ES2336684T3 - Vacunas de subunidades de ornithobacterium rhinotracheale. - Google Patents
Vacunas de subunidades de ornithobacterium rhinotracheale. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2336684T3 ES2336684T3 ES05701653T ES05701653T ES2336684T3 ES 2336684 T3 ES2336684 T3 ES 2336684T3 ES 05701653 T ES05701653 T ES 05701653T ES 05701653 T ES05701653 T ES 05701653T ES 2336684 T3 ES2336684 T3 ES 2336684T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- protein
- nucleic acid
- immunogenic
- immunogenic fragment
- ornithobacterium rhinotracheale
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241001135620 Ornithobacterium rhinotracheale Species 0.000 title claims abstract description 187
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 103
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 288
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 245
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 162
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 157
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 157
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 153
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 150
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 54
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 49
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 claims description 34
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 28
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 27
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 27
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 27
- 241000271566 Aves Species 0.000 claims description 25
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 23
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 23
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 claims description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 claims description 18
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 13
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 12
- 244000144977 poultry Species 0.000 claims description 8
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 7
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 6
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 6
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 claims description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 5
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 3
- 241001502481 Meleagrid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 3
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 claims description 3
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 claims description 3
- 241001492342 Anatid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 2
- 241001516406 Avian orthoreovirus Species 0.000 claims description 2
- 241000606767 Avibacterium paragallinarum Species 0.000 claims description 2
- 208000010884 Bursa disease Diseases 0.000 claims description 2
- 241000223924 Eimeria Species 0.000 claims description 2
- 241000711450 Infectious bronchitis virus Species 0.000 claims description 2
- 241000204022 Mycoplasma gallisepticum Species 0.000 claims description 2
- 241000202942 Mycoplasma synoviae Species 0.000 claims description 2
- 241000606856 Pasteurella multocida Species 0.000 claims description 2
- 241001223089 Tremovirus A Species 0.000 claims description 2
- 241000711955 Turkey rhinotracheitis virus Species 0.000 claims description 2
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 229940051027 pasteurella multocida Drugs 0.000 claims description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims description 2
- 241001135630 Ornithobacterium Species 0.000 claims 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 161
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 36
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 22
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 17
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 16
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 16
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 14
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 11
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 11
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 11
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 10
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 8
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 6
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 210000004712 air sac Anatomy 0.000 description 5
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 5
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 241000711404 Avian avulavirus 1 Species 0.000 description 4
- 125000003412 L-alanyl group Chemical group [H]N([H])[C@@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 229940124590 live attenuated vaccine Drugs 0.000 description 4
- 229940023012 live-attenuated vaccine Drugs 0.000 description 4
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 4
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 4
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 4
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 4
- 238000012552 review Methods 0.000 description 4
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 3
- 125000000570 L-alpha-aspartyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[C@]([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 3
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 3
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 3
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 3
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 2
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 241000724791 Filamentous phage Species 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003440 L-leucyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000002842 L-seryl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 2
- 125000000769 L-threonyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])[C@](O[H])(C([H])([H])[H])[H] 0.000 description 2
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 2
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 229940030156 cell vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 239000012212 insulator Substances 0.000 description 2
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 2
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 2
- 229940126580 vector vaccine Drugs 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 1
- 241000024188 Andala Species 0.000 description 1
- 206010060968 Arthritis infective Diseases 0.000 description 1
- 101100136076 Aspergillus oryzae (strain ATCC 42149 / RIB 40) pel1 gene Proteins 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 description 1
- 241001198387 Escherichia coli BL21(DE3) Species 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 241000701047 Gallid alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical class C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 1
- 125000001176 L-lysyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(N([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000288147 Meleagris gallopavo Species 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 208000010359 Newcastle Disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 206010031149 Osteitis Diseases 0.000 description 1
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 101710182846 Polyhedrin Proteins 0.000 description 1
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 241000710961 Semliki Forest virus Species 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 101710137500 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910000318 alkali metal phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 208000018339 bone inflammation disease Diseases 0.000 description 1
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 1
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- -1 microalginates Substances 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003595 mist Substances 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 239000002353 niosome Substances 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000003973 paint Substances 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 101150040383 pel2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150050446 pelB gene Proteins 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Virology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Ácido nucleico que codifica una proteína inmunogénica de 59,8 kD de Ornithobacterium rhinotracheale o una parte de dicho ácido nucleico que codifica un fragmento inmunogénico de dicha proteína, teniendo dicho ácido nucleico o dicha parte del mismo una homología de al menos el 80% con el ácido nucleico del gen de proteína de Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID Nº: 1.
