ES2473792T3 - Compuestos cin�micos y derivados de los mismos para la inhibición de la histona desacetilasa - Google Patents

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Abstract

Compuesto representado por la fórmula siguiente (I):**Fórmula** en la que R1 es hidrógeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo C3-8, un carbociclo insaturado con 5 miembros o 6 miembros, o un heterociclo con 5 miembros o 6 miembros; X es C, O, N o S; Y es O, NH o alquilo O-C1-4; n es un número entero comprendido entre 0 y 10; m es un número entero comprendido entre 0 y 5; R2 y R3 son independientemente alquilo C1-6; R4 es cicloalquilo C5-6 o un carbociclo insaturado de 5 miembros o 6 miembros, o un heterociclo que puede estar sustituido con un halógeno, CF3, OR7 o NR7R8, en el que R7 y R8 son independientemente hidrógeno o alquilo C1-6; R5 es OH, NH2 o cicloalquilo C5-6, un carbociclo insaturado de 5 miembros o 6 miembros o un heterociclo en el que el cicloalquilo, el carbociclo y el heterociclo pueden estar opcionalmente sustituidos con un halógeno, NH2, NO2, alcoxi C1-6, alquiltio C1-6, OR7, NR7R8 o CF3; y R6 es H, alquilo C1-10 que puede estar sustituido con hidroxi o alquenilo C2-10, o junto con R1 ser -C2H2-; y sales, estereoisómeros, enantiómeros, profármacos y solvatos de los mismos farmacéuticamente aceptables.

Description

Compuestos cin�micos y derivados de los mismos para la inhibición de la histona desacetilasa
CAMPO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se refiere a nuevos compuestos cin�micos que resultan útiles como sustancias para la prevención o el tratamiento de enfermedades relacionadas con la histona desacetilasa (HDAC). Se pueden utilizar asimismo como sustancias para aumentar la proliferaci�n de las neuritas. En particular, se pueden utilizar como fármacos antineopl�sicos, antidiab�ticos o para el tratamiento de trastornos neurodegenerativos tales como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Huntington, ataxias espinocerebelosas (SCA) y la atrofia muscular espinal humana (SMA).
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
El ADN eucariota se encuentra muy organizado y empaquetado en el núcleo. La organización y el empaquetamiento se alcanzan mediante la adición de proteínas, entre ellas las histonas del núcleo H2A, H2B, H3 y H4, que constituyen una estructura compleja, la cromatina, junto con el ADN. La modificación de las histonas del núcleo es de fundamental importancia para los cambios de la conformación de la cromatina. Se relaciona el nivel de acetilaci�n con la actividad de transcripción y de este modo la acetilaci�n provoca una conformación abierta de la cromatina que permite el acceso a la maquinaria de transcripción a los promotores. La histona desacetilasa (HDAC) y la histona acetiltransferasa (HAT) son enzimas que influyen en la transcripción desacetilando o acetilando selectivamente los grupos ε-amino de la lisina que se encuentran en la proximidad de la zona aminoterminal de las proteínas histonas. Las HDAC constituyen una familia de 18 enzimas (isoformas) que pueden actuar como reguladores principales en muchas enfermedades, entre ellas el cáncer, ya que se encuentran implicadas en el control de la expresión g�nica. Se han relacionado las alteraciones de las HDAC con una gran variedad de c�nceres humanos. Parece ser que las enzimas o isoformas de la HDAC est�n implicadas en muchos tipos distintos de cáncer.
Se est� empezando a considerar ciertos inhibidores de la histona desacetilasa (HDAC) como una nueva clase interesante de potenciales antineopl�sicos para el tratamiento de tumores malignos sólidos y hem�ticos. En los últimos años, se ha identificado un número cada vez mayor de inhibidores de la HDAC estructuralmente diversos. Estos inhiben la proliferaci�n y provocan la diferenciación y/o la apoptosis de las células tumorales en los cultivos y en modelos con animales. La inhibición de la HDAC provoca que las histonas nucleares acetiladas se acumulen tanto en los tejidos tumorales como en los sanos, proporcionando un marcador indirecto de la actividad biológica de los inhibidores de la HDAC in vivo. Los efectos de los inhibidores de la HDAC en la expresión g�nica son muy selectivos, provocando la activación de la transcripción de ciertos genes tales como el inhibidor p21WAF1/CIP1 de la cinasa dependiente de ciclina, pero la represión de los demás. La inhibición de la HDAC provoca la acetilaci�n de no únicamente las histonas sino también de factores de la transcripción tales como p53, GATA -1 y los α-receptores estrog�nicos. La importancia funcional de la acetilaci�n de las proteínas no histonas y de los mecanismos precisos por los que los inhibidores de la HDAC provocan la interrupción de la proliferaci�n, la diferenciación y/o la apoptosis celular en los tumores constituyen hoy en día un tema en el que se centra la investigación. Se ha demostrado que los inhibidores de la HDAC que se encuentran sometidos actualmente a ensayos cl�nicos presentan actividad y representan una clase de antineopl�sicos dirigidos a nivel molecular con potencial cuya eficacia se basa en un nuevo mecanismo de acción.
Un artículo publicado en Medicinal Research Reviews, vol. 26, n.� 4, pág. 397-413, 2006 indica que se han descrito cuatro clases de inhibidores de la HDAC, ácidos grasos de cadena corta, ácidos hidrox�micos, benzamidas y p�ptidos cíclicos. Los compuestos polares híbridos basados en el ácido hidrox�mico (HPC) son inhibidores de la HDAC y provocan la diferenciación en concentraciones micromolares o inferiores (Journal of the National Cancer Institute, Vol. 92, No. 15, 2 de Agosto de 2000, pág. 1210-1216). Las patentes US n.� 6.174.905, EP 0847992, JP 258863/96 y la solicitud japonesa n.� 10138957 dan a conocer que los derivados de la benzamida provocan la diferenciación celular e inhiben la HDAC. El SNDX-275 (Entinostat), que se describe en particular en el ejemplo 48 de la patente US n.� 6.174.905, se ha convertido en candidato a fármaco antineopl�sico. El documento WO 01/38322 da a conocer compuestos adicionales que actúan de inhibidores de la HDAC. Se ha descrito en Hum Genet, 2006, 120, pág. 101-110 que la benzamida M344 regula por aumento la expresión de la proteína SMN2 en fibroblastos procedentes de pacientes de SMA hasta 7 veces después de 64 horas de tratamiento. Se ha descrito que el butirato de sodio mejora la expresión fenot�pica de la atrofia muscular espinal y bulbar en un modelo con ratones transg�nicos (Human Molecular Genetics, 2004, Vol. 13, No. 11, pág. 1183-1192). Se ha descubierto que la tricostatina A, un inhibidor de la histona desacetilasa, provoca la degradación de la ciclina D1 dependiente de ubiquitina en células de cáncer de mama MCF-7 (Molecular Cancer 2006, 05:08). La patente US n.� 7.169.801 da a conocer que los compuestos que presentan la fórmula Z-Q-L-M o Z-L-M se pueden utilizar para inhibir la histona desacetilasa. La patente US n.� 6.888.027 comprende una familia de inhibidores de la HDAC sulfonamida, entre ellos el PXD101. La patente europea EP 1 301 184 se refiere a la utilización del ácido valproico y derivados como inhibidores de la HDAC en el tratamiento de tumores sólidos. El documento WO0222577 indica que los compuestos de hidroxamato son inhibidores de la histona desacetilasa y resultan útiles como fármacos útiles para el tratamiento de enfermedades proliferativas. Además,
se describe la actividad antidiab�tica de los inhibidores de la HDAC en FASEB Journal, 2008, Vol. 22, pág. 944945 y Diabetes, 2008, Vol. 57, pág. 860-867.
La N,N'-hexametilenbisacetamida (HMBA) es un inductor eficaz de la diferenciación en diversas estirpes celulares transformadas. Las patentes US n.� 6.087.367 y RE38506 indican que un cierto número de compuestos relacionados con la HMBA con grupos polares separados por enlaces apolares en una base molar, son tan activos o 100 veces más activos que la HMBA. Además, la Patente US n.� 7.399.787 indica que los inhibidores de la histona desacetilasa relacionados con la HMBA, tales como el ácido hidroxamida suberoilanilida (SAHA) tienen la capacidad de provocar la interrupción de la proliferaci�n, la diferenciación y/o la apoptosis celular en los tumores. Además, Laurence Catley et al. describen que el NVP-LAQ824 (un derivado del ácido hidrox�mico) y el NVP-LAQ824 (un derivado del ácido 4-aminometilcin�mico hidrox�mico) son inhibidores potentes de la histona desacetilasa (Blood, 1 de octubre de 2003, vol. 102, n.� 7, pág. 2615-2622). George P. et al. indican que el LBH589 provoca la inhibición y la remisión de la proliferaci�n de las estirpes celulares tumorales al activar la apoptosis y actualmente se est� analizando el LBH589 en ensayos cl�nicos de fase I como antineopl�sico (Blood 105(4): 1768/76 15 de febrero 2005). Otros inhibidores de la histona desacetilasa conocidos en la técnica comprenden la piroxamida, el ácido M-carboxicin�mico bishidroxamida (CBHA), la tricostatina A (TSA), la tricostatina C, el ácido salicilihidrox�mico (SBHA), ácido azelaicobishidrox�mico (ABHA), el ácido azelaico-1-hidroxamato-9-anilida (AAHA), el ácido 6-(3clorofenilureido)carpoicohidrox�mico (3C1-UCHA), la oxamflatina, el A-161906, Scriptaid, el PXD-101, el p�ptido que contiene ácido hidrox�mico cíclico (CHAP), el ITF-2357, el MW2796, el MW2996, la trapoxina A, el FR901228 (FK 228 o depsip�ptido), el FR225497, la apicidina, el CHAP, la toxina HC, el WF27082, la clamidocina, el butirato de sodio, el isovalerato, el valerato, el 4-fenilbutirato (4 -PBA), 4-fenilbutirato de sodio (PBS), el butirato de arginina, el propionato, la butiramida, la isobutiramida, el fenilacetato, el 3-bromopropionato, la tributirina, el ácido valproico, el valproato, el CI-994, el derivado 3'-amino del MS-27-275, el MGCD0103 y la depudecina (publicación US n.� 20080242648). A partir del documento WO 2008/087514 se conocen derivados de la 3-fenilacrilamida como inhibidores de la HDAC, en los que el grupo fenilo se puede encontrar m-sustituido por un grupo heteroc�clico, un grupo carbox�lico o un grupo alquilo. El documento WO 03/087066 da a conocer derivados del ácido hidrox�mico α-y β-insaturado y su uso como inhibidores de la histona desacetilasa.
Sin embargo, existe todavía la necesidad de desarrollar una nueva clase de inhibidores de la HDAC para prevenir o tratar c�nceres y otras enfermedades en las que interviene la HDAC.
SUMARIO DE LA INVENCIÓN
El objetivo de la presente invención es proporcionar un grupo de compuestos representados por la fórmula siguiente (I):
O
R5 Y
R6
O (CH2)m
X R4 R1O (CH2)n
CH
R2 R3 (I)
y sales, estereois�meros, enanti�meros, prof�rmacos y solvatos de los mismos farmac�uticamente aceptables. Los compuestos resultan útiles como sustancias para mejorar la proliferaci�n de las neuritas y la prevención o el tratamiento de enfermedades relacionadas con la HDAC.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
La figura 1 muestra los efectos del NBM-HB-OS01 (2h) en la inhibición de la proliferaci�n celular de diversas estirpes de células cancerosas. Se demostr� la inhibición de las células cancerosas en células de glioma de rata C6 y en células de cáncer de colon humano HT-29 una vez se hubieron tratado con diversas concentraciones de NBM-HB-OS01 durante 48 horas y los resultados se muestran en las figuras 1(a) y (b), respectivamente. La figura 1(c) muestra los resultados de un análisis del flujo de A549 tratadas con diversas concentraciones de NBM-HB-OS01 durante 24 horas. La figura 1(d) muestra cómo el NBM-HB-OS01 aument� la expresión del gen p21. Se trataron células de glioma de rata C6 con NBM-HB-OS01 durante 48 horas y se utilizó GAPDH como control interno. La figura 1(e) muestra los resultados del tratamiento de células de glioma de rata C6 con diversas concentraciones de NBM-HB-OS01 durante 72 horas. Se detect� la acumulación de la histona H3 hiperacetilada, la histona H4 hiperacetilada y p21 de un modo que dependía de la dosis por mediante inmunoelectrotransferencia de tipo Western. La figura 1(f) muestra los resultados del tratamiento de células de glioma de rata C6 con 10 μg/ml de NBM-HB-OS01 durante 1, 2, 3 y 4 horas. Se observ� la acumulación de H3 acetilada, H4 acetilada, tubulina acetilada y p21 de un modo que dependía de la dosis. La β-actina era el control interno. La figura 1(g) muestra los resultados del tratamiento de células de cáncer de mama humano MCF-7 (receptor de estr�genos positivo) con 10 μg/ml de NBM-HB-OS01 durante 24 horas. Se observ� la hiperexpresi�n de la proteína gelsolina.
La figura 2 muestra los efectos del NBM-C-BX-OS01 (4a) en la inhibición de la proliferaci�n celular de diversas estirpes de células cancerosas. Se demostr� la inhibición de la proliferaci�n de la células cancerosas tras el tratamiento de las estirpes celulares con diversas concentraciones de NBM-C-BX-OS01 en células de glioma de rata C6, en células de cáncer de mama humano MCF-7 durante 24 horas y en células de cáncer de pulmón humano A549 durante 48 horas. Los resultados se presentan en las figuras 2(a), (b) y (c), respectivamente. La figura 2(d) muestra los resultados del tratamiento de células MCF-7 con 10 μg/ml de NBM-C-BX-OS01 durante 1, 2, 3 y 4 horas. Se observ� el aumento de la expresión de H3 acetilada, H4 acetilada, tubulina acetilada y p21 de un modo que dependía de la dosis. La β-actina era el control interno. La figura 2(e) muestra los resultados del tratamiento de células de glioma de rata C6 con 7,5 μg/ml de NBM-C-BX-OS01 durante 6 horas. Se observ� la hiperexpresi�n de la proteína tubulina acetilada.
La figura 3 muestra los efectos del NBM-C-BA-OS01 (17a) en la inhibición de la proliferaci�n celular de tres estirpes de células cancerosas. En las figuras 3(a) y (b) se muestran los cambios morfológicos de las células del cáncer de mama humano MCF-7 y de las células del glioma de rata C6 como respuesta al NBM-C-BA-OS01 (2,5, 5,0, 7,5 μg/ml) durante 72 horas. La hiperacetilaci�n de la proteína histona H3 se detect� tratando las células de cáncer de pulmón humano A549 durante 6 horas con NBM-C-BA-OS01 de 7,5 μg/ml. Los resultados se presentan en la figura 3(c).
