ES2370171T3 - Nuevos compuestos opiáceos, procedimientos de preparación y procedimientos de uso. - Google Patents

Abstract

Un compuesto representado por la fórmula (I): en la que R1 es hidrógeno, un grupo metilo, un grupo isopropilo, un grupo isobutilo, un grupo ciclohexilo, un grupo butilo secundario, un grupo bencilo o un grupo fenilo; R2 es hidrógeno o un grupo metilo; y   R3 es cada X es, independientemente -OH, OMetilo, OEtilo, OBencilo, OnButilo, OFenilo, Metilo, Isopropilo, Butilo, fenilo, N(CH3)2, C(O)NH2, F, Cl, n es 1 ó 2; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

Description

Nuevos compuestos opiáceos, procedimientos de preparación y procedimientos de uso

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Campo de la invención

La presente invención se refiere a nuevos antagonistas y agonistas de receptores opiáceos.

Descripción de los antecedentes

El sistema de receptores opiáceos se ha estudiado ampliamente en las últimas ocho décadas, dirigiéndose principalmente a la búsqueda de analgésicos que no tengan la potencial adicción asociada con la morfina. Aunque estos estudios no tuvieron éxito, la comprensión del sistema de opiáceos ha aumentado mucho. Se ha producido un avance significativo en la comprensión de este sistema, al darse cuenta de que la farmacología de los opiáceos se basa en los receptores. Desde esta posición ventajosa, el centro de la investigación se volvió hacia la identificación de los subtipos de receptores con el objetivo final de asignar la función fisiológica específica a los receptores individuales. Hoy en día, se sabe que el sistema de receptores está compuesto de 3 subtipos diferentes OP1, OP2 y OP3 (delta, kappa y mu), ya que se ha clonado cada uno de ellos y se ha mostrado que derivan de 3 cromosomas diferentes. Para una discusión de los receptores opiáceos, véase Kirk-Othmer Encyclopedia of Chemical Technology, Volumen 17, 4ª edición, 1996, pág. 858-881. Sin embargo, se conoce menos sobre el número de subtipos dentro de cada una de las ramas principales y aunque se ha aprendido mucho de esto, el proceso de asignación de función a los subtipos todavía es un área activa de investigación.

El sistema de receptores opiáceos se ha estudiado ampliamente a lo largo de las últimas ocho décadas, dirigiéndose principalmente a la búsqueda de analgésicos que no tengan la potencial adicción asociada con la morfina. Aunque este esfuerzo no ha tenido éxito hasta la fecha, estudios recientes han destacado el sistema de receptores opiáceos delta como el que tiene el mayor potencial de éxito. Principalmente, se ha mostrado que los agonistas que actúan a través del receptor opiáceo delta modulan el dolor minimizando muchos de los efectos secundarios asociados con la morfina, la cual actúa principalmente en el receptor opiáceo mu. Estos efectos secundarios no deseados incluyen la dependencia física, depresión respiratoria, y problemas de motilidad gastrointestinal. Estos descubrimientos han conducido a un aumento espectacular de los esfuerzos de investigación dirigidos hacia la producción de potentes agonistas de receptores delta muy selectivos. Este esfuerzo ha llevado al descubrimiento de moléculas pequeñas en contraposición a péptidos, debido a su mayor estabilidad in vivo y a su capacidad para penetrar en el sistema nervioso central.

I.

El descubrimiento de potentes antagonistas puros de receptores opiáceos muy selectivos ha sido un objetivo en la química médica durante muchos años1,2. Como sondas moleculares, los antagonistas han sido herramientas útiles en el estudio tanto de la estructura como de las funciones fisiológicas del sistema de receptores opiáceos que son muy complejos. Se ha avanzado mucho, como se pone de manifiesto por el elegante trabajo de Portoghese y colaboradores en la década pasada, que finalmente ha conducido al descubrimiento de los antagonistas selectivos del subtipo de receptor delta y kappa basados en naltrexona, la norbinaltorfimina3 (1, nor-BNI) y el naltrindol4 (2, NTI), respectivamente. Siguiendo la guía de Portoghese, trabajadores de SmithKline Beecham recientemente han descrito que la octahidroisoquinolina (3, SB 205588) era un antagonista muy potente y selectivo para el receptor delta, de segunda generación, derivado formalmente de la fragmentación del naltrindol5. Un objetivo de investigación específico ha sido el descubrimiento de ligandos que se unen de forma reversible y selectiva al receptor de opiáceos, del tipo de compuestos (+)-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina N-sustituida (4a), que presentan actividad antagonista pura6. Estos compuestos serán útiles como sondas moleculares para el receptor opiáceo así como potenciales candidatos de fármacos para el tratamiento de drogodependencias y otros trastornos del SNC7. Aunque los antagonistas del receptor mu se han usado durante años en la terapia para la drogodependencia, descubrimientos recientes sugieren que los antagonistas del receptor kappa podrían proporcionar una estrategia de tratamiento más eficaz y de efecto prolongado8. Se ha preparado una gran variedad de derivados N-sustituidos del compuesto 4a, pero hasta la demostración reciente de la selectividad del receptor mu para el compuesto 5a9, ninguno ha mostrado selectividad entre los subtipos de receptores opiáceos. Puesto que la actividad antagonista pura de estos compuestos no depende del N-sustituyente, se esperaría que los múltiples cambios de esta parte de la molécula afectaran a la afinidad de unión y posiblemente a la selectividad del receptor, pero no alteraran su carácter fundamental de antagonista. Esta característica distingue esta clase de antagonistas de los compuestos basados en morfona, que presentan un comportamiento antagonista puro sólo con N-sustituyentes tales como alilo o ciclopropilmetilo, pero no con metilo, etilo o fenetilo10. Actualmente se cree que el N-sustituyente en el compuesto 4a interacciona con un dominio de unión lipófilo que se ha descrito como muy grande o bastante maleable, puesto que una multitud de diferentes tipos de cambios del N-sustituyente proporciona ligandos que presentan una alta afinidad de unión11. También se ha determinado que se logra la máxima potencia y selectividad para el receptor opiáceo mu cuando el N-sustituyente incorpora una identidad lipófila (fenilo o anillo de ciclohexilo) separada del nitrógeno de la

piperidina por 3 átomos, como se ilustra con los compuestos 5a-d9,11. La síntesis de los compuestos selectivos para el receptor K sigue siendo un objetivo importante. Compuestos 5a-d9,11.

II.

5 Los derivados de la (±)-trans-3,4-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina N-sustituidos, tales como los compuestos 6 y 7, se sabe que tienen una potente actividad antagonista pura de opiáceo no selectiva12-16. Investigaciones previas de antagonistas de opiáceos de la clase de fenilpiperidinas identificaron el sustituyente 3-metilo y su relación relativa trans con respecto al sustituyente en 4 como necesarios y suficientes para impartir actividad antagonista al agonista

10 4-(3-hidroxifenil)piperidina12. Esta característica distingue las fenilpiperidinas de las oximorfonas que se basan en particular en los N-sustituyentes (es decir, alilo, ciclopropilmetilo) para la expresión de la actividad antagonista de opiáceo17. Estudios adicionales demostraron que el N-sustituyente en los antagonistas de tipo fenilpiperidina controla su potencia y eficacia15. Por consiguiente, siguen siendo necesarios compuestos que tengan efectos terapéuticos similares a las trans-3,4-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidinas, pero que se basen en diferentes elementos

15 estructurales.

III.

Se han descubierto numerosos tipos de estructuras de agonistas de opiáceos, y algunos como la metadona, meperidina, fentanilo y pentazocina, así como otros, se han convertido en fármacos importantes para el tratamiento del dolor10. Sin embargo, solo hay unos pocos tipos estructurales que presenten una potente actividad de antagonista de opiáceo puro10,7. El resurgimiento del uso de heroína en los últimos años junto con la eficacia demostrada de los antagonistas de opiáceos para el tratamiento de otras drogodependencias ha promovido un nuevo interés en el desarrollo de nuevos antagonistas para los receptores opiáceos16.

En las últimas dos décadas se ha prestado una atención considerable a los compuestos relacionados con la oximorfona tales como la naloxona (8a) y naltrexona (8b), en los que la actividad antagonista depende del Nsustituyente10. Por ejemplo, los estudios pioneros de Portoghese y colaboradores, condujeron al desarrollo de los antagonistas de receptores opiáceos kappa y delata prototípicos, norbinaltorfimina (1, nor-BNI) y naltrindol (2, NTI). En cambio, la clase de antagonistas puros de tipo trans-3,4-dimetil-(3-hidroxifenil)piperidina N-sustituida (9a-d) ha recibido una atención relativamente pequeña. Los estudios con el análogos N-metilo del compuesto 9a, así como muchos otros análogos N-sustituidos tales como los compuestos 9b, 9c (LY255582) y 9d, mostraron que la actividad antagonista pura dependía del sustituyente 3-metilo y su relación relativa trans con respecto al sustituyente 4-metilo en el anillo de piperidina, y a diferencia del tipo de oximorfona, era independiente de la naturaleza del Nsustituyente7,16,17,6,13,14. Es interesante ver que se encontró que el isómero cis 3,4-dimetilo 9a era un agonistaantagonista mixto. May y colaboradores18 publicaron que el 2,9a-dimetil-5-(3-hidroxifenil)morfano (10a), que tenía el grupo 9-metilo en una configuración comparable a la cis-3,4-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina (9e) con el grupo 5-(3hidroxifenilo) bloqueado en una conformación ecuatorial con respecto al anillo de piperidina en la estructura de morfano, era un antagonista débil pero puro.

No se han descrito ni el 2,91-dimetil-5-(3-hidroxifenil)morfano (10b) ni el 2,41-dimetil-5-(3-hidroxifenil)morfano (10g), debido a la falta de accesibilidad sintética a estos isómeros estructurales. Por consiguiente, la preparación sintética satisfactoria de los 2,91-morfanos y 2,41-morfanos sigue siendo un objetivo importante en el campo de los compuestos de unión a receptores opiáceos.

IV.

5 En la búsqueda de analgésicos que tengan un perfil reducido de efectos secundarios con respecto a la morfina, se ha hecho un gran esfuerzo para encontrar opiáceos que operen por los receptores opiáceos 8 o K en contraposición al receptor opiáceo ! que media las acciones de la morfina y sus congéneres10. BW373U86 (11)19 y SNC-80 (12)20 representan una clase de agonistas de opiáceos que se ha descubierto que son selectivos para el receptor opiáceo

8. Debido a la falta de una subestructura mensaje de opiáceo clara (es decir, un componente tiramina similar a las

10 encefalinas), los compuestos 11 y 12 se han denominado ligandos opiáceos no clásicos5. La subunidad de piperazina de 11 y 12 no se encuentra normalmente en compuestos que presentan actividad en los receptores opiáceos. En cambio, los compuestos con anillo de piperidina se encuentran en muchas clases diferentes de opiáceos27. Si el átomo de nitrógeno interno en los compuestos 11 ó 12 se transpone con el carbono bencílico, se obtendrán los análogos del anillo de piperidina tales como el compuesto 13. Incluso aunque hay elementos

15 estructurales comunes entre las estructuras 11 ó 12 y 13, la diferencia de basicidad esperada entre el grupo amino piperidinilo de 11 ó 12 y la amino sustituido con difenilo de 13 es suficiente para que no se pueda predecir si la similitud sugiere que el compuesto 13 interaccionaría con los receptores opiáceos de forma similar a los compuestos 11 ó 12. También es interesante destacar que el compuesto 13 tiene algunos elementos estructurales en común con el cis-3-metilfentanilo (14)21,22, un ligando opiáceo no clásico selectivo para el receptor de opiáceos mu. Por

20 consiguiente, la preparación del compuesto 13 y estructuras relacionadas siguen siendo un objetivo importante.

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5 RESUMEN DE LA INVENCIÓN

Un objeto de la presente invención es proporcionar compuestos nuevos que se unan a receptores opiáceos.

10 Otro objeto de la presente invención es proporcionar compuestos nuevos que sean antagonistas de receptores opiáceos que se unan con alta afinidad.

Otro objeto de la presente invención es proporcionar opiáceos nuevos que sean selectivos para el receptor kappa comparado con los receptores delta y mu.

15 Otro objeto de la presente invención es proporcionar opiáceos nuevos que sean selectivos para los receptores mu y kappa comparado con el receptor delta.

Otro objeto de la presente invención es proporcionar opiáceos nuevos que sean selectivos para el receptor delta 20 comparado con los receptores mu y kappa.

Otro objeto de la presente invención es proporcionar opiáceos nuevos que sean antagonistas puros en los receptores mu, delta y kappa.

25 Los objetos de la presente invención se pueden lograr con compuestos representados por la fórmula (I), o sales de los mismos farmacéuticamente aceptables:

30 en la que

R1 es hidrógeno, un grupo metilo, un grupo isopropilo, un grupo isobutilo, un grupo ciclohexilo, un grupo butilo secundario, un grupo bencilo o un grupo fenilo; R2 es hidrógeno o un grupo metilo; y

35 R3 es

cada X es, independientemente -OH, OMetilo, OEtilo, OBencilo, OnButilo, OFenilo, Metilo, Isopropilo, Butilo, fenilo, N(CH3)2, C(O)NH2, F, Cl; n es 1 ó 2 ; y

Los objetos de la presente invención se pueden lograr en especial mediante los compuestos descritos en las reivindicaciones 2, 3, 4, 5 y 7.

Los objetos de la presente invención también se pueden lograr mediante los compuestos descritos en la reivindicación 6.

(II) Se obtendrá una apreciación más completa de la invención y de las muchas ventajas asociadas a la misma, cuando

se entienda mejor con referencia a la siguiente descripción detallada cuando se considera en relación con los dibujos que acompañan. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS -Figura 3: Síntesis de los compuestos (7) como se describen en el ejemplo 1.

-

Figura 4: Datos del cribado de la biblioteca descrita en el ejemplo 1 con concentración 100 nM contra el ligando selectivo del receptor kappa [3H] U69.595 (porcentaje de inhibición).

-Figura 5: Comparación de ensayos de relaciones de unión del radioligando y de GTPyS para el compuesto 8, naltrexona, nor-BNI, compuestos 5d y 5a-c descritos en el ejemplo 1, los derivados de N-trans-cinamilo del compuesto 4b. Los datos de unión del radioligando y de GITyS para los compuestos 5a-d se tomaron de la ref. 9 citada en el ejemplo 1.

