ES2640060T3 - Proceso para producir una partícula fina revestida - Google Patents

Abstract

Un método de producción de partículas finas revestidas en el que las partículas finas nucleares se revisten con un componente de capa de revestimiento, que comprende las etapas de: preparar un líquido A que comprende un componente de capa de revestimiento o componentes de capa de revestimiento disueltos en el mismo y un disolvente orgánico polar; preparar un líquido B apto para mezcla con el líquido A, en el que están dispersas las partículas finas nucleares y en el no está contenido un disolvente orgánico polar, o dicho disolvente orgánico polar está contenido en una relación menor que en el líquido A; y mezclar el líquido A con el líquido B para preparar un líquido C de manera que la concentración del disolvente orgánico polar en el líquido C sea del 30 al 60 % en volumen, las partículas finas nucleares no se disuelvan en el líquido C y el componente o componentes de capa de revestimiento está/están en estado dispersado en el líquido C; y dejar o mezclar el líquido C durante 3 segundos a 30 minutos.

Description

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DESCRIPCION

Proceso para producir una partlcuia fina revestida Campo tecnico

La presente invention se refiere a un metodo de production de partlcuias finas revestidas.

Antecedentes de la tecnica

Hasta ia fecha, se han divuigado muititud de tecnicas reiacionadas con metodos de produccion de partlcuias finas revestidas, para productos farmaceuticos, aiimentos, sustancias agroqulmicas, farmacos para animaies y simiiares. Ei revestimiento de partlcuias finas (partlcuias finas objeto de revestimiento) con componente(s) de ia capa de revestimiento se iieva a cabo para conferir una funcion a ias partlcuias finas, tai como ia inhibition de un efecto proporcionado por un factor externo, o para recibir seiectivamente un efecto proporcionado por un factor externo como un accionador que provoca un cambio en ias partlcuias finas por medio dei efecto. Como uno de eiios, se ha presentado un metodo de revestimiento de partlcuias finas con una membrana iipldica en un ilquido (vease documento de patente 1). En ei metodo, ias partlcuias finas se revisten con una membrana iipldica reduciendo ia reiacion de un disoivente organico poiar en ia soiucion acuosa que comprende ei disoivente organico poiar en ei que se dispersan ias partlcuias finas y se disueive un ilpido, se iieva a cabo ei revestimiento en ei ilquido, y por ejempio, se producen de forma muy eficiente ias partlcuias finas revestidas con un tamano apropiado para inyeccion intravenosa de dichas partlcuias finas y simiiares.

Se han presentado metodos de revestimiento de una partlcuia de miceia con una membrana iipldica (vease, documentos de patente 2 y 3). En ei documento de patente 2, por ejempio, se disueive un ilpido cationico en cioroformo de antemano, se anaden una soiucion acuosa de un oiigodesoxinucieotido (ODN) y metanoi y se mezcian con ia soiucion de cioroformo, se centrifuga ia mezcia obtenida para introducir un compiejo ilpido cationico/ODN en ia fase de cioroformo, y se alsia ia fase de cioroformo. Despues, se anaden un fosfoilpido modificado con poiietiien- giicoi, un ilpido neutro y agua a ia fase de cioroformo para formar una emuision de aceite en agua (W/O), y se somete ia emuision obtenida a evaporation de fase reversa para producir un iiposoma que comprende ODN. Por otra parte, en ei metodo dei documento de patente 3, por ejempio, se forma un compiejo (una miceia) de un componente iipldico y un piasmido u ADN de oiigonucieotido que tiene un conjugado de histidina/peptido fusogenico en etanoi ai l0 a 90 %. Se diiuye ei ilquido con agua y se mezcia con iiposoma o ilpido preparado por adeiantado, para convertir ia miceia en iiposoma, se somete ei iiposoma a diaiisis y se hace pasar a traves de una membrana, de forma que se produce ei iiposoma con ei piasmido o ei oiigonucieotido inmoviiizado.

Ei documento de patente 4 se refiere a un metodo para revestir partlcuias finas que comprende dispersar ias

partlcuias finas en una soiucion acuosa que contiene un disoivente poiar; anadir un ilpido disueito en una soiucion

acuosa que comprende un disoivente poiar; y anadir agua a ia mezcia acuosa resuitante con ei fin de disminuir ia tasa de disoivente organico poiar en ia mezcia acuosa.

Documento de patente 1: Documento WO 02/28367

Documento de patente 2: Traduction japonesa pubiicada de una soiicitud internacionai PCT N.° 2002-508765

Documento de patente 3: Traduccion japonesa pubiicada de una soiicitud internacionai PCT N.° 2003-535832

Documento de patente 4: EP 1 323 415 A1

Descripcion de la Invencion

Probiemas a soiucionar por medio de ia invencion

Ei objetivo de ia presente invencion es proporcionar un metodo de produccion senciiia de partlcuias finas revestidas en ei cuai ias partlcuias finas nucieares se revisten con un componente de capa de revestimiento. Medios para resoiver ios probiemas

La presente invencion se refiere a ia materia objetivo divuigada en ias presentes reivindicaciones 1-14.

Efecto de ia invencion

De acuerdo con ia presente invencion, se proporciona un metodo simpie de produccion de partlcuias finas revestidas en ei cuai ias partlcuias finas nucieares se revisten con un componente(s) de capa de revestimiento. Ademas, de acuerdo con ia presente invencion, se proporciona un metodo de produccion de partlcuias finas revestidas en ias cuaies se encierra un farmaco de forma efectiva y/o firme.

Breve descripcion del dibujo

[Fig. 1] Se muestran cineticas sangulneas de preparaciones obtenidas en ei Ejempio 4 y Ejempio comparativo 2 tras administration de ias misas a ratas. Los clrcuios soiidos representan ios resuitados de administration de ia

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preparacion del Ejemplo 4 y los clrcuios huecos representan los resultados de administracion de la preparacion del Ejemplo comparativo 2.

Mejor modo para llevar a cabo la invencion

En la presente invencion, las partlculas finas revestidas contienen al menos partlculas finas nucleares y una capa de revestimiento, y se generan por medio de revestimiento de la superficie externa de las partlculas finas nucleares con un componente(s) de la capa de revestimiento para la formacion de la capa de revestimiento.

Las partlculas finas nucleares en la presente invencion son partlculas finas que comprenden como componente constituyente, por ejemplo, un farmaco, un conjunto lipldico, liposoma, partlculas en emulsion, un pollmero, un coloide de metal, una preparacion de partlculas finas o similar. Los ejemplos preferidos incluyen partlculas finas que comprenden al menos un farmaco como componente constituyente. Las partlculas finas nucleares de la presente invencion pueden contener, como componente constituyente, un complejo obtenido mediante combinacion de dos o mas de un farmaco, un conjunto lipldico, liposoma, partlculas en emulsion, un pollmero, un coloide de metal, una preparacion de partlculas finas y similares, o puede contener, como componente constituyente, un complejo obtenido mediante combinacion de un farmaco, un conjunto lipldico, liposoma, partlculas en emulsion, un pollmero, un coloide de metal, una preparacion de partlculas finas o similar con otro compuesto (tal como un azucar, un llpido o un compuesto inorganico). Los ejemplos preferidos incluyen partlculas finas que comprende, como componente constituyente, un complejo de un farmaco y uno o mas de un conjunto lipldico, liposoma, partlculas en emulsion, un pollmero, un coloide metalico y una preparacion de partlculas finas. Los ejemplos mas preferidos incluyen partlculas finas que comprenden, como componente constituyente, un complejo de un farmaco y liposoma.

El farmaco incluye un farmaco que adopta la forma de partlculas finas en el disolvente en el llquido que contiene un disolvente organico polar, un farmaco que forma un complejo con otro componente que constituye las partlculas finas nucleares y adopta la forma de las partlculas finas en el disolvente, y similares, y ejemplos de los mismos incluyen sustancias que tienen actividad farmacologica entre una protelna, un peptido, un acido nucleico, un compuesto de bajo peso molecular, un sacarido, un pollmero, un compuesto lipldico, un compuesto metalico y similares. Los ejemplos preferidos incluyen un acido nucleico y los ejemplos mas preferidos incluyen una o mas sustancia(s) escogida(s) entre un gen, ADN, ARN, un oligonucleotido (ODN), plasmido, y ARNsi.

Los ejemplos de la protelna o el peptido incluyen bradiquinina, angiotensina, oxitocina, vasopresina, adrenocorticotropina, calcitonina, insulina, glucagon, colecistoquinina, p-endorfina, factor de inhibicion de melanocitos, hormona estimuladora de melanocitos, antagonista de gastrina, neurotensina, somatostaina, brucina, ciclosporina, encefalina, transferrina, peptido Arg-Gly-Asp (RGD), hormona tiroidea, hormona de crecimiento, hormona gonadotropica, hormona luteinizante, asparaginasa, arginasa, uricasa, carboxipeptidasa, glutaminasa, superoxido dismutasa, activador del plasminogeno tisular, estreptoquinasa, interleucina, interferones, dipeptido de muramilo, timopoyetina, factor estimulador de colonia de granulocitos, factor estimulador de colonia de macrofagos de granulocitos, eritropoyetina, trombopoyetina, inhibidor de tripsina, lisozima, factor de crecimiento epidermico (EGF), factor de crecimiento de tipo insulina, factor de crecimiento de nervios, factor de crecimiento procedente de plaquetas, factor de crecimiento transformante, factor de crecimiento de celulas endoteliales, factor de crecimiento de fibroblastos, factor de crecimiento glial, timosina y anticuerpos especlficos (tales como anticuerpo receptor anti- EGF) y similares.

Los ejemplos de acido nucleico incluyen ODN tal como oligonucleotido antisentido y un oligonucleotido de sentido, un gen, ADN, ARN, plasmido, ARNsi y similares. El acido nucleico incluye derivados en los cuales se ha sustituido un atomo de oxlgeno o similar presente en un resto de fosfato, un resto de ester, o similar en la estructura de acido nucleico por otro atomo tal como un atomo de azufre. Accidentalmente, ARNsi significa un ARN de bicatenario corto.

Los ejemplos de compuesto de bajo peso molecular incluyen acido £-aminocaproico, clorhidrato de arginina, L- aspartato de potasio, acido tranexamico, sulfato de bleomicina, sulfato de vincristina, cefazolina de sodio, cefalotina de sodio, citicolina, citarabina, sulfato de gentamicina, clorhidrato de vancomicina, sulfato de canamicina, sulfato de amicacina y similares.

Los ejemplos del sacarido incluyen condroitin sulfato de sodio, heparina de sodio, dextrano fluorescelna y similares.

Los ejemplos de pollmero incluyen poli(etilen sulfonato) de sodio, un copollmero de eter divinllico con anhldrido maleico (DIVEMA), un producto unido de un copollmero de estireno-anhldrido maleico con neocarcinostatina (SMANcS) y similares.

Los ejemplos del compuesto lipldico incluyen vitamina D, vitamina E y similares.

Los ejemplos de compuesto metalico incluyen cisplatino y similares.

El conjunto lipldico o el liposoma esta formad por, por ejemplo, un llpido y/o un tensioactivo o similares. El llpido puede ser un llpido simple, un llpido complejo y un llpido derivado, y ejemplos de los mismos incluyen un fosfollpido,

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un gliceroglicollpido, un esfingoglicollpido, un esfingoide, un esterol, un llpido cationico, y similares, y ejemplos preferidos incluyen un fosfollpido, un llpido cationico y similares. Ademas, los ejemplos del llpido tambien incluyen tensioactivos (que tienen la misma definicion que el tensioactivo descrito anteriormente), un pollmero (que tiene la misma definicion que el pollmero descrito a continuation, especlficamente dextrano, etc.) y un derivado lipldico tal como un poli(derivado de oxietileno) (especlficamente, polietilen glicol, etc.) y los ejemplos preferidos incluyen un poli(llpido etilen glicolado). Los ejemplos del tensioactivo incluyen un tensioactivo no ionico, un tensioactivo anionico, un tensioactivo cationico, un tensioactivo zwiterionico y similares.

Los ejemplos de fosfollpido incluyen fosfollpidos naturales y sinteticos tales como fosfatidilcolina (especlficamente, fosfatidilcolina de semilla de soja, fosfatidilcolina de yema de huevo (EPC), fosfatidilcolina de diestearollo, fosfatidilcolina de dipalmitollo, fosfatidilcolina de dimiristollo, fosfatidilcolina de diolello, etc.), fosfatidiletanolamina (especlficamente diestearoil fosfatidiletanolamina (DSPE), dipalmotil fosfatidiletanolamina, dioleoil

fosfatidiletanolamina, etc.), glicerofosfollpido (especlficamente, fosfatidilserina, acido fosfatldico, fosfatidilglicerol, fosfatidilinositol, lisofosfatidilcolina, etc.) esfingofosfollpido (especlficamente esfingomielina, fosfoetanolamina de ceramida, fosfoglicerol de ceramida, fosfoglicerofosfato de ceramida, etc.) glicerofosfono llpido, esfingofosfonollpido, lecitina natural (especlficamente, lecitina de yema de huevo, lecitina de semilla de soja, etc.) y fosfollpido hidrogenado (especlficamente fosfatidilcolina hidrogenada, etc.).

