ES2565516A1 - Productos biocidas y su uso para el control de fitopatógenos y organismos plaga que afectan a plantas - Google Patents
Productos biocidas y su uso para el control de fitopatógenos y organismos plaga que afectan a plantas Download PDFInfo
- Publication number
- ES2565516A1 ES2565516A1 ES201431276A ES201431276A ES2565516A1 ES 2565516 A1 ES2565516 A1 ES 2565516A1 ES 201431276 A ES201431276 A ES 201431276A ES 201431276 A ES201431276 A ES 201431276A ES 2565516 A1 ES2565516 A1 ES 2565516A1
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- compound
- phytopathogens
- organisms
- translation
- machine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
- A01N43/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms
- A01N43/24—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with two or more hetero atoms
- A01N43/26—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with two or more hetero atoms five-membered rings
- A01N43/28—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with two or more hetero atoms five-membered rings with two hetero atoms in positions 1,3
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D317/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D317/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3
- C07D317/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 not condensed with other rings
- C07D317/32—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 not condensed with other rings with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D317/34—Oxygen atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/04—Oxygen as only ring hetero atoms containing a five-membered hetero ring, e.g. griseofulvin, vitamin C
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Virology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Productos biocidas y su uso para el control de fitopatógenos y organismos plaga que afectan a plantas. Las enfermedades y plagas constituyen un importante problema en el campo de la agricultura. La presente invención propone un nuevo compuesto de fórmula (I) con actividad biocida, aislado a partir del producto de fermentación de hongos endófitos del género Guignardia sp. La invención también se refiere al método de obtención del compuesto de fórmula (I), a un producto de fermentación que lo comprende junto a otros compuestos conocidos que comparten estructura y actividad biocida con el compuesto de fórmula (I) y al uso de dichos compuestos como biocidas, y especialmente como nematicidas, bien directamente o a través de una composición, constituyendo de este modo un efectivo método de control de fitopatógenos y organismos plaga que afectan a plantas.
Description
-se obtienen de fuentes naturales, por procedimientos sencillos y económicos,
-se pueden obtener a gran escala por fermentación del microorganismo en biorreactores y las condiciones de fermentación se pueden manipular para aumentar la producción de componentes activos,
-son efectivos simultáneamente contra varios patógenos,
-son singularmente efectivos contra nematodos, alcanzando en este caso una efectividad superior al 99%, muy por encima, por ejemplo, del producto Abamectina (AVICTA®) que presenta un valor de en torno al 35 % en condiciones experimentales similares.
Los inventores de la presente invención han identificado, por primera vez, un compuesto bioactivo con actividad biocida obtenido a partir de una fermentación con hongos endófitos del género Guignardia sp, gracias a su caracterización en base a datos físicos y espectroscópicos, y por comparación de los mismos con los publicados en la bibliografía.
Adicionalmente al compuesto de fórmula (I) se han identificado otros compuestos conocidos como son el ácido guignárdico (Rodrigues-Heerklotza et al. 2001. Helv. Chim. Acta 84, 3766-3772), el metil ester del ácido penguignardico (Andernach et al. 2013. European Journal of Organic Chemistry 26, 5946-5951), las guignardonas A y B (Yuan et al. 2010. Eur. J. Org. Chem. 6348–6353), las guignarenonas B y C (Sommart et al. 2012. Phytochemistry Lett. 5, 139-143), las guignardianonas A, C (1) y D (2) y E (Buckel et al. 2013. Phytochemistry 89, 96–103) y el ácido 3,4 dihidroxibenzoico.
En un aspecto, la invención se relaciona con un compuesto con actividad biocida que se aísla a partir de un producto de fermentación con hongos endófitos del género Guignardia sp. y de fórmula (I), en adelante compuesto de la invención,
a) cultivar micelio de un hongo del género Guignardia sp. con capacidad para producir al compuesto de fórmula (I) en un medio de cultivo hasta conseguir un producto fermentado y
b) aislar al compuesto de fórmula (I) a partir del producto fermentado de la etapa anterior.
