ES2350993A1 - Composicion fotoprotectora. - Google Patents
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Abstract
Composición fotoprotectora. La presente invención se refiere a una composición que comprende (I) un compuesto A que absorbe en la región del ultravioleta A (UVA)-visible cercana y (ii) un compuesto B que absorbe en la región del ultravioleta B (UVB), en donde, al menos, uno de dichos compuestos A o B es un compuesto de fórmula (I) donde Y representa un grupo arilo o estiril-arilo opcionalmente sustituido, R{sup,1}, R{sup,2}, R{sup,3} y R{sup,4}, independientemente entre sí representan, H, OH, ORa, NH{sub,2}, NHRa, NRaRb, NO{sub,2} o halógeno; donde Ra y Rb independientemente entre sí representan alquilo C1-C10; y R{sup,5} y R{sup,6}, independientemente entre sí representan, H, o bien R{sup,5} y R{sup,6} juntos forman un enlace C-C entre los átomos de carbono a los que están unidos; así como al empleo de dicho compuesto de fórmula (I) en la elaboración de una composición fotoprotectora y al tratamiento cosmético relacionado.
Description
Composición fotoprotectora.
La presente invención se refiere a una
composición fotoprotectora útil para prevenir o minimizar los
efectos dañinos producidos por la radiación solar sobre la piel o el
pelo.
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Las radiaciones electromagnéticas emitidas por
el sol son las responsables directas de los efectos nocivos del sol
sobre la piel y el pelo. Sus consecuencias a nivel cutáneo dependen
de múltiples factores, principalmente el tipo de radiación (longitud
de onda, tiempo de exposición y nivel de penetración en la piel), el
fototipo cutáneo y la susceptibilidad individual. Asimismo, las
radiaciones solares que alcanzan la tierra dependen de diversos
factores como la latitud, altitud sobre el nivel del mar, época del
año, hora del día, espesor de la capa de ozono,
etc.
etc.
La región del espectro electromagnético
denominada ultravioleta-visible cercana puede ser
divida a su vez en cuatro regiones (UVC, UVB, UVA y visible
cercana), cuyas características se describen a continuación.
Los rayos UVC (200-280 nm)
emitidos por el sol constituyen la radiación ultravioleta con un
mayor contenido energético. Sin embargo, esta radiación no es
peligrosa ya que los rayos solares UVC se filtran a través de la
capa de ozono en la estratosfera, no llegando a la superficie de la
tierra.
La radiación UVB (280-320 nm),
con una energía intermedia entre los rayos UVC y los rayos UVA,
llega bastante filtrada a la superficie terrestre. Este tipo de
radiación penetra poco en la piel y ocasiona un daño directo sobre
el ADN. Son responsables por ejemplo de quemaduras, eritemas, del
incremento del grosor de la piel y del cáncer de
piel.
piel.
Los rayos UVA (320-400 nm)
pueden ser divididos en dos tipos de radiación: UVA2
(320-340 nm) y UVA1 (340-400 nm).
Son los responsables de la pigmentación inmediata de la piel y del
bronceado de retardo. Aunque poseen menor energía que la radiación
UVB, también son susceptibles de inducir una alteración de la piel,
sobre todo en el caso de una piel sensible o una piel expuesta
continuamente a la radiación solar. En este sentido, la radiación
UVA emitida por el sol es permanente, ya que se encuentra poco
filtrada. Por otro lado, no produce señal de alarma (eritema), por
lo que su efecto no es advertido en primera instancia. Además del
daño directo, los rayos UVA llevan asociado un daño indirecto sobre
el ADN, ya que en presencia de fotosensibilizadores, tanto endógenos
como ambientales, generan con el oxígeno del aire, especies
reactivas de oxígeno, como singlete o radicales libres, cuya acción
oxidante es muy potente. Los rayos UVA penetran en las capas más
profundas de la piel y son responsables por ejemplo de la
fotocarcinogénesis y el fotoenvejecimiento.
La radiación visible cercana
(400-450 nm) procedente del sol también supone un
gran peligro para la piel, principalmente debido a su baja
filtración atmosférica. No obstante, el menor contenido energético
de este tipo de radiación en comparación con los rayos UV ha
provocado que durante mucho tiempo no fuera objeto de interés por
los
expertos.
expertos.
Al igual que sucede con la piel, la radiación
solar agrede la fibra capilar, alterándola desde la superficie
(cutícula) hasta el corazón (córtex). La radiación ultravioleta y
visible cercana dañan el cemento intercelular, que asegura la
cohesión de las escamas que protegen el cabello. Como consecuencia,
éste pierde su resistencia, solidez, brillo y suavidad. Cuando se
daña la cutícula, la fibra capilar no tiene ninguna protección
frente a los agentes externos y sufre alteraciones más profundas, en
el córtex: por un lado, la queratina se degrada provocando que el
cabello se vuelva más frágil y que las puntas se abran; por otro, la
melamina también se altera originando distorsiones en el
color
original.
original.
Las siguientes referencias proporcionan
información complementaria sobre los efectos adversos asociados con
la exposición a radiación solar: DeSimone, "Sunscreen and Suntan
Products", Handbook of Nonprescription Drugs, 8ª Ed.,
Capítulo 26, páginas 533-546 (American
Pharmaceutical Association, Washington, D.C.; 1986); Grove and
Forbes, "A Method for Evaluating the Photoprotection Action of
Sunscreen Agents Against UV-A Radiation",
International Journal of Cosmetic Science 1982, 4,
15-24; US 4,387,089; De Méo y col., "Genotoxicity
of visible light (400-800 nm) and photoprotection
assesment of ectoin, L-ergothioneine and mannitol
and four sunscreens", Journal of Photochemistry and
Photobiology B: Biology 2008, 91, 24-34;
Parrish JA y col., "The Optics of Human Skin", The Journal
of Investigative Dermatology 1981, 77,
13-19.
Por lo tanto, aunque los efectos inmediatos de
la radiación solar se relacionen con el bronceado de la piel, tanto
la radiación ultravioleta (UVA-UVB) como la
radiación visible cercana representan un serio peligro. Por
consiguiente, es deseable que los tres tipos de radiaciones sean
filtradas, evitando así sus efectos nocivos sobre la piel y
el
pelo.
pelo.
Entre las distintas técnicas de protección
frente a las radiaciones solares, la forma más sencilla consiste en
minimizar el tiempo de exposición al sol, o bien la protección
física frente a sus radiaciones mediante el uso de, por ejemplo,
ropas, gorros, gafas de sol o cristales tintados. Sin embargo,
existe un gran número de actividades que requieren largos periodos
de exposición al sol y además la protección física no es apropiada
en muchas ocasiones. Por ello, surgieron composiciones cosméticas
fotoprotectoras constituidas por filtros físicos, tales como
pigmentos, que actuaban como barreras de los rayos solares. No
obstante, hay estudios que demuestran que algunos filtros físicos
actúan como catalizadores de fotooxidación, siendo por tanto
necesaria la aplicación conjunta de antioxidantes para paliar dicho
efecto. Posteriormente, se incorporaron filtros químicos en las
composiciones fotoprotectoras, que en un principio sólo absorbían
radiación UVB, ya que se consideraba que era la radiación solar más
perjudicial. En los últimos tiempos, se han desarrollado
composiciones fotoprotectoras que absorben en su conjunto rayos UVA
y rayos UVB, denominadas comúnmente como composiciones
fotoprotectoras de amplio espectro (Pathak M A, "Sunscreens:
Progress and perspectives on photoprotection of human skin against
UVB and UVA radiation", J Dermatol 1996,
23(11), 783-800; Gilaberte Y, Coscojuela C,
Saenz de Santamaría M C, González S, "Photoprotectores",
Actas Dermosifiliogr 2003, 94(5),
271-293). Dichas composiciones de amplio espectro
comprenden distintas moléculas para poder filtrar un amplio rango de
longitudes de onda. Por ejemplo, la marca registrada como Helioplex®
contiene avobenzona, que es un fotoprotector de la radiación UVA, y
oxibenzona, que es un fotoprotector de la radiación UVB, mostrando
también cierta absorbancia en la región UVA. Sin embargo, en líneas
generales, las composiciones fotoprotectoras de amplio espectro no
han prestado atención a la radiación visible cercana. Por otro lado,
su fotoestabilidad está poco descrita, y, además, existen evidencias
de que sus componentes son disruptores hormonales. Por lo tanto,
sería deseable desarrollar nuevas composiciones fotoprotectoras que
no presenten estos
inconvenientes.
inconvenientes.
La lofina
(2,4,5-trifenilimidazol) puede ser preparada
calentando hidrobenzamida a unos 300ºC. Desde hace años se conoce
que la lofina y sus derivados son quimioluminiscentes, es decir,
provocan la emisión de luz mediante una reacción química a
temperaturas bajas. Así, la oxidación de la lofina conduce a la
formación de un compuesto excitado que se descompone emitiendo luz
(Philbrook, G E Photochemisty and Photobiology 1965,
4, 1175-
1183).
1183).
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\vskip1.000000\baselineskip
En base a estos antecedentes, resultaría
necesario desarrollar composiciones fotoprotectoras de amplio
espectro para prevenir o minimizar los efectos dañinos de la
radiación solar sobre la piel o el pelo alternativas a las
existentes, que proporcionaran simultáneamente protección frente a
radiaciones UVB, UVA y visible cercana y que además presentaran una
alta estabilidad sin afectar al sistema hormonal.