Los ejemplos de gliceroglicollpido incluyen sulfoxiribosil glicerido, diglicosil diglicerido, digalactosil diglicerido, galactosil diglicerido, glicosil diglicerido y similares.

Los ejemplos de esfingoglicollpido incluyen galactosil cerebrosido, lactosil cerebrosido, gangliosido y similares.

Los ejemplos de esfingoide incluyen esfingano, icosaesfingano, esfingosina, un derivado del mismo y similares. Los ejemplos de un derivado del mismo incluyen aquellos en los que -NH2 de esfingano, icosaesfingano, esfingosina o similar se sustituyen por -NHCO(CH2)xCH3 (en la formula, x representa un numero entero de 0 a 18, en particular, se prefiere 6, 12 o 18) y similares.

Los ejemplos del esterol incluyen colesterol, dihidrocolesterol, lanosterol, p-sitosterol, campesterol, estigmasterol, brasicasterol, ergocasterol, fucosterol, 3p-[N-(N'N'-dimetilaminoetil)carbamoil colesterol (DC-Chol) y similares.

Los ejemplos de llpido cationico incluyen cloruro de N-[1-(2,3-dioleoilpropil)]-N,N,N-trimetilamonio (DOTAP), N-[1- (2,3-dioleoilpropil)]-N,N-dimetilamina (DoDAP), cloruro de N-[1-(2,3-dioleiloxipropil)-N,N,N-trimetilamonio (dOtmA), trifluoroacetato de 2,3-dioleiloxi-N-[2-(espermincarboxiamido)etil]-N,N-dimetil-1-propanaminio (DOSPA), bromuro de N-[1-(2,3-ditetradeciloxipropil)]-N,N-dimetil-N-hidroxietilamonio (DmRIE), bromuro de N-[1-(2,3-dioleiloxipropil)]-N,N- dimetil-N-hidroxietilamonio (DORIE) y similares.

Los ejemplos de tensioactivos no ionicos incluyen poli(monooleato de oxietilen sorbitan) (especlficamente, Polysorbate 80, etc.), polioxietilen polioxipropilen glicol (especlficamente, Pluronic F68, etc.), un acido graso de sorbitan (especlficamente, monolaurato de sorbitan, monooleato de sorbitan, etc.), un poli(derivado de oxietileno) (especlficamente aceite de ricino 60 polioxietilen hidrogenado, poli(alcohol oxietilen laurllico), etc.), un ester de acido graso de glicerol y similares.

Los ejemplos de tensioactivos anionicos incluyen acilsarcosina, alquilsulfato de sodio, sulfonato de alquilbenceno, un acido graso de sodio que tiene de 7 a 22 atomos de carbono y similares. Los ejemplos especlficos incluyen dodecil sulfato de sodio, laurilsulfato de sodio, colato de sodio, desoxicolato de sodio, taurodesoxicolato de sodio y similares.

Los ejemplos de tensioactivos cationicos incluyen sal de alquilamina, sal de acilamina, una sal de amonio cuaternario, un derivado de amina y similares. Los ejemplos especlficos incluyen cloruro de benzalconio, una sal de acilaminoetildietilamina, una sal de N-alquilpolialquilpoliamina, una poli(poliamida de etileno) de acido graso, bromuro de cetriltrimetilamonio, bromuro de dodeciltrimetilamonio, alquilpolioxietilenamina, N- alquilaminopropilamina, un ester de acido graso de trietanolamina y similares.

Los ejemplos de tensioactivos zwiterionicos incluyen sulfonato de 3-[(3-colamidopropil)dimetilamonio]-1-propano, sulfonato de N-tetradecil-N,N-dimetil-3-amonio-1-propano y similares.

En el liposoma, estos llpidos y tensioactivos se usan solos o en combination, y preferentemente se usan en combination. Como combinacion en el caso de que se usen en combinacion, por ejemplo, se puede poner como ejemplo una combinacion de dos o mas componentes escogidos entre fosfatidilcolina de semilla de soja hidrogenada, un poli(fosfollpido glicolado de etileno) y colesterol, una combinacion de dos o mas componentes escogidos entre diestearoil fosfatidilcolina, un poli(fosfollpido glicolado de etileno) y colesterol, una combinacion de EPC y DOTAP, una combinacion de EPC, DOTAP y un poli(fosfolf pi do etilen glicolado), una combinacion de EPC, DOtAp, colesterol y un poli(fosfollpido etilen glicolado), y similares.

Ademas, el liposoma puede contener un estabilizador de membrana tal como un esterol que incluye un colesterol, un antioxidante tal como tocoferol o similares, segun sea necesario.

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Los ejemplos de conjunto lipidico incluyen una micela esferica, una micela reversa esferica, una micela con forma de salchicha, una micela reversa con forma de salchicha, una micela con forma de placa, una micela reversa con forma de placa, hexagonal I, hexagonal II, un producto asociado que comprende dos o mas moleculas lipldicas y similares.

Los ejemplos de partlcula de emulsion incluyen partlculas de emulsion de aceite en agua (o/w) tales como una emulsion de grasa, una emulsion formada por un tensioactivo no ionico y aceite de semilla de soja, una emulsion lipldica y una nanoesfera lipldica, partlculas de emulsion de agua en aceite en agua (w/o/w) y similares.

Los ejemplos del pollmero incluyen pollmeros naturales tales como albumina, dextrano, quitosano, sulfato de dextrano y ADN, pollmeros sinteticos tales como poli-L-lisina, polietilenimina, poli(acido aspartico), un copollmero de estireno con acido maleico, un copollmero de isopropilacrilamida con acrilpirrolidona, un dendrlmero modificado con PEG, poli(acido lactico), poli(acido lactico) y poli(acido glicolico) y poli(acido lactico) polietilen glicolado, una sal de los mismos y similares.

En este documento, la sal del pollmero incluye, por ejemplo, una sal metalica, una sal de amonio, un sal de adicion de acido, una sal de adicion de amina organica, una sal de adicion de amino acido y similares. Los ejemplos de sal metalica incluyen sales de metales alcalinos tales como una sal de litio, una sal de sodio y una sal de potasio, sales de metales alcalino terreas tales como una sal de magnesio y una sal de calcio, una sal de aluminio, una sal de cinc y similares. Los ejemplos de sal de amonio incluyen sales de amonio, tetrametilamonio y similares. Los ejemplos de sal de adicion de acido incluyen inorganatos tales como un hidroclorato, un sulfato, un nitrato y un fosfato, y organatos tales como un acetato, un maleato, un fumarato y un citrato. Los ejemplos de sal de adicion de amina organica incluyen sales de adicion de morfolina, piperidina y similares, y los ejemplos de sal de adicion de amino acido incluyen sales de adicion de glicina, fenilalanina, acido aspartico, acido glutamico, lisina y similares.

Los ejemplos de coloide metalico incluyen coloides metalicos que incluyen oro, plata, platino, cobre, rodio, sllice, calcio, aluminio, hierro, indio, cadmio, bario, plomo y similares.

Los ejemplos de preparacion de partlculas finas incluyen una microesfera, una microcapsula, un nanocristal, nanopartlculas lipldicas, una micela polimerica y similares.

Las partlculas finas nucleares producidas por medio del metodo de acuerdo con la presente invention preferentemente contienen un derivado lipidico o un derivado de acido graso de una o mas sustancia(s) escogidas entre, por ejemplo, azucares, peptidos, acidos nucleicos y pollmeros solubles en agua o un tensioactivo o similar. El derivado lipidico o el derivado de acido graso de una o mas sustancia(s) escogidas entre azucares, peptidos, acidos nucleicos y pollmeros solubles en agua o el tensioactivo pueden estar presentes en los componentes de constituyente de las partlculas finas nucleares o se pueden usar mediante adicion de los mismos a los componentes de constituyente de las partlculas finas nucleares.

Los ejemplos preferidos del derivado lipidico o el derivado de acido graso de una o mas sustancia(s) escogida entre azucares, peptidos, acidos nucleicos y pollmeros solubles en agua o el tensioactivo incluye un glicolipido o un derivado lipidico o un derivado de acido graso de un pollmero soluble en agua, y ejemplos mas preferidos de los mismos incluyen un derivado lipidico o un derivado de acido graso de un polimero soluble en agua. El derivado lipidico o el derivado de acido graso de una o mas sustancia(s) escogida(s) entre azucares, peptidos, acidos nucleicos y pollmeros solubles en agua o el tensioactivo es preferentemente una sustancia que tiene un caracter dual ya que una parte de la molecula tiene una propiedad de union a otro componente constituyente de las partlculas finas nucleares debido a, por ejemplo, afinidad hidrofoba, interaction electrostatica o similar, y la otra parte tiene una propiedad de union a un disolvente usado en la production de las partlculas finas nucleares debido a, por ejemplo, afinidad hidrofila, interaccion electrostatica o similares.

Los ejemplos de derivado lipidico o derivado de acido graso de un azucar, un peptido o un acido nucleico incluyen los que comprenden un azucar tal como sacarosa, sorbitol o lactosa, un peptido tal como un peptido procedente de caseina, un peptido derivado de clara de huevo, un peptido derivado de semilla de soja o glutation, un acido nucleico tal como ADN, ARN, plasmido, ARNsi u ODN y cualquier lipido ilustrado en la definition anteriormente mencionada de las partlculas finas nucleares o el acido graso tal como acido estearico, acido palmitico, acido miristico o acido laurico unidos uno a otro y similares. Los ejemplos del derivado lipidico o derivado de acido graso de un azucar incluyen los glicollpidos tales como gliceroglicollpidos o esfingoglicollpidos ilustrados en la definicion anteriormente mencionada de las partlculas finas nucleares y similares.

Los ejemplos del derivado lipidico o del derivado de acido graso de un pollmero soluble en agua incluyen los que comprenden polietilen glicol, poliglicerol, polietilenimina, poli(alcohol vinllico), poli(acido acrllico), poliacrilamida, oligosacarido, dextrina, una celulosa soluble en agua, dextrano, sulfato de condroitina, poliglicerol, quitosano, polivinilpirrolidona, poli(amida de aspartato), poli-L-lisina, manano, pululano, oligoglicerol o similares o un derivado del mismo y cualquier lipido ilustrado en la definicion anteriormente mencionada de las partlculas finas nucleares o un acido graso tal como acido estearico, acido palmitico, acido miristico o acido laurico unidos uno a otro y similares. Mas preferiblemente, se puede poner de ejemplo un derivado lipidico o un derivado de acido graso de un poli(derivado de etilen glicol) o un poli(derivado de glicerol), y aun mas preferentemente, se puede poner de ejemplo

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un derivado lipidico o un derivado de acido graso de un poli(derivado de etilen glicol).

Los ejemplos de derivado lipidico o derivado de acido graso de un poli(derivado de etilen glicol) incluyen un poli(llpido etilen glicolado) [especlficamente, fosfatidil etanolamina de polietilenglicol (mas especlficamente, 1,2- diestearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina-N-[metoxi (polietilen glicol)-2000] (PEG-DSPE) y similares), aceite de ricino 60 polioxietilen hidrogenado, Cremophor EL y similares], un ester de poli(acido graso de sorbitan de etilen glicol) (especlficamente, poli(monooleato de oxietilen sorbitan) y similares), un ester de poli(acido graso de etilen glicol) y similares, y ejemplos mas preferidos incluyen un poli(llpido etilen glicolado).

Los ejemplos de derivado lipidico o el derivado de acido graso de un pol(derivado de glicerol) incluyen un poli(lipido glicerolado) (especlficamente, poli(fosfatidil etanolamina de glicerol) y similares), un poli(ester de acido graso de glicerol) y similares, y ejemplos mas preferidos incluyen un poli(llpido glicerolado).

Los ejemplos de tensioactivo incluyen los tensioactivos ilustrados en la definicion anteriormente mencionada de las partlculas finas nucleares, un poli(alquil eter de etilen glicol) y similares, y ejemplos preferidos del mismo incluyen polioxietilen polioxipropilen glicol, un ester de acido graso de glicerol, un poli(alquil eter de oxietilen glicol) y similares.

En el caso de que las partlculas finas nucleares contengan el complejo de un farmaco y uno o mas componentes de constituyentes escogidos entre el grupo que consiste en un conjunto lipidico, liposoma, partlculas en emulsion, un polimero, un coloide metalico y una preparation de partlculas finas, es preferible que el componente tenga una carga electrostatica opuesta a la del farmaco. La carga electrostatica del componente, opuesta a la del farmaco, puede ser una carga, una polarization de superficie, etc. que genera una atraccion electrostatica junto con una carga intramolecular, una polarizacion intramolecular, etc. del farmaco. Para que un conjunto lipidico, liposoma, partlculas en emulsion, un polimero, un coloide metalico y la preparacion de partlculas finas tengan una carga electrostatica opuesta a la del farmaco, un conjunto lipidico, liposoma, partlculas en emulsion, un polimero, un coloide metalico y la preparacion de partlculas finas preferentemente comprenden una sustancia carga que tiene la carga electrostatica opuesta a la del farmaco, y mas preferentemente comprende un llpido que tiene la carga electrostatica opuesta a la del farmaco (el llpido cationico anteriormente mencionado o el llpido anionico objeto de description a continuation).

