ES2345066T3 - Compuestos de triazolopirazina utiles para el tratamiento de enfermedades degenerativas e inflamatorias. - Google Patents
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Abstract
Un compuesto según la fórmula III: **(Ver fórmula)** en la que R1 es H, o alquilo sustituido o no sustituido; y cada uno de R8 y R9 se selecciona independientemente de cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido; o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco de los mismos, y estereoisómeros, variantes isotópicas y tautómeros de los mismos.
Description
Compuestos de triazolopirazina útiles para el
tratamiento de enfermedades degenerativas e inflamatorias.
La presente invención se refiere a una clase de
compuestos de triazolopirazina capaces de unirse al sitio activo de
una serina/treonina cinasa, cuya expresión está implicada en la ruta
que da como resultado la degradación de la matriz extracelular
(ECM), la degeneración articular y enfermedades que implican tal
degradación y/o inflamación.
Las enfermedades que implican la degradación de
la matriz extracelular incluyen, pero no se limitan a, artritis
psoriásica, artritis juvenil, artritis precoz, artritis reactiva,
osteoartritis, espondilitis anquilosante, osteoporosis,
enfermedades musculoesqueléticas como tendinitis, y enfermedad
periodontal, metástasis de cáncer, enfermedades de las vías
respiratorias (COPD, asma), fibrosis renal y hepática, enfermedades
cardiovasculares como aterosclerosis e insuficiencia cardíaca, y
enfermedades neurológicas como neuroinflamación y esclerosis
múltiple. Las enfermedades que implican principalmente la
degeneración articular incluyen, pero no se limitan a, artritis
psoriásica, artritis juvenil, artritis precoz, artritis reactiva,
osteoartritis, y espondilitis anquilosante.
La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad
degenerativa crónica de las articulaciones, caracterizada por
inflamación y destrucción de las estructuras articulares. Cuando la
enfermedad no se vigila, conduce a una sustancial discapacidad y
dolor debido a la pérdida de funcionalidad articular, e incluso a
muerte prematura. Por lo tanto, el objetivo de una terapia contra
la AR no es ralentizar la enfermedad sino lograr la remisión a fin
de detener la destrucción articular. Además de la gravedad del
resultado de la enfermedad, la elevada prevalencia de AR (\sim
0,8% de adultos están afectados a nivel mundial) representa un
elevado impacto socioeconómico. (Para repasos sobre AR, refiérase a
Smolen y Steiner (2003); Lee y Weinblatt (2001); Choy y Panayi
(2001); O'Dell (2004) y Firestein (2003)).
Aunque se acepta ampliamente que la AR es una
enfermedad autoinmunitaria, no hay consenso en cuanto a los
mecanismos precisos que conducen a la "etapa de iniciación" de
la enfermedad. Lo que se sabe es que el desencadenante o
desencadenantes iniciales median, en un hospedante predispuesto, una
cascada de sucesos que conducen a la activación de diversos tipos
celulares (células B, células T, macrófagos, fibroblastos, células
endoteliales, células dendríticas y otras). Concomitantemente, se
observa en las articulaciones y tejidos que rodean a la
articulación una producción incrementada de diversas citocinas (por
ejemplo, TNF-\alpha, IL-6,
IL-1, IL-15, IL-18
y otras). Cuando la enfermedad avanza, la activación celular y la
cascada de producción de citocinas se autoperpetúan. En esta etapa
temprana, ya es muy clara la destrucción de las estructuras
articulares. El treinta por ciento de los pacientes tienen signos
radiográficos de erosión ósea en el momento del diagnóstico, y esta
proporción aumenta hasta 60 por ciento después de dos años.
El análisis histológico de las articulaciones de
los pacientes con AR evidencia claramente los mecanismos implicados
en los procesos degradativos asociados con AR. Este análisis muestra
que el efector principal responsable de la degradación articular
asociada con AR es el paño sinovial, en el que el fibroblasto
sinovial, produciendo diversas enzimas proteolíticas, es el
conductor principal de la erosión ósea y del cartílago. Una
articulación contiene clásicamente dos huesos adyacentes que se
articulan sobre una capa de cartílago rodeada por la membrana
sinovial y la cápsula articular. En el paciente con AR avanzada, el
sinovio de la articulación aumenta de tamaño para formar el paño
sinovial, debido a la proliferación de los fibroblastos sinoviales y
la infiltración de células mononucleares tales como células T,
células B, monocitos, macrófagos y neutrófilos. El paño sinovial
media la degradación del cartílago adyacente, conduciendo al
estrechamiento del espacio articular, y tiene el potencial de
invadir el hueso y cartílago adyacentes. Puesto que los tejidos óseo
y de cartílago están compuestos principalmente de colágeno tipo I o
II, respectivamente, las propiedades destructivas e invasivas del
paño sinovial están mediadas por la secreción de proteasas
colagenolíticas, principalmente las metaloproteinasas de la matriz
(MMP). La erosión del hueso bajo y adyacente al cartílago también es
parte del proceso de la AR, y resulta principalmente de la
presencia de osteoclastos en la interfaz de hueso y paño sinovial.
Los osteoclastos son células multinucleadas que, al adherirse al
tejido óseo, forman un compartimiento cerrado, dentro del cual los
osteoclastos segregan proteasas (catepsina K, MMP9) que degradan el
tejido óseo. La población osteoclástica en la articulación está
anormalmente incrementada por la formación de osteoblastos a partir
de células precursoras indu-
cidas por la secreción del ligando de unión al Receptor Activador de NF\kappaB (RANKL) por SF y células T activados.
cidas por la secreción del ligando de unión al Receptor Activador de NF\kappaB (RANKL) por SF y células T activados.
Diversos tipos de colágeno tienen un papel clave
definiendo la estabilidad de la matriz extracelular (ECM). El tipo
I de colágeno y el tipo II de colágeno, por ejemplo, son los
componentes principales del hueso y cartílago, respectivamente. Las
proteínas de colágeno típicamente se organizan en estructuras
multiméricas denominadas como fibrilos de colágeno. Los fibrilos de
colágeno nativo son muy resistentes a la escisión proteolítica. Se
ha dado a conocer que sólo unos pocos tipos de proteínas que
degradan la ECM tienen la capacidad para degradar el colágeno
nativo: las MMP y las catepsinas. Entre las catepsinas, la mejor
caracterizada es la catepsina K, que es activa principalmente en
osteoclastos. Entre las MMP, se sabe que MMP1, MMP2, MMP8, MMP13 y
MMP14 tienen propiedades colagenolíticas. La correlación entre una
expresión incrementada de MMP1 por fibroblastos sinoviales (SF) y
la progresión de la enfermedad artrítica está bien probada, y es
predictiva de procesos erosivos de las articulaciones (Cunnane
et al., 2001). Por lo tanto, en el contexto de AR, MMP1
representa una proteína degradante de colágeno muy apropiada. In
vitro, el tratamiento de SF cultivados con citocinas apropiadas
en la patología de AR (por ejemplo, TNF-\alpha e
IL1\beta) incrementará la expresión de MMP1 por estas células
(Andreakos et al., 2003). Por lo tanto, la monitorización de
los niveles de MMP1 expresada por los SF es una lectura apropiada
en el campo de AR, puesto que es indicativa de la activación de los
SF con respecto a un fenotipo erosivo que, in vivo, es
responsable de la degradación del cartílago. La inhibición de la
expresión de MMP1 por los SF representa un enfoque terapéutico
valioso para el tratamiento de AR.
La actividad de las proteínas degradantes de ECM
también puede ser causal o se puede correlacionar con la progresión
de diversas enfermedades distintas de AR, por ejemplo otras
enfermedades que implican la degradación de las articulaciones.
Estas enfermedades incluyen, pero no se limitan a, artritis
psoriásica, artritis juvenil, artritis precoz, artritis reactiva,
osteoartritis y espondilitis anquilosante. Otras enfermedades que se
pueden tratar con los compuestos identificados según la presente
invención y que usan las dianas implicadas en la expresión de las
MMP como se describe aquí son osteoporosis, enfermedades
musculoesqueléticas como tendinitis y enfermedad periodontal
(Gapski et al., 2004), metástasis de cáncer (Coussens et
al., 2002), enfermedades de las vías respiratorias (COPD, asma)
(Suzuki et al., 2004), fibrosis pulmonar y renal (Schanstra
et al., 2002), fibrosis hepática asociada con hepatitis C
crónica (Reiff et al., 2005), enfermedades cardiovasculares
como aterosclerosis e insuficiencia cardíaca (Creemers et
al., 2001), y enfermedades neurológicas como neuroinflamación y
esclerosis múltiple (Rosenberg, 2002). Los pacientes que sufren
tales enfermedades se pueden beneficiar de la estabilización de la
ECM (protegiéndola de la degradación).
La serina/treonina cinasa de 471 aminoácidos
identificada como proteína cinasa 5 activada por proteína cinasas
activadas por mitógenos (MAPKAPK5 o PRAK) es expresada en un amplio
panel de tejidos. La proteína contiene su dominio catalítico en el
extremo N-terminal, y tanto una señal de
localización nuclear (NLS) como una señal de exportación nuclear
(NES) en su extremo C-terminal. La MAPKAPK5 endógena
está presente predominantemente en el citoplasma, pero el estrés o
la activación de las células por citocinas media su translocación al
núcleo (New et al., 2003). Este suceso depende de la
fosforilación de MAPKAPK5. Tr182 es el sitio de fosforilación
regulador de MAPKAPK5. Aunque la p38\alpha cinasa es capaz de
fosforilar MAPKAPK5 en un escenario de sobreexpresión, los
experimentos con MAPKAPK5 endógena no apoyan esta hipótesis (Shi
et al., 2003). Se han generado ratones a los que se les ha
suprimido el gen de MAPKAPK5 que son viables y fértiles. El fenotipo
de estos ratones es bastante diferente del de los ratones
deficientes para MAPKAPK2, una cinasa relacionada con MAPKAPK5 que
está regulada por p38\alpha (Shi et al., 2003). Esto indica
que la función de cada proteína es distinta, y que ninguna de estas
cinasas puede compensar la actividad de la otra. Tomadas juntas,
MAPKAPK5 y MAPKAPK2 representan dianas distintas con un papel no
redundante. MAPK6 (también denominada como ERK3) se ha identificado
recientemente como un sustrato fisiológicamente apropiado para
MAPKAPK5, definiendo una nueva ruta de transducción de señales
(Seternes et al., 2004).
Los NSAID (fármacos antiinflamatorios no
esteroideos) se usan para reducir el dolor asociado con AR, y
mejorar la calidad de vida de los pacientes. Sin embargo, estos
fármacos no frenarán la destrucción articular asociada con AR.
Se encontró que los corticosteroides disminuyen
la progresión de AR según se detectó radiográficamente, y se usan a
dosis bajas para tratar a parte de los pacientes con AR (30 a 60%).
Sin embargo, efectos secundarios graves están asociados con el uso
prolongado de corticosteroides (adelgazamiento de la piel,
osteoporosis, cataratas, hipertensión, hiperlipidemia).
Los DMARD (fármacos antirreumáticos que
modifican la enfermedad) sintéticos (por ejemplo, metotrexato,
leflunomida, sulfasalacina) abordan principalmente el componente
inmunoinflamatorio de AR. Como desventaja principal, estos fármacos
sólo tienen una eficacia limitada (la destrucción articular sólo se
ralentiza pero no es bloqueada por los DMARD, de forma que la
progresión de la enfermedad a largo plazo continúa). La falta de
eficacia está indicada por el hecho de que, de media, sólo el 30%
de los pacientes logran una puntuación de ACR40 después de un
tratamiento de 24 meses con metotrexato. Esto significa que, según
el American College of Rheumatology, sólo el 30% de los pacientes
logra una mejora del 50% de sus síntomas (O'Dell et al.,
1996). Además, a menudo no está claro el mecanismo preciso de acción
de los DMARD.
Los DMARD biológicos (Infliximab, Etanercept,
Adalimumab, Rituximab, CTLA4-Ig) son proteínas
terapéuticas que inactivan citocinas (por ejemplo
TNF-\alpha) o células (por ejemplo células T o
células B) que tienen un papel importante en la patofisiología de
la AR (Kremer et al., 2003; Edwards et al., 2004).
Aunque la terapia de combinación de bloqueadores de
TNF-\alpha (Infliximab, Etanercept, Adalimumab) y
metotrexato es el tratamiento más eficaz contra la AR actualmente
disponible, es llamativo que incluso esta terapia sólo logra una
mejora del 50% (ACR40) en los síntomas de la enfermedad en el
50-60% de los pacientes después de una terapia de 12
meses (St Clair et al., 2004). Existen algunas advertencias
de sucesos adversos para fármacos
anti-TNF-\alpha, arrojando luz
sobre los efectos secundarios asociados con este tipo de fármacos.
Se ha descrito un aumento del riesgo de infecciones (tuberculosis),
sucesos hematológicos y trastornos desmielinizantes para los
bloqueadores de TNF-\alpha (véase también
Gomez-Reino et al., 2003). Además de los
graves efectos secundarios, los bloqueadores de
TNF-\alpha también comparten las desventajas
generales de la clase biológica de compuestos terapéuticos, que son
la manera desagradable de administrarlos (inyecciones frecuentes
acompañadas de reacciones en el sitio de infusión) y el elevado
coste de producción. Los agentes más recientes en fase de desarrollo
tardía seleccionan como dianas a moléculas coestimulantes de
células T y a células B. Se espera que la eficacia de estos agentes
sea similar a la de los bloqueadores de
TNF-\alpha. El hecho de que una variedad de
terapias escogidas tengan eficacias similares pero limitadas
sugiere que hay una multiplicidad de factores patógenos para la AR.
Esto también es indicativo de las deficiencias en nuestra
comprensión de los sucesos patógenos que tienen que ver con la
AR.
Las terapias actuales para AR no son
satisfactorias debido a la eficacia limitada (no existe terapia
adecuada para el 30% de los pacientes). Esto exige estrategias
adicionales para lograr la remisión. La remisión es necesaria
puesto que la enfermedad residual conlleva el riesgo de un daño
articular progresivo y de este modo una discapacidad progresiva. La
inhibición del componente inmunoinflamatorio de la enfermedad de la
AR, que representa la diana principal de fármacos usados
actualmente para el tratamiento de AR, no da como resultado un
bloqueo de la degradación articular, el sello principal de la
enfermedad.
El documento US 2005/0009832 describe
imidazolo[1,2-a]pirazin-8-il-aminas
sustituidas como moduladores para proteína cinasas, incluyendo
MAPKAPK5. El documento W002/056888 describe inhibidores de MAPKAPK5
como moduladores de TNF capaces de regular la expresión de ciertas
citocinas. Ninguna de estas referencias de la técnica anterior
describe ningún compuesto dentro del alcance de la clase de
compuestos descritos aquí más abajo.
La presente invención se basa en el
descubrimiento de que las funciones de MAPKAPK5 en la ruta que da
como resultado la expresión de MMP1, y de que los inhibidores de la
actividad de MAPKAPK5, tales como los compuestos de la presente
invención, son útiles para el tratamiento de enfermedades que
implican la expresión anormalmente elevada de la actividad de las
MMP.
Los compuestos de la presente invención se
pueden describir generalmente como as
[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il-aminas
sustituidas en la posición 5 con un grupo arilo y heteroarilo, y en
la posición 8 con un grupo arilamino o heteroarilamino.
Más particularmente, la presente invención se
refiere a compuestos que tienen propiedades inhibidoras de las
metaloproteinasas de la matriz en una célula de mamífero, según la
fórmula III:
en la
que
- R^{1} es H, o alquilo sustituido o no sustituido; y cada uno de R^{8} y R^{9} se selecciona independientemente de cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido; o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco de los mismos, y estereoisómeros, variantes isotópicas y tautómeros de los mismos.
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} se selecciona de ciclopentilo
sustituido o no sustituido, ciclohexilo, fenilo sustituido o no
sustituido, piridilo sustituido o no sustituido, pirimidina
sustituida o no sustituida, y pirazina sustituida o no sustituida,
pirrol sustituido o no sustituido, pirazol sustituido o no
sustituido, e imidazol sustituido o no sustituido.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{1} es H, Me, Et,
i-Pr o CF_{3}.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{1} es H.
Otro aspecto de la presente invención se refiere
a compuestos según la fórmula IVa, IVb, IVc, o IVd:
y en las que L es un enlace, -CO-,
-O(CH_{2})_{m1}-,
-CON(H)(CH_{2})_{m1}-, o -NHCO-; el subíndice m1
se selecciona de 1-4; el anillo P es
heterocicloalquilo sustituido o no sustituido; el subíndice n se
selecciona de 1-4; cada R^{8a} se selecciona
independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido,
alcoxi, ciano, carbamoílo, CHO, y halo; y R^{9} se selecciona
independientemente de arilo y heteroarilo sustituido o no
sustituido; o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o
profármaco de los mismos, y estereoisómeros, variantes isotópicas y
tautómeros de los
mismos.
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas III-IVd, R^{9} es arilo
sustituido o no sustituido. En otra realización, R^{9} es fenilo
sustituido o no sustituido.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas III-IVd, R^{9} es
heteroarilo sustituido o no sustituido. En otra realización, R^{9}
es piridilo sustituido o no sustituido.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas III-IVd, R^{9} se
selecciona de fenilo sustituido o no sustituido, indolilo,
isoindolilo, pirrolilo, furanilo, tienilo, pirazolilo, oxazolilo, y
tiazolilo.
En un aspecto adicional, la presente invención
proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto
de triazolopirazina de la invención, y un vehículo, excipiente o
diluyente farmacéutico. En este aspecto de la invención, la
composición farmacéutica puede comprender uno o más de los
compuestos descritos aquí. Además, los compuestos de la presente
invención útiles en las composiciones farmacéuticas y métodos de
tratamiento descritos aquí son todos farmacéuticamente aceptables
según se preparan y se usan.
Otro aspecto de esta invención se refiere al uso
del presente compuesto en un método terapéutico, a una composición
farmacéutica, y a la fabricación de tal composición, útil para el
tratamiento de enfermedades que implican inflamación, degradación
del colágeno, y en particular enfermedades características de una
actividad anormal de las metaloproteinasas de la matriz (MMPI) y/o
de la proteína cinasa 5 activada por proteína cinasas activadas por
mitógenos (MAPKAPK5), de las cuales la artritis reumatoide (AR) es
una enfermedad particular de tales enfermedades. Esta invención
también se refiere a procedimientos para la preparación de los
presentes compuestos.
Otros objetos y ventajas serán manifiestos para
los expertos en la técnica a partir de la consideración de la
descripción detallada que sigue, que transcurre con referencia a los
siguientes dibujos ilustrativos.
Figura 1. Este diagrama muestra las llamativas
diferencias histológicas entre una articulación sana y aquella de un
paciente con AR.
Figura 2. Esta gráfica muestra el aumento de
expresión de MMP1 en fibroblastos sinoviales activados con citocinas
implicadas en la patología de la artritis reumatoide.
Figura 3. Esta gráfica muestra la inhibición,
dependiente de la dosis, de la expresión de MMP1, inducida por la
"activación a base de TNF-\alpha", mediante
los SF por un compuesto antiinflamatorio conocido.
Figura 4. Este gel muestra la reducción, a nivel
proteico, de la expresión de MAPKAPK5 en los SF mediante infección
de las células con un virus de Ad-siRNA dirigido
contra MAPKAPK5.
Figura 5. Esta gráfica muestra la reducción de
los niveles, inducidos por el "activador complejo", de la
expresión de MMP1 mediante los SF por un virus de
Ad-siRNA dirigido contra MAPKAPK5.
A la hora de describir los compuestos, las
composiciones farmacéuticas que contienen tales compuestos, y los
métodos de uso de tales compuestos y composiciones, los siguientes
términos tienen los siguientes significados, excepto que se indique
de otro modo.
"Alcoxi" significa
alquil-O-. Los alcoxi ejemplares incluyen metoxi,
etoxi, n-propoxi, i-propoxi,
n-butoxi, y heptoxi. Los grupos alcoxi preferidos
son alcoxi inferior.
"Alquilo" significa un hidrocarburo
alifático lineal o ramificado que tiene 1 a alrededor de 20 átomos
de carbono. El alquilo preferido tiene 1 a alrededor de 12 átomos
de carbono. Es más preferido el alquilo inferior. Ramificado
significa que uno o más grupos alquilo inferior, tal como metilo,
etilo o propilo, está unido a la cadena de alquilo lineal.
"Alquilamino" significa
alquil-NH. El alquilamino preferido es alquilamino
de (C_{1}-C_{6}). El alquilamino ejemplar
incluye metilamino y etilamino.
"Aminoalcanoílo inferior" significa
NH_{2}-R-CO-, en la que R es
alquileno inferior. Los grupos preferidos incluyen aminoetanoílo y
aminoacetilo.
"Carbamoilalquilo inferior" significa el
radical NH_{2}CO-alquilo inferior. Grupos
preferidos incluyen carbamoiletilo y carbamoilmetilo.
"Éster de alquilo inferior de carboxi"
significa un éster de alquilo inferior de un radical carboxi,
-COO-grupo.
"Compuestos de la presente invención", y
expresiones equivalentes, abarcan compuestos de Fórmula (III) como
se describe aquí anteriormente, expresión la cual incluye los
profármacos, las sales farmacéuticamente aceptables, y los
solvatos, por ejemplo hidratos, cuando así lo permita el contexto.
De forma similar, la referencia a intermedios, ya sea que se
reivindiquen por sí mismos o no, abarcan sus sales, y solvatos,
cuando así lo permita el contexto.
"Expresión" significa expresión
endógena.
"Halo" o "halógeno" significa fluoro,
cloro, bromo, o yodo.
"Hidrógeno" significa, en el contexto de un
sustituyente, que -H está presente en la posición del compuesto, y
también incluye su isótopo, el deuterio.
"Alcanoilamino inferior" significa un grupo
amino con un grupo funcional orgánico R-CO-, en el
que R representa un grupo alquilo inferior.
"Alquilo inferior" significa 1 a alrededor
de 6 átomos de carbono en una cadena de alquilo lineal que puede ser
lineal o ramificada.
"Alcoxi inferior" significa 1 a alrededor
de 6 átomos de carbono en una cadena de alquilo lineal que puede ser
lineal o ramificada, y que está enlazada mediante un átomo de
oxígeno.
"Alquilsulfonamida inferior" se refiere a
una alquilamida inferior de sulfonamida de la fórmula
-SO_{2}NR*R*, en la que R* es hidrógeno o alquilo inferior, y al
menos uno de R* es alquilo inferior.
"Profilaxis" significa una medida tomada
para la prevención de una enfermedad.
"Solvato" significa una asociación física
de un compuesto útil en esta invención con una o más moléculas de
disolvente. Esta asociación física incluye el enlace de hidrógeno.
En ciertos casos, el solvato se podrá aislar, por ejemplo cuando se
incorporan una o más moléculas de disolvente en la red cristalina
del sólido cristalino. "Solvato" engloba solvatos tanto en
fase de disolución como aislables. Los compuestos de la invención se
pueden preparar por ejemplo en forma cristalina y se pueden
solvatar o hidratar. Los solvatos adecuados incluyen solvatos
farmacéuticamente aceptables, tales como hidratos, y además incluyen
tanto solvatos estequiométricos como solvatos no estequiométricos.
Por lo tanto, los disolventes convencionales incluyen agua, etanol,
ácido acético, y similares, y los solvatos representativos incluyen
hidratos, etanolatos y metanolatos.
"Sustituido" significa que un átomo o grupo
de átomos en una molécula está sustituido por otro átomo o
grupo.
"Sulfonamida" se refiere a un grupo de
compuestos que contienen el grupo químico -SO_{2}NH_{2}.
"Cantidad terapéuticamente eficaz"
significa aquella cantidad de un fármaco o agente farmacéutico que
provocará la respuesta biológica o médica de un sujeto que es
buscada por un médico o internista. La "cantidad terapéuticamente
eficaz" puede variar dependiendo del compuesto, la enfermedad y
su gravedad, y la edad, peso, etc., del sujeto a tratar. En
particular, con respecto a tratar una afección caracterizada por la
degradación de la matriz extracelular, la expresión "cantidad
eficaz inhibidora de las metaloproteasas de la matriz" quiere
decir aquella cantidad eficaz de un compuesto de la presente
invención que provocará una disminución biológicamente significativa
en la producción de MMP1 en los tejidos afectados por la enfermedad
del sujeto, de forma que se reduce significativamente la
degradación de la matriz extracelular. Un compuesto que tiene
propiedades inhibidoras de las metaloproteasas de la matriz, o un
"compuesto inhibidor de las metaloproteasas de la matriz",
significa un compuesto de la presente invención que, proporcionado
a una célula en cantidades eficaces, es capaz de provocar una
disminución biológicamente significativa en la producción de
MMP-1 en tales células.
"Arilo" se refiere a un grupo
hidrocarbonato aromático monovalente derivado de la eliminación de
un átomo de hidrógeno de un único átomo de carbono de un sistema de
anillo aromático parental. Los grupos arilo típicos incluyen, pero
no se limitan a, grupos derivados de aceantrileno, acenaftileno,
acefenantrileno, antraceno, azuleno, benceno, criseno, coroneno,
fluoranteno, fluoreno, hexaceno, hexafeno, hexaleno,
as-indaceno, s-indaceno, indano, indeno,
naftaleno, octaceno, octafeno, octaleno, ovaleno,
penta-2,4-dieno, pentaceno,
pentaleno, pentafeno, perileno, fenaleno, fenantreno, piceno,
pleyadeno, pireno, pirantreno, rubiceno, trifenileno, trinaftaleno
y similares. Particularmente, un grupo arilo comprende de 6 a 14
átomos de carbono.
"Arilo sustituido" incluye aquellos grupos
citados en la definición de "sustituido" de esta memoria, y se
refiere particularmente a un grupo arilo que se puede sustituir
opcionalmente con uno o más sustituyentes, por ejemplo de 1 a 5
sustituyentes, particularmente 1 a 3 sustituyentes, seleccionados
del grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alquenilo,
alquenilo sustituido, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo,
alquilo, alquilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, amino,
amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino,
aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano,
cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halógeno, hidroxilo, nitro,
tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tiol,
alquil-S(O)-,
aril-S(O)-,
alquil-S(O)_{2}- y
aril-S(O)_{2}-.
"Bicicloarilo" se refiere a un grupo
hidrocarbonado aromático monovalente derivado de la eliminación de
un átomo de hidrógeno de un único átomo de carbono de un sistema
anular bicicloaromático parental. Los grupos bicicloarílicos
típicos incluyen, pero no se limitan a, grupos derivados de indano,
indeno, naftaleno, tetrahidronaftaleno, y similares.
Particularmente, un grupo arilo comprende de 8 a 11 átomos de
carbono.
"Bicicloheteroarilo" se refiere a un grupo
bicicloheteroaromático monovalente derivado de la eliminación de un
átomo de hidrógeno de un único átomo de un sistema anular
bicicloheteroaromático parental. Los grupos bicicloheteroarílicos
típicos incluyen, pero no se limitan a, grupos derivados de
benzofurano, bencimidazol, bencindazol, benzdioxano, cromeno,
cromano, cinolina, ftalacina, indol, indolina, indolicina,
isobenzofurano, isocromeno, isoindol, isoindolina, isoquinolina,
benzotiazol, benzoxazol, naftiridina, benzoxadiazol, pteridina,
purina, benzopirano, benzpiracina, piridopirimidina, quinazolina,
quinolina, quinolicina, quinoxalina, benzomorfano,
tetrahidroisoquinolina, tetrahidroquinolina, y similares.
Preferiblemente, el grupo bicicloheteroarilo es un
bicicloheteroarilo entre 9-11 miembros, siendo
particularmente preferido el heteroarilo de 5-10
miembros. Los grupos bicicloheteroarílicos particulares son
aquellos derivados de benzotiofeno, benzofurano, benzotiazol, indol,
quinolina, isoquinolina, bencimidazol, benzoxazol y benzdioxano.
"Carbamoílo" se refiere al radical
-C(O)N(R^{42})_{2}, en el que cada
grupo R^{42} es independientemente hidrógeno, alquilo,
cicloalquilo o arilo, como se define aquí, que puede estar
opcionalmente sustituido como se define aquí. En una realización
específica, el término "carbamoílo" se refiere a
-C(O)-NH_{2}.
"Cicloalquilo" se refiere a grupos
hidrocarbílicos cíclicos que tienen de 3 a alrededor de 10 átomos de
carbono y que tienen un solo anillo cíclico o múltiples anillos
condensados, incluyendo sistemas anulares condensados y en puente,
que opcionalmente pueden estar sustituidos con 1 a 3 grupos alquilo.
Tales grupos cicloalquilo incluyen, a título de ejemplo,
estructuras de un solo anillo tales como ciclopropilo, ciclobutilo,
ciclopentilo, ciclooctilo. 1-metilciclopropilo,
2-metilciclopentilo,
2-metilciclooctilo, y similares, y estructuras de
múltiples anillos, tales como adamantanilo, y similares.
"Cicloalquilo sustituido" incluye aquellos
grupos citados en la definición de "sustituido" de esta
memoria, y particularmente se refiere a un grupo cicloalquilo que
tiene 1 o más sustituyentes, por ejemplo de 1 a 5 sustituyentes, y
particularmente de 1 a 3 sustituyentes, seleccionados del grupo que
consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxi sustituido,
alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, amino sustituido,
aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo,
ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo
sustituido, halógeno, hidroxilo, ceto, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi
sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol,
alquil-S(O)-,
aril-S(O)-,
alquil-S(O)_{2}- y
aril-S(O)_{2}-.
"Sustituido" se refiere a un grupo en el
que uno o más átomos de hidrógeno se sustituyen cada uno
independientemente por el mismo o diferente sustituyente o
sustituyentes. Los sustituyentes típicos incluyen, pero no se
limitan a, -X, -R^{46}, -O-, =O, -OR^{46}, -SR^{46}, -S-, =S,
-NR^{46}R^{47}, =NR^{46}, -CX_{3}, -CF_{3}, -CN, -OCN,
-SCN, -NO, -NO_{2}, =N_{2},
-N_{3}, -S(O)_{2}O-, -S(O)_{2}OH, -S(O)_{2}R^{46}, -OS(O_{2})O-, -OS(O)_{2}R^{46}, -P(O)(O^{-})_{2}, -P(O)(OR^{46})(O^{-}), -OP(O)(OR^{46})(OR^{47}),
-C(O)R^{46}, -C(S)R^{46}, -C(O)OR^{46}, -C(O)NR^{46}R^{47}, -C(O)O-, -C(S)OR^{46}, -NR^{48}C(O)NR^{46}R^{47}, -NR^{48}C(S)NR^{46}R^{47}, -NR^{49}C(NR^{48})NR^{46}R^{47} y -C(NR^{48})NR^{46}R^{47}, en los que cada X es independientemente un halógeno; cada R^{46}, R^{47}, R^{48} y R^{49} son independientemente hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, arilalquilo, arilalquilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, cicloheteroalquilo, cicloheteroalquilo sustituido, heteroalquilo, heteroalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heteroarilalquilo, heteroarilalquilo sustituido, -NR^{50}R^{51}, -C(O)R^{50} o
-S(O)_{2}R^{50}, u opcionalmente R^{50} y R^{51}, junto con el átomo al que ambos están unidos, forman un anillo de cicloheteroalquilo o de cicloheteroalquilo sustituido; y R^{50} y R^{51} son independientemente hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, arilalquilo, arilalquilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, cicloheteroalquilo, cicloheteroalquilo sustituido, heteroalquilo, heteroalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heteroarilalquilo, o heteroarilalquilo sustituido.
-N_{3}, -S(O)_{2}O-, -S(O)_{2}OH, -S(O)_{2}R^{46}, -OS(O_{2})O-, -OS(O)_{2}R^{46}, -P(O)(O^{-})_{2}, -P(O)(OR^{46})(O^{-}), -OP(O)(OR^{46})(OR^{47}),
-C(O)R^{46}, -C(S)R^{46}, -C(O)OR^{46}, -C(O)NR^{46}R^{47}, -C(O)O-, -C(S)OR^{46}, -NR^{48}C(O)NR^{46}R^{47}, -NR^{48}C(S)NR^{46}R^{47}, -NR^{49}C(NR^{48})NR^{46}R^{47} y -C(NR^{48})NR^{46}R^{47}, en los que cada X es independientemente un halógeno; cada R^{46}, R^{47}, R^{48} y R^{49} son independientemente hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, arilalquilo, arilalquilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, cicloheteroalquilo, cicloheteroalquilo sustituido, heteroalquilo, heteroalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heteroarilalquilo, heteroarilalquilo sustituido, -NR^{50}R^{51}, -C(O)R^{50} o
-S(O)_{2}R^{50}, u opcionalmente R^{50} y R^{51}, junto con el átomo al que ambos están unidos, forman un anillo de cicloheteroalquilo o de cicloheteroalquilo sustituido; y R^{50} y R^{51} son independientemente hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, arilalquilo, arilalquilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, cicloheteroalquilo, cicloheteroalquilo sustituido, heteroalquilo, heteroalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heteroarilalquilo, o heteroarilalquilo sustituido.
Los ejemplos de arilos sustituidos
representativos incluyen los siguientes
En estas formulas, uno de R^{52} y R^{53}
puede ser hidrógeno y al menos uno de R^{52} y R^{53} se
selecciona cada uno independientemente de alquilo, alquenilo,
alquinilo, cicloheteroalquilo, alcanoílo, alcoxi, ariloxi,
heteroariloxi, alquilamino, arilamino, heteroarilamino,
NR^{54}COR^{55}, NR^{54}SOR^{55},
NR^{54}SO_{2}R^{57}, COOalquilo, COOarilo,
CONR^{54}R^{55}, CONR^{54}OR^{55}, NR^{54}R^{55},
SO_{2}NR^{54}R^{55}, S-alquilo,
S-alquilo, SOalquilo, SO_{2}alquilo,
S-arilo, SOarilo, SO_{2}arilo; o R^{52} y
R^{53} se pueden unir para formar un anillo cíclico (saturado o
insaturado) de 5 a 8 átomos, que contiene opcionalmente uno o más
heteroátomos seleccionados del grupo N, O o S. R^{54}, R^{55}, y
R^{56} son independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo,
alquinilo, perfluoroalquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo,
arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heteroalquilo sustituido o o
similar.
"Hetero", cuando se usa para describir un
compuesto o un grupo presente en un compuesto, significa que uno o
más átomos de carbono en el compuesto o grupo se han sustituido por
un heteroátomo de nitrógeno, oxígeno, o azufre. Hetero se puede
aplicar a cualquiera de los grupos hidrocarbilo descritos
anteriormente, tales como alquilo, por ejemplo
heteroalquilo, cicloalquilo, por ejemplo cicloheteroalquilo,
arilo, por ejemplo heteroarilo, cicloalquenilo, por
ejemplo cicloheteroalquenilo, y similares, que tienen de 1 a 5,
y especialmente 1 a 3 heteroátomos.
"Heteroarilo" se refiere a un grupo
heteroaromático monovalente derivado de la eliminación de un átomo
de hidrógeno de un único átomo de un sistema anular heteroaromático
parental. Los grupos heteroarílicos típicos incluyen, pero no se
limitan a, grupos derivados de acridina, arsindol, carbazol,
\beta-carbolina, cromano, cromeno, cinolina,
furano, imidazol, indazol, indol, indolina, indolizina,
isobenzofurano, isocromeno, isoindol, isoindolina, isoquinolina,
isotiazol, isoxazol, naftiridina, oxadiazol, oxazol, perimidina,
fenantridina, fenantrolina, fenazina, ftalazina, pteridina, purina,
pirano, pirazina, pirazol, piridazina, piridina, pirimidina,
pirrol, pirrolizina, quinazolina, quinolina, quinolizina,
quinoxalina, tetrazol, tiadiazol, tiazol, tiofeno, triazol,
xanteno, y similares. Preferiblemente, el grupo heteroarílico es
heteroarilo entre 5-15 miembros, siendo
particularmente preferido heteroarilo de 5-10
miembros. Los grupos heteroarílicos particulares son aquellos
derivados de tiofeno, pirrol, benzotiofeno, benzofurano, indol,
piridina, quinolina, imidazol, oxazol y pirazina.
