ES2347867T3 - Aislados fúngicos y composiciones de control biológico para el control de malezas. - Google Patents
Aislados fúngicos y composiciones de control biológico para el control de malezas. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2347867T3 ES2347867T3 ES02734935T ES02734935T ES2347867T3 ES 2347867 T3 ES2347867 T3 ES 2347867T3 ES 02734935 T ES02734935 T ES 02734935T ES 02734935 T ES02734935 T ES 02734935T ES 2347867 T3 ES2347867 T3 ES 2347867T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- phoma
- idac
- macrostoma
- biocontrol
- crop
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/82—Proteins from microorganisms
- Y10S530/823—Lower fungi, e.g. mold
Abstract
Un método para controlar una o más malezas de hoja ancha que comprende administrar micelios de Phoma cf macrostoma aislados decaído de Canadá, un extracto obtenido de micelios de Phoma cf macrostoma, o una combinación de los mismos, al suelo donde crecen dichas semillas, en donde dicho extracto se selecciona del grupo que consiste de inoculo de cebada muerta con calor, un extracto de cloroformo de dicho aislado de Phoma cf macrostoma, un extracto de etanol de dicho aislado de Phoma cf macrostoma, y extracto de etil acetato de dicho aislado de Phoma cf macrostoma.
Description
Aislados fúngicos y composiciones de control
biológico para el control de malezas.
La presente invención se relaciona con
bioherbicidas. Más específicamente, la presente invención se
relaciona con bioherbicidas y composiciones fúngicas que comprenden
bioherbicidas fúngicos.
El uso de pesticidas para matar insectos,
malezas y otras plagas de enfermedades es común en agricultura. Se
ha estimado que los agricultores canadienses gastan más de 750
millones en plaguicidas, y en Estados Unidos y Europa se estima que
probablemente sea varias veces mayor. En las planicies canadienses,
el 95% de la tierra sembrada con trigo, cebada, canola y lino se
trata con uno o más plaguicidas. Sin embargo, a pesar del uso
extensivo de plaguicidas, las malezas continúan originando pérdidas
estimadas en los cultivos de mil millones de dólares solo en Canadá
cada año.
Las malezas son dañinas para los cultivos
agrícolas porque ellas son capaces de competir con las plantas de
cultivo por espacio, sol y nutrientes. En particular, las malezas
problemáticas incluyen cardo del Canadá, (Cirsium arvence) y
otros miembros de la familia Asterasea tal como el "coquillo"
perenne (Sonchus arvence) y diente de león (Taraxacum
officinale).
El cardo de Canadá (Cirsium arvence [L.]
Scop) es una maleza perenne agresiva en los cultivos de campo,
pasturas y veredas de camino, y es particularmente prevaleciente en
el oeste de Canadá donde se presenta cerca del 50% de todos los
campos. El cardo del Canadá origina pérdidas en el rendimiento de
los cultivos de aproximadamente 15 a 60% de cereales, semillas
oleosas y cultivos de legumbre, dependiendo de la densidad de la
maleza. En cultivos de cereal, densidades de 6 a 20 plantas de
cardo amarillo del Canadá por metro cuadrado da como resultado
pérdidas del 18 al 30% en el rendimiento de granos. En 1937, el
cardo de Canadá fue designado como una maleza nociva por la ley de
Semillas Federal Canadiense.
Aunque las malezas de la familia Asterasa, por
ejemplo el cardo de Canadá y el diente de león, pueden reproducirse
mediante floración, ellas son difíciles de erradicar por su sistema
radicular intensivo. Las raíces son muy quebradizas y se fragmentan
fácilmente durante la labranza. Esto da como resultado una mayor
emergencia de retoños de los brotes estimulados. Además agregado a
las dificultades de control, los fragmentos de raíz llevan
suficientes reservas alimenticias para sobrevivir varios periodos
bajo condiciones adversas.
El control del cardo de Canadá en cultivos de
campo se logra habitualmente mediante siembra, en cultivos, y
control químico de post-cosecha en herbecidas,
aplicado a tasas suficientes para suprimir el crecimiento superior,
matar las raíces. Por ejemplo, el glifosato se utiliza como un
tratamiento de presiembra para matar el cardo del Canadá, o se
utiliza en cultivos sobre cultivos tolerantes a glifosato. El
Clopiralid se utiliza para control en cultivos para lograr el mismo
efecto pero tiene problemas de actividad no residual para algunos
cultivos en el siguiente año. Otras combinaciones de producto solo
suministran supresión del crecimiento superior tal como el
tifensulfurón y el tribenurón-metilo o fenoxi pro y
MCTA. Otras opciones de control incluyen el crecimiento de cultivos
competitivos y la siembra temprana para conseguir un crecimiento de
cultivo vigoroso antes de la emergencia del cardo de Canadá y el
cultivo superficial del suelo para reducir la fragmentación de la
raíz y no crecimiento de retoños. También, se puede utilizar el
podado para controlar las malezas a los lados de caminos, zanjas,
bahías y líneas de cerca. El control de parches en lugar de campos
completos se recomienda de nuevo para reducir los costos.
Existe un número de inconvenientes asociados con
el control no químico de cardo del Canadá además de aquellos
discutidos anteriormente. Primero, existen muy pocos cultivos que
puedan competir con las malezas tales como el cardo de Canadá y
muchos cultivos no se pueden sembrar lo suficientemente temprano
para suministrarle al cultivo una ventaja competitiva con el cardo
de Canadá. Además, los cultivos de semilla más temprano de lo usual
puede ser un inconveniente para los agricultores. También, la
siembra superficial del suelo y la poda de malezas para matar las
malezas o evitar la floración de malezas son solo soluciones
temporales y son a lo sumo efectivas marginalmente para controlar
las malezas tal como el cardo del Canadá.
Existen también varios inconvenientes asociados
con el uso de herbicidas químicos para controlar las malezas tal
como el cardo del Canadá. Los herbicidas son costosos y pueden ser
demasiado costosos para ser utilizados para algunos agricultores.
Además, si un agricultor utiliza menos de la dosis requerida de
herbicida para matar las malezas, existe un riesgo creciente de que
algunas malezas puedan desarrollar resistencia herbicidas. También
hay un riesgo creciente de resistencia herbicida al
sobre-uso de un herbicida. Además, los herbicidas
no están disponibles para todos los cultivos y todas las
situaciones. Por ejemplo, no existe un herbicida efectivo
disponible para cultivos tales como arvejas y lentejas mientras que
algunos de los herbicidas químicos en los cultivos solo suprimen el
crecimiento superior de las malezas sin controlar el crecimiento de
raíz, que es una estrategia a corto plazo utilizada a menudo para
cultivos tales como el trigo, cebada y la canola. La actividad
herbicida residual también puede limitar la rotación de cultivos
para algunos cultivos y algunas prácticas herbicidas agronómicas
pueden incrementar las densidades de las malezas. Existen algunas
preocupaciones acerca de la seguridad de herbicidas a corto y largo
plazo, tanto los consumidores como para el ambiente.
Los temas ambientales en la industria
agroalimenticia se han vuelto una prioridad con los gobiernos
federales y provinciales, incluyendo el desarrollo de alternativas
para los productos químicos del control de plagas, con la meta
final de reducir el uso de pesticidas químicos. El incremento en los
costos económico, social y ambiental asociados con temas agrícolas,
arrastres de pulverizado, residuos pesticidas, y la legislación
gubernamental para el uso reducido de plaguicidas, junto con el
desarrollo de la resistencia a los herbicidas de las malezas hace
de los agentes de control biológicos estrategias atractivas para el
control de malezas tanto para agrícola como doméstico.
Las malezas de hoja ancha en situaciones de
césped, tales como parques y canchas de golf, afectan la uniformidad
visual deseada (es decir son desagradables), crean problemas en el
mantenimiento del césped debido al aglomeramiento y a los hábitos
de crecimiento de las malezas, competir con el césped por luz,
nutrientes y agua. Las malezas también son irritantes para las
manos cuando se producen reacciones alérgicas a su polen o son
aplicados químicos para el control de malezas. Las malezas
importantes en los pasos de césped pertenecen a las compuestas
(tales como el diente de león, y la cerraja), las cariofiláceas,
(tales como la cerastio), y las rubiáceas, y Convolvuláceas.
Típicamente, el control de malezas en césped ha sido con herbicidas
selectivos, no selectivos, sistémicos, y de contacto aplicado en
varios momentos (pre-plantación,
pre-emergencia y post-emergencia).
La presión pública se está incrementando para evitar el uso de
herbicidas químicos en lugares públicos tales como parques y
céspedes en hogares, por ejemplo, algunas leyes han pasado
recientemente en Calgary, Alberta, y Halifax, Nueva Escocia, todas
en Canadá, contra su uso. Herbicidas químicos utilizados en estas
áreas conducen a una exposición química creciente a grupos
susceptibles en la población como niños, plagas y ancianos.
Un número de bacterias y hongos son patógenos
naturales de las malezas y se ha sugerido que bioherbicidas, o mata
malezas hechos de agentes biológicos en lugar de agentes químicos
puedan suministrar una alternativa a los plaguicidas químicos. Por
ejemplo, la Patente, No. 6,008, 159 describe controlar las malezas
anuales utilizando e hongo Pyrenophora. Las patentes US Nos.
5,993,802 y 5,472,690 enseñan suprimir el crecimiento de
Calmagrostis canadensis utilizando un aislado de un hongo
basidiomicete a baja temperatura o un mioherbicida (incluyendo al
menos uno o ambos de Fusarium nivalis y Colletotrichum
calamagrostidis), respectivamente. Las patentes estadounidenses
Nos. 5,952,264 y 5,635,444 enseñan controlar la hierba rastrera
utilizando el hongo Cochliobolus intermedius, o los hongos
seleccionados del genero Culvularia, respectivamente. La Patente
estadounidense No. 5,747,029 enseña a controlar malezas de vaina de
hoz con el hongo Myrothecium verrucaria. La Patente US No.
5,698,491 y WO 98/08389 describe controlar malezas de
"coquillo" con el hongo Dactylaria higginsii (WO
98/08389 y US 5,698,491). La Patente US No. 4,606,751 enseña a
controlar el pasto Johnson y malezas similares con esporas de
Bipolares sorghicola. Las esporas están suspendidas en una solución
de agua y tensoactivo y son roseadas en un campo en el cual está
creciendo la maleza. La Patente US No. 5,795,845 describe una
composición bioherbicida que comprende un portador de emulsión
invertido y un microorganismo que es una bacteria hongo débil o no
patógeno. La composición se puede utilizar para controlar maleza de
cerdo, cardo sin ciruelo hoja de terciopelo y cereza de tierra. La
patente US 4,636,386 describe un aislado de Alternaria para el
control de cardo italiano. La Patente US No. 5,994,27 describe una
composición que comprende un bioherbicida que es un aislado de
Sclerotina minor que produce marchitamiento foliar y pudrición en
especies de malezas de hoja ancha con el fin de inhibir su
crecimiento. Los bioherbicidas se pueden utilizar para controlar el
crecimiento de malezas de hoja ancha tales como el diente de león,
el plátano de hoja ancha, ambrosia, piedra, el cardo maleza de nudo
y el clavel blanco.
Brebaum y Boland (1999, Plant Disease 83: 2000)
describe Phoma exigua y Phoma herbarum como patógenos
del diente de león (Taraxacum officinale) sin embargo,
ninguna maleza para controlar la actividad se reportó utilizando
estas especies.
Ninguna de las referencias identificadas
describe aislados de hongo derivados de Phoma macrostoma como
composiciones de biocontrol adecuadas para el uso del control del
cardo del Canadá, el diente de león y otras especies de
malezas.
Subsiste la necesidad en la técnica de
bioherbicidas novedosos y composiciones de biocontrol para controlar
malezas. Además subsiste la necesidad en la técnica de
bioherbicidas novedosos y composiciones de biocontrol para
controlar plantas de malezas por ejemplo el cardo del Canadá, el
coquillo el diente de león, el girasol de la pradera, la
correhuela, alforfón, y la camomila sin aroma, los claveles, y la
cerastio. Además, subsiste la necesidad en la técnica de
composiciones de biocontrol que comprenden un agente de control
biológico y un medio de crecimiento para soportar la viabilidad del
agente de control biológico cuando la composición de biocontrol se
emplea para controlar male-
zas.
zas.
Es un objeto de la presente invención solucionar
las desventajas de la técnica anterior.
El anterior objeto se cumple mediante la
combinación de las características de las reivindicaciones
principales.
Las sub reivindicaciones describen además
modalidades ventajosas de la invención.
La presente invención se relaciona con
bioherbicidas. Más específicamente, la presente invención se
relaciona con bioherbicidas fúngicos y composiciones que comprenden
bioherbicidas fúngicos.
\global\parskip0.950000\baselineskip
De acuerdo con la presente invención se
suministra un método para controlar una más malezas de hoja ancha
que comprende administrar micelios de Phoma cf. macrostoma
aislados de cardos del Canadá, y el extracto obtenido de los
micelios de Phoma cf. macrostoma, o una combinación de los
mismos al suelo donde crecen dichas malezas, en donde dichos
extractos se seleccionan del grupo que consiste de inoculo de cebada
muerta con calor, un extracto de cloroformo de dicho aislado de
Phoma cf. macrostoma, un extracto de metanol de dicho
aislado de Phoma cf. macrostoma, y extracto de etil acetato
de dicho aislado de Phoma cf. macrostoma.
La presente invención también está dirigida al
método definido anteriormente en donde una o más malezas de hoja
ancha en unas especies de la familia seleccionada del grupo que
consiste de compuertas, Cariofilaceas, Convolvulaceas,
Plantaginaceas, y Rubiaceas. Preferiblemente, una o más malezas de
hoja ancha se seleccionan del grupo que consiste del cardo de
Canadá, coquillo perenne, diente de león, chamomile sin aroma,
claveles falsos, cerastio, alfardón silvestre, plátano, girasol de
la pradera, correhuela, clavel y mostaza.
