ES2619590T3

ES2619590T3 - Biomarcadores de plasma sanguíneo para terapias de combinación con bevacizumab para el tratamiento de cáncer de mama

Info

Publication number: ES2619590T3
Application number: ES11746191.3T
Authority: ES
Inventors: Sanne Lysbet De Haas; Paul Delmar; Dorothee Foernzler; Ursula Klause; Stefan Scherer
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 2010-07-19
Filing date: 2011-07-18
Publication date: 2017-06-26
Anticipated expiration: 2031-07-18
Also published as: JP6055764B2; US20130121999A1; CN103109188A; AU2011281706A1; CA2804350A1; HK1184854A1; US20130183303A1; JP2013534308A; RU2013106938A; US20130183302A1; MX343801B; NZ603780A; KR20130091750A; HK1217093A1; SG187013A1; WO2012010552A1; EP2596363A1; CN105327347A; EP3156800A1; EP2596363B1

Abstract

Un método in vitro para la identificación de un paciente con capacidad de respuesta o sensible a la adición de un tratamiento de bevacizumab a un régimen de quimioterapia, comprendiendo dicho método determinar el nivel de expresión de las proteínas VEGFA y VEGFR2 o VEGFA y PLGF en una muestra de plasma sanguíneo de un paciente que se sospecha que padece, o que es propenso a padecer, cáncer de mama, mediante el cual un nivel de expresión combinada aumentado de VEGFA y de VEGFR2 o de VEGFA y de PLGF con respecto a niveles de expresión combinada de control determinados en pacientes que padecen cáncer de mama, es indicativo de una sensibilidad del paciente a la adición de bevacizumab a dicho régimen de quimioterapia.

Description

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Adicionalmente en el presente documento se describe un método para mejorar la supervivencia sin progresión de un paciente que padece cáncer de mama añadiendo bevacizumab a un régimen de quimioterapia, comprendiendo dicho método:

(a): determinar el nivel de expresión de las proteínas VEGFA y PLGF en una muestra del paciente; y

(b): administrar bevacizumab en combinación con el régimen de quimioterapia al paciente que tiene un nivel de expresión combinada aumentado de VEGFA y PLGF con respecto a un nivel de expresión combinada de control determinado en pacientes diagnosticados con cáncer de mama.

El cáncer de mama puede ser cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado, recurrente o metastásico. El régimen de quimioterapia puede comprender terapia con taxano, tal como terapia con docetaxel o paclitaxel. La dosis del bevacizumab administrada puede ser una dosis alta o baja de bevacizumab.

En el presente documento también se describe un método para mejorar la supervivencia sin progresión de un paciente que padece cáncer de mama añadiendo bevacizumab a un régimen de quimioterapia, comprendiendo dicho método:

(a): obtener una muestra de dicho paciente;

(b): determinar el nivel de expresión de las proteínas VEGFA y PLGF; y

(c): administrar bevacizumab en combinación con el régimen de quimioterapia al paciente que tiene un nivel de expresión combinada aumentado de VEGFA y PLGF con respecto a un nivel de expresión combinada de control determinado en pacientes diagnosticados con cáncer de mama.

Adicionalmente en el presente documento se describe un método para mejorar la supervivencia sin progresión de un paciente que padece cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado, recurrente o metastásico añadiendo bevacizumab a un régimen de quimioterapia, comprendiendo dicho método:

(a): determinar el nivel de expresión de las proteínas VEGFA y PLGF en una muestra de paciente; y

(b): administrar bevacizumab en combinación con el régimen de quimioterapia al paciente que tiene un nivel de expresión combinada aumentado de VEGFA y PLGF con respecto a un nivel de expresión combinada de control determinado en pacientes diagnosticados con dicho cáncer de mama,

en el que el régimen de quimioterapia comprende terapia con docetaxel. La dosis de bevacizumab administrada puede ser una dosis alta o baja de bevacizumab

Adicionalmente, en el presente documento se describe un método para mejorar la supervivencia sin progresión de un paciente que padece cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado, recurrente o metastásico añadiendo bevacizumab a un régimen de quimioterapia, comprendiendo dicho método:

(a): obtener una muestra de dicho paciente;

(b): determinar el nivel de expresión de las proteínas VEGFA y PLGF; y

(c): administrar bevacizumab en combinación con el régimen de quimioterapia al paciente que tiene un nivel de expresión combinada aumentado de VEGFA y PLGF con respecto a un nivel de expresión combinada de control determinado en pacientes diagnosticados con dicho cáncer de mama,

en el que el régimen de quimioterapia comprende terapia con docetaxel. La dosis del bevacizumab administrada puede ser una dosis alta o baja de bevacizumab.

La presente invención proporciona un método in vitro para la identificación de un paciente receptivo o sensible a la adición de tratamiento con bevacizumab a un régimen de quimioterapia, comprendiendo dicho método determinar el nivel de expresión de las proteínas VEGFA y VEGFR2 o de VEGFA y PLGF en una muestra de plasma sanguíneo de un paciente que padece, se sospecha que padece o que es propenso a padecer cáncer de mana, en particular cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado, recurrente o metastásico, mediante el cual un nivel de expresión aumentado de VEGFA y VEGFR2 o de VEGFA y PLGF con respecto a niveles de expresión combinada de control determinados en pacientes que padecen cáncer de mama, en particular cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado, recurrente o metastásico es indicativo de una sensibilidad del paciente a la adición de bevacizumab a dicho régimen de quimioterapia. El régimen de quimioterapia puede comprender terapia con taxano, tal como terapia con docetaxel o paclitaxel.

Por consiguiente, el método in vitro para la identificación de un paciente receptivo o sensible a la adición de tratamiento con bevacizumab a un régimen de quimioterapia, como se describe en el presente documento, comprende:

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(a): obtener una muestra de plasma sanguíneo de un paciente que padece, se sospecha que padece o que es propenso a padecer cáncer de mama, cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado, recurrente o metastásico; y

(b): determinar el nivel de expresión de las proteínas VEGFA y VEGFR2 o VEGFA y PLGF;

mediante el cual un nivel de expresión aumentado de VEGFA y VEGFR2 o de VEGFA y PLGF con respecto a los niveles de expresión de control determinados en pacientes que padecen de cáncer de mama, en particular cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado, recurrente o metastásico es indicativo de una sensibilidad del paciente a la adición de bevacizumab a dicho régimen de quimioterapia. El régimen de quimioterapia puede comprender la terapia con taxano, tal como terapia con docetaxel o paclitaxel.

La presente invención proporciona un método in vitro para la identificación de un paciente receptivo o sensible a la adición de tratamiento con bevacizumab a un régimen de quimioterapia, comprendiendo dicho método determinar el nivel de expresión de las proteínas VEGFA y VEGFR2 en una muestra de plasma sanguíneo de un paciente que padece, o se sospecha que padece o que es propenso a padecer, cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado, recurrente o metastásico, por lo que un nivel de expresión combinada aumentado de VEGFA Y VEGFR2 con respecto a los niveles de expresión combinada de control determinados en pacientes que padecen cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado, recurrente o metastásico es indicativo de una sensibilidad del paciente a la adición de bevacizumab a dicho régimen de quimioterapia. El régimen de quimioterapia puede comprender terapia con taxano, tal como terapia con docetaxel o paclitaxel.

