ES2339096B2 - Procedimiento de modificacion quimica de superficies de pentoxido de tantalo. - Google Patents

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Abstract

Procedimiento de modificación química de superficies de pentóxido de tántalo.
La presente invención se refiere a un nuevo procedimiento para la modificación de al menos una superficie de pentóxido de tántalo, caracterizado porque comprende, al menos, las siguientes etapas:
a) la preparación de una disolución de al menos un organosilano que comprende en su estructura al menos un grupo seleccionado entre un grupo tiol, un grupo amino primario o secundario y un grupo isocianato o isotiocianato;
b) la introducción en dicha disolución de la superficie de pentóxido de tántalo hasta obtenerse la superficie de pentóxido de tántalo modificada.
Asimismo, será objeto de esta invención la aplicación de dichas superficies de pentóxido de tántalo modificadas, preferentemente, en dispositivos ópticos de detección basados en guías de onda y anclaje covalente de biomoléculas.

Description

Procedimiento de modificación química de superficies de pentóxido de tántalo.
Campo técnico
La presente invención se refiere a un procedimiento de modificación química de superficies a base de pentóxido de tántalo (Ta_{2}O_{5}). La modificación es aplicable a cualquier tipo de superficie de óxido de tántalo como, por ejemplo, soportes sólidos para inmovilizar sustancias, tales como ácidos nucleicos o proteínas, con aplicación en el desarrollo de técnicas de detección basadas en guías de onda ópticas.
Antecedentes de la invención
La detección de ADN y ARN, así como de interacciones antígeno-anticuerpo con elevada sensibilidad es cada vez más interesante para el desarrollo de dispositivos de diagnóstico precoz como por ejemplo, en genómica, proteómica, detección de enfermedades, etc.
La tecnología de micromatrices (del inglés, microarrays), basada en la interacción receptor-analito, está reemplazando a los ensayos tradicionales que utilizan geles, filtros y columnas, por chips de diferentes materiales capaces de almacenar decenas de miles de sondas (secuencias de ácidos nucleicos, proteínas, etc.), que proporcionan información sobre los niveles de expresión génica, síntesis de proteínas, polimorfismos de un solo nucleótido (Single Nucleotide Polymorphisms o SNPs), fármacos, etc.
Las superficies empleadas para microarrays deben ser, preferentemente, planas y uniformes, de modo que permitan el anclaje de un elevado número, del orden de hasta centenares o miles, de sustancias dispuestas espacialmente. La detección y cuantificación de resultados se efectúa mediante fluorescencia o colorimetría y, en menor medida, por espectroscopia de masas, utilizando para ello sustancias funcionalizadas con un marcador adecuado. Los marcadores más frecuentes son fluoróforos con longitudes de onda de excitación en el UV/visible y emisiones entre 500 y 800 nm.
En este sentido, las tecnologías que emplean guías de onda planas se basan en la excitación del marcador fluorescente a través de un campo evanescente, con lo que la excitación y detección del fluoróforo se restringe a la superficie sensora, mientras que la señal debida a sustancias no ancladas o en disolución, no es detectada. Esto se traduce en un incremento significativo de la relación señal/ruido en comparación con los métodos de detección óptica convencionales. En definitiva, esta tecnología aprovecha la alta intensidad del campo y su confinamiento en la proximidad de las guías de onda, para proporcionar una detección altamente sensible y selectiva.
Las guías de onda planas consisten en una fina capa de un material con elevado Índice de refracción como pentóxido de tántalo u óxido de titanio, depositado en un soporte sólido, preferentemente transparente y con bajo índice de refracción (como vidrio o determinados polímeros).
Adaptar esta tecnología para aplicaciones analíticas, requiere inmovilizar sondas receptoras del analito de interés sobre la superficie de la guía de onda. Así, para mantener una alta sensibilidad y selectividad en los ensayos, es necesario desarrollar modificaciones químicas de la superficie de pentóxido de tántalo que permitan:
\bullet
una inmovilización estable de los elementos de reconocimiento biológico (ácidos nucleicos, proteínas, hidratos de carbono, receptores de membrana, etc.);
\bullet
el mantenimiento de una capacidad bioreceptora similar a la presentada en disolución;
\bullet
maximizar el número posible de sitios activos; y
\bullet
minimizar las adsorciones inespecíficas.
