ES2613519T3 - Hidrolizados de proteínas de crustáceo para mantener y/o estimular la salud intestinal de peces de cultivo - Google Patents
Hidrolizados de proteínas de crustáceo para mantener y/o estimular la salud intestinal de peces de cultivo Download PDFInfo
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Abstract
Ingrediente de pienso realizado a partir de uno o más hidrolizados de proteínas de crustáceos para la utilización en un procedimiento para mantener y/o estimular la salud intestinal de un pez poslarvario de cultivo.
Description
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DESCRIPCION
Hidrolizados de protefnas de crustaceo para mantener y/o estimular la salud intestinal de peces de cultivo.
La presente invencion se refiere al campo de la acuicultura, mas particularmente a los piensos para peces en acuicultura.
Mas particularmente, la invencion se refiere a la utilizacion de uno o mas hidrolizados de protefnas de crustaceos como ingrediente de pienso para el mantenimiento y/o la estimulacion de la salud intestinal de peces en fase poslarvaria de cultivo.
Antecedentes de la invencion
Los piscicultores y fabricantes que trabajan en el campo de la acuicultura se enfrentan a un problema importante basado en el hecho de que se espera que se reduzca la disponibilidad de materias primas marinas en los anos venideros, a la vez que se expande progresivamente la acuicultura.
En particular, la disponibilidad en el mercado mundial de harinas y aceites de pescado, las cuales se han utilizado como fuente dominante de protefnas en los piensos secos para peces, se esta reduciendo drasticamente y los precios de estas materias primas se estan incrementando considerablemente. En consecuencia, la industria de la acuicultura, especialmente la industria de los piensos para peces, ha predicho durante varios anos que se producira una escasez de tanto harina de pescado como aceite de pescado en el futuro.
Claramente el nivel nutricional de la harina de pescado sigue resultando crucial para conseguir un rendimiento de los piensos, afectando a tanto la palatabilidad de los mismos como a su utilizacion. De esta manera, durante los ultimos 20 anos, la industria de los piensos para peces se ha interesado crecientemente en alternativas satisfactorias a las harinas de pescado y los aceites de pescado para la utilizacion en la alimentacion de peces de cultivo, dado que, ano tras ano, el nivel de harina de pescado en los piensos disenados para especies de peces carnfvoros tiende a reducirse y esta proxima a alcanzar un umbral crftico para el crecimiento de los peces y la utilizacion del pienso.
Para los piensos para peces secos pueden utilizarse fuentes de protefnas animales alternativas. Por ejemplo, es conocida la utilizacion de materias primas de origen terrestre (por ejemplo harina de sangre, harina de huesos, harina de plumas y otros tipos de harina producidos a partir de otros residuos de matadero, por ejemplo harina de aves de corral), asf como materias primas de origen vegetal (por ejemplo harina de soja, harina de trigo, harina de semilla de colza, harina de arroz y similares). Estas tfpicamente resultan mas economicas y se encuentran mas disponibles que las harinas de pescado y los aceites de pescado. Como resultado, ahora se proponen mas comunmente piensos de origen terrestre en las formulaciones de piensos para peces como alternativa a las harinas de pescado.
Sin embargo, por otra parte, el equilibrado del perfil dietetico de aminoacidos de las dietas ricas en plantas para cumplir los requisitos de aminoacidos de los peces no es suficientemente eficiente para conseguir rendimientos de peces y piensos para peces satisfactorios. Por otra parte, en algunas regiones geograficas, incluyendo Europa, existe una prohibicion de utilizar materias primas de origen terrestre en la produccion de piensos para animales y peces productores de piensos.
En dicho contexto de baja disponibilidad de harinas de pescado y volatilidad de los precios, resulta esencial encontrar soluciones para compensar el mas bajo contenido de harinas de pescado de las actuales dietas para peces. Tal como se ha indicado anteriormente, las materias primas de origen vegetal con frecuencia se utilizan para sustituir las harinas de pescado en las formulas de los piensos para los peces y crustaceos de cultivo. Sin embargo, la introduccion de protefnas vegetales en la dieta de los peces carnfvoros es conocido que afecta negativamente a la calidad intestinal de los peces al causar danos en el epitelio intestinal (Krogdahl et al., 2003). Lo anterior resulta en diarrea y, por lo tanto, en una mala utilizacion de los nutrientes y en el debilitamiento de los peces, que se vuelven mas susceptibles a patogenos. En el caso de que se utilicen dietas no equilibradas o dietas con bajo contenido de harinas de pescado, con frecuencia se observan peces muy delgados que rechazan el pienso y no crecen durante todo el ensayo.
De esta manera, existe una necesidad en la tecnica de ingredientes para piensos para peces que presenten propiedades nutricionales altamente especfficas con el fin de satisfacer requisitos para peces de cultivo y para superar los efectos adversos sobre la salud de los peces de las dietas que contienen materiales de bajo contenido en harinas de pescado y/o materiales vegetales.
Los presentes inventores han planteado la hipotesis de que algunos hidrolizados de crustaceos particulares podrfan satisfacer la necesidad de la tecnica al incrementar el rendimiento de los piensos de bajo contenido en harinas de pescado mediante la mejora de la palatabilidad de los piensos y de las capacidades de absorcion de nutrientes de los peces.
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Los hidrolizados de protefnas se reconocen en el campo de la nutricion animal como materias primas relevantes para mejorar los rendimientos de los piensos y animales. Los hidrolizados tambien estan siendo reconocidos en la nutricion deportiva humana. El impacto positivo de la hidrolisis enzimatica sobre la digestibilidad de las protefnas se ha demostrado desde hace algunas decadas. La predigestion de las materias primas protefnas por enzimas endogenos o exogenos es capaz de liberar peptidos altamente disponibles y aminoacidos libres que podrfan pasar muy rapidamente la barrera intestinal a la circulacion sistemica (Koopman et al., 2009). De esta manera, la hidrolisis enzimatica limitara el riesgo de desnaturalizacion de las protefnas durante el procesamiento (secado) de las materias primas y mejorara la digestibilidad de las protefnas.
Varios estudios han investigado el impacto positivo de las protefnas hidrolizadas dieteticas sobre el crecimiento de varias especies de peces (carpas doradas, salmon atlantico, rodaballo, tilapia, pacu, lubina japonesa, lubina europea, etc.; ver Taheri et al., 2010, para referencias). En comparacion con una materia prima no hidrolizada (por ejemplo harinas de pescado), los hidrolizados de pescado generalmente han mostrado un efecto beneficioso sobre el crecimiento y la utilizacion de los piensos debido a una palatabilidad y digestibilidad mas elevadas.
La inclusion de hidrolizados de protefnas tambien se reconoce como una estrategia eficiente para mejorar la digestibilidad y valor nutricional de las dietas formuladas para peces en estado larvario (Kolkovski, 2008). Los hidrolizados pueden proporcionar compuestos de alta biodisponibilidad (en particular peptidos y aminoacidos libres) a las larvas, caracterizadas por un sistema digestivo inmaduro, y pueden mejorar el desarrollo del sistema digestivo (Cahu et al., 1999).
Sin embargo, las larvas presentan especificidades que las diferencian de los peces "poslarvarios" (es decir, peces que se encuentran en un estadio poslarvario del desarrollo/crecimiento), no solo ffsica sino tambien fisiologicamente. En particular, segun Kendall et al. (1984), el estadio larvario (que cubre el periodo desde la eclosion hasta el desarrollo de radios de aleta completos y el inicio de la aparicion de las escamas) se caracteriza por cambios de la forma corporal y cambios de la capacidad locomotora y de las tecnicas de alimentacion. Ademas, desde la eclosion, el estadio larvario se caracteriza por un intestino rudimentario, con una capacidad limitada de digestion de los macronutrientes, desarrollando un sistema digestivo maduro al alcanzar el estadio juvenil (Zambonino y Cahu, 2001). El estadio poslarvario se inicia tras el estadio juvenil, al completarse el numero de radios de las aletas e iniciarse la aparicion de las escamas, hasta (y comprendiendo) cuando el pez entra en la poblacion adulta o alcanza la madurez sexual (Kendall et al., 1984). En este estadio los peces se caracterizan por la presencia de un sistema digestivo eficiente, representando el modo de digestion adulto (Zambonino y Cahu, 2001).
En la presente memoria se demuestra por primera vez un beneficio de hidrolizados particulares de protefnas de crustaceos para el mantenimiento y/o la estimulacion de la salud intestinal de peces poslarvarios de cultivo, especialmente para la mejora del desarrollo del epitelio intestinal en dichos peces poslarvarios de cultivo.
Sumario de la invencion
La presente invencion se refiere a un ingrediente para pienso preparado con uno o mas hidrolizados de protefnas de crustaceos para la utilizacion en un procedimiento para el mantenimiento y/o la estimulacion de la salud intestinal de los peces poslarvarios de cultivo.
Breve descripcion de las figuras
Figura 1. Especificaciones del hidrolizado de protefnas de crustaceos (HID CRUS) y del hidrolizado de pescado blanco (HID pescado blanco) utilizados en el ensayo presentado. El contenido de protefnas en bruto, protefnas solubles y aminoacidos libres se expresa como % del hidrolizado. El perfil de pesos moleculares de peptidos se determina en % de protefnas solubles presentes en el hidrolizado.
Figura 2. Tasa de crecimiento especffico (TCE) de lubina europea alimentada con tratamientos dieteticos durante 56 dfas. HID CRUS: hidrolizado de protefnas de crustaceos; HID de pescado blanco: hidrolizado de pescado blanco; FM5: dieta para peces que contiene 5% de harinas de pescado; FM20: dieta para peces que contiene 20% de harinas de pescado.
Figura 3. Indice de conversion alimentaria (ICA) en lubina europea alimentada con tratamientos dieteticos durante 56t dfas. HID CRUS: hidrolizado de protefnas de crustaceos; HID de pescado blanco: hidrolizado de pescado blanco; FM5: dieta para peces que contiene 5% de harinas de pescado; FM20: dieta para peces que contiene 20% de harinas de pescado.
Figura 4. Procedimiento para el calculo de la relacion diametro interno (DI) / diametro externo (DE) de la seccion histologica del intestino medio.
Figura 5. Relacion DI/DE de intestino medio muestreado en lubina europea alimentada con tratamientos dieteticos durante 56 dfas. GH: grado de hidrolisis; FM5: dieta para peces que contiene 5% de harinas de pescado; FM20: dieta para peces que contiene 20% de harinas de pescado.
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Figura 5bis. Seccion histologica del intestino medio de peces alimentados con dieta FM5 (A) y peces alimentados con FM5 + 5% de hidrolizados de protefnas de crustaceos (B).
Figura 6. Analisis comparativo de la expresion del gen beta-actina entre peces de los tratamientos de alimentacion FM5 (=dieta para peces que contiene 5% de harinas de pescado), FM20 (=dieta para peces que contiene 20% de harinas de pescado) y FM5 + 5% de hidrolizado de protefnas de crustaceos. Los datos se refieren a valores de medias de 15 peces en cada tratamiento. El analisis comparativo de la cantidad de ARNm de act. de la diana (a lo largo de los tres segmentos intestinales) en terminos de los valores 2-aCT (eje Y) (**P<0,01) (*P<0,05; ANOVA a una via). Pil_ca: apendice pilorico; int.: intestino proximal; dist.: intestino distal.
Figura 7. Calidad de las protefnas de las harinas de pescado, hidrolizados de protefnas de crustaceos (HID CRUS) y de los hidrolizados de pescado blanco (HID pescado blanco). El contenido de protefnas en bruto, protefnas solubles y aminoacidos libres se expresa como % del hidrolizado. Se determino el perfil de pesos moleculares peptfdicos en % de las protefnas solubles presentes en el hidrolizado.
Figura 8. Perfil de aminoacidos de las harinas de pescado, hidrolizados de protefnas de crustaceos (HID CRUS) y del hidrolizado de pescado blanco (HID pescado blanco) (% del producto).
Figura 9. Isocurvas de respuesta para la tasa de crecimiento especffico (TCE) en lubina europea alimentada con dietas que incluyen hidrolizado de protefnas de crustaceos (HID CRUS) durante 47 dfas.
Figura 10. Isocurvas de respuesta para el fndice de conversion para el fndice de conversion alimentaria (ICA) en lubina europea alimentada con dietas que inclufan hidrolizado de protefnas de crustaceos (HID CRUS) durante 47 dfas.
Figura 11. Isocurvas de respuesta para la tasa de crecimiento especffico (TCE) en lubina europea alimentada con dietas que inclufan hidrolizado de pescado blanco (HID de pescado blanco) durante 47 dfas.
