ES2568698A1 - Composite con actividad antimicrobiana que comprende dos componentes autoensamblados de origen natural y, opcionalmente, un componente (C) de tamaño nanométrico - Google Patents

Abstract

Composite con actividad antimicrobiana que comprende dos componentes autoensamblados de origen natural y, opcionalmente, un componente (C) de tamaño nanométrico. Un material compuesto formado por un componente (A) oligomérico y un componente (B) con compuestos fenólicos, donde ambos componentes son de origen natural, presentan actividad antimicrobiana y propiedades antiadhesivas frente a los microorganismos, son biocompatibles y no presentan citotoxicidad para las células de los mamíferos. Opcionalmente, el material compuesto puede comprender un componente (C) de tamaño nanométrico. Preferiblemente, material compuesto formado por oligómeros de quitosano propóleo y, opcionalmente, plata de tamaño nanométrico. Método de síntesis de un material compuesto que comprende al menos dos de los componentes (A), (B) y (C) mediante procesos de sonicación. Uso del material compuesto para prevenir, reducir, controlar o eliminar cualquier tipo de microorganismo o agente patógeno.

Description

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Se prefiere especialmente que el componente (B) sea un extracto de propóleo con una concentración 10 % en peso de polifenoles y flavonoides, propóleos procedentes preferentemente de Burgos, Cuenca del Duero, España. En particular, el extracto de propóleo obtenido tal como se describe en el apartado de los ejemplos de esta solicitud. Así, el composite de la invención se puede obtener mezclando el extracto descrito en esta solicitud con la solución de quitosano en la relación 1:1, o 1 mg/L de propóleo con un 1mg/L de quitosano

Tal como se ha mencionado anteriormente, el material compuesto de la invención también puede comprender aloe vera como componente (B), producto que comprende generalmente un contenido de 1% en peso en polifenoles y flavonoides. En este caso, el composite de la invención comprende preferiblemente una relación aloe vera/quitosano de 10:1, o 10 mg/L de aloe vera con 1 mg/L de quitosano.

Tambien se pueden utilizar extractos puros de polifenoles o flavonoides disponibles en el mercado y mezclarlos directamente con el componente (A) oligomérico, en particular oligómeros de quitosano, preferentemente en la proporción 10% en p/v de polifenol o flavonoide y un 90% en p/v del oligómero. Por ejemplo se puede adquirir el producto puro o componente activo aislado del propolis o fenetil ester del ácido cafeíco (CAPE), aunque también pueden utilizarse otros principios activos derivados de ácidos fenólicos, polifenoles

o de flavonoides y utilizarse mezclando en las proporciones recomendadas más arriba con el oligómero, preferiblemente quitosano. No obstante y de modo preferente se recomienda en la presente invención que se opere con los productos naturales, ante todo por el ahorro de coste que ello representa.

En realizaciones especialmente preferidas de la presente invención, el material compuesto o composite comprende un componente (A) formado por oligómeros de quitosano con peso molecular máximo 6000 g/ml, y propóleo como componente (B), preferiblemente extracto de propóleo con un contenido de polifenoles y flavonoides entre un 5 y un 15% en peso. Este material compuesto presenta una actividad antifúngica superior a sus componentes por separado. Adicionemente, es soluble en agua, y también puede fabricarse como recubrimiento o película y así ofrecer una mayor protección.

En otras realizaciones preferidas adicionales, el material compuesto que se describe en esta solicitud de patente comprende un componente (C) de tamaño nanométrico, es decir, tamaño de partícula comprendido entre 1 a 150 nm. Preferentemente, entre 40 y 150 nm, ya que por debajo de 40 nm el elemento o especie química presenta una muy elevada actividad y puede ser tóxica para la célula. Este componente (C), ya sea elemento o especie química, puede ser de origen inorgánico tal como óxido, metal o fluoruro, pero también puede ser de origen orgánico, por ejemplo, un nanopesticida sintético.

En realizaciones aún más perferidas, el componente (C) de tamaño nanométrico es inorgánico. Preferentemente, éste se selecciona del grupo que consiste en plata, cobre, arsénico, óxido de titanio, silice y material grafénico.

