ES2351026A1 - Uso de peptidos de la proteina e2 del virus de la hepatitis g para inhibir la actividad del virus vih. - Google Patents
Uso de peptidos de la proteina e2 del virus de la hepatitis g para inhibir la actividad del virus vih. Download PDFInfo
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Abstract
Uso de péptidos de la proteína E2 del virus de la hepatitis G para inhibir la actividad del virus VIH. La presente invención se refiere al uso de al menos un péptido, o derivado del mismo, contenido en la secuencia de la proteína E2 del virus de la hepatitis G (GBV-C/HGV), capaz de inhibir la actividad del virus VIH, impidiendo o reprimiendo la función y/o actividad del virus VIH (Virus de Inmunodeficiencia Humana), de forma transitoria o permanente, o además capaz de interaccionar con una secuencia aminoacídica de la glicoproteína gp41 del virus VIH, para la elaboración de una composición farmacéutica. Dicho péptido es capaz de impedir la inhibición de la función del fragmento de la proteína gp41 del virus VIH, impedir la fusión celular o impedir la replicación del VIH en una célula huésped. Asimismo la presente invención también se refiere a dicha composición farmacéutica y al método para su fabricación.
Description
Uso de péptidos de la proteína E2 del virus de
la hepatitis G para inhibir la actividad del virus VIH.
La presente invención se refiere al uso de al
menos un péptido, o derivado del mismo, contenido en la secuencia de
la proteína E2 del virus de la hepatitis G
(GBV-C/HGV), capaz de inhibir la actividad del virus
VIH, impidiendo o reprimiendo la función y/o actividad del virus VIH
(Virus de Inmunodeficiencia Humana), de forma transitoria o
permanente, o además capaz de interaccionar con una secuencia
aminoacídica de la glicoproteína gp41 del virus VIH, para la
elaboración de una composición farmacéutica. Dicho péptido es capaz
de impedir la inhibición de la función del fragmento de la proteína
gp41 del virus VIH, impedir la fusión celular o impedir la
replicación del VIH en una célula huésped. Asimismo la presente
invención también se refiere a dicha composición farmacéutica y al
método para su fabricación.
Cuando a mediados de los años 90 se descubrió un
supuesto nuevo virus de la hepatitis, el GB virus C
(GBV-C), también denominado virus de la hepatitis G
(HGV) (Simons et al., 1997. Nature Medicine 1:
564-569; Linnen et al., 1996 Science
271, 505-508), muchos grupos de investigación
trataron de correlacionarlo con la inflamación hepática u otras
enfermedades asociadas. Sin embargo, no se pudo identificar ninguna
influencia en la salud (Mphahlele et al., 1998. Liver
18: 143-155; Theodore et al., 1997.
Hepatology 25: 1285-1286), hasta que el
Prof. Tillmann descubrió el inesperado beneficio de la coinfección
por GBV-C/HGV en el curso de la enfermedad de los
pacientes que habían sido infectados por VIH (Virus de
Inmunodeficiencia Humana 1) (Heringlake el al, 1998. J. Infect.
Dis. 177: 1723-1726).
Aunque en algunas ocasiones los resultados no
han sido claramente significativos (Zhang et al., 2006.
HIV Med. 7: 173-180), se ha observado una
menor progresión de la enfermedad y un incremento en la
supervivencia en individuos GBV-C/HGV positivos
comparados con individuos GBV-C/HGV negativos,
mientras que la pérdida de la viremia GBV-C/HGV está
estrechamente relacionada con una mortalidad incrementada así como
con una mayor progresión del SIDA (Van der Bij et al., 2005.
J. Infect. Dis. 191: 678-685; Williams et
al., 2004. N. Engl. J. Med. 350:
981-990).
El empleo de péptidos sintéticos como
inhibidores del VIH-1 ha sido objeto de
investigación durante los últimos años. Se han estudiado y lo están
siendo en la actualidad, para su aplicación clínica en la lucha
contra la infección por el VIH-1 un gran número de
péptidos que tienen como diana las distintas etapas del ciclo vital
del VIH-1.
Los péptidos inhibidores del
VIH-1 han sido identificados y/o desarrollados
mediante distintos métodos. Algunos péptidos terapéuticos como el
Enfuvirtide, ya aprobado para su uso clínico (Burton, 2003.
Lancet Infec. Dis. 3, 260), derivan del
VIH-1, mientras que otros son péptidos naturales
como las quimiocinas, defensinas o el "Virus Inhibitory
Peptide" (VIRIP) (Munch et al., 2007, Cell 129:
263-275) o han sido diseñados y sintetizados a
partir de datos cristalográficos de las proteínas del
VIH-1 o a partir de librerías peptídicas (Boggiano
et al., 2006. Biochem. Biophys. Res. Comun. 347:
909-915).
El ciclo replicativo del VIH ha sido descrito
con detalle en numerosas revisiones (Greene y Peterling, 2002.
Nat. Med. 8: 673-680; Freed y Mouland, 2006.
Retrovirology 3: 77). Se ha descrito la entrada del virus a
la célula huésped como un proceso que requiere tres etapas: 1)
aproximación y unión del VIH a las moléculas de CD4 (receptor
primario) a través de la glicoproteína viral gp120; 2) cambio
conformacional en gp120, lo que permite la unión al coreceptor de
quimiocinas (CCR5 o CXCR4) y 3) fusión de la envuelta del VIH con la
membrana de la célula mediante un cambio conformacional en la
glicoproteína de membrana gp41,el cual tiene lugar únicamente tras
la unión productiva de gp120 a CD4. Cada una de estas etapas
representa una diana potencial en la inhibición de la replicación
viral.
Así pues, sería útil el uso de inhibidores de
fusión o entrada viral y/o replicación del virus, para impedir la
acción del virus VIH en células huésped, siendo esta fase de fusión
y/o entrada un punto adecuado para la actuación de los inhibidores,
ya que el virus todavía no ha introducido su material genético en el
interior celular.
La presente invención se refiere al uso de al
menos un péptido contenido en la secuencia de la proteína E2 del
virus GBV-C/HGV, capaz de inhibir la actividad del
virus VIH, impidiendo o reprimiendo la función y/o actividad del
virus VIH (Virus de Inmunodeficiencia Humana), de forma transitoria
o permanente, o además capaz de interaccionar con una secuencia
amininoacídica de la glicoproteína gp41 del virus VIH (Virus de
Inmunodeficiencia Humana), para la elaboración de una composición
farmacéutica. Dicho péptido es capaz de inhibir la función del
fragmento de la proteína gp41 del virus VIH, impedir la fusión
celular o impedir la replicación del VIH en una célula huésped.