Ejemplos de heteroarilos representativos
incluyen los siguientes:
en los que cada Y se selecciona de
carbonilo, N, NR^{58}, O, y S; y R^{58} es independientemente
hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo,
heteroarilo, heteroalquilo o
similar.
\vskip1.000000\baselineskip
Como se usa aquí, el término
"cicloheteroalquilo" se refiere a un anillo no aromático
heterocíclico estable y anillos condensados que contienen uno o más
heteroátomos seleccionados independientemente de N, O y S. Un
sistema de anillo heterocíclico condensado puede incluir anillos
carbocíclicos, y sólo necesita incluir un anillo heterocíclico. Los
ejemplos de anillos heterocíclicos incluyen, pero no se limitan a,
piperazinilo, homopiperazinilo, piperidinilo y morfolinilo, y se
muestran en los siguientes ejemplos ilustrativos:
en los que cada X se selecciona de
CR^{58}_{2}, NR^{58}, O y S; y cada Y se selecciona de
NR^{58}, O y S; y R^{58} es independientemente hidrógeno,
alquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo, heteroarilo,
heteroalquilo o similar. Estos anillos cicloheteroalquílicos pueden
estar opcionalmente sustituidos con uno o más grupos seleccionados
del grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxi
sustituido, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, amino
sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi,
arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo
sustituido, halógeno, hidroxilo, ceto, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi
sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol,
alquil-S(O)-,
aril-S(O)-,
alquil-S(O)_{2}- y
aril-S(O)_{2}-. Los grupos
sustituyentes incluyen carbonilo o tiocarbonilo, que proporcionan,
por ejemplo, derivados de lactama y de
urea.
\vskip1.000000\baselineskip
Los ejemplos de cicloheteroalquenilos
representativos incluyen los siguientes:
en los que cada X se selecciona de
CR^{58}_{2}, NR^{58}, O y S; y cada Y se selecciona de
carbonilo, N, NR^{58}, O y S; y R^{58} es independientemente
hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo,
heteroarilo, heteroalquilo o
similar.
\vskip1.000000\baselineskip
Los ejemplos de arilo representativo que tienen
heteroátomos que contienen sustitución incluyen los siguientes:
en los que cada X se selecciona de
C-R^{58}_{2}, NR^{58}, O y S; y cada Y se
selecciona de carbonilo, NR^{58}, O y S; y R^{58} es
independientemente hidrógeno, alquilo, cicloalquilo,
cicloheteroalquilo, arilo, heteroarilo, heteroalquilo o
similar.
\vskip1.000000\baselineskip
Una persona que tenga pericia normal en la
técnica de síntesis orgánica reconocerá que el número máximo de
heteroátomos en un anillo heterocíclico estable, químicamente
factible, tanto si es aromático como no aromático, está determinado
por el tamaño del anillo, el grado de insaturación y la valencia de
los heteroátomos. En general, un anillo heterocíclico puede tener
uno a cuatro heteroátomos en tanto que el anillo heteroaromático sea
químicamente factible y estable.
"Farmacéuticamente aceptable" significa
aprobado por una agencia reguladora del gobierno Federal o de un
Estado o listada en la Farmacopea de los Estados Unidos de América u
otra farmacopea generalmente reconocida para uso en animales, y más
particularmente en seres humanos.
\newpage
"Sal farmacéuticamente aceptable" se
refiere a las sales de adición de ácidos inorgánicos y orgánicos, y
sales de adición de bases, no tóxicas, de compuestos de la presente
invención, en particular son farmacéuticamente aceptables y poseen
la actividad farmacológica deseada del compuesto parental. Estas
sales se pueden preparar in situ durante el aislamiento y
purificación final de los compuestos útiles en la presente
invención. Tales sales incluyen: (1) sales de adición de ácidos,
formadas con ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido
bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, y
similares; o formadas con ácidos orgánicos tales como ácido
acético, ácido propiónico, ácido hexanoico, ácido
ciclopentanopropiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido
láctico, ácido malónico, ácido succínico, ácido málico, ácido
maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido
benzoico, ácido 3-(4-hidroxibenzoil)benzoico,
ácido cinámico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido
etanosulfónico, ácido 1,2-etanodisulfónico, ácido
2-hidroxietanosulfónico, ácido bencenosulfónico,
ácido 4-clorobencenosulfónico, ácido
2-naftalenosulfónico, ácido
4-toluenosulfónico, ácido canfosulfónico, ácido
4-metilbiciclo[2.2.2]-oct-2-en-1-carboxílico,
ácido glucoheptónico, ácido 3-fenilpropiónico,
ácido trimetilacético, ácido terc-butilacético,
ácido laurilsulfúrico, ácido glucónico, ácido glutámico, ácido
hidroxinaftoico, ácido salicílico, ácido esteárico, ácido mucónico,
y similares; o (2) sales formadas cuando un protón ácido presente
en el compuesto parental se sustituye por un ion metálico, por
ejemplo un ion de metal alcalino, un ion de metal
alcalinotérreo, o un ion de aluminio; o se coordina con una base
orgánica tal como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina,
N-metilglucamina, y similares. Las sales incluyen
además, sólo a título de ejemplo, sales de sodio, potasio, calcio,
magnesio, amonio, tetraalquilamonio, y similares; y cuando el
compuesto contiene una funcionalidad básica, las sales de ácidos
orgánicos o inorgánicos no tóxicos, tales como hidrocloruro,
hidrobromuro, tartrato, mesilato, acetato, maleato, oxalato y
similares. La expresión "catión farmacéuticamente aceptable"
se refiere a un contraion catiónico aceptable, no tóxico, de un
grupo funcional ácido. Tales cationes se ejemplifican mediante
cationes de sodio, potasio, calcio, magnesio, amonio,
tetraalquilamonio, y similares.
"Vehículo farmacéuticamente aceptable" se
refiere a un diluyente, adyuvante, excipiente o portador con el que
se administra un compuesto de la invención.
"Prevenir" o "prevención" se refiere a
una reducción en el riesgo de adquirir una enfermedad o trastorno
(es decir, que hace que al menos uno de los síntomas clínicos de la
enfermedad no se desarrolle en un sujeto que puede estar expuesto a
o predispuesto a la enfermedad, pero que todavía no experimenta o
presenta síntomas de la enfermedad).
"Profármacos" se refiere a compuestos,
incluyendo derivados de los compuestos de la invención, que tienen
grupos escindibles y se convierten, mediante solvolisis o en
condiciones fisiológicas, en los compuestos de la invención que son
farmacéuticamente activos in vivo. Tales ejemplos incluyen,
pero no se limitan a, derivados de éster de colina y similares,
ésteres de N-alquil-morfolina y
similares.
"Sujeto" incluye seres humanos. Los
términos "ser humano", "paciente" y "sujeto" se usan
aquí de forma intercambiable.
"Tratar" o "tratamiento" de cualquier
enfermedad o trastorno se refiere, en una realización, a mejorar la
enfermedad o trastorno (es decir, detener o reducir el
desarrollo de la enfermedad, o al menos uno de sus síntomas
clínicos). En otra realización, "tratar" o "tratamiento"
se refiere a mejorar al menos un parámetro físico, que puede ser no
discernible por el sujeto. Todavía en otra realización,
"tratar" o "tratamiento" se refiere a modular la
enfermedad o trastorno, ya sea físicamente (por ejemplo,
estabilización de un síntoma discernible) fisiológicamente (por
ejemplo, estabilización de un parámetro físico), o ambos.
Todavía en otra realización, "tratar" o "tratamiento" se
refiere a retrasar el comienzo de la enfermedad o trastorno.
Otros derivados de los compuestos de esta
invención tienen actividad tanto en su forma ácida como en su forma
de derivado de ácido, pero la forma sensible a ácidos a menudo
ofrece ventajas de solubilidad, compatibilidad tisular, o
liberación retrasada en el organismo del mamífero (véase, Bundgard,
H., Design of Prodrugs, p. 7-9,
21-24, Elsevier, Ámsterdam 1985). Los profármacos
incluyen derivados de ácidos bien conocidos por los practicantes de
la técnica, tales como, por ejemplo, ésteres preparados mediante
reacción del ácido parental con un alcohol adecuado, o amidas
preparadas mediante reacción del compuesto ácido parental con una
amina sustituida o no sustituida, o anhídridos de ácido, o
anhídridos mixtos. Los ésteres, amidas y anhídridos alifáticos o
aromáticos simples, derivados de grupos ácidos que cuelgan en los
compuestos de esta invención, son profármacos preferidos. En
algunos casos es deseable preparar profármacos del tipo de ésteres
dobles, tales como ésteres de (aciloxi)alquilo o ésteres de
((alcoxicarbonil)oxi)alquilo. Se prefieren los ésteres
alquílicos de C_{1} a C_{8}, alquenílicos de
C_{2}-C_{8}, arílicos, arílicos sustituidos de
C_{7}-C_{12}, y arilalquílicos de
C_{7}-C_{12} de los compuestos de la
invención.
Como se usa aquí, la expresión "variante
isotópica" se refiere a un compuesto que contiene proporciones no
naturales de isótopos en uno o más de los átomos que constituyen
tal compuesto. Por ejemplo, una "variante isotópica" de un
compuesto puede contener uno o más isótopos no radiactivos, tales
como, por ejemplo, deuterio (^{2}H o D), carbono 13 (^{13}C),
nitrógeno-15 (^{15}N), o similares. Se entenderá
que, en un compuesto en el que se realiza tal sustitución
isotópica, los siguientes átomos, cuando están presentes, pueden
variar, de forma que, por ejemplo, cualquier hidrógeno puede ser
^{2}H/D, cualquier carbono puede ser ^{13}C, o cualquier
nitrógeno puede ser ^{15}N, y que la presencia y situación de
tales átomos puede ser determinada dentro de la pericia de la
técnica. Igualmente, la invención puede incluir la preparación de
variantes isotópicas con radioisótopos, en el caso por ejemplo en
el que los compuestos resultantes se pueden usar para estudios de
distribución tisular de fármacos y/o sustratos. Los isótopos
radioactivos tritio, es decir, ^{3}H, y
carbono-14, es decir, ^{14}C, son
particularmente útiles para este fin en vista de su fácil
incorporación y su fácil medio de detección. Además, se pueden
preparar compuestos que están sustituidos con isótopos emisores de
positrones, tales como ^{11}C, ^{18}F, ^{15}O y ^{13}N, y
serían útiles en estudios de Topografía de Emisión de Positrones
(PET), para examinar la ocupación del receptor del sustrato.
Todas las variantes isotópicas de los compuestos
proporcionadas aquí, sean radiactivas o no, están destinadas a estar
englobadas en el alcance de la invención.
También se entiende que los compuestos que
tienen la misma fórmula molecular pero difieren en la naturaleza o
secuencia de enlace de sus átomos o la disposición de sus átomos en
el espacio se denominan "isómeros". Los isómeros que difieren
en la disposición de sus átomos en el espacio se denominan
"estereoisómeros".
Los estereoisómeros que no son imágenes
especulares uno del otro se denominan "diastereómeros", y
aquellos que son imágenes especulares no superponibles entre sí se
denominan "enantiómeros". Cuando un compuesto tiene un centro
asimétrico, por ejemplo está enlazado a cuatro grupos diferentes, es
posible un par de enantiómeros. Un enantiómero se puede
caracterizar mediante la configuración absoluta de su centro
asimétrico, y se describe por las reglas de secuenciación R y S de
Cahn y Prelog, o por la manera en la que la molécula gira el plano
de luz polarizada y se denomina como dextrorrotatorio o
levorrotatorio (es decir, como isómeros (+) o (-),
respectivamente). Un compuesto quiral puede existir como un
enantiómero individual o como una mezcla de los mismos. Una mezcla
que contiene proporciones iguales de los enantiómeros se denomina
una "mezcla racémica".
"Tautómeros" se refiere a compuestos que
son formas intercambiables de una estructura de un compuesto
particular, y que varían en la colocación de los átomos de
hidrógeno y los electrones. De este modo, dos estructuras pueden
estar en equilibrio a través del movimiento de los electrones \pi
y un átomo (habitualmente H). Por ejemplo, los enoles y cetonas son
tautómeros debido a que se interconvierten rápidamente mediante
tratamiento con un ácido o una base. Otro ejemplo de tautomería es
las formas aci y nitro del fenilnitrometano, que igualmente se
forman mediante tratamiento con un ácido o una base.
Las formas tautómeras pueden ser apropiadas para
el logro de la reactividad química y actividad biológica óptimas de
un compuesto de interés.
Los compuestos de esta invención pueden poseer
uno o más centros asimétricos; por lo tanto, tales compuestos se
pueden producir como estereoisómeros (R) o (S) individuales, o como
mezclas de los mismos. Excepto que se indique de otro modo, la
descripción o nomenclatura de un compuesto particular en la memoria
descriptiva y en las reivindicaciones pretenden incluir tanto
enantiómeros individuales como mezclas, racémicas o de otro modo,
de los mismos. Los métodos para la determinación de la
estequiometría y la separación de estereoisómeros son bien conocidos
en la técnica.
La presente invención se basa en el
descubrimiento de que las funciones de MAPKAPK5 en la ruta que da
como resultado la expresión de MMP1, y de que los inhibidores de la
actividad de MAPKAPK5, tales como los compuestos de la presente
invención, son útiles para el tratamiento de enfermedades que
implican la expresión anormalmente elevada de la actividad de
MMP.
Los compuestos de la presente invención se
pueden describir generalmente como
[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il-aminas
sustituidas en el grupo en la posición 5, y en la posición 8.
La presente invención se refiere a compuestos
según la fórmula III:
en la que R^{1} es H, o alquilo
sustituido o no sustituido; y cada uno de R^{8} y R^{9} se
selecciona independientemente de cicloalquilo sustituido o no
sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo
sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido;
o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco de los
mismos, y estereoisómeros, variantes isotópicas y tautómeros de los
mismos.
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} se selecciona de ciclopentilo
sustituido o no sustituido, ciclohexilo, fenilo sustituido o no
sustituido, piridilo sustituido o no sustituido, pirimidina
sustituida o no sustituida, y pirazina sustituida o no sustituida,
pirrol sustituido o no sustituido, pirazol sustituido o no
sustituido, e imidazol sustituido o no sustituido.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{1} es H, Me, Et,
i-Pr o CF_{3}.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{1} es H.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} se selecciona de cicloalquilo
sustituido o no sustituido.
En otra realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} se selecciona de ciclohexilo o
ciclopentilo sustituido o no sustituido.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} se selecciona de
heterocicloalquilo sustituido o no sustituido.
En otra realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} se selecciona de piperidinilo,
morfolinilo o pirrolidinilo sustituido o no sustituido.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} se selecciona de fenilo, piridilo
o pirimidina sustituido o no sustituido.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} se selecciona de fenilo
sustituido, piridilo sustituido, y pirimidina sustituida; y la
sustitución es
-L-R^{8d},
y en la
que
- L se selecciona de un enlace, alquileno, heteroalquileno, -O-, -N(R^{8e})-, -CO-, -CO_{2}-, -SO-, -SO_{2}-, -CON(R^{8e})-, -SO_{2}N(R^{8e}), -N(R^{8e})CO-, -N(R^{8e})SO_{2}-, -N(R^{8e})CON(R^{8e})-, N(R^{8e})SO_{2}N(R^{8e})-; y
- R^{8d} se selecciona de alquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, amino sustituido o no sustituido, aralquilo sustituido o no sustituido, heteroarilalquilo sustituido o no sustituido, y aminoalquilo sustituido o no sustituido; y
- R^{8e} se selecciona de H, alquilo sustituido o no sustituido, y cicloalquilo sustituido o no sustituido.
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es
en los que L y R^{8d} son como se
describen en el párrafo anterior; el subíndice n se selecciona de
1-4; y cada R^{8a} se selecciona
independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido,
alcoxi, ciano, y
halo.
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe
anteriormente, y el subíndice n es 1, y R^{8a} es Me, Et, Pr,
iso-Pr, Cl, F, CN, OMe, o CF_{3}. En otra
realización, R^{8a} está en la posición 2-(orto con respecto a
-L). En aún otra realización, R^{8a} es 2-Cl,
2-F, 2-Me o
2-CF_{3}.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe anteriormente
y
L es un enlace, -O-, -CO-,
-CON(R^{8e})-, o -N(R^{8e})CO-;
R^{8d} se selecciona de alquilo sustituido o
no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo
sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no
sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, aralquilo
sustituido o no sustituido, heteroarilalquilo sustituido o no
sustituido, y aminoalquilo sustituido o no sustituido; y
R^{8e} se selecciona de H, alquilo sustituido
o no sustituido.
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe
anteriormente, y
L es un enlace, -O-, -CO-,
-CON(R^{8e})-, o -N(R^{8e})CO-; y
R^{8d} se selecciona de H, alquilaminoetilo,
dialquilaminoetilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilalquilo, y
heteroarilalquilo.
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe anteriormente
y
L es un enlace, -O-, -CO-,
-CON(R^{8e})-, o -N(R^{8e})CO-; y
R^{8d} se selecciona de metilaminoetilo,
etilaminoetilo, dimetilaminoetilo, dietilaminoetilo, pirrolidinilo
sustituido o no sustituido, bencilo y piridilmetilo.
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe anteriormente
y
L es un enlace, -CO-, SO_{2},
-(CH_{2})_{m1}-, -O(CH_{2})_{m1}-,
-NH(CH_{2})_{m1}-,
-CON(H)(CH_{2})_{m1}-, o
-SO_{2}NH(CH_{2})_{m1}-; el subíndice m1 se
selecciona de 1-4; y R^{8d} es
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en el que el anillo P es
heterocicloalquilo sustituido o no sustituido. En otra realización,
L es un enlace, -CO-, -O(CH_{2})_{m1}-,
-CON(H)(CH_{2})_{m1}-, o
-NHCO-;
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe
anteriormente; L es un enlace; y el anillo P es heterocicloalquilo
sustituido o no sustituido.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe
anteriormente; L es un enlace; y el anillo P es piperidina
sustituida o no sustituida, piperazina sustituida o no sustituida, y
piperidina sustituida o no sustituida, morfolina.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe
anteriormente; L es CO; y el anillo P es heterocicloalquilo
sustituido o no sustituido.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe
anteriormente; L es CO; y el anillo P es piperidina sustituida o no
sustituida, piperazina sustituida o no sustituida, y piperidina
sustituida o no sustituida, morfolina.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe
anteriormente; L es -(CH_{2})_{m1}-,
-O(CH_{2})_{m1}-, o
-NH(CH_{2})_{m1}-; el subíndice m1 se selecciona
de 1-4; y el anillo P es heterocicloalquilo
sustituido o no sustituido.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe
anteriormente; L es -(CH_{2})_{m1}-,
-O(CH_{2})_{m1}-, o
-NH(CH_{2})_{m1}-; el subíndice m1 es 2 ó 3; y el
anillo P es piperidina sustituida o no sustituida, piperazina
sustituida o no sustituida, y piperidina sustituida o no sustituida,
morfolina.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe
anteriormente; L es -CON(H)(CH_{2})_{m1}-, o
-NHCO(CH_{2})_{m1}-; el subíndice m1 se selecciona
de 1-4; y el anillo P es heterocicloalquilo
sustituido o no sustituido.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe
anteriormente; L es -CON(H)(CH_{2})_{m1}-; el
subíndice m1 es 2 ó 3; y el anillo P es piperidina sustituida o no
sustituida, piperazina sustituida o no sustituida, y piperidina
sustituida o no sustituida, morfolina.
\newpage
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, el compuesto es según la fórmula IVa,
IVb, IVc, o IVd:
en las que L y el anillo P son como
se describen anteriormente; el subíndice n se selecciona de
1-4; cada R^{8a} se selecciona independientemente
de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, alcoxi, ciano, y
halo; y R^{9} se selecciona independientemente de arilo sustituido
o no sustituido y heteroarilo; o una sal farmacéuticamente
aceptable, solvato o profármaco del mismo, y estereoisómeros,
variantes isotópicas y tautómeros del
mismo.
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas IVa-IVd, L es un enlace.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas IVa-IVd, L es metileno,
etileno, propileno, y butileno.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas IVa-IVd, L es -CO-.
Un compuesto según la reivindicación 9, en el
que L es -CO-.
Un compuesto según la reivindicación 9, en el
que L es -NHCO- o -CONN-.
Un compuesto según la reivindicación 9, en el
que L es
-CON(H)-CH_{2}-CH_{2}-, o
-N(H)-CO-CH_{2}-CH_{2}-.
Un compuesto según la reivindicación 9, en el
que L es -OCH_{2}-CH_{2}- o
-NHCH_{2}-CH_{2}-.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas IVa-IVd, L es -SO_{2}.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas IVa-IVd, L es
-CON(H)-CH_{2}-CH_{2}-, o
-SO_{2}NH-CH_{2}-CH_{2}.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas IVa-IVd, L es
-OCH_{2}-CH_{2}- o
-NHCH_{2}-CH_{2}-.
En una realización preferida, L es un
enlace.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas IVa-IVd, el anillo P es
piperidina sustituida o no sustituida, morfolina o piperazina.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas IVa-IVd, L y el anillo P son
como se describe anteriormente; el subíndice n es 4 y cada R^{8a}
es H.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas IVa-IVd, L y el anillo P son
como se describe anteriormente; el subíndice n es 1 y R^{8a} es
Me, Et, Pr, iso-Pr, Cl, F, CN, OMe, o CF_{3}. En
otra realización, R^{8a} está en la posición 2-(orto con respecto
a -L). En aún otra realización, R^{8a} es 2-Cl,
2-F, 2-Me o
2-CF_{3}.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es
en las que el anillo P es
heterocicloalquilo sustituido o no sustituido; el subíndice n se
selecciona de 1-4; y cada R^{8a} se selecciona
independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido,
alcoxi, ciano, y
halo.
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe
anteriormente, y el anillo P es piperidina sustituida o no
sustituida, morfolina o piperazina.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe
anteriormente, y el subíndice n es 4, y cada R^{8a} es H.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe
anteriormente, y el subíndice n es 1, y R^{8a} es Me, Et, Pr,
iso-Pr, Cl, F, CN, OMe, o CF_{3}. En otra
realización, R^{8a} está en la posición 2-(orto con respecto al
N-anillo P). En aún otra realización, R^{8a} es
2-Cl, 2-F, 2-Me o
2-CF_{3}.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en las que el subíndice n se
selecciona de 1-4; cada R^{8a} se selecciona
independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido,
alcoxi, ciano, y halo; R^{8b} es hidrógeno, alquilo sustituido o
no sustituido, o cicloalquilo sustituido o no sustituido; R^{8c}
es hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, y el subíndice x
se selecciona de
1-8.
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en las que el subíndice n se
selecciona de 1-4; cada R^{8a} se selecciona
independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido,
alcoxi, ciano, y halo; R^{8b} es hidrógeno, alquilo sustituido o
no sustituido, o cicloalquilo sustituido o no sustituido; R^{bc}
es hidrógeno o
Mc.
\newpage
En otra realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es
en las que el subíndice n se
selecciona de 1-4; cada R^{8a} se selecciona
independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido,
alcoxi, ciano, y
halo.
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es
en las que el subíndice n se
selecciona de 1-4; cada R^{8a} se selecciona
independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido,
alcoxi, ciano, y halo; y R^{8b} es hidrógeno, alquilo sustituido o
no sustituido, o cicloalquilo sustituido o no
sustituido.
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe
anteriormente, y el subíndice n es 4, y cada R^{8a} es H.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe
anteriormente, y el subíndice n es 1, y R^{8a} es Me, Et, Pr,
iso-Pr, Cl, F, CN, OMe, o CF_{3}. En otra
realización, R^{8a} está en la posición 2-(orto con respecto al
N-anillo P). En aún otra realización, R^{8a} es
2-Cl, 2-F, 2-Me o
2-CF_{3}.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe
anteriormente, y R^{8b} es H.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe
anteriormente, y R^{8b} es alquilo sustituido o no sustituido.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe
anteriormente, y R^{8b} es cicloalquilo sustituido o no
sustituido.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe
anteriormente, y R^{8b} es Me, Et, Pr, i-Pr,
t-Bu, i-Bu, CH_{2}CF_{3},
CF_{3}, CH_{2}CONH_{2}, ciclopropilo o ciclopropilmetilo.
En una realización particular, con respecto a
los compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe
anteriormente, y R^{8b} es i-Pr.
En otra realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas IVa-IVd, R^{8a} se
selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no
sustituido, alcoxi, ciano, carbamoílo, CHO, y halo. En una
realización, R^{8a} es H, Me, F, o Cl. En una realización
preferida, R^{8a} es H.
\newpage
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas IVa-IVd, el compuesto es
según las fórmulas Va, Vb, Vc, Vd, Ve, o Vf:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en las que R^{9} es como se
describe para la fórmula III, y R^{8b} es hidrógeno, alquilo
sustituido o no sustituido, o cicloalquilo sustituido o no
sustituido.
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas Va-Vf, R^{8b} es H.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas Va-Vf, R^{8b} es alquilo
sustituido o no sustituido.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas Va-Vf, R^{8b} es
cicloalquilo sustituido o no sustituido.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas Va-Vf, R^{8b} es Me, Et,
Pr, i-Pr, t-Bu,
i-Bu, CH_{2}CF_{3}, CF_{3},
CH_{2}CONH_{2}, ciclopropilo o ciclopropilmetilo.
En una realización particular, con respecto a
los compuestos de fórmulas Va-Vf, R^{8b} es
i-Pr.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas III-Vf, R^{9} es arilo
sustituido o no sustituido. En otra realización, R^{9} es fenilo
sustituido o no sustituido.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas III-Vf, R^{9} es
heteroarilo sustituido o no sustituido. En otra realización, R^{9}
es piridilo sustituido o no sustituido.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas III-Vf, R^{9} se selecciona
de fenilo sustituido o no sustituido, indolilo, isoindolilo,
pirrolilo, furanilo, tienilo, pirazolilo, oxazolilo, y
tiazolilo.
\newpage
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas III-Vf, R^{9} es
y cada uno de A^{1}, A^{2} y
A^{3} se selecciona independientemente de S, O, N, NR^{9a}, y
CR^{9a}; cada uno de R^{9a} es independientemente H o alquilo
sustituido o no sustituido; y R^{9b} es CONH_{2}, CONHMe, o
CN.
\vskip1.000000\baselineskip
En otra realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas III-Vf, R^{9} es
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas III-Vf, R^{9} es
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas III-Vf, R^{9} es
en la que el subíndice m se
selecciona de 1-4, y cada R^{9d} es
independientemente H, alquilo sustituido o no sustituido, o
halo.
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas III-Vf, R^{9} es
en la que el subíndice m se
selecciona de 1-4, y cada R^{9d} es
independientemente H, alquilo sustituido o no sustituido, o
halo.
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas III-Vf, R^{9} es
en las que el subíndice m se
selecciona de 1-3, y cada R^{9d} es
independientemente H, alquilo sustituido o no sustituido, o
halo.
\vskip1.000000\baselineskip
En otra realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas III-Vf, R^{9} es como se
describe anteriormente; y cada R^{9d} es H.
En otra realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas III-Vf, R^{9} es como se
describe anteriormente; m es 1 ó 2, y cada R^{9d} es
independientemente Me, Cl o F.
\global\parskip0.850000\baselineskip
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, el compuesto es según las fórmulas VIa,
VIb, VIc, VId, VIe o VIf:
y R^{8b} es hidrógeno, alquilo
sustituido o no sustituido, o cicloalquilo sustituido o no
sustituido.
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas VIa-VIf, R^{8b} es H.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas VIa-VIf, R^{8b} es
cicloalquilo.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas VIa-VIf, R^{8b} es
ciclopropilo.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas VIa-VIf, R^{8b} es alquilo
sustituido o no sustituido.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas VIa-VIf, R^{8b} es Me, Et,
Pr, i-Pr, t-Bu,
i-Bu, CF_{3}, CH_{2}CF_{3},
CH_{2}CONH_{2}, o ciclopropilmetilo.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, el compuesto es según las fórmulas VIIa,
VIIb, VIIc, VIIc, VIId, VIIe o VIIf:
y R^{8b} es hidrógeno, alquilo
sustituido o no sustituido, o cicloalquilo sustituido o no
sustituido.
\global\parskip1.000000\baselineskip
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas VIIa-VIId, R^{8b} es H.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas VIIa-VIIf, R^{8b} es
cicloalquilo.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas VIIa-VIIf, R^{8b} es
ciclopropilo.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas VIIa-VIIf, R^{8b} es
alquilo sustituido o no sustituido.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas VIIa-VIIf, R^{8b} es Me,
Et, Pr, i-Pr, t-Bu,
i-Bu, CF_{3}, CH_{2}CF_{3},
CH_{2}CONH_{2}, o ciclopropilmetilo.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, el compuesto es según las fórmulas VIIIa,
VIIIb, VIIIc, VIIId, VIIIe o VIIIf:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
y R^{8b} es hidrógeno, alquilo
sustituido o no sustituido, o cicloalquilo sustituido o no
sustituido.
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas VIIIa-VIIIf, R^{8b} es
H.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas VIIIa-VIIIf, R^{8b} es
cicloalquilo.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas VIIIa-VIIIf, R^{8b} es
ciclopropilo.
\newpage
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas VIIIa-VIIIf, R^{8b} es
alquilo sustituido o no sustituido.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas VIIIa VIIIf, R^{8b} es Me, Et, Pr,
i-Pr, t-Bu, i-Bu,
CF_{3}, CH_{2}CF_{3}, CH_{2}CONH_{2}, o
ciclopropilmetilo.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, el compuesto es según las fórmulas IXa,
IXb, IXc, IXd, IXe, o IXf:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
y R^{8b} es hidrógeno, alquilo
sustituido o no sustituido, o cicloalquilo sustituido o no
sustituido.
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas IXa-IXf, R^{8b} es H.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas IXa-IXf, R^{8b} es
cicloalquilo.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas IXa-IXf, R^{8b} es
ciclopropilo.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas IXa-IXf, R^{8b} es alquilo
sustituido o no sustituido.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas IXa-IXf, R^{8b} es Me, Et,
Pr, i-Pr, t-Bu,
i-Bu, CF_{3}, CH_{2}CF_{3},
CH_{2}CONH_{2}, o ciclopropilmetilo.
\newpage
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, el compuesto es según las fórmulas Xa,
Xb, Xc, Xd, Xe, o Xf:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
y R^{8b} es hidrógeno, alquilo
sustituido o no sustituido, o cicloalquilo sustituido o no
sustituido.
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas Xa-Xf, R^{8b} es H.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas Xa-Xf, R^{8b} es
cicloalquilo.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas Xa-Xf, R^{8b} es
ciclopropilo.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas Xa-Xf, R^{8b} es alquilo
sustituido o no sustituido.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas Xa-Xf, R^{8b} es Me, Et,
Pr, i-Pr, t-Bu,
i-Bu, CF_{3}, CH_{2}CF_{3},
CH_{2}CONH_{2}, o ciclopropilmetilo.
\newpage
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, el compuesto es según las fórmulas XIa,
XIb, XIc, XId, XIe o XIf:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
y R^{8b} es hidrógeno, alquilo
sustituido o no sustituido, o cicloalquilo sustituido o no
sustituido; y R^{9e} es hidrógeno, Me, o
CN.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas XIa-XIf, R^{9e} es H.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas XIa-XIf, R^{9e} es Me.
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmulas XIa-XIf, R^{9e} es CN.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas XIa-XIf, R^{8b} es H.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas XIa-XIf, R^{8b} es
cicloalquilo.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas XIa-XIf, R^{8b} es
ciclopropilo.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas XIa-XIf, R^{8b} es alquilo
sustituido o no sustituido.
En una realización adicional, con respecto a los
compuestos de fórmulas XIa-XIf, R^{8b} es Me, Et,
Pr, i-Pr, t-Bu,
i-Bu, CF_{3}, CH_{2}CF_{3}, CH_{2}CONH_{2}
o ciclopropilmetilo.
\newpage
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, el compuesto es según las fórmulas XIIa,
XIIb, XIIc o XIId:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, el compuesto es según las fórmulas XIIIa,
XIIIb, XIIIc o XIIId:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, el compuesto es según las fórmulas XIVa,
XIVb, XIVc o XIVd:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
En una realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, el compuesto es según las fórmulas XVa,
XVb, o XVc:
\vskip1.000000\baselineskip
y L es un enlace o
-O-CH_{2}CH_{2}-; el anillo P
es
\vskip1.000000\baselineskip
y R^{8b} es H, Me,
i-Pr, t-Bu, CH_{2}CONH_{2},
ciclopropilmetilo, o
CH_{2}CF_{3}.
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización particular, con respecto a
los compuestos de fórmulas XVa-XVc, L es un enlace.
En otra realización particular, L es
-O-CH_{2}CH_{2}-.
En una realización particular, con respecto a
los compuestos de fórmulas XVa-XVc, el anillo P
es
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización más particular, con respecto
a los compuestos de fórmulas XVa-XVc, el anillo P
es
\vskip1.000000\baselineskip
En otra realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, el compuesto se selecciona de la Tabla
1.
En otra realización, con respecto a los
compuestos de fórmula III, el compuesto se selecciona de la Tabla
2.
En ciertos aspectos, la presente Solicitud
también describe profármacos y derivados de los compuestos según
las fórmulas anteriores. Los profármacos son derivados de los
compuestos de la invención, que tienen grupos metabólicamente
escindibles y se convierten, mediante solvolisis o en condiciones
fisiológicas, en los compuestos de la invención, que son
farmacéuticamente activos, in vivo. Un profármaco puede ser
inactivo cuando se administra a un sujeto, pero se convierte in
vivo en un compuesto activo de la invención. "Profármacos
farmacéuticamente aceptables", como se usa aquí, se refiere a
aquellos profármacos de los compuestos útiles en la presente
invención que son, dentro del alcance del juicio médico acertado,
adecuados para uso en contacto con los tejidos de pacientes sin
toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica en proporción con
una relación beneficio/riesgo razonable, y eficaces para su uso
pretendido de los compuestos de la invención. El término
"profármaco" significa un compuesto que se transforma in
vivo para producir un compuesto eficaz útil en la presente
invención, o una sal farmacéuticamente aceptable, hidrato o solvato
del mismo. La transformación puede ocurrir mediante diversos
mecanismos, tal como mediante hidrólisis en la sangre. Los
compuestos que poseen grupos metabólicamente escindibles tienen la
ventaja de que pueden mostrar una biodisponibilidad mejorada como
resultado de una solubilidad y/o tasa de absorción potenciadas
conferidas al compuesto parental en virtud de la presencia del
grupo metabólicamente escindible; de este modo, tales compuestos
actúan como profármacos. En Design of Prodrugs, H. Bundgaard, ed.,
Elsevier (1985); Methods in Enzymology; K. Widder et al, Ed.,
Academic Press, 42, 309-396 (1985); A Textbook of
Drug Design and Development, Krogsgaard-Larsen y H.
Bandaged, ed., Capítulo 5; "Design and Applications of
Prodrugs" 113-191 (1991); Advanced Drug Delivery
Reviews, H. Bundgard, 8 , 1-38, (1992); J. Pharm.
Sci., 77,285 (1988); Chem. Pharm. Bull., N. Nakeya et al, 32,
692 (1984); Prodrugs as Novel Delivery Systems, T. Higuchi y V.
Stella, 14 A.C.S. Symposium Series, y Bioreversible Carriers in
Drug Design, E.B. Roche, ed., American Pharmaceutical Association y
Pergamon Press, 1987, que se incorporan aquí como referencia, se
proporciona una discusión a conciencia. Tales ejemplos incluyen,
pero no se limitan a, derivados de éster de colina y similares,
ésteres de N-alquilmorfolina y similares.