La sustancia carga que tiene la carga electrostatica opuesta a la del farmaco tal como un conjunto lipidico, liposoma, partlculas en emulsion, un polimero, un coloide metalico, y las preparaciones de partlculas finas se pueden clasificar en una sustancia cationica que exhibe una propiedad cationica y una sustancia anionica que exhibe una propiedad anionica. Sin embargo, incluso si es una sustancia zwiterionica que tiene tanto un grupo cationico como un grupo anionico, la electronegatividad relativa varla dependiendo del pH, uniendose con otra sustancia o similar, y se puede clasificar en una sustancia cationica o una sustancia anionica dependiendo de las condiciones. Dicha sustancia cargada se puede usar, como componente constituyente, de las partlculas finas nucleares o se puede usar mediante adicion de la misma al componente constituyente de las partlculas finas nucleares.

Los ejemplos de la sustancia cationica incluyen las sustancias cationicas entre las ilustradas en la definicion anteriormente mencionada de las partlculas finas nucleares (especlficamente, un llpido cationico (que tiene la misma definicion que anteriormente), un esterol cationico, un tensioactivo cationico (que tiene la misma definicion que anteriormente), un polimero cationico y similares), una proteina o un peptido con los cuales se puede formar un complejo a un pH igual o menor que el punto isoelectrico, y similares.

Los ejemplos del esterol cationico incluyen DC-Chol y similares.

Los ejemplos del polimero cationico incluyen poli-L-lisina, polietilenimina, polifect, quitosano y similares.

La proteina o el peptido con los cuales se puede formar un complejo a un pH igual o menor que un punto isoelectrico no se encuentran particularmente limitados, con tal de que sea una proteina o un peptido con los cuales se puede formar un complejo a un pH igual o menor que el punto isoelectrico de la sustancia. Ejemplos de los mismos incluyen albumina, orosomucoide, globulina, fibrinogeno, pepsina, ribonucleasa T1 y similares.

Los ejemplos de la sustancia anionica incluyen sustancias anionicas entre las ilustradas en la definicion anteriormente mencionada de las partlculas finas nucleares [especlficamente, un llpido anionico, un tensioactivo anionico (que tiene la misma definicion que anteriormente), un polimero anionico y similares], una proteina o un peptido, con los cuales se puede formar un complejo a un pH igual o mayor que el punto isoelectrico, un acido nucleico y similares.

Los ejemplos de llpido anionico incluyen fosfatidilserina, fosfatidilglicerol, fosfatidilinositol, acido fosfatldico y similares.

Los ejemplos del polimero anionico incluyen acido poliaspartico, un copollmero de estireno con acido maleico, un copollmero de isopropilacrilamida con acrilpirrolidona, un dendrlmero modificado con PEG, poli(acido lactico), poli(acido lactico) poli(acido glicolico), poli(acido oxietilen glicolado lactico), sulfato de dextrano, dextran sulfato de sodio, sulfato de condroitina, condroitin sulfato de sodio, acido hialuronico, condroitina, sulfato de dertamano, sulfato

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de heparano, heparina, sulfato de quetarano, fluorescelna de dextrano anionica y similares.

La protelna o el peptido con los cuales se puede formar un complejo a un pH igual o mayor que el punto isoelectrico no estan particularmente limitados, con tal de que sean una protelna o un peptido con los cuales se pueda formar un complejo a un pH igual o mayor que el punto isoelectrico de la sustancia. Ejemplos de los mismos incluyen albumina, orosomucoide, globulina, fibrinogeno, histona, protamina, ribonucleasa, lisozima y similares.

Los ejemplos del acido nucleico como sustancia anionica incluyen ADN, ARN, plasmido, ARNsi, ODN y similares. Puede tener cualquier longitud y cualquier secuencia con tal de que no exhiba una actividad fisiologica.

En el caso de que las partlculas finas nucleares contengan el complejo de un farmaco y uno o mas componentes de constituyente escogidos entre el grupo que consiste en un conjunto lipldico, liposoma, partlculas en emulsion, un pollmero, un coloide metalico, y una preparacion de partlculas finas, y un conjunto lipldico, liposoma, partlculas en emulsion, un pollmero, un coloide metalico o la preparacion de partlculas finas tenga una carga electrostatica opuesta a la del farmaco, es preferible ademas que las partlculas finas nucleares contengan un agente competitivo de adhesion.

Como agente competitivo de adhesion de la presente invention, por ejemplo, se puede mencionar una sustancia que tenga la misma carga electrostatica que el farmaco y similares, y una sustancia electrostaticamente adherida a un conjunto lipldico, liposoma, partlculas en emulsion, un pollmero, un coloide metalico o la preparacion de partlculas finas que es un componente constituyente de las partlculas finas nucleares, debido a la atraccion electrostatica a un cation o un anion por medio de una carga electrica en la molecula, se incluye la polimerizacion intramolecular o similares. Los ejemplos de los mismos incluyen un llpido, tensioactivos, un acido nucleico, una protelna, un peptido, un pollmero y similares. Los ejemplos del llpido, el tensioactivo, el acido nucleico, la protelna, el peptido y el pollmero incluyen los llpidos cationicos, los llpidos anionicos, los tensioactivos cationicos, los tensioactivos anionicos, los acidos nucleicos, las protelnas, los peptidos, los pollmeros cationicos y los pollmeros anionicos ilustrados en la definition anteriormente mencionada de la sustancia cargada y similares. Los ejemplos preferidos incluyen los pollmeros cationicos y los pollmeros anionicos ilustrados en la definicion anteriormente mencionada de la sustancia cargada y similares, y los ejemplos mas preferidos incluyen una o mas sustancia(s) escogida(s) entre sulfato de dextrano, dextran sulfato de sodio, sulfato de condroitina, condroitin sulfato de sodio, acido hialuronico, condroitina, sulfato de dertamano, sulfato de heparano, heparina, sulfato de quetarano, fluorescelna de dextrano anionica, poli-L-lisina, polietilenimina, polifect, quitosano y similares. Preferentemente, el agente competitivo de adhesion se adhiere electrostaticamente a un conjunto lipldico, liposoma, partlculas en emulsion, un pollmero, un coloide metalico o la preparacion de partlculas finas que es un componente constituyente de las partlculas finas nucleares, y es preferentemente una sustancia con un tamano que no permite la formation de reticulation para agregar el conjunto lipldico, liposoma, partlculas en emulsion, un pollmero, un coloide metalico o la preparacion de partlculas finas que es un componente constituyente de las partlculas finas nucleares, incluso si la sustancia se adhiere a un conjunto lipldico, liposoma, partlculas en emulsion, un pollmero, un coloide metalico o la preparacion de partlculas finas, o una sustancia que tenga un resto en su molecula, que repela la adhesion del conjunto lipldico, liposoma, partlculas en emulsion, el pollmero, el coloide metalico o la preparacion de partlculas finas, evitando de este modo la agregacion del conjunto lipldico, liposoma, partlculas en emulsion, el pollmero, el coloide metalico o la preparacion de partlculas finas.

Las partlculas finas nucleares producidas de acuerdo con el metodo de la presente invencion se pueden producir por medio de, o de acuerdo con, un metodo de production conocido, y se pueden producir por medio de cualquier metodo de produccion. Por ejemplo, en la produccion de partlculas finas nucleares que comprenden, como componente constituyente, liposoma, que es una de las partlculas finas nucleares, se puede aplicar un metodo conocido de preparacion de liposoma. Como metodo conocido de preparacion de liposoma, por ejemplo, metodo de preparacion de liposomas de Bangham, et al. [vease "Journal of Molecular Biology" (J. Mol. Biol.), vol. 13, pp. 238252 (1965)], un metodo de inyeccion de etanol [vease "Journal of Cell Biology" (J. Cell Biol.), vol. 66, pp. 621-634 (1975)], un metodo de prensa frances [vease "FEBS Letters" (FEBS Lett.), vol. 99, pp. 210-214 (1979)], un metodo de congelacion-descongelacion [vease "Archives of Biochemistry and Biophysics" (Arch. Biochem. Biophys.), vol. 212, pp. 186-194 (1981)], un metodo de evaporation en fase reversa [vease "Proceedings of the National Academy of Science United States of America" (Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU), vol. 75, pp. 4194-4198 (1978)], un metodo de gradiente de pH (vease, por ejemplo, Patente Japonesa N.° 2.572.554, Patente Japonesa N.° 2.659.136, etc.) y similares. Como solution para dispersar el liposoma en la produccion del liposoma, por ejemplo, se puede usar agua, un acido, un alcali, cualquiera de diversos tampones, una solucion salina fisiologica, una infusion de amino acidos o similares. Ademas, en la produccion del liposoma, tambien es posible anadir un antioxidante tal como acido cltrico, acido ascorbico, cistelna o acido etilendiamino tetracetico (EDTA), un agente isotonico tal como glicerol, glucosa, cloruro sodico o similares. Ademas, el liposoma se puede preparar por medio de solucion del llpido o similar en, por ejemplo, un disolvente organico tal como etanol, destilacion del disolvente, adicion de una solucion salina fisiologica o similar y agitation de la mezcla por medio de sacudidas, formandose de este modo el liposoma.

Ademas, la mejora superficial del liposoma se pueden llevar a cabo opcionalmente usando, por ejemplo, un tensioactivo no ionico (que tiene la misma definicion que anteriormente), un tensioactivo cationico (que tiene la misma definicion que anteriormente), un tensioactivo anionico (que tiene la misma definicion que anteriormente), un

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pollmero, un poli(derivado de oxietileno) o similar, y dicho liposoma de mejora superficial tambien se usa como componente constituyente de las partlculas finas nucleares de la presente invencion [vease "Stealth Liposome", editado por D. D. Lasic y F. Martin, CRC Press Inc., USA, pp. 93-102 (1995)]. Los ejemplos de pollmero incluyen dextrano, pululano, manano, amilopectina, hidroxietilalmidon y similares. Los ejemplos de poli(derivado de oxietileno) incluyen Polysorbate 80, Pluronic F68, aceite de ricino 60 polioxietilen hidrogenado, poli(alcohol oxietilen laurllico), PEG-DSPE y similares. La mejora superficial del liposoma se puede emplear como uno de los metodos de incorporacion del derivado lipldico o un derivado de acido graso de una o mas sustancia(s) escogidas entre azucares, peptidos, acidos nucleicos y pollmeros solubles en agua o un tensioactivo en las partlculas finas nucleares.

El diametro medio de partlcula del liposoma se puede escoger de forma libre segun demanda. Los ejemplos de un metodo de ajuste del diametro medio de partlcula incluyen un metodo de extrusion y un metodo en el que la veslcula liposomica multi-lamelar de gran tamano (MLV) se pulveriza por medios mecanicos (especlficamente usando un Manton-gaulin, un microfluidizador o similares) [vease "Emulsion and Nanosuspensions for the Formulation of Poorly Soluble Drugs", editado por R. H. Muller, S. Benita y B. Bohm, Scientific Publishers, Stuttgart, Alemania, pp. 267-294 (1998)] y similares.

Ademas, el metodo de production de un complejo obtenido mediante combination de dos o mas sustancias escogidas entre, por ejemplo, un farmaco, un conjunto lipldico, liposoma, partlculas en emulsion, un pollmero, un coloide de metal, preparation de partlculas finas y similares, que constituyen las partlculas finas nucleares (ejemplos especlficos incluyen un complejo de liposoma o un conjunto lipldico que comprende un llpido cationico y un acido nucleico, un complejo de un pollmero que comprende un pollmero cationico tal como poli-L-lisina y un acido nucleico, un complejo de liposoma o un conjunto lipldico que comprende un llpido anionico tal como un acido fosfatldico y una protelna, un complejo de un pollmero que comprende un pollmero anionico tal como acido estiren- maleico y una protelna, un complejo de liposoma o un conjunto lipldico que comprende un llpido cationico y una protelna, un complejo de un pollmero que comprende un pollmero cationico tal como poli-L-lisina y una protelna y similares) puede ser, por ejemplo, un metodo de produccion en el que se mezcla simplemente un farmaco con un conjunto lipldico, liposoma, un pollmero o similar en agua. En este momento, se puede anadir una etapa de tamizado, una etapa de esterilizacion o similar, segun sea necesario. Ademas, tambien es posible llevar a cabo la formation del complejo en cualquiera de los diversos disolventes tales como acetona y eter. Por ejemplo, se disuelven un acido nucleico y un llpido en un disolvente organico tal como etanol, se destilan los disolventes, se anade una solution salina fisiologica o similar, y se agita la mezcla mediante sacudidas, de modo que se puede formar tambien un complejo de acido nucleico.

En cuanto al tamano de las partlculas finas nucleares de la presente invencion, preferentemente es diametro medio de partlcula es de varios nanometros a varios cientos de micrometros, mas preferentemente de 10 nm a 5 pm, aun mas preferentemente de 50 nm a 300 nm, del modo mas preferido de 50 nm a 200 nm.