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Los autores de la presente invención han
desarrollado nuevas composiciones cosméticas y/o farmacéuticas
destinadas a la fotoprotección de la piel y/o de los cabellos contra
la radiación solar, en particular contra la radiación ultravioleta y
la radiación visible cercana. La presente invención se dirige a
dichas composiciones fotoprotectoras así como a su utilización en la
aplicación cosmética y/o farmacéutica anteriormente mencionada. Más
particularmente, la presente invención se relaciona con
composiciones fotoprotectoras que absorben tanto en la región
UVA-visible cercana como en la región UVB que
comprenden al menos un derivado de lofina de fórmula (I). Algunos de
dichos compuestos de fórmula (I) son solubles en disolventes
polares, lo que facilita su formulación galénica. Además, su poca
reactividad química y su escasa descomposición por acción de la luz
confieren estabilidad a la composición fotoprotectora. Por otro
lado, los compuestos de fórmula (I) no tienen actividad estrogénica,
por lo que la composición fotoprotectora se puede utilizar en
sujetos en riesgo de disrupción
hormonal.
hormonal.
\newpage
Por lo tanto, en un aspecto, la invención se
relaciona con una composición que comprende (i) un compuesto A que
absorbe principalmente en la región del UVA-visible
cercana y (ii) un compuesto B que absorbe principalmente en la
región del UVB, en donde, al menos, uno de dichos compuestos A o B
es un compuesto de fórmula (I)
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donde
- Y representa
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- R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4}, independientemente entre sí representan, H, OH, OR_{a}, NH_{2}, NHR_{a}, NR_{a}R_{b}, NO_{2} o halógeno; donde R_{a} y R_{b} independientemente entre sí representan alquilo C_{1}-C_{10}; y
- R^{5} y R^{6}, independientemente entre sí representan, H, o bien R^{5} y R^{6} juntos forman un enlace C-C entre los átomos de carbono a los que están unidos.
En otro aspecto, la invención se relaciona con
un compuesto de fórmula (I'')
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donde
R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{5} y
R^{6}, independientemente entre sí representan los valores
definidos para la fórmula (I).
En otro aspecto, la invención se relaciona con
el empleo de un compuesto de fórmula (I), tal como se ha definido
anteriormente, en la elaboración de una composición fotoprotectora o
composición de la invención.
En otro aspecto, la invención se relaciona con
un método de tratamiento cosmético para proteger la piel o el pelo
de la radiación solar o para prevenir o minimizar los efectos
dañinos producidos por la radiación solar sobre la piel o el pelo,
que comprende aplicar sobre la piel o el pelo una cantidad eficaz de
una composición, tal como se ha definido anteriormente.
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Figura 1: Espectro de emisión del foco luminoso
UVB empleado durante la exposición en los ensayos de fotoprotección
(figura proporcionada por el fabricante).
Figura 2: Espectro de respuesta del detector
utilizado para determinar la dosis aplicada en los ensayos de
fotoprotección (figura proporcionada por el fabricante).
Figura 3: Fotografías que muestran el aspecto de
la piel del dorso de ratones sobre los que ha aplicado
p-nitrolofina al 0,5%, expuestos a UVB. La zona de
aplicación del producto se indica con una flecha.
Figura 4: Fotografías que muestran el aspecto de
la piel del dorso de ratones sobre los que ha aplicado
m-nitrolofina al 0,5%, expuestos a UVB. La zona de
aplicación del producto se indica con una flecha.
Figura 5: Fotografías que muestran el aspecto de
la piel del dorso de ratones sobre los que ha aplicado
4-metilbenciliden alcanfor (P5000) al 0,5%,
expuestos a UVB. La zona de aplicación del producto se indica con
una flecha.
Figura 6: Fotografías que muestran el aspecto de
la piel del dorso de ratones sobre los que ha aplicado
metoxidibenzoilmetano de butilo (P1789) al 0,5%, expuestos a UVB. La
zona de aplicación del producto se indica con una flecha.
Figura 7: Espectro comparativo de absorción
UV-visible de p-nitrolofina (PNLof)
(triángulo negro), 4-metilbenciliden alcanfor
(Parsol 5000) (cuadrado negro) y
metoxi-dibenzoilmetano de butilo (Parsol 1789)
(círculo negro).
Figura 8: Espectro comparativo de absorción
UV-visible de m-nitrolofina (MNLof)
(triángulo negro), 4-metilbenciliden alcanfor
(Parsol 5000) (cuadrado negro) y metoxidibenzoilmetano de butilo
(Parsol 1789) (círculo negro).
Figura 9: Espectro de absorción
UV-visible de estiril lofina.
Figura 10: Representación en el estudio de las
propiedades antiinflamatorias del promedio y EEM de la diferencia de
peso entre la oreja derecha y la oreja izquierda para cada grupo de
ratones: control positivo (A), control negativo (B) (tratamiento con
indometacina 0,5 mg), tratamiento con 0,5 mg de
p-nitrolofina (C) y tratamiento con 1 mg de
p-nitrolofina (D).
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La presente invención describe composiciones
fotoprotectoras útiles para absorber radiación UVB
(280-320 nm) y UVA-visible cercano
(320-450 nm). Los rangos de longitud de onda
expresados en la presente invención para diferenciar los distintos
tipos de radiaciones se corresponden con valores aproximados,
comúnmente aceptados en el estado de la técnica.
En la presente invención el término "filtro
solar" se refiere a un compuesto que, química o físicamente,
absorbe o bloquea algún tipo de radiación ultravioleta y/o visible
cercana, tanto aquella proveniente del sol como de otras fuentes
naturales o artificiales. Filtro solar "complementario" es
cualquier filtro solar cuya fórmula química es distinta de la
fórmula (I).
En la presente invención el término
"composición fotoprotectora" se refiere a una composición
cosmética y/o farmacéutica destinada para la fotoprotección de la
piel y/o de los cabellos contra la radiación
ultravioleta-visible cercana.
La composición de la invención comprende (i) un
compuesto A que absorbe principalmente en la región
UVA-visible cercana y (ii) un compuesto B que
absorbe principalmente en la región UVB, en donde, al menos, uno de
dichos compuestos A o B es un compuesto de fórmula (I), tal como se
ha descrito anteriormente.
En la presente invención, un compuesto que
absorbe principalmente en la región UVA-visible
cercana o UVB se refiere a un compuesto que presenta un máximo de
absorción en la región UVA-visible cercana o UVB,
respectivamente. Este hecho no implica que dicho compuesto también
presente absorción en otras regiones.
Aunque más adelante se proporcionarán ejemplos
de preparación de algunos compuestos de fórmula (I) representativos,
de manera general la preparación de dichos compuestos puede ser
llevada a cabo mezclando un aldehído aromático, un derivado de
bencilo y un exceso de acetato amónico, y a continuación haciendo
reaccionar dicha mezcla en ácido acético glacial a reflujo, tal como
muestra el esquema de reacción 1.
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Esquema de reacción
1
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\vskip1.000000\baselineskip
donde
Y, R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{5} y
R^{6} representan los valores definidos para la fórmula (I).
Un procedimiento de preparación de lofina
asistido por microondas, así como referencias a otros protocolos de
síntesis, se muestran en: Crouch y col.,
"Microwave-Mediated Synthesis of Lophine:
Developing a Mechanism to Explain a Product", Journal of
Chemical Education 2006, 83,
1658-1660.
En una realización particular, la composición de
la invención comprende un único compuesto de fórmula (I). En otra
realización particular, la composición de la invención comprende,
dos o más compuestos de fórmula (I). De manera preferida,
dicho(s) compuesto(s) de fórmula (I) se
selecciona(n) del grupo formado por:
- 2,4,5-trifenil-1H-imidazol;
- 2-(4-hidroxifenil)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2-(4-metoxifenil)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2-(3-nitrofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2-(4-nitrofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2-(4-clorofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2-(4-fluorofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2-[4-(N,N-dimetilamino)fenil]-4,5-difenil-1H-imidazol;
- (E)-2-estiril-4,5-difenil-1H-imidazol;
- (E)-2-(4-nitroestiril)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2,4,5-tris(4-nitrofenil)-1H-imidazol;
- 2-(4-nitrofenil)-1H-fenantro[9,10-d]imidazol;
y sus mezclas.
En una realización más particular, la
composición de la invención comprende, al menos, un compuesto de
fórmula (I) seleccionado entre
2-(3-nitrofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol,
2-(4-nitrofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol,
2-[4-(N,N-dimetilamino)fenil]-4,5-difenil-1H-imidazol,
(E)-2-estiril-4,5-difenil-1H-imidazol,
(E)-2-(4-nitroestiril)-4,5-difenil-1H-imidazol,
2,4,5-tris(4-nitrofenil)-1H-imidazol,
2-(4-nitrofenil)-1H-fenantro[9,10-d]imidazol,
y sus mezclas.
\newpage
En una realización aún más particular, el
compuesto de fórmula (I) es un compuesto de fórmula (I')
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donde
- R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4}, independientemente entre sí representan, H, OH, OR_{a}, NH_{2}, NHR_{a}, NR_{a}R_{b}, NO_{2} o halógeno; donde R_{a} y R_{b} independientemente entre sí representan alquilo C_{1}-C_{10}.
En otra realización aún más particular, el
compuesto de fórmula (I) es un compuesto de fórmula (I'')
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
donde
- R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4}, independientemente entre sí representan, H, OH, OR_{a}, NH_{2}, NHR_{a}, NR_{a}R_{b}, NO_{2} o halógeno; donde R_{a} y R_{b} independientemente entre sí representan alquilo C_{1}-C_{10}; y
- R^{5} y R^{6}, independientemente entre sí representan, H, o bien R^{5} y R^{6} juntos forman un enlace C-C entre los átomos de carbono a los que están unidos.
Según otra realización particular, la
composición de la invención comprende, al menos, un compuesto de
fórmula (I) que absorbe principalmente radiación UV
A-visible cercana. De manera preferida,
dicho(s) compuesto(s) A de fórmula (I) se
selecciona(n) entre
2-(4-nitrofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol,
2-[4-(N,N-dimetilamino)fenil]-4,5-difenil-1H-imidazol,
(E)-2-estiril-4,5-difenil-1H-imidazol,
(E)-2-(4-nitroestiril)-4,5-difenil-1H-imidazol,
2,4,5-tris(4-nitrofenil)-1H-imidazol,
2-(4-nitrofenil)-1H-fenantro[9,10-d]imidazol,
y sus mezclas.