Hasta el momento, la mayor parte de las modificaciones químicas de óxidos metálicos que se han llevado a cabo se han centrado en la formación de SAMs (del inglés, Self Assembled Monolayers) sobre óxido de silicio (en adelante, SiO) mediante silanización con clorosilanos (Wang, Y., Lieberman, M., Langmuir, 2003, 19, 1159), y organosilanos (Rozlosnik, N., et al., Langmuir, 2003, 19, 1182).
La formación de SAMs sobre SiO con alquiltriclorosilanos fue introducida por primera vez por Bigelow en el año 1946 (Bigelow, W. C., et al., J. Colloid Sci., 1946, 1, 513) y posteriormente fue desarrollada por Maoz y Sagiv (Maoz, R., Sagiv, J. J. Colloid Sci., 1984, 100, 465). Desde entonces, la bibliografía recoge muchos trabajos acerca de la modificación química superficial de SiO principalmente mediante silanos, organometálicos y alcoholes (Böcking, T., et al., Langmuir, 2005, 21, 10522-10529).
En la última década, el empleo de esta química para la fabricación de biosensores ha sido muy desarrollada (Lee L. M., et al., Nanotechnology, 2006, 17, S29-S33).
Existen también técnicas alternativas para recubrir superficies de óxidos, entre las que cabe citar: ácidos hidroxámicos sobre óxidos de cobre, plata, titanio, aluminio, zirconio y hierro (Folkers, J.P., et al., Langmuir, 1995, 11, 813-824); ácidos carboxílicos sobre óxidos de aluminio (Aronoff, Y. G., et al., J. Am. Chem. Soc., 1997, 119, 259); ácidos fosfónicos sobre mica (Woodward, J. T., et al., Langmuir, 1996, 12, 3626), óxidos de circonio, titanio o silicio circonizado (Gao, W., et al., Langmuir, 1996, 12, 6429) y óxido de silicio (Midwood, K. S., et al., Langmuir, 2004, 20, 5501-5505).
En el caso del pentóxido de tántalo, sin embargo, se conocen pocas modificaciones superficiales dirigidas a la inmovilización de sondas. La más conocida se basa en el empleo de alean-fosfatos y alcan-fosfonatos \omega-sustituidos, que han demostrado ser compuestos muy efectivos para la formación de SAMs sobre superficies de óxidos de metales de transición como óxido de titanio (Tosatti, S. et al, Langmuir, 2002), óxido de niobio y pentóxido de tántalo (Textor, M. et al. Langmuir, 2000, 16, 3257-3271).
Los grupos funcionales situados en el otro extremo de la cadena permiten la modificación de las propiedades de la superficie (hidrofobicidad, carga eléctrica, etc.), así como la adsorción o unión covalente de proteínas.
Otra alternativa interesante consiste en la adsorción de polímeros multifuncionales (polilisina, polietilenglicol) que permitan inmovilizar los elementos de captura requeridos para los ensayos.
El empleo de la alternativa de los fosfonatos está bien establecida para la fabricación de dispositivos basados en guías de onda planas. Sin embargo, para aplicaciones bioanalíticas, la búsqueda de nuevas alternativas para la superficie de Ta_{2}O_{5} que mejoren las prestaciones de las hasta ahora empleadas basadas en fosfonatos, sigue teniendo una gran demanda.
Por tanto, es objeto de esta invención presentar un nuevo procedimiento de modificación de la superficie de pentóxido de tántalo con organosilanos, que permita la inmovilización de receptores para la realización de distintos tipos de ensayos como, por ejemplo, los basados en micromatrices (microarraying) de alta densidad (Rebecca L. et al., Chem. Biol., 2007, 2 (1), 24-30).
Gracias a este procedimiento, es posible obtener superficies con baja fluorescencia de fondo y alta capacidad de carga de muestra y al mismo tiempo, se consiguen mejorar otros procedimientos ya conocidos respecto a la sencillez del procedimiento, así como al número de etapas necesarias para conseguir la inmovilización del receptor.