La presente invención proporciona un método in vitro para la identificación de un paciente receptivo o sensible a la adición de tratamiento con bevacizumab a un régimen de quimioterapia, comprendiendo dicho método determinar el nivel de expresión de las proteínas VEGFA y PLGF en una muestra de plasma sanguíneo de un paciente que padece, se sospecha que padece o es propenso a padecer, cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado, recurrente o metastásico, mediante el cual un nivel de expresión combinada aumentado de VEGFA y PLGF con respecto a niveles combinados de control determinados en pacientes que padecen cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado, recurrente o metastásico es indicativo de una sensibilidad del paciente a la adición de bevacizumab a dicho régimen de quimioterapia. El régimen de quimioterapia puede comprender terapia con taxano, tal como terapia con docetaxel o paclitaxel.

Por consiguiente, la presente invención resuelve el problema técnico identificado ya que, sorprendentemente, se descubrió que los niveles de expresión específicos en plasma sanguíneo de VEGFA y VEGFR2 o de VEGFA y PLGF en un paciente determinado, con respecto a niveles de control determinados en pacientes diagnosticados con cáncer de mama, en particular cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado, recurrente o metastático, se correlaciona con el efecto del tratamiento en los pacientes a los que se administra un inhibidor de la angiogénesis en combinación con un régimen de quimioterapia. Específicamente, las variaciones en los niveles de expresión de las proteínas de VEGFA y VEGFR2 o de VEGFA y PLGF fueron identificados, sorprendentemente, como marcadores/indicadores de la supervivencia sin progresión aumentada de pacientes con cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado, recurrente o metastásico en respuesta a la adición de bevacizumab (Avastin®) al régimen de quimioterapia de la terapia con docetaxel. Se identificaron pacientes que mostraban una respuesta o sensibilidad a la adición de bevacizumab (Avastin®) a los regímenes de quimioterapia, que tenían un nivel de expresión de proteínas de VEGFA y VEGFR2 o de VEGFA y PLGF aumentado con respecto a los niveles de expresión de control establecidos en muestras obtenidas de pacientes diagnosticados con cáncer de mama, en particular cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado, recurrente o metastásico. Los términos “marcador” e “indicador” se pueden utilizar indistintamente y se refieren a los niveles de expresión de VEGFA y VEGFR2 o de VEGFA y PLGF como se describe en el presente documento.

La invención también incluye el uso de los términos “marcador” e “indicador” para referirse a una combinación de VEGFA y VEGFR2 o de VEGFA y PLGF.

En el contexto de la presente invención, “VEGFA” se refiere a la proteína A del factor de crecimiento endotelial vascular, ilustrada por la SEQ ID NO: 1, mostrada en la Figura 8 (Número de Registro de Swiss Prot P15692, Gene ID (NCBI): 7422). El término “VEGFA” incluye la proteína que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 así como sus homólogos e isoformas. El término “VEGFA” también incluye las isoformas conocidas, por ejemplo, isoformas de corte y empalme, de VEGFA, por ejemplo VEGF111, VEGF121, VEGF145, VEGF165, VEGF189 y VEGF206, así como sus variantes, homólogos e isoformas, incluyendo el factor de crecimiento celular endotelial vascular humano de 110 aminoácidos generado por escisión con plasmina de VEGF165 como se describe en Ferrara Mol. Biol. Cell 21: 687 (2010), en Leung et al. Science 246: 1306 (1989) y en Houck et al. Mol. Endocrin. 5: 1806 (1991). En una realización particular de la presente invención, “VEGFA” se refiere a VEGF121 y/o a VEGF110. En una realización particular de la presente invención, “VEGFA” se refiere a VEGF111. En el contexto de la invención, el término “VEGFA” también incluye proteínas que tienen una homología de al menos 85 %, al menos 90 % o al menos 95 % con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, o con las secuencias de aminoácidos de las variantes y/u homólogos de las mismas, así como con fragmentos de las secuencias, siempre que las proteínas variantes (incluyendo isoformas), proteínas homólogas y/o fragmentos sean reconocidos por uno o más anticuerpos específicos de VEGFA, tal como los clones de anticuerpo 3C5 y 26503, que están disponibles en Bender RELIATech

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y R&D Systems, respectivamente y A4.6.1 como se describe en Kim et al., Growth Factors 7 (1): 53-64 (1992). En el contexto de la invención, el término “isoforma” de VEGF o VEGF-A se refiere tanto a isoformas de corte y empalme como a formas generadas por escisión enzimática (por ejemplo, plasmina).

En una realización, “VEGFA” se refiere a VEGF no modificado. En el contexto de la presente invención, VEGF “no modificado” se refiere a la secuencia de aminoácidos no modificada de VEGF, a sus isoformas y a sus productos de escisión. El VEGF no modificado puede producirse, por ejemplo, sintéticamente o, preferentemente, de manera recombinante en sistemas de expresión procariotas, por ejemplo, en E. coli. El VEGF no modificado no lleva, por ejemplo, una modificación postraduccional, como una glucosilación. En el contexto de la invención, la expresión “VEGF-A no modificado” también incluye sus variantes y/u homólogos, así como fragmentos de VEGF-A, a condición de que las proteínas variantes (incluyendo isoformas), proteínas y/o fragmentos sean reconocidos por anticuerpos específicos de VEGF-A no modificado, tal como el clon de anticuerpo 3C5, que está disponible en RELIATech GmbH, Wolfenbüttel, Alemania.

En el contexto de la presente invención, “VEGFR2” se refiere al receptor 2 del factor de crecimiento endotelial vascular, ilustrado por SEQ ID NO: 2, mostrado en la Figura 9 (Número de Registro de Swiss Prot P35968, Gene ID (NCBI): 3791). El término “VEGFR2” incluye la proteína que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 así como sus homólogos e isoformas. En el contexto de la invención, el término “VEGFR2” también incluye proteínas que tienen una homología de al menos 85 %, al menos 90 % o al menos 95 % con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, o con las secuencias de aminoácidos de sus variantes y/u homólogos, así como con fragmentos de las secuencias, siempre que las proteínas variantes (incluyendo las isoformas), las proteínas homólogas y/o los fragmentos sean reconocidos por uno o más anticuerpos específicos de VEGFR2, tal como los clones de anticuerpo 89115 y 89109, ambos disponibles en R&D Systems.

En el contexto de la presente invención, “PLGF” se refiere al factor de crecimiento placentario, ilustrado por SEQ ID NO: 3, mostrado en la Figura 10 (Número de Registro de Swiss Prot P49763, Gene ID (NCBI): 5228). El término “PLGF” incluye la proteína que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 así como sus homólogos e isoformas. En el contexto de la invención, el término “PLGF” también incluye proteínas que tienen una homología de al menos 85 %, al menos 90 % o al menos 95 % con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3, o con las secuencias de aminoácidos de sus variantes y/u homólogos, así como con fragmentos de las secuencias, siempre que las proteínas variantes (incluyendo las isoformas), las proteínas homólogas y/o los fragmentos sean reconocidos por uno o más anticuerpos específicos de PLGF, tal como los clones de anticuerpo 2D6D5 y 6A11D2, ambos disponibles en Roche Diagnostics GmbH.

