ES2342104T3 - Estabilizacion de la troponina cardiaca. - Google Patents
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Abstract
Un patrón de ensayo para diagnóstico que comprende: una solución acuosa de proteína Troponina-I, y una matriz que comprende al menos un agente tensioactivo aniónico, siendo dicho agente tensioactivo aniónico polioxietilen(1) lauril sulfato sódico.
Description
Estabilización de la troponina cardiaca.
La invención se refiere a una composición
estabilizada de proteína troponina cardiaca útil como patrones de
control y calibrador en inmunoensayos. En particular, la proteína
troponina se estabiliza en una matriz acuosa que contiene al menos
un agente tensioactivo aniónico.
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El complejo de troponina desempeña un papel en
la regulación dependiente del calcio de la contracción y relajación
del músculo. Existen tres proteínas distintas, o isoformas de
troponina, que constituyen el complejo de troponina y que se pueden
encontrar tanto en los músculos cardiacos como esqueletales. Dichas
proteínas se designan Troponina-I,
Troponina-C y Troponina-T. Durante
el infarto de miocardio, mueren las células del músculo cardíaco y,
en consecuencia, liberan su contenido intracelular, incluyendo las
proteínas Troponina en la corriente sanguínea.
El infarto de miocardio es una causa principal
de fallecimiento en los países desarrollados. La organización
Mundial de la Salud (OMS) desarrolló las directrices para
diagnosticar el infarto de miocardio en 1979 (ver Circular,
59:607-609 (1979)). Las directrices de la OMS
recomiendan que un diagnóstico de miocardio dependa de la
manifestación de dos de tres criterios en concreto. Dichos criterios
son: (1) Dolor en el pecho o historia de un episodio cardíaco; (2)
Indicación de electrocardiograma del episodio cardíaco; y (3)
Niveles elevados de la enzima creatina quinasa.
Millones de personas ingresan en las salas de
urgencias todos los años aquejados de dolor en el pecho y no tienen
electrocardiogramas sin diagnóstico, lo que dificulta un diagnóstico
de episodio cardíaco. La medida de los niveles en circulación de
creatina quinasa tienen una especificidad cuestionable en relación
con la manifestación de infarto de miocardio ya que la elevación de
esta proteína en la sangre podría ser el resultado también de una
lesión muscular esqueletal. Se ha demostrado que la
Troponina-I y la Troponina-T tienen
mayor especificidad debido a la presencia de una forma cardíaco
específica de estas proteínas presente únicamente en el corazón. La
mayor especificidad de Troponina-I y
Troponina-T para el diagnóstico de infarto de
miocardio ha llevado al desarrollo de diversos inmunoensayos
dirigidos a determinar los niveles de estas proteínas en muestras
de sangre de un paciente del que se espera que presente niveles
elevados. La bibliografía que demuestra la superior utilidad de
troponina se ha traducido en una actualización de la definición de
infección miocardial a la fecha de 2000 (que se publicó
conjuntamente en el Journal of the American College of Cardiology,
36:959-696 (2000) y en el European Heart Journal,
21:1502-1513- (2000)). Esta definición actualizada
hace un mayor hincapié en los biomarcadores para el diagnóstico.
Como resultado, los criterios para un infarto de miocardio agudo,
en evolución o reciente son la típica elevación y gradual caída
(troponina) o una elevación y caída más rápidas
(CK-MB) de los marcadores bioquímicos de necrosis
miocardial con al menos uno de los siguientes: (a) síndromes
isquémicos; (b) desarrollo de ondas Q patológicas en el ECG , (c)
cambios en ECG indicativos de isquemia (elevación o depresión del
segmento ST); o (d) intervención de la arteria coronaria (v.g.,
angioplastia coronaria).
Los inmunoensayos cuantitativos requieren el uso
tanto de patrones de calibración para definir una curva de
calibración como patrones de control para analizar la integridad de
la curva de calibración. Una característica necesaria de los
patrones utilizados es la estabilidad, es decir, demostrar la
pérdida mínima de inmunoactividad a lo largo de un período de
tiempo definido (fecha de expiración) en las condiciones de
almacenamiento apropiadas. Las técnicas de estabilización para
Troponina-I han incluido congelación, liofilización
y disolución en agentes de reducción fuertes, como guanidina. Dichas
técnicas requieren por lo general un tiempo adicional, un equipo
especializado y procedimientos de manejo especiales necesarios para
descongelar o reconstituir. Adicionalmente, el descongelado o
reconstitución de la proteína troponina tiene como resultado
normalmente un material inestable con una vida en almacenamiento
limitada.
