ES2549498T3 - Nuevos sustratos con fluorescencia reprimida, su preparación y su uso para la identificación, la detección y el análisis de Legionella pneumophila - Google Patents

Nuevos sustratos con fluorescencia reprimida, su preparación y su uso para la identificación, la detección y el análisis de Legionella pneumophila Download PDF

Info

Publication number
ES2549498T3
ES2549498T3 ES11736084.2T ES11736084T ES2549498T3 ES 2549498 T3 ES2549498 T3 ES 2549498T3 ES 11736084 T ES11736084 T ES 11736084T ES 2549498 T3 ES2549498 T3 ES 2549498T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
msp
amino acid
ser
legionella pneumophila
homo
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES11736084.2T
Other languages
English (en)
Inventor
Hervé Poras
Tanja Ouimet
Marie-Claude Fournie-Zaluski
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Pharmaleads SA
Original Assignee
Pharmaleads SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pharmaleads SA filed Critical Pharmaleads SA
Application granted granted Critical
Publication of ES2549498T3 publication Critical patent/ES2549498T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6486—Measuring fluorescence of biological material, e.g. DNA, RNA, cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
    • G01N33/542—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with steric inhibition or signal modification, e.g. fluorescent quenching
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56911—Bacteria
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Péptido sustrato selectivo de la Major Secreted Protein (Msp) de Legionella pneumophila, con fórmula (I): (I) R-(X)n-Fluo-Rep-(Gly)m-Z-NH2 en la que, · Fluo es un aminoácido-a de configuración (L), que posee en su cadena lateral un grupo fluorigénico seleccionado de entre el grupo constituido por la (L)-(1-pirenil)-alanina, la (L)-Nε(retroAbz)-Lis, la (L)-(7- metoxicumarin-4-il)-alanina, la (L)-((6,7-dimetoxi-cumarin-4-il)-alanina, la (L)-Nβ(pirenilacetil)-Dap, la (L)- Nγ(pirenilacetil))-Dab, la (L)-Nδ-(pirenilacetil)-Orn, la (L)-Nε-(pirenilacetil)-Lis, la (L)-S-(1-pirenometil)-Cis y la (L)-O-(1-pirenometil)-Ser, · Rep es un aminoácido de configuración (L) seleccionado de entre la (3-NO2)Tyr y la (4-NO2)Phe, entendiéndose que cuando Fluo es la pirenilalanina, Rep es la (3-NO2)Tyr, · R es un grupo seleccionado de entre los grupos acetilo, succinilo y metoxisuccinilo, · X es un aminoácido-a de configuración (L) seleccionado de entre el grupo constituido por: Gly, Ser, homo- Ser, Lys, homo-Lys, Arg, homo-Arg y Orn, · Z es un aminoácido-a cargado positivamente, y · n y m son dos números enteros naturales, estando n comprendido entre 0 y 3 y estando m comprendido entre 0 y 2.