Por consiguiente, la presente invención incluye la determinación de niveles de expresión de proteínas que incluyen, pero sin limitación, las secuencias de aminoácidos como las descritas en el presente documento. En este contexto, la invención incluye la detección de homólogos, variantes e isoformas de VEGFA y VEGFR2 o de VEGFA y PLGF; pudiendo dichas isoformas o variantes, entre otras cosas, comprender variantes alélicas o variantes de corte y empalme. También se contempla la detección de proteínas que son homólogas a VEGFA, VEGFR2 y/o PLGF como se describe en el presente documento, o a un fragmento de las mismas, que tienen, por ejemplo, al menos 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, 96 % 97 %, 98 % o 99 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 3 o con un fragmento de las mismas. Como alternativa o adicionalmente, la presente invención incluye la detección de los niveles de expresión de proteínas codificadas por secuencias de ácido nucleico, o sus fragmentos, que son al menos 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % idénticos a una secuencia de ácido nucleico que codifica la SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 3 o un fragmento, variante o isoforma de las mismas. En este contexto, el término “variante” significa que la secuencia de aminoácidos de VEGFA, VEGFR2 y/o PLGF, o la secuencia de ácido nucleico que codifica dicha secuencia de aminoácidos, se diferencia de las secuencias distintas identificadas por las SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 3 y/o disponibles con los números de Registro de Swiss Prot anteriormente identificados, por mutaciones, por ejemplo, deleciones, adiciones, sustituciones, inversiones, etc. Además, el término “homólogo” se refiere a moléculas que tienen una identidad de secuencia de al menos 60 %, más preferentemente de al menos 80 % y aún más preferentemente de al menos 90 % con uno o más de los polipéptidos como se muestra en las SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 3, o con uno o más de sus fragmentos.

Para determinar si una secuencia de aminoácidos o de ácidos nucleicos tiene un cierto grado de identidad con una secuencia de aminoácidos o de ácidos nucleicos, como de describe en el presente documento, el experto puede usar medios y métodos muy conocidos en la técnica, por ejemplo, alineamientos, ya sea manualmente o usando programas informáticos conocidos en la técnica o descritos en el presente documento.

De acuerdo con la presente invención, el término “idéntico” o la expresión “porcentaje de identidad” en el contexto de dos o más secuencias de aminoácidos o de ácidos nucleicos, se refiere a dos o más secuencias o subsecuencias que son iguales, o que tienen el mismo porcentaje de restos de aminoácidos o de nucleótidos especificado (por ejemplo, 60 % o 65 % de identidad, preferentemente, 70-95 % de identidad, más preferentemente al menos 95 % de identidad con las secuencias de aminoácidos de, por ejemplo, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 3), cuando se comparan y alinean para obtener una correspondencia máxima sobre una ventana de comparación, o sobre una región designada, medido usando un algoritmo de comparación de secuencias como se sabe en la

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técnica, o por alineamiento manual e inspección visual. Las secuencias que tienen, por ejemplo, una identidad de 60 % a 95 % o mayor, se consideran sustancialmente idénticas. Dicha definición también se aplica al complemento de una secuencia de ensayo. Preferentemente la identidad descrita existe sobre una región que tiene una longitud de al menos aproximadamente 15 a 25 aminoácidos o nucleótidos, más preferentemente, sobre una región que tiene una longitud de aproximadamente 50 a 100 aminoácidos o nucleótidos. Los expertos en la técnica sabrán como determinar el porcentaje de identidad entre secuencias usando, por ejemplo, algoritmos tales como los basados en el programa informático CLUSTALW (Thompson Nucl. Acids Res. 2 (1994), 4673-4680) o FASTDB (Brutlag App. Biosci. 6 (1990), 237-245), como se conoce en la técnica.

Aunque normalmente el algoritmo FASTDB no considera en su cálculo deleciones o adiciones no coincidentes internas en las secuencias, es decir, huecos, esto puede corregirse manualmente para evitar una sobreestimación del % de identidad. Sin embargo, en sus cálculos de identidad CLUSTALW tiene en cuenta los huecos de secuencia. Los expertos en esta técnica también disponen de los algoritmos BLAST (por sus siglas en inglés Basic Local Alignment Search Tool, herramienta básica de búsqueda de alineamientos locales) y BLAST 2.0 (Altschul, 1997, Nucl. Acids Res. 25: 3389-3402, Altschul, 1993 J. Mol. Ev. 36: 290-300, Altschul, 1990, J. Mol. Biol. 215: 403-410). El programa BLASTN para secuencias de ácidos nucleicos usa por defecto una longitud de palabra (W) de 11, una expectativa (E) de 10, M = 5, N = 4 y una comparación de ambas cadenas. Para secuencias de aminoácidos el programa BLASTP usa por defecto una longitud de palabra (W) de 3 y una expectativa (E) de 10. La matriz de puntuación BLOSUM62 (Henikoff (1989) PNAS 89: 10915) usa alineamientos (B) de 50, una expectativa (E) de 10, M = 5, N = 4 y una comparación de ambas cadenas.

Los algoritmos BLAST, como se ha indicado anteriormente, producen alineaciones secuencias tanto de aminoácidos como de ácidos nucleicos para determinar la similitud de secuencia. Debido a la naturaleza local de los alineamientos, BLAST es especialmente útil para determinar coincidencias exactas o para identificar secuencias similares. La unidad fundamental del resultado del algoritmo BLAST es el Par de Segmentos de Alta puntuación (HSP, High-scoring Segment Pair). Un HSP consta de dos fragmentos de secuencias de longitudes arbitrarias pero iguales cuya la alineación es localmente máxima y para los cuales la puntuación del alineamiento alcanza o excede una puntuación umbral o límite establecida por el usuario. La estrategia BLAST es la búsqueda de los HSP entre una secuencia problema y una secuencia de la base de datos, para evaluar el significado estadístico de las coincidencias encontradas, y que informe solo de aquellas coincidencias que cumplan con el umbral o significado seleccionado. El parámetro E establece el umbral estadísticamente significativo para comunicar coincidencias de secuencias de las bases de datos. E se interpreta como el límite superior de la frecuencia de que ocurra una probabilidad esperada de un HSP (o conjunto de HSP) en el contexto de la búsqueda de toda la base de datos. Cualquier secuencia de base de datos cuya coincidencia cumpla E se informa en el resultado del programa.

Para buscar moléculas idénticas o relacionadas en bases de datos de proteínas o de nucleótidos, tales como GenBank o EMBL, Pueden usarse técnicas informáticas similares que usan BLAST. Este análisis es mucho más rápido que las hibridaciones múltiples basadas en membrana. Además, la sensibilidad de la búsqueda informática puede modificarse para determinar si cualquier emparejamiento particular se clasifica como exacto o similar. La base de la búsqueda es la puntuación del producto que se define como:

% de identidad de secuencia x % de puntuación BLAS máxima 100

y tiene en cuenta tanto el grado de similitud entre dos secuencias como la longitud del emparejamiento de las mismas. Por ejemplo, con una puntuación del producto de 40, el emparejamiento será exacto dentro de un error de 1-2 %, y con una puntuación de 70, el emparejamiento será exacto. Normalmente, se identifican moléculas similares seleccionando las que muestran puntuaciones del producto entre 15 y 40, aunque puntuaciones más bajas pueden identificar moléculas relacionadas. Otro ejemplo de un programa capaz de generar alineamientos de secuencias es el programa informático CLUSTALW (Thompson, 1994, Nucl. Acids Res. 2: 4673-4680) o FASTDB (Brutlag, 1990, Comp. App. Biosci. 6: 237-245) como se conoce en la técnica.