La presente invención suministra un agente de
biocontrol que comprende micelios de uno o más de aislado de
Phoma cf. macrostoma, aislado de cardo del Canadá, o un
extracto obtenido de micelios de Phoma cf. macrostoma, o una
combinación de los mismos, en donde dicho extracto se selecciona del
grupo que consiste de inóculo de cebada muerta con calor, extracto
de cloroformo de dicho aislado de Phoma cf. macrostoma, un
extracto de metanol de dicho aislado de Phoma cf.
macrostoma, y un extracto de etil acetato de dicho aislado de
Phoma cf. macrostoma.
La presente invención también abarca una
composición de biocontrol, que comprende un agente de biocontrol ya
definido, y un medio para soportar la viabilidad de dicho uno o más
de un aislado de de Phoma cf. macrostoma. Más
preferiblemente, el uno más de uno de un aislado de de Phoma cf.
macrostoma, se selecciona del grupo que consiste de
- a)
- 85-24B (IDAC 230201-, depositado Febrero 23, 2001)
- b)
- 89-25A (IDAC 110401-1, depositado Abril 11, 2001)
- c)
- 94-26 (IDAC 230201-2, depositado Febrero 23, 2001)
- d)
- 94-44B (IDAC 230201-1-3, depositado Febrero 23, 2001)
- e)
- 94-134 (IDAC 230201-4, depositado Febrero 23, 2001)
- f)
- 94-359A (IDAC 110401-2, depositado Abril 11, 2001)
- g)
- 95-54A1 (IDAC 230201-5 depositado Febrero 23, 2001)
- h)
- 95-268B (IDAC 110401-3 depositado Abril 11, 2001)
- i)
- 97-12B (IDAC 230201-6 depositado Febrero 23, 2001)
- j)
- 97-15B2 (IDAC 110401-4, depositado Abril 11, 2001) y una combinación de los mismos.
\vskip1.000000\baselineskip
Se puede seleccionar un medio de un grupo que
consiste de Agar, pesta, granulado de turba, vermiculita, arcilla,
almidones, cardos de papa dextrosa, cardo de jugo V8®, granos de
cereal y granos de legumbre.
La presente invención también está relacionada
con un método para controlar malezas desarrolladas durante el
crecimiento de cultivo que comprende:
- a)
- agregar una cantidad efectiva de un agente de biocontrol de la invención a una composición de biocontrol de la invención al suelo para producir suelo tratado;
- b)
- plantar los cultivos en el suelo tratado;
- c)
- desarrollar el cultivo.
\vskip1.000000\baselineskip
De acuerdo con la presente invención también se
suministra un método para controlar el desarrollo de malezas
durante el crecimiento de cultivo que comprende:
- a)
- plantar el cultivo;
- b)
- agregar una cantidad efectiva de un agente de biocontrol de la invención a una composición de biocontrol de la invención al suelo donde se planta el cultivo;
- c)
- desarrollar el cultivo.
\global\parskip0.900000\baselineskip
La presente invención también está dirigida a un
método para controlar desarrollo de malezas durante el crecimiento
del cultivo que comprende:
- a)
- agregar una cantidad efectiva de un agente de biocontrol de la invención a una composición de biocontrol de la invención a las semillas de cultivo para producir semillas de cultivo tratadas;
- b)
- plantar una semilla de cultivo tratada;
- c)
- desarrollar el cultivo.
\vskip1.000000\baselineskip
También se incluyó en esta invención el método
como se definió en donde la semilla de cultivo tratada es semilla
de pasto, que incluye semilla de pasto doméstico especialmente
césped, pastura de animal o mezclas de semilla de heno que
comprenden uno o más de timoti, pasto azul, cizaña perenne, bromo,
pasto de canario, semillas de pasto de huerto.
La presente invención también suministra un
método para controlar desarrollo de malezas durante el crecimiento
de un cultivo establecido que comprende:
- a)
- agregar una cantidad efectiva de un agente de biocontrol de la invención o una composición de biocontrol de la invención al cultivo establecido;
- b)
- desarrollar el cultivo.
\vskip1.000000\baselineskip
También se incluye en esta invención el método
como se definió en donde el cultivo establecido es pasto, que
incluye pastos domésticos especialmente césped, pastura de animal o
mezclas de heno que comprenden uno o más de timoti, césped, pasto
azul, cizaña perenne, bromo, pasto de canario, pasto superior rojo y
de huerto.
Los métodos de la presente invención se utilizan
preferiblemente para controlar el desarrollo de malezas durante el
crecimiento de un cultivo perenne. Preferiblemente, el cultivo
perenne se selecciona del grupo que consiste de un césped, pasto
perenne y un cereal de invierno. El cultivo puede ser un pasto y la
semilla del cultivo puede ser semilla de pasto.
La presente invención también suministra un
método para controlar el desarrollo de malezas que comprende aplicar
un agente de biocontrol de la invención o una composición de
biocontrol de la invención al suelo en donde dicha maleza
crece.
El agente de biocontrol puede ser dicho uno o
más de un aislado de de Phoma cf. macrostoma, o un extracto
del mismo.
La presente invención también suministra
cualquiera de los métodos anteriores donde el agente de biocontrol
o la composición se aplica al suelo antes o después de la emergencia
de la maleza, preferiblemente antes de la emergencia.
La presente invención también suministra
cualquiera de los métodos anteriores en donde el agente de
biocontrol la composición se aplica como polvo, restregable,
esparcible, perforable, bandas, difusión, rociado, inyección
líquida, vertido o empapado del suelo.
La presente invención abarca una semilla de
cultivo recubierta, que comprende
- (i)
- micelios de uno o más aislados de de Phoma cf. macrostoma, aislados de cardo del Canadá o un extracto obtenido de micelios de de Phoma cf. macrostoma, y
- (ii)
- un ligador.
\vskip1.000000\baselineskip
En donde dicho extracto se selecciona del grupo
que consiste de un inóculo de cebada muerto con calor, un extracto
de cloroformo de dicho aislado de de Phoma cf. macrostoma, un
extracto de metanol de dicho aislado de de Phoma cf.
macrostoma, y un extracto de etil acetato de dicho aislado de de
Phoma cf. macrostoma.
La semilla del cultivo que está recubierta es
preferiblemente semilla de pasto que incluye, semilla de pasto
doméstico especialmente césped, pastura de animal, y mezclas de
semilla de heno que comprenden uno o más de timoti, fresco, azul,
pasto azul, cizaña perenne, bromo, pasto de canario, semilla de
pasto superior rojo y de huerto.
La invención también suministra un método para
controlar el desarrollo de maleza que comprende aplicar un agente
de biocontrol de la invención a dicha maleza. La etapa de aplicar
puede comprender empolvado, restregado, esparcido, difundido,
rociado o vertido.
Este resumen no necesariamente describe todas
las características necesarias de la invención sino que la invención
también puede recibir en una sub-combinación de las
características descritas.
Estas y otras características de la invención
serán más evidentes de la siguiente descripción en las cuales se
hace referencia a los dibujos finales en donde:
\global\parskip1.000000\baselineskip
Figura 1 muestra el efecto de diferentes
cantidades de suspensión de inóculo 85-24B sobre
plantas de cardo del Canadá. La escala de calificación es 1 =
saludable, follaje verde oscuro saludable; 2 = follaje ligeramente
amarillo-verde; 3 = hojas principalmente amarillas,
algunas amarillas-verde, 4 = hojas principalmente
blancas, unas pocas amarillo-verde; 5 = plantas
completamente blancas; y 6 = muerte de plantas.
Figura 2. Muestra el efecto de los aislados
fúngicos 94-44B, 94-26,
95-54A1 y 97-12B sobre la proporción
de crecimiento de raíz del coquillo perenne.
Figura 3 muestra el efecto de aislados fúngicos
94-44B de biomasa foliar de coquillo perenne.
Figura 4 muestra el efecto del aislado fúngico
94-44B sobre la emergencia de coquillo perenne.
La Figura 5 muestra una representación gráfica
de la mortalidad de malezas luego de la aplicación del aislado
fúngico 94-44B, 89-25A y
97-12B a coquillo perenne.
La presente invención se relaciona con
bioherbicidas. Más específicamente, la presente invención se
relaciona con bioherbicidas fúngicos y composiciones que comprenden
bioherbicidas fúngicos.
La siguiente descripción es de una realización
preferida por vía de ejemplo solamente y sin limitación a la
combinación de características necesarias para llevar a cabo la
invención a la práctica.
Por el término "controlar crecimiento de
maleza" o "actividad de control de malezas" se quiere decir
que uno o más aislados fúngicos, un extracto de los mismos, un
cardo inoculado de los mismos o una combinación de los mismos,
cuando se aplica en o cerca a las malezas interfiere con el
crecimiento normal o el desarrollo de una maleza. Ejemplos de
actividad de control de el crecimiento de malezas incluye pero no
está limitado a, inhibición del crecimiento de raíz, inhibición del
crecimiento de brotes, inhibición de emergencia de brotes,
reducción de inhibición de biomasa de malezas o producción de
semillas, una capacidad de inducir clorosis, o reducir la
competitividad de una maleza para agua, nutrientes, una combinación
de los mismos, que de otra manera se utilizaría mediante una planta
de cultivo. Alternativamente, el aislado de fúngico puede ser capaz
de controlar las semillas al matarlas. Se prefiere que el aislado
fúngico controle selectivamente el crecimiento de maleza, y no
tenga ningún efecto sustancial sobre la planta para la cual se desea
el crecimiento, por ejemplo una planta no objetivo tal como una
planta agrícolamente importante, o pasto residencial comercial.
Los aislados fúngicos que controlan el
crecimiento de de las malezas o exhiben actividad de de control de
malezas se pueden caracterizar por tener un índice de control de
maleza (WCI) de entre aproximadamente 20% a 100% (entre mayor el
WCI, más eficaz el aislado fúngico). El WCI incluye un WCI anual
(WCIA) o un WCI perenne (WCIP) como se define adelante.
Preferiblemente, los aislados fúngicos se
caracterizan por tener un WCI de entre aproximadamente 50% a 100%.
Más preferiblemente, los aislados fúngicos tienen un WCI de entre
aproximadamente 70% a 100%. Sin embargo, se debe entender que el
aislado fúngico con un WCI bajo puede aún probar ser efectivo para
llevar el control del crecimiento de malezas y suministrarle a una
planta no blanco una ventaja competitiva sobre una o más malezas.
Adicionalmente, puede ser deseable utilizar uno o más aislados
fúngicos que exhiban un WCI bajo con el fin de asegurar que la
planta no blanco no se afecta por el bioherbicida.
El índice del control de maleza se determina
utilizando la WCIA para evaluación de las malezas anuales, la WCIP
para evaluación de los manejos perennes, como sigue.
WCIA=
{[(100-ffw) + (% M) + (%IOC)]/300} X
100%
WCIP={[(100-RW) +
(100-FFW) + (%M) + (%IOC)])/400} x
100%
donde
RW - es el peso de la raíz
FFW - es el peso fresco foliado
M - es mortalidad;
IOC - es la incidencia de la clorosis,
determinada mediante el número de plantas con una calificación de
3-6, donde, 1= follaje verde oscuro saludable; 2=
follaje ligeramente amarillo-verde; 3= hojas
principalmente amarillas, algunas amarillo-verdes;
4= hojas principalmente blancas, o un poco
amarillo-verde; 5=plantas completamente blancas; y
6 = plantas muertas.
Por "el lado fúngico" se quiere decir un
Phoma cf. macrostoma biológicamente activo o un fragmento
biológicamente activo, componente, obtenido o aislado del Phoma
cf. macrostoma, por fragmento o componente de un aislado
fúngico, se quiere decir un fragmento de el micelio o una o más
esporas, picnidia, conidia, clamidosporas o una combinación de las
mismas, obtenidas de los hongos. Los aislados fúngicos se pueden
obtener de lesiones cloróticas y necróticas pequeñas sobre las
hojas y los tejidos de tallos de una maleza deseada, por ejemplo
pero no limitada a cardo del Canadá y ensayado para cantidad de
control de crecimiento de maleza, como se describió aquí o
utilizando métodos estándar como lo sabría un experto en la técnica.
Ejemplos de aislados de Phoma cf. macrostoma, que se puede
utilizar de acuerdo con la presente invención, y que no van a ser
considerados como limitantes de alguna manera, incluyen:
- \bullet
- 85-24B (IDAC 230201-1, depositado Febrero 23, 2001),
- \bullet
- 89-25A (IDAC 230201-1, depositado Febrero 23, 2001),
- \bullet
- 94-26 (IDAC 230201-2, depositado Febrero 23, 2001),
- \bullet
- 94-44B (IDAC 230201-3, depositado Febrero 23, 2001),
- \bullet
- 94-134 (IDAC 230201-4, depositado Febrero 23, 2001),
- \bullet
- 94-359A (IDAC 110401-2, depositado Abril 11, 2001),
- \bullet
- 95-54A1 (IDAC 230201-5, depositado Febrero 23, 2001),
- \bullet
- 95-268B (IDAC 110401-3, depositado Abril 11, 2001),
- \bullet
- 97-12B (IDAC 230201-6, depositado Febrero 23, 2001),
- \bullet
- 97-15B2 (IDAC 110401-4, depositado Abril 11, 2001),
o combinaciones de estos.
\vskip1.000000\baselineskip
Por "extracto", se quiere decir un extracto
acuoso o disolvente, crudo un estado más purificado, que comprende
uno más compuestos activos obtenidos de un aislado fúngico, que en
la proximidad de, o cuando se aplica sobre, una maleza es capaz de
controlar el crecimiento de la maleza.
Por un "cardo inoculado", se quiere decir
el cardo obtenido de un cultivo de uno más de un aislados de Phoma,
(ver Ejemplo 5) como se definió aquí, que comprende uno más
compuestos activos capaces de controlar el crecimiento de malezas.
Un cardo inoculado se puede concentrar utilizando los métodos
conocidos en la técnica, por ejemplo, pero no limitados a
evaporación, roto-evaporación o secado por
congelamiento.
Por "saturación" se quiere decir una
capacidad de retención máxima de un suelo, y se define como
ocurriendo cuando los poros del suelo en la parte superior del
suelo se llenan con agua. Por "capacidad de campo" o
"capacidad de humedad de campo", se quiere decir el porcentaje
de agua que permanece en un suelo dos o tres días después de haber
sido saturado y después de que ha cesado el drenaje
esencialmente.