En US 5834210 se describe un método para la
preparación de complejos de Troponina cardiaca humana estables que
se obtienen a partir de Troponina-I, modificada
recombinante, Troponina-C recombinante y
Troponina-T recombinante, en presencia de una sal o
sales alcalinotérreas y, si se desea, un detergente como dodecil
sulfato sódico.
En WO 96/27661 se describen composiciones para
estabilizar proteínas y fragmentos de proteínas, como Troponina y
fragmentos de Troponina. Las composiciones comprenden una solución
acuosa de un tampón, una proteína estabilizante, un agente
quelante, un agente de reducción y una sal y pueden comprender
dodecil sulfato como detergente.
Debido a la inestabilidad inherente de la
proteína troponina, existe la necesidad de contar con un material
que sea resistente a las variaciones de la temperatura a las que se
somete potencialmente durante el transporte y el almacenamiento.
Existe además la necesidad de contar con un método para preparar
dicha troponina estabilizada. La invención proporciona una proteína
troponina estabilizada y un método para preparar la troponina
estabilizada.
En uno de los modos de realización, la invención
proporciona un patrón de ensayo de diagnóstico que comprende una
solución acuosa de proteína Troponina-1 y una matriz
que comprende al menos un agente tensioactivo aniónico, siendo el
agente tensioactivo aniónico en el patrón de ensayo de diagnóstico
polioxietilen(1) lauril sulfato sódico.
En otro modo de realización más, el patrón para
ensayo de diagnóstico es estable a temperatura ambiente durante al
menos seis (6) meses.
En otro modo de realización más, la matriz en el
patrón para ensayo de diagnóstico comprende además gelatina
porcina.
En otro modo de realización más, la matriz en el
patrón para ensayo de diagnóstico comprende además un compuesto
seleccionado del grupo que consiste en cloruro sódico y fosfato
sódico.
En otro modo de realización, la matriz del
patrón para ensayo de diagnóstico comprende además un tampón de pH
que se añade para mantener el pH dentro del intervalo de
aproximadamente 6,8 a aproximadamente 7,2.
En otro modo de realización más, la matriz
contiene polioxietilen(1) lauril sulfato sódico en una
concentración de aproximadamente 0,1% a aproximadamente 0,25%.
En otro modo de realización, la invención
proporciona un método para estabilizar Troponina en una solución
acuosa, comprendiendo dicho método las etapas de:
(a) preparar una solución acuosa de al menos un
agente tensioactivo aniónico, siendo el agente tensioactivo
aniónico polioxietilen(1) lauril sulfato sódico;
(b) añadir proteína Troponina-I
a la solución acuosa; y
(c) almacenar la solución a temperatura
ambiente.
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En otro modo de realización más, la invención se
refiere a un patrón para ensayo de diagnóstico que comprende una
solución acuosa de un complejo de una proteína
Troponina-I y una proteína
Troponina-C y una matriz que comprende al menos un
agente tensioactivo aniónico, siendo el agente tensioactivo aniónico
del patrón para ensayo de diagnóstico polioxietilen(1)
lauril sulfato sódico.
En otro modo de realización, dicho patrón para
ensayo de diagnóstico es estable a temperatura ambiente durante al
menos seis (6) meses.
En otro modo de realización más, la matriz del
patrón para ensayo de diagnóstico comprende además gelatina
porcina.
En otro modo de realización más, la matriz del
patrón para ensayo de diagnóstico comprende además un compuesto
seleccionado del grupo que consiste en cloruro sódico y fosfato
sódico.
En otro modo de realización, la matriz del
patrón para ensayo de diagnóstico comprende además un tampón de pH
que se añade para mantener el pH dentro del intervalo de
aproximadamente 6,8 a aproximadamente 7,2.
En otro modo de realización más de este patrón
para ensayo de diagnóstico, la matriz contiene
polioxietilen(1) lauril sulfato sódico en una concentración
de aproximadamente 0,1% a aproximadamente 0,25%.