En los ejemplos de la presente invención se
sintetizan 124 péptidos compuestos por 18 aminoácidos que abarcan la
secuencia completa de la proteína E2 del virus
GBV-C/HGV (SEQ ID NO: 1). Dichas secuencias se
solapan en 15 aminoácidos, es decir, un péptido concreto tiene tres
aminoácidos diferentes respecto al péptido que le precede o que le
sigue.
\newpage
A continuación se determina la interacción de
cualquiera de los péptidos de la secuencia SEQ ID NO: 1 del virus
GBV-C/HGV con una secuencia aminoacídica (SEQ ID NO:
2) de la glicoproteína de membrana gp41 del virus
VIH-1 (Virus de Inmunodeficiencia Humana 1) mediante
el empleo de técnicas biofísicas que permiten determinar la
inhibición de liberación de contenidos vesiculares inducida por SEQ
ID NO: 2 que permiten determinar la capacidad de inhibir la función
del fragmento de la proteína gp41 del virus VIH-1, y
evaluando el potencial carácter inhibitorio del
VIH-1 mediante ensayos celulares dirigidos a
determinar la inhibición de la fusión celular o la inhibición de la
replicación del virus.
Las principales ventajas que aportan los
péptidos sintéticos de la presente invención son:
- Su baja toxicidad sistémica,
- La posibilidad de realizar modificaciones
estructurales en ellos y consecuentemente la capacidad que presentan
para mimetizar determinados sustratos o epítopos,
- Su aplicabilidad en terapias combinadas o
cuando aparecen resistencias a otros fármacos antirretrovirales,
o
- Que pueden actuar antes de que se produzca la
entrada del virus en la célula. En este sentido, cualquiera de los
péptidos de la presente invención podría tener el mismo potencial
que la inducción de inmunidad que aporta una vacuna.
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Así pues, un aspecto de la presente invención es
el uso de al menos un péptido, o derivado del mismo, contenido en
una secuencia aminoacídica que tiene al menos un 60% de identidad
con la secuencia SEQ ID NO: 1, capaz de inhibir la actividad del
virus VIH, para la elaboración de una composición farmacéutica.
Es decir, la composición farmacéutica de la
presente invención se usa para el tratamiento o prevención del
síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) causado por cualquier
tipo de VIH, bien sea del tipo VIH-1, del tipo
VIH-2 o cualquier otro tipo de VIH.
Las secuencias aminoacídicas que tienen al menos
un 60% de identidad con SEQ ID NO: 1 son secuencias homologas de
diferentes genotipos del virus GBV-C/HGV. Este
porcentaje de identidad no se ha escogido de forma arbitraria sino
tras obtener la identidad de los genotipos conocidos de la base de
datos de GeneBank y compararlas por medio de un análisis Blast de la
secuencia SEQ ID NO: 1. En este análisis comparativo se ha
encontrado una secuencia correspondiente a un fragmento de una
poliproteína de la variante Troglodites del virus
GBV-C/HGV. La secuencia completa (de 2942
aminoácidos) se puede consultar en el número de acceso AAD31543 del
GeneBank. En este análisis comparativo se ha podido determinar una
identidad de un 66% del fragmento del virus
GBV-C/HGV Troglodites respecto de SEQ ID NO: 1.
El término "derivado del mismo", tal como
se entiende en la presente invención se refiere al péptido
resultante de variaciones en la composición aminoacídica de su
secuencia de forma que se obtenga un péptido que tenga su origen en
la secuencia original sin perder la característica funcional que le
caracteriza en la presente invención. A modo de ejemplo, un péptido
derivado de cualquiera de los péptidos que proceden de una secuencia
que tiene al menos un 60% de identidad con la secuencia SEQ ID NO:
1, puede tener aminoácidos distintos en la misma posición de la
secuencia siempre que esos cambios no afecten a la eficacia en la
función definida para los mismos en la presente invención y teniendo
en cuenta que dichos péptidos derivados tienen al menos un 60% de
identidad con la secuencia
SEQ ID NO: 1.
SEQ ID NO: 1.
El término "inhibición de la actividad del
virus VIH" tal como se entiende en la presente invención hace
referencia a impedir o reprimir la función y/o actividad del virus
VIH, de forma transitoria o permanente.
SEQ ID NO: 1 es una secuencia aminoacídica de la
proteína de envoltura E2 del virus de la hepatitis G
(GBV-C/HGV). El péptido, contenido en la secuencia
SEQ ID NO: 1, es capaz de inhibir la actividad del virus VIH
actuando en una o varias etapas del proceso de infección de dicho
virus.
Una realización preferida se refiere al uso de
al menos un péptido, o derivado del mismo, contenido en una
secuencia aminoacídica que tiene al menos un 80% de identidad con la
secuencia SEQ ID NO: 1 capaz de inhibir la actividad del virus VIH,
para la elaboración de una composición farmacéutica. Según una
realización más preferida, el péptido, o derivado del mismo está
contenido en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 1.
Otra realización preferida se refiere al uso de
al menos un péptido, donde además dicho péptido es capaz de
interaccionar con un fragmento de la proteína gp41 del virus
VIH.
Según otra realización más preferida, el virus
VIH es el virus VIH-1. Otra realización más
preferida se refiere al uso de al menos un péptido, donde el
fragmento de la proteína gp41 es la secuencia SEQ ID NO: 2 del
virus
VIH-1.
VIH-1.
\newpage
SEQ ID NO: 2 es la secuencia aminoacídica
comprendida entre los aminoácidos 1 y 23 la glicoproteína de
membrana gp41 del virus VIH-1 (Virus de
Inmunodeficiencia Humana 1) (NQ de acceso ACJ04095 de GeneBank). La
envoltura del virus VIH-1 está compuesta de
espículas, que son complejos proteicos integrados en la membrana.
Cada espícula está formada por la proteína gp41, integral en la
membrana, y una cabeza externa formada por la proteína gp120,
esencial para el acoplamiento con el exterior de ciertas células
previo a su invasión. Una posibilidad para inhibir la
unión del virus a las células sanas, como por ejemplo, pero sin limitarse, linfocitos es actuar contra la proteína gp41.
unión del virus a las células sanas, como por ejemplo, pero sin limitarse, linfocitos es actuar contra la proteína gp41.
