ES2542344T3

ES2542344T3 - Uso de inhibidores de tirosina cinasa Syk para el tratamiento de trastornos proliferativos celulares

Info

Publication number: ES2542344T3
Application number: ES07804842.8T
Authority: ES
Inventors: Eliahu Kaplan
Original assignee: Novaremed Ltd
Current assignee: Novaremed Ltd
Priority date: 2006-05-09
Filing date: 2007-05-09
Publication date: 2015-08-04
Anticipated expiration: 2027-05-09
Also published as: US20090306214A1; CA2651375C; AU2007246779B2; HUE026820T2; IL195152A; US20120108666A1; JP2009536191A; PL2026775T3; EP2026775A2; IL195152A0; US20140039060A1; EP2026775B1; AU2007246779A1; WO2007129226A2; DK2026775T3; WO2007129226A3; CA2651375A1; JP5225264B2; PT2026775E

Abstract

Compuesto para su uso en el tratamiento de un trastorno proliferativo celular en un sujeto, siendo dicho compuesto el enantiómero S de la fórmula I:**Fórmula** en la que: la línea de puntos representa un enlace sencillo o uno doble; R5 y R5' son independientemente H u OH; X es -CH2O, -CH2CH2O, -CH(CH3)CH2O o -CH2CH(CH3)O; Z es -CH2CH2O, -CH(CH3)CH2O o -CH2CH(CH3)O; m es 1; y n es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 o 50; o una sal farmacéuticamente eficaz del mismo en el que el trastorno proliferativo celular es cáncer de colon.

Description

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DESCRIPCIÓN

Uso de inhibidores de tirosina cinasa Syk para el tratamiento de trastornos proliferativos celulares

5 La invención se refiere a compuestos y a su uso en el tratamiento de trastornos proliferativos celulares, más específicamente cáncer de colon.

Las proteínas tirosina cinasa (PTK) son enzimas que catalizan la fosforilación de residuos de tirosina. Hay dos clases principales de PTK: PTK receptoras y PTK celulares o no receptoras. Estas enzimas están implicadas en rutas de señalización celular y regulan funciones celulares clave tales como proliferación, diferenciación, señalización antiapoptótica y excrecencia de neuritas. La activación no regulada de estas enzimas, a través de mecanismos tales como mutaciones puntuales o sobreexpresión, puede conducir a diversas formas de cáncer así como a estados proliferativos benignos.

15 Más del 70% de los oncogenes y protooncogenes conocidos implicados en cáncer codifican para PTK. La importancia de las PTK en salud y enfermedad se pone de relieve adicionalmente por la existencia de aberraciones en la señalización de PTK que se producen en enfermedades inflamatorias y diabetes.

Las PTK receptoras presentan un dominio de unión a ligando extracelular, un dominio transmembrana y un dominio catalítico intracelular. El dominio transmembrana ancla el receptor en la membrana plasmática, mientras que el dominio extracelular se une a factores de crecimiento. De manera característica, los dominios extracelulares están compuestos por uno o más motivos estructurales identificables, que incluyen regiones ricas en cisteína, dominios de tipo fibronectina III, dominios de tipo inmunoglobulina, dominios de tipo EGF, dominios de tipo cadherina, dominios de tipo kringle, dominios de tipo factor VIII, regiones ricas en glicina, regiones ricas en leucina, regiones ácidas y

25 dominios de tipo discoidina.

Los dominios cinasa intracelulares de PTK receptoras pueden dividirse en dos clases: los que contienen un tramo de aminoácidos que separa el dominio cinasa y aquéllos en los que el dominio cinasa es continuo. La activación de la cinasa se logra mediante la unión del ligando al dominio extracelular, que induce la dimerización de los receptores. Los receptores activados de este modo pueden autofosforilar residuos de tirosina fuera del dominio catalítico por medio de fosforilación cruzada. Los resultados de esta autofosforilación son la estabilización de la conformación activa del receptor y la creación de sitios de unión de fosfotirosina para proteínas que transducen señales dentro de la célula. Las proteínas de señalización que se unen al dominio intracelular de tirosina cinasas receptoras de una manera dependiente de fosfotirosina incluyen RasGAP, PI3-cinasa, fosfolipasa Cy, fosfotirosina fosfatasa SHP y

35 proteínas adaptadoras tales como Shc, Grb2 y Crk.

En contraposición a las PTK receptoras, las PTK celulares se ubican en el citoplasma, el núcleo o están ancladas a la cara interna de la membrana plasmática. Se agrupan en ocho familias: SRC, JAK, ABL, FAK, FPS, CSK, SYK y BTK. Con la excepción de dominios cinasa homólogos (dominios Src homología 1, o SH1), y algunos dominios de interacción proteína-proteína (dominios SH2 y SH3), tienen poco en común, estructuralmente. De las PTK celulares cuyas funciones se conocen, muchas, tales como SRC, están implicadas en crecimiento celular. En cambio, las PTK FPS están implicadas en diferenciación, las PTK ABL están implicadas en inhibición del crecimiento y la actividad de FAK está asociada con adhesión celular. Algunos miembros de la ruta del receptor de citocinas interaccionan con JAK, que fosforilan los factores de transcripción, STAT. Todavía otras PTK activan rutas cuyos componentes y

45 funciones quedan por determinarse.

Syk es una tirosina cinasa no receptora relacionada con ZAP-70 que está implicada en la señalización a partir del receptor de células B y el receptor de IgE. Syk se une a motivos ITAM dentro de estos receptores, e inicia la señalización a través de las rutas de señalización de Ras, PI 3-cinasa y PLCg. Syk también se expresa ampliamente en células hematopoyéticas. Está implicada en el acoplamiento de inmunorreceptores activados a acontecimientos de señalización posteriores que median en diversas respuestas celulares incluyendo proliferación, diferenciación y fagocitosis. Se ha notificado expresión de Syk en líneas celulares de origen epitelial, pero su función en estas células sigue siendo desconocida. Syk se expresa comúnmente en tejido de mama humano normal, lesiones de mama benignas y líneas celulares de cáncer de mama poco tumorigénicas. Se cree que Syk es un potente

55 modulador del crecimiento de células epiteliales y un posible supresor de tumores en carcinomas de mama humanos.

ZAP-70 es una tirosina cinasa no receptora de la familia Syk. ZAP-70 está implicada en la señalización del receptor de células T a través de su reclutamiento a complejos de receptores de células T una vez que se activan las células T mediante células presentadoras de antígeno. ZAP-70, una vez activada, fosforila y activa varias dianas posteriores, incluyendo SLP-76 y LAT. ZAP-70 se ha identificado como el biomarcador más reciente para el pronóstico de leucemia linfocítica crónica (LLC).

El documento WO 2005/092305 se refiere a compuestos para su uso en el tratamiento de enfermedades e

65 infecciones virales. El documento WO 03/000688 se refiere a compuestos para su uso en el tratamiento del cáncer de colon.

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Hay una necesidad en la técnica de desarrollar potentes compuestos que son eficaces en el tratamiento, la prevención y el control de trastornos proliferativos celulares, y más específicamente en trastornos mediados por tirosina cinasa Syk.

5 El alcance de la invención se define mediante las reivindicaciones.

Según un aspecto de la presente invención, se proporciona por tanto un compuesto para su uso en el tratamiento de un trastorno proliferativo celular en un sujeto, siendo dicho compuesto el enantiómero S de un compuesto representado por la estructura de fórmula I:

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en la que:

15 la línea de puntos representa un enlace sencillo o uno doble; y R5 y R5’ son independientemente H, OH u OR6, en el que R6 es un alquilo C1-C4 lineal o ramificado; X es -CH2O, -CH2CH2O, -CH(CH3)CH2O o -CH2CH(CH3)O; Z es -CH2CH2O,-CH(CH3)CH2O o -CH2CH(CH3)O; m es 1; y n es un número entero de 1-50, o una sal farmacéuticamente eficaz del mismo, en el que el trastorno proliferativo celular es cáncer de colon.

20 Según aún otro aspecto de la presente invención, se proporciona el uso de un enantiómero S del compuesto representado por la estructura de fórmula I definida anteriormente en la fabricación de un medicamento para tratar un trastorno proliferativo celular, que comprende cáncer de colon.

En algunas realizaciones, n puede ser un número entero de desde 1-25. Por ejemplo, n puede ser 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 25 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 o 25. Preferiblemente, n es 1, 2 o 7.

En otra realización, la invención comprende el uso de las sales o hidratos del compuesto de fórmula I. En una realización, X puede ser -CH2O.