En otro modo de realización, la invención
proporciona un método para estabilizar Troponina en una solución
acuosa, comprendiendo dicho método las etapas de:
(a) preparar una solución acuosa de al menos un
agente tensioactivo aniónico, siendo dicho agente tensioactivo
aniónico polioxietilen(1) lauril sulfato sódico;
(b) añadir proteína Troponina-I
y proteína Troponina-C, ya sea individualmente o en
combinación como un único complejo a la solución acuosa, y
(c) almacenar la solución a temperatura
ambiente.
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La figura 1 es un gráfico en el que se comparan
los niveles de actividad de Troponina-I en las
formulaciones con y sin polioxietilen (1) lauril sulfato
sódico.
La figura 2 es un gráfico en el que se presenta
la variabilidad lote a lote de polioxietilen (1) lauril sulfato
sódico como STANDAPOL® ES-1 sobre la estabilidad de
Troponina-I a lo largo del tiempo a una temperatura
comprendida entre 2 y 3ºC.
La figura 3 es un gráfico en el que se presenta
la variabilidad lote a lote de polioxietilen (1) lauril sulfato
sódico como STANDAPOL® ES-1 sobre la estabilidad de
Troponina-I a lo largo del tiempo a una temperatura
de 31ºC.
La figura 4 es un gráfico en el que se presenta
la variabilidad lote a lote de polioxietilen (1) lauril sulfato
sódico como STANDAPOL® ES-1 sobre la estabilidad de
Troponina-I a lo largo del tiempo a una temperatura
de 45ºC.
La figura 5 es un gráfico en el que se
representa el % de actividad de Troponina-I que
queda para controles Bajo, Medio y Alto calculados a partir de una
curva de calibración generada a través del uso de patrones de
calibrador que fueron almacenados congelados y recién
descongelados.
La figura 6 es un gráfico en el que se
representa el % de actividad de Troponina-I que
queda para controles Bajo, Medio y Alto calculados a partir de una
curva de calibración generada a través del uso de patrones de
calibrador que fueron almacenados a 2-8ºC.
La figura 7 es un gráfico en el que se
representa el % de actividad de Troponina-I que
queda para controles Bajo, Medio y Alto calculados a partir de una
curva de calibración generada a través del uso de patrones de
calibrador que fueron almacenados a temperatura ambiente (31ºC).
La figura 8 es un gráfico en el que se
representa el % de actividad de Troponina-I que
queda para controles Bajo, Medio y Alto que fueron almacenados
congelados. Se calculó la concentración de los controles a partir
de la curva patrón generada utilizando patrones calibradores que
fueron almacenados congelados y utilizados inmediatamente después
del descongelado.
La figura 9 es un gráfico en el que se
representa el % de actividad de Troponina-I que
queda para Controles Bajo, Medio y Alto que fueron almacenados a
2-8ºC. Se calculó la concentración de los controles
a partir de la curva patrón generada utilizando los patrones de
calibrador que fueron congelados y utilizados inmediatamente
después de descongelar.
La figura 10 es un gráfico en el que se
representa el % de la actividad de Troponina-I que
quedaba para Controles Bajo, Medio y Alto que fueron almacenados en
el peor de los casos a temperatura ambiente (31ºC). Se calculó la
concentración de los controles a partir de una curva patrón generada
utilizando los patrones de calibrador que fueron congelados y
utilizados inmediatamente después de descongelar.
La figura 11 (A-C) son gráficos
en los que se representa la concentración de
Troponina-I para el control Medio almacenado
continuamente, a 2-8ºC, y en el peor de los casos a
temperatura ambiente (31ºC). Se calculó la concentración de los
controles a partir de la curva patrón generada utilizando los
patrones de calibrador que fueron congelados y utilizados
inmediatamente después de descongelar.
La presente invención se refiere a proteína
Troponina-I estabilizada en una matriz que comprende
al menos un agente tensioactivo aniónico que es útil como patrón de
calibración y control en inmunoensayos destinados a determinar los
niveles de proteína troponina en muestras de sangre de pacientes de
los que se sospecha que tienen niveles elevados de troponina. La
presente invención se refiere también a métodos para preparar una
proteína troponina estabilizada en una matriz que comprende al menos
un agente tensioactivo aniónico.
