ES2612343T3 - Extracción de compuestos fenólicos y su uso en composiciones con ácido fumárico - Google Patents

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Abstract

Una composición que comprende: ácido fumárico aislado; compuestos fenólicos aislados, en la que los compuestos fenólicos aislados comprenden proantocianidinas (PAC); y en la que la proporción entre el ácido fumárico y las PAC es de entre 4.000:1 y 100:1, o en la que la proporción entre el ácido fumárico y las PAC es de entre 50:1 y 10:1.

Description

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Como se ha mencionado anteriormente, el proceso divulgado en el presente documento puede incluir uno o más ciclos englobados en una única serie. Las series pueden repetirse según sea necesario.
La materia prima que puede usarse el proceso anterior puede incluir cualquier material natural y/o sintético (por ejemplo, soluciones y líquidos) que contenga compuestos fenólicos (por ejemplo, que contenga una cantidad (por ejemplo, una cantidad natural) al menos de antocianinas y/o de proantocianidinas (por ejemplo, de proantocianidinas de tipo A)). Los compuestos fenólicos pueden incluir, por ejemplo, la clase de compuestos reconocida en la técnica que también pueden conocerse como fenoles, y todos los compuestos conocidos en la materia englobados por esta clase de compuestos. La clase de los compuestos fenólicos engloba un intervalo diverso de compuestos naturales y sintéticos. El fenol es compuesto fenólico más sencillo, que contiene un solo grupo hidroxilo unido directamente a un grupo aromático. Los compuestos fenólicos también incluyen los polifenoles, que contienen más de una unidad de fenol por molécula. Los polifenoles más habituales se clasifican como flavonoides. Todos los flavonoides contienen un núcleo que consiste en dos anillos fenólicos y un heterociclo oxigenado. Los flavonoides se clasifican adicionalmente basándose en su estado de oxidación. Algunos ejemplos de clases de flavonoides incluyen flavonoles, flavanoles, catequinas, flavanonas, antocianidinas e isoflavonoides. Las proantocianidinas (PAC), o taninos condensados, son una forma de flavanol que está formada por cadenas poliméricas de catequinas (véase, por ejemplo, Cheynier V., Am. J. Clin. Nutr., 81: 223S-229S, 2005). Se ha informado de que las PAC se forman a través de reacciones de las antocianinas con compuestos que contienen un doble enlace polarizable. Consecuentemente, las PAC difieren en la naturaleza de sus unidades constitutivas, en la secuencia, en las posiciones de los enlaces interflavánicos, en la longitud de la cadena y en la presencia de sustituyentes (por ejemplo, de grupos galoílo o glucosilo). Las PAC, incluyendo las PAC de mayor peso molecular, son generalmente solubles en un medio acuoso o en un medio hidroalcohólico. La afinidad y la astringencia de la proteína PAC se correlaciona (por ejemplo, aumenta) con el grado de polimerización y de galoilación de la PAC. Específicamente, las de PAC mayor peso molecular son más astringentes que las PAC oligoméricas (Vidal et al., J. Sci. Food Agric., 83: 564-573, 2003). Adicionalmente, las PAC con un bajo grado de polimerización, por ejemplo, un grado de polimerización de entre 2 y 4 (de dímero a tetrámero), es decir, las PAC oligoméricas, son muy bioactivas. Algunos ejemplos de listas de los compuestos englobados por la clase están disponibles al público y pueden encontrarse, por ejemplo, en internet (véase, por ejemplo, la dirección de internet en.wikipedia.org/wiki/Category:Phenols (visitada al 27 de noviembre de 2009, y con la última modificación el 23 de noviembre de 2009 a las 14:07), en libros de texto y en publicaciones periódicas. El término compuestos fenólicos incluye aquellos compuestos englobados por las clases químicas de los fenoles, los polifenoles, los flavonoles, los flavanoles, las catequinas, las flavanonas, las antocianidinas, y los isoflavonoides, y las proantocianidinas (PAC).