No todos los hongos del género Guignardia sp. presentan la capacidad de producir el compuesto de la invención. Es la interacción endófito-planta hospedadora la que confiere al hongo unas características determinadas que posibilitan la producción de determinados compuestos. Por este motivo, en la presente invención por hongo del género Guignardia sp. con capacidad para producir el compuesto de la invención se entiende cualquier cepa de un hongo del género Guignardia sp. que debido a su interacción con la planta hospedadora ha desarrollado las características necesarias para producir los compuestos de la invención. Preferentemente la cepa del hongo del género Guignardia sp. pertenece a la especie G. manguiferea. Más preferentemente, la cepa del hongo de la especie Guignardia manguiferae es la cepa YCC4 de G. manguiferae aíslada de hojas de Persea indica depositada en fecha 2 julio de 2014 en la Colección Española de Cultivos Tipo con CECT 20914, siguiendo el Tratado de Budapest sobre el Reconocimiento Internacional del Depósito de Microorganismos a los fines del Procedimiento en materia de Patentes.
Ejemplos de medios de cultivo que permiten la fermentación de los hongos del género Guignardia sp. son PDB (potato dextrose broth); los medios citados en las referencias Molitor et al (2012. J. Nat. Prod. 75, 1265−1269) y Buckel et al (2013. Phytochemistry 89, 96–103); los que se citan en el documento W02002017937 A1 o cualquier otro medio de cultivo comercial para hongos fitopatógenos.
En una realización particular, la cepa YCC4 de G. manguiferae aíslada de hojas de Persea indica depositada en la Colección Española de Cultivos Tipo con CECT 20914 en fecha 2 julio de 2014 se cultiva utilizando un medio líquido Czapek-Dox modificado.
Por “producto fermentado” se entiende un producto que es el resultado de la acción del hongo endófito sobre el medio de cultivo y que comprende al compuesto de la
En otra realización particular, en el compuesto de fórmula general (II) R1 es metiletil y R2 es H y es el acido guignárdico.
Los compuestos de fórmula general (II) que se incluyen en el ámbito de esta invención comparten estructura y actividad biocida con el compuesto de la invención y además tienen el mismo origen.
El aislamiento de los compuestos que se incluyen en el ámbito de la invención partiendo del producto fermentado se realiza por técnicas de fraccionamiento.
Técnicas de fraccionamiento conocidas por cualquier experto en el estado de la técnica, y que permiten obtener a los compuestos incluidos en el ámbito de la invención, son por ejemplo y sin limitarse, cromatografía líquida de vacío (VLC-1), cromatografía en columna (CC), cromatografía en columna (CC) empleando diferentes fases sólidas (Gel de Sílice, Sephadex LH-20) y cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), eluyéndose con distintos gradientes de polaridad mediante diferentes combinaciones de disolventes orgánicos.
El producto fermentado de la invención es el producto crudo que se obtiene tras la etapa (a) del procedimiento de la invención, pero también cualquier fracción o subfracción sucesiva obtenida a partir de dicho producto y que se obtiene por las técnicas de fraccionamiento que se recogen en la descripción.
Por “actividad biocida” se entiende la capacidad de controlar al menos un fitopatógeno u organismo plaga que afecte a plantas a través de diferentes mecanismos de acción. Dicho control comprende la prevención de la acción o la destrucción directa de dichos organismos perjudiciales para la salud pública y también para la agricultura durante la producción, pero también se extiende al almacenamiento, transporte, distribución y elaboración de productos agrícolas y sus derivados. Ejemplos de fitopatógenos y organismos plaga que afectan a plantas y que se incluyen en la presente invención son aunque sin limitarse, nematodos, hongos e insectos plaga.
En otro aspecto, la invención se relaciona con el uso para el control de fitopatógenos y organismos plaga que afectan a plantas, y preferentemente para el control de nematodos, del compuesto de la invención, o del compuesto de fórmula general (II), ya sea de forma aislada o en combinación, o del producto fermentado de la invención.
La actividad contra insectos plaga se puede determinar mediante diferentes tipos de bioensayos que incluyen actividad antialimentaria (inhibición de la alimentación y/o asentamiento en el caso de áfidos), repelente o tóxica, entre otras (ver ejemplo 5).