En realizaciones especialmente preferidas, el material compuesto o composite de la presente invención comprende un componente (A) formado por oligómeros de quitosano con peso molecular máximo 6000 g/ml, un componente (B) que es propóleo, preferiblemente extracto de propóleo con un contenido de polifenoles y flavonoides entre un 5 y un 15% en peso, y plata de tamaño nanométrico, preferiblemente con un tamaño de partícula entre 40 y 150 nm, como componente (C). Este material compuesto presenta una mayora actividad antifúngica o antimicrobiana debido a la incorporación o integración del nanomaterial, y tiene además un mayor poder bactericida que los componentes por separado o asociados de dos

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a) obtener una solución de un componente (A) formado por oligómeros de peso molecular máximo 6000 g/mol, preferentemente entre 2000 g/mol y 6000 g/mol;

b) obtener un componente (B) que comprende uno o varios compuestos fenólicos, preferiblemente flavonoides o polifenoles; y

c) mezclar la solución de oligómeros de la etapa a) con los compuestos fenólicos de la etapa b) y sonicar durante al menos un minuto.

En el método que se describe en esta solicitud de patente, la obtención del componente (A) oligomérico y del componente (B) que comprende uno o varios compuestos fenólicos se realiza de forma independiente. Por ello, las etapas a) y b) pueden realizarse en cualquier orden o simultaneamente.

En realizaciones aún más preferidas, cuando el material compuesto de la invención comprende un oligómero de quitosano y propóleo, el método de síntesis de la presente invención comprende:

a) obtener una solución de un componente (A) formado por oligómeros de peso molecular máximo 6000 g/mol, preferentemente entre 2000 g/mol y 6000 g/mol;

b) obtener un extracto fenólico de propóleo, preferiblemente con un contenido entre 5 y 15 % de flavonoides y polifenoles; y

c) mezclar la solución de oligómeros de la etapa a) con el extracto fenólico de la etapa b) y sonicar durante al menos un minuto.

Los oligómeros de quitosano se pueden producir por degradación oxidativa del quitosano comercial. Para ello se pueden utilizar, por ejemplo, métodos de radiación de microondas [Sun T., Zhou D., Xie J., Mao F. 2007. Preparation of chitosan oligomers and their antioxidant activity. Eu. Food. Res. Technol. 225:451-456].

Sin embargo, en el método de la presente invención, con objeto de disminuir los tiempos de degradación, los oligómeros se producen por sonicación. En particular, los oligómeros de quitosano se pueden obtener por hidrólisis ácida a partir de una disolución de quitosano en presencia de un agente oxidante limpio y asequible tal como, por ejemplo, peróxido de hidrógeno. La hidrólisis se lleva a cabo con agitación con un equipo de ultrasonidos que opera a frecuencia de 20 kHz. La sonicación se puede realizar durante 3-6 periodos de 5 minutos cada uno, dependiendo de la calidad del quitosano de partida, no dejando que la solución se caliente por encima de 60ºC. A medida que se incrementan los periodos de sonicación de 3 a 6, las temperaturas de 30 a 60ºC y las concentraciones de H2O2 de 0.3 a

0.6 M, se consigue reducir el PM de los oligómeros de 6000 a 2000 g/mol, siendo óptimo la obtención de oligómeros de 2000 g/mol.

Después de calentar o sonicar durante 30 minutos se retira, por ejemplo, por centrifugación

o decantación, cualquier material insoluble en agua. Posteriormente se ajusta el pH a 8-9, por ejemplo, utilizando una solución de metóxido de potasio al 25% en metanol. Seguidamente, el material se puede aislar de la solución y secar, preferiblemente a vacío a 20ºC. La calidad de los oligómeros obtenidos puede determinarse por espectrometría infrarroja por transformada de Fourier (FTIR). De esta forma se pueden obtener oligómeros con un peso molecular entre 2000-6000 g/mol. Tamaño que puede reducirse en el proceso de sonicación de las etapas posteriores del método de síntesis, alcanzando preferiblemente un tamaño máximo de 2000 g/mol en el composite de la invención.

Soluciones acuosas de oligómeros de quitosano, preferiblemente de concentración 0.005

0.01 M o soluciones del 1.25-2.5% p/v, pueden prepararse a partir de una disolución de oligómeros de quitosano de PM 6000-2000 g/mol en AcOH al 0.5 % y pH 4-6. La mezcla de quitosano/ácido acético/agua se sonica durante al menos un minuto y se deja agitando durante al menos 12 horas, al objeto que la solución se estabilice y se obtenga una solución transparente de quitosano. Las soluciones se mantienen estables en atmósfera inerte y en frío a 4-10ºC, a pH entre 4-6.

