ES2635868T3 - Método y composición de formulación de terapia celular - Google Patents

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Abstract

Una composición que comprende una cantidad efectiva de tratamiento de células, de las cuales una parte son células T, donde las células T se han cosechado a partir de cultivo celular y se eliminan de estímulos de activación en el cultivo y las células T cosechadas se formulan para la infusión por un método que comprende (1) poner en contacto las células T con uno o más agentes que ligan un resto de superficie celular sobre al menos una porción de las células T, (2) reticular uno o más agentes con nanoesferas o microesferas biodegradables recubiertas de un medio capaz de reticular uno o más agentes, (3) suspender las células T, uno o más agentes y las nanoesferas o microesferas biodegradables recubiertas en un medio de infusión, y (4) envasar en un recipiente adecuado, en el que las células T están en un estado activado en el medio.

Description

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Metodo y composicion de formulacion de terapia celular Descripcion
CAMPO DE LA INVENCION
[0001] Esta invencion se refiere a metodos para proceso de formulacion de celulas T ex-vivo preparadas para la infusion y una composicion que comprende una cantidad eficaz de tratamiento de las celulas T formuladas para infusion por los metodos.
ANTECEDENTES DE LA INVENCION
[0002] Los metodos de la terapia celular se han desarrollado con el fin de potenciar la respuesta inmune del huesped a los tumores, virus y patogenos bacterianos. Los metodos de terapia celular a menudo implican la activacion ex-vivo y la expansion de celulas T. Ejemplos de este tipo de tratamientos incluyen el uso de celulas de linfocitos infiltrantes de tumores (TIL) (vease la Patente de Estados Unidos N° 5.126.132 concedida a Rosenberg), celulas T citotoxicas (vease la Patente de Estados Unidos N° 6.25.073 concedida a Cai et al., y Patente de Estado Unidos N°5.846.827 concedida a Celis, et al.), celulas de nodulos linfaticos drenantes de tumor expandido (vease la Patente de Estado Unidos N° 6.251.385 concedida a Terman), y varias otras preparaciones de linfocitos (vease la Patente de Estados Unidos N° 6.194.207 concedida a Bell, et al. Patente de Estados Unidos N° 5.443.983 expedida a Ochoa, et al., Patente de Estados Unidos N° 6.040.177 concedida a Riddell et al., Patente de Estados Unidos N° 5.766.920 expedida a Babbitt, et al.).
[0003] Lum LG et al: "Immune Modulation in Cancer Patients After Adoptive Transfer of Anti-CD3/Anti-CD28- Costimulated T Cells-Phase I Clinical Trial", Journal of Immunotherapy, 24 (5): 408-419, 2001-09, describe celulas mononucleares de sangre periferica (PBMC) activadas en cultivo celular con perlas recubiertas con anti-CD3/anti- CD28. Cuando se necesita para la infusion, las celulas activadas, con las perlas eliminadas, se lavan y se suspenden en un medio de infusion.
[0004] Para obtener la maxima eficacia de las celulas T en protocolos de terapia celular, la poblacion de celulas T activada ex vivo debe estar en un estado de activacion maxima tras la infusion. Los esfuerzos para desarrollar metodos mejorados para producir celulas T mas eficaces para uso en protocolos de terapia celular se han centrado en los metodos de activacion ex vivo. Sin embargo, las celulas activadas ex vivo necesitan ser cosechadas y administradas a los pacientes para tener un efecto terapeutico. La recoleccion de las celulas T elimina los estlmulos activadores disponibles en los cultivos ex vivo. Por lo tanto, cuanto mas largo sea el tiempo desde la cosecha a la infusion, menor sera la calidad de las celulas T.
[0005] Hay una necesidad de desarrollar formulaciones de celulas T para la infusion que mantienen las celulas en un estado que puede orquestar maximalmente una respuesta inmune al cancer, enfermedades infecciosas y otros estados de enfermedad, tanto en el momento de la infusion como mientras que circulan en la sangre. Los esfuerzos para mantener el estado de activacion de las celulas T en el momento de la infusion han implicado mas comunmente la formulacion de las celulas T con IL-2 exogena. La administracion sistemica de IL-2 a pacientes tambien se ha utilizado para mantener el estado de activacion de las celulas T despues de la infusion. Sin embargo, administracion de IL-2 exogena es extremadamente toxica para los pacientes y no ha dado como resultado un beneficio significativo para los pacientes sometidos a infusiones de celulas T.