Según otra realización particular, la
composición de la invención comprende, al menos, un compuesto de
fórmula (I) que absorbe principalmente radiación UVB. De manera
preferida, dicho(s) compuesto(s) B de fórmula (I) se
selecciona(n) entre
2,4,5-trifenil-1H-imidazol,
2-(4-hidroxifenil)-4,5-difenil-1H-imidazol,
2-(4-metoxifenil)-4,5-difenil-1H-imidazol,
2-(3-nitrofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol,
2-(4-clorofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol,
2-(4-fluorofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol,
y sus mezclas.
Según otra realización más particular, la
composición de la invención comprende, al menos, un compuesto de
fórmula (I) que absorbe principalmente radiación UV
A-visible cercana y, al menos, un compuesto de
fórmula (I) que absorbe principalmente radiación UVB. De manera
preferida, dicho(s) compuesto(s) A y B de fórmula (I)
se selecciona(n) respectivamente entre:
- (i)
- un compuesto A de fórmula (I) seleccionado entre 2-(4-nitrofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol, 2-[4-(N,N-dimetilamino)fenil]-4,5-difenil-1H-imidazol, (E)-2-estiril-4,5-difenil-1H-imidazol, (E)-2-(4-nitroestiril)-4,5-difenil-1H-imidazol, 2,4,5-tris(4-nitrofenil)-1H-imidazol, 2-(4-nitrofenil)-1H-fenantro[9,10-d]imidazol, y sus mezclas; y
- (ii)
- un compuesto de B fórmula general (I) seleccionado entre 2,4,5-trifenil-1H-imidazol, 2-(4-hidroxifenil)-4,5-difenil-1H-imidazol, 2-(4-metoxifenil)-4,5-difenil-1H-imidazol, 2-(3-nitrofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol, 2-(4-clorofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol, 2-(4-fluorofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol, y sus mezclas.
Tal como se ha indicado anteriormente, el hecho
de que en la presente invención se defina que un compuesto absorbe
principalmente radiación UV A-visible cercana, o
bien, que absorbe principalmente radiación UVB, no implica que no
absorba otras radiaciones. Por ejemplo, el
(E)-2-(4-nitroestiril)-4,5-difenil-1H-imidazol
presenta un máximo de absorción en ambas regiones, UV
A-visible cercana y UVB.
Compuestos de fórmula (I) preferidos en la
composición de la invención son aquellos donde R^{1}, R^{2},
R^{3} y R^{4}, independientemente entre sí representan, H, OH,
OMe NH_{2}, NHMe, NMe_{2}, NO_{2}, flúor o cloro.
La composición de la invención, además de, al
menos, un compuesto de fórmula (I), puede comprender un filtro solar
complementario. Dicho filtro solar complementario es opcional cuando
la composición de la invención comprende un compuesto de fórmula (I)
que absorbe en la región UVA-visible cercano y otro
compuesto de fórmula (I) que absorbe en la región UVB. Sin embargo,
la presencia de un filtro solar complementario es necesaria cuando
el o los compuestos de fórmula (I) comprendidos en la composición
únicamente absorben en una determinada región, de tal modo que dicho
filtro solar cubra la otra región, ofreciendo así protección en
ambas regiones.
Entre los filtros solares complementarios
adecuados en la presente invención se encuentran tanto filtros
químicos como físicos.
Los filtros solares químicos se corresponden con
compuestos de naturaleza orgánica que absorben en un determinado
rango de longitudes de onda. Es bien conocido que dichos filtros
químicos se clasifican como filtros UVA y filtros UVB. Los filtros
UVA absorben principalmente radiación en la región entre 320 y 400
nm del espectro. Filtros UVA que pueden actuar como filtros solares
complementarios en la composición de la presente invención son por
ejemplo: benzofenonas, derivados del alcanfor, derivados del
dibenzoilmetano, antranilatos, bisimidazilato. Los filtros UVB
absorben principalmente radiación en la región entre 280 y 320 nm
del espectro ultravioleta. Filtros UVB que pueden actuar como
filtros solares complementarios en la composición de la presente
invención son por ejemplo: 1,3,5-triazinas,
cinamatos, ácido p-aminobenzoico (PABA) y sus
derivados, salicilatos, derivados del alcanfor, bencimidazol y sus
derivados, octocrileno y ácido urocánico. También existen filtros
solares químicos de radiación visible cercana y filtros solares
químicos capaces de absorber radiación UVA y UVB útiles en la
presente invención, como por ejemplo: anisotriazina, drometrizol
trisiloxano, metilen bisbenzotriazolil tetrametilbutilfenol.
La clasificación de los filtros solares químicos
en función del rango de longitudes de onda a las que absorben es
comúnmente aceptada en la industria. Sin embargo, existe una
clasificación más precisa en función de sus propiedades químicas
("Sunscreens: Development, Evaluation and Regulatory Aspects"
N. Shaath y col., 2ª Ed, páginas 269-273, Marcel
Dekker, Inc. (1997)).
Los filtros solares físicos se corresponden con
agentes fotoprotectores, tales como pigmentos o nanopigmentos de
óxidos metálicos capaces de bloquear físicamente, por difusión y/o
reflexión, la radiación UV, tanto de tipo A como B, y visible
cercana. Ejemplos de filtros solares físicos que pueden actuar como
filtros solares complementarios en la composición de la presente
invención son óxidos de titanio, zinc, hierro, zirconio, cerio y sus
mezclas, opcionalmente revestidos. Estos filtros solares físicos han
sido empleados en el estado de la técnica en diferentes suspensiones
y tamaños de partícula. La siguiente referencia ofrece una extensa
revisión sobre filtros solares físicos: "Sun Protection Effect of
Nonorganic Materials" S. Nakada & H. Konishi, Fragance
Journal, volumen 15, páginas 64-70
(1987).
(1987).
Ejemplos representativos de filtros solares
complementarios que pueden ser formulados en las composiciones de la
presente invención incluyen 1,3,5-triazinas,
cinamatos, ácido p-aminobenzoico (PABA) y sus
derivados, salicilatos, derivados del alcanfor, bencimidazol y sus
derivados, octocrileno, ácido urocánico, benzofenonas, derivados del
dibenzoilmetano, antranilatos, bisimidazilato, anisotriazina,
drometrizol trisiloxano, metilen bisbenzotriazolil
tetrametilbutilfenol, dióxido de titanio, óxido de zinc, y sus
mezclas.
De manera todavía más preferente, dicho filtro
solar complementario se selecciona entre:
- ácido p-aminobenzoico (PABA),
- metosulfato de alcanfor benzalconio,
- éster del ácido salicílico y 3,3,5-trimetilciclohexanol (homosalato),
- benzofenona-3,
- ácido 2-fenilbencimidazol-5-sulfónico (sal de potasio, sal de sodio y trietanolamina)
- ácido tereftalideno dicanfor sulfónico y sales,
- metoxidibenzoilmetano de butilo,
- ácido benciliden alcanfor sulfónico y sales,
- octocrileno,
- alcanfor benciliden poliacrilamidometilo,
- metoxicinamato de octilo,
- PEG-25 PABA,
- p-metoxicinamato de isoamilo,
- octil triazona,
- drometrizol trisiloxano,
- di-octil butamido triazona,
- 4-metilbenciliden alcanfor,
- 3-benciliden alcanfor,
- octil salicilato,
- isopropilbencil salicilato,
- octil dimetil PABA,
- benzofenona-4,
- benzofenona-5,
- 2,2'-metilen-bis-6(2h-benzotriazol-2-il)-4-(tetrametilbutil)-1,1,3,3-fenol,
- sal monosódica del ácido 2,2'-bis-(1,4-fenilen)-1H-benzimidazol-4,6-disulfónico,
- (1,3,5)-triazina-2,4-bis{(4-2-etil-hexiloxi)2-hidroxi)fenilo}-6-(4-metoxifenilo),
- dimeticodietilbenzalmalonato,
- dióxido de titanio, y
sus mezclas.
Particularmente, las composiciones de la
invención se formulan en una forma de administración por vía tópica.
Dichas formas de administración pueden ser tanto líquidas como
semisólidas. Entre las formas de administración por vía tópica
líquidas adecuadas se encuentran: linimento, loción y similares.
Entre las formas de administración por vía tópica semisólidas
adecuadas se encuentran: emulsión, crema, leche, gel,
gel-crema, suspensión, espuma, pulverizado,
ungüento, pomada, pasta, emplasto y similares.
Formas de administración tópica preferidas
incluyen una emulsión de aceite en agua, una emulsión de agua en
aceite y una solución alcohólica.
Aunque las necesidades individuales pueden
variar, por ejemplo en función del sujeto o del tipo de formulación,
la determinación de los intervalos óptimos para las cantidades
eficaces de los filtros solares forma parte de la experiencia
general de los expertos en la técnica. Cada uno de los filtros
solares incluidos en la composición de la invención se encuentran
típicamente en una cantidad entre aproximadamente 0,01% y
aproximadamente 10%, y preferiblemente, entre aproximadamente 0,1% y
aproximadamente 5%, por peso de la composición.
La composición de la invención típicamente
comprende un vehículo o excipiente cosmética y/o farmacéuticamente
aceptable. Un vehículo o excipiente cosmética y/o farmacéuticamente
aceptable es aquel, para uso cosmético y/o farmacéutico, que es
fisiológicamente tolerable y no causa normalmente una reacción
alérgica ni una reacción adversa similar cuando se administra a
animales, más particularmente seres humanos. La elección de estos
ingredientes es una tarea rutinaria para el experto en la materia
que depende del tipo de producto en el que se formula la
composición. En CTFA Cosmetic Ingredient Handbook, 7ª Ed, 1997, y
también, 8ª Ed, 2000, se describen una amplia variedad de
ingredientes cosmética y farmacéuticamente aceptables usados
habitualmente en composiciones del cuidado de la piel, que se pueden
incorporar en las composiciones de la presente invención. A
continuación se describen algunos ejemplos no limitativos de
vehículos y excipientes adecuados: un cuerpo graso, un disolvente
orgánico, un espesante (iónico o no iónico), un suavizante, un
antioxidante, un opacificante, un estabilizante, un emoliente, un
agente anti-espuma, un agente hidratante, una
vitamina, un agente aromatizante, un conservante, un agente
tensioactivo, un colorante, un secuestrante, un agente
alcalinizante, un agente acidulante, y sus
mezclas.
mezclas.