-

Figura. 7: Representación estructural de (a) Naltrexona, (b) 3,4-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina, y (c) 8a-metil4a-(3-hidroxifenil)-octahidrobenzo[e]isoquinolino (Ejemplo 2).

-

Figura 13: Representación conformacional de naltrexona (1b), 3,4-dimetil-4-(3-hidrofenil)piperidina N-sustituida, y 2alquil-9�-5-(3-hidroxifenil)morfano. Estos compuestos se describen en el ejemplo 4.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

5 La presente invención se refiere a un grupo de compuestos que contienen un grupo de piperidinilo. Se ha encontrado que los compuestos de la invención tienen una variedad de actividades diferentes cuando se unen a los receptores opiáceos.

10 Compuestos de fórmula (I)

En la fórmula (I), R1 es como ya se ha definido antes.

R2 en la fórmula (I) es como se ha definido antes. 15 Preferiblemente, R2 es hidrógeno, R3 en la fórmula (I) es uno de los siguientes grupos:

20 En estos grupos, el anillo de fenilo está sustituido con 1 ó 2 grupos X, y cada X es independientemente como ya se ha definido antes.

Los grupos X preferidos son cloro, flúor, -OH y -OCH3. Preferiblemente, a es 1. El o los grupos X pueden estar situados en las posiciones orto, meta y para. Se prefiere la posición para, en especial cuando X es -OH.

25 La configuración absoluta del átomo de carbono al que está unido R, puede ser (R) o (S). Se prefiere la configuración (S).

Los compuestos de fórmula (I) son preferiblemente opiáceos con afinidad preferente por los receptores opiáceos !/K

30 y una afinidad comparablemente menor por los receptores 8. En una realización preferida, estos compuestos son antagonistas puros. La relación de afinidad para el receptor 8 al receptor K (8/K) puede ser al menos 1,5, preferiblemente al menos 2,0, más preferiblemente al menos 20, todavía más preferiblemente al menos 100, incluso todavía más preferiblemente al menos 750 y los más preferiblemente al menos 800. La relación !/K puede ser de 0,002 a 500.

Los compuestos de fórmula (I) se pueden preparar usando técnicas sintéticas bien conocidas, por condensación de 5 un ácido fórmula R3-CO2H con una amina representada por la fórmula:

El ácido se convierte preferiblemente en un éster activado con el fin de acoplarse con la amina. Se prefiere un éster

10 BOP. En una realización particularmente preferida, se pueden sintetizar y evaluar simultáneamente una variedad de compuestos dentro del alcance de la fórmula (I), usando técnicas de síntesis combinatoria bien establecida, por ejemplo, como se describe en el ejemplo 1.

Los compuestos (I) y compuestos de la reivindicación 6 pueden estar en forma de una sal farmacéuticamente

15 aceptable por protonación de la amina con un ácido adecuado. El ácido puede ser un ácido inorgánico o un ácido orgánico. Los ácidos adecuados incluyen, por ejemplo, ácido clorhídrico, yodhídrico, bromhídrico, sulfúrico, fosfórico, cítrico, acético y fórmico.

Las selectividades de los receptores discutidos antes se determinan basándose en las afinidades de unión en los 20 receptores indicados.

Los compuestos de la presente invención se pueden usar para unirse a receptores opiáceos. Dicha unión se puede llevar a cabo poniendo en contacto el receptor con una cantidad eficaz del compuesto de la invención. Por supuesto, dicho contacto se lleva a cabo preferiblemente en un medio acuoso, preferiblemente a una fuerza iónica, pH, etc.

25 significativamente relevantes.

Los compuestos de la invención también se pueden usar para tratar pacientes que padecen estados patológicos que mejoran mediante la unión a receptores opiáceos. Dichos estados patológicos incluyen la adicción a la heroína, dolor, es decir, los compuestos se usan como analgésicos. Los compuestos de la invención también se pueden usar

30 para invertir la depresión respiratoria inducida por el receptor mu, como agentes citostáticos, como agentes antimigraña, como inmunomoduladores, como inmunosupresores, como agentes antiartríticos, como agentes antialérgicos, como viricidas, para tratar la diarrea, como antidepresivos, como agentes uropáticos, como antitusivos, como agentes antiadicción, como agentes antitabaquismo, para tratar el alcoholismo, como agentes hipotensores, o para tratar la obesidad.

35 Los compuestos se pueden administrar en una cantidad eficaz por cualquiera de las técnicas convencionales bien establecidas en el campo médico. Por ejemplo, los compuestos se pueden administrar por vía oral, intravenosa o intramuscular. Cuando se administran así, los compuestos de la invención se pueden combinar con cualquiera de los vehículos y aditivos farmacéuticos bien conocidos, que se usan habitualmente en dichas composiciones

40 farmacéuticas. Para una discusión de las formas farmacéuticas, vehículos, aditivos, farmacodinámica, etc., véase Kirk-Othmer Encyclopedia of Chemical Technology, 4ª edición, Vol. 18, 1996, pág. 480-590, incorporado en el presente documento por referencia. El paciente preferiblemente es un mamífero, siendo especialmente preferidos los pacientes humanos.

45 Habiendo descrito esta invención en general, se obtendrá una mayor comprensión por referencia a algunos ejemplos específicos que se proporcionan en el presente documento con propósitos solo de ilustración, y no se pretende que sean limitantes salvo que se especifique lo contrario. En cada uno de los ejemplos, la numeración de los compuestos y de las referencias citadas es específica de cada ejemplo.

EJEMPLOS

Ejemplo 1

Identificación de opiáceos selectivos para los receptores opiáceos

Resumen

Se preparó una biblioteca de compuestos de 3 componentes en paralelo usando una metodología sintética en fase de disolución simultánea y múltiple. Los compuestos incorporaban un grupo (+)-(3R,4R)-dimetil-4-(3hidroxfenil)piperidina como uno de los monómeros. Los otros dos monómeros que incluían aminoácidos protegidos con Boc N-sustituidos o no sustituidos y una variedad de ácidos aril-carboxílicos sustituidos, se seleccionaron para añadir diversidad química. El cribado de estos compuestos en experimentos de unión competitiva con el ligando selectivo para el receptor opiáceo kappa [3H]U69.593 condujo a la identificación de un ligando selectivo para el receptor opiáceo K, la N-{(2’S)-[3-(4-hidroxifenil)propanamido]-3’-metilbutil}-(3R,4R)-dimetil-4(3-hidroxifenil)piperidina (8, RTI-5989-29). Estudios de SAR (relación estructura-actividad) adicionales sugerían que el compuesto 8 tiene sitios lipófilos y de enlaces de hidrógeno que son importantes para su potencia y selectividad en el receptor opiáceo. Los sitios parece que existen predominantemente dentro del receptor kappa, puesto que la selectividad surge de una pérdida de afinidad de 530 veces del compuesto 8 por el receptor mu y un aumento de afinidad de 18 veces para el receptor kappa con respecto al ligando selectivo para el receptor mu, la (+)-N-[trans-4-fenil-2-butenil]-(3R,4R)dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina (5a). Este grado de selectividad observado en los experimentos de unión de radioligandos no se observó en el ensayo funcional. De acuerdo con su capacidad para inhibir la unión estimulada por agonista de [35S]GTPyS en los tres receptores opiáceos, el compuesto 8 se comporta como un antagonista puro de receptores opiáceos mu/kappa con afinidad insignificante por el receptor delta.

Química

El acoplamiento de la (+)-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina (4b) (Figura 3) con un aminoácido protegido con terc-butoxicarbonilo (protegido con Boc) seguido de la eliminación del grupo protector Boc con ácido trifluoroacético (IFA) en cloruro de metileno, seguido de reducción usando una disolución en tetrahidrofurano (THF) de complejo de borano-sulfuro de dimetilo, dio las aminas intermedias (6a-k) con rendimientos de 15-78% (Figura 3): Estos compuestos intermedios 6 se sometieron a cromatografía en columna o a cristalización, según fuera necesario, para obtener los compuestos puros. Los productos finales (7) se prepararon en viales de centello por formación del enlace amídico por acoplamiento de una amplia variedad de ácidos carboxílicos disponibles en el comercio. En la sección experimental de este ejemplo se da una lista representativa de dichos ácidos carboxílicos. Se usó hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxi-tris(dimetilamino)fosfonio (reactivo BOP) en THF como el reactivo de acoplamiento que proporcionó productos muy limpios después del tratamiento acuoso. Estos compuestos se usaron directamente en el cribado sin purificación adicional. Los compuestos puros para el análisis de SAR se obtuvieron por purificación de muestras de la biblioteca o por síntesis de compuestos individuales por metodología sintética convencional y se caracterizaron por EM, RMN 1H y análisis elemental.

Resultados y discusión

Los resultados del cribado de la biblioteca de 288 compuestos en la unión competitiva frente al ligando selectivo para el receptor opiáceo kappa [3H]U69.593 se ilustran de forma gráfica en la figura 6. Varios compuestos mostraron inhibición significativa de unión del radioligando con concentración 10 nM, siendo el mejor el compuesto 8 (placa 4, pocillo 20, 71%) (Figura 6). Los datos del % de inhibición de la unión de [3H]U69.593 por los compuestos seleccionados de la biblioteca 8-23 100 nM se listan en la Tabla 1.

Un análisis comparativo de las estructuras relacionadas con los compuestos 9-23, que tienen menos afinidad de unión con respecto al compuesto 8, ilustra fácilmente la importancia de la unión al receptor kappa de cada subunidad estructural del grupo R3 (Tabla 1). El compuesto 9, un diastereoisómero del compuesto 8, en el que el carbono al que está conectado el grupo isopropilo R1 tiene la estereoquímica opuesta, presenta menor afinidad de unión (11%) por el receptor opiáceo kappa. La sensibilidad a la orientación (R o S) en este centro estereogénico sugiere que el grupo isopropilo puede estar trabajando en tándem con otra característica estructural de la unidad R3 tanto para aumentar la unión en el compuesto 8 como la disminuir la unión en el compuesto 9. La diferencia de afinidad de los compuestos 8 (71%) y 10 (28%) sugiere que el sustituyente 4-hidroxilo en el compuesto 8 es más eficaz con alta afinidad de unión al receptor kappa. Además, la menor inhibición presentada por los compuestos 11 (20%) y 12 (25%) que tienen sustituyentes hidroxilo en meta y orto, respectivamente, apunta a la posición para del grupo para-hidroxilo como la posición óptima. El hecho de que el compuesto 19, que carece de grupo isopropilo pero tiene el sustituyente para-hidroxifenilpropiónico, presente menor afinidad (11% frente a 71%) con respecto al compuesto 8, es un apoyo adicional a la importancia de los grupos R1 isopropilo y 4-hidroxifenilo para la unión selectiva al receptor kappa. La baja afinidad del compuesto 20 (20%) que tiene un sustituyente metilo en la posición (R1), muestra que un grupo metilo puede ser menos eficaz que el grupo isopropilo. Esto refuerza la idea de que tanto el grupo isopropilo (R1) como el grupo 4-hidroxifenilo para R3 están trabajando juntos para producir una alta afinidad de unión en el receptor opiáceo kappa del compuesto 8. Los resultados para el compuesto 13 (6%) sugieren que dos grupos metileno son más eficaces entre el anillo de fenilo y la amida carboxílica en la diversidad de elementos de R3, supuestamente debido a que el grupo para-hidroxilo no puede alcanzar su sitio de interacción en el derivado truncado. Además, la menor inhibición de la unión para el compuesto 14 (15%) que incorpora un doble enlace trans en la cadena de conexión, muestra que la longitud de la cadena no es óptima para impartir una alta afinidad de unión, lo que implica que también es preferida la flexibilidad en esta cadena de carbonos para proporcionar un alineamiento adecuado del ligando y el receptor. La menor afinidad del derivado 4-fluoro 15 (26%) y el derivado 4metoxi 18 (16%) apoyan la idea de que existe un enlace de hidrógeno entre el ligando 8 y el receptor, siendo el compuesto 8 el que dona el hidrógeno. Esto también lo apoya la menor afinidad del derivado 3,4-hidroxilo 16 (31%) que puede formar enlace de hidrógeno interno y el derivado 3-metoxi-4-hidroxi 17 (42%) cuyo enlace de hidrógeno podría estar estéricamente dificultado por interferencia de un grupo metoxi adyacente. Es interesante ver que todos los compuestos que tienen metilo y no hidrógeno como segundo elemento de diversidad R2, 21 (0%), 22 (1%), y 23 (7%) presentaban una afinidad de unión muy baja, normalmente en niveles de valores base (blanco de DMSO). Al parecer, la posición R2 preferiblemente no está sustituida. Estos resultados sugieren que el grupo amida puede ser parte de una interacción de enlace de hidrógeno separada para poner el isopropilo R1 y anillo de p-hidroxifenilo R3 claves en sus posiciones correctas para una interacción fuerte con el receptor. Alternativamente, el sustituyente Nmetilo puede disminuir la afinidad del ligando por interacciones estéricas repulsivas.

Considerados juntos, estos datos sugieren que la alta afinidad de unión presentada por el compuesto 8 es el resultado de una combinación de varias características estructurales presentes en su N-sustituyente. Estas incluyen un grupo 4-hidroxilo en el anillo de fenilo colgante del grupo R3, la longitud y flexibilidad de la cadena de carbonos que conecta este anillo al carbonilo de la amida y la presencia de un grupo isopropilo beta (posición R1) con una configuración S en el centro estereogénico adyacente. El análisis de los datos sugiere que las interacciones estabilizantes fundamentales podrían estar relacionadas con la unión de los sustituyentes hidroxilo e isopropilo con los otros átomos de la subestructura del N-sustituyente que actúan para mantener estos dos elementos de unión en posiciones óptimas de superposición dentro del sitio receptor. Alternativamente, el grupo isopropilo podría estar actuando para alterar la conformación de la molécula para proporcionar el mejor alineamiento de la cadena lateral de ácido 4-hidroxifenilpropiónico con su sitio de unión.