La interacción de cualquiera de los péptidos con
la secuencia SEQ ID NO: 2 tal como se entiende en la presente
invención, hace referencia a la acción que se ejerce recíprocamente
entre dichas secuencias. Así pues, por ejemplo, pero sin limitarse,
la interacción hace referencia a cualquier tipo de enlace químico,
fuerzas de Van der Waals o interacciones hidrofóbicas.
Para referirse a la composición farmacéutica se
puede emplear también el término "medicamento". La composición
farmacéutica comprende cualquier péptido contenido en la secuencia
SEQ ID NO: 1, tal como se ha descrito en párrafos precedentes. Dicha
composición puede comprender uno o más péptidos así como cualquier
combinación de dichos péptidos. Cualquiera de los péptidos de la
presente invención, se formula en una composición farmacéutica
apropiada, en la cantidad terapéuticamente efectiva, junto con uno o
más vehículos, adyuvantes o excipientes farmacéuticamente
aceptables.
En adelante se podrá hacer referencia a
cualquiera de los péptidos definidos en los párrafos precedentes
como "péptido/s de la presente invención" o "péptido/s de la
invención".
Los péptidos de la presente invención pueden ser
lineales o cíclicos, pueden incorporar residuos no naturales como
los D-aminoácidos y, también, pueden modificarse
mediante la conjugación con ácidos grasos. Además, los péptidos de
la presente invención pueden formar parte de un sistema para generar
anticuerpos anti-péptidos como por ejemplo, pero sin
limitarse, MAPS (Multiple Antigen Peptide System). Estas
diferentes estrategias de presentación peptídica permiten
incrementar la actividad antiviral de péptidos sintéticos y, además,
pueden mejorar la estabilidad y selectividad de este tipo de
moléculas en su aplicación clínica.
Una realización preferida se refiere al uso
donde el péptido de la invención tiene entre 15 y 20 aminoácidos. El
orden que ocupa cada aminoácido de cualquiera de los péptidos de la
invención es el mismo que el orden que ocupa en la secuencia SEQ ID
NO: 1, de esta forma, los péptidos de la presente invención son
secuencias parciales de la secuencia SEQ ID NO: 1 que tienen una
extensión de entre 15 y 20 aminoácidos o secuencias derivadas de las
anteriores que incorporen algún aminoácido sustituido.
Otra realización preferida se refiere al uso de
la composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones
1 a 6, donde la inhibición de la actividad del virus VIH se produce
por impedir la entrada de material genético de dicho virus a la
célula huésped.
El término "entrada del material genético del
virus" hace referencia a la entrada de ARN viral protegido o no
por cápside y/o nucleocápside así como la entrada de proteínas
virales que son consecuencia de la traducción de algunas secuencias
de ARN viral en el propio virus.
Las posibles células huésped en las que podría
entrar el material genético del virus se seleccionan, pero sin
limitarse, de la lista que comprende, linfocitos T CD4+, monocitos,
macrófagos, células dendríticas, células de Langerhans o células de
microglía del cerebro.
Según una realización más preferida, la entrada
del material genético a la célula huésped se impide por la
inhibición de la fusión celular. Otra realización aún más preferida
se refiere al uso de la composición farmacéutica, donde la
inhibición de la fusión celular se lleva a cabo por medio de una
composición farmacéutica que comprende al menos un péptido contenido
en cualquiera de los fragmentos aminoacídicos SEQ ID NO:
4-8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO:
13-140 SEQ ID NO: 15
El término "inhibición de la fusión
celular" tal como se entiende en la presente invención se refiere
a impedir o reprimir de forma permanente o transitoria la fusión de
la envoltura del virus VIH con la membrana de la célula sana (célula
huésped a la que se une el virus VIH). Al menos en algunos casos,
esta inhibición está basada probablemente en un cambio
conformacional en la glicoproteína de membrana gp41 del virus
VIH-1 que impide la fusión con la célula
huésped.
La valoración del grado de inhibición de la
fusión celular se lleva a cabo por medio de la observación de
sincitios al microscopio. La formación de sincitios es el efecto
citopático del VIH en algunas líneas celulares y consiste en la
formación de acúmulos celulares (por la acumulación de diversos
núcleos) que pierden la capacidad de separación de la membrana de la
célula infectada tras producirse la mitosis, es decir, la célula
pierde la capacidad de dividirse.
Otra realización más preferida se refiere al uso
de la composición farmacéutica, donde la inhibición de la fusión
celular se lleva a cabo por medio de una composición farmacéutica
que comprende al menos un péptido contenido en cualquiera de los
fragmentos aminoacídicos SEQ ID NO: 4-8 (SEQ ID NO:
4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID
NO: 7 o SEQ ID NO: 8), SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 13-14 (SEQ ID NO: 13 o SEQ ID NO: 14) o SEQ ID NO: 15.
NO: 7 o SEQ ID NO: 8), SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 13-14 (SEQ ID NO: 13 o SEQ ID NO: 14) o SEQ ID NO: 15.
Otra realización aún más preferida se refiere al
uso de la composición farmacéutica, donde el péptido, o cualquiera
de sus combinaciones, se selecciona de la lista que comprende SEQ ID
NO: 4-5 (SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5), SEQ ID NO: 7,
SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 15-23 (SEQ ID NO: 15, SEQ
ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 o SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO:
20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22 o SEQ ID NO: 23), SEQ ID NO: 35,
SEQ ID NO: 37 o SEQ ID NO: 41. La lista de péptidos que se presenta
pertenece a fragmentos de SEQ ID NO: 4-8, SEQ ID NO:
10, SEQ ID NO: 13-14 o SEQ ID NO: 15 de la manera
que se presenta en la tabla 1.
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\vskip1.000000\baselineskip
Otra realización preferida se refiere al uso de
la composición farmacéutica donde la inhibición de la actividad del
virus VIH se produce por inhibir la función de un fragmento de la
proteína gp41 del virus VIH. Preferiblemente el fragmento de la
proteína gp41 es SEQ ID NO: 2. El fragmento de la proteína gp41 es
un péptido de fusión N-terminal del virus VIH. La
función del péptido de fusión a la membrana celular hace que la
envoltura del virus se adhiera y penetre el virus o su material
genético al interior del citoplasma de la célula huésped. Es decir,
la inhibición de la función del fragmento de la proteína gp41 del
virus VIH se puede experimentar mediante la inhibición de la
liberación de contenidos vesiculares.
El término "inhibición de la liberación de
contenidos vesiculares" tal como se entiende en la presente
invención se refiere a impedir o reprimir de forma permanente o
transitoria la lisis de vesículas lipídicas.