Description

imagen1
imagen2
imagen3
imagen4
imagen5
5
15
25
35
45
55
65 E11736084
06-10-2015
Los inventores han mostrado así que la respuesta fluorimétrica varía de manera lineal en función de la concentración en proteasa. Por lo tanto, es posible, a partir de un valor de fluorescencia, deducir fácilmente a qué concentración de Msp corresponde dicho valor de fluorescencia. Se puede, por ejemplo, según una técnica bien conocida por el experto en la materia, establecer un intervalo estándar con cantidades conocidas de Msp para determinar la cantidad de Msp presente en la muestra.
La presente invención tiene por lo tanto como tercer objeto un procedimiento de análisis de la Msp en una muestra de una solución que comprende las etapas siguientes:
a) detectar la actividad proteasa de la Msp según el procedimiento descrito anteriormente,
b) medir la emisión de fluorescencia, y
c) deducir del valor de la emisión de fluorescencia la cantidad de Msp presente en la muestra.
Pueden existir casos en los que la cantidad de Msp a detectar es muy baja. En otros casos, la solución que contiene Msp puede también contener unos compuestos que inhiben la actividad proteásica de Msp. En estas condiciones, puede ser ventajoso concentrar la enzima antes de medir la actividad de la enzima para incrementar la sensibilidad del ensayo. Se puede así filtrar y concentrar la muestra, por ejemplo pasando dicha muestra sobre un filtro Centricon. Preferentemente, esta etapa de concentración permitirá eliminar todas las moléculas cuyo peso molecular es inferior o igual a 25 kDa. Se puede proceder asimismo a un enriquecimiento selectivo de proteína Msp, por ejemplo utilizando un anticuerpo anti-Msp que no afecta a la actividad catalítica de esta proteasa (en una columna de afinidad o en una reacción de inmunoprecipitación) o una columna de inhibidor. El enriquecimiento puede también ser no selectivo, por ejemplo por concentración sobre bolas magnéticas. El procedimiento de análisis de la Msp según la invención puede comprender por lo tanto una etapa suplementaria de concentración de la enzima. Ventajosamente, esta etapa se realiza antes de la etapa a).
En un cuarto aspecto, la invención se refiere a un procedimiento de análisis de Legionella pneumophila en una muestra de una solución. En efecto, los inventores han demostrado que existía una relación lineal entre la cantidad de Msp detectada y la cantidad de Legionella pneumophila presente en esta misma muestra.
La invención tiene también por objeto un procedimiento de análisis de las Legionella pneumophila en una muestra de una solución, que comprende las etapas siguientes:
a) analizar la Msp en dicha muestra según el procedimiento descrito anteriormente, y
b) deducir la cantidad de Legionella pneumophila.
Los compuestos de la fórmula (I) son especialmente útiles para identificar, detectar y analizar la presencia de Legionella pneumophila en redes de agua caliente sanitaria o de TAR.
Se ensayaron diferentes aguas de TAR más o menos contaminadas por L. pneumophila con el objetivo de determinar la presencia de Msp mediante el análisis fluorimétrico desarrollado en la reivindicación anterior. Entre todos los ensayos efectuados, no se observó ningún falso positivo y la presencia de Msp se detectó en aguas cuya contaminación era baja (inferior a 1000 UG/l).
La presente invención propone también unos kits para la detección y el análisis de Legionella pneumophila, conteniendo dicho kit por lo menosun péptido de fórmula (I) tal como se describe anteriormente. Además, dicho kit comprende ventajosamente los reactivos necesarios para la medición de la actividad enzimática. Los kits según la invención son utilizables en laboratorio o sobre el terreno.
Las figuras y ejemplos siguientes se presentan a título ilustrativo y no limitativo de la presente invención
Leyenda de las figuras
Figura 1
Especificidad del sustrato fluorigénico frente a Msp: Escisión comparativa del compuesto 8 (10 µM) por 10 ng/ml de Msp y de pseudolisina, pepsina, papaína, neprilisina (NEP), enzima de conversión de la endotelina-1 (ECE-1) y 2 (ECE-2), la proteasa de VIH (VIH P.) así como por la tripsina. Los deltas de fluorescencia (U.A.) se representan después de 300 minutos de incubación a 37ºC en 50 mM HEPES pH 7.
