ES2528732T3 - Pirazoquinolinas de indolilo sustituido y su uso en el tratamiento del cáncer - Google Patents

Abstract

Un compuesto de la fórmula I, **Fórmula** donde: los enlaces ilustrados por representan la estereoquímica relativa; X e Y representan independientemente -O-, -N(Ra)- o bien uno de ellos puede representar alternativamente -N>=; Ra representa H o C1-6 alquilo opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor; R1 y R2 representan independientemente H, C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor), - C(O)C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor), -CH2-fenilo (cuya fracción de fenilo es opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes seleccionados entre halo y C1-3 alquilo), o, R1 y R2 pueden representar conjuntamente un grupo enlazador de C1-2 alquileno para formar, junto con los grupos X e Y, un anillo de cinco o seis miembros; R3 a R10 representan independientemente H, halo, -ORb, -N(Rc)Rd, C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor) o -CH2-fenilo (cuya fracción de fenilo es opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes seleccionados entre halo y C1-3 alquilo); o dos grupos cualesquiera adyacentes R6 a R9 pueden estar enlazados para formar otro anillo de entre 3 y 8 miembros que contiene opcionalmente entre uno y tres dobles enlaces, que contienen opcionalmente entre uno y cuatro heteroátomos, siendo opcionalmente el propio anillo sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados entre halo y C1-4 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor); Rb representa H, C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor) o -C(O)C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor); Rc y Rd representan independientemente H o C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor); R11 y R12 representan independientemente H, C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor), -C(O)C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor), fenilo (opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados entre halo y C1-3 alquilo) o -CH2-fenilo (cuya fracción de fenilo es opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes seleccionados entre halo y C1-3 alquilo); R13 y R14 representan independientemente H, C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor) o -CH2-fenilo (cuya fracción de fenilo es opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes seleccionados entre 30 halo y C1-3 alquilo).

Description

DESCRIPCIÓN

Pirazoquinolinas de indolilo sustituido y su uso en el tratamiento del cáncer.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a compuestos novedosos de uso farmacéutico, que pueden resultar útiles para el tratamiento del cáncer. La invención se refiere también a métodos sintéticos para la preparación de compuestos. 5

Antecedentes de la invención

El cáncer es un tipo de enfermedad que afecta a las personas en todo el mundo. Por lo general, las células de un tumor benigno mantienen sus características diferenciadas y no se dividen de manera completamente incontrolada. Habitualmente un tumor benigno está localizado y no presenta metástasis.

En un tumor maligno, las células se vuelven indiferenciadas, no responden a las señales de control del crecimiento 10 del organismo y se multiplican de manera incontrolada. Por lo general, los tumores malignos se dividen en dos categorías: primarios y secundarios. Los tumores primarios surgen directamente del tejido en el que se encuentran. Los tumores secundarios se pueden originar a raíz de los tumores primarios o en otra parte del organismo y son capaces de propagarse hasta lugares distantes (diseminándose) o presentar metástasis. Las vías de metástasis habituales son el crecimiento directo en estructuras adyacentes, propagarse a través del sistema vascular o linfático 15 o del torrente sanguíneo.

Las metástasis tumorales son la principal causa de mortalidad en los pacientes con cáncer. Existen evidencias claras que demuestran que la angiogénesis es clínicamente relevante para la progresión y la metástasis del cáncer. La angiogénesis consta de diversos pasos: la degradación de la membrana basal, la proliferación y migración de las células endoteliales, y la formación del túbulo capilar. Los nuevos vasos capilares aportan nutrientes y oxígeno a un 20 tumor en crecimiento y eliminan los catabolitos y el dióxido de carbono. Las enfermedades asociadas con una angiogénesis anómala requieren o inducen el crecimiento vascular. Por ejemplo, la angiogénesis corneal implica tres fases: un periodo de latencia prevascular, neovascularización activa, y maduración y regresión vascular. Todavía no se ha revelado la identidad y el mecanismo de los diversos factores angiogénicos, incluyendo elementos de la respuesta inflamatoria, tales como leucocitos, plaquetas, citoquinas y eicosanoides o componentes plasmáticos 25 no identificados.

Esta actividad también es necesaria para que se produzca la metástasis. Uno de los eventos tempranos importantes para el desarrollo del fenotipo metastásico es la inducción de genes implicados en la angiogénesis, tales como VEGF y otras proteínas liberadas por las células tumorales y que afectan a su microentorno. Las células cancerígenas producen el exceso de factores proangiogénicos, tales como el factor de crecimiento endotelial 30 vascular (VEGF), bFGF (factor de crecimiento fibroblástico básico). Hay siete miembros de la familia del VEGF, entre los que se incluyen VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, VEGF-F y factor de crecimiento placentario. VEGF actúa específicamente a través de los receptores de tirosina quinasa VEGFR-1, VEGFR-2 y VEGFR-3. La molécula clave es VEGF-A (también denominada más adelante 'VEGF'), que induce la angiogénesis mediante la promoción de la proliferación, brotadura, migración y formación de túbulos de células endoteliales. 35 VEGF-A es uno de los facilitadores más potentes de la angiogénesis en el cáncer. VEGF se une a VEGFR-1 y activa la señalización a través de las PI3K-Akt quinasas, produciendo así un incremento de la supervivencia y la migración. Por otra parte, induce la actividad de PLC mediante la activación de c-src seguida de la interacción con VEGFR-2. Se ha demostrado que la expresión de VEGF está asociada con la capacidad metastásica del cáncer. VEGF puede inducir la progresión de la enfermedad afectando directamente a los componentes del ciclo celular con el objeto de 40 acelerar la proliferación celular. La metástasis es un proceso muy complejo, que se produce a través de una serie de pasos secuenciales, incluyendo la invasión de tejido adyacente, intravasación, transporte a través del sistema circulatorio,bloqueo y crecimiento en un lugar secundario.

Los estudios clínicos demuestran claramente que las células tumorales pueden experimentar un periodo de latencia seguido de un crecimiento rápido durante la recidiva. Se desconoce en gran medida el proceso de direccionamiento 45 de las células cancerígenas hacia órganos concretos. En los carcinomas, el paso inicial de la diseminación metastásica incluye la separación de las células epiteliales de la matriz extracelular y la alteración del citoesqueleto de actina para conseguir una forma redonda. El movimiento de las células migratorias en microentornos tisulares requiere la remodelación proteolítica de las matrices extracelulares (ECM, por sus siglas en inglés). Los miembros de la familia de proteínas denominados metaloproteinasas de la matriz (MMP, por sus siglas en inglés) desempeñan 50 un papel importante en la remodelación de la ECM y la invasión de las células. Las MMP son endopeptidasas dependientes de zinc que desempeñan múltiples funciones en la biología de la ECM, tales como la liberación de fragmentos crípticos y neoepitopos de macromoléculas de la ECM, la liberación de factores de crecimiento y la modificación de la interfaz entre la célula y la ECM. La mayoría de las MMP son proteínas secretadas; sin embargo, seis de ellas son proteínas de membrana. La principal función de las MMP es la degradación de los componentes 55 estructurales de la ECM, así como la migración directa e indirecta de las células. La degradación de la matriz extracelular no solamente promueve la migración, sino que también libera los factores de crecimiento esenciales del almacenamiento de la matriz. Es interesante señalar que las MMP contribuyen a la remodelación de los vasos mediante la degradación del colágeno tipo I, la regulación de las células perivasculares y el procesamiento de VEGF. Los cambios de la arquitectura del tejido tras la liberación de MMP se deben al clivaje de cadherinas 60

epiteliales y desmogleínas. La expresión e interacción de MMP y TIMP parecen estar implicadas en la invasión y capacidad metastática de diversos cánceres.

Diversos tipos de cáncer diferentes afectan a la población de todo el mundo, como por ejemplo los que se describen más adelante. El cáncer de próstata (PCa, por sus siglas en inglés) es uno de los cánceres más prevalentes y una causa importante de mortalidad asociada con el cáncer en todo el mundo. La incidencia del cáncer de próstata ha 5 aumentado de forma significativa en todo el mundo (Jemal A, Siegel R, Ward E, et al., Cancer statistics, 2006. CA: a cancer journal for clinicians 56: 106-130, 2006; Yin M, Bastacky S, Chandran U, Becich MJ y Dhir R: Prevalence of incidental prostate cancer in the general population: a study of healthy organ donors; The Journal of urology 179: 892-895, discusión 895, 2008). A pesar de los recientes avances logrados en el ámbito del diagnóstico temprano y el tratamiento, el PCa sigue siendo el segundo cáncer más letal entre los varones del mundo occidental (Jemal et al., 10 ibid, Yin et al., ibid).

Inicialmente, la mayoría de los cánceres de próstata responden a la terapia de ablación androgénica, aunque la mayor parte de ellos finalmente progresarán hasta el estado andrógeno-refractario(Gronberg H: Prostate cancer epidemiology. Lancet 361: 859- 864, 2003). Una vez que el cáncer de próstata se muestra andrógeno-refractario, las células cancerígenas pueden tener rápidamente la capacidad de invadir y propagarse a los nódulos linfáticos y 15 órganos distantes (Kalluri R: Basement membranes: structure, assembly and role in tumour angiogenesis. Nature reviews 3: 422-433, 2003).

Las metástasis tumorales son la principal causa de mortalidad en los pacientes con cáncer. Aproximadamente un tercio de los pacientes tratados sufrirán una recidiva y actualmente no existe ningún tratamiento curativo para la enfermedad metastásica (Yin et a/., ibid; Gronberg H, ibid; Albertsen PC, Hanley JA y Fine J: 20-year outcomes 20 following conservative management of clinically localized prostate cancer. Jama 293: 2095-2101 , 2005; Society AC: Cancer Facts & Figures 2008. Atlanta, GA, American Cancer Society, 2008).No se dispone de datos que permitan entender suficientemente la progresión del cáncer hormono-dependiente al hormono-refractario ni al cáncer de próstata metastásico. Dada la importante prevalencia de la enfermedad, el envejecimiento de la población y la falta de un tratamiento efectivo para la metástasis del cáncer, hay una necesidad urgente de descubrir y desarrollar 25 planteamientosterapéuticos novedosos.

El PCa primario se trata con terapia hormonal, con el fin de contener la producción de andrógenos y bloquear las vías de proliferación mediadas por receptor de andrógenos (AR, por sus siglas en inglés) y de supervivencia. En el PCa avanzado, la terapia de privación de andrógenos (ADT, por sus siglas en inglés) es el principal tratamiento. La extirpación quirúrgica del tumor y el uso de agonistas hormonales o antagonistas del AR, como la flutamida, son los 30 principales tipos de ADT (DeMarzo AM, Nelson WG, Isaacs WB y Epstein Jl: Pathological and molecular aspects of prostate cancer. Lancet 361: 955-964, 2003).

El docetaxel dirigido al uso mitótico y al ciclo de proliferación de las células se está empleando en PCa en estadio avanzado. Sin embargo, la actividad de docetaxel en monoterapia es limitada. El tratamiento actual del cáncer metastásico avanzado se beneficia de los fármacos antiangiogénicos. Avastin™, un inhibidor de VEGF, aborda las 35 vías angiogénicas para el tratamiento del cáncer de próstata metastásico y ha sido testado en ensayos clínicos (Di Lorenzo G, Figg WD, Fossa SD, et al.: Combination of Bevacizumab and Docetaxel in Docetaxel-Pre-treated Hormone-Refractory Prostate Cancer: A Phase 2 Study. European Urology 54: 1089-1096, 2008). La tasa de respuesta mejoró de forma notable al utilizar Avastin™ en monoterapia o combinado con Docetaxel. Sin embargo, los efectos secundarios que provocan docetaxel y Avastin™ pueden ser graves, dado que las toxicidades de los 40 fármacos individuales se combinan causando múltiples efectos adversos, en particular mielosupresión e insuficiencia cardíaca (Friberg LE, Henningsson A, Maas H, Nguyen L y Karlsson MO: Model of chemotherapy-induced myelosuppression with parameter consistency across drugs. J Clin Oncol 20: 4713-4721, 2002). Por otra parte, el coste de estos fármacos es elevado.

En consecuencia, el desarrollo de tratamientos alternativos con los mínimos efectos adversos y un menor coste 45 aportarán grandes beneficios desde el punto de vista clínico y económico.

El fármaco efectivo candidato para el tratamiento del cáncer metastásico debería tener las propiedades necesarias para abordar múltiples vías de las células cancerígenas, incluyendo las vías de proliferación celular, las vías de la apoptosis y la señalización de la angiogénesis. También es importante una elevada biodisponibilidad para el tratamiento de las formas agresivas de cáncer. 50

La inclusión en la bibliografía o el debate de un documento aparentemente ya publicado en la presente memoria descriptiva no se deberá considerar necesariamente un reconocimiento de que el documento forma parte del estado actual de la técnica ni de que es de conocimiento público general.

El compuesto etopósido se ha utilizado en el tratamiento de diversos cánceres. Este compuesto contiene un núcleo tetracíclico, que comprende dioxolilo, tetrahidronaftilo y tetrahidrofuranilo fusionados en una serie. 55

El uso como medicamento de los compuestos heterocíclicos que contienen una subunidad de pirazinotetrahidro tetrahidroisoquinolina, o variantes de la misma, es conocido, como se describe en la solicitud de patente internacional WO 98/16526 y en el artículo del diario Crescendi, Orlando, 1997, Eur. J. Biochem., 247, 66-73. Sin embargo, ninguno de estos documentos se refiere a compuestos en los que esta subunidad está sustituida por un

grupo indolilo. US2002/035111 A1 divulga un método para inhibir la neoplasia, en particular las lesiones cancerosas y precancerosas, mediante la exposición de las células afectadas a pirido[3,4b] indoles.

WO 03/017939 A2 divulga compuestos de piperazinona, compuestos farmacéuticos que contienen estos compuestos y sus usos en el tratamiento de los tumores y el cáncer. 5

Asimismo, el siguiente compuesto: en el que el hidrógeno de la posición 9a se encuentra en la configuración S y el grupo 3- indolilo de la posición 5 se encuentra en la configuración R (es decir, el compuesto anterior es de una estereoquímica absoluta) ha sido aislado 10 de extractos botánicos en China. Este compuesto y/o los extractos de los que ha sido aislado pueden haber demostrado actividad biológica como medicamento. Sin embargo, no existe ninguna divulgación relativa a la potencial preparación sintética de estos compuestos y, además, no existe ninguna divulgación de este compuesto de una estereoquímica relativa y/o absoluta diferente para su uso como medicamento.