La figura 4 muestra la inhibición de la proliferaci�n celular mediante el tratamiento con diversos derivados del NBM-C-BA-OS01. El tratamiento con 7,5 μg/ml de NBM-C-BA-OS01, NBM-C-BCA-OS01 (17d) y NBM-C-BMA-OS01 (17b) inhibió la proliferaci�n de las células de glioma de rata C6 en 48 horas.
La figura 5 muestra el efecto de los derivados del NBM-HB-OS01 en la inhibición de la proliferaci�n celular. La figura 5(a) muestra cómo el NBM-C-BA-OS01 (5 μg/ml), el NBM-C-BCX-OS01 (4d) (2,5, 5,0 μg/ml) y el NBM-C-BMX-OS01 (4b) (2,5, 5,0 μg/ml) inhibieron la proliferaci�n celular de las células de glioma de rata C6 en 24 horas. La figura 5 (b) muestra cómo el tratamiento con NBM-C-BX-OS01 (7,5 μg/ml), NBM-C-BCX-OS01 (2,5, 5,0, 7,5 μg/ml) y NBM-C-BMX-OS01 (2,5, 5,0, 7,5 μg/ml) durante 72 horas provocó la inhibición de la proliferaci�n de las células A549 de un modo dependiente de la dosis. Se pueden observar unos resultados similares en el tratamiento de células de glioma de rata C6 con NBM-C-BCX-OS01 y NBM-C-BMX-OS01 con varias concentraciones durante 24 horas, tal como se muestra en la figura 5(c). La figura 5(d) muestra los resultados del tratamiento de células de glioma humano Hs683 con NBM-C-BX-OS01 (1,25, 2,5, 5,0 μg/ml) durante 72 horas y la figura 5(e) muestra los resultados del tratamiento de células de glioblastoma humano 05-MG con NBM-C-BCX-OS01 (1,0, 2,0, 4,0 μg/ml) y NBM-C-BMX-OS01 (1,0, 2,0, 4,0 μg/ml) durante 72 horas. Se observ� inhibición de la proliferaci�n celular. Las células tratadas contadas mediante un ensayo de exclusión con azul de tripano se representan en la figura 5(f).
La figura 6 muestra los efectos de los derivados del NBM-HB-OS01 en la actividad biológica en diversas estirpes celulares de cáncer humano. Tal como se representa en la figura 6(a), se observ� la inhibición de la proliferaci�n de las células de cáncer de mama humano MDA-MB-231 células tras tratar las células con diversas concentraciones de NBM-C-BCX-OS01, NBM-C-BMX-OS01 y NBM-C-BFX-OS01 (4c) durante 72 horas. Los derivados de NBM-HB-OS01 inhibieron significativamente la proliferaci�n de las células del cáncer de mama humano MDA-MB-231. Las células tratadas contadas mediante un ensayo de exclusión con azul de tripano se representan en la figura 6(b). Las figuras 6(c) y (d) presentan los resultados del tratamiento de las células A549 del cáncer de pulmón humano y de las células de glioblastoma humano 05-MG con NBM-C-BCX-OS01 y NBMC-BMX-OS01 durante 72 horas, respectivamente. La figura 6(e) muestra cómo el NBM-C-BCX-OS01 detuvo el crecimiento de las células de glioma humano Hs683. Se trataron las células de glioma humano Hs683 con NBMC-BCX-OS01 (1,0, 2,0, 4,0 μg/ml) durante 72 horas.
La figura 7 muestra los efectos del NBM-C-BCX-OS01 y el NBM-C-BMX-OS01 en las histonas y proteínas relacionadas. Se trataron células de glioma humano Hs683 con distintas concentraciones de NBM-C-BCX-OS01 y NBM-C-BMX-OS01 durante 72 h. Tal como se representa en la figura 7(a), se detect� la inducción de las proteínas Hsp90 acetilada y gelsolina de un modo dependiente de la dosis, es decir, las proteínas Hsp90 y CTPS disminuyeron de un modo dependiente de la dosis. Se puede observar en la figura 7(b) que la expresión de p21, tubulina acetilada, histona H3 acetilada, histona H4 acetilada y aument� significativamente de un modo dependiente de la dosis. Se utilizó SAHA como control positivo y β-actina como control interno.
La figura 8 representa los efectos de: (a) NBM-T-BMX-OS01 (4b), (b) NBM-T-BCX-OS01 (4d), (c) NBM-T-BBX-OS01 (4e) y NBM-C-BBX-OS01 (4e), y (d) NBM-I-BCX-OS01 en la inhibición de la proliferaci�n celular (véanse las figuras 8(a) a (d)). Se cultivaron células de glioma humano Hs683 en presencia de los compuestos anteriores con diversas concentraciones (1,0, 2,0 y 4,0 μg/ml) durante 72 horas. Las células tratadas contadas mediante un ensayo de exclusión con azul de tripano se representan en la figura 8(e).
La figura 9 representa los efectos de (a) NBM-C-BBX-OS01 y NBM-T-BCX-OS01, (b) NBM-T-BBX-OS01 y NBMI-BCX-OS01, (c) NBM-T-BMX-OS01, (d) NBM-I-BCX-OS01 y NBM-T-BMX-OS01 y (e) NBM-T-BBX-OS01 en la inhibición de las células de cáncer de mama humano MDA-MB-231 (véanse las figuras 9(a) a (e)). Los resultados del ensayo de exclusión con azul de tripano se representan en la figura 9(f).
La figura 10 representa cómo (a) NBM-I-BCX-OS01 y NBM-T-BMX-OS01, y (b) NBM-T-BBX-OS01 y NBM-C-BBX-OS01 interrumpieron las células de cáncer de pulmón humano A549 en las fases S y G2/M (véanse las figuras (a) y (b)). Los resultados fueron similares a los obtenidos con las células de cáncer de mama humano MCF-7 (véanse las figuras 10(c) y (d)).
DESCRIPCI�N DETALLADA DE LA INVENCIÓN
La presente invención se refiere a nuevos derivados cin�micos, que son útiles como sustancias destinadas mejorar el crecimiento de las neuritas, y prevenir y tratar enfermedades relacionadas con la HDAC, en particular, enfermedades neurodegenerativas, accidentes cerebrovasculares, diabetes, tumores u otras enfermedades proliferativas celulares. Los compuestos de la presente invención son potentes en la inhibición del crecimiento de células cancerosas mediante la vía de la diferenciación. En particular, se pueden utilizar como fármacos para el tratamiento de trastornos neurodegenerativos tales como: la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Huntington, ataxias espinocerebelosas (SCA) y la atrofia muscular espinal humana (SMA).
COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN
Por consiguiente, la presente invención se refiere a los compuestos representados por la fórmula siguiente (I):
O
R5 Y R6
O (CH2)m
X R4 R1O (CH2)n
CH
R2 R3 (I)
en la que R1 es hidrógeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo C5-6, un carbociclo insaturado con 5 miembros o 6 miembros, o un heterociclo con 5 miembros o 6 miembros; X es C, O, N o S; Y es O, NH o alquilo O-C1-4; n es un número entero comprendido entre 0 y 10; m es un número entero comprendido entre 0 y 5; R2 y R3 son independientemente alquilo C1-6; R4 es cicloalquilo C5-6 o un carbociclo insaturado de 5 miembros o 6 miembros, o un heterociclo que puede estar sustituido con un halógeno, CF3, OR7 o NR7R8, en el que R7 y R8 son independientemente hidrógeno o alquilo C1-6; R5 es OH, NH2 o cicloalquilo C5-6, un carbociclo insaturado de 5 miembros o 6 miembros o un heterociclo en el que el cicloalquilo, el carbociclo y el heterociclo pueden estar opcionalmente sustituidos con un halógeno, NH2, NO2, alcoxi C1-6, alquiltio C1-6, OR7, NR7R8 o CF3; y R6 es H, alquilo C1-10 que puede estar sustituido con hidroxi o alquenilo C2-10, o junto con R1 ser -C2H2-; y sales, estereois�meros, enanti�meros, prof�rmacos y solvatos de los mismos farmac�uticamente aceptables.
En el contexto de la presente memoria descriptiva, el término "alquilo" significa cadenas de hidrocarburos lineales o ramificadas. El alquilo es preferentemente alquilo C1-10. Preferentemente, se selecciona el número de carbonos del grupo alquilo entre 1 y 8; más preferentemente, es alquilo C1-6 o alquilo C1-4. Los ejemplos de
grupos alquilo comprenden metilo (-CH3), etilo (-CH2CH3), propilo (-CH2CH2CH3), isopropilo (CH3)2CH and butilo (-C4H9).
En el contexto de la presente memoria descriptiva, el término "alquenilo" significa grupos hidrocarb�ricos insaturados de cadena lineal y ramificada, en los que la insaturaci�n se encuentra únicamente presente como dobles enlaces. Según la invención, el alquenilo comprende uno o más dobles enlaces. El alquenilo es preferentemente alquenilo C2-16. Más preferentemente, se selecciona el número de carbonos del grupo alquenilo entre 2 y 12. Los ejemplos de grupos alquenilo comprenden etenilo (-CH=CH2), propenilo (-CH=CHCH3 o-CH2CH=CH2), butenilo (-CH2CH=CHCH3 o –CH=CHCH2CH3 o –CH2CH2CH=CH2), -CH2CH=C(CH3)CH3,-CH2-CH=CH-CH2-CH2-CH=CH-CH3 y-CH2-CH=C(CH3)-CH2-CH2-CH=C(CH3)-CH3.
En el contexto de la presente memoria descriptiva, el término "cicloalquilo" significa un anillo alif�tico (anillo carboc�clico saturado). Más preferentemente, se selecciona el número de carbonos del grupo cicloalquilo entre 3 y 8. Más preferentemente, se selecciona el número de carbonos del grupo cicloalquilo entre 5 y 6. Los ejemplos de grupos cicloalquilo comprenden ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo.
En el contexto de la presente memoria descriptiva, el término "carbociclo insaturado" comprende un sustituyente cíclico que consiste en un átomo de carbono y un átomo de hidrógeno, y la parte cíclica es un ciclo insaturado, por ejemplo, un arilo o un cicloalquenilo o similar. El término "cicloalquenilo" comprende alquenilo que es el cicloalquilo que presenta uno o más dobles enlaces, por ejemplo, ciclopropenilo (por ejemplo, 1-ciclopropenilo), ciclobutenilo (por ejemplo, 1-ciclobutenilo), ciclopentenilo (por ejemplo, 1-ciclopenten-1-ilo, 2-ciclopenten-1-ilo, y 3-ciclopenten-1-ilo), ciclohexenilo (por ejemplo, 1-ciclohexen-1-ilo, 2-ciclohexen-1-ilo, y 3-ciclohexen-1-ilo), cicloheptenilo (por ejemplo, 1-cicloheptenilo), ciclooctenilo (por ejemplo, 1-ciclooctenilo) o similares. Se prefieren en particular 1-ciclohexen-1-ilo, 2-ciclohexen-1-ilo o 3-ciclohexen-1-ilo. El término "arilo" comprende anillos simples y condensados en los que por lo menos un anillo es aromático, por ejemplo, fenilo, naftilo y tetrahidronaftalenilo.
En el contexto de la presente memoria, la frase "heterociclo de 5 miembros o 6 miembros" se refiere a un anillo cíclico de cinco o seis átomos, en el que por lo menos un átomo del anillo es un hetero�tomo. El heterociclo de 5 miembros o 6 miembros puede ser aromático o no aromático y estar saturado o insaturado. Preferentemente, el hetero�tomo se selecciona de entre N, O y S. Los ejemplos de heterociclo comprenden, pero sin limitarse a los mismos, furilo (por ejemplo, 2-furilo, 3-furilo), tienilo (por ejemplo, 2-tienilo, 3-tienilo), pirrolilo (por ejemplo, 1pirrolilo, 2-pirrolilo, 3-pirrolilo), imidazolilo (por ejemplo, 1-imidazolilo, 2-imidazolilo, 4-imidazolilo), pirazolilo (por ejemplo, 1-pirazolilo, 3-pirazolilo, 4-pirazolilo), triazolilo (por ejemplo, 1,2,4-triazol-1-ilo, 1,2,4-triazol-3-ilo, 1,2,4triazol-4-ilo), tetrazolilo (por ejemplo, 1-tetrazolilo, 2-tetrazolilo, 5-tetrazolilo), oxazolilo (por ejemplo, 2-oxazolilo, 4-oxazolilo, 5-oxazolilo), isoxazolilo (por ejemplo, 3-isoxazolilo, 4-isoxazolilo, 5-isoxazolilo), tiazolilo (por ejemplo, 2-tiazolilo, 4-tiazolilo, 5-tiazolilo), tiadiazolilo, isotiazolilo (por ejemplo, 3-isotiazolilo, 4-isotiazolilo, 5-isotiazolilo), piridilo (por ejemplo, 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo), piridazinilo (por ejemplo, 3-piridazinilo, 4-piridazinilo), pirimidinilo (por ejemplo, 2-pirimidinilo, 4-pirimidinilo, 5-pirimidinilo), furazanilo (por ejemplo, 3-furazanilo), pirazinilo (por ejemplo, 2-pirazinilo), oxadiazolilo (por ejemplo, 1,3,4-oxadiazol-2-ilo), 1-pirrolinilo, 2-pirrolinilo, 3pirrolinilo, pirrolidino, 2-pirrolidinilo, 3-pirrolidinilo, 1-imidazolinilo, 2-imidazolinilo, 4-imidazolinilo, 1-imidazolidinilo, 2-imidazolidinilo, 4-imidazolidinilo, 1-pirazolinilo, 3-pirazolinilo, 4-pirazolinilo, 1-pirazolidinilo, 3-pirazolidinilo, 4pirazolidinilo, piperidino, 2-piperidilo, 3-piperidilo, 4-piperidilo, piperazino, 2-piperazinilo, 2-morfolinilo, 3morfolinilo, morfolino, tetrahidropiranilo o similares.
En el contexto de la presente memoria descriptiva, el término "halógeno" significa flúor, cloro, bromo e yodo.