En el contexto de la invención descrita en el presente documento, los niveles de expresión, en particular niveles de expresión de las proteínas VEGFA, VEGFR2 y/o PLGF, pueden considerarse por separado, como marcadores individuales, o en grupos de dos o más, como un perfil de expresión o un panel de marcadores. En el contexto de la invención descrita en el presente documento, un perfil de expresión o un panel de marcadores en el que los perfiles de expresión de dos o más marcadores pueden considerarse conjuntamente, también pueden denominarse nivel de expresión combinada. Por ejemplo, los niveles de expresión de dos o más marcadores pueden añadirse conjuntamente y compararse con un nivel de expresión combinada de control determinado de manera similar. Por lo tanto, los métodos de la invención incluyen la determinación de un perfil de expresión, incluyendo un nivel de expresión combinada, basado en el nivel de expresión de uno o más de los marcadores.

En el contexto de la invención descrita en el presente documento, y de acuerdo con el ejemplo ilustrativo adjunto, para considerar VEGFA o VEGFR2 por separado, como valores correspondientes de expresión alta o baja del marcador, se utilizaron los siguientes valores: VEGFA valor Alto (≥ 125 pg/ml), VEGFA valor Bajo (<125 pg/ml), VEGFR2 nivel Alto (≥ 11 mg/ml) y VEGFR2 nivel Bajo (<11 ng/ml). Estos niveles se determinaron como la mediana

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de la muestra, de acuerdo con un plan de análisis prospectivo. Adicionalmente, los niveles optimizados que constituyen el valor límite entre la expresión alta y baja de un marcador particular, pueden determinarse modificando el límite hasta que el subconjunto de pacientes por encima y por debajo del límite cumpla un criterio de optimización estadístico relevante. Por ejemplo, puede seleccionarse un punto de corte óptimo para maximizar las diferencias en el tratamiento de razón de riesgos entre el subconjunto por encima y por debajo, o para maximizar el efecto del tratamiento en un subgrupo, o cualquier otro criterio estadístico relevante. Sin embargo, el experto entenderá que el nivel de expresión del marcador particular y, por lo tanto, lo que constituye un nivel de expresión alto o bajo, puede variar de un paciente a otro y de una población de pacientes a otra. Por consiguiente, el experto entenderá que cuando se usan métodos de detección distintos de los descritos en el ejemplo ilustrativo adjunto, y que cuando se estudian pacientes y poblaciones de pacientes distintos de los descritos en el ejemplo ilustrativo adjunto, lo que el experto considera un nivel de expresión alto y/o bajo para un biomarcador particular puede variar de los valores que se describen en el presente documento. Teniendo en cuenta los métodos descritos en el presente documento, el experto en la materia puede determinar lo que constituye un nivel de expresión alto y/o bajo de un biomarcador particular.

Como el experto en la materia apreciará, hay muchas maneras de utilizar las mediciones de dos o más marcadores para mejorar la cuestión diagnóstica que se está investigando. En una estrategia bastante sencilla, aunque no obstante a menudo efectiva, se supone que un resultado es positivo si una muestra es positiva para al menos uno de los marcadores investigados.

De acuerdo con la presente invención, se evalúa una combinación de marcadores. Los valores medidos para marcadores de un panel marcador (o un nivel de expresión combinada), por ejemplo, para VEGFA y VEGFR2 o VEGFA y PLGF o VEGFA, VEGFR2 y PLGF, pueden combinarse matemáticamente y el valor combinado puede correlacionarse con la cuestión diagnóstica subyacente. Los valores de los marcadores pueden combinarse mediante cualquier método matemático apropiado de la técnica. Se conocen bien métodos matemáticos adecuados para correlacionar una combinación de marcadores con una enfermedad o con un efecto de tratamiento que emplea métodos tales como, análisis discriminante (AD) (es decir, AD lineal, cuadrático, regularizado), métodos Kernel (es decir SVM), Métodos No Paramétricos (es decir Clasificadores de los k Vecinos más Próximos), PLS (Mínimos Cuadrados Parciales), Métodos Basados en Árboles (es decir, Regresión Logística), CART, Métodos de muestreo en bosques al azar, Métodos de Boosting/Bagging), Modelos Lineales Generalizados (es decir, Regresión Logística), Métodos Basados en Componentes Principales (es decir SIMCA), Modelos Aditivos Generalizados, Métodos Basados en Lógica Difusa, Métodos Basados en Redes Neuronales y Algoritmos Genéticos. El experto en la materia no tendrá problemas para seleccionar un método apropiado para evaluar una combinación de marcadores de la presente invención. El método usado en la correlación de combinaciones de marcadores de acuerdo con la invención desvelada en el presente documento con, por ejemplo, supervivencia global mejorada, supervivencia sin progresión, capacidad de respuesta o sensibilidad a la adición de bevacizumab a agentes quimioterapéuticos/régimen de quimioterapia y/o la predicción de una respuesta o sensibilidad a bevacizumab (en adición a uno o más agentes quimioterapéuticos/régimen quimioterapéutico) se selecciona de AD (Análisis Discriminante Lineal, Cuadrático, Regularizado), Métodos de Kernel (es decir SVM), Métodos No Paramétricos (es decir, Clasificadores de los k Vecinos Más Próximos), PLS (Cuadrados Mínimos Parciales), Métodos Basados en Árboles (es decir, Regresión Logística, CART, Métodos de Bosques al Azar, Métodos de Boosting) o Modelos Lineales Generalizados (es decir, Regresión Logística). Los detalles relativos a estos métodos estadísticos se encuentran en las siguientes referencias: Ruczinski, I., et al, J. of Computational and Graphical Statistics, 12 (2003) 475-511; Friedman, J. H., J. of the American Statistical Association 84 (1989) 165-175; Hastie, Trevor, Tibshirani, Robert, Friedman, Jerome, The Elements of Statistical Learning, Springer Series in Statistics, 2001; Breiman, L., Friedman, J. H., Olshen, R. A., Stone, C. J. (1984) Classification and regression trees, California: Wadsworth; Breiman, L., Random Forests, Machine Learning, 45 (2001) 5-32; Pepe, M. S., The Statistical Evaluation of Medical Tests for Classification and Prediction, Oxford Statistical Science Series, 28 (2003); y Duda, R. O., Hart, P. E., Stork,

D. G., Pattern Classification, Wiley Interscience, 2ª Edición (2001).

Por consiguiente, la invención descrita en el presente documento se refiere al uso de un límite multivariado optimizado de la combinación subyacente de marcadores biológicos y para discriminar el estado A del estado B, por ejemplo, pacientes receptivos o sensibles a la adición de bevacizumab a un régimen de quimioterapia de pacientes que son poco receptivos a la terapia de adición de bevacizumab a un régimen de quimioterapia. En este tipo de análisis, los marcadores ya no son independientes, sino que forman un panel de marcadores o un nivel de expresión combinada.

Por lo tanto, la presente invención se refiere a un método para mejorar el efecto del tratamiento de un régimen de quimioterapia de pacientes que padecen cáncer de mama, en particular cáncer de mama HER2 negativo localmente avanzado, recurrente o metastásico, añadiendo bevacizumab a un régimen de quimioterapia, determinando los niveles de expresión de VEGFA y VEGFR2 o de PLGF y VEGFA, añadiendo estos niveles de expresión de manera que cada nivel de expresión se multiplica con una función ponderada (o factor de ponderación). Sorprendentemente, el resultado (“valor”, resultante de la operación matemática, o nivel de expresión combinada) se correlaciona con el efecto del tratamiento en pacientes a los que se administra bevacizumab en combinación con regímenes de quimioterapia, de tal manera que los valores por encima de un límite previamente especificado (multivariante) son indicativos de un mejor efecto del tratamiento para el paciente y los valores por debajo de este límite son indicativos

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de un peor efecto del tratamiento.