Los insectos contra los que es efectivo el compuesto de la invención, el producto fermentado de la invención y el compuesto de fórmula general (II) son principalmente insectos-plaga herbívoros con diferentes adaptaciones tróficas, ya sean masticadores
o chupadores, y que pueden presentar una alta incidencia sobre cultivos hortícolas provocando graves pérdidas económicas, desarrollar resistencias a insecticidas de síntesis y presentar capacidad de transmisión de virus. Ejemplos, a título ilustrativo y no limitativo, de órdenes y especies de insectos-plaga herbívoros con diferentes adaptaciones tróficas, masticadores o chupadores son Lepidoptera, Homoptera y Spodoptera littoralis, Myzus persicae, Rhopalosiphum padi, respectivamente.
En una realización particular, el compuesto de la invención y el producto fermentado de la invención comprenden una actividad bioinsecticida contra los insectos Spodoptera littoralis y Myzus persicae, superior al 80%.
En otra realización particular, la guignardianona C y el acido guignárdico comprenden una actividad bioinsecticida contra al menos un insecto seleccionado de entre Spodoptera littoralis y Myzus persicae, superior al 80%.
La actividad contra hongos se determina mediante ensayos de inhibición del crecimiento del micelio en placa. Ejemplos de hongos contra los que es efectivo el producto fermentado de la invención son Fusarium y Botrytis.
La actividad contra nematodos se relaciona con la toxicidad, es decir, capacidad para interrumpir una fase concreta del ciclo de vida del nematodo impidiendo su desarrollo. En el ámbito de la invención, la actividad nematicida se determina por ejemplo a través de la determinación del porcentaje de juveniles infectivos (J2) muertos tras 24, 48 y 72 horas posteriores a la aplicación del extracto (ver ejemplo 7), así como a través de la determinación de los efectos del tratamiento sobre la eclosión de los huevos tras 5 días de tratamiento de las masas de huevos y por la determinación de los efectos de concentraciones subletales sobre la capacidad de infección de los juveniles en las raíces de plántulas de tomate.
Los nematodos contra los que son efectivos el compuesto de la invención, el producto fermentado de la invención y el compuesto de fórmula general (II), preferentemente son nematodos formadores de nódulos de las raíces (Meloidogyne sp). Un ejemplo de nematodo formador de nódulos es la especie Meloidogine javanica, polífaga, con capacidad de parasitar más de 3.000 especies de plantas de cultivo, que incluyen cultivos extensivos, hortícolas y frutales, afectando gravemente la producción (Agrios. 2005. Plant Pathology, Fifth edition, Elsevier/Academic, Amsterdam), y causando pérdidas económicas anuales de miles de millones de euros (Singh et al. 2013. OEPP/EPPO Bulletin 43 (2), 334–374).
En otra realización particular, el compuesto de la invención o el producto fermentado de la invención comprenden una actividad nematicida preferentemente de hasta el 85%, más preferentemente de hasta el 95% y todavía más preferentemente de hasta el 100% cuando se utilizan en una concentración de 0.5 mg/ml y 1 mg/ml respectivamente a 24, 48 y 72 horas de tratamiento.
En otra realización particular, el producto fermentado de la invención comprende una actividad nematicida manifestada por la inhibición, preferentemente de un 98% de la eclosión de huevos después de 72 horas de tratamiento cuando se utiliza a la concentración de 1 mg/ml y la supresión preferentemente de un 60% de la capacidad infectiva cuando se utiliza a una concentración del 0,5 mg/ml.
En otra realización particular, la guignardianona D y el metil éster del ácido penguignárdico comprenden una actividad nematicida preferentemente de hasta el 90%, más preferentemente de hasta el 95% y todavía más preferentemente de hasta el 100% cuando se utiliza en una concentración de 0,5 mg/ml.
En otro aspecto, la invención se relaciona con una composición biocida que comprende al compuesto de fórmula (I), o al compuesto de fórmula general (II), ya sea de forma aislada o en combinación, o al producto fermentado, en adelante composición biocida de la invención.
La composición biocida de la invención adicionalmente puede comprender diversos vehículos y agentes que faciliten su conservación, manejo y aplicación.