Por "punto de marchitamiento permanente" se
quiere decir la humedad crítica del suelo en las cuales las plantas
se marchitan y no recuperan la turbidez cuando se colocan en la
oscuridad y en una atmósfera húmeda.
En una modalidad preferida, el aislado fúngico
se formula en una composición de biocontrol que comprende uno o más
aislados fúngicos, uno o más extractos obtenidos de un aislado
fúngico, a una combinación de los mismos, y una composición de
biocontrol se agrega al suelo, agregada a compost, agregada a
glóbulos tipo turba, agregadas o utilizadas a recubrir un medio de
plantación, por ejemplo pero no limitado a pedazos de madera,
utilizados para recubrir o tratar semillas de planta en la
presencia de un ligador; pero no limitado a metil celulosa,
almidón, arcilla, azúcar o combinación de los mismos, o aplicada a
una planta, por ejemplo pero no limitada a, rociado o restregado
sobre una planta, para control de malezas.
Adicionalmente, la inyección líquida se puede
utilizar para aplicar uno más aislados, por ejemplo, esporas o
micelios, extractos obtenidos de aislados fúngicos, o combinación de
los mismos, al suelo. La inyección líquida se puede utilizar para
aplicaciones perennes, por ejemplo pero no limitadas al manejo de
paso de césped.
\newpage
Por el término "composición de biocontrol",
se quiere decir una composición que comprende uno o más de un
agente de biocontrol de la presente invención dentro de un agente de
biocontrol A con medio adecuado consiste de uno o más aislados
fúngicos como se definió anteriormente, un extracto de los mismos, a
una combinación de ellos. Por ejemplo, si la composición de
biocontrol comprende un aislado fúngico, entonces el medio adecuado
puede comprender un medio de crecimiento para mantener la viabilidad
del aislado fúngico antes, y después de la aplicación de la
composición de biocontrol al suelo. Si un extracto de un estado
fúngico, uno o más aislados fúngicos, o una combinación de los
mismos se utilizan para - administración a una maleza o al suelo,
entonces el medio adecuado puede comprender agentes estabilizantes,
tensoactivos, y similares como sería conocido por u experto en la
técnica. Por ejemplo, lo que no se debe considerar limitante de
ninguna manera, el medio puede incluir Agar suplementado, pesta,
granulado de turba, vermiculita, arcilla, almidones, cardo de
dextros de papa (PDB), cardo de jugo V8®, grano completo,
fragmentos de grano de, por ejemplo pero no limitados a, granos de
legumbre que incluyen lentejas o arvejas, o granos de cereal por
ejemplo, trigo o cebada, o maíz o cualquier combinación o variante
de las mismas, siempre y cuando el medio le permita al aislado
fúngico permanecer viable.
La pesta es un término para un producto granular
hecho de una harina de grano de cereal y un agente de biocontrol.
El proceso encapsula los agentes de biocontrol en los productos
similares a pasta denominados pesta (Connick et al., 1991).
Las bacterias formuladas en tal medio pueden exhibir vida de estante
de campo extendidas (e. g Connick et al., 1998). Estas
características se desean en un producto que se pueda almacenar
antes de uso o embarcar largas distancias antes de ser utilizado
para control de semillas en un campo. Por lo tanto, las
composiciones de biocontrol que comprende aislados fúngicos de la
presente invención se pueden formular en un medio adecuado por
ejemplo, pero limitados a, pesta.
Si el medio adecuado es un medio de crecimiento,
entonces el medio de crecimiento puede comprender cualquier medio
líquido, semilíquido o sólido, que permiten que los aislados
fúngicos de la presente invención crezcan o permanezcan viables.
Cualquier medio de crecimiento conocido en la técnica que sea capaz
de soportar el aislado fúngico se puede emplear. Ejemplos de medio
de crecimiento adecuado, que no debe estar considerado limitantes,
de ninguna manera incluyen Agar de dextrosa de papa, cardo de
dextrosa de papa, cardo de jugo de V8®, y similares.
Preferiblemente, el medio de crecimiento es un medio sólido, por
ejemplo pero no limitado a grano por ejemplo un grano completo o
fermento de los mismos, por ejemplo pero no limitados a, granos de
legumbre que incluyen lenteja o arveja, o granos de cereal por
ejemplo trigo o cebada, o maíz (ver Ejemplo 3). El medio de
crecimiento debe también permitir que una cantidad efectiva del
aislado fúngico permanezca viable después de ser aplicado al suelo
de un cultivo para o durante un periodo de tiempo adecuado, por
ejemplo pero no limitado a, hasta aproximadamente 7 días a
aproximadamente 18 meses después de la aplicación. Preferiblemente,
el aislado permanece viable desde aproximadamente 14 días a
aproximadamente 12 meses, y más preferiblemente desde
aproximadamente 14 días a aproximadamente 90 días. Para la
aplicación al suelo, las esporas, micelios (creciendo sobre
granos), o esporas o micelios que crecen sobre grano se puede
mezclar y aplicar sobre, o mezcladas con, el suelo.
Adicionalmente, la inyección de líquido se puede
utilizar para aplicar uno o más aislados, por ejemplo, las esporas
o los micelios, los extractos obtenidos, de los aislados fúngicos,
son la combinación de los mismos al suelo. Las tasas de aplicación
típicas para un estado fúngico que creció sobre el medio de
crecimiento preferido incluyen, pero no están limitados a, 0,001
kg/m^{2} a 5 kg/m^{2} utilizando un tamaño de partícula entre
49-840 micrómetros y una viabilidad de partícula de
60-100%. La tasa preferida de aplicación es de 0,1
kg/m^{2}, a 1,0 kg/m^{2}. Sin embargo, se puede utilizar
cualquier tasa de aplicación que dé como resultado actividad de
control de malezas.
Cuando uno o más aislados fúngicos se aplican
utilizando un medio sólido, por ejemplo cebada sin cáscara, el
grano de cebada infestado preparado como se describió en el Ejemplo
3 se puede moler antes de la aplicación al suelo. Cualquier tamaño
de gránulo adecuado se puede utilizar, por ejemplo, desde
aproximadamente 50 micras a aproximadamente 1 mm. La viabilidad
preferida de las partículas utilizadas para la aplicación es de
aproximadamente 60-100%. Como se muestra en la
Tabla 20, (Ejemplo 3), con un tamaño de gránulo más pequeño, un
logro de una tasa de dosis de aplicación inferior (g/m^{2})
logrará una actividad de control de malezas similares o mejor.
También se contempla por medio de la presente
invención que más de un aislado fúngico se puede utilizar para
controlar las malezas. De manera similar, una composición de
biocontrol puede comprender más de un aislado fúngico. Los aislados
fúngicos múltiples capaces de controlar una maleza específica se
pueden utilizar o aislados fúngicos múltiples, cada uno de los
cuales es capaz de controlar un tipo distinto de maleza se puede
mezclar y utilizar como se describe aquí. También se prefiere que
el aislado fúngico o la composición de biocontrol exhiban una
selectividad de huésped, en esa actividad de control de maleza se
observa en una o más maleza blanca, aunque no se observa ninguna
actividad de control de maleza en las plantas no blanco. Ejemplos de
plantas no blanco incluyen plantas agrícolas con importantes, y
pastos domésticos y comerciales (gramíneas).
Por maleza, se quiere decir cualquier planta
indeseable. Preferiblemente, una maleza es una maleza de hoja ancha
(dicotiledónea), por ejemplo pero no limitada a miembros de las
compuestas, Cariofiláceas, Poligonáceas, Convolvuláceas,
Plantagináceas y Rubiáceas. Más preferiblemente, una maleza se
selecciona del grupo que consiste de:
Compositae (familia compuesta): incluye
[Tarazacum officinale L]
Oxeye daisy [Chrysanthemum
leucanthemum]burdocks por ejemplo common burdock [Arctium
minus],
goat'sbeards [e.g Tragopogon dubius], cockleburs [e.g Xanthium strumarium] ragweeds por ejemplo common
ragwwed [Ambrosia artemisiifolia] o giant ragweed [Ambrosia trifolia] Zanilla inodora [Matricaria perforata Merat.], sow-thistles, por ejemplo perennial coquillo [Sonchus arvensis L], y thistles por ejemplo Canada thistle [Cirsium arvence L. (Scop.)];
goat'sbeards [e.g Tragopogon dubius], cockleburs [e.g Xanthium strumarium] ragweeds por ejemplo common
ragwwed [Ambrosia artemisiifolia] o giant ragweed [Ambrosia trifolia] Zanilla inodora [Matricaria perforata Merat.], sow-thistles, por ejemplo perennial coquillo [Sonchus arvensis L], y thistles por ejemplo Canada thistle [Cirsium arvence L. (Scop.)];
Cariofiláceae (Familia de la Rosada): incluyendo
cerastio [Stellariamedia (L) Vill];
Poligonáceae (Familia de trigo sarraceno):
incluye trigo sarraceno silvestre [Polygonum convolvulus
(L). Vill];
Convolvuláceae (Familia de la Gloria de la
Mañana): incluyendo maleza ligada de campo [Convolvulus
arvensis L];
Plantagináceae (Familia del Plátano): incluyendo
plátano [Plantago lanceolata]; o
Rubiáceae (Familia del Rubus): incluyendo
claveles falsos [Gallium spurium].
\vskip1.000000\baselineskip
Preferiblemente los aislados fúngicos, las
composiciones de biocontrol, o ambos, de la presente invención se
agregan al suelo donde la semilla crece o puede crecer. El suelo se
puede mezclar de tal manera que uno o más aislados fúngicos están
en proximidad cercana al sistema de maleza o a los fragmentos de
raíz de las malezas. También es preferible que los aislados
fúngicos estén en proximidad cercana a las semillas de maleza
cuando tales semillas están presentes. Los aislados fúngicos y las
composiciones de biocontrol de la presente invención se pueden
aplicar al suelo o a la maleza o a cualquier método conocido e la
técnica como tal, pero no limitadas a empolvado, restregado,
esparcido, perforado puesta de pandas, difusión (con o sin
incorporación), rociado, inyección de líquido, vertimiento o
empapado del suelo. Los aislados fúngicos y las composiciones de
biocontrol también se pueden aplicar en cualquier momento adecuado,
por ejemplo pero no limitado a, durante o después la labranza del
suelo. Preferiblemente, la composición de biocontrol se aplica
durante la primavera, o a comienzos del verano. La preparación
sólida del aislado fúngico solo o la composición de biocontrol por
ejemplo pero no limitada a un grano de cebada infestado, se agrega
al suelo en una cantidad de aproximadamente 0,1 kg/m^{2} a
aproximadamente 5 kg/m^{2}. Las suspensiones de líquido de
aproximadamente 10^{3} a aproximadamente 10^{9} cfu/mL se puede
aplicar a una tasa de aproximadamente 1 L/m^{2} a aproximadamente
5 L/m^{2}. Sin embargo, se puede aplicar cualquier cantidad que
resulte en actividad de control de maleza.
También dentro del alcance de la presente
invención, esos extractos obtenidos de uno más aislados fúngicos
se pueden formular y aplicar al suelo o la maleza como un líquido,
por ejemplo como un rociado, inyección, empapado, restregado,
empolvado, o como un sólido, incluyendo gránulos de cebada infestada
en autoclave empolvado o restregado de extractos adecuadamente
formulados. Como un experto lo podrá determinar, las dosis
apropiadas dependerán de la concentración de los componentes
activos dentro del extracto o sólido. Preferiblemente, el extracto
se deriva de un cardo crudo de cuatro semanas concentrado
aproximadamente 100X en volumen original, o de un extracto obtenido
de una proporción 3:1 del micelio extraído a metanol. Un ejemplo,
que no se debe considerar limitante, de una tasa de aplicación de
tales extractos es de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 2.5
L/m^{2} dependiendo de la concentración de los ingredientes
activos. Sin embargo, cualquier cantidad que resulte en la
actividad de control de maleza se puede aplicar.
Un agente de biocontrol, o una composición de
biocontrol, de la presente invención se puede agregar a un medio de
plantación, por ejemplo compost, o se puede agregar o ser utilizado
para recubrir un medio de plantación alternativo; por ejemplo pero
no limitado a pedazos de madera, cubiertas de paisaje, vermiculita y
similares, como será evidente para un experto en la técnica.
Adicionalmente, el agente de biocontrol o la composición de
biocontrol como se describió aquí se puede utilizar para recubrir o
tratar semillas de plantas. La semilla de planta puede involucrar
el uso de un ligador, por ejemplo pero no limitado a metilcelulosa,
almidón, arcilla, azúcar, o combinación de los mismos.
Por lo tanto, de acuerdo con la presente
invención, se suministra un método para controlar un rango de
malezas con un bioherbicida que comprende uno o más aislados
fúngicos, un agente de biocontrol, o una composición de biocontrol
de la invención.
Los aislados fúngicos, o combinaciones de los
mismos, que se pueden emplear para controlar el crecimiento de
malezas incluyen pero no están limitados a aquellos listados en la
Tabla 1 de adelante.
Con relación ahora a la Tabla 2 (y ver Ejemplo 2
para protocolos asociados) se muestra, como un ejemplo, actividad
de control de maleza, como se indica mediante reducción de un peso
fresco foliar, reducción en el peso de la raíz, clorosis, o
mortalidad, en el cardo del Canadá por un rango de aislados
fúngicos.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
\vskip1.000000\baselineskip
De la Tabla 2, se puede notar que varias cepas
fúngicas, por ejemplo pero no limitadas a 85-24B,
94-26, 94-44B,
94-134, 95-54A1,
97-12B, 95-268B y
97-15B2 son capaces de reducir el peso fresco foliar
en cardo del Canadá desde aproximadamente 40% a aproximadamente
92%, y suprimir el peso de raíz en aproximadamente 47% a
aproximadamente 85% comparado con el control inoculado. Estos
aislados fúngicos se caracterizan por tener un WCIP de
aproximadamente 47 a 88% y ellos son efectivos para controlar el
crecimiento de malezas que está soportado por la observación de que
hasta aproximadamente 80% de las plantas se mueven por el
tratamiento. Los aislados fúngicos 82-25A y
94-359A también son efectivos al suprimir e peso
fresco foliar. El peso de la raíz, y exhibir un WCIP de
aproximadamente 30-32%.