Description
Vacunas de subunidades de Ornithobacterium
rhinotracheale.
La presente invención se refiere a ácidos
nucleicos que codifican proteínas de Ornithobacterium
rhinotracheale, a fragmentos de ADN, a moléculas de ADN
recombinante, vehículos recombinantes vivos y células hospedadoras
que comprenden tales ácidos nucleicos, a proteínas de
Ornithobacterium rhinotracheale, a anticuerpos contra tales
proteínas, a tales proteínas para el uso en vacunas, al uso de tales
proteínas en la fabricación de tales vacunas, a vacunas que
comprenden tales ácidos nucleicos, fragmentos de ADN, moléculas de
ADN recombinante, vehículos recombinantes vivos, células
hospedadoras, proteínas o anticuerpos contra tales proteínas y a
métodos para la preparación de tales vacunas.
El Ornithobacterium rhinotracheale es una
bacteria descubierta de forma relativamente reciente que se
encuentra más y más frecuentemente en granjas de aves de corral y
en aves silvestres. Especialmente los animales en granjas
comerciales de pollos, granjas de pavos y granjas de patos están
infectados frecuentemente. En aves de corral comerciales, la
infección está asociada con enfermedades respiratorias: las
características más comunes de infección por Ornithobacterium
rhinotracheale son aerosaculitis y neumonía. Estos signos se
pueden inducir por aerosol en administración intratraqueal o
intratorácica del organismo y se agravan por otros factores tales
como virus respiratorios, bacterias o condiciones de alojamiento
sub-óptimas. La osteítis, meningitis e infecciones articulares que
se pueden inducir por aplicación intravenosa se han asociado con
Ornithobacterium rhinotracheale. La infección se puede
transmitir horizontalmente así como verticalmente a través de los
huevos, lo que probablemente explica su propagación rápida y a
nivel mundial. Se ha proporcionado una revisión extensa de
Ornithobacterium rhinotracheale por van Empel, P.C.M. ad
Hafez, H. M. en Avian Pathology 28: 217-227 (1999).
La Patente Europea EP0.625.190 se refiere tanto a la bacteria
Ornithobacterium rhinotracheale como a vacunas contra
Ornithobacterium rhinotracheale.
La investigación serológica ha puesto de
manifiesto que las cepas de Ornithobacterium rhinotracheale
pueden tener diferentes serotipos, dependiendo hasta cierto grado
del origen geográfico de la cepa y del animal hospedador del que se
aislaron. En este momento se han encontrado dieciocho serotipos
diferentes.
El tratamiento terapéutico de la enfermedad
puede ser difícil debido a que dentro del género es muy común la
resistencia adquirida contra los antibióticos regulares. Además,
existe una reticencia creciente contra el uso de antibióticos en
animales de alimentación por motivos tanto públicos como sanitarios
y ambientales.
La vacunación ofrece una alternativa para el
tratamiento terapéutico con anticuerpos, pero hasta ahora solamente
ha sido posible la vacunación con vacunas vivas atenuadas y vacunas
inactivadas de células completas.
Avian Diseases, vol. 44, páginas
549-555, 2000, S. J. Sprenger et al. describe
la vacunación de pavos de 6 semanas de edad con una vacuna viva o
inactivada de Ornithobacterium rhinotracheale. Después de 14
ó 21 semanas, las aves se expusieron a Ornithobacterium
rhinotracheale vivo. Se observó que los pavos a los que se había
inoculado la vacuna viva o inactivada de Ornithobacterium
rhinotracheale estaban protegidos frente a cambios
patológicos.
Avian Diseases, vol. 46, páginas
177-185, 2002, V. Lopes et al. describe la
investigación de la protección provocada por un mutante sensible a
temperatura (Ts) de la vacuna de Ornithobacterium
rhinotracheale frente a una exposición a una cepa patógena. Los
resultados indicaron que el uso de la cepa mutante Ts de
Ornithobacterium rhinotracheale como una vacuna viva sería
adecuado para provocar protección contra infección por
Ornithobacterium rhinotracheale en pavos.
El éxito de vacunas vivas atenuadas
específicamente para Ornithobacterium rhinotracheale depende
en gran medida del equilibrio correcto entre atenuación y
activación del sistema inmune. Las vacunas inactivadas de células
completas básicamente son seguras y, por lo tanto, desde un punto de
vista de seguridad, parecerían el tipo preferido de vacuna.