En la presente invencion, el(los) componente(s) de la capa de revestimiento se dispersa(n) en el llquido C que comprende el disolvente organico polar a concentration controlada del disolvente organico polar. Los ejemplos del(de los) componente(s) de la capa de revestimiento incluyen un llpido, un tensioactivo, un pollmero y similares, descritos en la definition anterior de las partlculas finas nucleares. El(los) componente(s) de la capa de revestimiento preferentemente comprende(n) una o mas sustancia(s) escogida(s) entre el grupo que consiste en llpidos y tensioactivos descritos en la definicion anterior de las partlculas finas nucleares, mas preferentemente comprende(n) una o mas sustancias escogidas entre el grupo que consiste en llpidos y tensioactivos para la formacion de una capa de revestimiento de una membrana lipldica, y mas preferentemente comprende(n) un llpido neutro entre los llpidos y los tensioactivos. Los llpidos neutros incluyen llpidos diferentes de los llpidos cationicos, tensioactivos cationicos, llpidos anionicos y tensioactivos anionicos, entre los llpidos y los tensioactivos descritos en la definicion anterior de las partlculas finas nucleares. Los ejemplos mas preferidos de llpidos neutros incluyen fosfollpidos, glicoglicerollpidos, glicoesfingollpidos, y similares, incluyendo ejemplos mas preferidos de los mismos fosfollpidos, e incluyendo los ejemplos mas preferidos de los mismos EPCs.

La combinacion de partlculas finas nucleares con componente(s) de la capa de revestimiento de la presente invencion no se encuentra particularmente limitada, sin embargo, se prefiere una combinacion de partlculas finas nucleares que son partlculas finas que comprenden, como componente constituyente, un complejo de un farmaco y un liposoma con el(los) componente(s) de la capa de revestimiento que es un llpido y/o un tensioactivo. Las partlculas finas revestidas en las cuales las partlculas finas nucleares son partlculas que comprenden, como componente constituyente, liposoma, el(los) componente(s) de la capa de revestimiento es(son) un llpido y/o un tensioactivo y la capa de revestimiento es una membrana lipldica, se clasifican en liposomas en sentido estricto, basandose en sus estructura. Las partlculas finas revestidas en las cuales las partlculas finas nucleares son otras partlculas finas que comprenden, como componente constituyente, liposoma, el(los) componente(s) de la capa de revestimiento es un llpido y/o un tensioactivo y la capa de revestimiento es una membrana lipldica, se clasifican en liposomas en sentido amplio. En la presente invencion, es mas preferible que el componente constituyente de las partlculas finas nucleares y las partlculas finas revestidas sean liposomas.

Es preferible que el(los) componente(s) de la capa de revestimiento presente, intramolecularmente, un resto

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hidrofobo con una afinidad por el disolvente organico polar usado en la presente invencion, y sea(n) soluble(s) en el disolvente organico polar debido al resto hidrofobo, y es mas preferible que el(los) componente(s) de la capa de revestimiento presente, intramolecularmente, una resto hidrofilo ademas del resto hidrofobo. Ademas, el(los) componente de la cara revestimiento preferentemente forma(n) un agregado o micela, que preferentemente tiene un tamano de 0,1 a 1000 nm, mas preferentemente tiene un tamano de 0,3 a 500 nm. El tamano del agregado o micela se puede medir examinando si puede pasar a traves de un filtro de membrana que tiene un tamano de poro deseado.

En la presente invencion, se considera que el(los) componente(s) de la capa de revestimiento es(son) solubles en el disolvente organico polar en caso de que el(los) componente(s) de la capa de revestimiento se pueda(n) disolver en el disolvente organico polar, y en caso de que el(los) componente(s) de la capa de revestimiento se pueda(n) disolver usando un agente de disolucion o similar en el disolvente organico polar. Es preferible que el(los) componente(s) de la capa de revestimiento se pueda(n) disolver por si mismo(s) en el disolvente organico polar.

Ademas, los ejemplos del llpido a usar cuando la capa de revestimiento es una membrana lipldica incluyen un llpido sintetico y similares. Los ejemplos de llpido sintetico incluyen fosfatidilcolina fluorada, tensioactivos fluorados, bromuro de dialquilamonio y similares. Estos se pueden usar solos o en combinacion con otros llpidos o similares. Ademas, cuando la capa de revestimiento es una membrana lipldica, el(los) componente(s) de la capa de revestimiento preferentemente contiene(n) un derivado lipldico, un derivado de acido graso o un derivado de hidrocarburo alifatico de una sustancia soluble en agua, o el derivado lipldico anteriormente mencionado o el derivado de acido graso de una o mas sustancia(s) escogidas entre azucares, peptidos, acidos nucleicos y pollmeros solubles en agua o el tensioactivo, mas preferentemente contiene el derivado lipldico anteriormente mencionado o el derivado de acido graso de un pollmero soluble en agua, aun mas preferentemente contiene el fosfollpido polietilen glicolado mencionado anteriormente, y del modo mas preferido contiene poli(fosfatidil etanolamina de etilen glicol).

Los ejemplos de derivado lipldico, derivado de acido graso o derivado de hidrocarburo alifatico de una sustancia soluble en agua de la presente invencion incluyen el derivado lipldico anteriormente mencionado o un derivado de acido graso de una o mas sustancia(s) escogida(s) entre azucares, protelnas, peptidos, acidos nucleicos y pollmeros solubles en agua del derivado de hidrocarburo alifatico de una o mas sustancia(s) escogidas entre azucares, protelnas, peptidos, acidos nucleicos y pollmeros solubles en agua, incluyendo los ejemplos preferidos de los mismos un glicollpido y un derivado lipldico o un derivado de acido graso de un pollmero soluble en agua, e incluyendo los ejemplos mas preferidos de los mismos un derivado lipldico o un derivado de acido graso de un pollmero soluble en agua.

Los ejemplos de derivado de hidrocarburo alifatico o de una sustancia soluble en agua incluyen los que comprenden una sustancia soluble en agua y, por ejemplo, un alcohol alifatico de cadena larga, polioxipropilen alquilo, un residuo alcoholico de un ester de acido graso de glicerina o similar, unido uno a otro.

Los ejemplos de derivado de hidrocarburo alifatico de un azucar, un peptido o un acido nucleico incluyen un derivado de hidrocarburo alifatico de un azucar tal como sacarosa, sorbitol o lactosa, un peptido tal como un peptido procedente de caselna, un peptido derivado de clara de huevo, un peptido derivado de semilla de soja o glutation, un acido nucleico tal como ADN, ARN, plasmido, ARNsi u ODN.

Los ejemplos del derivado de hidrocarburo alifatico de un pollmero soluble en agua incluyen un derivado de hidrocarburo alifatico de polietilen glicol, poliglicerol, polietilenimina, poli(alcohol vinllico), poli(acido acrllico), poliacrilamida, oligosacarido, dextrina, una celulosa soluble en agua, dextrano, sulfato de condroitina, poliglicerol, quitosano, polivinilpirrolidona, poli(amida de aspartato), poli-L-lisina, manano, pululano, oligoglicerol o similares o un derivado de los mismos, y los ejemplos mas preferidos de los mismos incluyen un derivado de hidrocarburo alifatico de un poli(derivado de etilen glicol) o un poli(derivado de glicerol), y los ejemplos mas preferidos incluyen un derivado de hidrocarburo alifatico de un poli(derivado de etilen glicol).

La expresion "las partlculas finas nucleares se dispersan" significa que las partlculas finas nucleares se suspenden, emulsionan o dan lugar a la formacion de una emulsion, preferentemente se suspenden. Una pequena parte de las partlculas finas nucleares se puede depositar en el llquido C, mientras que una gran parte de las mismas se dispersa. Es preferible que todas las partlculas finas nucleares se dispersen en el llquido C. La expresion "el(los) componente(s) de la capa de revestimiento se dispersa(n)" significa que el(los) componente(s) de la capa de revestimiento forma(n) un agregado, micela o similar y se suspende(n), emulsionan o dan lugar a la formacion de una emulsion, preferentemente se emulsiona(n) y da(n) lugar a la formacion de una emulsion. Una pequena parte del(de los) componente(s) de la capa de revestimiento se puede disolver en el llquido C, mientras que una gran parte del(de los) mismo(s) forma el agregado, micela o similar y se emulsiona o da lugar a la formacion de una emulsion. Ademas, una pequena parte del(de los) componente(s) de la capa de revestimiento se puede depositar en el llquido C, mientras que una gran parte del(de los) mismo(s) forma el agregado, micela o similar y se suspende(n), emulsionan o dan lugar a la formacion de una emulsion, preferentemente, se emulsiona o da lugar a la formacion de una emulsion. No existen limitaciones particulares en cuanto a la preparacion del llquido de dispersion C, siempre y cuando el(los) componente(s) de la capa de revestimiento sea(n) soluble(s) en el disolvente organico polar, y la

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concentracion de disolvente organico polar del llquido de dispersion sea tal que las partlculas finas nucleares no se disuelvan y el(los) componente(s) de la capa de revestimiento este(n) en estado dispersado en el llquido como se divulga en la reivindicacion 1.

No existen limitaciones particulares en cuanto al perlodo de abandono o mezcla del llquido C, con tal de que la etapa de abandono o mezcla no se detenga inmediatamente despues de que las partlculas finas nucleares y el(los) componente(s) de la capa de revestimiento se dispersen en el llquido que comprende el disolvente organico polar. El perlodo se puede escoger dependiendo de los tipos de componente(s) de la capa de revestimiento y el llquido que comprende el disolvente organico polar, y es preferentemente tal que el rendimiento de las partlculas finas revestidas que se producen sea estacionario. El perlodo es de 3 segundos a 30 minutos.

El metodo de acuerdo con la invencion comprende particularmente las etapas de: preparar un llquido A que comprende el disolvente organico polar como se ha descrito anteriormente en el que se disuelve el(los) componente(s) de la capa de revestimiento; preparar un llquido B que se puede mezclar con el llquido A, en el que las partlculas finas nucleares se dispersan y un disolvente organico polar como se ha descrito anteriormente no esta presente o el disolvente organico polar esta presente en una relacion menor que la del llquido A; y mezclar el llquido A con el llquido B para preparar un llquido C como se ha descrito anteriormente. No existen limitaciones particulares sobre la preparation de los llquidos A y B, con tal de que la concentracion de disolvente organico polar de llquido mixto C sea tal que las partlculas finas nucleares no se disuelvan y el(los) componente(s) de la capa de revestimiento pueda(n) estar en estado dispersado. El llquido C se deja o se mezcla durante un perlodo de 3 segundos a 30 minutos para revestir las partlculas finas nucleares con el componente de la capa de revestimiento.

Los ejemplos de los disolventes organicos polares que se puede usar en la presente invencion incluyen alcoholes tales como metanol, etanol, n-propanol, 2-propanol, n-butanol, 2-butanol, y terc-butanol; glicoles tales como glicerina, etilen glicol y propilen glicol; polialquilen glicoles tales como polietilen glicol, aceite de ricino endurecido con polioxietileno y eter o ester de acido graso de polioxietilen sorbitan; y similares. Preferentemente, el disolvente organico polar es etanol. Los ejemplos de disolventes que se pueden usar en la invencion, diferentes del disolvente organico polar, incluyen agua, dioxido de carbono llquido, hidrocarburos llquidos, carburos halogenados, hidrocarburos halogenados y similares, y entre ellos se prefiere agua. El llquido C puede contener un componente de tampon, o similar.

La combinacion del disolvente organico polar y el disolvente diferente del disolvente organico polar es preferentemente tal que los disolventes se pueden mezclar uno con el otro, y se pueden escoger basandose en las solubilidades de las partlculas finas nucleares anteriormente mencionadas y el(los) componente(s) de la capa de revestimiento anteriormente mencionado(s) en cada disolvente del llquido que comprende el disolvente organico polar en cada proceso, etc. Preferentemente, las partlculas finas nucleares tienen una baja solubilidad en el llquido que comprende el disolvente organico polar en cada proceso, y preferentemente tienen una baja solubilidad en cada uno del disolvente organico polar y el disolvente diferente del disolvente organico polar. Preferentemente, el(los) componente(s) de la capa de revestimiento tiene(n) una elevada solubilidad en el disolvente organico polar, y preferentemente tiene baja solubilidad en el disolvente diferente del disolvente organico polar.

En caso de que las partlculas finas nucleares sean solubles en el disolvente organico polar, la solubilidad de las partlculas finas nucleares en el disolvente organico polar es preferentemente menor que la del componente de la capa de revestimiento. La expresion "la solubilidad de las partlculas finas nucleares es baja" significa que cada componente constituyente de las partlculas finas nucleares tiene baja capacidad de elucion en el disolvente, y la solubilidad de cada componente constituyente puede ser elevada, siempre y cuando cada componente constituyente tenga una baja capacidad de elucion debido a la union entre los componentes, etc.

No existen limitaciones particulares en cuanto a la relacion del disolvente organico polar en el llquido C, siempre y cuando las partlculas finas nucleares y el(los) componente(s) de la capa de revestimiento se pueden dispersar. La concentracion de disolvente organico polar del llquido C se puede escoger dependiendo de los tipos de disolvente, las partlculas finas nucleares y el componente de la capa de revestimiento, etc., y es de un 30 a un 60 % en volumen, preferentemente de un 30 a un 40 % en volumen.

Es preferible que la interaction hidrofila se produzca entre el(los) componente(s) de la capa de revestimiento y la superficie de las partlculas finas nucleares en el llquido de dispersion C. De este modo, las partlculas finas nucleares y el(los) componente(s) de la capa de revestimiento preferentemente tienen un resto hidrofilo.