Algunas materias primas que contienen compuestos fenólicos pueden incluir, pero no se limitan a, por ejemplo, frutas de plantas del género Vaccinium, arándanos (por ejemplo, el jugo, las semillas, la piel, la pulpa y las hojas), el jugo, las semillas y la piel de la uva, la manzana, la fruta del algarrobo, el arándano rojo, el mirtilo, el arándano azul (y el jugo obtenido a partir del mismo), la grosella negra, la aronia, la aronia negra, y la corteza de pino, los cacahuetes (por ejemplo, las pieles de cacahuetes), el ginkgo (por ejemplo, las hojas de ginkgo), las nueces de cola, la Rathania (por ejemplo, la raíz de Rathania), la canela, el coco, el té negro y el té verde. En algunos casos, la materia prima puede incluir, pero no se limita a, (1) arándanos completos, (2) pieles de arándanos, (2) semillas de arándanos, (3) pulpa de arándanos, (4) hojas de arándanos, (5) plantas de arándanos completas, (6) y cualquier combinación de (1) -(6). Además, en los procesos divulgados en el presente documento pueden usarse materiales distintos a los divulgados si el material contiene compuestos fenólicos. Los métodos para la identificación y la cuantificación de los compuestos fenólicos en los materiales o en las materias primas son conocidos en la materia e incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, una espectroscopía directa a 280 nm; una espectroscopía indirecta mediante el uso de, por ejemplo, reactivos y ensayos reconocidos en la técnica y disponibles comercialmente, por ejemplo, ensayo de Vanillan, ensayo de Folin-Denis, ensayo de Folin-Ciocalteu, ensayo de azul de Prusia, ensayo de Bate-Smith y ensayo de Porter; y una cromatografía de líquidos, por ejemplo, mediante el uso de ultravioleta, fluorescencia, espectroscopía de masas y resonancia magnética nuclear (RMN). Las técnicas de detección de compuestos fenólicos también se divulgan en la bibliografía (véase, por ejemplo, Fereidoon y Naczk, Food Phenolics, Technomic Publishing Co. Inc., 995).
La materia prima puede ser sólida o líquida y estar fresca o congelada. Las materias primas sólidas pueden ser licuadas o solubilizadas, por ejemplo, llevadas a una solución, antes de comenzar el proceso. Las materias primas congeladas pueden ser descongeladas, por ejemplo, antes de su uso. La materia prima también puede usarse con o sin modificaciones. Algunos ejemplos de modificaciones útiles pueden incluir una selección, un refinado y/o un procesado mecánico. Por ejemplo, pueden emplearse los materiales para eliminar los desechos (por ejemplo, el material que no contiene PAC), por ejemplo, desechos, y/o clasificarse para seleccionar el material con un tamaño definido. Cuando el material es una fruta (por ejemplo, arándanos), el material puede cortarse en rodajas y/o pelarse para exponer la carne interior de la fruta (por ejemplo, la pulpa del arándano) y para aumentar el área superficial del material. En algunos casos, las pieles y la pulpa pueden usarse conjuntamente, o pueden separarse y usarse por separado.
La materia prima también puede incluir un jugo (por ejemplo, jugo de arándano) producido mediante un prensado tradicional, una digestión enzimática y/o una extracción a contracorriente (CCE) (la CCE se describe en las Patentes de EE.UU. nº 5.320.861 y 5.419.251 o el jugo según se describe en, o se obtiene mediante el uso de, los métodos
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Como se ha mencionado anteriormente, puede desecharse un volumen del flujo dinámico de la materia prima como residuo o redirigirse para un procesado adicional. Algunos ejemplos de volúmenes que pueden desecharse incluyen al menos y/o aproximadamente, un 0,5 %, un 1 %, un 5 %, un 10 %, y aproximadamente un 20 %.