Sin embargo, las vacunas inactivadas de células
vivas se tienen que dar a una mayor dosis en comparación con las
vacunas vivas atenuadas. Como una regla general, la mayor parte de
las proteínas presentes en una bacteria no desempeña ningún papel
en la activación del sistema inmune, es decir, no son inmunógenos
relevantes. Esto significa que, en el caso de vacunas inactivadas
de células completas, para proporcionar a seres humanos o animales
un nivel suficiente de inmunogénicas pertinentes, se administra una
gran cantidad de material no protector adicionalmente y de forma
inevitable. Esto no es una situación deseable.
El uso de vacunas de subunidades podría superar
este problema y, por lo tanto, sería altamente preferido, pero
actualmente no se conoce vacunas de subunidades inmunogénicas en la
técnica para combatir Ornithobacterium rhinotracheale.
Además, se conoce que aunque las vacunas vivas
atenuadas y las preparaciones inactivadas de células completas
proporcionan un cierto nivel de protección cruzada contra todas las
cepas de Ornithobacterium rhinotracheale, las vacunas de
subunidades pueden inducir o no reactividad cruzada.
\newpage
\global\parskip0.900000\baselineskip
La presente invención pretende proporcionar por
primera vez vacunas que están basadas en subunidades de
Ornithobacterium rhinotracheale que inducen reactividad
cruzada.
Este objetivo se alcanza proporcionando ocho
proteínas novedosas de Ornithobacterium rhinotracheale que
desempeñan sorprendentemente un papel importante en la activación
de una respuesta inmune protectora y proporcionando vacunas que
comprenden una o más de estas proteínas inmunogénicas novedosas. Aún
más sorprendentemente, se observó que estas ocho proteínas
novedosas no solamente inducen una respuesta inmune homóloga
protectora, sino que también inducen una respuesta inmune con
reactividad cruzada protectora. Una respuesta inmune homóloga es
una respuesta contra cepas del mismo serotipo, mientras que una
respuesta inmune de reactividad cruzada es una respuesta contra
cepas serológicamente tanto homólogas como heterólogas.
La primera proteína novedosa, Or01, que tiene un
peso molecular de 59,8 kD, está codificada por un ácido nucleico que
tiene una secuencia de nucleótidos como se ilustra en la SEC ID Nº:
1.
Se conoce bien en la técnica que muchas
secuencias de nucleótidos diferentes pueden codificar la misma
proteína. Este fenómeno se conoce comúnmente como titubeo en la
segunda y especialmente en la tercera base de cada triplete que
codifica un aminoácido. Este fenómeno puede dar como resultado una
heterología de aproximadamente el 20-30% para dos
secuencias de nucleótidos que todavía codifican la misma proteína.
Por lo tanto, dos ácidos nucleicos que tienen una homología de
secuencia de nucleótidos de aproximadamente el 80% todavía pueden
codificar la misma proteína.
Por tanto, una realización se refiere a un ácido
nucleico que codifica una proteína de 59,8 kD de Ornithobacterium
rhinotracheale o una parte de dicho ácido nucleico que codifica
un fragmento inmunogénico de dicha proteína, donde dicho ácido
nucleico o dicha parte del mismo tiene una homología de al menos el
80% con el ácido nucleico del gen de proteína de
Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID
Nº: 1.
El peso molecular de la proteína (y las siete
otras proteínas) se determina basándose en el peso molecular de los
aminoácidos como se dan en la secuencia de aminoácidos.
Preferiblemente, un ácido nucleico de acuerdo
con la invención que codifica esta proteína de 59,8 kD de
Ornithobacterium rhinotracheale o una parte de ese ácido
nucleico que codifica un fragmento inmunogénico de esta proteína
tiene una homología de al menos el 85%, preferiblemente del 90%,
más preferiblemente del 95% con el ácido nucleico del gen de
proteína de Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra
en la SEC ID Nº: 1.
Se prefiere incluso más un nivel de homología
del 98%, del 99% o incluso del 100%.
El nivel de homología de nucleótidos se puede
determinar con el programa informático "BLAST 2 SEQUENCES"
seleccionado el sub-programa: "BLASTN" que se
puede encontrar en
www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/bl2sea/bl2.html. Una referencia
para este programa es Tatiana A. Tatusova, Thomas L. Madden FEMS
Microbiol. Letters 174: 247-250 (1999). Los
parámetros usados son los parámetros por defecto:
Recompensa por una coincidencia: +1.