Una realización aún más preferida se refiere al
uso de la composición farmacéutica, donde la inhibición de la
función de un fragmento de la proteína gp41 del virus VIH se lleva a
cabo por medio de una composición farmacéutica que comprende al
menos un péptido contenido en cualquiera de los fragmentos
aminoacídicos SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 12-14 (es
decir, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13 o SEQ ID NO: 14).
Las secuencias SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO:
12-14 son fragmentos de secuencias de aminoácidos
que corresponden a la secuencia parcial de SEQ ID NO: 1. Los
fragmentos están compuestos de 18 aminoácidos o más, según el caso.
Así pues, a modo de ejemplo, los fragmentos que tengan 18
aminoácidos podrán contener péptidos de entre 15 y 18
aminoácidos.
Una realización todavía más preferida se refiere
al uso de la composición farmacéutica, donde el péptido, o
cualquiera de sus combinaciones, se selecciona de la lista que
comprende SEQ ID NO: 24-40. La lista de péptidos que
se presenta pertenece a los fragmentos SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO:
12-14 de la manera que se presenta en la tabla
2.
\vskip1.000000\baselineskip
Otra realización preferida se refiere al uso de
la composición farmacéutica donde la inhibición de la actividad del
virus VIH se produce por inhibir la replicación del material
genético de dicho virus.
El término "inhibición de la replicación"
tal como se entiende en la presente invención se refiere a impedir o
reprimir de forma permanente o transitoria la generación de nuevo
material genético a partir del material genético del virus VIH,
nuevos virus o viriones. El término "virión" se refiere a la
partícula viral infectiva compuesta al menos por ácido nucleico
vírico y/o proteínas víricas. Las proteínas víricas son proteínas
estructurales como las que forman la cubierta externa o cápside, o
también pueden ser otro tipo de proteínas enzimáticas (por ejemplo
POL, VIF, VPR, TAT, etc ...). Los viriones son liberados al medio
extracelular. En los ejemplos de realización de la presente
invención, se valora el grado de inhibición de la replicación del
virus VIH mediante la medida de la concentración del antígeno p24
del virus VIH-1. La detección del antígeno del
VIH-1, usualmente la proteína p24, es un marcador
directo de la presencia del virus en el organismo.
Una realización más preferida se refiere al uso
de la composición farmacéutica, donde la inhibición de la
replicación se lleva a cabo por medio de una composición
farmacéutica que comprende al menos un péptido contenido en
cualquiera de los fragmentos aminoacídicos SEQ ID NO:
3-11 (SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ
ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 o
SEQ ID NO: 11), SEQ ID NO: 13-14 (SEQ ID NO: 13 o
SEQ ID NO: 14).
Otra realización aún más preferida se refiere al
uso de la composición farmacéutica, donde el péptido, o cualquiera
de sus combinaciones, se selecciona de la lista que comprende SEQ ID
NO: 3-5 (SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 o SEQ ID NO: 5),
SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 10-11 SEQ ID NO: 10 o SEQ
ID NO: 11), SEQ ID NO: 16-24 (SEQ ID NO: 16, SEQ ID
NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21,
SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23 o SEQ ID NO: 24), SEQ ID NO: 35, SEQ ID
NO: 37 o SEQ ID NO: 41. La lista de péptidos que se presenta
pertenece a los fragmentos SEQ ID NO: 3-11, SEQ ID
NO: 13-14 de la manera que se presenta en la
tabla 3.
tabla 3.
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Otro aspecto de la presente invención se refiere
a una composición farmacéutica que comprende al menos un péptido, o
derivado del mismo, contenido en una secuencia aminoacídica que
tiene al menos un 60% de identidad con la secuencia SEQ ID NO: 1,
capaz de inhibir la actividad del virus VIH.
Una realización preferida se refiere a la
composición farmacéutica donde la secuencia aminoacídica tiene al
menos un 80% de identidad con SEQ ID NO: 1. Según otra realización
más preferida, la secuencia aminoacídica es SEQ ID NO: 1.
Otra realización preferida se refiere a la
composición farmacéutica, donde además al menos un péptido, o
derivado del mismo, capaz de inhibir la actividad del virus VIH, es
capaz además de interaccionar con un fragmento de la proteína gp41
del virus VIH. Según otra realización más preferida, el fragmento de
la proteína gp41 es la secuencia SEQ ID NO: 2 del virus
VIH-1.
Otra realización preferida más se refiere a la
composición farmacéutica, donde el péptido tiene entre 15 y 20
aminoácidos.
Otra realización preferida se refiere a la
composición farmacéutica que además comprende excipientes
farmacéuticamente aceptables.
El término "excipiente" hace referencia a
una sustancia que ayuda a la absorción de cualquiera de los péptidos
de la presente invención, estabiliza dichos péptidos o ayuda a la
preparación de la composición farmacéutica en el sentido de darle
consistencia o aportarle cualquier otra característica deseable para
dicha preparación. Así pues, los excipientes podrían tener la
función de mantener los ingredientes unidos como por ejemplo
almidones, azúcares o celulosas, función de endulzar, función de
colorante, función de protección del medicamento como por ejemplo
para aislarlo del aire y/o la humedad, función de relleno de una
pastilla, cápsula o cualquier otra forma de presentación como por
ejemplo el fosfato de calcio dibásico, función desintegradora para
facilitar la disolución de los componentes y su absorción en el
intestino, sin excluir otro tipo de excipientes no mencionados en
este párrafo.
El término excipiente "farmacéuticamente
aceptable" hace referencia a que el excipiente esté permitido y
evaluado de modo que no cause daño a los organismos a los que se
administra.
Además, el excipiente debe ser farmacéuticamente
adecuado, es decir, un excipiente que permita la actividad del
principio activo o de los principios activos, es decir, que sea
compatible con el principio activo, en este caso, el principio
activo es cualquiera de los péptidos de la presente invención.
Otra realización preferida se refiere a una
composición farmacéutica que además comprende al menos un vehículo
farmacéuticamente aceptable.
El vehículo, al igual que el excipiente, es una
sustancia que se emplea en la composición farmacéutica para diluir
cualquiera de los compuestos de la presente invención hasta un
volumen o peso determinado. El vehículo farmacéuticamente aceptable
es una sustancia inerte o de acción análoga a cualquiera de los
compuestos de la presente invención. La función del vehículo es
facilitar la incorporación de otros compuestos, permitir una mejor
dosificación y administración o dar consistencia y forma al
medicamento. Cuando la forma de presentación es líquida, el vehículo
farmacéuticamente aceptable es el diluyente.
Otra realización preferida se refiere a la
composición farmacéutica que además comprende otra sustancia activa.