Según otro aspecto, la invención se relaciona
con un compuesto de fórmula (I'')
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
donde
- R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4}, independientemente entre sí representan, H, OH, OR_{a}, NH_{2}, NHR_{a}, NR_{a}R_{b}, NO_{2} o halógeno; donde R_{a} y R_{b} independientemente entre sí representan alquilo C_{1}-C_{10}; y
- R^{5} y R^{6}, independientemente entre sí representan, H, o bien R^{5} y R^{6} juntos forman un enlace C-C entre los átomos de carbono a los que están unidos.
Compuestos de fórmula (I'') preferidos son
aquellos donde R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4},
independientemente entre sí representan, H, OH, OMe NH_{2}, NHMe,
NMe_{2}, NO_{2}, flúor o cloro. Compuestos de fórmula (I'') aún
más preferidos son aquellos donde R^{1}, R^{2}, R^{3} y
R^{4}, independientemente entre sí representan, H, NMe_{2} o
NO_{2}. Ejemplos particulares de compuestos de fórmula (I'')
preferidos incluyen
(E)-2-estiril-4,5-difenil-1H-imidazol
y
(E)-2-(4-nitroestiril)-4,5-difenil-1H-imidazol.
Los compuestos de fórmula (I'') poseen un doble
enlace conjugado entre el anillo central de imidazol y un fenilo.
Este aumento de la deslocalización electrónica favorece la absorción
a \lambda mayores, es decir, más hacia el visible. En este
sentido, los compuestos de fórmula (I'') son especialmente útiles
para conseguir un efecto batocrómico, proporcionando así
fotoprotección en longitudes de onda mayores en comparación a los
compuestos que no presentan dicho doble enlace conjugado.
Según otro aspecto, la invención se relaciona
con el empleo de un compuesto de fórmula (I), tal como se ha
definido anteriormente, en la elaboración de una composición
fotoprotectora.
En una realización particular, el compuesto de
fórmula (I) empleado en la elaboración de la composición
fotoprotectora se selecciona del grupo formado por:
- 2,4,5-trifenil-1H-imidazol;
- 2-(4-hidroxifenil)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2-(4-metoxifenil)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2-(3-nitrofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2-(4-nitrofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2-(4-clorofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2-(4-fluorofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2-[4-(N,N-dimetilamino)fenil]-4,5-difenil-1H-imidazol;
- (E)-2-estiril-4,5-difenil-1H-imidazol;
- (E)-2-(4-nitroestiril)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2,4,5-tris(4-nitrofenil)-1H-imidazol; y
- 2-(4-nitrofenil)-1H-fenantro[9,10-d]imidazol.
En otro aspecto, la invención se relaciona con
un compuesto de fórmula (I) para uso en fotoprotección.
Asimismo, el compuesto de fórmula (I) se puede
usar en la elaboración de una composición fotoprotectora en
combinación con otro u otros compuestos de fórmula (I), así como con
uno o más filtros solares complementa-
rios.
rios.
Tanto desde un punto de vista farmacéutico como
cosmético, la composición fotoprotectora que comprende al menos un
compuesto de fórmula (I) se emplea para proteger la piel o el pelo
de la radiación solar. Tal como se ha comentado en los antecedentes,
la radiación solar dañina que llega a la tierra se compone de rayos
UVB, UVA y de radiación visible cercana. Por ello, la composición
fotoprotectora de la invención es útil para proteger la piel o el
pelo de la radiación ultravioleta de tipo A y B y visible cercana
del sol. No obstante, el uso de la composición fotoprotectora de la
invención no se limita únicamente a radiación solar, sino que
también incluye otros tipos de radiaciones tanto de origen natural
como artificial que comprenden rayos UVB, UVA y/o visible cercana.
Entre las fuentes de radiación artificial encontramos por ejemplo
las recibidas en hospitales, industrias, tratamientos cosméticos
(cabinas de rayos UVA), etc.
La invención también se dirige a un método de
tratamiento cosmético para proteger la piel o el pelo de la
radiación solar u otra radiación de origen natural o artificial o
para prevenir o minimizar los efectos dañinos producidos por la
radiación solar u otra radiación de origen natural o artificial
sobre la piel o el pelo, que comprende aplicar sobre la piel o el
pelo una cantidad eficaz de una composición tal como se ha definido
anteriormente.
Existen diversos efectos dañinos producidos por
la radiación solar u otra radiación de origen natural o artificial
sobre la piel o el pelo. La composición fotoprotectora de la
invención se puede emplear en el campo de la cosmética o con una
finalidad farmacéutica para prevenir o minimizar tales efectos como
por ejemplo eritema, quemaduras solares profundas, envejecimiento
prematuro de la piel inducido por el sol, regulación del deterioro
bioquímico causado por los radicales libres, fotocarcinogénesis,
melanoma, cáncer cutáneo no melanoma, etc.
Por lo tanto, la composición fotoprotectora es
aplicable, tanto a sujetos sanos con objeto de prevenir los efectos
dañinos producidos por la radiación solar u otra radiación de origen
natural o artificial, como a sujetos afectados por alguno de esos
efectos con objeto de minimizar los mismos.
Los compuestos de fórmula (I) no presentan
actividad estrogénica y por tanto pueden ser utilizados por sujetos
en riesgo de disrupción hormonal. En una realización particular la
composición fotoprotectora se emplea para prevenir o minimizar los
efectos dañinos producidos por la radiación solar u otra radiación
de origen natural o artificial sobre la piel o el pelo en sujetos en
riesgo de disrupción hormonal tales como niños y mujeres
embaraza-
das.
das.
Los siguientes ejemplos ilustran la invención,
permiten al experto en la materia desarrollar la presente invención,
y no deben ser considerados en sentido limitativo de la misma.
\newpage
En los siguientes ejemplos, "ppa" significa
"producto puro para análisis".
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
1
La lofina y sus derivados monosustituidos
p-hidroxi (R^{1}= OH), p-metoxi
(R^{1}= OMe), m-nitro (R^{2}= NO_{2}),
p-nitro (R^{1} = NO_{2}),
p-cloro (R^{1}= C1) y p-flúor
(R^{1}= F) se prepararon siguiendo el procedimiento general
descrito en el esquema de reacción 1. Más concretamente, una mezcla
del aldehído correspondiente (1 mmol), bencilo (210 mg, 1 mmol) y
exceso de acetato de amonio (350 mg, 4,5 mmoles) se calentaron a
reflujo en ácido acético glacial durante 4 horas. La mezcla se
enfrió y se agregaron 30 mL de agua utilizando un ecualizador. El
precipitado se filtró, se lavó con agua y se secó en desecador. El
producto se recristalizó en etanol.
Se colocaron 30 mL de ácido acético glacial,
0,64 g (3,06 mmol) de bencilo y 1,08 g (13,90 mmol) de acetato de
amonio en un matraz de dos bocas con refrigerante. El baño se
calentó y una vez alcanzado el reflujo se agregaron 0,44 g (2,99
mmol) de p-dimetilamino benzaldehído, manteniendo el
reflujo durante 4 horas. La reacción se dejó enfriar y a
continuación se extrajo usando acetato de etilo como disolvente. La
fase orgánica se llevó a sequedad por rotaevaporación. Se tomaron
335 mg del crudo de reacción, disueltos en cloroformo para la
siembra, y se purificaron por columna de Sílica flash usando éter de
petróleo: acetato de etilo (1:1) como eluyente y obteniéndose 95 mg
del producto puro (28,4%).
Se colocaron 30 mL de ácido acético glacial,
0,66 g (3.1 mmol) de bencilo y 1,08 g (13,90 mmol) de acetato de
amonio en un matraz de dos bocas con refrigerante. El baño se
calentó y una vez alcanzado el reflujo se agregaron 0,42 g (3,2
mmol) de cinamaldehído, manteniendo el reflujo durante 3 horas. La
reacción se dejó enfriar y a continuación se volcó en un baño de
agua/hielo. El precipitado se filtró a vacío y se retomó en acetato
de etilo. La fase orgánica se llevó a sequedad por rotaevaporación.
Se tomaran 868 mg del crudo de reacción, que se purificaron por
columna de Sílica flash usando éter de petróleo: acetato de etilo
(4:1) como eluyente y obteniéndose 422 mg del producto puro
(42.2%).
Se colocaron 30 mL de ácido acético glacial,
0,64 g (3,06 mmol) de bencilo y 1,08 g (13,90 mmol) de acetato de
amonio en un matraz de dos bocas con refrigerante. El baño se
calentó y una vez alcanzado el reflujo se agregaron 0,44 g (2,5
mmol) de p-nitrocinamaldehído, manteniendo el
reflujo durante 1 hora y media. La reacción se dejó enfriar y se
volcó en un baño de agua/hielo. El precipitado se filtró a vacío, se
lavó con agua caliente y se secó en desecador. Se tomaron 503 mg del
crudo de reacción, que se purificaron por columna de Sílica flash
usando éter de petróleo: acetato de etilo (1:1) como eluyente y
obteniéndose 265 mg del producto puro (52,7%).
Se colocaron 202 mg de
p-nitrolofina obtenida según el procedimiento de
síntesis general anterior, 41 mg de urea, 0,62 mL de H_{2}SO_{4}
98% en un matraz de dos bocas con refrigerante y bola de bromo, en
un baño de aceite y se agregaron 0,50 mL de HNO_{3} 70% gota a
gota a temperatura ambiente. El baño se calentó lentamente hasta
alcanzar una temperatura de 63ºC, que se mantuvo durante 45 minutos.