Penalización por un apareamiento erróneo: -2. Hueco abierto: 5.
Extensión de hueco: 2. Disminución x de hueco: 50.
Otra estrategia para decidir si una cierta
secuencia de ácido nucleico es o no una secuencia de ácido nucleico
de acuerdo con la invención se refiere a la cuestión de si una
cierta secuencia de ácido nucleico híbrida en condiciones rigurosas
con la secuencia de nucleótidos como se ilustra en la SEC ID Nº: 1
(o en la SEC ID Nº: 3, 5, 7, 9, 11, 13 ó 15, véase más adelante).
Si una secuencia de ácido nucleico híbrida en condiciones rigurosas
con la secuencia de nucleótidos como se ilustra en la SEC ID Nº: 1
o, por supuesto, como se ilustra en la SEC ID Nº: 3, 5, 7, 9, 11,
13 y 15, se considera que es una secuencia de ácido nucleico de
acuerdo con la invención.
La definición de condiciones rigurosas se deduce
de la fórmula de Meinkoth y Wahl (1984. Hybridization of nucleic
acids immobilized on solid supports. Anal. Biochem. 138:
267-284.).
Tm = [81,5ºC +
16,6(log M) + 0,41(% GC) - 0,61(% de formamida) - 500/L]
-1ºC/1% de apareamiento
erróneo
En esta fórmula, M es la molaridad de cationes
monovalentes; %GC es el porcentaje de nucleótidos guanosina y
citosina en el ADN; L es la longitud del híbrido en pares de
bases.
Las condiciones rigurosas son las condiciones en
las que las secuencias de ácido nucleico o fragmentos de las mismas
todavía hibridan, si tienen un apareamiento erróneo del 20% como
mucho, preferiblemente del 10%, más preferiblemente del 8, 6, 5,
4,3, 2, 1 o el 0% en ese orden o preferencia, con la secuencia de
ácido nucleico como se ilustra en cualquiera de las SEC ID Nº: 1, 3,
5, 7, 9, 11, 13 ó 15.
Otra realización se refiere a un ácido nucleico
que codifica una proteína de 58,2 kD de Ornithobacterium
rhinotracheale Or02, o una parte de dicho ácido nucleico que
codifica un fragmento inmunogénico de dicha proteína, donde dicho
ácido nucleico o dicha parte del mismo tiene una homología de al
menos el 80% con el ácido nucleico del gen de proteína de
Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID
Nº: 3.
\global\parskip1.000000\baselineskip
Preferiblemente, un ácido nucleico de acuerdo
con la invención que codifica esta proteína de 58,2 kD de
Ornithobacterium rhinotracheale o una parte de ese ácido
nucleico que codifica una fragmento inmunogénico de esa proteína
tiene una homología de al menos el 85%, preferiblemente del 90%,
más preferiblemente del 95% con el ácido nucleico del gen de
proteína de Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra
en la SEC ID Nº: 3.
Se prefiere incluso más un nivel de homología
del 98%, del 99% o incluso del 100%.
Otra realización más se refiere a un ácido
nucleico que codifica una proteína de 46,0 kD de Ornithobacterium
rhinotracheale Or03 o una parte de dicho ácido nucleico que
codifica un fragmento inmunogénico de dicha proteína, donde dicho
ácido nucleico o dicha parte del mismo tiene una homología de al
menos el 80% con el ácido nucleico del gen de proteína de
Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID
Nº: 5.
Preferiblemente, un ácido nucleico de acuerdo
con la invención que codifica esta proteína de 46,0 kD de
Ornithobacterium rhinotracheale o una parte de ese ácido
nucleico que codifica un fragmento inmunogénico de esa proteína
tiene una homología de al menos el 85%, preferiblemente del 90%,
más preferiblemente del 95% con el ácido nucleico del gen de
proteína de Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra
en la SEC ID Nº: 5.
Se prefiere incluso más un nivel de homología
del 98%, del 99% o incluso del 100%.
De nuevo, otra realización se refiere a un ácido
nucleico que codifica una proteína de 37,2 kD de Ornithobacterium
rhinotracheale Or04 o una parte de dicho ácido nucleico que
codifica un fragmento inmunogénico de dicha proteína, donde dicho
ácido nucleico o dicha parte del mismo tiene una homología de al
menos el 80% con el ácido nucleico del gen de proteína de
Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID
Nº: 7.