Descripción de la invención
La presente invención se refiere a un nuevo procedimiento para la modificación de al menos una superficie de pentóxido de tántalo, caracterizado porque comprende, al menos, las siguientes etapas:
a)
la preparación de una disolución de al menos un organosilano que comprende en su estructura al menos un grupo seleccionado entre un grupo tiol, un grupo amino primario o secundario y un grupo isocianato o isotiocianato;
b)
la introducción en dicha disolución de la superficie de pentóxido de tántalo hasta obtenerse la superficie de pentóxido de tántalo modificada.
De manera particular, la superficie de pentóxido de tántalo se encontrará depositada sobre al menos una de las caras de un soporte sólido, el cual consistirá, de manera preferente, en un soporte transparente con bajo índice de refracción, preferentemente vidrio o un compuesto polimérico, y más preferentemente sustratos de vidrio (chips). En una realización preferida de la invención, dicha superficie de pentóxido de tántalo se encontrará depositada sobre al menos una de las caras de un soporte sólido, formando una capa de pocos nanómetros de espesor, preferentemente entre 100 y 200 nm, y más preferentemente entre 130 y 170 nm.
Gracias a este procedimiento es posible la obtención de al menos una superficie de pentóxido de tántalo modificada caracterizada por comprender al menos un grupo seleccionado entre un grupo tiol, un grupo amino, un grupo aldehído y un grupo isocianato o isotiocianato.
Introducción de grupos tiol
De manera particular, en el caso de que se tenga interés en la introducción de grupos tiol en la superficie del pentóxido de tántalo, el organosilano consistirá, preferentemente, en 3-mercaptopropil trietoxisilano. En una realización preferida del procedimiento, la disolución comprenderá de 1 a un 4% de 3-mercaptopropil trietoxisilano y de un 2 a un 5% de agua en una mezcla 0,05 a 0,25M de ácido acético en metanol.
De manera aún más preferida, la disolución comprenderá de 2 a un 3% de 3-mercaptopropil trietoxisilano y de un 3 a un 4% de agua en una mezcla 0,1 a 0,2M de ácido acético en metanol.
Una vez las superficies de pentóxido de tántalo hayan sido sumergidas en esta disolución durante un cierto tiempo, preferentemente de 1 a 3 h, y más preferentemente 1,5 h, serán lavadas con metanol y se secarán, preferentemente con aire a presión o mediante centrifugación. Las superficies de pentóxido de tántalo así tratadas estarán preparadas para la inmovilización de los receptores que comprendan grupos tiol en su estructura, mediante la formación de puentes disulfuro.
Introducción de grupos amino, aldehído e isotiocianato
A su vez, en una realización particular en la que interese introducir grupos amino y aldehído en las superficies de pentóxido de tántalo, se preparará una disolución en la que el organosilano consistirá, preferentemente, en trimetoxisililpropil etilendiamina.
En una realización preferida del procedimiento, la disolución comprenderá de 1 a un 4% de trimetoxisililpropil etilendiamina y de un 2 a un 5% de agua en una mezcla 0,05 a 0,25M de ácido acético en metanol.
De manera aún más preferida, la disolución comprenderá de 2 a un 3% de 3-mercaptopropil trietoxisilano y de un 3 a un 4% de agua en una mezcla 0,1 a 0,2M de ácido acético en metanol.
Una vez las superficies de pentóxido de tántalo hayan sido sumergidas en esta durante un cierto tiempo, preferentemente de 1 a 3 h, y más preferentemente 1,5 h, serán lavadas con metanol y se secarán, preferentemente mediante aire a presión.
En este caso, el procedimiento podrá comprender, asimismo una etapa adicional, posterior al secado, de tratamiento de las superficies de pentóxido de tántalo con una disolución que comprenda al menos un compuesto con al menos dos grupos aldehído, preferentemente glutaraldehído, o al menos dos grupos isotiocianato, preferentemente, p-fenilendiisotiocianato. En una realización especialmente preferida de la invención, esta disolución comprenderá de un 0,05 a un 1%, y más preferentemente de un 0,1 a un 0,5% de glutaraldehído en, preferentemente, una solución reguladora de fosfato salino, más preferentemente, PBS1x, aunque también podrá tratarse de una disolución de agua sin sales; o de un 0.5 a un 1% de p-fenilendiisotiocianato en un disolvente aprótico, preferentemente, en tolueno.