Por consiguiente, la invención se refiere a un método para mejorar el efecto del tratamiento de un régimen de quimioterapia de pacientes que padecen cáncer de mama, en particular cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado, recurrente o metastásico, añadiendo bevacizumab a un régimen de quimioterapia, determinando los niveles de expresión de VEGFA y VEGFR2, añadiendo estos niveles de expresión de manera que cada nivel de expresión se multiplica con una función ponderada (o factor de ponderación). Sorprendentemente, el resultado (“valor”, resultante de la operación matemática, o nivel de expresión combinada) se correlaciona con el efecto del tratamiento en pacientes a los que se administra bevacizumab en combinación con regímenes de quimioterapia, de tal manera que los valores por encima de un límite previamente especificado (multivariante) son indicativos de un mejor efecto del tratamiento para el paciente y los valores por debajo de este límite son indicativos de un peor efecto del tratamiento.

La invención se refiere a un método para mejorar el efecto del tratamiento de un régimen de quimioterapia de pacientes que padecen cáncer de mama, en particular cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado, recurrente o metastásico, por adición de bevacizumab a un régimen de quimioterapia, determinando los niveles de expresión de VEGFA y PLGF, añadiendo estos niveles de expresión de tal manera que cada nivel de expresión se multiplica con una función ponderada (o factor de ponderación). Sorprendentemente, el resultado (“valor”, resultante de la operación matemática, o nivel de expresión combinada) se correlaciona con el efecto del tratamiento en pacientes a los que se administra bevacizumab en combinación con regímenes de quimioterapia de tal manera que los valores por encima de un límite previamente especificado (multivariante) son indicativos de un mejor efecto del tratamiento para el paciente y los valores por debajo de este límite son indicativos de un peor efecto del tratamiento.

Por consiguiente, la presente invención, se refiere a un método para mejorar el efecto del tratamiento de un régimen de quimioterapia de pacientes que padecen cáncer de mama, en particular cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado, recurrente o metastásico, añadiendo bevacizumab a un régimen de quimioterapia, determinando los niveles de expresión de VEGFA, VEGFR2 y PLGF, añadiendo estos niveles de expresión de tal manera que cada nivel de expresión se multiplica con una función ponderada (o factor de ponderación). Sorprendentemente, el resultado (“valor”, resultante de la operación matemática, o nivel de expresión combinada) se correlaciona con el efecto del tratamiento en pacientes a los que se administra bevacizumab en combinación con regímenes de quimioterapia de tal manera que los valores por encima de un límite previamente especificado (multivariante) son indicativos de un mejor efecto del tratamiento para el paciente y los valores por debajo de este límite son indicativos de un peor efecto de tratamiento.

Por ejemplo, como se muestra en el ejemplo ilustrativo adjunto, las siguientes ecuaciones pueden usarse para evaluar el nivel de expresión combinada de VEGFA y VEGFR2 o de VEGFA y PLGF cuando el efecto del tratamiento es la supervivencia sin progresión en pacientes que padecen cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado, recurrente, metastásico y el tratamiento es bevacizumab a una dosis baja (7,5 mg/kg cada tres semanas) o a una dosis alta (15 mg/kg cada tres semanas) más terapia con docetaxel en comparación con placebo más terapia con docetaxel.

Fórmula 1: norm(VEGFA)+1,3*norm(VEGFR2)

Fórmula equivalente: 0,71*log2(VEGFA)+3,16*log2(VEGFR2)-15,6

y

Fórmula 2: 0,25*norm(VEGF)+0,21*norm(PLGF)

Fórmula equivalente: 0,18*log2(VEGFA)+0,42*log2(VEGFR2)-3.1

Donde se usa la transformación log2 y log2(xi) – media(log2(x))

xi → norm(xi) =

dma (log2(x))

Donde dma es la desviación media absoluta ajustada por un factor de 1,4826.

Por consiguiente, en el contexto de la invención descrita en el presente documento, y de acuerdo con el ejemplo ilustrativo adjunto, un nivel alto de expresión combinada de VEGFA y VEGFR2 es Fórmula 1 ≥ -0,132 y un nivel bajo de expresión combinada de VEGFA y VEGFR2 es Fórmula 1 < -0,132, con respecto a la supervivencia sin progresión para la adición de una terapia con bevacizumab a una dosis tanto baja como alta. En el contexto de la invención descrita en el presente documento y de acuerdo con el ejemplo ilustrativo adjunto, un nivel alto de expresión combinada de VEGFA y PLGF es la Fórmula 2 ≥ -0,006 y un nivel bajo da expresión combinada de

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VEGFA y PLGF es la Fórmula 2 < -0,006, con respecto a la supervivencia sin progresión para la adición de una terapia con bevacizumab a una dosis tanto baja como alta. Sin embargo, el experto en la técnica entenderá que los niveles de expresión medidos para marcadores de un panel de marcadores (o un nivel de expresión combinada), por ejemplo, para VEGFA y VEGFR2 o VEGFA y PLGF, pueden combinarse matemáticamente y el nivel de expresión combinada puede correlacionarse con la cuestión diagnóstica subyacente en más de una manera. Por consiguiente, los niveles de los marcadores pueden combinarse mediante cualquier método matemático apropiado del estado de la técnica.

El nivel de expresión de uno o más de los marcadores VEGFA, VEGFR2 y PLGF puede evaluarse mediante cualquier método conocido en la técnica, que sea adecuado para la determinación de niveles de proteína específicos en una muestra del paciente y determinarse preferentemente mediante un método de inmunoensayo, tal como un ELISA, empleando anticuerpos específicos para uno o más de VEGFA, VEGFR2 y PLGF. Dichos métodos son muy conocidos y están implementados habitualmente en la técnica y corresponden a anticuerpos y/o a kits comerciales fácilmente disponibles. Por ejemplo, anticuerpos/kits de ensayo disponibles en el comercio para VEGFA, VEGFR2 y PLGF, pueden obtenerse en Bender RELIATech y R&D Systems, como los clones 3C5 y 26503, de R&D Systems como los clones 89115 y 89109, de Roche Diagnostics GmbH, como los clones 2D6D5 y 6A11D2, respectivamente. Preferentemente, los niveles de expresión de las proteínas marcadoras/indicadoras de la invención se evaluaron usando los reactivos y/o las recomendaciones protocolarias del fabricante del anticuerpo o del kit. El experto en la técnica también sabrá de otros medios para la determinación del nivel de expresión de uno o más de VEGFA, VEGFR2 y PLGF por métodos de inmunoensayo. Por lo tanto, el nivel de expresión de uno o más de los marcadores/indicadores de la invención puede determinarse de manera rutinaria y reproducible por un experto en la técnica sin carga excesiva. Sin embargo, para garantizar resultados exactos y reproducibles, la invención también incluye el análisis de muestras de pacientes en un laboratorio especializado que pueda garantizar la validación de los procedimientos analíticos.