El al menos un agente tensioactivo aniónico,
utilizado en la matriz y los métodos de la presente invención, es
polioxietilen(1) lauril sulfato sódico. Las proteínas
Troponina, en particular Troponina-I cardíaca
(cTnl), son moléculas inestables que pierden rápidamente la
inmunoactividad en entornos acuosos. La estabilidad de la
inmunoactividad es una característica esencial para un analito que
ha de utilizarse para preparar calibradores o controles para un
ensayo de diagnóstico. Los autores de la presente invención han
observado que polioxietilen(1) lauril sulfato sódico puede
impartir estabilidad a las moléculas cTnl. Más específicamente, los
autores de la invención han descubierto que la adición de
polioxietilen(1) lauril sulfato sódico a cTnl imparte
estabilidad térmica y solidez a la formación de soluciones normales
acuosas utilizadas en los calibradores y los controles de ensayo
para análisis. La solidez se refiere a la fuerza de las propiedades
de la troponina. La solidez también puede referirse al modo en el
que ha sido construida la troponina.
Polioxietilen (1) lauril sulfato sódico
proporciona estabilidad a Troponina-I dando lugar a
que sea sólida a temperaturas elevadas, amplios intervalos de
concentraciones iónicas y pH. Los agentes tensioactivos aniónicos,
como polioxietilen (1) lauril sulfato sódico, están disponibles en
el comercio. Por ejemplo, polioxietilen(1) lauril sulfato
sódico está disponible como STANDAPOL® ES-1 de
Cognis Corporation, Hoboken, NJ.
Polioxietilen (1) lauril sulfato sódico se puede
utilizar como un componente diluyente para soluciones que contienen
troponina y no requieren ningún procesado adicional. La matriz que
contiene el al menos un agente tensioactivo aniónico y proteínas
troponina no suponen ningún requisito de manejo especial para el
usuario y el usuario puede guardar la matriz a temperaturas
comprendidas entre 2 y 8ºC o a temperatura ambiente, hasta 31ºC
durante períodos de al menos (6) seis meses, un (1) año o más.
Se cree que polioxietilen (1) lauril sulfato
sódico es fácilmente soluble en condiciones acuosas y puede
añadirse y mezclarse hasta disolverse. Los intervalos de
concentración del al menos un agente tensioactivo aniónico en la
matriz están comprendidos entre 0,1% y 0,25%, a un pH en el
intervalo comprendido entre 6,8 y 7,2, preferiblemente 7,0.
Polioxietilen(1) lauril sulfato sódico
estabiliza la inmunoactividad de cTnl y los complejos de
Troponina-I/Tropo-
nina-C recombinantes que se forman como una única molécula de proteína. El complejo recombinante puede utilizarse en la formulación de calibradores y controles para los ensayos que se llevan a cabo por ejemplo con ensayos de Troponina-I AxSYM, ADV y ARCHITECT. La presente invención contempla asimismo que la matriz que contiene polioxietilen (1) lauril sulfato sódico también puede utilizarse para estabilizar la inmunoactividad de complejos de Troponina-I/Troponina-C recombinantes o nativos que se forman al añadir Troponina-I y Troponina-C en combinación para formar un complejo.
nina-C recombinantes que se forman como una única molécula de proteína. El complejo recombinante puede utilizarse en la formulación de calibradores y controles para los ensayos que se llevan a cabo por ejemplo con ensayos de Troponina-I AxSYM, ADV y ARCHITECT. La presente invención contempla asimismo que la matriz que contiene polioxietilen (1) lauril sulfato sódico también puede utilizarse para estabilizar la inmunoactividad de complejos de Troponina-I/Troponina-C recombinantes o nativos que se forman al añadir Troponina-I y Troponina-C en combinación para formar un complejo.
Los ejemplos que se exponen a continuación
sirven para ilustrar la invención pero, naturalmente, no deberán
interpretarse en ningún modo como limitativos de su alcance. Todas
las referencias, incluyendo las publicaciones, solicitudes de
patente y patentes, citadas en el presente documento se incorporan
en él como referencia igual que si cada una de las referencias se
indicaran individualmente y específicamente como incorporadas como
referencia y se expusieran en su totalidad aquí.