RESUMEN DE LA INVENCION
[0006] Esta invencion incluye celulas T preparadas ex vivo que se cosechan a partir de condiciones de cultivo celular y formuladas en medios adecuados para perfusion. El metodo de formulacion implica: (1) marcar las celulas con uno o mas agentes que tienen reactividad para los movimientos superficiales de las celulas T capaces de suministrar senales de activacion tras la reticulacion; (2) mezclar las celulas marcadas con nanoesferas o microesferas biodegradables recubiertas con un material capaz de reticular los agentes unidos a los restos de la superficie de las celulas T; (3) suspender la mezcla de celulas T marcadas y esferas de reticulacion biodegradables recubiertas en un medio adecuado para infusion; (4) envasar la mezcla en un recipiente adecuado, tal como una jeringa o una bolsa de infusion intravenosa; y (5) administracion parenteral de dicha mezcla a un paciente. 0007
[0007] Alternativamente, la invencion puede lograrse con un metodo de formulacion que implica: (1) mezclar una poblacion de celulas T con las esferas nano biodegradables o microesferas recubiertas con un primer material y una o mas segundos materiales, mientras que el primer material se une a los segundos materiales y los segundos materiales tienen reactividad para los restos superficiales en las celulas T, y mientras que la interaccion de los segundos materiales con las celulas T provoca la activacion de las celulas T; (2) suspender la mezcla de celulas T y las esferas biodegradables en un medio adecuado para infusion; y (3) envasar la mezcla en un recipiente adecuado, tal como una jeringa o una bolsa de infusion intravenosa; y (4) administracion parenteral de la mezcla a un paciente.
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[0008] En la practica de la presente invencion, las celulas T destinadas a introducirse se cosechan primero desde el entorno de cultivo celular ex vivo. Las celulas cosechadas se formulan inmediatamente para infusion, se criopreservan para una formulacion posterior o se envlan a la localizacion del paciente para la formulacion.
[0009] Tras la formulacion por el metodo de la presente invencion, todas las celulas T para la infusion se activaran al maximo en un vehlculo de suministro no toxico.
[0010] Para los fines de la presente invencion, todas las referencias a las celulas T incluyen una poblacion de celulas con al menos una parte de las celulas que contienen celulas T. Las celulas T son celulas que expresan TCR, incluyendo TCR a/p y y/S. Las celulas T incluyen todas las celulas que expresan CD3, incluyendo subconjuntos de celulas T que tambien expresan CD4 y CD8. Las celulas T incluyen celulas tanto naive como de memoria y celulas efectoras tales como CTL. Las celulas T tambien incluyen celulas reguladoras tales como celulas Th1, Tc1, Th2, Tc2, Th3, Treg y Tr1. Las celulas T tambien incluyen celulas NKT y clases unicas similares del linaje de celulas T.
FORMAS DE REALIZACION REFERIDAS
[0011] Las esferas biodegradables de la presente invencion se fabrican preferiblemente de poliesteres alifaticos, tales como poli(acido lactico) (PLA), poli(acido glicolico) (PGA), copollmeros de PLA y PGA (PLGA) o poli(carprolactona) (PCL), y polianhldridos. Las esferas se producen en tamanos de partlcula pequena de 0,1 a 500 micras, preferiblemente menos de 10 micrometres y lo mas preferiblemente menos de 1 micrometre. Las microesferas de esta gama de tamanos son capaces de inyeccion directa en el cuerpo por metodos convencionales. Se prefiere que las esferas revestidas se disenen para degradarse en fluidos fisiologicos dentro de 7 dlas, mas preferiblemente dentro de 3 dlas.