Por lo tanto, la presente invención se dirige a
un bioherbicida que comprende aislados fúngicos
85-24B, 94-26,
94-44B, 94-134,
95-54A1, 97-12B,
89-25A, 94-359A,
95-268B y 97-15B2, o una
combinación de los mismos para el control de cardo del Canadá.
Con relación ahora a la Figura 1, se muestra el
efecto de una suspensión de inóculo que comprende el aislado
fúngico 85-24B sobre el cardo del Canadá. La Figura
demuestra que el daño del cardo del Canadá fue mayor a niveles de
inóculos mayores. Una dosis en el rango de aproximadamente 5 g/0.01
m^{2} a aproximadamente 50 g/0.01 m^{2} o mayor es capaz de
controlar el cardo del Canadá. También se observan resultados
similares al aplicar gránulos de grano de cebada infestado a
suelo.
Sin querer estar ligado por la teoría, los
aislados fúngicos como se describen aquí pueden tener la capacidad
de debilitar el cardo del Canadá, o un rango de otras malezas
perennes o anuales, como se describe adelante, al afectar los
procesos involucrados en el crecimiento de la planta y en el
desarrollo, por ejemplo la fotosíntesis, la acumulación de
productos de almacenamiento en las raíces, reducir la emergencia de
brotes, reducir el crecimiento de la raíz, inducir síntomas de
clorosis (amarillamiento de las hojas de la planta).
La caracterización de la actividad del control
de maleza de varios aislados fúngicos de la presente invención
indica que la actividad de control de la maleza de un aislado
fúngico puede durar aproximadamente una estación de crecimiento,
dependiendo del tiempo de aplicación del aislado fúngico al suelo o
planta. Con referencia a la Tabla 18 (Ejemplo 3), se muestra que la
aplicación en primavera o verano del aislado fúngico exhibe
actividad de control de maleza sobre una o más de las estaciones de
crecimiento. La aplicación de otoño da como resultado una actividad
de control de maleza no observada. Adicionalmente, como se muestra
en la Tabla 19 (Ejemplo 3), la actividad del control de la maleza
incrementa con el mayor contenido de humedad del suelo.
Un número de aislados fúngicos también fueron
probados para determinar su eficacia al controlar las malezas
diferentes del cardo de Canadá, por ejemplo: miembros de la familia
Asterasia incluyendo Sonchus arvense (cardosiembra
perenne) Helianthus (girasol de la pradera), Taraxacum
officinale (diente de león) Matricaria perforata
(Zanilla inodora), y otras plantas, incluyendo males de
pollo (Stellaria media), avenas silvestres, cola de zorro
verde y claveles falsos (Gallium Spurium).
Los aislados fúngicos 85-24B,
89-25A, 94-26,
94-359A, 94-44B,
94-134, 95-54A1,
95-268B, 97-15B2, y
97-15B2, 94-44B,
89-25A, 94-26,
95-54A1 y 97-12B, se aplicaron a
cardo de siembra perenne utilizando el bio-ensayo
de esterilla de inóculo descrito en el Ejemplo 2. Como se muestra en
la Figura 2, los aislados fúngicos 94-44B,
94-26, 95-54A1, y
97-12B redujeron el peso de las raíces comparadas
con el control inoculado en ensayos de invernadero. Una reducción
similar en el peso de la raíz también se observó con la mayoría de
los otros aislados fúngicos como se indicó en la Tabla 8 de Ejemplo
2. Además, el aislado fúngico 94-44B reduce
significativamente la biomasa foliar (Figura 3) y redujo la
emergencia de retoños (Figura 4) con relación al control. Tres
aislados (94-44B, 89-25A, Y
97-12B) incrementaron la mortalidad de las malezas
como se muestra en la Figura 5 y la Tabla 8.
Por lo tanto, los aislados fúngicos
94-44B, 89-25A,
94-26, 95-54A1, Y
97-12B se pueden utilizar para controlar el cardo
siembra perenne (Sonchus arvensis). En una realización
preferida, en el lado fúngico, o la composición de biocontrol que
comprende el 94-44B, se utiliza para controlar cardo
siembra perenne.
Se han observado resultados similares del efecto
de estos aislados fúngicos sobre otras malezas, tanto malezas
perennes como anuales, como se demostró al determinar el WCI para un
rango de especies de malezas, por ejemplo como se muestra en la
Tabla 3 (también ver Ejemplo 2).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Por lo tanto, la presente invención también está
dirigida a un bioherbicida que comprende aislados fúngicos
85-24B, 94-26,
94-44B, 94-134,
95-54A1, 97-12B,
89-25A, 94-359A,
95-268B, 97-15B2, o una combinación
de los mismos, para el control de cualquier maleza susceptible,
tanto anual como perenne. Preferiblemente la maleza es una maleza
de hoja ancha. Más preferiblemente, la maleza de hoja ancha es de
Compositae, Caryophyllaceae, Polygonaceae, Plantaginaceae,
Rubiaceae, o Convolvuláceae, por ejemplo pero no limitadas a,
chamomile sin aroma, claveles falsos, cerastio, alforfón silvestre,
maleza ligada de campo, cardo siembra perenne, diente de león y
cardo del
Canadá.
Canadá.
Utilizando el bio-ensayo de
esterilla de inóculo (método subrayado en el Ejemplo 2), se probaron
un número de aislados fúngicos por su capacidad de controlar las
malezas de girasol (Hellianthus). La germinación de semillas se
afectó por los aislados fúngicos 85-24B, que
redujeron la germinación de semillas de girasol en aproximadamente
10%. Cinco aislados fúngicos (85-24B,
94-44B, 89-25S,
95-54A1, 97-15B2) redujeron la
biomasa foliar en el girasol de la pradera (ver también Tabla 10
(B), Ejemplo 2). Así, los aislados fúngicos 85-24B,
94-44B, 89-25A,
95-54A1, 97-15B2) se pueden utilizar
para controlar el girasol de pradera.
También se observó que estos aislados fúngicos y
las composiciones de biocontrol que comprenden los aislados
fúngicos de la presente invención son específicas para un grupo
objetivo de plantas y malezas, por ejemplo, aquellas de las familia
Asterásea, (compositae). En general, los aislados fúngicos de la
presente invención no fueron efectivos para controlar el
crecimiento de pastos, por ejemplo, avena silvestre, y cola de zorro
verde (ver Tabla 12 y 13, respectivamente). Sin embargo, el
94-44B exhibe actividad de control de maleza en
avena silvestre, y 85-24B y 95-39A
exhibe actividad de control de maleza en cola de zorro verde (ver
Tabla 17, Ejemplo 2 para resumen del WCI).
Los aislados fúngicos de la presente invención
también exhiben selectividad por que, aún bajo cargas de inóculo
alta (significativamente mayores que aquellas utilizadas bajo
condiciones de campo), los aislados se pueden identificar por que
inducen síntomas despreciables o ningún síntoma de enfermedad en
plantas de cultivo (ver Tablas 22 y 23, Ejemplo 4). Ejemplo de
plantas de cultivo probadas incluyen:
- 1)
- Cereal y otros monocotiledones
- Trigo - cvs. Katepwa, AC Domain, AC Karma, Biggar, Kile
- Cebada - cvs. Harringto, Silky
- Avena - cvs, Derby o Walden
- Mijo - cvs, Minco o Prairie Gold
- Semilla de Canary - cv. Keet
- 2)
- Cultivos con semilla de aceite
- Canola cvs. Ac Excel, AC Parkland
- Mostaza - cvs. Cutlas, Ochre
- Lino - cv. Vimy
- Girasol - cvs. Cargill SF270 o IS7111
- Azafrán - CV. Lethbridge
- 3)
- Cultivos de legumbre
- Lenteja - cvs. Laird, Eston
- Arveja de campo - c.v Express
- Arveja de pollo - cv. Sanford
- Frijol Faba - cv. CDC Fatima
- 4)
- Cultivos de Forraje
- Trébol - trébol amarillo cv. Norgold, trébol blanco cvs. Polara y Sonja, trébol común,
- Trébol rojo cvs. Altaswede o Florex
- Trihoja pie de pájaro - cv. Cree
- Alfalfa - cv. Beaver.
\vskip1.000000\baselineskip
Por ejemplo, lo que no debe considerarse
limitante de ninguna manera el 94-44B es adecuado
para uso con cultivos de cereal, y aún bajo cargas de inoculo altas
sin que se observe síntomas de enfermedad. Sin embargo, el uso de
94-44B bajo cargas de inóculo altas pueden no ser
deseadas para uso sobre cultivos de pulso, como en la medida en que
los cultivos de pulso exhiban algunos síntomas de enfermedad bajo
estas condiciones. Si las cargas de inóculo inferiores de
94-44B se utilizan, entonces los síntomas de la
enfermedad en legumbres se minimizan y este aislado se puede
utilizar con cultivos de legumbres. En cargas de inóculo reducidas,
estos aislados exhiben aún actividad de control de maleza. Un
experto en la técnica puede manipular las dosis para optimizar el
balance entre obtener actividad de control de maleza y evitar los
síntomas de enfermedad en un cultivo no blanco planta agrícola o
comercialmente importante.
También se contempla por medio de la presente
invención el uso de un cardo inoculado, o un extracto de uno o más
aislados fúngicos de la presente invención como un agente de control
de maleza. Como se describió en el Ejemplo 5, el cardo inoculado
(que incluye un cardo inoculado concentrado), extractos acuosos o
disolvente, obtenidos de uno más aislados fúngicos como se
describió aquí y reconstituidos en un medio apropiado, por ejemplo,
pero no limitados a agua o metanol, se pueden aplicar al suelo o la
hoja de una planta y exhibir actividad de control de maleza.
También se contempla que un cardo inoculado, o un extracto de la
presente invención se pueda combinar con un herbicida químico o un
aislado fúngico, incluyendo aislados no Phoma como un agente de
control de maleza.
También se contempla por medio de la presente
invención un método que utiliza uno o más de un aisladote Phoma
macrostoma unos extractos de los mismos, o combinaciones de
ellos para controlar el desarrollo de malezas durante el
crecimiento de un cultivo establecido, por ejemplo, como se alistó
anteriormente e incluyendo pero no estando limitado a pasto, tal
como pero no limitado a pastos especialmente de césped, pasturas de
animales o mezclas de heno que comprenden uno o más de timoti,
festuja, paso azul, cizaña perenne, bromo, pasto canario, pasto
superior rojo y de huerto, como se ilustró, por ejemplo, en la Tabla
18A (Ejemplo 3).
Se describe aquí un método que utiliza uno o más
de un aislado de Phoma cf macrostoma como un extracto del
mismo, un cardo inoculado de éste o una combinación del mismo para
mejorar el crecimiento (por ejemplo incrementar la biomasa) de un
cultivo que se está estableciendo o establecido, por ejemplo, como
se listó anteriormente, y que incluye, pero no está limitado a un
pasto, tal como, pero no limitado a pastos domésticos y
especialmente de césped, pastura de animal o mezcla de heno que
comprende uno o más de timote, festuja, pasto azul, cizaña perenne,
bromo, pasto canario, pasto superior rojo y de huerto, como se
ilustró, por ejemplo, en las Tablas 18A (Ejemplo 3), 21(C)
y
21(D) (Ejemplo 3). Sin querer estar ligado por la teoría, el mejoramiento del crecimiento puede resultar en un incremento de la tasa de germinación.
21(D) (Ejemplo 3). Sin querer estar ligado por la teoría, el mejoramiento del crecimiento puede resultar en un incremento de la tasa de germinación.
También se contempla por medio de la presente
invención un método que utiliza uno o más de un aislado de Phoma
cf macrostoma, un extracto del mismo, o una combinación de estos
para controlar el desarrollo de malezas durante el crecimiento de
un cultivo en el que se ha establecido mediante la aplicación de
rociado foliar antes o después de la emergencia de la maleza. El
cultivo puede ser, por ejemplo, uno de los cultivos listados
anteriormente, el que incluye pero no está limitado a un pasto, tal
como, pero no limitado a pastos domésticos y especialmente de
césped, pastura de animal o mezclas de heno que comprenden uno o más
de timote, festuja, pasto azul, cizaña perenne, bromo, pasto
canario, pasto superior rojo y de huerto, como se ilustró, por
ejemplo, en la Tabla 21(D) (Ejemplo 3).
La aplicación de un cardo inoculado, o un
extracto de la presente invención, cuando se combinó con un aislado
fúngico, ejerce actividad de control de semilla de manera rápida,
cuando se compara con la aplicación de un aislado por sí mismo.
Sin querer estar ligado por la teoría, el cardo inoculado, o el
extracto es capaz de funcionar de una manera más rápida, en razón
de que no hay requisito de crecimiento del aislado fúngico, y la
producción asociada de uno o más compuestos del aislado fúngico de
crecimiento antes de notar la actividad de control de maleza. Tal
aplicación combinada suministra una actividad de control de maleza
rápida y más consistente durante el periodo de exposición de una
planta al extracto - aislado o una mezcla de cardo -aislada
inoculada.
La presente invención también contempla el uso
de un aislado fúngico o cualquier combinación de aislados fúngicos
con uno o más herbicidas químicos. Además, la presente invención
contempla las composiciones de biocontrol que comprenden un aislado
fúngico de la presente invención, o una pluralidad de aislados
fúngicos con uno o más herbicidas químicos y un medio de
crecimiento para soportar la viabilidad de los aislados fúngicos.
La presente invención también comprende el uso de un estado fúngico
o una combinación de los aislados fúngicos con una o más cepas
fúngicas no Phoma. Además, la presente invención contempla las
composiciones de biocontrol que comprenden un aislado fúngico de la
presente invención, a una pluralidad de aislados fúngicos no Phoma
con uno o más herbicidas y un medio de crecimiento para soportar la
viabilidad de los aislados fúngicos.
La anterior descripción no pretende limitar la
invención reivindicada de ninguna manera adicionalmente, la
combinación discutida de características podría no ser absolutamente
necesaria para la solución inventiva.
La presente invención se ilustrará
adicionalmente en los siguientes ejemplos.
Sin embargo se debe entender que estos ejemplos
son solo con propósitos ilustrativos, y no deben ser utilizados
para limitar el alcance de la presente invención de ninguna
manera.