La reacción se dejó enfriar y a continuación se volcó en
agua-hielo. Posteriormente, el precipitado se filtró
a vacío, se lavó con agua caliente y se secó en desecador para
obtener 246 mg del crudo de reacción (96,5%). Una muestra de 52 mg
del crudo se purificó mediante columna de Sílica flash usando éter
de petróleo: acetato de etilo (3:1) como eluyente, obteniéndose 16
mg del producto puro
(30%).
(30%).
Se calentaron a reflujo 100 mL de ácido acético
glacial con 1,53 g (0,001 mol) de p-nitro
benzaldehído. Una vez alcanzado el reflujo, se le agregaron 2,08 g
(0,001 mol) de 9,10-fenantroquinona y 1,55 g (0,002
mol) de acetato de amonio (en exceso).
Se dejó a reflujo durante 1 hora. Luego se dejó
enfriar y se filtró. Se agregaron 150 mL de agua y nh4oh a las aguas
madres hasta neutralización. El precipitado formado se filtró y se
reunió con el anterior, lavando con agua. Del crudo de reacción se
tomaron 360 mg para purificar por columna de Silica flash para
obtener 69 mg del producto
(17,52%).
(17,52%).
La Tabla 1 muestra el aspecto de los sólidos
obtenidos, su rendimiento, así como las longitudes de onda de los
máximos de absorción (nm) y su correspondiente absorbancia (unidades
de absorbancia) [espectro UV obtenido en un equipo Cecil 2021
UV-Visible Spectrophotometer],
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Todos los derivados de lofina monosustituidos
anteriores, con excepción de la m-nitrolofina, son
muy solubles o solubles en disolventes como acetato de etilo o
acetona.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
2
Todas las irradiaciones realizadas en los
estudios de fotoestabilidad se llevaron a cabo en un fotorreactor
ACE 7840, que usa una lámpara ACE 7825 de 450 W de potencia.
Como paso previo, en el caso de la
p-nitrolofina se determinó su absortividad molar
específica de la molécula (\varepsilon) (A^{1}_{1}). Para
ello, se pesaron 50,4 mg de p-nitrolofina, que se
disolvieron en 100,0 mL de MeOH (ppa); a continuación, se realizaron
4 diluciones, tomando 1,0, 2,0, 5,0 y 10,0 mL de esta solución madre
y llevando cada una a un volumen de 100,0 ml con MeOH (ppa). La
Tabla 2 muestra los valores de absorbancia para cada una de las
mues-
tras.
tras.
La pendiente de la recta obtenida a partir de
estos puntos (y= 16.717x + 0,03; R2 = 0,9993) coincide por tanto con
el valor de la absortividad molar específica de la
p-nitrolofina a 379 nm
\varepsilon_{(379\ nm)} = 16 .
717\
U.A.L/mol
El disolvente usado en el ensayo de
fotoestabilidad fue metanol [MeOH] (ppa) (250 mL), utilizando una
concentración de 1 g/mL de p-nitrolofina. Se irradió
la solución durante 2 horas, tomándose muestras a los 10 minutos, 20
minutos, 1 hora y 2 horas, y llevándolas a sequedad en un evaporador
rotatorio. Cada muestra se analizó por cromatografía en capa fina
(TLC en Sílica Gel) utilizando éter de petróleo:acetato de etilo
(4:1) como eluyente. Las placas cromatográficas se revelaron con una
lámpara 254 nm y con una lámpara de 366 nm, así como mediante
revelado simultáneo con ambas lámparas (254 y 366 nm).
Al cabo del experimento (2 horas) existía una
alta concentración del producto de partida, lo que indica que la
fotodescomposición es lenta. En concreto, se pudieron resolver tres
fotoproductos (tres manchas), que fueron aislados por TLC
preparativa. Una valoración aproximada de la suma total de dichos
fotoproductos indica que la p-nitrolofina ha sufrido
una degradación inferior al 5%. Además, el número de manchas que
apareció en la placa, es decir 3, se mantuvo constante, demostrando
que los fotoproductos aislados no experimentaron
fotodescomposición
secundaria.
secundaria.
Se preparó una disolución saturada de
m-nitrolofina en MeOH para realizar el estudio, ya
que la solubilidad en este disolvente es baja (aproximadamente 0,2
mg/mL). Brevemente, se procedió dejando en agitación una cantidad de
m-nitrolofina suficiente para asegurar la saturación
en 200 mL de MeOH durante toda la noche. Se filtró y se irradió la
solución durante 2 horas, tomándose muestras de 10 mL a los 10
minutos, 20 minutos, 1 hora y 2 horas, y llevándolas a sequedad en
evaporador rotatorio. Cada muestra se analizó por cromatografía en
capa fina (TLC en Sílica Gel) utilizando éter de petróleo:acetato de
etilo (2:1) como eluyente y se reveló con lámpara UV a 254 nm.
Tras 2 horas únicamente apareció una mancha de
interés, que se aisló. Para ello se tomó el producto a las 2 horas
de irradiación, se llevó a sequedad por rotaevaporación y se
purificó mediante cromatografía en columna (Silica flash) usando
como eluyente la mezcla utilizada para realizar la TLC, resultando
en 5,7 mg de producto de fotodescomposición. Además, la ausencia de
nuevas manchas indica que no existe fotodescomposición
secundaria.
Ejemplo
3
Con objeto de evaluar la posible estrogenicidad
de la p-nitrolofina se investigó su capacidad de
unirse a receptores estrogénicos y activar la expresión de genes
específicos de la actividad hormonal, empleando diversos bioensayos
de estrogenicidad in vitro de reconocida sensibilidad y
especificidad.
Brevemente, los bioensayos de transactivación
("Transactivation assay" o "Reporter gene assay")
utilizados se basan en el empleo de líneas celulares de cáncer de
mama y de útero transfectadas con diversos receptores hormonales, ya
sean nativos o modificados. Las líneas celulares resultantes
contienen, además, un gen reporter regulado por los
estrógenos a través del elemento de respuesta estrogénico, el
promotor de la globina y el gen de la luciferasa. El conjunto
obtenido responde de forma específica al estímulo del estrógeno
natural (estradiol) o de cualquier mimetizador estrogénico que
induce la expresión del gen reporter que se hace ostensible
desencadenando una reacción colorimétrica.
Se prepararon soluciones stock (10 nM) en etanol
(EtOH) tanto de p-nitrolofina como de estradiol, las
cuales se mantuvieron a -20ºC hasta su uso. Las sucesivas diluciones
fueron realizadas en el medio de cultivo.
Los medios de cultivo celular y el suero bovino
fetal (FBS) fueron obtenidos de Life Technologies Inc. El
antibiótico geneticina y la luciferina fueron comprados a Promega.
El 17\beta-estradiol (E_{2}) y el antibiótico
piromicina fueron comprados a Sigma-Aldrich Inc.
Todo el material plástico para el cultivo fue
obtenido de Falcon (Merck Eurolab) excepto las placas de 96
pocillos, las cuales fueron obtenidas de Greiner Labortechnik.
Las células MELN fueron obtenidas mediante la
transfección de la línea celular MCF-7 de cáncer de
mama [las cuales expresan de forma endógena el receptor de los
estrógenos alfa (ER\alpha)] con un elemento de respuesta sensible
a los estrógenos
(ERE-\betaGlob-Luc-SV-Neo).
La selección de clones resistentes a la geneticina se realizó
empleando una concentración de 1 mg/mL. El medio de mantenimiento de
esta línea celular es DMEM F12 (Dulbecco's modified eagle médium)
con rojo fenol, suplementado con 10% FBS, 1% de
penicilina/estreptomicina y 1 mg/mL de geneticina. Debido a la
actividad estrogénica del rojo fenol así como del FBS, los
experimentos son realizados en medio denominado experimental, esto
es, medio de cultivo sin rojo fenol y FBS desprovisto de estrógenos.
El medio experimental para esta línea es DMEM sin rojo fenol
suplementado con 3% de FBS tratado con
carbón-dextrano. La actividad basal de estas células
está alrededor del 15% de la máxima actividad, obtenida con 10 nM
de
E_{2}.
E_{2}.
Las líneas celulares
HELN-ER\alpha y HELN-ER\beta
fueron obtenidas mediante la transfección de la línea celular HeLa
de cáncer de útero. En una primera fase, dichas células fueron
transfectadas con un elemento de respuesta sensible a los estrógenos
y a continuación con el receptor de los estrógenos alfa o beta
(ER\alpha o ER\beta). La selección de clones resistentes a la
geneticina y piromicina se realizó empleando una concentración de 1
mg/mL y 0,5 mg/mL, respectivamente. El medio de mantenimiento así
como el medio experimental de estas 2 líneas celulares es DMEM F12
sin rojo fenol, suplementado con 6% de FBS (desprovisto de
estrógenos), 1% de penicilina/estreptomicina, 1 mg/mL de geneticina
y 0,5 \mug/mL de piromicina. La actividad basal de estas células
está alrededor del 10% de la máxima actividad, obtenida con 10 nM de
E_{2}.
Las células se sembraron a una densidad de
5x10^{4} células por pocillo, en placas blancas opacas de 96
pocillos, en 150 \mul de medio experimental. Transcurridas 8
horas, los compuestos a ensayar (p-nitrolofina y
estradiol) se prepararon (4x concentrados) en el mismo medio y se
añadieron a cada pocillo (50 \mul). Las células fueron incubadas
durante 16 horas a 37ºC. Al final de la incubación, se eliminó el
medio se reemplazó por medio fresco conteniendo luciferina 0,3 nM [a
esa concentración la luciferina difunde al interior celular
produciendo una señal luminiscente que es estable tras 5 minutos y
durante, al menos, 2 horas]. A continuación, las placas fueron
introducidas en el luminómetro para medir la luminiscencia durante 2
segundos. Se utilizó un aparato YicroBeta Trilux luminometer (EGG
Wallac) para detectar la actividad luciferasa.