30 Además, la invención proporciona un compuesto para su uso en el tratamiento de un trastorno proliferativo celular que comprende cáncer de colon, usando un enantiómero S de un compuesto representado por la estructura de fórmula II:

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35 en la que la línea de puntos representa un enlace sencillo o uno doble; R5 y R5’ son independientemente H, OH u OR6 (en el que R6 es un alquilo C1-C4 lineal o ramificado); Z es -CH2CH2O, -CH(CH3)CH2O o -CH2CH(CH3)O; y n es un número entero de 1-25. Por ejemplo, n puede ser 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 o 25. Preferiblemente, n es 1, 2 o 7. En otra realización, la invención proporciona las sales o hidratos

40 del compuesto presentado por la estructura de fórmula II. En una realización, Z es -CH(CH3)CH2O.

Además, la invención proporciona un compuesto para su uso en el tratamiento de un trastorno proliferativo celular que comprende cáncer de colon, usando un enantiómero S de un compuesto representado por la estructura de fórmula III:

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en la que la línea de puntos representa un enlace sencillo o uno doble; R5 y R5’ son independientemente H, OH u OR6 (en el que R6 es un alquilo C1-C4 lineal o ramificado); Z es -CH2CH2O, -CH(CH3)CH2O o -CH2CH(CH3)O; y n es 5 un número entero de 1-25. Por ejemplo, n puede ser 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 o 25. Preferiblemente, n es 1, 2 o 7.

En otra realización, la invención proporciona las sales o hidratos del compuesto presentado por la estructura de fórmula III. En una realización, R5 es H. En otra realización, R5 es OH. En una realización, R5’ es H. En otra 10 realización, R5’ es OH.

Además, la invención proporciona un compuesto para su uso en el tratamiento de un trastorno proliferativo celular que comprende cáncer de colon, usando un enantiómero S de un compuesto de fórmula IV:

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en la que R es un polímero de polialquilenglicol que tiene n unidades, n es un número entero de desde 1-50. En una realización, el polímero de polialquilenglicol es poliisopropilenglicol. En otra realización, n es un número entero de desde 1-25. Por ejemplo, n puede ser 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24

20 o 25. Preferiblemente, n es 1, 2 o 7.

Además, la invención proporciona un compuesto para su uso en el tratamiento de un trastorno proliferativo celular que comprende cáncer de colon, usando un enantiómero S de un compuesto de fórmula V:

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en la que R es un polímero de polialquilenglicol que tiene n unidades, siendo n un número entero de desde 1-50. En una realización, el polímero de polialquilenglicol es poliisopropilenglicol. n puede ser, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 o 25. Preferiblemente, n es 1, 2 o 7.

30 Además, la invención proporciona un compuesto para su uso en el tratamiento de un trastorno proliferativo celular que comprende cáncer de colon, usando un enantiómero S de un compuesto de fórmula VI: en la que R es un polímero de polialquilenglicol que tiene n unidades, siendo n un número entero de desde 1-50. En una realización, el polímero de polialquilenglicol es poliisopropilenglicol. n puede ser, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 o 25. Preferiblemente, n es 1, 2 o 7.

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Además, la invención proporciona un compuesto para su uso en el tratamiento de un trastorno proliferativo celular, usando un enantiómero S de un compuesto de fórmula VII:

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15 Además, en una realización, la invención proporciona una composición para su uso en el tratamiento de un trastorno proliferativo celular, que comprende cáncer de colon, que comprende uno o más compuestos de fórmula I, II, III, IV, V, VI o VII. En otra realización, la invención proporciona una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento del cáncer de colon que comprende como principio activo uno o más compuestos de fórmula I, II, III, IV, V, VI o VII,

20 junto con uno o más excipientes o adyuvantes farmacéuticamente aceptables.

A menos que se defina otra cosa, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que entiende comúnmente un experto habitual en la técnica a la que pertenece esta invención. Se describen a continuación métodos y materiales adecuados.

25 Además, los materiales, métodos y ejemplos son sólo ilustrativos.

Todas las partes y porcentajes son en peso a menos que se especifique otra cosa.

30 Definiciones

Por conveniencia, determinados términos usados en la memoria descriptiva, los ejemplos y las reivindicaciones adjuntas se recogen a continuación.

35 “Tratar” incluye cualquier efecto, por ejemplo, disminuir, reducir, modular o eliminar, que da como resultado la mejora el estado, enfermedad, trastorno, etc.

La invención proporciona compuestos y composiciones farmacéuticas útiles en el tratamiento del cáncer de colon. La invención proporciona además uno o más de los compuestos representados por la estructura de fórmula I, II, III, 40 IV, V, VI o VII anterior para su uso en el tratamiento, la prevención y el control del cáncer de colon.

Las metodologías de síntesis para obtener y purificar los compuestos se dan a conocer en detalle más adelante. Sin embargo, debe resultar evidente para un experto en la técnica que los compuestos de la invención pueden prepararse mediante cualquier método de síntesis viable y que las síntesis expuestas en el presente documento no son en absoluto limitativas. Un experto en la técnica conocerá diversos métodos de síntesis para la preparación y purificación de estos compuestos. Los compuestos de la invención pueden modificarse adicionalmente tal como se permite por las reglas de la química. Tales modificaciones incluyen la adición de diversos sustituyentes (por ejemplo,

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5 hidroxilación, carboxilación, metilación, etc.), generación de enantiómeros, creación de sales de adición de ácido o base, y similares. Otras modificaciones incluyen añadir polímeros de polialquilenglicol.

Los compuestos de la invención pueden sintetizarse como conjugados de polialquilenglicol (PAG). Los polímeros típicos usados para conjugación incluyen poli(etilenglicol) (PEG), también conocido como o poli(óxido de etileno)

10 (PEO) y polipropilenglicol (incluyendo poliisopropilenglicol). Estos conjugados se usan a menudo para potenciar la solubilidad y estabilidad y para prolongar la semivida de circulación en sangre de las moléculas.

En su forma más común, un polialquilenglicol (PAG), tal como PEG es un polímero lineal terminado en cada extremo con grupos hidroxilo:

15 HO-CH2CH2O-(CH2CH2O)n-CH2CH2-OH.

El polímero anterior, alfa-, omega-dihidroxilpoli(etilenglicol), también puede representarse como HO-PEG-OH, en el que se entiende que el símbolo -PEG-representa la siguiente unidad estructural:

20 -CH2CH2O-(CH2CH2O)n-CH2CH2

en la que n oscila normalmente entre aproximadamente 4 y aproximadamente 10.000. PEG se usa comúnmente como metoxi-PEG-OH, o mPEG, en el que un extremo terminal es el grupo metoxilo relativamente inerte, mientras

25 que el otro extremo terminal es un grupo hidroxilo que se somete fácilmente a modificación química. Adicionalmente, puede sustituirse PEG en muchas de sus aplicaciones por copolímeros al azar o de bloque de diferentes óxidos de alquileno (por ejemplo, óxido de etileno y óxido de propileno) que están estrechamente relacionados con PEG en composición química.

30 Los PAG son polímeros que tienen normalmente las propiedades de solubilidad en agua y en muchos disolventes orgánicos, carecen de toxicidad y carecen de inmunogenicidad. Un uso de PAG es unir covalentemente el polímero a moléculas insolubles para preparar el “conjugado” de PAG-molécula soluble resultante. Por ejemplo, se ha mostrado que el fármaco insoluble en agua paclitaxel, cuando se acopla a PEG, se vuelve soluble en agua. Greenwald, et al., J. Org. Chem., 60:331-336 (1995).

35 Los compuestos polialquilados contienen normalmente entre 1 y 500 unidades monoméricas. Otros compuestos de PAG contienen entre 1 y 200 unidades monoméricas. Todavía otros compuestos de PAG contienen entre 1 y 100 unidades monoméricas. Por ejemplo, el polímero puede contener 1, 10, 20, 30, 40, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 o 100 unidades monoméricas. Algunos compuestos contienen polímeros que incluyen entre 5 y 75 o entre 1 y 50

40 unidades monoméricas. Por ejemplo, el polímero puede contener 2, 3, 5, 6, 7, 8, 10, 11, 12, 13, 15, 16, 17, 18, 20, 25, 30, 33, 34, 35, 40, 45, 50, 60, 65, 68, 69, 70 o 75 unidades monoméricas. Preferiblemente, n es 7, 12, 17, 34 o

69. Los polímeros pueden ser lineales o ramificados.

Se entiende que compuestos que se han modificado mediante la adición de un resto PAG pueden incluir una mezcla

45 de polímeros que tienen un número variable de unidades monoméricas. Normalmente, la síntesis de un compuesto modificado con PAG (por ejemplo, un conjugado de PAG) producirá una población de moléculas con una distribución de Poisson del número de unidades monoméricas por polímero en el conjugado. Por tanto, un compuesto que se describe que tiene un polímero de n = 7 unidades monoméricas se refiere no sólo a los polímeros reales en esa población que se describe que tienen n = 7 unidades monoméricas, sino también a una población de moléculas con

50 un pico de la distribución que es 7. La distribución de unidades monoméricas en una población dada puede determinarse, por ejemplo, mediante resonancia magnética nuclear (RMN) o mediante espectrometría de masas (EM).