[0012] El primer material preferido para el recubrimiento sobre las esferas biodegradables es anticuerpos policlonal anti-raton policlonales de cabra (o de oveja). A modo de ejemplo, este primer material preferido puede usarse para reticular anticuerpos monoclonales derivados de raton, o fragmentos o derivados geneticamente modificados, que tienen especificidad para restos de superficie de celulas T. Asl, por ejemplo, la mezcla de microesferas (o nanoesferas) anti-raton revestidas de cabra con celulas T humanas marcadas con CD3 anti-humano de raton y mAc CD28 anti-humano de raton provocara la reticulacion de los mAb de raton sobre las celulas T humanas a traves de la union del anticuerpo policlonal anti-raton de cabra con los mAbs de raton. La reticulacion de los mAbs causa la activacion de las celulas T. Alternativamente, el CD3 anti-humano y el anti-CD28 tambien pueden unirse primero, preferiblemente en una relacion 50/50, en las esferas revestidas con anticuerpo policlonal de cabra (o oveja) y mezclarse con las celulas T. Sera evidente para los expertos en la tecnica que se pueden usar muchas combinaciones de primeros materiales y segundos materiales para lograr el objetivo de reticular segundos agentes unidos a restos de superficie de celulas T con el fin de iniciar la transduccion de senales y la activacion de celulas T.
[0013] La mezcla de celulas T con restos de superficie reticulados se suspende en medio de infusion (por ejemplo, soluciones isotonicas tales como solucion salina normal, dextrosa al 5%, Plasma-Lito (Baxter) o Normasol (Abbott). En algunas formas de realizacion, el medio de infusion se suplementa con albumina de suero humano (HSA) al 0,5%-10%.
[0014] La mezcla se ajusta preferiblemente a una concentracion de celulas T final de entre 1 x 107 a 1 x 108 celulas por ml de medio de infusion. En una realizacion preferida, 109 celulas T se formulan en 100 ml de medio de infusion. La formulacion se envasa entonces en uno o mas recipientes, tales como jeringas, bolsas de plastico o botellas de plastico.
[0015] Segun un aspecto, la invencion proporciona una composicion que comprende una cantidad eficaz de tratamiento de las celulas, de las cuales una parte son las celulas T, en donde las celulas T han sido recogidas a partir de cultivo celular y se eliminan de esta manera de estlmulos de activacion en el cultivo y las celulas T recogidas se formulan para infusion por un metodo que comprende (1) poner en contacto las celulas T con uno o mas agentes que ligan un resto de superficie celular sobre al menos una parte de las celulas T, (2) reticular uno o mas agentes con nanoesferas o microesferas biodegradables recubiertas con un material capaz de reticular uno o mas agentes, (3) suspender las celulas T, uno o mas agentes y las nanosferas o microesferas biodegradables revestidas en un medio de infusion, y (4) envasar en un recipiente adecuado, en el que las celulas T estan en un estado activado en el medio.
[0016] En una realizacion, el medio es adecuado para infusion parenteral.
[0017] En otra realizacion, el recipiente es colapsable.
[0018] En una realizacion adicional, el recipiente tiene una parte de jeringa.
[0019] Segun otro aspecto, la invencion proporciona un metodo para la preparation de una cantidad eficaz de tratamiento de las celulas, de las cuales una parte son las celulas T, en las que las celulas T han sido cosechadas a partir de cultivo celular y se eliminan de esta manera de estlmulos de activacion en el cultivo, comprendiendo el
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procedimiento la formulacion de las celulas T recolectadas para infusion por un metodo que comprende: (1) marcar las celulas T obtenidas con uno o mas agentes que tienen reactividad para restos de superficie de celulas T capaces de suministrar senales de activacion tras la reticulacion; (2) mezclar las celulas con laminas con nanoesferas o microesferas biodegradables recubiertas con un material capaz de reticular los agentes unidos a los restos de la superficie de las celulas T; (3) suspender la mezcla de celulas T marcadas y esferas de reticulacion biodegradables recubiertas en un medio de infusion, con lo que las celulas T estan en estado activado; y (4) envasar la mezcla en un recipiente adecuado.
[0020] De acuerdo con un aspecto adicional, la invencion proporciona un metodo para la preparation de una cantidad eficaz de tratamiento de las celulas, de las cuales una parte son las celulas T, en el que las celulas T han sido cosechadas a partir de cultivo celular y se eliminan de esta manera a partir de estlmulos de activacion en el cultivo, comprendiendo el metodo la formulacion de las celulas T recolectadas para infusion por un metodo que comprende: (1) mezclar una poblacion de las celulas T cosechadas con nanoesferas o microesferas biodegradables recubiertas con un primer material y uno o mas segundos materiales; en el que el primer material reticula los segundos materiales y los segundos materiales tienen reactividad para restos superficiales en las celulas T y en donde la interaction de los segundos materiales con las celulas T provoca la activacion de las celulas T; (2) suspender la mezcla de celulas T y las esferas biodegradables en un medio de infusion, con lo que las celulas T estan en estado activado; y (3) envasar la mezcla en un recipiente. Preferiblemente, la mezcla de paquete de la concentration de las celulas T es de al menos I x 107 celulas por ml de medio de infusion.