Divulgación de la invención 15

Según la invención, aquí se proporciona un compuesto de la fórmula I, I, donde: 20 los enlaces ilustrados por representan la estereoquímica relativa (es decir, el átomo de hidrógeno relevante y el grupo 3-indolilo son cis con respecto al otro);

X e Y representan independientemente -O-, -N(Ra)- o bien uno de ellos pueden representar alternativamente -N=;

Ra representa H o C1-6 alquilo opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor;

R1 y R2 representan independientemente H, C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor), -C(O)C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor), -CH2-fenilo (cuya fracción de fenilo es opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes seleccionados entre halo y C1-3 alquilo), o, R1 y R2 pueden representar conjuntamente un grupo enlazador de C1-2 alquileno (es decir, R1 y R2 pueden estar enlazados para formar, junto con los grupos X e Y a los que se encuentran necesariamente unidos, un anillo de 5 o 6 miembros en 5 el que hay un grupo C1-2 alquileno que une a los sustituyentes X e Y);

R3 a R10 representan independientemente H, halo, -ORb, -N(Rc)Rd, C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor) o -CH2-fenilo (cuya fracción de fenilo es opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes seleccionados entre halo y C1-3 alquilo); o

dos grupos cualesquiera adyacentes R6 a R9 (es decir, R6 y R7, R7 y R8 o R8 y R9) pueden estar enlazados para 10 formar otro anillo de entre 3 y 8 miembros (por ejemplo, de 5 o 6 miembros) que contiene opcionalmente entre uno y tres dobles enlaces, que contienen opcionalmente entre uno y cuatro (por ejemplo, uno o dos) heteroátomos, siendo opcionalmente el propio anillo sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados entre halo y C1-4 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor);

Rb representa H, C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor) o -C(O)C1-6 alquilo 15 (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor);

Rc y Rd representan independientemente H o C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor);

R11 y R12 representan independientemente H, C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor), -C(O)C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor), fenilo (opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados entre halo y C1-3 alquilo) o -CH2-fenilo (cuya fracción de fenilo es opcionalmente 20 sustituida por uno o más sustituyentes seleccionados entre halo y C1-3 alquilo);

R13 y R14 representan independientemente H, C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor) o -CH2-fenilo (cuya fracción de fenilo es opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes seleccionados entre halo y C1-3 alquilo),

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, 25

cuyos compuestos y sales se denominan, en adelante, "los compuestos de la invención".

En otra realización de la invención, se proporciona un compuesto de la invención como el anteriormente descrito, siempre que el compuesto no sea: 30 es decir, se proporciona de forma que cuando: X e Y representan-O-; R1 y R2 representan conjuntamente una fracción de -CH2- que une X e Y; R3 a R10, R12, R13 y R14 representan hidrógeno; R11 representa metilo; por tanto, cuando el hidrógeno de la posición 9a se encuentra en la configuración S, en grupo 3-indolilo no se encuentra en la configuración S,

cuyos compuestos y sales se denominan también en adelante "los compuestos de la invención". 35

Para evitar cualquier duda, y dado que ya se ha indicado que el grupo 3-indolilo y el átomo de hidrógeno relevante (unido mediante un enlace "en cuña") son cis entre sí, los siguientes compuestos de la fórmula IA e IB se incluyen dentro del ámbito de aplicación de los compuestos de la invención:

en los que los números enteros son los anteriormente definidos (y R5a es preferiblemente hidrógeno; de ahí su omisión), pero en los que los enlaces "en cuña" (unidos al grupo 3-indolilo y al átomo de hidrógeno relevante) representan enlaces de una configuración absoluta, representada por las letras "R" o "S" en negrita. Es decir, puede ser un compuesto de la fórmula IA en la que tanto el grupo 3-indolilo de la posición 5 como el átomo de hidrógeno 5 relevante de la posición 9a se encuentran en la configuración S, o bien un compuesto de la fórmula IB en la que estas fracciones (tanto el grupo 3-indolilo de la posición 5 como el átomo de hidrógeno relevante de la posición 9a) se encuentran en la configuración R. Asimismo, el compuesto de la invención puede ser una mezcla (por ejemplo, una mezcla racémica) de aquellos compuestos relevantes de la fórmula IA e IB (en la que los dos enlaces en cuña se encuentran ambos en la configuración R o ambos en la configuración S), es decir, mezclas de los dos 10 enantiómeros diferentes de los diastereoisómeros cis. Preferiblemente, se obtienen los enantiómeros individuales de compuestos de la invención, en los que, por ejemplo, el exceso enantiomérico (ee) es superior a 50:50, por ejemplo superior a 80:20, como superior a 90:10 (más preferiblemente, en estas situaciones el ee es superior o cercano al 99%; sin embargo, esto puede depender de la pureza óptica de los materiales de partida que se pueden emplear en la síntesis). Más preferiblemente, resultan recomendables los enantiómeros individuales de los compuestos de la 15 invención en los que la estereoquímica absoluta de los dos centros quirales relevantes se encuentran en la configuración S (véase el compuesto IA anterior).

En el presente se indica que los compuestos de la invención son aquellos en los que el grupo 3-indolilo de la posición 5 y el átomo de hidrógeno relevante de la posición 9a son relativamente cis. De este modo, queremos decir que el diastereoisómero cis se encuentra presente en un ratio de al menos 80:20 en comparación con el 20 diastereoisómero trans no deseado. Preferiblemente, se encuentra presente al menos en un ratio de 90:10, por ejemplo al menos o aproximadamente 95:5 y más preferiblemente al menos o aproximadamente 99:1 (por ejemplo, no existe prácticamente ningún diastereoisómero trans presente o existe una cantidad insignificante en el compuesto de la invención).

Entre las sales farmacéuticamente aceptables se incluyen las sales de adición de ácido y las sales de adición de 25 bases. Estas sales se pueden formar utilizando medios convencionales, por ejemplo por reacción de una forma de ácido libre o base libre de un compuesto de la fórmula I con uno o más equivalentes de un ácido o una base apropiados, opcionalmente en un solvente, o en un medio en el que la sal es insoluble, seguido de la retirada de dicho solvente, o dicho medio, empleando técnicas estándar (por ejemplo, en vacío, mediante secado por congelación o mediante filtración). Las sales también se pueden preparar intercambiando un contraión de un 30 compuesto de la invención en forma de sal con otro contraión, por ejemplo utilizando una resina intercambiadora de iones adecuada. Para que no quepa duda, los solvatos también se encuentran incluidos en el ámbito de aplicación de lainvención.

Los compuestos de la invención pueden contener dobles enlaces y pueden, por tanto, existir como isómeros geométricos E (entgegen o juntos) y Z (zusammen u opuestos) alrededor de cada doble enlace individual. Todos 35 estos isómeros y mezclas de los mismos se encuentran dentro del ámbito de aplicación de la presente invención.

Los compuestos de la invención también pueden presentar tautomerismo. Todas las formas tautoméricas y mezclas de las mismas se encuentran incluidas en el ámbito de aplicación de la invención.

Los compuestos de la invención también pueden contener uno o más átomos de carbono asimétricos y pueden, por tanto, presentar isomería óptica y/o diastereoisomería. Los diastereoisómeros pueden ser separados empleando 40 técnicas convencionales, tales como cromatografía o cristalización fraccionada. Los diversos estereoisómeros pueden ser aislados por separación de una mezcla racémica u otra mezcla de los compuestos, empleando técnicas convencionales, como la cristalización fraccionada o HPLC. Alternativamente, los isómeros ópticos deseados se pueden producir mediante reacción de los materiales de partida ópticamente activos adecuados en condiciones que

no provoquen racemización ni epimerización (es decir, un método que emplea el denominado "chiral pool"), por reacción del material de partida apropiado con un "auxiliar quiral" que puede eliminarse posteriormente en una fase adecuada, por derivatización (es decir, una resolución, incluyendo una resolución dinámica), por ejemplo con un ácido homoquiral seguido de la separación de los derivados diastereoméricos por medios convencionales, como la cromatografía, o por reacción con un reactivo quiral o un catalizador quiral adecuado, todo ello en condiciones 5 conocidas por el experto en la materia. Todos los estereoisómeros y mezclas de los mismos están incluidos en el ámbito de aplicación de la invención.

A menos que se especifique lo contrario, los grupos C1-q alquilo (en los que q es el límite superior del rango) definidos aquí pueden ser de cadena recta o, cuando existe un número suficiente (es decir, un mínimo de dos o tres, según corresponda) de átomos de carbono, pueden ser de cadena ramificada y/o cíclicos (formando así un grupo C3-10 q-cicloalquilo). Cuando existe un número suficiente (es decir, un mínimo de cuatro) de átomos de carbono, estos grupos también pueden ser cíclicos en parte. Estos grupos alquilo también pueden ser saturados o, cuando existe un número suficiente (es decir, un mínimo de dos) de átomos de carbono, insaturados (formando, por ejemplo, un grupo C2-q alquenilo o C2-q alquinilo). A menos que se especifique lo contrario, los grupos C1-2 alquileno, definidos en el presente, se refieren a -CH2- or -CH2-CH2-, es decir lineales (alquileno no ramificado). Sin embargo, el C1-2 15 alquileno también comprende C1-2 alquileno insaturado, es decir =C(H)- y -CH=CH-.

Para los fines del presente, el término "halo" incluye flúor, cloro, bromo y yodo.

Para que no quepa duda, para los fines del presente cuando se emplea un término como "R1 a R15" el experto en la materia entenderá que esto significa R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14 y R15 inclusive.

La presente invención también abarca compuestos etiquetados isotópicamente de la presente invención que son 20 idénticos a los enumerados aquí, salvo por el hecho de que uno o más átomos son sustituidos por un átomo que tiene una masa atómica o un número de masa diferente de la masa atómica o del número de masa que habitualmente se encuentra en la naturaleza (o que se encuentra más abundante en la naturaleza). Todos los isótopos de cualquier átomo o elemento concreto especificado en el presente se encuentran incluidos en el ámbito de aplicación de los compuestos de la invención. Por tanto, los compuestos de la invención también incluyen 25 compuestos deuterados, es decir en los que uno o más átomos de hidrógeno son sustituidos por el isótopo del hidrógeno deuterio.

Todas las características individuales (por ejemplo, las características preferibles) mencionadas en el presente pueden considerarse de forma aislada o combinada con cualquier otra característica (incluyendo las características preferibles) mencionada en el presente (por tanto, las características preferibles pueden considerarse conjuntamente 30 con otras características preferibles o independientemente de ellas).

El experto en la materia apreciará que los compuestos de la invención que son objeto de la presente invención incluyen aquellos que son estables. Es decir, que los compuestos de la invención incluyen aquellos que son suficientemente sólidos como para superar el aislamiento obtenido, por ejemplo, por una mezcla de reacción para alcanzar un grado de pureza útil. 35

Los compuestos de la invención que se pueden mencionar incluyen aquellos en los que cualesquiera dos grupos R6 a R9 adyacentes no se pueden unir, es decir que R6 a R9 representan independientemente H, halo, -ORb, -N(Rc)Rd, alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor) o -CH2-fenilo (cuya fracción de fenilo es opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes seleccionados entre halo y C1-3 alquilo).

Otros compuestos de la invención que pueden ser mencionados incluyen aquellos en los que, cuando cualesquiera 40 dos grupos R6 a R9 adyacentes (es decir, R6 y R7, R7 y R8 o R8 y R9) se unen para formar otro anillo, entonces ese anillo es preferiblemente un anillo carbocíclico de 5 o 6 miembros (p. ej.6 miembros), que contiene preferiblemente enlaces dobles (por ejemplo, uno o más, preferiblemente formando un anillo de benceno, fusionado con el grupo indolilo necesario del compuesto de la fórmula I); R5a representa hidrógeno.

Los compuestos preferibles de la invención que pueden ser mencionados incluyen aquellos en los que: 45 R5 y R5a representan independientemente hidrógeno;

R6 a R9 representan independientemente: hidrógeno; halo; -ORb; -N(Rc)Rd; C1-6alquilo no sustituido; -CH2-fenilo no sustituido; o

dos grupos R6 a R9 adyacentes (p. ej. R8 y R9) se unen para formar un anillo de 6 miembros (p. ej., un anillo de benceno); 50

cualesquiera dos o tres de R6 a R9 (p. ej., R6 y R8, y, p. ej., opcionalmente, R9) representan hidrógeno y los demás (p. ej., R7) representan hidrógeno o un sustituyente seleccionado entre halo (p. ej., cloro) y -ORb, o cualesquiera dos sustituyentes adyacentes (p. ej., R8 y R9) se unen para formar otro anillo de 6 miembros (p. ej., un anillo de benceno); R12 representa hidrógeno, C-1-4(p. ej., C1-2) alquilo (p. ej., metilo; cuyo grupo alquilo se encuentra preferiblemente no sustituido) o -CH2-fenilo. 55

Los compuestos preferibles de la invención que pueden ser mencionados incluyen aquellos en los que:

Ra representa H o C1-6alquilo no sustituido;

R1 y R2 representan independientemente: H; C1-6aloquilo no sustituido; -C(O)C1-6alquilo no sustituido; -CH2-fenilo no sustituido; o, R1 y R2 pueden representar conjuntamente un grupo enlazador de C1-2 alquileno;

R3 a R10 representan independientemente: -N(Rc)Rd; o preferiblemente H; halo; -ORb; C1-6 alquilo no sustituido; o -CH2-fenilo no sustituido (más preferiblemente, al menos cinco (por ejemplo, al menos seis) de R3 a R10 representan hidrógeno, es decir que solamente dos o preferiblemente uno de R3 a R10 representa un sustituyente distinto de 5 hidrógeno);

Rb representa -C(O)C1-6 alquilo no sustituido o, preferiblemente, H o C1-6 alquilo no sustituido;

RC y Rd representan independientemente H o C1-6 alquilo no sustituido;

R11 y R12 representan independientemente: -C(O)C1-6 alquilo no sustituido, -CH2-fenilo no sustituido; o, preferiblemente, H; C1-6 alquilo no sustituido; o fenilo no sustituido; 10

R13 y R14 representan independientemente -CH2-fenilo no sustituido o, preferiblemente H o C1-6 alquilo no sustituido;

entre los sustituyentes preferibles de las fracciones de fenilo se incluyen halo (por ejemplo, flúor y cloro) y metilo.

Los compuestos más preferibles de la invención que se pueden mencionar incluyen aquellos en los que:

Ra representa hidrógeno;

R1 y R2 representan independientemente hidrógeno o C1-3 alquilo (p. ej., metilo) o R1 y R2 representan conjuntamente 15 -CH2-, -CH2CH2- o -C(H)= (que unen X e Y);

tanto X como Y representan -0-; cualquiera de X e Y representa -O- y el otro representa -N(Ra)- o -N= (en este caso, R1 y R2 representan preferiblemente -CH2- o -C(H)=); o cualquiera de X e Y representa -N(Ra)- y el otro representa -O- o -N= (en este caso, R1 y R2 representan preferiblemente -CH2-or-C(H)=);

R3 a R10 representan independientemente hidrógeno o -ORb (por ejemplo, cualquiera de R3 a R10, p. ej., R5, puede 20 representar -ORb o hidrógeno y los demás representan hidrógeno);

Rb representa hidrógeno;

R13 y R14 representan independientemente hidrógeno;

R11 representa C1-4(p. ej., C1-3) alquilo (p. ej., metilo, etilo o n-propilo) o fenilo no sustituido;

R12 representa hidrógeno o C1-3 alquilo (p. ej., metilo); 25

la fracción de 3-indolilo necesaria de la posición 5 está en la configuración S;

el átomo de hidrógeno de la posición 9a está en la configuración S.

Entre los anillos preferibles que pueden representar X, Y, R1 y R2 (cuando los dos últimos representan un grupo C1-2 alquileno que une X e Y) se incluyen los siguientes:

30

por ejemplo un grupo 1,3-dioxolilo, un grupo 1,4-dioxinilo (preferiblemente un grupo 2,3-dihidro-[1,4]-dioxinilo), un grupo oxazolilo (p.Ej., oxazolilo o 2,3-dihidro-oxazolilo) o un grupo imidazolilo (el experto en la materia apreciará que

los dos grupos imidazolilo ilustrados pueden existir en equilibrio, gracias al tautomerismo). Cuando R1 y R2 no están unidos, entonces estos grupos representan independientemente hidrógeno o C1-3alquilo (p. ej., metilo), por ejemplo, -X-R1 e -Y-R2 representan independientemente -OH u -OCH3 (por ejemplo, -X-R1 e -Y-R2 representan ambos -OH o representan ambos -OCH3).