A lo largo de toda esta solicitud, se usa terminología convencional para designar los isómeros descritos a

55 continuación y en libros de texto apropiados conocidos por los expertos habituales en la técnica (véanse, por ejemplo, Principles in Biochemistry, Lehninger (ed.), páginas 99-100, Worth Publishers, Inc. (1982) Nueva York, NY; Organic Chemistry, Morrison y Boyd, 3ª edición, cap. 4, Allyn y Bacon, Inc., Boston, MA (1978).

Se indicará que la estructura de los compuestos de la invención incluye átomos de carbono asimétricos. Debe

60 entenderse por consiguiente que los isómeros que surgen de tal asimetría (por ejemplo, todos los enantiómeros y diastereómeros) se incluyen dentro del alcance de la invención, a menos que se indique otra cosa. Tales isómeros pueden obtenerse en forma sustancialmente pura mediante técnicas de separación clásicas y mediante síntesis controlada estereoquímicamente. Además, las estructuras y otros compuestos y restos comentados en esta solicitud también incluyen todos los tautómeros de los mismos. Los alquenos pueden incluir la geometría o bien E o bien Z,

65 cuando se apropiado.

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Un átomo de carbono que incluye cuatro sustituyentes diferentes se denomina centro quiral. Un centro quiral puede aparecer en dos formas isoméricas diferentes. Estas formas son idénticas en todas las propiedades químicas y físicas con una excepción, la dirección en la que pueden provocar la rotación del plano de luz polarizada. Estos compuestos se dice que son “ópticamente activos”, es decir, los compuestos pueden hacer rotar el plano de luz

5 polarizada en una dirección o en la otra.

Los cuatro grupos sustituyentes diferentes unidos a un carbono pueden ocupar dos disposiciones diferentes en el espacio. Estas disposiciones son imágenes especulares no superponibles entre sí y se denominan isómeros, enantiómeros o estereoisómeros ópticos. Una disolución de un estereoisómero de un compuesto dado hará rotar el

10 plano de luz polarizada a la izquierda y se denomina isómero levorrotatorio [designado (-)]; el otro estereoisómero para el compuesto hará rotar el plano de luz polarizada en la misma magnitud pero a la derecha y se denomina isómero dextrorrotatorio [designado (+)].

El sistema R S se inventó para evitar ambigüedades cuando un compuesto contiene dos o más centros quirales. En

15 general, el sistema está diseñado para clasificar los cuatro átomos sustituyentes diferentes alrededor de un átomo de carbono asimétrico en orden de número atómico decreciente o en orden de densidad de valencia decreciente cuando el grupo más pequeño o de clasificación más baja está apuntando directamente en sentido opuesto al observador. Si se observa que el orden de clasificación decreciente es en sentido horario, la configuración alrededor del centro quiral se denomina R; si el orden de clasificación decreciente es en sentido antihorario, la configuración se

20 denomina S. Cada centro quiral se nombra por consiguiente usando este sistema.

Puede prepararse un compuesto de la invención mediante síntesis asimétrica, o mediante derivación con un grupo auxiliar quiral, en la que la mezcla diastereomérica resultante se separa y el grupo auxiliar se escinde para proporcionar el enantiómero S deseado. Alternativamente, cuando la molécula contiene un grupo funcional básico,

25 tal como amino, o un grupo funcional ácido, tal como carboxilo, se forman sales diastereoméricas con un ácido o una base ópticamente activo apropiado, seguido por resolución de los diastereómeros así formados mediante cristalización fraccionada o medios cromatográficos bien conocidos en la técnica, y recuperación posterior del enantiómero puro.

30 Las composiciones y composiciones farmacéuticas de la invención pueden comprender uno o más de los compuestos de la invención, o bien en forma pura o bien en forma parcialmente pura. De manera similar, los métodos comprenden el uso de uno o más compuestos, en los que los compuestos están en forma pura, o en forma parcialmente pura. Preferiblemente, dicha composición farmacéutica puede comprender al menos el 95% en peso de dicho uno o más compuestos de la invención, por ejemplo, el 96%, el 97%, el 98% o más del 99% en peso de

35 dicho uno o más compuestos.

En algunas realizaciones, la composición farmacéutica según la presente invención puede incluir, además del uno o más compuestos de la invención, una proporción de polialquilenglicol libre tal como, por ejemplo, polietilenglicol (PEG) o polipropilenglicol (PPG). Dicho polialquilenglicol puede ser por sí mismo biológicamente activo. La longitud 40 de cadena del polialquilenglicol puede oscilar entre 1-50, especialmente 1-25. En algunas realizaciones, dicho polialquilenglicol puede tener una longitud de cadena de 3, 7, 12 y/o 17 unidades monoméricas. Normalmente, dicha composición farmacéutica puede comprender una cantidad de polietilenglicol y/o polipropilenglicol libre que tiene una mezcla de diferentes longitudes de cadena. En algunas realizaciones, dicha composición farmacéutica puede comprender aproximadamente el 5-60% en peso de uno o más compuestos según la invención y aproximadamente

45 el 95-40% en peso de polialquilenglicol libre. Normalmente, dicha composición farmacéutica puede comprender aproximadamente el 45-55% en peso de dicho uno o más compuestos según la invención y aproximadamente el 5545% en peso de dicho uno o más polialquilenglicoles. Alternativamente, dicha composición farmacéutica puede comprender aproximadamente el 80-95% en peso de dicho uno o más compuestos según la invención y aproximadamente el 20-5% en peso de dicho uno o más polialquilenglicoles.

50 En una realización, una composición de la invención comprende al menos uno de los compuestos de la invención, es decir uno o más de los compuestos representados por las estructuras de fórmula I, II, III, IV, V, VI o VII. En otra realización, una composición de la invención comprende una mezcla de al menos dos de los compuestos representados por las estructuras de fórmula I, II, III, IV, V, VI o VII. En otra realización, una composición de la

55 invención comprende una mezcla de al menos cinco de los compuestos representados por las estructuras de fórmula I, II, III, IV, V, VI o VII. En otra realización, una composición de la invención comprende una mezcla de al menos diez de los compuestos representados por las estructuras de fórmula I, II, III, IV, V, VI o VII.

Se ha encontrado ahora sorprendentemente que uno o más compuestos representados por las estructuras de

60 fórmula I, II, III, IV, V, VI o VII son eficaces contra el cáncer de colon. Por tanto, en una realización, la invención proporciona compuestos para el tratamiento, la prevención y el control del cáncer de colon en un ser humano así como aplicaciones veterinarias. En una realización, el tratamiento comprende administrar a un sujeto uno o más compuestos representados por las estructuras de fórmula I, II, III, IV, V, VI o VII. En otra realización, el tratamiento comprende administrar a un sujeto una composición farmacéutica que comprende uno o más compuestos

65 representados por las estructuras de fórmula I, II, III, IV, V, VI o VII.

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Un experto en la técnica conoce bien métodos de administración. Los métodos de administración incluyen por vía parenteral, por vía transdérmica, por vía intramuscular, por vía intravenosa, por vía intradérmica, por vía intranasal, por vía subcutánea, por vía intraperitoneal o por vía intraventricular o por vía rectal. Los expertos en la técnica conocen métodos y medios de administración, por ejemplo, patentes estadounidenses n.os 5.693.622; 5.589.466;

5 5.580.859; y 5.566.064.

Además, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende como principio activo uno o más compuestos de la invención, junto con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. Tal como se usa en el presente documento, “composición farmacéutica” puede significar una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o

10 más compuestos de la invención junto con excipientes y/o portadores adecuados útiles para el tratamiento del cáncer de colon.

Una “cantidad terapéuticamente eficaz” tal como se usa en el presente documento se refiere a la cantidad que proporciona un efecto terapéutico para un estado y régimen de administración dados. Tales composiciones pueden

15 administrarse mediante uno cualquiera de los métodos enumerados anteriormente en el presente documento.

Un aspecto adicional comprende un compuesto en combinación con otros compuestos de la invención. Un compuesto también puede administrarse en combinación con un agente antiinflamatorio, un inmunosupresor, un agente antiviral, o similar. Además, los compuestos pueden administrarse en combinación con un agente

20 quimioterápico tal como un agente alquilante, antimetabolito, inhibidor mitótico o antibiótico citotóxico, tal como se describió anteriormente. En general, serán adecuadas las formas de dosificación disponibles actualmente de los agentes terapéuticos conocidos para su uso en tales combinaciones.

