ES2635016T3 - Nuevos compuestos como inhibidores duales de fosfodiesterasas e histonas deacetilasas - Google Patents

Nuevos compuestos como inhibidores duales de fosfodiesterasas e histonas deacetilasas Download PDF

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Abstract

Un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o cualquier estereoisómero o mezclas del mismo, o bien del compuesto de fórmula (I) o de cualquiera de sus sales farmacéuticamente aceptables, **(Ver fórmula)** donde B1 es un radical seleccionado del grupo que consiste en la fórmula (A"), fórmula (B"), fórmula (C"), y la fórmula (D") **(Ver fórmula)** :p, n y r son independientemente 0 o 1; R1 y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H; alquilo (C1-C7) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; y un anillo monocíclico de 3 a 7 miembros carbocíclico o heterocíclico, que está saturado o parcialmente insaturado o aromático, y que está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre halógeno y alquilo (C1-C3); Z1 es un biradical seleccionado del grupo que consiste en una fórmula (E), fórmula (F"), fórmula (G'), fórmula (H'), fórmula (J'), y fórmula (K): **(Ver fórmula)** Z2 se selecciona entre el grupo que consiste en -Z5-; - Z5-Cy4-; -Z5-Cy4-Z5-; y -Cy4-; Z3 y cada Z5 son independientemente un biradical de un alquilo (C1-C6) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno;

Description

[0001] La presente invención se refiere a compuestos, que son inhibidores duales de PDE y HDAC; y a procesos para su preparación. También se refiere a composiciones farmacéuticas que los contienen, y a su uso en 5 medicina, en particular en el tratamiento y/o prevención de trastornos neurológicos que cursan con déficit o deterioro cognitivo, o enfermedades neurodegenerativas.
Técnica antecedente
10 [0002] El deterioro cognitivo leve está caracterizado por déficit en la memoria, el lenguaje y/u otras funciones cognitivas esenciales que no interfieren con la vida diaria de un individuo. La afección a menudo evoluciona hacia la demencia, que se caracteriza por un deterioro global de las capacidades cognitivas en una medida que interfiere con la vida cotidiana. La enfermedad de Alzheimer (EA) es la forma más común de demencia entre las personas mayores y se refiere a la demencia que no tiene una causa antecedente, tal como ictus, trauma cerebral o alcohol;
15 se caracteriza por la presencia en el cerebro de placas amiloides extracelulares y enredos neurofibrilares intracelulares que provocan disfunción neuronal y muerte celular. El creciente número de pacientes con EA asociados con el envejecimiento de la población hace que el desarrollo de nuevas estrategias de manejo/tratamiento sea crítico.
20 [0003] La búsqueda de una gestión eficaz de la EA se ha basado en gran medida en la hipótesis amiloide (Aß), centrándose principalmente en la reducción del número de placas seniles, aunque con poco éxito hasta la fecha. Se hace hincapié ahora en otros signos distintivos de la enfermedad, tales como la hiperfosforilación de la proteína citoesquelética tau, que es el componente principal de los enredos ovillos.
25 [0004] La transcripción génica y la síntesis de proteínas juegan un papel importante en la formación de nuevos recuerdos. Un aumento en la acetilación de histona (H3 y/o H4) utilizando histona desacetilasa (HDAC) inhibe la reestructuración de la cromatina, que se asocia con la activación de la transcripción génica. Las proteínas HDAC se clasifican en cuatro familias: clase I (HDAC 1-3, HDAC8), clase IIa (HDAC 4, 5, 7 y 9), clase IIb (HDAC 6 y 10) y clase IV (HDAC 11). El patrón de expresión de cada HDAC en el sistema nervioso central (SNC) y su
30 contribución en función de la memoria varía entre cada subtipo.
[0005] El 4-fenilbutirato (PBA), un inhibidor de HDAC, es un potenciador cognitivo eficaz en el modelo de ratón transgénico Tg2576 de EA, que sobreexpresa una forma mutante de la proteína precursora amiloide (APP). Además, la PBA invirtió los signos patológicos de la enfermedad y restauró la pérdida de la columna dendrítica en 35 este modelo animal. Teniendo en cuenta que la PBA inhibe HDAC clase I y IIb, todos estos datos sugieren fuertemente el potencial de los beneficios terapéuticos de los inhibidores HDAC en EA, especialmente para HDAC de clase I y HDAC6. Los inhibidores de HDAC de clase I mejoran la función de la memoria aumentando los niveles de acetilación de histonas, lo que facilita la transcripción génica en el cerebro. Además, los inhibidores de HDAC6 inducen la acetilación tubulina (AcTub) que puede ayudar a la estabilidad del citoesqueleto y el tráfico de proteínas.
40 Esto podría desempeñar un papel importante en el mal plegamiento de trastornos de la proteína, tales como EA, en el que se ha demostrado que los inhibidores de HDAC6 reducen el proceso de la proteína del precursor amiloide (APP) reduciendo su producción del precursor amiloide (C99).
[0006] Además, el envejecimiento está asociado con un aumento en la expresión y actividad de la
45 fosfodiesterasa (PDE). Por lo tanto, las fosfosdiesterasas (PDE) son buenas candidatas para las dianas no amiloides en déficits cognitivos en general y en EA en particular. Rolipram, que es un inhibidor específico de PDE4, fue el primero que resultó útil para restaurar los déficit cognitivos en modelos animales de EA.
[0007] Los inhibidores de fosfodiesterasa (PDE) específicos (por ejemplo, inhibidores de PDE5: Sildenafilo, o
50 Tadalafilo; e, inhibidor de PDE9: PF-4447943 (6-[(3S, 4S)-4-metil-1-(pirimidin-2-ilmetil)pirrolidin-3-il]-1-(tetrahidro-2Hpiran-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4(5H)-ona)) han demostrado que mejoran el rendimiento de la memoria y/o potencian la plasticidad y función cognitiva en diferentes modelos animales de EA. Los inhibidores de PDE regulan las vías de señalización elevando los niveles de cAMP y/o cGMP, lo que en última instancia puede promover la transcripción génica mediante la activación directa y/o indirecta de la unión del elemento a respuesta de cAMP
55 (CREB). La expresión génica dependiente de CREB subyace en la formación de la memoria a largo plazo y en la potenciación persistente a largo plazo (LTP), que son indicadores de la plasticidad y fuerza sináptica. En el hipocampo, esto ocurre probablemente a través de la formación de nuevas conexiones sinápticas, que son necesarias para restaurar los déficits cognitivos. Por lo tanto, mediante la activación de la vía de señalización CREB, los inhibidores de PDE pueden mejorar los síntomas de EA. Además, otros mecanismos CREB independientes
60 parecen actuar en sinergia para restaurar el deterioro cognitivo en la AD a través del aumento de cAMP y/o cGMP niveles. El rendimiento cognitivo también puede mejorarse indirectamente por medio de un aumento mediado por un inhibidor de PDE del flujo sanguíneo cerebral y/o del consumo de glucosa en el cerebro.
[0008] Además de la carga amiloide, la fosforilación de Tau es otro marcador histopatológico del avance de la EA. Es importante destacar que, se ha demostrado que los inhibidores de PDE5 Sildenafilo y Tadalafilo, reducen la fosforilación de Tau (niveles de pTau) en diferentes modelos animales de EA.
5 [0009] Por lo tanto, todavía existe la necesidad de desarrollar compuestos que muestren una actividad mejorada en el tratamiento y/o prevención de trastornos neurológicos que cursen con un déficit o deterioro cognitivo,
o enfermedades neurodegenerativas.
[0010] El documento WO 2008/024494 desvela compuestos que tienen un núcleo imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin
10 4-ona, que son inhibidores de PDE5. En particular, desvela el compuesto 14 (página 70), que tiene un núcleo de imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-4-ona y un éster de ácido hidroxámico. Este compuesto, al que se hace referencia como ejemplo comparativo 2-01, se sintetizo por los presentes inventores y como se muestra en los ejemplos siguientes, estuvo inactivo frente a HDAC1, HDAC2 y HDAC6; CI50 > 20 µM.
15 [0011] El documento WO 2012/020022 desvela derivados de 6-cicloalquil-1, 5-dihidro-pirazolo[3,4-d]pirimidin4-ona y su uso como inhibidores de PDE9A. En particular, desvela en el ejemplo 8B (página 77) un compuesto con un núcleo éster del ácido 1,5-dihidro-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ona y un éster del ácido hidroxámico. Este compuesto, al que se hace referencia como ejemplo comparativo 3-01, se sintetizo por los presentes inventores y como se muestra en los ejemplos siguientes, estuvo inactivo frente a HDAC1, HDAC2 y HDAC6; CI50 > 20 µM.
20 [0012] En M. Cuadrado-Tejedor et al. (British Journal of Pharmacology 2011, vol. 164, no. 8, páginas 20292041) los efectos del inhibidor de la PDE5 sildenafilo sobre las características patológicas de la enfermedad de Alzheimer y sobre el comportamiento relacionado con la memoria.
25 [0013] El documento WO 2004/101567 desvela compuestos con un núcleo de imidazo[1,5-a][1,3,5]triazin-4ona que son inhibidores de PDE5 y son activos contra una enfermedad neurodegenerativa, la enfermedad de Alzheimer.
[0014] El documento EP2535049 desvela tadalafilo, un inhibidor de PDE5, que actúa contra enfermedades 30 neurodegenerativas y demencias, incluyendo la enfermedad de Alzheimer.
[0015] Sh Chen et al. (British Journal of Pharmacology 2012, vol. 165, n.º 2, páginas 494-505) desvela que el inhibidor de HDAC ácido suberoilanilida hidroxoxámico (N-Hidroxi-N'-feniloctanodiamida, también conocida como vorinostat) protege a las neuronas dopaminérgicas del daño inducido por neurotoxinas.
Resumen de la invención
[0016] Los inventores han encontrado nuevos compuestos que tienen una estructura policíclica y un resto de ácido hidroxámico que son capaces de inhibir una o más fosfodiesterasas (PDE) y simultáneamente una o más 40 histona desacetilasas (HDAC). Estos compuestos son por lo tanto inhibidores duales de PDE y HDAC y podrían ser útiles para mejorar la cognición. Los compuestos de la invención tienen la ventaja de que están dirigidos a dos rutas diferentes de aquellas que, en modelos animales, han demostrado ser útiles para prevenir el avance de enfermedades neurodegenerativas y/o para aumentar los déficit cognitivos asociados a enfermedades neurodegenerativas. Considerando que el principal inconveniente de los tratamientos para la EA en las fases clínicas
45 es su falta de eficacia al dirigirse a un único evento fisiopatológico; los compuestos de la presente invención, que tienen un impacto en dos eventos fisiopatológicos, pueden conducir a un tratamiento más eficaz.
[0017] Por lo tanto, un primer aspecto de la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o cualquier estereoisómero o mezclas del mismo, ya sea del compuesto de
50 fórmula (I) o de cualquiera de sus sales farmacéuticamente aceptables,
donde
B1 es un radical seleccionado del grupo que consiste en la fórmula (A"), fórmula (B"), fórmula (C"), y la fórmula (D"):
O O
R 2 R 2 N HN
HN N
N Z1 (Z2)r
Z1 (Z2)r
N N (Z3)n
N (Z3)n
p
p R1 R1
(B'')
(A'')
Z2
(Z3)n p
O
R2
HN N
Z1 (Z2)r N N (Z3)n
p
R1
O
(C'')
(D'')
p, n y r son independientemente 0 o 1;
25 R1 y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H; alquilo (C1-C7) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; y un anillo monocíclico de 3 a 7 miembros carbocíclico o heterocíclico, que está saturado o parcialmente insaturado o aromático, y que está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre halógeno y alquilo (C1-C3);
30 Z1 es un biradical seleccionado del grupo que consiste en una fórmula (E), fórmula (F"), fórmula (G'), fórmula (H'), fórmula (J') y fórmula (K):
35 Z2 se selecciona entre el grupo que consiste en -Z5-; -Z5-Cy4-; -Z5-Cy4-Z5-; y -Cy4-;
Z3 y cada Z5 son independientemente un biradical de un alquilo (C1-C6) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno;
40 Z4 es un biradical de un alquilo (C1-C6) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre halógeno, OH, y -Oalquilo (C1-C3) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; o como alternativa, Z4 es -CR11R12-, donde R11 y R12 junto con el carbono al que están unidos forman C=O o un anillo monocíclico carbocíclico o heterocíclico de 3 a 7 miembros, que está saturado o
45 parcialmente insaturado, y que está opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno o alquilo (C1-C3) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno;
q y m son independientemente 0 ó 1;
50 Cy1, Cy3 y Cy4 son independientemente fenilo o un anillo monocíclico de 3 a 7 miembros carbocíclico o heterocíclico, que está saturado o parcialmente insaturado o aromático, y que está opcionalmente sustituido con uno o más grupos R3; o como alternativa
Cy1 es un anillo monocíclico saturado o parcialmente insaturado heterocíclico de 3 a 7 miembros, que está condensado, puenteado condensado o espiro-condensado a un anillo monocíclico carbocíclico o heterocíclico de 3 a 7 miembros saturado o parcialmente insaturado, donde Cy1 está opcionalmente sustituido con uno o más grupos R3;
5 Cy2 es un anillo monocíclico saturado o parcialmente insaturado heterocíclico de 3 a 7 miembros unido a N, que está opcionalmente condensado, puenteado condensado o espiro-condensado a un anillo monocíclico carbocíclico o heterocíclico de 3 a 7 miembros saturado o parcialmente insaturado, donde Cy2 está opcionalmente sustituido con uno o más grupos R3;
10 R3 se selecciona entre halógeno; alquilo (C1-C7) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; -Oalquilo (C1-C7) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; y un anillo monocíclico de 3 a 7 miembros carbocíclico o heterocíclico, que está saturado o parcialmente insaturado o aromático, y que está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes
15 seleccionados entre el grupo que consiste en halógeno y alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno;
R4 y R10 son independientemente H o alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; y 20 donde en cualquier anillo heterocíclico uno o más de los miembros de anillo se seleccionan entre NH, N, O, y S;
donde en todos los anillos saturados o parcialmente insaturados uno o dos miembros de los anillos son opcionalmente C(=O) y/o C(=NH) y/o C[=Nalquilo (C1-C4)],
25 donde alquilo saturado se refiere a una cadena hidrocarburo lineal o ramificada que contiene únicamente enlaces sencillos; y alquilo insaturado se refiere a una cadena hidrocarburo lineal o ramificada que contiene uno o dos dobles enlaces y/o uno o dos triples enlaces;
30 donde en cualquier grupo alquilo uno o dos miembros de la cadena seleccionados entre CH2 o CH se reemplazan opcionalmente por miembros de la cadena seleccionados independientemente entre N, NR4, O, C(=O), C(=O)NR4, NR4C(=O) y S;
con la condición de que el resto (L1) de la fórmula (A"), fórmula (B"), y fórmula (C"), y el resto (L2) de la fórmula 35 (D")
tengan una longitud de cadena comprendida de 1 a 20 átomos.
40 [0018] La presente invención también se refiere a procesos para la preparación de compuestos de fórmula (I). Por consiguiente, otro aspecto de la invención se refiere a la preparación de compuestos de fórmula (I) como se ha definido anteriormente haciendo reaccionar un compuesto de fórmula B1-COOR'(IV) con una hidroxilamina de fórmula RO-NH2 (V), donde B1 es como se ha definido anteriormente; R' es H y R es un grupo protector de ácido
45 hidroxámico, para dar un compuesto de fórmula (III)
y posteriormente eliminar el grupo protector del ácido hidroxámico para dar un compuesto de fórmula (I).
[0019] Otro aspecto de la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula (I) como se ha definido anteriormente, junto con uno o más
excipientes o portadores farmacéuticamente aceptables.
[0020] Como se ha descrito previamente, los compuestos de la invención son inhibidores duales de PDE y
5 HDAC y pueden ser útiles para mejorar la cognición. Por lo tanto, otro aspecto de la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I) o una composición farmacéutica que comprende el compuesto de fórmula (I) como se ha definido anteriormente, para su uso como un medicamento.
[0021] Un compuesto de fórmula (I) o una composición farmacéutica que comprende el compuesto de
10 fórmula (I) como se ha definido anteriormente puede usarse en el tratamiento y/o prevención de enfermedades mediadas por la inhibición dual de PDE u HDAC.
Descripción detallada de la invención
15 [0022] Todos los términos como se usan en el presente documento en esta solicitud, a menos que se indique otra cosa, se entenderán en su significado ordinario como se conoce en la técnica. Otras definiciones más específicas para ciertos términos como se usan en la presente solicitud son las que se exponen a continuación y están destinadas a aplicarse uniformemente a lo largo de la memoria descriptiva y las reivindicaciones a menos que una definición expresada de otro modo establezca una definición más amplia.
20 [0023] El término sistema anular "carbocíclico" se refiere a un sistema anular conocido en el que todos los miembros de anillo contienen átomos de carbono. El término sistema anular "heterocíclico" se refiere a un sistema anular conocido en el que uno o más de los miembros del anillo, preferiblemente 1, 2, 3, o 4 miembros del anillo, se seleccionan de NH, N, O, y S, cuando sean químicamente posibles. Los restantes miembros de anillo del anillo
25 heterocíclico se seleccionan independientemente de C, CH, CH2, O, N, NH, y S. A menos que se especifique otra cosa, el sistema anular "heterocíclico" puede estar unido al resto de la molécula a través de un átomo de C o un átomo de N del sistema anular. Ambos anillos carbocíclicos y heterocíclicos pueden estar saturados o parcialmente insaturados y pueden estar no sustituidos o sustituidos como se describe en el presente documento, estando los sustituyentes situados en cualquier posición disponible.
30 [0024] De acuerdo con la presente invención, el término anillo "policíclico" se refiere a un sistema anular que está formado por dos, tres o cuatro anillos que pueden estar condensados, puenteados-condensados, espirocondensados y pueden contener diferentes tipos de fusión. Para los propósitos de la presente invención, en los anillos "condensados" la fusión se produce a través de un enlace que es común para dos anillos adyacentes; en los
35 anillos "puenteados-condensados" la fusión se produce a través de una secuencia de átomos (cabeza de puente) que es común a dos anillos; y en los anillos "espiro-fusionados", la fusión se produce a través de un único átomo (átomo espiro), preferiblemente un átomo de carbono, que es común a dos anillos adyacentes (incluyendo anillos puenteados).
40 [0025] El término anillo "heteroaromático" se refiere a un sistema anular aromático conocido, en el que uno o más de los miembros de anillo, preferiblemente 1, 2, 3, o 4 miembros del anillo, se seleccionan de NH, N, O, y S, cuando sean químicamente posibles. Los restantes miembros de anillo del anillo heteroaromático se seleccionan independientemente de C, CH, O, N, NH, y S. El anillo heteroaromático puede estar sin sustituir o sustituido como se describe en el presente documento, estando los sustituyentes situados en cualquier posición disponible.
45 [0026] La expresión "sistema anular conocido", como se usa en el presente documento, se refiere a un sistema anular que es químicamente posible y que es conocido en la técnica y por lo tanto, pretende excluir aquellos sistemas anulares que no son químicamente posibles.
50 [0027] Para los propósitos de la presente invención, en todos los anillos saturados o parcialmente insaturados, uno o dos miembros de los anillos son opcionalmente C(=O) y/o C(=NH) y/o C[=Nalquilo (C1-C4)].
[0028] La expresión alquilo (C1-Cn) lineal o ramificado, saturado o insaturado se refiere a una cadena hidrocarburo lineal o ramificada que contiene de 1 a n átomos de carbono. Cuando el alquilo (C1-Cn) está saturado,
55 contiene únicamente enlaces sencillos. Cuando el alquilo (C1-Cn) está insaturado, contiene uno o dos dobles enlaces y/o uno o dos triples enlaces. El alquilo (C1-Cn) saturado o insaturado puede estar sustituido o sin sustituir como se describe en el presente documento. Además, en cualquier grupo alquilo uno o dos miembros de la cadena seleccionados entre CH2 o CH se reemplazan opcionalmente por miembros de la cadena seleccionados independientemente entre N, NR, O, C(=O), C(=O)NR, NRC(=O) y S; en el que R es como se describe en el
60 presente documento. Cuando en la presente invención no se especifica, si el término alquilo (C1-Cn) está saturado o insaturado, el término alquilo (C1-Cn) ha de entenderse como una cadena hidrocarburo saturada lineal o ramificada que contiene de 1 a n átomos de carbono. Las definiciones anteriores se aplican también para Oalquilo (C1-Cn).
[0029] Un sustituyente halógeno se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo. 65
[0030] En las realizaciones de la invención que se refieren a los compuestos de fórmula (I), cuando la sustitución o la no sustitución de un cierto grupo no se especifica, por ejemplo, indicando una determinada sustitución para ese grupo o indicando que el grupo está sin sustituir, debe entenderse que la posible sustitución de este grupo es la que se da en la definición de la fórmula (I).
5 [0031] "Grupo protector" (PG) se refiere a un agrupamiento de átomos que cuando se une a un grupo reactivo en una molécula enmascara, reduce o previene dicha reactividad.
[0032] La expresión "sustituido con uno o más" significa que un grupo puede estar sustituido con uno o más,
10 preferiblemente con 1, 2, 3 o 4 sustituyentes, con la condición de que este grupo tenga posiciones suficientes susceptibles de ser sustituidas.
[0033] Para los propósitos de la invención, la temperatura ambiente es de 20-25 ºC.
15 [0034] Como se ha mencionado anteriormente, un primer aspecto de la invención se refiere a compuestos de fórmula (I) o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. No hay limitación sobre el tipo de sal que puede usarse, siempre que sean farmacéuticamente aceptables cuando se usan con fines terapéuticos. La expresión "sales farmacéuticamente aceptables" incluye sales comúnmente utilizadas para formar sales de metales alcalinos y para formar sales de adición de ácidos libres o bases libres.
20 [0035] La preparación de sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula (I) puede realizarse mediante métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, se pueden preparar a partir del compuesto precursor, que contiene un resto básico o ácido, mediante procedimientos químicos convencionales. En general, dichas sales se preparan, por ejemplo, haciendo reaccionar las formas de ácido o base libre de estos compuestos
25 con una cantidad estequiométrica de la base o ácido farmacéuticamente aceptable apropiado en agua o en un disolvente orgánico o en una mezcla de los mismos. Los compuestos de fórmula (I) y sus sales pueden diferir en algunas propiedades físicas pero son equivalentes para los fines de la presente invención.
[0036] Los compuestos de la invención pueden estar en forma cristalina ya sea como compuestos de
30 solvatación libres o como solvatos (por ejemplo, hidratos) y se pretende que ambas formas estén dentro del alcance de la presente invención. Se conocen generalmente en la técnica métodos de solvatación. En general, las formas solvatadas con disolventes farmacéuticamente aceptables tales como agua, etanol y similares son equivalentes a la forma no solvatada para los propósitos de la invención.
35 [0037] Algunos de los compuestos de fórmula de la invención pueden tener centros quirales que dan lugar a diversos estereoisómeros. Como se usa en el presente documento, el término "estereoisómero" se refiere a todos los isómeros de compuestos individuales que difieren solamente en la orientación de sus átomos en el espacio. El término estereoisómero incluye isómeros de imagen especular (enantiómeros), mezclas de isómeros de imagen especular (racematos, mezclas racémicas), isómeros geométricos (cis/trans o sin/anti o E/Z) e isómeros de
40 compuestos con más de un centro quiral que no son imágenes especulares entre sí (diastereoisómeros). La presente invención se refiere a cada uno de estos estereoisómeros y también mezclas de los mismos.
[0038] Los diastereoisómeros y enantiómeros se pueden separar por técnicas convencionales tales como cromatografía o cristalización fraccionada. Los isómeros ópticos pueden resolverse mediante técnicas
45 convencionales de resolución óptica para dar isómeros ópticamente puros. Esta resolución se puede llevar a cabo en cualquier producto intermedio sintético quiral o en compuestos de la invención. Los isómeros ópticamente puros también se pueden obtener individualmente usando síntesis enantioespecífica.
[0039] En todas las realizaciones de la invención que se refieren a los compuestos de fórmula (I), las sales 50 farmacéuticamente aceptables de los mismos y los estereoisómeros de cualquiera de los compuestos de fórmula (I)
o de cualquiera de sus sales farmacéuticamente aceptables se contemplan siempre incluso si no se mencionan específicamente.
[0040] Los compuestos de fórmula (I) de la invención se caracterizan por que tienen un sistema anular 55 policíclico seleccionado del grupo que consiste en la fórmula (A'), fórmula (B'), fórmula (C'), y fórmula (D'):
y un resto de ácido hidroxámico. Este sistema anular policíclico comprende de 2 a 4 anillos; siendo al menos un anillo un anillo aromático; y comprende al menos 3 átomos de nitrógeno y 1 átomo de oxígeno. El enlazador entre el 5 sistema anular policíclico definido anteriormente y el resto de ácido hidroxámico, es decir, una estructura de fórmula (L1) o (L2),
(L1) (L2)
tiene una longitud de cadena comprendida de 1 a 20 átomos y comprende una cadena hidrocarburo, donde uno o
15 más átomos de carbono se reemplazan opcionalmente por átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, que opcionalmente contiene uno o más anillos aromáticos, heteroaromáticos, carbocíclicos y/o heterocíclicos.
[0041] En una realización particular, el enlazador entre el sistema anular policíclico y el resto de ácido hidroxámico es una estructura de fórmula (L1') o (L2')
Z1 (Z2)r
Z2(Z3)n
(Z3)n
(L1') (L2') que tiene una longitud de cadena comprendida entre átomos 3 a 20. Para los propósitos de la invención, si hay más de una posibilidad para contar la longitud de cadena, la longitud de cadena corresponde al número más alto de átomos. Como ejemplo, en el compuesto 2-01 a continuación, el enlazador tiene una longitud de cadena de 17 átomos: 30
HO NH
O
O O
HN O
N S
N
35 16 N N 7
15 5 1
N
14 842
10 O
13 11 9 3
40 [0042] En otra realización, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o cualquier estereoisómero o mezclas del mismo, ya sea del compuesto de fórmula (I) o de cualquiera de sus sales farmacéuticamente aceptables,
45 donde B1 es un radical seleccionado del grupo que consiste en la fórmula (A"), fórmula (B"), fórmula (C"), y la fórmula 50 (D"):
O O
R 2 R 2
N HN
HN N
N Z1 (Z2)r Z1 (Z2)r
N N (Z3)n
p N (Z3)n
p
5 R1 R1
(B'')
(A'') Z2
(Z3) n p
OR2
HN N Z1 (Z2)r N
N (Z3)n
p
R1 O
(C'')
20 (D'')
p, n y r son independientemente 0 o 1;
25 R1 y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H; alquilo (C1-C7) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; y un anillo monocíclico de 3 a 7 miembros carbocíclico o heterocíclico, que está saturado o parcialmente insaturado o aromático, y que está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre halógeno y alquilo (C1-C3);
30 Z1 es un biradical seleccionado del grupo que consiste en una fórmula (E), fórmula (F'), fórmula (G'), fórmula (H'), fórmula (J') y fórmula (K):
35 Z2 se selecciona entre el grupo que consiste en -Z5-; -Z5-Cy4-; -Z5-Cy4-Z5-; y -Cy4-;
Z3, Z4 y cada Z5 son independientemente un biradical de un alquilo (C1-C6) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno;
40 q y m son independientemente 0 o 1;
Cy1, Cy3 y Cy4 son independientemente fenilo o un anillo monocíclico de 3 a 7 miembros carbocíclico o heterocíclico, que está saturado o parcialmente insaturado o aromático, y que está opcionalmente sustituido con uno o más grupos R3;
45 Cy2 es un anillo monocíclico saturado o parcialmente insaturado heterocíclico de 3 a 7 miembros unido a N, que está opcionalmente condensado, puenteado condensado o espiro-condensado a un anillo monocíclico carbocíclico o heterocíclico de 3 a 7 miembros saturado o parcialmente insaturado, donde Cy2 está opcionalmente sustituido con uno o más grupos R3;
50 R3 se selecciona entre halógeno; alquilo (C1-C7) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; -Oalquilo (C1-C7) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de
halógeno; y un anillo monocíclico de 3 a 7 miembros carbocíclico o heterocíclico, que está saturado o parcialmente insaturado o aromático, y que está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo que consiste en halógeno y alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno;
5 R4 es H o alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; y
donde en cualquier anillo heterocíclico uno o más de los miembros de anillo se seleccionan entre NH, N, O, y S;
10 donde en todos los anillos saturados o parcialmente insaturados uno o dos miembros de los anillos son opcionalmente C(=O) y/o C(=NH) y/o C[=Nalquilo (C1-C4)],
donde alquilo saturado se refiere a una cadena hidrocarburo lineal o ramificada que contiene únicamente enlaces sencillos; y alquilo insaturado se refiere a una cadena hidrocarburo lineal o ramificada que contiene uno o dos
15 dobles enlaces y/o uno o dos triples enlaces;
donde en cualquier grupo alquilo uno o dos miembros de la cadena seleccionados entre CH2 o CH se reemplazan opcionalmente por miembros de la cadena seleccionados independientemente entre N, NR4, O, C(=O), C(=O)NR4, NR4C(=O), y S; y
20 con la condición de que el resto (L1) de la fórmula (A"), fórmula (B"), y fórmula (C"), y el resto (L2) de la fórmula (D")
25 tengan una longitud de cadena comprendida de 1 a 20 átomos.
[0043] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, en un compuesto de fórmula (I), B1 es un radical
30 seleccionado del grupo que consiste en la fórmula (A), fórmula (B), fórmula (C), y fórmula (D):
O OR2 R2
N HN
HN 35 N
N Z1 (Z2)r
Z1 (Z2)r
N N (Z3)n
N (Z3)n
R1 R1
40 (B)
Z2
(A)
(Z3)n O
R2
HN N Z1 (Z2)r N
N (Z3)n
R1
O O
(C) (D)
55 R2 es H o alquilo (C1-C4) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; Z1 es un biradical seleccionado del grupo que consiste en una fórmula (E), fórmula (F), fórmula (G), fórmula (H), fórmula (J), y fórmula (K):
y R3 se selecciona entre halógeno, alquilo (C1-C4) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; y -Oalquilo (C1-C4) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de 5 halógeno. Más particularmente, Cy2 es un anillo monocíclico heterocíclico de 5 a 7 miembros unido a N, que está saturado o parcialmente insaturado, y que está opcionalmente sustituido con uno o más grupos R3.
[0044] En una realización más particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, en un compuesto de fórmula (I), n es 0 y Cy1 se selecciona
10 del grupo que consiste en fenilo, un anillo heteroaromático de 5 a 6 miembros, un anillo carbocíclico de 3 a 6 miembros, y un anillo heterocíclico de 3 a 7 miembros, donde Cy1 está opcionalmente sustituido con uno o más grupos R3. En una realización más particular, n es 0 y Cy1 es fenilo opcionalmente sustituido con R3, más particularmente fenilo sustituido con -Oalquilo (C1-C4) o Cy1 es pirrolidina opcionalmente sustituida con R3, más particularmente pirrolidina sustituida con -alquilo (C1-C4).
15 [0045] En otra realización más particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, en un compuesto de fórmula (I), n es 1; Z3 es -CH(R5)-, donde R5 es H o alquilo (C1-C4) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; y Cy1 es un anillo carbocíclico de 3 a 6 miembros o un anillo heterocíclico de 3 a 7 miembros, donde Cy1 está opcionalmente sustituido
20 con uno o más grupos R3. En una realización más particular, n es 1; Z3 es -CH(R5)-; R5 es H o metil y Cy1 es piperidina o azetidina.
[0046] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, en el compuesto de fórmula (I), R1 se selecciona entre el
25 grupo que consiste en alquilo (C1-C7) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno, un anillo carbocíclico de 3 a 6 miembros opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre halógeno y alquilo (C1-C3), y un anillo heterocíclico de 3 a 7 miembros opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre halógeno y alquilo (C1-C3). En una realización más particular, R1 es propilo, ciclopentano o tetrahidropirano.
30 [0047] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, en el compuesto de fórmula (I), R2 es H o alquilo (C1-C4) opcionalmente sustituido. En una realización más particular, R2 es H o metilo.
35 [0048] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, en un compuesto de fórmula (I), Cy2 es un anillo heterocíclico opcionalmente sustituido saturado de 5 a 7 miembros. Más particularmente, Cy2 es piperidina o piperazina.
[0049] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas
40 realizaciones descritas anteriormente o a continuación, en un compuesto de fórmula (I), Cy2 es un anillo monocíclico heterocíclico de 3 a 7 miembros unido a N, que está espiro-condensado a un anillo monocíclico de 3 a 7 miembros carbocíclico o heterocíclico, donde Cy2 está opcionalmente sustituido con uno o más grupos R3.
[0050] En otra realización particular, en un compuesto de fórmula (I), opcionalmente junto con uno o más
45 características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, Cy3 se selecciona del grupo que consiste en fenilo, un anillo heteroaromático de 5 a 6 miembros, un anillo carbocíclico de 5 a 6 miembros, un anillo carbocíclico de 3 a 7 miembros, un anillo heterocíclico de 4 a 6 miembros, y un anillo heterocíclico de 5 a 7 miembros, donde Cy3 está opcionalmente sustituido con uno o más grupos R3. Más particularmente, Cy3 es fenilo, azetidina, piperidina, piperazina, pirimidina, tiofeno, furano, piridina, ciclobutano, ciclopentano, ciclohexano,
50 ciclohexeno, o cicloheptano.
[0051] En otra realización particular, en un compuesto de fórmula (I), opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, Cy4 se selecciona del grupo
que consiste en fenilo, y un anillo heteroaromático de 5 a 6 miembros, donde Cy4 está opcionalmente sustituido con uno o más grupos R3. Más particularmente, Cy4 es fenilo, piridina o pirimidina.
[0052] En otra realización particular, en un compuesto de fórmula (I), opcionalmente junto con uno o más 5 características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, Z1 es un biradical de fórmula (H), donde m es 0 y q es 0 (Z1 está ausente).
[0053] En otra realización particular, en un compuesto de fórmula (I), opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, Z1 se selecciona del grupo 10 que consiste en:
15 [0054] En otra realización particular, en un compuesto de fórmula (I), opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, Z1 se selecciona del grupo que consiste en:
O O
O O
N S
O O
O OS NN SSN
N HHN
N
O O
10
O N
N
N
N
N
N
15
N N N H N
[0055] En otra realización particular, en un compuesto de fórmula (I), opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, r es 1 y Z2 se selecciona entre 20 el grupo que consiste en:
N N N
30 [0056] En otra realización particular, en un compuesto de fórmula (I), opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, m es 0.
[0057] En otra realización particular, en un compuesto de fórmula (I), opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, m es 1, y Z4 es -(CH2)t-, donde 35 t es 1-3.
[0058] En otra realización particular, en un compuesto de fórmula (I), opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, Z5 se selecciona del grupo que consiste en: -(CH2)t-, donde t es 1-3, y -CH=CH-.
[0059] En otra realización particular, en un compuesto de fórmula (I), opcionalmente junto con uno o más
características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, r es 1 y el grupo -Z1-Z2-se
selecciona del grupo que consiste en:
45
O O O O O O
S
N S N N S N N
50
O
O
N
55
S N O O N S N N N N S N H O O N N
N OOO NNN NS ON NH
N O
NN5 N10 O
N N O
15
N
N
N
N
N
N
N
N
N
20
N
N H
N
25 [0060] En otra realización particular, en un compuesto de fórmula (I), opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, r es 1 y el grupo -Z1-Z2-se selecciona del grupo que consiste en:
30OO OO OO S
SS N
N N N N
35 N
OO OO
S N
N NN
O ONS N SN
N 40 N H
N O
O O NNN45 NS
O H N N
50 N O
NN
N
O
N N O60
N
N
N
NN
N
N
N
N
N
N
N
H
[0061] En otra realización particular, el compuesto de fórmula (I) tiene la fórmula (I'),
20 donde B1' se selecciona del grupo que consiste en la fórmula (A'), fórmula (B'), y fórmula (C')
donde Z3, n, Cy1, r, Z1, Z2, R1 y R2 son como se han definido anteriormente.
25 [0062] Las realizaciones particulares mencionadas anteriormente para los compuestos de fórmula (I) son también realizaciones particulares de los compuestos de fórmula (I'). [0063] En otra realización, el compuesto de fórmula (I') es un compuesto de fórmula (IA) o fórmula (IB):
donde r, Z1, Z2, R1 y R2 son como se han definido anteriormente; y R3' se selecciona entre H; halógeno; alquilo (C1-C4) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; -Oalquilo (C1-C4) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; y un anillo monocíclico de 3 a 7 miembros carbocíclicos o heterocíclicos, que está saturado o parcialmente insaturado o aromático, y que está opcionalmente
5 sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo que consiste en halógeno y alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno.
[0064] En una realización particular, en los compuestos de fórmula (IA) o fórmula (IB), R3' se selecciona entre H; halógeno; alquilo (C1-C4) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; y
10 Oalquilo (C1-C4) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno.
[0065] Las realizaciones particulares mencionadas anteriormente para los compuestos de fórmula (I) son también realizaciones particulares de los compuestos de fórmula (IA) y de fórmula (IB).
15 [0066] En una realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, en el compuesto de fórmula (IA) o fórmula (IB), R1 es alquilo (C1-C7) opcionalmente sustituido, más particularmente, propilo.
[0067] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas
20 realizaciones descritas anteriormente o a continuación, en el compuesto de fórmula (IA) o fórmula (IB), R2 es alquilo (C1-C4) opcionalmente sustituido, más particularmente, metilo.
[0068] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, en el compuesto de fórmula (IA) o fórmula (IB), R3' es
25 Oalquilo (C1-C4) opcionalmente sustituido, más particularmente, etoxi, incluso más particularmente etoxi situado en la posición orto con respecto al carbono unido al anillo bicíclico.
[0069] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, en el compuesto de fórmula (IA) o fórmula (IB), Z1 es un
30 biradical seleccionado del grupo que consiste en la fórmula (E), fórmula (F) y la fórmula (G) como se ha definido anteriormente.
[0070] En otra realización, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), que es un compuesto de fórmula (IC):
35 O
R2 R3'
O
HN N
OH 40
Z1N
(Z2)r N
N (Z3)n
H R1
(IC)
donde R1-R2, r, Z1-Z3, y n son como se han definido anteriormente, Cy1 es un anillo heterocíclico de 4 a 6 miembros, y R3' se selecciona entre H; alquilo (C1-C4) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de
50 halógeno; y un anillo monocíclico carbocíclico o heterocíclico de 3 a 7 miembros, que está saturado o parcialmente insaturado o aromático, y que está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno y alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno.
[0071] En una realización particular, en los compuestos de fórmula (IC), R3' se selecciona entre H, y alquilo 55 (C1-C4) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno.
[0072] Las realizaciones particulares mencionadas anteriormente para los compuestos de fórmula (I) son también realizaciones particulares de los compuestos de fórmula (IC).
60 [0073] En una realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, en el compuesto de fórmula (IC), n es 0.
[0074] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, en el compuesto de fórmula (IC), n es 1, y Z3 es -CH(R5)-,
donde R5 es H o alquilo (C1-C4) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno, más particularmente, R5 es H o metilo.
[0075] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas 5 realizaciones descritas anteriormente o a continuación, en el compuesto de fórmula (IC), Cy1 es pirrolidina, piperidina, piperazina o azetidina.
[0076] En una realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, en el compuesto de fórmula (IC), R1 es un anillo carbocíclico 10 o heterocíclico saturado de 3 a 7 miembros, más particularmente, tetrahidropirano o ciclopentano.
[0077] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, en el compuesto de fórmula (IC), R2 es H.
15 [0078] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, en el compuesto de fórmula (IC), y R3' es H o alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno, más particularmente, H o metilo.
[0079] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas 20 realizaciones descritas anteriormente o a continuación, en el compuesto de fórmula (IC), Z1 es un biradical seleccionado del grupo que consiste en la fórmula (G) y la fórmula (H) como se ha definido anteriormente.
[0080] En otra realización, el compuesto de fórmula (I) es un compuesto de fórmula (ID):
donde Z2, Z3, n y Cy1 son como se han definido anteriormente, y R3' se selecciona entre H; halógeno; alquilo (C1-C4) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; y un anillo monocíclico de 3 a 7 miembros carbocíclico o heterocíclico, que está saturado o parcialmente insaturado o aromático, y que está
30 opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno y alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno.
[0081] En una realización particular, en los compuestos de fórmula (ID), R3' se selecciona entre H, halógeno, y alquilo (C1-C4) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más 35 átomos de halógeno.
[0082] Las realizaciones particulares mencionadas anteriormente para los compuestos de fórmula (I) son también realizaciones particulares de los compuestos de fórmula (ID).
40 [0083] En una realización particular, en un compuesto de fórmula (ID), n es 0 y Cy1 se selecciona del grupo que consiste en fenilo, un anillo heteroaromático de 5 a 6 miembros, un anillo carbocíclico de 5 a 6 miembros, y un anillo heterocíclico de 5 a 7 miembros, donde Cy1 está opcionalmente sustituido con uno o más grupos R3. En una realización más particular, n es 0 y Cy1 es fenilo opcionalmente sustituido, más particularmente, fenilo sin sustituir.
45 [0084] En otra realización particular, en un compuesto de fórmula (ID), n es 1; Z3 es -CH(R5)-, donde R5 es H
o alquilo (C1-C4) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; y Cy1 es un anillo carbocíclico de 3 a 6 miembros o un anillo heterocíclico de 3 a 7 miembros donde Cy1 está opcionalmente sustituido con uno o más grupos R3. En una realización más particular, n es 1, Z3 es -CH(R5)-, R5 es H, y Cy1 es piperidina.
50 [0085] En otra realización, en un compuesto de fórmula (ID), -Z2-se selecciona del grupo que consiste en:
[0086] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), donde 5 B1 es un radical de fórmula (A").
[0087] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), donde B1 es un radical de fórmula (B").
10 [0088] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), donde B1 es un radical de fórmula (C").
15 [0089] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), donde R1 se selecciona entre el grupo que consiste en alquilo (C1-C4) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno, un anillo carbocíclico de 5 a 6 miembros saturado opcionalmente sustituido con uno
o más sustituyentes seleccionados entre halógeno y alquilo (C1-C3), y un anillo heterocíclico de 5 a 6 miembros 20 saturado opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre halógeno y alquilo (C1-C3).