Preferiblemente, un ácido nucleico de acuerdo
con la invención que codifica esta proteína de 37,2 kD de
Ornithobacterium rhinotracheale o una parte de ese ácido
nucleico que codifica un fragmento inmunogénico de esa proteína
tiene una homología de al menos el 85%, preferiblemente del 90%,
más preferiblemente del 95% con el ácido nucleico del gen de
proteína de Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra
en la SEC ID Nº: 7.
Se prefiere incluso más un nivel de homología
del 98%, del 99% o incluso del 100%.
Otra realización se refiere a un ácido nucleico
que codifica una proteína de 45,6 kD de Ornithobacterium
rhinotracheale Or11 o una parte de dicho ácido nucleico que
codifica un fragmento inmunogénico de dicha proteína, donde dicho
ácido nucleico o dicha parte del mismo tiene una homología de al
menos el 80% con el ácido nucleico del gen de proteína de
Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID
Nº: 9.
Preferiblemente, un ácido nucleico de acuerdo
con la invención que codifica esta proteína de 45,6 kD de
Ornithobacterium rhinotracheale o una parte de ese ácido
nucleico que codifica un fragmento inmunogénico de esa proteína
tiene una homología de al menos el 85%, preferiblemente del 90%,
más preferiblemente del 95% con el ácido nucleico del gen de
proteína de Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra
en la SEC ID Nº: 9.
Se prefiere incluso más un nivel de homología
del 98%, del 99% o incluso del 100%.
De nuevo, otra realización se refiere a un ácido
nucleico que codifica una proteína de 42,2 kD de Ornithobacterium
rhinotracheale Or77 o una parte de dicho ácido nucleico que
codifica un fragmento inmunogénico de dicha proteína, donde dicho
ácido nucleico o dicha parte del mismo tiene una homología de al
menos el 80% con el ácido nucleico del gen de proteína de
Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID
Nº: 11.
Preferiblemente, un ácido nucleico de acuerdo
con la invención que codifica esta proteína de 42,2 kD de
Ornithobacterium rhinotracheale o una parte de ese ácido
nucleico que codifica un fragmento inmunogénico de esa proteína
tiene una homología de al menos el 85%, preferiblemente del 90%,
más preferiblemente del 95% con el ácido nucleico del gen de
proteína de Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra
en la SEC ID Nº: 11.
Se prefiere incluso más un nivel de homología
del 98%, del 99% o incluso del 100%.
También, otra realización se refiere a un ácido
nucleico que codifica una proteína de 34,0 kD de Ornithobacterium
rhinotracheale Or98A o una parte de dicho ácido nucleico que
codifica un fragmento inmunogénico de dicha proteína, donde dicho
ácido nucleico o dicha parte del mismo tiene una homología de al
menos el 80% con el ácido nucleico del gen de proteína de
Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID
Nº: 13.
Preferiblemente, un ácido nucleico de acuerdo
con la invención que codifica esta proteína de 34,0 kD de
Ornithobacterium rhinotracheale o una parte de ese ácido
nucleico que codifica un fragmento inmunogénico de esa proteína
tiene una homología de al menos el 85%, preferiblemente del 90%,
más preferiblemente del 95% con el ácido nucleico del gen de
proteína de Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra
en la SEC ID Nº: 13.
Se prefiere incluso más un nivel de homología
del 98%, del 99% o incluso del 100%.
\newpage
Otra realización se refiere a un ácido nucleico
que codifica una proteína de 32,9 kD de Ornithobacterium
rhinotracheale Or98B o una parte de dicho ácido nucleico que
codifica un fragmento inmunogénico de dicha proteína, donde dicho
ácido nucleico o dicha parte del mismo tiene una homología de al
menos el 80% con el ácido nucleico del gen de proteína de
Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID
Nº: 15.
Preferiblemente, un ácido nucleico de acuerdo
con la invención que codifica esta proteína de 32,9 kD
Ornithobacterium rhinotracheale o una parte de ese ácido
nucleico que codifica un fragmento inmunogénico de esa proteína
tiene una homología de al menos el 85%, preferiblemente del 90%,
más preferiblemente del 95% con el ácido nucleico del gen de
proteína de Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra
en la SEC ID Nº: 15.
Se prefiere incluso más un nivel de homología
del 98%, del 99% o incluso del 100%.