Figura 12. Isocurvas de respuesta para el fndice de conversion alimentaria (ICA) en lubina europea alimentada con dietas que inclufan hidrolizado de pescado blanco (HID de pescado blanco) durante 47 dfas.
Figura 13. Tasa de crecimiento especffico (TCE) de lubina europea alimentada con tratamientos dieteticos durante 45 dfas (C: recubrimiento; I: inclusion; Hid. Crust.: hidrolizado de protefnas de crustaceos; FM5: dieta para peces que contiene 5% de harinas de pescado; FM20: dieta para peces que contiene 20% de harinas de pescado).
Figura 14. fndice de conversion alimentaria (ICA) en lubina europea alimentada con tratamientos dieteticos durante 45 dfas (C: recubrimiento; I: inclusion; Hid. Crust.: hidrolizado de protefnas de crustaceos; FM5: dieta para peces que contiene 5% de harinas de pescado; FM20: dieta para peces que contiene 20% de harinas de pescado).
Figura 15. Proporcion de peces muy delgados en lubina europea alimentada con tratamientos dieteticos durante 45 dfas (C: recubrimiento; I: inclusion; Hid. Crust.: hidrolizado de protefnas de crustaceos; FM5: dieta para peces que contiene 5% de harinas de pescado; FM20: dieta para peces que contiene 20% de harinas de pescado).
Figura 16. Supervivencia del falso fletan del Japon (Paralichthys olivaceus) alimentado con tratamiento dieteticos y despues retado con Streptococcus iniae durante 60 dfas (Hid crust.: hidrolizado de protefnas de crustaceos).
Figura 17. Supervivencia de la dorada del Japon (Pagrus major) alimentada con tratamientos dieteticos y despues retada con Edwarsellia tarda durante 84 dfas (Hid. crust.: hidrolizado de protefnas de crustaceos).
Figura 18. Rendimiento del hidrolizado de diferentes orfgenes (peces y crustaceos) en lubina europea alimentada con tratamientos dieteticos durante 18 dfas mediante la medicion de la tasa de crecimiento especffico (TCE) (FM5: dieta para peces que contenfa 5% de harinas de pescado; FM20: dieta para peces que contenfa 20% de harinas de pescado).
Figura 19. Rendimiento del hidrolizado de diferentes orfgenes (peces y crustaceos) aplicado mediante inclusion o recubrimiento superficial, en lubina europea alimentada con tratamientos dieteticos durante 57 dfas mediante la medicion de la tasa de crecimiento especffico (TCE) (FM5: dieta para peces que contiene 5% de harinas de pescado; FM20: dieta para peces que contiene 20% de harinas de pescado).
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Descripcion detallada de la invencion Definiciones
A menos que se indique especfficamente lo contrario, los porcentajes se expresan en la presente memoria en peso.
Los porcentajes pueden expresarse en la presente memoria en peso de una referencia de producto en "peso seco". El experto en la materia apreciara que la expresion "en peso seco" se refiere a que se mide la concentracion o porcentaje del ingrediente en una composicion tras eliminar el agua libre o tras determinarla en peso de la composicion tras restar cualquier humedad libre en la composicion.
En la presente exposicion los intervalos se indican abreviadamente de manera que se evite indicar y explicar todos y cada uno de los valores dentro del intervalo. Puede seleccionarse cualquier valor apropiado dentro del intervalo, en caso apropiado, como valor superior, valor inferior o extremo del intervalo. Por ejemplo, un intervalo de 0,1 a 1,0 representa los valores terminales 0,1 y 1,0, asf como los valores intermedios 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 y todos los intervalos intermedios comprendidos dentro de 0,1 y 1,0, tales como 0,2 a 0,5, 0,2 a 0,8, 0,7 a 1,0, etc.
Tal como se utiliza a lo largo de la memoria, la forma singular de un termino incluye el plural, y viceversa, a menos que el contexto indique claramente lo contrario. De esta manera, las referencias "un" o "una", y "el" o "la" son generalmente inclusivas de los plurales de los terminos respectivos. Por ejemplo, la referencia a "un procedimiento" o "un pienso" incluye una pluralidad de dichos "procedimientos" o "piensos". De manera similar, los terminos "comprende" y "comprendiendo" deben interpretarse de manera inclusiva. De manera similar, los terminos "incluye", "incluyendo" y "o" deben interpretarse todos como inclusivos. Sin embargo, la totalidad de dichos terminos debe considerarse como comprendiendo formas de realizacion exclusivas a las que tambien puede hacerse referencia utilizando terminos tales como "consisten de".
Los procedimientos y composiciones y otras formas de realizacion ejemplificadas en la presente memoria no se encuentran limitadas a las metodologfas, protocolos y reactivos particulares que se indican en la presente memoria debido a que, tal como apreciara el experto en la materia, pueden variar.
A menos que se defina de otra manera, todos los terminos tecnicos y cientfficos, terminos de la tecnica y acronimos utilizados en la presente memoria presentan los significados entendidos comunmente por el experto en la materia en el campo o campos de la invencion, o en el campo o campos en los que se utiliza el termino. Aunque pueden utilizarse en la practica de la presente invencion cualesquiera composiciones, procedimientos, artfculos fabricados u otros medios o materiales similares o equivalentes a los indicados en la presente memoria, se indican en la presente memoria las composiciones, procedimientos, artfculos fabricados u otros medios o materiales preferentes.
El termino "aproximadamente" tal como se utiliza en la presente memoria en referencia a un valor medible, tal como una cantidad, una duracion temporal y similares, pretende comprender variaciones de ±15%, mas preferentemente de ±10%, todavfa mas preferentemente de ±5% respecto al valor especificado, ya que dichas variaciones resultan apropiadas para reproducir los procedimientos y productos dados a conocer.
Las expresiones "acuicultura", "piscicultura", "cultivo de peces" y "crfa de peces" son sinonimas y se utilizan en la presente memoria segun su significado equivalente habitual. Los peces generalmente se crfan en "corrales", "estanques", "tanques" o "jaulas" de diferentes tamanos, volumenes y capacidades, dependiendo de la especie de pez que debe criarse, la ubicacion de la piscifactorfa, los medios economicos del piscicultor, etc.
El termino "corral" se utilizara posteriormente para referirse a cualquiera de entre un corral, un estanque, un tanque y una jaula.
En el contexto de la presente invencion, el termino "pez" o "pez de cultivo" se refiere a cualquier especie de pez que pueda criarse para los fines de suministrar peces comestibles a la poblacion (seres humanos y animales, en particular animales de companfa).
Existen 3 "grupos de peces" diferentes que se definen a partir de los requisitos nutricionales y habitos de alimentacion de los peces: el grupo de los peces carnfvoros, el grupo de los peces omnfvoros y el grupo de los peces herbfvoros.
A tftulo de ejemplo de especies de peces carnfvoros puede citarse el salmon rosado (Oncorhynchus gorbuscha), el salmon chum (Oncorhynchus keta), el salmon coho (Oncorhynchus kisutch), el salmon masu (Oncorhynchus masou), la trucha arcoiris (Oncorhynchus mykiss), el salmon rojo (Oncorhynchus nerka), el salmon atlantico (Salmo salar), la trucha marina (Salmo trutta), la trucha comun (Salvelinus fontinalis), la trucha de lago (Salvelinus namaycush), la anguila japonesa (Anguilla japonica), la anguila americana (Anguilla rostrata), la anguila europea (Anguilla anguilla), la perca americana (Micropterus salmoides), el pez limon (Seriola dumerili), "buri" (Seriola quinqueradiata), el jurel japones (Trachurus japonicas), el besugo negro (Acanthopagrus schlegeli), el sargo (Diplodus sargus), la dorada japonesa (Evynnis japonica), la dorada del Japon (Pagrus major), el bocinegro (Pagrus
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pagrus), el sargo dorado (Rhabdosargus sarba), la dorada (Sparus aurata), la lubina roja (Sciaenops ocellatus), el atun de aleta azul del sur (Thunnus maccoyii), el atun de aleta azul del norte (Thunnus thynnus), la perca trepadora (Anabas testudineus), el rodaballo (Psetta maxima), el falso fletan del Japon (Paralichthys olivaceus), el lenguado comun (Solea vulgaris), el lenguado senegales (Solea senegalensis), el fletan (Hippoglossus hippoglossus), la lubina rayada (Morone saxatilis), el barramundi (Lates calcarifer), la perca del Nilo (Lates niloticus), el bacalao del Atlantico (Gadus morhua), la lubina (Dicentrarchus labrax), el mero (Epinephelus sp.), el mero moteado del coral (Plectropomus maculates), la perca de rfo (Perca fluviatilis), la perca regia (Argyrosomus regius) y la cobia (Rachycentron canadum).
A tftulo de ejemplo de especies de peces omnfvoros, pueden citarse las especies de barbo (Puntius spp.), la carpa negra (Mylopharyngodon piceus), la carpa de fango (Cirrhinus molitorella), la perca trepadora (Anabas testudineus), la carpa comun (Cyprinus carpio), el carpfn (Carassius carassius), la pirapatinga (Piaractus brachypomus), el barbo plateado (Barbonymus gonionotus), la carpa Mrigale (Cirrhinus mrigala), el pacu (Piaractus mesopotamicus), especies de Tilapia [Oreochromis spp. (niloticus y mossambicus e hfbridos), Sarotherodon spp., Tilapia spp.], especies de bagre [Clarias spp. (gariepinus, macrocephalus, hfbridos), Pangasius spp. (Pangasius hypophthalmus, Pangasius pangasius), el bagre de canal (Ictalurus punctatus), el bagre comun japones (Silurus asotus), el siluro chino de hocico largo (Leiocassis longirostris) y el bagre amarillo (Pelteobagrus fulvidraco)].
A tftulo de ejemplo de especies de peces herbfvoros, pueden citarse la carpa plateada (Hypophtalmichthys molitrix), la carpa catla (Catla catla), el labeo rojo (Labeo rohita), el chano (Chanos chanos), el pardete (Mugil cephalus), la carpa herbfvora (Ctenopharyngodon idella), carpa de Wuchang (Megalobrama amblycephala), el gurami grande (Osphronemus goramy), el gurami piel de serpiente (Trichigaster pectoralis), algunas especies de Tilapia (Tilapia rendalli y Tilapia zillii), el gurami gigante (Osphronemus goramy) y la carpa cabezona (Hypophthalmichthys nobilis (filtrador)).
Los terminos "larvario", "larvas" y "larva" se refieren a un estadio recien eclosionado de desarrollo de pez que experimental metamorfosis, presentando una apariencia marcadamente diferente de los alevines, adultos y maduros y que presentan capacidades digestivas y de absorcion de los piensos limitadas.
De esta manera, tal como se utiliza en la presente memoria, la expresion "poslarvario" se refiere a estadios de desarrollo en los que el pez presenta escamas, morfologicamente presenta la apariencia adulta y presenta capacidades digestivas y de absorcion completas de los piensos. De esta manera, la expresion "peces poslarvarios" comprende alevines, peces adultos y peces maduros. En la presente memoria, la expresion "peces poslarvarios" se refiere a cualquier pez seleccionado de entre alevines, peces adultos y peces maduros. Las mezclas de peces seleccionados de entre alevines, peces adultos y peces maduros tambien se encuentran comprendidas en la expresion "peces poslarvarios".
Tal como se utiliza en la presente memoria, el termino "marisco" o "crustaceos" se refiere a una gran familia de artropodos marinos que incluye elementos comunes como cangrejos, langostas, gambas, kril y percebes. Preferentemente, en el contexto de la presente invencion, el termino "crustaceos" se refiere a las familias siguientes: Penaeidae, Palaemonidae, Pandalidae, Galatheidae, Euphausiidae, Mysidae y Nephropidae. Los crustaceos preferentes son las gambas y el kril.
La expresion "materiales proteicos de crustaceos" pretende referirse en la presente memoria a crustaceos completos y/o partes o productos secundarios de los mismos, siendo estas partes o productos secundarios de los mismos uno o mas de entre, entre otros, cabeza, vfsceras, carne, conchas y patas delanteras.
El termino "pienso" o "dieta" tal como se utiliza en la presente memoria se refiere a uno o mas productos o composiciones que estan destinadas a la ingestion por peces y que proporcionan por lo menos un nutriente a los peces. La composicion del pienso depende del grupo de peces que sera alimentado con dicho pienso. Un pienso para peces carnfvoros es diferente de un pienso para peces omnfvoros y de un pienso para peces herbfvoros, siendo tambien los dos ultimos piensos diferentes entre sf. Tfpicamente, los peces, especialmente los peces carnfvoros, requieren protefnas/peptidos/aminoacidos, grasas, minerales y vitaminas para crecer y para encontrarse en un buen estado de salud.