En realizaciones preferidas de la presente invención, el propóleo se utiliza como extracto etanólico de propóleo. Este extracto se puede obtener triturando el propóleo de partida hasta polvo fino y posterior extracción, por ejemplo, utilizando una solución hidroalcohólica 7:3. Otras etapas del procedimiento de extracción pueden ser maceración dinámica, percolación, filtración y concentración de la solución resultante.

En el método que se describe en esta solicitud de patente, la obtención de los oligómeros de quitosano y el extracto etanólico de propóleo se realiza de forma independiente. Por ello, estas etapas pueden hacerse en cualquier orden o simultaneamente.

Una vez obtenida la solución de oligómeros de quitosano de la etapa a) y el extracto etanólico de propóleo de la etapa c), la mezcla de ambas soluciones tiene lugar preferiblemente adicionando el extracto alcohólico de propóleo sobre una solución de quitosano en agua.

Tal como se ha mencionado anteriormente, el composite de la presente invención puede ser un recubrimiento o película que puede utilizarse para tratar, por ejemplo, cultivos, semillas, madera, piedra, etc. En estas realizaciones preferidas, en primer lugar se obtiene un material adhesivo o película del oligómero, preferentemente oligómero de quitosano, al que posteriormente se le incorporan el resto de componentes del composite.

Cuando el material compuesto que se describe en esta solicitud de patente se encuentra en forma de recubrimiento o película, el método de síntesis de la invención comprende entrecruzar in situ los oligómeros en presencia de un agente de entrecruzamiento, preferentemente glicerina o glioxal, antes de su mezcla con el componente (B) que comprende compuestos fenólicos, o con el componente (C) de tamaño nanométrico.

En realizaciones aún más preferidas, esta etapa de entrecruzamiento tiene lugar en presencia de un surfactante, en particular Tween 20, para mejorar las propiedades de adhesión de las soluciones del oligómero.

En realizaciones preferidas, para producir un recubrimiento o película del composite que comprende quitosano/nanoplata, quitosano/propóleo o quitosano/propóleo/nanoplata, se pueden utilizar las soluciones de oligómeros de quitosano obtenidas tal como se ha descrito anteriormente, preferiblemente con una concentración 1.25-2.5% p/v y pH 4-6. Estas soluciones se pueden tratar con una solución de glicerina (C3H803) al 2-2.5 % p/v o bien de glioxal al 4% v/v. Adicionalmente, se puede adicionar Tween 20, preferiblemente al 0.050.1% (v/v), a fin de mejorar las propiedades de adhesión de las soluciones de quitosano.

Cuando se utiliza glioxal, el proceso de entrecruzamiento es inmediato (menos de 1 hora), mientras que cuando se utiliza glicerina son varias horas (o incluso días) lo que tarda en producirse. El entrecruzamiento puede depender de múltiples factores, como temperatura, pH, tiempo de sonicación y/o agitación y concentración de las soluciones. En el método de síntesis de la presente invención se utilizan procesos de sonicación como activadores del proceso de entrecruzamiento, de esta forma la activación tiene lugar en un periodo máximo de 1 minuto, disminuyendo así los tiempos de formación de las películas o recubrimientos. Una vez incorporados el resto de materiales al composite, éste se puede aplicar dejando reposar sobre la superficie a tratar entre 1 minuto y 1 hora en atmósfera seca, para obtener espesores óptimos de 0.3 a 0.6 mm.

En otras realizaciones preferidas, cuando el material compuesto comprende los componentes (A), (B) y (C) tal como se describen en esta solicitud de patente, el método de síntesis comprende:

a) obtener una solución de un componente (A) formado por oligómeros de peso molecular máximo 6000 g/mol, preferiblemente entre 2000 g/mol y 6000 g/mol;

b) obtener un componente (B) que comprende uno o varios compuestos fenólicos;

c) mezclar la solución de oligómeros de la etapa a) con los compuestos fenólicos de la etapa b) y sonicar durante al menos un minuto;

d) obtener una solución estabilizada de un componente (C) de tamaño nanométrico; y

e) mezclar la solución del material bicompuesto obtenido en la etapa c) con la solución del componente (C) de tamaño nanométrico de la etapa d) y sonicar duante al menos un minuto.

En realizaciones aún más preferidas, cuando el material compuesto de la invención comprende oligómeros de quitosano, propóleo y plata de tamaño nanométrico, el método de síntesis de la presente invención comprende:

a) obtener una solución que comprende oligómeros de quitosano de peso molecular máximo 6000 g/mol, preferentemente entre 2000 g/mol y 6000 g/mol;

b) obtener un extracto fenólico de propóleo, preferiblemente con un contenido entre 5 y 15 % de flavonoides y polifenoles;

c) mezclar la solución de oligómeros de la etapa a) con el extracto fenólico de la etapa b) y sonicar durante al menos un minuto;

d) preparar una solución estabilidaza de plata de tamaño nanométrico, preferiblemente entre 40 y 150 nm; y

e) mezclar la solución de quitosano y propóleo obtenido en la etapa c) con la solución de plata de tamaño nanométrico de la etapa d) y sonicar durante al menos un minuto.