En el contexto de la presente memoria descriptiva, el término "sal farmac�uticamente aceptable" comprende las realizadas con ácidos y bases orgánicos e inorgánicos. Las sales de adición farmac�uticamente aceptables realizadas con ácidos comprenden las formadas a partir de ácidos minerales tales como los ácidos clorhídrico, bromh�drico, sulfúrico, y fosf�rico; y ácidos orgánicos tales como los ácidos cítrico, tartárico, l�ctico, pir�vico, acético, trifluoac�tico, succ�nico, ox�lico, f�rmico, fum�rico, maleico, oxaloac�tico, metanosulf�nico, etanosulf�nico, p-toluenosulf�nico, bencenosulf�nico e iseti�nico. Las sales farmac�uticamente aceptables realizadas con bases comprenden las sales de amonio, las sales de metales alcalinos tales como las de sodio y potasio, las sales de metales alcalinot�rreos tales como las de calcio y magnesio y las sales con bases orgánicas, entre ellas las sales de aminas primarias, secundarias y terciarias.
En el contexto de la presente memoria descriptiva, el término "solvato" significa un complejo que comprende el compuesto de la presente invención y un disolvente, en el que se hacen reaccionar, o precipitan o cristalizan.
En el contexto de la presente memoria descriptiva, el término "estereois�meros" se refiere a moléculas isom�ricas cuya conectividad atómica es la misma pero cuya disposición atómica en el espacio es distinta.
En el contexto de la presente memoria, el término "enanti�meros" se refiere a estereois�meros que son imágenes especulares no completamente superponibles entre s�, aunque los lados izquierdo y derecho son " los mismos" pero opuestos.
Seg�n la presente invención, se selecciona el compuesto preferido de fórmula (I) de la invención de entre grupo que consiste de los siguientes:
NBM-HB-OS01 (2h)
H3CO O
HN NH OC
Cl
NBM-C-BCA-OS01 (17d)
H2N NH OC
H3CO
O
NBM-C-BA-OS01 (17a)
H2N NH OC
H3CO
O
OCH3
NBM-C-BMA-OS01 (17b)
NBM-C-BX-OS01 (4a)
HO
NH
OC
H3CO O
Cl
NBM-C-BCX-OS01 (4d)
HO
NH
OC
H3CO
O
OCH3
NBM-C-BMX-OS01 (4b)
HO NH
OC
H3CO
O
F
NBM-C-BFX-OS01 (4c)
HO NH
OC
H3CO
O
Br
NBM-C-BBX-OS01 (4e)
O
NBM-T-BX-OS01 (4a)
NBM-T-BA-OS01 (17a)
NBM-T-BCA-OS01 (17d)
NBM-T-BBA-OS01 (17e)
NBM-T-BFA-OS01 (17c)
NBM-T-BMA-OS01 (17b)
O
C
OH
N
H
H3CO
O
Cl
NBM-T-BCX-OS01 (4d)
O
O Li
N H
MeO O
Cl
NBM-T-L-BCX-OS01 (4d-Li+)
O
C
OH
N H
H3CO
O
OCH3
NBM-T-BMX-OS01 (4b)
NBM-T-K-BMX-OS01 (4b-K+)
NBM-T-L-BMX-OS01 (4b-Li+)
NBM-T-BTX-OS01 (4f)
NBM-T-L-BTX-OS01 (4f-Li+)
NBM-T-TCX-OS01 (4i)
NBM-T-L-TCX-OS01 (4i-Li+)
NBM-T-TBX-OS01 (4j)
NBM-T-L-TBX-OS01(4j-Li+)
O
NBM-T-BBX-OS01 (4e)
NBM-T-L-BBX-OS01 (4e-Li+)
O
C
OH
N H
H3CO
O
F
NBM-T-BFX-OS01 (4c)
HO NH OC
H3CO O
Br
NBM-C-BBX-OS01 (4e)
HO NH
OC
H3CO O
F
NBM-C-BFX-OS01 (4c)
O C
OH N H
H3CO O
H3CO
OCH3
OCH3
NBM-T-TMX-OS01 (4g)
COOH
O
C
O-
NH2
+H4N
N
H
H3CO O
OCH3
NBM-T-BMX-L-OS01 (4b-lisina+)
HO
NH
O
O
O
Cl
NBM-I-BCX-OS01 (20)
O
C
OH
N H
O
O O
OCH3
NBM-T-I-BMX-OS01 (33a)
O
O Li
N
H
OCH3
NBM-T-L-I-BMX-OS01 (33a- Li+)
O
NBM-T-I-BBX-OS01 (33c)
O
NBM-T-L-I-BBX-OS01 (33c-Li+)
O
NBM-T-I-BCX-OS01 (33b)
O
C
O Li
N H
O
O O
Cl
NBM-T-L-I-BCX-OS01 (33b- Li+)
5 Según la presente invención, los compuestos de fórmula (I) de la presente invención pueden inhibir la HDAC y, por lo tanto, se pueden utilizar como fármacos para la prevención o el tratamiento de enfermedades asociadas con la histona desacetilasa (HDAC). Además, los compuestos de la presente invención inhiben significativamente la proliferaci�n de diversas estirpes celulares de cáncer, entre ellas las del glioma C6 de rata, el glioblastoma humano, las células de cáncer de mama humano, las células de leucemia humana y las células
10 de melanoma humano. El mecanismo para inhibir la proliferaci�n de las células cancerosas puede utilizar la vía de la diferenciación, en particular, mediante la diferenciación inducida y la expresión regulada de genes reguladores del ciclo celular, comprendiendo los de la p21 y la ciclina B1. Además, los compuestos de fórmula (I) de la presente invención pueden intervenir en la diferenciación neuronal de las células progenitoras neurales y, por lo tanto, se pueden utilizar como fármacos contra accidentes cerebrovasculares y contra enfermedades
15 neurodegenerativas tales como la enfermedad de Huntington y la enfermedad de la poliglutamina. Dichos compuestos se pueden utilizar asimismo para mejorar la memoria a largo plazo. Además, los compuestos de fórmula (I) de la presente invención pueden controlar el equilibro energético de todo el organismo mediante la regulaci�n de la transcripción del GLUT4 y, de este modo, proporcionar nuevos objetivos terapéuticos para el tratamiento de la diabetes de tipo 2.
20 En lo que se refiere a los usos terapéuticos de los compuestos de la presente invención, la dosificación administrada variar�, por supuesto, según el compuesto empleado, el modo de administración, el tratamiento pretendido y el trastorno indicado. La dosis diaria del compuesto de fórmula (I) puede estar comprendida entre 1 mg/kg y 20 mg/kg. La presente invención proporciona los procedimientos para inhibir la HDAC, tratar tumores o
25 enfermedades proliferativas celulares, accidentes cerebrovasculares, diabetes o enfermedades neurodegenerativas tales como la enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington, ataxias espinocerebelosas (SCA) y la atrofia muscular espinal humana (SMA), y mejorar el crecimiento de las neuritas en un paciente, comprendiendo la administración al paciente de una cantidad terapéuticamente efectiva de los compuestos de la presente invención, respectivamente.
S�ntesis general de los compuestos de fórmula I de la invención
Los compuestos de la presente invención se pueden preparar mediante cualquier medio convencional. Los procesos aptos para sintetizar dichos compuestos se proporcionan en los ejemplos. De un modo general, los
35 compuestos de fórmula (I) se pueden preparar según cualquiera de los esquemas de síntesis que se describen a continuación:
Procedimiento general para la preparación de 2
A la mezcla de 1 (2 g, 8,20 mmol) y t-but�xido pot�sico (1,84 g, 16,4 mmol) en DMF seca (20 ml) se añadieron diversos cloruros de bencilo (16,4 mmol), se agit� la solución resultante a temperatura ambiente bajo de
5 nitrógeno durante 6 h y a continuación se diluyó con EtOAc (50 ml), se lav� con dis-H2O (25 ml x3) y se secó sobre Na2SO4. Tras eliminar el EtOAc bajo una presión reducida, se purificó el residuo en gel de sílice (EtOAc: n-hexano = 1:10 ~ 1:1) para proporcionar 2.
2h se puede preparar mediante un procedimiento similar con una temperatura de reacción de 90 �C.
(Z)-2-benzoxi-3-prenil-4-metioxi-t-butilcinamato (2a)
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,50 (1H, d, J=8,7 Hz), 7,43-7,32 (5H, m), 7,06 (1H, d, J=12,4 Hz), 6,67 (1H, d, J=8,7 Hz), 5,82 (1H, d, J=12,4 Hz), 5,15 (1H, t, J=6,5 Hz), 4,82 (2H, s), 3,84 ( (3H, s), 3,35 (2H, d, J=6,7 Hz),
15 1,70 (3H, s), 1,65 (3H, s), 1,44 (9H, s). (cis)
(Z)-2-(4-metoxibenzoxi)-3-prenil-4-metoxi-t-butilcinamato (2b)
OMe
O
MeO
OO (2b)
20 1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,50 (1H, d, J=8,6 Hz), 7,35-7,30 (2H, m), 7,06 (1H, d, J=12,3 Hz), 6,90 (2H, d, J=8,4 Hz), 6,67 (1H, d, J=8,6 Hz), 5,83 (1H, d, J=12,4 Hz), 5,15 (1H, t, J=6,5 Hz), 4,76 (2H, s), 3,86 (3H, s), 3,82 (3H, s), 3,34 (2H, d, J=6,6 Hz), 1,71 (3H, s), 1,65 (3H, s), 1,44 (9H, s). (cis)
(Z)-2-benzoxi-4-metoxi-3-(2-hidroxi-2-metilbutil)bencilcinamato (2h)
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ 7,35 (1H, d, J=8,6 Hz), 7,25-7,12 (10H, m), 7,01 (1H, d, J=12,3 Hz), 6,45 (1H, d, J=8,6 Hz), 5,77 (1H, d, J=12,3 Hz), 4,98 (2H, s), 4,66 (2H, s), 3,68 (3H, s), 1,47 (2H, m), 1,04 (6H, s)
30 Procedimiento general para la preparación de 3
La mezcla de 2 (11,36 mmol) y un 10 % de KOH/MeOH (40 ml) se sometió a reflujo durante la noche bajo N2 y se diluyó a continuación con dis-H2O (100 ml), se acidific� con HCl 2 N a pH 5~6 y se extrajo con EtOAc (50 ml x3), respectivamente La capa combinada de EtOAc se secó en Na2SO4 y se concentr� bajo presión reducida. Se
35 purificó el residuo en gel de sílice (EtOAc: n-hexano = 1: 2) para proporcionar 3.
(Z)-2-benzoxi-3-prenil-4-metoxicinamato
1H-NMR (500 MHz, CDCl3):δ7,63 (1H, d, J=8,6 Hz), 7,42-7,26 (5H, m), 7,25 (1H, d, J=12,5 Hz), 6,80 (1H, d, 5 J=8,7 Hz), 5,88 (1H, d, J=12,5 Hz), 5,16 (1H, t, J=6,6 Hz), 4,82 (2H, s), 3,85 (3H, s), 3,36 (2H, d, J=6,7 Hz), 1,65 (3H, s), 1,62 (3H, s). (cis)
Procedimiento general para la preparación de 4
10 A una disolución de hidróxido pot�sico (637 mg, 11,36 mmol) en MeOH (4 ml) se a�adi� gota a gota hidrocloruro de hidroxilamina (790 mg, 11,36 mmol) y se agit� a continuación en un baño de hielo durante 1 h. La filtración para eliminar la sal blanca proporcion� clorhidrato de hidroxilamina libre en una disolución de MeOH. A la mezcla de 3a (1 g, 2,84 mmol) en THF seco (25 ml) se a�adi� cloroformiato de etilo (0,6 ml, 5,68 mmol) y trietilamina (0,6 ml, 5,68 mmol) y se agit� la disolución durante 0,5 h y a continuación se a�adi� la ´disoluci�n de
15 hidroxilamina libre preparada. Tras reaccionar durante 3 h, la mezcla de la reacción se concentr� bajo una presión reducida para proporcionar un residuo. Se purificó el residuo en gel de sílice (EtOAc: n-hexano = 1: 2) para proporcionar 4a.
(Z)-2-benzoxi-3-prenil-4-metoxi-N-hidroxicinamida (4a)
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,40-7,33 (5H, m), 7,30 (1H, d, J=8,6 Hz), 7,01 (1H, d, J= 12,5 Hz), 6,66 (1H, d, J=8,7 Hz), 5,79 (1H, d, J=12,4 Hz), 5,17 (1H, t, J=6,6 Hz), 4,82 (2H, s), 3,83 (3H, s), 3,37 (2H, d, J=6,7 Hz), 1,69 (3H, s), 1,66 (3H, s); 13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ159,7 (s), 159,2 (s), 155,9 (s), 136,9 (s), 135,9 (d), 131,8 (s),
25 128,6 (d), 128,5 (d), 128,2 (d), 128,1 (d), 128,0 (d), 123,9 (s), 122,7 (d), 121,1 (s), 118,2 (d), 106,8 (d), 76,6 (t), 55,7 (q), 25,7 (q), 23,2 (t), 17,9 (q), 14,4 (q). (cis)
(Z)-2-(4-metoxibenzoxi)-3-prenil-4-metoxi-N-hidroxicinamida (4b)
OMe
O
OH
MeO O N 30 H (4b)
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,35 (1H, d, J=8,6), 7,29 (2H, d, J=8,5 Hz), 6,99 (1H, d, J= 12,5 Hz), 6,89 (2H, d, J=8,6 Hz), 6,66 (1H, d, J=8,6 Hz), 5,79 (1H, d, J=12,4 Hz), 5,17 (1H, t, J=6,8 Hz), 4,76 (2H, s), 3,83 (3H, s), 3,81 (3H, s), 3,37 (2H, d, J=6,6 Hz), 1,71 (3H, s), 1,67 (3H, s). (cis)
(Z)-2-(4-fluorobenzoxi)-3-prenil-4-metoxi-N-hidroxicinamida (4c)
F
O
OH
MeO O N H (4c)
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,40 (1H, d, J=7,8 Hz), 7,36 (2H, d, J=8,5 Hz), 7,06 (2H, d, J= 8,5 Hz), 7,00 (1H, d, J=12,4 Hz), 6,65 (1H, d, J=7,8 Hz), 5,79 (1H, d, J=12,4 Hz), 5,14 (1H, t, J=6,2 Hz), 4,76 (2H, s), 3,80 (3H, s), 10 3,33 (2H, d, J=6,5 Hz), 1,67 (3H, s), 1,65 (3H, s). (cis)
(Z)-2-(4-clorobenzoxi)-3-prenil-4-metoxi-N-hidroxicinamida (4d)
Cl
O
OH
MeO O N H (4d)
15 1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,34-7,31 (4H, m), 6,99 (1H, d, J= 12,2 Hz), 6,69 (2H, d, J=8,3 Hz), 5,81 (1H, d, J=12,4 Hz), 5,13 (1H, t, J=6,2 Hz), 4,77 (2H, s), 3,85 (3H, s), 3,33 (2H, d, J=6,5 Hz), 1,67 (3H, s), 1,65 (3H, s). (cis)
(Z)-2-(4-bromobenzoxi)-3-prenil-4-metoxi-N-hidroxicinamida (4e)
Br
O
OH
MeO O N H (4e)
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,47 (2H, d, J=8,1 Hz), 7,40 (1H, d, J= 8,4 Hz), 7,28 (2H, d, J=8,1 Hz), 6,95 (1H, d, J=12,5 Hz), 6,62 (1H, d, J=8,4 Hz), 5,76 (1H, d, J=12,4 Hz), 4,73 (2H, s), 3,76 (3H, s), 3,31 (2H, d, J=6,1 Hz), 1,64 (6H, s). (cis)
(Z)-2-(4-trifluometilbenzoxi)-3-prenil-4-metoxi-N-hidroxicinamida (4f)
CF3
O
OH
MeO O N H (4f)
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,64 (2H, d, J=8,1 Hz), 7,52 (2H, d, J=8,0 Hz), 7,43 (1H, d, J= 8,4 Hz), 7,00 (1H, d, J=12,4 Hz), 6,68 (1H, d, J=8,6 Hz), 5,80 (1H, d, J=12,4 Hz), 5,14 (1H, t, J=6,4 Hz), 4,86 (2H, s), 3,84(3H, s), 3,41 (2H, d, J=6,6 Hz), 1,66 (3H, s), 1,63 (3H, s). (cis)
(Z)-2-(3,4,5-trimetoxibenzoxi)-3-prenil-4-metoxi-N-hidroxicinamida (4g)
OMe MeO OMe
O
OH
MeO O N 10 H (4g)
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,41 (1H, d, J=8,3 Hz), 6,70 (1H, d, J=12,5 Hz), 6,65 (1H, d, J= 8,4 Hz), 6,62 (1H, s), 6,61 (1H, s), 5,77 (1H, d, J=12,3 Hz), 5,17 (1H, t, J=6,6 Hz), 4,75 (2H, s), 3,84(9H, s), 3,80 (3H, s), 3,35 (2H, d, J=6,4 Hz), 1,69 (3H, s), 1,65 (3H, s). (cis)
Procedimiento general para la preparación de 5
La mezcla de 3 (17,04 mmol), HOBT (2,76 g, 20,44 mmol) y DCC (4,22 g, 20,44 mmol) en THF seco (30 ml) se agit� ta temperatura ambiente durante 0,5 h y a continuación se a�adi� o-fenilendiamina (1,84 g, 17,04 mmol).