Con el fin de obtener información adicional de la SAR, se preparó para el estudio una muestra pura del compuesto 8 junto con los compuestos 24-27 que varían solo en la posición R1. La tabla 2 lista los valores de Ki para estos derivados en los receptores opiáceos mu y kappa junto con los valores de Ki para el compuesto de referencia selectivo para mu 5a, naltrexona, y el antagonista selectivo para el receptor kappa nor-BNI. El ensayo para el receptor delta no se llevó a cabo para los compuestos 24-27 ya que todos los derivados previos del compuesto 8 no habían mostrado afinidad por este subtipo de receptor. Este estudio puso de manifiesto que el compuesto 8 no solo se une activamente al receptor kappa (Ki = 6,9 nM) sino que también tiene una selectividad de 57 veces por el receptor kappa frente al mu (Ki = 393 nM) y una selectividad de >870 veces por el receptor kappa frente al delta (Ki >5700 nM). Por lo tanto, el compuesto 8 presenta un alto grado de selectividad por el subtipo de receptor opiáceo kappa1,2. Nor-BNI (1) tiene una mayor afinidad por el receptor kappa que el compuesto 8 y tiene una mayor selectividad por el receptor kappa con respecto al receptor mu. Sin embargo, el compuesto 8 es más selectivo por el receptor kappa con respecto al receptor delta. Una parte de estas diferencias podría deberse al uso de diferentes tejidos y radioligandos.

Los datos para el compuesto con sustituyente beta-isobutilo 24, que resulta formalmente de la inserción de un metileno entre el grupo isopropilo y su centro estereogénico adyacente del compuesto 8, presentan una pérdida de afinidad por el receptor kappa mientras que mantienen la misma afinidad por el receptor mu que el compuesto 8. El efecto neto es una pérdida de selectividad entre los subtipos de receptores mu y kappa. El compuesto 26 (R1 = ciclopropilo) presenta una pérdida de afinidad similar por el receptor kappa y gana afinidad por el receptor mu produciendo una pérdida de selectividad similar. El compuesto 25 con un grupo R1 sec-butilo presenta una ligera disminución en la potencia tanto en el receptor kappa como en mu pero retiene la selectividad, aunque su magnitud es menor con respecto al compuesto 8. El compuesto 27 (R1 = bencilo) presentaba un perfil de unión completamente diferente del observado en el compuesto 8 con un gran aumento de la potencia en el receptor mu y pérdida simultánea de la potencia en el receptor kappa. Esto no era inesperado puesto que el compuesto 27, preparado a partir del aminoácido fenilalanina, tiene un N-sustituyente con un anillo de fenilo separado del anillo de piperidina por tres grupos metilo que se sabe que favorecen la unión al receptor mu1,2. Por esta razón se excluyó el uso de la fenilalanina en la síntesis de la biblioteca. En general, los comportamientos de los diferentes derivados en R1 del compuesto 8 indican que el tamaño del grupo lipófilo en la posición R1 es importante tanto para la potencia como para la selectividad del ligando por el subtipo de receptor. Además, los datos apoyan la hipótesis de que el grupo isopropilo en el compuesto 8 no altera simplemente la conformación de la cadena lateral sino que interacciona con el receptor directamente en una interacción estabilizante del ligando.

La actividad agonista/antagonista del compuesto 8 se midió determinando su capacidad para estimular o invertir la unión estimulada por el agonista de opiáceo del análogo de GTP no hidrolizable [35S]GTPyS, en los ensayos de los 3 recetores opiáceos (Tabla 3). La tabla 3 incluye los datos obtenidos para la naltrexona, el antagonista puro opiáceo no selectivo estándar nor-BNI, el antagonista selectivo del receptor kappa prototípico, y el potente antagonista opiáceo favorable para el receptor mu (5a). La selectividad por el receptor kappa presentada por el compuesto 8 en el ensayo de inhibición de la unión del radioligando no se observó en el ensayo funcional de [35S]GTPyS. Esa no es una situación atípica; los resultados de unión de radioligandos a menudo difieren sustancialmente de los vistos en ensayos funcionales, pero normalmente implican agonistas. Los antagonistas, naltrexona, normalmente presentan relaciones de unión Ki (radioligando)/Ki (GTPyS) cercanas a la unidad, mientras que se han observado relaciones mayores de la unidad para antagonistas de la serie de trans-3,4-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina N-sustituida1. Este fenómeno se ilustra de forma gráfica en la figura 5. Los derivados de trans-cinamilo 5a-c y el compuesto 5d presentan relaciones de unión Ki (radioligando)/Ki (GTPyS) mayores que la unidad en los ensayos de los receptores mu y kappa, que es claramente diferente de la respuesta demostrada por la naltrexona. En el presente caso, se encuentra que el compuesto 8 se comporta como la naltrexona en los ensayos del receptor kappa con una relación cercana a la unidad, lo cual es muy distinto del comportamiento observado para los compuestos 5a-c y 5d, que presentan relaciones de 118, 228, 63 y 85, respectivamente. Por otra parte, en el ensayo del receptor mu, el compuesto 8 con una relación de 54 se comporta como los compuestos 5a-c y 5d que dan relaciones de 19, 66, 43 y

15. Esta respuesta diferente del compuesto 8 en el ensayo de [35S]GTPyS es suficientemente grande para reducir la selectividad por el receptor kappa observada para el compuesto 8 en los ensayos de unión de radioligando. Obsérvese que las relaciones de unión de Ki (radioligando)/Ki (GTP) para nor-BNI en el receptor mu y kappa son 2,8 y 7,36, respectivamente.

Conclusiones

La identificación del compuesto 8, que presenta un perfil muy selectivo de inhibición de la unión del radioligando al receptor kappa frente al mu y un potente perfil de antagonista de opiáceo mu/kappa, demuestra la eficacia del procedimiento de biblioteca alterada para conducir a la generación del compuesto. Puesto que tanto los receptores mu como kappa pueden ser importantes en la adicción a la heroína, el compuesto 8 debería ser útil como medicamento para el tratamiento de la adicción a la heroína.

Sección experimental

Los puntos de fusión se determinaron en un aparato de tubo capilar Thomas-Hoover y no están corregidos. Los análisis elementales se obtuvieron de Atlantic Microlabs, Inc. y están dentro de ±0,4% de los valores calculados. Todas las rotaciones ópticas se determinaron en la línea D del sodio usando un polarímetro Rudolph Research Autopol III (cubeta de 1-dm). Los espectros de RMN 1H se determinaron en un espectrómetro Bruker WM-250 usando tetrametilsilano como referencia interna. Se usó gel de sílice 60 (nº de malla 230-400) para todas las cromatografía en columna. Los datos de espectros de masas se obtuvieron usando un espectrómetro de masas de electropulverización Finnegan LCQ en modo de iones positivos y a presión atmosférica. Todas las reacciones se siguieron por cromatografía en capa fina usando placas de gel de sílice 60 para TLC Whatman y se visualizaron por UV, tratamiento usando ácido fosfomolíbdico al 5% en etanol y/o exposición a vapores de yodo. Todos los disolventes eran de calidad reactivo. El tetrahidrofurano y el éter dietílico se secaron sobre benzofenona-cetilo sódico y se destilaron antes de usar. El cloruro de metileno se destiló sobre hidruro de calcio antes de usar.

Procedimiento general para introducir la diversidad de elementos R1 y R2 en la estructura 6. Se combinaron la (+)-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina (4b) (11,5 mmol), el aminoácido protegido con Boc adecuado (11,5 mmol) y el reactivo BOP (11,5 mmol) en THF (150 ml) a temperatura ambiente, y a esto se le añadió inmediatamente trietilamina (TEA) o diisopropiletilamina (25,3 mmol). Después de agitar durante 1 h, la mezcla de reacción se vertió en éter dietílico (500 ml) y agua (150 ml) en un embudo de separación. La mezcla se agitó y se separó la capa acuosa. Este procedimiento se repitió usando 150 ml de disolución saturada de NaHCO3 y 150 ml de salmuera. La capa orgánica se diluyó con hexano hasta estar turbia y se secó (Na2SO4), se concentró a presión reducida y después se disolvió en 100 ml de cloroformo (conservado sobre K2CO3) y se volvió a concentrar. Esta se puso en un sistema de alto vacío para separar el disolvente residual, dando un sólido esponjoso amarillo/blanco.

Después de permanecer con vacío en la bomba durante la noche, este material que no estaba puro se disolvió en 45 ml de cloruro de metileno y se enfrió a -20ºC (metanol/hielo). Se le añadió ácido trifluoroacético puro en porciones de 10 ml a lo largo de 2 min para dar una adición total de 30 ml. La mezcla entera se agitó durante exactamente 30 min y después se retiró el baño de enfriamiento durante exactamente 30 min. En este punto, la mezcla de reacción se vertió en un vaso de precipitados de 1 litro que contenía una barra agitadora grande y una mezcla agitada rápidamente de disolución saturada de bicarbonato (400 ml) y cloroformo (150 ml). Tras completarse la adición, se verificó que el pH de la mezcla fuera 10 y se ajustó con bicarbonato sódico sólido, si era necesario. Esta mezcla se vertió en un embudo de separación. Los compuestos orgánicos precipitados se aclararon en el embudo de separación usando una pequeña cantidad de metanol. El vaso de precipitados después se aclaró con una pequeña cantidad de agua que se añadió al embudo de separación. Las capas se agitaron, se separaron y la capa acuosa se extrajo 5 veces más usando cloruro de metileno:THF 3:1. Se observó que los compuestos con grupos R1 pequeños requerían extracciones adicionales y/o saturación de la capa acuosa con cloruro sódico. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y el disolvente se separó a presión reducida. Después, el material se puso en una bomba de vacío para dar un sólido espumoso amarillo.

El material no purificado de la etapa de desprotección se disolvió en THF (150 ml) y se enfrió a -20ºC (metanol/hielo). A esta mezcla agitada se añadió, gota a gota, una disolución de complejo de borano-sulfuro de dimetilo, 2 M en THF (110 mmol). Después la disolución se calentó y se mantuvo a reflujo durante 3 h, y después de este tiempo la disolución se enfrió a -20ºC y se le añadió con cuidado, gota a gota, metanol (72 ml). Esta mezcla se agitó durante 1 h a temperatura ambiente, se añadieron 16,4 ml de HCl 1 M en éter dietílico, la disolución se dejó con agitación durante 20 min, y los disolventes se separaron en un rotavapor. El residuo resultante se repartió entre cloruro de metileno:tetrahidrofurano 3:1 y agua, el pH se ajustó a 10 con disolución saturada de bicarbonato sódico, y la capa acuosa se saturó con cloruro sódico y se extrajo varias veces con cloruro de metileno:tetrahidrofurano 3:1. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se separó el disolvente. Este material se purificó por cromatografía ultrarrápida en una columna de gel de sílice que se preparó mediante empaquetamiento de la suspensión con cloroformo. Los compuestos impuros se cargaron en la columna en forma de una disolución en cloroformo. La elución se llevó a cabo con cloroformo solo seguido de metanol al 3% hasta metanol al 10% en cloroformo, según se necesitara para eluir los compuestos deseados. Las fracciones con producto se combinaron y el disolvente se separó en un rotavapor. Este material se disolvió en una cantidad mínima de acetato de etilo caliente y se dejó cristalizar. El material cristalino se aisló por filtración seguido de lavado con una pequeña cantidad de acetato de etilo enfriado con hielo y se usó directamente en la siguiente etapa después de secado durante la noche en un horno a vacío.

Introducción del elemento de diversidad R3 en la estructura 7. La diamina 6 pura adecuada, producida en la etapa previa (0,05 mmol x el número de derivados que se han preparado), se disolvió en THF (2 ml x el número de derivados que se han preparado), y se le añadió TEA (0,1 mmol x el número de derivados que se han preparado). Después, en viales de centelleo de 20 ml, previamente etiquetados, que contenían una barra agitadora, se añadió uno de los ácidos carboxílicos elegidos (0,05 mmol). A este se añadió la fracción adecuada de la mezcla de diamina/TEA/THF seguido de 50 !l de una disolución 1 M de reactivo BOP en dimetilformamida (DMF). Después, el vial se tapó con una tapa revestida de teflón y se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. Después de este tiempo, se añadieron al vial 4 ml de éter dietílico y 2 ml de agua. Después de agitar y dejar que las capas se depositaran, la capa acuosa se extrajo con una pipeta. Después, se añadieron 2 ml de disolución saturada de bicarbonato sódico y se repitió el procedimiento. A esto le siguió un lavado similar con disolución saturada de cloruro sódico. Se añadió sulfato sódico al vial, y después de secar, la mezcla se transfirió con pipeta a un vial de centelleo de 20 ml, previamente etiquetado y pesado, mediante una pipeta Pasteur 6-in que contenía un pequeño tapón de algodón. Después de esto, se añadieron 2 ml de cloroformo al agente de secado y se agitó el vial, después de lo cual el cloroformo del aclarado se filtró como antes. Los viales de recolección se pusieron en una salida de nitrógeno y se dejó que se evaporaran. Una vez separado el disolvente, los viales se pusieron en un desecador con alto vacío y se dejaron en reposo durante la noche. Los viales se pesaron de nuevo, y el rendimiento bruto se determinó por la diferencia. Puesto que los estudios piloto mostraron que la reacción de acoplamiento con BOP producía muestras muy limpias, los productos se usaron sin más purificación, y se consideró que la pureza era de 100%.

Antes del cribado, todos los compuestos se diluyeron hasta una concentración 10 mM en dimetilsulfóxido (DMSO). La dilución se llevó a cabo determinando los mmol/vial medios para cada lote de 20 reacciones usando una hoja de cálculo de Excel 3.0. Los pesos que se desviaban de la media en >±10% se agruparon en un segundo y tercer grupo por encima y por debajo de la media. Estos también se promediaron con los mismos parámetros. Los compuestos que no caían dentro de los grupos anteriores se diluyeron individualmente de acuerdo con su peso. Este procedimiento permitía llevar a cabo la dilución de la muestra usando un número mínimo de suministros de volúmenes diferentes de DMSO. Una vez diluidas a 10 mM, se extrajeron muestras de 1 ml de cada vial y se pusieron en las filas A y E (un compuesto/pocillo) de una placa de microvaloración de polipropileno de 1 ml x 96 pocillos. Después se llevaron a cabo diluciones seriadas usando dispositivos de pipeta de multicanales Matrix que suministraban una disolución 1 mM a las filas B y F y una disolución 0,1 mM a las filas C y G. Una vez transferidos todos los compuestos a las placas y diluidos a la concentración adecuada, las placas se pusieron en el refrigerador antes del ensayo.