[0090] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), donde R2 es H o alquilo (C1-C4) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno.
25 [0091] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), donde Z1 es un biradical seleccionado del grupo que consiste en una fórmula (E), fórmula (G'), y fórmula (H'), más particularmente, donde q es 1, e incluso más particularmente, donde Z1 es un biradical de fórmula (G) o fórmula (H).
[0092] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), donde r 35 es 0, o como alternativa r es 1 y Z2 es -Cy4-; más particularmente, donde r es 0.
[0093] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), donde B1 es un radical de fórmula (D").
40 [0094] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), donde p es 1; más particularmente, donde Cy1 se selecciona entre el grupo que consiste en: fenilo, un anillo heteroaromático de 5 a 6 miembros, y un anillo
45 heterocíclico saturado de 4 a 6 miembros, donde Cy1 está opcionalmente sustituido con uno o más grupos R3.
[0095] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), que es un compuesto de fórmula (IA):
donde R3' es H o R3.
5 [0096] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), que es un compuesto de fórmula (IB):
10 donde R3' es H o R3.
[0097] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), en
15 particular, un compuesto de fórmula (IA) o un compuesto de fórmula (IB), donde R3' se selecciona entre H, halógeno, alquilo (C1-C4) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; y -Oalquilo (C1-C4) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno.
[0098] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas
20 realizaciones descritas anteriormente o a continuación, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), que es un compuesto de fórmula (IC):
donde R3' es H o R3.
25 [0099] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), que es un compuesto de fórmula (ICIII) o un compuesto de fórmula (ICIV):
O OR2
R2
R3' HN
O N
HN
R3' N O
Z1
OH NN
5N
N N
(Z2)r N N
HZ1
OH R1
R1(Z2)r N
R5 H
(IC''') (ICIV)10
donde R5 se selecciona del grupo que consiste en: H, halógeno, y alquilo (C1-C4) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno.
15 [0100] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), en particular, un compuesto de fórmula (IC), un compuesto de fórmula (ICIII) o un compuesto de fórmula (ICIV), donde R3' se selecciona entre H y alquilo (C1-C4) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno.
20 [0101] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), que es un compuesto de fórmula (ID):
(ID)
donde R3' es H o R3.
45 [0102] En otra realización particular, opcionalmente junto con uno o más características de las diversas realizaciones descritas anteriormente o a continuación, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), en particular, un compuesto de fórmula (ID), donde R3' se selecciona entre H, halógeno, y alquilo (C1-C4) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno.
50 [0103] En otra realización de la invención, el compuesto de fórmula (I) se selecciona del grupo que consiste en:
O
O
N
O HN
N N OHN O N
N
N
N
O HN
N NO
S O
N
S
O
NH
N
O
OS ON
O NH HO
HN O
HN O OH
OH
1-01 1-02 1-03
O OO NO HN
NN
N OHN
O HN N
N N
NN
O O
SO S ON
S O ON
N N
N
N N
O
N O
HN
OH O HN NH
OH OH
1-04 1-05 1-06
O
O
NO HN
O N
N
O HN
NN N
O HN N N N
S O
NH
O O
O
N N N
N N
N
N H
N
O N
N OH HN
O HN O
OH
OH
1-07 1-11 1-12
OH O NH
O
O
HO N N
H
N
N HN N N
N
N
O
O
N N
NHN N
O
O
HO NH O
N
N
HN
NO
N
1-13 1-14 1-15
O
O O HN N HN N
HN N NN N NN N
S O
O
O
HN O NH O
O HO
NH HO
HO
1-16 1-17 1-18
OH O
NH O O
HN N HN N O
NNO NN HN NHN
OO NHO NH O
N NH
HO O
1-19 1-20 1-21
HO
NH
O
O
NO
H HN N
N
N
N
O
N N
N
N
N
N N
NN
H HN N
O
O
N
NO
NO
N
NH
N
NH
HO
HO
O
1-22 1-23 1-24
O
O
O
O
H HN N HN N
HO
N
N
N
N
NN N
N
H
N NO N N
O NO
NH O
O
HO
NH HO
1-25 1-26 1-27
OH HN
O
OO O
O N HO HN N HN N
NN
H
HN N
N N NHN
N O ON
HN O
HO
O
1-31 1-32 1-33
O
H
HO
N
OO
HO
ON
H
HN N
O
HN N
HN N
N
NN
N
NO N
NN
NH O
HO
O
O
1-34 1-35 1-36
O O
HO
O O HN N H
N
O HN N HN N
N O NN N
NN NO
NO
NH OHO
NH O HO
1-37 1-38 1-39
OH NH
O
H
NO HN
N HO N O
O
N
HN N
N N N
N
O
HN N
O
O
N
HO
N
N H
O
1-43 1-44 1-45
OH OH
O
O
NH
NH
O
N
N HN N N
N N NN O
O
N HN N HN N HO NH
O O
HN
NN NN
OO
1-46 1-47 1-48
OH
O
N
HO
O
HN N
HN NN N NO
HN N
N
O N NO
NN
N
NH O
NH O
HO
O
HO
1-49 1-50 1-51
O O OHO N
O
H
H
HN NHN N
HN N
N
O
HO
N
NN
N
OON
NN O HO NH O O
1-52 1-53 1-54
O
OH O
N HN
O HN
OHO
NN
H
N O O
N
HN NO
N
HN NN NN
N N O
H
O
N
OH O
1-55 1-56 1-57
O HO
ON N
O
H
O
HN NO
HN N HN N N
N HO HN N N
N O
NNOO O NH
O HO
1-58 1-59 1-60
O N
O HN O
N
O N
H HN N
F HN N
N N
NO N N
O
N N HO NH O
HO NH O
H N
HO O
1-64 1-65 1-66
O
OH
N
HN OHN
N
OO
N O N
F
HN H HN N
N
HO N NN
N N O
NO N
N O
H
N HO O
N
1-67 1-68 1-69
O N
O HN
N N
HO HO NH NH
O OO N O
NS HN
HN N N N
N
N
N
N O
O
NN
OHN
OH
1-70 1-71 1-72
HO
HO
HO
NH NH
NH
O
ON O
OO O
O
HN N
HN N
HN N
N
N
N
N
N
N
O
O
O
1-73 1-74 1-75
OH OH ONH OOH
O
NH
NH
O OO HN N HN N N N NN
O HO N N
N OO
O
1-76 1-77 1-78
HO
O
NH NOO
O HN NO HN N N
O
N S N HN N O
NO NNH
NH HO
N
O
OH O
1-79 1-80 1-81
*Con respecto a estos compuestos, se muestra una configuración absoluta aleatoria de los isómeros cis y trans. En los ejemplos se indica claramente cuál de los isómeros se trata en términos relativos, diferenciando inequívocamente entre los isómeros cis y trans por sus propiedades físicas y/o espectroscópicas.
10 [0104] En otra realización de la invención, el compuesto de fórmula (I) se selecciona del grupo que consiste en:
O
O
O
O HN
O HN
O HN
N
N
N
N
N
N
N
N
N
O
S O
O
N
S
S O HN OO
N
N
N
HN O OH
O NH O NH OH OH
2-01 2-02 2-03
O
O HN NN
N OO
HN
HN O
N
N
NS NO NN
N O
O
N N O
O NH
NH
N
HO
O HO
NH HO
2-05 2-06 2-07
OH HN
O
O O
HN H O O HN
N N
N
S
N
N
O HO N N
N HN
S
ON
O
O N
N
O NH O HO
2-08 2-09 2-10
*Con respecto a estos compuestos, se muestra una configuración absoluta aleatoria de los isómeros cis y trans. En los ejemplos se indica claramente cuál de los isómeros se trata en términos relativos, diferenciando inequívocamente entre los isómeros cis y trans por sus propiedades físicas y/o espectroscópicas.
[0105] En otra realización de la invención, el compuesto de fórmula (I) se selecciona del grupo que consiste en:
[0106] En otra realización de la invención, el compuesto de fórmula (I) se selecciona del grupo que consiste 10 en:
OH
OH
OH
HN O NH
HN
O
O
N
N N
OO
N
H H
H
O
N N N
N
N N
N H
N
H N
O
OH O
O
O O
O O
O
4-01 4-02 4-03
OH
4-04 4-05
[0107] En general, los compuestos de fórmula (I) como se han definido anteriormente pueden obtenerse haciendo reaccionar un compuesto de fórmula B1-COOR' (IV) con una hidroxilamina de fórmula RO-NH2 (V), donde 5 B1 es como se ha definido anteriormente; R' es H y R es un grupo protector de ácido hidroxámico, para dar un compuesto de fórmula (III)
10 y posteriormente eliminar el grupo protector del ácido hidroxámico para dar un compuesto de fórmula (I).
[0108] Esta primera conversión puede realizarse en presencia de un agente de activación tal como clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC.HCl) e hidroxibenzotriazol (HOBt), preferiblemente en presencia de una base, tal como N-metilmorfolina (NMM), en un disolvente adecuado, tal como diclorometano,
15 cloroformo o dimetilformamida, a una temperatura comprendida de la temperatura ambiente a la temperatura del punto de ebullición del disolvente, preferiblemente a temperatura ambiente.
[0109] La eliminación del grupo protector del ácido hidroxámico se realiza por método estándar ya conocidos en la técnica como se describe, por ejemplo, en T. W. Green y P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic 20 Chemistry (Wiley, 3ª ed. 1999, Capítulo 2, págs. 17-200). Los grupos protectores hidroxi representativos incluyen aquellos en los que el grupo hidroxi está acilado o alquilado tal como bencilo, y tritil éteres, así como alquil éteres, tetrahidropiranil éteres, trialquilsilil éteres y alil éteres. Por ejemplo, el grupo protector de ácido hidroxámico es tetrahidro-2H-piran-2-iloxi (THP), bencilo, 1-naftilmetilo o dimetiloxibencilo (DMB). Cuando el grupo protector de ácido hidroxámico es THP, la desprotección se realiza en medio ácido, por ejemplo, con HCl, en un disolvente
25 adecuado tal como dioxano.
[0110] Los compuestos de fórmula (IV) donde R' es H pueden obtenerse eliminando el grupo protector de un compuesto de fórmula (IV) donde R' es un grupo protector carboxi por métodos estándar ya conocidos en la técnica como se describe, por ejemplo, en T. W. Green y P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry (Wiley, 3ª ed. 1999, Capítulo 5, págs. 369-451). Los grupos protectores carboxi representativos incluyen alquilo, aril o bencil
5 ésteres, silil ésteres, amidas o hidrazidas. Por ejemplo, el grupo protector carboxi es alquilo (C1-C6), bencilo, pmetoxifenilo, trimetilsililo, o [2-(Trimetilsilil)-etoxi]metilo (SEM). Cuando el grupo protector carboxi es alquilo (C1-C6), la desprotección se realiza en medio básico, por ejemplo, con LiOH en un disolvente adecuado tal como tetrahidrofurano-metanol.
10 [0111] Los compuestos de fórmula (IV) que tienen la fórmula (IVa) o la fórmula (IVb):
15 donde B1', Z2-Z4, m, n, r, Cy1-Cy3 son como se definen en los compuestos de fórmula (I) y R' es un grupo protector carboxi, pueden prepararse acoplando un compuesto de fórmula (VI) con un compuesto de fórmula (VII) o un compuesto de fórmula (VIII) respectivamente, como se muestra en el esquema 1:
20 O
O SO2Cl
N Cy2 (Z2) r OR' B1' B1'
H SO2
N Cy 2 (Z2)r OR' (Z3)n (Z3)n
25 (VI) (VII) (IVa)
O SO2Cl OR'
O OR' B1'
B1'
SO2NH (Z2)r (Z3)n
H2N (Z4)m (Z2)r (Z3)n
(Z4)m
(VI)
(VIII) (IVb)
Esquema 1 35
[0112] Esta conversión puede realizarse en presencia de una base tal como trietilamina, en un disolvente adecuado tal como etanol, y a una temperatura adecuada, preferiblemente calentamiento.
40 [0113] Los compuestos de fórmula (IV) que tienen la fórmula (IVc) o la fórmula (IVd): OO
OR'
Cy2 OR' (Z2) rQSO2B1' N N (Z2)r B1' 45 (Z3)n (Z3) n
(IVc) (IVd)
donde Q se selecciona del grupo que consiste en -SO2NH-(Z4)m-; -O-(Z4)m-; y -(Z4)m-; B1', Z2-Z4, m, n, r, Cy1-Cy3 son
50 como se definen en los compuestos de fórmula (I); y R' es un grupo protector carboxi, pueden prepararse acoplando un compuesto de fórmula (IX) o fórmula (X) respectivamente con un compuesto de fórmula (XI), donde X es un grupo saliente, tal como halógeno o metanosulfonato, como se muestra en el esquema 2:
O O B1'
N Cy2 OR' SO2 SO2B1'N Cy2 NH X OR'
(Z2)r
N (Z2)r(Z3) n (Z3) n
(IX) (XI) (IVc) O O
OR'
OR' (Z2)rX
(Z2) rB1'
Q(Z3) n
B1'Q Cy3 NH (Z3)n
(X) (XI) (IVd)
Esquema 2
5 [0114] Esta conversión puede realizarse en presencia de una base tal como carbonato potásico, en un disolvente adecuado, tal como acetonitrilo, y a una temperatura adecuada, preferiblemente calentamiento. [0115] Los compuestos de fórmula (IV) que tienen la fórmula (IVe):
donde B1', Z1-Z2, n, Cy1-Cy3 son como se definen en los compuestos de fórmula (I) y R' es un grupo protector carboxi, pueden prepararse acoplando un compuesto de fórmula (XII) con un compuesto de fórmula (XIII), donde X es un grupo saliente, tal como halógeno o metanosulfonato, como se muestra en el esquema 3:
O
O B1' Cy1N Z1
(Z2 )r OR' X
Z1 (Z2 )r OR' (Z3)n
B1' (Z3)n Cy1 NH
(XII) (XIII) (IVe)
15 Esquema 3
[0116] Los compuestos de fórmula (IV) que tienen la fórmula (IVf):
donde B1', Z1-Z2, n, Cy1-Cy3 son como se definen en los compuestos de fórmula (I) y R' es como se ha definido anteriormente, pueden prepararse acoplando un compuesto de fórmula (XIV) con un compuesto de fórmula (XV), como se muestra en el esquema 4:
25 O
O HO B1'
OH
(Z4)m (Z 2)r OR' B1' (Z3)n O (Z4)m (Z2 )r OR' (Z3)n
(XIV)
(XV) (IVf)
Esquema 4
[0117] Esta conversión puede realizarse en presencia de Ph3P y azodicarboxilato de diisopropilo (DIAD) en 30 un disolvente adecuado, tal como tolueno, y a una temperatura adecuada, preferiblemente calentamiento.
[0118] Los compuestos de fórmula (IV) que tienen la fórmula (IVg):
donde B1', Z1-Z2, n, Cy1-Cy3 son como se definen en los compuestos de fórmula (I) y R' es como se ha definido
5 anteriormente, pueden prepararse acoplando un compuesto de fórmula (XVI) con un compuesto de fórmula (XVII), donde X es un grupo saliente, tal como halógeno o metanosulfonato, y R5 es H o alquilo (C1-C4) opcionalmente sustituido como se muestra en el esquema 5: O
O
B1' X
N Cy1 Z1 (Z 2)r OR' B1' HN Cy1 Z1 OR'
(Z2)r R5 R5
(XVI) (XVII) (IVg) Esquema 5 10
[0119] Los compuestos (IVe) e (IVg) pueden prepararse como se ha definido anteriormente usando condiciones de reacción análogas a las descritas para la preparación de compuestos de fórmula (IVc) o (IVd).
[0120] Los compuestos de fórmula (IV) que tienen la fórmula (IVh): 15
donde Z2-Z3, n, y Cy1 son como se definen en los compuestos de fórmula (I), R' es como se ha definido anteriormente, y B1" es un radical de fórmula (D')
pueden prepararse acoplando un compuesto de fórmula (XVIII) con un compuesto de fórmula (XIX), donde X es un grupo saliente, tal como halógeno o metanosulfonato, como se muestra en el esquema 6:
O
O
30
(XVIII) (XIX) (IVh)
Esquema 6
35 [0121] Esta conversión puede realizarse en presencia de CuI, K3PO4 y (±)-1,2-transdiaminociclohexano, en un disolvente adecuado, tal como dioxano, y a una temperatura adecuada, preferiblemente temperatura ambiente.
[0122] Como alternativa, los compuestos de fórmula (IVh) pueden prepararse acoplando un compuesto de fórmula (XX) con un compuesto de fórmula (XXI), como se muestra en el esquema 7:
(XX) 5 Esquema 7
[0123] Esta conversión puede realizarse en un disolvente adecuado, tal como metanol, y a una temperatura adecuada, preferiblemente calentamiento.
10 [0124] Los compuestos de fórmulas (V) a (XXI) están disponibles en el mercado o pueden obtenerse por procesos sintéticos convencionales como se muestra en los ejemplos a continuación.
[0125] La presente invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) como se ha definido anteriormente junto con
15 excipientes o portadores farmacéuticamente aceptables.
[0126] La expresión "cantidad terapéuticamente efectiva”, como se usa en el presente documento, se refiere a la cantidad de un compuesto que, al administrarse, es suficiente para impedir el desarrollo de, o aliviar en cierta medida, uno o más de los síntomas de la enfermedad que se aborda. La dosis específica del compuesto de la
20 invención para obtener un beneficio terapéutico puede variar dependiendo de las circunstancias particulares del paciente individual que incluyen, entre otras, el tamaño, peso, edad y sexo del paciente, la naturaleza y fase de la enfermedad, la agresividad de la enfermedad, y la ruta de administración. Por ejemplo, puede usarse una dosis de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 300 mg/kg.
25 [0127] La expresión "excipientes o portadores farmacéuticamente aceptables" se refiere a materiales, composiciones o portadores farmacéuticamente aceptables. Cada componente debe ser farmacéuticamente aceptable en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la composición farmacéutica. También debe ser adecuado para su uso en contacto con el tejido u órgano de seres humanos y animales sin toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica, inmunogenicidad u otros problemas o complicaciones proporcionales a una relación
30 beneficio/riesgo razonable.
[0128] La elección de la formulación farmacéutica dependerá de la naturaleza del compuesto activo y de su vía de administración. Se puede usar cualquier vía de administración, por ejemplo, administración oral, parenteral y tópica.
35 [0129] Por ejemplo, la composición farmacéutica puede formularse para administración oral y puede contener uno o más portadores o excipientes fisiológicamente compatibles, en forma sólida o líquida. Estas preparaciones pueden contener ingredientes convencionales tales como agentes de unión, cargas, lubricantes, y agentes humectantes aceptables.
40 [0130] La composición farmacéutica puede formularse para administración parenteral en combinación con vehículos líquidos inyectables convencionales, tales como agua o alcoholes adecuados. Pueden incluirse excipientes farmacéuticos convencionales para inyección, tales como agentes estabilizantes, agentes solubilizantes y tampones. en tales composiciones. Estas composiciones farmacéuticas se pueden inyectar por vía intramuscular,
45 intraperitoneal o intravenosa. intraperitoneal, o intravenosa.
[0131] La composición farmacéutica puede formularse para administración tópica. Las formulaciones incluyen cremas, lociones, geles, polvos, soluciones y parches en los que el compuesto se dispersa o se disuelve en excipientes adecuados.
50 [0132] Las composiciones farmacéuticas pueden estar en cualquier forma, incluyendo, entre otras, comprimidos, gránulos, cápsulas, soluciones acuosas u oleosas, suspensiones, emulsiones o formas en polvo secas adecuadas para la reconstitución con agua u otro medio líquido adecuado antes del uso, para liberación inmediata o retardada.
[0133] Los excipientes y/o portadores apropiados, y sus cantidades, pueden determinarse fácilmente por los expertos en la técnica de acuerdo con el tipo de formulación que se está preparando.
5 [0134] Como se demuestra en los ejemplos, los compuestos de la invención son inhibidores duales de PDE y HDAC, y por lo tanto, pueden usarse en el tratamiento y/o prevención de enfermedades mediadas por la inhibición dual de PDE y HDAC.
[0135] En una realización particular, la invención se refiere a compuestos de fórmula (I) como se ha descrito anteriormente, donde B1 es un radical de fórmula (A"), (B") o (D"), que son inhibidores duales de PDE5 y al menos un HDAC seleccionado del grupo que consiste en HDAC1, HDAC2, HDAC3 y HDAC6.
[0136] En otra realización particular, la invención se refiere a compuestos de fórmula (I) como se ha descrito
15 anteriormente, donde B1 es un radical de fórmula (C'') que son inhibidores duales de PDE9 y al menos un HDAC seleccionado del grupo que consiste en HDAC1, HDAC2, HDAC3 y HDAC6.
[0137] Por lo tanto, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I) o una composición farmacéutica que comprende el compuesto de fórmula (I) como se ha definido anteriormente, para su uso como un medicamento. La invención también se refiere a un compuesto de fórmula (I) o una composición farmacéutica que comprende el compuesto de fórmula (I) como se ha definido anteriormente, para su uso en el tratamiento y/o prevención de trastornos neurológicos que cursan con un déficit o deterioro cognitivo, o enfermedades neurodegenerativas. Por lo tanto, este aspecto se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) como se ha definido anteriormente, para la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de trastornos neurológicos que cursan con un
25 déficit o deterioro cognitivo, o enfermedades neurodegenerativas; y también pueden formularse como un método para el tratamiento y/o prevención de trastornos neurológicos que cursan con un déficit o deterioro cognitivo, o enfermedades neurodegenerativas que comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto definido previamente de fórmula (I), y uno o más excipientes o portadores farmacéuticamente aceptables, en un sujeto que lo necesite, incluyendo un ser humano.
[0138] En una realización particular, las enfermedades neurodegenerativas son enfermedades neurodegenerativas que cursan con un déficit o deterioro cognitivo. Más particularmente, la enfermedad neurodegenerativa o trastorno neurológico que curva un déficit o deterioro cognitivo se selecciona entre enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, demencia vascular (no complicada, con delirio,
35 con delirio o con estado de ánimo deprimido), deterioro cognitivo leve y deterioro cognitivo asociado a la edad. Más preferiblemente, la enfermedad es la enfermedad de Alzheimer.
[0139] A través de la descripción y las reivindicaciones, la palabra "comprende" y variaciones de la palabra, no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o etapas. Además, la palabra "comprender" incluye el caso de "consistente en". Objetos, ventajas y características adicionales de la invención se harán evidentes para los expertos en la técnica tras el examen de la descripción o pueden aprenderse mediante la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.
45 Ejemplos
Procedimiento general para el método de purificación por HPLC preparativa:
[0140] La medición por HPLC se realizó usando Gilson 281 de una bomba 233 (binaria), un automuestreador, y un detector UV. Las fracciones se detectó por LC-MS. El detector de MS se configuró con una fuente de ionización por electronebulización. La temperatura de origen se mantuvo a 300-350 °C.
[0141] Métodos por HPLC (métodos de purificación):
55 Método 1: El análisis por HPLC de fase inversa se realizó en luna (100 x 30 mm; 4 um-5 um). Disolvente A: agua con TFA al 0,075 %; Disolvente B: acetonitrilo con TFA al 0,075 %. Gradiente: A 25 °C, del 10-36 % de B al 4063 % de B en 6-16 min; después al 40-63 % de B durante 1-4 min, PDA
Método 2: El análisis por HPLC de fase inversa se realizó sobre luna C18 (100 x 30 mm; 4 um). Disolvente A: agua con TFA al 0,075 %; Disolvente B: acetonitrilo con TFA al 0,075 %. Gradiente: A 25 °C, del 20 % de B al 40 % de B en 6 min; después al 40 % de B durante 2 min, PDA
Método 3: El compuesto se purificó por cromatografía en columna (AE:PE = 1:30-1:3) y recristalización (AE)
AcOH: ácido acético; Boc: terc-butoxicarbonilo; calc.: calculado; conc.: concentrado; DMAP: 4-Dimetilaminopiridina; DCM: diclorometano; DIAD: azodicarboxilato de diisopropilo; DMF: dimetilformamida; DMSO: dimetilsulfóxido; AE: acetato de etilo; EDC.HCl: clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida;
5 equiv.: equivalente; ESI-MS: espectrometría de masas de ionización por electronebulización; Et3N: trietilamina; HOBt: Hidroxibenzotriazol; HPLC: cromatografía líquida de alto rendimiento; LDA: diisopropilamida de litio; MO: microondas; NMM: N-metil morfolina; PE: éter de petróleo; t.a.: temperatura ambiente; TFA: ácido trifluoroacético; THF: tetrahidrofurano; THP: tetrahidropirano; TLC: cromatografía de capa fina
10 Preparación de reactivos
Preparación del reactivo KR-1: Ácido 3,5-dicloropiridin-4-carboxílico
[0143] A una solución de la 3,5-dicloropiridina disponible en el mercado (10 g, 0,067 mol) en THF (20 ml) se
15 le añadió LDA (60 ml, 0,074 mol), la reacción se agitó a -78 °C durante 1 hora. Después, se añadió hielo seco (5,9 g, 0,134 mol) a la solución. Después de 0,5 h, la mezcla se inactivó añadiendo agua y se ajustó el pH a 3-4. La solución se repartió con AE y agua. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron para dar el producto en bruto KR-1 (7 g, rendimiento del 55 %) en forma de un sólido de color blanco pálido. ESI-MS (M+1): 192 calc. para C6H3Cl2NO2: 190,95.
20 Preparación del reactivo KR-2: 3-(Piridin-4-il)prop-2-enoato de (E)-etilo
[0144] A una solución de la p-formilpiridina disponible en el mercado (5,16 g, 48,22 mmol) en THF anhidro (50 ml) se le añadió éster etílico del ácido (trifenil-l5-fosfanilideno)-acético (20,13 g, 57,82 mmol), la mezcla de
25 reacción se agitó a t.a. durante una noche. Después, la mezcla de reacción se concentró al vacío y se purificó por columna para dar KR-2 (3 g, rendimiento del 36,3 %). ESI-MS (M+1): 178 calc. para C10H11NO2: 177,1.
Preparación del reactivo KR-3: 3-(4-Formilfenil)prop-2-enoato de (E)-etilo
30 [0145] KR-3 se obtuvo partiendo de tereftalaldehído disponible en el mercado de una manera análoga a KR
2. Rendimiento del 22,3 %. ESI-MS (M+1): 205 calc. para C12H12O3: 204,1.
Preparación del reactivo KR-4: Cloruro de 3,5-dicloroisonicotinoílo
35 [0146] A una solución de KR-1 (1,50 g, 7,85 mmol) en DCM (20 ml), que contenía dos gotas de DMF, se le añadió cloruro de tionilo (1,40 g, 0,85 ml, 1,5 equiv.). La reacción se calentó a reflujo durante 3 horas dando como resultado una solución transparente. La solución se evaporó al vacío proporcionado el producto en bruto KR-4 (1,35 g, rendimiento del 82,3 %) en forma de un aceite de color amarillo. ESI-MS (M+1): 210 calc. para C6H2Cl3NO: 208,9.
40 Preparación del reactivo KR-5: 3-(4-(Hidroximetil)fenil)prop-2-enoato de (E)-etilo
[0147] A una solución de KR-3 (2,04 g, 10 mmol) en MeOH (30 ml) se le añadió NaBH4 (1,9 g, 50 mmol), la mezcla de reacción se agitó a t.a. durante una noche. La mezcla se diluyó con AE y se lavó con agua, salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró para dar KR-5 (1,6 g, 77,7 %) en forma de un sólido de color amarillo.
45 ESI-MS (M+1): 207 calc. para C12H14O3: 206,1.
Preparación del reactivo KR-6: 3-(4-Nitrofenil)prop-2-enoato de (E)-etilo
[0148] A una solución de 4-nitrobenzaldehído disponible en el mercado (30 g, 0,19 mol) en THF (300 ml) se
50 le añadió 2-(trifenilfosforaniliden)-acetato de etilo (138 g, 0,39 mol, 2 equiv.), la reacción se agitó a 60 °C durante una noche. Después, la mezcla se concentró y se extrajo con AE. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna (AE:PE = 1:100-1:7) para dar KR-6 (30 g, rendimiento del 69 %) en forma de un sólido de color blanco pálido. ESI-MS (M+1): 222 calc. para C11H11NO4: 221,1.
55 Preparación del reactivo KR-7: 1-terc-Butoxicarbonil-4-(5-bromopirimidin-2-il)piperazina
[0149] A una solución de 5-bromo-2-cloropirimidina disponible en el mercado (9,75 g, 50 mmol) en CH3CN (100 ml) se le añadieron el compuesto 1-Boc-piperazina (9,25 g, 50 mmol) y K2CO3 (13,8 g, 100 mmol). La mezcla
60 de reacción se agitó a 80 °C durante una noche. Después, la mezcla de reacción se concentró al vacío y se extrajo con AE, se lavó con agua, se secó por Na2SO4 y se concentró al vacío para dar KR-7 (15 g, rendimiento del 87,7 %). ESI-MS (M+1): 343, 345 calc. para C13H19BrN4O2: 342,1.
Preparación del reactivo KR-8: 2-(4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-1-il)pirimidin-5-carboxilato de etilo 65
[0150] A una solución de KR-7 (6,00 g, 17,49 mmol) en etanol (100 ml) se le añadieron Et3N (1,77 g, 2,43 ml) y Pd(dppf)2Cl2 (5 g), después, la mezcla de reacción se agitó a 100 °C a 1,5 MPa en una atmósfera de CO durante una noche. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró al vacío para dar KR-8 (5 g, rendimiento del 85,2 %). ESI-MS (M+1): 337 calc. para C16H24N4O4: 336,2.
5 Preparación del reactivo KR-9: 5-bromo-2-[4-(N-terc-butoxicarbonil-amino)piperidin-1-il]pirimidina
[0151] KR-9 se obtuvo partiendo de 5-bromo-2-cloropirimidin de una manera análoga a KR-7, pero usando terc-butilpiperidin-4-ilcarbamato en lugar de 1-Boc-piperazina. Rendimiento del 84,3 %. ESI-MS (M+1): 357, 359
10 calc. para C14H21BrN4O2: 356,1.
Preparación del reactivo KR-10: 2-[4-(N-terc-butoxicarbonilamino)piperidin-1-il]pirimidin-5-carboxilato de etilo
[0152] KR-10 se obtuvo partiendo de KR-9 de una manera análoga a KR-8. Rendimiento del 61,22 %. ESI15 MS (M+1): 350,2 calc. para C17H26N4O4: 350,2.
Preparación del reactivo KR-11: (1-(5-Bromopirimidin-2-il)piperidin-4-il)metanol
[0153] KR-11 se obtuvo partiendo de 5-bromo-2-cloropirimidin de una manera análoga a KR-7, pero usando
20 4-piperidinametanol en lugar de 1-Boc-piperazina. Rendimiento del 81,5 %. ESI-MS (M+1): 272 calc. para C10H14BrN3O: 271,0.
Preparación del reactivo KR-12: 1-(5-Bromopirimidin-2-il)piperidin-4-ol
25 [0154] KR-12 se obtuvo partiendo de 5-bromo-2-cloropirimidin de una manera análoga a KR-7, pero usando 4-piperidinol en lugar de 1-Boc-piperazina. Rendimiento del 47,9 %. ESI-MS (M+1): 258 calc. durante 9H12BrN3O 257,1.
Preparación del reactivo KR-13: Ácido 5-bromo-2-metil-pirimidin-4-carboxílico
30 [0155] A una solución de la etanimidamida disponible en el mercado 11, como clorhidrato, (6,0 g, 63,83 mmol) en EtOH anhidro (20 ml) se le añadió etóxido sódico (20 ml de una solución al 21 % en etanol) y la mezcla de reacción se agitó a 50 °C y el ácido (2E)-2,3-dibromo-4-oxobut-2-enoico disponible en el mercado 12 (6,82 g, 26,74 mmol) en EtOH (10 ml) se añadió a la mezcla. Después de agitar a 50 °C durante 1 hora, se añadió una porción
35 adicional de etóxido sódico (10 ml de una solución al 21 % en etanol) y la mezcla se agitó a t.a. durante 16 h. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se redujo al vacío. Después, el residuo se trató con ácido clorhídrico acuoso 2 M (30 ml) y se agitó vigorosamente durante 30 min. El sólido resultante se filtró, se lavó con agua y se secó al aire para dar KR-13 (1,46 g, 25,2 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 217 calc. para C6H5BrN2O2: 216,0.
40 Preparación del reactivo KR-14: 5-Bromo-2-metil-pirimidina
[0156] Una solución de KR-13 (1,46 g, 6,76 mmol) en xileno (20 ml) se calentó 150 °C durante 16 h. Después de enfriar a t.a., la mezcla se purificó por columna para dar el producto deseado KR-14 (0,3 g, 27,3 %) en forma de
45 un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 173 calc. para C5H5BrN2: 172,0.
Preparación del reactivo KR-15: 4-(2-Metilpirimidin-5-il)benzoato de metilo
[0157] A una solución de KR-14 (637 mg, 3,7 mmol) en 1,4-dioxano se le añadieron ácido (4
50 (metoxicarbonil)fenil)borónico, R-22, (718 mg, 3,7 mmol) y (PPh3)4Pd (46 mg, 0,037 mmol), Na2CO3 (1,17 g, 11,1 mmol). La reacción se agitó a 110 °C durante 1 h por MO. Después de que el análisis por TLC (PE/AE, 1:1) mostrase que el material de partida se había consumido, la mezcla se filtró, se concentró al vacío, y se extrajo con DCM, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro. La mezcla se concentró para dar el reactivo KR-15 (720 mg, 85,4 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 229,1 calc. para
55 C13H12N2O2: 228,0.
Preparación del reactivo KR-16: 4-(2-Formilpirimidin-5-il)benzoato de metilo
[0158] Se calentó SeO2 (308 mg, 2,77 mmol) en 1,4-dioxano a 120 °C. El reactivo KR-15 (105 mg, 0,46
60 mmol) en 1,4-dioxano se añadió lentamente. La reacción se agitó a 120 °C durante 18 h. Después de que el análisis por TLC (PE/AE, 1:1) mostrado que el material de partida se había consumido, la mezcla se filtró, se concentró al vacío, y se extrajo con DCM, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. (PE: AE = 1:1) para dar KR-16 (62 mg, 55,9 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 243,2. calc. para C13H10N2O3: 242,1.
Preparación del reactivo KR-17: 4-[2-(Hidroximetil)pirimidin-5-il]benzoato de metilo
[0159] A una solución de KR-16 (40 mg, 0,16 mmol) en MeOH se le añadió NaBH4 (25 mg, 0,66 mmol). La reacción se agitó a t.a. durante 10 h. Después de que el análisis por TLC (PE/AE, 1:1) mostrase que el material de
5 partida se había consumido, la mezcla se vertió en agua, se concentró al vacío, y se extrajo con DCM, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. (PE:AE = 1:1) para dar el reactivo KR-17 (24 mg, 61,5 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 245,1 calc. para C13H12N2O3: 244,0.
10 Preparación del reactivo KR-18: (4-Cloro-2-metilsulfanil-pirimidin-5-il)metanol
[0160] A una solución del 4-cloro-2-metiltio-pirimidin-5-carboxilato de etilo disponible en el mercado, 13, (15 g, 64 mmol) en CH2Cl2 (250 ml) a -78 °C se le añadió lentamente Dibal-H (hidruro de diisobutilaluminio) (1,0 M en tolueno, 128 ml, 128 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 2 h. A la mezcla de reacción se le añadió
15 Na2SO4.10H2O (144 g, 640 mmol) y se agitó durante 30 min. Los productos orgánicos se secuestraron y el producto acuoso se extrajo adicionalmente con CH2Cl2, la capa orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el KR-18 en bruto (9,8 g, 80,9 %) en forma de un sólido de color amarillo que se usó directamente en la siguiente etapa. ESI-MS (M+1): 191,0 calc. para C6H7ClN2OS: 190,0.
20 Preparación del reactivo KR-19: terc-Butil-[(4-cloro-2-metilsulfanil-pirimidin-5-il)metoxi]-dimetil-silano
[0161] A una solución de KR-18 (1,7 g, 9 mmol) en CH2Cl2 (20 ml) se le añadieron TBSCl (cloruro de tercbutildimetilsililo) (2,0 g, 13,3 mmol), imidazol (1,2 g, 18 mmol). La mezcla de reacción se agitó a t.a. durante 10 h. La mezcla de reacción se inactivó en agua, se extrajo con CH2Cl2, se secó con Na2SO4 anhidro, se concentró para dar
25 el producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna (eluyendo con PE/AE = 100:1 a 5:1) para dar el reactivo puro KR-19 (2,1 g, 77,8 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 305,1 calc. para C12H21ClN2OSSi: 304,0.
Preparación del reactivo KR-20: terc-Butil-dimetil-[(2-metilsulfanilpirimidin-5-il)metoxi]silano
30 [0162] A una solución de KR-19 (5,7 g, 18,7 mmol) en MeOH (50 ml) se le añadieron Pd/C (10 g), Na2CO3 (2,6 g, 18,7 mmol), después la mezcla de reacción se agitó a 50 °C a 50 psi (345 kPa) de hidrógeno durante 18 h. Después de que el análisis por TLC (PE/AE = 5:1) mostrase que el material de partida se había consumido, la mezcla se filtró y se concentró, se añadió agua y se extrajo con CH2Cl2, la capa orgánica se lavó con salmuera, se
35 secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna (eluyendo con PE/AE = 100:1 a 10:1) para dar el reactivo KR-20 (2,3 g, 46,0 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 271,1 calc. para C12H22N2OSSi: 270,1.
Preparación del reactivo KR-21: terc-Butil-dimetil-[(2-metilsulfonilpirimidin-5-il)metoxi]silano
40 [0163] A una solución de KR-20 (2,24 g, 8 mmol) en CH2Cl2 (25 ml) se le añadió m-CPBA (ácido metacloroperbenzoico) (4,2 g, 21 mmol). La mezcla de reacción se agitó a t.a. durante 10 h. A la mezcla resultante se le añadió Na2SO3 acuoso agitado durante 30 min. La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo 3 veces con CH2Cl2. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO3 acuoso y salmuera, se secaron sobre sulfato
45 sódico y se concentraron a presión reducida para proporcionar el producto en bruto deseado que se purificó por cromatografía en columna (eluyendo con PE/AE = 100:1 a 10: 1) para dar KR-21 (1,8 g, 75,1 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 303,1 calc. para C12H22N2O3SSi: 302,1.
Preparación del reactivo KR-22: 1-[5-[[terc-butil(dimetil)silil]oximetil]-pirimidin-2-il]piperidin-4-carboxilato de etilo
50 [0164] A una solución de KR-21 (2,9 g, 9,6 mmol) en 1,4-dioxano se le añadieron piperidin-4-carboxilato de etilo, R-23, (12,0 g, 76,8 mmol), DIEA (N,N-Diisopropiletilamina) (3,7 g, 29 mmol). La reacción se agitó a 100 ºC durante 18 h. Después de que el análisis por TLC (PE/AE = 3:1) mostrase que el material de partida se había consumido, la mezcla se vertió en agua y se extrajo con CH2Cl2, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó
55 sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna (eluyendo con EP/AE = 100:1 a 10: 1) para dar el reactivo puro KR-22 (2,8 g, 77,8 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 380,1 calc. para C19H33N3O3Si: 379,2.
Preparación del reactivo KR-23: 1-[5-(hidroximetil)pirimidin-2-il]piperidin-4-carboxilato de etilo.
60 [0165] Una solución de KR-22 (2,7 g, 7,1 mmol) en AcOH/H2O/THF (13/7/3) se agitó a 30 °C durante 5 h. Después de que el análisis por TLC (EP/AE = 3:1) mostrase que el material de partida se había consumido, la mezcla se vertió en agua y se extrajo con CH2Cl2, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna (eluyendo con
EP/AE = 100:1 a 10: 1) para dar el reactivo puro KR-23 (1,6 g, 85,1 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 266,1 calc. para C13H19N3O3: 265,1.
Preparación del reactivo KR-24: 4-(4-Hidroxifenil)benzoato de metilo
5 [0166] A una solución del ácido 4'-hidroxi bifenil-4-carboxílico disponible en el mercado, 14, (5 g, 23,4 mmol) en MeOH (30 ml) se le añadió H2SO4 (3 ml), después la mezcla se agitó a 80 °C durante 5 h. La mezcla resultante se enfrió a temperatura ambiente y se concentró al vacío. La mezcla se inactivó en agua, se extrajo con AE, se secó con Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el reactivo en bruto KR-24 (4,5 g, 84,4 %) en forma de un sólido de color
10 amarillo pálido. ESI-MS (M+1):229,1 calc. para C14H12O3: 228,1.
Preparación del reactivo KR-25: 3-[4-(4-metoxicarbonilfenil) fenoxi]azetidin-1-carboxilato de terc-butilo
[0167] A una solución de KR-24 (400 mg, 1,76 mmol) en tolueno anhidro (15 ml) se le añadieron 3
15 hidroxiazetidin-1-carboxilato de terc-butilo, R-24, (304 mg, 1,76 mmol), Ph3P (694 mg, 2,64 mmol) y DIAD (538 mg, 2,64 mmol). El vial cerrado herméticamente se irradió en el microondas en una síntesis Biotage Smith a 110 °C durante 1 h. La mezcla resultante se enfrió a temperatura ambiente y se concentró al vacío. La mezcla se inactivó en agua, se extrajo con DCM, se secó con Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. (PE:AE = 1:0 a 3:1) para dar KR-25 (470 mg, 69,6 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido.
20 ESI-MS (M+1): 384,2 calc. para C22H25NO5: 383,2.
Preparación del reactivo KR-26: 3-(4-bromofenoxi)azetidin-1-carboxilato de terc-butilo
[0168] A una solución de 4-bromofenol, 15, (130 mg, 0,76 mmol) en tolueno (10 ml) se le añadieron 3
25 hidroxiazetidin-1-carboxilato de terc-butilo, R-24, (130 mg, 0,76 mmol), PPh3 (240 mg, 0,91 mmol), DIAD (186 mg, 0,91 mmol). El vial cerrado herméticamente se irradió en el microondas en una síntesis Biotage Smith a 110 °C durante 1 h. La mezcla de reacción se inactivó en agua, se extrajo con DCM, se secó con Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. para dar el reactivo KR-26 (180 mg, 72,6 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 328,1 calc. para C14H18BrNO3: 327,0.