Otros derivados de los compuestos de esta
invención tienen actividad tanto en su forma ácida como en su forma
de derivado de ácido, pero la forma sensible a ácidos a menudo
ofrece ventajas de solubilidad, compatibilidad tisular, o
liberación retrasada en el organismo del mamífero (véase, Bundgard,
H., Design of Prodrugs, p. 7-9,
21-24, Elsevier, Ámsterdam 1985). Los profármacos
incluyen derivados de ácido bien conocidos por los practicantes de
la técnica, tales como, por ejemplo, ésteres preparados mediante
reacción del ácido parental con un alcohol adecuado, o amidas
preparadas mediante reacción del compuesto ácido parental con una
amina sustituida o no sustituida, o anhídridos de ácido, o
anhídridos mixtos. Los ésteres, amidas y anhídridos alifáticos o
aromáticos simples, derivados de grupos ácidos que cuelgan de los
compuestos de esta invención, son profármacos preferidos. En
algunos casos es deseable preparar profármacos del tipo de ésteres
dobles, tales como ésteres de (aciloxi)alquilo o ésteres de
((alcoxicarbonil)oxi)alquilo. Se prefieren los ésteres
de alquilo de C_{1} a C_{8}, de alquenilo de
C_{2}-C_{8}, de arilo, de arilo sustituido de
C_{7}-C_{12}, y de arilalquilo de
C_{7}-C_{12} de los compuestos de la
invención.
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Cuando se emplean como fármacos, los compuestos
de esta invención se administran típicamente en forma de una
composición farmacéutica. Tales composiciones se pueden preparar de
manera bien conocida en la técnica farmacéutica, y comprende al
menos un compuesto activo.
Generalmente, los compuestos de esta invención
se administran en una cantidad farmacéuticamente eficaz. La cantidad
del compuesto realmente administrada estará determinada físicamente
por el médico, a la luz de las circunstancias pertinentes,
incluyendo la afección a tratar, la vía elegida de administración,
el compuesto real administrado, la edad, peso, y respuesta del
paciente individual, la gravedad de los síntomas del paciente, y
similar.
Las composiciones farmacéuticas de esta
invención se pueden administrar por una variedad de vías, incluyendo
la oral, rectal, transdérmica, subcutánea, intravenosa,
intramuscular, e intranasal. Dependiendo de la vía pretendida de
suministro, los compuestos de esta invención se formulan
preferiblemente como composiciones orales o inyectables, o como
pomadas, como lociones o como parches, todos para administración
transdérmica.
Las composiciones para administración oral
pueden tomar la forma de disoluciones o suspensiones líquidas a
granel, o polvos a granel. Sin embargo, más habitualmente, las
composiciones se presentan en formas de dosificación unitaria para
facilitar la dosificación exacta. La expresión "formas de
dosificación unitaria" se refiere a unidades físicamente
discretas adecuadas como dosis unitarias para sujetos humanos y
otros mamíferos, conteniendo cada unidad una cantidad
predeterminada de material activo calculada para producir el efecto
terapéutico deseado, en asociación con un excipiente farmacéutico
adecuado. Las formas de dosificación unitaria típicas incluyen
ampollas o jeringuillas previamente llenadas, previamente medidas,
de las composiciones líquidas, o pastillas, comprimidos, cápsulas,
o similares, en caso de composiciones sólidas. En tales
composiciones, el compuesto de ácido furanosulfónico es
habitualmente un componente minoritario (desde alrededor de 0,1hasta
alrededor de 50% en peso, o preferiblemente desde alrededor de 1
hasta alrededor de 40% en peso), siendo el resto diversos vehículos
o portadores y auxiliares del procesamiento útiles para formar la
forma de dosificación deseada.
Las formas líquidas adecuadas para
administración oral pueden incluir un vehículo acuoso o no acuoso
adecuado con tampones, agentes de suspensión y dispersantes,
colorantes, sabores y similares. Las formas sólidas pueden incluir,
por ejemplo, cualquiera de los siguientes ingredientes, o compuestos
de naturaleza similar: un aglutinante tal como celulosa
microcristalina, goma de tragacanto o gelatina; un excipiente tal
como almidón o lactosa, un agente disgregante tal como ácido
algínico, Primogel, o almidón de maíz; un lubricante tal como
estearato de magnesio; un agente de deslizamiento tal como dióxido
de silicio coloidal; un agente edulcorante tal como sacarosa o
sacarina; o un agente saborizante tal como menta piperita,
salicilato de metilo, o sabor a naranja.
Las composiciones inyectables se basan
típicamente en disolución salina estéril inyectable o disolución
salina tamponada con fosfato u otros portadores inyectables
conocidos en la técnica. Como antes, el compuesto activo en tales
composiciones es típicamente un componente minoritario, siendo a
menudo desde alrededor de 0,05 hasta 10% en peso, siendo el resto el
portador inyectable y similar.
Las composiciones transdérmicas se formulan
típicamente como un ungüento o crema tópico que contiene el
ingrediente o ingredientes activos, generalmente en una cantidad
que oscila desde alrededor de 0,01 hasta alrededor de 20% en peso,
preferiblemente desde alrededor de 0,1 hasta alrededor de 20% en
peso, preferiblemente desde alrededor de 0,1 hasta alrededor de 10%
en peso, y más preferiblemente desde alrededor de 0,5 hasta
alrededor de 15% en peso. Cuando se formulan como un ungüento, los
ingredientes activos se combinarán típicamente con una base
parafínica o una base para ungüento miscible con agua. Como
alternativa, los ingredientes activos se pueden formular en una
crema con, por ejemplo, una base para crema de aceite en agua. Tales
formulaciones transdérmicas son bien conocidas en la técnica, y
generalmente incluyen ingredientes adicionales para potenciar la
penetración dérmica o estabilidad de los ingredientes activos o la
formulación. Tales formulaciones e ingredientes transdérmicos
conocidos están incluidos dentro del alcance de esta invención.
Los compuestos de esta invención también se
pueden administrar mediante un dispositivo transdérmico. En
consecuencia, la administración transdérmica se puede lograr usando
un parche ya sea del tipo depósito o del tipo de membrana porosa, o
de una variedad de matriz sólida.
Los componentes descritos anteriormente para las
composiciones administrables oralmente, inyectables o administrables
tópicamente son meramente representativos. Otros materiales, así
como las técnicas de procesamiento y similares, se exponen en la
Parte 8 de Remington's Pharmaceutical Sciences, 17ª edición,
1985, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, que se
incorpora aquí como referencia.
Los compuestos de esta invención también se
pueden administrar en formas de liberación sostenida o a partir de
sistemas de suministro de fármacos de liberación sostenida. En
Remington's Pharmaceutical Sciences se puede encontrar una
descripción de materiales de liberación sostenida
representativos.
Los siguientes ejemplos de formulación ilustran
composiciones farmacéuticas representativas de esta invención. Sin
embargo, la presente invención no está limitada a las siguientes
composiciones farmacéuticas.
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Formulación
1
Un compuesto de la invención se mezcla como un
polvo seco con un aglutinante de gelatina seco, en una relación en
peso aproximada de 1:2. Como lubricante, se añade una cantidad
minoritaria de estearato de magnesio. La mezcla se conforma en
comprimidos de 240-270 mg (80-90 mg
de compuesto de amida activo por comprimido) en una prensa para
comprimidos.
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Formulación
2
Un compuesto de la invención se mezcla como un
polvo seco con un diluyente de almidón en una relación en peso
aproximada de 1:1. La mezcla se introduce en cápsulas de 250 mg (125
mg de compuesto de amida activo por cápsula).
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Formulación
3
Un compuesto de la invención (125 mg), sacarosa
(1,75 g) y goma de xantana (4 mg) se mezclan, se hacen pasar a
través de un tamiz U.S. malla nº 10, y entonces se mezclan con una
disolución previamente obtenida de celulosa microcristalina y
carboximetilcelulosa sódica (11:89, 50 mg) en agua. Se diluye
benzoato de sodio (10 mg), sabor, y color con agua, y se añaden con
agitación. Entonces se añade suficiente agua para producir un
volumen total de 5 ml.
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Formulación
4
Un compuesto de la invención se mezcla como un
polvo seco con un aglutinante de gelatina seco en una relación en
peso aproximada de 1:2. Como lubricante, se añade una cantidad
minoritaria de estearato de magnesio. La mezcla se conforma en
comprimidos de 450-900 mg (150-300
mg de compuesto de amida activo) en una prensa de comprimidos.
\newpage
Formulación
5
Un compuesto de la invención se disuelve o
suspende en un medio acuoso inyectable de disolución salina estéril
tamponada, hasta una concentración de aproximadamente 5 mg/ml.
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Formulación
6
Se funden alcohol estearílico (250 g) y una
vaselina blanca (250 g) a alrededor de 75ºC, y después se añade una
mezcla de un compuesto de la invención (50 g), metilparabeno (0,25
g), propilparabeno (0,15 g), laurilsulfato de sodio (10 g), y
propilenglicol (120 g) disueltos en agua (370 g), y la mezcla
resultante se agitó hasta que se coagula.
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Los presentes compuestos se usan como agentes
terapéuticos para el tratamiento de afecciones en mamíferos que
están relacionadas casualmente o son atribuibles a actividad
aberrante de MMP1 y/o MAPKAPK5. En consecuencia, los compuestos y
composiciones farmacéuticas de esta invención encuentran uso como
compuestos terapéuticos para prevenir y/o tratar enfermedades
inflamatorias en mamíferos, incluyendo seres humanos.
Esta invención también se refiere al uso de los
presentes compuestos en la fabricación de un medicamento para el
tratamiento o profilaxis de una afección prevenida, mejorada o
eliminada mediante administración de un inhibidor de la proteína
cinasa 5 activada por proteína cinasas activadas por mitógenos, o
una afección caracterizada por actividad anormal de colagenasa, o
una afección asociada con degradación de la ECM, o una afección
seleccionada de enfermedades que implican inflamación, lo más
preferible para el tratamiento de artritis reumatoide.
Como un aspecto adicional de la invención, se
proporcionan los presentes compuestos para uso como un fármaco
especialmente en el tratamiento o prevención de las siguientes
afecciones:
- una afección asociada con la degradación de la matriz extracelular (ECM), en particular artritis, y más particularmente artritis reumatoide;
- una afección asociada con una expresión celular anormal de ECM;
- una afección caracterizada por actividad anormal de las metaloproteinasas de la matriz;
- enfermedades y trastornos que están mediados por o dan como resultado inflamación, tal como, por ejemplo, artritis reumatoide y osteoartritis, infarto de miocardio, diversas enfermedades y trastornos autoinmunitarios, uveítis y aterosclerosis; picazón/prurito, tal como, por ejemplo, psoriasis; y trastornos renales;
- una afección caracterizada por actividad anormal de colagenasa, o una afección asociada con degradación de la ECM, o una afección seleccionada de enfermedades que implican inflamación, lo más preferible para el tratamiento de artritis reumatoide.
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También se proporciona aquí el uso de los
presentes compuestos en la fabricación de un medicamento para el
tratamiento o prevención de una de las afecciones y enfermedades
mencionadas anteriormente.
Se describe un método que comprende la
administración a un sujeto que sufre una enfermedad o afección
caracterizada por inflamación de una cantidad eficaz inhibidora de
metaloproteasas de la matriz de un compuesto de la presente
invención durante un período de tiempo suficiente para reducir los
niveles anormales de la degradación de la matriz extracelular en el
paciente, y preferiblemente terminar los procesos que se
autoperpetúan responsables de dicha degradación. Una realización
especial del método comprende administrar una cantidad eficaz
inhibidora de metaloproteasas de la matriz de un compuesto de la
presente invención a un paciente que sufre o es susceptible al
desarrollo de artritis reumatoide, durante un período de tiempo
suficiente para reducir o prevenir, respectivamente, la degradación
de colágeno y ósea en las articulaciones de dicho paciente, y
preferiblemente terminar los procesos que se autoperpetúan
responsables de dicha degradación.
Los niveles de las dosis de inyección oscilan
desde alrededor de 0,1 mg/kg/hora hasta al menos 10 mg/kg/hora,
todo durante un tiempo desde alrededor de 1 hasta alrededor de 120
horas, y especialmente 24 a 96 horas. También se puede administrar
un bolo de precarga de alrededor de 0,1 mg/kg a alrededor de 10
mg/kg o más para lograr niveles de estado estacionario adecuados.
No se espera que la dosis total máxima supere alrededor de 2 g/día
para un paciente humano de 40 a 80 kg.
Para la prevención y/o tratamiento de afecciones
a largo plazo, tal como afecciones inflamatorias y autoinmunitarias,
el régimen de tratamiento habitualmente se extiende durante muchos
meses o años, y en consecuencia se prefiere una dosificación oral
por conveniencia y tolerancia del paciente. Con la dosificación
oral, los regímenes representativos son una a cinco, y
especialmente dos a cuatro, y típicamente tres dosis orales por día.
Usando estos patrones de dosificación, cada dosis proporciona desde
alrededor de 0,01 hasta alrededor de 20 mg/kg del compuesto de la
invención, proporcionando cada una de las dosis preferidas desde
alrededor de 0,1 hasta alrededor de 10 mg/kg y especialmente
alrededor de 1 a alrededor de 5 mg/kg.
Las dosis transdérmicas generalmente se
seleccionan para proporcionar niveles sanguíneos similares o
inferiores a los que se logran usando dosis de inyección.
Cuando se usan para evitar el comienzo de una
afección inflamatoria, los compuestos de esta invención se
administrarán a un paciente con riesgo de desarrollar la afección,
típicamente bajo el consejo y la supervisión de un médico, a los
niveles de dosificación descritos anteriormente. Los pacientes con
riesgo de desarrollar una afección particular generalmente incluyen
aquellos que tienen antecedentes familiares de la afección, o
aquellos que han sido identificados mediante ensayo o
identificación genética por ser particularmente susceptibles a
desarrollar la afección.
Los compuestos de esta invención se pueden
administrar como el único agente activo, o se pueden administrar en
combinación con otros agentes, incluyendo otros compuestos que
demuestran la misma actividad terapéutica o una similar, y que se
determina que son seguros y eficaces para tal administración
combinada.
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Los compuestos de
triazolo[1,5-a]piridilo de esta
invención se pueden preparar a partir de materiales de partida
fácilmente disponibles usando los siguientes métodos y
procedimientos generales. Se apreciará que, aunque se dan
condiciones típicas o preferidas del procedimiento (es decir,
temperaturas de reacción, tiempos, relación en moles de agentes
reaccionantes, disolventes, presiones, etc.), también se pueden usar
otras condiciones del procedimiento, excepto que se establezca de
otro modo. Las condiciones de reacción óptimas pueden variar con
los agentes reaccionantes particulares o disolvente usados, pero
tales condiciones se pueden determinar por un experto en la técnica
mediante procedimientos de optimización habituales.
Adicionalmente, como será manifiesto para los
expertos en la técnica, pueden ser necesarios grupos protectores
convencionales para evitar que ciertos grupos funcionales sufran
reacciones indeseadas. La elección de un grupo protector adecuado
para un grupo funcional particular, así como las condiciones
adecuadas para la protección y desprotección, son bien conocidas en
la técnica. Por ejemplo, en T. W. Greene y P. G. M. Wuts, Protecting
Groups in Organic Synthesis, Segunda Edición, Wiley, New York,
1991, y referencias citadas allí, se describen numerosos grupos
protectores, y su introducción y eliminación.
Los siguientes métodos se presentan con detalles
en cuanto a la preparación de bicicloheteroarilos representativos
que se han enumerado aquí anteriormente. Los compuestos de la
invención se pueden preparar a partir de materiales de partida y
reactivos conocidos o comercialmente disponibles por un experto en
la técnica de síntesis orgánica.
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Todos los reactivos fueron de grado comercial y
se usaron como se recibieron, sin purificación adicional, excepto
que se señale de otro modo. Para reacciones llevadas a cabo en una
atmósfera inerte, se usaron disolventes anhidros comercialmente
disponibles. En todos los otros casos se usaron disolventes de grado
reactivo, excepto que se especifique de otro modo. La cromatografía
en columna se llevó a cabo sobre gel de sílice 60
(35-70 \mum). La cromatografía de capa fina se
llevó a cabo usando placas de gel de sílice prerrevestidas
F-254 (grosor 0,25 mm). Los espectros de RMN
^{1}H se registraron en un espectrómetro de RMN Bruker DPX 400
(400 MHz). Los desplazamientos químicos (\delta) para los
espectros de RMN ^{1}H se dan en partes por millón (ppm) con
relación a tetrametilsilano (\delta 0,00) o el pico de disolvente
residual apropiado, es decir CHCl_{3} (\delta 7,27),
como patrón interno. Las multiplicidades se dan como singlete (s),
doblete (d), triplete (t), cuartete (q), multiplete (m) y ancho
(br). Las constantes de acoplamiento (J) se dan en Hz. Los
espectros de MS mediante electropulverización se obtuvieron en un
espectrómetro de LC/MS de Micromass platform. La columna usada para
todos los análisis de LCMS: Waters Acquity UPLC BEH C18 1,7 \mum,
2,1 mm ID x 50 mm L (artículo nº 186002350)). HPLC preparativa:
Waters XBridge Prep C18 5 \mum ODB 19 mm ID x 100 mm L (artículo
nº 186002978). Todos los métodos usan gradientes de MeCN/H2O. H2O
contiene 0,1% de TFA o 0,1% de NH3.
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Compuesto
1
Etapa
1
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Una mezcla de
3,6-dibromo-pirazin-2-ilamina
(15,37 g, 60,80 mmoles) y acetal dimetílico de la
N,N-dimetilforma-
mida (10,1 ml, 76,00 mmoles), suspendida en etanol (150 ml), se puso a reflujo durante 2 horas. La mezcla de reacción se evaporó a vacío proporcionando el compuesto del título (18,6 g). RMN ^{1}H (400MHz, CDCl_{3}) \delta (ppm) 3,20 (s, 3H), 3,21 (s, 3H), 7,93 (s, 1H), 8,48 (s, 1H). LCMS: Rt 3,81 min. (99,1%), m/z (APCI) 307 (M+H)^{+}.
mida (10,1 ml, 76,00 mmoles), suspendida en etanol (150 ml), se puso a reflujo durante 2 horas. La mezcla de reacción se evaporó a vacío proporcionando el compuesto del título (18,6 g). RMN ^{1}H (400MHz, CDCl_{3}) \delta (ppm) 3,20 (s, 3H), 3,21 (s, 3H), 7,93 (s, 1H), 8,48 (s, 1H). LCMS: Rt 3,81 min. (99,1%), m/z (APCI) 307 (M+H)^{+}.
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Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
N-(3,6-dibromo-pirazin-2-il)-N,N-dimetilformamidina
(18,6 g, 60,80 mmoles) en metanol (200 ml) se añadió hidrocloruro de
hidroxilamina (5,91 g, 85,12 mmoles) en una porción. La reacción se
agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. El disolvente se
evaporó, y el residuo sólido se trató con agua fría (enfriamiento
con hielo), y se recogió mediante filtración. El precipitado se lavó
dos veces con agua y éter de petróleo y se secó a vacío
produciendo el compuesto del título (17,45 g) como un sólido
blanco.
RMN ^{1}H (400MHz,
d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 7,82 (1H, br s), 8,21
(1H, s), 8,34 (1H, m), 11,17 (1H, br s). LCMS: Rt 3,17 min. (98,7%),
m/z (APCI) 295 (M+H)^{+}.
\newpage
Etapa
3
Se trató
N-(3,6-dibromo-pirazin-2-il)-N'-hidroxiformamidina
(17,4 mg, 58,80 mmoles) con ácido polifosfórico (150 g) durante una
hora a 50ºC y después durante 1,75 horas a 70ºC. Después de enfriar
hasta la temperatura ambiente, se añadió agua a la mezcla de
reacción. La suspensión resultante se llevó hasta pH 8 mediante
adición cuidadosa de NaHCO_{3} sólido en pequeñas porciones. El
precipitado formado se recogió mediante filtración, se lavó una vez
con NaOH 1N, tres veces con agua y se secó a vacío. El
residuo se repartió entre acetato de etilo y NaOH 1N, y la fase
orgánica se lavó una vez más con NaOH 1N y una vez con salmuera. La
fase orgánica se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se evaporó para
dar el compuesto del título (10,15 g) como un sólido blanco. RMN
^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 8,43
(s, 1H), 8,92 (s, 1H). LCMS: Rt 2,73 min. (94,2%), m/z (APCI)
277 (M+H)^{+}.
Etapa
4
Una mezcla de
5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina
(123 mg, 443 \mumoles),
4-(4-morfolino)anilina (118 mg, 0,664 mmoles)
y N-etildiisopropilamina (116 ml, 0,664 mmoles) se calentó a
reflujo en 2-propanol (3 ml) durante 4,5 horas. La
mezcla de reacción se evaporó hasta sequedad, y el residuo se
repartió entre diclorometano y ácido cítrico (10%). La fase orgánica
se lavó una vez con agua y con salmuera, se secó sobre MgSO_{4},
se filtró y se evaporó para proporcionar el compuesto del título
(156 mg, 94%) como un sólido amarillo. RMN ^{1}H (400MHz,
d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 3,11 (m, 4H), 3,78 (m,
4H), 6,97 (d, 2H), 7,82 (d, 2H), 7,87 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 9,93
(br s, 1H). LCMS, Rt 3,32 min. (96,8%) m/z (APCI) 375
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
Una suspensión de
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-ilfenil)amina
(220 mg, 0,586 mmoles),
4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol
(171 mg, 0,879 mmoles), Pd(PPh_{3})_{4} (68 mg, 59
\mumoles) y NaO'Bu (225 mg, 2,34 mmoles) en 4 ml de DMF/agua (3:1)
se desgasificó durante 5 min. en un tubo cerrado herméticamente. La
mezcla de reacción se calentó en el tubo cerrado herméticamente a
90ºC toda la noche. Después de la evaporación de los disolventes, el
residuo se recogió mediante filtración, se lavó con agua (3x) y con
éter (2x), y se secó a vacío. El producto bruto se purificó
mediante cromatografía en columna (gel de sílice, DCM/MeOH 96:4)
produciendo el compuesto del título (76 mg, 36%) como un sólido
amarillo. RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO)
\delta (ppm) 3,11 (4H, m), 3,79 (4H, m), 6,98 (2H, d), 7,90 (2H,
d), 8,17 (1H, s), 8,35 (1H, br s), 8,64 (1H, br s), 8,75 (1H, s),
9,73 (1H, br s). LCMS: Rt 2,68 min. (97,7%) m/z (APCI) 363
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
4
Etapa
1
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-amina
(80 mg, 0,206 mmoles), ácido
2-metoxipiridin-4-borónico
(63 mg, 0,412 mmoles), Pd(PPh_{3})_{4} (0,052
mmoles) y Na_{2}CO_{3} 1,5N (1,1 ml, 1,65 mmoles) en DMF/dioxano
2:1 (2,2 ml). El producto bruto se purificó mediante cromatografía
en columna sobre gel de sílice, usando DCM:NH_{3} (7M en MeOH)
96:4, y las fracciones que contenían el producto deseado se
combinaron y se evaporaron para proporcionar el compuesto del título
(40 mg, 47%). HPLC (254 nm): Rt 2,26 min. (65%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
Una disolución de
[5-(2-metoxi-piridin-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-amina
(40 mg, 0,096 mmoles) e hidrocloruro de piridina (55 mg, 0,48
mmoles) en agua (1 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1
hora. El disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se
purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice
eluyendo con 96:4 DCM:NH_{3} (7M en MeOH). Se aisló el compuesto
del título (23 mg, 60%).
Se disolvieron 11 mg (0,0273 mmoles) del
compuesto de la base libre en la mínima cantidad de MeOH/DCM, (que
se puso a reflujo hasta disolución), y se añadió ácido
metanosulfónico 0,1 M (0,273 ml) en MeOH. Después de la evaporación
del disolvente, el residuo se trituró varias veces con una mezcla
1:1 de acetato de etilo-éter dietílico y DCM-éter dietílico, se
filtró y se secó a vacío para proporcionar el compuesto diana
como una sal de mesilato (13 mg, 99%). RMN ^{1}H (400MHz,
d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,21 (3H, s), 2,91 (3H,
s, MsOH), 3,00 (2H, t), 3,18-3,26 (2H, m), 3,58 (2H,
d), 3,90 (2H, d), 6,83 (1H, s), 7,07 (2H, d), 7,25 (1H, s), 7,53
(1H, d), 7,93 (2H, d), 8,14 (1H, s), 8,76 (1H, s), 9,69 (1H, br s),
10,21 (1H, s), 13,3 (1H, br s). LCMS: Rt 1,71 min. (97,5%),
m/z (APCI) 403 (M+H)^{+}.
\newpage
Compuesto
6
Etapa
1
Una mezcla de
5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina
(2 g, 7,20 mmoles),
4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamina
(1,65 g, 8,64 mmoles) y
N-etildiisopropil-amina (1,5 ml, 8,64 mmoles)
se calentó a 80ºC en 2-propanol (50 ml) durante 8
horas. La mezcla de reacción se evaporó hasta sequedad, y el residuo
se repartió entre diclorometano y agua. La fase acuosa se extrajo
dos veces con diclorometano. Las capas orgánicas se lavaron con
salmuera, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se evaporaron
para proporcionar el compuesto del título (1,41 g) como un sólido
gris. RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta
(ppm) 2,27 (3H, s), 2,54 (4H, m), 3,14 (4H, m), 6,97 (2H, d), 7,80
(2H, d), 7,87 (1H, s), 8,72 (1H, s), 9,92 (1H, br s). LCMS: Rt 2,07
min. (77,4%), m/z (APCI) 388 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
Una disolución de ácido
4-bromo-tiofen-2-carboxílico
(2,0 g, 9,66 mmoles), hidrocloruro de
1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)carbodiimida
(2,04 g, 10,63 mmoles) e hidrato de
1-hidroxibenzotriazol (1,44 g, 10,63 mmoles) en DMF
(20 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla
de reacción se enfrió entonces hasta 0ºC, y se añadió NH_{3} ac.
(1 ml, 17,3 mmoles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente
durante 5 horas adicionales, después se añadió agua a la mezcla de
reacción, y el precipitado resultante se recogió mediante filtración
y se lavó con NaOH 1M, H_{2}O y éter de petróleo. El compuesto del
título se aisló como un sólido blanco (1,56 g, 78%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
La amida del ácido
4-bromo-tiofen-2-carboxílico
(1,3 g, 6,34 mmoles), el bis(pinacolato)diboro (3,22
g, 12,7 mmoles), PdCl_{2}dppf (0,26 g, 0,318 moles) y KOAc (1,87
g, 19,10 mmoles) se suspendieron en dioxano (20 ml), se purgaron con
nitrógeno durante 5 minutos y después se calentaron a 90ºC toda la
noche. El disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se
repartió entre acetato de etilo y agua. La capa acuosa se extrajo
tres veces con acetato de etilo, y las fases orgánicas combinadas se
lavaron con salmuera, se filtraron a través de MgSO_{4} y se
evaporaron. El producto del título se cristalizó en EtOAc-éter de
petróleo (2,135 g, 77% puro mediante LCMS).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
Una suspensión de
5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-amina
(100 mg, 258 mmoles), amida del ácido
4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-tiofen-2-carboxílico
(130 mg, 516 mmoles) y Pd(PPh_{3})_{4} (74 mg,
64,5 mmoles) en Na_{2}CO_{3} acuoso (1,37 ml, 1,5 M, 2,06
mmoles) y DMF/dioxano 2/1 (2,75 ml) se desgasificó durante 5 min. en
un tubo de reacción. El tubo se cerró herméticamente, y la mezcla
de reacción se calentó a 90ºC toda la noche. Después de enfriar
hasta la temperatura ambiente, la mezcla de reacción se repartió
entre acetato de etilo y agua. El precipitado se recogió mediante
filtración y se lavó con agua (1x) y éter (2x) y se secó a
vacío. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en
columna (gel de sílice, DCM/MeOH/NH_{3} 96:4) produciendo el
compuesto del título (43 mg) como un sólido amarillo. RMN ^{1}H
(400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,26 (3H, s),
2,50 (4H, m), 3,15 (4H, m,), 6,99 (2H, d), 7,60 (1H, br s), 7,88
(2H, d), 8,10 (2H, m), 8,48 (1H, s), 8,66 (1H, s), 8,79 (1H, s),
9,97 (1H, br s). LCMS: Rt 1,99 min. (97,6%), m/z (APCI) 435
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
9
Etapa
1
Una disolución de ácido
5-bromo-tiofen-2-carboxílico
(4,51 g, 21,78 mmoles), hidrato de
3-hidroxibenzotriazol (3,24 g, 23,96 mmoles),
1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)carbodiimida
(4,6 g, 23,96 mmoles) en DMF (70 ml) se agitó a temperatura
ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se enfrió entonces
hasta 0ºC, y se añadió NH_{3} ac. al 35% (2,2 ml). La mezcla se
agitó a temperatura ambiente toda la noche. El disolvente se
eliminó a vacío, y el residuo se disolvió en EtOAc, se lavó
con NaHCO_{3} 1N, y salmuera. Las capas orgánicas se combinaron,
se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron para
proporcionar el compuesto del título (3,78 g, 84%). HPLC (254 nm):
Rt 2,46 min. (96,5%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
Se suspendieron amida del ácido
5-bromo-tiofen-2-carboxílico
(0,5 g, 2,426 mmoles), bis(pinacolato)diboro (678 mg,
2,669 mmoles), PdCl_{2}dppf (59 mg, 0,072 mmoles) y KOAc (0,714 g,
7,28 mmoles) en dioxano (5 ml), se purgaron con nitrógeno durante 5
minutos, y después se calentaron a 85ºC toda la noche. El disolvente
se eliminó a vacío, y el residuo se repartió entre acetato
de etilo y agua. La capa acuosa se extrajo de nuevo con acetato de
etilo, y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se
filtraron a través de MgSO_{4} y se evaporaron a vacío
para proporcionar el compuesto del título (417 mg, 68%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-amina
(100 mg, 0,258 mmoles), amida del ácido
5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-tiofen-2-carboxílico
(130 mg, 0,516 mmoles) y Pd(PPh_{3})_{4} (74 mg,
0,0645 mmoles) en Na_{2}CO_{3} acuoso 1,5M (1,37 ml, 2,06
mmoles) y dioxano (2,75 ml). Después de la evaporación del
disolvente, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna
sobre gel de sílice eluyendo con DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 96:6
para proporcionar el compuesto del título (23 mg, 21%). LCMS: Rt
1,94 min. (97,9%). RMN ^{1}H (400MHz,
d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,26 (3H, s), 2,49
(4H, m), 3,14 (4H, m), 6,98 (2H, d), 7,51 (1H, br s),
7,85-7,89 (2H, m), 8,03 (2H, d), 8,10 (1H, br s),
8,38 (1H, s), 8,82 (1H, s), 10,10 (1H, s). LCMS: Rt 1,94
min.,(97,9%), m/z (APCI) 435 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
12
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina
(0,2 g, 0,53 mmoles),
5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol
(222 mg, 1,06 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (0,154
mg, 0,134 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (ac.) (2,84 ml, 4,26
mmoles) y dioxano (8,5 ml). La mezcla de reacción se purificó
mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice usando
DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 98:2 y 97:3 para dar el compuesto del
título (15 mg, 7,5%). La conversión en la sal de mesilato usando
ácido metanosulfónico 0,1M en MeOH (0,398 ml) proporcionó el
compuesto del título (15 mg) como un sólido verde pálido. RMN
^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,41
(3H, s, MsOH), 2,46 (3H, s), 3,20 (4H, m), 3,71 (4H, m), 7,11 (2H,
d), 7,74 (1H, s), 7,97 (2H, d), 8,15 (1H, s), 8,69 (1H, s), 9,88
(1H, s). LCMS: Rt 2,41 min. (98,3%), m/z (APCI) 377
(M+H)^{+}.
\newpage
Compuesto
15
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina
(0,2 g, 0,53 mmoles), amida del ácido
4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-tiofen-2-carboxílico
(0,27 mg, 1,06 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (0,15
mg, 0,133 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (ac.) (2,84 ml, 4,26
mmoles) y dioxano (10 ml). La mezcla de reacción se repartió entre
agua y acetato de etilo. Se formó un precipitado, se recogió
mediante filtración y se purificó mediante cromatografía en columna
sobre gel de sílice usando DCM:MeOH 95:5 para dar el compuesto del
título (84,1 mg, 37,4%). RMN ^{1}H (400MHz,
d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 3,13 (4H, m), 3,79 (4H,
m), 7,01 (2H, d), 7,60 (1H, br s), 7,91 (2H, d), 8,10 (2H, s), 8,48
(1H, s), 8,66 (1H, s), 8,79 (1H, s), 9,96 (1H, s). LCMS: Rt 2,61
min. (97,1%), m/z (APCI) 422 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
16
Etapa
1
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 86, etapa 2, usando
4-bromo-5-metil-1H-pirazol
(3 g, 18,6 mmoles), bis(pinacolato)diboro (8,52 g,
33,5 mmoles), PdCl_{2}dppf (913 mg, 1,118 mmoles) y KOAc (5,49 mg,
55,9 mmoles) en dimetilsulfóxido (30 ml). La mezcla de reacción se
purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice
eluyendo con éter de petróleo:acetato de etilo 7:3 seguido de 1:1
para proporcionar
5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol
(3,87 g, 100%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-amina
(132 mg, 0,340 mmoles),
5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol
(141 mg, 0,68 mmoles), Pd(PPh_{3})_{4} (98 mg,
0,085 mmoles) y Na_{2}CO_{3} 1,5N (1,81 ml, 2,72 mmoles) en
dioxano (5,4 ml). El producto bruto se purificó mediante
cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con
DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 95:5, seguido de trituración con éter
dietílico y con éter de petróleo para proporcionar el compuesto del
título (9 mg, 7%) como un sólido verde pálido. RMN ^{1}H (400MHz,
d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,27 (3H, s),
2,38-2,49 (7H, m), 3,14 (4H, m), 6,97 (2H, d), 7,70
(1H, s), 7,88 (2H, d), 7,99 y 8,43 (1H, br s), 8,68 (1H, s), 9,71
(1H, s), 12,92 y 12,98 (1H, br s).
La conversión en la sal de mesilato usando ácido
metanosulfónico 0,1 M (0,231 ml) produjo el compuesto diana (11 mg).
LCMS: Rt 1,78 min. (86%), m/z (APCI) 390
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
17
Etapa
1
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 1, usando
5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina
(0,5 g, 1,799 mmoles),
3-fluoro-4-morfolin-4-il-fenilamina
(0,53 g, 2,70 mmoles), y DIPEA (0,470 ml, 2,70 mmoles) en
2-propanol (6 ml). La mezcla de reacción se repartió
entre disolución acuosa de ácido cítrico al 10% y DCM. La fase
orgánica se separó y se lavó con agua y con salmuera, se secó sobre
MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío para
proporcionar el compuesto del título (697 mg, 98%), que se usó en
la etapa siguiente sin purificación adicional. LCMS: Rt 3,52 min.
(98,2%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(3-fluoro-4-morfolin-4-il-fenil)-amina
(100 mg, 0,254 mmoles),
4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol
(99 mg, 0,51 mmoles) y Pd(PPh_{3})_{4} (73 mg,
0,063 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (1,36 ml, 2,03 mmoles) y
dioxano (4 ml). El material bruto se purificó mediante
cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con
DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 98:2 y mediante trituración con éter
dietílico y con éter de petróleo para producir el compuesto diana
(43 mg, 44%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO)
\delta (ppm) 3,01 (4H, m), 3,79 (4H, m), 7,08 (1H, t), 7,79 (1H,
d), 8,06 (1H, d), 8,26 (1H, s), 8,38 (1H, s), 8,67 (1H, s), 8,79
(1H, s), 10,03 (1H, s), 13,3 (1H, br s). LCMS: Rt 2,83 min. (99%),
m/z (APCI) 381 (M+H)^{+}.