Para obtener el material compuesto que comprende los componentes (A), (B) y (C), en particular quitosano, propóleo y plata de tamaño nanométrico, los tres componentes se preparan de forma separada. A continuación, se obtiene el material compuesto que comprende oligómeros y compuestos fenólicos tal como se ha descrito anteriormente. Y, posteriormente se incorporta el componente (C).

La etapa d) comprende la preparación de una solución estabilizada de plata de tamaño nanométrico, preferiblemente 40 y 150 nm. De acuerdo con el método de síntesis de la presente invención, la estabilización de nanoplata se realiza esclusivamente mediante sonicación. Sin embargo, existen otros métodos que permiten obtener nanopartículas de plata estabilizando las soluciones con una lámpara UV de 30 W durante 3 horas [Montazer,

M. Shamei, A., Alimohammadi F. 2012. Synthesizing and stabilizing silver nanoparticles on polyamide fabric using silver-ammonia/PVP/UVC. Progress in Organic Coatings, 75 (4), 379385].

La preparación de nanoplata en la presente invención se puede llevar a cabo preparando en primer lugar una solución acuosa de AgNO3 y un agente reductor como citrato de sodio o ácido ascorbico. Posteriormente, la solución anterior se enfría y agitar a una temperatura entre 5 y 10ºC. A continuación, se desoxigena con un gas inerte, preferentemente N2 abundante durante al menos 30 minutos. La etapa más delicada es la adición de una solución de NaBH4 (tambien se puede utilizar hidrazina). Esta adición ha realizarse en medio inerte, preferiblemente en atmósfera de N2, a la temperatura entre 5-10ºC, a una velocidad de adición muy baja, preferiblemente con micropipeta, y agitando fuertemente la solución. La primera microgota hace virar la solución de incolora a amarilla y el aumento de NaBH4, o de sucesivas gotas, produce una intensificación del color amarillo hacia marrón, que puede llegar a revertir a amarillo claro por la adición de microgotas de H2O2 al 10%. El color amarillo de la solución de plata se puede estabilizar con polivinilpirrolidona (PVP) para evitar que se agreguen las nanopartículas de plata o de cualquier otra especie química presente, y la aplicación de ultrasonidos durante 3-5 minutos con un equipo de ultrasonidos de 20 kHz. Por último se ajusta el pH entre 7-8, por ejemplo adicionando metóxido de potasio en metanol al 25%. La solución se debe dejar estabilizándose durante 24 horas en un refrigerador entre 5 y 10ºC.

Conforme al procedimiento descrito se pueden obtener soluciones de nanoplata con un tamaño de las nanopartículas 40 y 150 nm, y un contenido de plata en solución entre 100 ppm y 200 ppm. Estas soluciones se pueden caracterizar mediante su absorción en un espectrofotómetro de UV-Vis a 420 nm. Las soluciones se mantienen estables en atmósfera inerte y en frío a 4-10ºC.

Adicionalmente, el método de la presente invención también permite obtener materiales compuestos que comprendan los componentes (A) y (C) tal como se describen en esta solicitud de patente. Este método comprende:

a) obtener una solución de un componente (A) formado por oligómeros de peso molecular máximo 6000 g/mol, preferentemente entre 2000 g/mol y 6000 g/mol;

d) obtener una solución estabilizada de un componente (C) de tamaño nanométrico, preferentemente de tamaño entre 40 y 150 nm; y

e) mezclar la solución de oligómeros de la etapa a) con la solución del componente (C) de tamaño nanométrico de la etapa d) y sonicar duante al menos un minuto.

En realizaciones preferidas, el método de la presente invención permite obtener un material compuesto formado por oligómeros de quitosano y plata de tamaño nanométrico, donde el método comprende:

a) obtener una solución de oligómeros de quitosano de peso molecular máximo 6000 g/mol, preferentemente entre 2000 g/mol y 6000 g/mol;

d) obtener una solución estabilizada de un plata tamaño nanométrico, preferentemente de tamaño entre 40 y 150 nm; y

e) mezclar la solución de oligómeros de quitosano de la etapa a) con la solución de plata de tamaño nanométrico de la etapa d) y sonicar duante al menos un minuto.