30 Preparación del reactivo KR-27: 1-[4-(1-terc-butoxicarbonilazetidin-3-il)oxifenil]piperidin-4-carboxilato de etilo
[0169] A una suspensión de KR-26 (94 mg, 0,29 mmol) y el compuesto piperidin-4 carboxilato de etilo, R-23, (50 mg, 0,32 mmol) en 1,4-dioxano (10 ml) se le añadieron Cs2CO3 (284 mg, 0,87 mmol), Pd(tBu)3P (45 mg, 0,087
35 mmol). La mezcla se agitó a 120 °C en atmósfera de N2 durante 6 h. La mezcla resultante se enfrió a temperatura ambiente y se concentró al vacío. La mezcla se inactivó en agua, se extrajo con DCM, se secó con Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. (PE:AE = 1:0 a 3:1) para dar KR-27 (75 mg, 64,1 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 405,2 calc. para C22H32N2O5: 404,2.
40 Preparación del reactivo KR-28: (E)-3-(4-hidroxifenil)prop-2-enoato de metilo
[0170] Una solución del ácido trans-4-hidroxicinnámico disponible en el mercado, 16, (5 g, 30,5 mmol) en MeOH (30 ml) se le añadió H2SO4 (3 ml), después la mezcla se agitó a 80 °C durante 5 h. La mezcla resultante se enfrió a temperatura ambiente y se concentró al vacío. La mezcla se inactivó en agua, se extrajo con AE, se secó
45 con Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto KR-28 (4,2 g, 77,8 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 179,1 calc. para C10H10O3: 178,0.
Preparación del reactivo KR-29: 3-[4-[(E)-3-metoxi-3-oxo-prop-1-enil]fenoxi]azetidin-1-carboxilato de terc-butilo
50 [0171] A una solución de KR-28 (200 mg, 1,12 mmol) en tolueno anhidro (15 ml) se le añadieron 3hidroxiazetidin-1-carboxilato de terc-butilo, R-24, (194 mg, 1,12 mmol), Ph3P (353 mg, 1,13 mmol) y DIAD (230 mg, 1,13 mmol), el vial cerrado herméticamente se irradió en el microondas en una síntesis Biotage Smith a 110 ºC durante 1 h. La mezcla resultante se enfrió a temperatura ambiente y se concentró al vacío. La mezcla se inactivó en agua, se extrajo con DCM, se secó con Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó
55 por TLC prep. (PE:AE = 1:0 a 3:1) para dar KR-29 (260 mg, 69,9 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 334,2 calc. para C18H23NO5: 333,1.
Preparación del reactivo KR-30: 3-(4-piridiloxi)azetidin-1-carboxilato de terc-butilo
60 [0172] A una solución del 4-piridinol disponible en el mercado, 17, (500 mg, 5,26 mmol) en tolueno anhidro (15 ml) se le añadieron 3-hidroxiazetidin-1-carboxilato de terc-butilo, R-24, (910 mg, 5,26 mmol), Ph3P (1,67 g, 6,2 mmol) y DIAD (1,27 g, 6,3 mmol), el vial cerrado herméticamente se irradió en el microondas en una síntesis Biotage Smith a 150 °C durante 3 h. La mezcla resultante se enfrió a temperatura ambiente y se concentró al vacío. La mezcla se inactivó en agua, se extrajo con DCM, se secó con Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en
bruto que se purificó por TLC prep. para dar KR-30 (60 mg, 57,1 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 251,1 calc. para C13H18N2O3: 250,1.
Preparación del reactivo KR-31: 3-(4-piperidiloxi)azetidin-1-carboxilato de terc-butilo
5 [0173] Una solución de KR-30 (530 mg, 2,21 mmol) en EtOH anhidro (10 ml) se le añadieron PtO2 (360 mg, 1,59 mmol), ácido 4-metilbencenosulfónico (407 mg, 2,12 mmol), después la mezcla de reacción se agitó a 50 ºC durante 5 h en una atmósfera de hidrógeno a 50 psi (345 kPa). La mezcla se filtró y se concentró, se añadió agua y se extrajo con DCM, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por pre-TLC para dar el producto puro KR-31 (410 mg, 72,6 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 257,1 calc. para C13H24N2O3: 256,2.
Preparación del reactivo KR-32: 5-[4-(1-terc-butoxicarbonilazetidin-3-il)oxi-1-piperidil]pirimidin-2-carboxilato de etilo
15 [0174] A una solución de KR-31 (600 mg, 2,36 mmol) en CH3CN se le añadieron 2-cloropirimidin-5carboxilato de etilo, R-25, (366 mg, 1,97 mmol) y K2CO3 (814 mg, 5,9 mmol). La reacción se agitó a ta durante 18 h. La mezcla se concentró al vacío, y se extrajo con DCM, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna (eluyendo con EP/AE = 1:1) para dar el producto puro KR-32 (520 mg, 54,3 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 407,2 calc. para C20H30N4O5: 406,2
Preparación del reactivo KR-33: 4-(metilsulfoniloximetil)-piperidin-1-carboxilato de terc-butilo
[0175] A una solución de 4-(hidroximetil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo disponible en el mercado (4,3 g,
25 20 mmol) se disolvió en DCM (50 ml) y se añadió trietilamina (3,03 g, 30 mmol) a la mezcla de reacción, después se añadió lentamente MsCl (2,51 g, 22 mmol) en mezcla de reacción a 0 ºC. La mezcla de reacción se agitó a ta durante 3 horas. La mezcla de reacción se inactivó con agua, se extrajo con DCM, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío para dar KR-33 (4 g, 68,3 %). ESI-MS (M+1): 294 calc. para C12H23NO5S: 293,13.
Preparación del reactivo KR-34: 4-[(3-metoxicarbonilfenoxi)-metil]piperidin-1-carboxilato de terc-butilo
[0176] A KR-33 (2,93 g, 10 mmol) disuelto en CH3CN (30 ml) se le añadieron K2CO3 (2,76 mg, 20 mmol) y 3-hidroxibenzoato de metilo disponible en el mercado (1,52 mg, 10 mmol), después se agitó a 80 ºC durante una noche. La mezcla de reacción se concentró al vacío, después se extrajo con acetato de etilo, se lavó con agua, se
35 secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío para dar KR-34 (3,15 g, 90 %). ESI-MS (M+1): 350 calc. para C19H27NO5: 349,19.
Preparación del reactivo KR-35: Ácido 3-[(1-terc-butoxicarbonil-4-piperidil)metoxi]-benzoico
[0177] A una solución del reactivo KR-34 (2,0 g, 5,71 mmol) en THF/MeOH/H2O (20/2/10 ml) se le añadió LiOH.H2O (982 mg, 22,84 mmol). La mezcla resultante se agitó a ta durante una noche, después el análisis por TLC mostró que la mayor parte de los materiales se partida se habían consumido por completo, la mezcla se diluyó con agua y se ajustó a pH de 2-3. La mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró para dar KR-35 (1,5 g, 78,08 %). ESI-MS (M+1): 336 calc. para C18H25NO5: 335,17.
45 Preparación del reactivo KR-36: 4-metilsulfoniloxipiperidin-1-carboxilato de terc-butilo
[0178] Una solución de 4-hidroxipiperidin-1-carboxilato de terc-butilo disponible en el mercado (4,02 g, 20 mmol) se disolvió en DCM (50 ml) y se añadió trietilamina (3,03 g, 30 mmol) a la mezcla de reacción, después se añadió lentamente MsCl (2,51 g, 22 mmol) a la mezcla de reacción a 0 ºC. La mezcla de reacción se agitó a ta durante 3 horas. La mezcla de reacción se inactivó con agua, se extrajo con DCM, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío para dar KR-36 (4 g, 71,2 %). ESI-MS (M+1): 294 calc. para C12H23NO5S: 293,13.
Preparación del reactivo KR-37: 4-(3-metoxicarbonilfenoxi)-piperidin-1-carboxilato de terc-butilo
55 [0179] El reactivo KR-36 (2,79 g, 10 mmol) disuelto en CH3CN (30 ml) se añadió en K2CO3 (2,76 mg, 20 mmol) y 3-hidroxibenzoato de metilo disponible en el mercado (1,52 mg, 10 mmol), después se agitó a 80 ºC durante una noche. La mezcla de reacción se concentró al vacío, después se extrajo con acetato de etilo, se lavó con agua, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío para dar KR-37 (3,05 g, 91,4 %). ESI-MS (M+1): 336 calc. para C18H25NO5: 335,17.
Preparación del reactivo KR-38: Ácido 3-[(1-terc-butoxicarbonil-4-piperidil)oxi]-benzoico
mostró que la mayor parte de los materiales se partida se habían consumido por completo, la mezcla se diluyó con agua y se ajustó a pH de 2-3. La mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró para dar KR-38 (1,44 g, 79,00 %). ESI-MS (M+1): 322 calc. para C17H23NO5: 321,16.
5 Preparación del reactivo KR-39: 5-metiltiofeno-2-carboxilato de etilo
[0181] A una solución de ácido 5-metiltiofeno-2-carboxílico disponible en el mercado (9,2 g, 0,065 mol) en DMF (80 ml) se le añadió K2CO3 (17,9 g, 0,13 mol), y después se añadió lentamente el compuesto CH3CH2I (15,2 g, 0,98 mol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Después de que el análisis por TLC (PE/EtOAc = 2:1) mostrase que el material de partida se había consumido completamente, la mezcla se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el reactivo en bruto KR-39 (9,5 g, 86,3 %) en forma de un aceite de color amarillo pálido que se usó para la siguiente etapa sin purificación adicional. ESI-MS (M+1): 171,0 calc. para C8H1002S: 170,0.
15 Preparación del reactivo KR-40: 3-(4-formilfenil)propanoato de etilo
[0182] A una solución de 4-bromobenzaldehído disponible en el mercado (6,0 g, 0,032 mol) en DMF (30 ml) se le añadieron 3,3-dietoxiprop-1-eno (12,65 g, 0,096 mol), TBACl (1,51 g, 0,032 mol), n-Bu3N (11,84 g, 0,064 mol), Pd(AcO)2 (215 mg, 0,96 mmol), después la mezcla de reacción se agitó a 90 ºC durante 1 h hasta que el análisis por TLC mostró que el material de partida se había consumido completamente, después la mezcla se diluyó con HCl 2 N y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar un producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna para dar el reactivo puro KR-40 (3,78 g, rendimiento del 56,59 %) en forma de un aceite de color amarillo. ESI-MS (M+1): 207 calc. para C12H14O3: 206,1.
25 Preparación del reactivo KR-41: 3-[4-(hidroximetil)fenil]propanoato de etilo
[0183] A una solución del reactivo KR-40 (2,2 g, 10,68 mmol) en THF/MeOH (30 ml/10 ml) se le añadió en porciones NaBH4 (619 mg, 16,29 mmol) a 0 ºC, después la mezcla de reacción se agitó a 0 ºC durante 1 h hasta que el análisis por TLC mostró que el material de partida se había consumido por completo, después la mezcla se extrajo con DCM, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el reactivo KR-41 (1,93 g, 85,59 %) en forma de un aceite de color amarillo pálido que se usó para la siguiente etapa directamente. ESI-MS (M+1): 209 calc. para C12H16O3: 208,1.
[0184] Preparación del reactivo KR-42: Ácido 5-bromo-2-etoxi-benzoico A una solución de ácido 2
35 etoxibenzoico disponible en el mercado (50 g, 0,3 mol) en AcOH (500 ml) se le añadió lentamente Br2 (72 g, 0,45 mol) a temperatura ambiente. Después, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Después de que el análisis por LC-MS mostrase que el material de partida se había consumido completamente, se añadió Na2SO3 acuoso, se concentró, la mezcla se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con NaHCO3 acuoso, salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el reactivo en bruto KR-42 (65,41 g, 89,4 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 245,0 calc. para C9H9BrO3: 243,9.
Preparación del reactivo KR-43: 5-bromo-2-etoxi-benzoato de bencilo
[0185] A una solución del reactivo KR-42 (65,41 g, 0,27 mol) en DMF (240 ml) se le añadieron BnBr (51,3
45 g,0,3 mol) y K2CO3 (82,8 g, 0,6 mol), después la mezcla se agitó a t.a. durante una noche. La mezcla se diluyó con DCM, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el reactivo en bruto KR-43 (65 g, 73 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 335,1 calc. para C16H15BrO3: 334,0.
Preparación del reactivo KR-44: 2-etoxi-5-(4-metoxicarbonilanilino)-benzoato de bencilo
[0186] A una solución del compuesto reactivo KR-43 (2,0 g, 6,0 mmol) en 1, 4-dioxano (80 ml) se le añadieron 4-aminobenzoato de metilo disponible en el mercado (1,06 g, 7,0 mmol), Pd2(dba)3 (550 mg, 0,6 mmol), X-Phos (695 mg, 1,2 mmol), y Cs2CO3 (4,9 g, 15 mmol). La mezcla resultante se agitó a 90 ºC durante una noche hasta que el análisis por TLC mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se
55 filtró y la mezcla se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por cromatografía en columna para dar el reactivo puro KR-44 (1,82 g, rendimiento del 75 %) en forma de un aceite de color amarillo pálido.
[0187] ESI-MS (M+1): 406,2 calc. para C24H23NO5: 405,1.
Preparación del reactivo KR-45: 5-(N-terc-butoxicarbonil-4-metoxicarbonil-anilino)-2-etoxi-benzoato de bencilo
Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna para dar el reactivo puro KR-45 (1,5 g, rendimiento del 66 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M-55): 450,2 calc. para C29H31NO7: 505,21.
5 Preparación del reactivo KR-46: 2-(1,4-dioxaspiro[4,5]decan-8-ilideno)acetato de etilo
[0189] A una solución de 2-dietoxifosforilacetato de etilo disponible en el mercado (9,5 g, 42,3 mmol) en THF (20 ml) se le añadió NaH (1,7 g, 42,3 mmol) a 0 ºC. La solución de mezcla se agitó a 0 ºC durante 1 h. Después, una solución de 1,4-dioxaspiro[4,5]decan-8-ona disponible en el mercado (6 g, 38,5 mmol) en THF (5 ml) se añadió a 0 ºC. La solución se agitó a ta durante una noche. La mezcla se inactivó con NH4Cl acuoso y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por columna para dar el reactivo KR-46 (6,6 g, rendimiento del 69 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 227,2; calc. para C12H18O4: 226,1.
15 Preparación del reactivo KR-47: 2-(1,4-dioxaspiro[4,5]decan-8-il)acetato de etilo
[0190] A una solución del reactivo KR-46 (6 g, 26,5 mmol) en MeOH (40 ml) se le añadió Pd/C (3 g). La solución se agitó a ta durante 3 h en una atmósfera de H2. La solución se filtró y el filtrado se concentró para dar el reactivo KR-47 (5 g, 83 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 229,2 calc. para C12H20O4: 228,1.
Preparación del reactivo KR-48: 2-(4-oxociclohexil)acetato de etilo
[0191] Una solución del reactivo KR-47 (5 g, 21,9 mmol) en HCl (6N, 10 ml) se agitó a 70 ºC durante una noche, después se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por la columna para obtener el reactivo
25 puro KR-48 (3 g, 75 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 185,2 calc. para C10H16O3: 184,1.
Preparación del reactivo KR-49: 4-(1,4-dioxa-8-azaespiro[4,5]decan-8-il)benzoato de metilo
[0192] A una solución de reactivos 1,4-dioxa-8-azaespiro[4,5]decano disponible en el mercado (1,43 g, 10 mmol) y ácido (4-metoxicarbonilfenil)-borónico (3,6 g, 20 mmol)) en DCM (20 ml), se le añadieron Cu(OAc)2 (1,82 g, 10 mmol) y Et3N (2 g, 20 mmol) y la mezcla se agitó durante una noche. La mezcla se inactivó con agua y se extrajo con DCM, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por la columna para dar el compuesto reactivo KR-49 (1,2 g, 44 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 278,2; calc. para C15H19NO4: 277,1.
35 Preparación del reactivo KR-50: O2-etil 5-azaespiro[2,4]heptano-2,5-dicarboxilato de O5-terc-butilo
[0193] A una solución de ácido 5-terc-butoxicarbonil-5-azaespiro[2,4]heptano-2-carboxílico disponible en el mercado (400 mg, 1,66 mmol) en DMF (30 ml) se le añadieron el compuesto CH3CH2I (343 mg, 2,2 mmol) y K2CO3 (410 mg, 3,0 mmol), después la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. Después de que el análisis por TLC (PE/EtOAc = 5:1) mostrase que el material de partida se había consumido completamente, la mezcla se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el reactivo en bruto KR-50 (450 mg, ~100 %) en forma de un aceite de color amarillo que se usó para la siguiente etapa sin purificación adicional.
45 [0194] ESI-MS (M-55): 214,0 calc. para C14H23NO4: 269,1.
[0195] Preparación del reactivo KR-51: 3-oxociclobutanocarboxilato de bencilo A una mezcla de ácido 3oxociclobutanocarboxílico disponible en el mercado (13,50 g, 118,32 mmol) y Cs2CO3 (46,26 g, 141,98 mmol) en CH3CN (120 ml), se le añadió en una porción bromometilbenceno (21,25 g, 124,24 mmol) a t.a. en atmósfera de N2. La mezcla se agitó a t.a. durante 20 horas. El análisis por LCMS y TLC mostró que la reacción se había completado. El residuo se vertió en agua y se agitó durante 20 min. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (120 ml). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada (140 ml), se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar el reactivo KR-51 (8,86 g, 36,7
55 %).
Preparación del reactivo KR-52: 3-[(4-etoxicarbonilfenil)metil]-azetidin-1-carboxilato de terc-butilo
[0196] Se trató 3-metilenoazetidin-1-carboxilato de terc-butilo disponible en el mercado (500 mg, 3 mmol) con una solución 0,5 M de 9-BBN en THF (10 ml), y la mezcla se calentó a reflujo durante 4 h. La mezcla resultante se transfirió en una mezcla agitada de 4-yodobenzoato de etilo (1,7 g, 6 mmol), Pd2(dba)3 (270 mg, 0,3 mmol), X-Phos (450 mg, 0,9 mmol), y Na2CO3 (1 g, 9 mmol) en 1, 4-dioxano (40 ml) y H2O (4 ml). La mezcla resultante se agitó a la temperatura de reflujo durante una noche. Después, se filtró, la mezcla se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por 65 cromatografía en columna (eluyendo con PE/EtOAc = 50:1 a 5:1) para dar el reactivo puro KR-52 (200 mg,
rendimiento del 20 %) en forma de un aceite de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 320 calc. para C18H25NO4: 319,1.
Preparación del reactivo KR-53: 3-[(5-etoxicarbonil-2-tienil)metil]azetidin-1-carboxilato de terc-butilo
5 [0197] Se trató 3-metilenoazetidin-1-carboxilato de terc-butilo disponible en el mercado (500 mg, 3 mmol) con una solución 0,5 M de 9-BBN en THF (10 ml), y la mezcla se calentó a reflujo durante 4 h. La mezcla resultante se transfirió en una mezcla agitada de 5-bromotiofeno-2-carboxilato de etilo (1,4 g, 6 mmol), Pd2(dba)3 (270 mg, 0,3 mmol), X-Phos (450 mg, 0,9 mmol), y Na2CO3 (1 g, 9 mmol) en 1, 4-dioxano (40 ml) y H2O (4 ml). La mezcla
10 resultante se agitó a la temperatura de reflujo durante una noche, después se filtró, la mezcla se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por cromatografía en columna (eluyendo con PE/EtOAc = 50:1 a 5:1) para dar el reactivo puro KR-53 (200 mg, 20 %) en forma de un aceite de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 326 calc. para C16H23NO4S: 325,1.
15 Preparación del reactivo R-09a: 2-(piperazin-1-il)pirimidin-5-carboxilato de etilo
[0198] A una solución de KR-8 (2,50 g, 7,44 mmol) se le añadieron 4 mol/l de DCM/HCl (30 ml). La mezcla de reacción se agitó a t.a. durante una noche, y después se concentró para dar R-09a (320 mg, rendimiento del 96,7 20 %). ESI-MS (M+1): 237 calc. para C11H16N4O2: 236,1.
Preparación del reactivo R-09b: 3-(piperidin-4-il)propanoato de etilo
[0199] Una mezcla de KR-2 (3 g, 16,95 mmol) y Pd/C (0,5 g) en MeOH (30 ml) se agitó a 40 °C a 40 psi (276 25 kPa) durante una noche. La mezcla se filtró, el filtrado se concentró al vacío para dar R-09b (3 g, rendimiento del 95,8 %). ESI-MS (M+1): 186 calc. para C10H19NO2: 185,2.
Preparación del reactivo R-09c: 3-(4-((piperazin-1-il)metil)fenil)-prop-2-enoato de (E)-etilo
30 [0200] A una solución de KR-3 (0,204 g, 1 mmol) en MeOH (10 ml) se le añadieron AcOH (0,1 ml) y piperazina (0,164 g, 2 mmol), la mezcla de reacción se agitó a t.a. durante una noche, después se añadió NaBH3CN (0,0189 g, 3 mmol) a la mezcla de reacción, y se agitó a t.a. durante 2 horas. Después, la mezcla de reacción se concentró al vacío para dar R-09c (250 mg, rendimiento del 91,2 %) que usó para la siguiente etapa directamente. ESI-MS (M+1): 275 calc. para C16H22N2O2: 274,3.
35 Preparación del reactivo R-09d: 3-(4-Aminofenil)prop-2-enoato de (E)-etilo
[0201] A una solución de KR-6 (30 g, 0,136 mol) en AcOH (20 ml) se le añadió Fe (41,4 g, 0,74 mol), la reacción se agitó a ta durante 5 horas. Después, la mezcla se filtró, el filtrado se concentró para dar el producto en 40 bruto que se purificó por cromatografía en columna (AE:PE = 1:20-1:2) para dar R-09d (17 g, rendimiento del 65 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 192 calc. para C11H13NO2: 191,1.
Preparación del reactivo R-09e: 2-(4-aminopiperidin-1-il)pirimidin-5-carboxilato de etilo
45 [0202] Se obtuvo R-09e partiendo de KR-10 de una manera análoga a R-09a. Rendimiento del 93,5 %. ESI-MS (M+1): 251 calc. para C12H18N4O2: 250,1.
Preparación del reactivo R-09f: 4-[4-(azetidin-3-iloxi)fenil]benzoato de metilo
50 [0203] Una solución de KR-25 (500 mg, 1,3 mmol) en HCl/dioxano (4 M, 5 ml) se agitó a t.a. durante 1 h, la mezcla de reacción se concentró para dar el reactivo deseado R-09f (325 mg, 88,3 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 284,2 calc. para C17H17NO3: 283,1.
Preparación del reactivo R-09 g: 1-[4-(azetidin-3-iloxi)fenil]piperidin-4-carboxilato de etilo
55 [0204] Se obtuvo R-09 g partiendo de KR-27 de una manera análoga a R-09f. rendimiento del 87,6 %, en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1):305,1 calc. para C17H24N2O3: 304,2.
Preparación del reactivo R-09h: (E)-3-[4-(azetidin-3-iloxi)fenil]prop-2-enoato de metilo
60 [0205] Se obtuvo R-09h partiendo de KR-29 de una manera análoga a R-09f. Rendimiento del 75,0 %. ESI-MS (M+1): 234,1 calc. para C13H15NO3: 233,1.
[0206] Se obtuvo R-09i partiendo de KR-32 de una manera análoga a R-09f. Rendimiento del 89,2 %. ESI-MS (M+1): 307,1 calc. para C15H22N4O3: 306,2.
Preparación del reactivo R-09I: 2-azaespiro[5,5]undecano-9-carboxilato de metilo; clorhidrato
5 [0207] Una solución de 09-metil 2-azaespiro[5,5]undecano-2,9-dicarboxilato de O2-terc-butilo disponible en el mercado (200 mg, 0,64 mmol) en HCl/EtOAc (1,0 N, 15 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, y después se concentró para dar el reactivo en bruto R-09I (120 mg, 89 %) en forma de un sólido de color amarillo que se usó para la siguiente etapa sin purificación adicional. ESI-MS (M-35): 212,1 calc. para C12H22ClNO2: 247,1.
10 Preparación del reactivo R-09m: 5-azaespiro[2,4]heptano-2-carboxilato de etilo
[0208] Una solución del reactivo KR-50 (450 mg, 1,66 mmol) en HCl/EtOAc (1,0 N, 20 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 h, y después se concentró para dar el reactivo en bruto R-09m (340 mg, ~100 %) en
15 forma de un sólido de color amarillo que se usó para la siguiente etapa sin purificación adicional. ESI-MS (M+1): 170,1 calc. para C9H15NO2: 169,1.
Preparación del reactivo R-09o: 4-(azetidin-3-iloxi)benzoato de etilo
20 [0209] A una solución de 4-hidroxibenzoato de etilo (520 mg, 3 mmol) en tolueno (15 ml) se le añadieron 3hidroxiazetidin-1-carboxilato de terc-butilo (456,77 mg, 3 mmol), PPh3 (1 g, 3,81 mmol), DIAD (771 mg, 3,81 mmol). El vial cerrado herméticamente se irradió en el microondas en una síntesis Biotage Smith a 110 °C durante 6 h.
[0210] La mezcla de reacción se inactivó con agua, se extrajo con DCM, se secó con Na2SO4 anhidro, se
25 concentró para dar el producto en bruto que se purificó por columna para dar R-09o (480 mg, rendimiento del 49 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 222,1 calc. para C12H15NO3: 221,1.
Preparación del reactivo R-09p: 4-(azetidin-3-ilmetil)benzoato de etilo
30 [0211] Una solución del reactivo KR-52 (200 mg, 0,63 mmol) en HCl/EtOAc (10 ml) se agitó a ta durante 1 h, después se concentró para dar el reactivo en bruto R-09p (150 mg, cuant.) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 220; calc. para C13H17NO2: 219,1.
Preparación del reactivo R-09q: 5-(azetidin-3-ilmetil)tiofeno-2-carboxilato de etilo
35 [0212] Una solución del reactivo KR-53 (200 mg, 0,63 mmol) en HCl/EtOAc (10 ml) se agitó a ta durante 1 h, y después se concentró para dar el reactivo en bruto R-09q (150 mg, cuant.) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 226; calc. para C11H15NO2: 225,0.
40 Preparación del reactivo R-10a: 2-(4-(hidroximetil)piperidin-1-il)pirimidin-5-carboxilato de etilo
[0213] Se obtuvo R-10a partiendo de KR-11 de una manera análoga a KR-8. Rendimiento del 76,5 %. ESI-MS (M+1): 266 calc. para C13H19N3O3: 265,1.
45 Preparación del reactivo R-10b: 2-(4-hidroxi-1-piperidil)pirimidin-5-carboxilato de etilo
[0214] Se obtuvo R-10b partiendo de KR-12 de una manera análoga a KR-8. Rendimiento del 81,1 %. ESI-MS (M+1): 252 calc. para C12H17N3O3 251,1.
50 Preparación del reactivo R-10d: 4-hidroxiciclohexanocarboxilato de etilo
[0215] A una solución de 4-oxociclohexanocarboxilato de etilo disponible en el mercado (5,0 g, 0,029 mol) en MeOH (50 ml) se le añadió en porciones NaBH4 (2,24 g, 0,058 mol) a 0 °C, después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h hasta que el análisis por TLC mostró que el material de partida se había
55 consumido completamente, se inactivó con agua y la mezcla se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el reactivo en bruto R-10d (4,95 g, 97,83 %) en forma de un aceite de color amarillo pálido que se usó para la siguiente etapa directamente. ESI-MS (M+1): 173 calc. para C9H16O3:172,1.
60 Preparación del reactivo R-11c: Metanosulfonato de (1-(5-(Etoxicarbonil)pirimidin-2-il)piperidin-4-il)metilo
[0216] A una solución de R-10a (2,65 g, 10 mmol) en DCM (25 ml) se le añadió Et3N (3,5 g, 35 mmol), después se añadió cloruro de mesilo (1,99 mg, 17,5 mmol) a la mezcla de reacción lentamente a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a t.a. durante una noche. La mezcla se diluyó con DCM, se lavó con agua, salmuera, se secó
sobre Na2SO4 anhidro y se concentró para dar R-11c en bruto (2,55 g, rendimiento del 74,3 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 344 calc. para C14H21N3O5S: 343,1.
Preparación del reactivo R-11d: Metanosulfonato de 4-((E)-2-(etoxicarbonil)vinil)bencilo
5 [0217] A una solución de KR-5 (206 mg, 1 mmol) en DCM (20 ml) se le añadió Et3N (202 mg, 2 mmol), después se añadió lentamente MsCl (140 mg, 1,2 mmol) a la mezcla de reacción lentamente a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a t.a. durante una noche. La mezcla se diluyó con DCM, se lavó con agua, salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró para dar el material de partida R-11d (150 mg, 53,0 %) en forma de un líquido amarillo. ESI-MS (M+1): 285 calc. para C13H16O5S: 284,3.
Preparación del reactivo R-11f: 3-(4-Yodofenil)prop-2-enoato de (E)-etilo
[0218] A una solución de R-09d (17 g, 0,089 mol) en CH3CN (200 ml) se le añadieron tBuONO (18,3 g, 0,178
15 mol), I2 (22,6 g, 0,089 mol), la reacción se agitó a t.a. durante una noche. Después, la mezcla se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna (AE:PE = 1:50-1:10) para dar R-11f (8 g, rendimiento del 31 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 303 calc. para C11H11IO2: 302,1.
Preparación del reactivo R-11h: 4-[2-(metilsulfoniloximetil) pirimidin-5-il] benzoato de metilo
[0219] A una solución del reactivo KR-17 (100 mg, 0,41 mmol) en DCM se le añadieron MsCl (cloruro de mesilo) (70,4 mg,0,62 mmol), Et3N (82,8 mg, 0,82 mmol) a 0 °C. La reacción se agitó a 0 °C durante 1 h. Después de que el análisis por TLC (PE/AE, 1:1) mostrase que el material de partida se había consumido, la mezcla se vertió en agua y se extrajo con DCM, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró
25 para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. para dar el reactivo R-11 h (95 mg, 72,0 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 323,1 calc. para C14H14N2O5S: 322,0.
Preparación del reactivo R-11i: 1-[5-(metilsulfoniloximetil)pirimidin-2-il]piperidin-4-carboxilato de etilo
[0220] A una solución de KR-23 (911 mg, 3,4 mmol) en CH2Cl2 se le añadieron MsCl (cloruro de mesilo) (590 mg, 5,15 mmol), Et3N (687 mg, 6,8 mmol) a 0 °C. La reacción se agitó a 0 °C durante 18 h. Después de que el análisis por TLC (EP/AE = 1:1) mostrase que el material de partida se había consumido, la mezcla se vertió en agua y se extrajo con CH2Cl2, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. para dar el reactivo R-11i (420 mg, 36,2 %) en forma de un
35 sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 344,1 calc. para C14H21N3O5S: 343,1.
Preparación del reactivo R-11k: 5-(bromometil)tiofeno-2-carboxilato de etilo
[0221] A una solución del reactivo KR-39 (1,9 g, 0,011 mol) en CCI4 (30 ml) se le añadieron BPO (212 mg, 0,001 mmol) y NBS (2,85 g, 0,016 mmol), después la mezcla de reacción se agitó a la temperatura de reflujo durante 2 h hasta que el análisis por TLC (PE/EtOAc = 5:1) mostró que el material de partida se había consumido por completo, la mezcla se extrajo con DCM, la capa orgánica se lavó con NaHCO3 acuoso, salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (PE/EtOAc = 5:1) para dar el reactivo puro R-11k (1,3 g, 48,1 %) en forma de un aceite de color amarillo. ESI-MS
45 (M+1): 249,1 calc. para C8H9BrO2S: 247,9.
Preparación del reactivo R-11l: 5-(bromometil)furan-2-carboxilato de metilo
[0222] A una solución de 5-metilfuran-2-carboxilato de metilo disponible en el mercado (1,0 g, 7,14 mmol) en CCl4 (20 ml) se le añadieron BPO (173 mg, 0,714 mmol) y NBS (1,91 g, 10,71 mmol), después la mezcla de reacción se agitó a la temperatura de reflujo durante 4 h hasta que el análisis por TLC (PE/EtOAc = 3:1) mostró que el material de partida se había consumido por completo, la mezcla se extrajo con DCM, la capa orgánica se lavó con NaHCO3 acuoso, salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar un producto en bruto que se purificó por TLC prep. (PE/EtOAc = 3:1) para dar el reactivo puro R-11l (920 mg, 58,97 %) en forma de un aceite de
55 color amarillo. ESI-MS (M+1): 219 calc. para C7H7BrO3: 217,9.
Preparación del reactivo R-11m: 2-[4-(bromometil)fenil]acetato de etilo
[0223] A una solución de 2-(p-tolil)acetato de etilo disponible en el mercado (2,0 g, 11,24 mmol) en CCI4 (30 ml) se le añadieron BPO (272 mg,1,124 mmol) y NBS (3,00 g, 16,86 mmol), después la mezcla de reacción se agitó a la temperatura de reflujo durante 2 h hasta que el análisis por TLC (PE/EtOAc = 5:1) mostró que el material de partida se había consumido por completo, la mezcla se extrajo con DCM, la capa orgánica se lavó con NaHCO3 acuoso, salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar un producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna para dar el reactivo puro R-11m (1,90 g, 66 %) en forma de un aceite de color amarillo.
65 ESI-MS (M+1): 257 calc. para C11H13BrO2: 256,0.
Preparación del reactivo R-11n: 3-[4-(bromometil)fenil]propanoato de etilo
[0224] A una solución del reactivo KR-41 (1,93 g, 9,28 mmol) en DCM anhidro (30 ml) se le añadió PPh3
5 (1,19 g, 3,71 mmol), después la mezcla se enfrió a 0 °C, se añadió NBS (1,96 g, 11,14 mmol) a 0 °C, después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Después de que el análisis por LC-MS mostrase que el material de partida se había consumido completamente, la mezcla se extrajo con DCM, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar un producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna para dar el reactivo puro R-11n (680 mg, rendimiento del 27 %) en forma de un aceite de
10 color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 271 calc. para C12H15BrO2: 270,0.
Preparación del reactivo R-15a: 1-bencil-4-metilpirrolidin-3-carboxilato de etilo (racémico trans)
[0225] A una solución del but-2-enoato de (E)-metilo disponible en el mercado (32 g, 0,28 mol) se le
15 añadieron tolueno (500 ml), N-(metoximetil)(fenil)-N-((trimetilsilil)metil)metanamina (74 g, 0,31 mol) y CF3COOH (30 g, 0,28 mol). La mezcla de reacción se calentó a 50 °C durante 18 h. La mezcla de reacción se concentró, se inactivó con bicarbonato sódico saturado, se extrajo con DCM, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para dar R-15a en bruto (40 g, rendimiento del 57,97 %) en forma de un aceite de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 248 calc. para C15H21NO2: 247,1.
20 Preparación del reactivo R-22a: 4-[(3clorocarbonilfenoxi)-metil]piperidin-1-carboxilato de terc-butilo
[0226] A una solución del reactivo KR-35 (1 g, 2,86 mmol) en DCM (30 ml) se le añadió 1-cloro-N, N, 2trimetilprop-1-en-1-amina (571 mg, 4,29 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La
25 mezcla se concentró al vacío para dar el reactivo R-22a (1 g, 75,8 %) que se usó directamente en la siguiente etapa. ESI-MS (M-55): 298 calc. para C18H24ClNO4: 353,14.
Preparación del reactivo R-22b: 4-(3-clorocarbonilfenoxi)-piperidin-1-carboxilato de terc-butilo
30 [0227] A una solución del reactivo KR-38 (1 g, 3,11 mmol) en DCM (30 ml) se le añadió 1-cloro-N, N, 2trimetilprop-1-en-1-amina (621 mg, 4,67 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se concentró al vacío para dar el reactivo R-22b (0,98 g, 93,3 %) que se usó directamente en la siguiente etapa. ESI-MS (M-55): 284 calc. para C17H22ClNO4: 339,12.
35 Preparación del reactivo R-23a: 3-metilenociclobutanocarboxilato de etilo
[0228] A una solución de 3-metilenociclobutanocarbonitrilo disponible en el mercado (10,7 g, 115 mmol) en EtOH (70 ml) se le añadió KOH (25,2 g, 450 mmol), después la mezcla se agitó a la temperatura de reflujo durante una noche. La mezcla resultante se agitó a la temperatura de reflujo durante una noche hasta que el análisis por
40 TLC mostró que el material de partida se había consumido completamente, el disolvente se evaporó y se añadió agua. Se añadió HCl 1 N se añadió para alcanzar un pH de ~3 y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el producto en bruto (12,3 g, ~95 %). El producto en bruto (12,3 g, 110 mmol) se disolvió en DMF (120 ml). Después, se añadieron Etl (21,5 g, 138 mmol) y K2CO3 (31,7 g, 230 mmol) a esta solución. La mezcla se agitó a t.a. durante 8 h. Después, se añadió agua y se extrajo con
45 EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar un producto en bruto que se purificó por columna para dar el reactivo R-23a (13,6 g, rendimiento del 88 %) en forma de un aceite de color amarillo pálido. GC-MS (M): 140 calc. para C8H12O2: 140,08.
Preparación del reactivo R-23b: 4-oxociclohexanocarboxilato de etilo
50 [0229] A una solución de bromuro de metil trifenil fosfonio (16 g, 45 mmol) en THF se le añadió n-BuLi (18 ml, 2,5 M, 45 mmol) a -70 °C. La solución de mezcla se agitó a 0 °C durante 2 h. A esta mezcla, se la añadió una solución de 4-oxociclohexanocarboxilato de etilo disponible en el mercado (5 g, 30 mmol) en THF a -70 °C. La mezcla de reacción se agitó a ta durante una noche. La mezcla se inactivó con NH4Cl acuoso y se extrajo con
55 EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por la columna para dar el reactivo R-23b (3 g, 60 %) en forma de un sólido de color blanco. calc. para C10H16O2: 168,1
Preparación del reactivo R-23c: 2-(4-metilenociclohexil)acetato de etilo
60 [0230] A una solución de bromuro de metil trifenil fosfonio (2,74 g, 8,2 mmol) en THF se le añadió n-BuLi (3,4 ml, 2,5 M, 8,2 mmol) a -70 °C. La solución de mezcla se agitó a 0 °C durante 2 h. Después, se añadió una solución del reactivo KR-48 (1 g, 30 mmol) en THF a la solución a -70 °C. La solución de mezcla se agitó a ta durante una noche. La mezcla se inactivó con NH4Cl acuoso y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se
secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por la columna para dar el reactivo R-23c (0,5 g, rendimiento del 60 %) en forma de un sólido de color blanco. calc. para C11H18O2: 182,1. Preparación del reactivo R-23d: 3-metilenociclopentanocarboxilato de metilo
5 [0231] A una solución de bromuro de metil trifenil fosfonio (14 g, 30 mmol) en THF se le añadió n-BuLi (12 ml, 2,5 M, 30 mmol) a -70 °C. La solución de mezcla se agitó a 0 °C durante 2 h. Después de añadir una solución de 3oxociclopentanocarboxilato de metilo disponible en el mercado (3 g, 21 mmol) en THF a la solución a -70 °C. La solución de mezcla se agitó a ta durante una noche. La mezcla se inactivó con NH4Cl acuoso y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en
10 bruto que se purificó por la columna para dar el reactivo R-23d (0,7 g, rendimiento del 24 %) en forma de un sólido de color blanco. calc. para C8H12O2: 140,0.
Preparación del reactivo R-24a: Ácido 5-(N-terc-butoxicarbonil-4-metoxicarbonil-anilino)-2-etoxi-benzoico
15 [0232] A una solución del reactivo KR-45 (1,5 g, 3,0 mmol) en MeOH (40 ml) se le añadió Pd/C (1,0 g). Después, la mezcla de reacción se agitó a t.a. a 40 psi de hidrógeno durante 2 h. Después de que el análisis por TLC mostrase que el material de partida se había consumido, la mezcla se filtró y se concentró, se añadió agua y se extrajo con CH2Cl2, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna para dar el reactivo puro R-24a (1,1 g,
20 rendimiento del 88,4 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M-55): 360,1 calc. para C22H25NO7: 415,1.
Preparación del reactivo R-25: 4-metilenopiperidin-1-carboxilato de terc-butilo
25 [0233] A una solución de bromuro de metil trifenil fosfonio (59,03 g, 0,166 mol) en THF (300 ml) se le añadió n-BuLi (66 ml, 1,1 equiv.) a -78 °C, después la mezcla se agitó a -78 °C durante 1 h, se añadió gota a gota 4oxopiperidin-1-carboxilato de terc-butilo disponible en el mercado (R-21) (30 g, 0,151 mol) en THF (30 ml) a -78 °C. Después de la adición, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche, después se inactivó con NH4Cl acuoso, se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se
30 concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por cromatografía en columna (eluyendo con PE/EtOAc =
200:1 a 20:1) para dar el reactivo puro R-25 (18 g, rendimiento del 61 %) en forma de un aceite de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 198 calc. para C11H19NO2: 197,1.
Preparación del reactivo R-27a: 4-(trifluorometilsulfoniloxi)-ciclohex-3-eno-1-carboxilato de etilo
35 [0234] A una solución de 4-oxociclohexanocarboxilato de etilo disponible en el mercado (3,0 g, 17,65 mmol) en THF anhidro (30 ml) se le añadió LHMDS (18,53 ml, 1,0 M en THF, 18,53 mmol) a -78 °C, después la mezcla se agitó a la misma temperatura durante 1 h, se añadió el compuesto PhN(SO2CF3)2 (6,62 g, 18,53 mmol) en THF (20 ml) en una atmósfera de protección de N2. Después de la adición, la mezcla se agitó a temperatura ambiente
40 durante una noche hasta que el análisis por TLC mostró que el material de partida se había consumido completamente, la mezcla se inactivó con KHSO4 acuoso, se extrajo con MTBE, la capa orgánica se lavó con NaOH acuoso 1,0 M, NH4Cl acuoso, salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el reactivo en bruto R-27a (5,0 g, 93 %) en forma de un aceite de color amarillo. ESI-MS (M+1):303 calc. para C10H13F3O5S: 302,0.