\newpage
Compuesto
19
Etapa
1
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 1, usando
5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina
(250 mg, 0,90 mmoles),
5-amino-2-morfolin-4-ilbenzamida
(299 mg, 1,35 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (0,24 ml,
1,35 mmoles) en 2-propanol (7 ml). La trituración
con ^{i}PrOH y Et_{2}O proporcionó el compuesto del título (273
mg, 73%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
5-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-2-morfolin-4-il-benzamida
(140 mg, 0,33 mmoles),
4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol
(130 mg, 0,67 mmoles) y Pd(PPh_{3})_{4}, (96 mg,
0,083 mmoles) en K_{2}CO_{3} 1,5M (ac.) (1,93 ml) y dioxano
(3,44 ml). El material bruto se purificó mediante cromatografía en
columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM seguido de
DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 99:1, después 97:3 y después 95:5 para
proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (40,5
mg, 30%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO)
\delta (ppm) 2,96 (4H, m), 3,79 (4H, m), 7,28 (2H, d), 7,45 (1H,
m), 7,54 (1H, br s), 8,01-8,09 (1H, dd), 8,25 (1H,
s), 8,50 (1H, d), 8,69 (1H, br s), 8,78 (1H, s), 9,98 (1H, s), 13,3
(1H, br s). LCMS: Rt 2,23 min. (96,9%), m/z (APCI) 406
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
21
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(2-morfolin-4-il-etoxi)-fenil]-amina
(113 mg, 0,27 mmoles),
4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-tiofen-2-carboxamida
(136 mg, 0,537 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (78 mg,
0,067 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (1,44 ml, 2,16 mmoles) y
dioxano (4,3 ml). La mezcla de reacción se purificó mediante
cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con
DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 97:3 para producir el compuesto del
título (65 mg, 52%). LCMS: Rt 1,98 min. (98,9%). La conversión en la
sal de mesilato usando ácido metanosulfónico 0,1M en MeOH (1,1385
ml) proporcionó el compuesto del título (50 mg, 95%). RMN ^{1}H
(400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,37 (3H, s,
MsOH), 3,21-3,64 (6H, m), 3,76 (2H, t), 4,05 (2H,
d), 4,40 (2H, m), 7,09 (2H, d), 7,61 (1H, br s), 8,02 (2H, d), 8,11
(2H, s), 8,48 (1H, s), 8,67 (1H, s), 8,82 (1H, s), 9,91 (1H, br s),
10,09 (1H, s). LCMS: Rt 1,98 min. (97,7%), m/z (APCI) 466
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
22
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(2-morfolin-4-il-etoxi)-fenil]-amina
(118 mg, 0,28 mmoles),
5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-tiofen-2-carboxamida
(142 mg, 0,56 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (81 mg,
0,07 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (1,5 ml, 2,24 mmoles) y
dioxano (4,5 ml). La mezcla de reacción se purificó mediante
cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con
DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 97:3 para producir el compuesto del
título (33 mg, 25%). LCMS: Rt 2,66 min. (99%). La conversión en la
sal de mesilato usando ácido metanosulfónico 0,1M en MeOH (0,569
ml) proporcionó el compuesto del título (24 mg, 86%). RMN ^{1}H
(400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,37 (3H, s,
MsOH), 3,25 (2H, m), 3,50-3,64 (4H, m), 3,76 (2H,
t), 4,05 (2H, d), 4,40 (2H, m), 7,09 (2H, d), 7,51 (1H, br s), 7,87
(1H, d), 7,99-8,05 (3H, m), 8,11 (1H, br s), 8,37
(1H, s), 8,84 (1H, s), 9,92 (1H, br s), 10,21 (1H, s). LCMS: Rt 1,95
min. (98,8%), m/z (APCI) 466 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
23
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se disolvió 1H-pirazol (14,3 g, 0,21
moles) en
3,4-dihidro-2H-pirano
(26,74 g, 0,32 moles) en presencia de una cantidad catalítica de TFA
(0,1 ml, 1,3 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a 95ºC durante
5 horas, se enfrió y después se paralizó usando NaH (0,2 g, 5
mmoles). El disolvente se eliminó para dar el compuesto del título
como un aceite marrón (33,3 g, 99%), que se usó en la etapa
siguiente sin purificación adicional.
\newpage
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución enfriada (-78ºC) de
1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol
(7,6 g, 52 mmoles) en THF (50 ml), se añadieron gota a gota
nBuLi (33 ml, 2,5M en hexano, 82,5 mmoles) y
triisopropilborano (12,7 ml, 55 mmoles), manteniendo la temperatura
a -70ºC. La mezcla de reacción se agitó a -70ºC durante una hora, y
después se dejó alcanzar temperatura ambiente durante 4 horas.
Después de paralizar la reacción con HCl 2M, el disolvente se
eliminó a vacío, y el pH se ajustó hasta pH 6 usando NaOH 1M.
Se formó un precipitado, se recogió mediante filtración, y se lavó
con tolueno y con éter de petróleo. La trituración con acetato de
etilo proporcionó el compuesto diana como un sólido blanco (2,7 g,
48%), que se usó en la etapa siguiente sin purificación
adicional.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(morfolin-4-il)-fenil]-amina
(100 mg, 0,267 mmoles), ácido
1H-pirazol-2-borónico
(60 mg, 0,535 mmoles), Pd(PPh_{3})_{4} (93 mg,
0,08 mmoles) y Na_{2}CO_{3} (88 mg, 0,80 mmoles) en DMF (2 ml).
La mezcla de reacción se colocó en un tubo aplastado y se agitó a
100ºC durante 18 horas. Después de enfriar, la mezcla se diluyó con
disolución de NaHCO_{3} y se extrajo con EtOAc (4x). La capa
orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se
evaporó para proporcionar un producto bruto que se purificó
mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con
DCM seguido de DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 96:4. El compuesto del
título se aisló después de la trituración con éter dietílico (12,4
mg, 13%). La conversión en la sal de mesilato usando ácido
metanosulfónico 0,1M (0,342 ml, 0,0342 mmoles) da el compuesto
diana (10 mg, 81%). RMN ^{1}H (400MHz,
d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,34 (3H, s, MsOH),
3,14 (4H, m), 3,81 (4H, m), 7,04 (2H, d), 7,27 (1H, m), 7,92 (3H,
m), 8,24 (1H, s), 8,76 (1H, s), 9,92 (1H, s). LCMS: Rt 2,45 min.
(97,6%), m/z (APCI) 363 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
28
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
5-bromo-N-(6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina
(100 mg, 0,24 mmoles),
4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-tiofen-2-carboxamida
(121 mg, 0,48 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (69 mg,
0,059 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (1,28 ml, 1,92 mmoles) y
dioxano (3,84 ml). El producto bruto se purificó mediante
cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM y
DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 97:3 para producir el compuesto del
título (68 mg, 61%) como un sólido verde pálido. La conversión en la
sal de mesilato usando ácido metanosulfónico 0,1M en MeOH (1,47 ml,
0,147 mmoles), seguido de trituración con DCM y éter dietílico,
proporcionó el compuesto del título (67 mg, 98,5%). RMN ^{1}H
(400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 1,35 (6H, d),
2,34 (3H, s, MsOH), 3,00 (2H, t), 3,22-3,25 (2H, m),
3,56-3,61 (3H, m), 3,89 (2H, d), 7,09 (2H, d), 7,60
(1H, br s), 7,97 (2H, d), 8,10 (2H, s), 8,48 (1H, s), 8,67 (1H, s),
8,81 (1H, s), 9,23 (1H, br s), 10,03 (1H, s). LCMS: Rt 2,13 min.
(98,4%), m/z (APCI) 463 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
29
Etapa
1
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 35, etapa 3, usando
éster terc-butílico del ácido
(4-morfolin-4-il-fenil)-(5-tributilestannanil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-carbámico
(137 mg, 0,199 mmoles),
5-bromo-furan-3-carboxamida
(76 mg, 0,4 mmoles) y Pd(PPh_{3})_{4} (23 mg,
0,020 mmoles) en DMF (1 ml). La purificación de la mezcla de
reacción eluyendo con DCM:MeOH 98:2 y DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 96:4
proporcionó el compuesto del título (33 mg, 33%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
Una disolución de éster terc-butílico del
ácido
[5-(4-carbamoil-furan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-(4-morfolin-4-il-fenil)-carbámico
(33 mg, 0,065 mmoles) en una mezcla 1:1 de DCM:TFA (2 ml) (2 gotas
de agua) se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después
de la adición de Na_{2}CO_{3} sat., se formó un precipitado, se
recogió mediante filtración y se lavó con agua, con éter dietílico
y con éter de petróleo. Tras secar a vacío, se aisló el
compuesto del título (20 mg, 76%). La conversión en la sal de
mesilato usando ácido metanosulfónico 0,1M en MeOH (0,444 ml)
produjo el compuesto del título (19 mg, 100%). RMN ^{1}H (400MHz,
d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,36 (3H, s, MsOH),
3,22 (4H, m), 3,82-3,89 (4H, m), 7,13 (2H, d), 7,36
(1H, br s), 7,86 (1H, s), 7,95 (3H, m), 8,17 (1H, s), 8,40 (1H, s),
8,84 (1H, s), 10,17 (1H, s). LCMS: Rt 2,60 min. (96,9%), m/z
(APCI) 406 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
33
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina
(1,0 g, 2,67 mmoles),
5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-dihidro-isoindol-1-ona
(véase la descripción para el Compuesto 79) (1,03 g, 4,01 mmoles) y
Pd(PPh_{3})_{4} (0,77 g, 0,67 mmoles) en
Na_{2}CO_{3} 1,5M (14,3 ml) y dioxano (40 ml). La purificación
mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con
DCM seguido de DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 96:4 proporcionó el
compuesto del título (0,895 g, 79%). RMN ^{1}H (400MHz,
d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 3,12 (4H, m), 3,79 (4H,
m), 4,51 (2H, s), 7,01 (2H, d), 7,84 (1H, d), 7,92 (2H, d), 8,01
(1H, s), 8,09 (1H, d), 8,23 (1H, s), 8,72 (1H, s), 8,73 (1H, s),
10,02 (1H, s). LCMS: Rt 2,51 min. (97,8%), m/z (APCI) 428
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
34
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina
(78 mg, 0,16 mmoles), amida del ácido
4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-furan-2-carboxílico
(100 mg, 0,34 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (60 mg,
0,052 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (ac.) (1,1 ml, 1,68 mmoles),
y dioxano (3 ml). La mezcla de reacción se repartió entre agua y
acetato de etilo, el compuesto del título precipitó y se recogió
mediante filtración. La purificación del sólido mediante
cromatografía en columna sobre gel de sílice, eluyendo con DCM y
DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 95:5, proporcionó el compuesto del título
(42 mg, 65%). La conversión en la sal de mesilato usando ácido
metanosulfónico 0,1M (0,82 ml) dio un sólido que se trituró con éter
dietílico para proporcionar el compuesto del título (30,5 mg). RMN
^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,19
(3H, s, MsOH), 3,03-3,07 (4H, m), 3,67 (4H, m), 6,99
(2H, br s), 7,43 (1H, d), 7,74-7,82 (4H, m), 8,06
(1H, br s), 8,59 (1H, br s), 8,64 (1H, s), 9,91 (1H, br s). LCMS: Rt
2,64 min. (98,1%), m/z (APCI) 406 (M+H)^{+}.
\newpage
Compuesto
35
Etapa
1
Una disolución de
5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(morfolin-4-il)-fenil]-amina
(300 mg, 0,800
mmoles), dimetilaminopiridina (10 mg, 0,08 mmoles) y dicarbonato de di-terc-butilo (523 mg, 2,4 mmoles) en diclorometano (5 ml) se agitó a 50ºC toda la noche. La mezcla de reacción se repartió entre DCM y agua, y la capa orgánica se lavó con NaOH 1N y con salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío para proporcionar un compuesto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice. La elución con DCM:MeOH 98:2 produjo el compuesto del título (352 mg, 93%). LCMS: Rt 3,45 min. (97,8%).
mmoles), dimetilaminopiridina (10 mg, 0,08 mmoles) y dicarbonato de di-terc-butilo (523 mg, 2,4 mmoles) en diclorometano (5 ml) se agitó a 50ºC toda la noche. La mezcla de reacción se repartió entre DCM y agua, y la capa orgánica se lavó con NaOH 1N y con salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío para proporcionar un compuesto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice. La elución con DCM:MeOH 98:2 produjo el compuesto del título (352 mg, 93%). LCMS: Rt 3,45 min. (97,8%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
A una disolución enfriada (-78ºC) de éster
terc-butílico del ácido
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-carbámico
(370 mg, 0,78 mmoles) en THF (12 ml) se añadió cloruro de
isopropilmagnesio 2M en THF (0,78 ml, 1,56 mmoles), y, después de
agitar 5 minutos, se añadió cloruro de tributilestaño (0,42, 1,56
mmoles). La mezcla de reacción se agitó a -78ºC durante 15 minutos
y a temperatura ambiente durante 15 minutos adicionales. Tras
eliminar el disolvente, el residuo se purificó mediante
cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con éter de
petróleo:acetato de etilo 5:1, seguido de éter de petróleo:acetato
de etilo 1:1. Se aisló el compuesto del título (105 mg, 20%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
A una disolución desgasificada de éster
terc-butílico del ácido
(4-morfolin-4-il-fenil)-(5-tributilestannanil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-carbámico
(100 mg, 0,15 mmoles) y
6-bromo-3,4-dihidro-2H-isoquinolin-1-ona
en DMF (1 ml) se añadió
tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (17 mg,
0,015 mmoles), y la mezcla de reacción se agitó a 90ºC toda la
noche. Después de eliminar el disolvente a vacío, el residuo
se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice.
La elución con éter de petróleo:acetato de etilo 1:1 y acetato de
etilo proporcionó el compuesto diana como un sólido amarillo (30 mg,
37%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
Una disolución de éster terc-butílico del
ácido
(4-morfolin-4-il-fenil)-[5-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-6-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-carbámico
(30 mg, 0,055 mmoles) en una mezcla 1:1 de TFA:DCM (1 gota de
H_{2}O) se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. El
disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se repartió entre
acetato de etilo y NaHCO_{3} sat. (ac.). La capa acuosa se extrajo
con acetato de etilo (2x). Las capas orgánicas se combinaron y se
evaporaron para proporcionar un residuo purificado mediante
cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con acetato de
etilo. El compuesto del título se aisló (18 mg, 75%) y se convirtió
en la sal de mesilato (16,6 mg, 97%) usando ácido metanosulfónico
0,1M (0,317 ml) en MeOH.
RMN ^{1}H (400MHz,
d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,36 (3H, s MsOH), 3,04
(2H, t), 3,21 (4H, m), 3,47 (2H, t), 3,83 (4H, m), 7,11 (2H, d),
7,95-8,02 (6H, m), 8,05 (1H, s), 8,74 (1H, s), 10,09
(1H, brs). LCMS: Rt 2,81 min. (97,9%), m/z (APCI) 442
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
36
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
5-bromo-N-(6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina
(0,6 g, 1,44 mmoles),
5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-dihidro-isoindol-1-ona
(0,56 g, 2,16 mmoles) y Pd(PPh_{3})_{4} (0,416 g,
0,36 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (7,7 ml) y dioxano (23 ml). La
purificación mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice
eluyendo con DCM seguido de DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 98:2
proporcionó el compuesto del título (0,36 g, 53%) que se convirtió
en la sal de mesilato usando ácido metanosulfónico 1M en MeOH (0,77
ml). Tras la trituración con éter dietílico y DCM, el compuesto del
título se aisló como un sólido (0,410 g). RMN ^{1}H (400MHz,
d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 1,35 (6H, d), 2,35 (3H,
s, MsOH), 3,04 (2H, t), 3,20-3,27 (2H, m),
3,56-3,63 (3H, m), 3,89 (2H, d), 4,52 (2H, s), 7,09
(2H, d), 7,85 (1H, d), 7,95-8,01 (3H, m), 8,10 (1H,
d), 8,24 (1 H, s), 8,72 (1H, s), 8,74 (1H, s), 9,27 (1H, br s),
10,07 (1H, s). LCMS: Rt 2,93 min. (97,9%), m/z (ES^{+}) 469
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
37
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución enfriada (0ºC) de
2-morfolin-4-il-5-nitro-benzaldehído
(0,8 g, 3,39 mmoles) en MeOH (5 ml) se añadió NaBH_{4} (0,125 g,
3,39 mmoles), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura
ambiente durante 3 horas. Después de paralizar la reacción con agua,
el disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se disolvió en
acetato de etilo y se lavó con salmuera. La capa orgánica se secó
sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró para proporcionar el
compuesto del título (870 mg), que se usó en la etapa siguiente sin
purificación adicional.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
(2-morfolin-4-il-5-nitro-fenil)-metanol
(870 mg) en etanol (40 ml) se añadió hidróxido de paladio (87 mg), y
la mezcla se agitó en un aparato Parr a una presión de hidrógeno (10
bares) durante 4 horas. La mezcla de reacción se filtró sobre Celite
521, se lavó con etanol y se concentró a vacío para dar el
compuesto del título (640 mg, 83%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución de
(5-amino-2-morfolin-4-il-fenil)-metanol
(640 mg, 3,07 mmoles), cloruro de
terc-butildimetilsi-
lilo (509 mg, 3,38 mmoles) e imidazol (250 mg, 3,68 mmoles) en dimetilformamida (20 ml) se agitó a temperatura ambiente toda la noche. El disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se repartió entre agua y acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró para proporcionar un producto bruto. La purificación, usando cromatografía en columna sobre gel de sílice, eluyendo con DCM seguido de una mezcla 95:5 de DCM:MeOH, proporcionó el compuesto del título como un sólido rosa (390 mg, 27%).
lilo (509 mg, 3,38 mmoles) e imidazol (250 mg, 3,68 mmoles) en dimetilformamida (20 ml) se agitó a temperatura ambiente toda la noche. El disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se repartió entre agua y acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró para proporcionar un producto bruto. La purificación, usando cromatografía en columna sobre gel de sílice, eluyendo con DCM seguido de una mezcla 95:5 de DCM:MeOH, proporcionó el compuesto del título como un sólido rosa (390 mg, 27%).
\newpage
Etapa
4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una mezcla de
5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina
(0,391 g, 1,41 mmoles),
3-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-morfolin-4-il-fenilamina
(0,5 g, 1,55 mmoles) y
N-etildiisopropil-amina (0,27 ml, 1,55
mmoles) se calentó a 90ºC en 2-propanol (10 ml)
durante 8 horas. La mezcla de reacción se evaporó hasta sequedad, y
el residuo se repartió entre diclorometano y agua. La fase acuosa
se extrajo dos veces con diclorometano. Las capas orgánicas se
combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4},
se filtraron y se concentraron a vacío para proporcionar el
compuesto del título (335 mg, 46%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución de
5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[3-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-morfolin-4-il-fenil]-amina
(285 mg, 0,549 mmoles) en disolución 1M de fluoruro de
tetrabutilamonio en THF (0,63 ml) se agitó a temperatura ambiente
durante 1 hora. La mezcla de reacción se repartió entre acetato de
etilo y agua. La capa orgánica se lavó con disolución al 10% de
ácido cítrico y con salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y
se concentró para proporcionar el compuesto del título como un
sólido de color crema (100 mg, 45%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
6
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
[5-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-2-morfolin-4-il-fenil]-metanol
(85 mg, 0,21 mmoles),
4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol
(81 mg, 0,42 mmoles) y Pd(PPh_{3})_{4} (60 mg,
0,052 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (1,12 ml) y dioxano (2,0 ml).
La mezcla de reacción se purificó mediante cromatografía en columna
sobre gel de sílice, eluyendo con DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 95:3
seguido de purificación mediante HPLC preparativa de fase inversa.
El compuesto del título se obtuvo como un sólido marrón claro (10
mg, 12%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO)
\delta (ppm) 2,87 (4H, m), 3,77 (4H, m), 4,63 (2H, d), 5,12 (1H,
t), 7,11 (1H, d), 7,84 (1H, d), 8,12 (1H, s), 8,21 (1H, s), 8,39
(1H, s), 8,69 (1H, s), 8,77 (1H, s), 9,78 (1H, s), 13,29 (1H, br s).
LCMS: Rt 2,45 min. (96,3%), m/z (APCI) 393
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
41
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos tales como se describen para el Compuesto 120, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(6-morfolin-4-il-piridin-3-il)amina
en la etapa 4. LCMS: Rt = 0,80 min. (95%), m/z (ESI) 364
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
42
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos descritos para el Compuesto 120, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[6-(4-[ciclopropilmetil]piperazin-1-il)piridin-3-il]amina
en la etapa 4. LCMS: Rt = 0,80 min. (95%), m/z (ESI) 417
(M+H)^{+}.
\newpage
Compuesto
43
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 120, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il]amina
en la etapa 4. LCMS: Rt = 0,77 min. (95%), m/z (ESI) 405
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
44
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 120, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-{6-[4-(2,2,2-trifluoroetil)piperazin-1-il]-piridin-3-il}amina
en la etapa 4.
LCMS: Rt = 0,95 min. (95%), m/z (ESI) 445 (M+H)^{+}.
LCMS: Rt = 0,95 min. (95%), m/z (ESI) 445 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
46
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 120, etapa 4, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-{4-[4-ciclopropilmetil)piperazin-1-il]fenil}amina.
LCMS: Rt = 1,02 (95%), m/z (ESI) = 444
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
47
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 167, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(6-morfolin-4-il-piridin-3-il)amina
en la etapa 4. LCMS: Rt = 0,85 min. (95%), m/z (ESI) 423
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
48
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 120, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-ilfenil)amina
y
4,4,5,5-tetrametil-2-benzo[b]tiofen-3-il-[1,3,2]dioxaborolano
en la etapa 4. LCMS: Rt 0,84 min. (95%), m/z (ESI) 402
(M+H)^{+}.
\newpage
Compuesto
50
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 120, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-ilfenil)amina
y
4,4,5,5-tetrametil-2-tiofen-3-il-[1,3,2]dioxaborolano
en la etapa 4. LCMS: Rt 1,19 min. (95%), m/z (ESI) 379
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
51
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 50, usando
(5-bromo[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)-fenil]amina
en la etapa final. LCMS: Rt = 1,11 min. (95%), m/z (ESI) 420
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
52
Etapa
1
A una disolución agitada de
1-trimetilsilanil-pent-1-in-3-ona
(0,5 g, 3,25 mmoles) y sal de sulfato de hidrazina (0,56 g, 4,33
mmoles) en etanol (15 ml) se añadió Na_{2}CO_{3} sat. (0,52 g,
4,87 mmoles), y la mezcla se puso a reflujo a 90ºC durante 5 horas.
La mezcla de reacción se diluyó con agua y salmuera, y se extrajo
usando éter dietílico (3x). Las capas orgánicas se combinaron, se
secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron para
proporcionar un producto bruto, que se purificó mediante
cromatografía en columna sobre gel de sílice. La elución con éter
de petróleo:acetato de etilo 90:10 proporcionó el compuesto del
título (0,1196 g, 36%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución agitada de
3-etil-1H-pirazol
(0,114 g, 1,186 mmoles) en ácido acético (2 ml) se añadió bromo
(0,061 ml, 1,186 mmoles), y la mezcla se agitó a temperatura
ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se basificó con
NaHCO_{3} sat., y se extrajo usando acetato de etilo (3x). Las
capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgSO_{4}, se
filtraron y se concentraron para dar el compuesto del título (0,180
g, 87%). El compuesto se usó en la siguiente etapa sin purificación
adicional.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se disolvió
4-bromo-5-etil-1H-pirazol
(0,179 g, 1,032 mmoles) en
3,4-dihidro-2H-pirano
(0,28 ml, 3,098 mmoles) en presencia de una cantidad catalítica de
TFA (0,001 ml, 0,00103 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a
90ºC durante 3 horas, se enfrió y después se paralizó usando NaH
(1,5 mg, 0,0061 mmoles). Después de eliminar el disolvente, el
residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de
sílice eluyendo con una mezcla 90:10 de éter de
petróleo-acetato de etilo. Las fracciones que
contenían los compuestos deseados se recogieron y concentraron a
vacío para proporcionar los compuestos del título (175 mg,
66%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 86, etapa 2, usando
4-bromo-5-etil-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol
y
4-bromo-3-etil-1-(tetrahidropiran-2-il)-1H-pirazol
(168 mg, 0,65 mmoles), bis(pinacolato)diboro (331 mg,
1,3 mmoles), PdCl_{2}dppf (53 mg, 65 \mumoles) y KOAc (190 mg,
1,95 mmoles) en dimetilsulfóxido (2 ml). La mezcla de reacción se
purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice
eluyendo con éter de petróleo:acetato de etilo 90:10 para
proporcionar los compuestos del título (61,1 mg, 31%).
\newpage
Etapa
5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina
(0,032 g, 0,085 mmoles),
5-etil-1-(tetrahidro-piran-2-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol
y
3-etil-1-(tetrahidro-piran-2-il)-4-(4,4,5,5-
tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (0,52 mg, 0,17 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (0,025 mg, 0,021 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (ac) (0,45 ml, 0,6 mmoles) y dioxano (2 ml). La mezcla de reacción se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con éter de petróleo:acetato de etilo 1:1 seguido de éter de petróleo:acetato de etilo 1:4 para producir el compuesto del título (45 mg).
tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (0,52 mg, 0,17 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (0,025 mg, 0,021 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (ac) (0,45 ml, 0,6 mmoles) y dioxano (2 ml). La mezcla de reacción se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con éter de petróleo:acetato de etilo 1:1 seguido de éter de petróleo:acetato de etilo 1:4 para producir el compuesto del título (45 mg).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
6
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución de
{5-[5-etil-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol-4-il]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il}-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina
y
{5-[3-etil-1-(tetrahidropiran-2-il)-1H-pirazol-4-il]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il}-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina
(40 mg, 0,077 mmoles) y HCl conc. (0,3 ml) en MeOH (10 ml) se agitó
a temperatura ambiente durante 5 horas. Después de eliminar el
disolvente, el residuo sólido se repartió entre acetato de etilo y
NaHCO_{3} sat. El sólido no disuelto se recogió mediante
filtración, se lavó con agua, con éter dietílico y con éter de
petróleo, y se secó para proporcionar el compuesto del título (5
mg, 17%). La conversión en la sal de mesilato usando ácido
metanosulfónico 0,1M (0,128 ml) proporcionó el compuesto del título
(5,6 mg, 89%) como un sólido. RMN ^{1}H (400MHz,
d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 1,13 (3H, m), 2,29 (3H,
s, MsOH), 2,74 (2H, m), 3,29 (4H, m), 3,77 (4H, m), 7,06 (2H, m),
7,62 (1H, s), 7,89 (2H, d), 8,00 (1H, s), 8,61 (1H, s), 9,83 (1H,
s). LCMS: Rt 2,69 min. (98,4%), m/z (APCI) 391
(M+H)^{+}.
\newpage
Compuesto
53
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 86, etapa 2, usando
6-bromo-1,1-dioxo-1,2-dihidro-1\lambda_{6}-benzo[d]isotiazol-3-ona
(0,5, 1,9 mmoles), bis(pinacolato)diboro (0,53 g; 2,1
mmoles), PdCl_{2}dppf (0,047 g, 0,058 mmoles) y KOAc (0,56 g, 5,7
mmoles) en dioxano (10 ml). El disolvente se eliminó a
vacío, y el residuo se repartió entre DCM y agua. La capa
orgánica se lavó con NaHCO_{3} sat. y HCl 2M, se secó sobre
MgSO_{4}, se filtró y se evaporó para proporcionar el compuesto
del título (990 mg, 169%), usado en la siguiente etapa sin
purificación adicional.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando el
éster terc-butílico del ácido
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-carbámico
(170 mg, 0,36 mmoles),
1,1-dioxo-6-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1,2-dihidro-1\lambda_{6}-benzo[d]isotiazol-3-ona
(374 mg, 0,72 mmoles) y Pd(PPh_{3})_{4} (100 mg,
0,082 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (2 ml, 3 mmoles) y dioxano (6
ml). La purificación de la mezcla de reacción mediante cromatografía
en columna sobre gel de sílice usando éter de petróleo:acetato de
etilo 1:1 proporcionó un compuesto todavía impuro. Una segunda
cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM:MeOH
10:1 proporcionó el compuesto del título (91 mg, 44%).
\newpage
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una suspensión de éster terc-butílico del
ácido
(4-morfolin-4-il-fenil)-[5-(1,1,3-trioxo-2,3-dihidro-1H-1\lambda^{6}-benzo[d]isotiazol-6-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-carbámico
(100 mg, 0,173 mmoles) en HCl 4M (2,5 ml) en dioxano se agitó a
temperatura ambiente durante 2 horas. El disolvente se eliminó a
vacío, y el residuo se trituró con DCM, éter dietílico y éter de
petróleo para proporcionar el compuesto del título (84 mg, 100%).
RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm)
3,25 (4H, m), 3,85 (4H, m), 7,20 (2H, d), 7,88 (2H, d), 8,16 (1H,
d), 8,24 (1H, s), 8,58 (1H, d), 8,82 (2H, s), 8,96 (1H, s), 10,31
(1H, s). LCMS: Rt 2,31 min. (95,7%), m/z (APCI) 478
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
54
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos descritos para el compuesto 120, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[6-(4-[ciclopropilmetil]piperazin-1-il)piridin-3-il]amina
en la etapa 4. LCMS: Rt = 0,85 min. (95%), m/z (ESI) 476
(M+H)^{+}.
\newpage
Compuesto
55
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 167, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il]amina
en la etapa 4. LCMS: Rt = 0,82 min. (95%), m/z (ESI) 464
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
56
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 167, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-{6-[4-(2,2,2-trifluoroetil)piperazin-1-il]-piridin-3-il}amina
en la etapa 4.
LCMS: Rt = 0,99 min. (95%), m/z (ESI) 504 (M+H)^{+}.
LCMS: Rt = 0,99 min. (95%), m/z (ESI) 504 (M+H)^{+}.
\newpage
Compuesto
57
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 58, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-{4-[4-(2,2,2-trifluoroetil)piperazin-1-il]fenil}amina.
LCMS: Rt = 1,07 min. (95%), m/z (ESI) 503
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
58
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 46, usando ácido
2-(aminocarbonil)tiofen-4-borónico.
LCMS: Rt = 0,93 (95%), m/z (ESI) 475 (M+H)^{+}.
\newpage
Compuesto
59
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 46, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-ciclopropilpiperazin-1-il)-fenil]amina.
LCMS: Rt = 0,84 (95%), m/z (ESI) 402 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
60
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos descritos para el Compuesto 120, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[6-(4-ciclopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il]amina
en la etapa 4. LCMS: Rt = 0,76 min. (95%), m/z (ESI) 403
(M+H)^{+}.
\newpage
Compuesto
61
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 73, usando amoniaco (7 M
en McOH) como se usa en la etapa 3. LCMS: Rt = 1,00 min. (95%),
m/z (ESI) 423 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
62
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 61, usando
(5-bromo[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)-fenil]amina
en la etapa final. LCMS: rt = 0,96 min. (95%), m/z (ESI) 464
(M+H)^{+}.
\newpage
Compuesto
63
Etapa
1
Se agitaron trietilamina (1,0 ml, 7,3 mmoles) y
4-(4-nitrofenil)piperidina (1,0 g, 4,8
mmoles) en DCM (25 ml) a 0ºC en N_{2}, y se añadió anhídrido
trifluoroacético (0,81 ml, 5,8 mmoles). La mezcla se agitó durante
tres días, dejando que la temperatura se calentara hasta rt. La
disolución se diluyó entonces con DCM (50 ml) y se lavó con agua (2
x 15 ml), NaHCO_{3} (50% sat. ac., 2 x 15 ml) y salmuera (15 ml).
El disolvente se secó sobre MgSO_{4} y se evaporó para
proporcionar el compuesto deseado (1,46 g, 4,66 mmoles).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
Una disolución de
1-trifluoroacetil-4-(4-nitrofenil)piperidina
(1,42 g, 4,7 mmoles) en THF (15 ml) se agitó en un matraz de 2
bocas de 25 ml al que se le ajusta un condensador y embudo de
adición igualador de la presión. El sistema se inundó con N_{2},
se añadió NaBH_{4} (210 mg, 5,6 mmoles), y el matraz se enfrió
hasta 0ºC. Se añadió entonces gota a gota una disolución de yodo
(600 mg, 2,3 mmoles) en THF (5 ml) durante 20 minutos, después de
lo cual se retiró el embudo de adición y la mezcla se calentó a
reflujo toda la noche. La suspensión amarilla clara resultante se
enfrió hasta rt, y se añadió MeOH (1,5 ml) con cuidado, provocando
el desprendimiento vigoroso de un gas. La evaporación de los
disolventes proporcionó el compuesto del título, que se usó sin
purificación adicional.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
Se añadieron formiato de amonio (1,38 g, 22
mmoles) y Pd al 10%/C (230 mg, 0,2 mmoles) a una disolución de
1-(2,2,2-trifluoroetil)-4-(4-nitrofenil)piperidina
(1,26 g, 4,4 mmoles) en EtOH (10 ml) y EtOAc (10 ml). La suspensión
se calentó a reflujo durante 24 horas, añadiendo porciones
adicionales de formiato de amonio (2 g) después de 4 h y 8 h. La
mezcla se filtró a través de celita y se evaporó para proporcionar
un sólido naranja. Este sólido se repartió entre DCM (40 ml) y agua
(20 ml), y las capas se separaron. La fase acuosa se extrajo con
DCM (2 x 20 ml), y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre
MgSO_{4} y se evaporaron a presión reducida para proporcionar
N-{4-[1-(2,2,2-trifluoroetil)piperidin-4-il]fenil}formamida
como un sólido naranja pálido (980 mg).
Una disolución de la formamida en MeOH (20 ml)
se agitó a rt y se añadió HCl (conc., 1 ml). La disolución de color
violeta intenso se calentó a reflujo durante 1 h, se enfrió y se
evaporó el MeOH. El residuo se agitó con agua (20 ml), y se añadió
NaHCO_{3} (sat. ac.) hasta que cesó el burbujeo. La mezcla se
extrajo con DCM (20 ml, 2 x 10 ml), y los extractos combinados se
secaron sobre MgSO_{4} y se evaporaron a presión reducida para
proporcionar el compuesto del título como un sólido naranja (870
mg).
Este material se usó para preparar la amida del
ácido
4-(8-{4-[1-(2,2,2-trifluoroetil)piperidin-4-il]fenilamino}-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)tiofen-2-carboxílico
usando métodos análogos a los usados para el Compuesto 89.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
LCMS: Rt 2,11 min. (100%), m/z (ESI) 502
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
65
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Según el procedimiento descrito para el
Compuesto 6, etapa 1, se agitaron
5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina
(0,5 g, 1,799 mmoles),
4-(2-morfolin-4-il-etoxi)-fenilamina
(0,6 g, 4,5 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (0,47 ml, 2,7
mmoles) en 2-propanol (6 ml) a 95ºC toda la noche.
Después de la evaporación del disolvente, el residuo se disolvió en
DCM y se lavó con agua (2x) y salmuera. La capa orgánica se secó
sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío para
proporcionar un aceite que se purificó mediante cromatografía en
columna sobre gel de sílice. La elución con una mezcla 97:3 de
DCM:MeOH da el compuesto del título (650 mg 86%) como un sólido
amarillo claro. LCMS: Rt 2,06 min. (97,7%).
\newpage
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(2-morfolin-4-il-etoxi)-fenil]-amina
(80 mg, 0,19 mmoles),
5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-dihidro-isoindol-1-ona
(74 mg, 0,29 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (55 mg,
0,047 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (1,02 ml, 1,53 mmoles) y
dioxano (3 ml). La mezcla de reacción se purificó mediante
cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM y una
mezcla 97:3 de DCM:NH_{3} (7M en MeOH). Tras la trituración
usando éter dietílico, el compuesto del título se aisló como un
sólido (61,9 mg, 69%). La conversión del material en la sal de
mesilato, usando ácido metanosulfónico 1M (0,134 ml) en MeOH,
proporcionó el compuesto del título (57,1 mg). RMN ^{1}H (400MHz,
d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,40 (3H, s, MsOH),
3,25-3,38 (2H, m), 3,60-3,78 (4H,
m), 3,84 (2H, t), 4,09 (2H, d), 4,45 (2H, m), 4,56 (2H, s), 7,14
(2H, d), 7,90 (1H, d), 8,05-8,19 (4H, m), 8,28 (1H,
s), 8,76 (1H, br s), 8,79 (1H, s), 10,00 (1H, br s), 10,16 (1H, s).