“Terapia de combinación” (o “coterapia”) incluye la administración de un compuesto y al menos un segundo agente

25 como parte de un régimen de tratamiento específico previsto para proporcionar el efecto beneficioso a partir de la acción conjunta de estos agentes terapéuticos. El efecto beneficioso de la combinación incluye la acción conjunta farmacocinética o farmacodinámica resultante de la combinación de agentes terapéuticos. La administración de estos agentes terapéuticos en combinación normalmente se lleva a cabo a lo largo de un periodo de tiempo definido (habitualmente minutos, horas, días o semanas dependiendo de la combinación seleccionada). “Terapia de

30 combinación” puede pretender abarcar, pero generalmente no, la administración de dos o más de estos agentes terapéuticos como parte de regímenes de monoterapia separados que casual y arbitrariamente dan como resultado las combinaciones de la invención.

“Terapia de combinación” pretende abarcar la administración de estos agentes terapéuticos de una manera

35 secuencial, es decir, en la que cada agente terapéutico se administra en un momento diferente, así como la administración de estos agentes terapéuticos, o al menos dos de los agentes terapéuticos, de una manera sustancialmente simultánea. Puede lograrse una administración sustancialmente simultánea, por ejemplo, administrando al sujeto una única cápsula que tiene una razón fija de cada agente terapéutico o en múltiples cápsulas individuales, cápsulas individuales para cada uno de los agentes terapéuticos.

40 La administración secuencial o sustancialmente simultánea de cada agente terapéutico puede efectuarse mediante cualquier vía adecuada incluyendo vías orales, vías intravenosas, vías intramusculares y absorción directa a través de tejidos de membranas mucosas. Los agentes terapéuticos pueden administrarse mediante la misma vía o mediante vías diferentes. Por ejemplo, un primer agente terapéutico de la combinación seleccionada puede

45 administrarse mediante inyección intravenosa mientras que los otros agentes terapéuticos de la combinación pueden administrarse por vía oral. Alternativamente, por ejemplo, todos los agentes terapéuticos pueden administrarse por vía oral o todos los agentes terapéuticos pueden administrarse mediante inyección intravenosa. La secuencia en la que los agentes terapéuticos se administran no es crítica en sentido estricto.

50 “Terapia de combinación” también puede abarcar la administración de los agentes terapéuticos tal como se describió anteriormente en combinación adicional con otros principios biológicamente activos y terapias no farmacológicas (por ejemplo, cirugía o tratamiento por radiación). Cuando la terapia de combinación comprende además un tratamiento no farmacológico, el tratamiento no farmacológico puede realizarse en cualquier momento adecuado siempre que se logre el efecto beneficioso de la acción conjunta de la combinación de los agentes terapéuticos y el

55 tratamiento no farmacológico. Por ejemplo, en casos apropiados, el efecto beneficioso se logra todavía cuando se retira temporalmente el tratamiento no farmacológico de la administración de los agentes terapéuticos, quizá en días

o incluso semanas.

Los compuestos y el otro agente farmacológicamente activo pueden administrarse a un paciente de manera

60 simultánea, secuencial o en combinación. Se apreciará que cuando se usa una combinación, el compuesto y el otro agente farmacológicamente activo pueden estar en el mismo portador farmacéuticamente aceptable y por tanto administrarse simultáneamente. Pueden estar en portadores farmacéuticos separados tales como formas de dosificación orales convencionales que se toman simultáneamente. El término “combinación” se refiere además al caso en el que los compuestos se proporcionan en formas de dosificación separadas y se administran

65 secuencialmente.

imagen13

Los compuestos pueden administrarse opcionalmente en una terapia de combinación con otros inhibidores de tirosina cinasa, por ejemplo, para el tratamiento del cáncer, incluyendo trastuzumab (HERCEPTIN), gefitinib (IRESSA), erlotinib (TARCEVA) y lapatinib. El inhibidor de tirosina cinasa puede ser activo sobre Syk o no.

5 Las composiciones y terapias de combinación pueden administrarse en combinación con una variedad de excipientes farmacéuticos, incluyendo agentes estabilizantes, portadores y/o formulaciones de encapsulación tal como se describe en el presente documento.

En una realización, las composiciones se formulan como formas de dosificación orales o parenterales, tales como comprimidos no recubiertos, comprimidos recubiertos, píldoras, cápsulas, polvos, granulados, dispersiones o suspensiones. En otra realización, las composiciones se formulan para administración intravenosa. En otra realización, los compuestos de la invención se formulan en forma de pomada, crema o gel para administración transdérmica. En otra realización, los compuestos se formulan como un aerosol o pulverización para aplicación nasal. En otra realización, las composiciones se formulan en forma de dosificación líquida. Los ejemplos de formas

15 de dosificación líquidas adecuadas incluyen disoluciones o suspensiones en agua, grasas y aceites farmacéuticamente aceptables, alcoholes u otros disolventes orgánicos, incluyendo ésteres, emulsiones, jarabes o elixires, disoluciones y/o suspensiones.

Excipientes y portadores adecuados pueden ser sólidos o líquidos y el tipo se elige generalmente basándose en el tipo de administración que esté usándose. También pueden usarse liposomas para administrar la composición. Los ejemplos de portadores sólidos adecuados incluyen lactosa, sacarosa, gelatina y agar. Las formas de dosificación orales pueden contener aglutinantes, lubricantes, diluyentes, agentes disgregantes, agentes colorantes, agentes aromatizantes, agentes de inducción de flujo y agentes de fusión adecuados. Las formas de dosificación líquidas pueden contener, por ejemplo, disolventes, conservantes, agentes emulsionantes, agentes de suspensión,

25 diluyentes, edulcorantes, espesantes y agentes de fusión adecuados. Las formas parenterales e intravenosas deben incluir también minerales y otros materiales para hacerlas compatibles con el tipo de inyección o sistema de administración elegido.

A continuación se facilita una descripción a modo de ejemplo sólo con referencia a los dibujos adjuntos de realizaciones de la presente invención.

En los dibujos:

La figura 1 ilustra el efecto inhibidor del tratamiento de CMSP activadas con PHA con concentraciones variables de 35 un compuesto de la invención, AV 61S en un portador de DMSO.

La figura 2 ilustra el efecto inhibidor del tratamiento de CMSP activadas con PHA con concentraciones variables de un compuesto de la invención, AV 61S en un portador de PBS;

la figura 3 ilustra la falta de efecto que tiene AV 61S sobre la supervivencia de células Jurkat E6.1 tras un periodo de siete días;

la figura 4 ilustra el efecto de AV 61 S y AV 74S sobre la supervivencia de células Jurkat tras un periodo de siete días;

45 la figura 5 ilustra el efecto del tratamiento de CMSP activadas con PHA con concentraciones variables de un compuesto de la invención, AV 61S

la figura 6 ilustra el efecto del tratamiento de CMSP activadas con PHA con concentraciones variables de AV 61S;

la figura 7 ilustra el efecto del tratamiento de CMSP activadas con PHA con concentraciones variables de un compuesto de la invención, AV 74S;

la figura 8 ilustra el efecto del tratamiento de CMSP activadas con PHA con concentraciones variables de AV 74S;

55 la figura 9 ilustra una curva de dosis-respuesta para el compuesto AV 61S sobre CMSP activadas;

la figura 10 ilustra una curva de dosis-respuesta para el compuesto AV 74S sobre CMSP activadas;

la figura 11 ilustra el efecto comparativo del tratamiento con AV 61 S y AV 74S sobre células T y B en comparación con sus formas R;

la figura 12 ilustra el efecto del tratamiento con AV 74S sobre monocitos;

65 la figura 13 ilustra la falta de efecto inhibidor de PPG sobre células Jurkat tras dos días (está presente posiblemente una cantidad de PPG sin reaccionar tras la síntesis del compuesto);

imagen14

la figura 14 ilustra la falta de efecto inhibidor de PPG sobre células Jurkat tras cuatro días;

la figura 15 ilustra, en comparación con CMSP tratadas con ciclosporina, la viabilidad de CMSP tratadas con diferentes concentraciones de AV 61S o AV 74S tras 24 horas;

5 la figura 16 ilustra, en comparación con CMSP tratadas con ciclosporina, la viabilidad de CMSP tratadas con diferentes concentraciones de AV 61S o AV 74S tras 48 horas;

la figura 17 ilustra, en comparación con CMSP tratadas con ciclosporina, la viabilidad de CMSP tratadas con 10 diferentes concentraciones de AV 61 S o AV 74S tras 72 horas, y de dosificaciones combinadas de AV 61S y AV 74S a diferentes concentraciones;

la figura 18 ilustra, en comparación con células Jurkat tratadas con ciclosporina, la viabilidad de células Jurkat E6.1 tratadas con diferentes concentraciones de AV 61S o AV 74S tras 24 horas; y

15 la figura 19 ilustra, en comparación con células Jurkat tratadas con ciclosporina, la viabilidad de células Jurkat E6.1 tratadas con diferentes concentraciones de AV 61S o AV 74S tras 48 horas.

Las figuras 20A-I ilustran las curvas de dosis-respuesta para AV 74S cuando se somete a prueba frente a nueve 20 paneles diferentes de líneas celulares.

La figura 21 muestra las curvas de dosis-respuesta para AV 74S para todas las líneas celulares de las figuras 20A-I.