También pertenecen al alcance de la invención
secuencias de nucleótidos que son complementarias a la secuencia
ilustrada en la SEC ID Nº 1, 3, 5, 7, 9, 11,13 ó 15 o secuencias de
nucleótidos que comprenden series en tándem de las secuencias de
acuerdo con la invención.
Ya que la presente invención describe ácidos
nucleicos que codifican 8 proteínas novedosas de Ornithobacterium
rhinotracheale, ahora por primera vez es posible obtener estas
proteínas en cantidades significativas. Esto se puede realizar, por
ejemplo, usando sistemas de expresión para expresar la totalidad o
partes de un gen que codifica la proteína o un fragmento
inmunogénico del mismo.
Por lo tanto, en una forma preferida de esta
realización, la invención se refiere a fragmentos de ADN que
comprenden un ácido nucleico de acuerdo con la invención. Un
fragmento de ADN es un tramo de nucleótidos que funciona como un
vehículo para un ácido nucleico de acuerdo con la invención. Tales
fragmentos de ADN pueden ser, por ejemplo, plásmidos, en los que se
clona un ácido nucleico de acuerdo con la invención. Tales
fragmentos de ADN son útiles, por ejemplo, para aumentar la
cantidad de ADN para el uso como un cebador y para la expresión de
un ácido nucleico de acuerdo con la invención, como se describe más
adelante.
Un requisito esencial para la expresión del
ácido nucleico es un promotor adecuado unido funcionalmente al
ácido nucleico, de tal forma que el ácido nucleico esté bajo el
control del promotor. Es obvio para el especialista en la técnica
que la elección de un promotor se extiende a cualquier promotor
eucariota, procariota o vírico capaz de dirigir la transcripción
génica en células usadas como células hospedadoras para la expresión
de proteína. Por lo tanto, una forma más preferida de esta
realización se refiere a una molécula de ADN recombinante que
comprende un fragmento de ADN y/o un ácido nucleico de acuerdo con
la invención, donde el ácido nucleico de acuerdo con la invención
se pone bajo el control de un promotor unido funcionalmente. Esto se
puede obtener mediante, por ejemplo, técnicas de biología molecular
convencionales.
(Maniatis/Sambrook (Sambrook, J. Molecular
cloning: a laboratory manual, 1989. ISBN
0-87969-309-6). Los
promotores unidos funcionalmente son promotores que son capaces de
controlar la transcripción de los ácidos nucleicos a los que se
unen. Tal promotor puede ser el promotor nativo del gen novedoso, es
decir, el promotor que está implicado en la transcripción del ácido
nucleico que codifica una proteína de acuerdo con la invención u
otro promotor de Ornithobacterium rhinotracheale, suponiendo
que ese promotor sea funcional en la célula usada para la
expresión. También puede ser un promotor heterólogo. Cuando las
células hospedadoras son bacterias, las secuencias de control de la
expresión útiles que se pueden usar incluyen el promotor y el
operador de Trp (Goeddel, et al., Nucl Acids Res., 8, 4057,
1980); el promotor y operador lac (Chang, et al., Nature,
275, 615, 1978); el promotor de proteína de membrana externa
(Nakamura, K. y Inouge, M., EMBO J., 1,
771-775,1982); los promotores y operadores de
bacteriófago lambda (Remaut, E. et al., Nucl. Acids Res., 11,
4677-4688, 1983); el promotor y operador de
\alpha-amilasa (B. subtilis), secuencias de
terminación y otras secuencias de mejora y control de la expresión
compatibles con la célula hospedadora seleccionada. Cuando la célula
hospedadora es una levadura, las secuencias de control de la
expresión útiles incluyen, por ejemplo, factor de apareamiento
\alpha. Para células de insecto, se pueden usar los promotores de
polihedrina o p10 de baculovirus (Smith, G. E. et al., Mol.
Cell. Biol. 3, 2156-65, 1983). Cuando la célula
hospedadora es de origen vertebrado, las secuencias de control de
la expresión útiles ilustrativas incluyen el promotor temprano
inmediato de citomegalovirus (humano) (Seed, B. et al.,
Nature 329, 840-842,1987; Fynan, E. F. et
al., PNAS 90, 11478-11482, 1993; Ulmer, J. B.
et al, Science 259, 1745-1748, 1993), LTR de
virus de sarcoma de Rous (RSV, Gorman, C. M. et al., PNAS
79, 6777-6781, 1982; Fynan et al.,
anteriormente; Ulmer et al., anteriormente), el LTR de MPSV
(Stacey et al, J. Virology 50,
725-732,1984), el promotor temprano inmediato de
SV40 (Sprague J. et al., J. Virology 45, 773, 1983), el
promotor de SV40 (Berman, P. W. et al., Science, 222,
524-527, 1983), el promotor de metalotioneína
(Brinster, R. L. et al., Nature 296, 39-42,
1982), el promotor de choque térmico (Voellmy et al., Proc.