Esta sustancia activa debe permitir la actividad de cualquiera de
los péptidos de la invención, es decir, debe ser compatible.
En adelante se podrá hacer referencia a
cualquiera de las composiciones farmacéuticas descritas como
"composición/es farmacéutica/s de la presente invención" o
"composición/es farmacéutica/s de la invención".
Otro aspecto de la presente invención se refiere
a un método para la fabricación de la composición farmacéutica de la
invención, que comprende:
- a)
- Sintetizar al menos un péptido de la invención, o derivado del mismo, y
- b)
- preparar el producto obtenido en el apartado (a) en una forma adaptada a la administración oral o parenteral.
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Tal como se ha descrito en párrafos precedentes,
el péptido, o derivado del mismo, está contenido en una secuencia
aminoacídica que tiene al menos un 60% de identidad con la secuencia
SEQ ID NO: 1. Preferiblemente, el péptido, o derivado del mismo,
está contenido en una secuencia aminoacídica con al menos un 80% y
aún más preferiblemente el péptido, o derivado del mismo, está
contenido en la secuencia SEQ ID NO: 1. Cualquiera de los péptidos
de la presente invención es capaz de inhibir la actividad del virus
VIH, preferiblemente el virus es VIH-1 y además,
puede ser capaz de interaccionar con un fragmento de la proteína
gp41 del virus VIH, preferiblemente el fragmento de la proteína gp41
es la secuencia SEQ ID NO: 2 del virus VIH-1.
La síntesis de cualquiera de los péptidos de la
presente invención puede llevarse a cabo por medio de cualquier
técnica conocida en el estado de la técnica. La técnica de síntesis
puede, pero sin limitarse, una técnica de síntesis macromolecular,
como por ejemplo, pero sin limitarse, síntesis de péptidos en fase
sólida. También se puede obtener cualquiera de los péptidos de la
invención mediante técnicas de ADN recombinante, es decir, mediante
técnicas adaptadas de biología molecular y biotecnológica, en
microorganismos o plantas modificados genéticamente.
La síntesis de cualquiera de los péptidos de la
presente invención mediante técnicas de ADN recombinante se lleva a
cabo mediante inserción en un vector de expresión de la secuencia
nucleotídica que codifica para la secuencia aminoacídica de
cualquiera de los péptidos de la presente invención.
La célula hospedadora se transfecta, mediante
las técnicas conocidas en el estado de la técnica, como por ejemplo
pero sin limitarse, con electroporación, con biolística,
Agrobacteríum tumefaciens o cualquier otra técnica que
permita la integración de cualquiera de los ácidos nucleicos de la
invención en el ADN de la célula huésped, ya sea genómico,
cloroplástico o mitocondrial.
La expresión del ácido nucleico en la célula de
la invención da lugar a un péptido que puede ser purificado mediante
técnicas conocidas en el estado de la técnica.
En cada caso la forma de presentación de la
composición farmacéutica se adaptará al tipo de administración
utilizada, por ello, la composición de la presente invención se
puede presentar bajo la forma de soluciones o cualquier otra forma
de administración clínicamente permitida y en una cantidad
terapéuticamente eficaz.
La forma adaptada a la administración oral se
refiere a un estado físico que pueda permitir su administración
oral. La forma adaptada a la administración oral se selecciona de la
lista que comprende, pero sin limitarse, gotas, jarabe, tisana,
elixir, suspensión, suspensión extemporánea, vial bebible,
comprimido, cápsula, granulado, sello, píldora, tableta, pastilla,
trocisco o liofilizado.
La forma adaptada a la administración parenteral
se refiere a un estado físico que pueda permitir su administración
inyectable, es decir, preferiblemente en estado líquido. La
administración parenteral se puede llevar a cabo por vía de
administración intramuscular, intraarterial, intravenosa,
intradérmica, subcutánea o intraósea pero sin limitarse únicamente a
estos tipos de vías de administración parenteral. Cualquiera de los
péptidos de la invención puede ir asociado, por ejemplo, pero sin
limitarse, con liposomas o micelas. Un liposoma es una vesícula
esférica con una membrana fosfolipídica. El liposoma contiene un
núcleo de solución acuosa. La micela es un lípido esférico que
contiene material no acuoso. Tanto los liposomas como las micelas
pueden utilizarse como transportadores de diversas sustancias entre
el exterior y el interior de la célula.
Por otra parte, cualquiera de los péptidos de la
presente invención puede ir unido a uno o más lípidos. El lípido
puede estar formado por cadenas alifáticas saturadas o insaturadas,
lineales, o constituyendo uno o más anillos aromáticos. En este caso
se denominan lipopéptidos. Además, cualquiera de los péptidos de la
invención puede ir asociado a partículas como por ejemplo partículas
de oro.
Otra posibilidad es que la composición
farmacéutica se presente en una forma adaptada a la administración
sublingual, nasal, intracatecal, bronquial, linfática, rectal,
transdérmica o inhalada. La forma adaptada a la administración
rectal se selecciona de la lista que comprende, pero sin limitarse,
supositorio, cápsula rectal, dispersión rectal o pomada rectal. La
forma adaptada a la administración transdérmica se selecciona de la
lista que comprende, pero sin limitarse, parche transdérmico o
iontoforesis.
Otra realización preferida se refiere al método
donde el péptido se selecciona de la lista que comprende SEQ ID NO:
3-5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 10-11,
SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16-41.
A lo largo de la descripción y las
reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no
pretenden excluir otras características técnicas, aditivos,
componentes o pasos. Para el experto en la materia, otros objetos,
ventajas y características de la invención se desprenderán en parte
de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Las
siguientes figuras y ejemplos se proporcionan a modo de ilustración,
y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.
\vskip1.000000\baselineskip
Fig. 1. Muestra los péptidos con capacidad de
inhibir la liberación de contenidos vesiculares inducida por el
péptido de fusión SEQ ID NO: 2 del VIH-1.
Entre paréntesis se muestra el número de la
secuencia que le ha sido asignado en la presente invención a cada
uno de los péptidos de la figura: P59 (SEQ ID NO: 24), P60 (SEQ ID
NO: 25), P82 (SEQ ID NO: 28), P88-91 (SEQ ID NO:
30-33), P96 (SEQ ID NO: 34), P97 (SEQ ID NO: 35),
P104-108 (SEQ ID NO: 36-40).