No existen limitaciones particulares en cuanto a los metodos de mezcla o dispersion en las etapas anteriores. Los ejemplos de los metodos incluyen los que usan un mezclador en llnea, un mezclador estatico, un mezclador con impulsor, un mezclador de rotor/estator, un mezclador de turbina, una hoja de sierra, un molino de coloides, un homogeneizador de alta presion, o similar, y los ejemplos preferidos de los mismos incluyen los que usan un mezclador en llnea, un mezclador estatico, un mezclador con impulsor, un mezclador con rotor/estator o un mezclador de turbina.

Por ejemplo, las partlculas finas revestidas que tienen la capa de revestimiento de la membrana lipldica, de acuerdo

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con la invention, se pueden producir preferentemente por medio de las siguientes etapas.

(Etapa 1). Se disuelven o dispersan un llpido y/o un tensioactivo que es una capa de revestimiento (componentes de la membrana lipldica) en el disolvente organico polar o una solution acuosa que comprende el disolvente organico polar. Se puede anadir de forma adicional al llquido un derivado lipldico o un derivado de acido graso de una o mas sustancia(s) escogida(s) entre sacaridos, peptidos, acidos nucleicos y pollmeros solubles en agua, o un tensioactivo (por ejemplo un derivado lipldico modificado con polietilen glicol), y la cantidad del mismo no se encuentra particularmente limitada.

(Etapa 2) Las partlculas finas nucleares se dispersan (suspenden) en una solucion acuosa.

(Etapa 3) Los llquidos obtenidos en las etapas 1 y 2 se mezclan.

Las partlculas finas revestidas de la presente invencion se pueden producir sustancialmente de la misma forma que anteriormente, independientemente de los tipos de partlculas finas nucleares y el componente de la capa de revestimiento.

En el metodo de la presente invencion para producir las partlculas finas revestidas, no existen limitaciones particulares sobre la concentration de partlculas finas nucleares en el llquido C, con tal de que las partlculas finas nucleares se puedan revestir con la capa de revestimiento como se divulga por medio de la reivindicacion 1. Preferentemente, la concentracion de las partlculas finas nucleares es de 1 pg/ml a 1 g/ml, mas preferentemente, de 0,1 a 500 mg/ml. No existen limitaciones particulares sobre la concentracion de(de los)componente(s) de la capa de revestimiento (por ejemplo, un llpido) en el llquido C, siempre y cuando las partlculas finas nucleares puedan revestirse con el(los) mismo(s) como se divulga en la reivindicacion 1 y la concentracion del(de los) componente(s) de la capa de revestimiento es preferentemente de 1 pg/ml a 1 g/ml, mas preferentemente, de 0,1 a 400 mg/ml. En las partlculas finas revestidas obtenidas por medio del metodo de la presente invencion, la relation en peso del(de los) componente(s) de la capa de revestimiento con respecto a las partlculas finas es preferentemente de 1:0,1 a 1:1000, mas preferentemente de 1:1 a 1:10.

El diametro medio de partlcula de las partlculas finas revestidas obtenidas por medio del metodo de la invencion es preferentemente de 300 nm o menos, mas preferentemente de 200 nm o menos, mas preferentemente de 130 nm o menos, del modo mas preferido de 115 nm o menos, y por ejemplo, el tamano de las partlculas finas revestidas es preferentemente tal que las partlculas finas revestidas se pueden administrar por medio de inyeccion. El tamano de las partlculas finas revestidas se puede aumentar al incrementar el tamano de las partlculas finas nucleares objeto de revestimiento, al tiempo que se puede reducir el tamano de las partlculas finas revestidas mediante disminucion del tamano de las partlculas finas nucleares.

Las partlculas finas revestidas anteriores se pueden modificar con una protelna tal como un anticuerpo, un sacarido, un glicollpido, un aminoacido, un acido nucleico, un compuesto diverso de bajo peso molecular, un compuesto polimerico, o similar, y las partlculas finas revestidas de la presente invencion incluyen las partlculas modificadas de esta forma. La membrana lipldica de las partlculas finas revestidas se puede modificar en superficie con una protelna tal como un anticuerpo, un peptido, un compuesto de acido graso, o similar, por ejemplo con el fin de aplicar las partlculas finas revestidas para el marcaje [editado por D. D. Lasic y F. Martin, "Stealth Liposome", Estados Unidos, CRC Press Inc., 1995, p. 93-102]. Ademas, las partlculas finas revestidas se pueden modificar en superficie con un tensioactivo no ionico (que tiene la misma definition que anteriormente), un tensioactivo cationico (que tiene la misma definicion que anteriormente), un tensioactivo anionico (que tiene la misma definicion que anteriormente), un pollmero (que tiene la misma definicion que anteriormente), un poli(derivado de oxietileno) (que tiene la misma definicion que anteriormente), o similar, como con el liposoma usado como componente de las partlculas finas. Las partlculas finas revestidas de la invencion incluyen partlculas modificadas en superficie. De forma analoga, las partlculas finas revestidas se pueden modificar superficialmente con un derivado lipldico, un derivado de acido graso o un derivado de hidrocarburo alifatico de una sustancia soluble en agua; un derivado lipldico o un derivado de acido graso de una o mas sustancia(s) escogida(s) entre un sacarido, un peptido, un acido nucleico, o un pollmero soluble en agua; un tensioactivo; o similares. El derivado lipldico, derivado de acido graso, o derivado de hidrocarburo alifatico de una sustancia soluble en agua, el derivado lipldico o el derivado de acido graso de un sacarido, un peptido, un acido nucleico, o un pollmero soluble en agua, y el tensioactivo, usado para la modification superficial, tienen las mismas definiciones que el derivado lipldico mencionado anteriormente, derivado de acido graso, o derivado de hidrocarburo alifatico de una sustancia soluble en agua, usados como componente para la membrana lipldica, y el derivado lipldico descrito anteriormente o el derivado de acido graso de un sacarido, un peptido, un acido nucleico, o un pollmero soluble en agua, y el tensioactivo, usado para la preparation de partlculas finas nucleares que tienen un resto hidrofilo sobre parte o la totalidad de las superficies de las partlculas finas nucleares, y los componentes de la membrana lipldica incorporan los mismos.

Se pueden usar las partlculas finas revestidas producidas mediante el metodo de la presente invencion, por ejemplo, como preparacion farmaceutica destinada a estabilizar un farmaco en un componente de organismo vivo tal como un componente sangulneo (por ejemplo, sangre o un fluido digestivo), reduciendo el efecto secundario, aumentando la acumulacion de un farmaco en un organo diana de un tumor, etc., mejorando la absorcion de un farmaco en administration oral o transmucosal, o similar.

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En caso de que al menos un componente constituyente de las partlcuias finas nucleares sea un farmaco tal como un farmaco antitumoral o un farmaco anti-inflamatorio, las partlculas finas revestidas producidas mediante el metodo de la presente invencion se pueden usar como vehlculo que comprende farmaco para transportar el farmaco hasta un punto tumoral o un punto de inflamacion, y de este modo se puede suministrar el farmaco al punto de tumoral o punto de inflamacion mediante administracion de las partlculas finas revestidas. Cuando el farmaco es un farmaco antitumoral, se pueden administrar las partlculas finas revestidas como agente terapeutico tumoral para el tratamiento del tumor. Cuando el farmaco es un farmaco anti-inflamatorio, las partlculas finas revestidas se pueden administrar como agente terapeutico para el tratamiento de la inflamacion. Un tejido u organo en el que se mejora la neovascularizacion es uno de los puntos en los cuales se pueden administrar las partlculas finas revestidas producidas mediante el metodo de la presente invencion. Cuando al menos un componente constituyente de las partlculas finas revestidas es un farmaco terapeutico para una enfermedad en el tejido u organo, se pueden administrar las partlculas finas como agente terapeutico para el tratamiento de la enfermedad.

En caso de usar las partlculas finas revestidas producidas mediante el metodo de acuerdo con la presente invencion como preparacion farmaceutica, se puede usar el llquido de dispersion de las partlculas finas revestidas preparadas de la forma anterior como tal, por ejemplo, en forma de una preparacion de inyeccion, etc. La relacion de disolvente organico polar en el llquido de dispersion se puede reducir mediante adicion de un disolvente que comprende un disolvente diferente de un disolvente organico polar presente en el llquido de dispersion, que se puede mezclar con el disolvente organico polar, y/o se puede retirar selectivamente el disolvente organico polar mediante evaporacion, separacion a traves de membrana semipermeable, destilacion fraccionada o similar. Ademas, el llquido de dispersion o el llquido de dispersion modificado que tiene la relacion reducida de disolvente organico polar se puede someter a filtracion, centrifugacion o similar para retirar los disolventes. El llquido de dispersion o el llquido de dispersion en el que se anade un excipiente tal como manitol, lactosa, trehalosa, maltosa, o glicina se puede someter a liofilizacion cuando se usa como preparacion farmaceutica.

En el caso de una preparacion de inyeccion, es preferible que la preparacion de inyeccion se prepare por medio de mezcla de, por ejemplo, agua, un acido, un alcali, cualquiera de diversos tampones, una solucion salina fisiologica, una infusion de amino acido o similar con el llquido de dispersion o las partlculas finas revestidas mencionadas anteriormente, el llquido de dispersion en el que la relacion de disolvente organica polar es reducida o las partlculas finas revestidas anteriormente mencionadas obtenida mediante retirada del disolvente o mediante liofilizacion. Ademas, es posible preparar una preparacion de inyeccion mediante adicion de un antioxidante tal como acido cltrico, acido ascorbico, cistelna o EDTA, un agente isotonico tal como glicerol, glucosa, cloruro sodico o similares. Ademas, tambien se puede crio-conservar mediante adicion de un agente de crio-conservacion tal como glicerol.

Ademas, las partlculas finas revestidas producidas mediante el metodo de acuerdo con la presente invencion se pueden formular para dar lugar a una preparacion oral tal como una capsula, un comprimido o un granulo mediante granulacion junto con un excipiente apropiado o similar, secado o similar.

Se puede usar un kit en el metodo de production de la invencion. El kit puede comprender al menos las partlculas finas nucleares, el componente de capa de revestimiento, y un llquido que comprende el disolvente organico polar, para la preparacion de partlculas finas revestidas mediante el metodo de la presente invencion. Por ejemplo, los componentes para la preparacion de las partlculas finas revestidas mediante el metodo de la presente invencion, tal como las partlculas finas nucleares, el componente de la capa de revestimiento, y el llquido que comprende el disolvente organico polar, se introducen en pequenos recipientes respectivamente, y las partlculas finas revestidas se pueden preparar mediante mezcla de los componentes de acuerdo con el metodo de la invencion. No existen limitaciones en la mezcla, tal como la limitation de que los componentes deban mezclarse de forma gradual, y de este modo el kit sea ventajoso en el sentido de que las partlculas finas revestidas se puedan preparar de forma sencilla.

La invencion se describe especlficamente a continuation con referencia a los Ejemplos sin intention de restringir el alcance de la invencion.

Ejemplo 1

Disolucion de los componente(s) de la capa de revestimiento (llquido A); Se disolvieron 60 mg de EPC (disponible en NOF Corporation, lo mismo aplica en los siguientes ejemplos) y 12,5 mg de PEG-DSPE (disponible en NOF Corporation, lo mismo aplica en los siguientes ejemplos) en 2 ml de disolvente mixto de etanol/agua (8/5) para preparar un llquido A1.

Llquido de dispersion de partlculas finas nucleares (llquido B); Se dispersaron 10 mg de fluorescelna de dextrano anionica (FD, disponible en Molecular Probes, Inc., lo mismo aplica en los siguientes ejemplos), 60 mg de DOTAP (disponible en Avanti Polar Lipids, Inc., lo mismo aplica en los siguientes ejemplos), y PEG-DSPE (24 mg) en agua (2 ml). Se hizo pasar el llquido de dispersion resultante a traves de una membrana de policarbonato que tenia un diametro de poro de 0,1 pm (disponible en Whatman, Inc., lo mismo aplica en los siguientes ejemplos) 31 veces para preparar un llquido B1.

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Se anadio el llquido B1 (0,5 ml) al llquido A1 gota a gota de forma que la concentracion de etanol fuese de 50 % en volumen y se dispersaron los componentes de la capa de revestimiento y las partlculas finas nucleares a la concentracion, para obtener el llquido de dispersion de partlculas finas revestidas.

Se mezclo el llquido de dispersion obtenido con agua (22,5 ml) y se sometio a ultracentrifugacion (1 hora, 110.000 x g, 25 °C) y se retiro el sobrenadante para obtener una preparacion.

Ejemplo 2 (no de acuerdo con la invencion)

Llquido de dispersion de componente(s) de capa de revestimiento (llquido D); Se dispersaron EPC (60 mg) y PEG- DSPE (12,5 mg) en 1,6 ml de un disolvente mixto de etanol/agua (1/1) para preparar un llquido D2.

Llquido de dispersion de partlculas finas nucleares (llquido E); Se dispersaron FD (10 mg), DOTAP (60 mg) y PEG- DSPE (24 mg) en agua (1 ml). Se hizo pasar el llquido de dispersion resultante a traves de una membrana de policarbonato que tenia un diametro de poro de 0,1 pm, 31 veces para preparar un llquido de dispersion nuclear. Se anadio etanol (0,25 ml) al llquido obtenido (0,25 ml) de forma que la concentracion de etanol fuese de aproximadamente 50 % en volumen, para preparar un llquido E2.