Algunas soluciones de lavado útiles en los procesos divulgados en el presente documento pueden incluir, por ejemplo, soluciones basadas en agua que contienen uno o más disolventes que no reducirán (por ejemplo, que no reducirán sustancialmente) la cantidad de compuestos fenólicos unidos a la resina. Algunos ejemplos de soluciones de lavado pueden incluir agua o agua mezclada con uno o más disolventes, por ejemplo, agua que contiene hasta aproximadamente un 25 % de disolvente (por ejemplo, hasta y/o aproximadamente un 25 %, un 20 %, un 15 %, un 10 %, un 5 %, un 4 %, un 3 %, un 2 %, un 1 %, un 0,5 %, y/o por debajo del 0,5 % de disolvente). Algunos disolventes adecuados incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, alcohol (por ejemplo, metanol, etanol, propanol), acetona, hexano y/o mezclas de los mismos.
En algunos casos, la solución de lavado es una solución basada en agua que contiene un 5 % ± 1 % de etanol total (por ejemplo, 1 parte de etanol en 19 partes de agua). El volumen de la solución de lavado puede ser adaptado al volumen o la capacidad de la columna que contiene la resina, en la que una vez el volumen de resina de la columna se denomina un volumen de lecho. Por ejemplo, el volumen de la solución de lavado puede incluir, por ejemplo, menos de un volumen de lecho, aproximadamente un volumen de lecho, aproximadamente dos volúmenes de lecho,
o más de dos volúmenes de lecho.
En algunos casos, el volumen de la solución de lavado puede ser de aproximadamente 282 galones o de aproximadamente 2 volúmenes de lecho, y la solución de lavado puede incluir aproximadamente un 5 % ± 1 % de etanol total (por ejemplo, 1 parte de etanol en 19 partes de agua).
En algunos casos, el volumen de la solución de lavado puede ser de aproximadamente 282 galones o de aproximadamente 2 volúmenes de lecho, y la solución de lavado puede incluir aproximadamente un 5 % ± 1 % de alcohol desnaturalizado estándar (SDA), por ejemplo, SDA 35A 190, en agua (la información adicional relativa al SDA 35A 190 puede encontrarse en la dirección de internet sasoltechdata.com/tds/sda35A_190.pdf).
Un único ciclo puede incluir 1 o más etapas de lavado (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5 o más etapas de lavado) por cada ciclo. Adicionalmente, las etapas de lavado pueden llevarse a cabo durante un tiempo y en unas condiciones que permitan una eliminación óptima de los compuestos no fenólicos de la resina. Por ejemplo, el caudal de la solución de lavado en la columna de resina puede incluir, pero no se limita a, 1,0-6,0 galones por minuto (por ejemplo, aproximadamente 1,0, 1,5, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0, 5,5, 6,0 galones por minuto), y la temperatura en la columna de resina puede seleccionarse para minimizar el crecimiento microbiano (por ejemplo, a 35 ºF -80 ºF).
Las soluciones de elución que pueden usarse en los procesos divulgados en el presente documento pueden incluir soluciones basadas en agua que contienen uno o más disolventes a cualquier concentración que disminuirán (por ejemplo, que disminuirán sustancialmente) la asociación entre la resina-compuestos fenólicos unidos y la resina, de forma que los compuestos fenólicos sean liberados de la resina. Algunos ejemplos de soluciones de elución pueden incluir un disolvente o una mezcla de un disolvente y agua (por ejemplo, en el que la concentración del disolvente es de aproximadamente un 100 %, o de menos de un 100 %, por ejemplo, de aproximadamente un 99 %, un 98 %, un 97 %, un 96 %, un 95 %, un 90 %, un 85 %, un 80 %, un 75 %, un 70 %, un 60 %, un 55 %). Algunos disolventes adecuados pueden incluir, pero no se limitan a, por ejemplo, alcohol (por ejemplo, metanol, etanol, propanol), acetona y hexano. En algunos casos, la solución de elución es una solución basada en agua que contiene un 95 % ± 1 % de etanol total. El volumen de la solución de elución puede incluir, por ejemplo, menos de un volumen de lecho, aproximadamente un volumen de lecho, aproximadamente dos volúmenes de lecho, o más de dos volúmenes de lecho.
En algunos casos, el volumen de la solución de elución puede ser de aproximadamente 346 galones o de aproximadamente 2,8 volúmenes de lecho, y la solución de elución puede incluir un 95 % de etanol total en agua.