Las cepas fúngicas fueron inoculadas de lesiones
cloróticas y necróticas pequeñas sobre los tejidos de hoja y tallo
de las plantas de cardo de Canadá conectadas de los capos, pasturas,
lados de camino. El aislado fúngico purificado de los tejidos de la
planta se verificó por que originaba síntomas de enfermedad
utilizando las pústulas de Koch.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Los aislados fúngicos, obtenidos como se subrayó
anteriormente son esterilizados en superficie durante 2 minutos en
0.5% de hipoclorito de sodio, enjuagado en agua destilada estéril, y
clocado en Difco PDA (Agar de Dextroa de Papa) placas a 24ºC
durante 12 horas de luz, durante 3-7 días. Los
hongos que crecen de los tejidos son transferidos individualmente a
medio fresco y se les permite crecer hasta maduración. Los aislados
son tamizados para patogenizidad utilizando las pústulas de Koch
con un bio-ensayo de hoja separada. Las hojas
recientemente cortadas de cardo del Canadá son esterilizadas en la
superficie y colocadas sobre un papel de filtro #3 Whatman húmedo
en una caja petrie de vidrio. Un tapón de Agar de cultivo de hongo
purificado se colocó en el centro de cada hoja, el disco se selló
para evitar la pérdida de humedad, y se incubó como se describió
anteriormente. Se observó desarrollo de los síntomas de enfermedad.
Copias múltiples de cultivos patogénicos purificados se colocan en
almacenamiento de criopreservación como se subrayó adelante.
Los cultivos de hongos purificados se almacenan
mediante criopreservación de esporas y micélidos a menos 78ºC
utilizando una humedad 1:1 de 10% de leche descremada (p/v) a 40% de
soluciones de glicerol (v/v).
\newpage
Los siguientes 10 cultivos de hongos se
identificaron mediante CBS, Holanda como Phoma cf. macrostoma
Montagne, se depositaron en el IDAC como sigue:
- \bullet
- 85-24B (IDAC 230201-1, depositado Febrero 23, 2001)
- \bullet
- 89-25A (IDAC 110401-1, depositado Abril 11, 2001)
- \bullet
- 94-26 (IDAC 230201-2, depositado Febrero 23, 2001)
- \bullet
- 94-44B (IDAC 230201-3, depositado Febrero 23, 2001)
- \bullet
- 94-134 (IDAC 230201-4, depositado Febrero 23, 2001)
- \bullet
- 94-359A (IDAC 110401-2, depositado Abril 11, 2001)
- \bullet
- 95-54A1 (IDAC 230201-5 depositado Febrero 23, 2001)
- \bullet
- 95-268B (IDAC 110401-3 depositado Abril 11, 2001)
- \bullet
- 97-12B (IDAC 230201-6 depositado Febrero 23, 2001)
- \bullet
- 97-15B2 (IDAC 110401-4, depositado Abril 11, 2001)
\vskip1.000000\baselineskip
Recipientes que contienen 125 mL de Cardo de
Dextrosa de Papa (PDB) o un cardo de jugo V8® (Dhingra, O.D., and
Sinclair, J. B. 1995.) Basic Plant Pathology Methods, Second
Edition, CRC Press Inc., Boca Raton, F.L.)
Con 1x10^{5} cunidios/L y se incubaron sobre
un agitador (150 rpm) bajo condiciones ambiente (20ºC) durante un
mínimo de 7-14 días, pero más preferiblemente
durante 14-28 días. Los contenidos de cada
recipiente son entonces filtrados al vacío para separar las esporas
y el micelio. Se midió la concentración de conidio del peso fresco
del micelio.
Los hongos pueden crecer sobre medio sólido o
líquido. Para el cultivo en un medio sólido, todos los hongos
aislados crecen en un Agar de Dextrosa de Papa Difco (PDA; preparado
de acuerdo con las directrices del fabricante) aumentado con 3 ml
de 85% de ácido láctico por litro de medio. Un frasco de cultivo de
hongos tomado de crio-preservación es descongelado
a temperatura ambiente y los contenidos son distribuidos
asépticamente al pipetear los contenidos sobre 3 o más placas
preparadas. El inóculo se regó sobre la superficie de cada placa
utilizando una barra de jockey de vidrio estéril. Las placas de gas
se incuban sobre una banca de laboratorio a temperatura ambiente
una incubadora a 23/18ºC durante 12 horas de luz (bulbos
fluorescentes blancos fríos 20 W) durante una a dos
semanas.
semanas.
Para un medio de cultivo líquido, 125 ml de PDB
Difco se coloca en un Erlenmeyer de 500 ml. El recipiente se
inoculo con una suspensión de esporas tapones de agar. Para la
suspensión de esporas, se hizo fluir una placa Difco madura con
agua destilada de estéril y las esporas son separadas suavemente
con una barra de jockey de virio estéril. La suspensión de espora
se diluyó hasta una concentración de 1x10^{6} esporas/ml y luego
1 ml de solución de esporas diluidas se agregó a cada recipiente de
medio líquido. Para inocular el medio líquido con tapones de agar,
se toman tapones de agar con un diámetro de 5-8 mm
de un cultivo maduro sobre una placa PDA Difco. En los recipientes
inoculados se incuban sobre un agitador superior de banca a 150 rpm
durante 2 semanas a luz ambiente y condiciones de temperatura.
Los micelios (10 g) de los cultivos líquidos se
colocan e 20 ml de leche descremada a 5%: 20% de solución de
criopreservación de glicerol y homogenizada. Las muestras se
congelan y almacenan a -18ºC y a -73ºC durante 30 días y se
comparan a un control preparado inmediatamente después de
homogenización. Luego del almacenamiento durante 30 días, se
determina la viabilidad al regar 500 \mul de suspensión sobre una
placa de la mitad de concentración de PDA, incubar durante 4 días,
y evaluar el crecimiento de micelios y la producción de conidios.
Como un ejemplo, no hubo perdida viabilidad del aisladote hongos
85-24B crecido en PDB sobre un cardo de jugo V8®
después de almacenamiento a -18ºC o -73ºC durante un periodo de 1
mes.
\vskip1.000000\baselineskip
Los aislados fúngicos crecen sobre PDA ácido
láctico durante 10 a14 días. Las placas de agar cultivadas con
hongos son pesadas en dosis de 50 g (equivalente a una placa de agar
completa). 10 g, 5 g, 2,5 g, y 0 g (control) luego macerados con
agua destilada estéril y cada dosis de la suspensión de inóculo es
llevada a un volumen final de 50 ml. Como un ejemplo, se probó el
85-24B.
Las raíces son cortadas en longitudes
apropiadas, por ejemplo raíces del cardo de Canadá son de 10 cm de
longitud, pesadas y colocadas en ollas cuadradas de 10 cm rellenas
con suelo. Una dosis de la suspensión de inóculo es vertida sobre
la superficie de las raíces cubiertas con 1 cm de suelo, puesta con
agua a saturación y colocada en un invernadero (20ºC DÍA, 15ºC
noche, 16 luz de día) con 6 replicas. Las plantas son calificadas
por la emergencia del brote, la clorosis y la muerte a las 2, 4 y 6
semanas. A las 6 semanas las raíces son cosechadas y pesadas. Los
resultados de este estudio utilizando aislado 85-24B
son presentadas en la Figura 1 (la escala de calificación es 1 =
saludable, follaje verde oscuro; 2 = follaje ligeramente
amarillo-verde; 3= hojas principalmente amarillas,
algunas amarillas-verdes; 4 = hojas principalmente
blancas, unas pocas amarillas-verde 5 = plantas
completamente blancas; y 6 = plantas
muertas).
muertas).
Estos resultados demuestran que los aislados
fúngicos de la presente invención pueden controlar el crecimiento
de maleza y que este defecto es más prominente con cantidades
crecientes de inóculo administrado a las raíces.
\vskip1.000000\baselineskip
Las raíces son lavadas durante 1 hora bajo agua
de llave corriente para remover el exceso de suelo, y cortarlas en
longitudes de 10 cm cada longitud con al menos una yema. El peso de
2-10 cm de longitudes de raíz, manteniendo los
pesos de raíz similares para todas las ollas utilizadas en esta
replica, se registran A la placa de agar inoculada de dos semanas
es invertida sobre las piezas de raíz. El control es una placa de
agar que no se inoculo con un hongo, La placa de agar y las raíces
están cubiertas con 2-3 cm de mezcla de suelo y las
ollas colocada sen un invernadero a 20/15ºC y luz natural.
El número total de brotes o plantas, el número
de brotes o plantas que mueren, el número total de brotes o plantas
con síntomas es decir (clorosis, necrosis, lesiones) a las 2, 4 y 6
semanas después de que es registrado el inóculo de la raíz. Después
de 6 semanas, se toma la biomasa foliar y el peso de la raíz. Los
datos se analizaron para varios parámetros:
- i)
- % crecimiento de raíz; [peso final de la raíz o tratamiento/inicio de peso de la raíz del tratamiento], o [peso de la raíz final o control/inicio de peso de la raíz del control] x100:
- ii)
- biomasa foliar
- iii)
- emergencia de la raíz, % de control; y
- iv)
- % de emergencia con síntomas.
\vskip1.000000\baselineskip
El efecto de varios aislados fúngicos de la
presente invención sobre el crecimiento de cardo de Canadá y el
desarrollo se muestran en la Tabla 5.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Los resultados en la Tabla 5 demuestran que los
aislados fueron efectivos en la actividad de control de malezas,
por ejemplo controlar el crecimiento y desarrollo de cardo de
Canadá, cuando se aplicó al suelo.
Utilizando e bio-ensayo de
esterilla de inóculo, un rango de aislados fúngicos se probó para la
actividad de control de malezas utilizando el cardo de Canadá como
una maleza.
Los resultados utilizando el
bio-ensayo anterior, sobre el efecto de varios
aislados fúngicos sobre el crecimiento de cardo de Canadá y el
desarrollo se muestran e la Tabla 6.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
Estos resultados demuestran que un rango de
aislados de Foma tienen un impacto negativo sobre el peso de la
raíz, el peso fresco foliar, la clorosis, y la mortalidad en el
cardo de Canadá, y se pueden utilizar para controlar el crecimiento
y desarrollo de cardo de Canadá.
Los resultados anteriores se promedian (Tabla
7). Estos resultados indican que un rango de aislados fúngicos
exhibe actividad de control de malezas, en que el WCIP es mayor de
20%.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La actividad de control de maleza de un rango de
aislados fúngicos sobre varias malezas anuales y perennes y otras
plantas se examina utilizando el bio-ensayo de
esterilla. Las plantas probadas son:
En las Tablas 8-17, se utilizan
los siguientes acronimos:
- RW - peso de raíz;
- FFW - peso fresco de foliar;
- IOC - incidencia de clorosis;
- WCIP - índice de control de maleza perenne (WCIP % = {[(100 - peso de raíz) + (100 - peso fresco foliar) + (% mortalidad) + (% incidencia de clorosis)]/400} x 100%.)
- WCIA - índice de control de maleza anual (WCIA % = {[(100 - peso fresco foliar) + (% mortalidad) + (% incidencia de clorosis)]/300} x 100%.)
- S.E. Agrupado = error estándar agrupado medio entre aislados y control.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Colectivamente estos resultados demuestran que
un rango de aislados de Foma macrostoma, son efectivos al controlar
selectivamente el crecimiento de malezas. Estos aislados son
efectivos en controlar el crecimiento de malezas de hoja ancha,
incluyendo la Plantaginaceae, por ejemplo, plátano, el Compositae,
por ejemplo, manzanilla sin aroma, diente de león, cardo sembrado
perenne, preseras falsas, y cardo de Canadá, Caryophyllaceae, por
ejemplo cerastio, Polygonaceae, por ejemplo maleza ligada de campo,
Convolvulacease, por ejemplo correhuela. La Foma macrostoma, no
exhibe actividad de control de malezas de pastos, por ejemplo,
avenas silvestres, y cola de zorro verde, y se puede utilizar por
lo tanto para controlar malezas de hoja ancha en pastos.
\vskip1.000000\baselineskip
Para preparar la cebada para inóculo con el
aislado fúngico, cebada sin cáscara embebida, por ejemplo, pero no
se limita a, cebada cv. CDC Silky en agua destilada. El agua de
exceso drenada y sometida a autoclave durante 45 minutos a 121ºC
para un total de tres veces. Después del autoclave inocular los
recipientes cuando ellos están fríos.
Para preparar la suspensión de inóculo, se
coloca una placa de cultivo de agar de dos semanas en una botella
de boca ancha, con agua destilada estéril, y una solución de
almacenamiento de antibiótico (estreptomicina y vancomicina) se
agrega y se homogeniza la mezcla de antibiótico de agar.
Inocular cada recipiente de granos de cebada
estéril con una suspensión de inóculo homogenizada e incubar
durante dos semanas bajo condiciones de laboratorio ambiente.
Después de la incubación, remover la cebada del recipiente y regar
los granos infectados en una capa delgada sobre una bandeja para
secar durante 4 días bajo condiciones ambiente. Los granos secos se
muelen con un molino (es decir, Arthur H. Thomas Co.). El inóculo
molido se puede almacenar durante hasta 3 meses a temperatura
ambiente o refrigerar durante un tiempo de almacenamiento mayor. El
control consiste de grano estéril inoculado tratado de la misma
manera. La viabilidad del inóculo molido se determinó al plantar 25
piezas de placa PDA y registrar el número de partículas con
crecimiento de colonia después de 3 días y el número de colonias
que semeja el aislado fúngico original o son contaminantes después
de 7 días.
Para conducir el bio-ensayo, se
cortan raíces saludables en segmentos de longitud de 10 cm, estando
seguro de que cada segmento de raíz tiene al menos una yema. Los
segmentos de raíz lavados se pesan y se colocan dos por olla.