45 Preparación del reactivo R-27b: 2-[4-(trifluorometilsulfoniloxi)-ciclohex-3-en-1-il]acetato de etilo
[0235] A una solución de 2-(4-oxociclohexil)acetato de etilo disponible en el mercado (1,0 g, 5,43 mmol) en THF anhidro (30 ml) se le añadió LHMDS (5,7 ml, 1,0 M en THF, 5,70 mmol) a -78 °C, después la mezcla se agitó a
50 la misma temperatura durante 1 h, se añadió el compuesto PhN(SO2CF3)2 (2,04 g, 5,70 mmol) en THF (20 ml) en una atmósfera de protección de N2. Después de la adición, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por TLC mostró que el material de partida se había consumido completamente, la mezcla se inactivó con KHSO4 acuoso, se extrajo con MTBE, la capa orgánica se lavó con NaOH acuoso 1,0 M, NH4Cl acuoso, salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el reactivo en bruto R-27b (1,50 g, 87 %)
55 en forma de un aceite de color amarillo. ESI-MS (M+1): 317 calc. para C11H15F3O5S: 316,0.
Preparación del reactivo R-28a: 4-(4-oxo-1-piperidil)benzoato de metilo
[0236] Una solución del reactivo KR-49 (0,8 g, 2,9 mmol) en HCl (6 N, 10 ml) se agitó a 70 °C durante una
60 noche, después se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por la columna para obtener el reactivo puro R-28a (0,3 g, rendimiento del 46 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 234,2 calc. para C13H15NO3: 233,1.
Preparación del reactivo R-28b: 3-oxociclobutanocarboxilato de terc-butilo 65
[0237] A una solución de ácido 3-oxociclobutanocarboxílico disponible en el mercado (11,4 g, 100 mmol) en DCM anhidro (100 ml) se le añadieron DCC (31 g, 150 mmol) y 2 metilpropan-2-ol (8,9 g, 120 mmol), después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se inactivó con H2O acuoso, se extrajo con DCM, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El
5 residuo se purificó por columna para dar el reactivo R-28b (15,1 g, rendimiento del 89 %).
Preparación del reactivo R-31a: bromo-(2-etoxi-2-oxo-etil)cinc
[0238] Se puso polvo de Zn (5,2 g, 80 mmol) en un matraz de tres bocas de 250 ml en atmósfera de
10 protección de N2, y después de que se disolviera TMSCI (0,5 ml) en THF seco (20 ml) se inyectó en el matraz. La mezcla de suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 20 min, después el compuesto 2-bromoacetato de etilo (6,5 ml) disuelto en THF seco (50 ml) se añadió por goteo en el matraz durante aproximadamente 30 min a temperatura ambiente. Después de que se completase la adición, la mezcla de reacción se agitó a 40 °C durante 30 min más y después se usó para la siguiente etapa directamente.
15 Preparación del reactivo R-32a: 3-(metoximetileno)ciclobutano-carboxilato de bencilo
[0239] Se añadió LiHMDS (53 ml, 1,0 N, 53 mmol) a una suspensión agitada de KR-51 (7,20 g, 35 mmol) en THF (120 ml) a -20 °C durante un periodo de 20 min en una atmósfera de nitrógeno. La solución resultante se agitó
20 a -10 °C durante 1 h, y después se añadió metoximetil(trifenil)fosfonio; cloruro (18,13 g, 53 mmol) en THF (10 ml) durante un periodo de 15 min en una atmósfera de nitrógeno. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 15 h. La reacción se interrumpió con NH4Cl ac. y después se extrajo con EtOAc (200 ml). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada (100 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por columna para dar el reactivo puro R-32a_(4,61 g, rendimiento del 56 %).
[0240] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6), X es un grupo saliente, tal como halógeno, A es un anillo monocíclico heterocíclico opcionalmente sustituido de 3 a 7 miembros. 5 Preparación del intermedio I-01a: 2,4-Dioxoheptanoato de etilo
[0241] A una solución de metil propil cetona (1,43,06 g, 0,5 mol) en etanol (200 ml) se le añadió Na (41,5 g, 0,5 mol), se agitó a t.a. durante 1 horas, después se añadió oxalato de dietilo (R-01a, 73,03 g, 68 ml) a la mezcla de
10 reacción y se agitó a t.a. durante una noche. La mezcla de reacción se inactivó por una solución de NH4Cl y se concentró al vacío para dar el producto en bruto, después se extrajo con AE, se lavó con agua, y se concentró al vacío para dar I-01a (60 g, rendimiento del 64,5 %). ESI-MS (M+1): 187 calc. para C9H14O4: 186,1.
Preparación del intermedio I-02a: 3-Propil-1H-pirazol-5-carboxilato de etilo
15 [0242] A una solución de I-01a (42 g, 0,225 mol) en 2-Metoxietanol:CH3COOH (335 ml: 335 ml) se le añadió NH2NH2.H2O (22,52 g, 0,45 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante una noche. La mezcla de reacción se concentró al vacío, se extrajo con AE, se lavó con agua y la capa orgánica se concentró al vacío para dar I-02a (35 g, rendimiento del 85 %). ESI-MS (M+1): 183 calc. para C9H14N2O2: 182,1.
Preparación del intermedio I-03a: 1-metil-3-propil-1H-pirazol-5-carboxilato de etilo
[0243] A una solución de I-02a (40 g, 0,22 mol) en DMF (500 ml) se le añadió Cs2CO3 (0,44 mol, 2 equiv.), después se añadió el compuesto CH3I (0,28 mol, 1,25 equiv.). La mezcla de reacción se agitó a t.a. durante una 5 noche. La mezcla de reacción se concentró al vacío, se extrajo con DCM y se lavó con agua. La capa orgánica se concentró al vacío para dar I-03a (30 g, rendimiento del 70 %). ESI-MS (M+1): 197 calc. para C10H16N2O2: 196,1.
Preparación del intermedio I-04a: Ácido 1-metil-3-propil-1H-pirazol-5-carboxílico
10 [0244] La solución de I-03a (11 g, 56,12 mmol) en HCl (121 ml, 6 M) se calentó a 100 °C durante una noche. La mezcla de reacción se concentró al vacío, se extrajo con AE, se lavó con agua y la capa orgánica se concentró al vacío para dar I-04a (9,4 g, rendimiento del 98 %). ESI-MS (M+1): 169 calc. para C8H12N2O2: 168,1.
Preparación del intermedio I-05a: Ácido 1-metil-4-nitro-3-propil-1H-pirazol-5-carboxílico
15 [0245] A una solución de I-04a (9,5 g, 56,54 mmol) se disolvió en H2SO4 conc. (40 ml). Después, a la mezcla de reacción se le añadió lentamente H2SO4 conc.:HNO3 (3,6 ml:8 ml), y se agitó a 50 °C durante una noche. La mezcla de reacción se vertió en hielo-agua y se filtró, la torta de filtrado se recogió y se concentró al vacío para dar I05a (8 g, rendimiento del 71,11 %). ESI-MS (M+1): 214 calc. para C9H11N3O4: 213,1
20 Preparación del intermedio I-06a: 1-Metil-4-nitro-3-propil-1H-pirazol-5-carboxamida
[0246] Una solución de I-05a (8 g, 40,20 mmol) se disolvió en SOCl2 (20 ml), y después se calentó a reflujo durante una noche. La mezcla de reacción se concentró al vacío para dar cloruro de 1-metil-4-nitro-3-propil-1H
25 pirazol-5-carbonilo. Después, este compuesto se disolvió en THF (100 ml), y después se añadió en NH3H2O (100 ml) un baño de hielo-agua. Después de 2 horas más, la mezcla de reacción se concentró al vacío para dar I-06a (8 g). ESI-MS (M+1): 213 calc. para C8H12N4O3: 212,1.
Preparación del intermedio I-07a: 4-Amino-1-metil-3-propil-1H-pirazol-5-carboxamida
30 [0247] A una solución de I-06a (10 g, 47,17 mmol) disuelta en metanol (100 ml), después se añadió Pd/C (5 g) a la mezcla de reacción, y se agitó a 30 °C en una atmósfera de 50 Psi (345 kPa) de H2 durante una noche. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró al vacío para dar I-07a (8,5 g, rendimiento del 98,83 %). ESI-MS (M+1): 183 calc. para C8H14N4O: 182,1.
35 Preparación del intermedio I-08a: 5-(2-Etoxilfenilcarbonilaminocarbonil)-1-metil-3-propil-1H-pirazol-4-amina
[0248] A una solución de I-07a (6 g, 32,97 mmol) en DCM (100 ml) se le añadieron Et3N (6,6 g, 65,34 mmol), cloruro de 2-etoxibenzoílo (R-04a, 6,1 g, 32,97 mmol). La mezcla de reacción se agitó a t.a. durante una noche. La
40 mezcla de reacción se lavó interrumpida añadiendo agua y se extrajo con DCM. La fase orgánica se recogió, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío para dar I-08a (10,85 g, rendimiento del 98 %). ESI-MS (M+1): 331 calc. para C17H22N4O3: 330,2.
Preparación del intermedio I-09a: 6,7-Dihidro-5-(2-etoxifenil)-1-metil-7-oxo-3-propil-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidina
45 [0249] A una solución de I-08a (8 g, 24,24 mmol) se disolvió en etanol (273 ml), agua (78 ml), NaOH (2,11 g, 52,75 mmol) y H2O2 (8,75 ml). La mezcla de reacción se agitó a 100 °C durante una noche. Después, la mezcla de reacción se concentró al vacío, se lavó con agua y se extrajo con DCM. La fase orgánica se recogió, se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar I-09a (4 g, rendimiento del 53,3 %). ESI-MS (M+1): 313 calc. para C17H20N4O2:
50 312,2.
Preparación del intermedio I-10a: Cloruro de 4-etoxi-3-(6,7-dihidro-1-metil-7-oxo-3-propil-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin5-il)benceno-1-sulfonilo
55 [0250] Se añadió I-09a (2,5 g, 8,0 mmol) en CISO3H (R-05, 10 ml) a hielo-agua y se agitó a t.a. durante 2 horas. La mezcla de reacción se inactivó añadiendo agua, y después se filtró. La torta de filtrado se recogió y se secó al vacío para dar I-10a (2,0 g) ESI-MS (M+1): 411 calc. para C17H19ClN4O4S: 410,1.
Preparación del intermedio I-11a: N-([3-(6,7-dihidro-1-metil-7-oxo-3-propil-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)-460 etoxi]benceno-1-sulfonil)piperazina
[0251] A una solución de I-10a (0,41 g, 1 mmol) en etanol (273 ml) se le añadió piperazina (R-06a, 0,256 g, 2 mmol) y la mezcla se agitó a 100 °C en microondas (MO) durante 1 hora. La mezcla de reacción se concentró al vacío para dar I-11 a (0,4 g, rendimiento del 86,8 %). ESI-MS (M+1): 461 calc. para C21H28N6O4S: 460,2.
Preparación del intermedio I-12a: 5-(5-Bromo-2-etoxifenil)-1-metil-3-propil-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
[0252] A una solución del intermedio I-09a (2 g, 6,41 mmol) en AcOH (30 ml) se le añadió lentamente Br2 (1,25 g, 7,69 mmol), la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche, después se
5 añadieron Na2SO3 (0,0189 g, 3 mmol) y agua a la mezcla de reacción, se agitaron a ta durante 2 horas. Después, la mezcla de reacción se concentró al vacío, se extrajo por AE, se lavó con agua, se secó por Na2SO4, y después se concentró al vacío para dar I-12a (2 g, 79,7 %). ESI-MS (M+1): 391 calc. para C17H19BrN4O2: 390,2.
Preparación del intermedio I-13a: 5-(2-Etoxi-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-1-metil-3-propil-1H10 pirazolo[4,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
[0253] A una solución del compuesto I-12a (3,9 g, 10,0 mmol) en 1,4-dioxano (200 ml) se le añadieron AcOK (1,96 g, 20 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (3,05 g, 12 mmol) y (dppf)2Cl2Pd (816 mg, 1 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 90 °C durante una noche, y después se filtró, y el filtrado se concentró
15 para dar I-13a (320 mg, 96,7 %). ESI-MS (M+1): 439 calc. para C23H31BN4O4: 438,3.
Preparación del intermedio I-14a: [3-(6,7-Dihidro-1-metil-7-oxo-3-propil-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)1-4-etoxilfenol
[0254] A una solución del compuesto I-13a (4,39 g, 10 mmol) en agua (50 ml) se le añadieron NaOH/H2O (4
20 M, 13 mmol) y peróxido de hidrógeno (494 mg, 13 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Se añadió una solución de Na2SO3 y se agitó durante 2 horas. Después, se extrajo por AE y se secó por Na2SO4, y la fase orgánica se concentró para dar el intermedio I-14a (2,0 mg, 61 %). ESI-MS (M+1): 329 calc. para C17H20N4O3: 328,4.
[0255] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6), Q es NH o
30 donde Cy2 es un anillo heterocíclico, y A es una cadena hidrocarburo, que opcionalmente contiene átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, y opcionalmente contiene uno o más anillos aromáticos, heteroaromáticos, carbocíclicos y/o heterocíclicos.
35 Preparación del intermedio I-15a: 2-(4-[3-(6,7-dihidro-1-metil-7-oxo-3-propil-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)-4etoxifenilsulfonil]piperazin-1-il)pirimidin-5-carboxilato de etilo
[0256] A una solución de I-10a (0,41 g, 1 mmol) en etanol (273 ml) se le añadieron 2-(piperazin-1-il)pirimidin5-carboxilato de etilo (R-09a, 0,236 g, 2 mmol), Et3N (303 mg, 3 mmol). La mezcla se agitó a 100 °C un MO durante 40 2 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío para dar I-15a (0,4 g, rendimiento del 65,5 %). ESI-MS (M+1): 611 calc. para C28H34N8O6S: 610,2.
Preparación del intermedio I-16a: Ácido 2-(4-[3-(6,7-dihidro-1-metil-7-oxo-3-propil-1H-pirazolo|4,3-d]pirimidin-5-il)-4etoxifenilsulfonil]piperazin-1-l)pirimidin-5-carboxílico
[0257] A una solución de I-15a (500 mg, 0,82 mmol) en THF/metanol/H2O (10/1/5 ml) se le añadió LiOH.H2O
5 (168 mg, 4,1 mmol). La mezcla resultante se agitó a t.a. durante una noche. Después de que el análisis por TLC mostrase que la mayor parte del material de partida se había consumido por completo, la mezcla se diluyó con agua y se ajustó a pH de 2-3. La mezcla se extrajo con AE, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró para dar I-16a en bruto (300 mg, rendimiento del 63,8 %). ESI-MS (M+1): 583 calc. para C26H30N8O6S: 582,2.
10 Preparación del intermedio I-17a: 2-(4-[3-(6,7-Dihidro-1-metil-7-oxo-3-propil-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)-4etoxfenilsulfonil]piperazin-1-il)-N-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)pirimidin-5-carboxamida
[0258] A una solución de I-16a (500 mg, 1 mmol) en DMF (10 ml) se le añadieron EDC.HCl (230 mg, 1,2
15 mmol), HOBt (162 mg, 1,2 mmol), THP-O-NH2 (229 mg, 1,5 mmol), NMM (303 mg, 3 mmol). La mezcla se agitó a t.a. durante una noche. La mezcla se diluyó con AE, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna para dar I-17a (300 mg, rendimiento del 44,0 %). ESI-MS (M+1): 682 calc. para C31H39N9O7S: 681,3.
20 Preparación del compuesto 1-06: 2-(4-[3-(6,7-Dihidro-1-metil-7-oxo-3-propil-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)-4etoxifenilsulfonil]piperazin-1-il)-N-hidroxipirimidin-5-carboxamida
[0259] A una solución de I-17a (200 mg, 0,293 mmol) en dioxano (10 ml) se le añadió HCl/dioxano (4 M, 10 ml) y la mezcla se agitó a t.a. durante 3 h. La mezcla de reacción se concentró para dar el producto en bruto que se
25 purificó por HPLC preparativa (método 1) para obtener el compuesto puro 1-06 en forma de la sal TFA (62,5 mg, rendimiento del 88,0 %). ESI-MS (M+1): 598,1 (Método por HPLC: 1) calc. para C26H31N9O6S: 597,2.
[0260] Siguiendo la misma ruta sintética para el compuesto 1-06 y usando los mismos reactivos a menos que se indique otra cosa en la tabla a continuación, se obtuvieron los siguientes compuestos:
Ejemplo
Tr (min) [M+1]+ Método de HPLC Materiales de partida
1-01
3,20 547,1 1 3-(Piperidin-4-il)propanoato de etilo (R-09b)
1-02
2,94 636,1 1 3-(4-((piperazin-1-il)metil)fenil)prop-2-enoato de (E)-etilo (R-09c)
1-03
3,29 553,0 1 3-(4-Aminofenil)prop-2-enoato de (E)-etilo (R-09d)
1-07
3,22 612,1 1 2-(4-aminopiperidin-1-il)pirimidin-5-carboxilato de etilo (R09e)
[0261] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6), X es un grupo saliente, tal como halógeno, y A es una 35 cadena hidrocarburo, que opcionalmente contiene átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, y opcionalmente contiene uno o más anillos aromáticos, heteroaromáticos, carbocíclicos y/o heterocíclicos.
Preparación del intermedio I-18a: 3-(4-[3-(6,7-dihidro-1-metil-7-oxo-3-propil-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)-4etoxifenilsulfonil]piperazin-1-il)propanoato de etilo
[0262] A una solución de I-11a (300 mg, 0,651 mmol) en CH3CN (10 ml) se le añadieron K2CO3 (271 mg, 1,95
5 mmol) y 3-bromopropionato de etilo (R-11a, 177 mg, 0,976 mmol), y después la mezcla se agitó a 100 °C durante 2 horas por MO. La mezcla de reacción se concentró al vacío para dar I-18a en bruto (260 mg, rendimiento del 71,23 %). ESI-MS (M+1): 561 calc. para C26H36N6O6S: 560,2.
Preparación del intermedio I-19a: Ácido 3-(4-[3-(6,7-dihidro-1-metil-7-oxo-3-propil-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)-410 etoxifenilsulfonil]piperazin-1-il)propanoico
[0263] Se obtuvo I-19a partiendo de I-18a de una manera análoga a I-16a. Rendimiento del 60,1 %. ESI-MS (M+1): 533 calc. para C24H32N6O6S: 532,2.
15 Preparación del intermedio I-20a: 3-(4-[3-(6,7-Dihidro-1-metil-7-oxo-3-propil-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)-4etoxifenilsulfonil]piperazin-1-il)-N-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)propanamida
[0264] Se obtuvo I-20a partiendo de I-19a de una manera análoga a I-17a. Rendimiento del 75,8 %. ESI-MS (M+1): 632 calc. para C29H41N7O7S: 631,3.
20 Preparación del compuesto 1-04: 3-(4-[3-(6,7-Dihidro-1-metil-7-oxo-3-propil-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)-4-etoxifenilsulfonil]piperazin-1-N-hidropropanamida
[0265] El compuesto 1-04 se obtuvo partiendo de I-20a de una manera análoga al compuesto 1-06. 25 Rendimiento del 88,0 %. ESI-MS (M+1): 548,3 (Método de HPLC: 1) calc. [0266] para C24H33N7O6S: 547,2; Tr es 2,20
[0267] Siguiendo la misma ruta sintética para el compuesto 1-04 y usando los mismos reactivos a menos que se indique otra cosa en la tabla a continuación, se obtuvieron los siguientes compuestos: 30
Ejemplo
Tr (min) [M+1]+ Método de HPLC Materiales de partida
1-05
2,78 562,1 1 4-Bromobutanoato de etilo (R-11 b)
[0268] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6), X es un grupo saliente, tal como halógeno, y A es una 35 cadena hidrocarburo, que opcionalmente contiene átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, y opcionalmente contiene uno o más anillos aromáticos, heteroaromáticos, carbocíclicos y/o heterocíclicos.
Preparación del intermedio I-21a: 2-(4-[3-(6,7-dihidro-1-metil-7-oxo-3-propil-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)-4etoxifenoximetil]-piperidin-1-il)pirimidin-5-carboxilato de etilo
40 [0269] A una solución de I-14a (66 mg, 0,2 mmol) en tolueno anhidro (10 ml) se le añadieron 2-[4(hidroximetil)-1-piperidil]pirimidin-5-carboxilato de etilo (R-10a) (54 mg, 0,2 mmol), Ph3P (105 mg, 0,4 mmol) y DIAD (81 mg, 0,4 mmol), la mezcla de reacción se agitó a 110 °C durante 1 h. Después, la mezcla de reacción se concentró al vacío y se purificó por columna (PE: AE = 0:1 a 1:1) para dar I-21a (100 mg, rendimiento del 87,0 %)
45 ESI-MS (M+1): 576 calc. para C30H37N7O5: 575,3.
Preparación del intermedio I-22a: Ácido 2-(4-[3-(6,7-dihidro-1-metil-7-oxo-3-propil-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)-4etoxifenoximetil]-piperidin-1-il)pirimidin-5-carboxílico
[0270] A una solución de I-21a (57,5 mg, 0,1 mmol) en THF/MeOH/H2O (10/1/3 ml) se le añadió LiOH.H2O
5 (21,5 mg, 0,5 mmol). La mezcla resultante se agitó a t.a. durante una noche. Después de que el análisis por TLC mostrase que la mayor parte del material de partida se había consumido completamente, la mezcla se diluyó con agua y se ajustó el pH a 2-3, y después se extrajo con AE, la fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró para dar I-22a (46 mg, rendimiento del 84,0 %). ESI-MS (M+1): 548 calc. para C28H33N7O5: 547,2.
10 Preparación del intermedio I-23a: N-(Tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)-2-(4-[3-(6,7-dihidro-1-metil-7-oxo-3-propil-1Hpirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)-4-etoxifenoximetil]-piperidin-1-il)pirimidin-5-carboxamida
[0271] A una solución de I-22a (273 mg, 0,5 mmol) en DMF (15 ml) se le añadieron EDC.HCl (314 mg, 2,0
15 mmol), HOBt (270 mg, 2,0 mmol), THP-O-NH2 (115 mg, 1,0 mmol), NMM (202 mg, 2,0 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche, después se diluyó con AE, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro. El residuo se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna (DCM: MeOH = 1:0 a 20:1) para dar I-23a (150 mg, rendimiento del 46,4 %). ESI-MS (M+1): 647 calc. para C33H42N8O6: 646,3.
20 Preparación del compuesto 1-11: N-Hidroxi-2-(4-[3-(6,7-dihidro-1-metil-7-oxo-3-propil-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)-4-etoxifenoximetil]-piperidin-1-il)pirimidin-5-carboxamida
[0272] Una solución de I-23a (100 mg, 0,15 mmol) en HCl/dioxano (4 M, 10 ml) se agitó a t.a. durante 3 h. La
25 mezcla de reacción se concentró para dar el compuesto en bruto 1-11 que se purificó a través de HPLC prep. para conseguir el producto deseado (62,5 mg, 73,8 %) en forma de la sal TFA. Tr es 2,59 min (Método de HPLC: 1). ESI-MS (M+1): 563 calc. para C28H34N8O5: 562,4.
[0273] Siguiendo la misma ruta sintética para el compuesto 1-11 y usando los mismos reactivos a menos que 30 se indique otra cosa en la tabla a continuación, se obtuvieron los siguientes compuestos:
Ejemplo
Tr (min) [M+1]+ Método de HPLC Materiales de partida
1-12
3,07 549,2 1 2-(4-hidroxi-1-piperidil)pirimidin-5-carboxilato de etilo (R-10b)
[0274] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6), PG es un grupo protector, tal como boc, Q es NH o
en el que Cy2 es un anillo heterocíclico, y A es una cadena hidrocarburo, que opcionalmente contiene átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, y opcionalmente contiene uno o más anillos aromáticos, heteroaromáticos, carbocíclicos y/o heterocíclicos.
10 Preparación del intermedio I-85a: 4-[[3-[(5-carbamoil-1-metil-3-propilpirazol-4-il)carbamoil]fenoxi]metil]piperidin-1carboxilato de terc-butilo
[0275] El Intermedio I-07a (1 g, 2,87 mmol) se disolvió en DCM (30 ml), después se añadieron Et3N (0,8 ml,
15 5,74 mmol) y R-22a (1 g, 2,87 mmol) a la mezcla de reacción, y se agitó a ta durante una noche. La mezcla de reacción se lavó por agua, se extrajo por DCM, se secó por Na2SO4 y se concentró al vacío para dar el producto deseado I-85a (1,0 g, rendimiento del 70,4 %). ESI-MS (M+1): 500 calc. para C26H37N5O5: 499,28.
Preparación del intermedio I-86a: 4-[[3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenoxi]metil]piperidin-120 carboxilato de terc-butilo
[0276] El Intermedio I-85a (499 mg, 1 mmol) se disolvió en EtOH(10 ml) y agua (1 ml), y después se añadieron NaOH (220 mg, 5,5 mmol) y H2O2 (1 ml) a la mezcla de reacción, y se agitó a 100 °C durante una noche. La mezcla de reacción se inactivó por Na2SO3, se concentró al vacío, se lavó por agua, se extrajo por DCM, se secó
25 por Na2SO4 y se concentró para dar el producto deseado I-86a (400 mg, rendimiento del 83,2 %). ESI-MS (M+1): 482 calc. para C26H35N5O4:481,27.
Preparación del intermedio I-87a 1-metil-5-[3-(4-piperidilmetoxi)fenil]-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona
[0277] A una solución del intermedio I-86a (400 mg, 0,832 mmol) en DCM (10 ml) se le añadió HCl/1,4dioxano (10 ml, 4 M/l). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 h, y después se concentró para dar el compuesto del producto deseado I-87a (310 mg, rendimiento del 97,8 %). ESI-MS (M+1): 382 calc. para C21H27N5O2: 381,22.
5 Preparación del intermedio I-88a: 2-[4-[[3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenoxi]metil]-1piperidil]pirimidin-5-carboxilato de etilo
[0278] El intermedio I-87a (310 mg, 0,842 mmol) disuelto en CH3CN (10 ml) se añadió en K2CO3 (350 mg,
10 2,527 mmol) y R-11 e (2-cloropirimidin-5-carboxilato de etilo) (174 mg, 0,926 mmol), después se agitó a 80 °C durante una noche. La mezcla de reacción se concentró al vacío, se extrajo con EtOAc, se lavó con agua, se secó sobre Na2SO4, y se concentró para dar el producto deseado I-88a (300 mg, rendimiento del 67,3 %). ESI-MS (M+1): 532 calc. para C28H33N7O4: 531,26.
15 Preparación del intermedio I-89a: Ácido 2-[4-[[3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenoxi]metil]-1piperidil]pirimidin-5-carboxílico
[0279] A una solución del intermedio I-88a ((0,3 g, 0,596 mmol) en THF/MeOH/H2O (10/1/5 ml) se le añadió LiOH.H2O (128,2 mg, 2,982 mmol). La mezcla resultante se agitó a ta durante una noche, después el análisis por
20 TLC mostró que la mayor parte de los materiales se partida se habían consumido por completo, la mezcla se diluyó con agua y se ajustó a pH de 2-3. La mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró para dar el producto I-89a (200 mg, rendimiento del 66,7 %). ESI-MS (M+1): 504 calc. para C26H29N7O4: 503,23.
25 Preparación del intermedio I-90a: 2-[4-[[3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenoxi]metil]-1piperidil]-N-tetrahidropiran-2-iloxi-pirimidin-5-carboxamida
[0280] A una solución del intermedio I-89a (200 mg, 0,4 mmol) en DMF (20 ml) se le añadieron EDC.HCl (75,7 mg, 0,44 mmol), HOBt (59,4 mg, 0,44 mmol), THPO-NH2 (50,4 mg, 0,44 mmol), NMM (80,8 mg, 0,80 mmol). 30 La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se diluyó con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna para dar el compuesto I-90a (100 mg, 41,2 %). El análisis por HPLC de fase inversa se realizó en sistema de HPLC semi-preparativa Gilson 281 (100 x 30 mm; 5 um). Disolvente A: agua con ácido 2,2,2trifluoroacético al 0,075 %; Disolvente B: acetonitrilo. Gradiente: A 25°C, 40 % de B al 58 % de B en 8,5 min;
35 después al 58 % de B durante 4 min, PDA. ESI-MS (M+1): 603 calc. para C31H38N8O5: 602,30.
Preparación del compuesto 1-13: Ácido 2-[4-[[3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenoxi]metil]-1piperidil]pirimidin-5-carbohidroxámico
40 [0281] Una solución del intermedio I-90a (100 mg, 0,166 mmol) en HCl/dioxano (4 M, 10 ml) se agitó a t.a. durante 3 h, la mezcla de reacción se concentró. El producto de reacción en bruto se lavó con DCM y se filtró para dar el compuesto deseado 1-13 (20 mg, rendimiento del 24,5 %). ESI-MS (M+1): 519 calc. para C26H30N8O4:518,24; Tr es 2,84.
45 [0282] Siguiendo la misma ruta sintética para el compuesto 1-13 y usando los mismos reactivos a menos que se indique otra cosa en la tabla a continuación, se obtuvieron los siguientes compuestos:
Ejemplo
Tr (min) [M+1]+ Método de HPLC Materiales de partida
1-14
2,8 505,0 1 4-(3-clorocarbonilfenoxi)-piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (R22b)
[0283] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6), X es un halógeno y A es una cadena hidrocarburo, que opcionalmente contiene átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, y opcionalmente contiene uno o más anillos 5 aromáticos, heteroaromáticos, carbocíclicos y/o heterocíclicos.
Preparación del intermedio I-91a: 4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]metil]benzoato de metilo
10 [0284] A una solución del intermedio I-13a (300 mg, 0,685 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml) se le añadieron R11j: 4-(bromometil)benzoato de metilo (142 mg, 0,623 mmol), K2CO3 (284 mg, 2,06 mmol en 1 ml de agua), Pd(PPh3)4 (722 mg, 0,0623 mmol), después la mezcla se agitó a 80 °C durante una noche en atmósfera de protección de N2. Después de que el análisis por LC-MS mostrase que el material de partida se había consumido completamente, la mezcla se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4
15 anhidro, y se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por TLC prep. (PE/EtOAc = 1:1) para dar el intermedio puro I-91a (148 mg, rendimiento del 51,93 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 461 calc. para C26H28N4O4: 460,2.
Preparación del intermedio I-92a: Ácido 4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-520 il)fenil]metil]benzoico
[0285] A una solución del intermedio I-91a (148 mg, 0,32 mmol) en MeOH/THF/H2O (3/9/3, 15 ml) se le añadió LiOH.H2O (135 mg, 3,2 mmol), la mezcla de reacción se agitó a 40 °C durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente. Después se concentró, la
25 mezcla se diluyó con H2O y se ajustó a pH de 1-2 con HCl 1 N, y después se concentró para dar el intermedio en bruto I-92a (140 mg, 97,22 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 447 calc. para C25H26N4O4: 446,1.
Preparación del intermedio I-93a: 4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]metil]-N30 tetrahidropiran-2-iloxi-benzamida
[0286] A una solución del intermedio I-92a (140 mg, 0,314 mmol) en DMF (10 ml) se le añadieron EDC.HCl (121 mg, 0,628 mmol), HOBt (135 mg, 0,628 mmol), THPO-NH2 (117 mg, 0,628 mmol), NMM (95 mg, 0,942 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el 35 material de partida se había consumido completamente, después se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la
capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. (EtOAc) para dar el intermedio puro I-93a (120 mg, rendimiento del 70,18 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 546 calc. para C30H35N5O5: 545,2.
5 Preparación del compuesto 1-15: Ácido 4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]metil]bencenocarbohidroxámico
[0287] Una solución del intermedio I-93a (120 mg, 0,22 mmol) en HCl/dioxano (4 M, 5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, después se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por HPLC
10 prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-15 (49 mg, rendimiento del 48,51 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 462 calc. para C25H27N5O4: 461,2; Tr es 2,96.
[0288] Siguiendo la misma ruta sintética para el compuesto 1-15 y usando los mismos reactivos a menos que se indique otra cosa en la tabla a continuación, se obtuvieron los siguientes compuestos:
Ejemplo
Tr (min) [M+1]+ Método de HPLC Materiales de partida
1-16
2,96 468,1 1 5-(bromometil)tiofeno-2-carboxilato de etilo (R-11k)
1-17
2,77 452 1 5-(bromometil)furan-2-carboxilato de etilo (R-11I)
1-18
3,09 476 1 2-[4-(bromometil)fenil]acetato de etilo (R-11m)
1-20
3,11 490 1 3-[4-(bromometil)fenil]propanoato de etilo (R-11n)
1-30
2,87 448,1 1 4-yodobenzoato de etilo (R-11o)
1-34
2,94 462 1 2-(4-bromofenil)acetato de etilo (R-11 p)
1-59
3,15 488,2 1 (E)-3-[4-(bromometil)fenil]prop-2-enoato de metilo (R11r)
1-60
3,05 492,2 1 4-(bromometil)-3-metoxi-benzoato de metilo (R-11s)
1-61
3,07 492,2 1 4-(bromometil)-2-metoxi-benzoato de metilo (R-11t)
1-66
2,84 480,1 1 4-(bromometil)-2-fluoro-benzoato de metilo (R-11u)
1-68
3,01 480,1 1 4-(bromometil)-3-fluoro-benzoato de metilo (R-11v)
1-71
2,88 454,1 1 5-bromotiofeno-2-carboxilato de etilo (R-11w)
1-72
2,55 449,2 1 6-cloropiridin-3-carboxilato de metilo (R-11q)
1-73
2,75 449,2 1 5-bromopiridin-2-carboxilato de metilo (R-11x)
1-74
2,74 438,2 1 5-bromofuran-2-carboxilato de etilo (R-11y)
Preparación del intermedio I-94a: 5-(2-etoxi-5-yodo-fenil)-1-metil-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona
[0289] A una solución del intermedio I-09a (10 g, 32 mmol) en TFA (50 ml) se le añadió NIS (8,6 g, 38,4
20 mmol) a 0 °C. La solución de mezcla se agitó a ta durante una noche. La mezcla se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por la columna para dar el intermedio I-94a (11 g, 79 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 439,1; calc. para C17H19IN4O2: 438,0.
25 Preparación del intermedio I-91b: 3-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]metil]ciclobutanocarboxilato de etilo
[0290] El reactivo R-23a (700 mg, 5 mmol) se trató con una solución 0,5 M de 9-BBN en THF (12 ml), y la mezcla se calentó a reflujo durante 3 h. La mezcla resultante se transfirió en una mezcla agitada del Intermedio I-94a 30 (1,66 g, 3,8 mmol), Pd2(dba)3 (138 mg, 0,15 mmol), X-Phos (143 mg, 0,3 mmol), y Na2CO3 (850 mg, 8 mmol) en 1, 4-dioxano (35 ml) y H2O (6 ml). La mezcla resultante se agitó a la temperatura de reflujo durante una noche hasta que el análisis por TLC mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se filtró, la mezcla se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por cromatografía en columna (eluyendo con PE/EtOAc =
35 50:1 a 5:1) para dar el compuesto puro intermedio I-91b (1,38 g, rendimiento del 80,3 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 453,2 calc. para C25H32N4O4: 452,2.
Preparación del intermedio I-92b: Ácido 3-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]metil]ciclobutanocarboxílico
40 [0291] A una solución del intermedio I-91b (1,38 g, 3,05 mmol) en THF/MeOH/H2O (3/3/2, 32 ml) se le añadió LiOH.H2O (1,34 g, 10 equiv.). La mezcla resultante se agitó a t.a. durante 8 h, después de que el análisis por TLC mostrase que el material de partida se había consumido completamente, entonces la mezcla se diluyó con agua y se ajustó el pH a 3~4 con HCl 1 N y la mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4
45 anhidro, se concentró y se purificó por TLC prep. para proporcionar el intermedio deseado I-92b (1,30 g, ~100 %). ESI-MS (M+1): 425,2; calc. para C23H28N4O4: 424,2.
Preparación del compuesto 1-19: (racémico) Ácido 3-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]metil]ciclobutano-carbohidroxámico
[0292] A una solución del intermedio I-92b (1,30 g, 3,05 mmol) en DMF (60 ml) se le añadieron BOP (3,39 g,
5 7,63 mmol), DIEA (5,51 g, 42,7 mmol) y NH2OH HCl (2,15 g, 30,5 mmol). La mezcla se agitó a 80 °C durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-19 (560,9 mg, rendimiento del 42 %) en forma de un sólido de
10 color amarillo, en forma de una mezcla racémica. ESI-MS (M+1): 440,3 calc. para C23H29N5O4: 439,2; Tr es 2,86.
[0293] Siguiendo la misma ruta sintética para el compuesto 1-19 y usando los mismos reactivos a menos que se indique otra cosa en la tabla a continuación, se obtuvieron los siguientes compuestos. El método usado para la conversión del ácido carboxílico en el ácido hidroxámico también se indica:
Ejemplo
Tr (min) [M+1]+ Método de HPLC Materiales de partida/Método para la formación de ácido hidroxámico
I-76 racémico
3,14 468,2 1 4-metilenociclohexanocarboxilato de etilo (R-23b)/Método A
1-43 racémico
3,3 482,2 1 2-(4-metilenociclohexil)acetato de etilo (R-23c)/Método A
1-80 racémico
2,94 454,2 1 3-metilenociclopentanocarboxilato de metilo (R-23d)/Método A
Preparación de los compuestos 1-62 y 1-63: ácido cis y trans 3-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3d]pirimidin-5il)fenil]metil]ciclobutano-carbohidroxámico
20 [0294] Los isómeros cis y trans correspondientes se separaron de la mezcla racémica 1-19 (530 mg) por SFC para obtener los isómeros cis 1-62 (9,8 mg, 2 %) ESI-MS (M+1): 440,2 calc. para C23H29N5O4: 439,2 (Tr es 2,80) y los isómeros trans 1-63 (113 mg, 21 %) ESI-MS (M+1): 440,2 calc. para C23H29N5O4: 439,2 (Tr es 2,63).
Preparación de los compuestos 1-28 y 1-29: ácido trans y cis 4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,325 d]pirimidin-5-il)fenil]metil]ciclohexano-carbohidroxámico
[0295] Los isómeros cis y trans correspondientes se separaron de la mezcla racémica en bruto 1-76 (100 mg) por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener los isómeros trans 1-28 (5,1 mg, 6,2 %) en forma de un sólido de color blanco ESI-MS (M+1): 468,2 calc. para C25H33N5O4: 467,2 (Tr es 3,07) y los isómeros cis 1-29
30 (10,2 mg, 12 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 468,2 calc. para C25H33N5O4: 467,2 (Tr es 3,11).
Preparación del compuesto 1-83: ácido trans 3-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]metil]ciclopentanocarbohidroxámico
35 [0296] La mezcla racémica 1-80 se separó por SFC (Procedimiento general, método de SFC) para obtener los isómeros trans 1-83 (21,4 mg, 23 %): ESI-MS (M+1): 454,2 calc. para C24H31N5O4: 453,2. Tr es 2,99.
[0297] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6), PG es un grupo protector, tal como boc, Q es NH o
donde Cy2 es un anillo heterocíclico, y A es una cadena hidrocarburo, que opcionalmente contiene átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, y opcionalmente contiene uno o más anillos aromáticos, heteroaromáticos, carbocíclicos y/o heterocíclicos.
10 Preparación del intermedio I-95a: 4-[N-terc-butoxicarbonil-3-[(5-carbamoil-1-metil-3-prolpyl-pirazol-4-il)carbamoil]-4etoxi-anilinolbenzoato de metilo
[0298] A una solución del reactivo R-24a (415 mg, 1 mmol) en CH2Cl2 (30 ml) se le añadieron (COCl)2 (381
15 mg, 3 mmol) y DMF (0,1 ml) a -5 °C en atmósfera de N2. La mezcla se agitó a t.a. durante 2 h. La mezcla se concentró al vacío para dar el intermedio en bruto usado directamente en la siguiente etapa. El intermedio en bruto (~1 mmol) en CH2Cl2 (10 ml) se añadió a una solución de Et3N (303 mg, 3,0 mmol) y el intermedio I-07a (182 mg, 1,0 mmol) se disolvió en CH2Cl2 (30 ml) a 0 °C en atmósfera de N2. La mezcla resultante se agitó a t.a. durante una noche hasta que el análisis por TLC mostró que el material de partida se había consumido completamente, después
20 se añadió agua y la mezcla se extrajo con CH2Cl2, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio en bruto I-95a (350 mg, 60 %) que se usó directamente en la siguiente etapa ESI-MS (M+1): 580,3 calc. para C30H37N5O7: 579,2.
Preparación del intermedio I-96a: Ácido 4-[N-terc-butoxicarbonil-4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,325 d]pirimidin-5-il)anilino]benzoico
[0299] Una solución del intermedio I-95a (350 mg, 0,6 mmol) se disolvió en EtOH (10 ml) y se añadieron agua (1 ml), y después NaOH (220 mg, 5,5 mmol) y H2O2 al 30 % (1 ml) a la mezcla de reacción, y se agitó a 100 °C durante una noche. La mezcla de reacción se inactivó con Na2SO3, se concentró al vacío, se lavó por agua, se
30 extrajo por EtOAc, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró para dar el intermedio en bruto I-96a (280 mg, 86,7 %). ESI-MS (M-55): 492,2 calc. para C29H33N5O6: 547,2.
Preparación del intermedio I-97a: N-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]-N-[4(tetrahidropiran-2-iloxicarbamoil)fenil]carbamato de terc-butilo
[0300] A una solución del intermedio I-96a (280 mg, 0,51 mmol) en DMF (20 ml) se le añadieron EDC.HCl
5 (193 mg, 1 mmol), HOBt (135 mg, 1 mmol), THPO-NH2 (117 mg, 1 mmol), NMM (303 mg, 3 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. para dar el intermedio puro I-97a (250 mg, rendimiento del 75 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI
10 MS (M+1): 647,4 calc. para C34H42N6O7: 646,3.
Preparación del compuesto 1-21: Ácido 4-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)anilino]bencenocarbohidroxámico
15 [0301] Una solución del intermedio I-97a (250 mg, 0,38 mmol) en HCl/dioxano (30 ml, 1 N) se agitó a ta durante 4 h, después se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-21 (25,4 mg, rendimiento del 14,5 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 463,3 calc. para C24H26N6O4: 646,3; Tr es 2,74.