Se mezclo el llquido D2 con el llquido E2 de forma que la concentracion de etanol fuese aproximadamente 50 % en volumen y se dispersaron los componentes de la capa de revestimiento y las partlculas finas nucleares a la concentracion, para obtener un llquido de dispersion de partlculas finas revestidas.

El liquido de dispersion obtenido de partlculas finas revestidas se mezclo con agua (23 ml) y se sometio a ultracentrifugacion de la misma forma que en el Ejemplo 1, para obtener una preparacion.

Ejemplo 3 (no de acuerdo con la invencion)

Liquido de dispersion de componentes de capa de revestimiento y partlculas finas nucleares (liquido H); Se dispersaron FD (10 mg), DOTAP (60 mg) y PEG-DSPE (24 mg) en agua (1 ml). Se hizo pasar el liquido de dispersion resultante a traves de una membrana de policarbonato que tenia un diametro de poro de 0,1 pm, 31 veces. Se dispersaron, por separado EPC (120 mg) y PEG-DSPE (25 mg) en agua (2 ml). Se hizo pasar el liquido de dispersion resultante a traves de una membrana de policarbonato que tenia un diametro de poro de 0,4 pm (disponible en Whatman, Inc., lo mismo aplica en los siguientes ejemplos) 11 veces, y se hizo pasar a traves de una membrana de policarbonato que tenia un diametro de poro de 0,1 pm, 21 veces. Se mezclo el liquido de dispersion obtenido de este modo de Fd, DOTAP y PEG-DSPE con el liquido de dispersion de EPC y PEG-DSPE para preparar un liquido H3.

Se anadio etanol (1,25 ml) al llquido H3 de manera que la concentracion de etanol fuese de aproximadamente 50 % en volumen y se dispersaron los componentes de la capa de revestimiento y las partlculas finas nucleares a la concentracion, para obtener un liquido de dispersion de partlculas finas revestidas.

El liquido de dispersion obtenido de partlculas finas revestidas se mezclo con agua (22,5 ml) y se sometio a ultracentrifugacion de la misma forma que en el Ejemplo 1, para obtener una preparacion.

Ejemplo comparativo 1

Disolucion de componente(s) de capa de revestimiento (llquido A); Se disolvieron EPC (60 mg) y PEG-DSPE (12,5 mg) en etanol (1 ml) para preparar un liquido a1.

Liquido de dispersion de partlculas finas nucleares (llquido B); Se dispersaron FD (30 mg), DOTAP (180 mg) y PEG- DSPE (72 mg) en agua (9 ml). Se hizo pasar el liquido de dispersion resultante a traves de una membrana de policarbonato que tenia un diametro de poro de 0,1 1 pm, 31 veces, para preparar un llquido b1.

Se mezclo el llquido a1 (0,25 ml) con el liquido b1 (0,75 ml) de forma que la concentracion de etanol fuese de aproximadamente 62,5 % en volumen, y se disolvieron los componentes de la capa de revestimiento y se dispersaron las partlculas finas nucleares a la concentracion. Se anadio agua destilada (23 ml) a la mezcla a una tasa de 1 ml/minuto al tiempo que se agitaba, para obtener un liquido de dispersion de partlculas finas revestidas.

Se sometio el llquido de dispersion obtenido a ultracentrifugacion de la misma manera que en el Ejemplo 1, para obtener una preparacion.

Ejemplo de ensayo 1

Se examinaron el diametro medio de particula, las tasas de recuperacion de FD y EPC, y la estabilidad en suero bovino fetal (FBS) de cada una de las preparaciones obtenidas en los Ejemplos 1 a 3 y Ejemplo Comparativo 1 por medio de los siguientes metodos. Los resultados se muestran en la tabla 1.

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Diametro medio de partlcuia

Se midio ei diametro medio de partlcuia de ias partlcuias finas revestidas en una soiucion saiina de fosfato (PBS) con un metodo de dispersion de iuz dinamica (DLS) usando un aparato A MODELO ELS-800 (fabricado por Otsuka Eiectronics, Co., Ltd., io mismo apiica en ios siguientes ejempios).

Tasas de recuperacion de FD y EPC

Se diiuyo cada preparacion con PBS de forma que ia concentracion totai de ilpidos fuese de 30 mg/mi y posteriormente se diiuyo 1000 veces con PBS. Se anadieron 50 pi de 10% p/v de TRITON X-100 (disponibie en Wako Pure Chemicai Industries, Ltd., io mismo apiica en ios ejempios siguientes) y PBS (400 pi) a cada ilquido diiuido (50 pi) y se agito mediante un mezciador vorticiai. Se diiuyo ei sobrenadante obtenido por medio de uitracentrifugacion en cada uno de ios Ejempios y Ejempios comparativos anteriores, 10 veces con PBS, y se anadieron 10 % en p/v de TRITON X-100 (50 pi) y PbS (400 pi) a cada ilquido diiuido (50 pi) y se agito mediante un mezciador vorticiai. Se coiocaron 100 pi de ios ilquidos obtenidos de este modo en una micropiaca de 96 pociiios respectivamente, y se midieron sus intensidades de fiuorescencia a una iongitud de onda de excitacion de 485 nm y una iongitud de onda de fiuorescencia de 530 nm, usando un iector de piacas de fiuorescencia (ARVOsx-4 fabricado por Waiiac, io mismo apiica en ios siguientes ejempios). Entre tanto, se midieron ias intensidades de fiuorescencia de ios ilquidos FD-PBS que tenlan concentraciones de 1, 0,5 y 0,25 pg/mi respectivamente, para obtener una curva de caiibracion. Se obtuvo ia concentracion de FD de cada preparacion usando ia curva de caiibracion. Ademas, se obtuvo ia concentracion de EPC de cada preparacion mediante ei uso de Phospoiipid C-TEST WAKO (disponibie en Wako Pure Chemicai Industries, Ltd., io mismo apiica en ios siguientes ejempios).

Se caicuiaron ia tasa de recuperacion de FD y ia tasa de recuperacion de EPC de cada preparacion usando ias siguientes ecuaciones (1) y (2).

[Ecuacion 1]

Tasa de Recuperacion de FD (%) = A1 / (A1 + B1) x 100 (1)

A1: contenido de FD de ias partlcuias finas revestidas (pg) = Concentracion de FD en ia fraccion de partlcuias finas revestidas (pg/mi) x Voiumen de partlcuias finas revestidas (mi)

B1: contenido de FD dei sobrenadante (pg) = concentracion de FD en ei sobrenadante (pg/mi) x Voiumen de sobrenadante (mi)

[Ecuacion 2]

Tasa de Recuperacion de EPC (%) = A2 / (A2 + B2) x 100 (2)

A2: contenido de EPC de ias partlcuias finas revestidas (pg) = Concentracion de EPC en ia fraccion de partlcuias finas revestidas (pg/mi) x Voiumen de partlcuias finas revestidas (mi)

B2: contenido de EPC dei sobrenadante (pg) = Concentracion de ePc en ei sobrenadante (pg/mi) x Voiumen de sobrenadante (mi)

Estabiiidad en FBS

Se diiuyo cada preparacion con PBS de forma que ia concentracion totai de ilpidos fuese de 30 mg/mi y se anadio FBS (2970 pi) y se mezcio con 30 pi de ilquido diiuido.

Se aisiaron partes de 500 pi a partir de ia mezcia obtenida inmediatamente despues de ia mezcia y posteriormente se permitio ei reposo de ia mezcia a 37 °C durante 3 horas, y se sometio a cromatografla de permeabiiidad de gei (GPC), de forma respectiva. Se recuperaron 10 fracciones (cada una comprendla 100 gotas) a partir de cada porcion, y se agitaron ias fracciones mediante sacudidas con un mezciador vorticiai para preparar ias muestras. Para determinar ei contenido de FD de cada muestra, se anadieron 10 % en p/v de TRITON X-100 (50 pi) y PBS (400 pi) a 50 pi de ia muestra y se agito mediante un mezciador vorticiai. Se coiocaron 100 pi de ios ilquidos obtenidos de esta forma en una micropiaca de 96 pociiios respectivamente, y se midieron sus intensidades de fiuorescencia a una iongitud de onda de excitacion de 485 nm y una iongitud de onda de fiuorescencia de 530 nm usando ARVOsx-4. Se caicuiaron ias retenciones de farmaco de ias partlcuias finas trascurridas 0 y 3 horas usando ia siguiente ecuacion (3).

[Ecuacion 3]

Retention de FD tras 0 horas (%) = A3 / B3 x 100

Retention de FD tras 3 horas (%) = C3 / D3 x 100 (3)

A3 = !{(Intensidad de fiuoresencia de fraccion) Fracciones de partlcuias finas revestidas (tras 0 horas) x

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(Volumen de fraccion) Fracciones de partlcuias finas revestidas (tras 0 horas)}

B3 = Z{(intensidad de fluorescencia de fraccion) Todas las fracciones (tras 0 horas) x (Volumen de fraccion) Todas las fracciones (tras 0 horas)}

C3 = Z {(Intensidad de fluorescencia de fraccion)Fracciones partlculas finas revestidas (tras 3 horas) x (Volumen de fraccion) Fracciones de partlculas revestidas (tras 3 horas)}

D3 = Z{(Intensidad de fluoresencia de fraccion) Todas las fracciones (tras 3 horas) x (Volumen de fraccion) Todas las fracciones (tras 3 horas) }

[Tabla 11

Tasa de

Diametro medio de partlcula (nm) recuperation (%) Retencion en FBS (%)

FD EPC 0 horas 3 horas

Ej. 1

128 92 93 No medido No medido

Ej. 2

150 85 84 61 58

Ej. 3

114 86 82 63 59

Comp. Ej. 1

145 96 88 68 67

Como se muestra en la Tabla 1, las preparaciones obtenidas en los Ejemplos 1 a 3 tuvieron diametros de partlcula pequenos como con la preparacion obtenida en el Ejemplo Comparativo 1 y las preparaciones de los Ejemplos 1 y 3 tuvieron diametros de partlcula pequenos de 130 nm o menos y 115 nm o menos, de forma respectiva. Ademas, en las preparaciones de los Ejemplos 1 a 3, el farmaco se encerro de forma eficiente y firme en las partlculas finas revestidas como la preparacion del Ejemplo comparativo 1. El metodo de la presente invencion para producir las partlculas finas revestidas es mas simple que los metodos convencionales, y sin limitation de que los componentes tengan que mezclarse de forma gradual, etc. A pesar de esto, se pueden obtener excelentes partlculas finas revestidas similares a las obtenidas en los metodos convencionales.

Ejemplo 4

Se anadio PBS a la preparacion del Ejemplo 1 para ajustar la concentration de EPC en 24 mg/ml, y se mezclaron 0,5 ml del llquido obtenido con una solution preparada mediante disolucion de PEG-DSPE (2,5 mg) en etanol (0,02 ml). Se calento la mezcla a 70 °C durante 2 minutos para obtener la preparacion con superficie modificada con PEG.

Ejemplo comparativo 2

Se anadio PBS a la preparacion del Ejemplo Comparativo 1 para ajustar la concentracion de EPC en 24 mg/ml y se mezclaron 0,5 ml del llquido obtenido con una solucion preparada mediante disolucion de PEG-DSPE (2,5 mg) en etanol (0,02 ml). Se calento la mezcla a 70 °C durante 2 minutos para obtener la preparacion con superficie modificada con PEG.

Ejemplo de ensayo 2

Se examinaron las cineticas sangulneas de las preparaciones obtenidas en el Ejemplo 4 y Ejemplo comparativo 2 mediante los siguientes metodos. Los resultados se muestran en la Tabla 2 y en la Figura 1.

Cineticas sangulneas

Se diluyo cada preparacion con PBS de forma que la concentracion total de llpidos fuese 5 mg/ml y se administro a una rata a una relation de llpido/peso de rata de 10 mg/kg. Se tomaron muestras sangulneas de la rata transcurridos 1 minuto, 10 minutos, 30 minutos, 1 hora, 3 horas, 6 horas y 24 horas desde la administration, y se sometieron a centrifugation para obtener plasmas, de forma respectiva. Para determinar el contenido de FD de cada plasma, se anadieron 10 % p/v de TRITON X-100 (50 pl) y pBs (400 pl) a 50 pl de plasma y se agito mediante un mezclador vorticial. Se colocaron 100 pl de los llquidos obtenidos de esta forma en una microplaca de 96 pocillos respectivamente, y se midieron sus intensidades de fluorescencia a una longitud de onda de excitation de 485 nm y una longitud de onda de fluorescencia de 530 nm usando ARVOsx-4. Entre tanto, se midieron respectivamente las intensidad de fluorescencia de los llquidos FD-PBS que tenlan concentraciones de 1, 0,5 y 0,25 pg/ml, para obtener una curva de calibration. Se obtuvo la concentracion de FD del plasma usando la curva de calibration. Se considero la cantidad de plasma por cada 100 g de rata como 7,8 ml, y de este modo se calculo la retention de farmaco en la sangre (%) con respecto a la dosis de administracion, y se calculo AUC0-24 h (pg min/dosis) mediante un metodo trapezoidal.

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[Tabla 2]

Diametro medio de particula (nm) AUC (pg min/dosis)

Ej. 4

128 423

Comp. Ej. 2

145 342

Como se muestra en la Tabla 2, la preparation obtenida en el Ejemplo 4 exhibio una retention excelente en sangre de un cuerpo vivo como la preparation obtenida en el Ejemplo comparativo 2. El metodo de la presente invention para producir partlculas finas revestidas es un metodo simple, y a pesar de esto, se pueden obtener excelentes partlculas finas revestidas similares a las obtenidas en los metodos convencionales.