En realizaciones preferidas, los componentes (A) y (C) del composite se pueden definir tal como se ha descrito anteriormente en esta solicitud de patente. Así mismo, las condiciones preferidas de las etapas a), d) y e) son iguales a las descritas anteriormente para las otras variantes del método de la invención.

En realizaciones preferidas de la presente invención, una vez obtenida las soluciones por separado se pueden preparar las mezclas binarias en la relación 1:1 o ternarias en la relación 1:1:1. Estas se pueden mezclar adicionando siempre la solución que contiene la nanoplata sobre la solución que contiene propóleo-quitosano, o el quitosano en el caso de obtener el composite quitosano-nanoplata. Las muestras utilizadas para llevar a cabo los ensayos de actividad se preparon en el intervalo 50 ug/ml a 900 ug/ml. Por ejemplo se

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Dentro de la preservación y protección de plantas y/o cultivos, el composite que se describe en esta solicitud de patente, en particular cuando está formado por quitosano/propóleo ó quitosano/propóleo/nanoplata se puede utilizar como pesticida, en apósitos y recubrimientos para la protección y conservación del medio agrícola y forestal en su conjunto, protección de cultivos y de especies forestales.

Dentro de la protección del medio industrial, el composite que se describe en esta solicitud de patente, en particular cuando está formado por quitosano/propóleo ó quitosano/propóleo/nanoplata, se puede utilizar en la protección y preservación de productos, alimentos e instalaciones industriales, preferiblemente cuando el composite forma recubrimiento o película.

En otras realizaciones preferidas, el composite que se describe en esta solicitud de patente, se puede aplicar en el entorno agro-forestal, como nuevos agentes nanopesticidas para la protección antimicrobiana de superficies de plantas y de cultivos, semillas, madera, celulosa, alimentos e instalaciones agroforestales tal como silos, industrias alimentarias y sus instalaciones, industrias de la madera y de la celulosa y sus instalaciones, etc. En Agricultura el material compuesto de la presente invención se puede aplicar como factores de nodulación, agentes osmoprotectores y antioxidantes que beneficien el crecimiento de las cosechas.

En realizaciones especialmente preferidas, la presente invención se refiere al uso del composite que se describe en esta solicitud de patente, en particular cuando está formado por quitosano/propóleo ó quitosano/propóleo/nanoplata, como agente fungicida y/o bactericida frente a:

 Hongos de la yesca en vides o Diplodia seriata;

 Hongo de la enfermedad roja del arroz, Bipolaris orizae;

 Bacterias y hongos de interés clínico. Preferiblemetne, bacterias seleccionadas del grupo que consiste en Staphylococcus aureus, Eschericia coli, Acinetobacter baumanii y Pseudomonas aeruginosa; u hongos seleccionados del grupo que consiste en Candida albicans y Candida glabrata.

Adicionalmente, la presente invención también se refiere al uso de un composite que comprende los componentes (A) y (C) tal como se describen en esta solicitud de patente, preferiblemente oligómeros de quitosano y plata nanométrica tal como se describen en esta solicitud de patente en Agricultura para favorecer el crecimiento de las semillas.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

Figura 1 (A) Diagrama de barras del porcentaje de inhibición del crecimiento del hongo (PI) y (B) diámetro radial del micelio D. seriata (Ø) por quitosano (A50), quitosano+propóleo (B100), quitosano+propóleo+nAg (3 mL) (C1), quitosano+propóleo+nAg (6 mL) (C2), quitosano+propóleo+nAg (1.5 mL) (D1), quitosano+nAg (3 mL) (D2), propóleo+nAg (1.5 mL) (F1), propóleo+nAg (3 mL) (F2), nAg (E), propóleo (P) y testigo (T).

Figura 2. Crecimiento del hongo Diplodia seriata en placas petri y correspondiente a las mezclas A50, B100, C1, C2, D1, D2, F1, F2, B100, E y G); T = testigo. Las manchas que aparecen en las placas petri representan los discos de micelios repicados.

Figura 3. Crecimiento del hongo Biporaris orizae en placas petri. De izquierda a derecha: testigo (diámetro máximo Ø=7.8 cm) y mezcla D2 (quitosano + nAg 6 mL) con un diámetro radial cero y para concentraciones de 300, 600 y 900 µL/mL, respectivamente.