Entre otros compuestos preferibles de la invención que se pueden mencionar se incluyen aquellos en los que: 5

X e Y representan independientemente -O-;

R1 y R2 representan conjuntamente un grupo enlazador de -CH2-, que une X e Y para formar una fracción de 1,3-dioxolilo, es decir:

10

R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R12, R13 y R14 representan independientemente hidrógeno;

R11 representa C1-3 alquilo (p. ej., metilo);

la fracción de 3-indolilo necesaria está en la configuración S;

el átomo de hidrógeno de la posición 9a está en la configuración S.

Los compuestos de la invención se pueden producir conforme a técnicas bien conocidas por los expertos en la 15 materia, por ejemplo las descritas más adelante.

De acuerdo con otros aspectos de la invención, se proporciona un proceso para la preparación de un compuesto de la fórmula I que consiste en lo siguiente:

(i) para los compuestos de la fórmula I en la que R1 y R2 están unidos, se lleva a cabo una reacción de un compuesto de la fórmula I en la que R1 y R2 representan ambos hidrógeno (o un 20 derivado protegido del mismo), con un compuesto de la fórmula II,

donde L1 y L2 representan independientemente grupos salientes adecuados, como un grupo sulfonato (p. ej., -OS(O)2CF3, -OS(O)2CH3, -OS(O)2PhMe o un nonaflato), cloro, bromo, o, preferiblemente, yodo, y R1/2 representa alquileno (tal y como se define en el presente con respecto a la unión de R1 y R2), en condiciones de reacción 25 estándar, por ejemplo en presencia de una base adecuada, como NaH, NaOH, Na2CO3, K2CO3, K3PO4, Cs2CO3, una base alcóxido (como f-BuONa o t-BuOK, o similares) o una base amina (como Et3N, piridina, tributilamina, trimetilamina, dimetilaminopiridina, diisopropilamina y diisopropiletilamina, o similares), o mezclas de bases, y un solvente apropiado, como tolueno, diclorometano, acetonitrilo o un solvente polar aprótico (como tetrahidrofurano, dioxano, dietiléter, dimetilsulfóxido o dimetilformamida), o mezclas de los mismos. La base preferible incluye Cs2CO3 30 y los solventes preferibles incluyen dimetilformamida. Esta reacción se puede producir a temperatura ambiente, aunque es preferible a temperatura elevada (p. ej., por encima de 100°C, como a unos 150°C);

(ii) los compuestos de la fórmula I, o derivados protegidos de los mismos, también se pueden preparar por reacción de un compuesto de la fórmula III,

35

(o un enantiómero individual de los mismos; por ejemplo, una amina quiral en la que el enlace que contiene el grupo -NH2 tiene una determinada configuración) donde L3 representa un grupo saliente adecuado, como el anteriormente definido con respecto a L1 y L2 (p. ej., yodo, bromo o cloro), pero preferiblemente representa -ORa (donde Ra preferiblemente representa Ci.6 alquilo, p. ej., metilo), y R1, R2, R3, R4, R5, R11, R13, R14, X e Y son como los 5 anteriormente definidos, con un compuesto de la fórmula IV,

o un derivado protegido del mismo, donde R6, R7, R8, R9, R10 y R12 son como los anteriormente definidos, en condiciones de condensación y reacción de ciclación, por ejemplo en presencia de ácido acético y acetato sódico (aunque se pueden emplear diferentes solventes y/o bases), cuya reacción puede producir un producto intermedio 10 de la fórmula V tal y como se define más adelante. Posteriormente (por ejemplo, si se forma una sal de adición de ácido, p. ej., una sal de AcOH, del compuesto intermedio de la fórmula V), la mezcla de la reacción puede ser neutralizada (p. ej., mediante la adición de NaHCO3 (ag. sat.)), lo que puede provocar la formación del compuesto de la fórmula I, por ejemplo por reacción de ciclación intramolecular de cualquier compuesto intermedio de la fórmula V que se pueda formar. El experto en la materia apreciará que la estereoquímica del compuesto de la fórmula III puede 15 influir en la estereoquímica del compuesto de la fórmula I así formado. Por ejemplo, si el compuesto de la fórmula III contiene un centro quiral de una determinada configuración, entonces la estereoespecificidad del material de partida podrá dominar la estereoquímica del producto (por ejemplo, de la fórmula I) así formado. Por ejemplo, un compuesto de la fórmula III con la estereoquímica absoluta representada en la fórmula IIIA de la disposición siguiente puede producir un compuesto de la fórmula I con la estereoquímica absoluta representada en la fórmula IA de la 20 disposición siguiente:

Del mismo modo, el experto en la materia apreciará que, partiendo de una forma racémica de un compuesto de la fórmula III se podrá preparar cualquiera de los diastereoisómeros y/o enantiómeros del compuesto de la fórmula I (p. ej., a través de la separación de los diastereoisómeros, por ejemplo por cromatografía como HPLC, y separación de 25 los enantiómeros, por ejemplo por resolución);

(iii) ciclación intramolecular de un compuesto de la fórmula V,

o una sal del mismo (p. ej., una sal de adición de ácido, como una sal de AcOH), o un enantiómero individual del 5 mismo (enantiómero individual y diastereoisómero cis individual) donde R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, X e Y son como los anteriormente definidos, que se puede realizar en condiciones estándar, por ejemplo cuando se emplea una sal de adición de ácido del compuesto de la fórmula V (p. ej., si se forma in situ), entonces se puede efectuar la neutralización (p. ej., en condiciones como las descritas con respecto al paso ii) anterior) primero. La ciclación intramolecular (es decir, la sustitución nucleofílica del grupo carbonilo) se 10 puedeproducir naturalmente o puede promoverse por adición de una base adecuada; o

(iv) los compuestos de la fórmula I en la que R11 y/o R12 representan un sustituyente distinto de hidrógeno (p. ej., donde ambos representan un sustituyente distinto de hidrógeno) se pueden preparar a partir del correspondiente compuesto de la fórmula I en la que R11 y/o R12 representan hidrógeno, con un compuesto (o dos compuestos diferentes) de la fórmula VA, 15

donde R11/12 representa R11 o R12 (dependiendo de la posición en la que se desea la unión), siempre que no represente hidrógeno, en presencia de una base (como la descrita con respecto al paso de proceso i) anterior; p. ej., NaH) y de un solvente adecuado (como el descrito en el paso de proceso i) anterior; p. ej., un solvente polar aprótico como la dimetilformamida), en condiciones estándar conocidas por los expertos en la materia. El experto en la 20 materia apreciará que estas condiciones de reacción funcionarán para la preparación de compuestos en los que R11/12 representa C1-6 alquilo, -C(O)-C1-6 alquilo o -CH2fenilo (donde las fracciones de alquilo y fenilo son opcionalmente sustituidas tal y como se ha definido anteriormente). Para la preparación de compuestos en los que R11/12 representa opcionalmente fenilo sustituido, puede ser necesario emplear unas condiciones diferentes, por ejemplo, condiciones de reacción de acoplamiento en presencia de un catalizador apropiado (p. ej., Pd(OAc)2 o 25 similares), un aditivo opcional, una base y un solvente adecuado.

Los compuestos de la fórmula III se pueden preparar mediante la reacción de un compuesto de la fórmula

o un derivado protegido del mismo (p. ej., un derivado amino-protegido, como un derivado protegido de -NHBoc o un éster del mismo), o un enantiómero individual del mismo, donde R1, R2, R3, R4, R5, X e Y son como los anteriormente definidos, con un compuesto de la fórmula VII,

5

donde R11, R13, R14 y L3 son como los anteriormente definidos (y L3 es preferiblemente -ORa, tal como se ha definido anteriormente), en condiciones de reacción de acoplamiento de amida estándar, por ejemplo en presencia de un reactivo de acoplamiento adecuado (p. ej., 1,1'-carbonildiimidazol, N,N-diciclohexilcarbodiimida, 1 -(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (o hidrocloruro del mismo), N,N-disuccinimidil carbonato o más preferiblemente cloruro bis(2-oxo-3-oxazolidinil)fosfónico (p. ej., Bop-CI), o similares), opcionalmente en presencia de una base 10 adecuada (p. ej., hidruro de sodio, bicarbonato de sodio, carbonato de potasio, piridina, trietilamina, dimetilaminopiridina, diisopropilamina, hidróxido de sodio, terc-butóxido de potasio y/o diisopropilamida de litio (o variantes de los mismos) y un solvente adecuado (p. ej., tetrahidrofurano, piridina, tolueno, diclorometano, cloroformo, acetonitrilo, dimetilformamida, trifluorometilbenceno, dioxano o trietilamina). Entre los agentes de acoplamiento preferibles se incluyen Bop-CI, entre las bases preferibles se incluyen trietilamina y/o bicarbonato de 15 sodio (por ejemplo, una mezcla de los mismos) y el sistema de solvente preferible es diclorometano (en este caso, se puede permitir que la mezcla de la reacción reaccione a temperatura ambiente o similar, durante un periodo de tiempo). Alternativamente, el grupo de ácido carboxílico del compuesto de la fórmula VI se puede convertir en condiciones estándar al correspondiente cloruro de acilo (por ejemplo, en presencia de SOCI2 o cloruro de oxalilo), de forma que este cloruro de acilo se hace reaccionar después con un compuesto de la fórmula VII, por ejemplo en 20 condiciones similares a las anteriormente mencionadas.

Los compuestos mencionados en el presente (p. ej., los de las fórmulas II, IV, VA, VI y VII, así como ciertos otros compuestos de la fórmula III) están disponibles en el mercado, se recogen en la bibliografía o bien se pueden obtener por analogía con los procesos anteriormente descritos o a través de procedimientos sintéticos convencionales, conforme a técnicas estándar, utilizando materiales de partida disponibles con los reactivos y 25 condiciones de reacción adecuados. A este respecto, el experto en la materia puede consultar inter alia "Comprehensive Organic Synthesis" de B. M. Trost e I. Fleming, Pergamon Press, 1991.

Los sustituyentes R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, X e Y de compuestos finales de la invención o de los compuestos intermedios relevantes se pueden modificar una o más veces, después de los procesos anteriormente descritos o durante los mismos, empleando métodos bien conocidos por los expertos en la 30 materia. Entre los ejemplos de estos métodos se incluyen sustituciones, reducciones, oxidaciones, alquilaciones, acilaciones, hidrólisis, esterificaciones, eterificaciones, halogenaciones o nitraciones. Estas reacciones pueden provocar la formación de un compuesto final de la invención o de un compuesto simétrico, asimétrico o intermedio. Los grupos precursores se pueden cambiar por un grupo diferente o por los grupos definidos en la fórmula I, en cualquier momento durante la secuencia de reacción. A este respecto, el experto en la materia también puede 35 consultar "Comprehensive Organic Functional Group Transformations" de A. R. Katritzky, O. Meth-Cohn y C. W. Rees, Pergamon Press, 1995.

Los compuestos de la invención pueden ser aislados de sus mezclas de reacción mediante técnicas convencionales (p. ej., recristalizaciones).

Los expertos en la materia reconocerán que, en los procesos descritos en el presente documento, los grupos 40 funcionales de los compuestos intermedios pueden requerir la protección de grupos de protección.

Por ejemplo, los grupos amino pueden ser protegidos con un grupo Boc, por reacción en presencia de una base (p. ej., NaOH o una base amina, como trietilamina, dimetilaminopiridina o similares) con Boc2O y un solvente adecuado (p. ej., agua o un solvente polar aprótico como dioxano, tetrahidrofurano, dietiléter o mezclas de los mismos). Las

condiciones estándar de la reacción de desprotección incluyen la desprotección en presencia de ácido (p. ej., en presencia de HCI en un solvente, como un solvente polar aprótico).

La protección y desprotección de grupos funcionales pueden tener lugar antes o después de una reacción en las pautas anteriormente mencionadas.

Los grupos de protección se pueden eliminar con técnicas bien conocidas por los expertos en la materia y tal y como 5 se describe más adelante. Por ejemplo, los compuestos/compuestos intermedios protegidos descritos en el presente se pueden convertir químicamente en compuestos desprotegidos, usando técnicas de desprotección estándar. Por "grupo de protección" también nos referimos a los grupos alternativos adecuados que son precursores del grupo real que se desea proteger. Por ejemplo, en lugar de un grupo de protección amino "estándar", se puede emplear un grupo nitro o azido que funcione eficazmente como grupo de protección amino, y estos grupos se pueden convertir 10 más tarde (una vez que hayan cumplido el propósito de actuar como grupos de protección) en el grupo amino, por ejemplo bajo las condiciones estándar de reducción descritas en el presente. Los grupos de protección que se pueden mencionar incluyen grupos de protección de lactona (o derivados de los mismos), que pueden servir para proteger tanto un grupo hidroxi como un grupo oc-carboxi (es decir, de forma que la fracción cíclica se forma entre los dos grupos funcionales). 15

El tipo de química implicada dictará la necesidad y el tipo de grupos de protección, así como la secuencia para realizar la síntesis.

El uso de grupos de protección se describe de forma completa en "Protective Groups in Organic Synthesis", 3a edición, T.W. Greene & P.G.M. Wutz, Wiley-lnterscience (1999).

En otra realización más de la invención, se proporciona una forma sintética de un compuesto de la invención (es 20 decir, un compuesto de la fórmula I (o una sal del mismo), que se caracteriza por el hecho de que está producido sintéticamente, por ejemplo conforme a los procesos descritos en el presente. Estos compuestos también se denominan en el presente "compuestos de la invención".

Usos médicos y farmacéuticos

Los compuestos de la invención están indicados como productos farmacéuticos. Según otro aspecto de la invención, 25 se proporciona un compuesto de la invención, como se ha descrito anteriormente (pero sin ninguna condición, donde proceda) para el uso como producto farmacéutico. Se proporciona asimismo una forma sintética de un compuesto de la invención (pero sin ninguna condición, cuando corresponda), para su uso como producto farmacéutico.

Los compuestos de la invención están indicados como productos farmacéuticos. Según otro aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la invención, como se ha descrito anteriormente (pero sin ninguna condición, donde 30 proceda) para el uso como producto farmacéutico. Se proporciona asimismo una forma sintética de un compuesto de la invención (pero sin ninguna condición, donde proceda), para el uso como producto farmacéutico.

Para evitar cualquier duda, a pesar de que los compuestos de la invención pueden presentar actividad farmacológica en sí, pueden existir o se pueden preparar determinados derivados farmacéuticamente aceptables (p. ej., protegidos) de los compuestos de la invención que pueden no presentar esta actividad, aunque se pueden 35 administrar por vía parenteral u oral y posteriormente ser metabolizados por el organismo para formar compuestos de la invención. Estos compuestos (que pueden presentar alguna actividad farmacológica, siempre que esa actividad sea notablemente inferior a la de los compuestos "activos" para los que son metabolizados) pueden describirse por tanto como "profármacos" de los compuestos de la invención.

Entenderemos que el término "profármaco de un compuesto de la invención" incluye los compuestos que forman un 40 compuesto de la invención, en una cantidad experimentalmente detectable, dentro de un plazo predeterminado (p. ej., aproximadamente una hora), tras la administración vía oral o parenteral.