La disolución resultante se agit� continuamente durante la noche y se concentr� a continuación bajo una presión reducida para obtener el residuo. El residuo se disolvió en CH2Cl2 (50 ml), se lav� con NaHCO3 saturado (25 ml x 3) y se secó en Na2SO4. La capa orgánica se evapor� bajo una presión reducida y a continuación se purificó en gel de sílice (EtOAc: n-hexano = 1:3~1:1) para proporcionar 5.
(Z)-2-benzoxi-3-prenil-4-metoxi-N-(2-aminofenil)cinamida (5a)
O
ON
H
NH2
(5a)
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,43-7,38 (5H, m), 7,37 (1H, d, J=8,6 Hz), 7,03 (1H, d, J= 12,5 Hz), 7,01-7,02 (2H, 10 m), 6,74-6,72 (2H, m), 6,68 (1H, d, J=8,6 Hz), 6,06 (1H, d, J=12,4 Hz), 5,14 (1H, t, J=6,6 Hz), 4,90 (2H, s), 3,84 (3H, s), 3,65 (2H, s), 3,38 (2H, d, J=6,5 Hz), 1,72 (3H, s), 1,65 (3H, s). (cis)
(Z)-2-(4-metoxibenzoxi)-3-prenil-4-metoxi-N-(2-aminofenil)cinamida (5b)
OMe
O
ON H NH2
15 (5b)
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,41 (1H, d, J=8,5 Hz), 7,33 (2H, d, J=8,3 Hz), 7,00 (1H, d, J=12,9 Hz), 6,88 (2H, d, J=8,4 Hz), 6,73-6,72 (2H, m), 6,67 (1H, d, J=8,6 Hz), 6,04 (1H, d, J=12,4 Hz), 5,15 (1H, t, J=6,6 Hz), 4,83 (2H, s), 3,87 (3H, s), 3,77 (3H, s), 3,38 (2H, d, J=6,3 Hz), 1,74 (3H, s), 1,67 (3H, s). (cis)
20 (Z)-2-(4-clorobenzoxi)-3-prenil-4-metoxi-N-(2-aminofenil)cinamida (5c)
Cl
O
ON H NH2
(5c)
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,44 (1H, d, J=8,6 Hz), 7,35 (4H, m), 7,12 (1H, d, J=12,4 Hz), 7,00 (2H, d, J=10,5 Hz), 6,74 (2H, m), 6,69 (1H, d, J=8,6 Hz), 6,07 (1H, d, J=12,4 Hz), 5,13 (1H, t, J=6,6 Hz), 4,85 (2H, s), 3,84 (3H, 25 s), 3,35 (2H, d, J=6,3 Hz), 1,65 (3H, s), 1,59 (3H, s). (cis)
Procedimiento general para la preparación de 6
A una disolución de 5 (1 mmol) en THF (15 ml) se a�adi� H2SO4 al 49 % (10 ml) y se agit� a temperatura ambiente durante 6 h. Se extrajo la disolución resultante con CH2Cl2 (50 ml x 3) y se secó a continuación en Na2SO4 para proporcionar un residuo. Se purificó el residuo en gel de sílice (EtOAc: n-hexano = 2:1).
(Z)-2-benzoxi-3-(2-hidroxi-2-metilbutil)-4-metoxi-N-(2-aminofenil)cinamida (6a)
O
HO MeO
ON
H NH2
(6a)
10 1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,43-7,38 (5H, m), 7,37 (1H, d, J=8,6 Hz), 7,03 (1H, d, J= 12,5 Hz), 7,01-7,02 (2H, m), 6,74-6,72 (2H, m), 6,68 (1H, d, J=8,6 Hz), 6,06 (1H, d, J=12,4 Hz), 4,92 (2H, s), 3,81 (3H, s), 2,68 (2H, m), 1,62 (2H, m), 1,18 (6H, s). (cis)
(Z)-2-(4-Metoxibenzoxi)-3-(2-hidroxi-2-metilbutil)-4-metoxi-N-(2-aminofenil)cinamida (6b)
OMe
O
HO MeO
ON
H NH2
(6b)
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,41 (1H, d, J=8,5 Hz), 7,33 (2H, d, J=8,3 Hz), 7,00 (2H, d, J=12,9 Hz), 6,88 (2H, d, J=8,4 Hz), 6,73-6,72 (4H, m), 6,67 (1H, d, J=8,6 Hz), 6,04 (1H, d, J=12,4 Hz), 4,83 (2H, s), 3,87 (3H, s), 3,77 (3H, s), 2,67 (2H, m), 1,64 (2H, m), 1,74 (3H, s), 1,67 (3H, s). (cis)
(Z)-2-(4-clorobenzoxi)-3-(2-hidroxi-2-metilbutil)-4-metoxi-N-(2-aminofenil)cinamida (6c)
Cl
O
HO
MeO
ON
H
NH2
(6c)
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,44 (1H, d, J=8,6 Hz), 7,35 (4H, m), 7,12 (1H, d, J=12,4 Hz), 7,00 (2H, d, J=10,5 25 Hz), 6,74 (2H, m), 6,69 (1H, d, J=8,6 Hz), 6,07 (1H, d, J=12,4 Hz), 4,85 (2H, s), 3,84 (3H, s), 3,35 (2H, d, J=6,3), 2,68-2,64 (2H, m),1,65 (3H, s), 1,63-1,57 (2H, m), 1,59 (3H, s). (cis)
(Z)-2,4-dimetoxi-3-prenilcinamato (7)
A una disolución de 1 (2,44 g, 10 mmol) y KOH (4,20 g, 75 mmol) disueltos en EtOH (100 ml) se a�adi� gota a gota MeI (2,51 ml, 40 mmol) y a continuación se calentó hasta 90 �C durante 24 h. Se diluyó la mezcla con dis-H2O (100 ml), se acidific� con HCl 1 N a un pH comprendido entre 3 y 4, y a continuación se extrajo con EtOAc (50 ml x 3). La capa de EtOAc combinada se secó en Na2SO4, se filtr� y se concentr� bajo una presión reducida. El residuo se purificó en gel de sílice (EtOAc: n-hexano = 6:1) para obtener 7.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,62 (1H, d, J=8,6 Hz), 7,23 (1H, d, J=12,5 Hz), 6,64 (1H, d, J=8,7 Hz), 5,92 (1H, d, J=12,5 Hz), 5,17 (1H, t, J=6,3 Hz), 3,84 (3H, s), 3,71 (3H, s), 3,34 (2H, d, J=6,7 Hz), 1,77 (3H, s), 1,67 (3H, s).
(Z)-2,4-dimetoxi-3-prenil-N-hidroxicinamida (8)
15 Siguiendo un procedimiento similar al de 4 y una purificación adicional en gel de sílice (EtOAc: n-hexano = 1:1) se obtuvo 8.
H (8)
20 1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,36 (1H, d, J=8,6 Hz), 7,02 (1H, d, J= 12,5 Hz), 6,65 (1H, d, J=8,6 Hz), 5,87 (1H, d, J=12,5 Hz), 5,16 (1H, t, J=6,9 Hz), 3,82 (3H, s), 3,70 (3H, s), 3,34 (2H, d, J=6,8 Hz), 1,77 (3H, s), 1,68 (3H, s).
(Z) -2,4-dimetoxi-3-prenil-N-(2-aminofenil)cinamida (9)
Siguiendo un procedimiento similar al de 5 y una purificación adicional en gel de sílice (EtOAc: n-hexano = 2:3) se obtuvo 9.
O
ON
H
NH2
(9)
1H-NMR (500 MHz, CD3OD): δ7,48 (1H, d, J=8,6 Hz), 7,09 (1H, d, J=12,4 Hz), 7,00-6,97 (2H, m), 6,83 (1H, d, J=8,1 Hz), 6,72-6,70 (2H, m), 6,16 (1H, d, J=12,4 Hz), 5,12 (1H, t, J=6,9 Hz), 3,81 (3H, s), 3,73 (3H, s), 3,35 (2H, 10 d, J=6,7 Hz), 1,75 (3H, s), 1,63 (3H, s).
(Z)-2-benzoxi-3-(2-hidroxi-2-metilbutil)-4-metoxi-t-butilcinamato (10)
A una disolución de 2a (0,27 mmol) en THF (15 ml) se a�adi� H2SO4 al 49 % (10 ml) y se agit� a temperatura ambiente durante 6 h. Se extrajo la disolución resultante con CH2Cl2 (50 ml x 3) y se secó a continuación en Na2SO4 para proporcionar un residuo. Se purificó el residuo en gel de sílice (EtOAc: n-hexano = 1:1).
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,38 (1H, d, J=8,7 Hz), 7,36-7,27 (5H, m), 7,00 (1H, d, J= 12,4 Hz), 6,60 (1H, d, J=8,7 Hz), 5,94 (1H, d, J=12,4 Hz), 5,13 (2H, s), 4,81 (2H, s), 3,82 (3H, s), 2,67 (2H, t, J=8,2 Hz), 1,61 (2H, t,
10 J=8,2 Hz), 1,44 (9H, s), 1,18 (6H, s).
(Z)-2-benzoxi-3-(2,3-epoxi-2-metilbutil)-4-metoxi-t-butilcinamato (11)
A una disolución de 2a (1 g, 2,67 mmol) en CH2Cl2 (10 ml) se a�adi� MCPBA al 70 % (553 mg, 3,20 mmol) y se
15 agit� a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de la reacción se lav� con 1 NaHSO3, NaHCO3 al 10 % y se secó en Na2SO4. Se evapor� el CH2Cl2 bajo una presión reducida y se purificó a continuación en gel de sílice (EtOAc: n-hexano = 9:1) para obtener 11.
20 1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,55 (1H, d, J=8,6 Hz), 7,43 (2H, d, J=7,1 Hz), 7,38-7,32 (3H, m), 7,08 (1H, d, J= 12,4 Hz), 6,69 (1H, d, J=8,7 Hz), 5,86 (1H, d, J=12,4 Hz), 4,92 (1H, d, J=11,1 Hz), 4,83 (1H, d, J=11,1 Hz), 3,86 (3H, s), 2,97-2,94 (2H, m), 2,83-2,79 (1H, m), 1,44 (9H, s), 1,33 (3H, s), 1,25 (3H, s).
(Z)-2-benzoxi-3-(2,3-dihidroxi-2-metilbutil)-4-metoxicinamato (12)
25 Siguiendo un procedimiento de reacción similar al de 5 y una purificación adicional en gel de sílice (EtOAc: nhexano = 1:4) se obtuvo 12.
30 1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,57 (1H, d, J=8,6 Hz), 7,40-7,34 (5H, m), 7,23 (1H, d, J= 12,6 Hz), 6,72 (1H, d, J=8,7 Hz), 5,97 (1H, d, J=12,4 Hz), 4,91 (1H, d, J=11,1 Hz), 4,81 (1H, d, J=11,1 Hz), 3,88 (1H, t, J=10,5 Hz), 3,85 (3H,s), 2,63 (2H, d, J=10,5 Hz),1,22 (3H, s), 1,16 (3H, s).
(E) 2-hidroxi-3-prenil-4-metoxietilcinamato (13)
A la disolución de 1 (2,40 g, 10 mmol) en EtOH seco (20 ml) se a�adi� gota a gota la mezcla de et�xido sádico (1,36 g, 20 mmol) en EtOH seco (20 ml), se calentó la disolución resultante en nitrógeno durante 6 h y se diluyó a continuación con dis-H2O (50 ml), se acidific� con HCl(ac) 1 N a un pH comprendido entre 4 y 5, se extrajo con EtOAc (50 ml x 3) y se secó en Na2SO4. Tras eliminar el EtOAc bajo una presión reducida, se purificó el residuo en gel de sílice (EtOAc: n-hexano = 10:1) para proporcionar 13.