Como el experto en el estado de la técnica conocerá en la aplicación de fitosanitarios, habitualmente se utilizan vehículos sólidos, vehículos líquidos, vehículos gaseosos, etc., y, si es necesario, agentes tensioactivos y agentes auxiliares para la formulación de composiciones fitosanitarias como, por ejemplo, un aditivo para formular formas tales como concentrados emulsionables, polvos humectables, líquidos fluibles, (v.g., suspensión en agua, emulsión en agua, etc.), polvos, aerosoles, ULV y similares.
Ejemplos de vehículo sólido que se incluyen en el ámbito del uso de la invención son polvos finos o gránulos de arcillas (v.g. arcilla de caolín, tierra de diatomeas, óxido de silicio hidratado sintético, bentonita, arcilla Fubasami, arcilla ácida, etc.), talcos, cerámicas y otros minerales inorgánicos (v.g., sericita, cuarzo, azufre, carbono activo, carbonato cálcico, sílice hidratada, etc.), fertilizantes comerciales (v.g., sulfato amónico, fosfato amónico, nitrato amónico, urea, cloruro amónico, etc.) y similares.
Ejemplos de vehículo líquido que se incluyen en el ámbito del uso de la invención son agua, alcoholes (v.g., metanol, etanol, etc.), cetonas (v.g., acetona, metil etil cetona, etc.), hidrocarburos aromáticos (v.g, benceno, tolueno, xileno, etilbenceno, metilnaftaleno, etc.), hidrocarburos alifáticos (v.g. hexano, ciclohexano, kerosina, gas oil, etc), ésteres (v.g., acetato de etilo, acetato de butilo, etc.), nitrilos (v.g, acetonitrilo, isobutironitrilo, etc.), éteres (v.g, éter diisopropílico, dioxano etc.), amidas de ácido (v.g, N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, etc.), hidrocarburos halogenados (v.g., dicloroetano, tricloroetano, tetracloruro de carbono, etc. ), sulfóxido de dimetilo, aceites vegetales (v. g., aceite de soja, aceite de semilla de algodón, etc.) y similares.
Ejemplos de vehículo gaseoso que se incluyen en el ámbito del uso de la invención son agente de pulverizado, incluyendo gas flon, gas butano, LPG (gas de petróleo liquificado), éter dimetílico, gas de dióxido de carbono y similares.
Ejemplos de agente tensioactivo que se incluyen en el ámbito del uso de la invención son sulfatos de alquilo, sales de sulfonato de alquilo, alquil aril sulfonatos, ésteres alquil arílicos, compuestos de polioxietileno de los mismos, ésteres polietilen glicólicos, ésteres de alcohol polihidroxílico, derivados de alcohol de azúcar y similares.
Ejemplos de agente auxiliar para la formulación como agente de fijación y agente de dispersión que se incluyen en el uso de la invención son caseína, gelatina, polisacáridos (v.g., polvo de almidón, goma arábiga, derivado de celulosa, ácido
A lo largo de la descripción y de las reivindicaciones la palabra “comprende” y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas. Para el experto en la materia, otros aspectos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Las siguientes figuras y ejemplos se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.
MODOS DE REALIZACION DE LA INVENCION
A) OBTENCIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE LOS COMPUESTOS CON ACTIVIDAD BIOCIDA
El hongo endófito G. manguiferae fue aislado de hojas del árbol Persea indica, recolectadas en el Parque Rural de Anaga (Las Mercedes, Tenerife). Dicho hongo fue depositado en la CECT en fecha 2 de julio de 2014 y con el número de acceso 20914 siguiendo el Tratado de Budapest sobre el Reconocimiento Internacional del Depósito de Microorganismos a los fines del Procedimiento en materia de Patentes. El material vegetal fresco se esterilizó superficialmente con hipoclorito de sodio (65%), etanol (75%) y agua destilada estéril. Pequeñas muestras de explantos (hojas) se colocaron en placas Petri con medio PDA y se incubaron a 27ºC. El cultivo puro se obtuvo aislando individualmente una colonia crecida en este medio y se replicó periódicamente para su mantenimiento. El hongo se identificó a nivel molecular en base a la amplificación (PCR) y secuenciación de la región ITS ribosomal del ADNr extraído de una muestra del micelio (Arenal et al. 2000. Mycological Research 104, 2000, 301–303). El hongo se identificó como G. manguiferae por comparación de la secuencia ITS1-5.8S-ITS2 del ADNr con las depositadas en la base de datos del NCBI (National Center for Biotechnology Information) (número de acceso GenBank gi255068992).