Por tanto, los compuestos de la invención son útiles porque presentan actividad farmacológica y/o son metabolizados por el organismo, tras su administración oral oparenteral, para formar compuestos que presentan actividad farmacológica. 45

Los compuestos de la invención (tal y como se han definido, aunque sin ninguna condición o condiciones) pueden resultar útiles en el tratamiento del cáncer. Por "cáncer", entendemos cualquier enfermedad que se produce como consecuencia de un crecimiento celular incontrolado (p. ej., división incontrolada), invasión (p. ej., crecimiento directo en tejidos adyacentes) o metástasis. Entenderemos que el término "crecimiento incontrolado" incluye un aumento del número y/o tamaño de las células cancerígenas (también denominado en el presente "proliferación"). Por 50 "metástasis" entendemos el movimiento o migración (p. ej., invasión) de las células cancerígenas del sitio de un tumor primario del organismo de un sujeto a otra u otras áreas del cuerpo de ese sujeto (donde las células pueden formar entonces tumores secundarios). Por tanto, en una realización de la invención se proporcionan compuestos y métodos para inhibir, en su totalidad o en parte, la formación de tumores secundarios en un sujeto con cáncer.

Ventajosamente, los compuestos de la invención pueden ser capaces de inhibir la proliferación y/o metástasis de las 55 células cancerígenas de forma selectiva.

El término "de forma selectiva" quiere decir que los compuestos de la invención pueden inhibir la proliferación y/o metástasis de las células cancerígenas en mayor medida que con la que modula la función (p. ej., proliferación) de las células no cancerígenas. Preferiblemente, los compuestos de la invención inhiben la proliferación y/o metástasis de las células cancerígenas solamente.

Los compuestos de la invención pueden resultar adecuados para su uso en el tratamiento de cualquier tipo de 5 cáncer, incluyendo todos los tumores (sólidos y no sólidos). El tipo de cáncer puede incluir (a título meramente enunciativo) tanto tumores benignos (como hemangioma, adenoma hepatocelular, hemangioma cavernoso, hiperplasia nodular focal, neuromas acústicos, neurofibroma, adenoma del conducto biliar, cistanoma del conducto biliar, fibroma, lipomas, leiomiomas, mesoteliomas, teratomas, mixomas, hiperplasia regenerativa nodular, tracomas, granulomas piogénicas) como tumores malignos (como leucemia, síndromes mielodisplásicos (MDS), cáncer de 10 próstata, cáncer de mama, cáncer de piel, cáncer de huesos, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, cáncer cerebral, cáncer de laringe, vejiga, vesícula biliar, ovario, cuello de útero, páncreas, recto, paratiroide, tiroide, esófago, adrenal, tejido neural, cabeza y cuello, colon, estómago, bronquios, riñones, carcinoma de células basales, carcinoma de células escamosas de tipo tanto ulcerativo como papilar, carcinoma de piel metastásico, osteosarcoma, sarcoma de Ewing, sarcoma de células reticulares, mieloma, tumor de células gigantes, cáncer de 15 pulmón microcítico, cáncer de pulmón no microcítico, cálculos biliares, tumor de células de los islotes, tumor cerebral primario, tumores linfocíticos y granulocíticos agudos y crónicos, tumor de células pilosas, adenoma, hiperplasia, carcinoma medular, feocromocitoma, neuroma mucoso, ganglioneuromas intestinales, tumor hiperplásico del nervio córneo, tumor de hábito marfanoide, tumor de Wilms, seminoma, tumor de ovario, tumor leiomiomatoso, displasia cervical y carcinoma in situ, neuroblastoma, retinoblastoma, sarcoma de tejidos blandos, carcinoide maligno, lesión 20 de piel tópica, micosis fungoide, rabdomiosarcoma, sarcoma de Kaposi, sarcoma osteogénico y otros tipos de sarcoma, hipercalcemia maligna, tumor de células renales, policitemia vera, adenocarcinoma, glioblastoma multiforma, leucemias, linfomas, melanomas malignos, carcinomas epidermoides y otros carcinomas y sarcomas). Entre otros que se pueden mencionar se incluyen los cánceres de testículos, del tracto genitourinario, glioblastoma, neuroblastoma, queratoacantoma, carcinoma epidermoide, carcinoma de células grandes, carcinoma folicular, 25 carcinoma indiferenciado, carcinoma papilar, seminoma, trastornos mieloides, trastornos linfoides, células pilosas, cavidad bucal y faringe (oral), labios, lengua, boca, intestino delgado, colon-recto, intestino grueso, recto, cerebro y sistema nervioso central, linfoma de Hodgkin y leucemia, tumores hematopoyéticos de linaje linfoide, incluyendo leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, linfoma de células pilosas y linfoma de Burkett, tumores hematopoyéticos de linaje 30 mieloide, incluyendo leucemias mielógenas aguas y crónicas, síndrome mielodisplásico y leucemia promielocítica, tumores de origen mesenquimal, incluyendo fibrosarcoma y rabdomiosarcoma, tumores del sistema nervioso central y periférico, incluyendo astrocitoma, neuroblastoma, glioma y schwannomas, así como otros tumores, incluyendo melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma pigmentosum, queratoxantoma, cáncer folicular de tiroides y sarcoma de Kaposi. 35

En particular, los compuestos de la invención pueden presentar una potente actividad inhibidora del crecimiento y la invasión de tumores de próstata humanos agresivos y hormonorrefractarios (por ejemplo, como se puede demostrar en los modelos de xenoinjerto en ratones). Así pues, resulta particularmente preferible que los compuestos de la invención puedan resultar útiles en el tratamiento de cánceres agresivos como el cáncer de próstata.

Los compuestos de la invención pueden reducir la tasa de proliferación celular cuando se someten a ensayo 40 utilizando una línea de células cancerígenas PC-3 (p. ej., obtenidas del ATCC). Los compuestos pueden presentar por tanto un efecto inhibidor beneficioso sobre la capacidad de supervivencia de los tumores de este tipo y de los cánceres en general. La línea de células cancerígenas PC-3 presenta varias propiedades que representan al cáncer de próstata hormono-independiente e invasivo. Por ejemplo, las células PC-3 no presentan una señalización funcional del receptor de andrógeno (AR), crecen rápidamente en el medio de cultivo y pueden formar tumores de 45 gran tamaño y muy agresivos cuando se implantan en ratones atímicos desnudos. Por tanto, las pruebas biológicas que se describen más adelante (p. ej., modelos de xenoinjerto de PC-3 en ratones) predican con rotundidad la utilidad de los compuestos testados al imitar la diseminación gradual de las células del carcinoma de próstata in vivo.

Asimismo, se ha documentado que incluso fármacos contra el cáncer de uso generalizado, como Avastin™ o docetaxel en monoterapia o en terapia combinada, presentaban un escaso efecto inhibidor sobre las células PC-3 50 (Petrylak DP: Future directions in the treatment of androgen-independent prostate cancer. Urology 65: 8-12, 200538.2007; y Hung H: Bevacizumab plus 5-fluorouracil induce growth suppression in the CWR-22 and CWR-22R prostate cancer xenografts. Molecular cancer therapeutics 6: 2149-2157, 2007).

Los compuestos de la invención se pueden dirigir a múltiples vías celulares asociadas con el crecimiento del tumor, la angiogénesis y metástasis. Los compuestos de la invención también pueden afectar a otras vías del cáncer, como 55 la regulación del ciclo celular y la apoptosis.

Así pues, los compuestos de la invención pueden ser inhibidores del VEGF (factor de crecimiento endotelial vascular). Por ejemplo, pueden inhibir la expresión de receptores del VEGF incluyendo, a título meramente enunciativo, el VEGF y/o VEGFR-2 (como se puede mostrar en una prueba descrita en el presente). Esto se puede producir de forma selectiva o puede ser uno de una pluralidad de los mecanismos por los que los compuestos de la 60 invención actúan en el tratamiento del cáncer. Se sabe que la vía de señalización del VEGF está asociada a la vascularización e invasión del tumor, por lo que los compuestos de la invención pueden presentar efectos contra el

cáncer al inhibir la angiogénesis (y, por tanto, clasificarse como agentes antiangiogénicos). Por tanto, en otra realización de la invención los compuestos de la invención pueden resultar útiles en el tratamiento de una enfermedad en la que la inhibición de la angiogénesis (y/o del VEGF) resulta deseable y/o necesaria.

El término "inhibición" se puede referir a cualquier reducción mensurable y/o prevención, que en el contexto de la angiogénesis se refiere a la reducción y/o prevención de la angiogénesis (p. ej., la expresión de receptores del 5 VEGF, incluyendo, a título meramente enunciativo, el VEGF y VEGFR-2). La actividad inhibidora se puede medir comparando la inhibición de la angiogénesis en una muestra que contiene un compuesto de la invención y un receptor del VEGF, como el VEGF y/o VEGFR-2, con una muestra equivalente en ausencia de un compuesto de la invención. El cambio mensurable puede ser objetivo (p. ej., mensurable mediante alguna prueba o marcador, por ejemplo en una prueba o ensayo in vitro o in vivo , como el que se describe más adelante, o en cualquier otra prueba 10 o ensayo adecuado conocido por los expertos en la materia) o subjetivo (p. ej., el sujeto indica que siente algún efecto).

Los compuestos de la invención están indicados para el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de las enfermedades anteriormente mencionadas.

Según otro aspecto de la presente invención, se proporciona un método para el tratamiento de una enfermedad (p. 15 ej., cáncer u otra enfermedad anteriormente mencionada) que puede estar asociada con, o verse afectada por, la angiogénesis (y/o VEGF; p. ej., una inhibición de la expresión del VEGF y/o del VEGFR-2), comprendiendo este método la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la invención, pero sin ninguna condición o condiciones, tal y como se ha definido anteriormente, a un paciente que sufre o es susceptible de sufrir dicha enfermedad. 20

El término "pacientes" incluye pacientes mamíferos (incluyendo seres humanos). Por tanto, el método de tratamiento anteriormente debatido puede incluir el tratamiento de un organismo animal o humano.

El término "cantidad efectiva" se refiere a una cantidad de un compuesto, que aporta un efecto terapéutico al paciente tratado. El efecto puede ser objetivo (p. ej., mensurable mediante alguna prueba o marcador) o sujetivo (p. ej., el sujeto indica que ha sentido algún efecto). 25

Los compuestos de la invención se pueden administrar por vía oral, intravenosa, subcutánea, bucal, rectal, dérmica, nasal, traqueal, bronquial, sublingual, o cualquier otra vía parenteral o porinhalación, en una dosisfarmacéuticamente aceptable.

Los compuestos de la invención se pueden administrar de forma aislada, aunque preferiblemente se administran mediante formulaciones farmacéuticas conocidas, incluyendo comprimidos, cápsulas o jarabes para administración 30 oral, supositorios para administración rectal, soluciones estériles o suspensiones para administración parenteral o intramuscular y similares. El tipo de formulación farmacéutica se puede seleccionar teniendo debidamente en cuenta la vía de administración prevista y la práctica farmacéutica estándar. Estos portadores farmacéuticamente aceptables pueden ser químicamente inertes para los componentes activos y no tener ningún efecto perjudicial ni toxicidad en las condiciones de uso. 35

Estas formulaciones se pueden preparar de acuerdo con la práctica farmacéutica estándar y/o aceptada. De lo contrario, la preparación de formulaciones adecuadas la puede conseguir, sin emplear invenciones, un experto en la materia empleando técnicas rutinarias y/o conforme a la práctica farmacéutica estándar y/o aceptada.

Según otro aspecto de la presente invención, se proporciona una formulación farmacéutica que incluye un compuesto de la invención, tal y como se ha definido en el presente, aunque sin ninguna condición o condiciones, 40 conjuntamente con un adyuvante, diluyente y/o portador farmacéuticamente aceptable.

En función de la potencia y las características físicas del compuesto de la invención (es decir, del ingrediente activo), entre las formulaciones farmacéuticas que se pueden mencionar se incluyen aquellas en las que el ingrediente activo se encuentra presente en al menos un 1%, (o al menos un 10%, al menos un 30% o al menos un 50%) en peso. Es decir, el ratio del ingrediente activo con respecto a los demás componentes (es decir, la adición de 45 adyuvante, diluyente y portador) de la composición farmacéutica es al menos de 1:99 (o al menos de 10:90, al menos de 30:70 o al menos de 50:50) en peso.

La cantidad de compuesto de la invención de la formulación dependerá de la gravedad de la enfermedad y del paciente a tratar, así como del compuesto o los compuestos empleados, aunque podrá ser determinada, sin recurrir a ninguna invención, por un experto en la materia. 50

La invención proporciona asimismo un proceso para la preparación de una formulación farmacéutica, tal y como se ha definido anteriormente, comprendiendo dicho proceso la asociación de un compuesto de la invención, como el anteriormente definido, o de un éster, amida, solvato o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, con un adyuvante, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable.

Los compuestos de la invención también se pueden combinar con otros agentes terapéuticos que pueden resultar 55 útiles para el tratamiento de un cáncer y/o una enfermedad proliferativa (p. ej., otro inhibidor del VEGF como el descrito en el presente). Los compuestos de la invención se pueden combinar también con otras terapias.

Según otro aspecto de la invención, se proporciona un producto de combinación que comprende:

A) un compuesto de la invención, tal como se ha definido aunque sin ninguna condición o condiciones; y

B) uno o más agentes terapéuticos útiles en el tratamiento del cáncer y/o de una enfermedad proliferativa, 5

donde cada uno de los componentes A) y B) se formulan conjuntamente con un adyuvante, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable.

Estos productos de combinación permiten la administración de un compuesto de la invención conjuntamente con el otro agente terapéutico, y pueden, por tanto, presentarse como formulaciones separadas, donde al menos una de esas formulaciones comprende un compuesto de la invención, y al menos una comprende el otro agente terapéutico, 10 o pueden presentarse (es decir, formularse) como una preparación combinada (es decir, presentada como una única formulación que incluye un compuesto de la invención y el otro agente terapéutico).

Por tanto, se proporciona asimismo:

1) una formulación farmacéutica que incluye un compuesto de la invención, tal y como se ha definido en el presente, aunque sin ninguna condición o condiciones, uno o más agentes terapéuticos 15 que resultan útiles en el tratamiento del cáncer y/o de una enfermedad proliferativa, y un adyuvante, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable; y

2) un kit de partes que comprenden los componentes:

a) una formulación farmacéuticamente aceptable que incluye un compuesto de la invención, tal y como se ha definido anteriormente, aunque sin ninguna condición o condiciones, conjuntamente con un adyuvante, diluyente o 20 vehículo farmacéuticamente aceptable; y

b) una formulación farmacéutica que incluye uno o más agentes terapéuticos que resultan útiles en el tratamiento del cáncer y/o una enfermedad proliferativa en combinación con un adyuvante, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable, cuyos componentes a) y b) se proporcionan, cada uno de ellos, en una forma adecuada para su administración conjunta con el otro. 25

La invención proporciona asimismo un proceso para la preparación de un producto de combinación, tal y como se ha definido anteriormente, pero sin ninguna condición o condiciones, comprendiendo este proceso la asociación de un compuesto de la invención, tal y como se ha definido anteriormente, o de un éster, amida, solvato o sal del mismo farmacéuticamente aceptable con el otro agente (o agentes) terapéuticos que resulta o resultan útiles en el tratamiento del cáncer y/o de una enfermedad proliferativa, y al menos un adyuvante, diluyente o portador 30 farmacéuticamente aceptable.

Se entenderá por "asociación" que los dos componentes resultan adecuados para su administración conjunta.