Los ensayos fueron realizados por cuadruplicado
para cada concentración (0,01-10 \muM) en, al
menos, tres experimentos independientes. Los resultados fueron
expresados como porcentaje de la actividad máxima de luciferasa
(100%), que correspondía a la obtenida en presencia de E_{2} 10
nM. Los valores de actividad luciferasa obtenidos fueron analizados
usando el test estadístico one-way ANOVA. Las
diferencias fueron consideradas significativas cuando P era
menor de 0,5 (P < 0,05).
En primer lugar, con objeto de investigar la
estrogenicidad de la p-nitrolofina se ha utilizado
la línea celular MELN, empleada habitualmente para identificar la
actividad hormonal de compuestos que interaccionan específicamente
con el receptor de los estrógenos alfa. Como se muestra en la Tabla
3, la p-nitrolofina no fue capaz de inducir la
expresión de la luciferasa más allá del valor obtenido con el
control negativo (medio de cultivo libre de hormona) incluso a la
concentración más alta ensayada (10 \muM). Este ensayo evidencia
que la p-nitrolofina no es un compuesto
estrogénico.
estrogénico.
\vskip1.000000\baselineskip
A continuación, con objeto de confirmar los
resultados obtenidos y para categorizar el perfil estrogénico de la
p-nitrolofina, se ensayó el producto en otros dos
bioensayos basados en el empleo de las líneas celulares
HELN-ER\alpha y -ER\beta, mediante los cuales se
puede diferenciar la estrogenicidad dependiente de los receptores de
estrógenos alfa o beta, respectivamente. Los resultados obtenidos en
el bioensayo basado en el que se utiliza la línea
HELN-ER\alpha indican, de nuevo, que el compuesto
no es estrogénico (Tabla 4), confirmando así los resultados
anteriores.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Por otro lado, la p-nitrolofina
tampoco induce un incremento en la actividad luciferasa cuando es
ensayado en el bioensayo basado en el empleo de la línea
HELN-ER\beta (Tabla 5). Por tanto, también este
ensayo apunta a que la p-nitrolofina no es un
compuesto estrogénico.
\newpage
\global\parskip0.860000\baselineskip
Dada la sensibilidad y especificad de la
metodología empleada, la ausencia de actividad estrogénica en
ensayos de estrogenicidad en cultivo, permite concluir que es muy
improbable que la p-nitrolofina tenga comportamiento
estrogénico en modelos animales.
Con objeto de evaluar la posible actividad
hormonal estrogénica de la m-nitrolofina, se
investigó su capacidad para unirse al receptor estrogénico y activar
la proliferación celular tras 144 horas de subcultivo, en ausencia
(control negativo) o presencia (control positivo) del
17\beta-estradiol, mediante un test de
estrogenicidad in vitro (E-Screen) que
utiliza la línea celular de cáncer de mama denominada
MCF-7 [Experimentos de proliferación celular: Test
E-Screen].
El test de proliferación
E-Screen se basa en el empleo de la línea celular
MCF-7 de cáncer de mama. Las células
MCF-7 [las cuales expresan de forma endógena el
receptor de los estrógenos alfa (ER\alpha)], responden al
tratamiento con estradiol incrementando su ritmo proliferativo,
sintetizando nuevas proteínas y procediendo a la transcripción de
ciertos genes específicos. Estas células son consideradas
estrógeno-dependientes, con lo cual no proliferan
cuando se exponen a un medio de cultivo suplementado con suero al
que se le han eliminado los estrógenos, solamente estrógenos
naturales o sintéticos cancelan esta inhibición e inducen
proliferación máxima. Aprovechando estas características Soto et
al. ["An in culture bioassay to assess the estrogenicity of
xenobiotics"; en Chemically Induced Alterations in Sexual
Development: The Wildlife/Human Connection; Colborn T, Clement CR,
eds; Princeton, NJ: Princeton Scientific Publishing,
295-309; 1992] desarrollaron un ensayo biológico
bajo el nombre de E-screen (US 4.859.585). El test
compara el número de células o la proliferación celular obtenida
después de 6 días de cultivo. Las células crecen en medio de cultivo
suplementado con suero humano desprovisto de estrógenos, en
presencia y/o ausencia de estradiol, así como, de los compuestos
químicos de sospechada actividad estrogénica.
Se preparó una solución stock de
m-nitrolofina a 30 mg/ml en etanol y se ensayó en el
intervalo 300-0,003 \mug/ml. Por otro lado, se
prepararon soluciones stock de 17\beta-estradiol
(10 mM) también en etanol y se mantuvieron a -20ºC hasta su uso. Las
sucesivas diluciones tanto del compuesto problema como de estradiol,
fueron realizadas en el medio de cultivo.
Los medios de cultivo celular y el suero bovino
fetal (FBS) fueron obtenidos de Life Technologies Inc.
Estradiol-17\beta, L-glutamina,
Hepes y bicarbonato sódico fueron comprados a
Sigma-Aldrich Inc. Todo el material plástico para el
cultivo fue obtenido de Falcon (Merck Eurolab) excepto las placas de
24 pocillos, las cuales fueron obtenidas de Greiner
Labortechnik.
Se utiliza la línea celular de cáncer humano
MCF-7. Esta línea fue establecida por Soule et
al. ["A human cell line from a pleural effusion derived from a
breast carcinoma". J. Natl. Cáncer Inst.
51:1400-1413; 1973] a partir de un carcinoma de mama
humano. Su gran difusión como modelo experimental de cáncer de mama
puede ser atribuido a que se trata de la primera línea celular
documentada como receptor estrogénico positivo, que responde con
cambios metabólicos y estructurales a la acción de los estrógenos
[Soto et al. "The E-Screen as a tool to
identify estrogens: an update on oestrogenic environment
pollutants". Environ. Health Perspect.
103:113-122, 1995]. La línea celular
MCF-7 presenta, además, receptores específicos para
otros agentes hormonales, entre los cuales se encuentran los
andrógenos, progestágenos, glucocorticoides, vitamina D3, hormonas
tiroideas, prolactina, insulina, calcitonina y factores
estimuladores del crecimiento celular.
En el presente estudio se utilizó el stock de
las células MCF-7 BUS cedidas por el Dr. C.
Sonnenschein (Tufts University, Boston, EE.UU.) y clonadas como
C7MCF-7 a partir del pase 173 de la
MCF-7 original cedida por el Dr. McGrath de la
Michigan Cancer Foundation.
Como medio nutriente de la línea celular
ensayada, se utilizaron los siguientes medios sintéticos:
a) Medio de mantenimiento: El
mantenimiento en cultivo de las células MCF-7 se
efectuó en medio mínimo esencial DMEM (Dulbecco's modified Eagle
médium) suplementado con 10% de FBS más rojo fenol (RF),
L-glutamina y bicarbonato sódico; y
b) Medio experimental: Debido a actividad
estrogénica del rojo fenol así como del FBS, los experimentos son
realizados en medio denominado experimental, esto es, medio de
cultivo sin rojo fenol, quedando en este caso indicado en el texto
como DMEM sin RF. En este caso, la regulación del pH del medio se
efectuó utilizando como tampón, bicarbonato sódico y Hepes, a
concentraciones finales de 4,2 \mul y 20 mM, respectivamente. El
medio experimental se suplemento con 10% de suero humano desprovisto
de estrógenos (10% CDHuS).
El test E-Screen se realizó
siguiendo la metodología previamente descrita por Soto et al.
["An in culture bioassay to assess the estrogenicity of
xenobiotics. In: Chemically Induced Alterations in Sexual
Development: The Wildlife/Human Connection; Colborn T, Clement CR,
eds; Princeton, NJ: Princeton Scientific Publishing,
295-309; 1992] modificada por Villalobos et
al. ["The E-SCREEN assay: comparison among
different MCF7 cell stocks, Environ. Health Perspect.
103:844-850; 1995]. Las células
MCF-7, en confluencia, fueron tripsinizadas y se
sembraron alícuotas de dicha suspensión en placas de 24 pocillos a
concentraciones iniciales de 20.000-40.000 células
por pocillo en medio de mantenimiento, DMEM con RF, suplementado con
el 10% de FBS. Cuando las células estaban adheridas al soporte
plástico de la placa (generalmente 24-48 horas) se
retiraba el medio de mantenimiento y se añadía medio experimental
DMEM sin RF suplementado con el 10% de CDHuS. El
17\beta-estradiol y los compuestos a ensayar se
añadieron al medio de cultivo en las concentraciones requeridas. El
ensayo finalizó a las 144 horas de subcultivo (fase exponencial)
tras la aspiración del medio y la fijación de las células para la
aplicación de la técnica de la sulforrodamina-B. Por
último, el crecimiento celular para cada grupo experimental se
refiere al crecimiento obtenido para el control negativo (ausencia
de hormona) y con respecto al estradiol (control positivo).
Una vez realizado el ensayo
E-Screen, se procedió a establecer la tasa máxima de
proliferación celular inducida por el compuesto, también llamada
efecto proliferativo (EP), calculada como la relación existente
entre la máxima tasa de proliferación obtenida para el compuesto y
la tasa de proliferación alcanzada por el control negativo. Los
datos de proliferación correspondientes a las sucesivas diluciones
del compuesto se transformaron tras la aplicación del factor de
corrección para la dilución de cada punto experimental, procediendo
al cálculo de la media aritmética de los datos obtenidos. Otro
parámetro es la eficacia proliferativa relativa (EPR). Para ello, se
dividió la tasa máxima de proliferación celular obtenida entre la
tasa máxima de proliferación celular alcanzada por el
17\beta-estradiol (que se sitúa en torno a 6,2
\pm 0,3 sobre el control). El valor resultante se expresó en tanto
por ciento, estimando el 100% para el
17\beta-estradiol. Por último, se estimó también
la potencia proliferativa relativa (PPR), calculada como la relación
existente entre la concentración a la cual el producto ensayado
presentaba la máxima capacidad proliferativa y aquella a la que el
17\beta-estradiol presentaba su máximo efecto
proliferativo. El valor resultante se expresó en tanto por ciento,
estimando el 100% para el 17\beta-estradiol.