Figura 2
Comparación de la degradación del compuesto 1 y de 2 compuestos EF y EL de fórmula respectiva Ac-(X)n-Pya-EF(3-NO2)Tyr-(Gly)m-Z-NH2 y Ac-(X)n-Pya-EL-(3-NO2)Tyr-(Gly)m-Z-NH2 por la Msp y la pseudolisina. Los sustratos (10
7
imagen6
imagen7
E11736084
06-10-2015
HPLC ACE 100Ǻ, 5 µm, C18 250 x 4,6mm CH3CN (0,1% TFA)/ H2O (0,1% TFA) 25/75%; Rt: 41,62 min. Masa ESI(+): [(M+2H)/2]+ = 520,5
Compuesto 8-Ac-Ser-Lys-Gly-Pya-(3-NO2)Tyr-Orn-NH2
5 HPLC Atlantis T3, 3,5 µm, 100 x 4,6 mm CH3CN (0,1% TFA)/ H2O (0,1% TFA) 10 a 90% en 15 min; Rt: 9,02 min. Masa ESI(+): [(M+2H)/2]+ = 477,8
Compuesto 9-Ac-Ser-Lys-Gly-Pya-(3-NO2)Tyr-homo-Lys-NH2
HPLC Atlantis T3, 3,5 µm, 100 x 4,6 mm CH3CN (0,1% TFA)/ H2O (0,1% TFA) 10 a 90% en 15 min; Rt: 8,97 min. Masa ESI(+): [(M+2H)/2]+ = 463,5
Compuesto 10 -Ac-homo-Ser-Lys-Gly-Pya-(3-NO2)Tyr-Orn-NH2
15 HPLC ACE 100Ǻ, 5 µm, C18 250 x 4,6 mm CH3CN (0,1% TFA)/ H2O (0,1% TFA)30/70; Rt: 13,70 min. Masa ESI(+): [(M+2H)/2]+ = 470,5
Compuesto 11 -Ac-Ser-Lys-Gly-Pya-(3-NO2)Tyr-Arg-NH2
HPLC ACE 100Ǻ, 5 µm, C18 250 x 4,6 mm CH3CN (0,1% TFA)/ H2O (0,1% TFA) 30/70; Rt: 10,28 min. Masa ESI(+): [(M+2H)/2]+ = 484,0
Compuesto 12 -Ac-Ser-Lys-Gly-Pya-(3-NO2)Tyr-homo-Arg-NH2
25 HPLC ACE 100Ǻ, 5 µm, C18 250 x 4,6 mm CH3CN (0,1% TFA)/ H2O (0,1% TFA) 30/70; Rt: 11,25 min. Masa ESI(+): [(M+2H)/2]+ = 491,5
Compuesto 13 -Ac-Ser-Lys-Gly-(ε-Abz)Lys-(3-NO2)Tyr-Orn-NH2
Atlantis T3, 3,5 µm, 100 x 4,6 mm CH3CN (0,1% TFA)/ H2O (0,1% TFA) 15/85; Rt: 7,24 min. Masa ESI(+): [(M+2H)/2]+ = 451,6
Ejemplo 2 Comparación de la fluorescencia emitida por los sustratos y sus metabolitos fluorescentes.
35 Las longitudes de onda de excitación de los sustratos anteriores son:
λex = 340 mm cuando el fluoróforo es una pirenilalanina, λex = 310 nm para un grupo aminobenzoil y λex = 335 nm para los derivados metoxicumarinilos.
Los diferentes sustratos y sus metabolitos fluorescentes se ponen en solución en el tampón HEPES 50 mM, pH 7,0 a las concentraciones respectivas de 10-4 M y 10-6 M. Los espectros de fluorescencia se registran con un fluorímetro Perkin Elmer LS50B. Para los compuestos de 1 a 12, que contienen Pya como fluoróforo, los espectros de emisión obtenidos, después de la excitación a 343 nm, muestran dos máximas a 377 y 397 nm (figura 5), que permiten
45 lecturas a varias longitudes de ondas alrededor de estos valores y λem = 410 nm para el aminobenzoil (compuesto 13); λem = 420 para Mca.
Ejemplo 3 Purificación de la Msp
La Msp se purifica a partir de sobrenadantes de caldos de cultivo de 3 litros de Legionella pneumophila que proviene de la cepa Paris según un protocolo basado en los datos iniciales de Dreyfus y Iglewski, Infect. Immun., 1986, 51, 736-743.
El sobrenadante de cultivo se precipita en primer lugar con sulfato de amonio al 65% durante la noche a 4ºC.
55 Después de la centrifugación (10000 rpm, 60 minutos a 4ºC), el residuo se recoge en aproximadamente 200 ml de tampón de equilibración (25 mM Tris pH 7.8, 25 mM NaCl, 0,01% triton X 100) y se dializa a 4°C durante una noche. El precipitado dializado se carga después en una columna DEAE FF 16/10 (HiPrep, GE Healthcare) con la ayuda de un purificador Akta (GE Healthcare). Las proteínas retenidas en la columna se eluyen sobre tres niveles de concentración del tampón de elución, el primero al 15% de tampón B (25 mM Tris pH 7,8, 1 M NaCl, 0,01% triton X 100), el segundo al 60% y el último al 100%. La actividad enzimática correspondiente a la Msp se ensaya en cada fracción del segundo nivel con la ayuda de un sustrato fluorescente. Las fracciones que contienen la actividad enzimática son asimismo analizadas en SDS PAGE 10% (BioRad) en condiciones no desnaturalizantes, y los geles coloreados con nitratos de plata (Sigma). Las fracciones que contienen la actividad enzimática Msp se reúnen, se lavan con el tampón de equilibración de la segunda etapa de purificación, 50 mM Tris pH 7,2, 150 mM NaCl, 0,01%
65 triton X 100 y se concentran en Centricon YM10 (Amicon). El "pool" concentrado así obtenido se carga después en una columna HiLoad 16/60 Superdex 75 (GE Healthcare) y las proteínas se eluyen con el tampón de equilibración a
10