\vskip1.000000\baselineskip
A continuación se ilustrará la invención
mediante unos ensayos realizados por los inventores que describen la
síntesis de los péptidos de la presente invención así como la
inhibición de determinadas actividades del virus
VIH-1. Los siguientes ejemplos específicos que se
proporcionan en este documento de patente sirven para ilustrar la
naturaleza de la presente invención. Estos ejemplos se incluyen
solamente con fines ilustrativos y no han de ser interpretados como
limitaciones a la invención que aquí se reivindica. Por tanto, los
ejemplos descritos más adelante ilustran la invención sin limitar el
campo de aplicación de la misma.
\vskip1.000000\baselineskip
Se han obtenido 124 péptidos de la proteína de
envoltura E2 del virus GBV-C/HGV (SEQ ID NO: 1) por
metodología de Síntesis de Péptidos en Fase Sólida en un
sintetizador semiautomático de péptidos (SAM, Multisyntech,
Germany), en forma de carboxamidas terminales, empleando una resina
Tentagel RAM (Rapp Polymere GmbH, Germany) (100 mg, 0.28 meq/g) y
siguiendo una estrategia Fmoc/tBut. La protección de los aminoácidos
se ha llevado a cabo de la siguiente forma:
Trifenilmetil (Trt) para glutamina, asparagina,
histidina y cisteína; terbutilo (tBu) para ácido aspártico, ácido
glutámico, serina, treonina y tirosina;
2,2,5,7,8-pentametil-croman-6-sulfonil
(Pmc) para arginina y tert-butiloxicarbonilo (Boc)
para lisina y triptófano.
La reacción de acoplamiento entre aminoácidos se
llevó a cabo por duplicado empleando excesos de tres veces de los
Fmoc-aminoácidos. La activación de los aminoácidos
se realizó con diisopropilcarbodiimida (DIPCDI) y
1-hidroxibenzotriazol (HOBt) o con
hexafluorofosfato de
2-(1H-9-azobenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilaminio
(HATU) en presencia de N-etildiisopropilamina
(DIEA). La eliminación secuencial del grupo protector Fmoc se llevó
a cabo con 20% de piperidina en dimetilformamida (DMF). La
finalización de estas reacciones fue evaluada por reacción
colorimétrica (test de ninhidrina). Una vez completada la síntesis
se realizó la etapa final de desanclaje del péptido de la resina y
desprotección de los grupos funcionales. Para ello se trató la
peptidil-resina con ácido trifluoroacético (TFA) al
95% en presencia de capturadores de carbocationes, fundamentalmente
un 2.5% de agua y un 2.5% de triisopropilsilano (TIS), durante
cuatro horas. Los péptidos finales se aislaron por precipitación con
dietiléter, se centrifugaron y liofilizaron en un 10% de ácido
acético.
La caracterización de los péptidos se llevó a
cabo por cromatografía HPLC analítica en una columna de fase reversa
(Kromasil, C-18, 5 \mum, 25\times0.46 cm)
empleando como eluyentes acetonitrilo y agua con un 0.05% en TFA. La
identidad de los péptidos obtenidos con un grado de pureza superior
al 90% por HPLC analítica a una longitud de onda de 215 nm, fue
confirmada por espectrometría de masas
MALDI-Tof.
\vskip1.000000\baselineskip
El posible papel inhibidor de las secuencias
peptídicas relacionadas con el virus GBV-C/HGV,
diseñadas, sintetizadas, purificadas y convenientemente
caracterizadas, se ha comprobado por medio de los siguientes
ensayos:
- a.
- Ensayo de inhibición de liberación de contenidos vesiculares inducida por la secuencia SEQ ID NO: 2 del VIH-1
- b.
- Ensayo de inhibición de la fusión celular
- c.
- Ensayos de inhibición de replicación del VIH-1.
\vskip1.000000\baselineskip
Se ha realizado el ensayo biofísico de
liberación de contenidos vesiculares descrito por Ellens (Ellens
et al., 1984. Biochemistry 23:
1532-1538). Para ello se han preparado vesículas
lipídicas unilamelares (LUVs) que contienen las sondas
fluorescentes: sal sódica del ácido
8-aminonaftaleno-1,3,6-trisulfónico
(ANTS) y
p-xileno-bis(piridinio)-bromuro
(DPX), según el protocolo descrito por nuestro grupo de trabajo
(Larios et al., 2005. Arch. Biochem. Biophys. 442:
149-159). Las diferentes construcciones peptídicas
se han mezclado con SEQ ID NO: 2 en DMSO previamente a su adición a
la suspensión de liposomas LUVs registrándose la emisión de la sonda
ANTS a una longitud de onda de 520 nm. El posible efecto lítico
propio de cada una de las construcciones del
GBV-C/HGV ha sido restado de la liberación
observada en cada caso. Los ensayos se han realizado en un
espectrofluorímetro PTI QM4CW (Photon Technology
Internacional).
\vskip1.000000\baselineskip
Este ensayo se llevó a cabo empleando dos líneas
celulares:
HeLa-env, que expresa la
proteína de la envoltura del VIH-1 e integra en su
genoma el promotor LTR del VIH-1, y
TZM-bl (AIDS reagents Cat. No 8129), que
expresa el receptor de membrana de los linfocitos CD4 y los
co-receptores CCR5 y CXCR4 e integra en su genoma
los genes de la luciferasa y la
\beta-galactosidasa. Cuando fusionan las dos
células se activa la expresión del gen de la luciferasa, lo que
produce la oxidación de la luciferina formándose un peróxido
intermedio que se degrada rápidamente y da lugar a la oxiluciferina,
la cual al pasar del estado excitado al funda-
mental emite fotones que pueden ser detectados en un lector de luminiscencia (indicativo del grado de fusión celular).
mental emite fotones que pueden ser detectados en un lector de luminiscencia (indicativo del grado de fusión celular).
El ensayo de inhibición de la fusión celular
inducido por los péptidos del virus GBV-C/HGV
consiste en la incubación de aproximadamente 2.500 células
HeLa-env por pocillo (placas Cultek Ref: 3912)
durante 1 hora con concentraciones crecientes de los péptidos a
ensayar (en la presente invención se han empleado concentraciones de
entre 100 y 1000 \muM), seguida de la adición de unas 10 veces
(aproximadamente de unas 25.000 células) de TZM-bl
e incubación durante 24 horas. Para controlar la fusión celular se
reservaron pocillos en ausencia de péptidos, y se empleó un
inhibidor conocido de la fusión celular, C-34 (AIDS
reagents Cat. No 9824), como control positivo.
La valoración cualitativa del grado de
inhibición de la fusión celular se llevó a cabo por medio de la
observación de la formación de sincitios al microscopio. Los valores
cuantitativos se han obtenido por lectura de la luminiscencia (kit
comercial Britelite, Perkin Elmer Cat. No 6016761) en un lector de
microplacas SpectraMax M5 (Molecular Devices).