N-(2’-Aminoetil)-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina (6a)

Preparada a partir de N-(terc-butoxi)-glicina y (+)-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina de acuerdo con el procedimiento general con 15% de rendimiento: RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,13-7,062 (t, 1H, J=8,1 Hz), 6,77-6,74 (m, 2H), 6,59-6,55 (m, 1H), 3,31-3,29 (m, 1H), 2,83-2,70 (m, 3H), 2,5 (d, 2H, J = 3,1 Hz), 2,46-2,27 (m, 3H), 2,00 (s, 1H), 1,6 (d, 2H, J = 3,1 Hz), 1,68 (d, 1H, J =13,7 Hz), 1,29 (s, 3H), 0,89 (d, 3H, J = 7,0 Hz); RMN 13C (MeOH-d4) 5 158,5, 152,9, 130,0, 117,9, 113,9, 113,3, 61,6, 57,1, 51,5, 40,2, 39,5, 39,1, 32,0, 28,2, 16,7. MS (electropulverización) M+ 1 = 249. Calculado = 249.

N-(2’-Metilaminoetil)-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina (6b). Preparada a partir de N-(terc-butoxi)sarcosina y (+)-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina de acuerdo con el procedimiento general con 32% de rendimiento: RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,9 (t, 1H, J =7,7 Hz), 6,77 (d, 1H), 6,74 (s, 1H), 6,58 (d, 1H), 2,95-2,90 (m, 1H), 2,87-2,82 (m, 2H), 2,66 (dd, 1H), 2,61-2,55 (m, 2H), 2,54 (s, 3H), 2,52 (td, 1H), 2,37 (td, 1H), 2,03-2,00 (m, 1H), 1,69 (d ancho, 1H), 1,30 (s, 3H), 0,89 (d, 3H, J = 7,0 Hz); RMN 13C (MeOH-d4) 5 130,0, 118,0, 113,8, 113,3, 57,4, 56,7, 51,1, 48,2, 40,2, 39,4, 35,0, 31,9, 28,1, 16,6. MS (electropulverización) M + 1 = 263. Calculado = 263.

N-[(2’S)-Aminopropil]-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina (6c).

Preparada a partir de N-(terc-butoxi)-L-alanina y (+)-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina de acuerdo con el procedimiento general con 56% de rendimiento: RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,11-7,08 (t, 1H, J=7,7), 6,78-6,76 (d, 1H), 6,74 (s, 1H), 6,59-6,57 (d, 1H), 2,953-2,902 (m, 1H), 2,874-2,826 (m, 2H), 2,676-2,647 (dd, 1H), 2,618-2,559 (m, 2H), 2,548 (s, 3H), 2,541-2,400 (td, 1H), 2,342-2,284 (td, 1H), 2,030-2,002 (m, 1H), 1,613-1,587 (d ancho, 1H), 1,303 (s, 3H), 0,800-0,786 (d, 3H, J = 7,0); RMN 13C (MeOH-d4) d 130,0, 118,0, 113,8, 113,3, 57,4, 56,7, 51,1, 48,2, 40,2, 39,4, 35,0, 31,9, 28,1, 16,6. MS (electropulverización) M + 1 = 263. Calculado = 263.

N-[(2’S)-(Metilamino)propil]-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina (6d). Preparada a partir de N-(tercbutoxi)-N-metil-L-alanina17 y (+)-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina de acuerdo con el procedimiento general con 33% de rendimiento: RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,18 (t, 1H, J=7,9 Hz), 6,76 (d, 1H), 6,73 (s, 1H), 6,57 (d, 1H), 2,722,64 (m, 2H), 2,61-2,47 (m, 3H), 2,36 (s, 3H), 2,34-2,20 (m, 3H), 2,00-1,99 (m, 1H), 1,56 (dd, 1H), 1,29 (s, 3H), 1,03 (d, 3H, J=6,2 Hz), 0,65 (d, 3H, J=6,9 Hz); RMN 13C (MeOH-d4) 5 158,4, 153,3, 130,1, 117,9, 113,7, 113,3, 65,1, 56,0, 52,9, 52,9, 40,0, 39,5, 33,7, 31,9, 28,0, 17,3, 16,7. MS (electropulverización) M + 1 = 277. Calculado = 277.

N-[(2’S)-Amino-3’-metilbutil]-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina (6e). Preparada a partir de N-(tercbutoxi)-L-valina y (+)-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina de acuerdo con el procedimiento general con 78% de rendimiento: RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,126-7,062 (t, 1H), 6,769-6,735 (m, 2H), 6,603-6,558 (m, 1H), 2,657-2,179 (m, 8H), 2,000 (s ancho, 1H), 1,583-1,502 (m, 2H), 1,294 (s, 3H), 0,978-0,912 (q, 6H), 0,789-0,761 (d, 3H); RMN 13C (MeOH-d4) 5 158,5, 153,3, 130,1, 117,8, 113,8, 113,3, 63,4, 55,8, 54,1, 53,3, 40,0, 39,5, 33,1, 31,9, 28,1, 19,6, 19,2, 16,8. MS (electropulverización) M + 1 = 291. Calculado = 291.

N-[(2’R)-Amino-3’-metilbutil]-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina (6f). Preparada a partir de N-(tercbutoxi)-D-valina y (+)-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina de acuerdo con el procedimiento general con 62% de rendimiento: RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,11-7,08 (t, 1H), 6,78-6,76 (d, 1H), 6,74 (s, 1H), 6,59-6,57 (dd, 1H), 3,1393,097 (m, 1H), 2,953 (s ancho, 1H), 2,894-2,865 (dd, 1H), 2,546-2,500 (m, 2H), 2,401-2,292 (m, 3H), 2,046-2,034 (m ancho, 1H), 1,894-1,827 (sext, 1H), 1,62-1,30 (m, 1H), 1,311 (s, 3H), 1,042-1,006 (dd, 6H), 0,834-0,820 (d, 3H); RMN13C (MeOH-d4) 5 152,9, 130,1, 118,0, 113,8, 113,3, 59,8, 58,8, 55,2, 50,0, 40,4, 39,4, 31,6, 31,1, 28,0, 18,8, 18,5, 16,5. MS (electropulverización) M + 1 = 291. Calculado = 291.

N-[(2’S)-Amino-4’-metilpentil]-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina (6g). Preparada a partir de N-(tercbutoxi)-L-leucina y (+)-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina de acuerdo con el procedimiento general con 56% de rendimiento: RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,09 (t, 1H, J=7,9 Hz), 6,76 (d, 1 H, J=7,9 Hz), 6,73 (s, 1H), 6,57 (dd, 1H, J=2,2,7,9 Hz), 3,03-2,97 (m, 1H), 2,73 (d, 1H, J=11,2 Hz), 2,64 (d, 1H, J=11,1 Hz), 2,56 (td, 1H, J=2,5, 12,0 Hz), 2,48 (dd, 1H, J=2,7, 11,4 Hz), 2,33 (td, 1H, J=4,5, 12,7 Hz), 2,25 (dd, 1H. J = 3,6,12,4 Hz), 2,19-2,15 (m, 1H), 2,01-2,00 (m, 1H), 1,75 (sept, 1H, J =6,6 Hz), 1,56 (d, 1H. J=13,0 Hz), 1,29 (s, 3H), 1,27-1,15 (m, 2H), 0,94-0,91 (m, 6H), 0,07 (d, 3H, J =7,0 Hz); RMN 13C (MeOH-d4) 5 158,3, 153,3, 130:1, 117,9, 113,7, 113,2, 65,7, 56,0, 53,1, 46,5, 45,2, 40,0, 39,5, 31,9, 28,0, 25,8, 23,7, 22,6, 16,7. MS (electropulverización) M + 1 = 305. Calculado = 305.

N-[(2’S)-Amino-3’-metilpentil]-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina (6h). Preparada a partir de N-(tercbutoxi)-L-isoleucina y (+)-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina de acuerdo con el procedimiento general con 47% de rendimiento: RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,19 (t, 1H, J =7,9 Hz), 6,76 (d, 1H, J=8,1 Hz), 6,73-6,73 (m, 1H), 6,586,56 (dd, 1H, J=2,1, 7,9 Hz), 2,86-2,82 (m, 1H), 2,75-2,73 (m, 1H), 2,65-2,57 (m, 2H), 2,502-2,474 (dd, 1H, J=2,8,11,4 Hz), 2,40-2,23 (m, 3H), 2,02-2,00 (m, 1H), 1,50 (m, 2H), 1,46-1,41(m, 1H), 1,30 (s, 3H), 1,24-1,17 (m, 1H), 0,98-0,87(m, 6H), 0,78 (d, 3H, J =7,0 Hz); RMN 13C (MeOH-d4) 5 158,3,153,2, 130,1, 117,9, 113,7, 113,3, 61,9, 55,9, 53,1, 52,9, 49,0, 40,0, 39,5, 39,3, 31,9, 28,0, 26,6, 16,7, 15,1, 11,8. MS (electropulverización) M + 1 = 305. Calculado = 305.

N-[(2’S)-Amino-2’-ciclohexiletil]-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina (6i). Preparada a partir de N-(tercbutoxi)-L-ciclohexilglicina y (+)-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina de acuerdo con el procedimiento general con 63% de rendimiento: RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,18 (t, 1H. J=7,9), 6,76 (d, 1H, J= 7,8 Hz), 6,75 (s, 1H), 6,57 (d, 1H, J=7,8 Hz), 2,74-2,70 (m, 2H), 2,63-2,55 (m, 2H), 2,47-2,45 (d, 1H, J=10,0 Hz), 2,48 (dd, 1H, J=2,9, 12,4 Hz), 2,36 (td, 1H, J=4,3, 12,6 Hz), 2,23 (t, 1H, J=11,6 Hz), 2,00 (m, 1H), 1,76-1,74 (m, 3H), 1,67 (d, 2H, J=11,9 Hz), 1,57 (d, 1H. J=13,0 Hz), 1,39-1,16 (m, 7H), 1,09 (quint, 2H, J=12,4 Hz), 0,77 (d, 3H, J=6,8 Hz); RMN 13C (MeOH-d4) 5 158,3, 153,3, 130,1, 117,9, 113,7, 113,3, 162,6, 55,8, 53,4, 53,1, 42,9, 40,0, 39,5, 31,9, 30,9, 30,5, 30,2, 28,0, 27,6, 27,4, 16,7. MS (electropulverización) M + 1 = 331. Calculado = 331.

N-[(2’S)-Metilamino-2’-feniletil]-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)-piperidina (6j). Preparada a partir de N-(tercbutoxi)-N-metil-fenilglicina17 y (+)-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina de acuerdo con el procedimiento general con 44% de rendimiento: RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,34-7,22 (m, 5H), 7,13 (t, 1H, J=8,2 Hz), 6,80-6,77 (m, 2H), 6,616,69 (m, 1 H), 3,63 (dd, 1H, J=3,7, 12,6 Hz), 2,73 (d ancho, 2H, J=7,6 Hz), 2,64-2,52 (m, 3H), 2,38 (dd, 2H, J=3,6, 12,6 Hz), 2,25 (s, 3H), 2,04 (d ancho, 1H, J=6,3 Hz), 1,59 (d, 1H, J=12,9), 1,312 (s, 3H), 0,818-0,790 (d, 3H, J=6,9); RMN 13C (MeOH-d4) 5 147,3, 142,5, 131,5, 119,5, 119,0, 118,0, 107,4, 103,2, 102,7, 68,7, 68,233, 67,7, 55,2, 52,9, 45,1, 42,5, 42,5, 29,2, 28,9, 24,2, 21,3, 17,7. MS (electropulverización) M + 1 = 339. Calculado = 339.

N-[(2’S)-Amino-3’-fenilpropil]-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina (6k). Preparada a partir de N-(tercbutoxi)-L-fenilalanina y (+)-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina de acuerdo con el procedimiento general con 44% de rendimiento: RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,29 (t, 1H, J=7,4 Hz), 7,24-7,06 (m, 5H), 6,75-6,71 (m, 2H), 6,57-6,55 (m, 1H), 3,86-3,84 (m, 5H), 3,22-3,94 (m, 1H), 2,83-2,69 (m, 2H), 2,63-2,39 (m, 5H), 2,35-2,24 (m, 2H), 1,97 (t, 1H, J=6,4 Hz), 1,54 (t, 1H, J=12,7 Hz), 1,27 (s, 3H), 0,74 (dd, 3H, J=6,95, 21,04 Hz); RMN 13C (MeOH-d4) 5 158,3, 153,3, 139,9, 130,6, 130,3, 130,0, 129,6, 129,2, 127,5, 127,1, 118,0, 117,9, 113,8, 113,7, 113,2, 65,0, 64,7, 61,0, 57,3, 56,1, 52,9, 52,1, 50,5, 49,5, 49,3, 49,2, 49,0, 48,8, 48,7, 48,5, 41,9, 41,5, 40,3, 40,0, 39,4, 31,9, 28,0, 16,7. MS (electropulverización) M + 1 = 339. Calculado = 339.