El termino "pienso" o "dieta" segun la presente invencion excluye los "cebos", los cuales solo se utilizan para atraer a los peces.
El "pienso" para peces o "dieta" para peces esta compuesto tfpicamente de una o mas fuentes de protefna, tales como, aunque sin limitacion, protefnas marinas, incluyendo, entre otras, harina de pescado y harina de kril, protefnas vegetales (por ejemplo harina de soja, harina de semilla de colza, gluten de trigo, gluten de mafz, harina de altramuz, harina de guisante, harina de semilla de girasol y harina de arroz) y productos secundarios de matadero, tales como harina de sangre, harina de huesos, harina de plumas y harina de aves de corral. Los "piensos" para peces o "dieta" para peces contienen ademas grasas, tales como aceite de pescado y/o aceites de origen vegetal (por ejemplo aceite de semilla de colza y aceite de soja) y/o grasas de origen terrestre (en particular, grasa de aves de corral) como fuentes energeticas. Puede contener ademas un ligante, habitualmente en forma de una materia prima que
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contiene almidon, tal como trigo o harina de trigo, harina de patata, arroz, harina de arroz, harina de guisante, harina de judfas o de tapioca, para proporcionar al pienso la resistencia y estabilidad de la forma deseadas. Habitualmente, el "pienso" para peces o "dieta" para peces contiene ademas minerales y vitaminas para cuidar del buen crecimiento y buena salud de los peces. Los piensos pueden contener ademas ingredientes adicionales, tales como pigmentos. De esta manera, un "pienso" para peces o "dieta" para peces tfpico es un pienso compuesto en el que las cantidades relativas de protemas, grasas, carbohidratos, vitaminas, minerales y cualesquiera otros ingredientes se calculan para estar adaptadas optimamente a las necesidades nutricionales del grupo de peces y de las especies de peces basandose en la edad de los peces, el procedimiento de cna y las condiciones ambientales. Es habitual que la alimentacion se lleve a cabo con un unico tipo de pienso cada vez y de manera que cada trozo de pienso resulte nutricionalmente adecuado. De esta manera, el "pienso" para peces o "dieta" para peces comun presenta una composicion aproximada de 25% a 60% en peso de protemas, 5% a 40% en peso de lfpidos y 3% a 15% en peso de humedad.
Como pienso compuesto, el "pienso" para peces o "dieta" para peces tfpico contiene mas de un ingrediente de pienso. De esta manera, el "pienso" para peces o "dieta" para peces tal como se da a conocer en la presente memoria contiene ventajosamente por lo menos un ingrediente de pienso de la presente invencion y por lo menos otro ingrediente de pienso para peces convencional, tal como harina de pescado, harina vegetal y similares.
Tal como se utiliza en la presente memoria, un "pienso para juveniles" se formula para satisfacer los requisitos nutricionales de peces con un peso corporal comprendido entre aproximadamente 0,5 g y aproximadamente 50 g.
Tal como se utiliza en la presente memoria, un "pienso de crecimiento" se formula para satisfacer los requisitos nutricionales de los peces con un peso corporal comprendido entre aproximadamente 50 g y el peso del pez comercializable.
Tal como se utiliza en la presente memoria, un "pienso para reproductores" se formula para satisfacer los requisitos nutricionales de peces maduros/adultos que se utilizan comunmente como genitores en acuicultura.
Originalmente, en la cna de peces carmvoros, se utilizaron peces enteros o pescado molido para cubrir los requisitos nutricionales de los peces de cna. El pescado molido mezclado con materias primas secas de diversos tipos, tales como harina de pescado y almidon, se denomino "pienso blando". Gradualmente, la piscicultura se ha industrializado y los piensos blandos han sido sustituidos por piensos secos del tipo pienso comprimido. El pienso comprimido ha sido sustituido gradualmente por el pienso seco de tipo pienso extrudido. Actualmente el pienso extrudido es practicamente universal en la piscicultura de un gran numero de especies de peces, tales como varias especies de salmonidos, bacalao, lubina y dorada.
En su sentido original y mas amplio, el termino "extrusion" se refiere a la creacion de un objeto que presenta un perfil fijo en seccion de transversal. Lo anterior se lleva a cabo tirando o forzando un material conformable a traves de una abertura de una matriz que presenta la seccion transversal deseada. En las industrias alimentaria y de piensos, especialmente en la industria de la alimentacion pisdcola, el termino "extrusion" se utiliza comunmente en un sentido mas estrecho. En estas industrias, se utilizan extrusores de tipo un solo husillo o de doble husillo. El material extrudido es una mezcla de materias primas proteicas, materias primas que contienen almidon, grasas y agua. El agua puede anadirse a la mezcla en forma de agua o vapor. Ademas, la mezcla puede comprender minerales y vitaminas y posiblemente pigmento. La mezcla puede precalentarse en un preacondicionador, en donde el calentamiento tiene lugar mediante la adicion de vapor a la mezcla. Tambien puede anadirse vapor y agua a la sustancia en el interior del extrusor. En el extrusor mismo, la sustancia de tipo masa se fuerza mediante los husillos hacia una constriccion en el extremo de salida del extrusor y seguidamente a traves de una placa de matriz en donde la sustancia adopta la forma en seccion transversal que se desea. En el exterior de la placa de matriz normalmente se encuentra una cuchilla giratoria que corta la hebra que sale de los orificios de la matriz a la longitud deseada. Normalmente, la presion en el exterior de la placa de la matriz sera igual a la presion circundante. El producto extrudido generalmente se denomina "extrudido". Debido a la presion creada en el interior del extrusor y la adicion de vapor a la sustancia, la temperatura puede ser superior a 100°C y la presion puede ser superior a la presion atmosferica en la sustancia antes de ser forzada a traves de las aberturas de la matriz. Este procedimiento de extrusion tambien se denomina "coccion por extrusion". De esta manera, el termino "extrusion" se refiere en la presente memoria a la coccion por extrusion mediante un extrusor de un solo husillo o un extrusor de doble husillo. La expresion "pienso extrudido" se refiere al pienso producido mediante coccion por extrusion mediante un extrusor de un solo husillo o un extrusor de doble husillo. El pienso para peces extrudido tfpicamente se presenta en forma de granulos (“pellets”). La mayor parte, si no la totalidad, del "pienso extrudido" disponible actualmente contiene menos de aproximadamente 10% de agua y presenta un recubrimiento de aceite.
La expresion "pienso comprimido" se refiere a un pienso producido mediante una prensa de pienso. Este procedimiento difiere de la extrusion de varias maneras. Se utiliza menos agua y vapor durante el procedimiento. Se fuerza el paso de la mezcla de pienso por el anillo de la matriz desde el interior hacia el exterior mediante la utilizacion de rodillos que giran en el interior del anillo de la matriz. La temperatura y la presion son mas bajos que en la extrusion y el producto no es poroso. El procedimiento implica que el almidon no es tan digerible como despues de la extrusion. Un "pienso comprimido" normalmente contiene menos de aproximadamente 10% de agua tras el
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prensado y cualquier recubrimiento con aceite. No resulta necesario secar un pienso comprimido. El pienso se enfrfa antes del envasado opcional.
La expresion "pienso seco" se refiere a un pienso del tipo comprimido o extrudido.
Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresion "ingrediente de pienso" se refiere a un componente del pienso para peces o un componente de la dieta para peces. Puede ser un componente de un pienso para peces compuesto, completo y formulado, tal como un componente de un pienso extrudido, en particular de un granulo. Alternativamente, puede ser un complemento de pienso diferente proporcionado a los peces de cultivo ademas del pienso formulado. En este tipo de forma de realizacion, el ingrediente de pienso y el pienso formulado son dos componentes separados que constituyen un pienso para peces completo y pueden proporcionarse a los peces simultanea o separadamente.
Un "ingrediente de pienso" puede encontrarse bajo diversas formas. Puede ser un lfquido (por ejemplo que presenta entre aproximadamente 10% y aproximadamente 30% de materia seca) o un concentrado lfquido (por ejemplo que presenta entre aproximadamente 30% y aproximadamente 60% de materia seca) o una pasta (por ejemplo que presenta entre aproximadamente 60% y aproximadamente 85% de materia seca) o unos polvos (por ejemplo que presenta entre aproximadamente 85% y aproximadamente 100% de materia seca).
Tal como se utiliza en la presente memoria, un "ingrediente de pienso compuesto" es una mezcla o una combinacion o una asociacion o una composicion de ingredientes de piensos para peces que incluye por lo menos un ingrediente de pienso de la presente invencion (que esta constituido de hidrolizados de protefnas de crustaceos) y otro u otros ingredientes de piensos diferentes de los hidrolizados de protefnas de crustaceos, tales como ingredientes de piensos para peces convencionales (por ejemplo harina de pescado, harina vegetal y similares).
El termino "granulo" utilizado en la presente memoria se refiere a pedazos o trozos constituidos de partfculas formados mediante un procedimiento de compresion o extrusion. Los trozos pueden variar en tamano y/o forma, dependiendo del procedimiento o de los equipos. La mayorfa de granulos de pienso para peces presentan una forma cilfndrica. Debido a que los peces se crfan utilizando un producto de pienso para peces, desde alevines (con un peso de aproximadamente 0,5 g) hasta peces grandes, con un peso de varios kilogramos (por ejemplo 4 a 5 kg), se requieren y se utilizan diversos tamanos de granulo para la alimentacion en diferentes etapas del crecimiento de los peces. El tamano y/o la forma de los granulos en efecto deben adaptarse al tamano de los peces. De esta manera, durante un ciclo de crfa de los peces, se utilizan granulos de tamano creciente a medida que crecen los peces. Por ejemplo, en la crfa del salmon, tfpicamente se requieren 6 o 7 tamanos de granulo diferentes al utilizar los piensos para peces existentes. Ademas, en la crfa de la lubina, comunmente se utilizan granulos de 5 tamanos diferentes para satisfacer el crecimiento de los peces. El tamano del granulo que debe utilizarse esta determinado por el tamano de los peces segun la practica anterior.
Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresion "granulos de pienso" cumplen ambas definiciones de "alimento" y "granulo" anteriormente indicadas. De esta manera, la expresion "granulos de pienso" se refiere no solo a la composicion y formulacion del pienso sino tambien a la estructura ffsica, forma, tamano y densidad de los granulos.
El termino "aminoacido" se refiere a una molecula que contiene tanto un grupo amino como un grupo carboxilo. En algunas formas de realizacion, los aminoacidos son a-, p-, y- o 6-aminoacidos, incluyendo los estereoisomeros de los mismos y los racematos.
La expresion "aminoacidos libres" pretende referirse en la presente memoria a aminoacidos que se encuentran presentes individualmente como ingredientes no unidos en un producto o en una composicion. Los aminoacidos libres no forman parte o no se encuentran contenidos en peptidos o protefnas. En el caso de que se encuentren contenidos en un ingrediente de pienso, no se espera que los aminoacidos libres reaccionen significativamente in situ con cualquier otro ingrediente que puede encontrarse presente en el ingrediente de pienso. De esta manera, se encuentran comprendidos sin modificacion en el ingrediente de pienso.
El termino "peptido" pretende referirse en la presente memoria a una cadena corta de aminoacidos. En particular, un "peptido" en el presente contexto se caracteriza por su peso molecular (PM), expresado en daltons (Da).
La expresion "protefnas totales" o "protefnas en bruto" pretende referirse en la presente memoria a la cantidad global de protefnas presente en un producto dado.
La expresion "protefnas solubles" en la presente memoria pretende referirse a la fraccion de protefna de un producto dado que es capaz de ser disuelta en agua. De hecho, "protefnas solubles" se refiere principalmente a peptidos y aminoacidos libres.
El termino "proteasas" se refiere a enzimas que hidrolizan los enlaces peptfdicos que unen los aminoacidos entre sf en una cadena polipeptfdica.
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El termino "endoproteasa" o "endopeptidasa" se refiere a cualquier enzima proteolftico que cataliza el corte de enlaces internos en un peptido o en una protefna.
El termino "exoproteasa" o "exopeptidasa" se refiere a cualquier enzima proteolftico que cataliza el corte de los enlaces peptfdicos externos en un peptido o en una protefna.
La expresion "proteasas endogenas" se refiere a proteasas que se originan o son producidas dentro de un organismo, tejido o celula.
La expresion "proteasas exogenas" se refiere a proteasas que no se encuentran presentes naturalmente en un organismo, tejido o celula y que son anadidas a dicho organismo, tejido o celula con el fin de hidrolizar protefnas.