[0302] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6), PG es un grupo protector, tal como boc, Q es NH o
donde Cy2 es un anillo heterocíclico, y A es una cadena hidrocarburo, que opcionalmente contiene átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, y opcionalmente contiene uno o más anillos aromáticos, heteroaromáticos, carbocíclicos y/o heterocíclicos.
Preparación del intermedio I-98a: 5-(2-etoxi-5-nitro-fenil)-1-metil-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona
[0303] A una solución del intermedio I-09a (1,0 g, 3,21 mmol) en ácido sulfúrico concentrado (5 ml) se le añadió en porciones KNO3 (324 mg, 3,21 mmol) a 0 °C, después la mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 20 min hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después la mezcla se vertió en agua enfriada con hielo y se extrajo con EtOAc tres veces, la capa orgánica se lavó con NaHCO3 acuoso, salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio en bruto I-98a (1,10 g, 95,65 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 358 calc. para C17H19N5O4: 357,1.
Preparación del intermedio I-99a: 5-(5-amino-2-etoxi-fenil)-1-metil-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona
[0304] A una solución del intermedio I-98a (700 mg, 1,961 mmol) en MeOH (20 ml) se le añadió Pd/C (0,5 g) a una atmósfera de H2, después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se filtró, el filtrado se concentró para dar el intermedio en bruto I-99a (605 mg, 94,38 %) en forma de un sólido de color blanco que se usó para la siguiente etapa directamente. ESI-MS (M+1): 328 calc. para C17H21N5O2: 327,1.
Preparación del intermedio I-100a: 4-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)anilino]piperidin-1-carboxilato de terc-butilo
[0305] A una solución del intermedio I-99a (200 mg, 0,612 mmol) en DCM anhidro (20 ml) se le añadieron 4oxopiperidin-1-carboxilato de terc-butilo disponible en el mercado (R-21) (145 mg, 0,734 mmol), AcOH (cat.) y Na(AcO)3BH (259 mg, 1,224 mmol), después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, la mezcla se extrajo con DCM tres veces, la capa orgánica se lavó con NaHCO3 acuoso, salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por TLC prep. (PE/EtOAc = 1:1) para dar el intermedio puro I-100a (300 mg, rendimiento del 96 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 511 calc. para C27H38N6O4: 510,2.
Preparación del intermedio I-101 a: 5-[2-etoxi-5-(4-piperidylamino)fenil]-1-metil-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7ona
[0306] Una solución del intermedio I-100a (300 mg, 0,588 mmol) en HCl/EtOAc (4 M, 5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, y después se concentró para dar el intermedio en bruto I-101a (240 mg, 99,58 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 411 calc. para C22H30N6O2: 410,2.
Preparación del intermedio I-102a: 2-[4-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)anilinol-1piperidil]pirimidin-5-carboxilato de etilo
[0307] A una solución del compuesto intermedio I-101a (240 mg, 0,585 mmol) en acetonitrilo (20 ml) se le añadieron K2CO3 (161 mg, 1,17 mmol) y R-11e: 2-cloropirimidin-5-carboxilato de etilo (109 mg, 0,585 mmol), después la mezcla se agitó a 40 °C durante una noche. Después de que el análisis por LC-MS mostrase que el material de partida se había consumido completamente, la mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. (PE/EtOAc =1:1) para dar el intermedio puro I-102a (263 mg, 80,18 %) en forma de un aceite de color amarillo. ESI-MS (M+1): 561 calc. para C29H36N8O4: 560,2.
Preparación del intermedio I-103a: Ácido 2-[4-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)anilino]-1piperidil]pirimidin-5-carboxílico
[0308] A una solución del intermedio I-102a (263 mg, 0,47 mmol) en MeOH/THF/H2O (3/9/3, 15 ml) se le añadió LiOH.H2O (197 mg, 4,70 mmol), la mezcla de reacción se agitó a 40 °C durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente. Después se concentró, la mezcla se diluyó con H2O y se ajustó a pH de 1-2 con HCl 1 N, se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio en bruto I-103a (230 mg, 92,0 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 533 calc. para C27H32N8O4: 532,2.
Preparación del intermedio I-104a: 2-[4-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)anilino]-1piperidil]-N-tetrahidropiran-2-iloxi-pirimidin-5-carboxamida
[0309] A una solución del intermedio I-103a (230 mg, 0,432 mmol) en DMF (10 ml) se le añadieron EDC.HCl
5 (166 mg, 0,864 mmol), HOBt (117 mg, 0,864 mmol), THPO-NH2 (102 mg, 0,864 mmol), NMM (131 mg, 1,296 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. (EtOAc) para dar el intermedio puro I-104a (102 mg, rendimiento del 37 %) en forma de un
10 sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 632 calc. para C32H41N9O5: 631,3.
Preparación del intermedio I-105a: 4-[4-etoxi-N-metil-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)anilino]piperidin-1-carboxilato de terc-butilo
15 [0310] A una solución del intermedio I-100a (500 mg, 0,980 mmol) en DCM anhidro (30 ml) se le añadieron paraformaldehído (132 mg, 1,471 mmol), AcOH (cat) y Na(AcO)3BH (416 mg, 1,960 mmol), después la mezcla se agitó a 60 °C durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, la mezcla se extrajo con DCM tres veces, la capa orgánica se lavó con NaHCO3 acuoso, salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por TLC
20 prep. ( PE/EtOAc =1:1) para dar el intermedio puro I-105a (288 mg, rendimiento del 56 %) en forma de un aceite de color amarillo. ESI-MS (M+1): 525 calc. para C28H40N6O4: 524,3.
Preparación del compuesto 1-22: Ácido 2-[4-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)anilino]1-piperidil]pirimidin-5-carbohidroxámico
25 [0311] Una solución del compuesto intermedio I-104a (102 mg, 0,162 mmol) en HCl/EtOAc (4 M, 5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, y después se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-22 (50 mg, rendimiento del 56 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 548 calc. para C27H33N9O4: 547,2; Tr es 2,14.
30 [0312] Siguiendo la misma ruta sintética para el compuesto 1-22 y usando los mismos reactivos o intermedios y condiciones, a menos que se indique otra cosa en la tabla a continuación, se obtuvieron los siguientes compuestos: [0313] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6) y A es una cadena hidrocarburo, que opcionalmente contiene átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, y opcionalmente contiene uno o más anillos aromáticos, heteroaromáticos, carbocíclicos y/o heterocíclicos.
Ejemplo
Tr (min) [M+1]+ Método de HPLC Materiales de partida o intermedios/condiciones
1-23
2,31 562 1 4-formilpiperidin-1-carboxilato de terc-butilo (R-30c)
1-25
2,13 562 1 Intermedio I-105a
1-26
2,03 469 1 4-oxociclohexanocarboxilato de etilo (R-28d)
1-47
2,15 546,2 1 4-(4-oxo-1-piperidil)benzoato de metilo (R-28a)
Preparación del intermedio I-106a: 4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]metil]piperidin-1-carboxilato de terc-butilo
[0314] El reactivo R-25 (6 g, 31 mmol) se trató con una solución 0,5 M de 9-BBN en THF (62 ml), y la mezcla se calentó a reflujo durante 4 h. La mezcla resultante se transfirió en una mezcla agitada del intermedio I-12a (10,14 g, 26 mmol), Pd(dba2)3 (733 mg, 0,8 mmol), X-Phos (926 mg, 1,6 mmol), y Na2CO3 (6,4 g, 60 mmol) en 1, 4dioxano (60 ml) y H2O (10 ml). La mezcla resultante se agitó a la temperatura de reflujo durante una noche hasta que el análisis por TLC (PE: EtOAc = 3:1) mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se filtró, la mezcla se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por cromatografía en columna (eluyendo con PE/EtOAc = 50:1 a 5:1) para dar el intermedio puro I-106a (7,1 g, rendimiento del 45 %) en forma de un aceite de color amarillo pálido. ESI-MS (M-55): 454,1 calc. para C28H39N5O4: 509,3.
Preparación del intermedio I-107a: 5-[2-etoxi-5-(4-piperidilmetil)fenil]-1-metil-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7ona
[0315] Una solución del intermedio I-106a (500 mg, 0,982 mmol) en HCl/EtOAc (4 M, 5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, y después se concentró para dar el intermedio en bruto I-107a (400 mg, 99 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 410 calc. para C23H31N5O2: 409,2.
Preparación del intermedio I-108a: 2-[4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]metil]1-piperidil]pirimidin-5-carboxilato de etilo
[0316] A una solución del intermedio en bruto I-107a (400 mg, 0,978 mmol) en acetonitrilo (20 ml) se le
5 añadieron K2CO3 (270 mg, 1,956 mmol) y R11 e: 2-cloropirimidin-5-carboxilato de etilo (182 mg, 0,978 mmol), y después la mezcla se agitó a 40 °C durante una noche. Después de que el análisis por LC-MS mostrase que el material de partida se había consumido completamente, la mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. (PE/EtOAc =1:1) para dar el intermedio puro I-108a (450 mg, rendimiento del 82 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI
10 MS (M+1): 560 calc. para C30H37N7O4: 559,3.
Preparación del intermedio I-109a: Ácido 2-[4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]metil]-1-piperidil]pirimidin-5-carboxílico
15 [0317] A una solución del intermedio I-108a (450 mg, 0,805 mmol) en MeOH/THF/H2O (3/9/3, 15 ml) se le añadió LiOH.H2O (338 mg, 8,05 mmol), la mezcla de reacción se agitó a 40 °C durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido por completo. Después de la evaporación, la mezcla se diluyó con H2O y se ajustó a pH de 1-2 con HCl 1 N, se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio en bruto I-109a (400 mg, 93 %)
20 en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 532 calc. para C28H33N7O4: 531,2.
Preparación del intermedio I-110a: 2-[4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]metil]1-piperidil]-N-tetrahidropiran-2-iloxi-pirimidin-5-carboxamida
25 [0318] A una solución del intermedio I-109a (400 mg, 0,753 mmol) en DMF (10 ml) se le añadieron EDC.HCl (289 mg, 1,507 mmol), HOBt (203 mg, 1,507 mmol), THPO-NH2 (176 mg, 1,507 mmol), NMM (228 mg, 2,259 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que
30 se purificó por TLC prep. (EtOAc) para dar el intermedio puro I-110a (400 mg, rendimiento del 84 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 631 calc. para C33H42N8O5: 630,3.
Preparación del compuesto 1-24: Ácido 2-[4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]methy]-1-piperidil]pirimidin-5-carbohidroxámico
35 [0319] Una solución del intermedio I-110a (400 mg, 0,635 mmol) en HCl/EtOAc (4 M, 5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, y después se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-24 (150 mg, rendimiento del 43 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 547 calc. para C28H34N8O4: 546,2; Tr es 3,27.
40 [0320] Siguiendo la misma ruta sintética para el compuesto 1-24 y usando los mismos reactivos y condiciones, a menos que se indique otra cosa en la tabla a continuación, se obtuvieron los siguientes compuestos:
Ejemplo
Tr (min) [M+1]+ Método de HPLC Materiales de partida/condiciones
1-32
2,32 483 1 2-oxoacetato de etilo/e) condiciones
1-39
2,62 546 1 6-cloropiridin-3-carboxilato de metilo (R-11q)/d) condiciones
1-45
2,84 545,2 1 ácido (4-etoxicarbonilfenil)borónico/f) condiciones
1-46
2,35 497,2 1 prop-2-enoato de etilo/g) condiciones
[0321] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6) y Q es NH o
donde Cy2 es un anillo heterocíclico.
Preparación del intermedio I-111a: 1-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]piperidin-410 carboxilato de etilo
[0322] A una solución del intermedio I-94a (500 mg, 1,14 mmol) en tolueno (5 ml) se le añadieron piperidin-4carboxilato de etilo disponible en el mercado (R-26a) (358 mg, 2,28 mmol), x-phos (162 mg, 0,342 mmol), Pd2(dba)3 (104 mg, 0,114 mmol) y ButOK (3 ml, 2,28 mmol). La mezcla se calentó a 100 °C durante 1 h por microondas. La
15 mezcla se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por columna para dar el intermedio I-111a (200 mg, 36 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 468,3 calc. para C25H33N5O4: 467,2.
Preparación del intermedio I-112a: Ácido 1-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-520 il)fenil]piperidin-4-carboxílico
por TLC mostrase que el material de partida se había consumido completamente, después la mezcla se diluyó con agua y se ajustó el pH a 6-7 con HCl 1 N y la mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio en bruto I-112a (180 mg, 96 %). ESI-MS (M+1): 440,2; calc. para C23H29N5O4: 439,2.
Preparación del intermedio I-113a: 1-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il]fenil]-Ntetrahidropiran-2-iloxi-piperidin-4-carboxamida
[0324] A una solución del intermedio I-112a (60 mg, 0,14 mmol) en DMF (10 ml) se le añadieron EDC.HCl (54 mg, 0,28 mmol), HOBt (38 mg, 0,28 mmol), THPONH2 (33 mg, 0,28 mmol) y NMM (46 mg, 0,42 mmol) a ta, y después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. para dar el intermedio I-113a (40 mg, 53 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 539,3; calc. para C28H38N6O5: 538,3.
Preparación del compuesto 1-35: Ácido 1-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]piperidin-4-carbohidroxámico
[0325] Una solución del intermedio I-113a (40 mg, 0,074 mmol) en HCl/EtOAc (10 ml) se agitó a ta durante 1 h, después se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-35 (6 mg, rendimiento del 19 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 455,2 calc. para C23H30N6O4: 454,2; Tr es 1,96.
Preparación del intermedio I-114a: 4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)benzonitrilo
[0326] A una solución del intermedio I-94a (4,0 g, 9,13 mmol) en DMF (30 ml) se le añadieron Zn(CN)2 (2,21 g, 18,26 mmol), Pd(PPh3)4 (1,06 g, 0,913 mmol), y después la mezcla se agitó a 80 °C durante una noche en atmósfera de protección de N2. Después de que el análisis por LC-MS mostrase que el material de partida se había consumido completamente, la mezcla se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por cromatografía en columna para dar el intermedio puro I-114a (2,50 g, rendimiento del 81 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 338 calc. para C18H19N5O2: 337,1.
Preparación del intermedio I-115a: 4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)benzaldehído
[0327] A una solución del intermedio I-114a (2,50 g, 7,42 mmol) en DCM anhidro (30 ml) se lle añadió lentamente DIBAL-H (8,2 ml, 1,0 M en tolueno, 8,16 mmol) a 0 °C, después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche en atmósfera de protección de N2 hasta que el análisis por HPLC mostró que el material de partida se había consumido completamente, la mezcla se vertió en HCl 2 N, se extrajo con DCM, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por cromatografía en columna para dar el intermedio puro I-115a (1,69 g, rendimiento del 67 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 341 calc. para C18H20N4O3: 340,1.
Preparación del intermedio I-116a: etil 1-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5fenil]metil]piperidin-4-carboxilato
[0328] A una solución del intermedio I-115a (250 mg, 0,736 mmol) en DCM anhidro (30 ml) se le añadieron piperidin-4-carboxilato de etilo disponible en el mercado (R-26a) (97 mg, 0,618 mmol), AcOH (cat) y Na(AcO)3BH (260 mg, 1,226 mmol), después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, la mezcla se extrajo con DCM tres veces, la capa orgánica se lavó con NaHCO3 acuoso, salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por TLC prep. (PE/EtOAc = 1:1) para dar el intermedio puro I-116a (150 mg, 50,51 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 482 calc. para C26H35N5O4: 481,2.
Preparación del intermedio I-117a: Ácido 1-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]metil]piperidin-4-carboxílico
[0329] A una solución del intermedio I-116a (150 mg, 0,312 mmol) en MeOH/THF/H2O (3/9/3, 15 ml) se le añadió LiOH.H2O (131 mg, 3,12 mmol), la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente. Después se concentró, la mezcla se diluyó con H2O, se ajustó el pH a 1-2 con HCl 1 N, se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio en bruto I-117a (130 mg, 92,20 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 454 calc. para C24H31N5O4: 453,2.
Preparación del intermedio I-118a: 1-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]metil]-Ntetrahidropiran-2-iloxi-piperidin-4-carboxamida
[0330] A una solución del intermedio I-117a (130 mg, 0,287 mmol) en DMF (10 ml) se añadió EDC.HCl (110
5 mg, 0,574 mmol), HOBt (77 mg, 0,574 mmol), THPO-NH2 (67 mg, 0,574 mmol), NMM (87 mg, 0,861 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. (MeOH/ DCM = 1:10) para dar el intermedio puro I-118a (110 mg, rendimiento del 69 %) en
10 forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 553 calc. para C29H40N6O5: 552,3.
Preparación del compuesto 1-36: Ácido 1-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]metil]piperidin-4-carbohidroxámico
15 [0331] Una solución del intermedio I-118a (110 mg, 0,199 mmol) en HCl/EtOAc (4 M, 5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, después se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-36 (26,7 mg, rendimiento del 28 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 469 calc. para C24H32N6O4: 468,2; Tr es 2,00.
20 [0332] Siguiendo la misma ruta sintética para el compuesto 1-36 y usando los mismos reactivos a menos que se indique otra cosa en la tabla a continuación, se obtuvieron los siguientes compuestos:
Ejemplo
Tr (min) [M+1]+ Método de HPLC Materiales de partida
1-81
1,85 441,2 1 azetidin-3-carboxilato de metilo (R-26b)
25 [0333] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6) y A es una cadena hidrocarburo, que opcionalmente contiene átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, y opcionalmente contiene uno o más anillos aromáticos, heteroaromáticos, carbocíclicos y/o heterocíclicos.
30 Preparación del intermedio I-119a: 4-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenoxi]benzoato de etilo
[0334] A una solución del intermedio I-13a (250 mg, 0,7 mmol) en CH2Cl2 (50 ml) se le añadieron 4hidroxibenzoato de etilo disponible en el mercado R-10c (83 mg, 0,5 mmol), Cu(OAc)2 (127 mg, 0,7 mmol), Et3N 35 (253 mg, 2,5 mmol) y un tamiz molecular de 4 A (0,5 g), después la mezcla se agitó a t.a. durante una noche en protección de O2 hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se filtró y la mezcla se extrajo con CH2Cl2, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. para dar el intermedio puro I119a (115 mg, rendimiento del 48 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 477,2 calc. para
40 C26H28N4O5: 476,2.
Preparación del intermedio I-120a: Ácido 4-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenoxi]benzoico
[0335] A una solución del intermedio I-119a (115 mg, 0,242 mmol) en MeOH[THF/H2O (3/9/3, 15 ml) se le añadió LiOH.H2O (102 mg, 2,42 mmol), la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente. Después se concentró, la mezcla se diluyó con H2O, se ajustó el pH a 1-2 con HCl 1 N, se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar intermedio puro en bruto I-120a (100 mg, 92 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 449 calc. para C24H24N4O5. : 448,1.
Preparación del intermedio I-121a: 4-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenoxi]-Ntetrahidropiran-2-iloxi-benzamida
[0336] A una solución del intermedio I-120a (100 mg, 0,223 mmol) en DMF (10 ml) se le añadió EDC.HCl (86 mg, 0,446 mmol), HOBt (60 mg, 0,446 mmol), THPO-NH2 (52 mg, 0,446 mmol), NMM (68 mg, 0,669 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. (PE/EtOAc = 1:5) para dar el intermedio puro I-121 a (82 mg, rendimiento del 67 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 548 calc. para C29H33N5O6: 547,2.
Preparación del compuesto 1-37: Ácido 4-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenoxi]bencenocarbohidroxámico
[0337] Una solución del intermedio I-121a (82 mg, 0,150 mmol) en HCl/EtOAc (4 M, 5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 hr, después se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-37 (35 mg, rendimiento del 50 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 464 calc. para C24H25N5O5: 463,1; Tr es 2,95.
[0338] Siguiendo la misma ruta sintética para el compuesto 1-37 y usando los mismos reactivos a menos que se indique otra cosa en la tabla a continuación, se obtuvieron los siguientes compuestos:
Ejemplo
Tr (min) [M+1]+ Método de HPLC Materiales de partida
1-53
2,66 470 1 4-hidroxiciclohexanocarboxilato de etilo (R10d)
1-55
2,81 478,1 1 4-(hidroximetil)benzoato de metilo (R-10e)
[0339] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6) y n es 0 o 1.
Preparación del intermedio I-122a: 4-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenilciclohex-3eno-1-carboxilato de etilo
[0340] A una solución del intermedio I-13a (300 mg, 0,685 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml) se le añadieron R27a: 4-(trifluorometilsulfoniloxi)ciclohex-3-eno-1-carboxilato de etilo 207 mg, 0,685 mmol), K2CO3 (284 mg, 2,06 mmol en 1 ml de agua), Pd(PPh3)4 (80 mg, 0,0685 mmol), después la mezcla se agitó a 80 °C durante una noche en atmósfera de protección de N2. Después de que el análisis por LC-MS mostrase que el material de partida se había consumido completamente, la mezcla se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por TLC prep. (PE/EtOAc = 1:1) para dar el intermedio puro I-122a (300 mg, rendimiento del 94 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 465 calc. para C26H32N4O4: 464,2.
Preparación del intermedio I-123a: 4-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]ciclohex-3eno-1-carboxílico
[0341] A una solución del intermedio I-122a (130 mg, 0,280 mmol) en MeOH/THF/H2O (3/9/3, 15 ml) se le añadió LiOH.H2O (118 mg, 2,80 mmol), la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente. Después se concentró, la mezcla se diluyó con H2O, se ajustó el pH a 1-2 con HCl 1N, se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio en bruto I-123a (110 mg, 90 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 437 calc. para C24H28N4O4: 436,2.
Preparación del intermedio I-124a: 4-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]-Ntetrahidropiran-2-iloxi-ciclohex-3-eno-1-carboxamida
[0342] A una solución del intermedio I-123a (110 mg, 0,252 mmol) en DMF (10 ml) se le añadieron EDC.HCl
5 (97 mg, 0,504 mmol), HOBt (68 mg, 0,504 mmol), THPO-NH2 (59 mg, 0,504 mmol), NMM (77 mg, 0,756 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. (EtOAc) para dar el intermedio puro I-124a (90 mg, rendimiento del 66 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 536 calc. para C29H37N5O5: 535,2.
Preparación del compuesto 1-38: Ácido 4-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-ilfenil]ciclohex-3-eno-1-carbohidroxámico
15 [0343] Una solución del intermedio I-124a (90 mg, 0,168 mmol) en HCl/EtOAc (4 M, 5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, después se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-38 (14,5 mg, rendimiento del 19 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 452 calc. para C24H29N5O4: 451,2; Tr es 2,85.
[0344] Siguiendo la misma ruta sintética para el compuesto 1-38 y usando los mismos reactivos a menos que se indique otra cosa en la tabla a continuación, se obtuvieron los siguientes compuestos:
Ejemplo
Tr (min) [M+1]+ Método de HPLC Materiales de partida
1-42
2,98 466 1 2-[4-(trifluorometilsulfoniloxi)-ciclohex-3-en-1-il]acetato (R-27b) de etilo
Preparación del intermedio I-125a: 4-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-525 il)fenil]ciclohexanocarboxilato de etilo
[0345] A una solución del intermedio I-122a (170 mg, 0,366 mmol) en MeOH (20 ml) se le añadió Pd/C (50 mg) a una atmósfera de H2, después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se filtró, y el filtrado se concentró para dar el intermedio en bruto I-125a (154 mg, 90 %) en forma de un sólido de color blanco que se usó para la siguiente etapa directamente. ESI-MS (M+1): 467 calc. para C26H34N4O4: 466,2.
Preparación del intermedio I-126a: Ácido 4-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]ciclohexanocarboxílico
35 [0346] A una solución del intermedio en bruto I-125a (154 mg, 0,330 mmol) en MeOH/THF/H2O (3/9/3, 15 ml) se le añadió LiOH.H2O (139 mg, 3,30 mmol), la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente. Después se concentró, la mezcla se diluyó con H2O, se ajustó el pH a 1-2 con HCl 1 N, se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio puro en bruto I-126a (110 mg, 75 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 439 calc. para C24H30N4O4: 438,2.
Preparación del intermedio I-127a: 4-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]-N45 tetrahidropiran-2-iloxi-ciclohexanocarboxamida
[0347] A una solución del intermedio I-126a (110 mg, 0,251 mmol) en DMF (10 ml) se le añadieron EDC.HCl (96 mg, 0,502 mmol), HOBt (68 mg, 0,502 mmol), THPO-NH2 (59 mg, 0,502 mmol), NMM (76 mg, 0,753 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. (EtOAc) para dar el intermedio puro I-127a (90 mg, rendimiento del 66 %) en forma de un aceite de color amarillo. ESI-MS (M+1): 538 calc. para C29H39N5O5: 537,3.
55 Preparación de los compuestos 1-75, 1-40 y 1-41: racémico, ácido cis y trans 4-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6Hpirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]ciclohexanocarbohidroxámico
[0348] Una solución del intermedio I-127a (98 mg, 0,182 mmol) en HCl/EtOAc (1,0 M, 15 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, después se concentró para dar un producto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto racémico 1-75 (14,5 mg), ESI-MS (M+1): 454,2 calc. para C24H31N5O4: 453,2 (Tr es 3,05); isómeros cis 1-40 (5,8 mg) ESI-MS (M+1): 454,2 calc. para C24H31N5O4: 453,2 (TR es 2,95) y los isómeros trans 1-41 (10 mg) ESI-MS (M+1): 454,2 calc. para C24H31N5O4: 453,2 (Tr es 3,05).
[0349] Siguiendo la misma ruta sintética para el compuesto 1-75 y usando los mismos reactivos a menos que 5 se indique otra cosa en la tabla a continuación, se obtuvieron los siguientes compuestos:
Ejemplo
Tr (min) [M+1]+ Método de HPLC Materiales de partida
1-51
3,09 468 1 2-[4-(trifluorometilsulfoniloxi)ciclohex-3-en-1-il]acetato de etilo (R27b)
10 [0350] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6), Q es NH o
donde Cy2 es un anillo heterocíclico, PG es un grupo protector, tal como boc, y A es una cadena hidrocarburo, que
15 opcionalmente contiene átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, y opcionalmente contiene uno o más anillos aromáticos, heteroaromáticos, carbocíclicos y/o heterocíclicos.
Preparación del intermedio I-128a: 8-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]-8azaespiro[4,5]decano-3-carboxilato de etilo
[0351] A una solución del intermedio I-13a (200 mg, 0,56 mmol), Cu(OAc)2 (217 mg, 1,2 mmol), Et3N (152 mg, 1,5 mmol) y un tamiz molecular de 4 A (800 mg) en CH2Cl2 anhidro (65 ml) se le añadió R-09j: 8azaespiro[4,5]decano-3-carboxilato de etilo (144 mg, 0,68 mmol) en condiciones de O2, después la mezcla se agitó a t.a. durante 3,5 h hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido
25 completamente, después la mezcla se extrajo con CH2Cl2, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. para dar el intermedio puro I-128a (135 mg, rendimiento del 26 %). ESI-MS (M+1): 522,1 calc. para C29H39N5O4: 521,3.
Preparación del intermedio I-129a: Ácido 8-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]-8azaespiro[4,5]decano-3-carboxílico
[0352] A una solución del intermedio I-128a (135 mg, 0,26 mmol) en MeOH/THF/H2O (3/9/3, 30 ml) se le
5 añadió LiOH.H2O (130 mg, 3 mmol), la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente. Después se concentró, la mezcla se diluyó con H2O, se ajustó el pH a 3-4 con HCl 1 N, se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio en bruto I-129a (120 mg, 93 %). ESI-MS (M+1): 494,2 calc. para C27H35N5O: 493,2.
Preparación del intermedio I-130a: 8-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]-Ntetrahidropiran-2-iloxi-8-azaespiro[4,5]decano-3-carboxamida
[0353] A una solución del intermedio I-129a (120 mg, 0,24 mmol) en DMF (20 ml) se le añadieron EDC.HCl
15 (93 mg, 0,48 mmol), HOBt (65 mg, 0,48 mmol), THPO-NH2 (56 mg, 0,48 mmol), NMM (62 mg, 0,6 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio en bruto I-130a (142 mg, ~100 %). ESI-MS (M+1): 593,2 calc. para C32H44N6O5: 592,3.
Preparación del compuesto 1-56: Ácido 8-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]-8azaespiro[4,5]decano-3-carbohidroxámico
[0354] Una solución del intermedio I-130a (142 mg, 0,24 mmol) en HCl/EtOAc (1 N, 25 ml) se agitó a
25 temperatura ambiente durante 1 h, después se concentró el compuesto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-56 (44,8 mg, rendimiento del 37 %). ESI-MS (M+1): 509,2 calc. para C27H36N6O4: 508,2; Tr es 1,86.
[0355] Siguiendo la misma ruta sintética para el compuesto 1-56 y usando los mismos reactivos a menos que se indique otra cosa en la tabla a continuación, se obtuvieron los siguientes compuestos:
Ejemplo
Tr (min) [M+1]+ Método de HPLC Materiales de partida
1-54
1,81 483,2 1 3-(4-piperidil)propanoato de etilo (R-09k)
1-65
2,82 523,3 1 2-azaespiro[5,5]undecano-9-carboxilato de metilo; clorhidrato (R09l)
1-67
2,41 467,4 1 5-azaespiro[2,4]heptano-2-carboxilato de etilo (R-09m)
Preparación del intermedio I-131a: 2-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil-2,8diazaespiro]4,51decano-8-carboxilato de terc-butilo
35 [0356] A una solución del intermedio I-13a (445 mg, 1,25 mmol) en DCM anhidro (50 ml) se le añadieron R29a: 2,8-diazaespiro[4,5]decano-8-carboxilato de terc-butilo (200 mg, 0,833 mmol), Cu(OAc)2 (181 mg, 1,0 mmol), DMAP (22 mg, 0,167 mmol), Et3N (337 mg, 3,332 mmol) y MS 4 A (0,8 g), después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 h en una atmósfera de O2. Después de que el análisis por LC-MS mostrase que el material de partida se había consumido completamente, se añadió agua, se filtró, la mezcla se extrajo con DCM, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por TLC prep. (PE/EtOAc = 1,5:1) para dar el intermedio puro I-131a (60 mg, rendimiento del 13 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 551 calc. para C30H42N6O4: 550,3.
45 Preparación del intermedio I-132a: 5-[5-(2,8-diazaespiro[4,5]decan-2-il)-2-etoxi-fenil]-1-metil-3-propil-6H-pirazolo[4,3d]pirimidin-7-ona
[0357] Una solución del intermedio I-131a (60 mg, 0,109 mmol) en HCl/EtOAc (2 M, 5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, y después se concentró para dar el intermedio puro en bruto I-132a (35 mg, 71 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 451 calc. para C25H34N6O2: 450,2.
Preparación del intermedio I-133a: 2-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]-Ntetrahidropiran-2-iloxi-2,8-diazaespiro[4,5]decano-8-carboxamida
55 [0358] THPO-NH2 (18 mg, 0,156 mmol) se disolvió en THF anhidro (5 ml) y se añadió gota a gota mediante una cánula a una solución enfriada de CDI (25 mg, 0,156 mmol) en THF anhidro (10 ml) en atmósfera de protección de N2 a 0 °C. Después de agitarse durante 30 min a temperatura ambiente, se añadió el intermedio I-132a (35 mg, 0,078 mmol) disuelto en THF anhidro (5 ml), después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente. La mezcla se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. (EtOAc) para dar el intermedio puro I-133a (30 mg, rendimiento del 65 %) en forma de un aceite de color amarillo. ESI-MS (M+1): 594 calc. para C31H43N7O5: 593,3.
Preparación del compuesto 1-57: Ácido 2-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]-2,8diazaespiro[4,5]decano-8-carbohidroxámico
[0359] Una solución del intermedio I-133a (30 mg, 0,051 mmol) en HCl/EtOAc (4 M, 5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, después se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-57 (3,8 mg, rendimiento del 14 %) en forma de un sólido de color rojo. ESI-MS (M+1): 510 calc. para C26H35N7O4: 509,2; Tr es 2,77.
[0360] Siguiendo la misma ruta sintética para el compuesto 1-57 y usando los mismos reactivos a menos que se indique otra cosa en la tabla a continuación, se obtuvieron los siguientes compuestos:
Ejemplo
Tr (min) [M+1]+ Método de HPLC Materiales de partida
1-58
2,90 510 1 2,7-diazaespiro[4,5]decano-7-carboxilato de terc-butilo (R-29b)
Preparación del intermedio I-128b: 2-[2-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]-2,8diazaespiro[4,5]decan-8-il]pirimidin-5-carboxilato de etilo
[0361] A una solución del intermedio I-132a (240 mg, 0,53 mmol) en acetonitrilo (60 ml) se le añadieron K2CO3 (194 mg, 1,4 mmol) y R-11 e: 2-cloropirimidin-5-carboxilato de etilo (120 mg, 0,64 mmol), después la mezcla se agitó a 60 °C durante una noche. Después de que el análisis por LC-MS mostrase que el material de partida se había consumido completamente, la mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. para dar el intermedio I-128b (130 mg, rendimiento del 41 %) ESI-MS (M+1): 601,2 calc. para C32H40N8O4: 600,3.
Preparación del intermedio I-129b: Ácido 2-[2-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]2,8-diazaespiro[4,5]decan-8-il]pirimidin-5-carboxílico
[0362] A una solución del intermedio I-128b (130 mg, 0,22 mmol) en MeOH/THF/H2O (3/9/3, 15 ml) se le añadió LiOH.H2O (95 mg, 2,2 mmol), la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente. Después se concentró, la mezcla se diluyó con H2O y se ajustó el pH a 3 con HCl 1 N, se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio en bruto I-129b (95 mg, 77 %). [0363] ESI-MS (M+1): 573,2 calc. para C30H36N8O4: 572,2.
Preparación del intermedio I-130b: 2-[2-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]-2,8diazaespiro[4,5]decan-8-il]-N-tetrahidropiran-2-iloxi-pirimidin-5-carboxamida
[0364] A una solución del intermedio I-129b (95 mg, 0,17 mmol) en DMF (30 ml) se le añadió EDC.HCl (68 mg, 0,35 mmol), HOBt (48 mg, 0,35 mmol), THPO-NH2 (41 mg, 0,35 mmol), NMM (61 mg, 0,6 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio I-130b (100 mg, 87 %). ESI-MS (M+1): 672,2 calc. para C35H45N9O5: 671,3.
Preparación del compuesto 1-69: Ácido 2-[2-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]2,8-diazaespiro[4,5]decan-8-il]pirimidin-5-carbohidroxámico
[0365] Una solución del intermedio I-130b (100 mg, 0,15 mmol) en HCl/EtOAc (1,0 N, 20 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 h, y después se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-69 (15,4 mg, 17 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 588,3 calc. para C30H37N9O4: 587,3; Tr es 3,03.
[0366] Siguiendo la misma ruta sintética para el compuesto 1-69 y usando los mismos reactivos a menos que se indique otra cosa en la tabla a continuación, se obtuvieron los siguientes compuestos: [0367] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6) y A es una cadena hidrocarburo, que opcionalmente contiene átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, y opcionalmente contiene uno o más anillos aromáticos, heteroaromáticos, carbocíclicos y/o heterocíclicos.
Ejemplo
Tr (min) [M+1]+ Método de HPLC Materiales de partida
1-70
3,20 588,3 1 2, 7-diazaespiro[4,5]decano-7-carboxilato de terc-butilo (R-29b)
Preparación del intermedio I-134a: 4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]-hidroximetil]benzoato de metilo
[0368] Se añadió n-BuLi (1,4 ml, 3,5 mmol) a una suspensión agitada del intermedio I-94a (850 mg, 1,95 mmol) en THF (60 ml) a -70 °C durante un periodo de 10 min en una atmósfera de nitrógeno. La solución resultante se agitó a -40 °C durante 1 h, y después se añadió R-30a: 4-formilbenzoato de metilo disponible en el mercado (534 mg, 3,0 mmol) en THF (10 ml) durante un periodo de 5 min en una atmósfera de nitrógeno. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 15 h. La reacción se interrumpió con NH4Cl ac. y después se extrajo con EtOAc. La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por columna para dar el intermedio puro I-134a (400 mg, rendimiento del 43 %). ESI-MS (M+1): 477,1 calc. para C26H28N4O5: 476,2.
Preparación del intermedio I-135a: 4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]-fluorometil]benzoato de metilo
[0369] A una solución del intermedio I-134a (400 mg, 0,84 mmol) en DCM (40 ml) se le añadió DAST (215 mg, 1,34 mmol) en atmósfera de N2 a 0 °C. Después, la mezcla de reacción se agitó a t.a. durante 12 h. El análisis por TLC o LCMS mostró que el material de partida se había consumido completamente. La reacción se interrumpió por NaHCO3 ac. y después se extrajo con DCM. La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por columna para dar el intermedio puro I-135a (295 mg, rendimiento del 73 %). ESI-MS (M+1): 479,1 calc. para C26H27FN4O4: 478,2.
Preparación del intermedio I-136a: Ácido 4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]metoxi-metil]benzoico
[0370] A una solución del intermedio I-135a (120 mg, 0,25 mmol) en THF/H2O (9/6, 15 ml) se le añadió LiOH.H2O (130 mg, 3 mmol), la mezcla de reacción se agitó a t.a. durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente. Después se concentró, la mezcla se diluyó con H2O, se ajustó el pH a 3-4 con HCl 1 N, se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio I-136a (110 mg, 92 %). ESI-MS (M+1): 477,2 calc. para C26H28N4O5: 476,2.
Preparación del intermedio I-137a: 4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]-metoximetil]-N-tetrahidropiran-2-iloxi-benzamida
[0371] A una solución del intermedio I-136a (110 mg, 0,23 mmol) en DMF (30 ml) se le añadieron EDC.HCl (97 mg, 0,5 mmol), HOBt (68 mg, 0,5 mmol), THPO-NH2 (59 mg, 0,5 mmol), NMM (101 mg, 1,0 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido por completo, después se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio en bruto I-137a (123 mg, 93 %). ESI-MS (M+1): 576,2 calc. para C31H37N5O6: 575,2.
Preparación de compounds 1-77: ácido 4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]metoxi-metil]bencenocarbo-hidroxámico y 1-78: Ácido 4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin5-il)fenil]-hidroxi-metil]bencenocarbo-hidroxámico
[0372] Una solución del intermedio I-137a (123 mg, 0,21 mmol) en HCl/EtOAc (1,0 M, 25 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 h, después se concentró para dar una mezcla en bruto de dos compuestos que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-77 (22,4 mg). ESI-MS (M+1): 492,2 calc. para C26H29N5O5: 491,2; Tr es 2,88, y el compuesto puro 1-78 (9,9 mg) ESI-MS (M+1): 478,2 calc. para C25H27N5O5: 477,2; Tr es 2,40.
SÍNTESIS DE SINGLETONES DE LOS INTERMEDIOS ANTERIORES
Preparación del intermedio I-138a: 4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)benzoato de etilo
[0373] A una solución del intermedio I-12a (350 mg, 0,897 mmol) en EtOH (30 ml) se le añadieron Et3N (227 mg, 2,243 mmol) y Pd(dppf)Cl2 (146 mg, 0,179 mmol) en una atmósfera de CO, después la mezcla se agitó a 80 °C durante una noche en una protección de CO hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se filtró, se concentró, la mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. (PE/EtOAc = 1:1) para dar el intermedio puro I-138a (254 mg, rendimiento del 73 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 385 calc. para C20H24N4O4: 384,2.
Preparación del intermedio I-139a: Ácido 4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)benzoico
[0374] A una solución del intermedio I-138a (254 mg, 0,661 mmol) en MeOH/THF/H2O (3/9/3, 15 ml) se le añadió LiOH.H2O (278 mg, 6,61 mmol), la mezcla de reacción se agitó a 40 °C durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente. Después se concentró, la mezcla se diluyó con H2O, se ajustó el pH a 1-2 con HCl 1 N, se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio en bruto I-139a (220 mg, 93 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 357 calc. para C18H20N4O4: 356,1.
Preparación del intermedio I-140a: 4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)-N-tetrahidropiran2-iloxi-benzamida
[0375] A una solución del intermedio I-139a (220 mg, 0,618 mmol) en DMF (10 ml) se añadieron EDC.HCl (237 mg, 1,236 mmol), HOBt (167 mg, 1,236 mmol), THPO-NH2 (145 mg, 1,236 mmol), NMM (187 mg, 1,854 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. (EtOAc) para dar el intermedio puro I-140a (140 mg, rendimiento del 49 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 456 calc. para C23H29N5O5: 455,21.
Preparación del compuesto 1-27: Ácido 4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)bencenocarbohidroxámico
[0376] Una solución del intermedio I-140a (140 mg, 0,308 mmol) en HCl/EtOAc (4 M, 5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, y después se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-27 (85 mg, rendimiento del 74 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 372 calc. para C18H21N5O4: 371,1; Tr es 2,25.
Preparación del intermedio I-141a: (E)-3-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]prop-2enoato de etilo
[0377] Una mezcla de intermedio I-94a (100 mg, 0,228 mmol), acrilato de etilo (71 mg, 0,71 mmol), POT (28 mg, 0,091 mmol) y Et3N (81 mg, 0,798 mmol) se calentó en un tubo pirex de pared gruesa a 100 °C durante una noche en atmósfera de protección de N2. Después de que el análisis por LC-MS mostrase que el material de partida se había consumido completamente, la mezcla se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por TLC prep. (EP/EtOAc = 1:1) para dar el intermedio puro I-141a (85 mg, rendimiento del 90 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 411 calc. para C22H26N4O4: 410,2.
Preparación del intermedio I-142a: 3-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]propanoato de etilo
[0378] A una solución del intermedio I-141a (85 mg, 0,207 mmol) en MeOH (10 ml) se le añadió Pd/C (30 mg) en una atmósfera de H2, después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se filtró, el filtrado se concentró para dar el intermedio en bruto I-142a (81 mg, 95 %) en forma de un sólido de color amarillo que se usó en la siguiente etapa directamente. ESI-MS (M+1): 413 calc. para C22H28N4O4: 412,2.