N-{(2’S)-[3-(4-Hidroxifenil)propanamido]-3’-metilbutil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil) piperidina (8). Preparada a partir del compuesto 6e y el ácido 3-(4-hidroxifenil)propiónico de acuerdo con el procedimiento general anterior con 74% de rendimiento y se purificó por cromatografía en gel de sílice. La sal de hidrocloruro se preparó usando HCl 1 M en éter dietílico/metanol y precipitación en acetato de etilo: p.f. 136-140°C; RMN 1H (base libre). CD3OD 5 7,16 (t, J=7,94, Hz, 1 H), 7,04 (d, J=8,45 Hz, 2 H), 6,76 (d, J=7,78 Hz, 1 H), 6,72-6,69 (m, 2 H), 6,65 (dd, J=8,04, 1,76 Hz, 1 H), 4,02-3,98 (m, 1 H), 3,57 (d, J= 12,5 Hz, 1 H), 3,40 (ddd, J = 2,90, 11,6, 13,4 Hz, 2 H), 3,03 (dd, J = 10,5, 13,4 Hz, 1 Hz), 2,84 (t, 7,07 Hz, 2 H), 2,60 (t, 7,58 Hz, 2 H), 2,43 (dt, J = 13,21, 4,9 Hz, 1 H), 2,36-2,35 (m, 1 H), 1,85 (d, J = 14,5 Hz, 1 H), 1,87-1,76 (m, 1H), 1,42 (s, 3 H), 0,92 (t, J = 6,9 8 Hz, 6 H), 0,815 (d, J = 7,53, 3 H); RMN 13C, CD30D 5 176,3, 159., 157,7, 153,8, 133,8, 131,3, 131,0, 118,9, 117,1, 114,6, 114,2, 62,0, 57,2, 53,2, 52,8, 40,9, 40,3, 33,1, 33,1, 32,5, 31,7, 28,8, 20,6, 18,9, 17,3. MS (electropulverización) M + 1 = 439. Anal. (C27H39ClN2O3•1,5H2O): C, H, N.

Los compuestos citados en la tabla 1 se sacaron de la biblioteca y se purificaron por cromatografía en gel de sílice. La pureza de la muestra de la biblioteca se determinó de acuerdo con la fórmula [(mg de muestra aislada/mg de masa de muestra bruta) X100].

N-{(2’R)-[3-(4-Hidroxifenil)propanamido]-3’-metilbutil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil) piperidina (9). Preparada a partir del compuesto 6f y el ácido 3-(4-hidroxifenil)propiónico de acuerdo con el procedimiento general. Pureza (85%); RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,83 (s, 3H), 7,13-7,00 (m, 3H), 6,77-6,67 (m, 4H), 6,61-6,57 (m, 1H), 3,96-3,89 (m, 1H), 2,86-2,78 (m, 3M, 2,62-2,58 (m, 1H), 2,48 (d, 3H, J=8,0 Hz), 2,36-2,14 (m, 4H), 1,94 (d ancho, 1H, J=6,3 Hz), 1,76 (sept, 1H, J=5,5 Hz), 1,51 (d ancho, 1H, J=11,0 Hz), 1,26 (s, 3H), 0,84-0,74 (m, 9H). MS (electropulverización) M + 1= 439. Calculado = 439.

N-{(2’S)-[(3-Fenilpropanamido)-3’-metil]butil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil) piperidina (10). Preparada a partir del compuesto 6e y el ácido 3-fenilpropiónico de acuerdo con el procedimiento general. Pureza (87%); RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,25-7,22 (m, 2H), 7,17-7,13 (m, 4H), 6,82 (s, 1H), 6,76 (d, 1H, J=7,8 Hz), 6,70-6,68 (m, 1H), 5,74 (s, 1H), 4,02-3,97 (m, 1H), 2,99-2,87 (m, 2H), 2,74-2,69 (m, 1H), 2,64 (d ancho, 1H, J=1,3 Hz, 2,57-2,40 (m, 6H), 2,272,21 (m, 2H), 2,17 (s, 3H), 1,92=1,87 (m, 2H), 1,56 (d, 1H, 3=13,0 Hz), 1,28 (s, 3H), 0,81 (t, 6H, J=6,8 Hz), 0,69 (d, 3H, J=6,8 Hz). MS (electropulverización) M + 1 = 423. Calculado = 423.

N-{(2’S)-[3-(3-Hidroxifenil)propanamido]-3’-metilbutil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil) piperidina (11). Preparada a partir del compuesto 6e y el ácido 3-(3-hidroxifenil)propiónico de acuerdo con el procedimiento general. Pureza (84%); RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,24-7,23 (m, 1H), 7,13-7,03 (m, 3H), 6,76-6,57 (m, 5H), 3,32-3,29 (m, 4H), 2,85-2,17 (m, 8H), 1,97 (s ancho, 1H), 1,75-1,73 (m, 1H), 1,57 (d ancho, 1H, J=12,3 Hz), 1,28 (s, 3H) 0,863 (t, 6H, J=6,5 Hz), 0,72 (d, 3H, J=7,0). MS (electropulverización) M + 1 = 439. Calculado = 439.

N-{(2’S)-[3-(2-Hidroxifenil)propanamido]-3’-metilbutil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil) piperidina (12). Preparada a partir del compuesto 6e y el ácido 3-(2-hidroxifenil)propiónico de acuerdo con el procedimiento general. Pureza (85%); RMN 1H (CDCl3-d) 5 7,04-6,82 (m, 3H), 6,66-6,65 (m, 2H), 6,48-6,39 (m, 3H), 3,97-3,94 (m, 1H), 2,87-2,84 (m, 2H), 2,76 (d, 1H, J=11 Hz), 2,56-2,22 (m, 8H), 1,94-1,93 (m ancho, 1H), 1,80 (sextete, 1H, J=6,9 Hz), 1,52 (d, 1H, J=13,3 Hz), 1,26 (s, 3H), 0,84 (dd, 6H, J=13,1 Hz), 0,75 (d, 3H, J=6,9 Hz). MS (electropulverización) M + 1 = 439. Calculado = 439.

N-{(2’S)-[(4-Hidroxifenil)acetamido]-3’-metilbutil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina (13). Preparada a partir del compuesto 6e y el ácido 4-hidroxifenilacético de acuerdo con el procedimiento general. Pureza (88%); RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,14-7,06 (m, 3H), 6,67-6,69 (m, 4H), 6,58 (d, 1H, J=8,1 Hz), 3,95-3,92 (m, 1H), 3,32-3,30 (m, 2H), 2,70-2,60 (m, 1H), 2,56-2,47 (m, 1H), 2,41-2,15 (m, 6H), 1,90 (s ancho, 1H), 1,81-1,74 (m, 1H), 1,51 (d, 2H, J=12,5 Hz), 1,25 (s, 3H), 0,86 (t, 6H, J=6,7 Hz), 0,67 (d, 3H, J=6,9 Hz). MS (electropulverización) M + 1 = 425. Calculado =

425.

N-{(2’S)-[trans-3-(4-Hidroxifenil)acrilamido]-3’-metilbutil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil) piperidina (14). Preparada a partir del compuesto 6e y el ácido trans-3-(4-hidroxifenil)cinámico de acuerdo con el procedimiento general. Pureza (85%); RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,25-7,37 (m, 3H), 7,11-7,04 (m, 1H), 6,79-6,72 (m, 4H), 6,56 (d, 1H, J=9,5 Hz), 6,47 (d, 1H, J=12,7 Hz), 4,10 (m, 1H), 2,80 (m, 1H), 2,64 (m, 1H), 2,54-2,26 (m, 5H), 1,95 (m, 2H), 1,56 (d, 1H, J=13,1), 1,28 (s, 3H), 0,94 (t, 6H, J=6,8 Hz), 0,70 (d, 3H, J=6,9) MS (electropulverización) M + 1 = 437. Calculado = 437.

N-{(2’S)-[3-(4-Fluorofenil)propanamido]-3’-metilbutil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil) piperidina (15). Preparada a partir del compuesto 6e y el ácido 3-(4-fluorofenil)propiónico de acuerdo con el procedimiento general. Pureza (89%); RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,23-7,17 (m, 2H), 7,69 (t, 1H, J=8,0 Hz), 6,99-6,92 (m, 2H), 6,76-6,73 (m, 2H), 6,60-6,54 (m, 1H), 3,96-3,90 (m, 1H), 2,88 (t, 2H, J=7,7), 2,76 (d, 1H, J=10,3 Hz), 2,65-2,32 (m, 8H), 1,97 (s ancho, 1H), 1,73-1,69 (m, 1H), 1,54 (d, 1H, J=12,1 Hz), 1,27 (s, 3H), 0,80 (t, 6H, J= 5,8 Hz), 0,71 (d, 3H, J=6,9 Hz). MS (electropulverización) M + 1 = 441. Calculado = 441.

N-{(2’S)-[3-(3,4-Dihidroxifenil)propanamido]-3’-metilbutil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil) piperidina (16). Preparada a partir del compuesto 6e y el ácido 3-(3,4-dihidroxifenil)propiónico de acuerdo con el procedimiento general. Pureza (78%); RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,09 (t, 1H, J=7,9 Hz), 6,76-6,73 (m, 2H), 6,67-6,49 (m, 4H), 3,92 (s ancho, 1H), 2,74 (t, 3H, J=7,6 Hz), 2,63-2,59 (m, 1H), 2,51-2,15 (m, 7H), 1,94 (s ancho, 1H), 1,75-1,70 (m, 1H), 1,55 (d, 1H, J=12,1 Hz), 1,27 (s, 3H), 0,82 (t; 6H, J=6,4 Hz), 0,71 (d, 3H, J=6,9 Hz). MS (electropulverización) M + 1 =

455. Calculado = 455.

N-{(2’S)-[3-(3-Metoxi-4-hidroxifenil)propanamido]-3’-metilbutil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil) piperidina (17). Preparada a partir del compuesto 6e y el ácido 3-(3-metoxi-4-hidroxifenil)propiónico de acuerdo con el procedimiento general. Pureza (87%); RMN 1H (MeOH-d4) 8 7,15 (t, 1H, J=7,7 Hz), 6,81-6,76 (m, 3H), 6,67 (d, 3H, J=3,3 Hz), 3,98 (m ancho, 1H), 3,80 (s, 3H), 2,86-2,69 (m, 3H), 2,53-2,22 (m, 8H), 1,89 (s ancho, 2H), 1,55 (d, 1H, J=12,0 Hz), 1,27 (s, 3H), 0,82 (dd, 6H, J=6,6, 3,2 Hz), 0,67 (d, 3H, J=6,9 Hz). MS (electropulverización) M + 1= 469. Calculado = 469.

N-{(2’S)-[3-(3-Metoxifenil)propanamido]-3’-metilbutil}-(3R,4R)-dimetil]-4-(3-hidroxifenil) piperidina (18). Preparada a partir del compuesto 6e y el ácido 3-(3-metoxifenil)propiónico de acuerdo con el procedimiento general. Pureza (88%); RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,30-7,12 (m, 4H), 6,9-6,8 (m, 4H), 3,95 (s ancho, 1H), 3,76 (s, 3H), 2,96 (d, 2H, J=6,8 Hz), 2,86-2,72 (m, 5H), 2,65-2,61 (m, 1H), 2,56-2,14 (m, 7H), 1,91 (s ancho, 1H). 1,73-1,71 (m, 1H), 1,52 (d, 1H, J=13,0 Hz), 1,26 (s, 3H), 0,81 (t, 6H, J=6,7 Hz), 0,67 (d, 3H, J=6,9 Hz). MS (electropulverización) M + 1 =

453. Calculado = 453.

N-{2’-[3-(4-Hidroxifenil)propanamido]etil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina (19). Preparada a partir del compuesto 6a y el ácido 3-(4-hidroxifenil)propiónico de acuerdo con el procedimiento general. Pureza (82%); RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,13-6,99 (m, 3H), 6,79-6,67 (m, 4H), 6,59 (dd, 1H, J=7,3, 1,8 Hz), 3,32-3,25 (m, 3H), 2,832,77 (m, 3H), 2,58 (s, 2H), 2,46-2,15 (m, 6H), 1,98 (s ancho, 1H), 1,58 (d ancho, 1H, J=12,8 Hz), 1,29 (s, 3H), 0,76 (d, 3H, J=7,0 Hz). MS (electropulverización) M + 1 = 397. Calculado = 397.

N-{(2’S)-[3-(4-Hidroxifenil)propanamido]propil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina (20). Preparada a partir del compuesto 6c y el ácido 3-(4-hidroxifenil)propiónico de acuerdo con el procedimiento general. Pureza (88%); RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,77 (s, 1 H), 7,08 (t, 1H, J=8,1 Hz), 6,98 (d, 2H, J=8,4 Hz), 6,74-6,67 (m, 4H), 6,7 (d, 1H, J=7,5 Hz), 4,03 (dd, 1H, J=6,4 Hz), 2,811-2,70 (m, 3H), 2,49 (s, 2H), 2,44-2,26 (m, 4H), 2,16 (td, 2H, J=3,7, 10,9 Hz), 1,92-1,89 (m, 1H), 1,50 (d, 1H, J=12,3 Hz), 1,23 (s, 3H), 1,04 (d, 3H, J=6,4 Hz), 0,71 (d, 3H, J=6,9 Hz). MS (electropulverización) M + 1 = 411. Calculado = 411.

N-{2’-[3-(4-Hidroxifenil)-N-metilpropanamido]etil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina (21). Preparada a partir del compuesto 6b y el ácido 3-(4-hidroxifenil)propiónico de acuerdo con el procedimiento general. Pureza (78%); RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,84 (s, 1H), 7,18-7,00 (m, 3H), 6,77-6,69 (m, 4H), 6,60 (d, 1H, J=8,1 Hz), 3,47-3,27 (m, 2H), 2,92-2,90 (m, 3H), 2,82-2,77 (m, 3H), 2,67-2,54 (m, 3H), 2,47-2,18 (m, 3H),1,96 (s ancho, 1H), 1,58-1,49 (m, 3H), 1,27 (d, 3H, J=2,91 Hz), 0,73 (t, 3H, J=6,5 Hz). MS (electropulverización) M + 1 = 411. Calculado = 411.

N-{(2’S)-[3-(4-Hidroxifenil)-N-metilpropanamido]propil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil) piperidina (22). Preparada a partir del compuesto 6d y el ácido 3-(4-hidroxifenil)propiónico de acuerdo con el procedimiento general. Pureza (89%); RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,09 (t, 1H, J=7,9 Hz), 6,99 (d, 2H, J=8,2 Hz), 6,78-6,66 (m, 4H), 6,58-6,56 (m, 1H), 4,92-4,86 (m, 1H), 2,74 (s, 3H), 2,27-2,17 (m, 2H), 1,96-1,95 (m ancho, 1H), 1,55 (d ancho, 1H, J=14,3 Hz), 1,27 (s, 3H), 1,02 (d, 3H, J=6,7 Hz), 0,66 (d, 3H, J=6,9 Hz). MS (electropulverización) M + 1 = 425. Calculado = 425.