En el campo de la presente invencion, al experto en la materia le resultaran familiares los "parametros zootecnicos", entre ellos la tasa de supervivencia, la ingesta de pienso o el consumo de pienso (Ac), la tasa de crecimiento especffico (TCE) y el fndice de conversion de pienso (ICA). Estos parametros se utilizan comunmente en acuicultura para evaluar, por ejemplo, como/que comen o prefieren comer los peces, como crecen los peces, como utilizan los peces el pienso ingerido, etc. Se determinan utilizando mediciones experimentales convencionales y ecuaciones matematicas que son bien conocidas de la tecnica (ver, por ejemplo, el manual de Guillaume et al., publicado en septiembre de 2001).
El parametro "tasa de supervivencia" puede definirse como la relacion entre el numero final de peces (es decir, el numero total de peces vivo que se encuentra finalmente contenido en el corral) y el numero inicial de peces (es decir, el numero total de peces que se encontraba contenido inicialmente en el corral).
El parametro "tasa de crecimiento especffico" (TCE) se expresa como porcentaje de incremento de la biomasa de peces en un dfa. La TCE (expresada en, por ejemplo, %/dfa) no considera la cantidad de pienso proporcionado para obtener crecimiento. Es una medida de unicamente la tasa de crecimiento. La TCE depende de la digestibilidad del pienso para peces y su perfil en terminos de proporcion de protefnas y grasas, asf como de las composiciones de aminoacidos y acidos grasos.
El parametro "consumo de pienso" o "ingesta de pienso" (Ac) se define como el peso de pienso realmente consumido por los peces en el corral durante un periodo de tiempo dado. Puede calcularse Ac utilizando la ecuacion (1):
Ac = As - An
en la que As es el peso seco del pienso total que se ha repartido en exceso en el corral durante dicho periodo de tiempo y An es el peso seco del pienso no ingerido total que se recupera diariamente del corral durante dicho periodo de tiempo.
Ac puede expresarse en g de pienso/kg de biomasa media de peces/dfa.
El parametro "fndice de conversion de pienso" (ICA) es un parametro economico que indica el nivel de eficiencia del crecimiento de los peces a los que se proporciona el pienso. El crecimiento de los peces de hecho corresponde a la deposicion de protefnas, grasas y agua en el musculo. De esta manera, el ICA refleja la "utilizacion del pienso" por los peces o la "eficiencia del pienso". El ICA varfa entre las especies de pez y tambien con el tamano de los peces. A tftulo de ejemplo, en el salmon atlantico, el ICA tfpicamente pude ser de entre aproximadamente 0,7 y aproximadamente 2. El pienso para peces industrial en forma de pienso comprimido y pienso extrudido contiene cantidades reducidas de agua, tfpicamente de entre aproximadamente 5% y aproximadamente 10%. El cuerpo de los peces presenta un contenido de agua mas elevado. Por este motivo el ICA de diferentes piensos en teorfa deberfa considerar el contenido de agua de los piensos ya que el agua no contribuye al crecimiento. Mas exactamente, el ICA en teorfa deberfa calcularse en unidades de materia seca. Sin embargo, debido a que el contenido de agua se encuentra dentro de un intervalo estrecho y ya que resulta complicado para el piscicultor calcular el ICA en materia seca, el ICA habitualmente se calcula con el pienso incluyendo el contenido de agua.
Debe indicarse que la determinacion de los parametros zootecnicos es importante en acuicultura, por lo menos por los motivos siguientes. Tfpicamente existen numerosos peces individuales en un corral o estanque (por ejemplo 10.000 a 30.000 individuos), de manera que la alimentacion no puede observarse a nivel individual. Ademas, parte del pienso se pierde comunmente debido a que los granulos de pienso se rompen en el sistema de alimentacion y los trozos rotos son excesivamente pequenos para ser ingeridos o son tan pequenos que se reconocen como polvo. Ademas, algunos granulos de pienso no son ingeridos por los peces sino que simplemente sedimentan por la columna de columna. Ademas, parte del pienso se pierde debido a que los peces son alimentados hasta la saciedad, mientras que la alimentacion continua (lo que se conoce como "sobrealimentacion" o alimentacion "en exceso"). Alternativamente, puede producirse la infra-alimentacion, en cuyo caso la ICA se incrementa debido a que una proporcion mas alta de los nutrientes del pienso (materias primas originados en peces, plantas o de origen
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terrestre, compuestos nitrogenados, grasas, carbohidratos y similares) sera utilizada con fines metabolicos en lugar de ser utilizada para la deposicion de musculo.
Los terminos "estimular", "incrementar", "potenciar" y "mejorar" se utilizan en la presente memoria intercambiablemente. Una funcion o actividad o efecto biologico o tecnico de interes resulta "estimulado" en el caso de que sea mejor/mas elevado en un grupo de peces sometido a ensayo en comparacion con un grupo de peces estandar. A tftulo de ejemplo, la salud intestinal ha sido estimulada en el caso de que la salud intestinal de un grupo de peces sometido a ensayo alimentado con una dieta completa preparada a partir del ingrediente de pienso de la presente invencion y de un pienso convencional de bajo contenido en harinas de pescado (por ejemplo con un contenido de harinas de pescado de aproximadamente 5% en peso) es mejor/mas elevada que la salud intestinal de un grupo de peces estandar alimentado con unicamente dicho pienso convencional de bajo contenido de harinas de pescado.
Tal como se utiliza en la presente memoria, "un grupo de peces sometido a ensayo" es un grupo de peces con una dieta completa preparada a partir del ingrediente de pienso de la presente invencion y de un pienso convencional con un bajo contenido de harinas de pescado (por ejemplo que presenta un contenido de harinas de pescado de aproximadamente 5% en peso). "Un grupo de peces estandar" es un grupo de peces alimentados con unicamente un pienso convencional de bajo contenido en harinas de pescado (por ejemplo que presenta un contenido de harinas de pescado de aproximadamente 5% en peso). "Un grupo de peces de control" es un grupo de peces alimentados con unicamente un pienso convencional con elevado contenido de harinas de pescado (por ejemplo que presenta un contenido de harinas de pescado de aproximadamente 20% en peso).
Tal como se utiliza en la presente memoria, los terminos "vfsceras" e "intestino" son sinonimos.
La expresion "asimilacion de nutrientes" se refiere en la presente memoria a la absorcion o metabolizacion por el organismo del pez de sustancias dieteticas que resultan necesarias para los peces para crecer y para encontrarse en un buen estado de salud (en particular protefnas/peptidos/aminoacidos, grasas, minerales y vitaminas).
Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresion "resistencia a patogenos" se refiere a que los peces de cultivo no son susceptibles a infecciones o enfermedades causadas por microbios, incluyendo virus, bacterias, hongos, mohos y parasitos. En particular, los peces de cultivo no sufren de enteritis.
En referencia a un kit, la expresion "unico envase" se refiere a que los componentes de dicho kit estan ffsicamente asociados con uno o mas envases y se consideran una unidad de fabricacion, distribucion, comercializacion o utilizacion. Entre los envases se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, bolsas, cajas, paquetes, botellas, estuches, paquetes de cualquier tipo o diseno o material, componentes embalados, retractilados, grapados o de otro modo fijos, o combinaciones de los mismos. Un solo envase puede estar constituido por envases de componentes individuales asociados ffsicamente de manera que se considera que forman una unidad de fabricacion, distribucion, comercializacion o utilizacion.
Tal como se utiliza en la presente memoria, "medios para comunica informacion o instrucciones" es un componente del kit bajo cualquier forma adecuada para proporcionar informacion, instrucciones, recomendaciones y/o garantfas, etc. Dichos medios pueden comprender un documento, medios de almacenamiento digital, medios de
almacenamiento optico, presentacion de audio, visualizacion grafica que contiene informacion, etc. Los medios de comunicacion pueden ser un sitio de Internet visualizado, un folleto, una etiqueta de producto, un impreso en el paquete, un anuncio, un mensaje visual, etc.
El termino "recubrimiento" o "recubrimiento externo", tal como se utiliza en la presente memoria, se refiere a una deposicion topica de un producto o de una composicion sobre la superficie de un pienso para peces, tal como mediante pulverizacion, espolvoreo y similares.
La "inclusion" tal como se utiliza en la presente memoria se refiere a la adicion de un producto o de una composicion
internamente en una preparacion alimentaria para peces, mediante la mezcla del mismo con la preparacion
alimentaria para peces, antes de etapas de procesamiento adicionales para la obtencion del pienso para peces final.
El termino "palatabilidad" se refiere a una preferencia de un pez por un pienso y no por otro. La palatabilidad se refiere a la voluntad global de un pez de ingerir un determinado pienso. Ventajosamente, aunque no
necesariamente, la palatabilidad se refiere adicionalmente a la capacidad del pienso ingerido de satisfacer al pez. En todo caso en que un pez muestre una preferencia, por ejemplo por uno de entre dos o mas piensos, el pienso preferido es mas "agradable al paladar" y presenta una "palatabilidad incrementada". La palatabilidad de un aliento en comparacion con otro u otros piensos puede determinarse, por ejemplo, sometiendo a ensayo el consumo de los piensos por el pez. Dicha preferencia puede surgir a partir de cualquiera de los sentidos del pez, aunque tfpicamente se refiere, entre otros, al sabor, olor, aroma, gusto, textura y/o sensacion en boca.
A menos que se indique lo contrario, los pesos en la presente memoria se expresan en gramos.
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Descripcion de algunas formas de realizacion de la invencion
La presente invencion en la presente memoria proporciona un ingrediente de pienso para peces preparado a partir de hidrolizados de protefnas de crustaceos especfficos que se demuestra que (i) mantienen y/o estimulan la salud intestinal de los peces poslarvarios, e (ii) estimulan el atractivo o la palatabilidad del pienso.
De esta manera, la presente invencion se refiere a un ingrediente de pienso para peces constituido de uno o mas hidrolizados de protefnas de crustaceos para la utilizacion en un procedimiento para el mantenimiento y/o la estimulacion de la salud intestinal de peces poslarvarios de cultivo.
Preferentemente, dichos hidrolizados de protefnas de crustaceos comprenden:
- aminoacidos libres en una cantidad de entre 10% y 60% en peso y
- una cantidad de protefnas solubles de entre 70% y 100% respecto al peso de protefnas total de dichos hidrolizados, en el que dichas protefnas solubles presentan un perfil de distribucion del peso molecular de los peptidos tal como se indica en la tabla 1, posteriormente.
Tabla 1
- Peso molecular de los peptidos (PM en Da)
- Cantidad en % de protefnas solubles en los hidrolizados de protefnas de crustaceos
- PM < 500
- 50 < % < 100
- 500 < PM < 1.000
- 0 < % < 20
- 1.000 < PM < 5.000
- 0 < % < 20
- 5.000 < PM < 10.000
- 0 < % < 5
- PM > 10.000
- 0 < % < 5
Todavfa preferentemente, dichos hidrolizados de protefnas de crustaceos comprenden:
- aminoacidos libres en una cantidad de entre 12% y 58% en peso, y
- una cantidad de protefnas solubles de entre 80% y 100% respecto al peso de protefnas total de dichos hidrolizados, en el que dichas protefnas solubles presentan un perfil de distribucion de pesos moleculares de los peptidos tal como se indica en la tabla 2, a continuacion.
Tabla 2
- Peso molecular de los peptidos (PM en Da)
- Cantidad en % de protefnas solubles en los hidrolizados de protefnas de crustaceos
- PM < 500
- 57 < % < 100
- 500 < PM < 1.000
- 0 < % < 18
- 1.000 < PM < 5.000
- 0 < % < 17
- 5.000 < PM < 10.000
- 0 < % < 4
- PM > 10.000
- 0 < % < 4
En particular, dichos hidrolizados de protefnas de crustaceos se seleccionan de entre hidrolizados de protefnas de las familias de crustaceos siguientes: Penaeidae, Palaemonidae, Pandalidae, Galatheidae, Euphausiidae, Mysidae y Nephropidae. Todavfa en particular, dichos hidrolizados de protefnas de crustaceos se seleccionan de entre hidrolizados de protefnas de gambas y kril.
Pueden obtenerse hidrolizados de protefnas mediante tecnicas convencionales. Por ejemplo, puede conseguirse la hidrolisis de protefnas mediante uno o mas medios ffsicos (por ejemplo calor y/o corte), medios qufmicos (utilizando acidos o bases), medios enzimaticos (utilizando enzimas endogenos, obteniendo de esta manera autolisados o ensilados, y/o enzimas exogenos). Las formas de realizacion ventajosas de hidrolisis de las protefnas para producir hidrolizados de interes en el contexto de la presente invencion se ilustran en los ejemplos, posteriormente.