Cuando el efecto proliferativo relativo de un compuesto, o mezcla de
ellos, es en torno a 100 se le considera como un agonista completo,
si el valor está alrededor de 1 se le considera como un compuesto
que carece de actividad estrogénica, para valores intermedios se
habla de agonistas parciales.
En este ensayo se ha utilizado el test de
estrogenicidad E-Screen, empleado habitualmente para
identificar la actividad hormonal de compuestos que interaccionan
específicamente con el receptor de los estrógenos alfa (ER\alpha).
Los ensayos fueron realizados por triplicado para cada concentración
(rango: 300-0,003 \mug/ml) en, al menos, tres
experimentos independientes.
Los resultados obtenidos tras la realización del
bioensayo (Tabla 6) expresados como efecto proliferativo, indican
claramente que la m-nitrolofina no induce una
proliferación celular significativa con respecto al control negativo
(medio de cultivo libre de hormona), presentando un efecto
proliferativo inferior a 1,5 en todo el rango de concentraciones
testadas. Por lo general, se considera que un compuesto tiene
actividad estrogénica cuando su efecto proliferativo es de 2 ó
superior, por lo que se puede considerar que la
m-nitrolofina
\hbox{no es un compuesto
estrogénico para el receptor alfa.}
Ejemplo
4
En estos ensayos se ha estudiado el efecto de
p-nitrolofina y m-nitrolofina sobre
el eritema debido a la exposición de la piel de ratón a una fuente
de irradiación con máximo en la región UVB. Los resultados obtenidos
se han comparado con el efecto del 4-metilbenciliden
alcanfor (P5000), sustancia considerada como un filtro solar UVB, y
con el efecto del metoxidibenzoilmetano de butilo (P1789), filtro
tipo UVA, ambos productos muy utilizados en cosmética antisolar.
Se han utilizado 35 ratones macho, de peso
superior a 20 gramos. Tras su recepción, los animales se aclimataron
durante 7 días al lugar donde se realizaron los ensayos, ubicándose
en una sala con la temperatura controlada (22ºC) con humedad
relativa entre el 50% y el 75%, con recambio de 10 veces por hora
aproximadamente de aire fresco filtrado y con ciclos luz/oscuridad
de 12 h (7,00 - 19,00 luz y de 19,00 a 7,00 oscuridad). Durante este
periodo y durante el periodo experimental, los animales fueron
alimentados ad libitum con dieta estándar para roedores y
agua corriente como bebida.
Los animales se distribuyeron aleatoriamente en
4 grupos experimentales, según lo expuesto en la Tabla 7. Los
productos a probar se utilizaron directamente aplicándolos en forma
de gel sobre un área de la piel, de forma que cada animal constituya
su propio control.
\newpage
\global\parskip1.000000\baselineskip
La prueba se realizó siguiendo el método
descrito por Winder et al. ["A study of Pharmacological
influences on ultraviolet erythema in guinea pigs". Arch. Int
Pharmacodyn, 116:261-292; 1958] y por otros autores
[Wendy et al. "The local antinociceptive and topical
antiinflamatory effects of propyl gallate in rodents". Br. J.
Pharmacol, 58:573-581; 1976; Katiyar et al.
"Protective Effects of Silymarin Against Photocarcinogenesis in a
Mouse Skin Model". J Natl Cáncer Inst 89:556-65;
1997] con ligeras modificaciones. El día anterior al del ensayo, los
animales se depilaron lo mejor posible aplicando una capa de crema
depilatoria comercial para eliminar todo el rastro de pelo y dejar
la piel del dorso completamente al descubierto. Los restos de crema
depilatoria se eliminaron mediante lavado y enjuague con agua
corriente y a continuación los animales se devolvieron a sus cajas
correspondientes, donde permanecieron hasta el día siguiente.
El día del ensayo, las sustancias a ensayar se
aplicaron sobre el lomo de los animales previamente marcados,
siguiendo una pauta aleatoria (randomizada) y a ciegas. Tras aplicar
los tratamientos correspondientes, los animales se colocaron y se
fijaron en la plataforma de exposición del equipo. A continuación,
los animales se situaron a 8 cm de una fuente de luz ultravioleta de
4*40 w, de 313 nm de emisión fundamental y rango comprendido entre
290 y 350 nm aproximadamente y con un filtro
anti-UVC. El espectro de emisión de dicho foco
luminoso se representa en la Figura 1.
La exposición se mantuvo hasta que todos los
animales recibieron una dosis total aproximada de 2,5 kJ/m^{2}. La
dosis de irradiación aplicada, se determinó mediante un detector de
luz ultravioleta, cuya curva de respuesta se expone en la Figura
2.
Veinticuatro horas después de terminar la
exposición, se fotografió el dorso de los animales y se devolvieron
a sus jaulas. La evaluación del eritema se realizó mediante un
criterio de positivo/negativo, obteniéndose el porcentaje de
animales protegidos. La significación estadística de las diferencias
se evaluó mediante la prueba no paramétrica "Test de
Fisher".
Para determinar el espectro de absorción, de
cada una de las sustancias se preparó una solución de 10 mg/ml de
metanol. El metanol, a su vez, se utilizó para ajustar el cero de
absorbancia en cada una de las longitudes de onda en el rango 195 -
400 nm.
El estudio se realizó según las directrices de
"Buenas Prácticas de Laboratorio".
A las 24 horas de la exposición, todos los
animales mostraron un eritema intenso acompañado de evidentes signos
inflamatorios, muy intensos en algunas ocasiones y con zonas de
extravasación hemática variable, que iban desde pequeñas petequias
hasta lesiones claramente hemorrágicas.
El resultado de la aplicación de
p-nitrolofina y m-nitrolofina fue
comparable. Los fragmentos de piel sobre los que se depositaron
estos geles, presentaron un aspecto casi normal, aunque pudo
apreciarse un eritema muy ligero. El 100% de los animales fueron
calificados como "protegidos" porque la intensidad del eritema
se redujo considerablemente con respecto a las zonas circundantes.
Sin embargo, la supresión no fue completa. La intensidad del eritema
es entre un 60% y un 80% menor que en las zonas colindantes (véanse
las Figuras 3 y 4 para los compuestos p-nitrolofina
y m-nitrolofina, respectivamente).
La aplicación de P5000 protegió de forma eficaz
frente al eritema al 100% de los animales, en los que la piel
presentó un aspecto sonrosado muy próximo a la normalidad que puede
evaluarse de forma subjetiva en un 70-90% de
supresión del eritema (véase la Figura 5).
De manera similar, el tratamiento con P1789
redujo el eritema de forma visible en todos los animales, aunque la
supresión lograda fue considerablemente menor que la obtenida por
p-nitrolofina, m-nitrolofina y por
el P5000. De forma subjetiva se evalúa que la supresión alcanzada
osciló entre un 10% y un 30% con respecto a las zonas vecinas (véase
la Figura 6).
El espectro del
4-metilbenciliden alcanfor (P5000) es característico
ya que presenta un máximo de absorción entre aproximadamente 245 y
325 nm (295 nm), mientras que el metoxidibenzoilmetano de butilo
(P1789) presenta su máximo entre aproximadamente 305 y 395 nm (360
nm). Esta característica define a estas sustancias como filtros
específicos de UVB y de UVA, respectivamente.
El espectro de absorción de la
p-nitrolofina muestra un máximo de absorción en la
región UVA comprendido entre aproximadamente 320 y 450 nm (379 nm),
si bien en la región UVB también muestra absorción. Por tanto, la
p-nitrolofina ofrece una absorbancia que bloquea de
forma simultánea la luz UVB y la luz UVA, llegando incluso hasta
longitudes del visible cercano. Parte de sus efectos podrían ser
debidos a un efecto pantalla de amplio espectro que impide que la
radiación ultravioleta incida sobre la piel. Comparando los máximos
obtenidos con los dos patrones y la p-nitrolofina,
se observa que, a la concentración utilizada (10 mg/ml), el bloqueo
de la UVB por parte de la p-nitrolofina es inferior
al del P5000 pero superior al del P1789, mientras que en la región
UVA la p-nitrolofina ofrece una protección muy
amplia, que cubre también la región visible cercana (véase la Figura
7).
El espectro de absorción de la
m-nitrolofina muestra un máximo de absorción a
longitudes de onda comprendidas entre aproximadamente 250 y 350 nm
(309 nm). Por tanto, la m-nitrolofina ofrece una
absorbancia que bloquea principalmente a la luz
UVB-UVA2 y deja pasar casi intacta la porción de los
UVA1. Parte de sus efectos podrían ser debidos a un efecto pantalla
sobre la región UVB-UVA2. Comparando los máximos
obtenidos con los dos patrones y la m-nitrolofina,
se observa que, a la concentración utilizada (10 mg/ml), el bloqueo
de la UVB por parte de la m-nitrolofina es superior
al del P5000, mientras que en comparación con P1789, el bloqueo
observado para la m-nitrolofina es similar en la
región UVA2 y muy inferior en la región UVA1. (véase la Figura
8).
La Tabla 8 resume estos resultados.