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Se diluyó Troponina-I (código
67911, Lote 63821P101, Abbott Laboratories, Abbott Park, IL) en
matrices de gelatina porcina al 0,1% (código 35745, lote 74281P1,
Abbott Laboratories, Abbott Park, IL) a pH 4,0 y gelatina porcina
al 0,1% (Código 35745, lote 74281P100) que contenía STANDAPOL®
ES-1 (Lote 1 2L019 de Cognis Corporation, Hoboken,
NJ) a pH 6,8 a una concentración final comprendida entre 40 y 50
ng/ml (Unidades AxSYM son ng/ml). Se añadió la gelatina porcina
como fuente de proteína con el fin de reducir al mínimo la pérdida
de troponina durante la fabricación.
Se almacenó cada una de las formulaciones tanto
a 2-8ºC como a 37ºC del siguiente modo:
- Muestra A - Troponina-I en gelatina porcina a 2-8ºC
- Muestra B - Tropoina-I en gelatina porcina a 37ºC
- Muestra C - Troponina-I en gelatina porcina a 2-8ºC con STANDAPOL® ES-1 al 0,1%
- Muestra D - Troponina-I en gelatina porcina a 37ºC con STANDAPOL® ES-1 al 0,1%
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Se midió la concentración de
Troponina-I en cada una de las muestras utilizando
una curva normal generada el día 0 utilizando calibración normal de
Troponina-I AxSYM (Nº 3C29-01,
Abbott Laboratories, Abbott Park, IL) en un sistema de instrumento
AxSYM (Química Clínica, 45, Nº 12, 1999). A lo largo de los
siguientes diez días, se midió la concentración de
Troponina-I y se comparó con la concentración
observada el día 0. Se calculó el porcentaje de actividad que
quedaba cada día dividiendo la concentración medida para cada
muestra en los diferentes puntos en el tiempo según la
concentración medida el día 0. En la tabla 1 se indican los
resultados que están representados en la figura 1.
\newpage
La adición de STANDAPOL® ES-1 al
0,1% a la matriz que contiene gelatina porcina en un 0,1% y el
ajuste del pH de 4 a 6,8 tiene un efecto significativo en la
estabilidad térmica de Troponina-I tal como se
observa tras el almacenamiento de las muestras a 37ºC durante diez
días. Se observaron estabilidades similares para las muestras
almacenadas a 2-8ºC con y sin STANDAPOL®
ES-1.
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Se utilizaron tres lotes del vendedor STANDAPOL®
ES-1 para la preparación de matrices de analito.
Todas las matrices se basaron en una formulación: gelatina porcina
al 0,025% (Código 35745, lote 74281P100, Abbott Laboratories,
Abbott Park, IL), 0,175% del STANDAPOL® ES-1
seleccionado, NaPO_{4} 2,5 mM (un tampón para mantener el pH de
la solución) y 0,1% de ProClin 300 (ingrediente activo primario -
metil cloroisotiazolona) a pH 7,0. ProClin 300 es un agente
antimicrobiano utilizado para impedir el crecimiento bacteriano.
Los tres lotes del vendedor de SATANDAPOL®
ES-1 fueron
- Lote 1- código 88965, lote 39267X102 (Abbott Laboratories)
- Lote 1- código 88965, lote 74497P100 (Abbott Laboratories)
- Lote 1- código 88965, lote 74498P101 (Abbott Laboratories)
\vskip1.000000\baselineskip
Se compararon las tres matrices (fabricadas en
Abbott Laboratories Instalaciones R&D) con una preparación
fabricada en Bulk Solutions (Departamento 864, Abbott Laboratories).
Se añadió a esta preparación el lote 1 a una concentración de
0,175%. Se utilizó cada una de las matrices para diluir
Troponina-I cardiaca a una concentración
comprendida entre 15 ng/ml-20 ng/ml. Se almacenaron
las muestras en tres condiciones de temperatura diferentes:
2-8ºC, temperatura ambiente y 45ºC. Se midió la
concentración de Troponina-I de cada patrón (a
través del ensayo de troponina-I AxSYM) los días 0,
1, 2 y 7. Se determinó el porcentaje de la actividad de
Troponina-I que quedaba. En las tablas
2-7 se indican los resultados, que se representan en
las figuras 2-4.
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Después de 7 días en almacenamiento a
2-8ºC, el porcentaje de actividad de
Troponina-I que quedaba varió según el lote de
STANDAPOL® ES-1 utilizado entre 96% y 105%.
Después de 7 días en almacenamiento a
temperatura ambiente, el porcentaje de actividad de
Troponina-I que quedaba varió según el lote de
STANDAPOL® ES-1 utilizado entre 99% y 103%.