Tal como se ha mencionado en las definiciones, anteriormente, el ingrediente de pienso para peces constituido de hidrolizados de protefnas de crustaceos puede ser un lfquido, un concentrado lfquido, una pasta o unos polvos. Bajo estas circunstancias, los ejemplos de composiciones proximales (o analfticas) del ingrediente de pienso pueden ser tal como se indica en la tabla 3, a continuacion.
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Tabla 3
- Forma del hidrolizado
- Materia seca (%) Protefnas (%) Grasas (%) Ceniza (%)
- Lfquida
- 10-30% 8-20% 1-6% 1-10%
- Concentrado
- 30-60% 8-50% 1-15% 1-20%
- Pasta
- 60-88% 20-80% 1-30% 1-30%
- Polvos
- >88% 50-90% 1-35% 1-35%
Preferentemente, dicho pez poslarvario de cultivo es un pez poslarvario carnfvoro. Un pez carnfvoro particularmente preferente es la lubina.
En particular, la salud intestinal se mantiene y/o se estimula en dichos peces poslarvarios de cultivo mejorando el desarrollo del epitelio intestinal.
Todavfa en particular, la salud intestinal se mantiene y/o se estimula en dichos peces poslarvarios potenciando la asimilacion de nutrientes por parte de dichos peces poslarvarios de cultivo.
Todavfa en particular, la salud intestinal se mantiene y/o se estimula en dichos peces poslarvarios mediante el incremento de la resistencia de dichos peces poslarvarios de cultivo frente a patogenos.
Tambien se describe en la presente memoria un procedimiento para el mantenimiento y/o la estimulacion de la salud intestinal de los peces poslarvarios de cultivo, que comprende:
- alimentar dichos peces poslarvarios con un ingrediente de pienso constituido de uno o mas hidrolizados de protefnas de crustaceos.
Se describe ademas en la presente memoria la utilizacion de uno o mas hidrolizados de protefnas de crustaceos para la preparacion de un ingrediente de pienso para peces destinado a la utilizacion en un procedimiento para el mantenimiento y/o la estimulacion de la salud intestinal de peces poslarvarios de cultivo.
Todas las formas de realizacion preferidas, ventajosas o particulares indicadas anteriormente en relacion al ingrediente de pienso segun la presente invencion, se aplican tambien a las demas partes de la presente exposicion.
Se describe ademas en la presente memoria un ingrediente de pienso para la alimentacion de peces poslarvarios de cultivo constituido de uno o mas hidrolizados de protefnas de crustaceos tal como se ha indicado anteriormente.
Ventajosamente, los inventores han demostrado que dicho ingrediente de pienso constituido de hidrolizados de protefnas de crustaceos presenta un efecto de potenciacion de la palatabilidad al utilizarlo en pienso para peces (datos no mostrados).
La presente exposicion se refiere ademas a un procedimiento para la preparacion de un ingrediente de pienso tal como se ha mencionado anteriormente, que comprende:
a) proporcionar uno o mas materiales proteicos de crustaceos,
b) hidrolizar dichos materiales,
c) recuperar hidrolizados de protefnas de crustaceos, que comprenden:
- aminoacidos libres en una cantidad de entre 10% y 60% en peso, y
- una cantidad de protefnas solubles de entre 70% y 100% respecto al peso de protefnas total de dichos hidrolizados, en el que dichas protefnas solubles presentan un perfil de distribucion de pesos moleculares de peptidos tal como se indica en la tabla 1, anteriormente,
y
d) obtener dicho ingrediente de pienso constituido por uno o mas de dichos hidrolizados de protefnas de crustaceos.
En particular, dicho procedimiento comprende:
a) proporcionar uno o mas materiales proteicos de crustaceos,
de cultivo de cultivo
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b) hidrolizar dichos materiales,
c) recuperar hidrolizados de protemas de crustaceos, que comprenden:
- aminoacidos libres en una cantidad de entre 12% y 58% en peso, y
- una cantidad de protemas solubles de entre 80% y 100% respecto al peso de protemas total de dichos hidrolizados, en el que dichas protemas solubles presentan un perfil de distribucion de pesos moleculares de los peptidos tal como se indica en la tabla 2, anteriormente,
y
d) obtener dicho ingrediente de pienso constituido por uno o mas de dichos hidrolizados de protemas de crustaceos.
En formas de realizacion particulares, dicho procedimiento comprende ademas una o mas etapas intermedias entre las etapas b) y d), anteriormente, tal como:
e) tratar termicamente la mezcla resultante de la etapa b) o c), y/o
f) estabilizar adicionalmente la composicion resultante de la etapa b) o c) mediante, por ejemplo, acidificacion, adicion de conservantes y similares, y/o
g) opcionalmente, secar la composicion obtenida de la etapa b) o c).
En una forma de realizacion todavfa particular, pueden mezclarse entre sf dos o mas hidrolizados de protemas de crustaceos con el fin de obtener un hidrolizado de protemas de crustaceos final para la utilizacion como ingrediente de pienso en un pienso para peces. En el caso de que se lleve a cabo una etapa de secado g), dichos dos o mas hidrolizados de protemas de crustaceos pueden mezclarse antes de dicha etapa g).
En otra forma de realizacion todavfa particular, el hidrolizado o hidrolizados de protemas de crustaceos pueden mezclarse con una harina de pescado o con una harina vegetal, de manera que se obtiene un ingrediente de pienso para peces compuesto. De esta manera, el perfil de distribucion de los pesos moleculares de los peptidos del ingrediente de pienso para peces compuesto resultante puede ser diferente del indicado anteriormente para los hidrolizados de protemas de crustaceos.
Se indica adicionalmente en la presente memoria un ingrediente de pienso para peces compuesto para la alimentacion de peces poslarvarios de cultivo que comprende por lo menos un ingrediente de pienso constituido de hidrolizados de protemas de crustaceos tal como se ha indicado anteriormente.
Dicho ingrediente de pienso para peces compuesto puede comprender ademas, de esta manera, cualesquiera ingredientes de piensos para peces convencionales diferentes de los hidrolizados de protemas de crustaceos, tales como harina de pescado, harina vegetal y similares.
De esta manera, dicho ingrediente de pienso para peces compuesto puede obtenerse segun la practica convencional de la tecnica. Por ejemplo, puede obtenerse mediante por lo menos:
- la provision de por lo menos un ingrediente de pienso constituido de hidrolizados de protemas de crustaceos (que pueden prepararse utilizando el procedimiento dado a conocer anteriormente), y
- la mezcla con uno o mas ingredientes de piensos convencionales para peces diferentes de los hidrolizados de protemas de crustaceos, tales como harina de pescado, harina vegetal y similares.
En la presente memoria se describe ademas un pienso para peces para la alimentacion de peces poslarvarios de cultivo, que comprende:
- por lo menos un ingrediente de pienso constituido de hidrolizados de protema de crustaceos, y/o
- por lo menos un ingrediente de pienso para peces compuesto, tal como se ha indicado anteriormente.
Ventajosamente, dicho pienso para peces comprende una cantidad apropiada de dicho ingrediente o ingredientes de piensos constituidos por hidrolizados de protemas de crustaceos, en el que dicha cantidad apropiada depende del tipo de pienso. En particular:
- para juveniles, dicha cantidad apropiada de ingrediente de pienso constituido de hidrolizados de protemas de crustaceos esta comprendida entre aproximadamente 0,5% y aproximadamente 15%, preferentemente entre
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aproximadamente 1% y aproximadamente 10% (% expresado en peso del pienso en materia seca),
- para la alimentacion de crecimiento, dicha cantidad apropiada de ingrediente de pienso constituido por hidrolizados de protefnas de crustaceos esta comprendida entre aproximadamente 0,5% y aproximadamente 8%, preferentemente entre aproximadamente 1% y aproximadamente 5% (% expresado en peso del pienso en materia seca),
- para la alimentacion de reproductores, dicha cantidad apropiada de ingrediente de pienso constituido por hidrolizados de protefnas de crustaceos esta comprendida entre aproximadamente 0,5% y aproximadamente 8%, preferentemente entre aproximadamente 1% y aproximadamente 5% (% expresado en peso del pienso en materia seca).
Dicho pienso para peces puede comprender, de esta manera, cualesquiera ingredientes de piensos para peces, tales como harina de pescado, harina vegetal y similares.
De esta manera, dicho pienso para peces puede obtenerse segun la puesta en practica convencional de la tecnica. Por ejemplo, puede obtenerse mediante por lo menos:
- la provision de por lo menos un ingrediente de pienso constituido de hidrolizados de protefnas de crustaceos (que pueden prepararse utilizando el procedimiento dado a conocer anteriormente) y/o por lo menos un ingrediente de pienso para peces compuesto, y
- la mezcla con uno o mas ingredientes de piensos para peces convencionales, tales como harina de pescado, harina vegetal y similares.
En particular, uno o mas ingredientes de pienso para pescado y/o uno o mas ingredientes de pienso para peces compuestos tal como se indica en la presente memoria pueden aplicarse a un pienso para peces bajo la forma de granulos mediante inclusion y/o mediante recubrimiento. En otras palabras, el ingrediente o ingredientes de pienso para peces y/o el ingrediente o ingredientes de pienso compuestos para peces se incluyen en los granulos de aliento para peces o los granulos se recubren con uno o mas ingredientes de pienso para peces y/o con uno o mas ingredientes de pienso compuestos para peces.
Se da a conocer ademas en la presente memoria un procedimiento para alimentar peces poslarvarios de cultivo, que comprende:
- alimentar dichos peces poslarvarios con un ingrediente de pienso o un ingrediente de pienso compuesto o un pienso para peces tal como se ha indicado anteriormente.
Sin embargo, se da a conocer en la presente memoria un kit para la utilizacion en un procedimiento para el mantenimiento y/o la estimulacion de la salud intestinal de peces poslarvarios de cultivo, que comprende, en uno o mas envases en un solo paquete:
a) por lo menos un ingrediente de pienso constituido de hidrolizados de protefnas de crustaceos tal como se ha indicado anteriormente, y/o
b) por lo menos un ingrediente de pienso compuesto tal como se ha indicado anteriormente, y/o
c) por lo menos un pienso para peces tal como se ha indicado anteriormente.
Opcionalmente, dicho kit comprende ademas uno o mas de:
- por lo menos un ingrediente de pienso convencional para peces diferente de los hidrolizados de protefnas de crustaceos, tal como harina de pescado, harina vegetal y similares, y/o
- un medio para comunicar informacion o instrucciones al usuario para la utilizacion apropiada de los componentes del kit.
Los ejemplos a continuacion ilustran algunas formas de realizacion y ventajas de la presente invencion.
Ejemplos
1. Descripcion del hidrolizado de protefnas de crustaceos
1.1 Origen de las materias primas
Las materias primas pueden ser animales enteros o partes de animal de crustaceos salvajes o domesticos.
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Por ejemplo, pueden utilizarse animales de la familia Euphausiidae: kril (Euphausia superb), de la familia Penaeidae: gamba blanca (Penaeus vannamei), gamba tigre (Penaeus monodon), gamba azul (Litopenaeus stylirostris), de la familia Calanidae (Calanus finmarchicus), de la familia Pandalidae (Pandalus borealis) y similares.
1.2 Procesamiento de materia prima para obtener hidrolizados de proteinas de crustaceos Preprocedimiento de hidrolisis:
o Adicion de agua: 0% a 50% o Trituracion (3 a 30 mm)
o Calentamiento hasta la temperatura configurada de la etapa de hidrolisis (ver posteriormente)
Parametros del procedimiento de hidrolisis:
o Se recomienda llevar a cabo el procedimiento de hidrolisis en reactor (por lotes) horizontal o vertical cerrado con el fin de controlar la reaccion y obtener un hidrolizado estandarizado lote por lote.
o Los enzimas son proteasas exogenas o endogenas que pueden ser exopeptidasas o endopeptidasas o mezclas de ambas.
o Nivel de enzima, al anadir enzimas exogenos: 1% a 5% respecto a la protefna en bruto de las materias primas.
o Temperatura de la hidrolisis: segun las especificaciones del enzima, aunque habitualmente de entre 40°C y 60°C.
o Tiempo de hidrolisis: entre 15 min. y 120 min. desde que se alcanza el valor configurado de temperatura de hidrolisis.
Posprocedimiento de hidrolisis:
o Inactivacion del enzima: segun las especificaciones del enzima, aunque habitualmente de por lo menos 80°C durante 15 min.
o Los hidrolizados pueden desgrasarse en caso necesario mediante restricciones del procedimiento (tal como el secado).
o Los hidrolizados pueden estabilizarse como producto acabado lfquido o concentrarse o secarse.