YCC4 se cultivó en medio PDA en placas Petri durante 15 días a una temperatura de 27º C. Se le añadió 10 ml de agua destilada estéril y la superficie del micelio se raspó suavemente con una espátula. Esta suspensión del micelio se vertió en un erlermeyer (250ml) con 100 ml medio liquido Czapek-Dox-Levadura [Cz-L: NaNO3 (2 g/l), KH2PO4 (5 g/l), MgSO4 (0.5 g/l), FeSO4 (0.01 g/l), ZnSO4 (0.003 g/l), extracto de levadura (1 g/l) y glucosa (60 g/l)] y se cultivó a una temperatura de 25ºC en continua agitación (120 r.p.m.) durante 4 días. Transcurrido este tiempo, 5 ml del cultivo se inocularon en cada uno de los 100 erlermeyers (250ml) con 100 ml de medio fresco. Después de 20 días de fermentación en las mismas condiciones, el medio de cultivo se separó del micelio por filtración en un büchner y se extrajo con un volumen igual de acetato de etilo obteniendo el extracto crudo de la invención. Posteriormente, el disolvente se secó sobre SO4Na2 y se llevó a sequedad a vacío a presión reducida, obteniendo 10.5 g de extracto crudo seco. El micelio se congeló con nitrógeno líquido y se liofilizó para su conservación.
El extracto crudo seco (10.5 g) obtenido según el ejemplo 2 se fraccionó mediante una cromatografía líquida de vacío (VLC) utilizando como eluyente mezclas crecientes en polaridad de n-hexano/acetato de etilo y acetato de etilo/metanol dando lugar a 9 fracciones. La fracción 1 (n-hexano/acetato de etilo 25%) fue cromatografiada en una columna flash de media presión empleando como sistema de elución n-hexano/acetato de etilo en orden de polaridad creciente. De las fracciones menos polares (n-hex/acet, 10%) se aislaron la guignardianona A (Buckel et al. 2013. Phytochemistry 89, 96–103)
(23.0 mg) y la guignardianona C (96.1 mg), empleando una cromatografía líquida de alta presión (HPLC) (n-hex/ AcOEt 3%). La fracción posterior obtenida con n-hex/AcOEt 15% fue cromatografiada en columna de media de presión de gel de sílice y, posteriormente, mediante HPLC (n-hex/ AcOEt 3%), y se obtuvo la guignardianona D (89 mg) y el metil éster del ácido penguignárdico (36.5 mg). De la fracción eluida en n-hex/acet 20%, después de una cromatografía en HPLC (n-hex/ AcOEt 15%) se obtuvo la guignardona A (Yuan et al. 2010. Eur. J. Org. Chem. 6348–6353) (78.3 mg). En la fracción más polar (n-hex/ AcOEt 50%) de la cromatografía de esta fracción 1 se aisló el ácido metguignárdico (204 mg).
La fracción 2 del extracto fue cromatografiada en una columna de media presión con gel de sílice con mezclas de polaridad creciente de n-hex/ AcOEt y AcOEt / MeOH y se aislaron de nuevo la guignardianona A (430 mg), la guignardona A (80 mg), que se habían obtenido anteriormente en la fracción 1 del extracto. En las fracciones eluidas con AcOEt 100% se aisló la guignardona B (Yuan et al. 2010. Eur. J. Org. Chem.
una cromatografía líquida de vacío (VLC) o en columnas cromatográficas acopladas a una bomba de media presión (Fluid Metering Inc). La elución se realizó en gradientes de polaridad creciente, empleando como disolventes mezclas de n-hexano/acetato de etilo (AcOEt) o diclorometano (CH2Cl2)/metanol (MeOH). Posteriores purificaciones de los compuestos se llevaron a cabo en un equipo de cromatografía líquida de alta presión (Beckman 125P®) acoplado a un detector fotodiodo, controlado por la aplicación informática Beckman 32-Karat. Las separaciones se llevaron a cabo en columnas de fase normal con un tamaño de partícula de 5 μ, sílica Inertsil de 20.0 x 250 mm (preparativa) o sílica Ultrasphere de 10.0 x 250 mm (semipreparativa), dependiendo del peso de la muestra a cromatografiar. El desarrollo de las cromatografías en columna se siguió por cromatografía en capa fina, visualizando las placas a la luz UV (254 y 360 nm) y calentando a 100-130 °C las placas pulverizadas con oleum (disolución de H2SO4 (4%) y ácido acético (80%) en agua destilada).