Preparación del intermedio I-143a: Ácido 3-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]propanoico
[0379] A una solución del intermedio I-142a (81 mg, 0,197 mmol) en MeOH/THF/H2O (3/9/3, 15 ml) se le añadió LiOH.H2O (83 mg, 1,97 mmol), la mezcla de reacción se agitó a 40 °C durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente. Después se concentró, la mezcla se diluyó con H2O, se ajustó el pH a 1-2 con HCl 1 N, se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el producto en bruto del intermedio I-143a (60 mg, 79 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 385 calc. para C20H24N4O4: 384,1.
Preparación del intermedio I-144a: 3-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]-Ntetrahidropiran-2-iloxi-propanamida
[0380] A una solución del intermedio I-143a (60 mg, 0,156 mmol) en DMF (10 ml) se le añadieron EDC.HCl (60 mg, 0,312 mmol), HOBt (42 mg, 0,312 mmol), THPO-NH2 (36 mg, 0,312 mmol), NMM (48 mg, 0,468 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. (EtOAc) para dar el intermedio puro I-144a (60 mg, rendimiento del 80 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 484 calc. para C25H33N5O5: 483,2.
Preparación del compuesto 1-31: Ácido 3-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]propanohidroxámico
[0381] Una solución del intermedio I-144a (60 mg, 0,124 mmol) en HCl/EtOAc (4 M, 5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, y después se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-31 (20 mg, rendimiento del 40 %) en forma de un sólido de color rojo. ESI-MS (M+1): 400 calc. para C20H25N5O4: 399,2; Tr es 2,44.
Preparación del intermedio I-145a: 3-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)anilino]propanoato de metilo
[0382] A una solución del intermedio I-99a (500 mg, 1,53 mmol) y 3,3-dimetoxipropanoato de metilo (274 mg,1,85 mmol) en CH2Cl2 (16 ml) en una atmósfera de nitrógeno se le añadieron TFA (8 ml) y trietilsilano (TES, 534 mg, 4,6 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente. Después se concentró, la mezcla se diluyó con H2O, se ajustó el pH a 7 con NaHCO3 ac., se extrajo con CH2Cl2, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio I-145a (620 mg, 98 %). ESI-MS (M+1): 414,2 calc. para C21H27N5O4: 413,2.
Preparación del intermedio I-146a: Ácido 3-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)anilino]propanoico
[0383] A una solución del intermedio I-145a (620 mg, 1,5 mmol) en THF/MeOH/H2O (3/3/2, 32 ml) se le añadió LiOH.H2O (645 mg, 10 equiv.). La mezcla resultante se agitó a t.a. durante 8 h, después de que el análisis por TLC (EP/AE, 5:1) mostrase que los materiales de partida se habían consumido completamente, entonces la mezcla se diluyó con agua y se ajustó el pH a 3~4 con HCl 1 N y la mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio en bruto I-146a (580 mg, 96 %) en forma de un aceite de color amarillo pálido que se usó directamente en la siguiente etapa. ESI-MS (M+1): 400,2; calc. para C20H25N5O4: 399,2.
Preparación del intermedio I-147a: 3-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)anilino]-Ntetrahidropiran-2-iloxi-propanamida
[0384] A una solución del intermedio I-146a (580 mg, 1,45 mmol) en DMF (40 ml) se le añadieron EDC.HCl (560 mg, 2,9 mmol), HOBt (392 mg, 2,9 mmol), THPO-NH2 (340 mg, 2,9 mmol), NMM (505 mg, 5,0 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por columna para dar el intermedio puro I-147a (630 mg, rendimiento del 87 %) en forma de un aceite de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 499,3 calc. para C25H34N6O5: 498,2.
Preparación del compuesto 1-33: Ácido 3-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)anilino]propanohidroxámico
[0385] Una solución del intermedio I-147a (300 mg, 0,6 mmol) en HCl/EtOAc (1,0 M, 40 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 4 h, y después se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-33 (41,2 mg, rendimiento del 16 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 415,1 calc. para C20H26N6O4: 414,2; Tr es 1,88.
Preparación del intermedio I-148a: 5-[5-(1,4-dioxa-8-azaespiro[4,5]decan-8-il)-2-etoxi-fenil]-1-metil-3-propil-6Hpirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona
[0386] A una solución del intermedio I-94a (1,7 g, 3,87 mmol) en tolueno (10 ml) se le añadieron Butok (7,74 ml, 1 M, 7,74 mmol), Pd2(dab)3 (355 mg, 0,387 mmol), 1,4-dioxa-8-azaespiro[4,5]decano (1,1 g, 7,74 mmol) y xphos (553 mg, 1,16 mmol). La solución se calentó a 120 °C durante 1 h por microondas. La mezcla se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por columna para dar el intermedio I-148a (1,4 g, 80 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 454,2 calc. para C24H31N5O4: 453,2.
Preparación del intermedio I-149a: 5-[2-etoxi-5-(4-oxo-1-piperidil)fenil]-1-metil-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7ona
[0387] Una solución del intermedio I-148a (1,4 g, 3,1 mmol) en HCl (6 N, 10 ml) se agitó a 70 °C durante una noche, después se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por la columna para obtener el intermedio puro I-149a (1,1 g, rendimiento del 85 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 410,2 calc. para C22H27N5O3: 409,2.
Preparación del intermedio I-150a: 2-[1-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]-4piperidilideno]acetato de etilo
[0388] A una solución de 2-dietoxifosforilacetato de metilo (279 mg, 1,34 mmol) en THF (20 ml) se le añadió NaH (54 mg, 1,34 mmol) a 0 °C. La solución de mezcla se agitó a 0 °C durante 1 h. Después, se añadió una solución del intermedio I-149a (500 mg, 1,22 mmol) en THF (5 ml) a 0 °C. La solución se agitó a ta durante una noche. La mezcla se inactivó con NH4Cl acuoso y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por la columna para dar el intermedio I150a (260 mg, rendimiento del 45 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 480,2; calc. para C26H33N5O4: 479,2.
Preparación del intermedio I-151a: 2-[1-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]-4piperidil]acetato de etilo
[0389] A una solución del intermedio I-150a (140 mg, 0,29 mmol) en MeOH (40 ml) se le añadió Pd/C (0,3 g) La solución se agitó a ta durante 3 h en una atmósfera de H2. La solución se filtró y el filtrado se concentró para dar el intermedio I-151a (100 mg, 71 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 482,2 calc. para C26H35N5O4: 481,2.
Preparación del intermedio I-152a: Ácido 2-[1-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]4-piperidil]acético
[0390] A una solución del intermedio I-151a (100 mg, 0,21 mmol) en THF/MeOH/H2O (3/3/2, 8 ml) se le añadió LiOH.H2O (88 mg, 10 equiv.). La mezcla resultante se agitó a t.a. durante 8 h, después de que el análisis por TLC mostrase que el material de partida se había consumido completamente, entonces la mezcla se diluyó con agua y se ajustó el pH a 6~7 con HCl 1 N y la mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para proporcionar el intermedio deseado I-152a (90 mg, 95 %). ESI-MS (M+1): 454,2; calc. para C24H31N5O4: 453,2.
Preparación del intermedio I-153a: 2-[1-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il]fenil]-4piperidil]-N-tetrahdropiran-2-iloxi-acetamida
[0391] A una solución del intermedio I-152a (90 mg, 0,2 mmol) en DMF (10 ml) se le añadieron EDC.HCl (77 mg, 0,4 mmol), HOBt (54 mg, 0,4 mmol), THPONH2 (47 mg, 0,4 mmol) y NMM (62 mg, 0,6 mmol) a ta, y después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. para dar el intermedio I-153a (70 mg, rendimiento del 64 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 553,3; calc. para C29H40N6O5: 552,3.
Preparación del compuesto 1-44: Ácido 2-[1-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolor[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]-4piperidil]etanohidroxámico
[0392] Una solución del intermedio I-153a (70 mg, 0,13 mmol) en HCl/EtOAc (10 ml) se agitó a ta durante 1 h, y después se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-44 (22,9 mg, rendimiento del 35 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 469,2 calc. para C24H32N6O4: 468,2; Tr es 2,01.
Preparación del intermedio I-154a: 4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]metil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo
[0393] A una solución del intermedio I-115a (400 mg, 1,176 mmol) en tolueno anhidro (20 ml) se le añadieron piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (325 mg, 1,764 mmol), Ti(Oi-Pr)4 (413 mg, 1,764 mmol), después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 h en atmósfera de protección de N2, y se añadió Na(AcO)3BH (499 mg, 2,352 mmol), la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche, la mezcla se extrajo con EtOAc tres veces, la capa orgánica se lavó con salmuera acuosa, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por TLC prep. ( PE/EtOAc = 1:1,5) para dar el intermedio puro I-154a (450 mg, rendimiento del 75 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 511 calc. para C27H38N6O4: 510,2.
Preparación del intermedio I-155a: 5-[2-etoxi-5-(piperazin-1-ilmetil)fenil]-1-metil-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7ona
[0394] Una solución del intermedio I-154a (450 mg, 0,882 mmol) en HCl/EtOAc (4 M, 10 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, y después se concentró para dar el intermedio en bruto I-155a (340 mg, 93 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 411 calc. para C22H30N6O2: 410,2.
Preparación del intermedio I-156a: 2-[4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propl-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]metil]piperazin-1-il]pirimidin-5-carboxilato de etilo
[0395] A una solución del intermedio I-155a (170 mg, 0,307 mmol) en acetonitrilo (20 ml) se le añadieron K2CO3 (85 mg, 0,614 mmol) y R-11 e: 2-cloropirimidin-5-carboxilato de etilo (57 mg, 0,307 mmol), después la mezcla se agitó a 60 °C durante una noche. La mezcla se extrajo con EtOAc y se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. (PE/EtOAc = 1:1,5) para dar el intermedio puro I-156a (150 mg, 87 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 561 calc. para C29H36N8O4: 560,2.
Preparación del intermedio I-157a: Ácido 2-[4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]metil]piperazin-1-il]pirimidin-5-carboxílico
[0396] A una solución del intermedio I-156a (150 mg, 0,268 mmol) en MeOH[THF/H2O (3/9/3, 15 ml) se le añadió LiOH.H2O (112 mg, 2,68 mmol), la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente. Después se concentró, la mezcla se diluyó con H2O, se ajustó el pH a 1-2 con HCl 1 N, se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio en bruto I-157a (130 mg, 90,91 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 533 calc. para C27H32N8O4: 532,2.
Preparación del intermedio I-158a: 2-[4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]metil]piperazin-1-il]-N-tetrahidropiran-2-iloxi-pirimidin-5-carboxamida
mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche, después se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. (EtOAc) para dar el intermedio puro I-158a (120 mg, rendimiento del 78 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 632 calc. para C32H41N9O5: 631,3.
Preparación del compuesto 1-48: Ácido 2-[4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]metil]piperazin-1-il]pirimidin-5-carbohidroxámico
[0398] Una solución del intermedio I-158a (120 mg, 0,190 mmol) en HCl/EtOAc (4 M, 5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, y después se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-48 (26,2 mg, 25 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 548 calc. para C27H33N9O4: 547,2; Tr es 1,88.
Preparación del intermedio I-159a: 4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]metil]-Ntetrahidropiran-2-iloxi-piperazin-1-carboxamida
[0399] THPO-NH2 (146 mg, 1,248 mmol) se disolvió en THF anhidro (10 ml) y se añadió gota a gota mediante una cánula a una solución enfriada de CDI (202 mg, 1,248 mmol) en THF anhidro (20 ml) en atmósfera de protección de N2 a 0 °C. Después de agitarse durante 30 min a temperatura ambiente, se añadió el intermedio I155a (170 mg, 0,415 mmol) disuelto en THF anhidro (10 ml), después la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. (EtOAc) para dar el intermedio puro I-159a (150 mg, rendimiento del 65 %) en forma de un aceite de color amarillo. ESI-MS (M+1): 554 calc. para C28H39N7O5: 553,3.
Preparación del compuesto 1-50: Ácido 4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo(4,3-d]pirimidin-5il)fenil]metil]piperazin-1-carbohidroxámico
[0400] Una solución del intermedio I-159a (150 mg, 0,271 mmol) en HCl/EtOAc (4 M, 5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, y después se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-50 (43,4 mg, rendimiento del 34 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 470 calc. para C23H31N7O4: 469,2; Tr es 1,97.
Preparación del intermedio I-160a: 4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo(4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]metil]-Ntetrahidropiran-2-iloxi-piperidin-1-carboxamida
[0401] Se disolvió THPO-NH2 (57 mg, 0,487 mmol) se disolvió en THF anhidro (10 ml) y se añadió gota a gota mediante una cánula a una solución enfriada de CDI (79 mg, 0,487 mmol) en THF anhidro (20 ml) en atmósfera de protección de N2 a 0 °C. Después de agitarse durante 30 min a temperatura ambiente, se añadió el intermedio I107a (100 mg, 0,244 mmol) disuelto en THF anhidro (10 ml), después la mezcla se agitó a temperatura ambiente. La mezcla se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. (EtOAc) para dar el intermedio puro I-160a (105 mg, rendimiento del 77 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 553 calc. para C29H40N6O5: 552,3.
Preparación del compuesto 1-49: Ácido 4-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]metil]piperidin-1-carbohidroxámico
[0402] Una solución del intermedio I-160a (105 mg, 0,190 mmol) en HCl/EtOAc (4 M, 5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, después se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-49 (19,1 mg, 21 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 469 calc. para C24H32N6O4: 468,2; Tr es 2,99.
Preparación del intermedio I-161a: 2-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]acetato de etilo
[0403] A una solución del intermedio I-12a (500 mg, 1,282 mmol), Pd2(dba)3 (118 mg, 0,128 mmol), X-Phos (147 mg, 0,256 mmol) en THF anhidro (30 ml) se le añadió R-31 a: bromo-(2-etoxi-2-oxo-etil)cinc (20 ml, exceso) en atmósfera de protección de N2, después la mezcla se agitó a 80 °C durante una noche en atmósfera de protección de N2 hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después la mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. (PE/EtOAc = 1:1) para dar el intermedio puro I-161a (270 mg, rendimiento del 52 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 399 calc. para C21H26N4O4: 398,2.
Preparación del intermedio I-162a: Ácido 2-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]acético
[0404] A una solución del intermedio I-161a (270 mg, 0,678 mmol) en MeOH[THF/H2O (3/9/3, 15 ml) se le añadió LiOH.H2O (285 mg, 6,78 mmol), la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Después se concentró, la mezcla se diluyó con H2O, se ajustó el pH a 1-2 con HCl 1 N, se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio en bruto I-162a (230 mg, 91 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS(M+1): 371 calc. para C19H22N4O4: 370,1.
Preparación del intermedio I-163a: 2-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]-Ntetrahidropiran-2-iloxi-acetamida
[0405] A una solución del intermedio I-162a (115 mg, 0,311 mmol) en DMF (10 ml) se le añadieron EDC.HCl (119 mg, 0,622 mmol), HOBt (84 mg, 0,622 mmol), THPO-NH2 (73 mg, 0,622 mmol), NMM (94 mg, 0,933 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. (EtOAc) para dar el intermedio puro I-163a (116 mg, rendimiento del 79 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 470 calc. para C24H31N5O5: 469,2.
Preparación del compuesto 1-52: Ácido 2-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]etanohidroxámico
[0406] Una solución del intermedio I-163a (116 mg, 0,247 mmol) en HCl/EtOAc (4 M, 5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, después se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-52 (12,2 mg, 13 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 386 calc. para C19H23N5O4: 385,2; Tr es 2,32.
Preparación del intermedio I-164a: 5-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)benzoil]tiofeno2-carboxilato de metilo
[0407] A una solución del intermedio I-13a (1,25 g, 3,5 mmol) en anisol (40 ml) se le añadieron 5bromotiofeno-2-carboxilato de metilo (R-11z) (655 mg, 4,2 mmol), Pd(dppf)Cl2 (146 mg, 0,2 mmol), K2CO3 (1,52 g, 11 mmol) y KI (1,83 g, 11 mmol). La solución se realizó a 85 °C en una atmósfera de CO (1 atm) durante 3 días. Después, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se añadió agua, se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por columna para dar el intermedio puro I-164a (260 mg, rendimiento del 15 %). ESI-MS (M+1): 481,1 calc. para C24H24N4O5S: 480,1.
Preparación del intermedio I-165a: Ácido 5-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)benzoil]tiofeno-2-carboxílico
[0408] A una solución del intermedio I-164a (100 mg, 0,21 mmol) en MeOH/THF/H2O (3/9/3, 15 ml) se le añadió LiOH.H2O (130 mg, 3 mmol), la mezcla de reacción se agitó a t.a. durante una noche. Después se concentró, la mezcla se diluyó con H2O, se ajustó el pH a 3-4 con HCl 1 N, se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio en bruto I-165a (83 mg,85 %). ESI-MS (M+1): 467,1 calc. para C23H22N4O5S: 466,1.
Preparación del intermedio I-166a: 5-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)benzoil]-Ntetrahidropiran-2-iloxi-tiofeno-2-carboxamida
[0409] A una solución del intermedio I-165a (83 mg, 0,18 mmol) en DMF (30 ml) se le añadieron EDC.HCl (78 mg, 0,4 mmol), HOBt (55 mg, 0,4 mmol), THPO-NH2 (47 mg, 0,4 mmol), NMM (101 mg, 1,0 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio en bruto I-166a (95 mg, 93 %).
[0410] ESI-MS (M+1): 566,2 calc. para C28H31N5O6S: 565,2.
Preparación del compuesto 1-79: Ácido 5-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)benzoil]tiofeno-2-carbohidroxámico
[0411] Una solución del intermedio I-166a (95 mg, 0,168 mmol) en HCl/EtOAc (1,0 M, 20 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 h, y después se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-79 (48,9 mg, rendimiento del 60 %). ESI-MS (M+1):482,1 calc. para C23H23N5O5S: 481,1; Tr es 2,52.
Preparación del intermedio I-167a: 3-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]hidroxiciclobutanocarboxilato de terc-butilo
[0412] Se añadió n-BuLi (2,6 ml, 6,5 mmol) a una suspensión agitada del intermedio I-94a (2,63 g, 6,0 mmol) en THF (60 ml) a -70 ºC durante un periodo de 5 min en una atmósfera de nitrógeno. La solución resultante se agitó a -40 ºC durante 1 h, y después se añadió R-28b: 3-oxociclobutanocarboxilato de terc-butilo (1,1 g, 6,5 mmol) en THF (10 ml) durante un periodo de 5 min en una atmósfera de nitrógeno. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 15 h. La reacción se interrumpió con NH4Cl ac. y después se extrajo con EtOAc. La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por columna para dar el intermedio puro I-167a (830 mg, rendimiento del 26 %). ESI-MS (M+1): 483,2 calc. para C26H34N4O5: 482,2.
Preparación del intermedio I-168a: Ácido 3-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]ciclobutanocarboxílico
[0413] A una solución del intermedio I-167a (700 mg, 1,45 mmol) en TFA (8 ml) se le añadió gota a gota una solución de TESH (8 ml) en DCM (8 ml) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 h más. El análisis por LCMS mostró que el material de partida no había consumido completamente. La reacción se interrumpió lentamente por NaHCO3 ac. y después se extrajo con DCM (50 ml). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada (60 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para dar el intermedio en bruto I-168a (512 mg, 86 %). ESI-MS (M+1): 411,1 calc. para C22H26N4O4: 410,2.
Preparación del compuesto 1-82: (racémico) ácido 3-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]ciclobutanocarbohidroxámico
[0414] A una solución del intermedio I-168a (512 mg, 1,25 mmol) en DMF (40 ml) se le añadieron BOP (995 mg, 2,25 mmol), DIEA (413 mg, 3,2 mmol) y NH2OH HCl (152 mg, 2,2 mmol). La mezcla se agitó a 80 ºC durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto 1-82 en forma de una mezcla racémica (320 mg), rendimiento del 60 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 426,2 calc. para C22H27N5O4: 425,2. Tr es 2,61.
Preparación de compound 1-84 y 1-85: ácido cis y trans 3-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3d]pirimidin-5-il)fenil]ciclobutanocarbo-hidroxámico
[0415] Los isómeros cis y trans correspondientes se separaron de la mezcla racémica 1-82 por SFC para obtener los isómeros cis 1-84 (57,6 mg): ESI-MS (M+1): 426,2 calc. para C22H27N5O4: 425,2 (Tr es 2,48) y los isómeros trans 1-85 (49,7 mg): ESI-MS (M+1): 426,2 calc. para C22H27N5O4: 425,2 (Tr es 2,43).
Preparación del intermedio I-183a: 2-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]hidroximetil]ciclolprolpanocarboxilato de etilo
[0416] Se añadió n-BuLi (1,1 ml, 2,7 mmol) a una suspensión agitada del intermedio I-94a (1,1 g, 2,5 mmol) en THF (40 ml) a -70 ºC durante un periodo de 10 min en una atmósfera de nitrógeno. La solución resultante se agitó a -40 ºC durante 1 h, y después se añadió el reactivo (1S,2S)-2-formilciclopropanocarboxilato de etilo (R-30d) (375 mg, 2,64 mmol, CAS: 20417-61-2, predominantemente trans, adquirido en Aldrich) en THF (10 ml) durante un periodo de 5 min en una atmósfera de nitrógeno. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 15
h. La reacción se interrumpió con NH4Cl ac. y después se extrajo con EtOAc. La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por columna para dar el intermedio puro I-183a (210 mg, rendimiento del 18 %). ESI-MS (M+1): 455,1 calc. para C24H30N4O5: 454,2.
Preparación del intermedio I-184a: 2-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]metil]ciclopropanocarboxilato de etilo
[0417] A una solución del intermedio I-183a (210 mg, 0,46 mmol) en TFA (8 ml) se le añadió gota a gota una solución de TESH (8 ml) en DCM (8 ml) a -0 ºC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 h más. La reacción se interrumpió lentamente por NaHCO3 ac. y después se extrajo con DCM (50 ml). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada (60 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para dar el intermedio en bruto I-184a (135 mg, 67 %). ESI-MS (M+1): 439,1 calc. para C24H30N4O4: 438,2.
Preparación del intermedio I-185a: Ácido 2-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]metil]ciclopropanocarboxílico
[0418] A una solución del intermedio I-184a (135 mg, 0,31 mmol) en MeOH/THF/H2O (3/9/3, 15 ml) se le añadió LiOH.H2O (130 mg, 3 mmol), la mezcla de reacción se agitó a t.a. durante una noche. Después se concentró, la mezcla se diluyó con H2O, se ajustó el pH a 3-4 con HCl 1 N, se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el intermedio I-185a (125 mg, 98 %). ESI-MS (M+1): 411,1 calc. para C22H26N4O4: 410,2.
Preparación del intermedio I-186a: 2-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)fenil]metil]-Ntetrahidropiran-2-iloxi-ciclopropanocarboxamida
[0419] A una solución del intermedio I-185a (125 mg, 0,3 mmol) en DMF (20 ml) se le añadieron EDC.HCl (97 mg, 0,5 mmol), HOBt (68 mg, 0,5 mmol), THPO-NH2 (59 mg, 0,5 mmol), NMM (101 mg, 1,0 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche, después se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio en bruto I186a (93 mg, 61 %). ESI-MS (M+1): 510,2 calc. para C27H35N5O5: 509,2.
Preparación del compuesto 1-86: Ácido 2-[[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)fenil]metil]ciclopropanocarbohidroxámico
[0420] Una solución del intermedio I-186a (93 mg, 0,183 mmol) en HCl/EtOAc (1,0 M, 20 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 h, y después se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-86 (32,2 mg, rendimiento del 41 %). ESI-MS (M+1): 426,2. calc. para C22H27N5O4: 425,2; Tr es 2,71.
Preparación del intermedio I-187a: 4-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)anilino]-Ntetrahidropiran-2-iloxi-piperidin-1-carboxamida
[0421] Se disolvió THPO-NH2 (34,2 mg, 0,293 mmol) en THF anhidro (5 ml) y se añadió gota a gota mediante una cánula a una solución enfriada de CDI (47,7 mg, 0,293 mmol) en THF anhidro (10 ml) en atmósfera de protección de N2 a 0 ºC. Después de agitarse durante 30 min a temperatura ambiente, se añadió el intermedio I101a (100 mg, 0,244 mmol) disuelto en THF anhidro (5 ml), y después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. (EtOAc) para dar el intermedio puro I-187a (100 mg, rendimiento del 73 %) en forma de un aceite de color amarillo. ESI-MS (M+1): 554 calc. para C28H39N7O5: 553,3.
Preparación del compuesto 1-64: Ácido 4-[4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5il)anilino]piperidin-1-carbohidroxámico
[0422] Una solución del intermedio I-187a (100 mg, 0,18 mmol) en HCl/EtOAc (4 M, 5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, y después se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 1-64 (28 mg, rendimiento del 33 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 470,2 calc. para C23H31N7O4: 469,2; Tr es 1,96.
[0423] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6), X es halógeno, A es un anillo monocíclico heterocíclico opcionalmente sustituido de 3 a 7 miembros.
5 Preparación del intermedio I-24a: 2-Etoxibenzamidina
[0424] A una solución de 2-etoxibenzonitrilo (2, 10 g, 68 mmol) en tolueno (150 ml) se le añadió AlCH3ClNH2 (1 equiv.). La metilcloroaluminio amida se preparó nuevamente, in-situ; se disolvió NH4Cl (0,535 g, 10 mmol) en tolueno seco (10 ml) a 0 °C y se añadió trimetilaluminio (2 M en tolueno, 5,0 ml, 10 mmol) y la reacción se calentó a
10 t.a. y se agitó durante 1 hora para dar AlCH3ClNH2, que se usó directamente. La mezcla se agitó a 80 °C durante 6 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío para dar I-24a en bruto (8,42 g, rendimiento del 75,4 %). ESI-MS (M+1): 165 calc. para C9H12N2O: 164,2.
Preparación del intermedio I-26a: Ácido 2-acetamidopentanoico
15 [0425] Se añadió gota a gota cloruro de butirilo (R-20a, 9,6 g, 90 mmol) a una solución de D,L-alanina (3, 6,68 g, 75 mmol) en hidróxido sódico acuoso (7,2 g, 180 mmol) de aproximadamente 5 °C a 10 °C. La mezcla se agitó durante una noche a t.a. La mezcla de reacción se extrajo con DCM que se recuperó para obtener I-26a en bruto en forma de un residuo oleoso (7,65 g, rendimiento del 64 %). ESI-MS (M+1): 160 calc. para C7H13NO3: 159,2.
Preparación del intermedio I-27a: 3-Acetamido-2-oxohexanoato de etilo
[0426] Se añadió gota a gota cloruro de etoxalilo (R-12, 8,6 g, 63,0 mmol, 2 equiv.) con agitación a una solución de I-26a (5 g, 31,4 mmol), piridina (5,15 g, 66 mmol, 2,1 equiv.), y DMAP (0,125 g, 1 mmol) en THF (200 5 ml). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 4 horas, se enfrió, se diluyó con agua (100 ml) y se extrajo con AE. Se recuperó acetato de etilo para obtener material oleoso. Este producto en bruto se disolvió en etanol (100 ml) y se añadió bicarbonato sódico (1,58 g, 18,8 mmol). Los contenidos se calentaron a reflujo durante 4 horas, se enfriaron y el bicarbonato sódico se eliminó por filtración. La mezcla se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna con hexano:AE (3:1) para obtener I-27a (2,1 g, rendimiento del 31 %). ESI
10 MS (M+1): 216 calc. para C10H17NO4: 215,2.
Preparación del intermedio I-28a: N-(1-(3-(2-etoxifenil)-4,5-dihidro-5-oxo-1,2,4-triazin-6-il)etil)butanamida
[0427] A una solución de I-24a (1,11 g, 6,8 mmol) en etanol (15 ml) se le añadió una solución de hidrazina
15 hidrato (0,345 g, 6,8 mmol) en etanol (5 ml) durante aproximadamente de 10 a 15 minutos. La mezcla de reacción se agitó a t.a. durante 10 minutos. Se añadió MgSO4 (1 g) y la mezcla de reacción, donde el intermedio I-25 se generó y se reaccionó sin aislamiento, se calentó a reflujo. Después, una solución de I-27a (1,48 g, 6,8 mmol) en etanol (10 ml) se añadió en aproximadamente 15 minutos. La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 3 horas. La mezcla se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna para obtener el
20 compuesto I-28a (638 mg, rendimiento del 28,4 %). ESI-MS (M+1): 331 calc. para C17H22N4O3: 330,4.
Preparación del intermedio I-29a: 2-(2-Etoxifenil)-5-metil-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-4-ona
[0428] A una solución de I-28a (456 mg, 1,38 mmol) en 1,2-dicloroetano (10 ml) se le añadió POCl3 (1,67 g,
25 11 mmol, 8 equiv.). La reacción se calentó a reflujo durante 2 horas. La mezcla de reacción se enfrió a t.a., se diluyó en DCM (20 ml) y se neutralizó añadiendo una solución acuosa de hidróxido sódico. La mezcla de reacción se extrajo y se concentró al vacío para dar el compuesto del producto en bruto I-29a (169 mg, rendimiento del 39,2 %). ESI-MS (M+1): 313 calc. para C17H20N4O2: 312,4.
30 Preparación del intermedio I-30a: Cloruro de 4-etoxi-3-(5-metil-4-oxo-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-2il)bencenosulfonilo.
[0429] Se obtuvo I-30a partiendo de I-29a de una manera análoga a I-10a. Rendimiento del 80 %. ESI-MS (M+1): 411 calc. para C17H19ClN4O4S: 410,08.
35 Preparación del intermedio I-31a: 2-(2-Etoxi-5-piperazin-1-ilsulfonilfenil)-5-metil-7-propil-3H-imidazo[5,1f][1,2,4]triazin-4-ona
[0430] Se obtuvo I-31 a partiendo de I-30a de una manera análoga a I-11a. Rendimiento del 82,6 %. ESI-MS 40 (M+1): 461 calc. para C21H28N6O4S: 460,2.
[0431] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6), Q es NH o
donde Cy2 es un anillo heterocíclico, y A es una cadena hidrocarburo, que opcionalmente contiene átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, y opcionalmente contiene uno o más anillos aromáticos, heteroaromáticos, 5 carbocíclicos y/o heterocíclicos.
Preparación del intermedio I-35a: (E)-3-[4-[[4-[4-Etoxi-3-(5-metil-4-oxo-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-2il)fenil]sulfonilpiperazin-1-il]metil]fenil]prop-2-enoato de etilo
10 [0432] Se obtuvo I-35a partiendo de I-30a de una manera análoga a I-15a, pero usando 3-(4-((piperazin-1il)metil)fenil)-prop-2-enoato de (E)-etilo (R-09c) en lugar de 2-(piperazin-1-il)pirimidin-5-carboxilato de etilo (R-09a). Rendimiento del 87 %. ESI-MS (M+1): 649 calc. para C33H40N6O6S: 648,3.
Preparación del intermedio I-36a: Ácido (E)-3-[4-[[4-[4-Etoxi-3-(5-metil-4-oxo-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin15 2-il)fenil]sulfonilpiperazin-1-il]metil]fenil]prop-2-enoico
[0433] Se obtuvo I-36a partiendo de I-35a de una manera análoga a I-16a. Rendimiento del 60,1 %. ESI-MS (M+1): 621 calc. para C31H36N6O6S: 620,2.
20 Preparación del intermedio I-37a: (E)-3-[4-[[4-[4-etoxi-3-(5-metil-4-oxo-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-2il)fenil]sulfonilpiperazin-1-il]metil]fenil]-N-tetrahidropiran-2-iloxi-prop-2-enamida
[0434] Se obtuvo I-37a partiendo de I-36a de una manera análoga a I-17a. Rendimiento del 45 %. ESI-MS (M+1): 720 calc. para C36H45N7O7S: 719,3.
25 Preparación del compuesto 2-01: Ácido (E)-3-[4-[[4-[4-Etoxi-3-(5-metil-4-oxo-7-propil-3H-imidazo[5,1-f]1,2,4]triazin-2il)fenil]sulfonilpiperazin-1-il]metil]fenil]prop-2-enohidroxámico
[0435] El compuesto 2-01 se obtuvo partiendo de I-37a de una manera análoga al compuesto 1-06. 30 Rendimiento del 24 %. ESI-MS (M+1): 636 calc. para C31H37N7O6S: 635,2
[0436] Siguiendo la misma ruta sintética para el compuesto 2-01 y usando los mismos reactivos a menos que se indique otra cosa en la tabla a continuación, se obtuvieron los siguientes compuestos:
Ejemplo
Tr (min) [M+1]+ Método de HPLC Materiales de partida
2-03
2,04 553,1 1 3-(4-Aminofenil)prop-2-enoato de (E)-etilo (R-09d)
2-05
1,92 598,1 1 2-(piperazin-1-il)pirimidin-5-carboxilato de etilo (R-09a)
2-09
2,10 463,1 1 2-(metilamino)acetato de etilo (R-09n)
[0437] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6), X es un grupo saliente, tal como halógeno, y A es una cadena hidrocarburo, que opcionalmente contiene átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, y opcionalmente contiene uno o más anillos aromáticos, heteroaromáticos, carbocíclicos y/o heterocíclicos.
5 Preparación del intermedio I-38a: 4-[4-[4-etoxi-3-(5-metil-4-oxo-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-2il)fenil]sulfonilpiperazin-1-il]butanoato de etilo
[0438] Se obtuvo I-38a partiendo de I-31a de una manera análoga a I-18a, pero usando 4-bromobutanoato de etilo (R-11 b) en lugar de 3-bromopropionato de etilo (R-11a). Rendimiento del 62,89 %, ESI-MS (M+1): 575 calc. 10 para C27H38N6O6S: 574,26
Preparación del intermedio I-39a: Ácido 4-[4-[4-etoxi-3-(5-metil-4-oxo-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-2il)fenil]sulfonilpiperazin-1-il]butanoico
15 [0439] Se obtuvo I-39a partiendo de I-38a de una manera análoga a I-19a. Rendimiento del 70,2 %. ESI-MS (M+1): 547 calc. para C25H34N6O6S: 546,23.
Preparación del intermedio I-40a: 4-[4-[4-etoxi-3-(5-metil-4-oxo-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-2il)fenil]sulfonilpiperazin-1-il]-N-tetrahidropiran-2-iloxi-butanamida
20 [0440] Se obtuvo I-40a partiendo de I-39a de una manera análoga a I-20a. Rendimiento del 83,3 %. ESI-MS (M+1): 646 calc. para C30H43N7O7S:645,29.
Preparación del compuesto 2-02: Ácido 4-[4-[4-etoxi-3-(5-metil-4-oxo-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-225 il)fenil]sulfonilpiperazin-1-il]butanohidroxámico
[0441] El compuesto 2-02 se obtuvo partiendo de I-40a de una manera análoga al compuesto 1-04. Rendimiento del 35 %. ESI-MS (M+1): 562,1 (Método de HPLC: 1) calc. para C25H35N7O6S: 561,24.
[0442] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6), X es un halógeno y A es una cadena hidrocarburo, que opcionalmente contiene átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, y opcionalmente contiene uno o más anillos aromáticos, heteroaromáticos, carbocíclicos y/o heterocíclicos.
35 Preparación del intermedio I-33a: 2-[2-etoxi-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil]-5-metil-7-propil-3Himidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-4-ona
[0443] A una solución del intermedio I-172a (5,5 g, 12,56 mmol), 101-3 (3,84 g, 15,12 mmol), Pd(dppf)Cl2
40 (2,6 g, 3,77 mmol) y KOAc (3,69 g, 37,7 mmol) en dioxano (30 ml) se agitó a 90 ºC durante una noche. La mezcla se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por la columna para dar el intermedio I-33a (3,5 g, rendimiento del 64 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 439,1; calc. para C23H31BN4O4: 438,2.
45 Preparación del intermedio I-169a: 4-[[4-etoxi-3-(5-metil-4-oxo-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-2il)fenil]metil]benzoato de metilo
[0444] A una solución del intermedio I-33a (300 mg, 0,685 mmol), R-11j: 4-(bromometil)benzoato de metilo
5 (172 mg, 0,75 mmol), Pd(PPh3)4 (79 mg, 0,0685 mmol) y K2CO3 (284 mg, 2,06 mmol) en dioxano/H2O (5/2 ml) se agitó a 85 ºC durante 1 h en MO. La mezcla se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por la columna para dar el intermedio I-169a (100 mg, rendimiento del 32 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 461,2; calc. para C26H28N4O4: 460,2.
10 Preparación del intermedio I-170a: Ácido 4-[[4-etoxi-3-(5-metil-4-oxo-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-2il)fenil]metil]benzoico
[0445] A una solución del intermedio I-169a (100 mg, 0,22 mmol) en THF/MeOH/H2O (3/3/2, 8 ml) se le
15 añadió LiOH.H2O (84 mg, 10 equiv.). La mezcla resultante se agitó a t.a. durante 8 h. Después, la mezcla se diluyó con agua y se ajustó el pH a 6~7 con HCl 1 N y la mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para proporcionar el intermedio deseado I-170a (80 mg, 82 %). ESI-MS (M+1): 447,2; calc. para C25H26N4O4: 446,2.
20 Preparación del intermedio I-171a: 4-[[4-etoxi-3-(5-metil-4-oxo-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-2-il)fenil]metil]N-tetrahidropiran-2-iloxi-benzamida
[0446] A una solución del intermedio I-170a (80 mg, 0,18 mmol) en DMF (10 ml) se le añadieron EDC.HCl (69 mg, 0,36 mmol), HOBt (49 mg, 0,36 mmol), THPONH2 (39 mg, 0,36 mmol) y NMM (55 mg, 0,54 mmol) a ta, y
25 después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. para dar el intermedio I-171a (50 mg, rendimiento del 50 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 546,2; calc. para C30H35N5O5: 545,2. Preparación del compuesto 2-06: Ácido 4-[[4-etoxi-3-(5-metil-4-oxo-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-2
30 il)fenil]metil]bencenocarbohidroxámico
[0447] Una solución del intermedio I-171a (50 mg, 0,09 mmol) en HCl/EtOAc (10 ml) se agitó a ta durante 1 h, después se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 2-06 (2,1 mg, rendimiento del 5 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS
35 (M+1): 462,2 calc. para C25H27N5O4: 461,2; Tr es 2,31.
[0448] Siguiendo la misma ruta sintética para el compuesto 2-06 y usando los mismos reactivos a menos que se indique otra cosa en la tabla a continuación, se obtuvieron los siguientes compuestos: [0449] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6) y A es una cadena hidrocarburo, que opcionalmente contiene átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, y opcionalmente contiene uno o más anillos aromáticos, heteroaromáticos, carbocíclicos y/o heterocíclicos.
Ejemplo
Tr (min) [M+1]+ Método de HPLC Materiales de partida
2-08
2,49 488,2 1 (E)-3-[4-(bromometil)fenil]prop-2-enoato de metilo (R-11r)
2-10
2,34 468,1 1 5-(bromometil)tiofeno-2-carboxilato de etilo (R-11k)
2-11
2,25 448,1 1 4-yodobenzoato de etilo (R-11o)
Preparación del intermedio I-172a: 2-(2-etoxi-5-yodo-fenil)-5-metil-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-4-ona
[0450] A una solución del intermedio I-29a (5 g, 16 mmol) en TFA (50 ml) se le añadió NIS (4,3 g, 19,2 mmol) a 0 ºC. La solución de mezcla se agitó a ta durante una noche. La mezcla se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por la columna para dar el intermedio I-172a (5 g, 79 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 439,1; calc. para C17H19IN4O2: 438,0.
Preparación del intermedio I-173a: 3-[[4-etoxi-3-(5-metil-4-oxo-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-2il)fenil]metil]ciclobutanocarboxilato de etilo
[0451] El reactivo 3-metilenociclobutanocarboxilato de etilo R-23a (200 mg, 1,43 mmol) se trató con una solución 0,5 M de 9-BBN en THF (10 ml), y la mezcla se calentó a reflujo durante 4 h. La mezcla resultante se transfirió en una mezcla agitada del intermedio I-172a (0,6 g, 1,37 mmol), Pd2(dba)3 (120 mg, 0,14 mmol), X-Phos (66 mg, 0,14 mmol), y Na2CO3 (454 mg, 4,2 mmol) en 1, 4-dioxano (20 ml) y H2O (4 ml). La mezcla resultante se agitó a la temperatura de reflujo durante una noche. Después se filtró, la mezcla se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por cromatografía en columna (eluyendo con PE/EtOAc = 50:1 a 5:1) para dar el intermedio puro I-173a (200 mg, rendimiento del 33 %) en forma de un aceite de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 453,2 calc. para C25H32N4O4: 452,2.
Preparación del intermedio I-174a: Ácido 3-[[4-etoxi-3-(5-metil-4-oxo-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-2il)fenil]metil]ciclobutanocarboxílico
[0452] A una solución del intermedio I-173a (200 mg, 0,44 mmol) en THF/MeOH/H2O (3/3/2, 16 ml) se le añadió LiOH.H2O (168 mg, 10 equiv.). La mezcla resultante se agitó a t.a. durante 8 h, después de que el análisis por TLC mostrase que el material de partida se había consumido completamente, entonces la mezcla se diluyó con agua y se ajustó el pH a 6~7 con HCl 1 N y la mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para proporcionar el intermedio deseado I-174a (160 mg, 82 %). ESI-MS (M+1): 425,2; calc. para C23H28N4O4.
Preparación del compuesto 2-07: Ácido 3-[[4-etoxi-3-(5-metil-4-oxo-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-2il)fenil]metil]ciclobutanocarbohidroxámico
[0453] A una solución del intermedio I-174a (160 mg, 0,38 mmol) en DMF (10 ml) se le añadieron NH2OH.HCl (590 mg, 7,6 mmol), DIEA (900 mg, 3,8 mmol) y BOP (300 mg, 0,76 mmol) a ta, después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa
5 orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por HPLC prep. para dar el compuesto 2-07 (58,4 mg, 50 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 440,2; calc. para C23H29N5O4: 439,2; Tr es 2,15.
10 [0454] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6).