1.3 Especificaciones del hidrolizado Composicion proximal (o analftica):
Los hidrolizados obtenidos de esta manera pueden ser un lfquido (10% a 30% de materia seca), un concentrado lfquido (30% a 60% de materia seca), una pasta (60% a 85% de materia seca) o unos polvos (>85% de materia seca).
Dependiendo de la forma de los hidrolizados (lfquidos, concentrado, pasta o polvos), la composicion proximal puede ser tal como se indica en la tabla 3, anteriormente.
Perfil de peptidos:
el perfil de peptidos de los hidrolizados obtenidos de esta manera resulta esencial para conseguir los efectos esperados del ingrediente de pienso.
El perfil de peptidos se expresa como porcentaje de proteinas solubles presentes en los hidrolizados de proteinas de crustaceos. Al final del procedimiento, dichas proteinas solubles pueden representar por lo menos 70% y preferentemente por lo menos 80% de las proteinas totales.
Al final del procedimiento de hidrolisis, el perfil de pesos moleculares de la protefna satisface lo indicado en las tablas 1 y 2, anteriormente.
2. Rendimiento de los hidrolizados de proteinas de crustaceos en peces poslarvarios
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2.1 Efecto positivo de los hidrolizados dieteticos de proteinas de crustaceos sobre el desarrollo intestinal en peces poslarvarios
Se llevo a cabo un ensayo de crecimiento con lubinas con el fin de estudiar el efecto del hidrolizado dietetico de proteinas de crustaceos seco ("HID. CRUS.") y de hidrolizado de pescado blanco ("HID. de pescado blanco") (figura 1) aplicado a una dieta de bajo contenido en harinas de pescado (5%, "FM5") y en comparacion con un control positivo que contenia 20% de harinas de pescado ("FM20"). Se repartio el pienso en exceso con recoleccion diaria del pienso no consumido.
Con el fin de formular las dietas de bajo contenido en harina de pescado, que contenian 5% de harina de pescado ("FM5"), se sustituyo la harina de pescado de FM20 en FM5 por una mezcla de materias primas de origen vegetal. Se anadio metionina libre, lisina libre y una fuente de fosforo (fosfato monocalcico) para satisfacer los requisitos nutricionales de la lubina (Tabla 4, a continuacion). Todos los demas ingredientes (por ejemplo vitaminas, minerales y similares) fueron los mismos en todas las formulaciones de pienso. Todos los piensos se formularon para ser isonitrogenados, isocaloricos e isolipidicos.
Tabla 4. Formula de pienso proporcionado a lubinas durante 56 dias (composicion proximal: proteina en bruto: 45%;
grasa en bruto: 16%; ceniza: 6,5%; energia: 5,1 Kcal/Kg)
- Ingredientes
- FM5 FM5 + 5% HID. CRUST. FM5 + 5% HID. PESC. BLANCO FM20
- Harina de pescado (calidad Super Prime)
- 5,00 5,00 5,00 20,00
- HID. CRUST.
- 0,00 5,00 0,00 0,00
- HID. PESC. BLANCO
- 0,00 0,00 5,00 0,00
- Proteinas vegetales mixtas
- 74,25 68,40 67,95 60,70
- Metionina libre
- 0,57 0,52 0,52 0,43
- Lisina libre
- 1,60 1,46 1,45 1,08
- Fosfato monocalcico
- 2,52 2,30 2,29 1,35
- Aceite de pescado
- 13,70 13,45 13,13 12,78
- Celulosa
- 0,00 1,50 2,30 1,30
- Premezcla (vitaminas, minerales, antioxidantes, etc.)
- 2,36 2,36 2,36 2,36
Al final del ensayo de 56 dias, se pesaron los peces para el calculo de la tasa de crecimiento especffico (TCE) y el indice de conversion de pienso (ICA); despues se muestrearon nueve peces por tratamiento para el analisis histologico del intestino medio. Se calculo la relacion diametro interno/diametro externo "DI/DE" de la seccion histologica del intestino medio tal como se muestra en la figura 4.
Al final del ensayo, solo la adicion de hidrolizados de proteinas de crustaceos a la dieta para peces permitio mejorar significativamente el rendimiento de crecimiento de los peces alimentados con dieta FM5 hasta alcanzar el del control positivo (figura 2). De la misma manera, se mejoro ligeramente la eficiencia del pienso (figura 3).
La adicion dietetica de los hidrolizados de proteinas de crustaceos con niveles elevados de aminoacidos libres y peptidos pequenos ("hidrolizado alto DH") mejoro significativamente el desarrollo de las microvellosidades intestinales en comparacion con los peces alimentados con FM5 (P=0,06) y con los peces alimentados con FM20 (P=0,07) (figura 5). La altura de las microvellosidades era mas alta que en otros tratamientos, incluso que el control positivo ("FM20"), y la luz interna era muy pequena, tal como se ilustra en la figura 5bis. Los hidrolizados de pescado blanco evaluados en el presente ensayo no presentaron este efecto significativo sobre el desarrollo intestinal.
El remodelaje del intestino de los peces alimentados con hidrolizados de proteinas de crustaceos se confirmo mediante el analisis de la expresion genica de la beta-actina (una proteina que participa en la estructura de la pared celular) en el intestino de los peces recolectados de otro ensayo realizado bajo las mismas condiciones del que se informa anteriormente. Se registro una sobreexpresion significativa del gen beta-actina en los peces alimentados con hidrolizados de proteinas de crustaceos, proporcionando otra prueba de un efecto positivo de dicho ingrediente sobre el desarrollo del epitelio intestinal (figura 6).
Con el fin de obtener los resultados ilustrados en la figura 6, se generaron unas curvas de amplificacion a partir de datos de qPCR en tiempo real y se calculo el ciclo umbral ("CU") basandose en un umbral de la fluorescencia de 0,01, en donde se define CU como el ciclo umbral de la PCR en el que se detecta por primera vez un producto amplificado. A continuacion, se determino la ACU para cada muestra utilizando la ecuacion ACU = CU gen diana - CU gen de referencia, a fin de calcular la expresion relativa de cada gen respecto al control de referencia interno. Lo
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anterior se llevo a cabo mediante una modificacion de la ecuacion original para la expresion relativa = 1 / (2ACU) para las muestras tanto de control como de tratamiento (Livak y Schmittgen, 2001; Schmittgen y Livak, 2008).
En consecuencia, se mejora la superficie de absorcion de nutrientes, de manera que la eficiencia del pienso podrfa mejorar en el caso de que los hidrolizados de protefnas de crustaceos sean un ingrediente del pienso.
2.2 Efectos positivos de los hidrolizados de protefnas de crustaceos sobre la asimilacion de nutrientes en la dieta en peces poslarvarios
Con el fin de estudiar el efecto positivo de los hidrolizados de protefnas de crustaceos dieteticos secos en la utilizacion del pienso, se diseno un experimento factorial completo con lubinas alimentadas con una gradacion de niveles de harina de pescado en la dieta e hidrolizados de protefnas de crustaceos en la dieta ("HID. CRUST.") o hidrolizados de pescado blanco ("HID. pescado blanco") que presentaban un perfil nutricional y calidad de las protefnas diferentes (figuras 7 y 8).
Se formularon veinte piensos que contenfan 4 niveles de harina de pescado (0, 5, 10 y 20%) y para cada nivel de harina de pescado, se evaluaron 5 niveles de hidrolizados (0, 2,5, 5, 7,5 y 10%) (Tabla 5, a continuacion).
Con el fin de formular dietas con bajo contenido de harina de pescado, se sustituyo la harina de pescado por una mezcla de materias primas de origen vegetal. Se anadio metionina libre, lisina libre y una fuente de fosforo (fosfato monocalcico) para satisfacer los requisitos nutricionales de la lubina (Tabla 6, posteriormente). Todos los demas ingredientes (por ejemplo vitaminas, minerales y similares) eran los mismos en todas las formulaciones de pienso. Todos los piensos se formularon para ser isonitrogenados, isocaloricos e isolipfdicos.
Se repitieron cuatro tratamientos para mejorar la robustez del ensayo. Los piensos se proporcionaron a lubinas durante 47 dfas. Se raciono el pienso para evitar la influencia de la adicion de hidrolizado sobre la palatabilidad del pienso y, por lo tanto, sobre los rendimientos de utilizacion del pienso.
Al final del ensayo, se pesaron los peces y a continuacion se analizaron los resultados de crecimiento y utilizacion del pienso utilizando el procedimiento estadfstico ANOVA (software Statgraphics) y se modelaron utilizando la ilustracion de respuestas de isocurvas.
Tabla 5. Tratamientos dieteticos con los que alimentaron lubinas durante 47 dfas
- Tratamientos
- Nivel de harina de pescado (%) Nivel de hidrolizado (%)
- 1
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- 2
- 2,5
- 3
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- 4
- 7,5
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Tabla 6. Formula alimentaria utilizada para alimentar lubinas durante 47 dfas (composicion proximal: protefna en bruto: 45%; grasa en bruto: 16%; ceniza: 6,5%; energfa: 5,1 Kcal/Kg)
- Harina de pescado en la dieta
- 0,0% 0,0% 0,0% 0,0% 0.0%
- HID. CRUST. en la dieta
- 0,0% 2,5% 5,0% 7,5% 10.0%
- Ingredientes
- Harina de pescado (calidad Super Prime)
- 0,00% 0,00% 0,00% 0,00% 0.00%
- HID. CRUST.
- 0,00% 2,50% 5,00% 7,50% 10.00%
- Protefnas vegetales mixtas
- 78,25% 76,18% 73,12% 70,51% 67.90%
- Metionina libre
- 0,61% 0,60% 0,58% 0,56% 0.54%
- Lisina libre
- 1,82% 1,77% 1,70% 1,64% 1.59%
- Fosfato monocalcico
- 2,96% 2,89% 2,77% 2,68% 2.58%
- Aceite de pescado
- 13,99% 13,70% 13,47% 13,26% 13.04%
- Celulosa
- 0,00% 0,00% 1,00% 1,50% 2.00%
- Premezcla (vitaminas, minerales, antioxidantes, etc.)
- 2,36% 2,36% 2,36% 2,36% 2.36%
- Harina de pescado en la dieta
- 5,0% 5,0% 5,0% 5,0% 5.0%
- HID. CRUST. en la dieta
- 0,0% 2,5% 5,0% 7,5% 10.0%
- Ingredientes
- Harina de pescado (calidad Super Prime)
- 4,97% 4,97% 4,97% 4,97% 4.97%
- HID. CRUST.
- 0,00% 2,50% 5,00% 7,50% 10.00%
- Protefnas vegetales mixtas
- 74,29% 72,21% 69,15% 66,54% 63.93%
- Metionina libre
- 0,57% 0,55% 0,53% 0,51% 0.49%
- Lisina libre
- 1,60% 1,55% 1,48% 1,42% 1.36%
- Fosfato monocalcico
- 2,52% 2,44% 2,33% 2,23% 2.14%
- Aceite de pescado
- 13,70% 13,41% 13,18% 12,97% 12.76%
- Celulosa
- 0,00% 0,00% 1,00% 1,50% 2.00%
- Premezcla (vitaminas, minerales, antioxidantes, etc.)
- 2,36% 2,36% 2,36% 2,36% 2.36%
- Harina de pescado en la dieta
- 10,0% 10,0% 10,0% 10,0% 10.0%
- HID. CRUST. en la dieta
- 0,0% 2,5% 5,0% 7,5% 10.0%
- Ingredientes
- Harina de pescado (calidad Super Prime)
- 10,01% 10,01% 10,01% 10,01% 10.01%
- HID. CRUST.
- 0,00% 2,50% 5,00% 7,50% 10.00%
- Protefnas vegetales mixtas
- 70,06% 67,54% 64,93% 61,87% 58.81%
- Metionina libre
- 0,53% 0,51% 0,49% 0,47% 0.45%
- Lisina libre
- 1,46% 1,40% 1,35% 1,28% 1.21%
- Fosfato monocalcico
- 2,16% 2,07% 1,98% 1,86% 1.75%
- Aceite de pescado
- 13,41% 13,10% 12,89% 12,65% 12.42%
- Celulosa
- 0,00% 0,50% 1,00% 2,00% 3.00%
- Premezcla (vitaminas, minerales, antioxidantes, etc.)
- 2,36% 2,36% 2,36% 2,36% 2.36%
- Harina de pescado en la dieta
- 20,0% 20,0% 20,0% 20,0% 20.0%
- HID. CRUST. en la dieta
- 0,0% 2,5% 5,0% 7,5% 10.0%
- Ingredientes
- Harina de pescado (calidad Super Prime)
- 20,02% 20,02% 20,02% 20,02% 20.02%
- HID. CRUST.