Por tanto, por lo que respecta al proceso para la preparación de un kit de partes como el anteriormente definido, al "asociar" los dos componentes entre sí, entendemos que los dos componentes del kit de partes podrán ser:

i) administrados como formulaciones separadas (es decir, independientes entre sí) que posteriormente se combinan 35 para su uso conjunto en una terapia combinada; o

ii) envasados y presentados juntos como componentes separados de un "pack de combinación" para su uso conjunto en una terapia combinada.

Dependiendo del trastorno y del paciente a tratar, así como de la vía de administración, los compuestos de la invención se podrán administrar a diversas dosis terapéuticamente efectivas a unpaciente que los necesita. Sin 40 embargo, las dosis administradas a un mamífero, particularmente a un ser humano, en el contexto de la presente invención deberán ser suficientes para lograr una respuesta terapéutica en el mamífero, dentro de un plazo de tiempo razonable. Un experto en la materia reconocerá que la selección de la dosis exacta y de la composición, así como de la posología más adecuada también dependerá entre otras cosas de las propiedades farmacológicas de la formulación, de la naturaleza y gravedad de la enfermedad a tratar, y de la condición física y la agudeza mental del 45 receptor, así como de la potencia del compuesto específico, la edad, el estado, el peso corporal, el sexo y la respuesta del paciente a tratar, y el estadío/la gravedad de la enfermedad.

La administración puede ser continua o intermitente (p. ej., mediante inyección en bolo). La dosis también se puede determinar en función de los plazos y la frecuencia de administración. En caso de administración oral o parenteral, la dosis puede variar entre unos 0,01 mg hasta unos 10 g (p. ej., 1000 mg) al día de un compuesto de la invención. Por 50 ejemplo, el rango de dosis puede estar entre 1 mg/kg y 1000 mg/kg (p. ej., entre 10 mg/kg y 500 mg/kg, preferiblemente entre unos 20 mg/kg y 200 mg/kg), como en los rangos de dosis empleados en los modelos de ratones que se describen más adelante.

En cualquier caso, el médico responsable, u otro experto en la materia, podrá determinar rutinariamente la dosis real más adecuada para cada paciente individual. Las dosis anteriormente mencionadas constituyen ejemplos de 55

promedios; por supuesto, pueden darse casos individuales en los que se requiera una dosis superior o inferior, y estos se encuentran incluidos en el ámbito de aplicación de la presente invención.

Los compuestos de la invención pueden ofrecer la ventaja de que están dirigidos a múltiples vías implicadas en el crecimiento del tumor, la apoptosis, la angiogénesis y la metástasis. Los compuestos de la invención también 5 pueden resultar inhibidores efectivos de la angiogénesis (y/o inhibidores del VEGF), es decir que pueden (por ejemplo, selectivamente o como un modo de acción) inhibir la angiogénesis (y/o el VEG; p. ej., pueden inhibir la expresión del VEGF y el VEGFR-2).

Los compuestos de la invención también pueden ofrecer la ventaja de que pueden ser más eficaces, menos tóxicos, presentar una acción más prolongada, ser más potentes, producir menos efectos secundarios, absorberse más 10 fácilmente y/o presentar un mejor perfil farmacocinético (por ejemplo, una mayor biodisponibilidad oral y/o una menor eliminación), así como otras propiedades farmacológicas, físicas o químicas útiles, que los compuestos conocidos por la técnica hasta la fecha, sea para su uso en las indicaciones anteriormente señaladas o de otro modo.

Por ejemplo, los compuestos de la invención pueden ser bien tolerados por el paciente, es decir tener menos efectos 15 secundarios o ninguno (tales como pérdida de peso u otros efectos secundarios tóxicos), por ejemplo, en comparación con otros agentes terapéuticos. Esto puede ser así incluso a concentraciones/dosis elevadas de los compuestos de la invención. Los compuestos de la invención también pueden mostrar una gran potencia (por ejemplo, una potencia mayor que otros agentes terapéuticos) a una dosis relativa o comparativamente inferior. Por tanto, el compuesto de la invención puede ofrecer una amplia ventana terapéutica. 20

Los compuestos de la invención pueden ofrecer ventajas con respecto a otros agentes quimioterapéuticos conocidos (p. ej., Avastin™ , docetaxel y/o etopósido), que incluyen una mayor potencia y un mejor perfil de seguridad (es decir, menos efectos secundarios). Estas ventajas comparativas se pueden demostrar en pruebas biológicas como las que se describen más adelante.

A continuación se describirán, a título meramente ilustrativo, algunos ejemplos de realizaciones de la invención, por 25 referencia a las figuras siguientes:

Figura 1: Tolerancia de los ratones sanos al compuesto del Ejemplo 1 (también denominado en adelante "Sustancia X) Tratamiento a diversas dosis

A. Los ratones sanos fueron tratados con 100 mg/kg de Sustancia X una vez cada dos días, durante un periodo de 13 días. El peso corporal de cada ratón se controló periódicamente desde el Día 1 hasta el Día 13 y los valores 30 reflejan los promedios + desviación estándar (SD, por sus siglas en inglés).

B. Los ratones sanos fueron tratados con 200 mg/kg de Sustancia X una vez cada dos días, durante un periodo de 13 días. El peso corporal de cada ratón se controló cada dos días y los valores reflejan los promedios + desviación estándar (SD).

Figura 2: Inhibición del crecimiento tumoral en modelo de xenoinjerto en animales con tumores de gran tamaño 35

Cuando los tumores en ratones con PC-3 implantadas crecieron hasta alcanzar los 500-600 mm3 de tamaño, fueron tratados con 40 mg/kg de Sustancia X o solvente (Control) por vía intravenosa durante 20 días y se midió el tamaño del tumor periódicamente. Los valores del tamaño del tumor reflejan promedios + desviación estándar (SD).

Figura 3: Inhibición del crecimiento tumoral en modelo de xenoinjerto en animales mediante administración oral de la Sustancia X 40

Cuando los tumores en ratones con PC-3 implantadas crecieron hasta alcanzar los 300-350 mm3 de tamaño, los ratones fueron tratados con 40 mg/kg de Sustancia X o solvente (Control). La Sustancia X se administró por vía oral.

Figura 4: Inhibición del crecimiento tumoral en modelo de xenoinjerto en animales mediante etopósido y Sustancia X

Cuando los tumores en ratones con PC-3 implantadas crecieron hasta alcanzar los 200-300 mm3 de tamaño, los 45 ratones fueron tratados con 20 mg/kg de etopósido, 40 mg/kg de Sustancia X o solvente (Control) por vía IV cada dos días durante un periodo de 14 días. El tumor se midió periódicamente y los valores del tamaño del tumor reflejan los promedios + la desviación estándar (SD).

Figura 5: Efecto de la Sustancia X sobre la expresión del VEGF y VEGFR-2. Se realizó un análisis inmunohistoquímico del VEGF y VEGFR-2 en tumores de ratones de control y ratones tratados con Sustancia X. Se 50 muestran las imágenes representativas. Las secciones del tumor (Control) o (Sustancia X) se tiñeron con anticuerpo contra el VEGF y VEGFR-2 humano.

Figura 6: Sección histológica de tumores completos de ratones tratados con el Control y la Sustancia X, y evaluación del efecto de la Sustancia X sobre la vascularización 55

A. Comparación del aspecto y la histología de un par de tumores teñidos con anticuerpo anti-VEGFR-2. B. Análisis inmunohistoquímico de tumores de los ratones de control y los ratones tratados con la Sustancia X para detectar la expresión de CD31. Las secciones de los tumores (Control) o (Sustancia X) se tiñeron con anticuerpo anti-CD31. B) Se examinaron las regiones de alta densidad vascular en las zonas del centro y los bordes de los tumores. Se registró el número de píxeles CD31-positivos por campo microscópico. Se determinaron al menos dos 5 secciones por tumor y tres vistas por sección. Se realizó la prueba estadística T (T-test) bilateral y el valor P inferior a 0,05 se consideró estadísticamente significativo; el valor P inferior a 0,01 está marcado con dos asteriscos.

Figura 7: Efecto del Compuesto X de la Universidad de Lund y sintetizado con enamina sobre el crecimiento de las células PC-3. El número de células viables después de 48 horas. A, Los valores reflejan el promedio ± la desviación estándar. B, Curva de respuesta a la dosis para el efecto inhibidor del crecimiento. 10

Figura 8: Efecto del Ejemplo 2 (Análogo 1) sobre el crecimiento de las células PC-3. El número decélulas viables después de 48 horas. A, Los valores reflejan el promedio ± la desviación estándar. B, Curva de respuesta a la dosis para el efecto inhibidor del crecimiento.

Figura 9: Efecto del Ejemplo 3 (Análogo2) sobre el crecimiento de las células PC-3. El número de células viables después de 48 horas. A, Los valores reflejan el promedio ± la desviación estándar. B, Curva de respuesta a la dosis 15 para el efecto inhibidor del crecimiento.

Figura 10: Efecto del Ejemplo 4 (Análogo 3) sobre el crecimiento de las células PC-3. El número de células viables después de 48 horas. A, Los valores reflejan el promedio ± la desviación estándar. B, Curva de respuesta a la dosis para el efecto inhibidor del crecimiento.

Figura 11: Efecto del Ejemplo 5 (Análogo 4) sobre el crecimiento de las células PC-3. El número de células viables 20 después de 48 horas. Los valores reflejan el promedio ± la desviación estándar. B, Curva de respuesta a la dosis para el efecto inhibidor del crecimiento.

Figura 12: Efecto del Ejemplo 6 (Análogo 5) sobre el crecimiento de las células PC-3. El número de células viables después de 48 horas. A, Los valores reflejan el promedio ± la desviación estándar. B, Curva de respuesta a la dosis para el efecto inhibidor del crecimiento. 25

Figura 13: Comparación en paralelo del efecto de los Análogos 1 y 3 con etopósido y docetaxel. El número de células viables después de 48 horas. Los valores reflejan el promedio ± la desviación estándar.

Figura 14: El efecto antitumoral del Análogo 1 y el Análogo 3 sobre la línea de células del linfoma monocítico leucémico humano U937.

Figura 15: Análisis de proliferación de las células en un punto en el tiempo, tras el tratamiento con concentraciones 30 de análogos IC50: Compuesto X 30 uM, Análogo 1 36 uM, Análogo 2 60 uM, Análogo 3 32 uM, Análogo 4 30 uM.

Figura 16: Resultados de diversos compuestos testados en el ensayo BrdU.

Figuras 17, 18, 19 y 20: Resultados de determinados ejemplos en el ensayo de apoptosis

Figuras 21, 22, 23 y 24: Resultados de determinados ejemplos en el análisis del ciclo celular Ejemplos/Pruebas biológicas 35

Los materiales se obtuvieron de proveedores comerciales y se utilizaron sin ninguna purificación posterior, salvo indicación contraria. Todas las reacciones sensibles a la humedad y al aire se realizaron en una atmósfera de nitrógeno seco, utilizando instrumentos de vidrio secados en horno. Se registraron espectros de masas de alta resolución (ESI) en un microespectrómetro Micromass Q-TOF. Se registraron los espectros NMR en un Bruker Avance II a 400 MHz(1H) y los cambios químicos se reflejan en comparación con el pico residual del solvente 40 deuterado. Toda la cromatografía flash se realizó en gel de sílice de 60 Å35-70 μm Matrex. Los análisis TLC se realizaron en placas de sílice Gel 60 F254 (Merck) y se visualizaron con a) luz ultravioleta y b) vanilina/ácido sulfúrico y calentamiento.

Procedimiento para la síntesis del compuesto intermedio (12) (Paso I)

A una solución de L-Dopa (11) (1 eq) en dioxano (resultante en 0,6 M solución de L-Dopa (11)) se añadió 1M NaOH (1,1 eq), H2O (55 eq) y Boc2O (1,1 eq) disueltos en dioxano (resultante en 2,8 M solución de Boc2O). Después de 30, 60 y 120 minutos se ajustó el pH a 10 mediante la adición de 1 M NaOH. La solución se agitó bajo rotación. La 5 solución se concentró bajo presión reducida, el pH se ajustó a ~2 mediante la adición de 1 M HCI y se extrajo con EtOAc x 2. Las fases org. agrupadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y evaporaron. El producto no se sometió a ninguna otra purificación.

Procedimiento general para la síntesis del compuesto intermedio (15) y (16). (Paso II)

A una suspensión de ácido carboxílico (12) (1 eq.) y la amina (p. ej., (13), (14)) (1,1 eq) en CH2CI2 (resultante en 10 0,03 M de solución de ácido carboxílico (11)) se añadió Et3N (3,5 eq) y la solución resultante se enfrió hasta 0°C. Se añadió Bop-CI (1,16 eq) y posteriormente NaHCO3 (2,1 eq), y se agitó la suspensión bajo rotación. Las sustancias volátiles fueron evaporadas y el resto se separó entre EtOAc y 1 M HCI. La fase org. se lavó con NaHC03 (ag.) sat. NaHC03, agua salada, se secó sobre Na2SO4, se filtró y evaporó. El resto se purificó mediante cromatografía flash en columna (EtOAc/éter de pet. (60-80) como eluyente). 15

Procedimiento general para la síntesis del compuesto intermedio (17) y (18). (Paso III)

A una suspensión agitada de la amina primaria protegida por Boc (p. ej., (15), (16)) se añadió 2 M HCI en Et2O (resultante en 0,1 M de suspensión de la amina protegida (p. ej., (15), (16)) a 0 °C. La suspensión se agitó a 0°C durante una hora y, a continuación, se filtró, se lavó con un baño de hielo de Et2O, se disolvió en MeOH y se evaporó. El producto no se sometió a ninguna purificación posterior. 20

Procedimiento general para la síntesis del compuesto intermedio (23), (24), (25) y (26). (Paso IV)

A una solución de derivado del indol (p. ej., (19), (20), (21), (22)) (1 eq) en THF seco (resultante en 0,05 M de solución de derivado del indol (p. ej., (19), (20), (21), (22))) 15 se añadió Boc2O (1,5 eq) y, a continuación, DMAP (0,3 eq). La solución se agitó bajo rotación durante seis horas y, a continuación, se diluyó con H2O, se evaporaron las sustancias volátiles y el resto se extrajo con EtOAc x 2. Las fases org. agrupadas se lavaron con agua salada, se 25 secaron sobre Na2SO4, se filtraron y evaporaron. El producto no se sometió a ninguna purificación posterior.

Procedimiento general para la síntesis de la sustancia intermedia/sustancia (9), (10), (27), (28), (29) y (30). (Paso V)

A una solución de la amina primaria (p. ej., (17) o (18)) (1 eq) en AcOH (resultante en 0,07 M de solución de la amina primaria (p. ej., (17) o (18))) se añadieron 3 eq. de NaOAc y 1 eq. de aldehído (p. ej., (23), (24), (25), (26)). La mezcla se agitó bajo rotación. Posteriormente, se neutralizó mediante la adición de NaHCO3 (ag.) sat. y se extrajo 3 5 veces con CH2CI2. Las fases org. agrupadas se lavaron con agua salada, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y evaporaron. El resto se filtró con SiO2 (EtOAc como eluyente) y se purificó con cromatografía flash en columna (EtOAc como eluyente).

Procedimiento general para la síntesis de la sustancia (1), (2), (3) y (4). (Paso VI)

A una mezcla del derivado de tetrahidroisoquinolina (p. ej., (27), (28), (29), (30)) (1 eq) y Cs2CO3 (1,5 eq) en DMF 10 recién destilado (resultante en 0,5 M de solución del derivado de tetrahidroisoquinolina (p. ej., (27), (28), (29), (30)) se añadió BrCH2CI (1,5 eq). La mezcla se calentó a 150 °C durante 2,5 horas. La mezcla se filtró, se diluyó con EtOAc, se lavó con H2O x 2, agua salada, se secó sobre Na2SO4, se filtró y evaporó. El resto se purificó mediante cromatografía flash en columna (EtOAc/éter de pet. (60-80) como eluyente).