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Después de 7 días de almacenamiento a 45ºC, el
porcentaje de actividad de Troponina-I que quedaba
varió según el lote de STANDAPOL® ES-1 utilizado
entre 93% y 101%.
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Los calibradores son formulaciones patrón que
contienen concentraciones conocidas de Troponina-I y
que se utilizan para definir la curva de calibración utilizada en
el ensayo. Los controles son formulaciones patrón que contienen
también concentraciones conocidas de Troponina-I y
que se utilizaron para comprobar la integridad de la curva de
calibración a lo largo del intervalo dinámico del ensayo.
Se prepararon calibradores patrón utilizando la
formulación matriz que contenía STANDAPOL® ES-1:
- 0,025% de gelatina porcina (código 35745, lote 74281P103 (Sigma-Aldrich, Milwaukee, WI))
- 0,175% de STANDAPOL® ES-1 (código 88965, lote 39267X102 (Cognis Corporation, Hoboken, N.J.))
- 2,5 mM NaPO_{4}
- 0,1% ProClin 300 (Suppleco) a pH 7,0 y
- Troponina-I (Código Abbott 67911, lote 78480P200, comprado a Scripps Laboratories, CA.) en las siguientes concentraciones de Troponina-I: 0, 2,5, 5,0, 15, 30 y 50 ng/ml, designadas A-F, respectivamente.
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De manera similar, se prepararon los tres
patrones de control en las siguientes concentraciones de
Troponina-I:
- Control Bajo: 3,0 ng/ml
- Control Medio: 10 ng/ml
- Control Alto: 35 ng/ml
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Se almacenó en congelación un juego completo de
calibradores y controles patrón a 2-8ºC y a 31ºC. Se
seleccionó la temperatura 31ºC como el peor caso de condiciones de
temperatura ambiente. Se utilizaron controles recién descongelados
para evaluar la estabilidad de los calibradores almacenados en
varias condiciones de temperatura los días 0, 1, 3, 7 y 14. En las
tablas 8-10 se muestran los resultados que están
representados en las figuras 5-7. En
contraposición, se utilizaron los calibradores recién descongelados
para evaluar la estabilidad de los controles que se habían
almacenado en las mismas condiciones de temperatura los días 0, 1,
3, 7 y 14. En las tablas 11-13 se indican los
resultados que quedan representados en las figuras
8-10. Adicionalmente, la estabilidad del control
Medio en las distintas condiciones de almacenamiento fue seguida de
184 días, tal como se muestra en la tabla 14 y la figura 11.
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Se valoró la estabilidad del calibrador
almacenado en distintas condiciones de temperatura a lo largo de 14
días utilizando controles recién descongelados. La actividad de
Troponina-I que quedaba al cabo de 14 días osciló
entre 97ºC y 106%. Los calibradores almacenados a
2-8ºC y 31ºC demostraron una actividad de
Troponina-I similar que quedaba comprendida entre
95 y 102%, y entre 97% y 102% respectivamente al cabo de 14
días.
La estabilidad del control almacenado en
condiciones de congelación, 2-8ºC y 31ºC, presentó
una retención de la actividad comparable. Los controles congelados
retuvieron entre 97 y 106% de la actividad al cabo de 14 días. Los
controles almacenados a 2-8ºC y 31ºC produjeron
actividades de Troponina-I comprendidas entre 101 y
109% al cabo de 14 días en comparación con la actividad medida el
día 0. El control medio almacenado en condiciones de congelación,
2-8ºC y 31ºC retuvo un 97, 102 y 93% de la
actividad, respectivamente al cabo de 184 días.
Se observó que polioxietilen (1) lauril sulfato
sódico no causaba ningún efecto remanente de una muestra a otra en
el sistema de instrumento AxSYM.