LCMS: Rt 1,98 min. (99,1%), m/z (APCI) 472
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
67
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 1, usando
5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina
(0,105 g, 0,89 mmoles),
2-fluoro-4-morfolin-4-il-fenilamina
(93 mg, 0,474 mmoles), DIPEA (0,123 ml, 0,706 mmoles) y
1,4-diazabiciclo[2,2,2]octano (53 mg,
0,472 mmoles) en 2-propanol (2 ml). La mezcla de
reacción se repartió entre DCM y disolución al 10% de ácido cítrico
(ac.), la capa orgánica se separó y se lavó con disolución al 10%
de ácido cítrico, agua y salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se
filtró y se concentró a vacío. El compuesto del título se
aisló como un sólido rojo pálido (77 mg, 42%) y se usó en la
siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS: Rt 3,48 min.
(89%).
\newpage
Etapa
2
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(2-fluoro-4-morfolin-4-il-fenil)-amina
(80 mg, 0,203 mmoles),
4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol
(79 mg, 0,406 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (59 mg,
0,051 mmoles) en
Na_{2}CO_{3} 1,5N (1,09 ml, 1,62 mmoles) y dioxano (3,25 ml). La mezcla de reacción se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 97:3. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se evaporaron a vacío para proporcionar un sólido que se trituró con éter dietílico y con éter de petróleo para producir el compuesto del título (29 mg, 38%). LCMS: Rt 2,90 min. (96%).
Na_{2}CO_{3} 1,5N (1,09 ml, 1,62 mmoles) y dioxano (3,25 ml). La mezcla de reacción se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 97:3. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se evaporaron a vacío para proporcionar un sólido que se trituró con éter dietílico y con éter de petróleo para producir el compuesto del título (29 mg, 38%). LCMS: Rt 2,90 min. (96%).
La conversión en la sal de mesilato usando
disolución 0,1 M de ácido metanosulfónico en MeOH (0,762 ml, 0,076
mmoles) proporcionó el compuesto del título (35 mg). RMN ^{1}H
(400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,36 (3H, s,
MsOH), 3,19 (4H, m), 3,79 (4H, m), 6,84-6,94 (2H,
m), 7,54 (1H, t), 8,08 (1H, s), 8,48 (2H, s), 8,76 (1H, s), 9,31
(1H, s). LCMS: Rt 2,91 min. (95,4%), m/z (APCI) 381
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
70
Etapa
1
Una disolución de
(4-bromo-2H-pirazol-3-il)-metanol
(0,64 mg, 3,63 mmoles), cloruro de terc-butildimetilsililo
(0,82 g, 5,45 mmoles) e imidazol (0,42 g, 6,18 mmoles) en
N,N-dimetilformamida (20 ml) se agitó a temperatura ambiente
toda la noche. La mezcla de reacción se diluyó con una mezcla 50:50
de éter dietílico:acetato de etilo y se lavó con agua (3x). Las
capas orgánicas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se
concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en
columna sobre gel de sílice eluyendo con éter de petróleo:acetato de
etilo 80:20 para proporcionar el compuesto del título (1,035 g,
98%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
Se disolvió
4-bromo-5-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1H-pirazol
(1 g, 3,45 mmoles) en
3,4-dihidro-2H-pirano
(0,944 ml, 10,34 mmoles) en presencia de una cantidad catalítica de
TFA (0,0026 ml, 0,035 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a
90ºC durante 18 horas, se enfrió y después se paralizó usando NaH
(4,69 mg, 0,206 mmoles). Después de eliminar el disolvente, el
residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de
sílice eluyendo con una mezcla 95:5 de éter de
petróleo-acetato de etilo, seguido de éter de
petróleo-acetato de etilo 90:10. Las fracciones que
contenían los compuestos deseados se recogieron y se concentraron
a vacío para proporcionar
4-bromo-3-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol
y
4-bromo-5-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol
(724 mg, 56%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 35, etapa 3, usando
éster terc-butílico del ácido
(4-morfolin-4-il-fenil)-(5-tributilestannanil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-carbámico
(210 mg, 0,30 mmoles),
4-bromo-3-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol
y
4-bromo-5-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol
(170 mg, 0,45 mmoles) y
tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (35 mg,
0,030 mmoles) en DMF (4 ml). El compuesto bruto se purificó
mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con
éter de petróleo:acetato de etilo 7:3 y después 3:7 para
proporcionar los compuestos del título (62,5 mg).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
Una disolución de
{5-[3-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1-(tetrahidro-piran-3-il)-1H-pirazol-4-il]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il}-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina
y
{5-[5-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1-(tetrahidropiran-3-il)-1H-pirazol-4-il]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il}-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina
(53,6 mg, 0,077 mmoles) y HCl conc. (0,27 ml) en MeOH (5 ml) se
agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después de eliminar
el disolvente, el residuo se repartió entre acetato de etilo y agua.
La capa acuosa se lavó con acetato de etilo (3x), y las capas
orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se
concentraron. El residuo se disolvió en HCl 4M en dioxano, se
concentró a vacío y después se repartió entre acetato de
etilo y NaHCO_{3} sat. La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4},
se filtró y se concentró a vacío para proporcionar un
compuesto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna
sobre gel de sílice. El compuesto del título se aisló eluyendo con
EtOAc y una mezcla 95:5 de DCM:MeOH (5,4 mg, 18%).
RMN ^{1}H (400MHz,
d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 3,11 (4H, m), 3,79 (4H,
m), 4,65 (2H, d), 5,25 y 5,53 (1H, br s), 6,99 (2H, m), 7,84 y 8,51
(1H, br s), 7,92 (2H, d), 8,12 (1H, d), 8,70 (1H, s), 9,74 (1H, s),
13,12 y 13,23 (1H, br s). LCMS: Rt 2,26 min. (96,2%), m/z
(APCI) 393 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
73
Etapa
1
Se mezclaron en nitrógeno como sólidos
tiazolidinona (3,43 g, 29,32 mmoles) y POBr_{3} (25 g, 87,96
mmoles, 3 equiv.). La mezcla de reacción se calentó entonces hasta
110ºC con agitación durante 3 h provocando la formación de un
sirope negro. La mezcla de reacción se dejó entonces enfriar hasta
la temperatura ambiente y se añadió con mucha cuidado una
mezcla de agua/hielo (200 ml). La suspensión gris resultante se
extrajo con éter dietílico (3 x 50 ml), las capas orgánicas se
combinaron, se filtraron a través de un tapón de sílice y se
evaporaron para proporcionar el compuesto del título como un aceite
naranja (4 g, 57%), que se usó en la etapa siguiente sin
purificación adicional.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
A una disolución de dibromotiazol (1 g, 4,15
mmoles) en THF (15 ml) a 0ºC se añadió gota a gota una disolución
de iPrMgCl en THF (2 M, 2,3 ml, 4,57 mmoles, 1,10 equiv.). La
reacción se agitó a 0ºC durante 0,25 h. A la disolución naranja
resultante se añadió, vía una cánula, carbonato de dietilo (3 ml) en
THF (5 ml). La disolución verde resultante se agitó adicionalmente
a temperatura ambiente durante 0,5 h, en cuyo momento la reacción
se paralizó añadiendo NH_{4}Cl saturado. El compuesto del título
se purificó mediante LC usando ciclohexano/DCM 6/4 como eluyente,
para proporcionar 514,2 mg (52%) del compuesto del título como un
sólido pulverulento amarillo claro.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
Se disolvió éster etílico del ácido
4-bromotiazol-2-carboxílico
(500 mg, 2,13 mmoles) en metanol (1 ml), y se añadió metilamina en
metanol (10 ml). La mezcla se agitó toda la noche a temperatura
ambiente. La evaporación del disolvente a presión reducida
proporcionó el compuesto del título como un sólido amarillo. LCMS:
Rt 0,92 min. (100%) m/z (ESI) 219/221 (M+H)^{+}.
\newpage
Etapa
4
La metilamida del ácido
4-bromotiazol-2-carboxílico
se convirtió en el boronato de una manera análoga a la descrita para
el Compuesto 6, Etapa 3. El compuesto del título se preparó entonces
usando métodos según se describen para el Compuesto 120'', etapa 4.
LCMS: Rt = 1,06 min. (95%), m/z (ESI) 437
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
79
Etapa
1
Se disolvió ácido
4-bromo-2-metil-benzoico
(4,6 g, 21,39 mmoles) en HCl 2M en MeOH y se puso a reflujo durante
3 horas. El disolvente se evaporó para dar el éster metílico del
ácido
4-bromo-2-metil-benzoico
(4,24 g, 86%). Este intermedio (18,51 mmoles) se disolvió en
tetracloruro de carbono (100 ml), y se añadió
N-bromosuccinimida (NBS) (5,57 g, 24,06 mmoles). Después se
añadió AIBN (122 mg, 740 \mumoles), y la mezcla se purgó con
nitrógeno durante 5 min. La mezcla de reacción se puso a reflujo
entonces durante 4 horas. Después de enfriar hasta la temperatura
ambiente, la mezcla de reacción se filtró, y el filtrado se evaporó.
El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de
sílice, éter de petróleo/acetato de etilo 2:1) para dar el compuesto
del título (3,42 g, 60%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
El éster metílico del ácido
4-bromo-2-bromometil-benzoico
(0,5 g, 16,2 mmoles) se trató con amoniaco metanólico (10 ml,
NH_{3} 7N en MeOH) durante 5 minutos a 90ºC. Después de enfriar
hasta la temperatura ambiente, se formó un precipitado, se recogió
mediante filtración y se lavó con una pequeña cantidad de metanol
para proporcionar el compuesto del título como un sólido incoloro
(224 mg, 65%). RMN ^{1}H (400 MHz, d_{6}-DMSO)
\delta (ppm) 4,41 (2H, s), 7,64 (1H, d), 7,70 (1H, d), 7,87 (1H,
s), 8,67 (1H, br s). LCMS: Rt 2,49 min, (99,6%), m/z (APCI)
212 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
Se suspendieron
5-bromo-2,3-dihidro-isoindol-1-ona
(230 mg, 1,08 mmoles), bis(pinacolato)diboro (300 mg,
1,18 mmoles), PdCl_{2}dppf (25 mg, 31 \mumoles) y KOAc (320 mg,
3,26 mmoles) en dioxano (4 ml), se purgaron con nitrógeno durante 5
minutos y después se calentaron a 85ºC toda la noche. El disolvente
se eliminó a vacío, y el residuo se repartió entre acetato
de etilo y agua. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo
(3x), y las fases orgánicas combinadas se lavaron una vez con
salmuera, se filtraron a través de MgSO_{4} y se evaporaron. El
residuo sólido se trituró con hexano y se secó a vacío para
producir el compuesto del título (185 mg, 66%) como un sólido gris.
RMN ^{1}H (400MHz, CDCl_{3}) \delta (ppm) 1,37 (12H, s), 4,45
(2H, s), 6,38 (1H, br s), 7,87 (1H, d), 7,93 (2H, m).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
2-cloro-5-nitropiridina
(2,5 g, 15,7 mmoles) en THF (25 ml) se añadieron
1-isopropilpiperazina (2,01 g, 15,7 mmoles) y
K_{2}CO_{3} (3,25 g, 23,6 mmoles). La mezcla de reacción se
agitó a 50ºC durante 4 horas y después a 70ºC toda la noche. El
disolvente se eliminó a vacío, y el sólido naranja resultante
se trituró usando éter de petróleo-éter dietílico 10:1. El compuesto
aislado (3,7 g, 94%) se usó en la siguiente etapa sin purificación
adicional.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
\vskip1.000000\baselineskip
Se disolvió
1-isopropil-4-(5-nitro-piridin-2-il)-piperazina
(0,9 g, 3,6 mmoles) en MeOH (20 ml), y se añadió dicloruro de estaño
(II) dihidratado (4 g, 18 mmoles). La mezcla se enfrió usando un
baño de agua, y se añadió HCl conc. (4 ml). La reacción se agitó a
temperatura ambiente toda la noche. Después de eliminar el metanol,
la disolución amarilla clara resultante se basificó usando NaOH
conc. (pH 11), y se formó un precipitado blanco. El sólido se
recogió mediante filtración, y el agua se extrajo con éter dietílico
(5x). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre
MgSO_{4}, se filtraron, y se concentraron a vacío para
proporcionar un aceite naranja que cristaliza al dejar reposar para
proporcionar un sólido naranja (0,68 g, 86%).
\newpage
Etapa
6
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 1, usando
5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina
(0,188 g, 0,68 mmoles),
6-(4-isopropil-piperazin-1-il)-piridin-3-ilamina
(0,180 g, 0,816 mmoles) y
N-etildiisopropil-amina (0,20 ml, 1,02
mmoles) en 2-propanol (2 ml). La purificación del
material bruto mediante cromatografía en columna sobre gel de
sílice, usando DCM seguido de DCM:MeOH 95:5, proporcionó el
compuesto del título como un sólido marrón claro (260 mg, 92%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
5-bromo-N-(6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina
(50 mg, 0,12 mmoles),
5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-dihidro-isoindol-1-ona
(56 mg, 0,216 mmoles) y Pd(PPh_{3})_{4} (35 mg,
0,03 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (0,64 ml) y dioxano (2 ml). El
producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna sobre
gel de sílice eluyendo con DCM:MeOH 95:5 seguido de DCM:MeOH 90:10.
El compuesto del título se obtuvo tras la trituración con una mezcla
10:1 de n-hexano:DCM (19 mg, 34%). La conversión en la sal de
mesilato, usando ácido metanosulfónico 0,1M (0,35 ml), dio el
compuesto del título como un sólido amarillo (20 mg, 69%).
RMN ^{1}H (400 MHz,
d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 1,34 (6H, d), 2,36 (6H,
s, 2xMsOH), 3,16-3,21 (5H, m), 3,57 (2H, m), 4,45
(2H, d), 4,52 (2H, s), 7,11 (1H, d), 7,86 (1H, d), 8,01 (1H, s),
8,10 (1H, d), 8,24-8,29 (2H, m), 8,72 (1H, s), 8,76
(1H, s), 8,82 (1H, d), 9,39 (1H, br s), 10,21 (1H, s). LCMS: Rt 1,92
min. (98,5%), m/z (APCI) 470 (M+H)^{+}.
\newpage
Compuesto
80
Etapa
1
A una disolución de
2-bromotiofenol (10,50 g, 55,87 mmoles) en DMF seca
(50 ml) en nitrógeno se añadió carbonato de potasio (9,2 ml, 61,46
mmoles, 1,10 equiv.) con cuidado. Una vez se calmó el burbujeo, se
añadió a la mezcla
2-bromo-1,1-dietoxietano
(8,46 g, 61,46 mmoles, 1,10 equiv.) y se agitó durante 2 h a
temperatura ambiente. La suspensión resultante se vertió en 200 ml
de agua helada, y se extrajo con éter dietílico (3 x 50 ml). Las
capas orgánicas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4}
para proporcionar, tras la eliminación del disolvente, el compuesto
del título como un aceite naranja viscoso, que se usó sin
purificación adicional.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
Se disolvió
1-bromo-2-(2-etoxivinilsulfanil)benceno
en clorobenceno (50 ml), y la disolución se calentó hasta 70ºC. Se
añadió entonces PPA (10,5 ml) con cuidado, y la mezcla bifásica se
calentó a 150ºC toda la noche. El sirope oscuro resultante se dejó
enfriar, y el disolvente sobrenadante se eliminó mediante una
pipeta. Se añadió clorobenceno (15 ml) al residuo y se calentó hasta
150ºC durante 30 min. El disolvente se eliminó de nuevo, y el
residuo se lavó con pequeñas cantidades de diclorometano hasta que
los lavados fueron transparentes. Las fracciones orgánicas se
combinaron y se filtraron a través de celita para proporcionar una
disolución amarilla clara. La concentración a vacío seguido
de LC usando ciclohexano como eluyente proporcionó el compuesto del
título como un aceite incoloro viscoso (1,21 g, 35%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
Se disolvió
7-bromobenzo[b]tiofeno (500 mg, 2,36
mmoles) en THF seco (5,0 ml) en nitrógeno. Se añadieron limaduras
de magnesio (530 mg, 2,83 mmoles, 1,20 equiv.), y la mezcla
resultante se calentó a reflujo hasta que se produjo la disolución
del magnesio. La disolución resultante amarilla turbia se dejó
enfriar hasta rt, y se añadió carbonato de dietilo (2 ml, exceso),
y la agitación se continuó durante una hora, momento en el que se
añadió cloruro de amonio (10% ac.). La mezcla resultante se
repartió entre DCM y agua, y la capa acuosa se extrajo con DCM. Las
fracciones orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se
secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se adsorbieron sobre sílice. La
purificación mediante LC usando ciclohexano/diclorometano 8/2 como
eluyente proporcionó el compuesto del título como un aceite naranja
pálido (346,2 mg, 71%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
A una disolución de éster etílico del ácido
benzo[b]tiofen-7-carboxílico
(1,0 g, 48 mmoles) en metanol (10 ml) y agua (10 ml) se añadió
hidróxido de sodio (5 g, exceso). La disolución se agitó a
temperatura ambiente durante 30 min., momento en el cual todo el
éster se había consumido. La mezcla de reacción se ajustó hasta pH
1 añadiendo disolución 6M de HCl, y se extrajo con DCM. Las capas
orgánicas combinadas se filtraron a través de un tapón de sílice
para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo
(505,2 mg, 59%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
Una disolución de ácido
benzo[b]tiofen-7-carboxílico
(505 mg, 2,84 mmoles) en diclorometano (10 ml) se agitó a rt, y se
añadió cloruro de tionilo (669 mg, 5,68 mmoles, 2,0 equiv.), seguido
de DMF (0,06 ml), provocando desprendimiento de gas. La disolución
resultante se agitó a rt durante 1 hora. Después, a la mezcla se
añadió con cuidado amoniaco acuoso (10 ml), provocando
desprendimiento vigoroso de gas. La mezcla resultante se diluyó
entonces con agua (50 ml), y el pH se llevó a neutro añadiendo
NaHCO_{3} saturado (ac.). La capa acuosa se extrajo con DCM, y
las capas orgánicas se combinaron y se secaron sobre
Na_{2}SO_{4}. La evaporación del disolvente a presión reducida
proporcionó el compuesto del título (81% puro) como un sólido
amarillo (500 mg, 98%) que se usó sin purificación adicional.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
6
Una disolución de amida del ácido
benzo[b]tiofen-7-carboxílico
(500 mg, 2,82 mmoles) en diclorometano (5 ml) se agitó a rt, y se
añadió ácido acético (5 ml) seguido de NBS (750 mg, 4,23 mmoles, 1,5
equiv.). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1
hora, en cuyo momento el análisis mediante LC-MS
mostró la conversión completa del material de partida en el
compuesto deseado (79%) y material dibromado (21%). La reacción se
diluyó con agua (50 ml), y se neutralizó con disulfito de potasio
acuoso, seguido de bicarbonato de sodio. La capa acuosa se extrajo
entonces con diclorometano, y las capas orgánicas resultantes se
combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre
Na_{2}SO_{4} y se evaporaron. El material bruto se purificó
mediante LC usando DCM como eluyente para proporcionar el compuesto
del título como un sólido blanco (300 mg, 41%).
\newpage
Etapa
7
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución de amida del ácido
3-bromobenzo[b]tiofen-7-carboxílico
(300 mg, 1,18 mmoles) en dioxano (5 ml) se agitó en nitrógeno. Se
añadieron Pd(dppf)Cl_{2} (29 mg, 3% en moles),
acetato de potasio (230 mg, 2,35 mmoles, 2,0 equiv.) y
bispinacolatodiboro (450 mg, 1,77 mmoles, 1,5 equiv.), y la reacción
se calentó hasta 80ºC y se agitó toda la noche. La suspensión
naranja resultante se diluyó con DCM, se filtró a través de celita
y se concentró a vacío para proporcionar un aceite que se usó
en la siguiente etapa sin purificación adicional.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
8
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 120, Etapa 4. RMN
^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 3,19
(4H, br s), 3,76 (4H, br s), 5,70 (1H, d), 7,12 (2H, m), 7,43 (1H,
t), 7,63 (1H, br s), 7,76-7,80 (2H, m), 7,92 (1H,
d), 8,03 (1H, d), 8,21 (1H, s), 8,28 (1H, s), 8,6 (1H, s), 10,09
(1H, s). LCMS: Rt = 1,01 min. (95%), m/z (ESI) 472
(M+H)^{+}.
\newpage
Compuesto
81
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 80, usando
(5-bromo[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)-fenil]amina
en la etapa final. LCMS: rt = 0,94 min. (95%), m/z (ESI) 513
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
83
Etapa
1
Una disolución de
4-bromo-2-metilpiridina
(5 g, 29 mmoles) en DCM (20 ml) se enfrió hasta 0ºC, y se añadió
m-CPBA (7,55 g, 43,87 mmoles, 1,5 equiv.) en porciones
durante 30 min. Después, el baño de hielo se retiró, y la mezcla se
dejó agitar a temperatura ambiente durante 3 horas. La disolución
resultante se diluyó con bicarbonato de sodio (sat. ac.) y se
extrajo con DCM. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con
bicarbonato de sodio (sat. ac.), se secaron sobre Na_{2}SO_{4},
y se concentraron a vacío para proporcionar el compuesto del
título como un aceite naranja pálido que se usó sin purificación
adicional.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
A una disolución de 1-óxido de
4-bromo-2-metilpiridina
(4,00 g, 21,40 mmoles) en DCM (20 ml) se añadió anhídrido acético (6
ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, y
después se calentó a reflujo toda la noche. El disolvente se eliminó
a vacío, y el producto bruto se filtró a través de un tapón
de sílice, eluyendo con DCM para proporcionar el compuesto del
título como un aceite naranja (815 mg).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
Una disolución de éster
4-bromopiridin-2-ilmetílico
del ácido acético (800 mg, 3,49 mmoles) en dioxano (5 ml) se agitó
en nitrógeno. Se añadieron Pd(dppf)Cl_{2} (85 mg, 3%
en moles), acetato de potasio (1,03 g, 10,5 mmoles, 3,0 equiv.) y
bispinacolatodiboro (1,33 g, 5,24 mmoles, 1,5 equiv.), y la reacción
se calentó a 80ºC toda la noche. La suspensión naranja resultante se
diluyó con DCM, se filtró a través de celita y se concentró a
vacío para proporcionar un aceite que se usó en la siguiente
etapa sin purificación adicional.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
Una suspensión de
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)fenil]amina
(300 mg, 0,723 mmoles) y Pd(dppf)Cl_{2} (59 mg, 10%
en moles) en dioxano/agua 4/1 (5 ml) se agitó a rt, y se añadieron
carbonato de potasio (200 mg, 1,45 mmoles, 2,0 equiv.) y éster
4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)piridin-2-ilmetílico
del ácido acético (300 mg, 1,08 mmoles, 1,5 equiv.). La mezcla
resultante se calentó a 85ºC toda la noche. La disolución resultante
se repartió entre diclorometano y agua, y la capa orgánica se
concentró sobre sílice y se purificó mediante cromatografía en
columna (DCM/MeOH 98/2) para proporcionar el compuesto del título
como un sólido amarillo. LCMS: Rt = 0,78 min. (100%), m/z 445
(M+H)^{+}.
\newpage
Etapa
5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se agitó a temperatura ambiente toda la noche
éster
4-{8-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}piridin-2-ilmetílico
del ácido acético en 10 ml de una disolución 1,5 M de carbonato de
potasio en metanol. El pH se llevó entonces hasta neutro mediante
adición de ácido cítrico acuoso al 10%, y la mezcla se extrajo con
DCM. La purificación mediante LC usando DCM/NH_{3} (2M en MeOH)
98/2 como eluyente proporciona el compuesto del título como un polvo
amarillo (40,3 mg, 12,5% a lo largo de 2 etapas). RMN ^{1}H
(400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 1,02 (6H, m),
2,33 (1H, m), 2,60 (4H, br m), 3,10 (4H, br m), 4,65 (2H, d), 5,51
(1H, t), 6,96 (2H, d), 7,84-7,89 (3H, m), 8,11 (1H,
s), 8,17 (1H, m), 8,61 (1H, d), 8,73 (1H, m), 10,08 (1H, s). LCMS:
Rt = 0,78 min. (100%), m/z (ESI) 445 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
84
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 92, usando ácido
pirazol-4-borónico en la etapa 4.
LCMS: Rt 0,89 min. (100%) m/z (ESI) 403
(M+H)^{+}.
\newpage
Compuesto
86
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de ácido
4,5-dibromo-furan-2-carboxílico
(7,79 g, 28,85 mmoles) en NH_{4}OH (100 ml) se añadió polvo de
cinc (2,29 g, 34,62 mmoles) en pequeñas porciones. La mezcla de
reacción se agitó a temperatura ambiente durante 7 minutos, después
se filtró a través de celita y se lavó con agua y HCl 2M. El
filtrado se acidificó hasta pH 1 usando HCl conc., y se extrajo con
acetato de etilo (3x). La fase orgánica se lavó con salmuera, se
secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío para
dar un aceite (4,96 g) que solidificó al dejar reposar para dar un
sólido blanco, que se usó sin purificación adicional.
El sólido (4,93 g, 25,81 mmoles) se disolvió en
cloruro de tionilo (44,2 ml) y se puso a reflujo durante 1 hora.
Después de eliminar el disolvente a vacío, el residuo se
disolvió en diclorometano (75 ml), y se añadió una disolución 0,5M
de NH_{3} en dioxano (52 ml). La mezcla de reacción se agitó a
temperatura ambiente durante 1 hora, después se añadió NH_{3} ac.
al 33% (5 ml), y la reacción se agitó durante 2 horas adicionales.
El disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se recogió con
una disolución de NaHCO_{3} sat. La disolución básica se extrajo
usando acetato de etilo (3x), las capas orgánicas combinadas se
secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío. La
purificación mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice,
eluyendo con una mezcla (50:49:1) de acetato de etilo:éter de
petróleo:ácido acético, proporcionó el compuesto del título (1,2 g,
22%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se suspendieron la amida del ácido
4-bromo-furan-2-carboxílico
(1,2 g, 6,32 mmoles), bis(pinacolato)diboro (1,76 g,
6,94 mmoles), PdCl_{2}dppf (0,154 g, 189 moles) y KOAc (1,85 g,
18,94 mmoles) en dioxano (20 ml), se purgaron con nitrógeno durante
5 minutos y después se calentaron a 90ºC toda la noche. El
disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se repartió entre
acetato de etilo y agua. La capa acuosa se extrajo tres veces con
acetato de etilo, y las fases orgánicas combinadas se lavaron con
salmuera, se filtraron a través de MgSO_{4} y se evaporaron. El
residuo sólido se trituró con hexano y se secó a vacío para
proporcionar el compuesto del título como un sólido (0,984 g,
66%).
\newpage
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
5-bromo-8-(6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina
(60 mg, 0,144 mmoles), amida del ácido
4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-furan-2-carboxílico
(59 mg, 0,26 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4}
(42 mg, 0,036 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (0,8 ml, 1,15 mmoles) y dioxano (2 ml). Después de la evaporación del disolvente, el material bruto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice usando DCM seguido de DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 97,5:2,5 y 95:5. El compuesto del título se obtuvo como un sólido amarillo (30 mg, 47%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 1,05 (6H, d), 2,54-2,59 (4H, m), 2,70-2,74 (1H, m), 3,47 (4H, m), 6,90 (1H, d), 7,60 (1H, br s), 7,91 (1H, s), 7,99 (1H, br s), 8,12 (1H, dd), 8,19 (1H, s), 8,68 (1H, s), 8,75 (1H, s), 8,81 (1H, s), 10,03 (1H, s). LCMS: Rt 2,64 min. (98,1%), m/z (APCI) 406 (M+H)^{+}. LCMS: Rt 2,74 min. (93%), m/z (ES+) 448 (M+H)^{+}.
(42 mg, 0,036 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (0,8 ml, 1,15 mmoles) y dioxano (2 ml). Después de la evaporación del disolvente, el material bruto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice usando DCM seguido de DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 97,5:2,5 y 95:5. El compuesto del título se obtuvo como un sólido amarillo (30 mg, 47%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 1,05 (6H, d), 2,54-2,59 (4H, m), 2,70-2,74 (1H, m), 3,47 (4H, m), 6,90 (1H, d), 7,60 (1H, br s), 7,91 (1H, s), 7,99 (1H, br s), 8,12 (1H, dd), 8,19 (1H, s), 8,68 (1H, s), 8,75 (1H, s), 8,81 (1H, s), 10,03 (1H, s). LCMS: Rt 2,64 min. (98,1%), m/z (APCI) 406 (M+H)^{+}. LCMS: Rt 2,74 min. (93%), m/z (ES+) 448 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
88
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
4-fluoronitrobenceno (5 g, 35,4 mmoles) en THF (50
ml) se añadieron 1-isopropilpiperazina (4,54 g, 35,4
mmoles) y K_{2}CO_{3} (7,35 g, 53,2 mmoles). La mezcla de
reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche. El
disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se repartió entre
EtOAc y agua. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre
MgSO_{4}, se filtró y se concentró. El compuesto bruto se purificó
mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice usando
DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 99:1 y 98:2 para dar el compuesto del
título (8,2 g, 94%).
\newpage
Etapa
2
Se disolvió
1-isopropil-4-(4-nitro-fenil)-piperazina
(8,3 g, 33,2 mmoles) en MeOH (120 ml), y se añadió dicloruro de
estaño (II) dihidratado (37,4 g, 0,165 moles). La mezcla se enfrió
usando un baño de agua, y se añadió HCl conc. (36 ml). La reacción
se agitó a temperatura ambiente toda la noche. Después de eliminar
el metanol, la disolución resultante se basificó usando NaOH conc.
(pH 11). La fase acuosa se extrajo con éter dietílico (3x), y las
capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgSO_{4}, se
filtraron, y se concentraron a vacío para proporcionar el
compuesto del título (6,4 g, 88%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 1, usando
5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina
(2 g, 7,20 mmoles),
4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamina
(1,89 g, 8,62 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (1,88 ml,
10,8 mmoles) en 2-propanol (30 ml) se agitaron a
95ºC toda la noche. El compuesto del título se aisló tras la
trituración con éter dietílico y con éter de petróleo como un sólido
gris (2,59 g, 87%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
5-bromo-N-(6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina
(80 mg, 0,21 mmoles), amida del ácido
4-(,4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-furan-2-carboxílico
(101 mg, 0,42 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (62 mg,
0,053 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (ac.) (1,143 ml, 1,71
mmoles), y dioxano (4 ml). El producto bruto se purificó mediante
cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM y
DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 97:3. El compuesto del título se aisló
tras la trituración con éter dietílico (35,4 mg, 42%). La conversión
en la sal de mesilato usando
ácido metanosulfónico 1M en MeOH (0,0793 ml) proporcionó el compuesto del título como un sólido (35 mg).
ácido metanosulfónico 1M en MeOH (0,0793 ml) proporcionó el compuesto del título como un sólido (35 mg).
RMN ^{1}H (400MHz,
d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 1,35 (6H, d), 2,35 (3H,
s, MsOH), 3,01 (2H, t), 3,22-3,35 (2H, m), 3,58 (3H,
m), 3,88 (2H, d), 7,09 (2H, d), 7,61 (1H, br s), 7,94 (2H, m), 8,00
(1H, br s), 8,22 (1H, s), 8,76 (1H, s), 8,82 (1H, s), 9,27 (1H, br
s), 10,02 (1H, s). LCMS: Rt 2,02 min. (98,9%), m/z (APCI) 447
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
89
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 92, usando ácido
2-(aminocarbonil)tiofen-4-borónico
en la etapa 4. LCMS: Rt 0,94 min. (100%) m/z (ESI) 462
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
90
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 83, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il]amina
en la etapa 4. LCMS: Rt = 0,71 min. (95%), m/z (ESI) 446
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
92
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
Se agitaron
4-(4-nitrofenil)piperidina (250 mg, 1,21
mmoles), K_{2}CO_{3} (170 mg, 1,21 mmoles) y
2-yodopropano (240 \mul, 2,4 mmoles) en
acetonitrilo (3 ml) en un tubo cerrado herméticamente a 120ºC
durante 45 min. La mezcla se enfrió, y el disolvente se eliminó a
presión reducida. El residuo se repartió entre DCM (20 ml) y agua
(5 ml), las capas se separaron, y el DCM se lavó con agua (5 ml) y
con salmuera (5 ml) y se secó sobre MgSO_{4}. La evaporación del
disolvente proporcionó el compuesto del título (300 mg) que se usó
sin purificación adicional.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadieron hidrazina (35% en peso en agua,
0,67 ml, 7,2 mmoles) y Pd al 10%/C (38 mg, 0,03 mmoles) a una
disolución de
1-isopropil-4-(4-nitrofenil)piperidina
(180 mg, 0,72 mmoles) en EtOH (10 ml), y la mezcla se calentó a
reflujo durante 3 h. Después de enfriar, la mezcla se filtró a
través de celita, y el disolvente se evaporó. El residuo es
redisolvió en DCM (25 ml), se secó sobre MgSO_{4}, y el disolvente
se evaporó para proporcionar el compuesto deseado como un sólido
amarillo pálido (113 mg, 0,52 mmoles) que se usó sin purificación
adicional.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadió N,N-diisopropiletilamina (200
\mul, 1,2 mmoles) a una mezcla de
4-(1-isopropilpiperidin-4-il)fenilamina
(220 mg, 1,0 mmoles) y
5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina
(280 mg, 1,0 mmoles) en ^{i}PrOH (5 ml), y se calentó a reflujo
durante 48 h. La mezcla se enfrió, y el disolvente se evaporó a
presión reducida para proporcionar un sólido
naranja-amarronado. El sólido se repartió entre DCM
(50 ml) y agua (20 ml), y las capas se separaron. La fase orgánica
se lavó con ácido cítrico (10% ac., 3 x 25 ml). Los lavados
combinados se extrajeron con DCM (25 ml) y después se hicieron
básicos mediante adición de NaHCO_{3} (s). La mezcla se extrajo
con DCM (3 x 25 ml), y los extractos combinados se secaron sobre
MgSO_{4} y se evaporaron. El producto bruto se purificó mediante
cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con 5%-10% de MeOH en
DCM para proporcionar el compuesto deseado, contaminado con la
anilina de partida. Aquel se recristalizó en MeOH para proporcionar
el compuesto del título puro (110 mg).
Este material se puede usar para preparar
5-{8-[4-(1-isopropilpiperidin-4-il)fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidroisoindol-1-ona
de una manera análoga a la etapa 4 como se describe para el
Compuesto 79.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
LCMS: Rt 0,91 min. (100%) m/z (ESI) 468
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
100
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una suspensión de
p-yodo-anilina (918 mg, 4,8 mmoles),
éster terc-butílico del ácido
3-oxo-piperazin-1-carboxílico
(960 mg, 4,2 mmoles)
(1R,2R)-ciclohexano-1,2-diamina
(0,05 ml, 0,42 mmoles), yoduro de cobre (I) (14,9 mg, 0,0042
mmoles) y K_{2}CO_{3} (1,19 g, 2,04 mmoles) en dioxano (4 ml) se
purgó con nitrógeno durante 5 min. en un tubo de reacción. El tubo
se cerró herméticamente, y la mezcla de reacción se calentó a 119ºC
durante 15 horas. Después de enfriar hasta la temperatura ambiente,
la mezcla de reacción se filtró a través de un cartucho de sílice,
lavando con acetato de etilo (40 ml). El filtrado se concentró a
vacío para proporcionar el compuesto del título como un líquido
marrón (1,06 g, 87%). LCMS: Rt 0,88 min. (91%).
\newpage
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 1, usando
5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina
(0,283 g, 1,00 mmoles), éster terc-butílico del ácido
4-(4-amino-fenil)-3-oxo-piperazin-1-carboxílico
(0,300 g, 1,00 mmoles) y
N-etildiisopropil-amina (0,20 ml, 1,02
mmoles) en 2-propanol (1 ml). La purificación del
material bruto mediante cromatografía en columna sobre gel de
sílice, eluyendo con DCM seguido de DCM:MeOH 98:2, proporcionó el
éster terc-butílico del ácido
4-[4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-fenil]-3-oxo-piperazin-1-carboxílico
como un sólido blanco (0,252 g, 51%).