Ejemplo 5

Disolucion de componente(s) de capa de revestimiento (llquido A); Se disolvieron EPC (15 mg) y PEG-DSPE (3,125 mg) en 1 ml de un disolvente mixto de etanol/agua (8/5) para preparar un llquido A5.

Llquido de dispersion de partlculas finas nucleares (llquido B); Se dispersaron DOTAP (90 mg) y PEG-DSPE (36 mg) en agua (2 ml). Se hizo pasar el llquido de dispersion resultante a traves de una membrana de policarbonato que tenia un diametro de poro de 0,4 pm 11 veces, se hizo pasar a traves de una membrana de policarbonato que tenia un diametro de poro de 0,1 pm 11 veces, y se hizo pasar a traves de una membrana de policarbonato que tenia un diametro de poro de 0,05 pm (disponible en Whatman, Inc., lo mismo aplica en los siguiente ejemplos) 25 veces. A 0,167 ml del llquido de dispersion se anadio una solution que comprendia 0,083 ml de agua y 1,87 mg de ODN (fluoresceina marcada con isocianato, fosforotioato oligooxiribonucleotido, que tenia una secuencia de (5') CCT CTT ACC TCA G (3'), un numero de bases de 13 y un peso molecular de 4573,57, disponible en SciMedia Ltd., lo mismo aplica en los siguientes ejemplos), para preparar un llquido B5.

Se mezclo el llquido A5 con el llquido B5 de forma que la concentration de etanol fuese aproximadamente 50 % en volumen y se dispersaron los componentes de la capa de revestimiento y las partlculas finas nucleares a la concentration, para obtener un llquido de dispersion de partlculas finas revestidas.

Se mezclo el llquido de dispersion obtenido de partlculas finas con agua (11,25 ml) y se sometio a ultracentrifugacion (1 hora, 110.000 x g, 25 °C) y se retiro el sobrenadante para obtener una preparation.

Ejemplo 6

Disolucion de componente(s) de capa de revestimiento (llquido A); Se disolvieron EPC y PEG-DSPE en 0,9 ml de un disolvente mixto de etanol/agua (8/5), siendo las cantidades de EPC y PEG-DSPE las mismas que las de llquido A1 del Ejemplo 5, para preparar un llquido A6.

Liquido de dispersion de partlculas finas nucleares (llquido B); Se anadio agua destilada (0,1 ml) al llquido B5 del Ejemplo 5 para preparar un liquido B6.

Se mezclo el liquido A6 con el llquido B6 de manera que la concentration de etanol fuese aproximadamente 45 % en volumen y se dispersaron los componentes de la capa de revestimiento y las partlculas finas nucleares a la concentration, para obtener un liquido de dispersion de partlculas finas revestidas.

El liquido de dispersion obtenido de partlculas finas revestidas se mezclo con agua (10 ml) y se sometio a ultracentrifugacion de la misma forma que en el Ejemplo 5, para obtener una preparation.

Ejemplo 7

Disolucion de componente(s) de capa de revestimiento (llquido A); Se disolvieron EPC y PEG-DSPE en 0,8 ml de un disolvente mixto de etanol/agua (8/5), siendo las cantidades de EPC y PEG-DSPE las mismas que las de liquido A5 del Ejemplo 5, para preparar un liquido A7.

Llquido de dispersion de partlculas finas nucleares (liquido B); Se anadio agua (0,2 ml) al liquido B5 del Ejemplo 5 para preparar un llquido B7.

Se mezclo el llquido A7 con el liquido B7 de manera que la concentration de etanol fuese aproximadamente 40 % en volumen y se dispersaron los componentes de la capa de revestimiento y las partlculas finas nucleares, para obtener un liquido de dispersion de partlculas finas revestidas.

El llquido de dispersion obtenido de partlculas finas revestidas se mezclo con agua (8,75 ml) y se sometio a ultracentrifugacion de la misma forma que en el Ejemplo 5, para obtener una preparation.

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Ejemplo 8

Disolucion de componente(s) de capa de revestimiento (llquido A); Se disolvieron EPC y PEG-DSPE en 0,7 ml de un disolvente mixto de etanol/agua (8/5), siendo las cantidades de EPC y PEG-DSPE las mismas que las de llquido A5 del Ejemplo 5, para preparar un llquido A8.

Llquido de dispersion de partlculas finas nucleares (llquido B); Se anadio agua destilada (0,3 ml) al llquido B5 del Ejemplo 5 para preparar un llquido B8.

Se mezclo el llquido A8 con el llquido B8 de manera que la concentracion de etanol fuese de aproximadamente 35 % en volumen y se dispersaron los componentes de la capa de revestimiento y las partlculas finas nucleares a la concentracion, para obtener un llquido de dispersion de partlculas finas revestidas.

El llquido de dispersion obtenido de partlculas finas revestidas se mezclo con agua (7,5 ml) y se sometio a ultracentrifugacion de la misma forma que en el Ejemplo 5, para obtener una preparacion.

Ejemplo 9 (no de acuerdo con la invencion)

Disolucion de componente(s) de capa de revestimiento (llquido A); Se disolvieron EPC y PEG-DSPE en 0,5 ml de un disolvente mixto de etanol/agua (8/5), siendo las cantidades de EPC y PEG-DSPE las mismas que las de llquido A5 del Ejemplo 5, para preparar un llquido A9.

Llquido de dispersion de partlculas finas nucleares (llquido B); Se anadio agua destilada (0,5 ml) al llquido B5 del Ejemplo 5 para preparar un llquido B9.

Se mezclo el llquido A9 con el llquido B9 de manera que la concentracion de etanol fuese de aproximadamente 25 % en volumen y se dispersaron los componentes de la capa de revestimiento y las partlculas finas nucleares a la concentracion, para obtener un llquido de dispersion de partlculas finas revestidas.

El llquido de dispersion obtenido de partlculas finas revestidas se mezclo con agua (5 ml) y se sometio a ultracentrifugacion de la misma forma que en el Ejemplo 5, para obtener una preparacion.

Ejemplo comparativo 3

Disolucion de componente(s) de capa de revestimiento (llquido A); Se disolvieron EPC (30 mg) y PEG-DSPE (6,25 mg) en etanol (1 ml) para preparar un llquido a3.

Llquido de dispersion de partlculas finas nucleares (llquido B); Se dispersaron DOTAP (60 mg) y PEG-DSPE (24 mg) en agua (2 ml). Se hizo pasar el llquido de dispersion resultante a traves de una membrana de policarbonato que tenia un diametro de poro de 0,4 pm 11 veces, se hizo pasar a traves de una membrana de policarbonato que tenia un diametro de poro de 0,1 pm 11 veces, y se hizo pasar a traves de una membrana de policarbonato que tenia un diametro de poro de 0,05 pm 21 veces. A 0,5 ml de la dispersion liquida se anadio una solucion que comprendia 0,25 ml de agua y 3,75 mg de ODN para preparar un llquido b3.

Se mezclaron 0,25 ml del llquido a3 con el llquido b3 de manera que la concentracion de etanol fuese aproximadamente 62,5 % en volumen y se disolvieron los componentes de la capa de revestimiento y las partlculas finas nucleares a la concentracion. Se anadio agua (23 ml) a la mezcla a una tasa de 1 ml/minuto al tiempo que se agitaba, para obtener un llquido de dispersion de partlculas finas revestidas.

Se sometio el llquido de dispersion obtenido de partlculas finas revestidas a ultracentrifugacion de la misma manera que en el Ejemplo 5, para obtener una preparacion.

Ejemplo de ensayo 3

Se examinaron el diametro medio de particula, las tasas de recuperacion de ODN y EPC, y la estabilidad en FBS de cada una de las preparaciones obtenidas en los Ejemplos 5 a 9 y Ejemplo comparativo 3 mediante los siguientes metodos. Los resultados se muestran en la tabla 3.

Diametro medio de particula

Se midio el diametro medio de particula de las partlculas finas revestidas en PBS mediante DLS.

Tasas de recuperacion de ODN y EPC

Se diluyo cada preparacion con PBS de forma que la concentracion total de llpidos fuese de 30 mg/ml y posteriormente se diluyo 1000 veces con PBS. Se anadieron 10 % p/v de TRITON X-100 (50 pl) y PBS (400 pl) a 50

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55

60

|j| del llquido diluido, y se agito mediante un mezclador vorticial. Se diluyo el sobrenadante obtenido mediante ultracentrifugacion en cada uno de los Ejemplos y Ejemplo Comparativo anteriores 10 veces con PBS, y se anadieron 10 % p/v de TRITON X-100 (50 jl) y PBS (400 jl) a 50 jl del llquido diluido, y se agito mediante un mezclador vorticial. Se colocaron 100 jl de los llquidos obtenidos de esta forma en una microplaca de 96 pocillos respectivamente, y se midieron sus intensidades de fluorescencia a una longitud de onda de excitacion de 485 nm y una longitud de onda de fluorescencia de 530 nm usando ARVOsx-4. Entre tanto, se midieron respectivamente las intensidades de fluorescencia de los llquidos de ODN-PBS que tenlan concentraciones de 1,5, 1,5/4, 1,5/42, 1,5/43, 1,5/44 y 1,5/45 jg/ml, para obtener una curva de calibracion. Se obtuvo la concentracion de ODN de cada preparacion usando la curva de calibracion. Ademas, se obtuvo la concentracion de EPC de cada preparacion mediante el uso de Phospholipid C-TEST WAKO.

Se calcularon la tasa de recuperacion de ODN y la tasa de recuperacion de EPC de cada preparacion usando las siguientes ecuaciones (4) y (5).

[Ecuacion 4]

Tasa de recuperacion de ODN (%) = A4 / (A4 + B4) x 100 (4)

A4: contenido de ODN de las partlculas finas revestidas (jg) = Concentracion de ODN en las partlculas finas revestidas (jg/ml) x Volumen de las partlculas finas revestidas (ml)

B4: contenido de ODN del sobrenadante (jg) = Concentracion de ODN en el sobrenadante (jg/ml) x Volumen de sobrenadante (ml)

[Ecuacion 5]

Tasa de recuperacion de EPC (%) = A2 / (A5 + B5) x 100 (5)

A5: Contenido de EPC de las partlculas finas revestidas (jg) = Concentracion de EPC en las partlculas finas revestidas (jg/ml) x Volumen de las partlculas finas revestidas (ml)

B5: contenido de EPC del sobrenadante (jg) = Concentracion de EPC en el sobrenadante (jg/ml) x Volumen de sobrenadante (ml)

Estabilidad en FBS

Se diluyo cada preparacion con PBS de manera que la concentracion total de llpidos fuese de 30 mg/ml y se anadieron 50 mg/ml de dextran sulfato de sodio (60 jl) y FBS (2910 jl) y se mezclo con 30 jl de llquido diluido.

Se aislaron porciones de 500 jl a partir de la mezcla obtenida inmediatamente despues de la mezcla y posteriormente se permitio el reposo de la mezcla a 37 °C durante 3 horas, y se sometio a GPC, de forma respectiva. Se recuperaron 10 fracciones (cada una comprendla 100 gotas) a partir de cada porcion, y se agitaron las fracciones mediante sacudidas con un mezclador vorticial para preparar las muestras. Para determinar el contenido de ODN de cada muestra, se anadieron 10 % en p/v de TRItOn X-100 (50 jl) y PBS (400 jl) a 50 jl de la muestra y se agito mediante un mezclador vorticial. Se colocaron 100 jl de los llquidos obtenidos de esta forma en una microplaca de 96 pocillos respectivamente, y se midieron sus intensidades de fluorescencia a una longitud de onda de excitacion de 485 nm y una longitud de onda de fluorescencia de 530 nm usando ARVOsx-4. Se calcularon las tasas de recuperacion de farmaco despues de 0 horas y 3 horas usando la siguiente ecuacion (6).