Asimismo, de manera preferente, este tratamiento se llevará a cabo durante un tiempo de 1,5 a 5 h, más preferentemente, durante 2 h. Finalmente, las superficies de pentóxido de tántalo así tratadas se lavarán con agua y se secarán, preferentemente, mediante aire a presión.
Introducción de grupos isocianato
Finalmente, en el caso de que se tenga interés en introducir grupos isocianato en las superficies de pentóxido de tántalo, se preparará una disolución en la que el organosilano consistirá, preferentemente, en 3-isocianatopropil trietoxisilano.
En una realización preferida del procedimiento, la disolución comprenderá de 1 a un 4% de 3-isocianatopropil trietoxisilano y de un 0,01 a un 0,1% de agua en un disolvente aprótico y preferentemente no polar, preferentemente seleccionado de un grupo que consiste en hexano, ciclohexano, tolueno y xileno.
De manera aún más preferida, la disolución comprenderá de 2 a un 3% de 3-isocianato propil trietoxisilano y un 0,01% de agua en hexano o ciclohexano.
Una vez las superficies de pentóxido de tántalo hayan sido sumergidas en esta disolución durante un tiempo de 1 a 3 h, preferentemente 1,5 h, serán lavadas con hexano o ciclohexano y se secarán, preferentemente, con aire a presión. Las superficies de pentóxido de tántalo así tratadas estarán listas para la inmovilización de receptores conteniendo grupos amino, mediante la formación de enlaces urea, caracterizados por ser enlaces muy estables y de larga duración.
De esta manera, gracias al procedimiento de la presente invención, es posible desarrollar protocolos de derivatización sencillos y rápidos, proporcionando superficies homogéneas que mantienen las propiedades ópticas y mecánicas del soporte o superficie derivatizada. Estas características son clave para su posterior aplicación, preferentemente, en dispositivos ópticos de detección basados en guías de onda y anclaje covalente de biomoléculas, de manera preferente, en el desarrollo de ensayos genómicos o proteómicos.
En una realización particular de la invención, dichas biomoléculas podrán tratarse de ácidos nucleicos de diferentes pesos moleculares, tanto monocatenarios, como bicatenarios conteniendo al menos un grupo amino o un grupo tiol. Estos ácidos nucleicos podrán ser inmovilizados mediante su unión covalente con al menos un grupo isotiocianato, isocianato, aldehído o tiol de la superficie de pentóxido de tántalo modificada.
Asimismo, en una realización particular adicional de la invención, dichas biomoléculas podrán consistir en proteínas o moléculas PNAs. En este caso, la inmovilización se producirá mediante la formación de enlaces covalentes entre la superficie de pentóxido de tántalo modificada y al menos un residuo de lisina de la proteína o bien mediante la formación de puentes disulfuro entre la superficie de pentóxido de tántalo modificada y al menos un residuo de cisteína de dicha proteína.
\newpage
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Breve descripción de las figuras
La figura 1 muestra los resultados de la inmovilización de diferentes concentraciones (de 5-50 \mug/ml) de GAR-Cy5 (anticuerpo de cabra contra conejo marcado con Cy5) sobre la superficie modificada y sobre controles, donde el Assay corresponde a la superficie modificada; el Blank 1 a la superficie sin tratamiento; el Blank 2 a la superficie sin amin-organosilano y el Blank 3 a la superficie sin glutaraldehído.
La figura 2 representa la intensidad de emisión de fluorescencia para 5-50 \mug/mL GAR-Cy5 sobre la superficie modificada y sobre controles, donde El corresponde a la superficie modificada, C1 a la superficie sin tratamiento; C2 a la superficie sin amin-organosilano y C3 a la superficie sin glutaraldehído.
La figura 3 muestra los resultados de la inmovilización de GAR-Cy5 a diferentes concentraciones, sobre la superficie tratada con 3-isocianatopropiltrietoxisilano y sobre un control de la superficie sin tratar.