- 0,00% 2,50% 5,00% 7,50% 10.00%
- Protefnas vegetales mixtas
- 61,86% 58,88% 55,82% 52,76% 49.70%
- Metionina libre
- 0,44% 0,42% 0,40% 0,37% 0.35%
- Lisina libre
- 1,11% 1,04% 0,97% 0,90% 0.83%
- Fosfato monocalcico
- 1,39% 1,28% 1,17% 1,06% 0.95%
- Aceite de pescado
- 12,83% 12,50% 12,26% 12,03% 11.80%
- Celulosa
- 0,00% 1,00% 2,00% 3,00% 4.00%
- Premezcla (vitaminas, minerales, antioxidantes, etc.)
- 2,36% 2,36% 2,36% 2,36% 2.36%
5 Las figuras 9 y 10 demuestran que, al mismo nivel en la dieta de hidrolizados de protefnas de crustaceos ("HID. CRUST."), los rendimientos de crecimiento y del pienso fueron mas elevados que con harina de pescado. Por ejemplo, solo resulto necesario ~2,5% de hidrolizado para registrar un ICA de 2,26%, comparado con ~5% de harina de pescado. Ademas, se obtuvo un ICA de 1,05 con ~3% de hidrolizado frente a ~9% de harina de pescado. En resumen, se requerirfa un nivel mas bajo de adicion de hidrolizado de protefnas de crustaceo (2 a 3 veces menos) 10 para alcanzar el rendimiento de la harina de pescado y ello incluso si los dos ingredientes presentan una composicion analftica y perfil de aminoacidos cerrados. La diferencia principal entre los dos ingredientes es el
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tamano molecular de las protefnas, que aparentemente es un motor esencial del rendimiento en peces.
En el segundo experimento, aunque el hidrolizado de pescado blanco ("HID. pescado blanco") tendio a funcionar ligeramente mejor que la harina de pescado, el rendimiento se mantuvo mas bajo que con el hidrolizado de protefnas de crustaceos (figuras 11 y 12). A un nivel de adicion bajo, el hidrolizado de pescado blanco podrfa resultar preferente respecto a la harina de pescado, aunque rapidamente con un nivel creciente de adicion, la harina de pescado y el hidrolizado de pescado blanco proporcionaron el mismo rendimiento. Ademas, al nivel elevado de adicion, el hidrolizado de pescado blanco tendio a presentar peores rendimientos de crecimiento y del pienso.
Dichos dos ultimos ensayos demostraron claramente la importancia del origen de la materia prima y del perfil de pesos moleculares proteicos de los hidrolizados, en el mantenimiento de un rendimiento elevado al anadirlos a un pienso para peces. Aunque el hidrolizado de pescado blanco mostro el mejor perfil nutricional, representado por su nivel de protefnas y perfil de aminoacidos, su rendimiento se mantuvo mas bajo que el del hidrolizado de protefnas de crustaceos debido a que el perfil de pesos moleculares proteicos es menos rico en peptidos muy pequenos (<1.000 Da) y en aminoacidos libres.
Basandose en estos resultados, los inventores pudieron prever aplicaciones dieteticas de los hidrolizados de protefnas de crustaceos para mejorar los rendimientos de los peces y de los piensos.
3. Aplicaciones de los hidrolizados de protefnas de crustaceos al pienso para peces poslarvarios
3.1 Rendimiento de los hidrolizados de protefnas de crustaceos en peces poslarvarios alimentados con dietas con bajo contenido en harina de pescado
Se llevo a cabo un ensayo con lubina alimentada con FM5, FM20, FM5+5% de hidrolizado de protefnas de crustaceos ("Hid. crust.") durante 45 dfas. Se aplico concentrado lfquido de hidrolizado de protefnas de crustaceos (55% de materia seca) mediante solo inclusion (5%I) o mediante inclusion y recubrimiento externo (3%I/2%R) para incrementar la palatabilidad del producto. Tambien se aplico un tratamiento que contenfa harina de kril, ya que esta materia prima se considera actualmente una de las de mejor rendimiento en acuicultura.
Con el fin de formular las dietas de bajo contenido en harina de pescado que contenfan 5% de harina de pescado (FM5), se sustituyo la harina de pescado de FM20 en FM5 por una mezcla de materiales de origen vegetal. Se anadio metionina libre, lisina libre y una fuente de fosforo (fosfato monocalcico) para satisfacer los requisitos nutricionales de la lubina (Tabla 7, posteriormente). Todos los demas ingredientes (por ejemplo vitaminas, minerales y similares) eran los mismos en todas las formulaciones de pienso. Todos los piensos se formularon para ser isonitrogenados, isocaloricos e isolipfdicos.
Tabla 7. Formula de pienso utilizado para alimentar lubina durante 45 dfas (composicion proximal: protefnas en bruto: 45%; grasas en bruto: 14%; cenizas: 6,5%; energfa: 4,9 Kcal/Kg)
- Ingredientes
- FM5 FM5 +5% HID. CRUST. (I) FM5 + 5% harina de kril FM5 +5% HID. CRUST. (3% R/2%I) FM20
- Harina de pescado (calidad Super Prime)
- 5,00 5,00 5,00 5,00 20,00
- HID. CRUST.
- 0,00 5,00* 0,00 5,00* 0,00
- Harina de kril
- 0,00 0,00 5,00 0,00 0,00
- Protefnas vegetales mixtas
- 76,51 72,86 71,19 72,86 64,53
- Metionina libre
- 0,59 0,56 0,55 0,56 0,45
- Lisina libre
- 1,67 1,59 1,55 1,59 1,08
- Fosfato monocalcico
- 2,60 2,46 2,40 2,46 1,25
- Aceite de pescado
- 11,27 11,32 10,34 11,32 10,33
- Celulosa
- 0,00 1,10 1,60 1,10 0,00
- Premezcla (vitaminas, minerales, antioxidantes, etc.)
- 2,36 2,36 2,36 2,36 2,36
- *equivalente a 2,75% de materia seca
Al final del ensayo, se pesaron los peces y se registro el numero de peces delgados.
La inclusion de concentrado lfquido de hidrolizado de protefnas de crustaceos en la dieta FM5 resulto en una mejora significativa de los rendimientos de crecimiento de los peces y de la utilizacion del pienso en comparacion con el grupo alimentado con la dieta FM5 (figuras 13 y 14). Ambas aplicaciones del concentrado lfquido de hidrolizado de protefnas de crustaceos (inclusion o inclusion+recubrimiento externo) funcionaron bien y el recubrimiento externo en
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combinacion con la inclusion no permitiendo obtener un rendimiento mas elevado que la inclusion por si sola. Aunque la inclusion de harina de kril resulto en una mejora del rendimiento de la dieta FM5, la ganancia se mantuvo en niveles menores a los del hidrolizado de protefnas de crustaceos.
Resulta interesante que la aplicacion del hidrolizado de protefnas de crustaceos permitio obtener un numero muy bajo de peces delgados en comparacion con los otros tratamientos, incluso la dieta de alto contenido en harina de pescado (FM20) o la dieta que contenfa harina de kril (figura 15). Las diferencias observadas fueron significativas entre FM5 y FM5+hidrolizado de protefnas de crustaceos (ambos procedimientos de aplicacion). Estos resultados constituyen una mayor evidencia de que la utilizacion del hidrolizado de protefnas de crustaceos como solucion funcional para mejorar y estandarizar los rendimientos de los peces y del pienso.
3.2 Rendimiento de hidrolizados de protefnas de crustaceos para incrementar la resistencia de los peces poslarvarios frente a patogenos
El efecto beneficioso de los hidrolizados de protefnas de crustaceos sobre la palatabilidad del pienso, sobre la utilizacion del pienso y, en ultima instancia, sobre el desarrollo del sistema digestivo podrfa presentar algunos efectos directos sobre el estado de salud de los peces. De hecho, se considera que el intestino es la via principal de entrada de patogenos en el organismo del pez y cuanto menor sea la calidad del intestino, mas alto sera el riesgo de enfermedades.
Con el fin de verificar dichas hipotesis, se llevo a cabo un ensayo en dos especies tropicales: la dorada del Japon y el falso fletan del Japon, alimentados con una dieta de tipo comercial que contiene 46% a 52% de harina de pescado y 2% o 7,2% de concentrado lfquido de hidrolizado de protefnas de crustaceos (55% de materia seca) aplicado mediante recubrimiento externo o mediante inclusion, respectivamente (Tablas 8 y 9, a continuacion).
Tabla 8. Formula del pienso para el falso fletan del Japon (Paralichthys olivaceus)
- Dietas experimentales
- Ingredientes
- Control (Con.) Con. + recubrimiento de Hid. crust. Con. + inclusion de Hid. crust.
- Harina de pescado blanco
- 50,00 48,90 46,00
- Hidrolizado de crustaceos
- 0,00 2.00'1 7,202
- Mezcla de harinas de origen vegetal
- 38,50 38,50 38,50
- Aceite de hfgado de calamar
- 4,00 4,00 4,00
- Aceite de soja
- 4,00 4,00 4,00
- Premezcla (vitaminas, minerales, antioxidantes, etc.)
- 3,50 3,50 3,50
- 'Equivalente a 1,1% de materia seca; 2Equivalente a 4,0% de materia seca Hid. Crust.: hidrolizado de crustaceos
Tabla 9. Formula del pienso para la dorada del Japon (Pagrus major)
- Dietas experimentales
- Ingredientes
- Control (Con.) Con. + recubrimiento de Hid. crust. Con. + inclusion de Hid. crust.
- Harina de pescado blanco
- 52,00 50,90 48,00
- Hidrolizado de crustaceos
- 0,00 2.00'1 7,202
- Mezcla de harinas de origen vegetal
- 34,50 34,50 34,50
- Aceite de hfgado de calamar
- 5,00 5,00 5,00
- Aceite de soja
- 5,00 5,00 5,00
- Premezcla (vitaminas, minerales, antioxidantes, etc.)
- 3,50 3,50 3,50
- 1Equivalente a 1,1% de materia seca; 2Equivalente a 4,0% de materia seca Hid. Crust.: hidrolizado de crustaceos
Los piensos se proporcionaron manualmente hasta la saciedad segun evaluacion visual, durante 60 dfas (falso fletan del Japon) y 84 dfas (dorada del Japon). Al final del ensayo, se pesaron los peces y se calcularon los parametros zootecnicos (supervivencia, crecimiento y utilizacion del pienso). A continuacion, se retaron los peces con un patogeno (Streptococcus iniae) y se registro la supervivencia durante 21 dfas. Se presentan los resultados posteriormente.
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Al final del ensayo, la aplicacion del concentrado ifquido de hidrolizado de protefnas de crustaceos mejoro significativamente el rendimiento del crecimiento y la utilizacion del pienso en ambas especies (Tablas 10 y 11, a continuacion).
Tabla 10. Rendimiento de crecimiento del falso fletan del Japon (Paralichthys olivaceus) alimentado con las dietas experimentales durante 5 semanas (hidrolizado de crustaceos: Hid. Crust.)
- Tratamientos
- PCI (g) PCF (g) TCE (%) ICA
- Control (Con.)
- 24,06±0,24 74,75±2,89b 1,89±0,05b 1,53±0,02a
- Con. + 2% recubrimiento de Hid. crust.
- 24,40±0,21 86,64±3,69a 2,11±0,06a 1,32±0,06b
- Con. + 7,2% inclusion de Hid. crust.
- 24,86±0,42 93,12±1,72a 2,20±0,05a 1,25±0,02b
- Valores son medias de grupos por triplicado, presentados como medias ± S.D. PCI: peso corporal inicial - PCF: peso corporal final
Tabla 11. Rendimiento de crecimiento de dorada del Japon (Pagrus major) alimentada con las dietas experimentales
durante 6 semanas (hidrolizado de crustaceos: Hid. crust.)
- Tratamientos
- pci (g) PCF (g) TCE (%) ICA
- Control (Con.)
- 28,99±0,20 102,75±1,43b 1,51±0,02b 1,86±0,04a
- Con. + 2% recubrimiento de Hid. crust.
- 29,01±0,27 112,73±2,27a 1,62±0,03a 1,69±0,04b
- Con. + 7,2% inclusion de Hid. crust.
- 29,03±0,03 113,20±3,22a 1,62±0,03a 1,70±0,06b
- Valores son medias de grupos por triplicado, presentados como medias ± S.D. PCI: peso corporal inicial - PCF: peso corporal final
En ambas especies, la tasa de mortalidad de los peces alimentados con la dieta de control se incremento mucho en el 3° a 5° dfa posterior al reto, hasta alcanzar un nivel muy elevado al final del periodo de reto (>80%) (figuras 16 y 17). Por el contrario, los peces alimentados con el concentrado lfquido de hidrolizado de protefnas de crustaceos ("Hid. crust.") aplicado mediante inclusion, registro un nivel de supervivencia muy elevado durante el periodo de ensayo. Este resultado es una buena prueba del efecto bioactivo de los hidrolizados de protefnas de crustaceos utilizados para alimentar a peces para obtener una dieta completa.