Natl. Acad. Sci. USA, 82, 4949-53, 1985), el
promotor tardío principal de Ad2 y el promotor de
\beta-actina (Tang et al., Nature 356
152-154, 1992). Las secuencias reguladoras también
pueden incluir secuencias terminadoras y de
poli-adenilación. Entre las secuencias que se pueden
usar están la secuencia bien conocida de
poli-adenilación de hormona de crecimiento bovino,
la secuencia de poli-adenilación de SV40, las
secuencias terminadoras y de poli-adenilación de
citomegalovirus humano (hCMV).
Los sistemas de expresión de células
bacterianas, de levadura, fúngicas, de insecto y de vertebrados son
sistemas usados muy frecuentemente. Tales sistemas se conocen bien
en la técnica y están disponibles de forma general, por ejemplo, en
el mercado por Clontech Laboratories, Inc. 4030 Fabian Way, Palo
Alto, California 94303-4607, EEUU. Además de estos
sistemas de expresión, los sistemas de expresión basados en
parásitos son sistemas de expresión atractivos. Tales sistemas se
describen, por ejemplo, en la Solicitud de Patente Francesa con el
Nº de Publicación 2 714 074 y en la Publicación NTIS de Estados
Unidos Nº US 08/043109 (Hoffman, S. y Rogers, W.: Public. Fecha 1 de
diciembre de 1993).
Una forma incluso más preferida de esta
realización de la invención se refiere a Vehículos Recombinantes
Vivos (LRC) que comprenden un ácido nucleico que codifica una
proteína de Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento
inmunogénico de la misma de acuerdo con la invención, un fragmento
de ADN de acuerdo con la invención o una molécula de ADN
recombinante de acuerdo con la invención. Estos LRC son
microorganismos o virus en los que se ha clonado información
genética adicional, en este caso, un ácido nucleico que codifica una
proteína de Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento
inmunogénico de la misma, un fragmento de ADN o una molécula de ADN
recombinante de acuerdo con la invención. Los pollos infectados por
tales LRC producirán una respuesta inmunológica no solamente contra
los inmunógenos del vehículo, sino también contra las partes
inmunogénicas de la proteína o las proteínas para las que se clona
el código genético adicionalmente en el LRC, por ejemplo, un gen de
proteína de Ornithobacterium rhinotracheale de acuerdo con la
invención.
Como un ejemplo de LRC bacteriano, se pueden
usar cepas atenuadas de Salmonella conocidas en la técnica de forma
muy atractiva. Además, también se han descrito entre otras cosas
parásitos portadores recombinantes vivos por Vermeulen, A. N. (Int.
Journ. Parasitol. 28: 1121 -1130 (1998)). Además, se pueden usar
virus LRC como un modo de transportar el ácido nucleico al interior
de una célula diana. Los virus portadores recombinantes vivos
también se denominan virus vectores. Los virus usados con frecuencia
como vectores son virus Vaccinia (Panicali et al. 1982,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79: 4927(1982)), virus herpes
(documento EP 0473210-A2) y retrovirus (Valerio, D.
et al. en: Baum, S. J., Dicke, K. A., Lotzova, E. y Pluznik,
D. H. (Eds.), "Experimental Haematology today" 1988, Springer
Verlag, New York, págs. 92-99 (1989)). Los virus
conocidos y usados en la técnica como virus vectores muy adecuados
específicamente en aves de corral son virus de peste aviar, virus de
Marek serotipo 3, virus Herpes de Pavo, virus Semliki Forest y virus
de Enfermedad de Newcastle.
Los Vehículos Recombinantes Vivos también se
conocen en la técnica como "vectores vivos", o de forma
resumida, "vectores". Por lo tanto, las vacunas basadas en un
Vehículo Recombinante Vivo también se conocen en la técnica como
vacunas de vector.
La técnica de recombinación homóloga in
vivo, bien conocida en la técnica, se puede usar para introducir
un ácido nucleico recombinante en el genoma de una bacteria,
parásito o virus de elección, capaz de inducir la expresión del
ácido nucleico insertado de acuerdo con la invención en el animal
hospedador.