[Ecuacion 6]

Tasa de recuperacion de ODN tras 0 horas (%) = A6 / B6 x 100

(6)

Tasa de recuperacion de ODN tras 3 horas (%) = C6 / D6 x 100

A6 = !{(Intensidad de fluorescencia de fraccion)Fracciones de partlculas finas revestidas (tras 0 horas) x (Volumen de fraccion)

Fracciones de partlculas finas revestidas (tras 0 horas)}

B6 = !{(Intensidad de fluorescencia de fraccion) Todas las fracciones (tras 0 horas) x (Volumen de la fraccion) Todas las fracciones

(tras 0 horas)}

C6 = !{(Intensidad de fluorescencia de fraccion)Fracciones de partlculas finas revestidas (tras 3 horas) x (Volumen de fraccion)

Fracciones de partlculas finas revestidas (tras 3 horas)}

D6 = !{(Intensidad de fluorescencia de fraccion)Todas las fracciones (tras 3 horas) x (Volumen de fraccion) Todas las fracciones (tras

3 horas)}

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

_________________________[Tabla 31_________________________________

Tasa de

Diametro medio de partlcula (nm) recuperacion (%) Retention en FBS (%)

ODN Llpido 0 horas 3 horas

Ej. 5

124 84 45 68 43

Ej. 6

125 85 57 84 62

Ej. 7

119 88 70 87 73

Ej. 8

129 88 70 79 61

Ej. 9

110 85 29 55 32

Comp. Ej. 3

145 97 59 No medido No medido

Como se muestra en la Tabla 3, las preparaciones obtenidas en los Ejemplos 5 a 9 tuvieron diametros de partlcula pequenos como la preparation obtenida en el Ejemplo comparativo 3 y las preparaciones de los Ejemplos 5 a 8 tuvieron diametros de partlcula mas pequenos, de 130 nm o menos, respectivamente, y la preparacion del Ejemplo 9 tuvo un diametro de partlcula mas pequeno, de 115 nm o menos. Ademas, en las preparaciones de los Ejemplos 5 a 9, el farmaco se encerro de forma eficiente y firme en las partlculas finas revestidas como la preparacion del Ejemplo comparativo 3. El metodo de la invention llevado a cabo en los Ejemplos 5 a 9 comprendio las etapas de: preparar el llquido A que comprendla el disolvente organico polar, en el que se disolvieron los componentes de la capa de revestimiento; preparar el llquido B apto para mezcla con el llquido A, en el que se dispersaron las partlculas finas nucleares y el disolvente organico polar no estuvo presente o e disolvente organico polar estuvo presente en una relation menor que en el llquido A; y mezclar el llquido A con el llquido B para preparar el llquido C, produciendo de este modo las partlculas finas revestidas que comprendlan las partlculas finas nucleares con los componentes de capa de revestimiento. El metodo es mas simple que los metodos convencionales, y sin limitation de que los componentes se tengan que mezclar de forma gradual, etc. A pesar de esto, se podrlan obtener excelentes partlculas finas revestidas mediante el metodo de la presente invencion similares a las obtenidas en los metodos convencionales, incluso en el caso de usar un farmaco relativamente grande de ODN como las partlculas finas nucleares.

Ejemplo 10 (no de acuerdo con la invencion)

Llquido de dispersion de componentes de capa de revestimiento y partlculas finas nucleares (llquido H); Se dispersaron EPC (30 mg) y PEG-DSPE (6,25 mg) en agua (0,75 ml). Se hizo pasar el llquido de dispersion resultante a traves de una membrana de policarbonato que tenia un diametro de poro de 0,4 pm 11 veces, y se hizo pasar a traves de una membrana de policarbonato que tenia un diametro de poro de 0,1 pm 25 veces, para obtener un llquido de dispersion lipldica. Se mezclaron 0,375 ml del llquido de dispersion lipldica con el llquido B5 del Ejemplo 5 para preparar un llquido H10.

Se anadio etanol (0,625 ml) al llquido H10 de manera que la concentration de etanol fuese de aproximadamente 50 % en volumen y se dispersaron los componentes de la capa de revestimiento y las partlculas finas nucleares a la concentracion. Se agito el llquido obtenido durante 30 minutos para obtener un llquido de dispersion de partlculas finas revestidas.

El llquido de dispersion obtenido de partlculas finas revestidas se mezclo con agua (11,25 ml) y se sometio a ultracentrifugacion de la misma forma que en el Ejemplo 5, para obtener una preparacion.

Ejemplo 11 (no de acuerdo con la invencion)

Llquido de dispersion de componentes de capa de revestimiento y partlculas finas nucleares (llquido H); Se preparo un llquido H11 de la misma forma que el llquido H10 del Ejemplo 10, exceptuando que la cantidad de agua fue de 1 ml y se mezclaron 0,5 ml del llquido de dispersion lipldica con el llquido B5 del Ejemplo 5.

Se anadio etanol (0,5 ml) al llquido H11 de manera que la concentracion de etanol fuese de aproximadamente 40 % en volumen y se dispersaron los componentes de la capa de revestimiento y las partlculas finas nucleares a la concentracion. Se agito el llquido obtenido durante 30 minutos para obtener un llquido de dispersion de partlculas finas revestidas.

El llquido de dispersion obtenido de partlculas finas revestidas se mezclo con agua (8,75 ml) y se sometio a ultracentrifugacion de la misma forma que en el Ejemplo 5, para obtener una preparacion.

Ejemplo 12 (no de acuerdo con la invencion)

Llquido de dispersion de componentes de capa de revestimiento y partlculas finas nucleares (llquido H); Se preparo un llquido H12 de la misma forma que el llquido H10 del Ejemplo 10 exceptuando que la cantidad de agua fue de 1.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

ml y 0. Se mezclaron 563 ml del llquido de dispersion lipldica con el llquido B5 del Ejemplo 5.

Se anadio etanol (0,438 ml) al llquido H12 de manera que la concentration de etanol fuese aproximadamente 35 % en volumen y se dispersaron los componentes de la capa de revestimiento y las partlculas finas nucleares a la concentracion. Se agito el llquido obtenido durante 30 minutos para obtener un llquido de dispersion de partlculas finas revestidas.

El llquido de dispersion obtenido de partlculas finas revestidas se mezclo con agua (7,5 ml) y se sometio a ultracentrifugacion de la misma forma que en el Ejemplo 5, para obtener una preparation.

Ejemplo 13 (no de acuerdo con la invencion)

Llquido de dispersion de componentes de capa de revestimiento y partlculas finas nucleares (llquido H); Se preparo un llquido Hl3 de la misma forma que el llquido H10 del Ejemplo 10 exceptuando que la cantidad de agua fue de 1,375 ml y se mezclaron 0,688 ml del llquido de dispersion lipldica con el llquido B5 del Ejemplo 5.

Se anadio etanol (0,313 ml) al llquido H13 de manera que la concentracion de etanol fuese aproximadamente 25 % en volumen y se dispersaron los componentes de la capa de revestimiento y las partlculas finas nucleares a la concentracion. Se agito el llquido obtenido durante 30 minutos para obtener un llquido de dispersion de partlculas finas revestidas.

El llquido de dispersion obtenido de partlculas finas revestidas se mezclo con agua (5 ml) y se sometio a ultracentrifugacion de la misma forma que en el Ejemplo 5, para obtener una preparacion.

Ejemplo de ensayo 4

Se examinaron el diametro medio de partlcula, las tasas de recuperation de ODN y EPC, y la estabilidad en FBS de cada una de las preparaciones obtenidas en los Ejemplos 10 a 13 de la misma manera que en el Ejemplo de ensayo 3. Los resultados se muestran en la tabla 4.

_________________________[Tabla 41__________________________________

Tasa de

Diametro medio de partlcula (nm) recuperacion (%) Retention en plasma (%)

ODN EPC 0 horas 3 horas

Ej. 10

108 79 43 56 29

Ej. 11

98 90 76 82 61

Ej. 12

99 93 74 88 70

Ej. 13

95 90 79 73 60

Comp. Ej. 3

145 97 59 No medido No medido

Como se muestra en la Tabla 4, las preparaciones obtenidas en los Ejemplos 10 a 13 tuvieron diametros de partlcula pequenos como la preparacion obtenida en el Ejemplo comparativo 3 y la preparacion del Ejemplo 10 tuvo un diametro de partlcula pequeno de 115 nm o menos y las preparaciones de los Ejemplos 11 a 13 tuvieron diametros de partlcula de 100 nm o menos, de forma respectiva. Ademas, en las preparaciones de los Ejemplos 10 a 13, el farmaco se encerro de forma eficiente y firme en las partlculas finas revestidas como la preparacion del Ejemplo comparativo 3. El metodo de la presente invencion llevado a cabo en el ejemplo 13 comprendio las etapas de: preparar el llquido H, en el que se dispersaron los componentes de la capa de revestimiento y las partlculas finas nucleares; y mezclar el llquido H con el llquido apto para mezcla con el llquido H, en el que el disolvente organico polar estuvo presente, para preparar el llquido I, produciendo de este modo las partlculas finas revestidas que comprendlan las partlculas finas nucleares con los componentes de capa de revestimiento. El metodo es mas simple que los metodos convencionales, y sin limitation de que los componentes se tengan que mezclar de forma gradual, etc. A pesar de esto, se pudieron obtener excelentes partlculas finas revestidas por medio del metodo de la presente invencion, similares a las obtenidas en los metodos convencionales, incluso en el caso de usar el farmaco relativamente grande de ODN en las partlculas finas nucleares.

Como resulta evidente a partir de las Tablas 3 y 4, el metodo de la presente invencion de production de partlculas finas revestidas resulta ventajoso tambien debido a que la cantidad del disolvente organico polar usado puede ser mas pequena en comparacion con los metodos convencionales.

Aplicabilidad industrial

De acuerdo con la presente invencion, se proporciona un metodo para producir de forma sencilla partlculas finas revestidas en el cual las partlculas finas nucleares se revisten con un componente de capa de revestimiento y

similares. Ademas, se proporciona un metodo de produccion de partlcuias finas nucleares en el que se encierra un farmaco de forma eficiente y/o firme.

Claims (14)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   40

   45

   50

   55

   60

   65

   REIVINDICACIONES

   1. Un metodo de produccion de partlcuias finas revestidas en el que las partlculas finas nucleares se revisten con un componente de capa de revestimiento, que comprende las etapas de:

   preparar un llquido A que comprende un componente de capa de revestimiento o componentes de capa de revestimiento disueltos en el mismo y un disolvente organico polar;

   preparar un llquido B apto para mezcla con el llquido A, en el que estan dispersas las partlculas finas nucleares y en el no esta contenido un disolvente organico polar, o dicho disolvente organico polar esta contenido en una relacion menor que en el llquido A; y

   mezclar el llquido A con el llquido B para preparar un llquido C de manera que la concentration del disolvente organico polar en el llquido C sea del 30 al 60 % en volumen, las partlculas finas nucleares no se disuelvan en el llquido C y el componente o componentes de capa de revestimiento esta/estan en estado dispersado en el llquido C; y

   dejar o mezclar el llquido C durante 3 segundos a 30 minutos.
2. 2. El metodo de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el componente o componentes de la capa de revestimiento es/son una o mas sustancia o sustancias seleccionadas entre llpidos y tensioactivos para la formation de una capa de revestimiento de una membrana lipldica.
3. 3. El metodo de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el componente o componentes de la capa de revestimiento es/son una sustancia o sustancias seleccionadas entre llpidos y tensioactivos para la formacion de una capa de revestimiento de una membrana lipldica, y un derivado lipldico o un derivado de acido graso de una o mas sustancia o sustancias seleccionadas entre sacaridos, peptidos, acidos nucleicos y pollmeros solubles en agua, o un tensioactivo.
4. 4. El metodo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que las partlculas finas nucleares comprenden un derivado lipldico o un derivado de acido graso de una o mas sustancia o sustancias seleccionadas entre sacaridos, peptidos, acidos nucleicos y pollmeros solubles en agua, o un tensioactivo.
5. 5. El metodo de acuerdo con las reivindicaciones 3 o 4, en el que el derivado lipldico o el derivado de acido graso de una o mas sustancia o sustancias seleccionadas entre sacaridos, peptidos, acidos nucleicos y pollmeros solubles en agua, o un tensioactivo, es una o mas sustancia o sustancias seleccionadas entre polijllpidos etilen glicolados), polijllpidos modificados con glicerina), poli(eteres alqullicos de etilen glicol), poli(esteres de acido graso de sorbitan y etilen glicol), poli(esteres de acido graso de etilen glicol), poli(esteres de acido graso de glicerina), polioxietilen polioxipropilen glicoles y esteres de acido graso de glicerina.
6. 6. El metodo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que las partlculas finas nucleares

   son partlculas finas que comprenden, como componente constituyente, uno o mas componente o componentes

   seleccionados entre un farmaco, un conjunto lipldico, liposoma, partlculas en emulsion, un pollmero, un coloide metalico y una preparation de partlculas finas.
7. 7. El metodo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que las partlculas finas nucleares son partlculas finas que comprenden un farmaco como componente constituyente.
8. 8. El metodo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que las partlculas finas nucleares

   son partlculas finas que comprenden, como componente constituyente, un complejo de un farmaco y uno o mas

   componente o componentes seleccionados entre un conjunto lipldico, liposoma, partlculas en emulsion, un pollmero, un coloide metalico y una preparacion de partlculas finas.
9. 9. El metodo de acuerdo con la reivindicacion 8, en el que el conjunto lipldico, el liposoma, las partlculas en emulsion, el pollmero, el coloide metalico o la preparacion de partlculas finas tienen una carga electrostatica opuesta a la del farmaco.
10. 10. El metodo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que las partlculas finas nucleares son partlculas finas que comprenden, como componente constituyente, un complejo de un farmaco anionico y un liposoma que comprende un llpido cationico.
11. 11. El metodo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que las partlculas finas nucleares son partlculas finas que comprenden, como componente constituyente, un complejo de un farmaco cationico y un liposoma que comprende un llpido anionico.
12. 12. El metodo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, en el que las partlculas finas nucleares son partlculas finas que ademas comprenden un agente competitivo de adhesion.
13. 13. El metodo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 12, en el que el farmaco es uno o mas

    componente o componentes seleccionados entre peptidos, protelnas, acidos nucleicos, compuestos de bajo peso molecular, sacaridos y compuestos polimericos.
14. 14. El metodo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 12, en el que el farmaco es uno o mas 5 componente o componentes seleccionados entre genes, ADN, ARN, oligonucleotidos, plasmidos y ARNsi.