En algunos casos, el volumen de la solución de elución puede ser de aproximadamente 346 galones o de aproximadamente 2,8 volúmenes de lecho y la solución de elución puede incluir un 95 % de alcohol desnaturalizado estándar (SDA), por ejemplo, SDA 35A 190, en agua.
Un único ciclo puede incluir 1 o más etapas de elución (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5 o más etapas de elución) por cada ciclo. Adicionalmente, las etapas de elución pueden llevarse a cabo durante un tiempo y en unas condiciones que permitan una extracción óptima de los compuestos fenólicos de la resina. Por ejemplo, el caudal de la solución de lavado en la columna de resina puede incluir, pero no se limita a, 1,0-6,0 galones por minuto (por ejemplo, aproximadamente 1,0, 1,5, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0, 5,5, 6,0 galones por minuto), y la temperatura en la columna de resina puede seleccionarse para minimizar el crecimiento microbiano (por ejemplo, a 35 ºF -80 ºF).
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Pequeña escala (de laboratorio) (ml salvo que se indique)
Volumen de flujo dinámico de materia prima con compuestos fenólicos reducidos
4.195
Volumen de la solución de lavado
2.000
Volumen de la solución de elución
2.452
Caudal (en todas las etapas)
15,6 ml/minuto
Volumen de reequilibrado
2.678
Se analizaron distintos extractos de múltiples series de ciclo único a pequeña escala para determinar la cantidad de compuestos fenólicos, de ácidos orgánicos y de azúcares. Los datos de cada serie se combinaron y se calcularon las medias. Los resultados de estos experimentos se muestran en la Tabla 3.
Tabla 3: caracterización del extracto
Promedio (%)
Mín. (%) Máx. (%) Desviación típica
% de sólidos
95,52 95,18 97,25 0,97
Quínico
0,07 0,03 0,12 0,05
Málico
0,17 0,11 0,25 0,07
Cítrico
0,26 0,11 0,38 0,11
Ácidos orgánicos totales
0,50 0,39 0,76 0,17
PAC 2
55,00 55,00 55,00 0,00
PAC 1
18,20 18,20 18,20 0,00
Compuestos fenólicos (Folina)
44,40 35,49 55,44 8,50
Antocianinas 1
6,86 4,94 9,78 2,24
Dextrosa
0,17 0,00 0,67 0,33
Fructosa
0,00 0,00 0,00 0,00
Sacarosa
0,00 0,00 0,00 0,00
Azúcares totales
0,17 0,00 0,67 0,33
Quercetina
0,54 0,17 1,22 0,59
Quercitrina
3,03 0,95 4,23 1,81
Hiperósido
2,24 0,93 4,71 2,14
Miricetina
0,24 0,09 0,52 0,24
Kulina
0,00 0,00 0,00 0,00
Kaempferol
0,00 0,00 0,00 0,00
Isohamnetina
0,00 0,00 0,00 0,00
Isoquercitrina
0,00 0,00 0,00 0,00
Flavonoles totales
6,05 5,17 7,06 0,95
Portador de estandarización
20,58 9,50 32,10 12,57
Agente de flujo
0,80 0,80 0,80 0,00
Recuperación total
121,44 101,18 144,77
1 Evaluados mediante una HPLC
2 Evaluados mediante el DMAC
1 y 2 son valores normalizados
Según se muestra en la Tabla 3, el contenido primario del extracto es de compuestos fenólicos (véase "compuestos fenólicos (folina)" en la Tabla 3), con las PAC y las antocianidinas presentes en las cantidades más altas. También 10 se detectaron cantidades de flavanoles, quercetina, quercitrina, hiperósido y miricetina.
Como contraste, el extracto está sustancialmente exento de azúcares (véase "azúcares totales" en la Tabla 3) y de ácidos orgánicos. Además, el contenido total en ácidos orgánicos era menor del 1 %, y el contenido total en azúcar era menor del 1 %. Estas observaciones indican que el proceso divulgado en el presente documento puede usarse 15 para la obtención de un extracto a partir de una materia prima de jugo de arándano CCE que contiene unas
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quercgalac, la quercitrina, la miricetina y el quercaraban presentes en la materia prima también están conservadas en el extracto. Como contraste, aunque en el extracto hay presentes antocianinas, la proporción entre las PAC y las antocianinas presentes en la materia prima no está conservada en el extracto (véase PACs:TAcy).