\vskip1.000000\baselineskip
Para estudiar el posible papel inhibidor de los
péptidos del virus GBV-C/HGV se llevó a cabo la
cuantificación de la concentración del antígeno p24 del VIH en el
sobrenadante del cultivo celular. Para ello, se han incubado
concentraciones seriadas de los péptidos con aislados de
VIH-1 de tropismo X4 y R5 durante dos horas. Los
virus aislados pueden proceder de pacientes infectados. Tras el
periodo de incubación se incorporaron las células
CEM-174 (AIDS reagents Cat. No. 272) y se incubaron
con el virus y los péptidos durante 3 horas. Transcurrido este
tiempo se eliminó el virus VIH-1 que aún quedaba en
el medio, por lavados con tampón PBS. Finalmente, se resuspendió el
pellet celular en medio de cultivo y se recogió una porción del
sobrenadante celular cada 12 horas durante una semana. El ensayo de
cuantificación del antígeno p24 se realizó en los sobrenadantes
post-infección recogidos empleando el kit comercial
Innotest VIH antigen mAb p24 (Innogenetics Diagnostica
Iberia Cat. No. 80563). Como control negativo se empleó el
sobrenadante del cultivo celular en ausencia de virus y de péptidos;
como control positivo de infección se empleó el sobrenadante del
cultivo derivado de la incubación de las células con el virus.
Finalmente, como control positivo de la inhibición, se empleó el
sobrenadante procedente de la incubación de las células con el virus
y el inhibidor C34 (AIDS reagents Cat. No 9824).
\vskip1.000000\baselineskip
La toxicidad celular de los péptidos
sintetizados del virus GBV-C/HGV se determinó según
el ensayo que empleó bromuro de
3-(4,5-dimetiltriazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium
(MTT) (Mosmann, 1983. J. Immunol. Methods 65:
55-63).
55-63).
\vskip1.000000\baselineskip
Con la finalidad de analizar la interacción de
la proteína de envuelta del virus GBV-C/HGV con el
péptido de fusión de la glicoproteína gp41 del virus
VIH-1 (SEQ ID NO: 2), se realizó la síntesis de
péptidos que abarcan la secuencia completa de la proteína E2 del
virus GBV-C/HGV (SEQ ID NO: 1) mediante la síntesis
de secuencias peptídicas compuestas de 18 aminoácidos solapadas en
15 residuos. Los 124 péptidos obtenidos se caracterizaron por HPLC y
HPLC-MS mostrando una pureza superior al 90%.
Se llevó a cabo el estudio de su capacidad de
inhibir el proceso de desestabilización de vesículas lipídicas
inducido por el péptido de fusión del VIH-1 (SEQ ID
NO: 2) siguiendo el procedimiento detallado en la parte
experimental. Tal y como se muestra en la Fig. 1, se han podido
seleccionar una serie de péptidos con capacidad de inhibir la
función del SEQ ID NO: 2.
Para comprobar la especificidad de la
interacción observada entre los péptidos del virus
GBV-C/HGV y el péptido SEQ ID NO: 2 del virus
VIH-1, se utilizó melitina como péptido control. Se
pudo comprobar que los péptidos seleccionados no inhibían la
capacidad lítica de la melitina tras realizar el mismo ensayo pero
en presencia de melitina en lugar del péptido SEQ ID NO: 2, por lo
que se confirmó la especificidad de la interacción antes
descrita.
En la tabla 4 se indican los péptidos que
corresponden a la proteína de envuelta E2 del virus
GBV-C/HGV (SEQ ID NO: 1) que a distintas
concentraciones, han mostrado capacidad de inhibir la formación de
sincitios según el ensayo realizado de fusión celular. En la tabla 5
se indican los resultados más relevantes en cuanto a la inhibición
de la producción de antígeno p24. Asimismo se muestran los valores
de inhibición alcanzados por el péptido inhibidor control. Tras la
realización de los ensayos de toxicidad, siguiendo el ensayo del MTT
(ejemplo 1.3), con los péptidos del virus GBV-C/HGV
se pudo comprobar una viabilidad celular del 100%.
El cálculo del porcentaje de inhibición para
cada péptido se ha obtenido según la ecuación:
% inhibición
péptido = 100 - {[(Lum(P) - Lum_{0}) / (Lum_{100} -
Lum_{0})] x
100}
siendo:
Lum(P) = luminiscencia de las células
tratadas con el péptido
Lum_{0} = luminiscencia de las células control
no fusionadas
Lum_{100} = luminiscencia de las células
control totalmente fusionadas.
\vskip1.000000\baselineskip
Para llevar a cabo el cálculo de los porcentajes
de inhibición de la replicación del virus VIH-1
(inhibición producción antígeno p24) se utilizó la misma ecuación
pero empleando los valores de absorbancia en lugar de
luminiscencia.
Los estudios realizados indican que varias de
las secuencias sintetizadas, pertenecientes a la proteína de
envuelta E2 del virus GBV-C/HGV, disminuyen
notablemente la fusión de membranas celulares y la producción del
antígeno p24, lo que indica un posible efecto inhibidor de éstos
péptidos frente al virus VIH-1.
<110> Consejo Superior de Investigaciones
Científicas (CSIC)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> Uso de péptidos de la proteína E2
del virus de la hepatitis G para inhibir la actividad del virus
VIH
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> 1641.438
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 41
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn versión 3.5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 387
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Human immunodeficiency virus type
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
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<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
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\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
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<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 36
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 10
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 11
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 45
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 12
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 13
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 33
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 14
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
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<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 15
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 16
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 17
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
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<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 17
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 18
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<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 18
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
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<212> PRT
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<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 19
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
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<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 20
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 21
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
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<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 22
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 23
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 24
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<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 24
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 25
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<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
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<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 25
\hskip1cm
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<210> 26
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<211> 18
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<212> PRT
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<213> Hepatitis GB virus C
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<400> 26
\hskip1cm
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<210> 27
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<211> 18
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<212> PRT
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<213> Hepatitis GB virus C
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<400> 27
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 28
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<211> 18
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<212> PRT
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<213> Hepatitis GB virus C
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\vskip0.400000\baselineskip
<400> 28
\hskip1cm
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<210> 29
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<211> 18
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<212> PRT
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<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
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<400> 29
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\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 30
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<211> 18
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<212> PRT
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<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
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<400> 30
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\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 31
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 31
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 32
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
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<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 32
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 33
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 33
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 34
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 34
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 35
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
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<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 35
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 36
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 36
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 37
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 37
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 38
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 38
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 39
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 39
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 40
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 40
\hskip1cm
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<210> 41
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<211> 18
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<212> PRT
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<213> Hepatitis GB virus C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 41
\hskip1cm
Claims (19)
1. Uso de al menos un péptido, o derivado del
mismo, contenido en una secuencia aminoacídica que tiene al menos un
60% de identidad con la secuencia SEQ ID NO: 1, capaz de inhibir la
actividad del virus VIH, para la elaboración de una composición
farmacéutica.