Preparación del intermedio I-176a: 4-[4-etoxi-3-(5-metil-4-oxo-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-2il)fenil]ciclohex-3-eno-1-carboxilato de etilo
15 [0455] A una solución del intermedio I-33a (1,1 g, 2,5 mmol) en 1,4-dioxano (60 ml)/H2O (10 ml) se le añadieron añadió R-27a: 4-(trifluorometilsulfoniloxi)ciclohex-3-eno-1-carboxilato de etilo (1,06 g, 3,5 mmol), K2CO3 (1,1 g, 8,0 mmol), Pd(PPh3)4 (230 mg, 0,2 mmol), y después la mezcla se agitó a 80 ºC durante una noche en atmósfera de protección de N2. Después de que el análisis por LC-MS mostrase que el material de partida se había
20 consumido completamente, la mezcla se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por columna para dar el intermedio puro I-176a (680 mg, rendimiento del 58 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 465 calc. para C26H32N4O4: 464,2.
25 Preparación del intermedio I-177a: 4-[4-etoxi-3-( 5-metil-4-oxo-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-2il)fenil]ciclohexanocarboxilato de etilo
[0456] A una solución del intermedio I-176a (680 mg, 1,46 mmol) en EtOAc (40 ml) se le añadió Pd/C (0,2 g) a una atmósfera de H2, después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h hasta que el análisis por LC30 MS mostró que el material de partida se había consumido completamente, después se filtró, el filtrado se concentró
para dar el intermedio en bruto I-177a (667 mg, 98 %) en forma de un sólido de color blanco que se usó para la siguiente etapa directamente.
[0457] ESI-MS (M+1): 467 calc. para C26H34N4O4: 466,2.
5 Preparación del intermedio I-178a: Ácido 4-[4-etoxi-3-(5-metil-4-oxo-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-2il)fenil]ciclohexanocarboxílico
[0458] A una solución del intermedio I-177a (667 mg, 1,43 mmol) en MeOH/THF/H2O (3/9/3, 30 ml) se le
10 añadió LiOH.H2O (645 mg, 15 mmol), la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche hasta que el análisis por LC-MS mostró que el material de partida se había consumido completamente. Después se concentró, la mezcla se diluyó con H2O y se ajustó a pH de 1-2 con HCl 1 N, se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio en bruto I-178a (613 mg, 98 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 439 calc. para C24H30N4O4: 438,2.
15 Preparación del intermedio I-179a: 4-[4-etoxi-3-(5-metil-4-oxo-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-2-il)fenil]-Ntetrahidropiran-2-iloxi-ciclohexanocarboxamida
[0459] A una solución del intermedio I-178a (93 mg, 0,21 mmol) en DMF (30 ml) se le añadieron EDC.HCl (78
20 mg, 0,4 mmol), HOBt (54 mg, 0,4 mmol), THPO-NH2 (47 mg, 0,4 mmol), NMM (56 mg, 0,55 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. para dar el intermedio puro I-179a (98 mg, rendimiento del 87 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 538 calc. para C29H39N5O5: 537,2.
25 Preparación de los compuestos 2-12 (racémico), 2-13 (cis) y 2-14 (trans): Ácido 4-[4-etoxi-3-(5-metil-4-oxo-7-propil3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-2-il)fenil]ciclohexanocarbohidroxámico
[0460] Una solución del intermedio I-179a (98 mg, 0,182 mmol) en HCl/EtOAc (1,0 M, 15 ml) se agitó a
30 temperatura ambiente durante 1 h, y después se concentró para dar una reacción en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto 2-12 en forma de una mezcla racémica (14,5 mg), ESI-MS (M+1): 454,2 calc. para C24H31N5O4: 453,2; isómeros cis: 2-13 (5,8 mg), ESI-MS (M+1): 454,2 calc. para C24H31N5O4: 453,2 (Tr es 2,62) y los isómeros trans: 2-14 (10 mg). ESI-MS (M+1): 454,2 calc. para C24H31N5O4 (Tr es 2,78).
35 [0461] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6). Se considera cualquier mezcla racémica y enantiómero puro.
Preparación del intermedio I-44a: 5-Amino-1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazol-4-carbonitrilo
[0462] A una solución de la tetrahidro-2H-piran-4-ilhidrazina disponible en el mercado (R-14, 43 g, 228 mmol) en etanol (300 ml) se le añadió lentamente etóxido sódico (32,6 g, 479 mmol, 2,1 equiv.), y la mezcla resultante se agitó durante 1 hora a t.a. Después, la mezcla de reacción se transfirió a una solución del reactivo disponible en el mercado (etoximetileno)malononitrilo (4, 27,8 g, 228 mmol) en etanol (300 ml). Después de 30 minutos a t.a., la mezcla se calentó a reflujo durante 2 horas. Después, se enfrió a ta y se concentró al vacío para proporcionar I-44a en forma de un sólido que se usó en la siguiente etapa sin purificación.
Preparación del intermedio I-44b: 5-amino-1-ciclopentil-pirazol-4-carbonitrilo
[0463] A una mezcla de clorhidrato de ciclopentilhidrazina disponible en el mercado (R-14b) (1,82 g, 18,18 mmol) y el compuesto disponible en el mercado 4: (etoximetileno)malononitrilo (1,34 g, 10,97 mmol) en EtOH (20 ml), se le añadió en una porción Et3N (3,03 g, 29,93 mmol) a t.a. en atmósfera de N2. La mezcla se agitó a t.a. durante 10 min. Después, se calentó a 50 ºC y se agitó durante 2 h. La mezcla se enfrió a t.a. y se concentró a presión reducida. El residuo se vertió en agua y la fase acuosa se extrajo con AE (50 ml). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada (20 ml), se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar el intermedio I-44b (1,22 g, rendimiento del 69 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 177,1 calc. para C9H12N4: 176,1.
Preparación del intermedio I-45a: 5-Amino-1-(tetrahidro-2H-piran-4-il-1H-pirazol-4-carboxamida
[0464] Una solución de I-44a (< 228 mmol, en bruto de la reacción anterior) en etanol (300 ml) se trató con peróxido de hidrógeno acuoso al 35 % (100 ml) seguido de una solución acuosa concentrada de amoniaco (300 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 48 horas a t.a., después se inactivó con una solución acuosa saturada de tiosulfato sódico (800 ml). La retirada de etanol al vacío proporcionó un sólido que se aisló por filtración y se lavó con agua (2 x 200 ml) y éter dietílico (2 x 150 ml) para proporcionar I-45a (31 g, 147 mmol). El rendimiento para estas dos etapas, del reactivo 4 a I-45a, fue del 64 %. ESI-MS (M+1): 211 calc. para C9H14N4O2: 210,1
Preparación del intermedio I-45b: 5-amino-1-ciclopentil-pirazol-4-carboxamida
[0465] A una mezcla de intermedio I-44b (2,20 g, 12,48 mmol) en CH3CH2OH (20 ml), se le añadió en una porción H2O2 (4,24 g, 124,80 mmol) a t.a. en atmósfera de N2. Después, se añadió gota a gota NH3.H2O (4,37 g, 124,80 mmol). La mezcla se agitó a t.a. durante 2 h. El análisis por HPLC (TLC) mostró la reacción completa. Al residuo se le añadió Na2SO3 ac. (150 ml) y se agitó durante 2 h. La fase acuosa se extrajo con AE (50 ml). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada (20 ml), se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar el intermedio I-45b (1,54 g, rendimiento del 63 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 195,1 calc. para C9H14N4O: 194,1.
Preparación del intermedio I-46a: 6-(1-Bencil-4-metilpirrolidin-3-il)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[3,4d]pirimidin-4(5H)-ona (trans racémica)
[0466] A I-45a (0,4 g, 1,9 mmol) y 1-bencil-4-metilpirrolidin-3-carboxilato de etilo, trans racémico, R-15a (0,564 g, 2,28 mmol) se le añadió una solución de t-butóxido potásico en (1 M) en THF (10 ml, 5 equiv.). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 16 h y después la mezcla de reacción se vertió en una solución saturada de bicarbonato sódico. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para dar I-46a en bruto (0,55 g, 73,5 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido que se usó para la siguiente etapa sin purificación adicional. ESI-MS (M+1): 394 calc. para C22H27N5O2: 393,1.
Preparación del intermedio I-46b: 6-(1-bencil-4-metil-pirrolidin-3-il)-1-ciclopentil-5H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ona (trans racémica)
[0467] A una solución del intermedio I-45b (1,3 g, 5,26 mmol) en EtOH (10 ml) se le añadió 1-bencil-4metilpirrolidin-3-carboxilato de etilo, trans racémico, R-15a (510 mg, 2,63 mmol) y NaH (631 mg, 26,3 mmol), después la mezcla de reacción se agitó a 120 ºC durante 1 h por MO. La mezcla se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar un producto de reacción en bruto que se purificó por cromatografía en columna para dar el intermedio puro I-46b (685 mg, rendimiento del 69,0 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 378,2 calc. para C22H27N5O: 377,2.
Preparación del intermedio I-47a: 1-(Tetrahidro-2H-piran-4-il)-6-((3S,4S)-4-metilpirrolidin-3-il)-1H-pirazolo[3,4
d]pirimidin-4(5H)-ona (trans racémica)
[0468] A una solución de I-46a (1 g, 2,5 mmol) en metanol (30 ml) se le añadió Pd/C (1,5 g). La mezcla de
5 reacción se agitó a t.a. durante 5 h en una atmósfera de hidrógeno. Después de que el análisis por TLC (EP/AE 5:1) mostrase que el material de partida se había consumido, la mezcla se filtró y el filtrado se concentró al vacío. El residuo se extrajo con AE, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, La mezcla se concentró para dar el producto que se purificó por cromatografía en columna para dar I-47a (0,65 g, rendimiento del 84,41 %) en forma de un sólido de color amarillo; (trans) racémico. ESI-MS (M+1): 304 calc. para C15H21N5O2: 303,2.
10 Preparación del intermedio I-47b: 1-ciclopentil-6-(4-metil-pirrolidin-3-il)-5H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ona (trans racémica)
[0469] A una solución del intermedio I-46b (2 g, 5,3 mmol) en MeOH (10 ml) se le añadió Pd/C (1 g), después
15 la mezcla de reacción se agitó a ta 5 h en una atmósfera de H2 (40 psi). La mezcla se filtró, se concentró al vacío, y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, La mezcla se concentró para dar el intermedio I-47b (687 mg, rendimiento del 45,11 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 288,2 calc. para C15H21N5O: 287,2.
20 Preparación del intermedio I-48a: 6-(1-Hidroxietil)-1-tetrahidropiran-4-il-5H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ona
[0470] A una solución del intermedio I-45a (5,0 g, 23,86 mmol) en EtOH anhidro (100 ml) se le añadieron R16, 2-hidroxipropanoato de (S)-metilo, (7,28 g, 70 mmol) y EtONa (25 ml, 2,7 M), la mezcla de reacción se agitó a 80 ºC durante una noche. Después, la mezcla de reacción se concentró al vacío y se purificó por columna (PE: AE =
25 10:1 a 0:1) para dar el intermedio I-48a en forma de una mezcla racémica (3,0 g, 47,7 %). ESI-MS (M+1): 265 calc. para C12H16N4O3: 264,1.
Preparación del intermedio I-49a: metanosulfonato de 1-(4-oxo-1-tetrahidropiran-4-il-5H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6il)etilo
30 [0471] A una solución del intermedio I-48a (0,792 g, 3 mmol) en DCM (30 ml) se le añadieron lentamente Et3N (454,5 mg, 4,5 mmol) y cloruro de metanosulfonilo (9,25 g, 50 mmol) a 0 ºC. La mezcla de reacción se agitó 30 min a 0 ºC. Después, la mezcla de reacción se extrajo por DCM y se lavó por agua, se secó por Na2SO4, se concentró al vacío y se purificó por columna para dar el intermedio deseado I-49a en forma de una mezcla racémica
35 (0,3 g, 32,5 %). ESI-MS (M+1): 343 calc. para C13H19N4O5S: 342,1.
[0472] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6), X es un grupo saliente, tal como halógeno, y A es una
40 cadena hidrocarburo, que opcionalmente contiene átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, y opcionalmente contiene uno o más anillos aromáticos, heteroaromáticos, carbocíclicos y/o heterocíclicos. Se considera cualquier mezcla racémica y enantiómero puro.
Preparación del intermedio I-50a: 2-(4-((3-(4,5-dihidro-1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-4-oxo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-645 il-4-metilpirrolidin-1-il)metil)piperidin-1-il)pirimidin-5-carboxilato de etilo (trans racémico)
[0473] A una solución de I-47a (200 mg, 0,66 mmol) en CH3CN (10 ml) se le añadió el reactivo metanosulfonato de (1-(5-(etoxicarbonil)pirimidin-2-il)piperidin-4-il)metilo (R-11 c, 272 mg, 0,79 mmol) y K2CO3 (364 mg, 2,64 mmol). La reacción se agitó a 80 °C durante 48 h. Después de que el análisis por TLC (PE/AE, 3:1) mostrado que el material de partida se había consumido, la mezcla se filtró, se concentró al vacío, y se extrajo con
5 DCM, la capa orgánica se lavó con salmuera, y se secó sobre Na2SO4 anhidro. La mezcla se concentró para dar I50a (210 mg, rendimiento del 51,59 %) que se purificó por TLC preparativa en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 551 calc. para C28H38N8O4: 550,1
Preparación del intermedio I-51a: Ácido 2-(4-((4,5-Dihidro-1-tetrahidro-2H-piran-4-il)-4-oxo-1H-pirazolo[3,410 d]pirimidin-6-il)-4-metilpirrolidin-1-il)metil)piperidin-1-il)pirimidin-5-carboxílico (trans racémico)
[0474] Se obtuvo I-51a partiendo de I-50a de una manera análoga a I-19a. Rendimiento del 95,81 %. ESI-MS (M+1): 523 calc. para C26H34N8O4: 522,1.
15 Preparación del intermedio I-52a: 2-(4-((3-(4,5-Dihidro-1-(tetrahidro-2H-piran)-4-il-oxo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6il)-4-metilpirrolidin-1-il)metil)piperidin-1-il)-N-tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)pirimidin-5-carboxamida (trans racémica)
[0475] Se obtuvo I-52a partiendo de I-51a de una manera análoga a I-20a. rendimiento del 38,89 %, ESI-MS (M+1): 622 calc. para C31H43N9O5: 621,1.
20 Preparación del compuesto 3-02: 2-(4-((3-(4,5-Dihidro-1-tetrahidro-2H-piran-4-il)-4-oxo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6il)-4-metilpirrolidin-1-il)metil)piperidin-1-il)-N-hidroxipirimidin-5-carboxamida (trans racémica)
[0476] El compuesto 3-02 se obtuvo partiendo de I-52a de una manera análoga al compuesto 1-04.
25 Rendimiento del 46,67 %. ESI-MS (M+1): 538,3 (Método de HPLC: 2; Tr es 2,96) calc. para C26H35N6O4: 537,1; Tr es 2,59.
[0477] Siguiendo la misma ruta sintética para el compuesto 3-02 y usando los mismos reactivos a menos que se indique otra cosa en la tabla a continuación, se obtuvieron los siguientes compuestos:
Ejemplo
Tr (min) [M+1]+ Método de HPLC Materiales de partida
3-01 (trans racémico)
2,96 479,3 2 Metanosulfonato de 4-((E)-2-(etoxicarbonil)vinil)bencilo (R11d)
3-04 (trans racémico)
2,64 531,2 2 4-[2-(metilsulfoniloximetil) pirimidin-5-il]benzoato de metilo (R-11h)
3-08 (trans racémico)
1,42 538,3 2 1-[5-(metilsulfoniloximetil) pirimidin-2-il]piperidin-4carboxilato de metilo (R-11i)
[0478] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6), Q es oxígeno, NH o 94
donde Cy2 es un anillo heterocíclico, y A es una cadena hidrocarburo, que opcionalmente contiene átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, y opcionalmente contiene uno o más anillos aromáticos, heteroaromáticos, 5 carbocíclicos y/o heterocíclicos. Se considera cualquier mezcla racémica y enantiómero puro.
Preparación del intermedio I-53a: 4-[4-[1-[1-(4-oxo-1-tetrahidropiran-4-il-5H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)etil]azetidin-3il]oxilfenil]benzoato de metilo
10 [0479] A una solución del reactivo R-09f (204 mg, 0,877 mmol) en CH3CN (10 ml) se le añadieron K2CO3 (276 mg, 2 mmol) y I-49a (250 mg, 0,731 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 110 °C en MO durante 2 horas. Después, se concentró al vacío y se purificó por columna (DCM:MeOH = 1:0 a 10:1) para dar el compuesto del producto deseado I-53a (72 mg, 18,7 %). ESI-MS (M+1): 530,1 calc. para C29H31N5O5: 529,2.
15 Preparación del intermedio I-54a: Ácido 4-[4-[1-[1-(4-oxo-1-tetrahidropiran-4-il-5H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6il)etil]azetidin-3-il]oxifenil]benzoico
[0480] A una solución del compuesto I-53a (72 mg, 0,137 mmol) en THF/MeOH/H2O (10/1/3 ml) se le añadió LiOH.H2O (29,3 mg, 0,681 mmol). La mezcla resultante se agitó a t.a. durante una noche. Después de que el análisis
20 por TLC mostrase que la mayor parte del material de partida se había consumido por completo, la mezcla se diluyó con agua y se ajustó a pH de 2-3. La mezcla se concentró para dar el producto I-54a (42 mg, 71,7 %). ESI-MS (M+1): 516,1 calc. para C28H29N5O5: 515,2.
Preparación del intermedio I-55a: 4-[4-[1-[1-(4-Oxo-1-tetrahidropiran-4-il-5H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)etil]zetidin-325 il]oxifenil]-N-tetrahidropiran-2-iloxi-benzamida
[0481] A una solución de I-54a (93 mg, 0,2 mmol) en DMF (15 ml) se le añadieron EDC.HCl (68,8 mg, 0,4 mmol), HOBt(54 mg, 0,4 mmol), THP-O-NH2(34,4 mg, 0,3 mmol), NMM(40,4 mg, 0,4 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se diluyó con AE, se lavó con salmuera, se secó sobre
30 Na2SO4 anhidro y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por hplc prep. para dar el compuesto I55a (50 mg, 40,9 %). ESI-MS (M+1): 615,1 calc. para C33H38N6O6: 614,3.
Preparación del compuesto 3-03: Ácido 4-[4-[1-[1-(4-oxo-1-tetrahidropiran-4-il-5H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6il)etil]azetidin-3-il]oxifenil]benceno 35 carbohidroxámico
[0482] Una solución del compuesto I-55a (56,4 mg, 0,1 mmol) en HCI/dioxano (4 M, 5 ml) se agitó a t.a. durante 1 h, y la mezcla de reacción se concentró para dar el compuesto deseado 3-03 (7 mg, 13,2 %). ESI-MS 40 (M+1): 531,3 (Método de HPLC: 2; Tr es 2,89) calc. para C28H30N6O5: 530,2.
[0483] Siguiendo la misma ruta sintética para el compuesto 3-03 y usando los mismos reactivos a menos que se indique otra cosa en la tabla a continuación, se obtuvieron los siguientes compuestos:
Ejemplo
Tr (min) [M+1]+ Método de HPLC Materiales de partida
3-05
2,43 538,3 2 1-[4-(azetidin-3-iloxi)fenil] piperidin-4-carboxilato de etilo (R-09 g)
3-06
3,51 480,1 2 (E)-3-[4-(azetidin-3-iloxi)fenil]prop-2-enoato de metilo (R-09h)
3-07
2,69 540,3 2 5-[4-(azetidin-3-iloxi)-1-piperidil] pirimidin-2-carboxilato de etilo (R-09i)
3-13
2,29 455,2 2 4-(azetidin-3-iloxi)benzoato de etilo (R-09o)
3-15
2,25 453,2 2 4-(azetidin-3-ilmetil)-benzoato de etilo (R-09p)
3-16
2,23 459,2 2 5-(azetidin-3-ilmetil)tiofeno-2-carboxilato de etilo, R-09q)
[0484] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6) y A es una cadena hidrocarburo, que opcionalmente contiene átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, y opcionalmente contiene uno o más anillos aromáticos, heteroaromáticos, carbocíclicos y/o heterocíclicos.
Preparación del intermedio I-180a: 4-[[(3R,4R)-3-metil-4-(4-oxo-1-tetrahidropiran-4-il-5H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6il)pirrolidin-1-il]metil]benzoato de metilo (trans racémico)
[0485] A una solución del intermedio I-147a (130 mg, 0,43 mmol) en DCM (10 ml) se le añadió R-30a: 4formilbenzoato de metilo (84,4 mg, 0,515 mmol), y la mezcla se añadió CH3COOH (0,1 ml) Después, la mezcla se agitó a ta durante 1 h. Después, a la mezcla se le añadió NaBH(OAc)3 (182,3 mg, 0,86 mmol), y se agitó a ta durante una noche. Después de que el análisis por TLC (DCM/MeOH, 10:1) mostrase que el material de partida se había consumido, la mezcla se filtró y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. para obtener el intermedio puro 1-180a (130 mg, rendimiento del 67 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 452,2 calc. para C24H29N504: 451,2.
Preparación del intermedio I-181a: Ácido 4-[[(3R,4R)-3-metil-4-(4-oxo-1-tetrahidropiran-4-il-5H-pirazolo[3,4d]pirimidin-6-il)pirrolidin-1-il]metil]benzoico (trans racémico)
[0486] A una solución del intermedio I-180a (130 mg, 0,29 mmol) en THF/MeOH/H2O (3/3/2, 10 ml) se le añadió LiOH.H2O (122 mg, 29 mmol). La mezcla resultante se agitó a ta durante 4 h. Después, la mezcla se diluyó con agua y se ajustó el pH a 2-3 con HCl 1 N y la mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio en bruto I-181a (125 mg, 98 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido que se usó en la siguiente etapa sin purificación. ESI-MS (M+1): 438,2 calc. para C23H27N5O4: 437,2.
Preparación del intermedio I-182a: 4-[[(3R,4R)-3-metil-4-(4-oxo-1-tetrahidropiran-4-il-5H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6il)pirimidin-6-pirrolidin-1-il]metil]-N-tetrahidropiran-2-iloxi-benzamida (trans racémico)
[0487] A una solución del intermedio I-181a (125 mg, 0,286 mmol) en DMF (10 ml) se le añadieron EDC.HCl (110 mg, 0,572 mmol), HOBt (77,2 mg, 0,572 mmol), THP-O-NH2 (67 mg, 0,572 mmol), NMM (86,6 mg, 0,858 mmol), después la mezcla se agitó a ta durante una noche. La mezcla se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se concentró para dar el intermedio en bruto I-182a (40 mg, 26 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 537,3 calc. para C28H36N605: 536,2.
Preparación del compuesto 3-09: Ácido 4-[[(3R,4R)-3-metil-4-(4-oxo-1-tetrahidropiran-4-il-5H-pirazolo[3,4-d]pirimidin6-il)pirrolidin-1-il]metil]bencenocarbohidroxámico (trans racémico)
[0488] Una solución del intermedio I-182a (40 mg, 0,074 mmol) en HCl/AE (4 M, 5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, y después se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por HPLC prep. (Procedimiento general, Método 1) para obtener el compuesto puro 3-09 (24 mg, 72,7 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 453,2 calc. para C23H28N6O4: 452,2; Tr es 2,33.
[0489] Siguiendo la misma ruta sintética para el compuesto 3-09 y usando los mismos reactivos o intermedios a menos que se indique otra cosa en la tabla a continuación, se obtuvieron los siguientes compuestos:
Ejemplo
Tr (min) [M+1]+ Método de HPLC Materiales de partida
3-10 (trans racémico)
2,19 459,1 2 5-formiltiofeno-2-carboxilato de metilo (R-30b)
3-11 (trans racémico)
2,91 437,2 2 Intermedio I-47b
3-12 (trans racémico)
3,08 431,2 2 3-(metoximetileno)ciclo-butanocarboxilato de bencilo (R32a)
3-14 (trans racémico)
2,45 417,2 2 3-oxociclobutanocarboxilato de metilo (R-28c)
3-17 (trans racémico)
2,87 443,1 2 Intermedio I-47b y 5-formiltiofeno-2-carboxilato de metilo (R-30b)
[0490] Se considera cualquier mezcla racémica y enantiómero puro.
Preparación del intermedio I-59a: Benzo[d][1,3]dioxol-5-carbaldehído
10 [0491] Una solución del piperonol disponible en el mercado (5, 100 g, 0,66 mmol) y MnO2 activo (572 g, 6,6 mmol) en DCM (1000 ml) se agitó a ta durante una noche. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se lavaron con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró para dar I-59a en bruto (80 g, rendimiento del 80 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 151 calc. para C8H6O3: 150,1
15 Preparación del intermedio I-60a: 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indolo-3-carboxilato de metilo
[0492] La solución de I-59a (30 g, 0,2 mol) y el reactivo 2-amino-3-(1H-indol-3 il)propanoato de (R)-metilo (R
20 17, 43,6 g, 0,2 mol) en propan-2-ol (500 ml) se calentó a reflujo durante una noche. La mezcla de reacción se concentró y el sólido se disolvió en NaHCO3 ac. y DCM. La fase orgánica se separó y se secó sobre Na2SO4, se concentró y el residuo se disolvió en 50 ml de DCM y se añadió hexano (600 ml) con agitación. El sólido se retiró por filtración y la filtración se concentró para dar el compuesto en bruto I-60a en forma de una mezcla racémica (isómero cis al 90 %) (50 g, rendimiento del 70 %). ESI-MS (M+1): 351 calc. para C20H18N2O4: 350.
25 Preparación del intermedio I-61a: 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-2-(2-cloroacetil)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4b]indolo-3-carboxilato de metilo [0493] A una solución de I-60a (50 g, 0,14 mol) y Et3N (29 g, 0,28 mol) en THF anhidro (500 ml) se le añadió cloruro de cloro-acetilo (R-18, 17,7 mg, 0,15 mol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a t.a. durante 3 h. Se diluyó con 300 ml de DCM, se lavó por NaHCO3 acuoso, se secó y se concentró para dar I-61a, mezcla racémica (principalmente como isómero cis), (20 g, 2,57 mmol, rendimiento del 27 %) en forma de un sólido de color amarillo.
5 ESI-MS (M+1): 427 calc. para C22H19ClN2O5: 426,1
Preparación del intermedio I-62a: 6-(1,3-Benzodioxol-5-il)-2,3,6,7,12,12a-hexahidropirazino [1',2':1,6] pirido[3,4b]indolo-1,4-diona
10 [0494] La solución del compuesto I-61a (5 g, 9,5 mmol) en NH3/metanol (30 ml, 30 %) se agitó a 40 °C durante 3 días. Se concentró y se disolvió en 50 ml de DCM. Se lavó con agua (50 ml x 3) y se secó. La fase orgánica se concentró para dar el producto I-62a, mezcla racémica (principalmente como isómero cis), (3 g, rendimiento del 84,2 %) en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 376 calc. para C21H17N3O4: 375,1
[0495] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6), n es 0 o 1, X es un grupo saliente, tal como halógeno, y A es una cadena hidrocarburo, que opcionalmente contiene átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, y opcionalmente contiene uno o más anillos aromáticos, heteroaromáticos, carbocíclicos y/o heterocíclicos.
20 Preparación del intermedio I-63a: 4-[6-(1,3-Benzodioxol-5-il)-2,3,6,7,12,12a-hexahidropirazino[1',2':1,6]pirido[3,4b]pirido[3,4-b]indolo-1,4-dion-2-il]1-(terc-butoxicarbonil)piperidina
[0496] A una solución de I-61a (10,8 g, 0,025 mol) en metanol (300 ml) se le añadió el reactivo disponible en
25 el mercado 4-aminopiperidin-1-carboxilato de terc-butilo (R-19a, 5,1 g, 0,025 mol), la reacción se agitó a 90 °C durante 3 días. Después, la mezcla se concentró y se extrajo con AE. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna (AE: PE = 1:100-1:3) para dar I-63a, mezcla racémica (principalmente como isómero cis), (2,5 g, rendimiento del 17,6 %) en forma de un sólido de color blanco pálido. ESI-MS (M+1): 559 calc. para
30 C31H34N4O6: 558,1.
Preparación del intermedio I-64a: 4-[6-(1,3-Benzodioxol-5-il)-2,3,6,7,12,12a-hexahidrazino[1',2':1,6]pirido[3,4b]indolo-1,4-dion-2-il]piperidina [0497] A una solución de I-63a (2,5 g, 4,4 mol) en DCM (50 ml) se le añadió TFA (1 ml), la reacción se agitó a ta durante 2 horas. Después, la mezcla se concentró para dar I-64a en bruto, mezcla racémica (principalmente como isómero cis), (2,4 g, rendimiento del 100 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 459 calc. para
5 C26H26N4O4:458,0
Preparación del intermedio I-65a: 2-(4-[6-(1,3-benzodioxol-5-il)-2,3,6,7,12,12a-hexahidropirazino[1',2':1,6]pirido[3,4b]indolo-1,4-dion-2-il]piperidin-1-il)pirimidin-5-carboxilato de etilo
10 [0498] A una solución de I-64a (0,5 g, 1,09 mmol) en CH3CN (10 ml) se le añadieron 2-cloropirimidin-5carboxilato de etilo disponible en el mercado (R-11 e, 0,41 g, 2,18 mmol), K2CO3 (0,45 g, 3,27 mmol), KI (0,036 g, 0,22 mmol), la reacción se agitó a ta durante 5 h. Después, la mezcla se concentró y se extrajo con AE. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna (AE:PE = 1:50-1:3) para dar I-65a, mezcla racémica
15 (principalmente como isómero cis), (0,6 g, rendimiento del 90 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 609 calc. para C33H32N6O6: 608,1.
Preparación del intermedio I-66a: Ácido 2-(4-[6-(1,3-benzodioxol-5-il)-2,3,6,7,12,12a-hexahidropirazino[1',2':1,6] pirido[3,4-b]indolo-1,4-dion-2-il]piperidin-1-il)pirimidin-5-carboxílico
20 [0499] A una solución de I-65a (0,4 g, 0,66 mmol) en THF/H2O (20/10 ml) se le añadió LiOH.H2O (0,22 g, 5 mol), la mezcla de reacción se agitó a ta durante una noche. La mezcla se diluyó con AE, se lavó con una solución 2 M de HCl, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró para dar I-66a en bruto, mezcla racémica (principalmente como isómero cis), (0,2 g, rendimiento del 51 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 581 calc.
25 para: C31H28N6O6: 580,1.
Preparación del intermedio I-67a: N-(Tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)-2-(4-6[6-(1,3-benzodioxol-5-il)-2,3,6,7,12,12ahexahidropirazino[1',2':1,6]
30 pirido[3,4-b]indolo-1,4-dion-2-il]piperidin-1-il)pirimidin-5-carboxamida
[0500] A una solución de I-66a (260 mg, 0,45 mmol) en DMF (10 ml) se le añadieron EDC.HCl (173 mg, 0,9 mmol), HOBt (122 mg, 0,9 mmol), THP-O-NH2 (63 mg, 0,54 mmol), NMM (136 mg, 1,35 mmol). La mezcla se agitó a 30 °C durante una noche. La mezcla se diluyó con AE, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se
35 purificó por columna (AE:PE = 1:50-1:5) para dar I-67a, mezcla racémica (principalmente como isómero cis), (250 mg, rendimiento del 82 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 680 calc. para: C36H37N7O7: 679,1
Preparación del compuesto 4-03: N-Hidroxi-2-(4-[6-(1,3-benzodioxol-5-il)-2,3,6,7,12,12a40 hexahidropirazino[1',2':1,6]pirido[3,4-b]indolo-1,4-dion-2-il]piperidin-1-il)pirimidin-5-carboxamida
[0501] Una solución de I-67a (125 mg, 0,18 mmol) en HCI/dioxano (3M, 10 ml) se agitó a t.a. durante una noche. La mezcla de reacción se concentró y se purificó por HPLC preparativa para dar 4-03 puro, mezcla racémica (principalmente como isómero cis), (22,6 mg, rendimiento del 21 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido.
45 ESI-MS (M+1): 596,3 (Método de HPLC: 1) calc. para C31H29N7O6: 595,1
[0502] Siguiendo la misma ruta sintética para el compuesto 4-03 y usando los mismos reactivos a menos que se indique otra cosa en la tabla a continuación, se obtuvieron los siguientes compuestos:
Ejemplo
Tr (min) [M+1]+ Método de HPLC Materiales de partida
4-02 (principalmente como isómero cis)
2,03 560,1 1 4-aminopiperidin-1-carboxilato de terc-butilo (R-19a) y 4bromobutanoato de etilo (R-11b)
4-04 (principalmente como isómero cis)
2,42 634,3 1 4-aminopiperidin-1-carboxilato de terc-butilo (R-19a) y metanosulfonato de 4-((E)-2-(etoxicarbonil)-vinil)bencilo (R-11d)
4-05 (principalmente como isómero cis)
2,50 610,3 1 4-(aminometil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (R19b) y 2-cloropirimidin-5-carboxilato de etilo (R-11e)
[0503] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6), X es un grupo saliente, tal como halógeno, y A es una cadena hidrocarburo, que opcionalmente contiene átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, y opcionalmente contiene uno o más anillos aromáticos, heteroaromáticos, carbocíclicos y/o heterocíclicos. Se considera cualquier mezcla racémica y enantiómero puro.
Preparación del intermedio I-68a: 4-[6-(1,3-benzodioxol-5-il)-2,3,6,7,12,12a-hexahidropirazino[1',2':1,6]pirido[3,4b]indolo-1,4-dion-2-il]fenilprop-2-enoato de (E)-etilo
[0504] A una solución de I-62a (0,6 g, 1,6 mmol) en dioxano (15 ml) se le añadieron Cul (0,6 g, 3,2 mmol, 2 equiv.), K3PO4 (0,68 g, 3,2 mmol, 2 equiv.), (±)-trans-1,2-diaminociclohexano (0,72 g, 6,4 mmol, 4 equiv.), 3-(4yodofenil)prop-2-enoato de (E)-etilo (R-11f, 0,48 g, 1,6 mmol, 1 equiv.), la reacción se agitó a ta durante 8 días. Después, la mezcla se concentró y se extrajo con AE. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna (AE:PE = 1:10-1:3) para dar I-68a, mezcla racémica (principalmente como isómero cis), (0,3 g, rendimiento del 34 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 550 calc. para C32H27N3O6: 549,1
Preparación del compuesto 4-01: (E)-N-Hidroxi-4-[6-(1,3-benzodioxol-5-il)-2,3,6,7,12,12ahexahidropirazino[1',2':1,6]pirido[3,4-b]indolo-1,4-dion-2-il]fenilprop-2-enamida
[0505] A una solución de I-68a (100 mg, 0,18 mmol) en NH2.OH/metanol (2 M/l, 3 ml) se le añadió NaCN (1,7 mg, 0,036 mmol), la reacción se agitó a 50 °C durante 3 h. Después, la mezcla se concentró y se extrajo con AE. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron para dar directamente el producto en bruto que se purificó por HPLC preparativa para obtener 4-01 puro, mezcla racémica (principalmente como isómero cis), (5,6 mg, rendimiento del 5,7 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 537,2 (Método de HPLC: 1) calc. para C30H24N4O6: 536,1
[0506] En el esquema anterior, X es un grupo saliente, tal como halógeno.
Preparación del intermedio I-71a: 2-(Ciclopentiloxi)-1-metoxi-4-nitrobenceno
[0507] A una solución del reactivo disponible en el mercado 2-metoxi-5-nitrofenol (19,4 g, 111 mmol) en CH3CN anhidro (300 ml) se le añadieron bromociclopentano (20,34 g, 140 mmol), K2CO3 (30 g, 222 mmol), la mezcla de reacción se agitó a 90 °C durante una noche. La mezcla se diluyó con AE, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna para dar I-71a (20 g, rendimiento del 76,9 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-M (M+1): 238 calc. para C12H15NO4: 237,1.
Preparación del intermedio I-72a: 3-(Ciclopentiloxi)-4-metoxibenzenamina
[0508] A una solución del compuesto I-71a (20 g, 84 mmol) en metanol (300 ml) se le añadió Pd/C (6 g). La mezcla de reacción se agitó a ta durante 5 h. La mezcla resultante se filtró, el filtrado se concentró para dar I-72a en bruto (16 g, rendimiento del 92,0 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 208 calc. para C12H17NO2: 207,0.
Preparación del intermedio I-73a: N-(3-(Ciclopentiloxi)-4-metoxifenil)-1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-amina
[0509] A una solución de 1-72a (5 g, 240 mmol) en metanol (100 ml) se le añadieron 4-oxopiperidin-1carboxilato de terc-butilo (R-21, 7,1 g, 360 mmol), NaBH3CN (3 g, 480 mmol), AcOH (3 g, 480 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 60 °C durante una noche. La mezcla se diluyó con AE, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna (AE:PE = 1:20-1:5) para dar I-73a (4 g, rendimiento del 42 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 391 calc. para C22H34N2O4: 390,1.
Preparación del intermedio I-75a (compuesto de referencia 5-01): 3,5-Dicloro-N-(3-(ciclopentiloxi)-4metoxifenil)piridin-4-carboxamida
[0510] A una solución del compuesto 1-72a (600 mg, 2,88 mmol) en DMF (30 ml) se le añadieron EDC.HCl (1,1 g, 5,76 mmol), HOBt (780 mg, 5,76 mmol), KR-1 (550 mg, 2,88 mmol), NMM (870 mg, 8,64 mmol). La mezcla se agitó a t.a. durante una noche. La mezcla se diluyó con AE, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró para dar el compuesto en bruto que se purificó por cromatografía en columna (AE:PE = 1:30-1:3) y recristalización (AE) para dar I-75a (5-01, 85 mg, rendimiento del 8,5 %) en forma de un sólido pálido. ESI-MS (M+1): 382,0 (Método de HPLC: 3) calc. para C18H18Cl2N2O3: 381,2.
[0511] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6), X es un grupo saliente, tal como halógeno, y A es una cadena hidrocarburo, que opcionalmente contiene átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, y opcionalmente contiene uno o más anillos aromáticos, heteroaromáticos, carbocíclicos y/o heterocíclicos.
Preparación del intermedio I-76a: 4-(N-[3,5-Dicloropiridin-4-ilcarbonil]-N-[(3-ciclopentiloxi)-4-metoxifenil)]amino)-1(terc-butoxicarbonil)-piperidinaca)-piperidina
[0512] A una solución de I-73a (7 g, 17,9 mmol) en DCM (100 ml) se le añadieron cloruro de 3,5dicloroisonicotinoílo, KR-4, (3,7 g, 17,9 mmol, 1 equiv.), Et3N (3,6 g, 36 mmol, 2 equiv.). La mezcla de reacción se agitó a ta durante una noche. La mezcla se diluyó con AE, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna (AE:PE = 1:50-1:30) para dar el compuesto I-76a (1,1 g, rendimiento del 11 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 564 calc. para C2H35Cl2N3O5: 563,1.
Preparación del intermedio I-77a: 4-(N-[3,5-Dicloropiridin-4-ilcarbonil]-N-[(3-(ciclopentiloxi)-4metoxifenil)]amino)piperidina
[0513] Una solución de I-76a (1,1 g, 1,95 mmol) en HCI/Dioxano (4 M/l,10 ml) se agitó a t.a. durante 2 h. La mezcla se concentró para dar I-77a (1 g, rendimiento del 100 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 464 calc. para C23H27Cl2N3O3: 463,0.
Preparación del intermedio I-78a: 4-[4-(N-[3,5-dicloropiridin-4-ilcarbonil]-N-[(3-(ciclopentiloxi)-4metoxifenil)]amino)piperidin-1-il]butanoato de etilo
[0514] Se obtuvo I-78a partiendo de I-77a de una manera análoga a I-18a, pero usando 4-bromobutanoato de etilo (R-11 b) en lugar de 3-bromopropionato de etilo (R-11a). rendimiento del 81 % en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 578 calc. para C29H37Cl2N3O5: 577,1.
Preparación del intermedio I-79a: Ácido 4-[4-(N-[3,5-dicloropiridin-4-ilcarbonil]-N-[(3-ciclopentiloxi)-4)metoxifenil)]amino)piperidin-1-il]butanoico
[0515] Se obtuvo I-79a partiendo de I-78a de una manera análoga a I-19a. rendimiento del 79 % en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 550 calc. para C27H33Cl2N3O5: 549,1.
Preparación del intermedio I-80a: N-(Tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)4-[4-(N-[3,5-dicloropiridin-4-ilcarbonil]-N-[3(ciclopentiloxi)-4-metoxifenil)]amino)piperidin-1-il]butanamida
[0516] Se obtuvo I-80a partiendo de I-79a de una manera análoga a I-20a. rendimiento del 64 %) en forma de un sólido de color amarillo. ESI-MS (M+1): 649 calc. para C32H42Cl2N4O6: 648,1.
Preparación del compuesto de referencia 5-03: N-Hidroxi-4-[4-(N-[3,5-dicloropiridin-4-ilcarbonil]-N-[(3-(ciclopentiloxi)4-metoxifenil)]amino)piperidin-1-il]butanamida
[0517] El compuesto de referencia 5-03 se obtuvo partiendo de I-80a de una manera análoga al compuesto
5 1-04. Rendimiento del 9,4 % en forma de un sólido de color blanco. ESI-MS (M+1): 565 (Método de HPLC: 1) calc. para C27H34Cl2N4O5: 564,2.
[0518] Siguiendo la misma ruta sintética para el compuesto de referencia 5-03 y usando los mismos reactivos a menos que se indique otra cosa en la tabla a continuación, se obtuvieron los siguientes compuestos:
Ejemplo de referencia
Tr (min) [M+1]+ Método de HPLC Materiales de partida
5-02
2,31 640,2 1 Metanosulfonato de 4-((E)-2-(etoxicarbonil)vinil)bencilo (R-11d)
5-04
2,66 602,2 1 2-cloropirimidin-5-carboxilato de etilo (R-11e)
[0519] En el esquema anterior, R es alquilo (C1-C6), X es un grupo saliente, tal como halógeno, y A es una
15 cadena hidrocarburo, que opcionalmente contiene átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, y opcionalmente contiene uno o más anillos aromáticos, heteroaromáticos, carbocíclicos y/o heterocíclicos.