O
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,92 (1H, d, J=16,1 Hz), 7,33 (1H, d, J=8,7 Hz), 6,49 (1H, d, J=8,7 Hz), 6,44 (1H, d, J=16,1 Hz), 6,10 (1H, s), 5,20 (1H, t, J=7,0 Hz), 4,23 (2H, q, J=7,2 Hz), 3,82 (3H, s), 3,42 (1H, d, J=7,1 Hz), 1,82 (3H, s), 1,75 (3H, s), 1,31 (3H, t, J=7,2 Hz). (trans)
Procedimiento general para la preparación de 14
A la mezcla de 13 (1,72 mmol) y K2CO3 (4,3 mmol) en acetona (20 ml) se a�adi� bromuro de bencilo apropiado (3,44 mmol) y se calentó la disolución resultante en N2 durante la noche. Tras la filtración para eliminar el K2CO3,
10 se condens� el filtrado bajo una presión reducida. Se purificó el residuo resultante en gel (EtOAc: n-hexano = 15:1) para proporcionar 14.
(E)-2-(4-metoxibenzoxi)-3-prenil-4-metoxietilcinamato (14a)
O
MeO
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,98 (1H, d, J=16,1 Hz), 7,44 (1H, d, J=8,7 Hz), 7,40 (2H, d, J=8,4 Hz), 6,92 (2H, d, J=8,4 Hz), 6,71 (1H, d, J=8,7 Hz), 6,34 (1H, d, J=16,1 Hz), 5,17 (1H, t, J=6,4 Hz), 4,74 (2H, s), 4,25 (2H, q, J=7,1 Hz), 3,86 (3H, s), 3,83 (3H, s), 3,39 (2H, d, J=6,5 Hz), 1,73 (3H, s), 1,67 (3H, s), 1,33 (3H, t, J=7,1 Hz). (trans)
20 (E)-2-(4-clorobenzoxi)-3-prenil-4-metoxietilcinamato (14b)
O
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,92 (1H, d, J=16,1 Hz), 7,44 (1H, d, J=8,7 Hz), 7,41 (2H, d, J=8,4 Hz), 7,37 (2H, d, J=8,4 Hz), 6,72 (1H, d, J=8,7 Hz), 6,34 (1H, d, J=16,0 Hz), 5,16 (1H, t, J=6,6 Hz), 4,77 (2H, s), 4,23 (2H, q, J=7,2
25 Hz), 3,86 (3H, s), 3,37 (2H, d, J=6,6 Hz), 1,69 (3H, s), 1,67 (3H, s), 1,31 (3H, t, J=7,2 Hz). (trans)
(E)-2-(4-bromobenzoxi)-3-prenil-4-metoxietilcinamato (14c)
O
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,91 (1H, d, J=16,1 Hz), 7,52 (2H, d, J=8,4 Hz), 7,44 (1H, d, J=8,7 Hz), 7,34 (2H, d, J=8,4 Hz), 6,72 (1H, d, J=8,7 Hz), 6,34 (1H, d, J=16,0 Hz), 5,16 (1H, t, J=6,6 Hz), 4,75 (2H, s), 4,23 (2H, q, J=7,1 Hz), 3,87 (3H, s), 3,36 (2H, d, J=6,6 Hz), 1,70 (3H, s), 1,68 (3H, s), 1,31 (3H, t, J=7,1 Hz). (trans)
5 (E)-2-(3,4,5-trimetoxibenzoxi)-3-prenil-4-metoxietilcinamato (14d)
O
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,96 (1H, d, J=16,1 Hz), 7,45 (1H, d, J=8,6 Hz), 6,72 (1H, d, J=8,8 Hz), 6,70 (2H, s), 6,38 (1H, d, J=16,0 Hz), 5,20 (1H, t, J=6,6 Hz), 4,74 (2H, s), 4,22 (2H, q, J=7,1 Hz), 3,90 (6H, s), 3,87 (3H, s), 3,86 (3H, s), 3,40 (2H, d, J=6,5 Hz), 1,74 (3H, s), 1,68 (3H, s), 1,30 (3H, t, J=7,2 Hz). (trans)
Procedimiento general para la preparación de 15
La mezcla de 14 (1,81 mmol) y un 10 % de KOH/MeOH (20 ml) se sometió a reflujo durante la noche bajo N2 y se diluyó a continuación con dis-H2O (100 ml), se acidific� con HCl 2 N a pH 5~6 y se extrajo con EtOAc (50 ml
15 x3), respectivamente La capa combinada de EtOAc se secó en Na2SO4 y se concentr� bajo presión reducida para proporcionar 15.
(E)-2-(4-metoxibenzoxi)-3-prenil-4-metoxicinamato (15a)
O
MeO
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ8,06 (1H, d, J=16,1 Hz), 7,47 (1H, d, J=8,7 Hz), 7,39 (2H, d, J=8,5 Hz), 6,93 (2H, d, J=8,5 Hz), 6,73 (1H, d, J=8,7 Hz), 6,35 (1H, d, J=16,0 Hz), 5,18 (1H, t, J=6,5 Hz), 4,76 (2H, s), 3,88 (3H, s), 3,82 (3H, s), 3,39 (1H, d, J=6,5 Hz), 1,73 (3H, s), 1,68 (3H, s). (trans)
25 (E)-2-(4-clorobenzoxi)-3-prenil-4-metoxicinamato (15b)
O
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ7,69 (1H, d, J=16,0 Hz), 7,64 (1H, d, J=8,8 Hz), 7,47 (2H, d, J=9,3 Hz), 7,44 (2H, d, J=9,3 Hz), 6,87 (1H, d, J=8,8 Hz), 6,37 (1H, d, J=16,0 Hz), 5,06 (1H, t, J=6,4 Hz), 4,75 (2H, s), 3,82 (3H,
30 s), 3,25 (1H, d, J=6,6 Hz), 1,58 (6H, s). (trans)
(E)-2-(4-bromobenzoxi)-3-prenil-4-metoxicinamato (15c)
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ7,71 (1H, d, J=16,1 Hz), 7,65 (1H, d, J=8,7 Hz), 7,60 (2H, d, J=8,3 Hz), 7,40 5 (2H, d, J=8,3 Hz), 6,88 (1H, d, J=8,8 Hz), 6,38 (1H, d, J=16,1 Hz), 5,06 (1H, t, J=6,5 Hz), 4,74 (2H, s), 3,82 (3H, s), 3,26 (2H, d, J=6,6 Hz), 1,59 (6H, s). (trans)
(E)-2-(3,4,5-trimetoxibenzoxi)-3-prenil-4-metoxicinamato (15d)
O
MeO
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,96 (1H, d, J=16,1 Hz), 7,45 (1H, d, J=8,6 Hz), 6,72 (1H, d, J=8,8 Hz), 6,70 (2H, s), 6,38 (1H, d, J=16,0 Hz), 5,20 (1H, t, J=6,6 Hz), 4,74 (2H, s), 3,90 (6H, s), 3,87 (3H, s), 3,86 (3H, s), 3,40 (2H, d, J=6,5 Hz), 1,74 (3H, s), 1,68 (3H, s). (trans)
15 Procedimiento general para la preparación de 16
A una disolución de hidróxido pot�sico (637 mg, 11,36 mmol) en MeOH (4 ml) se a�adi� gota a gota hidrocloruro de hidroxilamina (790 mg, 11,36 mmol) y se agit� a continuación en un baño de hielo durante 1 h. La filtración para eliminar la sal blanca proporcion� clorhidrato de hidroxilamina libre en una disolución de MeOH. A la
20 mezcla de 15 (2,84 mmol) en THF seco (25 ml) se a�adi� cloroformiato de etilo (0,6 ml, 5,68 mmol) y trietilamina (0,6 ml, 5,68 mmol) y se agit� durante 0,5 h, y se a�adi� a continuación la disolución de hidroxilamina libre preparada. Tras reaccionar durante 3 h, la mezcla de la reacción se concentr� bajo una presión reducida para proporcionar un residuo. Se purificó el residuo en gel de sílice (EtOAc: n-hexano = 1:1) para proporcionar 16.
25 (E)-2-(4-metoxibenzoxi)-3-prenil-4-metoxi-N-hidroxicinamida (16a)
O
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,83 (1H, d, J=15,5 Hz), 7,33 (2H, d, J=8,4 Hz), 7,27 (1H, d, J=8,6 Hz), 6,88 (2H, d, J=8,3 Hz), 6,52 (1H, d, J=8,6 Hz), 6,28 (1H, d, J=15,5 Hz), 5,12 (1H, t, J=5,7 Hz), 4,64 (2H, s), 3,76 (3H, s), 3,74 30 (3H, s), 3,33 (2H, d, J=6,2 Hz), 1,70 (3H, s), 1,64 (3H, s). (trans)
(E)-2-(4-clorobenzoxi)-3-prenil-4-metoxi-N-hidroxicinamida (16b)
1H-NMR (500 MHz, MeOH-d4): δ7,83 (1H, d, J=15,8 Hz), 7,47 (1H, d, J=8,7 Hz), 7,44 (2H, d, J=8,2 Hz), 7,37 (2H, d, J=8,3 Hz), 6,81 (1H, d, J=8,7 Hz), 6,36 (1H, d, J=15,8 Hz), 5,09 (1H, t, J=6,5 Hz), 4,76 (2H, s), 3,84 (3H, s), 3,32 (1H, d, J=6,6 Hz), 1,63 (3H, s), 1,62 (3H, s). (trans)
(E)-2-(4-bromobenzoxi)-3-prenil-4-metoxi-N-hidroxicinamida (16c)
O
MeO
1H-NMR (500 MHz, acetona-d6): δ7,86 (1H, d, J=15,8 Hz), 7,60 (2H, d, J=8,4 Hz), 7,51 (1H, d, J=8,7 Hz), 7,49 (2H, d, J=8,3 Hz), 6,86 (1H, d, J=8,7 Hz), 6,50 (1H, d, J=15,8 Hz), 5,14 (1H, t, J=6,7 Hz), 4,80 (2H, s), 3,87 (3H, s), 3,36 (1H, d, J=6,7 Hz), 1,65 (3H, s), 1,61 (3H, s). (trans)
15 (E)-2-(3,4,5-trimetoxibenzox)-3-prenil-4-metoxi-N-hidroxicinamida (16d)
O
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,88 (1H, d, J=15,7 Hz), 7,35 (1H, d, J=8,6 Hz), 6,68 (2H, s), 6,62 (1H, d, J=8,7 Hz), 6,28 (1H, d, J=15,7 Hz), 5,18 (1H, t, J=6,0 Hz), 4,68 (2H, s), 3,86 (6H, s), 3,84 (3H, s), 3,82 (3H, s), 3,38
20 (2H, d, J=6,4 Hz), 1,73 (3H, s), 1,66 (3H, s). (trans)
(E)-2-benzoxi-3-prenil-4-metoxi-N-(2-aminofenil)cinamida (17a)
25 1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ 7,87 (1H, d, J=15,1 Hz), 7,40-7,35 (5H, m), 7,32 (1H, d, J=7,8 Hz), 7,03 (2H, m), 6,77 (2H, m), 6,67 (1H, d, J=8,1 Hz), 6,49 (1H, d, J=15,6 Hz), 5,19 (1H, m), 4,79 (2H, s), 3,85 (3H, s), 3,40 (2H, d, J=6,1 Hz), 1,70 (3H, s), 1,67 (3H, s).
(E)-2-(4-metoxibenzoxi)-3-prenil-4-metoxi-N-(2-aminofenil)cinamida
5 1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ 7,85 (1H, d, J=15,1 Hz), 7,39 (4H, d, J=7,6 Hz), 7,12-7,04 (2H, m), 6,90 (1H, d, J=8,2 Hz), 6,78 (2H, d, J=7,3 Hz), 6,68 (1H, d, J=8,1 Hz), 6,54 (1H, d, J=15,2 Hz), 5,19 (1H, m), 4,73 (2H, s), 3,86 (3H, s), 3,77 (3H, s), 3,41 (2H, m), 1,74 (3H, s), 1,67 (3H, s).
(E)-2-(4-fluorobenzoxi)-3-prenil-4-metoxi-N-(2-aminofenil)cinamida (17c)
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ 7,90 (1H, d, J=15,2 Hz), 7,43-7,38 (4H, m), 7,07-7,03 (4H, m), 6,76 (2H, d, J=7,0 Hz), 6,65 (1H, d, J=8,4 Hz), 6,51 (1H, d, J=15,7 Hz), 5,16 (1H, m), 4,76 (2H, s), 3,84 (3H, s), 3,34 (2H, d, J=6,5 Hz), 1,69 (3H, s), 1,66 (3H, s).
(E)-2-(4-clorobenzoxi)-3-prenil-4-metoxi-N-(2-aminofenil)cinamida (17d)
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ 7,88 (1H, d, J=15,4 Hz), 7,39-7,35 (4H, m), 7,34 (1H, d, J=7,9), 7,05 (2H, m), 6,78 20 (2H, m), 6,69 (1H, d, J=8,0 Hz), 6,50 (1H, d, J=15,4 Hz), 5,15 (1H, m), 4,78 (2H, s), 3,86 (3H, s), 3,34 (2H, d, J=6,3 Hz), 1,68 (3H, s), 1,66 (3H, s).
(E)-2-(4-bromobenzoxi)-3-prenil-4-metoxi-N-(2-aminofenil)cinamida (17e)
MeO
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ 7,88 (1H, d, J=15,3 Hz), 7,50 (2H, d, J=7,8 Hz), 7,40 (1H, d, J=7,4 Hz), 7,34 (2H, m), 7,05 (2H, m), 6,81 (2H, m), 6,71 (1H, d, J=7,6 Hz), 6,52 (1H, d, J=15,5 Hz), 5,15 (1H, m), 4,77 (2H, s), 3,86 (3H, s), 3,37 (2H, m), 1,66 (3H, s), 1,57 (3H, s).
(Z)-3-[6-(4-clorobenzoxi)-5-isopreniloxibenzofuran-5-il]-4-clorobencilacrilato (18)
O
Cl O
O
O
Cl
(18)
5 (Z)-3-[6-(4-clorobenzoxi)-5-isopreniloxibenzofuran-5-il]-4-clorobencilacrilato (18)
Siguiendo el procedimiento descrito como 2 proporcion� 18.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ7,61 (1H, d, J=2,0 Hz), 7,44 (1H, s), 7,36 (2H, d, J=8,3 Hz), 7,31 (2H, d, J=8,3 Hz), 10 7,23 (2H, d, J=8,3 Hz), 7,18 (1H, d, J=12,3 Hz), 7,11 (2H, d, J=8,3 Hz), 6,66 (1H, d, J=1,9 Hz), 5,99 (1H, d, J=12,3 Hz), 5,58 (1H, t, J=7,1 Hz), 5,06 (2H, s), 5,02 (2H, s), 4,86 (2H, d, J=7,1 Hz), 1,78 (3H, s), 1,71 (3H, s).