DESCRIPCIÓN 1: Síntesis de compuestos de polialquilenglicol

25 Se sintetizaron generalmente compuestos de polialquilenglicol mediante la preparación del compuesto de alcohol apropiado (por ejemplo, uno de los compuestos descritos en el ejemplo 1, o un derivado hidroxilado del mismo) y luego la conjugación del alcohol con un polímero de polialquilenglicol (PAG) (por ejemplo, polietilenglicol (PEG) o polipropilenglicol (PPG)) de la longitud deseada.

30 Compuesto 1, fenilalaninol

Se añadieron 1,2 g de LiAlH4 32 mM a 2,3 g de éster etílico de fenilalanina HCl 10 mM en 50 ml de éter seco. Tras agitar durante 2 horas a temperatura ambiente, se añadieron agua y KOH y se extrajo el producto de reacción con 35 acetato de etilo. Tras la evaporación, se obtuvieron 0,8 g del compuesto 1, un aceite de color amarillo claro.

imagen15

Peso molecular: 151,21 40 1

El compuesto 1 cristalizó en reposo. Pf-70. RMN CDCl3 7,30 (5H, m), 3,64 (1H, dd, J=10,5, 3,8 Hz) 3,40 (1H, dd, J=10,5, 7,2 Hz) 3,12 (1H, m), 2,81 (1H, dd, J=13,2, 5,2 Hz), 2,52 (1H, dd, J=13,2, 8,6 Hz). RMN acetona d6 7,30 (5H, 45 m), 3,76 (1H, dt) 3,60 (1H, m) 3,30 (1H, t), 2,85 (2H, m). Helv. Chim. Acta, 31, 1617(1948). Biels. -E3, vol. 13, pág. 1757.

Compuesto 2, tirosinol

imagen16

50 Peso molecular: 167,21 A 3 g de éster etílico de L-tirosina HCl 12 mM en 50 ml de éter seco se le añadieron 1,2 g de LiAlH4 32 mM. Tras 55 agitar 3 horas a temperatura ambiente, se añadieron agua y KOH y se extrajo la reacción con acetato de etilo. La

imagen17

evaporación dio 1,1 g de un aceite de color amarillo claro, rendimiento del 54%, que cristalizó en reposo. Pf-85.

RMN CDCl3 7,20 (4H, AB q, J=8,6 Hz), 3,50 (2H, m) 3,20 (1H, m), 2,81 (2H, m). RMN de base libre de éster etílico de tirosina CDCl3 7,0, 6,56 (4H, AB q, J=8,8 Hz), 4,20 (2H, q, J=7,0 Hz), 3,70, 3,0, 2,80 (3H, línea 12 ABXm), 1,28 (3H, t, J=7,0 Hz). JACS 71 305(1949). Biels. -E3, vol. 13, pág. 2263.

Compuesto 3, triptofanol

imagen18

10 Peso molecular: 190,24

A 3 g de éster metílico de L-triptófano HCl 12,9 mM en 50 ml de éter seco se le añadieron 1,2 g de LiAlH4 32 mM. Tras agitar 6 horas a temperatura ambiente se añadieron agua y KOH y se extrajo la reacción con acetato de etilo. La evaporación dio 1,23 g de aceite de color amarillo claro, rendimiento del 50%. Cristalizó en reposo. Pf-65.

15 RMN CDCl3 7,30 (5H, m), 3,64 (1H, dd, J=10,5, 3,8 Hz) 3,40 (1H, dd, J=10,5, 7,2 Hz) 3,12 (1H, m), 2,81 (1H, dd, J=13,2, 5,2 Hz), 2,52 (1H, dd, J=13,2, 8,6 Hz) J. Het. Chem, 13, 777 (1976). Biels. -E5, 22, vol. 12, pág. 90.

Compuesto 4, AV 22

20 Se pusieron a reflujo durante 2 horas 0,66 g de ácido 4-hidroxihidrocinámico y 4 ml de cloruro de tionilo en 30 ml de ciclohexano. Tras la evaporación, se obtuvo un sólido de color blanco, al que se añadieron 0,65 g de aceite del compuesto 1 (4,3 mM) en 30 ml de diclorometano y 0,4 ml de trietilamina. Tas agitar durante 2 horas a temperatura ambiente, se añadieron agua y KOH con el fin de neutralizar el pH. Se extrajo el producto de reacción con

25 diclorometano. La evaporación dio 0,8 g del compuesto 4, aceite viscoso de color amarillo claro. Se trituró parte de este producto y se recristalizó con etanol para dar un sólido blanco. Pf-149.

RMN CDCl3 7,30-6,9 (9H, m), 3,50 (2H, m) 3,30 (2H, t, J=7,2 Hz) 2,90 (3H, m), 2,60 (2H, t, J=7,2 Hz).

imagen19

Peso molecular: 299,36

Compuesto 5, AV 57

35

imagen20

Peso molecular: 283,36

imagen21

Se pusieron a reflujo durante 2 horas 0,75 g de ácido hidrocinámico 5 mM y 4 ml de cloruro de tionilo en 30 ml de ciclohexano. La evaporación dio un sólido blanco al que se añadieron 0,83 g de fenilalaninol 5,5 mM en 30 ml de diclorometano y 0,5 ml de trietilamina. Tras agitar 3 horas a temperatura ambiente, se añadieron agua y KOH a pH neutro y se extrajo la reacción con diclorometano. La evaporación dio 0,57 g de un aceite viscoso amarillo,

5 rendimiento del 40%.

RMN CDCl3 7,40-7,10 (10H, m), 3,60 (2H, m) 3,35 (2H, t, J=7,2 Hz) 2,95 (3H, m), 2,50 (2H, t, J=7,2 Hz).

Compuesto 6, AV 58 10

imagen22

Peso molecular: 315,36

15 Se pusieron a reflujo durante 3 horas 0,66 g de ácido 4-hidroxihidrocinámico 4 mM y 4 ml de cloruro de tionilo en 30 ml de ciclohexano. La evaporación dio un sólido de color amarillo claro al que se añadieron 0,72 g de tirosinol 4,3 mM en 30 ml de diclorometano y 0,5 ml de trietilamina. Tras agitar 3 horas a temperatura ambiente, se añadieron agua y KOH a pH neutro y se extrajo la reacción con diclorometano. La evaporación dio 0,53 g de un aceite viscoso de color amarillo claro, rendimiento del 42%.

20 RMN CDCl3 7,30, 7,20 (8H, 2 ABq, J=8,6 Hz), 3,40 (2H, m) 3,30 (2H, t, J=7,2 Hz) 2,90 (3H, m), 2,60 (2H, t, J=7,2 Hz).

Compuesto 8, AV 72

25

imagen23

Peso molecular: 299,36

30 Se pusieron a reflujo 0,45 g de ácido hidrocinámico 3 mM y 3 ml de cloruro de tionilo en 30 ml de ciclohexano durante 2 horas. La evaporación dio un sólido de color amarillo claro al que se añadieron 0,58 g de tirosinol 3,5 mM en 30 ml diclorometano y 0,4 ml de trietilamina. Tras agitar durante 2,5 horas a temperatura ambiente, se añadieron agua y KOH para obtener pH neutro y se extrajo la reacción con diclorometano. La evaporación dio 0,57 g de un aceite viscoso de color amarillo claro, rendimiento del 63%.

35 RMN CDCl3 7,40-7,10 (9H, m), 3,60 (2H, m) 3,35 (2H, t, J=7,2 Hz) 2,95 (3H, m), 2,50 (2H, t, J=7,2 Hz).

Compuesto 10

40 Se añadieron 0,3 g del compuesto 4 (AV 22), 0,8 g de trifenilfosfina y 0,55 g diazocarboxilato de etilo a 1 g de poli(propilenglicol), (peso molecular promedio de aproximadamente 1000), en 60 ml de diclorometano. La agitación durante 2 horas a temperatura ambiente, la evaporación y la cromatografía dieron 0,65 g del compuesto 10 como un aceite viscoso.

imagen24

imagen25

Compuestos sintetizados a partir de fenilalaninol Estos compuestos incluyen los representados por la estructura de fórmula (VIII):

imagen26

10 Este compuesto también puede representarse como la fórmula A, en la que R es un polímero de polipropilenglicol y n es el número total de monómeros de polipropileno en el polímero:

imagen27

Fórmula A

15

AV 61S:

R = PPG (polipropilenglicol) n = 7 PM-706

20 Se añadieron 0,3 g de AV 22 (1 mM), 0,8 g de trifenilfosfina 3 mM y 0,55 g de diazocarboxilato de etilo 3,2 mM a 1 g de poli(propilenglicol) (peso molecular promedio 424, N=7) en 60 ml de diclorometano. Tras agitar durante 4 horas a temperatura ambiente, la evaporación y la cromatografía dieron 0,55 g de un aceite viscoso, un rendimiento del 73%. RMN CDCl3 7,30-6,9 (9H, m), 4,1-3,0 (m), 2,60 (2H, t, J=7,2 Hz), 1,2-1,1 (m). Se pusieron 0,1 g de este producto 0,33 mmol, carbonato de potasio (0,069 g, 0,5 mmol, finamente triturado) y THF (3 ml, secado sobre gránulos de