Claims (1)

  1. imagen1
    imagen2
ES11736084.2T 2010-07-21 2011-07-21 Nuevos sustratos con fluorescencia reprimida, su preparación y su uso para la identificación, la detección y el análisis de Legionella pneumophila Active ES2549498T3 (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR1055970A FR2963022B1 (fr) 2010-07-21 2010-07-21 Nouveaux substrats a fluorescence reprimee, leur preparation et leur utilisation pour l'identification, la detection et le dosage de legionella pneumophila
FR1055970 2010-07-21
PCT/EP2011/062565 WO2012010668A1 (fr) 2010-07-21 2011-07-21 Nouveaux substrats a fluorescence reprimee, leur preparation et leur utilisation pour l'identification, la detection et le dosage de legionella pneumophila

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2549498T3 true ES2549498T3 (es) 2015-10-28

Family

ID=43663510

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES11736084.2T Active ES2549498T3 (es) 2010-07-21 2011-07-21 Nuevos sustratos con fluorescencia reprimida, su preparación y su uso para la identificación, la detección y el análisis de Legionella pneumophila

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20130203097A1 (es)
EP (1) EP2596124B1 (es)
CA (1) CA2813219A1 (es)
ES (1) ES2549498T3 (es)
FR (1) FR2963022B1 (es)
WO (1) WO2012010668A1 (es)

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001508654A (ja) * 1996-12-27 2001-07-03 ベーリンガー インゲルハイム（カナダ）リミテッド ヒトのサイトメガロウイルスプロテアーゼ用の改良した基質
FR2807523B1 (fr) * 2000-04-07 2002-08-30 Inst Nat Sante Rech Med UTILISATION D'UN RESTE PyA-(Z)x-pNF A DES FINS DE DETECTION, IDENTIFICATION ET/OU DOSAGE PAR FLUORESCENCE
CA2565678C (fr) * 2004-05-05 2013-07-09 Pharmaleads Substrats peptidiques reconnus par la toxine botulique de type a, bont/a et leurs utilisations

Also Published As

Publication number Publication date
EP2596124A1 (fr) 2013-05-29
CA2813219A1 (fr) 2012-01-26
US20130203097A1 (en) 2013-08-08
FR2963022B1 (fr) 2012-08-31
WO2012010668A1 (fr) 2012-01-26
EP2596124B1 (fr) 2015-07-08
FR2963022A1 (fr) 2012-01-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7372392B2 (ja) エンドトキシン測定剤
US6593454B2 (en) Methods for identifying inhibitors of methionine aminopeptidases
Tashian et al. Genetic and phylogenetic variation in the different molecular forms of mammalian erythrocyte carbonic anhydrases
US4188264A (en) Process for determining bacterial endotoxin and reagents used therefor
ES2502481T3 (es) Composición para el análisis de proteínas glicosiladas
EP2211167B1 (en) Method and kit for measurement of endotoxin level
Hemker Handbook of synthetic substrates
CL2008002917A1 (es) Anticuerpos especificos para 5-ennolpiruvilshikimato-3-fosfato sintetasa (epsps) doble mutante; hibridoma productor; método para generar dichos anticuerpos; eodo de detección de dicha enzima epsps doble mutante en una composición; kit para detectar la presencia de dicha epsps doble mutante en la composición.
HUT62312A (en) Process for producing chymotrypsin-like proteases and their inhibitors
US10962529B1 (en) Fluorescent probe based biosensor and assay for the detection of SARS-CoV-2
JP2010197110A (ja) 質量分析装置を用いたタンパク質定量のための評価用ペプチド、人工標準タンパク質、及びタンパク質の定量方法
ES2549498T3 (es) Nuevos sustratos con fluorescencia reprimida, su preparación y su uso para la identificación, la detección y el análisis de Legionella pneumophila
Shimura et al. Assay of trypsin activity by capillary isoelectric focusing with laser‐induced fluorescence detection
EP3529371B1 (en) A functional detection assay devoid of antibodies for serotyping of botulinum neurotoxins
US20100075297A1 (en) Photosensitive polypeptide and methods of their production and use
ES2268030T3 (es) Deteccion de inflamaciones.
Summary The spectrophotometric determination of human serum carboxypolypeptidase with angiotensin converting enzyme-like activity
Cao et al. Determination of Phosphoamino Acids by 6-Oxy-(N-succinimidyl acetate)-9-(2′-methoxycarbonyl) fluorescein and MEKC with LIF Detection
KR100454903B1 (ko) 엠이케이케이3 단백질 인산화효소의 기질 펩티드 및 이를이용한 비방사성 엠이케이케이3 단백질 인산화효소활성측정법
CA1130706A (en) Process for determining bacterial endotoxin and reagents used therefor
JP4690027B2 (ja) プロテアーゼ活性の測定方法及びそのための試薬
Moriyama et al. Quinacrine mustard and lipophilic cations inhibitory to both vacuolar H+-ATPase and F0F1-ATP synthase
Carne The sequences of the tryptic peptides from actinidin: a thesis presented in partial fulfillment for the degree of Doctor of Philosophy [in Biochemistry] at Massey University
Uchikoba et al. Detection of Hydrolytic Activity of Trypsin with a Fluorescence-chymotryptic Peptide on a TLC Plate
Inokuchi et al. Fluorescence measurements revealed two distinct modes of metal binding by histidine-containing motifs in prion-derived peptides