(Z)-3-[ 6-(4-clorobenzoxi)-5-isopreniloxibenzofuran-5-il]acrilato (19)
OH
O
O
O
Cl
(19)
Siguiendo el procedimiento descrito como 3 proporcion� 19.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ7,58 (1H, d, J=2,0 Hz), 7.53 (1H, s), 7,33 (2H, d, J=8,3 Hz), 7,30 (2H, d, J=8,3 Hz), 7,22 (1H, d, J=12,5 Hz), 6,71 (1H, d, J=2,1 Hz), 5,92 (1H, d, J=12,4 Hz), 5,56 (1H, t, J=7,2 Hz), 5,02 (2H, s), 4,85 10 (2H, d, J=7,1 Hz), 1,75 (3H, s), 1,66 (3H, s).
(Z)-3-[ 6-(4-clorobenzoxi)-5-isopreniloxibenzofuran-5-il ]-N-hidroxiacrilmida (20)
OH
H
N O
O
O
Cl
(20)
15 Siguiendo el procedimiento descrito como 4 proporcion� 20.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ7,58 (1H, s), 7,35~7,30 (4H, m), 7,32 (1H, s), 7,00 (1H, d, J=12,4 Hz), (1H, s), 5,86 (1H, d, J=12,5 Hz), 5,56 (1H, t, J=6,9 Hz), 5,50 (2H, s), 4,89 (2H, d, J=7,1 Hz), 1,76 (3H, s), 1,69 (3H, s).
A una disolución de 1 (18,51 mmol) en THF (150 ml) se a�adi� H2SO4 al 49 % (100 ml) y se agit� a temperatura ambiente durante 6 h. Se extrajo la disolución resultante con CH2Cl2 (50 ml x 3) y se secó a continuación en Na2SO4 para proporcionar un residuo. Se purificó el residuo en gel de sílice (EtOAc: n-hexano = 1:2).
OO
OH
21
xantotoxol
1H-NMR (500 MHz, d6-acetona):δ8,02(1H, d, J=9,5 Hz), 7,91 (1H, d, J=2,1 Hz), 7,41 (1H, s), 6,96 (1H, d, J=2,1
Hz), 6,32 (1H, d, J=9,5 Hz).
Preparaci�n de 8-metilxantotoxol (22)
Se disolvió el compuesto 21 (1 g, 4,95 mmol) en acetona (150 ml). A la mezcla de la disolución de 1 y K2CO3 (1,7 g, 12,4 mmol) se a�adi� sulfato de dimetilo (0,96 ml, 5,85 mmol), se calentó la disolución resultante a reflujo durante 2 horas en nitrógeno. Tras la filtración para eliminar el K2CO3, se condens� el filtrado a presión reducida y se diluyó a continuación con EtOAc (50 ml), se lav� con dis-H2O (25 ml x3) y se secó en Na2SO4. Tras eliminar
10 el EtOAc bajo una presión reducida, se purificó el residuo en gel de sílice (EtOAc: n-hexano = 1:2) para proporcionar 22.
8-metilxantotoxol (22)
OO OCH3
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ7,75 (1H, d, J=9,5 Hz), 7,67 (1H, d, J=5,0 Hz), 7,32 (1H, s), 6,80(1H, d, J=5,0 Hz),
6,35 (1H, d, J=9,5 Hz).
A la disolución de 22 (1,06 g, 4.94 mmol) en EtOH seco (25 ml) se a�adi� gota a gota la mezcla de et�xido
20 sádico (0,50 g, 7.41 mmol) en EtOH seco (25 ml), se sometió a reflujo la disolución resultante en nitrógeno durante la noche y se diluyó a continuación con dis-H2O (50 ml), se neutralizó con HCl(ac) 1 N a un pH comprendido entre 4 y 5, se extrajo con EtOAc (50 ml x 3) y se secó en Na2SO4. Tras eliminar el EtOAc bajo una presión reducida, se purificó el residuo en gel de sílice (EtOAc: n-hexano = 2:1) para proporcionar 23.
25 (E)-3-(6-hidroxi-5-metoxibenzofurano-5-il)-4-etilacrilato (23)
O
O
OCH3
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ8,03 (1H, d, J=16,0 Hz), 7,51 (1H, d, J=2,0 Hz), 7,35 (1H, s), 6,68 (1H, d, J=2,0 Hz), 6,63 (1H, d, J=16,5 Hz), 4,29 (2H, q, J=7,1 Hz), 4,21 (3H, s), 1,33 (3H, t, J=7,2 Hz).
Procedimiento general para la preparación de 24
A la mezcla de 23 (1,96 mmol) y K2CO3 (4,9 mmol) en acetona (20 ml) se a�adi� bromuro de bencilo apropiado (3,92 mmol) y se sometió a reflujo la disolución resultante en nitrógeno durante la noche. Tras la filtración para
35 eliminar el K2CO3, se condens� el filtrado a presión reducida y se diluyó a continuación con EtOAc (50 ml), se lav� con dis-H2O (25 ml x3) y se secó en Na2SO4. Tras eliminar el EtOAc bajo una presión reducida, se purificó el residuo en gel de sílice (EtOAc: n-hexano = 1:10) para proporcionar 24.
(E)-3-[ 6-(4-bromobenzoxi)-5-metoxibenzofurano-5-il]-4-etilacrilato (24a)
O
24a
5 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ8,00 (1H, d, J=16,1 Hz), 7,60 (1H, d, J=2,0 Hz), 7,50 (2H, d, J=8,3 Hz), 7,43 (1H, s), 7,35 (2H, d, J=8,3 Hz), 6,72 (1H, d, J=2,0 Hz), 6,41 (1H, d, J=16,1 Hz), 5,00 (2H, s), 4,27 (2H, q, J=7,0 Hz), 4,17 (3H, s), 1,34 (3H, t, J=7,1 Hz).
(E)-3-[ 6-(4-clorobenzoxi)-5-metoxibenzofurano-5-il]-4-etilacrilato (24b)
O
24b
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ8,00 (1H, d, J=16,0 Hz), 7,61 (1H, d, J=2,5 Hz), 7,44 (1H, s), 7,41 (2H, d, J=8,0 Hz), 7,34 (2H, d, J=8,0 Hz), 6,73 (1H, d, J=2,0 Hz), 6,41 (1H, d, J=16,0 Hz), 5,02 (2H, s), 4,27 (2H, q, J=7,0 Hz), 4,18 (3H, s), 1,34 (3H, t, J=7,0 Hz).
Procedimiento general para la preparación de 25
La mezcla de 24 (1,68 mmol) y un 10 % de KOH/MeOH (20 ml) se sometió a reflujo durante 6 horas bajo N2 y se diluyó a continuación con dis-H2O (100 ml), se acidific� con HCl 2 N a pH 2~3 y se extrajo con EtOADIS-H2Oc
20 (50 ml x 3), respectivamente La capa combinada de EtOAc se secó en Na2SO4 y se concentr� bajo presión reducida para proporcionar 25.
(E)-3-[ 6-(4-bromobenzoxi)-5-metoxibenzofurano-5-il]acrilato (25a)
O
25a
1H-NMR (500 MHz, d6-acetona): δ8,02 (1H, d, J=16,1 Hz), 7,89 (1H, d, J=2,1 Hz), 7,79 (1H, s), 7,58 (2H, d,
J=8,3 Hz), 7,49 (2H, d, J=8,2 Hz), 6,92 (1H, d, J=2,1 Hz), 6,50 (1H, d, J=16,0 Hz), 5,10 (2H, s), 4,19 (3H, s).
(E)-3-[6-(4-clorobenzoxi)-5-metoxibenzofurano-5-il]-acrilato (25b)
25b
5 1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ8,11 (1H, d, J=16,0 Hz), 7,63 (1H, d, J=2,0 Hz), 7,48 (1H, s), 7,41 (2H, d, J=8,5 Hz), 7,36 (2H, d, J=8,0 Hz), 6,75 (1H, d, J=2,0 Hz), 6,44 (1H, d, J=16,0 Hz), 5,04 (2H, s), 4,19 (3H, s).
Procedimiento general para la preparación de 26 (los compuestos 26a y 26b no corresponden a la presente invención)
10 A una disolución de hidróxido pot�sico (379 mg, 6,76 mmol) en MeOH (1,8 ml) se a�adi� gota a gota hidrocloruro de hidroxilamina (470 mg, 6,76 mmol) en MeOH (4,7 ml) durante 1 h. La filtración para eliminar la sal blanca proporcion� el clorhidrato de hidroxilamina libre en una disolución de MeOH. A la mezcla de 23 (1,69 mmol) en THF seco (25 ml) se a�adi� cloroformiato de etilo (0,3 ml, 2,62 mmol) y trietilamina (0,4 ml, 6,38 mmol)
15 y se agit� durante 0,5 h, y se a�adi� a continuación la disolución de hidroxilamina libre preparada bajo N2. Después de la reacción durante 2 h, la mezcla de la reacción se diluyó con dis-H2O (100 ml), se acidific� con HCl 1 N a un pH de 2~3 y se extrajo con EtOAc (50 ml x 3), respectivamente. La capa combinada de EtOAc se secó en Na2SO4 y se concentr� bajo presión reducida para proporcionar un residuo. Se purificó el residuo en gel de sílice (EtOAc: n-hexano = 1:1) para proporcionar 26.
(E)-3-[6-(4-bromobenzoxi)-5-metoxibenzofurano-5-il]-N-hidroxiacrilmida (26a)
O
26a
1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ7,92 (1H, d, J=16,0 Hz), 7,75 (1H, d, J=2,0 Hz), 7,50 (2H, d, J=8,0 Hz), 7,47 (1H, 25 s), 7,39 (2H, d, J=8,0 Hz), 6,81 (1H, d, J=2,0 Hz), 6,43 (1H, d, J=16,0 Hz), 5,07 (2H, s), 4,14 (3H, s).
(E)-3-[6-(4-clorobenzoxi)-5-metoxibenzofurano-5-il]-N-hidroxiacrilmida (26b)
O
26b
1H-NMR (500 MHz, d6-acetona) δ7,96 (1H, d, J=15,8 Hz), 7,83 (1H, d, J=2,0 Hz), 7,53 (2H, d, J=8,1 Hz), 7,52 30 (1H, s), 7,38 (2H, d, J=8,1 Hz), 6,85 (1H, d, J=2,0 Hz), 6,59 (1H, d, J=15,5 Hz), 5,05 (2H, s), 4,15 (3H, s).
8-metoximetilxantotoxol (27)
OO OMOM
A la mezcla de xantotoxol (21), K2CO3 (2,5 eq.) y acetona se a�adi� MOMCl (2 eq.), se agit� la disolución resultante a temperatura ambiente durante 12 h. Tras eliminar la acetona, se diluyó el residuo con EtOAc, se lav� con dis-H2O y se secó en Na2SO4. La capa de EtOAc se concentr� bajo presión reducida. Se sometió el residuo a cromatograf�a en gel de sílice para proporcionar 27.
O
O
OMOM
28
Siguiendo un procedimiento similar al de 13 se obtuvo 28.
Procedimiento general para la preparación de 29 Siguiendo un procedimiento similar al de 14 se obtuvo 29.
30 Procedimiento general para la preparación de 30
A la mezcla de 29 y MeOH se a�adi� un 37 % de HCl(ac), se agit� la solución resultante a temperatura ambiente durante 2 h, se diluyó a continuación con dis-H2O y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica combinada se secó en Na2SO4 y se concentr� bajo presión reducida. Se sometió el residuo a gel de sílice para proporcionar 30.
O
Procedimiento general para la preparación de 31
A la mezcla de 30, K2CO3 (2,5 eq.) y acetona se a�adi� bromuro de isoprenilo (2 eq.), se agit� la disolución
20 resultante a temperatura ambiente durante 24 h. Tras eliminar la acetona, se diluyó el residuo con EtOAc, se lav� con dis-H2O y se secó en Na2SO4. La capa de EtOAc se concentr� bajo presión reducida. Se sometió el residuo a cromatograf�a en gel de sílice para proporcionar 31.
O
25 Procedimiento general para la preparación de 32 Siguiendo el procedimiento descrito como 3 proporcion� 32.
O
Procedimiento general para la preparación de 33
5 Siguiendo el procedimiento descrito como 4 proporcion� 33. Sales Las sales farmac�uticamente aceptables de los compuestos de la presente invención se pueden preparar
10 mediante cualquier medio convencional. A continuación se proporcionan unos ejemplos de síntesis de las sales.
Sal de (E)-2-(4-metoxbenzoxi)-4-metoxi-3-prenil-N-hidroxicinamida lisina
NBM-T-BMX-L-OS01
A la mezcla de hidroxamato (1 mmol) y EtOH (15 ml) se a�adi� una disolución de L-lisina (1 mmol) en H2O (10 ml). Se agit� el producto resultante a 40 �C durante 4 h, se enfri� a temperatura ambiente y a continuación se agit� durante 12 h adicionales. Se elimin� el disolvente bajo una presión reducida y se precipit� el residuo a partir de EtOH. Tras la filtración, se lav� el sólido con dis-H2O y se secó en un horno de vacío.
O
O OK
OLi NN HH MeO OMeO O OMe R
R = OCF3 T-L-BTX T-K-BMX = OMe T-L-BMX = Br T-L-BBX = Cl T-L-BCX
A la mezcla de hidroxamato (1 mmol) y EtOH (15 ml) se a�adi� una disolución de hidróxido de litio o hidróxido pot�sico (1,2 mmol) en H2O (5 ml). Se agit� el producto resultante a temperatura ambiente durante la noche. Se 25 elimin� el disolvente bajo una presión reducida y se precipit� el residuo a partir de EtOH. Tras la filtración, se lav� el sólido con dis-H2O y se secó en un horno de vacío.
Composici�n farmacéutica de la invención
Los compuestos de fórmula (I) y las sales, estereois�meros, enanti�meros, prof�rmacos y solvatos farmac�uticamente aceptables de los mismos se pueden usar por s� mismos, pero generalmente se administrarán en forma de composición farmacéutica en la que el compuesto / sal / solvato de fórmula (I) (principio activo) se presenta junto con un aditivo, diluyente o vehículo farmac�uticamente aceptable. En función del modo de administración, la composición farmacéutica comprender� preferentemente entre el 10 y el 30 % en peso (porcentaje en peso), más preferentemente entre el 30 y el 50 % en peso, aún más preferentemente entre el 50 y el 70 % en peso, y aún más preferentemente entre el 70 y el 100 % en peso, del principio activo, basándose todos los porcentajes en la composición total. Además, la composición farmacéutica de la presente invención puede comprender además otras sustancias para la prevención o el tratamiento de enfermedades relacionadas con la histona desacetilasa (HDAC).