N-{(2’S)-[3-(4-Hidroxifenil)-N-metilpropanamido]-2’-feniletil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil) piperidina (23). Preparada de acuerdo con el procedimiento general usando el compuesto 6j y el ácido 3-(4-hidroxifenil)propiónico de acuerdo con el procedimiento general. Pureza (86%); RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,69-7,66 (m, 1H), 7,45-7,42 (m, 1H), 7,32-6,97 (m, 7H), 6,76 (d, 1H, J=9,4 Hz), 6,73 (s, 1H), 6,66-6,64 (m, 1H), 6,59-6,57 (m, 1H), 6,05 (q, 1H, J=5,5 Hz), 3,00-2,71 (m, 9H), 2,65-2,63 (m, 2H), 2,29 (td, 1H, J=4,3, 8,4 Hz), 2,01-2,00 (m ancho, 1H), 1,59 (d ancho, 1H, J=12,0 Hz), 1,32-1,28 (m, 6H), 0,71 (d, 3H, J=6,9 Hz). MS (electropulverización) M + 1 = 487. Calculado = 487.

N-{(2’S)-[3-(4-Hidroxifenil)propanamido]-4’-metilpentil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil) piperidina (24).

Preparada de acuerdo con el procedimiento general de acoplamiento (pero a una escala de 3 mmol) usando el compuesto 6g y el ácido 3-(4-hidroxifenil)propiónico con 85% de rendimiento. Después, los productos brutos se purificaron por cromatografía en gel de sílice usando metanol en cloroformo al 10-25%: RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,85 (s, 1H), 7,26-7,06 (m, 6H), 6,97 (d, 2H, J=8,5 Hz), 6,76-6,66 (m, 3H), 6,58 (d, 1H, J=7,2 Hz), 4,27 (t, 1H, J=7,3 Hz), 2,84-2,23 (m, 10H), 1,93 (d ancho, 1H, J=7,2 Hz), 1,52 (d, 1H, J=12,0 Hz), 1,25 (s, 3H), 1,05 (t, 1H, J=7,2 Hz), 0,74 (d, 3H, J=6,9 Hz); RMN 13C (MeOH-d4) 5 164,0, 147,5, 143,0, 142,6, 129,0,122,3, 119,9,119,6, 119,3, 118,5, 116,5, 107,3,105,5, 103,0, 1022, 51,6, 46,1, 40,8, 29,4, 29,3, 29,3, 28,7, 21,4, 21,0, 17,3. Anal. (C28H40N2O3): C, H, N.

N-{(2’S)-[3-(4-Hidroxifenil)propanamido]-3’metilpentil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil) piperidina (25). Preparada de acuerdo con el procedimiento general (pero a una escala de 3 mmol) usando el compuesto 6h y el ácido 3-(4-hidroxifenil)propiónico con 81% de rendimiento. Después, los productos brutos se purificaron por cromatografía en gel de sílice usando metanol en cloroformo al 10-25%: RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,59 (s, 1H), 6,906,76 (m, 3H), 6,52-6,45 (m, 3H), 6,36 (d, 1H, J=7,6 Hz), 3,89 (s ancho, 1H), 2,56-2,54 (m, 3H), 2,39-1,95 (m, 9H), 1,70 (s ancho, 1H), 1,32-1,10 (m, 3H), 1,03 (s, 5H), 0,65-0,61 (m, 8H), 0,52-0,42 (m, 3H); RMN 13C (MeOH-d4) 5 163,8, 147,5, 146,0, 142,6, 122,2, 119,7, 119,4, 107,4, 105,5, 103,1, 102,6, 68,7, 53,7, 46,2, 41,0, 39,4, 39,1, 35,4, 33,4, 29,5, 28,9, 28,7, 21,5, 21,2, 17,5, 15,1, 13,3, 11,9. Anal. (C28H40N2O3): C, H, N.

N-{(2’S)-[3-(4-Hidroxifenil)propanamido]-2’-ciclohexiletil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil) piperidina (26). Preparada de acuerdo con el procedimiento general (pero a una escala de 3 mmol) usando el compuesto 6i y el ácido 3-(4-hidroxifenil)propiónico con 87% de rendimiento. Después, los productos brutos se purificaron por cromatografía en gel de sílice usando metanol en cloroformo al 10-25%: RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,85-7,82 (m, 2H), 7,11-6,97 (m, 3H), 6,74-6,56 (m, 5H), 3,99-3,97 (m, 1H), 2,81-2,75 (m, 3H), 2,54 (m, 1H), 2,44-2,12 (m, 7H), 1,94 (s ancho, 1H), 1,54-1,26 (m, 3H), 1,25 (s, 3H), 1,02-0,68 (m, 10H); RMN 13C (MeOH-d4) 5 164,1, 147,5, 146,0, 142,6, 122,2, 119,7, 119,4, 107,3, 105,5, 103,1, 102,5, 68,7, 49,4, 45,5, 41,3, 40,9, 29,4, 28,8, 28,4, 21,5, 21,1, 17,4, 15,4. Anal. (C30H24N2O3): C, H, N.

N-{(2’S)-[3-(4-Hidroxifenil)propanamido]-3’-fenilpropil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil) piperidina (27). Preparada de acuerdo con el procedimiento general (pero a una escala de 3 mmol) usando el compuesto 6k y el ácido 3-(4-hidroxifenil)propiónico con 82% de rendimiento. Después, los productos brutos se purificaron por cromatografía en gel de sílice usando metanol en cloroformo al 10-25%: RMN 1H (MeOH-d4) 5 7,88 (s, 1H), 7,127,00 (m, 3H), 6,76-6,66 (m, 4H), 6,59-6,55 (m, 1H), 3,90 (m, 1H), 2,78 (q, 3H, J=7,0 Hz), 2,62-2,56 (m, 1H), 2,472,24 (m, 6H), 1,66-1,50 (m, 6H), 1,26 (s, 3H), 1,16-1,03 (m, 3H), 0,88-0,84 (m, 2H), 0,71 (d, 3H, J=6,9 Hz); RMN 13C (MeOH-d4) 5 164,1, 147,5, 146,0, 142,6, 122,1, 119,8, 119,4, 107,3, 105,5, 103,1, 102,6, 68,7, 50,1, 45,6, 41,2, 41,1, 31,7, 29,4, 28,8, 21,5, 21,1, 20,3, 18,4, 17,4, 16,8. Anal. (C31H28N2O3): C, H, N.

Ensayos de unión de opiáceos. Los sitios de unión del receptor mu se marcaron usando [3H][D-Ala2-MePhe4,Glyol5]encefalina ([3H]DAMGO) (2,0 nM, SA = 45,5 Ci/mmol), y los sitios de unión del receptor delta se marcaron usando [3H][D-Ala2,D-Leu5]encefalina (2,0 nM, SA = 47,5 Ci/mmol) usando membranas de cerebro de rata preparadas como se ha descrito4. Los sitios de unión del receptor kappa-1 se marcaron usando [3H]U69.593 (2,0 nM, SA = 45,5 Ci/mmol) y las membranas de cobaya se pretrataron con BIT y FIT para reducir los sitios de unión de receptores mu y delta.

La unión de [3H]DAMGO se desarrolló como sigue: se cargaron previamente 12 x tubos de ensayo de poliestireno de 75 mm con 100 !l del fármaco de ensayo que se había diluido en tampón de ensayo (BB: Tris-HCl 10 mM, pH 7,4, que contenía BSA 1 mg/ml), seguido de 50 !l de BB, y 100 !l de [3H]DAMGO en un cóctel inhibidor de proteasas (Tris-HCl 10 mM, pH 7,4, que contenía bacitracina (1 mg/ml), bestatina (100 mg/ml), leupeptina (40 mg/ml), y quimostatina (20 mg/ml)). Las incubaciones se iniciaron por la adición de 750 !l de la preparación de membrana preparada que contenía 0,2 mg/ml de proteína y se desarrollaron durante 4 a 6 h a 25ºC. El ligando se desplazó con 10 concentraciones del fármaco de ensayo, por triplicado, 2x. La unión no específica se determinó usando levalorfano 20 !M. En estas condiciones, la Kd de [3H]DAMGO era 4,35 nM. Se usaron recolectores celulares Brandel para filtrar las muestras sobre filtros Whatman GF/B, que se sumergieron previamente en tampón de lavado (Tris-HCl 10 mM, pH 7,4).

La unión de [3H][D-Ala2,D-Leu5]encefalina se desarrolló como sigue: se cargaron previamente 12 x tubos de ensayo de poliestireno de 75 mm con 100 !l del fármaco de ensayo que se había diluido en BB, seguido de 100 !l de una disolución de sales que contenía cloruro sódico (1 M, concentración final 100 mM), MnCl2 (30 mM, concentración final 3,0 mM), y para bloquear los sitios del receptor mu, DAMGO (1000 nM, concentración final 100 nM), seguido de 50 !l de [3H][D-Ala2,D-Leu5]encefalina en el cóctel inhibidor de proteasas. Las incubaciones se iniciaron por la adición de 750 !l de la preparación de membrana preparada que contenía 0,41 mg/ml de proteína y se desarrollaron durante 4 a 6 h a 25ºC. El ligando se desplazó con 10 concentraciones del fármaco de ensayo, por triplicado, 2x. La unión no específica se determinó usando levalorfano 20 !M. En estas condiciones, la Kd de [3H][D-Ala2,DLeu5]encefalina era 2,95 nM. Se usaron recolectores celulares Brandel para filtrar las muestras sobre filtros Whatman GF/B, que se sumergieron previamente en tampón de lavado (Tris-HCl 10 mM, pH 7,4, enfriado con hielo).

La unión de [3H]U69.593 se desarrolló como sigue: se cargaron previamente 12 x tubos de ensayo de poliestireno de 75 mm con 100 !l del fármaco de ensayo que se había diluido en BB, seguido de 50 !l de BB, seguido de 100 !l de [3H]U69.593 en el cóctel inhibidor de proteasas estándar con la adición de captopril (1 mg/ml en ácido acético 0,1 N que contenía 2-mercaptoetanol 10 mM para dar una concentración final de 1 !g/ml). Las incubaciones se iniciaron por la adición de 750 !l de la preparación de membrana preparada que contenía 0,4 mg/ml de proteína y se desarrollaron durante 4 a 6 h a 25ºC. El ligando se desplazó con 10 concentraciones del fármaco de ensayo, por triplicado, 2x. La unión no específica se determinó usando U69.593 1 !M. En estas condiciones, la Kd de [3H]U69.593 era 3,75 nM. Se usaron recolectores celulares Brandel para filtrar las muestras sobre filtros Whatman GF/B, que se sumergieron previamente en tampón de lavado (Tris-HCl 10 mM, pH 7,4, enfriado con hielo) que contenía PEI al 1%.

Para los tres ensayos, la etapa de filtración se desarrolló como sigue: se añadieron 4 ml de tampón de lavado a los tubos, se filtraron rápidamente y le siguieron dos ciclos de lavado adicionales. Se contó el tritio retenido en los filtros, después de una noche de extracción en cóctel Cytoscint ICN, en un contador beta Taurus con 44% de eficacia.

Ensayo de unión de [35S]-GTP-y-S. Se descongelaron 10 cerebros de cobaya (Harlan Bioproducts for Science, Inc, Indianapolis, IN) congelados, y el núcleo caudado se diseccionó y se homogeneizó en tampón A (3 ml/caudado) (tampón A = Tris-HCl 10 mM, pH 7,4 a 4ºC que contiene leupeptina 4 mg/ml, quimostatina 2 mg/ml, bestatina 10 mg/ml y bacitracina 100 mg/ml) usando un dispositivo Polytron (Brinkman) ajustado a 6, hasta obtener una suspensión uniforme. El homogeneizado se centrifugó a 30.000 x g durante 10 min a 4ºC y se descartó el líquido sobrenadante. Los sedimentos de membrana se lavaron mediante suspensión otra vez y centrifugación dos veces más con tampón A de nueva aportación, se repartieron en partes alícuotas en tubos de microfuga y se centrifugaron en una microfuga refrigerada Tomy (modelo MTX 150) a una velocidad máxima durante 10 min. Los líquidos sobrenadantes se descartaron y los sedimentos se almacenaron a -80ºC hasta su ensayo.

Para el ensayo de unión de [35S]-GTP-y-S, todas las diluciones de fármaco se hicieron en tampón B [TRIS-HCl 50 mM, pH 7,7/BSA al 0,1%]. Brevemente, 12 x tubos de ensayo de poliestireno de 75 mm recibieron las siguientes adiciones: (a) 50 !l de tampón B con o sin un agonista, (b) 50 !l de tampón B con o sin GTP-y-S 60 !M para la unión no específica, (c) 50 !l de tampón B con o sin un antagonista, (d) 50 !l de disolución de sales que contenían, en tampón B, [35S]-GTP-y-S 0,3 nM, NaCl 600 mM, GDP 600 !M, ditiotreitol 6 mM, MgCl2 30 mM y EDTA 6 mM, y (e)

100 !l de membranas en tampón B para dar una concentración final de 10 !g por tubo. La concentración final de los reactivos era NaCl 10 mM, MgCl2 5 mM, EDTA 1 mM, ditiotreitol 1 mM, GDP 100 !M, BSA al 0,1%, [35S]-GTP-y-S 0,05-0,1 nM, agonistas 500 nM o 10 !M, y concentraciones variables (al menos 10 concentraciones diferentes) de antagonistas. La reacción se inició por la adición de membranas y terminó después de 4 h por adición de 3 ml de 5 agua purificada helada (4ºC) (Milli-Q uv-Plus, Millipore) seguido de filtración a vacío rápida a través de filtros GF/B Whatman previamente sumergidos en agua purificada. Después, los filtros se lavaron una vez con 5 ml de agua helada. La radiactividad unida se contó por espectroscopía de centelleo de líquidos usando un contador de centelleo de líquidos Taurus (Micromedic) con 98% de eficacia después de una noche de extracción en 5 ml de fluido de centelleo Cytoscint. La unión no específica se determinó por la presencia de GTP-y-S 10 !M. Los ensayos se

10 llevaron a cabo por triplicado, y cada experimento se llevó a cabo al menos 3x.