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\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
5
En este estudio se ha analizado la actividad
antiinflamatoria tópica de la p-nitrolofina dado que
el eritema es un proceso inflamatorio. Concretamente, se evaluó la
inhibición de la inflamación inducida por
13-acetato-12-miristato
de forbol (MPA) y se comparó con un producto antiinflamatorio de
referencia (indometacina). Se dividieron 37 ratones en los
siguientes grupos: grupo control positivo (MPA 0,5 mg); grupo
control negativo (indometacina 0,5 mg); grupos tratados (0,5 mg y 1
mg de p-nitrolofina). Todas las soluciones fueron
preparadas usando acetona (ppa) como vehículo. A cada ratón se le
administró en la oreja derecha 20 \muL de solución de 25 mg/mL de
13-acetato-12-miristato
de forbol (MPA) [Fluka cod 79346] (10 \muL en cada cara). Al grupo
control positivo no se le administró nada más; al grupo control
negativo, se le administró 20 \muL de la solución de 25 mg/mL de
indometacina, y a los grupos tratados se les administró de igual
forma 20 \muL de la solución de 25 ó 50 mg/mL de
4-nitrolofina, inmediatamente después de administrar
el MPA. Se usaron animales que no tuvieran ninguna lesión o
irritación en la piel y
orejas.
orejas.
Transcurridas 4 horas
post-tratamiento los ratones fueron sacrificados por
dislocación cervical y con un sacabocados se obtuvo una porción de
cada oreja de 6 mm de diámetro las cuales fueron pesadas en balanza
analítica de precisión. Se calcularon las diferencias en peso
(\Delta) entre, la oreja derecha (tratada) e izquierda (sin
tratar) para cada animal y para cada grupo. Se estimó y se calculó
el porcentaje de inhibición (% inh) según la siguiente
ecuación:
ecuación:
%\ inh = 100\
(1-\Delta t/\Delta
c)
donde \Deltat representa la
diferencia en los grupos tratados y \Deltac la diferencia para el
grupo control
negativo.
Para el análisis de resultados se utilizó un
ANOVA de una vía y test de Dunnet de múltiple comparación, valores
de P<0,05 se consideraron significativos. A tales efectos se
utilizó un software Graphpad Instat Versión 3.06.
Los datos de pesos de los animales y pesos de
las orejas, derecha e izquierda, se recogen en la Tabla 9.
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
Todos los animales tuvieron un comportamiento
normal durante todo el periodo del estudio. Los resultados surgen de
la diferencia en peso entre oreja derecha e izquierda (\Delta = OD
- OI) para cada ratón y de cada grupo acorde a la metodología
descrita. En la Tabla 10 y en la Figura 10 se muestran los promedios
y EEM de (\Delta = OD - OI) para cada grupo (valores de p <
0,05 se consideraron significativos).
El grupo D tenía pocos anímales (n=4) por lo
que, aunque no se comparó estadísticamente, se observa una tendencia
a inhibir la inflamación (90% aproximadamente). Al comparar el
tratamiento con indometacina (Grupo B) con el de
4-nitrolofina (C) a la misma dosis (0,5 mg), no se
observan diferencias significativas (q = 1,3, p> 0,05).
Por tanto, utilizando este ensayo preliminar, se
puede concluir que la 4-nitro lofina a la dosis de
0,5 mg inhibe la inflamación inducida por MPA.
Los ejemplos anteriormente descritos evidencian
que los compuestos de fórmula (I) de la presente invención
proporcionan un doble mecanismo de protección:
- -
- por un lado, son útiles bloqueando el acceso de la radiación ultravioleta y visible cercana a la superficie de la piel; y
- -
- por otro, son útiles reduciendo la inflamación producida por aquellas radiaciones que hubieran logrado alcanzar la piel.
Claims (15)
1. Una composición que comprende (i) un
compuesto A que absorbe en la región del ultravioleta A
(UVA)-visible cercana y (ii) un compuesto B que
absorbe en la región del ultravioleta B (UVB), en donde, al menos,
uno de dichos compuestos A o B es un compuesto de fórmula (I)
donde
- Y representa
- R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4}, independientemente entre sí representan, H, OH, OR_{a}, NH_{2}, NHR_{a}, NR_{a}R_{b}, NO_{2} o halógeno; donde R_{a} y R_{b} independientemente entre sí representan alquilo C_{1}-C_{10}; y
- R^{5} y R^{6}, independientemente entre sí representan, H, o bien R^{5} y R^{6} juntos forman un enlace C-C entre los átomos de carbono a los que están unidos.
2. Composición según la reivindicación 1, en la
que dicho compuesto de fórmula (I) se selecciona del grupo formado
por:
- 2,4,5-trifenil-1H-imidazol;
- 2-(4-hidroxifenil)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2-(4-metoxifenil)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2-(3-nitrofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2-(4-nitrofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2-(4-clorofenil)-4,5 -difenil-1H-imidazol;
- 2-(4-fluorofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2-[4-(N,N-dimetilamino)fenil]-4,5-difenil-1H-imidazol;
- (E)-2-estiril-4,5-difenil-1H-imidazol;
- (E)-2-(4-nitroestiril)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2,4,5-tris(4-nitrofenil)-1H-imidazol; y
- 2-(4-nitrofenil)-1H-fenantro[9,10-d]imidazol.
\newpage
\global\parskip0.930000\baselineskip
3. Composición según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 2, que comprende dos o más compuestos de
fórmula (I), seleccionados preferentemente del grupo definido en la
reivindicación 2 y sus mezclas.
4. Composición según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 3, que comprende
- (i)
- un compuesto de fórmula (I) seleccionado entre 2-(4-nitrofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol, 2-[4-(N,N-dimetilamino)fenil]-4,5-difenil-1H-imidazol, (E)-2-estiril-4,5-difenil-1H-imidazol, (E)-2-(4-nitroestiril)-4,5-difenil-1H-imidazol, 2,4,5-tris(4-nitrofenil)-1H-imidazol, 2-(4-nitrofenil)-1H-fenantro[9,10-d]imidazol, y sus mezclas; y
- (ii)
- un compuesto de fórmula general (I) seleccionado entre 2,4,5-trifenil-1H-imidazol, 2-(4-hidroxifenil)-4,5-difenil-1H-imidazol, 2-(4-metoxifenil)-4,5-difenil-1H-imidazol, 2-(3-nitrofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol, 2-(4-clorofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol, 2-(4-fluorofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol, y sus mezclas.
5. Composición según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 4, que comprende, además, un filtro solar
complementario.
6. Composición según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 5, en una forma de administración por vía
tópica.
7. Un compuesto de fórmula (I'')
donde
- R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4}, independientemente entre sí representan, H, OH, OR_{a}, NH_{2}, NHR_{a}, NR_{a}R_{b}, NO_{2} o halógeno; donde R_{a} y R_{b} independientemente entre sí representan alquilo C_{1}-C_{10}; y
- R^{5} y R^{6}, independientemente entre sí representan, H, o bien R^{5} y R^{6} juntos forman un enlace C-C entre los átomos de carbono a los que están unidos.
8. Compuesto según la reivindicación 7, donde
R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4}, independientemente entre sí
representan, H, OH, OMe NH_{2}, NHMe, NMe_{2}, NO_{2}, flúor o
cloro; preferentemente el compuesto es
(E)-2-estiril-4,5-difenil-1H-imidazol
o
(E)-2-(4-nitroestiril)-4,5-difenil-1H-imidazol.
9. Empleo de un compuesto de fórmula (I)
\newpage
\global\parskip1.000000\baselineskip
donde
- Y representa
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
- R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4}, independientemente entre sí representan, H, OH, OR_{a}, NH_{2}, NHR_{a}, NR_{a}R_{b}, NO_{2} o halógeno; donde R_{a} y R_{b} independientemente entre sí representan alquilo C_{1}-C_{10}; y
- R^{5} y R^{6}, independientemente entre sí representan, H, o bien R^{5} y R^{6} juntos forman un enlace C-C entre los átomos de carbono a los que están unidos,
en la elaboración de una composición
fotoprotectora.
10. Empleo según la reivindicación 9, en el que
dicho compuesto de fórmula (I) se selecciona del grupo formado
por:
- 2,4,5-trifenil-1H-imidazol;
- 2-(4-hidroxifenil)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2-(4-metoxifenil)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2-(3-nitrofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2-(4-nitrofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2-(4-clorofenil)-4,5 -difenil-1H-imidazol;
- 2-(4-fluorofenil)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2-[4-(N,N-dimetilamino)fenil]-4,5-difenil-1H-imidazol;
- (E)-2-estiril-4,5-difenil-1H-imidazol;
- (E)-2-(4-nitroestiril)-4,5-difenil-1H-imidazol;
- 2,4,5-tris(4-nitrofenil)-1H-imidazol; y
- 2-(4-nitrofenil)-1H-fenantro[9,10-d]imidazol.
11. Empleo según cualquiera de las
reivindicaciones 9 ó 10, de dicha composición fotoprotectora para
proteger la piel o el pelo de la radiación solar o de otra radiación
de origen natural o artificial.
12. Empleo según la reivindicación 11, de dicha
composición fotoprotectora para proteger la piel o el pelo de la
radiación ultravioleta de tipo A, B y/o visible cercana.
13. Empleo según cualquiera de las
reivindicaciones 11 ó 12, de dicha composición fotoprotectora para
prevenir o minimizar los efectos dañinos producidos por dicha
radiación sobre la piel o el pelo, donde dichos efectos dañinos se
seleccionan preferentemente entre eritema, quemaduras solares
profundas, envejecimiento prematuro de la piel inducido por el sol,
regulación del deterioro bioquímico causado por los radicales
libres, fotocarcinogénesis, melanoma y cáncer cutáneo no
melanoma.
14. Empleo según la reivindicación 13, de dicha
composición fotoprotectora para prevenir o minimizar los efectos
dañinos producidos por dicha radiación sobre la piel o el pelo en
sujetos en riesgo de disrupción hormonal.
15. Un método de tratamiento cosmético para
proteger la piel de la radiación solar u otra radiación de origen
natural o artificial o para prevenir o minimizar los efectos dañinos
producidos por la radiación solar u otra radiación de origen natural
o artificial sobre la piel o el pelo, que comprende aplicar sobre la
piel o el pelo una cantidad eficaz de una composición tal como la
definida en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.
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Ref document number: 2350993 Country of ref document: ES Kind code of ref document: B1 Effective date: 20111102 |
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