Una disolución del éster terc-butílico
del ácido
4-[4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-fenil]-3-oxo-piperazin-1-carboxílico
(0,252 mg, 0,6 mmoles) en DCM:TFA 2:1 (4,8 ml) se agitó durante 1
hora a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó entonces con DCM y
se basificó con NaHCO_{3} sat. La capa acuosa se extrajo con DCM
(3x), y las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre
MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron para proporcionar el
compuesto del título como un sólido (180 mg, 78%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 1, etapa 5, usando
1-[4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-fenil]-piperazin-2-ona
(70 mg, 0,18 mmoles),
4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol
(64 mg, 0,33 mmoles), Pd(PPh_{3})_{4} (21 mg, 18
\mumoles) y NaO'Bu (70 mg, 0,72 mmoles) en 2 ml de DMF/agua 3:1.
La mezcla de reacción se concentró a vacío, y el residuo se
purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice
eluyendo con un gradiente de DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 99:1 hasta
90:10. El compuesto del título se aisló como un sólido verde pálido
(13 mg, 19%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO)
\delta (ppm) 3,05 (2H, m), 3,42 (2H, s), 3,62 (2H, m), 7,32 (2H,
d), 8,07 (2H, d), 8,26 (1H, s), 8,39 (1H, br s), 8,67 (1H, br s),
8,81 (1H, s), 10,05 (1H, s), 13,32 (1H, br s). LCMS: Rt 6,98 min.
(92,4%), m/z (APCI) 376 (M+H)^{+}.
\newpage
Compuesto
102
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
1-fluoro-4-nitro-benceno
(314 mg, 2,23 mmoles) y 4-terc-butilpiperazina (1 g, 3,34
mmoles) en dioxano (15 ml) se añadió K_{2}CO_{3} (1,65 mg, 11,9
mmoles), y la reacción se agitó a 130ºC toda la noche. El
disolvente se evaporó a vacío, y el residuo se repartió entre
acetato de etilo y agua. La capa orgánica se lavó con salmuera, se
secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró para dar un
compuesto bruto. La purificación mediante cromatografía en columna
sobre gel de sílice eluyendo con DCM seguido de DCM:NH_{3} (7M en
MeOH) 99:1 proporcionó el compuesto del título (348 mg, 55,4%).
LCMS: Rt 3,87 min. (99%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
Se disolvió
1-terc-butil-4-(4-nitro-fenil)-piperazina
(348 mg, 1,32 mmoles) en MeOH (10 ml), y se añadió dicloruro de
estaño (II) dihidratado (1,08 g, 4,79 mmoles). La mezcla se enfrió
usando un baño de agua, y se añadió HCl conc. (3 ml). La reacción
se agitó a 40ºC toda la noche. Después de eliminar el metanol, la
disolución resultante se basificó usando NaOH conc. (pH 11). La fase
acuosa se extrajo con éter dietílico (3x), y las capas orgánicas se
combinaron, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron, y se
concentraron a vacío para proporcionar el compuesto del
título (308 mg, 99%), que se usó en la etapa siguiente sin
purificación adicional. LCMS: Rt 2,16 min. (87%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 1, usando
5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina
(0,308 g, 1,107 mmoles),
4-(4-terc-butil-piperazin-1-il)-fenilamina
(0,310 g, 1,33 mmoles) y
N-etildiisopropil-amina (0,289 ml, 1,66
mmoles) en 2-propanol (5 ml). La mezcla de reacción
se repartió entre DCM y NaOH 1N, la capa orgánica se separó y se
lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se
concentró a vacío. La trituración del residuo con éter
dietílico y con éter de petróleo proporcionó el compuesto del
título (440 mg, 92%) como un sólido de color crema. LCMS: Rt 2,25
min. (96%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-terc-butil-piperazin-1-il)-fenil]-amina
(100 mg, 0,232 mmoles),
5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-dihidro-isoindol-1-ona
(90 mg, 0,32 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (67 mg,
0,058 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (ac.) (1,24 ml), y dioxano
(3,7 ml). La mezcla de reacción se repartió entre acetato de etilo
y salmuera, la capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4},
se filtró y se evaporó a vacío. El residuo se purificó
mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con
DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 98:2 seguido de DCM:NH_{3} (7M en MeOH)
95:5 para dar un sólido que se trituró con éter dietílico y con
éter de petróleo para proporcionar el compuesto del título (71 mg,
63%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta
(ppm) 1,43 (9H, s), 2,36 (3H, s, MsOH), 3,02 (2H, m),
3,19-3,26 (2H, m), 3,67 (2H, d), 3,90 (2H, d), 4,52
(2H, s), 7,10 (2H, d), 7,86 (1H, d), 7,96-8,01 (3H,
m), 8,10 (1H, d), 8,24 (1H, s), 8,72 (1H, s), 8,75 (1H, s), 9,09
(1H, br s), 10,09 (1H, s). LCMS: Rt 2,07 min. (99%), m/z
(APCI) 483 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
105
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
éster terc-butílico del ácido
4-[4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-fenil]-3-oxo-piperazin-1-carboxílico
(115 mg, 0,24 mmoles),
5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-dihidro-isoindol-1-ona
(92 mg, 0,35 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (83 mg,
0,072 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (ac.) (1,3 ml, 1,92 mmoles),
y dioxano (2,5 ml). La mezcla de reacción se diluyó con salmuera,
después se añadió tolueno, y se formó un precipitado y se recogió
mediante filtración. El sólido resultante se disolvió en DCM y se
filtró a través de un cartucho de sílice para proporcionar el
compuesto del título como un sólido amarillo (60 mg, 47%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución de éster terc-butílico del
ácido
3-oxo-4-{4-[5-(1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-5-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-piperazin-1-carboxílico
(59 mg, 0,1 mmoles) en DCM:TFA 3:1 (1,2 ml) se agitó a temperatura
ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se diluyó con DCM y
se basificó con NaHCO_{3} sat. La capa acuosa se extrajo con DCM
(3x), y las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre
MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron a vacío para
proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo (38
mg, 86%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO)
\delta (ppm) 3,07 (2H, m), 3,44 (2H, s), 3,64 (2H, m), 4,50 (2H,
s), 7,32 (2H, d), 7,83 (1H, d), 8,04-8,10 (4H, m),
8,22 (1H, s), 8,70 (1H, br s), 8,74 (1H, s), 10,25 (1H, s). LCMS: Rt
7,17 min. (93,7%), m/z (APCI) 441 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
108
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
A una suspensión de ácido
4-bromo-2,6-difluoro-benzoico
(5 g, 21 mmoles) en DCM (10 ml) se añadió cloruro de tionilo (15 ml)
y DMF (0,5 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante
2,5 h. Ésta se enfrió entonces hasta 0ºC, y se añadió con cuidado
MeOH (20 ml) provocando desprendimiento vigoroso de HCl. Tras agitar
durante 0,5 h adicionales, la disolución transparente se repartió
entre DCM (50 ml) y agua (50 ml). La capa orgánica se lavó con
NaHCO_{3} saturado, con salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, y el
disolvente se eliminó a vacío para proporcionar el compuesto
del título como un aceite amarillo pálido que se usó sin
purificación adicional.
\newpage
Etapa
2
Se añadió con cuidad nitrometano (10 ml, 169
mmoles, 8 equiv.) a una suspensión de hidruro de sodio (4,05 g, 169
mmoles, 8 equiv.) y MgSO_{4} (40 g) en DMSO (100 ml) a rt, y la
suspensión resultante se agitó durante 0,25 h. A la suspensión
amarilla resultante se añadió éster metílico del ácido
4-bromo-2,6-difluorobenzoico
(5,3 g, 21 mmoles), y la mezcla se agitó a rt durante 3 días, en
cuyo momento todo el material de partida se había consumido. Se
añadió agua (200 ml) y HCl 6M (50 ml), seguido de DCM (200 ml). Se
añadió más agua (500 ml) para producir un sistema bifásico
transparente. La capa acuosa se extrajo con DCM (3 x 100 ml), las
capas de DCM se combinaron entonces, se lavaron con NaHCO_{3}
saturado y salmuera, y se secaron sobre MgSO_{4}. La evaporación
del disolvente proporcionó un sólido naranja que contiene 64% del
material deseado, que se usó sin purificación adicional. LCMS; Rt =
1,27 min. (64%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
El éster metílico del ácido
4-bromo-2-fluoro-6-(nitrometil)benzoico
bruto procedente de la etapa anterior se disolvió en MeOH (100 ml).
A esta disolución naranja clara se añadió polvo de cinc (3,35 g,
51,3 mmoles, 3 equiv.) seguido de formiato de amonio (3,23 g, 51,3
mmoles, 3 equiv.), lo que da como resultado una reacción
exotérmica. Tras 0,3 h, se añadió NH_{3} 7M en MeOH (50 ml), y la
mezcla se agitó toda la noche a temperatura ambiente. La mezcla
resultante se filtró a través de celita, y el filtrado amarillo se
adsorbió sobre sílice y se limpió a conciencia mediante LC usando
DCM/NH_{3} (7M en MeOH) 94/6. La eliminación del disolvente
proporcionó un sólido bronceado que se redisolvió en DCM, se lavó
con NaOH al 10%, y se concentró a presión reducida para dejar un
sólido blanco, que se trituró adicionalmente con pequeñas cantidades
de DCM para proporcionar el compuesto del título. LCMS: Rt 0,96 min.
(100%) m/z 230/232 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
Una disolución de
5-bromo-7-fluoro-2,3-dihidroisoindol-1-ona
(531 mg, 2,31 mmoles) en dioxano (5 ml) se agitó en nitrógeno. Se
añadieron Pd(dppf)Cl_{2} (94 mg, 5% en moles),
acetato de potasio (453 mg, 4,62 mmoles, 2,0 equiv.) y
bispinacolatodiboro (1,17 g, 4,62 mmoles, 2 equiv.), y la reacción
se calentó a 80ºC durante 3 h. La suspensión naranja resultante se
diluyó con DCM, se filtró a través de celita y concentró a
vacío para proporcionar un aceite que se redisolvió en un
mínimo de DCM. Se añadió lentamente éter dietílico para
proporcionar el compuesto del título como un sólido bronceado. LCMS:
Rt 1,18 min. (100%) m/z 277/279 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 91, usando el boronato
anterior. LCMS: Rt = 0,90 min. (95%), m/z 487
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
112
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
1-[4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-fenil]-piperazin-2-ona
(ejemplo 31, etapa 2) (180 mg, 0,47 mmoles) en MeOH (4 ml) se
añadieron ácido acético (0,03 ml, 0,47 mmoles), NaOAc (38 mg, 0,47
mmoles) y acetona (0,2 ml, 1,18 mmoles). La mezcla de reacción se
agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, y después se añadió
NaCNBH_{3} (60 mg, 0,94 mmoles), y la mezcla se agitó a 40ºC toda
la noche. Después de enfriar hasta la temperatura ambiente, la
mezcla de reacción se acidificó con HCl conc. (pH 1) y se concentró
a vacío. El residuo se repartió entre NaOH 6N y DCM. La capa
acuosa se extrajo con DCM (3x), y las capas orgánicas combinadas se
secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío para
proporcionar un compuesto bruto que se purificó mediante
cromatografía en columna sobre gel de sílice. La elución con DCM y
DCM:MeOH 98:2 proporcionó el compuesto del título como un sólido
amarillo (45 mg, 25%).
\newpage
Etapa
2
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
1-[4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-fenil]-4-isopropil-piperazin-2-ona
(40 mg, 0,09 mmoles),
5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-dihidro-isoindol-1-ona
(37 mg, 0,14 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (31 mg,
0,027 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (ac.) (0,5 ml, 0,75 mmoles),
y dioxano (1,2 ml). La mezcla de reacción se diluyó con salmuera,
después se añadió tolueno y se formó un precipitado y se recogió
mediante filtración. El filtrado se lavó con éter dietílico, éter
de petróleo y MeOH, y después se purificó mediante cromatografía en
columna sobre gel de sílice. La elución con DCM:NH_{3} (7M en
MeOH) 99:1 seguido de DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 98:2 y 95:5
proporcionó el compuesto del título como un sólido amarillo (24 mg,
55%).
RMN ^{1}H (400MHz,
d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 1,08 (6H, d),
2,73-2,87 (3H; m), 3,27 (2H, s),
3,62-3,68 (2H, m), 4,52 (2H, s), 7,36 (2H, d), 7,84
(1H, d), 8,07-8,10 (4H, m), 8,25 (1H, s), 8,70 (1H,
br s), 8,77 (1H, s), 10,28 (1H, s). LCMS: Rt 1,94 min. (95,2%),
m/z (APCI) 483 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
114
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una suspensión de hidruro de sodio (130 mg,
dispersión al 60% en aceite mineral, 3,2 mmoles) y yoduro de
tetra-butilamonio (243 mg, 0,68 mmoles) en THF (20
ml) se agitó a rt, y se añadió una disolución de
5-bromo-2,3-dihidroisoindol-1-ona
(675 mg, 3,2 mmoles) en THF (20 ml) y DMF (4 ml). Después de 75
min., se añadió bromuro de 4-metoxibencilo (460
\mul, 3,2 mmoles), y la agitación se continuó durante 4 h.
Entonces se añadió hidruro de sodio (635 mg, dispersión al 60% en
aceite mineral, 15,9 mmoles), y la agitación se continuó durante 30
min. antes de añadir yodometano (1,19 ml, 19 mmoles), y la mezcla
se calentó hasta 70ºC durante 30 min. Después de enfriar, se añadió
NH_{4}Cl (sat. ac.), y la mezcla se diluyó con acetato de etilo
(120 ml). Las capas se separaron, la fase orgánica se secó sobre
MgSO_{4}, y los disolventes se eliminaron a presión reducida. El
residuo se purificó mediante cromatografía sobre sílice, eluyendo
con 5% hasta 10% de acetato de etilo en éter de petróleo para
proporcionar el compuesto del título como un aceite amarillo (640
mg, 1,78 mmoles).
\newpage
Etapa
2
Una disolución de
5-bromo-2-(4-metoxibencil)-3,3-dimetil-2,3-dihidroisoindol-1-ona
(640 mg, 1,78 mmoles) y nitrato amónico cérico (2,91 g, 5,33 mmoles)
en acetonitrilo (11 ml) y agua (5 ml) se agitó a 0ºC durante 45 min.
La disolución se diluyó con acetato de etilo (100 ml) y se lavó con
salmuera (40 ml). Los disolventes orgánicos se secaron sobre
MgSO_{4} y se evaporaron a presión reducida. El residuo se
purificó mediante cromatografía sobre sílice, eluyendo con 10% hasta
50% de acetato de etilo en éter de petróleo, para proporcionar el
compuesto del título (367 mg, 1,53 mmoles).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
El
5-bromo-3,3-dimetil-2,3-dihidroisoindol-1-ona
se convirtió en el boronato correspondiente de una manera análoga a
la del Compuesto 6, Etapa 3. Éste se usó entonces para preparar el
compuesto del título a partir de
(5-bromo[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)-fenil]amina
usando métodos como se describen para el Compuesto 120, Etapa 4.
LCMS: Rt = 0,92 (100%), m/z = 497 (M+H)+.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 1, usando
5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina
(250 mg, 0,90 mmoles), éster metílico del ácido
4-aminobenzoico (163 mg, 1,08 mmoles) y
N-etildiisopropilamina (0,19 ml, 1,08 mmoles) en
2-propanol (2,5 ml). El compuesto del título se
obtuvo tras la trituración con 2-propanol como un
sólido marrón (148 mg, 47%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
Se suspendió éster metílico del ácido
4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-benzoico
(460 mg, 1,32 mmoles) en THF (11 ml), y se añadió una disolución de
monohidrato de hidróxido de litio (554 mg, 13,2 mmoles) en agua (11
ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4
horas, después se añadió metanol (11 ml), y la mezcla se agitó a
50ºC durante 24 horas. La mezcla se repartió entre agua y DCM, la
fase acuosa se acidificó con HCl 2M (pH 2), y se formó un
precipitado amarillo. El precipitado se recogió mediante filtración,
se lavó con agua y con éter dietílico y se secó para proporcionar el
compuesto del título (215 mg, 49%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
Una disolución de ácido
4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-benzoico
(0,230 g, 0,69 mmoles),
3-hidroxi-benzotriazol (0,103 g,
0,76 mmoles), hidrato de
1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)carbodiimida
(0,146 g, 0,76 mmoles) en DMF (5 ml) y
3-picolilamina (0,077 ml, 0,76 mmoles) se agitó a
temperatura ambiente durante 21 horas. El disolvente se eliminó a
vacío, y el residuo se trituró con éter dietílico, acetato de
etilo y diclorometano. Se obtuvo un sólido amarillo pálido, se lavó
con agua y se secó para proporcionar el compuesto del título (241
mg, 82%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-N-piridin-3-ilmetil-benzamida
(100 mg, 0,24 mmoles),
4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol
(93 mg, 0,48 mmoles) y Pd(PPh_{3})_{4} (70 mg,
0,06 mmoles) en K_{2}CO_{3} 1,5M (ac.) (1,4 ml) y dioxano (2,5
ml). El material bruto se purificó mediante cromatografía en columna
sobre gel de sílice eluyendo con DCM seguido de DCM:NH_{3} (7M en
MeOH) 98:2 después 96:4 y después 90:10 para proporcionar el
compuesto del título como un sólido blanco (19,6 mg, 20%).
RMN ^{1}H (400MHz,
d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 4,52 (2H, d), 7,40 (1H,
m), 7,78 (1H, d), 7,93 (2H, d), 8,18 (2H, d), 8,32 (1H, s),
8,48-8,62 (4H, m), 8,82 (1H, s), 9,01 (1H, t), 10,21
(1H, br s), 13,3 (1H, br s). LCMS: Rt 1,86 min. (93%), m/z
(ES^{+}) 412 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
119
Etapa
1
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando
4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-N-piridin-3-ilmetil-benzamida
(120 mg, 0,28 mmoles), ácido
2-metoxipiridin-4-borónico
(87 mg, 0,57 mmoles) y Pd(PPh_{3})_{4} (81 mg,
0,07 mmoles) en K_{2}CO_{3} 1,5M (ac.) (1,6 ml) y dioxano (2,9
ml). El material bruto se purificó mediante cromatografía en columna
sobre gel de sílice eluyendo con DCM seguido de DCM:NH_{3} (7M en
MeOH) 99:1 después 97:3 y después 95:5 para proporcionar el
compuesto del título como un sólido blanco (92,6 mg, 73%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
Una mezcla de
4-[5-(2-metoxi-piridin-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-N-piridin-3-ilmetil-benzamida
(71,5 mg, 0,16 mmoles) e hidrocloruro de piridinio (91 mg, 0,79
mmoles) en agua (0,5 ml) en un tubo cerrado herméticamente se
calentó a 150ºC durante 25 minutos. Después de este período de
tiempo, el disolvente se eliminó a vacío. El residuo se
cromatografió sobre gel de sílice, eluyendo con DCM seguido de
DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 98:2 y 90:10, y las fracciones que
contenían el producto deseado se combinaron y se evaporaron. El
compuesto del título se aisló como un sólido amarillo (34,5 mg,
49%).
RMN ^{1}H (400MHz,
d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 4,52 (2H, d), 6,82 (1H,
m), 7,22 (1H, s), 7,38 (1H, m), 7,51 (1H, d), 7,78 (2H, d),
8,18-8,23 (3H, m), 8,51 (1H, d), 8,62 (1H, s), 8,82
(1H, s), 9,01 (1H, t), 10,58 (1H, br s), 11,8 (1H, br s). LCMS: Rt
1,72 min. (97%), m/z (ES^{+}) 439 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
120
Etapa
1
Se disolvió ácido
2-metoxi-4-nitrobenzoico
(293 mg, 1,49 mmoles) en DMF (2 ml), y se añadieron
4-metilmorfolina (220 \mul, 3,0 mmoles) y TBTU
(1,79 g, 1,7 mmoles). La mezcla se agitó a rt durante 30 min., y se
añadió
C-(6-metilpiridin-3-il)metilamina
(400 mg, 3,27 mmoles). La agitación se continuó a rt durante 12 h.
Se añadió DCM (10 ml), y la fase orgánica se lavó con
Na_{2}CO_{3} (5% ac.), HCl (3% ac.) y agua, y después se secó
sobre Na_{2}SO_{4}. Después de la evaporación de los
disolventes, el residuo se trituró con éter-hexano
para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
Se agitó una disolución de
2-metoxi-N-(6-metilpiridin-3-il)metil-4-nitrobenzamida
(448 mg, 1,49 mmoles) en EtOH y EtOAc (8 ml cada uno), y se
añadieron formiato de amonio (375 mg, 6 mmoles) y Pd al 10%/C (100
mg). La mezcla se calentó a reflujo durante 20 min., se enfrió, se
filtró a través de celita, el sólido se lavó con EtOH, y los
disolventes combinados se evaporaron para proporcionar el compuesto
del título.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
Se agitaron
5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina
(285 mg, 1,03 mmoles) y
4-amino-2-metoxi-N-[(6-metilpiridin-3-il)metil]benzamida
(280 mg, 1,03 mmoles) en ^{i}PrOH (5 ml), y se añadió HBr (48%
ac., 380 \mul). La mezcla se calentó a reflujo durante 24 horas.
La suspensión enfriada se vertió en NaHCO_{3} (sat. ac., 25 ml) y
agua (25 ml), y se extrajo con CHCl_{3} (4 x 30 ml). Los extractos
se secaron sobre MgSO_{4} y se evaporaron. El residuo se purificó
mediante cromatografía en columna, eluyendo con 10% de
CH_{2}Cl_{2}/MeOH. Las fracciones que contienen el producto se
evaporaron, y el residuo se trituró con MeOH para proporcionar el
compuesto del título como un sólido marrón.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se pesaron ácido
pirazol-4-borónico (19 mg, 0,17
mmoles),
4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-2-hidroxi-N-[(6-metil-piridin-3-il)metil]benzamida
(40 mg, 0,085 mmoles), K_{2}CO_{3} (24 mg, 0,17 mmoles) y
Pd(dppf)Cl_{2}CH_{2}Cl_{2} (4 mg, 0,005 mmoles)
en un tubo que se puede cerrar herméticamente. El tubo se inundó con
nitrógeno, y se añadió dioxano-agua (4:1, 4 ml). El
tubo se cerró herméticamente, se colocó en un baño ultrasónico bajo
un caudal de gas nitrógeno durante 30 segundos y después se colocó
en un baño de aceite a 85ºC. La reacción se agitó durante 28 horas,
añadiendo porciones adicionales de ácido borónico (10 mg) y
catalizador (2 mg) después de 2 h y 18 h. La mezcla bruta se
absorbió sobre SiO_{2} y se purificó mediante cromatografía en
columna, eluyendo con 1%-10% de MeOH/DCM. El producto obtenido se
redisolvió en MeOH/DCM (4:1, 10 ml), y se añadió MsOH 0,1 M/MeOH (2
eq.), los disolventes se evaporaron, y el residuo se recogió en agua
y se liofilizó para proporcionar el compuesto del título como su sal
de bis-mesilato (38 mg). LCMS: Rt 0,92 min. (93,9%)
m/z (ESI) 455 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
122
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos descritos para el Compuesto 120, usando bencilamina en la
etapa 1. LCMS: Rt 1,62 min. (100%) m/z (ESI) 440
(M+H)^{+}.
\newpage
Compuesto
124
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 129, usando
2-piridilmetilamina en la etapa 5. LCMS: Rt = 0,84
min. (100%), m/z (ESI) 412 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
127
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 129, usando
4-isopropilpiperazina en la etapa 5. LCMS: Rt = 0,84
min. (100%), m/z (ESI) 432 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
129
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
Se agitaron
5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina
(1,39 g, 5,00 mmoles) y 3-aminobenzoato de etilo
(0,93 g, 5,60 mmoles) en ^{i}PrOH (10 ml), y se añadió HBr (48%
ac., 1,14 ml, 10 mmoles). La mezcla se calentó a 85ºC durante 4 h, y
después se enfrió hasta rt y se paralizó con NaHCO_{3} (sat. ac.,
25 ml). La suspensión resultante se enfrió hasta 0ºC, y el sólido
blanco se recogió mediante filtración por succión y se lavó con agua
(10 ml). El producto bruto se recogió en EtOH, y el disolvente se
evaporó para proporcionar el compuesto del título como un sólido
blanquecino (1,79 g, 4,9 mmoles) que se usó sin purificación
adicional.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución de éster etílico del ácido
3-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)benzoico
(1,79 g, 4,93 mmoles) en DCM (20 ml) se agitó en N_{2} a rt, y se
añadieron BOC_{2}O (1,34 g, 6,16 mmoles) y DMAP (0,30 g, 2,46
mmoles). La agitación se continuó durante 2 h, momento en el que la
LCMS indica la conversión completa del material de partida. La
mezcla se filtró, y el filtrado se lavó con ácido cítrico diluido
(pH 6, 5 ml) y con salmuera (5 ml), y se secó sobre
Na_{2}SO_{4}. La evaporación del disolvente proporcionó el
compuesto del título como un aceite amarillo (1,87 g, 4,0 mmoles)
que se usó sin purificación adicional.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se burbujeó nitrógeno a través una mezcla de
éster etílico del ácido
3-[(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-terc-butoxicarbonilamino]benzoico
(0,58 g, 1,25 mmoles),
4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol
(0,49 g, 2,50 mmoles), K_{2}CO_{3} (0,35 g, 2,50 mmoles) y
Pd(dppf)Cl_{2}DCM (102 mg, 0,125 mmoles) en dioxano
(37,5 ml) y agua (9,6 ml). Se ajustó un condensador al matraz, el
sistema se evacuó y se purgó con N_{2} (g), y después se calentó a
115ºC durante 25 min. Se retiró el baño de calentamiento, y se
añadió CO_{2} (s) para enfriar y tamponar el sistema. El
disolvente se eliminó a presión reducida, y el residuo se purificó
mediante cromatografía sobre sílice, eluyendo con 10% hasta 50% de
acetato de etilo en DCM, para proporcionar el compuesto del título
como un aceite naranja (0,61 g, > 100%) que se usó sin
purificación adicional.
\newpage
Etapa
4
Se disolvió éster etílico del ácido
3-{terc-butoxicarbonil-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-amino}benzoico
impuro (0,61 g, 1,25 mmoles) en THF (2,5 ml), y se añadió KOH (2M
ac., 2,5 ml, 5 mmoles), y la mezcla se calentó a 60ºC toda la noche.
La disolución se enfrió y se filtró a través de celita, aclarando
con agua. El filtrado se vertió en ácido cítrico (2M ac., 2,5 ml) y
se agitó a 0ºC. El sólido resultante se recogió mediante filtración
por succión, lavando con agua y se secó mediante suspensión en EtOH
y evaporación a presión reducida, para proporcionar una goma marrón
(280 mg).
Se obtuvo producto adicional mediante extracción
del filtrado con DCM, para proporcionar un total combinado de 352 mg
del compuesto del título. Éste se usó sin purificación
adicional.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
Se agitaron ácido
3-{terc-butoxicarbonil-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-amino}benzoico
(42 mg, 0,10 mmoles), etilamina (12 M ac., 42 \mul, 0,50 mmoles),
y trietilamina (28 \mul, 0,20 mmoles) en DMF (0,30 ml), y se
añadió PyBOP (57 mg, 0,11 mmoles). La agitación se continuó toda la
noche. La mezcla de reacción se repartió entre EtOAc (7 ml) y
NaHCO_{3} (sat. ac., 7 ml), y las capas se separaron. Las capas
orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (2 x 5 ml) y se secaron
sobre Na_{2}SO_{4}. La evaporación del disolvente proporcionó un
aceite que se disolvió en MeOH (0,3 ml) que contiene HCl (12 M ac.,
0,15 ml) y se agitó toda la noche. Se añadieron trietilamina (0,25
ml) y EtOH (2 ml), y los disolventes se eliminaron a presión
reducida. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa para
proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (7 mg).
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}, 400 MHz): \delta =
13,29 ppm (s, 0,8 H); 10,01 (s, 0,9 H); 8,77 (s, 1,0 H); 8,65 (s,
1,0 H); 8,52 (s, 1,1 H); 8,41-8,37 (m, 2,1 H); 8,25
(s, 1,0 H); 8,08 (d, 1,0 H); 7,47 (d, 1,0 H); 7,41 (t, 1,1 H);
7,04-7,03 (m, 0,5 H); 3,32 (s, 29,2 H (agua)); 1,14
(t, 3,5 H). LCMS: Rt = 0,95 min. (100%), m/z (ESI) 349
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 129, usando
4-hidroxibencilamina en la etapa 5. LCMS: Rt = 0,98
min. (100%), m/z (ESI) 427 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 129, usando
N-metilbencilamina en la etapa 5. LCMS: Rt = 1,15 min.
(100%), m/z (ESI) 425 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
167
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución de
2-amino-5-nitropiridina
(4,17 g, 30 mmoles) en piridina (30 ml) se agitó a rt, y se añadió
gota a gota una disolución de cloruro de fenilacetilo (4,64 g, 30
mmoles) en THF (30 ml). La mezcla se agitó durante 24 h y después se
vertió en agua con hielo (250 ml) para proporcionar un sólido
marrón, que se usó sin purificación adicional.
Este material se usó para preparar
N-[5-(5-bromo[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-piridin-2-il]-2-fenilacetamida
de una manera análoga a las etapas 2 y 3 de los métodos como se
describen para el Compuesto 120.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 120, etapa 4, usando
N-[5-(5-bromo[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-piridin-2-il]-2-fenilacetamida
y ácido
2-(aminocarbonil)tiofen-4-borónico.
LCMS: Rt 1,06 min. (100%) m/z (ESI) 471
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 84, usando
2-bromoacetamida en la etapa 1. LCMS: Rt = 0,81 min.
(100%), m/z (ESI) 418 (M+H)^{+}.
\newpage
Compuesto
170
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto GB15, usando
5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-dihidroisoindol-1-ona.
LCMS: Rt = 0,99 min. (95%), m/z (ESI) 537
(M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
171
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se puede preparar usando los
métodos como se describen para el Compuesto 46, usando
(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)-3-trifluorometilfenil]amina.
LCMS: Rt= 0,99 (95%), m/z (ESI) 472 (M+H)^{+}.
Otros ejemplos de compuestos de la invención,
preparados mediante los procedimientos anteriores, se describen aquí
más abajo.
\vskip1.000000\baselineskip
\global\parskip0.950000\baselineskip
De forma habitual, tras la síntesis, todos los
compuestos se pueden purificar usando HPLC de fase inversa usando un
sistema de HPLC preparativa de Gilson (bomba 322, detector UV/VIS
155, y un manipulador de líquidos 215). El Gilson 215 actúa tanto
como un aparato de toma de muestras automático como un colector de
fracciones. Los compuestos también se pueden purificar mediante
cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice.
Los compuestos se caracterizan mediante
espectrometría de masas usando instrumentación cuadripular
individual, con una fuente de electropulverización.
\vskip1.000000\baselineskip
Las reacciones de MAPKAP-K5 se
llevaron a cabo en un formato FlashPlate usando 0,1 ó 0,2 \muCi de
33P-ATP; 0,6 \muM de ATP; 1 mU de
MAPKAP-K5; 3 \muM de sustrato peptídico de
MAPKAP-K5, incubado a temperatura ambiente durante
30 minutos.
\vskip1.000000\baselineskip
La reacción de MAPKAP-K5 cinasa
se lleva a cabo en una placa de polipropileno de 384 pocillos
(Matrix Technologies), y entonces se transfiere a flashplate de 384
pocillos revestida con estreptavidina
(Perkin-Elmer).
A los pocillos, que contienen 2 \mul de
compuesto de ensayo o de inhibidor estándar, se añaden 13 \mul de
mezcla enzimática o de diluyente, usando un aparato Hydra (Robbins
Scientific).
Las reacciones comienzan por adición de 10
\mul de [2,5x] cóctel de sustrato usando un Multidrop
(Thermo-Labsystems), para dar concentraciones
finales en el ensayo de:
1 mU de MAPKAP-K5
3 \muM de sustrato peptídico de
MAPKAP-K5
0,6 \muM de ATP
0,004 \muCi de
[33P]-\gamma-ATP/\mul
1x tampón de reacción
\vskip1.000000\baselineskip
Las placas se incubaron a temperatura ambiente
durante 30 minutos.
Las reacciones se terminaron por adición de 25
\mul de EDTA (50 mM) a cada pocillo usando un
Micro-fill (Biotek).
Las reacciones se transfirieron a una flashplate
revestida con estreptavidina usando un sistema robótico Zymark. Las
placas se incubaron durante 60 minutos a temperatura ambiente.
Todos los pocillos se lavaron 3 veces con 100
\mul de disolución salina tamponada con fosfato usando un lavador
de placas Tecan.
La radioactividad se determinó contando por
centelleo la flashplate (pocillos vacíos) en un contador Packard
TopCount.
\vskip1.000000\baselineskip
50 mM de Tris HCl (pH 7,5)
0,1 mM de EGTA
2 mM de DTT
1 mg/ml de BSA
\vskip1.000000\baselineskip
\global\parskip1.000000\baselineskip
50 mM de Tris HCl (pH 7,5)
0,1 mM de EGTA
10 mM de acetato de magnesio
2 mM de DTT
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Los siguientes compuestos se han preparado o se
pueden preparar según los métodos sintéticos descritos
anteriormente. Para los fines de la Tabla 1 y Tabla 2 a
continuación, la actividad de cada compuesto, que se puede
determinar usando el método de ensayo de MAPKAPK5 descrito en el
Ejemplo 1, se expresa según lo siguiente:
- ++++
- el compuesto mostró una IC_{50} de 1-100 nM de MAPKAPK5
- +++
- el compuesto mostró una IC_{50} de 101-500 nM de MAPKAPK5
- ++
- el compuesto mostró una IC_{50} de 501-1000 nM de MAPKAPK5
- +
- el compuesto mostró una IC_{50} de >1000 nM de MAPKAPK5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Para identificar compuestos que disminuyen la
actividad degradante de la ECM de las células, la actividad
degradante de la ECM de las células se puede inducir para permitir
la detección apropiada de esta actividad, y para lograr una lectura
más clara. En el contexto de AR, las células de elección son
fibroblastos sinoviales de mamífero, y los desencadenantes que se
pueden usar para inducir la actividad degradante de la ECM son
citocinas apropiadas en el campo de la artritis: por ejemplo,
TNF-\alpha, IL1\beta, IL6, OSM, IL17, y
MIF1-\alpha. Esta lista no es detallada debido a
la plétora de citocinas implicadas potencialmente en la patogénesis
de la AR (Smolen y Steiner, 2003). Para construir un ensayo in
vitro que sea tan similar como sea posible a la complejidad de
la patología, el desencadenante aplicado debe ser una mezcla de
factores generados poniendo en contacto células productoras de
citocinas apropiadas en el campo de la artritis, tales como
monocitos, macrófagos, células T, y células B, con un
desencadenante. Las células productoras de citocinas responderán al
contacto produciendo un complejo y una mezcla estimada de factores.
Si la célula productora de citocinas usada también se encuentra en
un paño sinovial, y si la citocina aplicada para producir este
desencadenante se encuentra en el fluido sinovial de pacientes con
artritis reumatoide, la mezcla de factores producida finalmente
contendrá parte de los factores que están presentes en las
articulaciones de pacientes con artritis.
\vskip1.000000\baselineskip
Las metaloproteasas de la matriz (MMP) poseen
diversos papeles fisiológicos, como por ejemplo la maduración de
otras proteasas, factores de crecimiento, y la degradación de los
componentes de la matriz extracelular. La MMP1 es uno de los
miembros de la familia de las MMP que es capaz de degradar colágeno
nativo, el principal componente del hueso y del cartílago. Una
expresión incrementada de MMP1 por fibroblastos sinoviales (SF) es
un diagnóstico para la progresión de la enfermedad artrítica, y
predice procesos erosivos en la articulación (Cunnane et al.,
2001). La expresión de MMP1 por los SF se puede incrementar mediante
la activación de los SF con desencadenantes apropiados para la
artritis reumatoide, como citocinas como
TNF-\alpha o IL1\beta (Andreakos et al.,
2003). Tomado en conjunto, la medida de los niveles de MMP1
producida por los SF activados es una lectura que es muy apropiada
en el contexto de AR puesto que este suceso refleja el nivel de
activación de los SF con respecto a un fenotipo erosivo como se
observa en el paño sinovial. Si una expresión reducida de una diana
farmacéutica candidata en los SF activados conduce a la reducción de
la expresión de MMP1 por estas células, entonces se demuestra que la
diana farmacéutica está implicada en la regulación de la expresión
de MMP1 y de este modo se considera apropiada para el desarrollo de
estrategias terapéuticas para el tratamiento de AR.