Las proteínas VEGF121 y VEGF110 pueden detectarse usando cualquier método conocido en la técnica. Por ejemplo, muestras de tejido o de células de mamíferos pueden someterse convenientemente a ensayo para determinar, por ejemplo, proteínas, usando transferencias Western, ensayos ELISA, etc. Se dispone de muchas referencias para ofrecer una orientación en la aplicación de las técnicas anteriores (Kohler et al., Hybridoma Techniques (Cold Spring Harbor Laboratory, Nueva York, 1980); Tijssen, Practice and Theory of Enzyme Immunoassays (Elsevier, Amsterdam, 1985); Campbell, Monoclonal Antibody Technology (Elsevier, Amsterdam, 1984); Hurrell, Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications (CRC Press, Boca Raton, FL, 1982); y Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, págs. 147-1 58 (CRC Press, Inc., 1987)).

Si se hace referencia a la detección o nivel de VEGF121 y VEGF110 esto significa que la suma de ambas moléculas se mide, por ejemplo, usando un ensayo que detecta tanto VEGF121 como VEGF110. Los ensayos que detectan las dos moléculas VEGF121 y VEGF110 incluyen, por ejemplo, ensayos que tienen una sensibilidad de al menos 25% por la otra forma correspondiente (es decir, por VEGF121 si VEGF110 es la mejor reconocida, o por VEGF110 si VEGF121 es la mejor reconocida, respectivamente). En determinadas realizaciones, los ensayos tienen una sensibilidad por la otra forma correspondiente de al menos 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o mayor. En una realización tanto VEGF como VEGF110 se midieron esencialmente con la misma sensibilidad.

En cuanto a la detección de las proteínas VEGF121 y VEGF110, se dispone de diversos ensayos. Por ejemplo, la muestra puede ponerse en contacto con un anticuerpo o con una combinación de anticuerpos (por ejemplo, en un ensayo de tipo sándwich) uniendo de manera preferente o específica las isoformas cortas de VEGF-A, VEGF121 y VEGF110, respectivamente en comparación con las isoformas VEGF-A de origen natural más largas, VEGF165 y VEGF189, respectivamente. Preferentemente las isoformas cortas se detectan con una sensibilidad al menos 3 veces mayor en comparación con las isoformas más largas. Se acepta una sensibilidad al menos 3 veces mayor si se establece una curva patrón usando una isoforma corta (pureza de al menos 90 % por SDS-PAGE y concentración determinada por DO 280 nm) y para una isoforma larga a una concentración predeterminada (pureza al menos 90 % por SDS-PAGE y concentración determinada por DO 280 nm) usando los mismos reactivos y la misma curva patrón el valor de la lectura de las curvas patrón es solo un tercio o menos de la concentración esperada. También se prefiere que la sensibilidad para las isoformas cortas sea al menos 4 veces, 5 veces, 6 veces, 7 veces, 8 veces o 9 veces mayor en comparación con las isoformas largas, especialmente en comparación con VEGF165.

En una realización, las dos isoformas cortas VEGF121 y VEGF110 se detectan específicamente. Dicha detección específica es posible, por ejemplo, si se usan anticuerpos, especialmente anticuerpos monoclonales, y si se emplean anticuerpos que se unen a la secuencia generada por la unión de los exones 4 y 8 en VEGF121 o al extremo C terminal de VEGF110, respectivamente. Dicho anticuerpo anti extremo C terminal de VEGF110 no se une a ninguna isoforma de VEGF-A que comprenda el aminoácido 110 como parte de una cadena polipeptídica más larga o a fragmentos de VEGF-A más cortos que terminen, por ejemplo en el aminoácido 109. El anticuerpo monoclonal que se une a la secuencia generada por la unión de los exones 4 y 8, respectivamente, en VEGF121 no se unirá a las secuencias de aminoácidos comprendidas en las isoformas de VEGF 165 y 189 más largas, respectivamente, ya que en ellas están presentes otras secuencias de aminoácidos debido a la unión del exón 4 y exón 7, y del exón 4 y exón 5, respectivamente (véase: Ferrara, N., Mol. Biol., of the Cell 21 (2010) 687-690). La unión específica en el sentido anterior se confirma, si el anticuerpo que se utiliza presenta reactividad cruzada menor de 10 % con un

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por el material VEGF121 es tan solo una decena o menor que la señal obtenida con el material VEGF111, entonces la reactividad cruzada hacia VEGF121 es menor que 10 %. Como el experto en la materia apreciará la señal de VEGF121 se lee preferentemente a una concentración que produce aproximadamente el 50 % de la señal máxima para VEGF111.

De acuerdo con procedimientos convencionales pueden obtenerse anticuerpos específicos apropiados que solo se unen a la isoforma corta de VEGF, VEGF111. Normalmente, un péptido que representa o que comprende los aminoácidos C terminal y N terminal en el aminoácido 105 de VEGF111 se sintetizará, opcionalmente se acoplará a un transportador y se usará para la inmunización. Preferentemente dicho péptido tendrá una longitud de al menos seis aminoácidos y comprenderá al menos los aminoácidos 105 y 106 de VEGF111. También se prefiere que comprenda al menos los aminoácidos 104, 105, 106 y 107 de VEGF111. Como apreciará el experto en la técnica, para obtener anticuerpos que se unan específicamente a VEGF111, también pueden usarse péptidos más largos que comprenden, por ejemplo, 3 o más aminoácidos N y C terminal en la unión de exón entre los aminoácidos 105 y 106 de VEGF111.

La proteína VEGF no modificada puede detectarse usando cualquier método apropiado conocido en la técnica. Preferentemente se usará un anticuerpo, como MAB 3C5, que tiene al menos las propiedades de unión preferenciales por VEGF no modificado en comparación con VEGF modificado, que se encuentra disponible en el comercio en RELIATech GmbH, Wolfenbüttel, Alemania. Por ejemplo, muestras de tejido o de células de mamíferos pueden ensayarse convenientemente con respecto a la proteína VEGF modificada usando transferencias Western, ensayos ELISA, etc. Se dispone de muchas referencias para proporcionar una orientación a la hora de aplicar las técnicas anteriores (Kohler et al., Hybridoma Techniques (Cold Spring Harbor Laboratory, Nueva York, 1980); Tijssen, Practice and Theory of Enzyme Immunoassays (Elsevier, Amsterdam, 1985); Campbell, Monoclonal Antibody Technology (Elsevier, Amsterdam, 1984); Hurrell, Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications (CRC Press, Boca Ratón, FL, 1982); y Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, págs. 147-1 58 (CRC Press, Inc., 1987)).

Si se hace referencia a la detección o al nivel de VEGF no modificado esto significa que se miden las moléculas de VEGF no modificadas (isoformas o productos de escisión) tales como, por ejemplo, las que se unen por MAB 3C5.