Las composiciones farmacéuticas se pueden administrar por vía sist�mica, por ejemplo, mediante su administración oral en forma de comprimidos, cápsulas, jarabes, polvos o gránulos; o por vía parenteral en forma de soluciones o suspensiones; o por vía subcutánea; o por vía rectal en forma de supositorios; o por vía transd�rmica.
Los compuestos y composiciones farmacéuticas de la presente invención son un inhibidor de la HDAC y pueden permanecer un cierto tiempo en las células y provocar continuamente la acetilaci�n de la histona H4. Son inhibidores de la HDAC que provocan la diferenciación de las células y las células progenitoras neurales. Además, los compuestos de la invención inhiben significativamente la actividad de la HDAC. Los compuestos de la presente invención disminuyen significativamente las fases S y G2/M de las células de un modo dependiente de la dosis y cambian la morfología de las células cancerosas. Por lo tanto, los compuestos de la presente invención pueden tratar tumores o enfermedades proliferativas celulares. Asimismo, los compuestos de la presente invención pueden mejorar el crecimiento de las neuritas y el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas (tales como la enfermedad de Huntington y la enfermedad de la poliglutamina) y la atrofia muscular espinal humana (SMA).
EJEMPLO
Los siguientes ejemplos ilustran los métodos preferidos para sintetizar y utilizar los compuestos:
Ejemplo 1 Preparación del 2-(4-nitrobenzoxi)-4-metoxi-3-prenil-4-nitrobencilcinamato
A la mezcla de 1 (2 g, 8,20 mmol) y t-but�xido pot�sico (1,84 g, 16,4 mmol) en DMF seca (20 ml) se añadieron diversos cloruros de bencilo (16,4 mmol) y se agit� la disolución resultante a temperatura ambiente en nitrógeno durante 6 h y a continuación se diluyó con EtOAc (50 ml), se lav� con dis-H2O (25 ml x 3) y se secó en Na2SO4. Tras eliminar el EtOAc bajo una presión reducida, se purificó el residuo en gel de sílice (EtOAc: n-hexano = 1:10 ~ 1:1) para obtener el compuesto del título: 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,24-8,22 (4H, m), 7,59-7,46 (4H, m), 7,45 (1H, d, J=8,6 Hz), 6,98 (1H, d, J=12,3 Hz), 6,69 (1H, d, J=8,6 Hz), 5,81 (1H, d, J=12,3 Hz), 5,12 (1H, t, J=6,5 Hz), 4,91 (2H, s), 4,64 (2H, s), 3,85 (3H, s), 3,32 (2H, d, J=6,6 Hz), 1,61 (3H, s), 1,57 (3H, s).
Ejemplo 2 Preparación del 2-benzoxi-4-metoxi-3-prenilcinamato La mezcla de 2 (11,36 mmol) y un 10 % de KOH/MeOH (40 ml) se sometió a reflujo durante la noche en N2 y a continuación se diluyó con dis-H2O (100 ml), se acidific� con HCl 2 N a un pH comprendido entre 5 y 6 y se extrajo con EtOAc (50 ml x 3). La capa combinada de EtOAc se secó en Na2SO4 y se concentr� bajo presión reducida. Se purificó el residuo en gel de sílice (EtOAc: n-hexano = 1:2) para obtener el compuesto del título: 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,63 (1H, d, J=8,6 Hz), 7,42-7,26 (5H, m), 7,25 (1H, d, J=12,5 Hz), 6,80 (1H, d, J=8,7 Hz), 5,88 (1H, d, J=12,5 Hz), 5,16 (1H, t, J=6,6 Hz), 4,82 (2H, s), 3,85 (3H, s), 3,36 (2H, d, J=6,7 Hz), 1,65 (3H, s), 1,62 (3H, s). ESIMS m/z [M-H]-351,13 (100).
Ejemplo 3 Preparación de la 2-benzoxi-4-metoxi-3-prenil-N-hidroxicinamamida
A una disolución de hidróxido pot�sico (637 mg, 11,36 mmol) en MeOH (4 ml) se a�adi� gota a gota hidrocloruro de hidroxilamina (790 mg, 11,36 mmol) y a continuación se agit� la disolución en un baño de hielo durante 1 h. Se procedió a la filtración para eliminar la sal blanca y obtener hidroxilamina libre en disolución de MeOH. A la mezcla de 3a (1 g, 2,84 mmol) en THF seco (25 ml) se añadieron cloroformato de etilo (0,6 ml, 5,68 mmol) y trietilamina (0,6 ml, 5,68 mmol), se agit� la mezcla durante 0,5 h y a continuación se a�adi� la solución de hidroxilamina libre preparada. Tras reaccionar durante 3 h, la mezcla de la reacción se concentr� bajo una presión reducida para proporcionar un residuo. Se purificó el residuo en gel de sílice (EtOAc: n-hexano = 1:2) para obtener el compuesto del título: 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) 7,40-7,33 (5H, m), 7,30 (1H, d, J=8,6 Hz), 7,24 (1H, d, J= 8,7 Hz), 7,01 (1H, d, J= 12,5 Hz), 6,66 (1H, d, J=8,7 Hz), 5,79 (1H, d, J=12,4 Hz), 5,17 (1H, t, J=6,6 Hz), 4,82 (2H, s), 3,83 (3H, s), 3,37 (2H, d, J=6,7 Hz), 1,69 (3H, s), 1,66 (3H, s); 13C-NMR (100 MHz, CDCl3) 159,7 (s), 159,2 (s), 155,9 (s), 136,9 (s), 135,9 (d), 131,8 (s), 128,6 (d), 128,5 (d), 128,2 (d), 128,1 (d), 128,0 (d), 123,9 (s), 122,7 (d), 121,1 (s), 118,2 (d), 106,8 (d), 76,6 (t), 55,7 (q), 25,7 (q), 23,2 (t), 17,9 (q), 14,4 (q); ESIMS m/z [M+H]+ 368,13 (100).
Ejemplo 4 Preparación de la 2-benzoxi-4-metoxi-3-(2-hidroxi-2-metilbutil)-N-hidroxicinamamida
A una disolución de 4a (100 mg, 0,27 mmol) en THF (15 ml) se a�adi� un 49 % de H2SO4 (10 ml) y se agit� la disolución a temperatura ambiente durante 6 horas. Se extrajo la disolución resultante con CH2Cl2 (50 ml x 3) y se secó a continuación en Na2SO4 para proporcionar un residuo. Se purificó el residuo en gel de sílice (EtOAc: n-hexano = 1:1) para obtener el compuesto del título: 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) 7,40-7,33 (5H, m), 7,30 (1H, d, J=8,6 Hz), 7,00 (1H, d, J= 12,4 Hz), 6,69 (1H, d, J=8,6 Hz), 5,89 (1H, d, J=12,4 Hz), 4,83 (2H, s), 3,82 (3H, s), 2,66 (2H, t, J=7,8 Hz), 1,65 (2H, t, J=7,8 Hz), 1,16 (6H, s).
Ejemplo 5 Preparación de la 2-benzoxi-4-metoxi-3-prenil-N-(2-aminofenil)cinamamida
La mezcla de 3 (17,04 mmol), HOBT (2,76 g, 20,44 mmol) y DCC (4,22 g, 20,44 mmol) en THF seco (30 ml) se agit� a temperatura ambiente durante 0,5 h y a continuación se a�adi� o-fenilendiamina (1,84 g, 17,04 mmol). La disolución resultante se agit� continuamente durante la noche y se concentr� a continuación bajo una presión reducida para obtener el residuo. El residuo se disolvió en CH2Cl2 (50 ml), se lav� con NaHCO3 saturado (25 ml x 3) y se secó en Na2SO4. La capa orgánica se evapor� bajo una presión reducida y se purificó a continuación en gel de sílice (EtOAc: n-hexano = 1:3-1:1) para obtener el compuesto del título: 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) 7,43-7,38 (5H, m), 7,37 (1H, d, J=8,6 Hz), 7,26 (1H, d, J= 8,7 Hz), 7,03 (1H, d, J= 12,5 Hz), 7,01-7,02 (2H, m), 6,74-6,72 (2H, m), 6,68 (1H, d, J=8,6 Hz), 6,06 (1H, d, J=12,4 Hz), 5,14 (1H, t, J=6,6 Hz), 4,90 (2H, s), 3,84 (3H, s), 3,65 (2H, s), 3,38 (2H, d, J=6,5 Hz), 1,72 (3H, s), 1,65 (3H, s).
Ejemplo 6 Preparación del 2-benzoxi-4-metoxi-3-(2-hidroxi-2-metilbutil)bencilcinamamato
A una disolución de 2 (2 mg, 0,27 mmol) en THF (15 ml) se a�adi� un 49 % de H2SO4 (10 ml) y se agit� la disolución a temperatura ambiente durante 6 horas. Se extrajo la disolución resultante con CH2Cl2 (50 ml x 3) y se secó a continuación en Na2SO4 para proporcionar un residuo. Se purificó el residuo en gel de sílice (EtOAc: n-hexano = 1:1) para obtener el compuesto del título: 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) 7,38 (1H, d, J=8,7 Hz), 7,367,27 (10H, m), 7,00 (1H, d, J= 12,4 Hz), 6,60 (1H, d, J=8,7 Hz), 5,94 (1H, d, J=12,4 Hz), 5,13 (2H, s), 4,81 (2H, s), 3,82 (3H, s), 2,67 (2H, t, J=8,2 Hz), 1,61 (2H, t, J=8,2 Hz), 1,18 (6H, s); ESIMS m/z [M+Na]+ 483,6(100).
Ejemplo 7 Inhibición del crecimiento de células cancerosas mediante los compuestos de la invención
Tres estirpes celulares de cáncer, células glioma de rata C6, células de cáncer de mama humano MCF-7 y células de cáncer de pulmón humano A549, se cultivaron en medio de Eagle modificado de Dulbecco (DMEM; Gibco) que contenía un 10% de suero bovino fetal (FBS) y un 1 % de penicilina / estreptomicina. Se mantuvieron las tres estirpes celulares a 37 Ԩ en una atmósfera humidificada de un 95 % de aire y un 5 % de CO2. Para los experimentos, se sembraron las células en placas de 6 pocillos. Al cabo de 24 horas, se trataron las células con distintas concentraciones de los diversos compuestos. Se observaron las células a las 24, 48 y 72 horas. Se demostr� la inhibición de la proliferaci�n de las células cancerosas con NBM-HB-OS01 en diversas concentraciones después de 48 horas en células de glioma de rata C6 (véase la figura 1(a)) o en células de cáncer de colon humano HT-29 (véase la figura 1(b)). El NBM-C-BX-OS01 interrumpió la proliferaci�n celular en distintas concentraciones en células de glioma de rata C6 en 48 horas (véase la figura 2(a)), en células de cáncer de mama humano MCF-7 en 24 horas (véase la figura 2(b)) y en células de cáncer de pulmón humano A549 en 48 horas (véase la figura 2(c)). Los tratamientos con NBM-C-BA-OS01, NBM-C-BCA-OS01 y NBM-C-BMA-OS01 inhibieron la proliferaci�n de las células de glioma de rata C6 en una concentración fija (7,5 �g/ml) en 48 horas, (véase la figura 4). El NBM-C-BA-OS01 (5 �g/ml), el NBM-C-BCX-OS01 (2,5, 5,0 �g/ml) y el NBMC-BMX-OS01 (2,5, 5,0 �g/ml) inhibieron la proliferaci�n celular de las células de glioma de rata C6 en 24 horas (véase la figura 5(a)).
Ejemplo 8 Inhibición de la proliferaci�n de células de cáncer y cambios en la morfología mediante los compuestos de la invención
Cinco estirpes celulares de cáncer, células de glioma rata C6, células de cáncer de mama humano MCF-7, células de glioma humano Hs683, células de glioblastoma humano 05-MG las células de cáncer de pulmón humano A549, se cultivaron en medio de Eagle modificado de Dulbecco (DMEM; Gibco) que contenía un 10 % de suero bovino fetal (FBS) y un 1 % de penicilina / estreptomicina, y se mantuvieron a 37 Ԩ en una atmósfera humidificada de un 95 % de aire y un 5 % de CO2. Las células de cáncer de mama humano MDA-MB-231 se cultivaron en medio L-15 (Gibco) que contenía un 10 % de suero bovino fetal (FBS), un 1 % de penicilina / estreptomicina, y glutamina 2 mM, y se mantuvieron a 37 Ԩ en una atmósfera humidificada de un 95 % de aire y un 0 % de CO2. Para dichos experimentos, se sembraron las células en placas de 6 pocillos o en una placa de 60 mm. Al cabo de 24 horas, se trataron las células con distintas concentraciones de los diversos compuestos. Se observaron las células a las 24, 48 y 72 horas. Las células de cáncer de mama humano MCF-7 (véase la figura 3(a)) y las células de glioma de rata C6 (véase la figura 3(b)) presentaron cambios en la morfología como respuesta al tratamiento con 2,5, 5,0, 7,5 �g/ml de NBM-C-BA-OS01 durante 72 horas. Los tratamientos con NBM-C-BX-OS01 (7,5 �g/ml), NBM-C-BCX-OS01 (2,5, 5,0, 7,5 �g/ml) y NBM-C-BMX-OS01 (2,5, 5,0, 7,5 �g/ml) provocaron la inhibición de la proliferaci�n de las células A549 con unas cantidades dependientes de la dosis durante 72 horas (véase la figura 5(b)) y los resultados fueron similares a los de las células de glioma de rata C6 durante 24 horas (véase la figura 5(c)). Las células de glioma humano Hs683 se trataron con NBM-C-BX-OS01 (1,25, 2,5, 5,0 �g/ml) durante 72 horas (véase la figura 5(d)). Se trataron células de glioblastoma humano 05-MG con NBM-C-BCX-OS01 (1,0, 2,0, 4,0 �g/ml) y NBM-C-BMX-OS01 (1,0, 2,0, 4,0 �g/ml) durante 72 horas (véase la figura 5(e)). Los resultados obtenidos mediante el recuento celular presentaron la misma tendencia (véase la figura 5(f)). El NBM-C-BCX-OS01, el NBM-C-BMX-OS01 y el NBM-C-BFX-OS01 inhiben la proliferaci�n de las células de cáncer de mama humano MDA-MB-231 y cambian la morfología de las células durante 72 horas (véase la figura 6(a)). Los resultados se contaron mediante un ensayo de exclusión de azul de tripano (véase la figura 6 (b)).