En los siguientes ejemplos, el desarrollo de un
ensayo, denominado posteriormente como "ensayo de MMP",
monitoriza la producción de MMP1 por fibroblastos sinoviales (SF) en
respuesta a diversos desencadenantes activadores (Ejemplo 2.1). El
uso de este ensayo se describe entonces para la validación de
productos génicos que se consideran dianas farmacéuticas para el
desarrollo de terapias contra la AR (Ejemplo 2.2). La validación de
las dianas farmacéuticas se realiza usando adenovirus recombinantes,
denominados posteriormente como virus reductores de la expresión o
Ad-siRNA, que median la expresión en células de
shRNA que reducen los niveles de expresión de genes seleccionados
como dianas mediante un mecanismo a base de ARNi (ARN de
interferencia) (véase el documento WO 03/020931). En la Tabla 3 se
describe entonces la identificación de compuestos que modulan la
actividad de las dianas farmacéuticas validadas. El uso del
"ensayo de MMP" para ensayar compuestos que modulan la
actividad de las dianas farmacéuticas identificadas se describe
posteriormente más abajo.
\vskip1.000000\baselineskip
Los virus de control usados en estos estudios se
enumeran a continuación. Se generaron adenovirus dE1/dE2A a partir
de estos plásmidos adaptadores mediante cotransfección del plásmido
auxiliar pWEAd5AfIII-rITR.dE2A en células de
empaquetamiento PER.E2A, como se describe en el documento WO
99/64582.
\vskip1.000000\baselineskip
- Ad5-eGFP_KD: secuencia diana: GCTGACCCTGAAGTTCATC (SEC ID NO: 1). Clonado usando sitios Sap1 en vector y virus generado como se describe en el documento WO 03/020931.
- Ad5-Luc_v13_KD: secuencia diana GGTTACCTAAGGGTGTGGC (SEC ID NO: 2). Clonado usando sitios Sap1 en vector y virus generado como se describe en el documento WO 03/020931.
- Ad5-M6PR_v1_KD: secuencia diana CTCTGAGTGCAGTGAAATC (SEC ID NO: 3). Clonado usando sitios Sap1 en vector y virus generado como se describe en el documento WO 03/020931.
\vskip1.000000\baselineskip
- Ad5-MMP1_v10_KD: secuencia diana ACAAGAGCAAGATGTGGAC (SEC ID NO: 4). Clonado usando sitios Sap1 en vector y virus generado como se describe en el documento WO 03/020931.
\vskip1.000000\baselineskip
- Ad5-MAPKAPK5_v13_KD: secuencia diana CGGCACTTTACAGAGAAGC (SEC ID NO: 5). Clonado usando sitios Sap1 en vector y virus generado como se describe en el documento WO 03/020931.
- Ad5-MAPKAPK5_v12_KD: secuencia diana ATGATGTGTGCCACACACC (SEC ID NO: 6). Clonado usando sitios Sap1 en vector y virus generado como se describe en el documento WO 03/020931.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
2.1
Para la medida de MMP1 se desarrolló un ELISA en
formato de 384 pocillos. Se ensayaron diversos anticuerpos
primarios, así como diversos protocolos de ELISA. El siguiente
protocolo se desarrolló y validó para medir los niveles de MMP1 en
sobrenadante de SF en placas de 384 pocillos: placas blancas de 384
pocillos Lumitrac 600 (Greiner) se revisten con 2 \mug/ml de
anticuerpo anti-MMP1 MAB1346 (Chemicon). El
anticuerpo se diluyó en tampón 40 (1,21 g de base Tris (Sigma),
0,58 g de NaCl (Calbiochem) y 5 ml de NaN_{3} al 10% (Sigma) en 1
l de agua milliQ, y se ajustó hasta pH 8,5). Después de la
incubación durante toda la noche a 4ºC, las placas se lavaron con
PBS (80 g de NaCl, 2 g de KCl (Sigma), 11,5 g de
Na_{2}HPO_{4}.7H_{2}O y 2 g de KH_{2}PO_{4} en 10 l de
milliQ: pH 7,4), y se bloquearon con 100 \mul/pocillo de tampón de
caseína (caseína al 2% (VWR International) en PBS). Al siguiente
día, el tampón de caseína se eliminó de las placas de ELISA y se
sustituyó por 50 \mul/pocillo de tampón de EC (4 g de caseína,
2,13 g de Na_{2}HPO_{4} (Sigma), 2 g de albúmina bovina
(Sigma), 0,69 g de NaH_{2}PO_{4}.H_{2}O (Sigma), 0,5 g de
CHAPS (Roche), 23,3 g NaCl, 4 ml de 0,5 M de EDTA pH 8
(Invitrogen), 5 ml de NaN_{3} al 10% en 1 l de milliQ, y se ajustó
hasta pH 7,0). A las placas de muestras descongeladas se añadieron
0,25 mM de DTT (Sigma). Tras la eliminación del tampón de EC, se
transfirieron 20 \mul de muestra a las placas de ELISA. Tras la
incubación toda la noche a 4ºC, las placas se lavaron dos veces con
PBS y una vez con PBST (PBS con 0,05% de Tween-20
(Sigma)) y se incubaron con 35 \mul/pocillo de disolución de
anticuerpo anti-MMP1 biotinilado (R&D). Este
anticuerpo secundario se diluyó en tampón C (0,82 g de
NaH_{2}PO_{4}.H_{2}O, 4,82 g de Na_{2}HPO_{4}, 46,6 g
NaCl, 20 g de albúmina bovina y 4 ml de 0,5M de EDTA pH 8 en 2 l de
milliQ y se ajustó hasta pH 7,0) a una concentración de 5
\mug/ml. Después de 2 h de incubación a RT, las placas se lavan
como se describe anteriormente y se incuban con 50 \mul/pocillo
de conjugado de estreptavidina-HRP (Biosource). El
conjugado de estreptavidina-HRP se diluyó en tampón
C a una concentración de 0,25 \mug/ml. Después de 45 min., las
placas se lavaron como se describe anteriormente y se incubaron
durante 5 minutos con 50 \mul/pocillo de sustrato de ELISA BM Chem
(Roche). La lectura se realiza en el luminómetro Luminoscan Ascent
(Labsystems), con un tiempo de integración de 200 ms, o con un
lector Envision (Perkin Elmer).
El incremento de la expresión de MMP1 mediante
los SF al tratarlos con citocinas apropiadas en el campo de AR
TNF-\alpha, IL1\beta y OSM), o una combinación
de las mismas, se muestra en la Figura 2 como barras blancas. Para
este experimento, se siembran los SF en placas de 96 pocillos, 3.000
células/pocillo. 24 h más tarde, el medio se cambia a medio M199
suplementado con 1% de FBS. Un día después del cambio de medio, se
añaden las citocinas o sus combinaciones a los cultivos, añadiéndose
cada citocina a una concentración final de 25 ng/ml. 72 h después
de la adición de las citocinas, el sobrenadante se recogió y se
procesó en el ELISA de MMP1 como se describe en el protocolo dado
anteriormente. En paralelo con este experimento, los SF se activan,
usando el mismo protocolo, con el sobrenadante de células THP1
(diluidas 2 veces en M199 + 1% de FBS) tratadas con las mismas
citocinas o combinaciones de citocinas durante 48 h en medio M199 +
1% de FBS. Los niveles de MMP1 para estas muestras se muestran en
la Figura 2 como barras grises. La inducción de la expresión de
MMP1 por los SF activados con los sobrenadantes de células THP1
tratadas con TNF-\alpha es más fuerte (inducción
de >4,5 veces) en comparación con los SF accionados con
TNF-\alpha recombinante sola (inducción de 3
veces), y casi iguala a la inducción de 5 veces obtenida mediante
una mezcla de 3 citocinas purificadas (TNF-\alpha,
IL1\betab y OSM). Este resultado indica que el sobrenadante de
células THP1 inducidas por TNF-\alpha contiene,
además de TNF-\alpha, factores proinflamatorios
adicionales que activan los SF con respecto a la expresión de MMP1.
Puesto que el papel de TNF-\alpha en la
patogénesis de la AR está validado (los bloqueadores de
TNF-\alpha tales como Infliximab y Etanercept
muestran cierta eficacia en el tratamiento de pacientes con AR) y
las células de THP-1 son representativas de
monocitos/macrófagos presentes en la articulación de los pacientes
con AR, la mezcla desencadenante a base de
TNF-\alpha, preparada poniendo en contacto células
THP-1 con TNF-\alpha, contendrán
factores presentes en las articulaciones de pacientes con AR, y
subsiguientemente es apropiada para AR. Este desencadenante
complejo a base de TNF-\alpha, denominado
posteriormente como el "desencadenante complejo", se usará
posteriormente como base para el "ensayo de MMP".
La inhibición de la activación de SF por el
"desencadenante complejo" se muestra usando dexametasona, un
potente agente antiinflamatorio que también reduce enormemente la
artritis inducida por colágeno en roedores (Yang et al.,
2004) (Figura 3). La desametasona demuestra reducir, de forma
dependiente de la dosis, cantidades de MMP1 producida por los SF
activados por el desencadenante complejo. Los SF se siembran a una
densidad de 3000 células/pocillo en placas de 96 pocillos. 24 h
después de la siembra, se añaden a las células concentraciones
crecientes de dexametasona. Tras la incubación durante la noche, el
medio de cada pocillo se renueva a sobrenadante de células
THP-1 tratadas con TNF-\alpha
(diluidas al 50% en M199 + 0,5% de FBS), y el día anterior se añade
la misma concentración de dexametasona. 48 h después del
tratamiento, el sobrenadante se recoge y se somete al ELISA de MMP1
descrito anteriormente. La adición de dexametasona reduce claramente
la expresión de MMP1 por los SF, con un valor de IC_{50} de
alrededor de 1 nM (véase la Figura 3). Estos datos muestran que la
expresión de MMP1 por los SF activados se puede reducir mediante la
adición de un inhibidor fisiológicamente apropiado, y representa una
prueba de principio para el "ensayo de MMP".
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
2.2
Los adenovirus recombinantes que median la
expresión de los siRNA dirigidos a MAPKAPK5 y eGFP se generan según
el procedimiento descrito en el documento WO 03/020931. La secuencia
diana usada en el adenovirus recombinante es CGGCACTTTACAGAGAAGC
(SEC ID NO: 5) así como ATGATGTGTGCCACACACC (SEC ID NO: 6). La
secuencia diana dentro del ARNm de eGFP usada en el adenovirus
recombinante es: GCTGACCCT
GAAGTTCATC (SEC ID NO: 1). Estas secuencias se clonan en el plásmido adaptador usando los sitios Sap1. Los adenovirus dE1/dE2A se generan a partir de estos plásmidos adaptadores mediante cotransfección del plásmido auxiliar pWEAd5AfIII-rITR.dE2A en células de empaquetamiento PER.E2A, como se describe en el documento WO 99/64582.
GAAGTTCATC (SEC ID NO: 1). Estas secuencias se clonan en el plásmido adaptador usando los sitios Sap1. Los adenovirus dE1/dE2A se generan a partir de estos plásmidos adaptadores mediante cotransfección del plásmido auxiliar pWEAd5AfIII-rITR.dE2A en células de empaquetamiento PER.E2A, como se describe en el documento WO 99/64582.
La funcionalidad de un adenovirus dirigido a
MAPKAPK5 se ensayó según lo siguiente. Estos adenovirus se usan
para infectar SF humanos primarios cultivados en cápsulas de Petri
según lo siguiente. En el primer día, se siembran 500.000 SF por
cápsula de Petri. Un día más tarde, las células se infectan con
Ad5-MAPKAPK5-v13_KD (1,6E9 VP/ml) o
Ad5-eGFP-v5_KD (1,3E10 VP/ml) a una
MOI de 4000 (basado en los títulos (número de partículas víricas
por ml) definidos por los virus mediante
Q-rt-PCR). En el 7º día, las células
se despegan de la cápsula de Petri según procedimiento estándar
usando una disolución de EDTA con tripsina. La tripsina se
neutraliza entonces mediante adición de medio de crecimiento DMEM
suplementado con 10% de FBS. Las células se recogen entonces
mediante una etapa de centrifugación (1000 rpm, 5 min.). El pelete
se lisa en 100 \mul de tampón RIPA reciente (50 mM de Tris pH
7,5, 150 mM de NaCl, 1% de desoxicolato, 1% de Triton X100, 0,1% de
SDS). Las muestras se tratan entonces con ultrasonidos durante 10
segundos. La concentración proteica de las muestras se determina
entonces usando el kit BCA (Pierce, Catálogo nº 23227) como se
describe por el proveedor, usando BSA como patrón. A 30 \mug de
lisado celular, diluido hasta 19,5 \mul en tampón de RIPA, se
añadieron 3,5 \mul de agente reductor (agente reductor NuPage nº
10, Invitrogen NP0004) y 7,5 \mul de tampón de muestra (tampón de
muestra NuPage LDS, Invitrogen NP0007). La muestra de 30 \mul se
hierve entonces durante 5 minutos y se carga en un gel de
poliacrilamida al 10% (Invitrogen NP0301). Para permitir la
estimación del nivel de reducción de la expresión proteica, también
se cargaron en el gel 15 \mug, 7,5 \mug y 3,75 \mug del
lisado de las células infectadas con
Ad5-eGFP-v5_KD. El gel se hizo pasar
entonces durante 2 horas a 100V en 1x de tampón MOPS/SDS NuPage
(Invitrogen NP001). Para estimar el tamaño de la proteína en el gel,
se usaron 10 \mul de Seablue Plus Prestained estándar (Invitrogen
LC5925). Las proteínas en el gel se transfirieron entonces sobre
una membrana de PVDF (Invitrogen LC2002) mediante un procedimiento
de transferencia en húmedo usando un tampón de transferencia
preparado mezclando 100 ml de tampón de transferencia Nupage 20*
(NP0006-1), 400 ml de metanol y 1500 ml de agua
Milli Q. Antes de la transferencia, la membrana se empapó
primeramente en metanol y en tampón de transferencia. La
transferencia se realiza a 100V durante 90 minutos. La membrana se
bloqueó entonces empapando durante 30 minutos en tampón de bloqueo
(2% de polvo de bloqueo (Amersham, RPN 2109) preparado en PBST (PBS
suplementado con 0,1% de Tween 20 (Sigma, P1379)). Después del
bloqueo, la inmunodetección se llevó a cabo usando un anticuerpo
monoclonal de ratón frente a MAPKAPK5 (BD Biosciences, Catálogo nº
612080) diluido 250 veces en tampón de bloqueo. Después de la
incubación durante toda la noche con este anticuerpo primario, la
membrana se lavó 3 veces con PBST y se incubó 1 h con el anticuerpo
secundario (anticuerpo anti-Ig de ratón de cabra
policlonal, conjugado con HRP (DAKO PO447), diluido 50000 veces en
tampón de bloqueo. La transferencia se lavó entonces 3 veces en
PBST, y la detección se realizó con el ECL advance (RPN2109,
Amersham) en un Kodakimager según las instrucciones del fabricante.
La transferencia Western reveló un menor nivel de expresión de
MAPKAPK5 en las células infectadas con
Ad5-MAPKAPK5-v13_KD, en comparación
con las células infectadas con el virus de control negativo
Ad5-eGFP-v5_KD. La comparación con
las muestras diluidas infectadas con
Ad5-eGFP-v5_KD permitió estimar que
la reducción de la expresión era de 2 veces. Se demuestra una carga
igual de las muestras de 30 \mug mediante inmunodetección de
\beta-actina tras la eliminación del anticuerpo
anti-MAPKAPK5 mediante un "procedimiento de
extracción" (ebullición durante 5 minutos de la membrana en
PBST). La inmunodetección de \beta-actina se
realiza según el método descrito para la detección de MAPKAPK5, pero
usando un anticuerpo policlonal de cabra contra
\beta-actina (Santa Cruz, Catálogo nº
SC-1615) a una dilución de 1000 veces como el
anticuerpo primario, y un anticuerpo anti-de cabra
de conejo a una dilución de 50000 veces como anticuerpo secundario.
Los resultados de este experimento se dan en la Figura 4. Tomado en
conjunto, este experimento demostró la funcionalidad del virus
Ad-siRNA producido para reducir los niveles de
expresión de MAPKAPK5 en los SF humanos primarios.
\vskip1.000000\baselineskip
La eficacia del virus
Ad5-MAPKAPK5-v13_KD en el "ensayo
de MMP" se ensayó según lo siguiente. El primer día, los SF
(paso 9 a 10) se siembran en placas de 96 pocillos a una densidad de
3000 células por pocillo en medio de crecimiento sinovial completo
(Cell Applications). Un día más tarde, las células se infectan con
cantidades crecientes (3, 6, 9, 12 ó 15 \mul) de los siguientes
virus: Ad5-eGFP-v5_KD,
Ad5-MAPKAPK5-v12_KD,
Ad5-MAPKAPK5-v13_KD,
Ad5-MMP1-v10_KD. La carga viral se
corrige mediante adición del virus neutro
Ad5-Luc-v13_KD para llevar el
volumen vírico final en las células a 15 \mul en cada pocillo. Esa
corrección garantiza que los efectos observados no resultan de la
carga vírica aplicada a las células. Las células se incuban entonces
durante 5 días antes de la etapa de activación. Esta etapa implica
la sustitución, en cada pocillo, del medio de crecimiento por 75
\mul de medio M199 suplementado con 25 \mul de "desencadenante
complejo". 48 horas después de la etapa de activación, el
sobrenadante se recoge y se somete al ELISA de MMP1 como se describe
en el Ejemplo 1. Los resultados del experimento se muestran en la
Figura 5. La calidad del experimento se demuestra mediante la
eficacia del virus Ad-siRNA dirigido contra la
propia MMP1. Este virus de control positivo reduce fuertemente la
expresión de MMP1 mediante los SF, mientras que el virus de control
negativo, diseñado para seleccionar como diana la expresión de
luciferasa, no influye en los niveles de expresión de MMP1. Dos
virus usados para validar la diana de MAPKAPK5
(Ad5-MAPKAPK5-v12_KD y
Ad5-MAPKAPK5-v13) también condujeron
a una reducción clara de la expresión de MMP1 inducida por el
desencadenante complejo mediante los SF humanos primarios. Se puede
concluir, a partir de este experimento, que MAPKAPK5 representa una
diana farmacéutica valiosa que demuestra modular la expresión de
MMP1 en los SF. De forma similar, se espera que la inhibición de la
actividad enzimática de MAPKAPK5 mediante un compuesto de pequeña
molécula reduzca la expresión de MMP1 inducida por la "citocina
compleja" en el "ensayo de MMP". También se predice que la
inhibición de la actividad enzimática de MAPKAPK5 mediante un
compuesto de pequeña molécula reduce la degradación de la
articulación asociada con AR.
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos que inhiben la actividad de
MAPKAPK5 en el ensayo bioquímico (es decir, célula libre, usando
enzima purificada) se ensayan en el "ensayo de MMP" según el
siguiente protocolo.
Las disoluciones madre de los compuestos (todas
a una concentración de 10 mM en 100% de DMSO) se diluyen 10 veces
en agua (agua destilada, GIBCO, libre de ADNasa y ARNasa) para
obtener un lote de trabajo intermedio de 1 mM en 10% de DMSO. Este
lote de trabajo intermedio se diluye adicionalmente 3 veces (o 10
veces) en 10% de DMSO para obtener un lote de trabajo intermedio de
333 \muM (o 100 \muM) de concentración, respectivamente, en 10%
de DMSO. Los lotes de trabajo intermedios de 1 mM así como de 333
\muM (o 100 \muM) se diluyen entonces adicionalmente 10 veces
en 1,1% de DMSO para obtener los 10x lotes de trabajo a 100 \muM y
33,3 \muM (o 10 \muM) de concentración en 2% de DMSO. Este 10x
lote de trabajo se diluye entonces 10 veces en medio M199
suplementado con 1% de FBS para obtener la "preparación de
compuesto 1x" final que contiene los compuestos a 10 \muM y
3,33 \muM (o 1 \muM) así como 0,2% de DMSO. Estas son las
condiciones finales a las que los compuestos se ensayan en las
células. Paralelamente, la disolución de trabajo 10x se diluye 10
veces en "desencadenante complejo" (es decir, el sobrenadante
de células THP1 tratadas con TNF-\alpha
producidas como se describe en el Ejemplo 1) que se diluye 2 veces
en M199 suplementado con 1% de FBS para producir las
"preparaciones de compuesto 1x en desencadenante complejo al
50%".
En el 1^{er} día, se siembran RASF en placas
de 96 pocillos (fondo plano, tratadas con cultivo de tejido,
Greiner) a una densidad de 3000 células/pocillo en medio de
crecimiento sinovial completo (Cell Applications). En el día 5, los
compuestos se añaden a las células cultivadas según lo siguiente. El
medio se elimina completamente de las células y se sustituye por 75
\mul de las "preparaciones de compuesto 1x" que contienen los
compuestos a 10 \muM o 3,33 \muM (o 1 \muM) en medio M199
suplementado con 1% de FBS y 0,2% de DMSO. Después de un período de
incubación de 2 horas, que permite que los compuestos se equilibren
y entren en las células, se añaden 25 \mul de las
"preparaciones de compuesto 1x en desencadenante complejo al
50%" a los pocillos en la parte superior de la "preparación de
compuesto 1x", en los pocillos que contienen los compuestos
correspondientes a la concentración correspondiente. De esta
manera, finalmente se aplica a las células un desencadenante
complejo diluido 8 veces. Entonces se lleva a cabo una incubación
de 48 h, y entonces se procesan 20 \mul del sobrenadante celular
en el ELISA de MMP1 como se describe anteriormente, proporcionando
datos en bruto (RLU: unidades de luminiscencia relativas). En los
experimentos se incluyen controles. Se añade un control de señal
máxima, en el que las células son activadas por el desencadenante
complejo pero sólo el vehículo de 0,2% de DMSO (y de este modo sin
compuesto). Este control indica el nivel máximo de MMP1 que se puede
lograr en el ensayo. También se incluye en estos experimentos un
control de señal mínima. Aquí, las células no están activadas. El
medio de las células se cambia entonces a 100 \mul de medio M199
suplementado con 1% de FBS en el 5º día. Este control vuelve los
niveles de MMP1 basales producidos por los RASF. El porcentaje de
inhibición de la expresión de MMP1 logrado por los compuestos se
calcula entonces basándose en los datos de RLU devueltos por el
ELISA, con la siguiente fórmula: [[(niveles de MMP1 máximos -
niveles de MMP1 mínimos) - (compuesto X de nivel MMP1 a la
concentración Y - niveles de MMP1 mínimos)]/(niveles de MMP1 máximos
- niveles de MMP1 mínimos)] x 100.
La toxicidad de los compuestos se evalúa según
lo siguiente. En el 1^{er} día, los SF se siembran en placas
blancas de 96 pocillos tratadas con cultivo tisular, a una densidad
de 3000 células por pocillo en 100 \mul de medio de crecimiento
sinovial completo. La manipulación de los compuestos, la adición de
los compuestos a las células, así como la activación de las células
se lleva a cabo posteriormente como se describe anteriormente en
este ejemplo para la determinación de los niveles de MMP1. Después
del período de incubación de 48 horas, el medio se elimina de los
pocillos, y se sustituye por 50 \mul de medio M199 reciente
suplementado con 1% de FBS. Entonces se añaden a los pocillos 50
\mul de sustrato (kit de viabilidad celular Promega Celltiter
Glow). Después de un período de incubación de 10 minutos, se mide la
señal de luminiscencia. Una reducción de la señal de luminiscencia
en más de 50%, en comparación con los pocillos de control máximo, se
considera que refleja una toxicidad significativa. No se observó
toxicidad para los compuestos ensayados en el "ensayo de
MMP".
Se entenderá que factores tales como la
capacidad de penetración celular diferencial de los diversos
compuestos puede contribuir a las discrepancias entre la actividad
de los compuestos en los ensayos bioquímicos y celulares in
vitro de MMP.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Para los fines de la Tabla 3 y Tabla 4 a
continuación, la EC_{50} de MMP1 de cada compuesto, que se puede
determinar usando el método de ensayo descrito aquí, se expresa
según lo siguiente:
- ****
- el compuesto mostró una EC_{50} de MMP1 1-100 nM
- ***
- el compuesto mostró una EC_{50} de MMP1 101-500 nM
- **
- el compuesto mostró una EC_{50} de MMP1 501-1000 nM
- *
- el compuesto mostró una EC_{50} de MMP1 >1000 nM
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se aislaron células mononucleares de sangre
periférica humana (PBMC) a partir de "capas leucocíticas"
preparadas de sangre de voluntarios sanos, aisladas esencialmente
según el método de Boyum (1984). De forma breve, la capa leucocítica
se diluyó 1:1 con 1x PBS (Gibco) y se pusieron 30 ml con cuidado
sobre la parte superior de 20 ml de Lymphoprep^{TM} (Lucron
Bioproducts) en tubos Falcon de 50 ml. Tras la centrifugación (35
min., 400 g, 18ºC), las células mononucleares se recogieron de la
interfase blanca y se lavaron 3 veces con 1x PBS mediante
resuspensión y centrifugación (10 min., 200 g). Las PBMC aisladas se
resuspendieron finalmente en RPMI 1640 (número de Catálogo 21875,
Gibco) que se suplementó con 10% de FBS inactivado por calor
(Hyclone).
Para el ensayo, las PBMC se sembraron a 2,5E6
células/ml en 160 \mul en placas de 96 pocillos (Nunc). Se realiza
una dilución en serie de los compuestos de ensayo en primer lugar en
DMSO (Sigma), y después se diluyen 50 veces en medio M199 (Gibco)
que contiene 1% de FBS inactivado por calor. Los compuestos se
diluyen posteriormente 1/10 en las placas de ensayo para obtener una
concentración final de DMSO de 0,2%. Las células se preincuban con
los compuestos durante 1 h a 37ºC, 5% de CO_{2}. Después, las
células se estimulan con LPS (Escherichia coli serotipo
026:B6, número de Catálogo L2654, Sigma), y se añade en un velocidad
de 20 \mul hasta una concentración final de 1 \mug/ml, y las
células se cultivan posteriormente durante 24 h. Las placas se
centrifugan, y el sobrenadante se recoge y se almacena a -80ºC hasta
el análisis de las diluciones apropiadas en los ELISA.
Se desarrolló el siguiente protocolo de ELISA
quimioluminiscente de 384 pocillos para medir los niveles de
TNF\alpha en el sobrenadante: placas blancas de 384 pocillos
Lumitrac 600 (Greiner) se revisten con anticuerpo de captura
anti-TNF\alpha (40 \mul/pocillo) (número de
Catálogo 551220, BD Pharmingen) que se diluye hasta 1 \mug/ml en
1x PBS (Gibco). Tras la incubación durante toda la noche a 4ºC, las
placas se lavaron con 1x PBS (80 g de NaCl, 2 g de KCl (Sigma), 11,5
g de Na_{2}HPO_{4}.7H_{2}O y 2 g de KH_{2}PO_{4} en 10 l
de milliQ; pH 7,4) y se bloquearon con 100 \mul/pocillo de tampón
B (1 x PBS que contiene 1% de BSA (Sigma), 5% de sacarosa (Sigma) y
0,05% de NaN_{3} (Sigma)). Después de una incubación durante 4 h a
RT, el tampón de bloqueo se eliminó y las placas se lavaron una vez
con PBST (1x PBS con 0,05% de Tween-20 (Sigma)).
Después, se transfirieron 40 \mul de muestra a las placas de
ELISA, y las placas se incubaron a 4ºC. Al día siguiente, las placas
se lavaron 3 veces (dos veces con PBST y una vez con PBS), y se
añadieron 35 \mul/pocillo de anticuerpo
anti-TNF\alpha biotinilado (número de Catálogo
554511, BD Pharmingen) diluido en primer lugar hasta una
concentración de 250 ng/ml en tampón D (1x PBS con 1% de BSA).
Después de 2 h de incubación a RT, las placas se lavaron como se
describe anteriormente, y se añaden 35 \mul/pocillo de una
dilución 1/2000 de conjugado de estreptavidina-HRP
(número de Catálogo SNN2004, Biosource) en tampón D. Después de 45
minutos, las placas se lavan como se describe anteriormente y se
incuban durante 5 minutos con 50 \mul/pocillo de BM
Chemiluminescence ELISA Substrate POD (Roche). La lectura se realiza
en el luminómetro Luminoscan Ascent (Labsystems), con un tiempo de
integración de 100 milisegundos, proporcionando datos sin tratar
(RLU: unidades de luminiscencia relativas). Los siguientes controles
incluyen los experimentos, un control de señal máxima, en el que las
células se activan mediante LPS pero sólo se añade el vehículo de
DMSO al 0,2% (y de este modo no se añade compuesto). Este control
indica el nivel máximo de TNF\alpha que se puede lograr en el
ensayo. También se incluye en estos experimentos un control de señal
mínima. Aquí, las células no son activadas. Este control da los
niveles de TNF\alpha basales producidos por las PBMC. El
porcentaje de inhibición (PIN) de la liberación de TNF\alpha,
logrado por los compuestos, se calcula entonces basándose en los
datos de RLU devueltos por el ELISA, con la siguiente fórmula: 100 -
[((compuesto X del nivel de TNF\alpha a la concentración Y -
niveles de TNF\alpha mínimos)/(niveles de TNF\alpha máximos -
niveles de TNF\alpha mínimos)) x 100]. Cuando los compuestos se
ensayan a 8 concentraciones (dilución en serie de 1/3), los valores
de EC50 se pueden calcular mediante ajuste de curvas de las medias
de los datos de PIN logrados para un compuesto en cada concentración
de ensayo.
Para ensayar el efecto de los compuestos sobre
la liberación de IL1 e IL6 mediante cultivos de PBMC estimulados con
LPS, se pueden medir diluciones apropiadas del sobrenadante usando
el mismo protocolo de ELISA como se describe d. Se pueden usar
anticuerpos emparejados para ELISA de IL1 e IL6 (todos del R&D
Systems) según lo siguiente: anticuerpo de captura
anti-IL1 (número de Catálogo MAB601) usado a 0,5
\mug/ml, anticuerpo de detección anti-IL1
biotinilado (número de Catálogo BAF201) usado a 50 ng/ml; anticuerpo
de captura anti-Il6 (número de Catálogo MAB206)
usado a 1 \mug/ml; anticuerpo de detección
anti-IL6 biotinilado (número de Catálogo BAF206)
usado a 50 ng/ml.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Para los fines de la Tabla 5 a continuación, la
EC_{50} de PBMC de cada compuesto, que se puede determinar usando
el método de ensayo descrito aquí, se expresa según lo
siguiente:
- \alm{4}
- el compuesto mostró una EC_{50} de PBMC 1-100 nM
- \alm{3}
- el compuesto mostró una EC_{50} de PBMC 101-500 nM
- \alm{2}
- el compuesto mostró una EC_{50} de PBMC 501-1000 nM
- #
- el compuesto mostró una EC_{50} de PBMC >1000 nM
\vskip1.000000\baselineskip
La presente Solicitud describe un método de
tratamiento o prevención de enfermedades inflamatorias, que
comprende administrar a un sujeto que lo necesite un inhibidor
terapéuticamente eficaz de cantidad inhibidora de proteína cinasa 5
activada por proteína cinasas activadas por mitógenos de un
compuesto según la fórmula 1.
Otro aspecto de la presente Solicitud se refiere
a un método de tratamiento o profilaxis de una afección
caracterizada por una actividad anormal de las metaloproteinasas de
la matriz, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente
eficaz de un compuesto inhibidor de las metaloproteinasas de la
matriz según la Fórmula 1.
Un aspecto adicional de la presente Solicitud es
un método de tratamiento o profilaxis de una afección seleccionada
de enfermedades que implican la degradación de la matriz
extracelular, que comprende administrar una cantidad
terapéuticamente eficaz inhibidora de las metaloproteinasas de la
matriz de un compuesto según la Fórmula 1.
Todavía un aspecto adicional de la presente
Solicitud es un método o profilaxis de una afección seleccionada de
enfermedades que implican una expresión celular anormal de MMP1, que
comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz
inhibidora de las metaloproteinasas de la matriz de un compuesto
según la Fórmula 1.
Una realización especial de la Solicitud es un
método de tratamiento o prevención de artritis reumatoide, que
comprende administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad
terapéuticamente eficaz de un compuesto según la Fórmula 1.
Esta invención también se refiere al uso de los
presentes compuestos en la fabricación de un medicamento para el
tratamiento o profilaxis de una afección prevenida, mejorada o
eliminada por administración de un inhibidor de proteína cinasa 5
activada por proteína cinasas activadas por mitógenos, o una
afección caracterizada por actividad anormal de colagenasa, o una
afección seleccionada de enfermedades que implican inflamación, lo
más preferible para el tratamiento de artritis reumatoide.
La administración del compuesto de la presente
invención al sujeto paciente incluye tanto la autoadministración
como la administración por otra persona. El paciente puede necesitar
tratamiento para una enfermedad o afección médica existente, o puede
desear un tratamiento profiláctico para prevenir o reducir el riesgo
de enfermedades y afecciones médicas afectadas por una perturbación
en el metabolismo óseo. El compuesto de la presente invención se
puede suministrar al paciente sujeto de forma oral, transdérmica,
vía inhalación, inyección, nasalmente, rectalmente, o vía una
formulación de liberación sostenida.
Un régimen preferido del presente método
comprende la administración a un sujeto que sufre una afección
caracterizada por inflamación con una cantidad eficaz inhibidora de
las metaloproteinasas de la matriz de un compuesto de la presente
invención durante un período de tiempo suficiente para reducir los
niveles anormales de degradación de la matriz extracelular en el
paciente, y preferiblemente terminar los procesos que se
autoperpetúan responsables de dicha degradación. Una realización
especial del método comprende administrar una cantidad eficaz
inhibidora de las metaloproteinasas de la matriz de un compuesto de
la presente invención a un paciente sujeto que sufre de o es
susceptible al desarrollo de artritis reumatoide, durante un período
de tiempo suficiente para reducir o prevenir, respectivamente, la
degradación del colágeno y del hueso en las articulaciones de dicho
paciente, y preferiblemente terminar los procesos que se
autoperpetúan responsables de dicha degradación.
La toxicidad y la eficacia terapéutica de tales
compuestos se pueden determinar mediante procedimientos
farmacéuticos estándar en cultivos celulares o animales
experimentales, por ejemplo, para determinar la LD50 (la
dosis letal al 50% de la población) y la ED50 (la dosis
terapéuticamente eficaz en el 50% de la población). La relación de
dosis entre los efectos tóxico y terapéutico es el índice
terapéutico, y se puede expresar como la relación LD50/ED50. Se
prefieren compuestos que muestran índices terapéuticos elevados.
Aunque se pueden usar compuestos que presentan efectos secundarios
tóxicos, se debería tener cuidado en diseñar un sistema de
suministro que dirija tales compuestos al sitio del tejido afectado,
a fin de minimizar el daño potencial a las células no infectadas y,
de ese modo, reducir los efectos secundarios.
Los datos obtenidos de los ensayos con cultivos
celulares y estudios con animales se pueden usar para formular un
intervalo de dosificaciones para uso en seres humanos. La
dosificación de tales compuestos está preferiblemente dentro de un
intervalo de concentraciones circulantes que incluye la ED50 con
poca o ninguna toxicidad. La dosificación puede variar dentro de
este intervalo dependiendo de la forma de dosificación empleada y la
vía de administración utilizada. Para cualquier compuesto usado en
el método de la invención, la dosis terapéuticamente eficaz se puede
estimar inicialmente a partir de ensayos con cultivos celulares. Se
puede formular una dosis en modelos con animales para lograr un
intervalo de concentración plasmática circulante que incluya la IC50
(es decir, la concentración del compuesto de ensayo que logra una
inhibición semimáxima de los síntomas) como se determina en cultivo
celular. Tal información se puede usar para determinar de forma más
exacta las dosis útiles en seres humanos. Los niveles en plasma se
pueden medir, por ejemplo, mediante cromatografía de líquidos de
altas prestaciones.