Inóculo molido espolvoreado homogéneamente sobre las raíces y la
superficie del suelo, por ejemplo aproximadamente 5 g (otras dosis
también se pueden utilizar), cubren con 2-3 cm de
mezcla de suelo, y las ollas se colocan en un invernadero. Se
registra el número total de brotes, número de brotes o plantas que
mueren, número total de brotes o plantas con síntomas (es decir,
clorosis, necrosis, lesiones) a las 2, 4 y 6 semanas después de la
inoculación. También a las 6 semanas se recolecta, enjuaga y
registra el peso fresco de las raíces que permanecen en la olla y
el peso fresco del tejido foliar. Los datos se analizan para varios
parámetros:
- i)
- % crecimiento raíz (es decir, [peso de raíz final de tratamiento/inicio de peso de raíz de tratamiento] o [peso de raíz final de control/peso de control de raíz inicial] x 100);
- ii)
- biomasa foliar;
- iii)
- emergencia de brote como % de control; y
- iv)
- % de brotes con síntomas.
Para determinar la eficacia de una aplicación
única de aislados fúngicos de la presente invención sobre los años
subsecuentes, se aplicaron aislados fúngicos de muestra al suelo
(inóculo de cebada sin cáscara preparado como se subrayó
anteriormente) a una tasa de 1 kg/m^{2} (sobre un rango de tamaños
de partícula de 50-840 \mu; ver Tabla 20
adelante), en tres períodos diferentes dentro de la estación de
crecimiento: al final de la primavera (en el momento de la
emergencia del cardo de Canadá); medio verano, y en el otoño. El
número de cardo de Canadá que permanece en las gráficas de prueba
se determinó sobre dos estaciones de crecimiento. Los resultados de
este experimento se presentan en la Tabla 18.
Estos datos ilustran que una aplicación única
del aislado fúngico de la presente invención es efectiva para
ejercer actividad de control de malezas sobre una o más estaciones
de crecimiento. La actividad de control de maleza es mayor si el
inóculo se aplica en la primavera o el verano, y se reduce si se
aplica en el otoño.
\vskip1.000000\baselineskip
Para determinar la eficacia de una aplicación
única de los aislados fúngicos de la presente invención para el
control de maleza en el establecimiento de pastos de semilla o en
césped perenne previamente establecido, se aplicaron aislados
fúngicos de muestra en la primavera al suelo (inóculo de cebada sin
cáscara preparado como se subrayó anteriormente) a una tasa entre
250-1000 g/m^{2} (sobre un rango de tamaños de
partícula de 50-840 \mu; ver Tabla 20 adelante).
Inóculo, semilla de pasto y semilla de maleza se pesaron antes de
establecer las gráficas de campo. Una mezcla de pasto de césped
"sobresembrado" se aplicó a 5.7 g por 1/4 m^{2} (200 lb por
acre). Este contenía 40% de Cizaña Perenne (Manhattan III y Calypso
II), 25% de Pasto Azúl de Kentucky (Quantum Leap y Alene), 15% de
Festuja masticables, 10% de Festuja Rojo Crepado, 10% de Poa
trivialis L. De esta cantidad un 10% de mezcla de maleza se calculó
(5% de semilla de diente de león y 5% de semilla de cerastio) para
ser 0.6 g por 1/4 m^{2}. Los aislados del inóculo se pesaron de
acuerdo con la dosis aplicada. La preparación de la gráfica de
campo del área de pasto sembrada consistió de rotoarar el suelo y
luego empacar firmemente el lecho de semilla al colocar sobre una
pieza de un m^{2} de madera laminada. Las áreas que no son
suaves, se rastrillaron y empacaron de nuevo. Las áreas de 1/4 de
m^{2} se establecieron en el centro del área empacada. La semilla
de pasto, la semilla de maleza y el inóculo se espolvorearon sobre
la parte superior y rastrillados a mano en dos direcciones. Luego
longitudes de 5 m de la cubierta de hilera se colocaron sobre la
parte superior de las áreas durante un período de 2 semanas y en
este tiempo, las áreas se regaron con agua cada día, solo lo
suficiente para mantener la humedad de la superficie y no permitir
que la semilla de pasto se seque aunque germine. En césped
previamente establecido, las áreas de 1/4 m^{2} se establecieron
en un área donde el pasto ha crecido durante más de 20 años. La
semilla de maleza y el inóculo se espolvorearon sobre la superficie
y rastrillados a mano en dos direcciones. Las áreas se rociaron con
agua diariamente durante 2 semanas lo suficiente para mantener la
humedad de la superficie, pero no suficiente para que el inóculo
corra hacia fuera con el agua. El número de plantas de diente de
león y cerastio en las áreas de prueba se determinó sobre la
estación creciente. La biomasa se midió como el peso fresco en
gramos del pasto. Los resultados de este experimento se presentan
en la Tabla 18A.
Estos resultados demuestran el control del
diente de león y la cerastio en el establecimiento de pastos y en
pastos establecidos. Ellos también muestran el uso de
85-24B para mejorar el crecimiento de pasto.
\vskip1.000000\baselineskip
Estudios adicionales examinan el efecto de la
humedad del suelo y temperatura sobre la actividad de control de
maleza de varios aislados fúngicos, utilizando cebada sin cáscara
como el inóculo (ver anterior). Para estos experimentos se
consideraron tres condiciones de humedad del suelo (saturación,
capacidad de campo y punto de marchitamiento permanente), junto con
días de 20º o 30ºC. Los resultados de estos experimentos se
presentan en la Tabla 19.
Estos resultados ilustran que la mejor actividad
de control de maleza se obtiene con la mayor humedad del suelo a
cualquier temperatura.
Los métodos para la aplicación de los aislados
fúngicos también se examinaron. Este estudio consideró que la
actividad de control de maleza como un resultado de aplicar un
inóculo de cebada sin cáscara, o un inóculo líquido. Para la cebada
sin cáscara, se examinaron el tamaño de partícula y la respuesta de
dosis de la cebada infectada (Tabla 20). Para el inóculo líquido,
se examinó el efecto de los homogeneizados de micelio (mezclados
con dos composts, lácteos, o compost de cerdo y pollos) sobre la
actividad de control de maleza (Tabla 21).
La cebada sometida a autoclave se utilizó para
la preparación de un inóculo fúngico como se describió
anteriormente. Los granos de cebada estéril inoculada se incubaron
durante dos semanas bajo condiciones de laboratorio ambiente, se
secaron y se molieron con un molino (es decir, Arthur H. Thomas
Co.). El control consiste de granos estériles inoculados tratados
de la misma manera. La viabilidad del inóculo molido se determinó al
poner en placa 25 piezas sobre la placa de PDA y registrar el
número de partículas con crecimiento de colonia después de 3 días y
el número de colonias que semejan el aislado fúngico original o son
contaminantes después de 7 días.
Para conducir el bio-ensayo, se
cortan raíces saludables en segmentos de 10 cm de longitud, estando
seguro de que cada segmento de raíz tiene al menos una yema. Los
segmentos de raíz lavados se pesan y se colocan dos por olla. El
inóculo molido espolvoreado homogéneamente sobre las raíces y la
superficie del suelo, por ejemplo aproximadamente 5 g (también se
pueden utilizar otras dosis), cubierta con 2-3 cm de
mezcla de suelo, y las ollas se colocan en un invernadero. El
cambio en el peso de la raíz a las 6 semanas después de la
inoculación se registra. Los resultados se presentan en la Tabla
20.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Los resultados presentados en la Tabla 20,
demuestran que el rango de tamaños de gránulo de cebada y las tasas
de aplicación son efectivas para controlar el crecimiento de maleza
(indicado mediante crecimiento de raíz reducido). La eficacia
creciente se observa con gránulos de tamaño más pequeño y tasas de
aplicación de dosis mayores.
\vskip1.000000\baselineskip
El hongo crece en un cultivo líquido como se
describió anteriormente (ver Cultivo de aislados de hongo, Ejemplo
1). Utilizando una capa doble de tela de queso, el líquido se drena
mediante fuerza de gravedad desde el micelio. Una proporción de
aproximadamente 1:3.2 (v/v) de micelio a agua se homogeniza para
producir aproximadamente 10^{5} a 10^{6} cfu/mL. El
homogenizado se mezcló con estiércol de compost en una proporción de
aproximadamente 1:2 (v/v).
Dos segmentos de raíz de maleza, por ejemplo,
aproximadamente 10 cm para raíces de cardo de Canadá, se colocan en
una olla que está tres cuartos completa con mezcla de suelo (3 suelo
franco arenoso: 1 turba sphagnum: 1 vermiculita grado medio: 1
arena de 9mm lavada tamizada) y firmemente empacada. Los segmentos
de raíz se pesan y se colocan dos por olla. El compost tratado
(mezcla homogenado-compost) se coloca en la olla y
luego se cubre con una mezcla adicional de suelo antes de enjuagar
completamente. Las ollas se colocan en un invernadero, y el número
total de brotes/olla, número total de brotes o plantas con síntomas
(es decir, clorosis, necrosis, lesiones) se registran a las 2, 4, y
6 semanas. También se recolectan las raíces a las 6 semanas,
enjuagadas, y registrado el peso fresco, como es el peso fresco del
tejido foliar. Los datos se analizan para varios parámetros:
- i)
- % de crecimiento de raíz (es decir, [peso de raíz final de tratamiento/peso de raíz inicial del tratamiento] o [peso de raíz final de control/peso de raíz de inicio de control] x 100);
- ii)
- biomasa foliar.
Los resultados se presentan en la Tabla 21
(A).
\vskip1.000000\baselineskip
Estos resultados demuestran que el inóculo
líquido preparado como un homogenizado utilizando una variedad de
medio de compost, es efectivo para controlar el crecimiento de
maleza.
\vskip1.000000\baselineskip
Los aislados fúngicos crecidos en el cultivo
líquido como se describió anteriormente (ver Cultivo de aislados
fúngicos, Ejemplo 1). Un tratamiento utilizó una mezcla de
94-359A, 94-44B, y
85-24B crecidos durante aproximadamente
4-8 semanas y el otro tratamiento utilizó
85-24B crecido durante 2 semanas. El caldo de
micelio y el cultivo líquido se homogenizan para producir
aproximadamente 10^{3} a 10^{4} cfu/mL. El control fue medio de
cultivo líquido no inoculado. Veinticinco semillas de diente de león
se sembraron con 6mm de profundidad en una mezcla de plantación sin
suelo de 100 mL (equivalente a 0.02 m^{2}) y 100 mL de
homogenizado se vertió sobre el suelo. Los conteos se hicieron del
número de plántulas de diente de león que emergieron y el número de
plántulas cloróticas después de 5.7 y 14 días. Los resultados se
presentan en la Tabla 21(B).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Estos resultados demuestran que los
homogenizados fúngicos con aproximadamente 10^{3} a 10^{4}
cfu/mL se pueden aplicar como un empapado de suelo a una tasa de
aproximadamente 5 L/m^{2} para la actividad de control de maleza,
y que se obtuvo una actividad de control de maleza más rápida y
mayor con mezclas de inóculo envejecido.
El aislado 94-44B fue crecido en
un cultivo líquido durante 4 semanas como se describió anteriormente
(Ver Cultivo de aislados fúngicos, Ejemplo 1). El caldo de micelio
y el cultivo líquido se homogenizaron para producir aproximadamente
10^{3} a 10^{4} cfu/mL. El homogenizado fúngico (1 mL) y 1 mL de
2% de metocil (un pegante de celulosa) se utilizó para recubrir 36
semillas de trigo Katewpa (138 cfu/semilla) o 173 semillas de
semilla de pasto festuja rojo crepado (29 cfu/semilla) en una placa
Petrie de vidrio. La semilla recubierta se secó al aire durante
toda la noche en una caperuza de flujo laminar.
Las semillas de trigo y 20 semillas de diente de
león se plantaron en una olla de 4 pulgadas con un medio de
plantación sin suelo y se llenan de agua completamente. El % de
plantas de diente de león con clorosis y la biomasa de trigo de
peso fresco se registraron 14 días después. Ver Tabla
21(C).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Estos resultados demuestran que el aislado
fúngico inventivo puede controlar los dientes de león mediante
tratamiento de semilla de cultivos. También se demuestra que el
efecto de la dosis es tal que las semillas más grandes con más
cfu/semilla dieron mayor control que las semillas más pequeñas con
menos cfu/semilla.
\vskip1.000000\baselineskip
El aislado 94-44B creció en
cultivo líquido durante cuatro semanas como se describió
anteriormente (Ver Cultivo de aislados de hongo, Ejemplo 1). El
cultivo líquido se filtró a través de una prenda de malla de nylon y
el caldo de cultivo líquido y las fracciones de micelio se
guardaron separadamente. Una alícuota de 150 ml de caldo de cultivo
líquido se filtró a través de un filtro de acetato de celulosa 0.45
um para producir el tratamiento de caldo de cultivo filtrado. Otras
150 ml de alícuota de caldo de cultivo líquido tuvieron 15% de
micelio (p/v) agregado a éste y luego se homogenizó para producir el
tratamiento denominado el caldo de cultivo líquido no filtrado que
contiene 10^{6} a 10^{7} propágulos/ml. (Los propágulos
comprendieron tanto fragmentos de micelio como esporas). Estos dos
tratamientos más el control de agua se rociaron sobre ollas de
6-4 pulgadas utilizando un rociador de pista a una
tasa de 480 L/ha. Cada olla se sembró con 0.11g de pasto cv. La
mezcla sobre sembrada y 20 semillas de diente de león en un medio de
plantación sin suelo. Las ollas se rociaron 1-2
días después de la siembra como una aplicación de rociado foliar
pre-emergente. Las ollas también se rociaron dos
semanas después de la siembra como una aplicación de rociado foliar
post-emergencia. Tres semanas después del rociado,
se registraron los siguientes datos: número total de dientes de león
por olla, número de dientes de león cloróticos por olla, peso
fresco del pasto por olla en gramos, peso fresco de diente de león
por olla en gramos. Ver Tabla 21(D).
Estos resultados demuestran que el aislado
fúngico inventivo puede controlar el diente de león mediante métodos
de aplicación en pulverizado antes o después de la emergencia de la
plante y mejorar el crecimiento de pasto mediante una aplicación de
rociado pre-emergente.
\vskip1.000000\baselineskip
Un rango de plantas agrícolamente importantes se
probaron para determinar la especificidad de huésped de los
aislados fúngicos de la presente invención. Los aislados fúngicos se
aplicaron a semillas de aceite, cereal, leguminosas, y plantas de
forraje utilizando el bio-ensayo de esterilla de
inóculo subrayado en el Ejemplo 2. El efecto de estos aislados
fúngicos sobre la germinación, clorosis, peso fresco foliar, y
mortalidad se examinaron.