Análisis de datos. Se reunieron los datos de los dos experimentos separados (ensayos de unión de opiáceos) o los tres experimentos (ensayo de [35S]-GTP-y-S) y se ajustaron, usando un ajuste de curva por mínimos cuadrados no lineal MLAB-PC (Civilized Software, Bethesda, MD), a la ecuación logística de dos parámetros6 para los cálculos

15 mejor ajustados de CI50 y el factor de pendiente. Los valores de Ki se determinaron después usando la ecuación: CI50/1 + ([L]/Kd).

Datos de % de inhibición para los compuestos de fórmula (I) en el ensayo del receptor kappa

(continuación) (continuación) (continuación) (continuación) (continuación) (continuación) (continuación)

Amino-alquil-ácidos

AA 1 Ácido 1-piperidina-propiónico 157,21 AA 2 2-N,N-Dimetil-glicina 103,21 AA 3 Ácido 3-N,N-dimetil-aminopropiónico AA 4 Ácido 4-N,N-dimetil-aminobutírico 167,64

Ácidos benzoicos

BA 1 Ácido benzoico 122,12 BA 2 Ácido 2-clorobenzoico 156,57 BA 3 Ácido 2-acetamidobenzoico 179,18 BA 4 Ácido 2-fenoxibenzoico 214,22 BA 6 Ácido 3-clorobenzoico 156,57 BA 8 Ácido 3-fenoxibenzoico 214,22 BA 9 Ácido 3-hidroxibenzoico 138,12 BA 10 Ácido 4-clorobenzoico 156,57 BA 7 Ácido 4-dimetilaminobenzoico 165,19 BA 12 Ácido 4-dodeciloxibenzoico 306,45 BA 13 Ácido 4-butoxibenzoico 212,69 BA 14 Ácido 4-hidroxibenzoico 138,12 BA 16 Ácido 4-terc-butilbenzoico 178,23 BA 18 Ácido 4-acetamidobenzoico 179,18 BA 19 Ácido o-anísico 152,15 BA 20 Ácido m-anísico 152,15 BA 21 Ácido p-anísico 152,15 BA 22 Ácido 2-benzoilbenoico 226,23 BA 23 Ácido 2-bifenilbenzoico 98,22 BA 24 Ácido 4-bifenilbenzoico 98,22 BA 25 Ácido 3-dimetilaminobenzoico 165,19 BA 26 Ácido 2-fluorobenzoico 140,11 BA 27 Ácido 3-nitrobenzoico 167,12 BA 28 Ácido o-tolílico 136,15 BA 29 Ácido m-tolílico 136,15 BA 30 Ácido p-tolílico 136,15 BA 31 Ácido 4-fluoro-3-nitrobenzoico 185,11 BA 32 Ácido 3,4-diclorobenzoico 191,01 BA 33 Ácido 2-hidroxibenzoico 138,12 BA 34 Ácido 4-cloro-3-nitrobenzoico 201,57 BA 35 Ácido 4-flurobenzoico 140,11 BA 36 Ácido 2-nitrobenzoico 167,12 BA 37 Ácido 4-nitrobenzoico 167,12

Ácidos cinámicos

CA 1 Ácido a-metilcinámico 162,19 CA 2 Ácido a-fenilcinámico 226,4 CA 3 Ácido 2-bromo-4,5-dimetoxicinámico 287,11 CA 4 Ácido 2-clorocinámico 182,61 CA 5 Ácido 2,4-diclorocinámico 217,05 CA 6 Ácido 3,4-dihidroxicinámico 180,16 CA 7 Ácido 2,4-dimetoxicinámico 208,21 CA 8 Ácido 3,5-di-terc-butil-4-hidroxicinámico 276,37 CA 9 Ácido 3-fluorocinámico 166,15 CA 10 Ácido 2-hidroxicinámico 164,16 CA 11 Ácido 3-hidroxicinámico 164,16 CA 12 Ácido 4-hidroxicinámico 164,16 CA 13 Ácido 2-metoxicinámico 178,19 CA 14 Ácido 3-metoxicinámico 178,19 CA 15 Ácido 4-metoxicinámico 178,19 CA 16 Ácido 2-metilcinámico 162,19 CA 17 Ácido 3-metilcinámico 162,19 CA 18 Ácido 4-metilcinámico 162,19 CA 19 Ácido 3-(1-naftil)acrílico 224,46 CA 20 Ácido 4-fenilcinámico 224,26 CA 21 Ácido 3,4,5-trimetoxicinámico 238,24 CA 22 Ácido 4-isopropilcinámico 190,24 CA 23 2,6-dicloro 218,063 CA 24 3-benciloxi 254,234 CA 25 2-bromo-4,5-dimetoxi 287,12 CA 26 2-cloro-6-fluoro 200,6 CA 27 alfa-metil-2,4,5-trimetoxi 252,27 CA 28 2-n-hexiloxi 250,22 CA 29 5-bromo-2-metoxi 257,09 CA 30 2-benciloxi 254,234 CA 31 2,4,5-trimetoxi 238,24 CA 32 2,6-difluoro 184,14 CA 33 2-t-butiltio 236,157 CA 34 2-cloro-5-nitro 227,61 CA 35 2,3-dimetoxi 208,21 CA 36 3,5-dit-butil-4-hidroxi 276,37 CA 37 2,5-dimetoxi 208,22 CA 38 Ácido trans-cinámico 147 CA 39 Ácido cis-cinámico 147

Ácidos grasos

FA 1 Ácido acético 60,05

FA 2 Ácido propiónico 74,08

FA 3 Ácido piválico 102,13

FA 4 Ácido 1-fenil-1-ciclopentano 162,19

FA 5 Ácido 1-fenil-1-ciclopropano 190,24

FA 6 Ácido isovalérico 102,13

FA 7 Ácido 4-metilvalérico 116,16

FA 8 Ácido ciclopentilacético 128,17

FA 9 Ácido ciclopentilcarboxílico 114,14

FA 10 trans-2-fenil-1-ciclopropil CA 162,19 FA 11 Ácido ciclohexano-carboxílico 128,17

Hidroxiácidos

HA 1 2-Hidroxi-3-metil-butírico 118,13 HA 2 2-Hidroxi-2-metil-butírico 118,13 HA 3 3-Hidroxi-butírico 104,11 HA 4 3-Hidroxi-4-trimetilamino-butírico 197,66 HA 5 2-Fenil-3-hidroxi-propiónico 166,18

Ácidos nicotínicos

NA 1 Ácido 2-(n-amiltio)nicotínico 225,31 NA 2 Ácido 5-bromonicotínico 202,01 NA 3 Ácido 6-cloronicotínico 157,56 NA 4 Ácido 2-cloronicotínico 157,56 NA 5 Ácido 2-(metiltio)nicotínico 169,2 NA 6 Ácido nicotínico 123,11 NA 7 Ácido picolínico 123,11 NA 8 Ácido 2-piridilacético HCl 173,6 NA 9 Ácido 3-piridilacético HCl 173,6 NA 10 Ácido 4-piridilacético HCl 173,6 NA 11 Ácido 2-(feniltio)nicotínico 231,27 NA 12 2-hidroxi-6-metil-nicotínico 153,14 NA 13 Ácido 3-(3-piridil)acrílico 149,15 NA 14 Ácido 3-(4-piridil)acrílico 149,15

Ácido propiónico

PP 1 fenil-propiónico 150,18 PP 2 Ácido 3,3-difenilpropiónico 226,28 PP 3 Ácido 3-fenilbutírico 164,2 PP 4 Ácido 3-(2-hidroxifenil)propiónico 166,18 PP 5 Ácido 3-(3-hidroxifenil)propiónico 166,18 PP 6 Ácido 3-(4-hidroxifenil)propiónico 166,18 PP 7 Ácido 3-(3-metoxifenil)propiónico 180,2 PP 8 Ácido 3-(4-metoxifenil)propiónico 180,2 PP 9 Ácido 3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico 240,26 PP 10 Ácido 3-(2-metoxifenil)propiónico 180,2 PP 11 Ácido 3-(2,5-dimetoxifenil)propiónico 210,24 PP 12 Ácido 3-(2-clorofenil)propiónico 184,62 PP 13 Ácido 3-(4-aminofenil)propiónico 165,119 PP 14 Ácido 3-(4-fluorofenil)propiónico 168,17 PP 15 Ácido 3-(3,4-dihidroxifenil)propiónico 182,18 PP 16 3-(3-metoxi-4-hidroxifenil) 196,2 PP 17 3-(3,5-dinitro-4-hidroxifenil) 256,2 PP 18 Ácido 3-(pentaflurofenil)propiónico PP 19 Ácido 3-(4-Boc-aminofenil)propiónico 265 PP 21 Ácido 2,2-difenilpropiónico 226,28

Ácido fenilacético

PA 1 PA 2 PA 3 PA 4 PA 5 PA 7 PA 8 PA 9 PA 10 PA 11 PA 12 PA 13 PA 14 PA 15 PA 16 PA 17 PA 18 PA 19 PA 20 PA 21 1 PA 22 PA 23 PA 24 PA 25 PA 26 PA 27 PA 28 PA 29 PA 30 PA 31 1 PA 32 PA 33 PA 34 PA 35 PA 36 PA 37 PA 38 PA 39 PA 40

Referencias

Ácido 4-aminofenilacético Ácido 4-bifenilacético Ácido 2-bromofenilacético Ácido 4-bromofenilacético Ácido 4-(n-butoxi)fenilacético Ácido 3-cloro-4-hidroxifenilacético Ácido 2-clorofenilacético Ácido 3-clorofenilacético Ácido 4-clorofenilacético Ácido 2-cloro-6-fluorofenilacético Ácido 2,4-diclorofenilacético Ácido 2,6-diclorofenilacético Ácido 3,4-diclorofenilacético Ácido 2,5-dimetoxifenilacético Ácido 3,4-dimetoxifenilacético Ácido 2,5-dimetilfenilacético Ácido 2,4-dinitrofenilacético Ácido 2-fluorofenilacético Ácido 3-fluorofenilacético Ácido 4-fluorofenilacético

Ácido 2-hidroxifenilacético Ácido 4-hidroxifenilacético Ácido 2-metoxifenilacético Ácido 3-metoxifenilacético Ácido 4-metoxifenilacético Ácido 2-metilfenilacético Ácido 3-metilfenilacético Ácido 4-metilfenilacético Ácido 2-nitrofenilacético Ácido 4-nitrofenilacético Ácido fenilacético Ácido 2-trifluormetilfenilacético Ácido 3-trifluorometilfenilacético Ácido 3,4,5-trimetoxifenilacético Ácido 4-etoxifenilacético Ácido mesitilacético 4-dimetil-amino PA 3-hidroxifenil PA difenil-acético 151,17 288,55 215,05 215,05 208,26 186,59 170,6 170,6 170,6 188,59 205,04 205,04 205,04 196,2 196,2 164,2 226,15 154,14 154,14 154,14

152,15 152,15 166,18 166,18 166,18 150,18 150,18 150,18 181,15 181,15 136,15 204,15 204,15 226,23 180,22 178,23

5 (1) Thomas, J.B.; Mascarella, S.W.; Rothman, R.B.; Partilla, J.S.; Xu, H.; McCullough, K.B.; Dersch, C.M.; Cantrell, B.E.; Zimmerman, D.M.; Carroll, F.I., Investigation of the N-substituent conformation governing potency and ! receptor subtype-selectivity in (+)-(3R,4R)-dimethyl-4-(3-hydroxyphenyl)piperidine opioid antagonists. J. Med. Chem. 1998, 41 (11), 1980-1990.

10 (2) Mitch, C.H.; Leander, J.D.; Mendelsohn, L.G.; Shaw, W.N.; Wong, D.T.; Cantrell, B.E.; Johnson, B.G.; Reel, J.K.;

Snoddy, J.D.; Takemori, A.E.; Zimmerman, D.M., 3,4-Dimethyl-4-(3-hydroxyphehyl)piperidines: Opioid antagonists

with potent anorectant activity. J. Med. Chem. 1993, 36(20), 2842-2850.

(3) Xu, H.; Lu, Y.-F.; Partilla, J.S.; Brine, G.A.; Carroll, F.I.; Rice, K.C.; Lai, J.; Porreca, F.; Rothman, R.B., Opioid 15 peptide receptor studies. 6. The 3-methylfentanyl congeners RTI-4614-4 and its enantiomers differ in efficacy, potency, and intrinsic efficacy as measured by stimulation of [35S]GTP-y-S binding using cloned m-opioid receptors. Analgesia 1997, 3, 35-42.

(4) Rothman, R.B.; Xu, H.; Seggel, M.; Jacobson, A.E.; Rice, K.C.; Brine, G.A.; Carroll, F.I., RTI-4614-4: an analog of (+)-cis-3-methylfentanyl with a 27,000-fold binding selectivity for mu versus delta opioid binding sites. Life Sci. 1991, 48, PL111-PL-116.

(5)

Rothman, R.B.; Bykov, V.; de Costa, B.R.; Jacobson, A.E.; Rice, K.C.; Brady, L.S., Interaction of endogenous opioid peptides and other drugs with four kappa opioid binding sites in guinea pig brain. Peptides 1990, 11, 311-331.

(6)

Rodbard, D.; Lenox, R.H.; Wray, H.L.; Ramseth, D. Statistical characterization of the random errors in the

radioimmunoassay dose-response variable. Clin. Chem. 1976, 22, 350- 58. 10

(7) Takemori et al, J. Pharm. Exp. Ther.,1988, 246 (1), 255-258.

Tabla 1. Resultados del cribado de la inhibición de isómeros estructurales seleccionados del compuesto 8, tomados de la biblioteca frente al ligando selectivo para el receptor opiáceo kappa [3H]U69.593 15

Tabla 2. Datos de unión de radioligando para el compuesto 8 y compuestos relacionados en ensayos de receptores opiáceos mu, delta y kappa

Compuesto

R [3H]DAMGO Ki (nM±SD) (-nH) [3H]DADLE [3H]U69.593 !/K 8/x

8

i-Pr 393±13,3 (0,89±0,02) >5700 6,91 ±0,55 (0,81±0,05) 57 >824

24

i-Bu 398±72,3 (0,91±0,16) NA 89,3±7,03 (0,78±0,05) 4,5

25

sec-Bu 421 ±30,5 (0,91±0,06) NA 8,84±0,30 (0,87±0,02) 47

26

c-Hex 234±25,2 (0,84±0,08) NA 83,1 ±5,7 (0,79±0,04) 2,8

27

Bencilo 9,6±:1,18 (0,89±0,09) NA 54,6±3,5 (0,86±0,04) 0,17

5aa 1(nor-BNI)b,c

0,74±0,05 (0,89±0,09) 47,2±3,3 322±38,1 (0,75±0,09) 42,9±11 122 ± 11,9 (0,52±0,07) 0,28 ± 0,07 0,006 181 2,6 150

naltrexonab

1,39 ±0,40 (0,9460,08) 94,9±6,6 (1,01±0,09) 4,71 ±0,12 (1,05±0,08) 0,30 20,1

a Datos tomados de la referencia 1 b Datos proporcionados por referencia; el compuesto no es un derivado del compuesto 8. c Datos tomados de la referencia 7. [3H]DAMGO, [3H]DPDPE, y [3H]U69593 se usaron como los radioligandos para los ensayos de los receptores mu, delta y kappa, respectivamente. Se usaron membranas de cerebro de cobaya.