En cuanto a la detección de la proteína VEGF no modificada, se dispone de diversos ensayos. Por ejemplo, la muestra puede ponerse en contacto con un anticuerpo o con una combinación de anticuerpos (por ejemplo, en un ensayo de tipo sándwich) uniéndose de un modo preferente o específico a un VEGF no modificado en comparación con un VEGF modificado, por ejemplo, como el que se produce de forma natural en una muestra del paciente. Preferentemente un VEGF no modificado se detecta usando un anticuerpo que se une específicamente a un VEGF no modificado, es decir, con un anticuerpo que tiene una sensibilidad al menos 3 veces mayor por VEGF165 no modificado en comparación con VEGF165 modificado. Dicha sensibilidad al menos 3 veces mayor para VEGF no modificado se evalúa comparando VEGF165 producido de manera recombinante en E. coli (pureza de al menos 90 % por SDS-PAGE y concentración determinada por DO 280 nm) y VEGF165 producido de manera recombinante en células HEK (pureza de al menos 90 % por SDS-PAGE y concentración determinada por DO 280 nm) usando los mismos reactivos. Si en esta comparación la señal obtenida para el material producido en células HEK es solo un tercio o menor de la señal obtenida con el material procedente de E. coli, entonces se detecta el VEGF no modificado con una sensibilidad al menos 3 veces mayor. Como apreciará el experto en la técnica la lectura de la señal es preferentemente alrededor del 50 % de la señal máxima. Preferentemente en esta evaluación se usa el ensayo del ejemplo 5. También se prefiere que el anticuerpo que se une específicamente a VEGF no modificado (VEGF165 ex de E. coli) sea un anticuerpo que detecte VEGF no modificado con, y al menos una sensibilidad 4 veces, 5 veces, 6 veces, 7 veces, 8 veces, 9 veces o 10 veces mayor en comparación con el material VEGF modificado (VEGF165 ex de células HEK).

En una realización el VEGF no modificado se detecta específicamente usando un anticuerpo que tiene al menos la misma preferencia de unión por el VEGF no modificado en comparación con el VEGF modificado, tal como el MAB 3C5 disponible en el comercio. En una realización la sensibilidad relativa por, o la unión preferencial de un anticuerpo con VEGF no modificado, se evalúa en un inmunoensayo de tipo sándwich, en el que el anticuerpo contra VEGF no modificado se usa como un anticuerpo de captura y se usa un anticuerpo de detección que se une a un epítopo presente en todas las isoformas de VEGF principales o productos de escisión. En una realización el anticuerpo de detección se unirá a un epítopo fuera del epítopo para MAB 3C5, es decir, no se unirá a un epítopo comprendido en un péptido sintético que abarque los aminoácidos 33 a 43 de VEGF. Preferentemente el anticuerpo de detección se unirá a un epítopo comprendido en los aminoácidos que van del 1 al 32, del 44 al 105, hasta los seis últimos aminoácidos de VEGF165 maduro, o a un epítopo conformacional que no se solapa con el epítopo unido por MAB 3C5. En una realización el anticuerpo que se une específicamente a VEGF165 no modificado en comparación con VEGF modificado, tiene la propiedad de unirse a un epítopo comprendido en un péptido sintético que abarca los aminoácidos 33 a 43 de VEGF.

Los anticuerpos específicos apropiados que se unen específicamente a VEGF no modificado pueden obtenerse de acuerdo con procedimientos convencionales. Normalmente una isoforma de VEGF producida de manera recombinante en E. coli u obtenida sintéticamente, por ejemplo, mediante síntesis polipeptídica en fase sólida, o un

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específicos para el ARNm que codifica uno o más de los marcadores/indicadores descritos en el presente documento, y los polipéptidos pueden comprender proteínas capaces de interaccionar específicamente con las proteínas marcadoras/indicadoras, por ejemplo, anticuerpos o fragmentos de anticuerpos específicos de marcadores/indicadores.

En el presente documento también se describe el uso de bevacizumab en un régimen de quimioterapia mejorado para un paciente que padece cáncer de mama en el que en una muestra de un paciente se determina el nivel de expresión de las proteínas de VEGFA y VEGFR2 o de PLGF y VEGFA y mediante el cual a un paciente que tiene un nivel aumentado de VEGFA y VEGFR2 o de PLGF y VEGFA con respecto a niveles de control determinados en pacientes diagnosticados con cáncer de mama, se le administra bevacizumab además del régimen de quimioterapia.

Pueden aplicarse los siguientes usos similares según corresponda.

También se describe el uso de bevacizumab para mejorar el efecto del tratamiento de un régimen de quimioterapia de un paciente que padece cáncer de mama que comprende las siguientes etapas:

(a): determinar el nivel de expresión de VEGFA y VEGFR2 o de PLGF y VEGFA en una muestra del paciente; y

(b): administrar bevacizumab, en combinación con el régimen de quimioterapia, a un paciente que tenga un nivel aumentado de VEGFA y VEGFR2 o de PLGF y VEGFA con respecto a niveles de control determinados en pacientes diagnosticados con cáncer de mama.

El cáncer de mama puede ser cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado, recurrente o metastásico. El régimen de quimioterapia puede comprender terapia con taxano, tal como terapia con docetaxel o paclitaxel.

Por consiguiente, también se describe el uso de bevacizumab para la mejora del efecto del tratamiento de un régimen de quimioterapia de un paciente que padece cáncer de mama que comprende las siguientes etapas:

(a): obtener una muestra de plasma sanguíneo de dicho paciente;

(b): determinar el nivel de expresión de VEGFA y VEGFR2 o de PLGF y VEGFA; y

(c): administrar bevacizumab en combinación con el régimen de quimioterapia al paciente que tiene un nivel aumentado de VEGFA y VEGFR2 o de PLGF y VEGFA con respecto a los niveles de control determinados en pacientes diagnosticados con cáncer de mama.

También se describe el uso de bevacizumab para mejorar la supervivencia sin progresión de un paciente que padece cáncer de mama que comprende las siguientes etapas:

(a): determinar el nivel de expresión de VEGFA y VEGFR2 o de PLGF y VEGFA en una muestra de paciente; y

(b): administrar bevacizumab en combinación con el régimen de quimioterapia al paciente que tiene un nivel aumentado de VEGFA y VEGFR2 o de PLGF y VEGFA con respecto a los niveles de control determinados en pacientes diagnosticados con cáncer de mama.

El cáncer de mama puede ser cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado, recurrente o metastásico. El régimen de quimioterapia puede comprender una terapia con taxano, tal como terapia con docetaxel o paclitaxel.

Adicionalmente se describe el uso de bevacizumab para mejorar la supervivencia sin progresión de un paciente que padece cáncer de mama que comprende las siguientes etapas:

(a): obtener una muestra de plasma sanguíneo de dicho paciente;

(a): determinar el nivel de expresión de VEGFA y VEGFR2 en una muestra de un paciente; y

(b): administrar bevacizumab en combinación con un régimen de quimioterapia al paciente que tiene un nivel de expresión combinada aumentado de VEGFA y VEGFR2 con respecto a un nivel de expresión combinada de control determinado en pacientes diagnosticados con cáncer de mama.

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El cáncer de mama puede ser cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado, recurrente o metastásico. El régimen de quimioterapia puede comprender terapia con taxano, tal como terapia con docetaxel o paclitaxel. La dosis de bevacizumab administrada puede ser una dosis alta o baja de bevacizumab.

(a): obtener una muestra de plasma sanguíneo de dicho paciente;

(b): determinar el nivel de expresión de VEGFA y VEGFR2; y

(c): administrar bevacizumab en combinación con un régimen de quimioterapia al paciente que tiene un nivel de expresión combinada aumentado de VEGFA y VEGFR2 con respecto a un nivel de expresión combinada de control determinado en pacientes diagnosticados con cáncer de mama.

El cáncer de mama puede ser cáncer de mama HER-2 negativo, localmente avanzado, recurrente o metastásico. El régimen de quimioterapia puede comprender terapia con taxano, tal como terapia con docetaxel o paclitaxel. La dosis de bevacizumab administrada puede ser una dosis baja o alta de bevacizumab.