La sensibilidad de los cultivos a los aislados
fúngicos se probó utilizando el bio-ensayo de
esterilla de inóculo (ver Ejemplo 2), utilizando cargas altas de
inóculo. Por lo tanto, los resultados muestran más reacciones
susceptibles que podrían ocurrir bajo condiciones más naturales de
infección.
Los cultivos y cultivares probados fueron como
sigue:
- 1.
- Cereal y otros monocotiledones
- Trigo - cvs. Katepwa, AC Domain, AC Karma, Biggar, Kyle
- Cebada - cvs. Harrington, Silky
- Avena - cvs. Derby o Walden
- Mijo - cvs. Minco o Prairie Gold
- Semilla de canario - cvs. NET
- 2.
- Cultivos de semilla de aceite
- Canola - cvs. AC Excel, AC Parkland
- Mostaza - cvs. Cutlas, Ochre
- Lino - cv. Vimy
- Girasol - cvs. Cargill SF270 o IS7111
- Alazor - cvs. Lethbridge
- 3.
- Cultivos de legumbres
- Lenteja - cvs. Laird, Eston
- Alverja de campo - cv. Express
- Alverja de pollo - cv. Sanford
- Fríjol Faba - cv. CDC Fatima
- 4.
- Cultivos de forraje
- Tréboles - trébol amarillo cv. Norgold, trébol blanco cvs. Polara y Sonja, trébol común, trébol rojo cvs. Altaswede o Florex
- Tres hojas pie de pájaro - cv. Cree
- Alfalfa - cv. Beaver.
\vskip1.000000\baselineskip
Los resultados de estos experimentos se
presentan en la Tabla 22 (efecto sobre la germinación y clorosis) y
la Tabla 23 (efecto sobre el peso fresco foliar y la
mortalidad).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
Los resultados presentados en las Tablas 22 y 23
demuestran que muchos cultivares de plantas de especias agrícolas
importantes no se afectan por los aislados de hongos de la presente
invención cuando se aplican a cargas de inóculo altas, y que estos
aislados se pueden utilizar como bioherbicidas para controlar la
actividad de malezas en la presencia de cultivos. Las cargas de
inóculo más bajas, que son efectivas para exhibir actividad de
control de malezas pero no dañinas para las plantas de cultivo, se
pueden utilizar para minimizar el impacto sobre las plantas
agrícolas si se desea.
Para determinar los efectos residuales de una
aplicación simple de aislados fúngicos de la presente invención
sobre cultivos agrícolamente importantes crecidos en el campo, se
aplicaron aislados fúngicos de muestra al suelo utilizando un
inóculo de cebada sin cáscara a 1 kg/m^{2} en tres diferentes
períodos dentro de la estación de crecimiento para controlar el
cardo de Canadá (Ver Ejemplo 3, Duración de Aplicación). La semilla
de lenteja del cultivar Laird se cosechó en las áreas tratadas y de
control a una tasa de 70-80 kg/ha aproximadamente
10-14 meses después del tiempo de aplicación del
bioherbicida. El número de plantas de lenteja emergidas por área y
el número de plantas con clorosis se contó. Los resultados de este
experimento se presentan en la Tabla 24(A). Los datos de un
experimento similar, sobre cardo de Canadá, se presentan en la Tabla
18.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Estos resultados demuestran que los aislados
fúngicos en la presente invención no tienen una actividad residual
dañina para los cultivos de campo agrícolamente importantes cuando
se aplican a tasas altas de aplicación de campo en la primavera y
el verano bajo condiciones naturales de infección.
\vskip1.000000\baselineskip
La actividad de control de maleza de los
aislados fúngicos muertos con calor se examinó. El inóculo de cebada
sin cáscara fue muerto con calor y se aplicó a cardo de Canadá o
el inóculo muerto con calor se mezcló con semilla de pasto
contaminada con 5% de semilla de diente de león como se describe
adelante (Tablas 24(B) y 24(C)). Los resultados
indican que los aislados fúngicos muertos con calor retuvieron la
actividad de control de maleza. Por lo tanto, el efecto del caldo
inoculado filtrado o los extractos de aislados fúngicos de la
presente invención sobre el crecimiento de maleza también se examinó
(Tabla 25).
El inóculo de granos de cebada sin cáscara se
preparó como se subrayó anteriormente (Ejemplo 3). El inóculo de
cebada se sometió a autoclave y se aplicó al suelo en el cual estaba
creciendo cardo de Canadá o el inóculo se mezcló semilla de pasto
contaminada con 5% de semilla de diente de león (ver Ejemplo 3
anterior). Como un control, se aplicó grano de cebada regular o
inóculo de cebada no infestado al suelo. Estos resultados se
repitieron bajo invernadero y condiciones de campo. Los resultados
de los experimentos se muestran en la Tabla 24B y en la Tabla
24C.
Estos experimentos demuestran que el inóculo de
hongo muerto con calor exhibe una actividad de control de maleza, y
que el inóculo de hongo vivo no se requiere para la actividad de
control de maleza.
Estos resultados sugieren que se hace un
producto natural mediante aislados de hongo de la presente
invención. Los extractos crudos de una fracción de fitotoxina se
obtuvieron y analizaron para activar el control de maleza.
\vskip1.000000\baselineskip
Estos resultados demuestran que el agente
fúngico o los metabolitos producidos por el agente fúngico pueden
controlar el diente de león en céspedes y que los metabolitos pueden
mejorar el crecimiento del pasto.
Los aislados fúngicos crecieron en medio de
cultivo líquido sobre un agitador durante 4 semanas bajo luz y
condiciones de temperatura ambiente. El cultivo se separó en un
caldo y una fracción de micelio mediante filtración de vacío
utilizando un embudo Buchner recubierto. Un papel de filtro Whatman
#1 y 2-4 capas de tela de queso. La fracción de
caldo (caldo inoculado filtrado) se redujo hasta sequedad o
utilizando un roto-evaporador (40ºC) o un secador
por congelamiento. La fracción de micelio se colocó en cloroformo
durante 3 horas durante toda la noche luego se sometió a vacío
filtrado a través de papel de filtro Whatman #1 para separar el
disolvente y el micelio. El disolvente filtrado fue
roto-evaporado hasta sequedad. El control fue un
medio de cultivo líquido inoculado tratado lo mismo que la fracción
de caldo. Los extractos secos se almacenados en recipientes en el
refrigerador hasta uso. Para la prueba, los extractos secos tanto
del caldo como las fracciones de micelio se disolvieron primero en
2-5 ml de agua destilada y luego una cantidad igual
de 80% de metanol se agregó a cada recipiente. El tratamiento de
control fue de 40% de metanol. El metanol y los extractos de etil
acetato también se obtuvieron de una fracción de micelio luego de
la etapa de extracción de cloroformo, y se examinaron para la
actividad de control de maleza como se describe adelante.
Se utilizó un bio-ensayo para
determinar la presencia de fitotoxinas en gotas de las fracciones
que originaron síntomas cloróticos similares a aquel causado por
los hongos sobre las hojas de una planta susceptible (en este
ejemplo, se utilizó fríjol Faba como una planta de prueba) o cardo
de Canadá (huésped maleza). Las semillas de fríjol Faba se
plantaron sobre una mezcla de suelo y disminuidas a 5 plantas por
olla utilizando 2 ollas por tratamiento. Las raíces de cardo de
Canadá se plantaron en mezcla de suelo y después de 3 semanas, las
ollas con 2-3 retoños se seleccionaron. Dos - 10 ul
gotas de un extracto se aplicaron a 2 hojas por planta de fríjol
Faba y 3 hojas por retoño de cardo de Canadá; una gota sobre una
herida de punción hecha de una picadura de insecto y la otra gota
directamente sobre la superficie de la hoja. Las plantas se
observaron diariamente durante 10 días para clorosis.
Un bio-ensayo diferente se
utilizó para determinar el impacto de las fitotoxinas de las
fracciones sobre el peso fresco del fríjol Faba. En este ensayo,
las semillas de fríjol Faba se mezclaron con 1 ml de extracto y 1
ml de 2% de metocil para recubrir las semillas y luego dejarlas
secar al aire durante toda la noche. Cinco semillas se plantaron
por olla en mezcla de suelo. Las plantas se calificaron para
emergencia y clorosis después de 10 días, y la biomasa foliar (peso
fresco) después de 4 semanas.
La actividad de control de maleza de estos
extractos de disolvente se presentan en la Tabla 25 (A; extracto de
cloroformo) y la Tabla 25 (B; cloroformo, metanol y extractos de
etil acetato).
La actividad de control de manejos, determinada
entre el porcentaje de plantas cloróticas (fríjol faba, FB o cardo
del Canadá, CT) observada 10 días después de recibir as gotas de un
extracto de cloroformo obtenida de un aislado so de
94-26, se presenta en la Tabla 25 (A).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La actividad de control de malezas de
cloroformo, metanol o fracciones de etil acetato también se
examinaron. La actividad de control de maleza se ensaya al
monitorear la emergencia, clorosis, y peso fresco foliar de fríjol
faba que se había tratado con varios extractos de disolvente de
94-26, o cardo de control no inoculado. Los
resultados de este experimento están presentes en la Tabla
25(B).
\vskip1.000000\baselineskip
Los resultados presentados en las Tablas
25(A) y (B) demuestran que el cardo inoculado filtrado y los
extractos de disolventes obtenidos de los aislados fúngicos de la
presente invención indujeron síntomas de enfermedad, redujeron el
crecimiento, y exhibieron actividad de control de maleza en plantas
susceptibles. Por lo tanto, el caldo inoculado filtrado, los
extractos de micelio, o una combinación de estos, se puede utilizar
para el control de malezas.
Claims (24)
1. Un método para controlar una o más malezas de
hoja ancha que comprende administrar micelios de Phoma cf
macrostoma aislados decaído de Canadá, un extracto obtenido de
micelios de Phoma cf macrostoma, o una combinación de los
mismos, al suelo donde crecen dichas semillas, en donde dicho
extracto se selecciona del grupo que consiste de inoculo de cebada
muerta con calor, un extracto de cloroformo de dicho aislado de
Phoma cf macrostoma, un extracto de etanol de dicho aislado
de Phoma cf macrostoma, y extracto de etil acetato de dicho
aislado de Phoma cf macrostoma.
2. El método de la reivindicación 1, en donde
dicho uno o más malezas de hoja ancha en unas especies de una
familia seleccionada del grupo que consiste de Compositae,
Caryophyllaceae, Convolvulaceae, Plantaginaceae, y Rubiaceae.
3. El método de la reivindicación 1, en donde
dicho uno o más malezas de hoja ancha se seleccionan del grupo que
consiste de cardo de Canadá, cardo de siembra perenne, diente de
león, Zanilla inodora, amor de hortelano, cerastio, trigo
sarraceno, correhuela, plátano, girasol de la pradera, trébol y
mostaza.
4. Un agente de biocontrol que comprende
micelios de uno o más un aislado de Phoma cf macrostoma,
aislado de cardo de Canadá, un extracto obtenido de micelios de
Phoma cf macrostoma, o una combinación de los mismos, en
donde dicho extracto se selecciona del grupo que consiste de inóculo
de cebada muerta con calor, un extracto de cloroformo de dicho
aislado de Phoma cf macrostoma, un extracto de metanol de
dicho aislado de Phoma cf macrostoma, y un extracto de etil
acetato de dicho aislado de Phoma cf macrostoma.
5. El agente de biocontrol de la reivindicación
4, en donde dicho uno o más aislado de Phoma cf macrostoma,
se selecciona del grupo que consiste de:
- a)
- 85-24B (IDAC 230201-1, depositado Febrero 23, 2001)
- b)
- 89-25A (IDAC 110401-1, depositado Abril 11, 2001)
- c)
- 94-26 (IDAC 230201-2, depositado Febrero 23, 2001)
- d)
- 94-44B (IDAC 230201-3, depositado Febrero 23, 2001)
- e)
- 94-134 (IDAC 230201-4, depositado Febrero 23, 2001)
- f)
- 94-359A (IDAC 110401-2, depositado Abril 11, 2001)
- g)
- 95-54A1 (IDAC 230201-5 depositado Febrero 23, 2001)
- h)
- 95-268B (IDAC 110401-3 depositado Abril 11, 2001)
- i)
- 97-12B (IDAC 230201-6 depositado Febrero 23, 2001)
- j)
- 97-15B2 (IDAC 110401-4, depositado Abril 11, 2001) y una combinación de los mismos.
\vskip1.000000\baselineskip
6. Una composición de biocontrol, que comprende
un agente de biocontrol de la reivindicación 4 o reivindicación 5,
y un medio para soportar la viabilidad de dicho uno o más un aislado
de Phoma cf macrostoma.
7. La composición de biocontrol de la
reivindicación 6, en donde dicho medio se selecciona del grupo que
consiste de Agar, pesto, granulado de turba, vermiculita, arcilla,
almidones, cardo de dextrosa de papa, cardo de jugo V8®, grano de
cereal y grano de legumbre.
8. Una semilla de cultivo recubierta, que
comprende
- (i)
- micelios de uno o más aislados de Phoma cf macrostoma, aislado de cardo de Canadá o un extracto obtenido de micelios de Phoma cf macrostoma, y
- (ii)
- un ligador,
donde dicho extracto se selecciona del grupo que
consiste de inóculo de cebada muerta con calor, un extracto de
cloroformo de dicho aislado de Phoma cf macrostoma, un
extracto de metanol de dicho aislado de Phoma cf
macrostoma, y un extracto de etil acetato del aislado de
Phoma cf macrostoma.