Por lo tanto, los datos presentados en el presente documento demuestran que los procesos divulgados en el presente documento pueden usarse para la obtención de un extracto que contiene antocianinas y PAC, en el que las PAC oligómeras están presentes en las cantidades presentes en la materia prima, y en el que la proporción entre las PAC y los compuestos fenólicos totales y las PAC, y de las PAC y la quercetina, el quercgalac, la quercitrina, la miricetina y el quercaraban en el extracto son las mismas que las proporciones de los mismos compuestos fenólicos en la materia prima.
Ejemplo 2: optimización del proceso
Algunas de las etapas o de los materiales usados en el proceso descrito en el Ejemplo 1 se sustituyeron en un intento de optimizar adicionalmente el proceso. En resumen, se repitió el proceso descrito en el Ejemplo 1 con las siguientes modificaciones: (1) la etapa de lavado se llevó a cabo mediante el uso de agua en lugar de mediante el uso de etanol al 5 %; (2) la etapa de lavado y la etapa de dilución se llevaron a cabo mediante el uso de acetona; (3) la resina Amberlite™ XAD-7HP fue sustituida por la resina FPX-66 y la etapa de lavado se llevó a cabo mediante el uso de agua en lugar de mediante el uso de etanol al 5 %; (5) la resina Amberlite™ XAD-7HP fue sustituida por la resina FPX-66; y (6) la resina Amberlite™ XAD-7HP fue sustituida por la resina FPX-66 y la etapa de lavado y la etapa de dilución se llevaron a cabo mediante el uso de acetona. A continuación se evaluó el rendimiento de los compuestos fenólicos extraídos, la pureza del extracto y la estabilidad del extracto. Los resultados se muestran en la Tabla 7.
Tabla 7: optimización del proceso
Modificación # (véase el texto del Ej. 3)
1 2 3 4 5 6
Resina
XAD-7HP XAD-7HP XAD-7HP FPX-66 FPX-66 FPX-66
Lavado
Agua 5 % de EtOH 5 % de acetona Agua 5 % de EtOH 5 % de acetona
Elución
90 % de EtOH 90 % de EtOH 90 % de acetona 90 % de EtOH 90 % de EtOH 90 % de acetona
Datos de rendimiento
Rendimiento de las PAC (% de de prima-Av)
92,59 97,57 101,44 86,32 88,43 96,76
Rendimiento de los compuestos fenólicos (folina-Av)
77,98 77,78 79,35 67,45 80,37 84,55
Datos de pureza
PAC (% de dwb-Av)
51,49 64,40 71,02 41,66 42,96 44,76
Compuestos fenólicos (Folina-Av)
48,68 51,34 51,88 36,55 38,83 41,32
Compuestos fenólicos (Folina-Bruns)
47,55 61,86 67,70 32,74 38,43 39,72
Compuestos fenólicos (HPLC-OS)
93,97 155,63 108,32 81,56 88,12 87,45
Acis (ppm-OS)
65.056 83.085 46.977 58.855 66.269 50.301
Quercetina (ppm-OS)
4120 No realizado No realizado 3.180 3.300 3.140
ORAC (Bruns)
8.131 9.701 10.379 6.756 7.410 6.633
Estabilidad de la bebida
Turbidez de la bebida, pendiente frente al tiempo
2,87 1,52 1,93 2,44 2,14 2,68
Color de la bebida, pendiente frente al tiempo
-3,27 -4,66 -3,35 -3,50 -1,92 -2,65
Según se muestra en la Tabla 6, tanto la resina XAD-7HP como la FPX-66 produjeron unas elevadas cantidades de PAC y de compuestos fenólicos totales. Sin embargo, globalmente la XAD-7HP proporcionó unos resultados mayores que la FPX-66, incluyendo la estabilidad de la turbidez. Como contraste, la FPX-66 proporcionó unos resultados ligeramente mejores en la estabilidad del color. Adicionalmente, todas las condiciones de lavado y de elución ensayadas proporcionaron buenos resultados. Se observó que la acetona era la mejor solución de lavado y de elución para la recuperación y la pureza de las PAC y de los compuestos fenólicos.