La figura 4 representa la intensidad de emisión de fluorescencia neta para concentraciones crecientes de GAR-Cy5, sobre la superficie modificada con isocianato y sobre un control de la superficie sin tratar.
La figura 5 muestra los resultados de la inmovilización de GAR-Cy5 a diferentes concentraciones sobre la superficie tratada con mercaptosilano y sobre un control de la superficie sin tratar.
La figura 6 representa la intensidad de emisión de fluorescencia neta para concentraciones crecientes de GAR-Cy5, sobre la superficie modificada con grupo tiol y sobre un control de la superficie sin tratar.
La figura 7 muestra los resultados del ensayo de inmovilización de la sonda de oligonucleótido sobre la superficie tratada con isocianato (a concentraciones de sonda de 1 y 5 \muM).
La figura 8 muestra los resultados del ensayo de hibridación de la cadena complementaria a la sonda inmovilizada sobre la superficie tratada con isocianato (a concentraciones de sonda de 10 y 25 \muM y a concentración de hibridación de 50 nM).
A continuación se recogen, a modo de ejemplo y con carácter no limitante, una serie de realizaciones particulares correspondientes a la presente invención.
En dichos ejemplos, la presencia de los grupos introducidos en la superficie de pentóxido de tántalo se comprobó empleando distintos ensayos de detección cualitativa en síntesis en fase sólida, así como técnicas de espectroscopia infrarroja con transformada de Fourier (FITR) mediante reflectancia total atenuada (ATR) y medida del ángulo de contacto.
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Ej. 1.
Introducción de grupos tiol
En este ejemplo, se procedió a preparar una disolución de 3-mercaptopropil trietoxisilano al 2,3% y agua al 3,7% en una mezcla 0,15M de ácido acético en metanol. A continuación se sumergieron en dicha disolución las superficies de pentóxido de tántalo depositadas sobre una de las caras de un soporte de sustratos de vidrio (chips) formando una capa de 150 nm de espesor. Al cabo de 1,5 h, los chips fueron lavados con metanol y se secaron con aire a presión.
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Ej. 2.
Introducción de grupos amino y aldehidización
En este ejemplo, se procedió a preparar una disolución de trimetoxisililpropil etilendiamina al 2,3% y agua al 3,7% en una mezcla 0,15M de ácido acético en metanol. A continuación se sumergieron en dicha disolución las superficies de pentóxido de tántalo depositadas sobre una de las caras de un soporte de sustratos de vidrio (chips) formando una capa de 150 nm de espesor. Al cabo de 1,5 h, los chips fueron lavados con metanol y se secaron con aire a presión. Posteriormente, se trataron con una disolución al 0,1% de glutaraldehído en PBS1x, durante 2 horas. Finalmente, se lavaron con agua y se secaron con aire a presión.
\vskip1.000000\baselineskip
Ej. 3.
Introducción de grupos isocianato
En este ejemplo, se procedió a preparar una disolución de 3-isocianato propil trietoxisilano al 2,3% y agua al 0,01% en hexano. A continuación se sumergieron en dicha disolución las superficies de pentóxido de tántalo depositadas sobre una de las caras de un soporte de sustratos de vidrio (chips) formando una capa de 150 nm de espesor. Al cabo de 1,5 h, los chips fueron lavados con metanol y se secaron con aire a presión.
\newpage
\global\parskip1.000000\baselineskip
Ej. 4.
Efectividad del procedimiento
Para demostrar la efectividad del procedimiento en el anclaje de bioreceptores, se realizaron los siguientes ensa-
yos:
\bullet
Inmovilización de anticuerpo marcado con Cy5 y lectura de la fluorescencia resultante;
\bullet
Realización de inmunoensayos utilizando Cy5 como trazador;
\bullet
Inmovilización de oligonucleótidos marcados con Cy5 y registro de la señal de fluorescencia;
\bullet
Hibridaciones con sondas inmovilizadas a través del correspondiente grupo funcional y la diana marcada con Cy5 y lectura de la fluorescencia resultante.
\vskip1.000000\baselineskip
Ej. 4.1.