Procedimiento para la síntesis de la sustancia (5). (Paso VII) 15

A una solución de (1) (1 eq) en DMF recién destilado (resultante en 0,4 M de solución de (1)) a 0 °C se añadió NaH (1,2 eq), la mezcla se agitó a 0 °C durante 10 minutos y, a continuación, se añadió Mel (1,2 eq). La solución se agitó bajo rotación. Se añadió H2O y la mezcla se extrajo con EtOAc x 3. Las fases org. agrupadas se lavaron con H2O, agua salada, se secaron sobre Na2S04, se filtraron y evaporaron. El resto se purificó por cromatografía flash en columna (EtOAc/éter de pet. (60-80) como eluyente). 20

Procedimiento para la síntesis de la sustancia (6). (Paso VIII)

A una solución de (1) (1 eq) en DMF recién destilado (resultante en 0,5 M de solución de (1)) a 0 °C se añadió NaH (1,2 eq), la mezcla se agitó a 0 °C durante 10 minutos y, a continuación, se añadió bromuro de bencilo (1,2 eq). La solución se agitó bajo rotación durante cuatro horas. Se añadió H2O y la mezcla se extrajo con EtOAc x 3. Las fases org. agrupadas se lavaron con H2O, agua salada, se secaron sobre Na2S04, se filtraron y evaporaron. El resto se 25 purificó mediante cromatografía flash en columna (EtOAc/éter de pet. (60-80) como eluyente).

Ejemplo 1 (también denominado en el presente como "Sustancia X") (5S,9aS)-5-(1H-lndol-3-in-8-metil-7,8,9a,10-tetrahidro-5H-1.3-dioxa-5a,8-diaza-ciclopenta[b]antracene-6,9-diona (nombre alternativo: (2S,8S)-2-(1H-indol-3-il)-6-metil-13,15-dioxa-3,6- diazatetraciclo [8.7.0.03,8.012,16]heptadeca-1(10),11,16-triene-4,7-diona (1))

30

(a) L-Dopa protegida por N-Boc(2) A una solución de 5,004 g (25,4 mmol) de L-Dopa (1) en 40 ml de dioxano y 25 ml de H2O, se añadieron 28 ml (28 mmol) 1 M NaOH y 6,0893 g (27,9 mmol) BOC2O disuelto en 8 ml de dioxano. La solución resultante se agitó bajo rotación. Después de 30 minutos, el pH se ajustó a 10 mediante la adición de 1 M NaOH. El pH se ajustó de nuevo a 10 después de una hora y después de 7,5 horas. Después del último ajuste del pH la 35 solución se agitó hasta el día siguiente. Las sustancias volátiles se evaporaron y la fase acuosa resultante se ajustó a un pH 2 y se extrajo con 3x100 ml de EtOAc. Las fases orgánicas agrupadas se lavaron con 150 ml de agua, 150 ml de agua salada, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron para obtener 7,6 g (25,4 mmol, 100 %) de L-Dopa protegida por [Lambda]/-Boc (2).

(b) N-Boc-{[(S)-2-Amino-3-(3,4-dihidroxi-fenil)-propionil]-metil-amino)-éster metílico del ácido acético (3) 40 5,0341 g (16,9 mmol) de (2) y 2,6002 g (18,6 mmol) de hidrocloruro de éster metílico de sarcosina se suspendieron en 500 ml de CH2CI2. Se añadieron 8,3 ml (59,5 mmol) de Et3N y la mezcla se enfrió a 0˚C. Se añadieron 5,0118 g (19,7 mmol) de Bop-CI y, a continuación, 2,9991 g (35,7 mmoi) de NaHCO3, y la mezcla se agitó bajo rotación hasta el día siguiente. Las sustancias volátiles se evaporaron y el resto se separó con 400 ml de EtOAc y 400 ml de 1 M

HCI (ag.). La fase orgánica se lavó con 400 ml de NaHCO3 (ag.) sat., 200 ml de agua salada, se secó sobre Na2SO4, y se filtró y evaporó.

La cromatografía flash (éter de pet.:EtOAc, 1 :4) produjo 1,9425 g (5,1 mmol, 30 %) (3).

(c) {[(S)-2-Amino-3-(3,4-dihidroxi-fenil)-propionil]-metil-amino)-éster metílico de ácido acético, ácido hidroclórico (4) 5 A 1,514 g (3,96 mmol) de (3) se añadieron 42 ml de 2M HCI en Et2O a 0˚C. La suspensión resultante se agitó a 0˚C durante una hora. La suspensión se filtró y se lavó con un baño de hielo de Et2O, se disolvió nuevamente en una cantidad mínima de MeOH y se evaporó. La sustancia no se sometió a ninguna purificación posterior (0.897 g (2,8 mmol, 71 %) (4)).

(d) N/-Boc-indol-3-carboxaldehido 10 Se pusieron 0,8754 g (6 mmol) de indol-3-carboxaldehido en 170 ml de THF recién destinado, se añadieron 2,0323 g (9,3 mmol) de BoC2O y, a continuación, 0,2006 g (1,6 mmol) de DMAP, y la mezcla se agitó bajo rotación durante cuatro horas. Se ñadieron 75 ml de H2O y se evaporaron las sustancias volátiles. El resto se extrajo con 2 x 75 ml de EtOAc. Las fases orgánicas agrupadas se lavaron con 75 ml de agua salada, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y evaporaron. Esto produjo 1,4790 g (6mmol) de indol-3- carboxaldehido protegido por Boc. 15

(e) (6S,11aS)-8,9-Dihidroxi-6-(1-Boc-1H-indol-3-il)-2-metil-2,3,11,11a-tetra- hidro-6H-pirazino[1,2-b]isoquinolin-1,4-diona (5)

Se disolvieron 0,897 g (2,8 mmol) (4) en 56 ml de AcOH, y se añadieron 0,6969 g (8,4 mmol) de NaOAc y 0,6923 g (2,8 mmol) de indol-3-carboxaldehido protegido por Boc. La mezcla se agitó a temperatura ambiente hasta el día siguiente. La mezcla de la reacción se dividió en dos y cada una de las mitades se neutralizó mediante la adición de 20 NaHCO3 (ag.) sat. (pH8) y se extrajo con 150 ml de CH2Ch x 3. Las fases orgánicas agrupadas se lavaron con 200 ml de agua salada, se secaron sobre Na2S04, se filtraron y evaporaron. La cromatografía flash (EtOAc) produjo 0,665 g (1,4 mmol, 50 %) de (5).

(f) (5S,9aS)-5-(1H-lndol-3-il)-8-metil-7,8,9a,10-tetrahidro-5H-1,3-dioxa-5a,8- diaza-ciclopenta[b]antracen-6,9-diona 25 (6) Se suspendieron 0,665 g (1,4 mmol) de (5) y 0,6853 g (2,1 mmol) de CS2CO3 en 3,3 ml de DMF recién destilado. Se añadieron 0,140 ml (2,1 mmol) de BrCH2CI y la mezcla se calentó a 150˚C durante una hora y media. Se retiró la fuente de calor y se dejó enfriar la mezcla bajo rotación. Después de esto la mezcla se filtró y se separó con 100 ml de EtOAc y 100 ml de H2O. La fase acuosa se extrajo con 2 x 100 ml de EtOAc. Las fases orgánicas se lavaron con 150 ml de agua salada, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y evaporaron. La cromatografía flash (éter de 30 pet.:EtOAc, 1:4) produjo 0,167 g (0,43 mmol, 31 %) (6).

1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,07 (bs, 1H), 7,54 (d, J=7,9 Hz, 1H), 7,36 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,09 (t, J= 7,4 Hz, 1H), 6,98 (t, 7,5 Hz, 1H), 6,94 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 6,74 (s, 1H), 6,71 (s, 1H), 5,99 (s, 1H), 5,98 (s, 1H), 4,21 (d, J=17,5 Hz, 1H), 4,05 (dd, J1=11,9 Hz J2=4,4 Hz, 1H), 3,99 (d, J=17,64 Hz, 1H), 3,10 (m, 2H), 2,78 (s, 3H)m/z calc. para C22H20N3O4 (M+H)+: 390,1448; obtenido: 390,1454 35

Ejemplo 2 (también denominado en el presente "Análogo 1")

(2S,8S)-2-(5-cloro-1H-indol-3-il)-6-metil-13,15-dioxa-3,6-diazatetraciclo-[8.7.0.03,8.012,16]heptadeca-1 (10),11,16-triene-4,7-diona (2)

1H NMR (400 MHz, CD2CI2): δ 8,37 (bs, 1H), 7,79 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,35 (d, J=8,7 Hz, 1H), 7,19 (dd, J1=8,7 Hz 40 J2=2,0 Hz, 1H), 7,08 (s, 1H), 6,79 (d, J=2,5 Hz, 1H), 6,72 (s, 1H), 6,62 (1H), 5,99 (d, J=1,3 Hz, 1H), 5,97 (d, J=1,3 Hz, 1H), 4,29 (dd, J1=12,6 J2=4,3 Hz, 1H), 4,13 (d, J=17,7 Hz, 1H), 4,01 (d, J=17,7 Hz, 1H), 3,31 (dd, J1=16,3 Hz J2=4,2 Hz, 1H), 3,01 (dd, J1=16,2 Hz J2=12,5 Hz, 1H), 2,92 (s, 3H)

m/zcalc. para C22H18CIN3O4Na (M+Na)+: 446,0878; obtenido: 446,0884

Ejemplo 3 (también denominado en el presente "Análogo 2") 45

(2S ,8S)-2-(5-metoxi-1H-indol-3-il)-6-metil-13,15-dioxa-3,6-diazatetra-ciclo[8.7.0.03,8.012,16]heptadeca-1(10), 11,16-triene-4,7-diona (3)

1H NMR (400 MHz, CDCI3): δ 8,73 (bs, 1H), 7,34 (m, 1H), 7,24 (d, J=8,8 Hz, 1H), 7,11 (s, 1H), 6,87 (dd, J1=8,8 Hz 5 J2=2,6 Hz, 1H), 6,62 (m, 3H), 5,93 (d, J=1,3 Hz, 1H), 5,91 (d, J=1,3 Hz, 1H), 4,35 (dd, J1,=16,3 Hz J2=4,3 Hz, 1H), 4,08 (m, 1H), 3,98 (d, J=17,7 Hz, 1H), 3,85 (s, 3H), 3,31 (dd,J1=16,3 Hz J2=4,3 Hz, 1H), 2,94(m, 1H), 2,88 (s, 3H)m/z calc. para C23H21N3O5Na(M+Na)+: 442,1373; obtenido: 442,1379

Ejemplo 4 (también denominado en el presente "Análogo 3")

10

(2S, 8S)-6-metil-2-{1H-nafto[1,2-b]pirrol-3-il}-13,15-dioxa-3,6-diazatetra-ciclo[8.7.0.03,8.012,16]heptadeca-1(10),11,16-triene-4,7-diona(4)

1H NMR (400 MHz, CD2CI2): δ 9,818 (bs, 1H), 8,09 (d, J=8,2 Hz, 1H), 7,89 (d, J=8,1, 1H), 7,82 (d, J=8,7 Hz, 1H), 7,49 (t, J=8,1 Hz, 1H), 7,49 (d, J=8,8 Hz, 1H), 7,39 (t, J=8,0 Hz, 1H), 7,16 (s, 1H), 6,69 (d, J=2,1 Hz, 1H), 6,60 (s, 1H), 6,59 (d, 15 J=3,9 Hz, 1H), 5,92 (d, J=1,1 Hz, 1H), 5,91 (d, J=1,1 Hz, 1H), 4,35 (dd, J1=12,4 Hz J2=4,2 Hz, 1H), 15 4,11 (d, J=17,7 Hz, 1H), 3,96 (d, J=17,8 Hz, 1H), 3,29 (dd, J1=16,4 Hz J2=4,3 Hz, 1H), 3,00 (dd, J1=16,1 Hz, J2=12,5 Hz, 1H), 2,88 (s, 3H) m/z calc. para C26H22N3O4 (M+H)+: 440,1605; obtenido: 440,1610

Ejemplo 5 (en el presente también denominado "Análogo 4")

(2S,8S)-6-metil-2-(1-metil-1H-indol-3-il)-13,15-dioxa-3,6-diazatetraciclo-[8.7.0.03,8.012,16]heptadeca-1(10),11,16-20 triene-4,7-diona (5)

1H NMR (400 MHz, CD2CI2): δ 7,74 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,33 (d, J=8,2 Hz, 1H), 7.26 (dt, J1=8,2 Hz J2=1,1 Hz, 1H), 7,12 (m, 2H), 6,73 (s, 1H), 6,65 (s, 1H), 6,62 (s, 1H), 5,99 (d, J=1,1 Hz, 1H), 5,97 (d, J=1,1 Hz, 1H), 4,34 (dd, J1=12,4 Hz, J2=4,2 Hz, 1H), 4,11 (d, J=17,7 Hz, 1H), 3,96 (d, J=17,7 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,32 (dd, J1=16,3 Hz J2=4,3 Hz, 1H), 3,01 (dd, J1 =16,2 Hz J2=12,6 Hz, 1H), 2,89 (s, 3H)m/z calc. para C23H22N3O4(M+H)+: 404,1605; obtenido: 404,1610 5

Ejemplo 6 (en el presente también denominado "Análogo 5")

(2S,8S)-2-(1-benzil-1H-indol-3-il)-6-metil-13,15-dioxa-3,6-diazatetraciclo-[8.7.0.03,8.012,16]heptadeca-1 (10), 11,16-triene-4,7-diona (6)1H NMR (400 MHz, CD2CI2): δ 7,77 (d, J=7,9 Hz, 1H), 7,20 (m, 9H), 6,77 (s, 1H), 6,72 (s, 1H), 6,67 (s, 1H), 5,98 (d, J=1,1 Hz, 1H), 5,97 (d, J=1,1, 1H), 5,27 (s, 2H), 4,34 (dd, J1=12,4 Hz, J2=4,3 Hz, 1H), 4,12 10 (d, J=17,7 Hz, 1H), 3,98 (d, J=17,7 Hz, 1H), 3,32 (dd, J1=16,3 Hz, J2=4,4 Hz, 1H), 3,01 (dd, J.,=16,3 Hz J2=12,5 Hz, 1H), 2,92 (s, 3H)m/z calc. para C29H25N3O4Na (M+Na)+: 502,1737; obtenido: 502,1743

Ejemplos biológicos

Ejemplo biológico A

MATERIALES Y MÉTODOS 15

Materiales

La sustancia X se disolvió en 100% DMSO diluido al 5% en solución tampón PBS.

Modelo de xenoinjerto en ratón para determinar el crecimiento del tumor y la metástasis

Se utilizaron ratones atímicos desnudos NMRI de entre seis y ocho semanas de edad (Taconic; Bomholt, Denmark). El modelo de xenoinjerto de cáncer de próstata en ratones se creó implantando células tumorales PC-3 20 hormonoindependientes subcutáneamente a ratones atímicos desnudos, tal y como ya se había descrito previamente (Wegiel B, Bjartell A, Tuomela J, et al.: Multiple cellular mechanisms related to cyclin Al in prostate cancer invasion and metastasis. Journal of the National Cancer Institute 100:10221036, 2008).