Estos resultados sugieren que, mientras que el proceso descrito en el Ejemplo 1 es eficaz para la obtención de un extracto que contiene antocianinas y PAC, en el que las PAC oligómeras están presentes en las cantidades presentes en la materia prima, y en el que la proporción entre las PAC y los compuestos fenólicos totales y entre las PAC y las PAC y la quercetina, el quercgalac, la quercitrina, la miricetina y el quercaraban del extracto son las
21
imagen17
Estos resultados sugieren que un extracto que contiene antocianinas y PAC, en el que las PAC oligómeras están presentes en las cantidades presentes en la materia prima, y en el que la proporción entre las PAC y los compuestos fenólicos totales y las PAC, y las PAC y la quercetina, el quercgalac, la quercitrina, la miricetina y el quercaraban en el extracto, son sustancialmente las mismas que las proporciones que pueden obtenerse de los mismos compuestos fenólicos en la materia prima mediante el uso de procesos a gran escala.
Tabla 9: características de la muestra del proceso extracción
ID de la muestra
Descripción Análisis Especificación
A
CCE 1 Turbidez Recuento de placa total (TPC) Levaduras Mohos < 1.000/g < 100/g < 100/g
B
Agua de ósmosis inversa TPC Levaduras Mohos < 1.000/g < 100/g <100/g
C
CCE 2 % de sólidos ºBrix Gravedad específica Lectura y registro (RR) (%) RR (%) RR (g/ml)
D
Materia prima líquida para el suministro a la columna de resina % de sólidos PAC Compuestos fenólicos % de acidez valorable Turbidez Antocianinas TPC Levaduras Mohos 25 ± 1 % ≥ 1,5 % dwb RR (% dwb) RR (%) RR (NTU) RR (ppm) < 1.000/g < 100/g < 100/g
E
Solución de lavado % Etoh 5 ± 1 % (v/v)
F
Filtrado exento de compuestos fenólicos ºBrix ≥ 2
G
Solución de elución % de agua <20& % por Karl Fisher
H
Flujo dinámico de la materia prima % de sólidos PAC TPC Levaduras Mohos RR (%) RR (% dwb) < 1.000/g < 100/g < 100/g
I
Extracto evaporado 1 % de sólidos % Etoh 2.562 % RR (%)
J
Extracto evaporado 2 % de sólidos % Etoh 25 ± 2 % RR (%)
K
Extracto líquido % de sólidos Etoh PAC Compuestos fenólicos Antocianinas Aspecto Aroma TPC Levaduras Mohos 25 ± 2 % < 90 ppm ≥ 56 % dwb R (% dwb) RR (% dwb) Líquido de color intenso rojo/púrpura Aroma de arándano < 1.000/g < 100/g < 100/g
Ejemplo 4: uso de los extractos para la conservación de alimentos
10 Se llevaron a cabo experimentos para determinar si puede usarse la combinación del extracto obtenido mediante el uso de los procesos divulgados en el presente documento y ácido fumárico para reducir el deterioro.
En resumen, se inocularon varios jugos con aproximadamente 100 esporas de una mezcla de las cepas de ACB 15 indicadas en la Tabla 10. Después las esporas se recogieron de las placas de PDA (agar de dextrosa de patata) y se inactivaron por calor.