Guignardianona C
[α]D:- 10.2 º (c 0.25, CHCl3). 1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ 7.68 (2 H, d, J= 7.1 Hz, H8 y H-12), 7.41 (2 H, m, H-9 y H-11), 7.35 (1 H, m, H-10), 6.50 (1 H, s, H-6), 3.85 (3 H, s, -OCH3), 2.69 (1 H, sept, J= 6.9 Hz, H-1’), 1.07 (6 H, d, J= 6.9 Hz, H-2’y H-3'); EM a m/z: 276 [M+] (5), 118 (100), 90 (39), 71 (13); EMAR [M+] a m/z: 276.0999 calculado para C15H16O5, 276.0998.
Guignardianona D
[α]D:+40.3 º (c 0.25, CHCl3). 1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ 7.63 (2 H, d, J= 7.2 Hz, H-8 y H-12), 7.41 (2 H, m, H-9 y H-11), 7.35 (1 H, m H-10); 7.24 (5 H, s ancho, H-3’, H-4’, H-5’, H-6’ y H-7’), 7.21 (1 H, m, H-6’’), 7.19 (2 H, m, H-5’’ y H-7’’), 7.15 (2 H, m, H-4’’ y H-8’’), 6.30 (1 H, s, H-6), 4.45 (2 H, m, H-1’’), 3.52 y 3.46 (1 H cada uno, d, J= 14.6 Hz, H-1’), 2.96 (2 H, t, J= 6.6 Hz, H-2’’); EIMS a m/z: 414 [M+] (4), 265 (11), 118 (100), 105 (27), 91 (84); EMAR [M+] a m/z: 414.1465 calculado para C26H22O5, 414.1467.
Metil éster del ácido penguignárdico
[α]D:+ 47.6 º (c 0.14, CHCl3). 1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ 7.63 (2 H, d, J= 7.2 Hz, H8 y H-12), 7.40 (2 H, m, H-9 y H-11), 7.36 (1 H, m, H-10), 7.28 (2 H, m, H-3’ y H-7’),
14.8 Hz, H-1’b), 3.52 (1 H, d, J= 14.8 Hz, H-1’a); EIMS a m/z: 324 [M+] (2), 264 (2), 118 (100), 91 (29), 90 (17), 65 (3); EMAR [M+] a m/z: 324.0987 calculado para C19H16O5, 324.0998.
5 Ácido metguignárdico
[α]D: -54.7 º (c 0.3, CHCl3). 1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ 7.67 (2 H, dd, J= 7.1 y 1.5 Hz, H-8 y H-12), 7.40 (2 H, m, H-9 y H-11), 7.35 (1 H, m, H-10), 6.52 (1 H, s, H-6),
2.43 (1 H, dcd, J= 10.2, 6.9 y 3.3 Hz, H-1’), 1.66 y 1.29 (1 H cada uno, m, H-2'), 1.07
10 (3 H, d, J= 6.9 Hz, H-3’), 0.99 (3 H, t, J=7.4 Hz, H-4’); EIMS a m/z: 276 [M+] (6), 118 (100), 90 (54), 85 (7), 63 (5), 57 (25); EMAR [M+] a m/z: 276.1001, calculado para C15H16O5, 276.0998.