25 KOH) en un matraz de fondo redondo equipado con un agitador magnético y un tubo de secado de CaCl2. En enfrió la mezcla sobre un baño de hielo-sal (-10ºC) y se introdujo una disolución enfriada previamente de dicarbonato de di-terc-butilo (0,066 g, 0,30 mmoles) en 2 ml de THF (seco) gota a gota. Se permitió que la mezcla se agitara a la temperatura del hielo durante 1 hora y luego durante 2 días a temperatura ambiente. Entonces se evaporó la mezcla de reacción, se introdujo agua (5 ml) y se extrajo el producto con dos porciones de 10 ml de acetato de etilo. Se

30 secaron los extractos combinados sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtraron con papel y se eliminó el disolvente. Se trituró el residuo oleoso con una pequeña cantidad de n-hexano y se recuperó el sólido formado mediante filtración a vacío (rendimiento 0,12 g, 90,1%). Alternativamente, el residuo oleoso puede disolverse en una

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mezcla 1:1 de acetato de etilo y hexano y puede recristalizarse el producto. AV 62 5 R=PPGn=12PM-996 Se preparó igual que anteriormente a partir de 0,2 g de AV 22 para dar 0,3 g, rendimiento del 46%.

AV 60S

10 R = PPG n = 17 PM-1286

Se preparó usando el mismo procedimiento que para AV 61S, anteriormente, con la sustitución de PPG 7 por PPG

17.

15 Compuestos sintetizados a partir del compuesto 5, AV 57

imagen29

Fórmula B

20

AV 86

R = PPG n = 7 PM-690 25 Se preparó igual que anteriormente a partir de 0,22 g de AV 57 para dar 0,25 g, rendimiento del 47%.

AV 87

R = PPG n = 17 PM-1270

30

Se preparó igual que anteriormente a partir de 0,2 g de AV 57 para dar 0,33 g, rendimiento del 33%.

Compuestos sintetizados a partir de tirosinol

35 Compuestos sintetizados a partir del compuesto 6, AV 58

imagen30

Fórmula D 40 AV 64 R = PPG n = 7 PM-722

Se preparó igual que anteriormente a partir de 0,2 g de AV 58 para dar 0,21 g, rendimiento del 46%.

45

imagen31

Compuestos sintetizados a partir del compuesto 8, AV 72

imagen32

10 Fórmula E

AV 74S

R = PPG n = 7 PM-706 15

a. Mesilación de PPG.

Se hicieron reaccionar 106 mg de PPG425 (0,25 mmol) con el 90 por ciento en moles de cloruro de mesilo (26 mg, 2 gotas) y 0,4 mmol de piridina (31,6 mg, 2 gotas) para proporcionar el PPG monomesilado (A). Tras combinar PPG,

20 cloruro de mesilo y piridina, se llevó a cabo la reacción de mesilación a 0ºC durante 30 minutos con agitación, y luego se continuó la reacción durante otros 60 minutos a temperatura ambiente. Durante el mezclado, la mezcla de reacción se volvió de incolora a color blanco lechoso. Entonces se disolvió la mezcla en 5 ml de cloruro de metileno y se lavó dos veces la fase orgánica con disolución de HCl 1 M, luego dos veces con disolución de NaOH 1 M y una vez con agua. Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se eliminó el disolvente.

25

b. Activación con sodio.

Se disolvieron 0,1 g del producto anterior (0,25 mmol) en 5 ml de etanol absoluto y luego se hicieron reaccionar con una cantidad equimolar de etóxido de sodio en etanol absoluto (preparado previamente haciendo reaccionar

30 0,25 mg-átomo de sodio con un exceso de etanol absoluto). Se evaporó el etanol de las disoluciones combinadas hasta sequedad total para producir la sal de sodio (B).

a. Reacción de A y B

35 Se disolvió A en 5 ml de acetonitrilo secado con hidróxido de potasio y se introdujo la disolución en un matraz de fondo redondo que contenía un agitador magnético. Se introdujeron 5 ml de la disolución de acetonitrilo secada de B en el matraz, seguido por una cantidad catalítica (algunos cristales) de yoduro de potasio. Se conectaron un condensador de reflujo y un burbujeador de gas ajustados en su parte superior al recipiente de reacción y se permitió que la mezcla de reacción se pusiera a reflujo bajo atmósfera de nitrógeno, con agitación, durante 24 h.

40 Entonces se filtró con papel la mezcla de reacción y se eliminó el disolvente. Se disolvió el residuo en 2 ml de acetato de etilo y entonces se hizo pasar a través de una columna de gel de sílice, usando acetato de etilo para la elución. La CCF (elución con acetato de etilo), punto de absorción UV a Rf = 0,55, dio como resultado que contenía el producto 3 deseado (una mezcla de moléculas que contenían diferentes longitudes de subunidad de PPG), sin embargo, también contenía algo de PPG sin reaccionar. Otras fracciones contenían PPG mesilado sin reaccionar y

45 PPG doblemente mesilado.

AV 78S

R = PPG n = 17 PM-1000

50 Se preparó usando el mismo procedimiento que para AV 74S, anteriormente, con la sustitución de PPG 7 por PPG

17.

Ejemplo 1

imagen33

Los siguientes experimentos se realizaron para demostrar la utilidad de los compuestos de la invención en el tratamiento del cáncer de colon.

Las proteínas tirosina cinasa proporcionan un mecanismo interruptor central en las rutas de transducción de señales

5 celulares, estando implicadas como tales en muchos procesos celulares tales como proliferación, metabolismo, supervivencia y apoptosis. Se sabe que varias PTK están activadas en células cancerosas e impulsan el crecimiento tumoral y la progresión de la enfermedad. El bloqueo de la actividad tirosina cinasa representa por tanto un enfoque racional para la terapia contra el cáncer.

10 Se encontró inicialmente que la tirosina cinasa de bazo se expresaba sólo en células hematopoyéticas como células mieloides, macrófagos, eritrocitos, plaquetas y células B, pero ahora se ha encontrado que se expresan en células no hematopoyéticas y que median en la señalización de diversas citocinas. Como tal, Syk es esencial para el desarrollo y la función del sistema inmunitario y para el mantenimiento de la integridad vascular. Recientemente se ha demostrado que Syk desempeña un papel importante en la tumorigenicidad de diversos tumores tales como los

15 cánceres de mama, de colon, de pulmón de células no pequeñas, así como tumores malignos hematológicos tales como LMC, LMA y linfoma de células B.

La figura 4 muestra que las células Jurkat que contienen Syk se destruyen (casi en el 100%) por AV 74S a una concentración de tan solo 10 µg/ml; por 61S a 50 µg/ml; 74R tiene un efecto de destrucción (de aproximadamente el

20 85%) a una concentración de 100 µg/ml y un efecto menor a 50 µg/ml; AV 61R tiene un efecto de destrucción a ∼ el 70% con ambas concentraciones de 100 µg/ml y 50 µg/ml. La línea jurkat E6.1 es una línea deficiente en Syk; de hecho, AV 61 S tras 7 días no tiene efecto sobre esta línea celular (es decir, no se produce ni apoptosis ni inhibición, véase la figura 3). Además, estas células son viables, tal como puede observarse a partir de las figuras 18 y 19, y ninguno de los compuestos (AV 61 S y AV 74S) las destruyen. Se ha realizado el estudio de viabilidad tras 24 y 48

25 horas de incubación, cada vez para 3 evaluaciones; en el plazo de 1, 3 y 6 horas. La figura 18 muestra los resultados tras 24 h de incubación en el plazo de 6 horas, la figura 19 muestra los resultados tras 48 h y en el plazo de 1 hora tras la incubación. Estos experimentos demuestran que cuando Syk está presente en una célula transformada (por ejemplo, una célula Jurkat de leucemia de células T), los compuestos AV destruyen la célula. Los compuestos AV no tienen efecto de destrucción sobre células normales (como son las CMSP, tomadas siempre de

30 diferentes donantes; los diferentes bioensayos de proliferación de linfocitos se han realizado al menos cuatro (4) veces a partir de diferentes donantes), sino más bien una detención del ciclo celular (probablemente antes de la fase S, ya que la incorporación de timidina en el ciclo celular se produce en la fase S). Cuando en la célula transformada falta Syk, los compuestos AV no tienen efecto en absoluto, ni siquiera un efecto inhibidor.