Las células PC-3 se compraron a American Type Culture Collection (Manassas, V A) y se cultivaron en RPMI-1640 suplementado con un 10% de suero bovino fetal. Se utilizaron células PC-3 a 1 x 106/por ratón. Los ratones se 25 dividieron en tres grupos (seis ratones por grupo). En el primer grupo se permitió crecer a los tumores hasta alcanzar un tamaño de 170-400 mm3 antes de comenzar el tratamiento. En el segundo grupo se permitió crecer a los tumores hasta alcanzar un tamaño de 550-650 mm3 antes de comenzar el tratamiento. En el tercer grupo se permitió crecer a los tumores hasta alcanzar un tamaño de 700-800 mm3 antes de comenzar el tratamiento. Los diámetros de los tumores se midieron dos veces por semana utilizando calibres. Los volúmenes de los tumores se calcularon 30 utilizando una ecuación de a*(b2/2) donde a y b representan la longitud y la anchura del tumor, respectivamente.

El tratamiento con el compuesto del Ejemplo 1 (en el presente también denominado "Sustancia X") o con PBS que contenía un 5% de DMSO (vehículo) como Control, se inició cuando los tumores alcanzaron el tamaño deseado anteriormente descrito. En el primer escenario experimental, la Sustancia X se administró por vía intravenosa una vez cada dos días. En el segundo escenario experimental, la Sustancia X se administró por vía oral una vez cada 35 dos días. El crecimiento del tumor se evaluó periódicamente, tal y como se describe en los Resultados. Los ratones fueron sacrificados después del tratamiento por eutanasia mediante inhalación de isofluorano. Se extirparon el nódulo linfático, el hígado, el pulmón, el bazo y los fémures de cada uno de los ratones. La mitad de los tejidos tumorales se utilizaron para el análisis histológico e inmunohistoquímico. Para el análisis histológico, los tejidos se fijaron en paraformaldehído al 4% y se introdujeron en parafina. Las secciones se tiñeron con hematoxilina-eosina 40 (H&E) o por tinción inmunohistoquímica con anticuerpos y se analizaron bajo un microscopio óptico. La otra mitad de los tejidos se utilizó para el análisis de proteínas y, por tanto, se congeló con nitrógeno líquido. Se recopilaron y compararon los pesos corporales de los ratones en el primer día y el último día de tratamiento. Se examinaron la invasión tumoral y metástasis en diversos tejidos de los ratones sacrificados.

Para un estudio de comparación, se trataron ratones con tumores de 190-250 mm3 de tamaño con el fármaco 45 citotóxico etopósido (Sigma), a una dosis de 20 mg/kg, por inyección intravenosa cada dos días. Se midió el tamaño del tumor tal y como se describe en los Resultados. Los ratones fueron tratados con etopósido o con el vehículo como Control. A continuación, fueron sacrificados y se recogieron los tejidos tal y como se ha descrito anteriormente.

Estudio básico de toxicidad

Para evaluar la toxicidad de la Sustancia X, se trataron ratones sanos con Sustancia X por inyección intravenosa a una dosis de 100 mg/kg o 200 mg/kg cada dos días durante un periodo de 13 días. El peso de cada ratón se controló periódicamente desde el Día 1 hasta el Día 13 del tratamiento. Las observaciones a pie de jaula, incluyendo mortalidad, moribundidad, ingestión de alimentos y actividades se realizaron cada dos días. Se tomaron muestras de 5 sangre el Día 1 y el Día 13 para realizar los recuentos de células sanguíneas. Para evaluar la toxicidad de la Sustancia X en los ratones con tumores, se trataron ratones a los que se les habían implantado tumores de PC-3 subcutáneos con la Sustancia X a una dosis elevada, de 200 mg/kg, cada dos días durante un periodo de 19 días. Se controló el peso corporal y se realizaron observaciones a pie de jaula cada dos días. Se extirparon y examinaron el nódulo linfático, el hígado, el pulmón, el bazo y los fémures de cada uno de los ratones. La toxicidad de la 10 Sustancia X también se evaluó en ratones que tenían un tumor tratados con 80 mg/kg de Sustancia X diariamente, tal y como se ha descrito anteriormente.

Inmunohistoquímica y cuantificación de la angiogénesis

La inmunohistoquímica de los tejidos tumorales se realizó tal y como ya se había descrito anteriormente (Wegiel B, Bjartell A, Ekberg J, Gadaleanu V, Brunhoff C y Persson JL: A role for cyclin Al in mediating the autocrine expression 15 of vascular endothelial growth factor in prostate cancer. Oncogene 24: 6385-6393, 2005), utilizando anticuerpos para CD-31 humanas (Dako, Golstrup, Denmark A/S). Se aplicaron anticuerpos secundarios conjugados con peroxidasa anti-conejo. Se utilizó una solución reactiva colorimétrica de diaminobencidina (Dako). Se procedió a la contratinción de los portaobjetos con hetoxilina (Sigma, St. Louis, MO). Las muestras se visualizaron con un microscopio Olympus BX5I a un aumento de 20x o 40x. Para el análisis de la angiogénesis del tumor, se examinaron y cuantificaron las 20 secciones del tumor teñidas con anticuerpo anti-CD31. Se examinaron las regiones de alta densidad vascular de los tumores. Se registró el número de píxeles CD31-positivos por campo microscópico. Se determinaron al menos dos secciones por tumor y tres vistas por sección.

RESULTADOS

Seguridad en el estudio básico de toxicidad 25

El estudio básico de seguridad de la Sustancia X se realizó primero con ratones sanos sin tumores, para comprobar si una dosis elevada de 100 mg/kg cada dos días resultaba segura. Tal y como se muestra en la Figura 1 A, no se produjo ningún cambio significativo en el peso corporal hasta el día 13 del periodo de tratamiento con una dosis elevada de la Sustancia X. Las observaciones a pie de jaulano mostraron ninguna anomalía en elingestión de alimentos ni en las actividades diarias, ni ningún efecto tóxico observable durante 13 días. Se realizó el análisis de 30 los hígados y riñones sin que se detectase ninguna anomalía en la histología de estos órganos (datos no mostrados). Estas pruebas básicas de toxicidad demostraron que la Sustancia X resulta segura a dosis elevadas en ratones sanos.

Los ratones fueron tratados con 200 mg/kg de Sustancia X una vez cada dos días durante un periodo de tiempo prolongado de 13 días. Tal como se muestra en la Figura 1B, los pesos corporales de los ratones que tenían un 35 tumor se mantuvieron estables durante todo el periodo del estudio. Las observaciones a pie de jaula no detectaron ninguna anomalía por lo que respecta alingestión de alimentos y las actividades diarias ni ningún efecto tóxico observable. Se realizó el análisis de los hígados y riñones sin que se detectase ninguna anomalía en la histología de estos órganos (datos no mostrados).

Posteriormente testamos la dosis elevada de la Sustancia X en ratones con un xenoinjerto de PC-3, imitando así su 40 efecto sobre los pacientes con cáncer de próstata. Generamos xenoinjertos de tumores de PC-3 humanas en ratones, mediante implantación subcutánea de las células tumorales en ratones atímicos desnudos. Testamos además la seguridad de la dosis de 40 mg/kg, que generó una notable actividad antitumoral en el modelo de xenoinjerto en ratones. El tratamiento diario de los ratones que tenían un tumor con esta dosis puede sugerir la seguridad de la Sustancia X en el tratamiento del cáncer. Los pesos corporales de los ratones que tenían un tumor 45 tratados con la Sustancia X diariamente durante 30 días se mantuvieron constantes durante todo el periodo de tratamiento (datos no mostrados). Las observaciones a pie de jaula no mostraron ninguna anomalía sobre elingestión de alimentos ni sobre las actividades diarias, ni ningún otro efecto tóxico observable. Se realizó el análisis de los hígados y riñones sin que se detectase ninguna anomalía en la histología de estos órganos (datos no mostrados). 50

Inhibición del crecimiento tumoral en el modelo de xenoinjerto en animales

Creamos un modelo de xenoinjerto de cáncer de próstata en ratones para estudiar el efecto de la Sustancia X sobre el crecimiento del tumor y la metástasis in vivo. Las células PC-3 de cáncer de próstata metastásico se inyectaron subcutáneamente en el costado derecho de cada ratón para crear un modelo de xenoinjerto en ratones. Cuando los tumores crecieron hasta alcanzar un tamaño de 190-240 mm3, los ratones fueron tratados por vía intravenosa con la 55 Sustancia X a 20 mg/kg o el vehículo como Control durante 21 días. Los tumores del grupo de Control tratados solo con el vehículo aumentaron de tamaño exponencialmente después de 21 días, mientras que se redujeron en los ratones tratados con la Sustancia X. Esto sugiere un notable efecto inhibidor de la Sustancia X sobre el crecimiento tumoral en los ratones con xenoinjerto in vivo.

Inhibición del crecimiento tumoral y la invasión en ratones con xenoinjerto de tumores de gran tamaño e invasivos

A continuación, evaluamos el efecto de la Sustancia X sobre el crecimiento tumoral y la invasión en ratones que tenían un tumor de gran tamaño. Anteriormente habíamos descubierto que los tumores de PC-3 que habían alcanzado los 400 mm3 de tamaño podían volverse metastásicos y que las células tumorales invadirían el nódulo 5 linfático, el hígado o el pulmón. Para testar si la Sustancia X es capaz de controlar un crecimiento tumoral agresivo, dejamos crecer los trasplantes de los tumores hasta alcanzar aproximadamente los 500-600 mm3 de tamaño y, a continuación, comenzamos a tratar a los ratones con 40 mg/kg de Sustancia X o con el solvente como Control mediante inyección intravenosa. Mientras que los tumores de gran tamaño del grupo de Control continuaron creciendo rápidamente, los tumores de los ratones del grupo de la Sustancia X no crecieron, sino que mostraban 10 una ligera reducción de su tamaño en el día 20 (Figura 2).

A continuación, testamos el efecto de la Sustancia X sobre tumores de gran tamaño e invasivos durante un periodo de tiempo más prolongado. Dividimos a los ratones en dos grupos: uno fue tratado con 40 mg/kg de la Sustancia X con inyección intravenosa durante 30 días, mientras que el otro grupo fue tratado con la Sustancia X con el mismo régimen de tratamiento durante 20 días. El día 21, los ratones del grupo 2 fueron tratados con 40mg/kg de la 15 SustanciaX por vía oral. El resultado demostró que el crecimiento tumoral en los ratones tratados con la Sustancia X se inhibió durante todo el periodo de tratamiento y que los tumores se habían reducido considerablemente al final del tratamiento. Por contra, los tumores del grupo de Control aumentaron de tamaño exponencialmente y presentaron metástasis. En el segundo grupo de tratamiento, los ratones tratados con la Sustancia X por vía oral presentaban un tamaño de los tumores ligeramente superior que los ratones tratados por inyección intravenosa continua, lo que 20 sugiere la biodisponibilidad de la Sustancia X por vía oral, aunque en menor medida que en el caso de la inyección intravenosa. Realizamos el análisis histológico e inmunohistoquímico y no se detectó ninguna infiltración de las células tumorales en cinco sitios secundarios en ninguno de estos ratones al final del estudio. Por contra, los tumores de los ratones de Control presentaban metástasis en los nódulos linfáticos (datos no mostrados).

También tratamos a los ratones mediante administración oral de la Sustancia X durante todo el periodo de 25 tratamiento. Tal como se muestra en la Figura 3, la Sustancia X administrada a los ratones por vía oral fue capaz de inhibir el crecimiento tumoral, aunque su efecto no fue tan contundente como el de la inyección intravenosa.

Comparación del efecto de etopósidoy la Sustancia X sobre el crecimiento tumoral en xenoinjertos en ratones

Para comparar el efecto de la Sustancia X con un fármaco citotóxico de uso generalizado en el tratamiento de tumores invasivos, testamos el efecto del etopósido a 20 mg/kg por inyección intravenosa (IV) en ratones con 30 tumores de PC-3 que habían crecido hasta alcanzar un tamaño aproximado de 250 mm3. Tal y como se muestra en la Figura 4, los tumores del grupo de Control aumentaron de tamaño exponencialmente después de 14 días. Por contra, los tumores del grupo de tratamiento con etopósido crecieron lentamente. Más importante es que la Sustancia X demostró un mayor efecto inhibidor sobre los tumores en comparación con el etopósido.

Efecto de la Sustancia X sobre la expresión de VEGF y VEGFR-2 en ratones con xenoinjertos tumorales 35

Examinamos la expresión de VEGF y VEGFR-2, que son importantes factores angiogénicos que pueden promover las vasculaturas tumorales y son necesarios para la invasión tumoral. Se realizó el análisis inmunohistoquímico de los tumores extirpados de los ratones de Control y de los ratones tratados con la Sustancia X. A diferencia del grupo de Control, la expresión del VEGF y VEGFR-2 se reguló a la baja de forma notable en los tumores tratados con la Sustancia X (Figura 5). Esto sugiere que la Sustancia X puede ser un inhibidor del VEGF que se dirige a las vías de 40 señalización del VEGF.

Efecto de la Sustancia X sobre la histología del tumor y la vascularización de tumores en ratones con xenoinjertos

También caracterizamos la histología del tumor mediante tinción del VEGFR-2 en ratones tratados con el vehículo o la Sustancia X. La comparación en paralelo de las secciones que contenían tumores completos de los ratones de Control y de los ratones tratados con la Sustancia X revelaron diferencias en el tamaño y la morfología de los 45 tumores de los dos grupos (Figura 6A). El tamaño de los tumores de los ratones tratados con la Sustancia X parecía ser menor que el de los ratones de Control. Es interesante señalar que había grandes áreas vacías en los tumores tratados con la Sustancia X, lo que sugiere que una reducción constante del tumor puede estar asociada con la eliminación de células tumorales muertas. Estos resultados confirmaron asimismo que la Sustancia X es capaz de inhibir el crecimiento en los tumores de gran tamaño e invasivos. 50

Posteriormente medimos la expresión de CD31, una proteína expresada en las vasculaturas tumorales e importante para la invasión del tumor, en los tumores tratados con la Sustancia X mediante análisis inmunohistoquímico (Figura 6B). Determinamos el grado de vascularización tumoral cuantificando la expresión de CD31 y vasos CD31-positivos en los tumores, incluyendo la zona central y los bordes de los tumores. Se produjo una reducción estadísticamente significativa de la expresión de CD31 y del número de vasos que expresaban CD31 en los tumores tratados con la 55 Sustancia X en comparación con los tumores de Control (Figura 6C). Este resultado sugiere que la Sustancia X puede inhibir el crecimiento tumoral y la invasión previniendo la vascularización de los tumores de PC-3 agresivos.

Ejemplo biológico B

Materiales y métodos

Productos químicos

Todos los nuevos compuestos sintetizados y el etopósido se disolvieron primero en un 100% de DMSO a una concentración inicial de 100mM y posteriormente se diluyeron a una concentración final de 200uM en un medio de 5 cultivo. La forma comercial de Avastin (25 mg/ml) se diluyó hasta unas concentraciones apropiadas en un medio de cultivo.

Cultivo de células

Las células cancerígenas PC-3 de cáncer de próstata hormonoindependiente y metastásico se adquirieron en American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA) y se cultivaron en RPMI-1640 suplementado con un 10% de 10 suero fetal bovino. El etopósido se adquirió en Sigma, Avastin de Roche.