Al aplicarlos mediante recubrimiento externo, el concentrado lfquido de hidrolizado de protefnas de crustaceos ("Hid. crust.") proporciono resultados limitados y solo el falso fletan del Japon sobrevivio bien al reto bacteriano. Este ultimo resultado permite concluir que debe aplicarse un nivel mfnimo de hidrolizado en la dieta para obtener una mejora del estado de salud de los peces.
3.3 Otras posibles aplicaciones del hidrolizado de protefnas de crustaceos en piensos para peces poslarvarios
En el contexto de la presente invencion se ha demostrado anteriormente que los hidrolizados de protefnas de crustaceos resultan eficientes para mejorar significativamente el rendimiento de las dietas de bajo contenido en harina de pescado, las cuales son formulaciones muy estresantes para los peces debido a su baja palatabilidad y bajo valor nutricional. Pueden encontrarse muchas otras fuentes de estres durante un ciclo de acuicultura y la aplicacion de los hidrolizados de protefnas de crustaceos podrfan resultar utiles para reducir el estres de los peces y, por lo tanto, para mejorar su resistencia a factores bioticos y abioticos.
3.3.1 Rendimiento de los hidrolizados de protefnas de crustaceos en la recuperacion despues de un periodo de estres
Un primer ejemplo se refiere al estres inducido por la manipulacion de los peces poslarvarios para el pesado, vacunacion, transferencia y similares. La consecuencia principal para los peces de dicha manipulacion es una reduccion significativa de la ingesta de pienso, que conduce a una reduccion del crecimiento. En el caso de que el comportamiento anorexico de los peces se prolongue muchos dfas, podrfa resultar negativamente afectada la morfologfa del intestino: reduccion de la superficie de las microvellosidades, enteropatfa, atrofia de las mucosas, etc. (Zeng et al., 2012) y la vuelta a un sistema digestivo funcional podrfa requerir varios dfas. Para evitar los efectos negativos de un ayuno prolongado, el objetivo principal es conseguir una recuperacion de la alimentacion muy rapida a fin de limitar el retraso del crecimiento y el riesgo de enfermedades.
La aplicacion de hidrolizados de protefnas de crustaceos podrfa ayudar a cumplir dicho objetivo. En primer lugar, los hidrolizados presentan un efecto potenciador de la palatabilidad y, de esta manera, estimularan el comportamiento de alimentacion de los peces poslarvarios. En segundo lugar, los peptidos de los hidrolizados podrfan contribuir al desarrollo del sistema digestivo, consiguiendo una mejor asimilacion de los nutrientes y, por lo tanto, mejores
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rendimientos de los peces y del pienso.
3.3.2 Rendimiento de los hidrolizados de proteinas de crustaceos para la recuperacion tras un reto ambiental
Las variaciones estacionales de temperatura del agua y del nivel de oxfgeno son dos parametros importantes que podrfan afectar al rendimiento de los peces de cultivo. Debido a que los peces poslarvarios son ectotermicos, su metabolismo esta directamente relacionado con la temperatura del agua en su medio de crfa. Muchos peces poslarvarios se crfan en jaulas en el mar y sufren cambios de los parametros ambientales durante el ciclo de crfa, las cuales son fuentes de estres y, por lo tanto, las desviaciones del rendimiento de los peces entre jaulas o piscifactorfas o ciclos de crfa. De esta manera, los hidrolizados de proteinas de crustaceos podrfan ayudar a los peces poslarvarios a ser mas resistentes durante estos periodos estresantes al estimular la ingesta de pienso y proteger el sistema digestivo.
4. Ejemplos comparativos
4.1 Comparacion del rendimiento de los hidrolizados de proteinas de crustaceos y de los hidrolizados de pescado en peces poslarvarios
Se sometio a ensayo el rendimiento de hidrolizados de origen diferente en lubina poslarvarios con el fin de evaluar el impacto del origen de las materias primas sobre el rendimiento de los hidrolizados resultantes. Todas las materias primas sometidas a ensayo se sometieron a exactamente el mismo procedimiento de hidrolisis en terminos de especificaciones del enzima y duracion de la hidrolisis.
Se disenaron dos ensayos:
- un ensayo de duracion corta (18 dfas) para comprobar el efecto a corto plazo de los hidrolizados, controlado mayoritariamente por sus rendimientos de palatabilidad (figura 18). Se aplicaron los hidrolizados mediante inclusion al 5% sobre una dieta de bajo contenido en harinas de pescado (5% harinas de pescado, FM5) y se compararon con una dieta de alto contenido en harinas de pescado (20% de harinas de pescado, FM20),
- un ensayo de larga duracion (57 dfas), para comprobar el efecto a largo plazo de los hidrolizados, controlado mayoritariamente por sus rendimientos nutricionales (figura 19). Se aplicaron los hidrolizados, mediante inclusion al 5% o mediante recubrimiento externo al 2%, en una dieta de bajo contenido de harinas de pescado (5% de harinas de pescado, FM5) y en comparacion con una dieta de alto contenido en harina de pescado (20% de harinas de pescado, FM20).
En ambos ensayos, aunque los hidrolizados de pescado resultasen eficientes en la mejora del rendimiento de la dieta de bajo contenido de harinas de pescado (FM5), no pudieron recuperar el rendimiento del control positivo (FM20). El rendimiento de los hidrolizados de crustaceos fue significativamente superior al rendimiento de los hidrolizados basados en pescado, alcanzando por lo menos el rendimiento del control positivo.
Dichos resultados demuestran la importancia del origen de la materia prima sobre el rendimiento del hidrolizado y que los hidrolizados de crustaceos son mas relevantes y de mejor rendimiento que los hidrolizados de pescado en la mejora de las caracterfsticas zootecnicas de los peces poslarvarios y en la restauracion del rendimiento de la formula de bajo contenido en harinas de pescado.
4.2 Influencia del origen de los hidrolizados en la dieta sobre su capacidad de estimular el desarrollo intestinal en peces poslarvarios
Con el fin de confirmar el rendimiento de los hidrolizados de diferente origen en la estimulacion del desarrollo intestinal, se diseno otro ensayo en falso fletan del Japon poslarvario alimentado con hidrolizados de salmon o de pescado blanco o de crustaceos durante 11 semanas. Todas las materias primas sometidas a ensayo se sometieron a exactamente el mismo procedimiento de hidrolisis en terminos de especificaciones enzimaticas y duracion de la hidrolisis. Se aplico el hidrolizado al 3,5% en una dieta de bajo contenido en harinas de pescado (27,5% de harinas de pescado, BHP) y se comparo con una dieta de alto contenido en harinas de pescado (55% de harinas de pescado, AHP). Al final del experimento, se muestrearon los intestinos anteriores (n=15 de cada tratamiento) para el analisis morfometrico, representado por el diametro intestinal y la longitud de las vellosidades. Se muestran los resultados en la tabla 12, posteriormente.
Tabla 12. Diametro intestinal y longitud de las vellosidades en falso fletan del Japon poslarvario alimentado con hidrolizados en la dieta de origen diferente durante 11 semanas (los valores son de medias de 15 analisis)
- Diametro intestinal (pm) Longitud de las vellosidades (pm)
- Dieta de alto contenido en harinas de pescado (AHP)
- 2,767±98,0a 913±5,2a
- Dieta de bajo contenido en harinas de pescado (BHP)
- 2,576±41,0b 782±24,4c
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- Diametro intestinal (pm) Longitud de las vellosidades (pm)
- BHP + 3,5% hidrolizado de gambas
- 2,818±97,3a 960±22,7a
- BHP + 3,5% hidrolizado de pescado blanco
- 2,657±154b 829±5,4b
- BHP + 3,5% hidrolizado de salmon
- 2,279±154c 798±16,7c
La reduccion de la cantidad de harinas de pescado en la dieta impacto significativamente sobre el diametro intestinal y la longitud de las vellosidades en los peces alimentados con la dieta BHP en comparacion con los alimentados con la dieta AHP. Dicho deterioro de la calidad intestinal podrfa impactar negativamente sobre el rendimiento de los peces y del pienso. La aplicacion de hidrolizado de gambas permitio recuperar una buena calidad intestinal (comparable al diametro intestinal y longitud de las vellosidades en la dieta de control AHP), mientras que la harina de pescado blanco y el hidrolizado de salmon no. Ademas, la inclusion del hidrolizado de salmon impacto negativamente sobre la calidad intestinal en comparacion con los peces alimentados con el control negativo (BHP).
Dichos resultados permitieron concluir que el origen de la materia prima era importante para el rendimiento de los hidrolizados y que los hidrolizados de crustaceos son mas relevantes y presentan mejor rendimiento que los hidrolizados de pescado en la mejora del desarrollo intestinal y en la proteccion de los efectos histologicos negativos de la formula de bajo contenido en harinas de pescado.
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Claims (11)
- 51015202530354045REIVINDICACIONES1. Ingrediente de pienso realizado a partir de uno o mas hidrolizados de protefnas de crustaceos para la utilizacion en un procedimiento para mantener y/o estimular la salud intestinal de un pez poslarvario de cultivo.
- 2. Ingrediente de pienso para la utilizacion en un procedimiento segun la reivindicacion 1, en el que dichos hidrolizados de protefnas de crustaceos comprenden:- aminoacidos libres en una cantidad desde 10 a 60% en peso; y- una cantidad de protefnas solubles desde 70 a 100% en relacion con el peso de protefnas total de dichos hidrolizados, en el que dichas protefnas solubles presentan un perfil de distribucion en el peso molecular de peptidos como se expone en la tabla a continuacion:
- Peso molecular de peptidos (PM en Da)
- Cantidad en % de las protefnas solubles en los hidrolizados de protefnas de crustaceos
- PM < 500
- 50 < % < 100
- 500 < PM < 1.000
- 0 < % < 20
- 1.000 < PM < 5.000
- 0 < % < 20
-
- 5.000 < PM < 10.000
- 0 < % < 5
- PM > 10.000
- 0 < % < 5
- 3. Ingrediente de pienso para la utilizacion en un procedimiento segun la reivindicacion 2, en el que dichos hidrolizados de protefnas de crustaceos comprenden:- aminoacidos libres en una cantidad desde 12 a 58% en peso; y- una cantidad de protefnas solubles desde 80 a 100% en relacion con el peso de protefnas total de dichos hidrolizados, en el que dichas protefnas solubles presentan un perfil de distribucion en el peso molecular de peptidos como se expone en la tabla a continuacion:
- Peso molecular de peptidos (PM en Da)
- Cantidad en % de las protefnas solubles en los hidrolizados de protefnas de crustaceos
- PM < 500
- 57 < % < 100
- 500 < PM < 1.000
- 0 < % < 18
- 1.000 < PM < 5.000
- 0 < % < 17
-
- 5.000 < PM < 10.000
- 0 < % < 4
- PM > 10.000
- 0 < % < 4
- 4. Ingrediente de pienso para la utilizacion en un procedimiento segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que se mantiene y/o se estimula la salud intestinal en dicho pez poslarvario de cultivo mejorando el desarrollo del epitelio intestinal.
- 5. Ingrediente de pienso para la utilizacion en un procedimiento segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que se mantiene y/o se estimula la salud intestinal en dicho pez poslarvario de cultivo aumentando la asimilacion de nutrientes por dicho pez poslarvario de cultivo.
- 6. Ingrediente de pienso para la utilizacion en un procedimiento segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que se mantiene y/o se estimula la salud intestinal en dicho pez poslarvario de cultivo aumentando la resistencia de dicho pez poslarvario de cultivo a los patogenos.
- 7. Ingrediente de pienso para la utilizacion en un procedimiento segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que dichos hidrolizados de protefnas de crustaceos se seleccionan de entre hidrolizados de protefnas de las familias de crustaceos siguientes: Penaeidae, Palaemonidae, Pandalidae, Galatheidae, Euphausiidae, Mysidae y Nephropidae.
- 8. Ingrediente de pienso para la utilizacion en un procedimiento segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que dichos hidrolizados de protefnas de crustaceos se seleccionan de entre hidrolizados de protefnas de gamba y de kril.
- 9. Ingrediente de pienso para la utilizacion en un procedimiento segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que dicho pez poslarvario de cultivo es un pez poslarvarios carnivora.
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