Inmovilización de anticuerpos (I)
Con el material modificado con grupos isocianato se procedió a la inmovilización de anticuerpos de cabra contra conejo marcados con Cy5 (GAR-Cy5). Para ello se prepararon distintas diluciones de GAR-Cy5 (5, 10, 25 y 50 \mug/mL) y se depositaron sobre la superficie tratada siguiendo el procedimiento descrito para la inmovilización de oligonucleótidos.
Tras 2 h de incubación en cámara oscura y húmeda a temperatura ambiente, se lavó la superficie con PBS1x, se secó y se midió la fluorescencia con una cámara CCD, según se muestra en las figuras 3 y 4.
\vskip1.000000\baselineskip
Ej. 4.2.
Inmovilización de anticuerpos (II)
La inmovilización de los anticuerpos se llevó a cabo sobre soportes modificados con 3-mercaptopropil trietoxisilano empleando un anticuerpo modificado con Cy5, mediante la reacción de formación de puentes disulfuro. Se procedió de manera similar a lo descrito para el ejemplo anterior, obteniéndose los resultados que se muestran en las figuras 5 y 6.
\vskip1.000000\baselineskip
Ej. 4.3.
Inmovilización de oligonucleótidos aminados
Diferentes concentraciones (1, 5, 10 y 25 \muM) de un oligonucleótido aminado en 3'o 5' y marcado con Cy5 en 5' o 3' fueron depositadas sobre las superficies funcionalizadas con isocianato con ayuda de un robot de impresión. Se crearon matrices de 2x3 puntos, con un 90% de humedad ambiente, depositando aproximadamente 50 nL por punto. Tras 2 h de incubación a temperatura ambiente en cámara oscura y húmeda, los chips se lavaron con PBS1x, se secaron, y se leyó la fluorescencia con una cámara CCD.
Este mismo procedimiento se empleó sobre chips sin tratamiento químico y se comparó la fluorescencia obtenida en ambos casos, según se muestra en la figura 7.
\vskip1.000000\baselineskip
Ej. 4.4.
Hibridación en chip
Empleando la metodología de inmovilización del ejemplo 4.1, se inmovilizó la sonda aminada a distintas concentraciones (1, 5, 10 y 25 \muM) y tras bloquear con OVA 1% en PBS1x durante 30 minutos, se trató el chip con una disolución de hibridación (6xSSC, 0,6% SDS, 0,1% DNA esperma de salmón y 2% BSA) conteniendo distintas concentraciones de la cadena complementaria a la sonda inmovilizada, marcada con Cy5. Después de 2 h de incubación y los correspondientes lavados, se procedió a registrar la fluorescencia de la superficie, observándose eficacia en la hibridación para concentraciones de hasta 50 nM de la cadena complementaria, según se muestra en la figura
8.
\newpage
Ej. 4.5.
Comparación de resultados
En todos los ejemplos anteriores se comprobó que el anclaje covalente de oligonucleótidos o anticuerpos proporciona mayor intensidad de fluorescencia y mejor relación señal/ruido que los oligonucleótidos anclados a la superficie mediante interacciones inespecíficas de control, según se muestra en la figura 1.
Por otro lado, la fluorescencia de fondo también resultó prácticamente inalterada tras el tratamiento químico, en relación a la fluorescencia de fondo de la superficie sin tratar, disminuyendo un 7,5% para el caso del isocianato, aumentando un 8% para el glutaraldehído y aumentando un 3,5% para el mercaptano, lo que demuestra la adecuación del procedimiento para el objeto de la invención.

Claims (21)

1. Procedimiento de modificación de al menos una superficie de pentóxido de tántalo, caracterizado porque comprende, al menos, las siguientes etapas:
a)
la preparación de una disolución de al menos un organosilano seleccionado de un grupo que consiste en un organosilano que comprende en su estructura al menos un grupo tiol, trimetoxililpropil etilendiamina y 3-isocianatopropil trietoxisilano, donde cuando el organosilano consiste en 3-isocianatopropil trietoxisilano, la disolución comprende de un 1 a un 4% de 3-isocianatopropil trietoxisilano y de un 0,01 a un 0,1% de agua en un disolvente aprótico;
b)
la introducción en dicha disolución de la superficie de pentóxido de tántalo hasta obtenerse la superficie de pentóxido de tántalo modificada;
c)
el lavado y secado de dicha superficie de pentóxido de tántalo modificada;
y donde, cuando el organosilano se trata de trimetoxililpropil etilendiamina, el procedimiento comprende una etapa adicional posterior al secado de tratamiento de la superficie de pentóxido de tántalo modificada con una disolución que comprende al menos un compuesto con al menos dos grupos isotiocianato.