\newpage
9. La semilla de cultivo recubierta de la
reivindicación 8, en donde dicho aislado de Phoma cf
macrostoma, se selecciona del grupo que consiste de:
- a)
- 85-24B (IDAC 230201-1, depositado Febrero 23, 2001)
- b)
- 89-25A (IDAC 110401-1, depositado Abril 11, 2001)
- c)
- 94-26 (IDAC 230201-2, depositado Febrero 23, 2001)
- d)
- 94-44B (IDAC 230201-3, depositado Febrero 23, 2001)
- e)
- 94-134 (IDAC 230201-4, depositado Febrero 23, 2001)
- f)
- 94-359A (IDAC 110401-2, depositado Abril 11, 2001)
- g)
- 95-54A1 (IDAC 230201-5 depositado Febrero 23, 2001)
- h)
- 95-268B (IDAC 110401-3 depositado Abril 11, 2001)
- i)
- 97-12B (IDAC 230201-6 depositado Febrero 23, 2001)
- j)
- 97-15B2 (IDAC 110401-4, depositado Abril 11, 2001) y una combinación de los mismos.
\vskip1.000000\baselineskip
10. Un método para controlar el desarrollo de
maleza durante el crecimiento de cultivos que comprende:
- a)
- agregar una cantidad efectiva del agente de biocontrol de la reivindicación 4 o reivindicación 5 o de la composición de biocontrol de la reivindicación 6 o reivindicación 7 para producir un suelo tratado;
- b)
- plantar dichos cultivos en dicho suelo tratado;
- c)
- hacer crecer dicho cultivo.
\vskip1.000000\baselineskip
11. Un método para controlar el desarrollo de
malezas durante el crecimiento de cultivos que comprende:
- a)
- Plantar dicho cultivo;
- b)
- agregar una cantidad efectiva de dicho agente de biocontrol de la reivindicación 4, reivindicación 5 de la composición de biocontrol de la reivindicación 6 o reivindicación 7 al suelo donde dicho cultivo se plantó;
- c)
- hacer crecer dicho cultivo.
\vskip1.000000\baselineskip
12. Un método para controlar el desarrollo de
malezas durante el crecimiento de cultivos que comprende:
- a)
- agregar una cantidad efectiva de dicho agente de biocontrol de la reivindicación 4, o reivindicación 5 de la composición de biocontrol de la reivindicación 6 o reivindicación 7 a las semillas de cultivo, para producir semillas de cultivo tratadas;
- b)
- plantar dicha semilla de cultivo tratada;
- c)
- desarrollar dicho cultivo.
\vskip1.000000\baselineskip
13. Un método para controlar el desarrollo de
malezas durante un crecimiento de cultivo establecido de cultivo
que comprende:
- a)
- agregar una cantidad efectiva de dicho agente de biocontrol de la reivindicación 4 o reivindicación 5 o la composición de biocontrol de la reivindicación 6 o reivindicación 7 al cultivo establecido; y
- b)
- desarrollar e cultivo.
\vskip1.000000\baselineskip
14. El método de una cualquiera de las
reivindicaciones 10 a 13, en donde dicho cultivo es un cultivo
perenne.
15. El método de la reivindicación 14, en donde
dicho cultivo perenne se selecciona del grupo que consiste de un
césped, un pasto perenne, y un cereal de invierno.
16. El método de una cualquiera de las
reivindicaciones 10 a 13, en donde el cultivo es un pasto y la
semilla de cultivo es semilla de pasto.
17. Un método para controlar el desarrollo de
malezas que comprende aplicar el agente de biocontrol de la
reivindicación 4 o reivindicación 5 o la composición de biocontrol
de la reivindicación 6 o reivindicación 7 al suelo en donde dicha
maleza crece.
18. El método de la reivindicación 17, en donde
dicho agente de biocontrol es un extracto de dicho uno o más un
aislado de Phoma macrostoma.
19. El método de la reivindicación 17, en donde
dicho agente de biocontrol es dicho uno o más de un aislado de
Phoma macrostoma.
20. El método de la reivindicación 17, 18 o 19,
en donde dicha etapa de aplicar comprende empolvar, restregar,
regar, perforar, poner banda, difundir, rociar, inyección de
líquido, verter o empapar el suelo.
21. El método de la reivindicación 17, 18, 19 o
20, en donde dicho agente de biocontrol se aplica a suelo antes de
la emergencia.
22. El método de la reivindicación 17, 18, 19,
20 o 21, en donde dicho agente de biocontrol se aplica al suelo
después de la emergencia de la maleza.
23. Un método para controlar el desarrollo de
maleza que comprende aplicar el agente de biocontrol de la
reivindicación 4 o reivindicación 5 o la composición de la
reivindicación 6 o reivindicación 7 a dicha maleza.
24. El método de la reivindicación 23, en donde
dicha etapa de aplicar comprende espolvorear, restregar, esparcir,
difundir, rociar, o verter.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US29447501P | 2001-05-30 | 2001-05-30 | |
| US294475P | 2001-05-30 | ||
| PCT/CA2002/000797 WO2002096204A1 (en) | 2001-05-30 | 2002-05-30 | Fungal isolates and biological control compositions for the control of weeds |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2347867T3 true ES2347867T3 (es) | 2010-11-24 |
Family
ID=23133596
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES02734935T Expired - Lifetime ES2347867T3 (es) | 2001-05-30 | 2002-05-30 | Aislados fúngicos y composiciones de control biológico para el control de malezas. |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8211830B2 (es) |
| EP (1) | EP1401284B1 (es) |
| JP (1) | JP4597483B2 (es) |
| AT (1) | ATE469553T1 (es) |
| AU (1) | AU2002311116B2 (es) |
| CA (1) | CA2448890C (es) |
| DE (1) | DE60236592D1 (es) |
| ES (1) | ES2347867T3 (es) |
| MX (1) | MXPA03010896A (es) |
| NZ (1) | NZ529796A (es) |
| WO (1) | WO2002096204A1 (es) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ529796A (en) | 2001-05-30 | 2006-03-31 | Ca Minister Agriculture & Food | Fungal isolates and biological control compositions for the control of weeds |
| US7772155B2 (en) | 2001-05-30 | 2010-08-10 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Minister Of Agriculture And Agri-Food | Fungal isolates and biological control compositions for the control of weeds |
| US7393736B2 (en) * | 2005-08-29 | 2008-07-01 | Micron Technology, Inc. | Atomic layer deposition of Zrx Hfy Sn1-x-y O2 films as high k gate dielectrics |
| AU2009201231B2 (en) * | 2009-03-30 | 2015-05-14 | University Of Queensland | Control of weeds |
| WO2012048377A1 (en) * | 2010-10-13 | 2012-04-19 | The University Of Queensland | Control of weeds |
| EP2640360A2 (en) | 2010-11-19 | 2013-09-25 | Forsight Vision4, Inc. | Therapeutic agent formulations for implanted devices |
| CN102061330B (zh) * | 2010-11-30 | 2012-09-05 | 中国农业科学院油料作物研究所 | 一种鉴定芝麻茎点枯病和枯萎病病原菌致病性的方法 |
| EP2968113B8 (en) | 2013-03-14 | 2020-10-28 | Forsight Vision4, Inc. | Systems for sustained intraocular delivery of low solubility compounds from a port delivery system implant |
| CN105409613A (zh) * | 2015-12-05 | 2016-03-23 | 武汉市蔬菜科学研究所 | 一种豇豆抗根腐病的苗期鉴定方法 |
| CN112690276B (zh) * | 2020-12-23 | 2022-04-12 | 沈阳农业大学 | 一种菌药复配可分散油悬浮剂及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4636386A (en) * | 1984-08-22 | 1987-01-13 | The Regents Of The University Of California | Mycological method for controlling italian thistle growth |
| US4606751A (en) * | 1984-12-07 | 1986-08-19 | North Carolina State University | Biological method of controlling johnson grass and similar weeds in agricultural crops |
| EP0187341A1 (en) | 1984-12-24 | 1986-07-16 | The B.F. GOODRICH Company | Coated seed and method of coating seeds |
| JPH0692285B2 (ja) | 1985-03-14 | 1994-11-16 | 片倉チツカリン株式会社 | 線虫抑制資材 |
| US5082489A (en) * | 1990-02-06 | 1992-01-21 | The Royal Institution For The Advancement Of Learning (Mcgill University) | Composition for biocontrol of wild buckwheat |
| US5391538A (en) * | 1991-01-19 | 1995-02-21 | Sandoz Ltd. | Method and compositions for the biological control of field bindweed |
| US5472690A (en) * | 1993-08-05 | 1995-12-05 | Forestry Canada | Mycoherbicide and method for controlling Calamagrostis canadensis |
| US5635444A (en) * | 1994-04-28 | 1997-06-03 | Walker; Harrell L. | Control of crabgrass with a fungal pathogen |
| US5952264A (en) * | 1994-04-28 | 1999-09-14 | Walker; Harrell L. | Control of crabgrass with a fungal pathogen |
| US5747029A (en) * | 1995-08-07 | 1998-05-05 | Walker; Harrell L. | Control of weeds with a fungal pathogen derived from M. verrucaria |
| AU715352B2 (en) * | 1996-01-10 | 2000-01-20 | Grains Research & Development Corporation | Control of annual grass weeds |
| US5945378A (en) | 1996-08-26 | 1999-08-31 | University Of Florida | Control of cyperus spp. with a fungal pathogen |
| US5698491A (en) * | 1996-08-26 | 1997-12-16 | University Of Florida | Control of Cyperus spp. with a fungal pathogen |
| US5795845A (en) * | 1997-01-17 | 1998-08-18 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Argiculture | Method for the control of weeds with weakly virulent or non-virulent plant pathogens |
| US5993802A (en) * | 1997-07-07 | 1999-11-30 | Minister Of Natural Resources As Represented By The Canadian Forest Service | Process for biological control of Calamagrostis canadensis using a low temperature basidiomycete |
| US6309869B1 (en) * | 1999-01-14 | 2001-10-30 | Novozymes Biotech, Inc. | Polypeptides having acid phosphatase activity and nucleic acids encoding same |
| EP1036492A1 (en) * | 1999-03-13 | 2000-09-20 | Aventis Research & Technologies GmbH & Co. KG | Seed treatment composition |
| JP3566886B2 (ja) | 1999-06-16 | 2004-09-15 | 汎陽科学株式会社 | コーティング種子及びコーティング種子の製造方法 |
| US6403530B1 (en) * | 1999-12-20 | 2002-06-11 | Ag/Bio Con, Inc. | Carrier methodology for aerial dispersal and soil penetration of bioactive agents |
| US7772155B2 (en) * | 2001-05-30 | 2010-08-10 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Minister Of Agriculture And Agri-Food | Fungal isolates and biological control compositions for the control of weeds |
| NZ529796A (en) | 2001-05-30 | 2006-03-31 | Ca Minister Agriculture & Food | Fungal isolates and biological control compositions for the control of weeds |
-
2002
- 2002-05-30 NZ NZ529796A patent/NZ529796A/xx not_active IP Right Cessation
- 2002-05-30 MX MXPA03010896A patent/MXPA03010896A/es active IP Right Grant
- 2002-05-30 CA CA2448890A patent/CA2448890C/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-30 AU AU2002311116A patent/AU2002311116B2/en not_active Ceased
- 2002-05-30 US US10/478,829 patent/US8211830B2/en active Active
- 2002-05-30 ES ES02734935T patent/ES2347867T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-30 JP JP2002592726A patent/JP4597483B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2002-05-30 DE DE60236592T patent/DE60236592D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-30 AT AT02734935T patent/ATE469553T1/de active
- 2002-05-30 EP EP02734935A patent/EP1401284B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-30 WO PCT/CA2002/000797 patent/WO2002096204A1/en active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US8211830B2 (en) | 2012-07-03 |
| EP1401284B1 (en) | 2010-06-02 |
| US20050079978A1 (en) | 2005-04-14 |
| AU2002311116B2 (en) | 2008-02-28 |
| NZ529796A (en) | 2006-03-31 |
| WO2002096204A1 (en) | 2002-12-05 |
| MXPA03010896A (es) | 2004-02-27 |
| CA2448890A1 (en) | 2002-12-05 |
| JP2004531564A (ja) | 2004-10-14 |
| JP4597483B2 (ja) | 2010-12-15 |
| CA2448890C (en) | 2010-12-07 |
| EP1401284A1 (en) | 2004-03-31 |
| DE60236592D1 (de) | 2010-07-15 |
| ATE469553T1 (de) | 2010-06-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8465963B2 (en) | Grass endophyte enhanced attributes | |
| Hamilton et al. | Halyomorpha halys (Stål) | |
| US6268203B1 (en) | Biological control of purple loosestrife | |
| Stubbs et al. | Microbial weed control and microbial herbicides | |
| Ciancio et al. | Integrated management of diseases caused by fungi, phytoplasma and bacteria | |
| ES2681889T3 (es) | Control biológico de nematodos | |
| ES2347867T3 (es) | Aislados fúngicos y composiciones de control biológico para el control de malezas. | |
| CN102036564A (zh) | 对环境无害的植物保护剂 | |
| Bailey et al. | Plectosphaerella cucumerina as a bioherbicide for Cirsium arvense: proof of concept | |
| Clements et al. | The biology of Canadian weeds. 128. Leucanthemum vulgare Lam. | |
| AU2002311116A1 (en) | Fungal isolates and biological control compositions for the control of weeds | |
| Kilalo et al. | Monitoring of aphid fauna in passionfruit orchards in Kenya | |
| Goates et al. | Relationship between soilborne and seedborne inoculum density and the incidence of dwarf bunt of wheat | |
| Siva | Alternative strategies for broadleaf weed management in residential lawns | |
| Davis | Carrot diseases and their management | |
| Thakre | Biological Control of Citrus Psylla (Diaphorina citri) on Nagpur Mandarin | |
| Mirzadi Gohari et al. | Diseases of Temperate Nuts | |
| Sacher | Diseases of Rhododendron and Boxwood: Survey and Virulence of Phytophthora Root Rot and Management of Boxwood Blight with Systemic Fungicides | |
| RU2777770C2 (ru) | Нетоксичные композиции агента для растений, способы и их применения | |
| Medina-Urrutia et al. | Organic mango production: a review Campo Experimental Tecomán, Mexico | |
| Satyagopal et al. | AESA based IPM package for onion | |
| Stricker | Activated Resistance of Bentgrass Cultivars to Microdochium nivale under Predicted Climate Change Conditions | |
| Kumari et al. | Commercial Agriculture | |
| Turner | Studies with Puccinia obtegens for biological control of Canada thistle (Cirsium arvense) | |
| Ogle et al. | BIOCONTROL OF WEEDS USING PLANT PATHOGENS |