También se describe el uso de bevacizumab para mejorar la supervivencia sin progresión de un paciente que padece cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado recurrentemente o metastásico que comprende las siguientes etapas:

(a): determinar el nivel de expresión de VEGFA y VEGFR2 en una muestra del paciente; y

(b): administrar bevacizumab en combinación con un régimen de quimioterapia al paciente que tiene un nivel de expresión combinada aumentado de VEGFA y VEGFR2 con respecto a un nivel de expresión combinada de control determinado en pacientes diagnosticados con dicho cáncer de mama.

El régimen de quimioterapia puede comprender terapia con taxano, tal como terapia con docetaxel o paclitaxel. La dosis de bevacizumab administrada puede ser una dosis baja o alta de bevacizumab.

Adicionalmente se describe el uso de bevacizumab para mejorar la supervivencia sin progresión de un paciente que padece cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado, recurrentemente o metastásico que comprende las siguientes etapas:

(a): obtener una muestra de plasma sanguíneo de dicho paciente;

(b): determinar el nivel de expresión de VEGFA y VEGFR2; y

(c): administrar bevacizumab en combinación con un régimen de quimioterapia al paciente que tiene un nivel de expresión combinada aumentado de VEGFA y VEGFR2 con respecto a un nivel de expresión combinada de control determinado en pacientes diagnosticados con dicho cáncer de mama.

Por consiguiente, en el presente documento se proporciona el uso de bevacizumab para mejorar la supervivencia sin progresión de un paciente que padece cáncer de mama que comprende las siguientes etapas:

El cáncer de mama puede ser cáncer de mama HER-2 negativo localmente avanzado, recurrente o metastásico. El régimen de quimioterapia puede comprender terapia con taxano, tal como terapia con docetaxel o paclitaxel. La dosis de bevacizumab administrada puede ser una dosis baja o alta de bevacizumab. Como se muestra en el ejemplo ilustrativo adjunto, el nivel de expresión combinada de VEGFA y VEGFR2 fue particularmente predictivo en pacientes a los que se administró una dosis baja de bevacizumab.

(a): obtener una muestra de plasma sanguíneo de dicho paciente;

(b): determinar el nivel de expresión de VEGFA y VEGFR2; y

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Una investigación del estado de los biomarcadores relacionados con angiogénesis y tumorigénesis reveló que los niveles de expresión de tres biomarcadores con respecto a los niveles de control determinados en toda la población de pacientes con biomarcador se correlacionó con un parámetro de tratamiento mejorado. En particular, los pacientes que presentaban un nivel de expresión más alto de VEGFA con respecto a los niveles de control 5 determinados en toda la población de pacientes con biomarcador, demostraron una supervivencia sin progresión prolongada en respuesta a la adición de bevacizumab a la terapia con docetaxel. Los pacientes que exhibían un nivel de expresión más alto de VEGFR2 con respecto a los niveles de control determinados en toda la población de pacientes con biomarcador, demostraron una supervivencia sin progresión prolongada en respuesta a la adición de bevacizumab a terapia con docetaxel. También, los pacientes que exhibían un nivel de expresión combinada más

10 alto de VEGFA y VEGFR2 con respecto a niveles de control determinados en toda la población de pacientes con biomarcador, demostraron una supervivencia sin progresión prolongada en respuesta a la adición de bevacizumab a terapia con docetaxel. Además, los pacientes que exhibían un nivel de expresión combinada más alto de VEGFA y PLGF con respecto a los niveles de control determinados en toda la población de pacientes, demostraron una supervivencia sin progresión prolongada en respuesta a la adición de bevacizumab a la terapia con docetaxel.

15 Pacientes y métodos inmunoquímicos

En el estudio BO17708 participó un total de 736 pacientes, y las muestras de plasma sanguíneo de 396 de los participantes estaban disponibles para análisis con biomarcador. Las características iniciales de los 396 pacientes

20 en el análisis con biomarcador y del resto de los pacientes para los cuales no fue posible análisis con biomarcador se proporcionan en la Tabla 1A y en la Tabla 1B.

Tabla 1A. Características iniciales

biomarcador evaluable N=396: biomarcador no evaluable N=334

Sexo

Mujer: 396 (100 %) 334 (100 %)

n: 396 334

Tratamiento aleatorizado

placebo + docetaxel: 129 (33 %) 109 (33 %)

bevacizumab (7,5 mg/kg) + docetaxel: 129 (33 %) 118 (35 %)

bevacizumab (15 mg/kg) + docetaxel: 138 (35 %) 107 (32 %)

n: 396 334

Edad (años)

Media: 54,4 52,8

DT: 10,72 10,46

DTM: 0,54 0,57

Mediana: 55,0 53,0

Min-Máx: 29-83 26 -77

n: 396 334

Categoría de edad (años)

<65: 316 (80 %) 288 (86 %)

> = 65: 80 (20 %) 46 (14 %)

n: 396 334

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biomarcador evaluable N=396: biomarcador no evaluable N=334

Raza

Blanca: 375 (95 %) 234 (70 %)

Negra: 4 (1 %) 3 (< 1 %)

Otra: 17 (4 %) 97 (29 %)

n: 396 334

Peso (kg)

Media: 68,79 67,23

DT: 14,097 14,185

DTM: 0,708 0,780

Mediana: 67,00 66,70

Min-Máx: 42,8 -135,6 37,5 -121,2

n: 396 331

Altura (cm)

Media: 161,79 160,41

DT: 7,158 7,351

DTM: 0,360 0,402

Mediana: 162,00 160,0

Min-Máx: 137,0 -189,0 140,0 -184,0

n: 396 334

Estado de Tabaquismo

Nunca ha fumado: 252 (64 %) 232 (70 %)

Ex-fumador: 99 (25 %) 61 (18 %)

fumador habitual: 44 (11 %) 38 (11 %)

n: 395 331

Años fumando un paquete diario

Media: 24,06 33,63

DT: 79,907 81,309

DTM: 7,294 8,925

Mediana: 10,00 15,00

Min-Máx: 0,3 -860,0 0,5 -720,0

n: 120 83

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Tabla 1B. Características iniciales

biomarcador evaluable N=396: biomarcador no evaluable N=334

Área de Superficie Corporal (m2)

Media: 1,726 1,698

DT: 0,1725 0,1796

DTM: 0,0087 0,0099

Mediana: 1,710 1,700

Min-Máx: 1,35 -2,42 1,29 -2,33

n: 396 331

Estado Funcional (ECOG)

0: 247 (63 %) 196 (60 %)

1: 143 (37 %) 133 (40 %)

2: 1 (<1 %) -

n: 391 329

LVEF

< = mediana (64): 181 (35 %) 172 (55 %)

> mediana (64): 177 (49 %) 138 (45 %)

n: 358 310

Intervalo Sin Enfermedad

< = 24 meses: 138 (35 %) 118 (35 %)

> 24 meses: 255 (65 %) 216 (65 %)

n: 393 334

Estado ER de Receptor Hormonal

Negativo: 104 (26 %) 103 (31 %)

Positivo: 290 (73 %) 229 (69 %)

Desconocido: 2 (< 1 %) 2 (< 1 %)

n: 396 334

Estado Combinado ER/PgR

Negativo: 81 (21 %) 82 (25 %)

Positivo: 314 (79 %) 250 (75 %)

n: 395 332

Número de Sitios Metastásicos

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Claims

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