Ensayo de proliferación celular y determinación del IC50

Para el recuento de células se sembró un total de 6x104células a una densidad de 0,3x106/ml en placas de 96 pocillos. Las células fueron tratadas con compuestos, etopósido o Avastin como controles positivos a 1 uM, 5 uM, 10 uM, 20 uM, 50 uM, 100 uM durante 48 horas. En el caso de Avastin, se utilizaron concentraciones de 5 uM, 20 uM y 15 50 uM. Las células se etiquetaron con azul de tripano y se cuantificaron las células viables.

El efecto de los análogos sobre la proliferación de células PC-3 se determinó utilizando un kit de ensayo de proliferación celular basado en BrdU no radiactivo (Roche, Germany), conforme al protocolo del fabricante. El etopósido y Avastin se utilizaron como controles positivos. Dicho brevemente, se cultivaron 2x103células en una placa de 96 pocillos en un medio RPMI-1640 que contenía un 10% de FBS durante 48 horas, incluyendo el 20 etiquetado con BrdU durante 18 horas. La incorporación de BrdU al ADN celular se determinó mediante la mediciónde la absorbancia a 450 nm y 690 nm en un lector de placas ELISA.

Ensayo de apoptosis con anexina V

Las células fueron tratadas con 50 uM y 100 uM de compuestos y etopósido durante 48 horas, se cosecharon, se lavaron con PBS y se resuspendieron en solución tampón de unión (0,01 M HEPES pH 7.4, 0,14 M NaCI, 2,5 M mM 25 CaCI2)( BD Bioscience, San Jose, CA, EE.UU.), se tiñeron anexina V conjugada con APS y 7-AAD (BD Bioscience). Las células se incubaron durante 15 minutos a temperatura ambiente en condiciones de oscuridad, se midió la tasa de apoptosis por citometría de flujo (Calibur, BD) y se analizó utilizando el software FCS Express Professional (De NoVo software, CA, EE.UU.).

Análisis del ciclo celular 30

Las células se cultivaron tras el tratamiento y, a continuación, se fijaron con un baño de hielo de EtOH al 70%. A continuación, las células se lavaron con PBS y se incubaron en solución tampón de tinción de ADN, que contenía 1 mg/ml de citrato de sodio (Sigma), 0,1 mg/ml de yoduro de propidio (Sigma), 3 ul/ml de TritonX-100 y 0,02 mg/ml de RNaseA (Sigma) durante 30 minutos a 4°C. Los perfiles del ciclo celular se midieron en un citofluorómetro FACS Calibur (BD) y se analizaron utilizando los softwares FCS Express Professional (De NoVo software, CA, EE.UU.) y 35 Multicycle (Phoenix Flow Systems, Inc., CA, EE.UU.).

Resultados

Evaluación del efecto del Compuesto X y sus análogos sobre el crecimiento de las células PC-3 del cáncer de próstata metastásico

A. Comparación de los valores del IC50 del Compuesto X de la Universidad de Lund y sintetizado con 40 enamina.

No existe ninguna diferencia entre los diferentes lotes del Compuesto X por lo que respecta a la eficacia. Ambos indujeron una inhibición dependiente de la dosis del crecimiento celular con la reducción estadísticamente significativa del número de células 5 uM. Se calculó que el IC50 para la inhibición del crecimiento se sitúa en 30 uM (véase la Figura 7). 45

B. Efecto del análogo 1 sobre el crecimiento de las células PC-3

Análogo 1 con un IC50 calculado para el crecimiento celular de 36 uM. La inhibición del crecimiento celular estadísticamente significativo comenzó entre 10 um y 20 uM (véase la Figura 8).

C. Efecto del análogo 2 sobre el crecimiento de las células PC-3

La inhibición significativa del crecimiento del análogo 2 comenzó a partir de una concentración de 5 uM. El IC50 50 determinado para el crecimiento celular se situó en 60 uM (véase la Figura 9).

D. Efecto del análogo 3 sobre el crecimiento de las células PC-3

El análogo 3 demostró tener efecto a partir de 5 uM, como el Compuesto X y el IC 50 se situó en 32 uM (véase la Figura 10).

E. Efecto del análogo 4 sobre el crecimiento de las células PC-3

El tratamiento de las células con el análogo 4 demostró una inhibición del crecimiento celular estadísticamente 5 significativa a partir de 10 um hasta 100 uM. El IC50 calculado se situó en 30 uM (véase la Figura 11).

F. Efecto del análogo 5 sobre el crecimiento de las células PC-3

El tratamiento con el análogo 5 de las células PC-3 provocó una reducción de las células (Figura 12).

La Figura 13 muestra una comparación en paralelo del efecto de los análogos 1 y 3 con etopósido y docetaxel.

La Figura 14 muestra el efecto antitumoral del análogo 1 y 3 sobre la línea de células del linfoma monocítico 10 leucémico humano U937.

Ensayo de proliferación celular basado en BrdU

Los resultados se ilustran en las Figuras 15 y 16. Ensayo de apoptosis

Los resultados se ilustran en las Figuras 17, 18, 19 y 20.

50 uM

Control Etopósido Análogo 1 Análogo 3

Apóptosis temprana, %

2,78 9,22 10,98 15,21

Apóptosis tardía/necrosis, %

4,39 6,73 4,23 6,55

Total, %

7,17 15,95 15,21 21,76

100 uM

Control Etopósido Análogo 1 Análogo 3

Apóptosis temprana,%

4,88 9,35 16,83 17,51

Apóptosis tardía/necrosis, %

3,13 4,98 8,29 5,52

Total, %

8,01 14,33 25,12 23,03

Se produce un incremento en el número de células apoptóticas tanto tempranas como tardías en entre las células 15 tratadas con el análogo 1 y el análogo 3 en comparación con el control y el etopósido como control positivo.

Análisis del ciclo celular

Los resultados se ilustran en las Figuras 21, 22, 23 y 24

50 uM

G0/G1,% S+G2+M, %

Control

65,65 34,35

Etopósido

15,91 84,09

Análogo 1

63,26 36,74

Análogo 3

67,52 32,48

100 uM

G0/G1, % S+G2+M, %

Control

62,59 37,41

Etopósido

21,39 78,61

Análogo 1

60,44 39,56

Análogo 3

51,77 48,23

Basándose en los resultados obtenidos, se produjo un bloqueo de la fase G2/M en las células tratadas con etopósido, pero no en las tratadas con el análogo 1. Se produce tal vez el bloqueo de las células tratadas con el análogo 3 a 100 uM.

Claims (16)

1. REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto de la fórmula I,

   5

   donde:

   los enlaces ilustrados por representan la estereoquímica relativa;

   X e Y representan independientemente -O-, -N(Ra)- o bien uno de ellos puede representar alternativamente -N=;

   Ra representa H o C1-6 alquilo opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor;

   R1 y R2 representan independientemente H, C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor), -10 C(O)C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor), -CH2-fenilo (cuya fracción de fenilo es opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes seleccionados entre halo y C1-3 alquilo), o, R1 y R2 pueden representar conjuntamente un grupo enlazador de C1-2 alquileno para formar, junto con los grupos X e Y, un anillo de cinco o seis miembros;

   R3 a R10 representan independientemente H, halo, -ORb, -N(Rc)Rd, C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o 15 más átomos de flúor) o -CH2-fenilo (cuya fracción de fenilo es opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes seleccionados entre halo y C1-3 alquilo); o

   dos grupos cualesquiera adyacentes R6 a R9 pueden estar enlazados para formar otro anillo de entre 3 y 8 miembros que contiene opcionalmente entre uno y tres dobles enlaces, que contienen opcionalmente entre uno y cuatro heteroátomos, siendo opcionalmente el propio anillo sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados entre halo 20 y C1-4 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor);

   Rb representa H, C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor) o -C(O)C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor);

   Rc y Rd representan independientemente H o C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor);

   R11 y R12 representan independientemente H, C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor), 25 -C(O)C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor), fenilo (opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados entre halo y C1-3 alquilo) o -CH2-fenilo (cuya fracción de fenilo es opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes seleccionados entre halo y C1-3 alquilo);

   R13 y R14 representan independientemente H, C1-6 alquilo (opcionalmente sustituido por uno o más átomos de flúor) o -CH2-fenilo (cuya fracción de fenilo es opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes seleccionados entre 30 halo y C1-3 alquilo),

   o una sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero o tautómero de los mismos.
2. 2. Un compuesto de la fórmula I, conforme a la definición de la Reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero o tautómero del mismo, siempre que el compuesto no sea:
3. 3. Un compuesto de la fórmula I, conforme a las Reivindicaciones 1 o 2, donde el centro quiral de la posición 5 5 se encuentra en la configuración S y el centro quiral de la posición 9a se encuentra en la configuración S.
4. 4. Un compuesto de la fórmula I, conforme a las Reivindicaciones 1 o 2, donde el centro quiral de la posición 5 se encuentra en la configuración R y el centro quiral de la posición 9a se encuentra en la configuración R.
5. 5. Un compuesto conforme a cualesquiera de las Reivindicaciones 1 a 4 donde R1 y R2 representan independientemente: H; C1-6alquilo no sustituido; -C(O)C1-6 alquilo no sustituido; -CH2-fenilo no sustituido; o R1 y R2 10 pueden representar conjuntamente un grupo enlazador de C1-2alquileno.
6. 6. Un compuesto como el reivindicado en cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, donde R3 a R10 representan independientemente: H; halo; -ORb; C1-6 alquilo no sustituido; o -CH2-fenilo no sustituido.
7. 7. Un compuesto como el reivindicado en cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, donde Rb representa H o C1-6 alquilo no sustituido y/o Rc y Rd representan independientemente H o C1-6 alquilo no sustituido. 15
8. 8. Un compuesto como el reivindicado en cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, donde R11 y R12 representan independientemente: H; C1-6alquilo no sustituido; o fenilo no sustituido y/o R13 y R14 representan independientemente H o C1-6 alquilo no sustituido.
9. 9. Una formulación farmacéutica incluyendo un compuesto de la fórmula I, tal y como se define en cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, o una sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero o 20 tautómero del mismo, en combinación con un adyuvante, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable.
10. 10. Un compuesto, como el definido en cualesquiera de las Reivindicaciones 1 a 8, o una sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero o tautómero del mismo, para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer.
11. 11. Un compuesto para un uso como el reivindicado en la Reivindicación 10, donde el cáncer es hemangioma, 25 adenoma hepatocelular, hemangioma cavernoso, hiperplasia nodular focal, neuromas acústicos, neurofibroma, adenoma del conducto biliar, cistanoma del conducto biliar, fibroma, lipomas, leiomiomas, mesoteliomas, teratomas, mixomas, hiperplasia regenerativa nodular, tracomas, granulomas piogénicas, leucemia, síndromes mielodisplásicos (MDS), cáncer de próstata, cáncer de mama, cáncer de piel, cáncer de hueso, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, cáncer cerebral, cáncer de laringe, vejiga, vesícula biliar, ovario, cuello de útero, páncreas, recto, paratiroide, tiroide, 30 esófago, adrenal, tejido neural, cabeza y cuello, colon, estómago, bronquios, riñones, carcinoma de células basales, carcinoma de células escamosas de tipo tanto ulcerativo como papilar, carcinoma de piel metastásico, osteosarcoma, sarcoma de Ewing, sarcoma de células reticulares, mieloma, tumor de células gigantes, cáncer de pulmón microcítico, cáncer de pulmón no microcítico, cálculos biliares, tumor de células de los islotes, tumor cerebral primario, tumores linfocíticos y granulocíticos agudos y crónicos, tumor de células pilosas, adenoma, hiperplasia, 35 carcinoma medular, feocromocitoma, neuroma mucoso, ganglioneuromas intestinales, tumor hiperplásico del nervio córneo, hábito marfanoide, tumor de Wilms, seminoma, tumor de ovario, tumor leiomiomatoso, displasia cervical y carcinoma in situ, neuroblastoma, retinoblastoma, sarcoma de tejidos blandos, carcinoide maligno, lesión de piel

    tópica, micosis fungoide, rabdomiosarcoma, sarcoma de Kaposi, sarcoma osteogénico y otros tipos de sarcoma, hipercalcemia maligna, tumor de células renales, policitemia vera, adenocarcinoma, glioblastoma multiforma, leucemias, linfomas, melanomas malignos, carcinomas epidermoides y otros carcinomas y sarcomas.
12. 12. Un compuesto como el que se define en cualesquiera de las Reivindicaciones 1 a 8 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento o la prevención de una enfermedad para la 5 que resulta deseable o se requiere la inhibición de la angiogénesis.
13. 13. El uso de un compuesto como el que se define en cualesquiera de las Reivindicaciones 1 a 8 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, estereoisómero o tautómero del mismo, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención del cáncer.
14. 14. Un compuesto para un uso como el reivindicado en cualesquiera de las Reivindicaciones 10 a 12 o el uso 10 de un compuesto como el reivindicado en la Reivindicación 13, donde el rango la dosis se encuentra entre 0,01 mg y 10 g; o entre 1 mg/kg y 1000 mg/kg.
15. 15. Un producto de combinación que comprende:

    (A) un compuesto de la fórmula I como el que se define en cualesquiera de las Reivindicaciones 1 a 8 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, estereoisómero o tautómero del mismo; y 15

    (B) un agente o agentes útiles para el tratamiento o la prevención de un cáncer,

    donde cada uno de los componentes (A) y (B) está formulado por separado o en combinación con un adyuvante, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable.
16. 16. Un proceso para la preparación de un compuesto de la fórmula I (o enantiómero individual del mismo) como el que se define en cualesquiera de las Reivindicaciones 1 a 8, que comprende además 20 uno de los métodos siguientes:

    (i) para la preparación de compuestos de la fórmula I en la que R1 y R2 están enlazados, se puede llevar a cabo la reacción de un compuesto de la fórmula I en la que tanto R1 como R2 representan hidrógeno (o un derivado protegido del mismo), con un compuesto de la fórmula II,

    L1-R1/2- L2 II 25

    donde L1 y L2 representan independientemente grupos salientes adecuados, y R1/2 representa C1-2alquileno (tal y como se define en la Reivindicación 1 con respecto al enlace de R1 y R2).

    (ii) para la preparación de compuestos de la fórmula I, o derivados protegidos de los mismos, 1) se realiza una reacción de un compuesto de la fórmula III,

    III 30

    o un enantiómero individual del mismo, donde L3 representa un grupo saliente adecuado, y R1, R2, R3, R4, R5, R11, R13, R14, X y Y son tal y como se define en la Reivindicación 1, con un compuesto de la fórmula IV,

    IV

    donde R6, R7, R8, R9, R10 y R12 son tal y como se define en la Reivindicación 1, con el objeto de producir un compuesto de la fórmula V;

    2) se realiza una ciclación intramolecular de un compuesto de la fórmula V,

    V

    o un enantiómero individual del mismo, o una sal del mismo, donde R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, X e Y son tal y como se define en la Reivindicación 1, con el objeto de producir compuestos de la fórmula I.

    (iii) para la preparación de compuestos de la fórmula I, en la que R11 y/o R12 representan un sustituyente distinto de hidrógeno, se lleva a cabo la reacción del correspondiente compuesto de la fórmula I, en la que R11 y/o R12 representa hidrógeno, con un compuesto (o dos compuestos diferentes) de la fórmula VA,

    R11/12-L4 VA

    donde R11/12 representa R11 o R12 (dependiendo de la posición en la que se desee la unión) tal y como se definen en la Reivindicación 1, siempre que no represente hidrógeno.