Acido guignárdico
15 [α]D: -26.7 º (c 0.25, CHCl3). 1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ 7.66 (2 H, d, J= 7.1 Hz, H8 y H-12), 7.40 (2 H, m, H-9 y H-11), 7.35 (1 H, m, H-10), 6.53 (1 H, s, H-6), 2.68 (1 H, sept. J= 6.9 Hz, H-1’), 1.09 y 1.08 (3 H cada uno, d, J = 6.9, H-2’ y H-3’); EIMS a m/z: 262 [M+] (5), 118 (100), 90 (38), 71 (9); EMAR [M+] a m/z: 262.0853 calculado para
Tabla 1. RMN de 13C de los compuestos con actividad biocida
- Guignardianona C
- Guignardianona D Metil éster del ácido penguignárdi co Ácido metguignárdico Acido guignárdico
- 2
- 108.5 105.2 105.2 108.3 109.6
- 4
- 162.8 162.3 162.3 162.7 163.4
- 5
- 135.8 135.2 135.2 135.3 135.9
- 6
- 109.6 109.5 109.6 110.1 109.4
- 7
- 132.3 132.2 132.2 132.1 132.2
- 8/12
- 129.9 129.8 129.8 129.9 129.8
- 9/11
- 128.8 128.8 128.7 128.8 128.7
- 10
- 129.1 129.0 129.0 129.2 129.0
- 13
- 166.0 165.1 165.8 169.5 169.4
- 1’
- 33.0 40.6 40.8 39.3 33.0
ensayaron en un experimento de dosis - respuesta para calcular su potencia relativa (EC50, es la dosis efectiva para una reducción de un 50 % de la alimentación).
Tabla 2. Actividad antialimentaria de los compuestos con actividad biocida y del 5 extracto crudo seco contra insectos-plaga, aplicados en una concentración de 50 µg/cm2
- mg/l cultivo
- µg/cm2 S.littoralis %FIa± SE (n=6) M. persicae %SIb ± SE (n=20)
- Extracto
- 1g/l 100 81.79 ± 5.06 78.15 ± 6.45
- 50
- 70.14 ± 8.69
- 20
- 50.52 ± 15.05 41.17±6.99
- 4
- 41.35 ± 5.46 33.41±7.17
- EC50
- 9.77 (4.13-23.16) 17.2 (0.85-26.5)
- Guignardianona C
- 15.5 50 50.32 ± 17.92 82.87 ± 3.69
- 10
- 62.22 ± 6.14
- 2
- 54.48 ± 8.63
- 0.4
- 30.76 ± 7.80
- EC50
- 1.74 (0.88-3.42)
- Guignardianona D
- 9.8 50 28.26 ± 14.11 50.70 ± 7.68
- Metil éster del ácido penguignárdico
- 4.3 50 20.03 ± 8.82 64.47 ± 7.87
- Ácido metguignárdico
- 23.1 50 94.48 ± 1.94 86.59 ± 3.52
- 25
- 57.78 ± 9.81
- 10
- 84.53 ± 6.70 34.33 ± 7.58
- 5
- 31.0 ± 8.8
- 2
- 10.59 ± 6.71 29.70 ± 7.59
- EC50
- 7.53 (5.43-10.44) 11.45 (8.29-15.83)
- Acido guignárdico
- 11.8 50 84.42 ± 4.93 82.02 ± 5.06
- 25
- 62.55 ± 7.69 73.05 ± 6.76
- 12.5
- 51.72 ± 9.49 62.06 ± 8.75
Claims (1)
-
imagen1 imagen2 imagen3
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES201431276A ES2565516B1 (es) | 2014-09-01 | 2014-09-01 | Productos biocidas y su uso para el control de fitopatógenos yorganismos plaga que afectan a plantas |
| PCT/ES2015/070641 WO2016034751A1 (es) | 2014-09-01 | 2015-09-01 | Productos biocidas, aislados a partir del producto de fermentación de hongos endófitos del género guignardia sp. y su uso para el control de fitopatógenos y organismos plaga que afectan a plantas. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES201431276A ES2565516B1 (es) | 2014-09-01 | 2014-09-01 | Productos biocidas y su uso para el control de fitopatógenos yorganismos plaga que afectan a plantas |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2565516A1 true ES2565516A1 (es) | 2016-04-05 |
| ES2565516B1 ES2565516B1 (es) | 2017-01-17 |
Family
ID=55439159
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES201431276A Active ES2565516B1 (es) | 2014-09-01 | 2014-09-01 | Productos biocidas y su uso para el control de fitopatógenos yorganismos plaga que afectan a plantas |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| ES (1) | ES2565516B1 (es) |