Ejemplo 9 Efectos de la invención (NBM-HB-OS01) en la expresión del ARNm de células de glioma de rata C6
La expresión de ARNm relacionada con el ciclo celular se examin� mediante RT-PCR. Se aisl� el ARN total de las células de glioma de rata C6 tratadas utilizando el RNeasy Mini Kit (Qiagen) tal como describe el fabricante. Se produjo el ADNc a partir de 500 ng del ARN total utilizando el ReverTra-Plus-TM (TOYOBO). El producto de
RT (1 μl) se amplificó por PCR con cebadores para la amplificación de diversos genes (p21, ciclina B1 y ciclina
D1) para los análisis del ciclo celular y se utilizó GAPDH como control interno. Se trataron las células de glioma de rata C6 con NBM-HB-OS01 durante 48 horas, y como se muestra en la figura 1(d), el NBM-HB-OS01 produjo la expresión del p21 del ARNm.
Ejemplo 10 Efectos de la invención sobre el ciclo celular de diversas células cancerosas humanas
Se sembraron células de cáncer de pulmón humano A549, células de glioma humano Hs683 y células de glioblastoma humano en 05-MH, 1 x 106 células en una placa de 100 mm. Tras 24 horas de incubaci�n en DMEM + BSA al 10 %, se trataron las células de cáncer de pulmón humano A549 con NBM-HB-OS01 (2,5, 5,0, 7,5, 10,0 �g/ml) durante 24 horas y se trataron con NBM-C-BCX-OS01 (2,5, 5,0, 7,5 �g/ml) y NBM-C-BMX-OS01 (2,5, 5, 7,5 �g/ml) durante 72 horas. Se trataron células de glioblastoma humano 05-MG con NBM-C-BCX-OS01 (1,0, 2,0, 4,0 �g/ml) y NBM-C-BMX-OS01 (1,0, 2,0, 4,0 �g/ml) durante 72 horas. Se trataron células de glioma humano Hs683 con NBM-C-BCX-OS01 (1,0, 2,0, 4,0 �g/ml). Para el análisis del ciclo celular, se fijaron las células en etanol al 80 % durante 1 hora (o durante la noche) a -20 �C y a continuación se incubaron con 2 �g/ml de ARNasa A durante 30 minutos a 37 �C. Se tiñeron las células con yoduro de propidio (5 g/ml PI) en PBS y se analizaron utilizando un cit�metro de flujo Becton Dickinson, y los programas de captura y análisis BD FACScan y CellQuest. Los resultados de la figura 1(c) demuestran que el NBM-HB-OS01 interrumpió las células de cáncer de pulmón humano A549 en la fase G0/G1 de un modo dependiente de la dosis. Las células de cáncer de pulmón humano A549 se inhibieron mediante diversas concentraciones (2,5, 5, 7,5 �g/ml) de NBM-C-BCX-OS01 y NBM-C-BMX-OS01 durante 72 horas (véase la figura 6(c)) y las células de glioblastoma humano 05-MG se inhibieron mediante diversas concentraciones (1,0, 2,0, 4,0 �g/ml) de NBM-C-BCX-OS01 y NBM-C-BMX-OS01 durante 72 horas (véase la figura 6(d)). Se trataron células de glioma humano Hs683 con NBM-C-BCX-OS01 (1,0, 2,0, 4,0 �g/ml) durante 72 horas. El NBM-C-BCX-OS01 podría detener la proliferaci�n de las células de glioma humano Hs683 (véase la figura 6 (e)).
Ejemplo 11 Aumento regulado de las proteínas relacionadas con la HDAC después del tratamiento con los compuestos de las invenciones
Se sembraron en placas de 6 pocillos células de glioma de rata C6, células de cáncer de mama humano MCF-7 y células de cáncer de pulmón humano A549. Tras 24 horas de incubaci�n en medio de cultivo + BSA al 10 %, las células de cáncer de mama humano MCF-7 se trataron con NBM-HB-OS01 (10,0 �g/ml) y vorinostat (SAHA, 5 �M) durante 24 horas. Se trataron células de glioma de rata C6 con NBM-C-BX-OS01 (7,5 μg/ml) y vorinostat (SAHA, 5 μM) durante 6 horas. Se trataron células de cáncer de pulmón humano A549 con NBM-C-BA-OS01 (7,5 μg/ml) y vorinostat (SAHA, 5 μM) durante 6 horas. Las células tratadas se fijaron en metanol al 80 % durante 30 minutos y a continuación se lavaron 3 veces con una disolución de PBS. Se permeabilizaron las células con Triton X-100 al 0,3 % durante 30 minutos y a continuación se bloquearon en suero bovino fetal al 10 % (FBS) en PBS -T (0,1 % Twin 20 en PBS) durante 1 hora. Se detectaron las células tratadas con el anticuerpo primario contra la acetilhistona H3, acetiltubulina y gelsolina. Se tomaron fotografías con un microscopio Nikon. Los resultados indicaron que los compuestos de la presente invención pueden provocar la expresión de las proteínas relacionadas con la HDAC de las diversas células cancerosas (véase la figura 1(g), la figura 2(e) y la figura 3 (c)).
Ejemplo 12 Aumento de la acumulación de histonas hiperacetiladas y tubulina y p21 en diversas estirpes celulares tratadas con el compuesto de la presente invención
Se sembraron células de glioma de rata C6 y células de cáncer de mama humano MCF-7, 5 � 105 células en una placa de 60 mm o 1 � 106 células en una placa de 100 mm. Después de 24 horas, se trataron células de glioma de rata C6 con diversas concentraciones de NBM-HB-OS01 (2,5, 5,0, 7,5, 10,0 μg/ml) durante 72 horas y se trataron con 10,0 μg/ml NBM-HB-OS01 durante 1, 2, 3, y 4 horas. Se trataron células de cáncer de mama humano MCF-7 con 7,5 μg/ml NBM-C-BX-OS01 durante 1, 2, 3, y 4 horas. Se prepararon lisados de células C6 y MCF-7 para la inmunotransferencia de acetilhistona H3 (Cell Signaling Technology, Inc.), acetilhistona H4 (Upstate), acetiltubulina (Sigma Chemical Co.), p21 (BD Pharmingen Technology, Inc.) y actina (Sigma Chemical
5 Co.). Se detectaron las proteínas por quimioluminiscencia (ECL, Amersham). Los resultados indicaron que se provocó la acumulación de histona H3 hiperacetilada, histona H4 hiperacetilada, tubulina acetilada y p21 en las células de glioma de rata C6 y en las células MCF-7 (véase la figura 1(e), la figura 1(f) y la figura 2(d)). La βactina es un control interno.
10 Ejemplo 13 Efectos del NBM-C-BCX-OS01 y el NBM-C-BMX-OS01 en las histonas y proteínas relacionadas con la HDAC
Se sembraron células de glioma humano Hs683, 5 � 105 células en una placa de 60 mm o 1 � 106 células en una placa de 100 mm. Después de 24 horas, las células Hs683 de glioma humano se trataron con distintas dosis 15 de NBM-C-BCX-OS01, NBM-C-BMX-OS01 (1,0, 2,0, 4,0 μg/ml), y vorinostat (SAHA, 5 μM) durante 72 horas. Se prepararon lisados de células Hs683 para la inmunotransferencia de acetilhistona H3 (Cell Signaling Technology, Inc.), acetilhistona H4 (Upstate), acetiltubulina (Sigma Chemical Co.), p21 (BD Pharmingen Technology, Inc.),CTPS (Abnova TAIW�N Corporation), gelsolina (Sigma Chemical Co.), Hsp90 (Cell Signaling Technology, Inc.), acetil-Hsp90 (ROCKLAND, Inc.) y actina (Sigma Chemical Co.). Se detectaron las proteínas por
20 quimioluminiscencia (ECL, Amersham). Se observ� el aumento de las proteínas Hsp90 acetilada y gelsolina de un modo dependiente de la dosis. Las proteínas Hsp90 y CTPS disminuyeron de un modo dependiente de la dosis (véase la figura 7(a)). Se provocó la expresión de p21, tubulina acetilada, histona H3 acetilada e histona H4 acetilada de un modo dependiente de la dosis. Se utilizó SAHA como control positivo y �-actina como control interno (véase la figura 7(b)).

Claims (16)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Compuesto representado por la fórmula siguiente (I):
    O
    R5 Y R6
    O (CH2)m
    X R4 R1O (CH2)n
    CH
    R2 R3 (I)
    en la que R1 es hidrógeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo C3-8, un carbociclo insaturado con 5 miembros o 6 miembros, o un heterociclo con 5 miembros o 6 miembros; X es C, O, N o S; Y es O, NH o alquilo O-C1-4; n es un número entero comprendido entre 0 y 10; m es un número entero comprendido entre 0 y 5; R2 y R3 son independientemente alquilo C1-6; R4 es cicloalquilo C5-6 o un carbociclo insaturado de 5 miembros o 6 miembros, o un heterociclo que puede estar sustituido con un halógeno, CF3, OR7 o NR7R8, en el que R7 y R8 son independientemente hidrógeno o alquilo C1-6; R5 es OH, NH2 o cicloalquilo C5-6, un carbociclo insaturado de 5 miembros o 6 miembros o un heterociclo en el que el cicloalquilo, el carbociclo y el heterociclo pueden estar opcionalmente sustituidos con un halógeno, NH2, NO2, alcoxi C1-6, alquiltio C1-6, OR7, NR7R8 o CF3; y R6 es H, alquilo C1-10 que puede estar sustituido con hidroxi o alquenilo C2-10, o junto con R1 ser -C2H2-; y sales, estereois�meros, enanti�meros, prof�rmacos y solvatos de los mismos farmac�uticamente aceptables.
  2. 2.
    Compuesto según la reivindicación 1, en el que R1, R2 y R3 son independientemente alquilo C1-4; R4 es fenilo o fenilo sustituido con halógeno, CF3, alquilo OC1-4, R5 es OH, fenilo o fenilo sustituido con NH2 y R6 es hidrógeno.
  3. 3.
    Compuesto según la reivindicación 1, en el que R1, R2 y R3 son independientemente metilo, R4 es fenilo
    o fenilo sustituido con F, Cl, Br, CF3, OCH3, R5 es OH o fenilo sustituido con NH2 y R6 es hidrógeno.
  4. 4.
    Compuesto según la reivindicación 1, en el que X es carbono.
  5. 5.
    Compuesto según la reivindicación 1, en el que n y m son 1.
  6. 6.
    Compuesto según la reivindicación 1, en el que el carbociclo es cicloalquenilo o arilo.
  7. 7.
    Compuesto según la reivindicación 6, en el que el cicloalquenilo se selecciona de entre el grupo que consiste en ciclopropenilo, ciclobutenilo, ciclopentenilo, ciclohexenilo, cicloheptenilo y ciclooctenilo, y el arilo se selecciona de entre el grupo que consiste en fenilo, naftilo y tetrahidronaftalenilo.
  8. 8.
    Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que los heterociclos insaturados de 5 miembros o de 6 miembros se seleccionan de entre el grupo que consiste en furilo, tienilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, triazolilo, tetrazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, isotiazolilo, piridilo, piridazinilo, pirimidinilo, furazanilo, pirazinilo, oxadiazolilo, 1-pirrolinilo, 2-pirrolinilo, 3-pirrolinilo, pirrolidino, 2pirrolidinilo, 3-pirrolidinilo, 1-imidazolinilo, 2-imidazolinilo, 4-imidazolinilo, 1-imidazolidinilo, 2-imidazolidinilo, 4
    imidazolidinilo, 1-pirazolinilo, 3-pirazolinilo, 4-pirazolinilo, 1-pirazolidinilo, 3-pirazolidinilo, 4-pirazolidinilo, piperidino, 2-piperidilo, 3-piperidilo, 4-piperidilo, piperazino, 2-piperazinilo, 2-morfolinilo, 3-morfolinilo, morfolino y tetrahidropiranilo.
  9. 9.
    Compuesto según la reivindicación 1, que se selecciona del grupo que consiste en:
    H2N NH OC
    H3CO
    O
    Cl
    H2N NH OC
    H3CO
    O
    H2N NH OC
    H3CO
    O
    OCH3
    HO
    NH
    OC
    H3CO
    O
    Cl HO
    NH
    OC
    H3CO
    O
    OCH3
    HO
    NH
    OC
    H3CO
    O
    F
    HO
    NH
    OC
    H3CO
    O
    Br
    O H3CO
    H3CO
    H3CO
    O
    Cl
    O
    OCH3 O
    o
    o o
    o
    O
    C
    OH
    N H
    H3CO
    O Br O
    C
    OH
    N H
    H3CO
    O
    F
    HO
    NH
    OC
    H3CO O
    Br
    HO
    NH
    OC
    H3CO O
    F
    O C
    OH N H
    H3CO O
    H3CO
    OCH3
    OCH3
    COOH
    O
    O-
    NH2
    +H4N
    H3CO
    OCH3
    HO
    O
    O
    O Li
    N H
    OCH3
    O
    C
    OH
    N H
    O
    O O
    Br
    O
    C
    O Li
    N H
    O
    O O
    Br
    O C
    OHN H
    O
    O O
    Cl
    O
    C
    O Li
    N H
    O
    O O
    Cl
  10. 10. Composición farmacéutica que comprende el compuesto según la reivindicación 1 o sales,
    estereois�meros, enanti�meros, prof�rmacos o solvatos farmac�uticamente aceptables del mismo como 15 principio activo y un vehículo farmac�uticamente aceptable.
  11. 11.
    Uso del compuesto según la reivindicación 1 o sales, estereois�meros, enanti�meros, prof�rmacos o solvatos farmac�uticamente aceptables del mismo en la producción de un medicamento destinado a inhibir la histona desacetilasa (HDAC).
  12. 12.
    Uso del compuesto según la reivindicación 1 o sales, estereois�meros, enanti�meros, prof�rmacos o solvatos farmac�uticamente aceptables del mismo en la producción de un medicamento destinado al tratamiento de la diabetes.
  13. 13.
    Uso del compuesto según la reivindicación 1 o sales, estereois�meros, enanti�meros, prof�rmacos o solvatos farmac�uticamente aceptables del mismo en la producción de un medicamento destinado al tratamiento de tumor o enfermedad proliferativa celular.
    10 14. Uso del compuesto según la reivindicación 1 o sales, estereois�meros, enanti�meros, prof�rmacos o solvatos farmac�uticamente aceptables del mismo en la producción de un medicamento destinado a aumentar el crecimiento de las neuritas.
  14. 15. Uso del compuesto según la reivindicación 1 o sales farmac�uticamente aceptables, estereois�meros,
    15 enanti�meros, prof�rmacos o solvatos de los mismos en la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento de enfermedades neurodegenerativas y de la atrofia muscular espinal humana (SMA) de la enfermedad.
  15. 16. Uso según la reivindicación 15, en el que la enfermedad neurodegenerativa es la enfermedad de 20 Huntington o la enfermedad de la poliglutamina.
  16. 17. Compuesto representado por la fórmula:
    -
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