Una cantidad terapéuticamente eficaz preferida
del compuesto de la presente invención a administrar a un paciente
sujeto es alrededor de 0,1 mg/kg a alrededor de 10 mg/kg,
administrada de una a tres veces al día. Por ejemplo, un régimen
eficaz del presente método puede administrar alrededor de 5 mg a
alrededor de 1000 mg de dicho compuesto de la presente invención
desde una a tres veces al día. Sin embargo, se entenderá que la
cantidad de dosis específica para cualquier paciente sujeto
particular dependerá de una variedad de factores, incluyendo la
edad, peso corporal, salud general, sexo, dieta, tiempo de
administración, vía de administración, tasa de excreción,
combinación farmacéutica, y la gravedad de la afección inflamatoria
particular. Una consideración de estos factores está dentro del
alcance del médico normalmente experto con el fin de determinar la
cantidad de dosificación terapéuticamente eficaz o profilácticamente
eficaz necesaria para prevenir, contrarrestar o detener el avance de
la afección.
Los compuestos de la invención se pueden
incorporar en composiciones farmacéuticas adecuadas para
administración. Tales composiciones comprenden típicamente al menos
un compuesto de la invención y al menos un vehículo
farmacéuticamente aceptable. Como se usa aquí, la expresión
"vehículo farmacéuticamente aceptable" incluye vehículos
sólidos tales como lactosa, estearato de magnesio, yeso, sacarosa,
talco, ácido esteárico, gelatina, agar, pectina, goma arábiga, o
similar; y líquidos tales como aceites vegetales, aceite de
cacahuete y agua estéril, o similar, cualesquiera y todos los
disolventes, medios de dispersión, revestimientos, agentes
antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y que retrasan la
absorción, y similares, compatibles con la administración
farmacéutica. Este listado de vehículos farmacéuticamente aceptables
no se debe de interpretar como limitante. El uso de tales medios y
agentes para sustancias farmacéuticamente activas es bien conocido
en la técnica. Excepto que en tanto en cuanto cualquier medio o
agente convencional sea incompatible con el compuesto activo, se
contempla su uso en las composiciones. También se pueden incorporar
en las composiciones compuestos activos suplementarios.
Una composición farmacéutica de la invención se
formula para ser compatible con su vía pretendida de administración.
Los ejemplos de vías de administración incluyen la administración
parenteral, por ejemplo intravenosa, intradérmica, subcutánea, oral
(por ejemplo, inhalación), transdérmica (tópica), transmucosal, y
rectal. Las disoluciones o suspensiones usadas para la aplicación
parenteral, intradérmica o subcutánea pueden incluir los siguientes
componentes: un diluyente estéril tal como agua para inyección,
disolución salina, aceites fijos, polietilenglicoles, glicerina,
propilenglicol u otros disolventes sintéticos; agentes
antibacterianos tales como alcohol bencílico o metilparabenos;
antioxidantes tales como ácido ascórbico o bisulfito sódico; agentes
quelantes tales como ácido etilendiaminotetraacético; tampones tales
como acetatos, citratos o fosfatos, y agentes para el ajuste de la
tonicidad, tales como cloruro de sodio o dextrosa. El pH se puede
ajustar con ácidos o bases, tales como ácido clorhídrico o hidróxido
sódico. La preparación parenteral se puede encerrar en ampollas,
jeringuillas desechables, o viales de múltiples dosis hechos de
vidrio o de plástico.
Las composiciones farmacéuticas adecuadas para
uso inyectable incluyen disoluciones acuosas estériles (cuando son
solubles en agua) o dispersiones y polvos estériles para la
preparación extemporánea de disoluciones o dispersiones inyectables
estériles. Para la administración intravenosa, los vehículos
adecuados incluyen disolución salina fisiológica, agua
bacteriostática, Cremophor ELTM (BASF, Parsippany, NJ) o disolución
salina tamponada con fosfato (PBS). En todos los casos, la
composición debe ser estéril y debe ser fluida en el grado en el que
exista una facilidad para aplicarla mediante una jeringa. Debe ser
estable en las condiciones de fabricación y almacenamiento, y se
debe de preservar frente a la acción contaminante de microorganismos
tales como bacterias y hongos. El vehículo puede ser un disolvente o
medio de dispersión que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol
(por ejemplo, glicerol, propilenglicol, y polietilenglicol líquido,
y similar), y sus mezclas adecuadas. La fluidez apropiada se puede
mantener, por ejemplo, mediante el uso de un revestimiento tal como
lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño requerido de
partículas en el caso de dispersión, y mediante el uso de
tensioactivos. La prevención de la acción de microorganismos se
puede lograr por diversos agentes antibacterianos y antifúngicos,
por ejemplo parabenos, clorobutanol, fenol, ácido ascórbico,
timerosal, y similar. En muchos casos, será preferible incluir
agentes isotónicos, por ejemplo azúcares, polialcoholes tales como
manitol, sorbitol, cloruro de sodio en la composición. La absorción
prolongada de las composiciones inyectables se puede provocar
incluyendo en la composición un agente que retrasa la absorción, por
ejemplo monoestearato de aluminio y gelatina.
Las disoluciones inyectables estériles se pueden
preparar incorporando el compuesto activo (por ejemplo, un compuesto
según una realización de la invención) en la cantidad requerida en
un disolvente apropiado con uno o una combinación de ingredientes
enumerados anteriormente, según se requiera, seguido de la
esterilización mediante filtración. Generalmente, las dispersiones
se preparan incorporando el compuesto activo en un vehículo estéril
que contiene un medio de dispersión básico y los otros ingredientes
requeridos de los enumerados anteriormente. En el caso de polvos
estériles para la preparación de disoluciones inyectables estériles,
los métodos preferidos de preparación son secado a vacío y
liofilización, que produce un polvo del ingrediente activo más
cualquier ingrediente deseado adicional de una disolución filtrada
previamente de forma estéril del mismo.
Las composiciones orales generalmente incluyen
un diluyente inerte o un vehículo comestible. Se pueden encerrar en
cápsulas de gelatina, o se pueden comprimir en comprimidos. Para los
fines de la administración terapéutica oral el compuesto activo se
puede incorporar con excipientes y se puede usar en forma de
comprimidos, trociscos, o cápsulas. Las composiciones orales también
se pueden preparar usando un vehículo fluido para uso como un
colutorio, en el que el compuesto en el vehículo fluido se aplica
oralmente y se agita y se expectora o se traga.
Los agentes aglutinantes farmacéuticamente
compatibles, y/o los materiales adyuvantes, se pueden incluir como
parte de la composición. Los comprimidos, pastillas, cápsulas,
trociscos y similares pueden contener cualquiera de los siguientes
ingredientes, o compuestos de naturaleza similar: un aglutinante tal
como celulosa microcristalina, goma de tragacanto o gelatina; un
excipiente tal como almidón o lactosa, un agente disgregante tal
como ácido algínico, Primogel, o almidón de maíz; un lubricante tal
como estearato de magnesio o Sterotes; un agente deslizante tal como
dióxido de silicio coloidal; un agente edulcorante tal como sacarosa
o sacarina; o un agente saborizante tal como menta piperita,
salicilato de metilo, o sabor a naranja.
Para la administración mediante inhalación, los
compuestos se suministran en forma de una pulverización de aerosol
desde un recipiente o dispensador a presión que contiene un
propelente adecuado, por ejemplo un gas tal como dióxido de carbono,
o un nebulizador.
La administración sistémica también se puede
realizar por medio transmucosal o transdérmico. Para la
administración transmucosal o transdérmica, en la formulación se
usan agentes penetrantes apropiados a la barrera a permear. Tales
agentes penetrantes son generalmente conocidos en la técnica, e
incluyen, por ejemplo, para administración transmucosal,
detergentes, sales biliares, y derivados de ácido fusídico. La
administración transmucosal se puede lograr mediante el uso de
pulverizadores nasales o supositorios. Para la administración
transdérmica, los compuestos activos se formulan en ungüentos,
pomadas, geles, o cremas como se conoce generalmente en la
técnica.
Los compuestos también se pueden preparar en
forma de supositorios (por ejemplo, con bases convencionales para
supositorios, tales como manteca de cacao u otros glicéridos), o
enemas de retención para el suministro rectal.
En una realización, los compuestos activos se
preparan con vehículos que protegerán al compuesto frente a la
eliminación rápida del organismo, tal como una formulación de
liberación controlada, incluyendo implantes y sistemas de suministro
microencapsulados. Se pueden usar polímeros biodegradables,
biocompatibles, tales como etileno-acetato de
vinilo, polianhídridos, poliácido glicólico, colágeno,
poliortoésteres, y poliácido láctico. Los métodos para la
preparación de tales formulaciones serán manifiestos para los
expertos en la técnica. Los materiales también se pueden obtener
comercialmente a partir de Alza Corporation y Nova Pharmaceuticals,
Inc. Como vehículos farmacéuticamente aceptables, también se pueden
usar suspensiones liposómicas (incluyendo liposomas dirigidos a
células infectadas, con anticuerpos monoclonales para antígenos
víricos). Estas se pueden preparar según métodos conocidos por los
expertos en la técnica.
Es especialmente ventajoso formular
composiciones orales o parenterales en forma de dosificación
unitaria por facilidad de administración y uniformidad de
dosificación. La forma de dosis unitaria como se usa aquí se refiere
a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones
unitarias para el sujeto a tratar, conteniendo cada unidad una
cantidad predeterminada de compuesto activo calculada para producir
el efecto terapéutico deseado en asociación con el vehículo
farmacéutico requerido. La especificación para las formas de
dosificación unitaria de la invención está dictada y depende
directamente de las características únicas del compuesto activo y
del efecto terapéutico particular a lograr, y las limitaciones
inherentes en la técnica de formulación de compuestos de tal
compuesto activo para el tratamiento de individuos.
Las composiciones farmacéuticas se pueden
incluir en un recipiente, envase, o dispensador, junto con
instrucciones para la administración.
Un compuesto según una realización de la
invención se puede proporcionar como una sal, preferiblemente como
una sal farmacéuticamente aceptable de compuestos de fórmula III.
Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables de estos
compuestos incluyen las derivadas de ácidos orgánicos tales como
ácido acético, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido
láctico, ácido oxálico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido
maleico, ácido benzoico, ácido salicílico, ácido fenilacético, ácido
mandélico, ácido metanosulfónico, ácido bencenosulfónico y ácido
p-toluenosulfónico, ácidos minerales tales como ácido
clorhídrico y sulfúrico, y similares, que dan metanosulfonato,
bencenosulfonato, p-toluenosulfonato, hidrocloruro y sulfato,
y similar, respectivamente, o las derivadas de bases tales como
bases orgánicas e inorgánicas. Los ejemplos de bases inorgánicas
adecuadas para la formación de sales de compuestos para esta
invención incluyen los hidróxidos, carbonatos, y bicarbonatos de
amonio, litio, sodio, calcio, potasio, aluminio, hierro, magnesio,
cinc, y similares. Las sales también se pueden formar con bases
orgánicas adecuadas. Tales bases adecuadas para la formación de
sales de adición de bases farmacéuticamente aceptables con
compuestos de la presente invención incluyen bases orgánicas que no
son tóxicas y son suficientemente fuertes para formar sales. Tales
bases orgánicas ya son bien conocidas en la técnica y pueden incluir
aminoácidos tales como arginina y lisina, mono-, di- o
trihidroxialquilaminas tales como mono-, di- y trietanolamina,
colina, mono-, di- y trialquilaminas, tales como metilamina,
dimetilamina, y trimetilamina, guanidina; N-metilglucosamina;
N-metilpiperazina; morfolina; etilendiamina;
N-bencilfenetilamina;
tris(hidroximetil)aminometano; y similares.
Las sales de compuestos según una realización de
la invención se pueden preparar de manera convencional usando
métodos bien conocidos en la técnica. Las sales de adición de ácidos
de dichos compuestos básicos se pueden preparar disolviendo los
compuestos en forma de bases libres según los aspectos primero o
segundo de la invención en disolución acuosa o alcoholicoacuosa u
otros disolventes adecuados que contienen el ácido requerido. Cuando
un compuesto de la invención contiene una función ácida, se puede
preparar una sal de base de dicho compuesto haciendo reaccionar
dicho compuesto con una base adecuada. La sal de ácido o de base se
puede separar directamente o se puede obtener concentrando la
disolución, por ejemplo mediante evaporación. Los compuestos de esta
invención también pueden existir en formas solvatadas o
hidratadas.
Se apreciará por los expertos en la técnica que
la descripción anterior es de naturaleza ejemplar y explicativa, y
está destinada a ilustrar la invención y sus realizaciones
preferidas. Mediante experimentación normal, el experto reconocerá
modificaciones y variaciones manifiestas que se pueden hacer sin
separarse del espíritu de la invención. De este modo, la invención
está destinada a ser definida no por la descripción anterior sino
por las siguientes reivindicaciones.
\vskip1.000000\baselineskip
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\vskip1.000000\baselineskip
A partir de la descripción anterior, los
expertos en la técnica idearán diversas modificaciones y cambios en
las composiciones y métodos de esta invención. Todas las citadas
modificaciones que proceden dentro del alcance de las
reivindicaciones anejas están destinadas a estar incluidas en
ellas.
Se debería entender que factores tales como la
capacidad de penetración celular diferencial de los diversos
compuestos pueden contribuir a discrepancias entre la actividad de
los compuestos en los ensayos bioquímicos y celulares in
vitro.
Los nombres químicos de los compuestos de la
invención dados en esta Solicitud se generan usando la herramienta
MDL's ISIS Draw Autonom Software, y no se verifican.
Preferiblemente, en el caso de una inconsistencia, prevalece la
estructura representada.
\global\parskip0.000000\baselineskip
<110> Galapagos N.V.
\hskip1cmAndrews, Martin J I
\hskip1cmEdwards, Paul
\hskip1cmChambers, Mark S
\hskip1cmSchmidt, Wolfgang
\hskip1cmClase, Juha A
\hskip1cmBar, Gregory
\hskip1cmHirst, Kim L
\hskip1cmAngus, MacLeod
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> COMPUESTOS DE TRIAZOLOPIRAZINA
ÚTILES PARA EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES DEGENERATIVAS E
INFLAMATORIAS
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130>
GAL-033-WO-PCT
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<150> US 60/803.552
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
2006-05-31
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<150> US 60/
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
2007-05-25
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<150> US 60/
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
2007-05-25
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<150> US 60/
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
2007-05-25
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<150> US 60/
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
2007-05-29
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn versión 3.4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia diana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia diana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia diana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia diana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia Diana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia diana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
Claims (37)
1. Un compuesto según la fórmula III:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
- R^{1} es H, o alquilo sustituido o no sustituido; y cada uno de R^{8} y R^{9} se selecciona independientemente de cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido; o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco de los mismos, y estereoisómeros, variantes isotópicas y tautómeros de los mismos.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el
que R^{8} se selecciona de ciclopentilo sustituido o no
sustituido, ciclohexilo, fenilo sustituido o no sustituido, piridilo
sustituido o no sustituido, pirimidina sustituida o no sustituida, y
pirazina sustituida o no sustituida, pirrol sustituido o no
sustituido, pirazol sustituido o no sustituido, e imidazol
sustituido o no sustituido.
3. Un compuesto según la reivindicación 1, en el
que R^{8} se selecciona de fenilo sustituido, piridilo sustituido,
y pirimidina sustituida; y la sustitución es
-L-R^{8d},
en la
que
- L se selecciona de un enlace, alquileno, heteroalquileno, -O-, -N(R^{8e})-, -CO-, -CO_{2}-, -SO-, -SO_{2}-, -CON(R^{8e})-, -SO_{2}N(R^{8e})-, -N(R^{8e})CO-, -N(R^{8e})SO_{2}-, -N(R^{8e})CON(R^{8e})-, -N(R^{8e})SO_{2}N(R^{8e})-; y
- R^{8d} se selecciona de alquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, amino sustituido o no sustituido, aralquilo sustituido o no sustituido, heteroarilalquilo sustituido o no sustituido, y aminoalquilo sustituido o no sustituido; y
- R^{8e} se selecciona de H, alquilo sustituido o no sustituido y cicloalquilo sustituido o no sustituido.
\vskip1.000000\baselineskip
4. Un compuesto según la reivindicación 1, en el
que R^{8} es
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en las que L, y R^{8d} son como
se describe en la reivindicación 3; el subíndice n se selecciona de
1-4; y cada R^{8a} se selecciona
independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido,
alcoxi, ciano, y
halo.
\vskip1.000000\baselineskip
5. Un compuesto según la reivindicación 4, en el
que L es un enlace, -O-, -CO-, -CON(R^{8e})-, o
-N(R^{8e})CO-; R^{8d} se selecciona de alquilo
sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido,
arilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no
sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, aralquilo
sustituido o no sustituido, heteroarilalquilo sustituido o no
sustituido, y aminoalquilo sustituido o no sustituido; y R^{8e} se
selecciona de H, alquilo sustituido o no sustituido.
6. Un compuesto según la reivindicación 4, en el
que L es un enlace, -CO-, -O(CH_{2})_{m1}-,
-CON(H)(CH_{2})_{m1}-, o -NHCO-; el subíndice m1
se selecciona de 1-4; y R^{8d} es
en la que el anillo P es
heterocicloalquilo sustituido o no
sustituido.
\vskip1.000000\baselineskip
7. Un compuesto según la reivindicación 1, en el
que el compuesto es según las fórmulas IVa, IVb, IVc, o IVd:
en las que L y el anillo P son como
en la reivindicación 6; el subíndice n se selecciona de
1-4; cada R^{8a} se selecciona independientemente
de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, alcoxi, ciano, y
halo; y R^{9} se selecciona independientemente de arilo sustituido
o no sustituido y heteroarilo; o una sal farmacéuticamente
aceptable, solvato de los mismos, y estereoisómeros, variantes
isotópicas y tautómeros de los
mismos.
\vskip1.000000\baselineskip
8. Un compuesto según la reivindicación 7, en el
que L es un enlace.
9. Un compuesto según la reivindicación 7, en el
que L es -NHCO- o -CONH-.
10. Un compuesto según la reivindicación 7, en
el que L es -OCH_{2}-CH_{2}- o
-NHCH_{2}CH_{2}-.
11. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 6-10, en el que el anillo P es
piperidina sustituida o no sustituida, morfolina o piperazina.
12. Un compuesto según la reivindicación 1, en
el que el compuesto es según las fórmulas Va, Vb, Vc, Vd, Ve, o
Vf:
en las que R^{9} es como en la
reivindicación 1 y R^{8b} es hidrógeno, alquilo sustituido o no
sustituido o cicloalquilo sustituido o no
sustituido.
\vskip1.000000\baselineskip
13. Un compuesto según la reivindicación 1, en
el que R^{9} se selecciona de arilo sustituido o no
sustituido.
14. Un compuesto según la reivindicación 1, en
el que R^{9} se selecciona de heteroarilo sustituido o no
sustituido.
15. Un compuesto según la reivindicación 1, en
el que R^{9} se selecciona de fenilo sustituido o no sustituido,
piridilo, indolilo, isoindolilo, pirrolilo, furanilo, tienilo,
pirazolilo, oxazolilo, y tiazolilo.
16. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1-15, en el que R^{9} es
y cada uno de A^{1}, A^{2} y
A^{3} se selecciona independientemente de S, O, N, NR^{9a}, y
CR^{9a}; cada uno de R^{9a} es independientemente H o alquilo
sustituido o no sustituido; y R^{9b} es CONH_{2}, CONHMe, o
CN.
\vskip1.000000\baselineskip
17. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1-15, en el que R^{9} es
18. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1-15, en el que R^{9} es
19. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1-15, en el que R^{9} es
en la que el subíndice m se
selecciona de 1-4 y cada R^{9d} es
independientemente H, alquilo sustituido o no sustituido o
halo.
\vskip1.000000\baselineskip
20. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1-15, en el que R^{9} es
en la que el subíndice m se
selecciona de 1-4 y cada R^{9d} es
independientemente H, alquilo sustituido o no sustituido o
halo.
\vskip1.000000\baselineskip
21. Un compuesto según la reivindicación 1, en
el que el compuesto es según las fórmulas VIIIa, VIIIb, VIIIc,
VIIId, VIIIe o VIIIf:
y R^{8b} es hidrógeno, alquilo
sustituido o no sustituido o cicloalquilo sustituido o no
sustituido.
\vskip1.000000\baselineskip
22. Un compuesto según la reivindicación 1, en
el que el compuesto es según las fórmulas IXa, IXb, IXc, IXd, IXe, o
IXf:
y R^{8b} es hidrógeno, alquilo
sustituido o no sustituido o cicloalquilo sustituido o no
sustituido.
\newpage
23. Un compuesto según la reivindicación 1, en
el que el compuesto es según las fórmulas Xa, Xb, Xc, Xd, Xe, o
Xf:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
y R^{8b} es hidrógeno, alquilo
sustituido o no sustituido o cicloalquilo sustituido o no
sustituido.
\vskip1.000000\baselineskip
24. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 12 ó 21-23, en el que R^{8b} es
H.
25. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 12 ó 21-23, en el que R^{8b} es
cicloalquilo.
26. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 12 ó 21-23, en el que R^{8b} es
ciclopropilo.
27. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 12 ó 21-23, en el que R^{8b} es
alquilo sustituido o no sustituido.
28. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 12 ó 21-23, en el que R^{8b} es
Me, Et, Pr, i-Pr, t-Bu,
i-Bu, CF_{3}, CH_{2}CF_{3},
CH_{2}CONH_{2}, o ciclopropilometilo.
\newpage
29. Un compuesto según la reivindicación 1, en
el que el compuesto es según las fórmulas XIIa, XIIb, XIIc o
XIId:
\vskip1.000000\baselineskip
30. Un compuesto según la reivindicación 1, en
el que el compuesto es según las fórmulas XVa, XVb, o XVc:
y L es un enlace, -CO-, o
-O-CH_{2}CH_{2}-; el anillo P
es
y R^{8b} es H, Me,
i-Pr, t-Bu, CH_{2}CONH_{2},
ciclopropilometilo, o
CH_{2}CF_{3}.
\vskip1.000000\baselineskip
31. Un compuesto según la reivindicación 30, en
el que L es un enlace y el anillo P es
\vskip1.000000\baselineskip
32. Un compuesto según la reivindicación 1, en
el que el compuesto se selecciona de
(4-Morfolin-4-il-fenil)-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;
[4-(4-Metil-piperazin-1-il)-fenil]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;
4-{8-[4-(4-Metil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-benzamida;
4-{8-[4-(4-Metil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-1H-piridin-2-ona;
4-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-benzamida;
Amida del ácido
4-{8-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico;
2-Fluoro-4-{8-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-benzamida;
3-Fluoro-4-{8-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-benzamida;
Amida del ácido
5-{8-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico;
3-Fluoro-4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-benzamida;
2-Fluoro-4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-benzamida;
[5-(5-Metil-1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina;
Amida del ácido
5-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofen-2-carboxílico;
2,6-Difluoro-4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-benzamida;
Amida del ácido
4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofen-2-carboxílico;
[4-(4-Metil-piperazin-1-il)-fenil]-[5-(5-metil-1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;
(3-Fluoro-4-morfolin-4-il-fenilo)-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;
(3-Cloro-4-morfolin-4-il-fenil)-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;
[4-(2-Morfolin-4-il-etoxi)-fenil]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;
Amida del ácido
4-{8-[4-(2-morfolin-4-il-etoxi)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico;
Amida del ácido
5-{8-[4-(2-morfolin-4-il-etoxi)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico;
(4-Morfolin-4-il-fenil)-[5-(2H-pirazol-3-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;
Amida del ácido
4-{8-[4-((2R,6S)-2,6-dimetil-morfolin-4-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico;
(4-Morfolin-4-il-3-trifluorometil-fenil)-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;
2,6-Difluoro-4-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-benzamida;
Amida del ácido
4-[8-(4-piperazin-1-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofen-2-carboxílico;
Amida del ácido
4-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico;
Amida del ácido
5-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-furan-3-carboxílico;
Amida del ácido
5-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-furan-3-carboxílico;
[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-[4-((2S,5R)-2,4,5-trimetil-piperazin-1-il)-fenil]-amina;
Amida del ácido
4-{8-[4-((2S,5R)-2,4,5-trimetil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-
tiofen-2-carboxílico;
tiofen-2-carboxílico;
5-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-2,3-dihidroisoindol-1-ona;
Amida del ácido
4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-furan-2-carboxílico;
6-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-3,4-dihidro-2H-isoquinolin-1-ona;
5-{8-[4-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;
{2-Morfolin-4-il-5-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-metanol;
[4-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-fenil]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;
6-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona;
(4-Piperazin-1-il-fenil)-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;
(6-Morfolin-4-il-piridin-3-il)-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;
[6-(4-Ciclopropilmetil-piperazin-1-il)-piridin-3-il]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;
[6-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-piridin-3-il]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;
[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-{6-[4-(2,2,2-trifluoro-etil)-piperazin-1-il]-piridin-3-il}-ami-
na;
na;
[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-{4-[4-(2,2,2-trifluoro-etil)-piperazin-1-il]-fenilo}-amina;
[4-(4-Ciclopropilmetil-piperazin-1-il)-fenil]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;
Amida del ácido
4-[8-(6-morfolin-4-il-piridin-3-ilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofen-2-carboxílico;
(5-Benzo[b]tiofen-3-il-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenilo)-amina;
(5-Benzo[b]tiofen-3-il-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilo]-amina;
(4-Morfolin-4-il-fenil)-(5-tiofen-3-il-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il)-amina;
[4-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-fenil]-(5-tiofen-3-il-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il)-amina;
[5-(5-Etil-1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina;
6-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-1,1-dioxo-1,2-dihidro-1\lambda^{6}-benzo[d]isotiazol-
3-ona;
3-ona;
Amida del ácido
4-{8-[6-(4-ciclopropilmetil-piperazin-1-il)-piridin-3-ilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico;
Amida del ácido
4-{8-[6-(4-isopropil-piperazin-1-il)-piridin-3-ilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico;
Amida del ácido
4-(8-{6-[4-(2,2,2-trifluoro-etil)-piperazin-1-il]-piridin-3-ilamino}-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il)-tiofen-2-carboxílico;
Amida del ácido
4-(8-{4-[4-(2,2,2-trifluoro-etil)-piperazin-1-il]-fenilamino}-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il)-tiofen-2-carboxílico;
Amida del ácido
4-{8-[4-(4-ciclopropilmetil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico;
[4-(4-Ciclopropil-piperazin-1-il)-fenil]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;
[6-(4-Ciclopropil-piperazin-1-il)-piridin-3-il]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;
Amida del ácido
4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-tiazol-2-carboxílico;
Amida del ácido
4-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiazol-2-carboxílico;
Amida del ácido
4-(8-{4-[1-(2,2,2-trifluoro-etil)-piperidin-4-il]-fenilamino}-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il)-tiofen-2-carboxílico;
[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-{4-[1-(2,2,2-trifluoro-etil)-piperidin-4-il]-fenil}-amina;
5-{8-[4-(2-Morfolin-4-il-etoxi)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il)-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;
(5-Benzotiazol-6-il-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina;
(2-Fluoro-4-morfolin-4-il-fenil)-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;
(2-Cloro-4-morfolin-4-il-fenil)-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;
1-{5-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofen-2-il}-etanona;
{4-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-2H-pirazol-3-il}-metanol;
6-{4-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol-[1,5-a]pirazin-5-il]-fenil)-4,5-dihidro-2H-piridazin-3-ona;
(5-Benzo[1,2,5]oxadiazol-5-il-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina;
Metilamida del ácido
4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-tiazol-2-carboxílico;
Metilamida del ácido
4-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiazol-2-carboxílico;
5-[8-(2-Fluoro-4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;
5-[8-(2-Cloro-4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;
5-{8-[2-Cloro-4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;
[5-(2-Amino-pirimidin-5-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina;
5-{8-[6-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-piridin-3-ilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidroisoindol-1-
ona;
ona;
Amida del ácido
3-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-benzo[b]tiofen-7-carboxílico;
Amida del ácido
3-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-benzo[b]tiofen-7-carboxílico;
{4-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-piridin-2-il}-metanol;
(4-{8-[4-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-piridin-2-il)-metanol;
[4-(1-Isopropil-piperidin-4-il)-fenil]-[5-(1H-piazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]piazin-8-il]-amina;
{5-[4-(2-amino-tiazol-4-il)-fenil]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il}-(4-morfolin-4-il-fenilo)-amina;
Amida del ácido
4-{8-[6-(4-isopropil-piperazin-1-il)-piridin-3-ilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-furan-2-carboxílico;
5-[8-(6-Morfolin-4-il-piridin-3-ilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;
Amida del ácido
4-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-furan-2-carboxílico;
Amida del ácido
4-{8-[4-(1-isopropil-piperidin-4-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico;
(4-{8-[6-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-piridin-3-ilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-piridin-2-il)-metanol;
[5-(2-Fluorometil-piridin-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenil]-amina;
5-{8-[4-(1-Isopropil-piperidin-4-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;
[5-(1H-Indazol-6-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina;
Amida del ácido
4-[8-(6-morfolin-4-il-piridin-3-ilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-furan-2-carboxílico;
Amida del ácido
4-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-5-metil-tiofen-2-carboxílico;
Amida del ácido
4-{8-[6-(4-isopropil-piperazin-1-il)-piridin-3-ilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-5-metil-tiofen-2-carboxílico;
4-{8-[4-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;
4-{8-[6-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-piridin-3-ilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidroisoindol-1-
ona;
ona;
5-[8-(2-Morfolin-4-il-pirimidin-5-ilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;
1-{4-[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-piperazin-2-ona;
5-{8-[2-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-pirimidin-5-ilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;
5-{8-[4-(4-terc-Butil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;
[4-(4-terc-Butil-piperazin-1-il)-fenil]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;
[5-(1H-Indazol-5-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina;
5-{8-[4-(2-Oxo-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;
[5-(1H-Indazol-6-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenil]-amina;
[6-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-piridin-3-il]-(5-{(E)-1-[4-metilen-2,4-dihidro-pirazol-(3E)-ilidenmetil]-propenil}-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il)-amina;
7-Fluoro-5-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidro-isoindol-
1-ona;
1-ona;
6-{8-[4-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;
(3-Metilaminometil-4-morfolin-4-il-fenilo)-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;
2-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-5,6-dihidro-furo[2,3-a]pirrol-4-ona;
5-{8-[4-(4-Isopropil-2-oxo-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidro-isoindol-1-
ona;
ona;
2-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-4,5-dihidro-tien[2,3-c]pirrol-6-ona;
5-{8-[4-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-3,3-dimetil-2,3-dihidro-isoin-
dol-1-ona;
dol-1-ona;
5-(8-Ciclohexilamino-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il)-2,3-dihidroisoindol-1-ona;
5-[8-(Tetrahidro-piran-4-ilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;
[4-(4-terc-Butil-piperazin-1-il)-fenilo]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;
2-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-4,5-dihidro-tien[2,3-c]pirrol-6-ona;
y
5-[8-(4-Fluoro-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-2,3-dihidro-isoindol-1-ona.
\vskip1.000000\baselineskip
33. Un compuesto según la reivindicación 1, en
el que el compuesto se selecciona de:
4-[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-N-piridin-3-ilmetil-benzamida;
4-[5-(2-Oxo-1,2-dihidro-piridin-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-N-piridin-3-ilmetil-benzamida;
2-Metoxi-N-(6-metil-piridin-3-ilmetil)-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;
\newpage
Amida del ácido
4-(8-{3-Metoxi-4-[(6-metil-piridin-3-ilmetil)-carbamoil]-fenilamino}-[1,2,4]triazol[1,5-a]pira-
zin-5-il)-tiofen-2-carboxílico;
zin-5-il)-tiofen-2-carboxílico;
N-Bencil-2-metoxi-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]tiazol-[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;
N-Bencil-3-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;
3-[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-N-piridin-2-ilmetil-benzamida;
N,N-Dietil-3-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;
{3-[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-pirrolidin-1-ilmetanona;
(4-Isopropil-piperazin-1-il)-{3-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-metanona;
3-[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;
N-Etil-3-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;
N-Ciclohexilmetil-3-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;
N-(4-Hidroxi-bencil)-3-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;
Amida del ácido
4-[8-(4-bencilcarbamoil-3-metoxi-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofen-2-carboxílico;
Amida del ácido
4-[8-(6-benzoilamino-piridin-3-ilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofen-2-carboxílico;
N-Bencil-N-metil-3-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;
N-{5-[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-piridin-2-il}-benzamida;
Metilamida del ácido
1-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzoil}-piperidine-4-carboxílico;
4-[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-N-(2-piridin-4-il-etil)-benzamida;
(4-Etil-piperazin-1-il)-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-metanona;
N-(1-Etil-pirrolidin-2-ilmetil)-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;
(2,5-Dihidro-pirrol-1-il)-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-metanona;
[4-(2-Etoxi-etil)-piperazin-1-il]-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil)-metanona;
N-Ciclopropilmetil-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]-triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;
N-Metil-N-(1-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol-[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzoil}-pirrolidin-3-il)-acetamida;
[4-(4-Fluoro-bencil)-piperazin-1-il]-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-meta-
nona;
nona;
(4-Fenil-piperazin-1-il)-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-metanona;
((S)-2-Metoximetil-pirrolidin-1-il)-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-meta-
nona;
nona;
N-((R)-1-Bencil-pirrolidin-3-il)-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;
{4-[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-(4-piridin-2-il-piperazin-1-il)-metanona;
N-(1-Metoximetil-propil)-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;
[4-(2-Metoxi-etil)-piperazin-1-il]-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-metanona;
N-[2-(4-Hidroxi-fenil)-etil]-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;
(4-sec-Butil-piperazin-1-il)-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-metanona;
N-[4-(4-Metil-piperazin-1-il)-fenil]-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;
Éster etílico del ácido
(bencil-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzoil}-amino)-acético;
N-Isopropil-2-(4-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzoil)-piperazin-1-il)-acetamida;
N-(2-Metoxi-etil)-N-metil-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;
N-Etil-N-(2-metoxi-etil)-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;
4-[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-N-(tetrahidro-furan-2-ilmetil)-benzamida;
(3,6-Dihidro-2H-piridin-1-il)-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-metanona;
N-(2-Metilsulfanil-etil)-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;
N-(2,2-Dimetil-[1,3]dioxolan-4-ilmetil)-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;
N-(2-Diisopropilamino-etil)-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;
N-((S)-1-Etil-pirrolidin-2-ilmetil)-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;
N-Isobutil-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;
[1,4']Bipiperidinil-1'-il-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-metanona;
N-(2-Hidroxi-etil)-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;
y
Amida del ácido
4-[8-(6-fenilacetilamino-piridin-3-ilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofen-2-carboxílico.
\vskip1.000000\baselineskip
34. Una composición farmacéutica que comprende
un vehículo farmacéuticamente aceptable y una cantidad
farmacéuticamente eficaz de un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 33.
35. El uso de un compuesto según una cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 33, en la fabricación de un medicamento
para el tratamiento o profilaxis de una afección
caracterizada por degeneración de la ECM.
36. El uso de un compuesto según una cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 33, en la fabricación de un medicamento
para el tratamiento o profilaxis de una afección seleccionada de
enfermedades que implican inflamación.
37. El uso de un compuesto según la
reivindicación 36, en el que dicha enfermedad es artritis
reumatoide.
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|---|---|
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ID=42668389
Family Applications (1)
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| ES07729660T Active ES2345066T3 (es) | 2006-05-31 | 2007-05-30 | Compuestos de triazolopirazina utiles para el tratamiento de enfermedades degenerativas e inflamatorias. |
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2007
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