Preparación del intermedio I-81 a: 7-[(3-(ciclopentiloxi)-4-metoxifenil)amino]heptanoato de etilo
20 [0520] A una solución de I-72a (2,5 g, 12,1 mmol) en DMF (50 ml) se le añadieron el reactivo disponible en el mercado 7-bromoheptanoato de etilo (R-11 g, 2,86 g, 12,1 mmol), K2CO3 (4,2 g, 30,3 mmol) y KI (1 g, 6,1 mmol). La mezcla de reacción se agitó a t.a. durante una noche. La mezcla se diluyó con AE, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró para dar el producto en bruto. Que se purificó por cromatografía en columna (AE:PE = 1:20-1:5) para dar I-81a (1,5 g, rendimiento del 34 %) en forma de un aceite. ESI-MS (M+1): 364,2 calc.
25 para C21H33NO4: 363,1.
Preparación del intermedio I-82a: 7-(N-[3,5-dicloropiridin-4-ilcarbonil]-N-[(3-(ciclopentiloxi)-4metoxifenil)]amino)heptanoato de etilo
30 [0521] A una solución de I-81a (727 mg, 2 mmol) en DCM (50 ml) se le añadieron cloruro de 3,5dicloroisonicotinoílo (KR-4, 421 mg, 2 mmol) y Et3N (606 mg, 6 mmol) a -20 °C. La mezcla de reacción se agitó a t.a. durante una noche. La mezcla se extrajo con AE, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna (AE: PE = 1:50-1:30) para dar el compuesto I-82a (640 mg, rendimiento del 60 %) en forma de un aceite. ESI-MS (M+1): 537,1 calc. para
35 C27H34Cl2N2O5: 536,1.
Preparación del intermedio I-83a: Ácido 7-(N-[3,5-dicloropiridin-4-ilcarbonil]-N-[(3-(ciclopentiloxi)-4metoxifenil)]amino)heptanoico
[0522] Se obtuvo I-83a partiendo de I-82a de una manera análoga a I-19a. Rendimiento del 75 %. ESI-MS 5 (M+1): 509,1; calc. para C25H30Cl2N2O5: 508,1.
Preparación del intermedio I-84a: 7-(N-[3,5-dicloropiridin-4-ilcarbonil]-N-[(3-(ciclopentiloxi)-4-metoxifenil)]amino)-N(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)heptanamida
10 [0523] Se obtuvo I-84a partiendo de I-83a de una manera análoga a I-20a. Rendimiento del 41 %. ESI-MS (M-55): 609; calc. para C30H39Cl2N3O6: 608,2
Preparación del compuesto de referencia 5-05: 7-(N-[3,5-Dicloropiridin-4-ilcarbonil]-N-[(3-ciclopentiloxi)-4metoxifenil)]amino-N-hidroxiheptanamida
15 [0524] El compuesto de referencia 5-05 se obtuvo partiendo de I-84a de una manera análoga al compuesto 1-04. Rendimiento del 12 %. ESI-MS (M+1): 525,2 (Método por HPLC: 2) calc. para C25H31Cl2N3O5:524,4.
Ejemplos comparativos
20 Ejemplo comparativo 2-01: 2-[[4-etoxi-3-(5-metil-4-oxo-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-2-il)fenil]sulfonil-metilamino]-N-metoxi-N-metil-acetamida (compuesto 14 del documento WO 2008/024494)
[0525] Su síntesis se realizó de acuerdo con el procedimiento descrito en la solicitud de patente mencionada, 25 y se caracterizó por ESI-MS (M+1): 507,1 calc. para C22H30N6O6S (como se indica en el documento WO 2008/024494).
Ejemplo comparativo 2-02: 3-[[4-etoxi-3-(5-metil-4-oxo-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-2-il-fenil]metil]-Nmetoxi-N-Metoxi-N-metil-ciclobutanocarboxamida 30 [0526] Su síntesis se realizó a partir del intermedio I-174a:
35 [0527] A una solución del intermedio I-174a (500 mg, 1,17 mmol) en DMF (10 ml) se le añadieron EDC.HCI (461 mg, 2,4 mmol), HOBt (324 mg, 2,4 mmol), N,O dimetilhidroxilamina (146 mg, 2,4 mmol) y NMM (363 mg, 3,6 mmol) a ta, después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se concentró para dar el producto en bruto que se purificó por TLC prep. para dar el ejemplo comparativo 2-02 (17 mg, rendimiento del
40 3 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. ESI-MS (M+1): 468,2; calc. para C25H33N5O4: 467,2; Tr es 2,74.
Ejemplo comparativo 3-01: (1R,2R-2(1-(4,4-difluorociclohexil)-3a,4,5,7a-tetrahidro-4-oxo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin6-il)-N-metoxi-N-metilciclobutanocarboxamida (racémica trans) (ejemplo 8B del documento WO2012/020022)
[0528] Su síntesis se realizó de acuerdo con el procedimiento descrito en la solicitud de patente mencionada, y se caracterizó por ESI-MS (M+1): 396,1 calc. para C18H23F2N5O3 (como se indica en el documento WO2012/020022).
Ensayos biológicos
Ensayo de actividad enzimática de PDE
[0529] El ensayo bioquímico para medir las actividades enzimáticas de PDE5A, isoforma b de PDE9A, PDE4D7, y PDE4A1 se basa en el kit de ensayo HTRF cGMP de CisBio (CisBio, Cat. n.º 62GM2PEB), que determina la cantidad de cGMP presente en la reacción. Las enzimas se obtuvieron de BPS Biosciences (número de acceso GenBank para PDE5A: NMM_001083, Cat. n.º 60050; PDE9A: NMM_001001567, Cat. n.º 60090; PDE4D7: NM_001165899, Cat. n.º 60047; y PDE4A1: U97584, Cat. n.º 60040) y son de longitud completa con etiqueta GST N-terminal. Se expresaron en un sistema de expresión de células Sf9 infectado con baculovirus.
[0530] Para cada enzima, se llevó a cabo el ensayo de actividad enzimática en una placa de 384 pocillos en un volumen final de 20 μl, como se indica a continuación:
•
2,5 µl de vehículo o compuesto estudiado 4 x concentrados preparados en tampón de ensayo que contiene Tris-HCl 50 mM, MgCl2 6 mM, pH 7,4 (PDE5A, PDE4D7, PDE4A1) y adicionalmente Tween-20 al 0,03 % (PDE9A). El porcentaje final de DMSO fue 0,5 %.
•
2,5 µl de PDE5A (7 µg/ml) o 2,5 µl de PDE9A (0,2 µg/ml) o 2,5 µl de PDE4D7 (1,25 µg/ml) o 2,5 µl de PDE4A1 (1,5 µg/ml) diluido en tampón de ensayo. La concentración final fue de 1,75 µg/ml (PDE5A) o 0,05 µg/ml (PDE9A) o 0,31 µg/ml (PDE4D7) o 0,375 µg/ml (PDE4A1).
•
5 µl de sustrato cGMP 4 x concentrado para alcanzar una concentración final de nucleótido cíclico de 100 nM (PDE5A y PDE9A) o 250 nM (PDE4D7 y PDE4A1).
•
Después del sellado de la placa, la mezcla se incubó durante 30 minutos a 37 ºC.
•
La reacción se detuvo mediante la adición de 5 µl de cGMP marcado con el colorante D2 (cGMP-D2) y 5 µl de Mab anti-cGMP marcado con criptato (cGMP-criptato) según lo recomendado por el kit de ensayo de CisBio.
•
La placa se cerró herméticamente y se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente.
[0531] Se determinó la fluorescencia de cada pocillo a 665 nm de excitación y 620 nm de emisión usando el lector de placas EnVision (Perkin-Elmer). Los resultados se calcularon a partir de la relación de 665 nm/620 nm. Se obtuvo un control positivo en presencia del vehículo de los compuestos. Se obtuvo un control negativo en ausencia de cGMP y nucleótido cíclico cGMP-D2 marcado.
Ensayo de actividad enzimática de HDAC
[0532] El ensayo bioquímico para medir las actividades enzimáticas de HDAC1, HDAC2, HDAC3, y HDAC6 se basa en la señal de fluorescencia producida por un sustrato marcado específico (BPS Biosciences, Cat. n.º 50037) después de su desacetilación por HDAC. El sustrato fluorogénico, que contiene una cadena lateral de lisina acetilada, puede desacetilarse y luego sensibilizarse para el posterior tratamiento con el revelador lisina (BPS Biosciences, Cat. n.º 50030), que produjo un fluoróforo que puede medirse con un lector de placas de fluorescencia.
[0533] Las enzimas se obtuvieron de BPS Biosciences. La enzima HDAC1 (número de acceso de GenBank n.º NM_004964; Cat. # 50051) es de longitud completa con etiqueta his C-terminal y etiqueta Flag C-terminal. La enzima HDAC2 (número de acceso de GenBank n.º NM_001527; Cat. n.º 50002) es de longitud completa con etiqueta his C-terminal. La enzima HDAC3 (número de acceso de GenBank n.º NM_003883; Cat. n.º 50003) es de longitud completa con etiqueta his C-terminal y etiqueta NCOR2, GST humana N-terminal. La enzima HDAC6 (número de acceso de GenBank n.º BC069243; Cat. n.º 50006) es de longitud completa con etiqueta GST Nterminal. Las enzimas se expresaron en un sistema de expresión de células Sf9 infectado con baculovirus.
[0534] La actividad enzimática se llevó a cabo en una placa de 96 pocillos de color negro en un volumen final de 100 μl, como se indica a continuación:
•
5 µl de vehículo o compuesto estudiado 10 x concentrados preparados en tampón de ensayo (BPS Biosciences, Cat. n.º 50031). El porcentaje final de DMSO fue del 1 %.
•
5 µl de HDAC1 (4 µg/ml de HDAC1) o 5 µl de HDAC2 (15 µg/ml) o 5 µl de HDAC3 (10 µg/ml) o 5 µl de HDAC6 (36 µg/ml) se diluyeron en tampón de ensayo. La concentración final fue de 0,4 µg/ml (HDAC1), 1,5 µg/ml (HDAC2) o 1 µg/ml (HDAC3) o 3,6 µg/ml (HDAC6).
•
Iniciar la reacción añadiendo 40 μl de mezcla de reacción que contiene 0,125 mg/ml de BSA y 12,5 μM de sustrato de HDAC fluorogénico. Las concentraciones finales de BSA y sustrato fueron de 0,1 mg/ml y 10 μM, respectivamente.
•
Después del sellado de la placa, la mezcla se incubó durante 30 minutos a 37 ºC.
•
La reacción se detuvo añadiendo 50 μl de revelador de ensayo de lisina.
•
La placa se incubó durante 20 minutos a temperatura ambiente.
[0535] Se determinó la fluorescencia de cada una a una excitación de 355 nm y una emisión de 460 nm usando el lector de placas Mithras (Berthold). Se obtuvo un control positivo en presencia del vehículo de los compuestos. Se obtuvo un control negativo en ausencia de actividad enzimática de HDAC1. La Tabla 1 muestra los valores de inhibición para enzimas recombinantes (CI50); donde, CI50 ≥10 µM (+), 1 µM ≤ CI50 < 10 µM (++),10 nM ≤ CI50 < 1 µM (+++) y CI50 < 10 nM (++++). Los inhibidores de PDE conocidos (Sildenafilo, Vardenafilo, Tadalafilo, Piclamilast y PF-4447943 (6-[(3S,4S)-4-metil-1-(pirimidin-2-ilmetil)pirrolidin-3-il]-1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-1H
5 pirazolo[3,4-d]pirimidin-4(5H)-ona)), así como inhibidores de HDAC (Vorinostat y Panobinostat) también se incluyeron como referencias.
Tabla 1
Ejemplo
PDE4 A1 PDE4 D7 PDE5A1 PDE9A HDAC1 HDAC2 HDAC3 HDAC6
Sildenafilo
++ ++++ ++ +
Vardenafilo
++ ++++ +++
Tadalafilo
+ ++++ + +
Piclamilast
++++ ++ +
PF-4447943
++ ++ +++
Vorinostat
+ + +++ +++ +++ +++
Panobinostat
++++ ++++ ++++ +++
1-01
+++ + +
1-02
++++ +++ ++
1-03
++++ ++ +++ +++
1-04
++++ ++ +
1-05
++++ ++ ++
1-06
++++ + ++++ +++ +++ +++
1-07
++++ ++ +++ +++ +++ +++
1-11
++ +++
1-12
+++ ++ +++
1-14
++ +++ +++
1-15
+++ +++ ++ ++ +++
1-16
+++ +++ ++ ++ +++
1-17
++++ ++ + + +++
1-18
+++ + + + +++
1-19
+++ +++ +++ +++ +++
1-21
++++ +++ + +++
1-22
++++ +++ +++ +++ +++
1-23
+++ +++ +++ +++
1-24
++++ +++ +++ +++ ++
1-25
++++ +++ +++ +++ +++
1-26
+++ ++ + +
1-27
++++ ++ + +
1-28
+++ +++ + +++
1-29
+++ +++ + +++
1-30
++++ +++ ++ +++
1-31
+++ ++ + ++
1-32
++++ + ++
1-33
+++ ++ + +
1-34
+++ + + +++
1-35
+++ ++ + ++
1-36
+++ ++ + ++
1-37
+++ +++ ++ +++
1-38
+++ ++ + +++
1-39
+++ ++ ++ +++
1-40
+++ ++ + +++
1-41
+++ + + ++
1-42
+++ ++ + +++
1-43
+++ ++ + +++
1-47
+++ ++ ++
1-48
++++ +++ +++ +++
1-49
+++ + + ++
1-51
+++ ++ + ++
1-53
+++ ++ ++ ++
1-54
+++ +++ ++ ++
1-55
+++ ++ + +++
1-56
+++ + + ++
Ejemplo
PDE4 A1 PDE4 D7 PDE5A1 PDE9A HDAC1 HDAC2 HDAC3 HDAC6
1-59
+++ ++ + ++
1-60
+++ + + +
1-62
+++ +++ +++ +++
1-63
+++ +++ ++ +++
1-65
+++ ++ + +
1-66
+++ ++ + +++
1-67
+++ + + +
1-68
+++ ++ + +++
1-69
+++ +++ ++ ++
1-70
+++ +++ ++ ++
1-71
++++ +++
1-72
++++ +++
1-73
++++ +++
1-74
++++ ++
1-75
+++ ++
1-76
+++ +++
1-77
+++ +++
1-78
++++ +++
1-79
++++ +++
1-80
+++ +++
1-82
+++ +++
1-83
+++ +++
1-84
+++ +++ ++ +++
1-85
+++ ++ ++ +++
1-86
+++ ++ + ++
2-01
++++ ++
2-02
++++ +++ +++
2-03
++++ ++ +++
2-05
++++ + ++++
2-07
++++ +++ ++ +++
2-08
++++ ++ ++ +++
2-10
++++ +++
2-11
++++ +++
2-12
++++ ++
2-13
++++ +++
3-01
+ ++++ +++
3-02
++ +++ +++
3-03
+ +++ ++
3-04
++++ +++
3-05
+++ +
3-06
++++ +++
3-07
+++ +++
3-08
+++ ++
3-09
+++ +++
3-10
+++ +++
3-11
+++ +++
3-12
+++ ++ + ++
3-13
+++ +++ ++ +++
3-14
+++ ++ + ++
3-15
+++ ++ ++ +++
3-16
+++ ++ ++ ++
3-17
++++ +++ ++ +++
4-01
+++ +
4-02
+++ +
4-03
+++ +++
4-04
+++ +++
4-05
+++ + +++ +++ +++
5-02
+ + +++
(compuesto de referencia)
5-03 (compuesto de referencia)
+ + ++
Ejemplo
PDE4 A1 PDE4 D7 PDE5A1 PDE9A HDAC1 HDAC2 HDAC3 HDAC6
5-04 (compuesto de referencia)
+ + +++
5-05 (compuesto de referencia)
++ + +++
[0536] Como puede verse en la tabla anterior, los compuestos ensayados de la invención muestran una doble inhibición de PDE y HDAC.
5 [0537] El ejemplo comparativo 2-02 lleva un núcleo de imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-4-ona y un éster de ácido hidroxámico; de hecho, esta molécula proporcionó una comparación directa en pares con el compuesto 2-07, en el que se sustituyó el ácido hidroxámico por un éster de ácido hidroxámico. Este compuesto, el ejemplo comparativo 202, mantuvo la actividad primaria frente a PDE5A1, CI50 <10 nM; sin embargo, estuvo inactivo frente a HDAC1, HDAC2 y HDAC6; CI50 > 20 µM.
10 [0538] El ejemplo comparativo 2-01 y el ejemplo comparativo 3-01 se inactivaron frente a HDAC1, HDAC2 y HDAC6; IC50 > 20 µM en las condiciones ensayadas.
Ensayo in vitro usando cultivos neuronales primarios 15 Neuronas de tipo silvestre de la actividad PDE y HDAC
[0539] El ensayo celular para determinar la actividad de PDE y HDAC se evaluó mediante análisis de transferencia de Western usando anticuerpos específicos contra pCREB-Ser129 e histona 3 acetilada en Lys9 20 (AcH3K9), respectivamente. En este caso, la CE50 indicada, Tabla 2 (a continuación), se refiere a un aumento del 50 % en pCREB o en niveles AcH3K9 sobre basal (solución salina, sin tratamiento).
[0540] Se usaron cultivos neuronales primarios derivados del hipocampo y la corteza del día embrionario 16 (E16) de ratones de tipo salvaje. El tejido se trituró usando pipetas de vidrio hasta que las neuronas se disociaron. 25 Las neuronas se sembraron en medios neurobasales libres de suero con un suplemento de B27 (Invitrogen, Gaithersburg, MD) y L-glutamina 2 mM en placas tratados con poli-L-lisina (0,1 mg/ml, Sigma) de 60 mm.
[0541] Para determinar el efecto de curva concentración-respuesta de los compuestos, se trataron cultivos celulares de 15 días in vitro (DIV) a diferentes concentraciones (1, 10, 50, 100 y 500 nM, 1 y 2 µM) durante 30 min. 30 Las células se recogieron en un tampón que contenía un tampón de lisis frío con inhibidores de proteasa (NaCl 0,2 M, HEPES 0,1 M (ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinaetanosulfónico), glicerol al 10 %, NaF 200 mM, Na4P2O7 2 mM, EDTA 5 mM (ácido etilendiaminatetraacético), EGTA 1 mM (ácido etilenglicoltetraacético), DTT 2 mM (ditiotreitol), PMSF 0,5 mM (fluoruro de fenilmetilsulfonilo), Na3VO4 1 mM y cóctel de inhibidor de proteasa completo, Roche Diagnostics), se centrifugaron a 14.000 x g 4 ºC durante 20 min y el sobrenadante se alicuotó y se almacenó a -80
35 ºC. Las concentraciones totales de proteína se determinaron usando el ensayo de proteína (BioRad Laboratories).
[0542] Las muestras de proteína se mezclaron con tampón de muestra de Laemmli, se resolvieron sobre geles de SDS-poliacrilamida y se transfirieron a membrana de nitrocelulosa. Las membranas se bloquearon con leche al 5 %, Tween-20 al 0,05 % en PBS (solución salina tamponada con fosfato) o TBS (solución salina 40 tamponada con Tris) seguido de incubación durante una noche con los siguientes anticuerpos primarios: Histona 3 policlonal anti-acetilada de conejo (acetilo K9), anti-pCREB-Ser129 policlonal de conejo (Cell Signaling), anti-actina monoclonal de ratón (Sigma) en el tampón correspondiente. Todos los anticuerpos se utilizaron a una dilución 1:1000 excepto la anti-β-actina monoclonal de ratón que se usó a 1:50.000. Después de dos lavados en TBS/Tween20 y un lavado en TBS en solitario, se detectaron bandas de proteína inmunomarcadas usando un
45 anticuerpo anti-conejo o anti-ratón conjugado con HRP (dilución de Santa Cruz 1:5.000) siguiendo un sistema de quimioluminiscencia mejorado (ECL, GE Healthcare Bioscience, Buckinghamshire, Reino Unido), y la exposición autorradiográfica a HyperfilmtECL (GE Healthcare Bioscience). Se usó Quantity OneTM software v. 4.6.3 (Bio-Rad) para la cuantificación.
50 Marcadores relacionados con AD (procesamiento de APP, pT au y tubulina acetilada) en neuronas Tq2576
[0543] Los efectos de los compuestos sobre la patología amiloide se analizaron en cultivos primarios (15 DIV) de neuronas derivadas del hipocampo y corteza de embriones de ratón Tg2576. Los ratones Tg2576 expresan la isoforma 695-aa humana de APP (hAPP) que contiene la doble mutación sueca, que favorece la producción de Aβ. 55 Las neuronas se trataron durante dos días y se recogieron al día 3, 24 h después del último tratamiento. Primero se analizó el efecto de los compuestos sobre el procesamiento de hAPP por la vía amiloidogénica midiendo el fragmento carboxilo terminal AβPP (C99), que es el precursor de Aβ42. En este caso, la CE50 indicada, Tabla 2 (a continuación), significa una disminución del 50 % en los niveles de C99 sobre basal (solución salina, sin tratamiento).
[0544] Se analizó a continuación el efecto de los compuestos sobre los niveles de tau fosforilado (p-tau) en las mismas muestras, otro marcador de AD, utilizando un anticuerpo fosfo-específico (AT8) que reconoce epítopos hiperfosforilados en Ser202/Thr205. En este caso, la CE50 indicada, Tabla 2 (a continuación), significa una disminución del 50 % en los niveles de pTau sobre basal (solución salina, sin tratamiento).
5 [0545] Además, recientemente se ha descrito que HDAC6 podría ser una diana molecular adecuada para el desarrollo de estrategias terapéuticas novedosas contra AD. La inhibición de los niveles de HDAC6 mejoró el deterioro de la α-tubulina acetilada y la formación de memoria asociativa y espacial en AD. Por lo tanto, a continuación se midieron los niveles de α-tubulina acetilada en las neuronas Tg2576 después del tratamiento. En
10 este caso, la CE50 indicada, Tabla 2 (a continuación), significa un aumento del 50 % en los niveles de α-tubulina acetilada sobre basal (solución salina, sin tratamiento).
[0546] Para analizar los fragmentos derivados de APP y los niveles de p-tau en cultivos neuronales primarios, las células se recogieron en un tampón que contenía SDS (2 %), Tris-HCl (10 mM, pH 7,4), inhibidores de proteasa
15 (PMSF 1 mM y Cóctel Completo de Inhibidores de Proteasa: Roche Diagnostics) e inhibidores de fosfatasa (Na3VO4 0,1 mM y NaF 1 mM). Los homogeneizados se sonicaron durante 2 min y se centrifugaron a 100.000 x g durante 1 h. Las alícuotas se congelaron del sobrenadante a -80 ºC y sus concentraciones de proteína se determinaron mediante el método de Bradford usando el ensayo de proteína Bio-Rad (Bio-Rad, Hercules, CA, Estados Unidos). Se mezclaron alícuotas de los extractos de proteína con tampón de muestra XT más agente reductor de XT (Bio
20 Rad, Hercules, CA, Estados Unidos) y se hirvieron durante 5 min. Las proteínas se separaron en un gel prefabricado de gradiente de Bis-Tris al 4-12 % prefabricado Criterion (Bio-Rad, Hercules, CA, Estados Unidos) y se transfirieron a una membrana de PVDF con un grado de eliminación de 0,2 mm (Hybond LFP, Amersham Biosciences, Little Chalfont, Reino Unido). Las membranas se bloquearon con leche al 5 %, Tween-20 al 0,05 % en PBS o TBS, y se incubaron durante la noche con los siguientes anticuerpos primarios en los tampones correspondientes: anti-fosfatau
25 AT8 monoclonal de ratón (Pierce Biotechnology Inc., Rockford), anti-tau monoclonal de ratón (clon Tau46, Sigma-Aldrich, St Louis, MO), anticuerpo monoclonal de ratón 6E10 (aminoácidos 1-17 del péptido Aβ; Millipore), anti-βactina monoclonal de ratón, anti-α-tubulina monoclonal de ratón y anti-tubulina acetilada monoclonal de ratón (Sigma). Todos los anticuerpos se utilizaron en diluciones de 1:1.000, excepto para anti-β-actina monoclonal de ratón, anti-tubulina acetilada y la anti tubulina (1:50.000). Después de dos lavados en TBS/Tween20 y un lavado en
30 TBS en solitario, se detectaron bandas de proteína inmunomarcadas usando anticuerpos anti-conejo o anti-ratón conjugados con HRP (diluidos 1:5.000: Santa Cruz). La unión se visualizó mediante quimioluminiscencia mejorada (ECL, GE Healthcare Bioscience, Buckinghamshire, Reino Unido) y exposición autorradiográfica a Hyperfilm ECL (GE Healthcare Bioscience), utilizando el software Quantity OneTM v.4.6.3 (Bio-Rad) para la cuantificación.
35 [0547] La Tabla 2 muestra la respuesta funcional en cultivos primarios (CE50); donde, N.E. significa Sin efecto, CE50 ≥10 µM (+), 1 µM ≤ CE50 < 10 µM (++), 10 nM ≤ CE50 < 1 µM (+++) y CE50 < 10 nM (++++), También se incluyeron un inhibidor de PDE5 conocido (Tadalafilo), así como el inhibidor de HDAC (Vorinostat) como referencias.
Tabla 2
Ejemplo
pCREBa AcH3a pTaub AcTubb C99b
Tadalafilo
+++ N.E. +++
Vorinostat
N.E. +++ +++ +++
1-06
+++ +++ +++ +++
1-12
+++ +++
1-15
+++ +++ +++ +++
1-16
+++ +++ +++ +++ +++
1-19
+++ +++ +++ +++ +++
1-25
++ +++
1-29
++ ++
1-30
+++ +++
1-40
++ +++
1-48
+++ +++
2-07
+++ +++
adatos obtenidos a partir de neuronas de tipo silvestre,bdatos obtenidos a partir de neuronas Tg2576.
[0548] Como puede verse en la tabla anterior, los compuestos ensayados de la invención muestran una doble actividad funcional en neuronas primarias, de ratones de tipo silvestre y Tg2576, que pueden desempeñar un papel crítico para el tratamiento de AD y no se logra por compuestos de referencia (Tadalafilo y Vorinostat).
Actividad in vivo
[0549] Para determinar la capacidad de los compuestos para inhibir HDAC y PDE en el cerebro, el compuesto se administró a ratones de tipo silvestre por i.p. a una dosis de 40 mg/kg (n = 3). Otro grupo de animales 5 recibió el vehículo (1/1/8, v:v:v, DMSO/Tween 20/solución salina). Una hora más tarde, los ratones fueron sacrificados por dislocación cervical y su hipocampo se diseccionó rápidamente de los cerebros. Se obtuvieron homogenados totales de tejido homogeneizando el hipocampo en un tampón de lisis frío con inhibidores de proteasa (NaCl 0,2 M, HEPES 0,1 M, glicerol al 10 %, NaF 200 mM, Na4P2O7 2 mM, EDTA 5 mM, EGTA 1 mM, DTT 2 mM, PMSF 0,5 mM, Na3VO4 1 mM y cóctel completo de inhibidor de proteasa, Roche Diagnostics). El homogenado se
10 centrifugó entonces a 14.000 x g a 4 ºC durante 20 min y el sobrenadante se alicuotó y se almacenó a -80 ºC. Las concentraciones totales de proteína se determinaron usando el ensayo de proteína (BioRad Laboratories). Las muestras de proteína se analizaron como se describe en la sección "in vitro".
[0550] Marcadores relacionados con AD (procesamiento de APP, pTau y tubulina acetilada) en ratones
15 Tg2576. Los efectos de los compuestos se analizaron también en ratones Tg2576 después de un tratamiento crónico (3-5 semanas) utilizando homogeneizados de hipocampo obtenidos en un tampón que contenía SDS (2 %) y siguiendo el mismo protocolo descrito en los estudios in vitro.
[0551] La Tabla 3 muestra un aumento en la respuesta biológica frente a inicial (sin tratamiento); por lo tanto,
20 inicial x1 se refiere a sin aumento (+), inicial x1 ≤ (++) < inicial x2, inicial x2 ≤ (+++) < inicial x3, inicial x3 ≤ (++++) < inicial x4 e inicial x4 ≤ (+++++). N.E. significa Sin efecto. También se incluyeron un inhibidor de PDE5 conocido (Tadalafil), así como el inhibidor de HDAC (Vorinostat) como referencias.
Tabla 3
Ejemplo
pCREBa AcH3a pTaub AcTubb C99b
Tadalafilo
+++ N.E. +++
Vorinostat
N.E. +++
1-06
+++ +++
1-12
+++ ++
1-15
+ +
1-16
+ ++
1-19
+++ +++
adatos obtenidos a partir de ratones de tipo silvestrebdatos obtenidos a partir de ratones Tg2576
25 [0552] Como puede verse en la tabla anterior, los compuestos ensayados de la invención muestran una actividad dual funcional in vivo que puede desempeñar un papel crítico para el tratamiento de AD y no se logra por compuestos de referencia (Tadalafilo y Vorinostat).
30 Farmacocinética
[0553] Se recogieron muestras de plasma y cerebro para medir concentraciones de compuestos en tiempos predeterminados de cuatro ratones de tipo silvestre por punto. Se midieron tres puntos de tiempo: 0,25, 0,5 y 1,0 hora. La concentración de los compuestos se midió utilizando un espectrómetro de masas de cuatro polos triple MS
35 Xevo-TQ con una fuente de ionización por electropulverización (ESI) y Acquity UPLC (Waters, Manchester, Reino Unido).
Preparación de la dosis y administración de la dosis:
40 [0554] Se prepararon soluciones de compuestos disolviendo las muestras en DMSO y esta solución se preparó hasta un volumen final por adición de una mezcla de Tween 20 y NaCl al 0,9 % (1/1/8, v:v:v, DMSO/Tween 20/solución salina). Los compuestos se inyectaron como una sola inyección intraperitoneal. Los animales fueron sacrificados por decapitación.
45 Recogida de muestras:
[0555] Plasma. Se recogió sangre en tubos que contenían EDTA y el plasma se recogió por centrifugación (4 ºC, 13200 rpm, 5 min) y se almacenó a -80 ºC hasta su análisis. Cerebro. Los cerebros se recogieron inmediatamente después de la muerte de los ratones. Se hicieron incisiones en
50 los cerebros, se pesaron y se congelaron a -80 °C hasta el proceso posterior para el análisis.
Cromatografía:
[0556] La separación cromatográfica se realizó por elución en gradiente a 0,4 ml/min utilizando una columna Acquity UPLC BEH C18 (100 x 2,1 mm, 1,7 µm de tamaño de partícula; Waters). La fase móvil consistió en A: agua
5 con ácido fórmico al 0,1 %, B: metanol con ácido fórmico al 0,1 %. Después de 1,5 min en la condición inicial del 95 % de A, el disolvente B se aumentó del 5 % al 100 % durante 2 min, se mantuvo al 100 % durante 1,5 min, luego se aplicó un gradiente lineal a las condiciones iniciales durante 0,1 min y se mantuvo durante 3,4 minutos para volver a equilibrar la columna, dando un tiempo de ciclo de 8,5 min. La temperatura del muestreador automático se ajustó a 10 ºC y la temperatura de la columna a 45 ºC.
Espectrometría de Masas:
[0557] Los compuestos se controlaron usando un espectrómetro de masas de cuadrupolo triple equipado con una interfaz de ionización por electropulverización. Para la detección y cuantificación, se utilizó una tensión capilar
15 de 3,5 kV y una tensión de cono de 38 V. Las temperaturas de origen y de desolvatación fueron 150 ºC y 650 ºC, respectivamente. Se utilizó nitrógeno de ultra alta pureza para el gas de cono (75 l, h-1) y gas de desolvatación (1000 l h-1). La ionización por electropulverización funcionó en el modo positivo, y el gas de colisión utilizado fue argón ultra-puro a un caudal de 0,15 ml min-1 .
20 Cuantificación y preparación de la muestra:
[0558] La cuantificación se logró mediante calibración externa utilizando patrones de matriz. Las concentraciones se calcularon utilizando una regresión lineal de mínimos cuadrados ponderada (W = 1/x). Se prepararon patrones de calibración añadiendo el volumen apropiado de soluciones diluidas del compuesto (hecho en 25 una mezcla de metanol y agua, 50:50, v:v) a alícuotas de 50 ul de plasma blanco o a 75 mg de cerebro blanco homogeneizado. Se añadió ácido fórmico al 2 % en acetonitrilo para precipitar las proteínas. Después, la mezcla se agitó durante 10 min y se centrifugó a 13200 rpm durante 5 min a 4 ºC. Los sobrenadantes resultantes se transfirieron a una placa Ostro (Waters, Manchester, Reino Unido), diseñada para eliminar fosfolípidos. Los eluyentes resultantes se evaporaron a 37 ºC bajo una corriente de nitrógeno. Los residuos se disolvieron en 75 μl de 30 una mezcla de metanol y agua (50:50, v:v). Se inyectó una alícuota de 10 ul de la solución resultante en el sistema LC-MS/MS para análisis. Las muestras de plasma congeladas se descongelaron a temperatura ambiente, se agitaron vorticialmente a fondo y se sometieron al procedimiento de extracción descrito anteriormente. Las muestras cerebrales se descongelaron sin ayuda a temperatura ambiente y se homogeneizaron usando un sonificador ultrasónico Branson 250 (Branson, Danbury, Connecticut, Estados Unidos). Cuando se homogeneizaron, se
35 ponderaron 75 mg y se extrajeron como se describió anteriormente.
Resultados
[0559] Los valores de concentración obtenidos a partir de los análisis de LC-MS/MS se describen en la Tabla
40 4. La Tabla 4 muestra el momento en el que se produce la concentración máxima en el cerebro, la concentración plasmática y cerebral en ese momento y la relación cerebro/plasma para los compuestos. La adosificación fue de 20 mg/kg, la bdosificación era de 40 mg/kg.
Tabla 4
Compuesto
tMáx (h) CMáx (plasma; nM) CMáx (cerebro; nmol/Kg) Relación cerebro/plasma (%) ¿Cruza BBB?
1-06a
0,25 283 (37)c 5,8 (1,8)c 2,0 Sí
1-12b
0,25 1881 (168)c 71,3 (19,5)c 3,8 Sí
1-15a
0,25 653 (83)c 29 (8)c 4,4 Sí
1-16a
0,50 11810 (1042)c 102(7)c 0,9 Sí
1-19b
0,25 15782 (3898)c 609 (178)c 3,9 Sí
cValor de desviación estándar
45 [0560] Como puede verse en la tabla anterior, los compuestos ensayados de la invención atraviesan la barrera hematoencefálica y alcanzan el cerebro con una concentración efectiva, como se ha confirmado anteriormente en la Tabla 3 (respuesta funcional).
50 REFERENCIAS CITADAS EN LA DESCRIPCIÓN
[0561]
Green and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, Wiley, 3ª ed. 1999, Capítulo 2, pp. 17-200
55 and Chapter 5, pp. 369-451. WO 2008/024494 WO2012/020022 M. Cuadrado-Tejedor et al., "Sildenafil restores cognitive function without affecting β-amyloid burden in a mouse mode of Alzheimer's disease", British Journal of Pharmacology 2011, vol. 164, n.º 8, pages 2029-2041. WO 2004/101567 EP2535049
5 Sh Chen et al., "Suberoylanilide hydroxoxamic acid, a histone deacetylase inhibitor, protects dopaminergic neurons from neurotoxin-induced damage", British Journal of Pharmacology 2012, vol. 165, n.º 2, pages 494-505.

Claims (12)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o cualquier estereoisómero o mezclas del mismo, o bien del compuesto de fórmula (I) o de cualquiera de sus sales farmacéuticamente aceptables,
    donde
    B1 es un radical seleccionado del grupo que consiste en la fórmula (A"), fórmula (B"), fórmula (C"), y la fórmula (D"):
    (B'')
    (A'')
    Z2
    (Z3) n p
    O
    O
    R 2
    HN
    N
    Z1 (Z2)r
    N N (Z3)n
    p
    R1
    O
    (C'')
    35
    (D'')
    p, n y r son independientemente 0 o 1;
    R1
    y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H; alquilo (C1-C7) saturado o
    insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; y un anillo monocíclico de 3 a 7 miembros carbocíclico o heterocíclico, que está saturado o parcialmente insaturado o aromático, y que está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre halógeno y alquilo (C1-C3); Z1 es un biradical seleccionado del grupo que consiste en una fórmula (E), fórmula (F"), fórmula (G'), fórmula (H'), fórmula (J'), y fórmula (K):
    O (Z4)m
    SO2
    SO2NR10 (Z4)m
    q
    q
    (E) (F'') (G')
    Z2 se selecciona entre el grupo que consiste en -Z5-; -Z5-Cy4-; -Z5-Cy4-Z5-; y -Cy4-; Z3 y cada Z5 son independientemente un biradical de un alquilo (C1-C6) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno;
    Z4 es un biradical de un alquilo (C1-C6) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre halógeno, OH, y -Oalquilo (C1-C3) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; o como alternativa Z4 es -CR11R12-, donde R11 y R12 junto con el carbono al que están unidos forman C=O o un anillo monocíclico carbocíclico o heterocíclico de 3 a 7 miembros, que está saturado
    5 o parcialmente insaturado, y que está opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno o alquilo (C1-C3) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; q y m son independientemente 0 ó 1; Cry1 Cy3 y Cy4 son independientemente fenilo o un anillo monocíclico carbocíclico o heterocíclico de 3 a 7 miembros, que está saturado o parcialmente insaturado o aromático, y que está opcionalmente sustituido con uno o más grupos R3; o como alternativa Cy1 es un anillo monocíclico saturado o parcialmente insaturado heterocíclico de 3 a 7 miembros, que está condensado, puenteado condensado o espiro-condensado a un anillo monocíclico carbocíclico o heterocíclico de 3 a 7 miembros saturado o parcialmente insaturado, donde Cy1 está opcionalmente sustituido con uno o más grupos R3;
    15 Cy2 es un anillo monocíclico saturado o parcialmente insaturado heterocíclico de 3 a 7 miembros unido a N, que está opcionalmente condensado, puenteado condensado o espiro-condensado a un anillo monocíclico carbocíclico o heterocíclico de 3 a 7 miembros saturado o parcialmente insaturado, donde Cy2 está opcionalmente sustituido con uno o más grupos R3; R3 se selecciona entre halógeno; alquilo (C1-C7) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; -Oalquilo (C1-C7) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; y un anillo monocíclico de 3 a 7 miembros carbocíclico o heterocíclico, que está saturado o parcialmente insaturado o aromático, y que está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre el grupo que consiste en halógeno y alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno;
    25 R4 y R10 independientemente H o alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; y donde en cualquier anillo heterocíclico uno o más de los miembros de anillo se seleccionan entre NH, N, O, y S; donde en todos los anillos saturados o parcialmente insaturados uno o dos miembros de los anillos son opcionalmente C(=O) y/o C(=NH) y/o C[=Nalquilo (C1-C4)], donde alquilo saturado se refiere a una cadena hidrocarburo lineal o ramificada que contiene únicamente enlaces sencillos; y alquilo insaturado se refiere a una cadena hidrocarburo lineal o ramificada que contiene uno o dos dobles enlaces y/o uno o dos triples enlaces; donde en cualquier grupo alquilo uno o dos miembros de la cadena seleccionados entre CH2 o CH se
    35 reemplazan opcionalmente por miembros de la cadena seleccionados independientemente entre N, NR4, O, C(=O), C(=O)NR4, NR4C(=O), y S; y con la condición de que el resto (L1) de la fórmula (A"), fórmula (B"), y fórmula (C"), y el resto (L2) de la fórmula (D")
    tengan una longitud de cadena comprendida de 1 a 20 átomos.
  2. 2. El compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, donde B1 es un radical de fórmula (A"). 45
  3. 3.
    El compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, donde B1 es un radical de fórmula (B").
  4. 4.
    El compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, donde B1, es un radical de fórmula (C").
  5. 5.
    El compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 2-4, donde R1, se selecciona del grupo que consiste en alquilo (C1-C4) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno, un anillo carbocíclico de 5 a 6 miembros saturado opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre halógeno y alquilo (C1-C3), y un anillo heterocíclico de 5 a 6 miembros saturado opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre halógeno y alquilo (C1-C3).
  6. 6.
    El compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 2-5, donde R2 es H o alquilo (C1-C4) saturado o insaturado opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno.
  7. 7.
    El compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 2-6, donde Z1 es un biradical seleccionado del grupo que consiste en una fórmula (E), fórmula (G'), y fórmula (H').
  8. 8.
    El compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, donde B1 es un radical de fórmula (D").
  9. 9.
    El compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 2 ó 5-7, que es un compuesto de fórmula (IA):
    donde R3' es H o R3.
    10 10. El compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 3 ó 5-7, que es un compuesto de fórmula (IB):
    15 donde R3' es H o R3.
  10. 11. El compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 4-7, que es un compuesto de fórmula (ICIII
    o un compuesto de fórmula (ICIV):
    donde R3' es H o R3 y R5 se selecciona del grupo que consiste en: H, halógeno, y alquilo (C1-C4) opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno.
  11. 12. El compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 8, que es un compuesto de fórmula (ID): donde R3' es H o R3.
    5 13. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula (I) como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-12, junto con uno o más excipientes o portadores farmacéuticamente aceptables.
    14 Un compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1-12 o una composición farmacéutica 10 según la reivindicación 13, para su uso en el tratamiento y/o prevención de un trastorno neurológico que cursa con un déficit o deterioro cognitivo, o una enfermedad neurodegenerativa.
  12. 15. Un compuesto de fórmula (I) o una composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 14, donde la
    enfermedad neurodegenerativa es enfermedad de Alzheimer. 15
    REFERENCIAS CITADAS EN LA DESCRIPCIÓN
    Esta lista de referencias citadas por el solicitante es únicamente para la comodidad del lector. No forma parte del documento de la patente europea. A pesar del cuidado tenido en la recopilación de las referencias, no se pueden excluir errores u omisiones y la EPO niega toda responsabilidad en este sentido.
    Documentos de patentes citados en la descripción
    •
    WO2008024494A [0010] [0525] [0561]
    •
    WO2012020022A [0011] [0528] [0561]
    •
    WO2004101567A [0013] [0561]
    •
    EP2535049A [0014] [0561]
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    M. CUADRADO-TEJEDOR et al.British Journal of Pharmacology, 2011, vol. 164, 82029-2041 [0012]
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    T. W. GREENP. G. M. WUTS. Protective Groups in Organic ChemistryWiley1999000017-200 [0109]
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    •
    PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC CHEMISTRY369-451 [0561]
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