Tabla 3. Inhibición por antagonistas de la unión de [35S]GTPyS en el núcleo caudado de cobaya, estimulada por los agonistas de opiáceos selectivos DAMGO (!), SNC80 (8) y U69.593 (K) Ki (nM±SD) (-nH)a

Compuesto DAMGOb SNC80C U69.593d 8 7,25 ± 0,52 450 ± 74,1 4,70 ± 0,56

(1,11 ± 0,08) (1,05 ± 0,17) (1,38 ± 0,19) 5ae 0,039 ± 0,003 1,48 ± 0,094 1,04 ± 0,061 (1,06 ± 0,07) (1,19 ± 0,08) (1,07 ± 0,06)

1, nor-BNI 16,75 ± 1,47 10,14 ± 0,96 0,038 ± 0,005 (1,02 ± 0,09) (1,18 ± 0,12) (0,97 ± 0,12) naltrexona 0,93 ± 0,21 1 19,3 ± 2,25 2,05 ± 0,21

(1,03 ± 0,22) (1,05 ± 0,17) (1,38 ± 0,19) aVéase la nota a de la tabla 2 b DAMGO [(D-Ala2,MePhe4,Gli-ol5)encefalina].

Agonista selectivo para el receptor opiáceo mu. cSNC-80 ([(+)-4-[(aR)-a-(2S,5R)-4-alil-2,5-dimetil-1-piperazinil)- 3

10 metoxibencil]-N,N-dietilbenzamida). Agonista selectivo para el receptor opiáceo delta. dU69.593 [(5a,7a,81)-(-)-Nmetil-N-[7-(1-pirrolidinil)-1-oxaspiro[4,5]dec-8-il]bencenoacetamida]. Agonista selectivo para el receptor opiáceo kappa. eDatos tomados de la referencia 1.

Apéndice. Análisis 15 N-{(2’S)-[3-(4-Hidroxifenil)propanamido]-3’-metilbutil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina (8). Anal. calculado para C27H39CIN2O3•1,5H2O: C, 64,59, H, 8,43; N, 5,58. Encontrado: C, 64,35; H, 8,12; N, 5,38.

N-{(2’S)-[3-(4-Hidroxifenil)propanamido]-4’-metilpentil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina (24). Anal. 20 calculado para C28H40N2O3: C, 74,30, H, 8,91; N, 6,19. Encontrado: C, 74,12; H, 9,22; N, 6,30.

N-{(2’S)-[3-(4-Hidroxifenil)propanamido]-3’-metilpentil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina (25). Anal. calculado para C28H40N2O3: C, 74,30, H, 8,91; N, 6,19. Encontrado: C, 74,02; H, 9,20; N, 6,25.

25 N-{(2’S)-[3-(4-Hidroxifenil)propanamido]-2’-ciclohexiletil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina (26).

Anal. calculado para C30H42N2O3: C, 75,28, H, 8,84; N, 5,85. Encontrado: C, 75,18; H, 8,96; N, 5,97.

N-{(2’S)-[3-(4-Hidroxifenil)propanamido]-3’-fenilpropil}-(3R,4R)-dimetil-4-(3-hidroxifenil)piperidina (27). Anal. calculado para C31H38N2O3: C, 76,51, H, 7,87; N, 5,76. Encontrado: C, 76,15; H, 7,99; N, 5,89.

Resultados y discusión

Tanto los estudios iniciales como el trabajo realizado en el laboratorio de los autores de la invención, han proporcionado pruebas de que la actividad antagonista de algunos compuestos de piperidina N-sustituidos se

10 expresa por una interacción de receptor-ligando con conformación de silla de la piperidina/fenilo ecuatorial como se ilustra en la figura 7b2. Esto contrasta con la conformación de silla de piperidina/fenilo axial presentada por la naltrexona (figura 7a).

Tabla 10. Afinidades de los antagonistas 3,4-dimetil-(3’-hidroxifenil)piperidina N-sustituida para los receptores

15

opiáceos mu y kappaa

Compuesto

! [3H]NaIb Ki (nM) K [3H]EKCc

4a

80 833

4b

1,5 52

1b, naltrexona

0,56 3,9

a Datos tomados de la referencia 2.

b[3H]Naloxona (ensayo del receptor !)

c[3H]Etilcetociclazocina (ensayo de receptor K)

Tabla 11. Inhibición por antagonistas de la unión de [35S]GTPyS en el núcleo caudado de cobaya, estimulada por los agonistas de opiáceos selectivos DAMGO (mu), SNC80 (delta) y U69.593 (kappa) Ki (nM±SD)

Compuesto ! (DAMGO)a 8 (SNC80)b K (U69.593)c 5b 21,2 ± 2,30 750 ± 85,9 105 ± 10,9 5c 0,338 ± 0,028 12,6 ± 1,01 1,34 ± 0,084

1b, naltrexona 0,930 ± 0,21 19,3 ± 2,25 2,05 ± 0,21 3 DAMGO [(D-Ala2,MePhe4,Gli-ol5)encefalina], Agonista selectivo para el receptor opiáceo mu. bSNC-80 ([(+)-4-[(aR)a-(2S,5R)-4-alil-2,5-dimetil-1-piperazinil)-3-metoxibencil]-N,N-dietilbenzamida). Agonista selectivo para el receptor opiáceo delta. Agonista selectivo para el receptor opiáceo delta. cU69.593 (trans-3,4-dicloro-N-metil[2-(1-pirrolidinil) ciclohexil]bencenoacetamida). Agonista selectivo para el receptor opiáceo kappa.

20 Apéndice

Análisis elemental Coeficiente de absorción F(000) Tamaño del cristal Intervalo zeta para la recolección de datos Intervalos de los índices Reflexiones recogidas Reflexiones independientes Corrección de absorción Transmisión máx. y mín. Método de refinamiento Datos / restricciones / parámetros Bondad del ajuste en F2 Índices R finales [I>2sigma(I)] Índices R (todos los datos) Mayor diferencia entre máximo y mínimo 2,072 mm-1 608 0,40 x 0,26 x 0,24 mm3 de 3,12 a 57,49º -15<=h<=3, -10<=k<=1, -12<=I<=12 2651 2154 [R(int) = 0,0312] Integración 0,6449 y 0,5284 Mínimos cuadrados con matriz completa en F2 2153 / 0 / 180 1,047 R1 = 0,0472, wR2 = 0,1367 R1 = 0,0598, wR2 = 0,1493 0,213 y -0,228 e.Å-3

Calculado

Encontrado

Compuesto 9 C17H25NO 5b C16H24ClNO 5c C23H30ClNO

C 78,72 68,19 74,27 H 9,71 8,53 8,13 N 5,40 4,91 3,77 C 78,79 68,25 74,16 H 9,75 8,53 8,12 N 5,34 5,03 3,71

Datos de cristalografía de rayos X para el compuesto 5b25

Tabla S1. Datos cristalinos y refinamiento de estructura para el compuesto 5b

Fórmula empírica Peso fórmula Temperatura Longitud de onda sistema cristalino Grupo espacial Dimensiones de la celda unidad Volumen Z Densidad (calculada)

C16 H24 Cl N O 281,81 293(2) K 1,54178 Å Monoclínico P2(1)/ca =14,183(1) Å b = 9,996(1) Å c = 11,126(1) Å 1577,5(2) Å3 4 1,187 mg/m3 a= 90º. 1= 90,33(2)º. y = 90º.

Tabla S2. Coordenadas atómicas (x 104) y parámetros de desplazamientos isotrópicos equivalentes (Å2 x 103) para el compuesto 5b. U(eq) se define como una tercera parte de la señal del tensor ortogonalizado Uij.

Tabla S3. Longitudes de enlace [Å] y ángulos [º] para el compuesto 5b

C(1)-N(2)

1,509(3)

C(1)-C(9)

1,524(4)

C(1)-C(8)

1,532(4)

N(2)-C(2)

1,488(4)

N(2)-C(3)

1,494(4)

C(3)-C(4)

1,517(4)

C(4)-C(5)

1,540(4)

C(5)-C(10)

1,530(4)

C(5)-C(9)

1,553(3)

C(5)-C(6)

1,558(4)

C(6)-C(7)

1,530(4)

C(7)-C(8)

1,518(4)

C(9)-C(9A)

1,533(3)

C(10)-C(11)

1,387(4)

C(10)-C(15)

1,401(4)

C(11)-C(12)

1,378(4)

O(12)-C(12)

1,365(4)

C(12)-C(13)

1,383(5)

C(13)-C(14)

1,371(5)

C(14)-C(15)

1,379(5)

N(2)-C(1)-C(9)

109,1(2)

N(2)-C(1)-C(8)

113,6(2)

C(9)-C(1)-C(8)

111,2(2)

C(2)N(2)-C(3)

112,2(2)

C(2)-N(2)-C(1)

113,1(2)

C(3)-N(2)-C(1)

113,1(2)

N(2)-C(3)-C(4)

112,3(2)

C(3)-C(4)-C(5)

116,4(2)

C(10)-C(5)-C(4)

111,0(02)

C(10)-C(5)-C(9)

110,5(2)

C(4)-C(5)-C(9)

108,8(2)

C(10)-C(5)-C(6)

107,4(2)

C(4)-C(5)-C(6)

112,1(2)

C(9)-C(5)-C(6)

107,0(2)

C(7)-C(6)-C(5)

115,5(2)

C(8)-C(7)-C(6)

113,3(2)

C(7)-C(8)-C(1)

116,1(2)

C(1)-C(9)-C(9A)

112,7(2)

C(1)-C(9)-C(5)

108,9(2)

C(9A)-C(9)-C(5)

114,9(2)

C(11)-C(10)-C(15)

116,8(3)

C(11)-C(10)-C(5)

119,4(2)

C(15)-C(10)-C(5)

123,8(2)

C(12)-C(11)-C(10)

122,9(3)

O(12)-C(12)-C(11)

122,1(3)

O(12)-C(12)-C(13)

118,5(3)

C(11)-C(12)-C(13)

119,4(3)

C(14)-C(13)-C(12)

118,6(3)

C(13)-C(14)-C(15)

122,2(3)

C(14)-C(15)-C(10)

120,0(3)

Tabla S5. Coordenadas de los átomos de hidrógeno (x 104) y parámetros de desplazamientos isotrópicos (Å2 x 103)

para el compuesto 5b.

Este ejemplo se describe en Tomas y col., J. Med. Chem., V, 41, No, 21, 4143-4149 (1998) incorporado en el 5 presente documento por referencia, incluido &quot;Supporting Information Available&quot; descrito en la pág. 4149.

Es evidente que son posibles numerosas modificaciones y variaciones de la presente invención a la luz de las enseñanzas anteriores. Por lo tanto, se entiende que dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas, la invención se puede llevar a la práctica de otra forma que la descrita específicamente en el presente documento.

10 Todas las referencias citadas antes se incorporan en esta solicitud por referencia en su totalidad salvo que se indique lo contrario.

Claims (7)

1. REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto representado por la fórmula (I):

   en la que R1 es hidrógeno, un grupo metilo, un grupo isopropilo, un grupo isobutilo, un grupo ciclohexilo, un grupo butilo secundario, un grupo bencilo o un grupo fenilo;

   10 R2 es hidrógeno o un grupo metilo; y R3 es

   15 cada X es, independientemente -OH, OMetilo, OEtilo, OBencilo, OnButilo, OFenilo, Metilo, Isopropilo, Butilo, fenilo, N(CH3)2, C(O)NH2, F, Cl, n es 1 ó 2;

   o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable. 20

2. 2.

   El compuesto de la reivindicación 1, en el que R1 es hidrógeno, un grupo metilo, un grupo isopropilo, un grupo isobutilo, un grupo ciclohexilo, un grupo butilo secundario, un grupo bencilo o un grupo fenilo;

   R2 es hidrógeno o un grupo metilo; n es 1 ó 2 .

3. 3.

   El compuesto de la reivindicación 2, en el que

   5 R1 es hidrógeno, un grupo metilo, un grupo isopropilo, un grupo isobutilo, o un grupo butilo secundario; n es 1 ó 2.
4. 4. El compuesto de la reivindicación 3, en el que R1 es hidrógeno, un grupo metilo o un grupo isopropilo;

   10 R2 es hidrógeno o un grupo metilo; n es 1 ó 2, y al menos un X es -OH, -OCH3 o -F.
5. 5. El compuesto de la reivindicación 4, en el que al menos un X es -OH.

   15 6. Un compuesto representado por la siguiente fórmula:

   en la que R1, R2, X1, X2, S1, S2, S3 son como se definen en la siguiente tabla:

   y en la que en el compuesto 9, el carbono al que está unido el grupo i-Pr tiene la estereoquímica opuesta a la que tiene en el compuesto 8; y en el compuesto 14 el doble enlace que une X1 y X2 es un doble enlace trans.
6. 7. El compuesto de fórmula (I) de la reivindicación 1, en el que dicho compuesto está representado por la siguiente fórmula:

   en la que R es como se define en la siguiente tabla:

   REFERENCIAS CITADAS EN LA DESCRIPCIÓN

   Esta lista de referencias citadas por el autor de la solicitud es sólo para la conveniencia del lector. No forma parte del documento de patente europea. Aunque se ha tenido mucho cuidado al recopilar las referencias, no se pueden excluir errores u omisiones y la EPO rechaza cualquier responsabilidad en este aspecto.

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