23

Tabla 10: cepas de ACB usadas
ID
Fuente (origen)
230
Jugo de manzana Hassia
231
NFPA (National Food Processors Association)
233
Jugo de manzana Hassia
245
Craving -menos azúcar Tropical
247
Jugo de melocotón
250
Jugo de pomelo rosa al 100 %
El extracto adecuado para su uso en los métodos divulgados en este Ejemplo puede obtenerse mediante el uso de cualquier técnica conveniente y a partir de cualquier materia prima adecuada. En este caso, el extracto se obtuvo a 5 partir de arándanos, que son una fuente particularmente rica de PAC, mediante el uso de los procesos divulgados en el presente documento. En resumen, se cargó jugo de arándano a 25 Brix una columna de resina Rohm & Haas XAD-7HP. La columna se lavó con una solución que contiene un 5 % de etanol / un 95 % de agua para eluir los azúcares, los ácidos y otros componentes no deseados. El extracto se eluyó mediante el lavado de la columna mediante el uso de una solución que contiene un 90 % de etanol y un 10 % de agua. El eluído se concentró
10 mediante evaporación hasta un 25 % de sólidos, después se secó por pulverización hasta un polvo. La cantidad de PAC en el polvo variaba entre un 55 y un 85 % en peso.
La concentración de PAC se evaluó para los experimentos de este Ejemplo como sigue. En resumen, se aplicó la muestra que se iba analizar a una columna Sephadex LH-20. La columna se lavó después con agua destilada y
15 después con un 25 % de etanol / 75 % de agua. Estos lavados eluyeron los azúcares, los ácidos orgánicos, las antocianinas y los compuestos fenólicos monoméricos. Las PAC se eluyeron después mediante el lavado de la columna con un 70 % de acetona en un 30 % de agua. El eluído se deja reaccionar con una solución de dimetilaminocinamaldehído (DMAC) al 0,1 % en ácido clorhídrico al 30 % en metanol al 70 %. El DMAC puede actuar como un electrófilo condensándose con anillos aromáticos en un medio ácido, y es muy específico por los
20 flavanoles. Cuando se añade un reactivo preparado de DMAC a una solución que contiene PAC se produce una condensación de aldehído con el monómero terminal de una proantocianidina polimérica en la posición del carbono ocho del anillo A del flavanoide. Los aductos coloreados resultantes tienen una absorción máxima a 640 nm. Se desarrolló una curva patrón de absorbancia a 640 nm mediante el uso de soluciones con un contenido conocido en PAC de arándano purificadas.
25 Las muestras de jugos se complementaron con jugo de arándano, con extracto, con ácido fumárico, o ambos, en presencia y en ausencia de aproximadamente 100 esporas de ACB/ml, según se muestra en la Tabla 11. Después, las muestras de jugos se almacenaron a 43 ºC. Periódicamente se tomaron alícuotas de los cubos y se ensayaron para comprobar la ACB mediante un subcultivo en placas de PDA. También se llevó a cabo una prueba sensorial
30 por parte de un grupo de 2-4 personas cualificadas para detectar la presencia de guayacol. Las pruebas se realizaron en diversos intervalos durante un periodo de 1 mes. Se incluyeron controles negativos (jugo no inoculado) en las pruebas y se ensayaron al mismo tiempo que el producto inoculado.

Tabla 11: resultados de conservación de alimentos
Jugo de muestra
Extracto, mg de PAC / 8 oz % de ácido fumárico (p/p) % de jugo de arándano pH Brix TA (%) Micro (crecimiento) Sensorial
CranPomBlue
0 0 7,33 3,56 12,52 0,45 + +
CranPomBlue
40 0 7,33 3,5 10,54 0,48 - -
Tropical Citrus
0 0,14 0 3,43 13,35 0,46 + +
Tropical Citrus
40 0,14 0 3,4 13,4 0,46 - -
Tropical Citrus
30 0,14 0 3,41 13,13 0,46 - -
Tropical Citrus
20 0,14 0 3,41 13,18 0,46 - -
Tropical Citrus
10 0,14 0 3,42 13,21 0,46 - -
Bebida de agua de extracto
40 0 0 2,67 2,74 0,17 - -
Tropical con Ruby Red
5 0,14 +
Tropical con Ruby Red
7,5 0,14 -
Tropical con Ruby Red
9,5 0,14 -
Tropical con Ruby Red
10 0,14 -
24
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imagen19

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