[0021] De acuerdo con los metodos de la invencion, el recipiente es preferiblemente una jeringa o una bolsa de infusion iv. Mas preferiblemente, el recipiente es plegable. El recipiente plegable incluye preferiblemente paredes opuestas de material flexible y un tubo de salida.

Claims (13)

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    Reivindicaciones
    1. Una composicion que comprende una cantidad efectiva de tratamiento de celulas, de las cuales una parte son celulas T, donde las celulas T se han cosechado a partir de cultivo celular y se eliminan de estimulos de activacion en el cultivo y las celulas T cosechadas se formulan para la infusion por un metodo que comprende (1) poner en contacto las celulas T con uno o mas agentes que ligan un resto de superficie celular sobre al menos una porcion de las celulas T, (2) reticular uno o mas agentes con nanoesferas o microesferas biodegradables recubiertas de un medio capaz de reticular uno o mas agentes, (3) suspender las celulas T, uno o mas agentes y las nanoesferas o microesferas biodegradables recubiertas en un medio de infusion, y (4) envasar en un recipiente adecuado, en el que las celulas T estan en un estado activado en el medio.
  2. 2. La composicion de la reivindicacion 1, en la que el medio es adecuado para infusion parenteral.
  3. 3. La composicion de la reivindicacion 1 o la reivindicacion 2, en la que el recipiente es plegable.
  4. 4. La composicion de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el recipiente tiene una porcion de jeringa.
  5. 5. Un metodo para preparar una cantidad efectiva de tratamiento de celulas, de las cuales una parte son celulas T, en donde las celulas T se han cosechado de cultivo celular y se eliminan de este modo de estimulos de activacion en el cultivo, comprendiendo el metodo la formulacion de las celulas T para infusion por un metodo que comprende: (1) marcar las celulas T cosechadas con uno o mas agentes que tienen reactividad para los movimientos superficiales de las celulas T capaces de suministrar senales de activacion tras la reticulacion; (2) mezclar las celulas marcadas con nanoesferas o microesferas biodegradables recubiertas con un material capaz de reticular los agentes unidos a los restos de la superficie de las celulas T; (3) suspender la mezcla de celulas T marcadas y esferas de reticulacion biodegradables recubiertas en un medio de infusion, con lo que las celulas T estan en estado activado; y (4) envasar la mezcla en un recipiente adecuado.
  6. 6. El metodo de la reivindicacion 5, en el que el recipiente es una jeringa o una bolsa de infusion intravenosa.
  7. 7. El metodo de la reivindicacion 5, en el que el recipiente es colapsable.
  8. 8. El metodo de la reivindicacion 7, en el que el recipiente incluye paredes opuestas de material flexible y un tubo de salida.
  9. 9. Un metodo para preparar una cantidad efectiva de tratamiento de celulas, de las cuales una porcion son celulas T, en el que las celulas T se han cosechado del cultivo celular y se han eliminado de los estimulos de activacion en el cultivo, comprendiendo el metodo la formulacion de las celulas T obtenidas para infusion por un metodo que comprende: (1) mezclar una poblacion de las celulas T recogidas con nanoesferas o microesferas biodegradables revestidas con un primer material y uno o mas segundos materiales; en el que el primer material reticula los segundos materiales y los segundos materiales tienen reactividad para restos superficiales sobre las celulas T y en donde la interaccion de los segundos materiales con las celulas T provoca la activacion de las celulas T; (2) suspender la mezcla de celulas T y las esferas biodegradables en un medio de infusion, con lo que las celulas T estan en estado activado; y (3) envasar la mezcla en un recipiente.
  10. 10. El metodo de la reivindicacion 9, en el que el recipiente es una jeringa o una bolsa de infusion intravenosa.
  11. 11. El metodo de la reivindicacion 9, en el que el recipiente es colapsable.
  12. 12. El metodo de la reivindicacion 11, en el que el recipiente incluye paredes opuestas de material flexible y un tubo de salida.
  13. 13. El metodo de la reivindicacion 9 en el que la mezcla de paquete de la concentracion de las celulas T es de al menos I x 107 celulas por ml de medio de infusion.
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