2. Uso de al menos un péptido según la
reivindicación 1, donde la secuencia aminoacídica tiene al menos un
80% de identidad con SEQ ID NO: 1.
3. Uso de al menos un péptido según cualquiera
de las reivindicaciones 1 ó 2, donde la secuencia aminoacídica es
SEQ ID NO: 1.
4. Uso de al menos un péptido según cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 3, donde el virus VIH es del tipo
VIH-1.
VIH-1.
5. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
1 a 4, donde el péptido tiene entre 15 y 20 aminoácidos.
6. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
1 a 5, donde el péptido está contenido en cualquiera de los
fragmentos SEQ ID NO: 3-15, de la secuencia SEQ ID
NO: 1, donde además dicho péptido mantiene la función de origen.
7. Uso según la reivindicación 6, donde el
péptido, o cualquiera de sus combinaciones, se selecciona de la
lista que comprende SEQ ID NO: 3-5, SEQ ID NO: 7,
SEQ ID NO: 10-11, SEQ ID NO:
15-41.
8. Uso según la reivindicación 7, donde el
péptido, o cualquiera de sus combinaciones, se selecciona de la
lista que comprende SEQ ID NO: 4-5, SEQ ID NO: 7,
SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 15-23, SEQ ID NO: 35, SEQ
ID NO: 37 o SEQ ID NO: 41, donde dicho péptido mantiene la función
de origen.
9. Uso según la reivindicación 7, donde el
péptido, o cualquiera de sus combinaciones, se selecciona de la
lista que comprende SEQ ID NO: 24-40, donde dicho
péptido mantiene la función de origen.
10. Uso según la reivindicación 7, donde el
péptido, o cualquiera de sus combinaciones, se selecciona de la
lista que comprende SEQ ID NO: 3-5, SEQ ID NO: 7,
SEQ ID NO: 10-11, SEQ ID NO: 16-24,
SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 37 o SEQ ID NO: 41, donde dicho péptido
mantiene la función de origen.
11. Composición farmacéutica que comprende al
menos un péptido, o derivado del mismo, contenido en una secuencia
aminoacídica que tiene al menos un 60% de identidad con la secuencia
SEQ ID NO: 1, donde dicho péptido es capaz de inhibir la actividad
del virus VIH.
12. Composición farmacéutica según la
reivindicación 11, donde la secuencia aminoacídica tiene al menos un
80% de identidad con SEQ ID NO: 1.
13. Composición farmacéutica según la
reivindicación 12, donde la secuencia aminoacídica es SEQ ID NO:
1.
14. Composición farmacéutica según cualquiera de
las reivindicaciones 11 a 13, donde el péptido tiene entre 15 y 20
aminoácidos.
15. Composición farmacéutica según cualquiera de
las reivindicaciones 11 a 14, que además comprende excipientes
farmacéuticamente aceptables.
16. Composición farmacéutica según cualquiera de
las reivindicaciones 11 a 15, que además comprende al menos un
vehículo farmacéuticamente aceptable.
17. Composición farmacéutica según cualquiera de
las reivindicaciones 11a 16, que además comprende otra sustancia
activa.
18. Método para la fabricación de la composición
farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 17 que
comprende:
- a)
- Sintetizar al menos un péptido ,o derivado del mismo, y
- b)
- preparar el producto obtenido en el apartado (a) en una forma adaptada a la administración oral o parenteral.
\vskip1.000000\baselineskip
19. Método para la fabricación de la composición
farmacéutica según la reivindicación 18, donde el péptido se
selecciona de la lista que comprende SEQ ID NO: 3-5,
SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 10-11, SEQ ID NO:
15-41.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200930044A ES2351026B1 (es) | 2009-04-06 | 2009-04-06 | Uso de peptidos de la proteina e2 del virus de la hepatitis g para inhibir la actividad del virus vih. |
| PCT/ES2010/070209 WO2010116015A1 (es) | 2009-04-06 | 2010-04-05 | Uso de péptidos de la proteína e2 del virus de la hepatitis g para inhibir la actividad del virus vih |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200930044A ES2351026B1 (es) | 2009-04-06 | 2009-04-06 | Uso de peptidos de la proteina e2 del virus de la hepatitis g para inhibir la actividad del virus vih. |
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| ES2351026B1 ES2351026B1 (es) | 2011-11-24 |
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Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| ES200930044A Expired - Fee Related ES2351026B1 (es) | 2009-04-06 | 2009-04-06 | Uso de peptidos de la proteina e2 del virus de la hepatitis g para inhibir la actividad del virus vih. |
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Families Citing this family (1)
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|---|---|---|---|---|
| WO2013142167A1 (en) * | 2012-03-20 | 2013-09-26 | The University Of Iowa Research Foundation | Gb virus c (hepatitis g virus) e2 glycoprotein as an immunomodulatory agent |
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Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| FERN`NDEZ-VIDAL, M., ROJO, N., HERRERA, E. et al. Liposome destabilization induced by synthetic lipopeptides corresponding to envelope and non-structural domains of GBV-C/HGV virus. Conformational requirements for leakage. Biophysical Chemistry. Octubre 2008, Vol. 132, Nº 1, páginas 55-63. ISSN 0301-4622. 1016/j.bpc.2007.10.009> * |
| JUNG, S., EICHENM¯eLLER, M., DONHAUSER, N. et al. HIV entry inhibition by the envelope 2 glycoprotein of GB virus C. AIDS. Marzo 2007, Vol. 21, Nº 5, páginas 645-647. ISSN 0269-9370. * |
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| NATTERMANN, J., NISCHALKE, H.-D., KUPFER, B. et al. Regulation of CC chemokine receptor 5 in hepatitis G virus infection. AIDS. Julio 2003, Vol. 17, Nº 10, páginas 1457-1462. ISSN 0269-9370. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2010116015A1 (es) | 2010-10-14 |
| ES2351026B1 (es) | 2011-11-24 |
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Legal Events
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