35 Otros dos experimentos confirmaron esta observación. En primer lugar, se trataron células HL 60 (una línea celular de leucemia promielocítica humana) que contienen Syk, a la vez que células CCRF, una línea celular de leucemia de células T – que no contienen proteínas tirosina cinasa -se trataron con compuestos AV 60S y AV 78S de la invención a lo largo de un periodo de cuatro días. Los datos se muestran en la tabla 1, donde se observa que AV 60S y AV 78S inhiben las células HL-60, mientras que parecen no tener efecto sobre la línea celular CCRF.

40 En segundo lugar, puede compararse el efecto de los compuestos de la invención con el inhibidor natural de Syk, piceatanol. Tal como muestran los datos en la tabla 2, el piceatanol bloquea al menos parcialmente el efecto inhibidor de AV 74S cuando está presente en una concentración de 100 µg/ml, mientras que 74S bloquea el efecto apoptótico de piceatanol 50 µg/ml y 30 µM/ml.

45 Sin querer restringirse a lo siguiente, parece que los compuestos de la invención actúan (inhiben estados mediados por tirosina cinasa Syk) mediante el bloqueo del crecimiento celular (es decir, detención del ciclo celular) en lugar de mediante la destrucción de las células (apoptosis). Las figuras 15-19 ilustran experimentos realizados a este respecto, usando ciclosporina (CsA) como comparación. En comparación, y tal como se observa en las figuras 18 y

50 19, este efecto no se observa significativamente en células Jurkat.

La eficacia de los compuestos de la invención se demuestra particularmente con referencia a las figuras 5-8. La figura 5 muestra el efecto del tratamiento de CMSP activadas con PHA con concentraciones variables de un compuesto de la invención, AV 61S, mientras que la figura 6 muestra el efecto del tratamiento de CMSP activadas

55 con PHA con concentraciones variables de AV 61R. La figura 7 muestra el efecto del tratamiento de CMSP activadas con PHA con concentraciones variables de un compuesto de la invención, AV 74S, mientras que la figura 8 muestra el efecto del tratamiento de CMSP activadas con PHA con concentraciones variables de AV 74R. Tal como puede observarse en las figuras anteriores, la forma S de los respectivos compuestos (es decir, los compuestos de la invención) son inhibidores mucho mejores de las células CMSP que sus homólogos R.

60 Las figuras 1 y 2 muestran el efecto del diluyente sobre los compuestos de la invención. La figura 1 muestra el efecto inhibidor del tratamiento de CMSP activadas con PHA con concentraciones variables de un compuesto de la invención, AV 61S en un portador de DMSO, mientras que la figura 2 muestra un efecto inhibidor menor del mismo compuesto en un portador de PBS.

65 Las figuras 11 y 12 comparan el efecto de los compuestos de la invención -AV 61S y AV 74S – sobre células T y B CMSP humanas (figura 11) frente a monocitos CMSP humanos (figura 12). Las figuras demuestran que el efecto de los compuestos de la invención es más profundo en monocitos (que contienen Syk) en comparación con las células T y B. Las células T contienen ZAP-70, en lugar de Syk, pero los linfocitos B no contienen Syk. PPG 7 y PPG 17 (es

imagen34

5 decir, distintos de los compuestos AV de la invención) no parecen ser inhibidores. Como tal, se cree que el efecto observado sobre las células B y T se debe a la actividad sobre las células B, no sobre las células T.

Las concentraciones adecuadas para administración para obtener un efecto inhibidor oscilan entre aproximadamente 20 µg/ml y 100 µg/ml.

10 Por tanto, los compuestos de la invención pueden usarse para tratar tumores dependientes de tirosina cinasa (Syk) y otras enfermedades en las que está implicada Syk.

Tabla 1.

15

Efecto de AV 78S y AV 60S sobre la viabilidad de células HL-60 tras 4 días – método XTT (% del control)

HL 60 (1) %: HL 60 (2) % CCRF (1) % CCRF (2) %

60s (1 µg/ml): 88 86 100 98

60s (3 µg/ml): 94 69 89 100

60s (10 µg/ml): 71 65 94 96

60s (30 µg/ml): 40 36 92 80

60s (50 µg/ml): 43 31 83 79

78s (1 µg/ml): 95 75 94 97

78s (3 µg/ml): 88 68 80 94

78s (10 µg/ml): 66 88 69

78s (30 µg/ml): 41 24 75 79

78s (50 µg/ml): 4 4 53 23

PPG (1 µg/ml): 84 97 100

PPG (3 µg/ml): 100 71 92 83

PPG (10 µg/ml): 90 47 98 100

PPG (30 µg/ml): 80 52 96 100

PPG (50 µg/ml): 52 43 84 95

1. Se han sometido a prueba células HL-60 a una concentración de 3x105 en presencia y ausencia de las moléculas de AV durante 4 días. 2. La concentración de DMSO en el sistema fue del 0,1%. 3. Al final del periodo de incubación se determinó la viabilidad de las células mediante el método XTT y se leyó mediante un lector de ELISA

Tabla 2.

imagen35

imagen36

PPG 10 µg/ml: ND ND

PPG 30 µg/ml

PPG 50 µg/ml: 69% 5%

PPG 100 µg/ml: 70% 7%

Pic.: Piceatanol ND: No determinado

Ejemplo 2

Se sometió a prueba el compuesto AV 74S frente a nueve paneles diferentes de líneas celulares según el estudio de descubrimiento de fármacos anticancerígenos in vitro del NCI (véase el capítulo 3, “The NCI Human Tumor Cell Line (60-Cell) Screen: Concept, Implementation and Applications”, de Michael R. Boyd en la Parte I de “Anticancer Drug Development Guide: Preclinical Screening, Clinical Trials and Approval (2ª edición)”, editado por B. Teicher, Humana Press, Totowa, Nueva Jersey, 2004). Los nueve paneles consistieron en las siguientes líneas celulares respectivas:

Leucemia Cáncer de pulmón de células no Cáncer de colon pequeñas

CCRF-CEM EKVX COLO 205 HL-60(TB) HOP-62 HTC-2998 MOLT-4 HOP-92 HCT-16 RPMI-8226 NCI-H226 HCT-15 SR NCIH23 HT29

NCI-H322M KM12 NCI-H460 SW-620 NCI-H522

Cáncer del SNC Melanoma Cáncer de ovario

SF-268 LOX IMVI IGROV1 SS-295 MALME-3M OVCAR-3 SS-539 M14 OVCAR-4 SNB-19 SK-MEL-2 OVCAR-5 SNB-75 SK-MEL-28 OVCAR-8 U251 SK-MEL-5 SK-OV-3

UACC-257 UACC-62

Cáncer renal Cáncer de próstata Cáncer de mama

786-0 PC-3 MCF7 A498 DU-145 NCI/ADR-RES ACHN MDA-MB-231/ATCC CAKI-1 HS 578T RXF 393 MDA-MB-435 SN12C BT-549 TK-10 T-47D UO-31

Se inocularon las líneas de panel sobre una serie de placas de microtitulación de 96 pocillos convencionales el día 0 a aproximadamente 20.000 células/pocillo y luego se preincubaron en ausencia del compuesto durante 24 horas.

15 Entonces se añadió AV 74S en cinco diluciones de 10 veces, partiendo de una concentración en log10 de -4,0 (que corresponde a 70,6 µg/ml o 100 µmol/ml) y se incubó durante 48 horas adicionales. Tras esto, se fijaron las células in situ, se lavaron y se secaron. Se añadió sulforrodamina B (SRB), seguido por lavado y secado adicionales de la masa de células teñidas, adherentes. Se solubilizó el colorante unido y se midió espectrofotométricamente. Los resultados se muestran en la tabla 3 y se ilustran gráficamente en las figuras 20A-I de los dibujos adjuntos.