| WO (1) | WO2016034751A1 (es) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6544524B2 (en) * | 2000-09-01 | 2003-04-08 | Fundacao Oswaldo Cruz - Fiocruz | Ethyl acetate extract from guignardia used to treat an individual infected by fungi or bacteria |
-
2014
- 2014-09-01 ES ES201431276A patent/ES2565516B1/es active Active
-
2015
- 2015-09-01 WO PCT/ES2015/070641 patent/WO2016034751A1/es active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2565516B1 (es) | 2017-01-17 |
| WO2016034751A1 (es) | 2016-03-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kim et al. | Pathogen resistance of transgenic tobacco plants producing caffeine | |
| ES2379178T3 (es) | Nuevas cepas que pertenecen al género paenibacillus y método para controlar una enfermedad vegetal mediante el uso de estas cepas o de sus cultivos | |
| US9414590B2 (en) | Chemical and biological agents for the control of molluscs | |
| CA2759124C (en) | Agents for the control of molluscs | |
| KR101877932B1 (ko) | 그람미신 화합물을 유효성분으로 함유하는 선충 방제용 조성물 및 이의 용도 | |
| Kaur et al. | Purification and Characterization of a New Antifungal Compound 10-(2, 2-dimethyl-cyclohexyl)-6, 9-dihydroxy-4, 9-dimethyl-dec-2-enoic Acid Methyl Ester from Streptomyces hydrogenans Strain DH16 | |
| KR101855264B1 (ko) | 핌프리네틴을 유효성분으로 함유하는 소나무재선충병 방제용 조성물 | |
| CN102634551B (zh) | 一种海藻附生真菌氯代缩酚酸环醚类化合物及其制备和应用 | |
| Park et al. | Efficacy evaluation of Streptomyces nigrescens KA-1 against the root-knot nematode Meloidogyne incognita | |
| KR101802911B1 (ko) | 코지산을 유효성분으로 함유하는 뿌리혹선충 방제용 조성물 및 이의 용도 | |
| JPS59187791A (ja) | 有機化合物及びその製法 | |
| ES2920198B2 (es) | Cepa de aspergillus tubingensis y su uso para el aislamiento de compuestos nematicidas | |
| Martínez et al. | Simaroubaceae and Picramniaceae as potential sources of botanical pesticides | |
| ES2565516A1 (es) | Productos biocidas y su uso para el control de fitopatógenos y organismos plaga que afectan a plantas | |
| KR101555907B1 (ko) | 트리움페타 그란디덴스 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 포함하는 선충 방제용 조성물 및 이를 이용한 선충 방제방법 | |
| Abd El et al. | Insecticidal activity of brown seaweed (Sargassum latifolium) extract as potential chitin synthase inhibitors: Toxicokinetic and molecular docking approaches | |
| Zounos et al. | Bioactive compounds from neem tissue cultures and screening against insects | |
| US6316476B1 (en) | Heterocyclic compounds with antibacterial and antimycotic properties | |
| KR20230001353A (ko) | 트리코더마 롱기브라키아툼 균주로부터 유래된 살균 화합물을 포함하는 식물병 방제용 조성물 및 이를 이용한 식물병 방제 방법 | |
| ES2610186A2 (es) | Biocidas naturales de amplio espectro procedentes del hongo endófito stemphylium solani | |
| KR100832745B1 (ko) | 리그난계 화합물, 레조시놀계 화합물 또는 이를 포함하는육두구 추출물을 함유하는 식물병 방제용 조성물 및 이를이용한 식물병 방제방법 | |
| KR100832746B1 (ko) | 폴리아세틸렌계 화합물 또는 이를 포함하는 엉겅퀴 뿌리추출물을 함유하는 식물병 방제용 조성물 및 이를 이용한식물병 방제방법 | |
| KR101418492B1 (ko) | 심플리실리움 라멜리콜라 ｋｒｉｃｔ３ 균주로부터 유래된 신규한 만노실 지질 유도체 및 이를 유효성분으로 함유하는 식물병 또는 해충 방제용 조성물 | |
| Hassanein et al. | Insecticidal impacts of Bacillus flexus S13 biofilm'extracellular matrix'on cowpea weevil, Callosobruchus maculatus | |
| Wang et al. | Chemical defenses of Trifolium glanduliferum against redlegged earth mite Halotydeus destructor |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG2A | Definitive protection |
Ref document number: 2565516 Country of ref document: ES Kind code of ref document: B1 Effective date: 20170117 |