El uso de los términos "un" y "uno" y
"el" y determinantes similares en el contexto de la descripción
de la invención (sobre todo en el contexto de las reivindicaciones
adjuntas'') debe interpretarse como el de determinantes que cubren
tanto el singular como el plural, a no ser que se indique de otra
forma en el presente documento o se contradiga claramente por el
contexto. La cita de los intervalos de valores en el presente
documento se indica simplemente como método de abreviatura para
referirse individualmente a cada uno de los valores por separado
que entran dentro de dicho intervalo, a no ser que se indique de
otro modo en el presente documento, y cada uno de los valores por
separado se incorporan en la presente memoria descriptiva como si
se citara expresamente aquí. Todos los métodos descritos en el
presente documento pueden realizarse en cualquier modo adecuado a
no ser que se indique aquí de otra forma o se contradiga claramente
por el contexto. El uso de cualquiera y de todos los ejemplos, o
expresiones que indican un ejemplo (v.g., "como por ejemplo")
que aparecen en el presente documento, tienen como único fin
ilustrar mejor la invención y no implican ninguna limitación en el
alcance de la invención a no ser que se reivindique de otra forma.
Ninguna de las expresiones de la memoria descriptiva deberá
interpretarse como indicativa de un elemento no reivindicado como
esencial para la práctica de la presente invención.
Si bien se han identificado de forma expresa en
el presente documento algunas de las ventajas potenciales y
objetos, debe entenderse que es posible que algunos de los modos de
realización de la invención no proporcionen todas o algunas de las
ventajas y objetos identificados expresamente.
Los modos de realización preferibles de la
presente invención quedan descritos en el presente documento,
incluyendo el mejor modo conocido por los autores de la invención
para llevar a cabo la presente invención. Naturalmente, para las
personas especializadas en la técnica serán evidentes variaciones de
estos modos de realización preferibles tras la lectura de anterior
descripción. Los autores de la invención esperan que los técnicos
especializados empleen dichas variaciones según lo apropiado y los
autores de la invención pretenden que la invención se ponga en
práctica de otras formas distintas a las descritas específicamente
aquí. Por consiguiente, la presente invención incluye todas las
modificaciones y equivalentes de la materia en cuestión citada en
las reivindicaciones adjuntas según lo permitido por la ley
aplicable. Asimismo, queda abarcada en la presente invención
cualquier combinación de los elementos descritos en todas las
variaciones posibles a no ser que se indique de otra forma o lo
contradiga claramente el contexto.
Claims (9)
1. Un patrón de ensayo para diagnóstico que
comprende:
una solución acuosa de proteína
Troponina-I, y
una matriz que comprende al menos un agente
tensioactivo aniónico, siendo dicho agente tensioactivo aniónico
polioxietilen(1) lauril sulfato sódico.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Un patrón de ensayo para diagnóstico con
arreglo a la reivindicación 1 que comprende:
una solución acuosa que contiene un complejo de
proteína Troponina-I y Troponina-C;
y
una matriz que comprende al menos un agente
tensioactivo aniónico, siendo dicho agente tensioactivo aniónico
polioxietilen (1) lauril sulfato sódico.
\vskip1.000000\baselineskip
3. Un patrón de ensayo para diagnóstico según
cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2 siendo dicho patrón
estable a temperatura ambiente durante al menos seis meses.
4. El patrón de ensayo para diagnóstico según
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, comprendiendo dicha
matriz además gelatina porcina.
5. El patrón de ensayo para diagnóstico según
cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2 comprendiendo además la
matriz un compuesto seleccionado del grupo que consiste en cloruro
sódico y fosfato sódico.
6. El patrón de ensayo para diagnóstico según
cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, comprendiendo dicha
matriz además un tampón de pH que se añade para retener el pH dentro
del intervalo de 6,8 a 7,2.
7. El patrón de ensayo para diagnóstico según
cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, encontrándose el
polioxietilen (1) lauril sulfato sódico en una concentración
comprendida entre 0,1 y 0,25%.
8. Un método para estabilizar Troponina en una
solución acusa, comprendiendo dicho método las etapas de:
Preparar una solución acuosa de al menos un
agente tensioactivo aniónico, siendo dicho agente tensioactivo
aniónico polioxietilen (1) lauril sulfato sódico;
Añadir proteína Troponina-I;
y
Almacenar la solución a temperatura
ambiente.
\vskip1.000000\baselineskip
9. Un método para estabilizar Troponina en una
solución acuosa según la reivindicación 8, comprendiendo dicho
método las etapas de:
Preparar una solución acuosa de al menos un
agente tensioactivo aniónico, siendo dicho agente tensioactivo
aniónico polioxietilen (1) lauril sulfato sódico;
Añadir una proteína Troponina-I
y proteína Troponina-C, ya sea por separado o en
combinación como un solo complejo, y
Almacenar la solución a temperatura
ambiente.
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