20

Tabla 3

Concentración en log 10

Tiempo: Densidades ópticas medias Porcentaje de crecimiento

Panel/Línea celular: Cero Cont. -8,0 -7,0 -6,0 -5,0 -4,0 -8,0 -7,0 -6,0 -5,0 -4,0 GI50 TGI LC50

Leucemia

CCRF-CEM: 0,141 0,738 0,771 0,794 0,797 0,796 I 0,437 106 109 110 110 50 9,83E-5 > 1,00E-4 > 1,00E-4

HL-60(TB): 0,468 1,443 1,616 1,690 1,643 1,822 0,814 118 125 120 139 35 7,23E-5 > 1,00E-4 > 1,00E-4

MOLT-4: 0,473 1,363 1,435 1,502 1,521 1,656 0,814 108 116 118 133 38 7,52E-5 > 1,00E-4 > 1,00E4

RPMI-8226: 0,404 1,301 1,292 1,393 1,414 1,399 0,719 99 110 113 111 35 6,35E-5 > 1,00E-4 > 1,00E-4

SR: 0,494 1,317 1,375 1,473 1,482 1,507 0,286 107 119 120 123 -42 2,77E-5 5,56E-5 > 1,00E-4

Cáncer de pulmón de células no pequeñas

EKVX: 0,474 1,656 1,745 1,775 1,742 1,744 1,157 108 110 107 107 58 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

HOP-62: 0,404 1,104 1,128 1,174 1,183 1,224 1,018 103 110 111 117 88 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

HOP-92: 0,752 1,198 1,230 1,213 1,179 1,145 0,946 107 103 96 88 43 7,14E-5 > 1,00E-4 > 1,00-4

NCI-H226: 0,619 1,178 1,194 1,213 1,161 1,157 1,014 103 106 97 96 71 E 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

NCI-H23: 0,511 1,458 1,489 1,560 1,550 1,568 1,069 103 111 110 112 59 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

NCI-H322M: 0,628 1,594 1,646 1,659 1,684 1,687 1,527 105 107 109 110 93 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

NCI-H460: 0,270 2,135 2,208 2,272 2,180 2,278 1,547 104 107 102 108 68 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

NCI-H522: 0,779 1,924 1,948 2,024 1,983 1,938 1,546 102 109 105 101 67 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

Cáncer de colon

COLO205: 0,239 1,175 1,146 1,225 1,237 1,136 0,483 97 105 107 96 26 4,54E-5 > 1,00E-4 > 1,00E-4

HCC-2998: 0,451 1,573 1,579 1,703 1,882 1,660 1,261 101 112 128 108 72 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

HCT-116: 0,195 1,715 1,730 1,763 1,703 1,827 0,855 101 103 99 107 43 7,89E-5 > 1,00E-4 > 1,00E-4

HCT-15: 0,523 2,507 2,470 2,514 2,555 2,619 1,877 98 100 102 106 68 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

HT29: 0,246 1,610 1,630 1,677 1,674 1,601 0,439 101 105 105 99 14 3,79E-5 > 1,00E-4 > 1,00E-4

KM12: 0,339 1,354 1,439 1,418 1,406 1,409 1,075 108 106 105 105 73 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

SW-620: 0,131 1,023 1,023 1,064 0,957 1,032 0,579 100 105 93 101 50 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

Cáncer del SNC

SF-268: 0,346 1,126 1,174 1,210 1,199 1,299 0,996 106 111 109 113 83 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

SF-295: 0,764 1,914 2,002 2,013 1,990 1,994 1,663 108 109 107 107 78 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

SF-539: 0,336 1,275 1,331 1,367 1,290 1,308 1,000 106 110 102 104 71 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

SNB-19: 0,318 1,258 1,307 1,348 1,325 1,338 1,088 105 110 107 109 82 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

SNB-75: 0,652 1,102 1,129 1,137 1,116 0,987 0,929 106 108 103 74 61 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

U251: 0,218 1,342 1,390 1,437 1,382 1,367 0,819 104 108 104 102 53 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

Melanoma

LOX IMVI: 0,248 1,656 1,830 1,772 1,757 1,705 1,007 112 108 107 103 54 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

MALME-3M: 0,499 0,992 1,022 1,021 1,018 1,024 0,922 106 106 105 106 86 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

M14: 0,434 1,668 1,744 1,727 1,724 1,800 1,434 106 105 105 111 81 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

SK-MEL-2: 0,337 0,878 0,847 0,924 0,850 0,868 0,755 94 109 95 98 77 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

SK-MEL-28: 0,394 1,397 1,428 1,397 1,409 1,431 1,228 103 100 101 103 83 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

SK-MEL-5: 0,246 2,136 2,202 2,235 2,191 2,168 0,843 104 105 103 102 32 5,46E-5 > 1,00E-4 > 1,00E-4

UACC-257: 0,777 1,991 2,075 2,071 2,092 2,056 1,631 107 107 108 105 70 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

UACC-62: 0,513 2,111 2,241 2,264 2,284 2,188 1,575 108 110 111 105 66 > 1,00E-4 > 1,00E4 > 1,00E-4

Cáncer de ovario

IGROV1: 0,183 0,895 1,019 0,949 0,917 0,869 0,623 117 108 103 96 62 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

OVCAR-3: 0,538 1,620 1,683 1,689 1,709 1,736 1,083 106 106 108 111 50 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

OVCAR-4: 0,443 1,219 1,288 1,301 1,297 1,293 0,796 109 111 110 110 45 8,49E-5 > 1,00E-4 > 1,00E-4

OVCAR-5: 0,346 0,82 u.903 0,935 0,942 0,952 0,845 102 108 109 111 91 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

OVCAR-8: 0,315 1,583 1,607 1,654 1,476 1,567 1,109 102 106 92 99 63 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

SK-OV-3: 0,442 1,004 1,029 1,100 1,052 1,055 1,005 104 117 109 109 100 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

Cáncer renal

786-0: 0,303 1,385 1,449 1,478 1,513 1,629 1,183 106 109 112 123 81 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

A498: 0,852 1,614 1,632 1,721 1,699 1,708 1,472 102 114 111 112 81 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

ACHN: 0,335 1,357 1,420 1,476 1,462 1,395 1,123 106 112 110 104 77 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

CAKI-1: 0,542 0,876 0,886 0,886 0,893 0,912 0,795 103 103 105 111 76 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

RXF 393: 0,835 1,579 1,639 1,678 1,591 1,588 1,309 108 113 102 101 64 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

SN12C: 0,506 1,268 1,239 1,252 1,209 1,266 1,017 96 98 92 100 67 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

TK-10: 0,484 1,124 1,213 1,245 1,240 1,265 1,107 114 119 118 122 97 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

UO-31: 0,482 1,687 1,685 1,818 1,716 1,645 1,151 100 111 102 96 56 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

Cáncer de próstata

PC-3: 0,306 1,262 1,283 1,298 1,249 1,177 0,879 102 104 99 91 60 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

DU-145: 0,134 0,771 0,757 0,751 0,721 0,749 0,632 98 97 92 97 78 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

Cáncer de mama

MCF7: 0,440 2,170 2,258 2,276 2,300 2,415 1,476 105 104 108 114 60 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

NCI/ADR-RES: 0,302 0,947 0,982 1,021 0,990 0,980 0,651 105 111 107 105 54 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

MDA-MB-231/ATCC: 0,513 1,458 1,452 1,509 1,340 1,436 1,296 99 105 88 98 83 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

HS 578T: 0,513 1,270 1,261 1,284 1,267 1,263 1,074 99 102 100 99 74 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

MDA-MB435: 0,871 2,632 2,657 2,661 2,673 2,688 2,330 108 108 108 109 88 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

BT-549: 0,606 1,391 1,423 1,468 1,406 1,445 1,108 104 110 102 107 64 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

T-47D: 0,632 1,678 1,782 1,795 1,763 1,702 1,171 110 111 108 102 51 > 1,00E-4 > 1,00E-4 > 1,00E-4

imagen37

En la figura 21 se muestran las curvas de dosis-respuesta para AV 74S frente a todas las líneas celulares. AV 74S mostró una GI50 en log10 de menos de -4,00 para once de las líneas celulares sometidas a prueba.

Claims

imagen1

REIVINDICACIONES

1. Compuesto para su uso en el tratamiento de un trastorno proliferativo celular en un sujeto, siendo dicho compuesto el enantiómero S de la fórmula I:

imagen2

en la que:

10 la línea de puntos representa un enlace sencillo o uno doble; R5 y R5’ son independientemente H u OH; X es -CH2O, -CH2CH2O, -CH(CH3)CH2O o -CH2CH(CH3)O; Z es -CH2CH2O, -CH(CH3)CH2O o -CH2CH(CH3)O; m es 1; y

15 n es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 o 50;

o una sal farmacéuticamente eficaz del mismo en el que el trastorno proliferativo celular es cáncer de colon.
2.

Compuesto para su uso según la reivindicación 1, en el que Z es -CH2CH2O. 20
3. Compuesto para su uso según la reivindicación 1, en el que uno de R5 y R5’ es -OH y el otro de R5 y R5’ es -H.
4.

Compuesto para su uso según la reivindicación 1, en el que tanto R5 como R5’ son -OH. 25
5.

Compuesto para su uso según la reivindicación 1, en el que X es -CH2O.
6.

Compuesto para su uso según la reivindicación 1, en el que Z es -CH(CH3)CH2O.

30 7. Compuesto para su uso según la reivindicación 1, en el que m es 1.
8. Compuesto para su uso según la reivindicación 1, en el que n es 1, 2 o 7.
9. Compuesto para su uso según la reivindicación 1, en el que el compuesto es el enantiómero S de la 35 siguiente fórmula (II) en la que R es PPG y n es 7

imagen3
10. Composición farmacéutica para su uso en el tratamiento de un trastorno proliferativo celular que comprende

40 un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-9 y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables, en el que el trastorno proliferativo celular comprende cáncer de colon.
11. Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 en la fabricación de un medicamento

para el tratamiento de un trastorno proliferativo celular que comprende cáncer de colon. 45

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