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Tratamientos

Concentraciones (µl/ml)

300

600 900

A50B100C1C2D1D2F1F2P

0 0 0 0 0 0 5.7 5.7 6.8 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Testigo

7.4

En la Figura 3 se ofrece una imagen de diámetro radial del testigo y diferentes concentraciones de muestras D2 de quitosano/plata en placas petri. La muestra a la

5 izquierda corresponde al testigo y ocupa prácticamente todo el diámetro de la placa, mientras que las tres placas de la derecha, correspondientes a mezclas D2 de 300, 600 y 900 µL/mL no exhiben crecimiento miceliar.

Las combinaciones de los productos quitosano+propóleo+plata se han mostrado efectivas para el control de los hongos Bipolaris orizae en semillas de arroz. Se ha comprobado la

10 acción antifúngica sobre el porcentaje de semillas sanas, una medida de la eficiencia del control de hongos para las distintas combinaciones de quitosano/propóleo/plata.

En la Figura 4 se observa que las combinaciones más activas son las de quitosano/propóleo/plata (C1, C2), las de los oligómeros de quitosano (A50) y las combinaciones de quitosano/plata (D1, D2), con porcentajes de inhibición máximos. Siguen

15 en eficacia a estos tratamientos las combinaciones de propóleo/plata (F1, F2) que dan lugar a porcentajes de semillas sanas por encima del 65% y, con porcentajes menores, las mezclas quitosano/propóleo y sólo propóleo.

La fitotoxicidad de las diferentes combinaciones frente al testigo ha sido evaluada a través de los resultados de los ensayos de germinación (EG) y medida de la longitud del tallo y de

20 raíz (LT), recogidos en la Tabla 2.

Del examen de esos resultados se concluye que, para la germinación de semillas de arroz, la combinación quitosano-plata (D2) es el tratamiento que ofrece un mayor índice de germinación (90%). Para el resto de los tratamientos puede establecerse que sus propiedades antifúngicas no se vienen acompañadas de propiedades estimulantes de la

25 germinación o del crecimiento de la plántula (raíz y parte aérea).

Tabla 2. Ensayos de germinación, diámetros de tallo y raíz en semillas tratadas con distintas combinaciones de quitosano/propóleo/plata (CHIPP): A50, B100, C1, C2, D1, D2, F1, F2, P y testigo.

Tratamientos

Concentraciones (µl)

TG (%)

DT (cm) DR (cm)

A50B100C1C2D1D2F1F2P Testigo

85 65 85 85 82 91 60 80 90 85 3.36 2.81 2.87 2.71 3.76 3.92 2.86 2.74 4.18 4.14 8.33 8.75 10.15 9.57 8.89 9.23 9.87 9.31 10.54 10.45

5 Caso 3. Actividad bactericida y fungicida de mezclas binarias y ternarias de quitosano/propóleo/plata sobre cepas bacterianas y hongos de interés hospitalario. Actividad bactericida

Como se muestra en la Figura 5, para concentraciones de 50 μg/mL, las muestras de

propóleonAg o propóleo-quitosano-nAg (muestras 2 y 3) apenas inhiben el crecimiento 10 bacteriano (Staphylococcus aureus) o resultan resistentes (Escherichia coli). Sin embargo,

para concentraciones en torno a 300 μg/mL, quitosano y sus combinaciones con propóleo y

propóleo-nAg son siempre sensibles, hecho que no siempre ocurre para las preparaciones

de propóleo-nAg. La inhibición de la cepa de Staphylococcus aureus ensayada tiene un alto

interés clínico dado su carácter de meticilin resistencia (MRSA). Es de observar que las 15 nanopartículas de plata sola (nAg) no muestran actividad bactericida per se (quizás al ser

retenidas en las capas superiores de los discos de celulosa)

En la Figura 6 puede observarse que para concentraciones por encima de 300 μg/mL, todos

los preparados estudiados inhiben el crecimiento de cepas clínicas de Acinetobacter

baumanii y Pseudomonas aeruginosa. Un estudio comparativo de los halos de inhibición y 20 sus concentraciones permite advertir que una mezcla ternaria de oligómeros de quitosano

propóleo-nanoplata de 300 ug/ml iguala en actividad la que produce el quitosano solo a una

concentración de 500 ug/ml o dicho de otro modo: 100 ug/ml de quitosano en combinación

con las mismas cantidades de propóleo y nanoplata iguala en actividad a la que producen

500 ug/ml de quitosano solo. Puede pues, concluirse indirectamente que la mezcla ternaria 25 multiplica x5 la actividad del quitosano solo.

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Claims (1)

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