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2. Procedimiento, de acuerdo a la reivindicación 1, caracterizado porque la superficie de pentóxido de tántalo se encuentra depositada sobre al menos una cara de un soporte sólido.
3. Procedimiento, de acuerdo a la reivindicación 1, caracterizado porque el soporte sólido se trata de un soporte de vidrio.
4. Procedimiento, de acuerdo a una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el organosilano se trata de 3-mercaptopropil trietoxisilano.
5. Procedimiento, de acuerdo a la reivindicación 4, caracterizado porque la disolución comprende de un 1 a un 4% de 3-mercaptopropil trietoxisilano y de un 2 a un 5% de agua en una mezcla 0,05 a 0,25M de ácido acético en metanol.
6. Procedimiento, de acuerdo a la reivindicación 1, caracterizado porque la disolución comprende de un 1 a un 4% de trimetoxisililpropil etilendiamina y de un 2 a un 5% de agua en una mezcla 0,05 a 0,25M de ácido acético en metanol.
7. Procedimiento, de acuerdo a la reivindicación 1, caracterizado porque la disolución que comprende al menos un compuesto con al menos dos grupos isocianato consiste en una disolución de un 0,5 a un 1% de p-fenilendiisotiocianato en un disolvente aprótico.
8. Superficie de pentóxido de tántalo modificada obtenible a partir de un procedimiento de acuerdo a una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.
9. Uso de una superficie de pentóxido de tántalo modificada de acuerdo a la reivindicación 8 para la realización de ensayos.
10. Uso de una superficie de pentóxido de tántalo modificada, de acuerdo a la reivindicación 9, donde dichos ensayos consisten en ensayos de hibridación.
11. Uso de una superficie de pentóxido de tántalo modificada, de acuerdo a la reivindicación 9, donde dichos ensayos consisten en inmunoensayos.
12. Método de inmovilización de al menos una sustancia sobre una superficie de pentóxido de tántalo modificada de acuerdo a la reivindicación 8.
13. Método, de acuerdo a la reivindicación 12, caracterizado porque dicha sustancia es un ácido nucleico.
14. Método, de acuerdo a la reivindicación 12, caracterizado porque dicha sustancia es una proteína.
15. Método, de acuerdo a la reivindicación 12, donde dicha superficie de pentóxido de tántalo modificada comprende al menos un grupo tiol.
16. Método, de acuerdo a la reivindicación 15, caracterizado porque la sustancia es un ácido nucleico cuya inmovilización se produce mediante la formación de enlaces covalentes entre la superficie de pentóxido de tántalo modificada y al menos un grupo tiol de dicho ácido nucleico.
17. Método, de acuerdo a la reivindicación 15, caracterizado porque la sustancia es una proteína cuya inmovilización se produce mediante la formación de puentes disulfuro entre la superficie de pentóxido de tántalo modificada y al menos un residuo de cisteína de dicha proteína.
18. Soporte caracterizado porque comprende al menos una superficie de pentóxido de tántalo modificada de acuerdo a la reivindicación 8.
19. Soporte, de acuerdo a la reivindicación 18, caracterizado porque la superficie de pentóxido de tántalo depositada se encuentra formando una capa de 100 a 200 nm de espesor.
20. Soporte, de acuerdo a una de las reivindicaciones 18 ó 19, caracterizado porque comprende, además, al menos una sustancia inmovilizada sobre dicho soporte.
21. Soporte, de acuerdo a la reivindicación 20, caracterizado porque dicha sustancia es una proteína o un ácido nucleico inmovilizada de manera biodisponible para el reconocimiento específico posterior de al menos un analito.
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