Finalmente, otra forma de esta realización de la
invención se refiere a una célula hospedadora que comprende un
ácido nucleico de acuerdo con una proteína de acuerdo con la
invención, un fragmento de ADN que comprende tal ácido nucleico o
una molécula de ADN recombinante que comprende tal ácido nucleico
bajo el control de un promotor unido funcionalmente. Esta forma
también se refiere a una célula hospedadora que contiene un vehículo
recombinante vivo que comprende una molécula de ácido nucleico que
codifica una proteína de Ornithobacterium rhinotracheale o
un fragmento inmunogénico de la misma de acuerdo con la invención.
Una célula hospedadora puede ser una célula de origen bacteriano,
por ejemplo, Escherichia coli, Bacillus subtilis y especies
de Lactobacillus, en combinación con plásmidos basados en
bacterias como pBR322, o vectores de expresión bacterianos tales
como pGEX o con bacteriófagos. La célula hospedadora también puede
ser de origen eucariota, por ejemplo, células de levadura en
combinación con moléculas de vector específico de levadura o células
eucariotas superiores como células de insecto (Luckow et al;
Bio-technology 6: 47-55 (1988)) en
combinación con vectores o baculovirus recombinantes, células
vegetales en combinación, por ejemplo, con vectores basados en
plásmido Ti o vectores víricos de plantas (Barton, K. A. et
al; Cell 32: 1033 (1983), células de mamífero como células Hela,
células de Ovario de Hámster Chino (CHO) o células de Riñón Felino
Crandell, también con vectores o virus recombinantes apropiados.
Otra realización de la invención se refiere a
una proteína de Ornithobacterium rhinotracheale y fragmentos
inmunogénicos de la misma de acuerdo con la invención.
El concepto de fragmentos inmunogénicos se
definirá más adelante.
Una forma de esta realización se refiere a una
proteína de 59,8 kD de Ornithobacterium rhinotracheale y a
fragmentos inmunogénicos de la misma que tienen una homología de
secuencia de aminoácidos de al menos el 80% con la secuencia de
aminoácidos como se ilustra en la SEC ID Nº: 2.
En una forma preferida, la realización se
refiere a tales proteínas de Ornithobacterium rhinotracheale
y fragmentos inmunogénicos de las mismas, que tienen una homología
de secuencia de al menos el 85%, preferiblemente del 90%, más
preferiblemente el 95% de homología con la secuencia de aminoácidos
como se ilustra en la SEC ID Nº: 2. Se prefiere incluso más un nivel
de homología del 98%, del 99% o incluso del 100%.
El nivel de homología de proteína se puede
determinar con el programa informático "BLAST 2 SEQUENCES"
seleccionando el sub-programa: "BLASTP", que se
puede encontrar en
www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/bl2seq/bl2.html.
\newpage
Una referencia para este programa es Tatiana A.
Tatusova, Thomas L. Madden FEMS Microbiol. Letters 174:
247-250 (1999). La matriz usada: "blosum62".
Los parámetros usados son los parámetros por defecto:
Hueco abierto: 11. Extensión de hueco: 1.
Disminución x de hueco: 50.
Otra forma de esta realización se refiere a una
proteína de 58,2 kD de Ornithobacterium rhinotracheale y a
fragmentos inmunogénicos de la misma, que tienen una homología de
secuencia de aminoácidos de al menos el 80% con la secuencia de
aminoácidos como se ilustra en la SEC ID Nº: 4.
En una forma preferida, la realización se
refiere a tales proteínas de Ornithobacterium rhinotracheale
y fragmentos inmunogénicos de las mismas, que tienen una homología
de secuencia de al menos el 85%, preferiblemente del 90%, más
preferiblemente del 95% de homología con la secuencia de aminoácidos
como se ilustra en la SEC ID Nº: 4. Se prefiere incluso más un
nivel de homología del 98%, del 99% o incluso del 100%.
Otra forma más de esta realización se refiere a
una proteína de 46,0 kD de Ornithobacterium rhinotracheale y
a fragmentos inmunogénicos de la misma, que tienen una homología de
secuencia de aminoácidos de al menos el 80% con la secuencia de
aminoácidos como se ilustra en la SEC ID Nº: 6.
En una forma preferida, la realización se
refiere a tales proteínas de Ornithobacterium rhinotracheale
y fragmentos inmunogénicos de las mismas, que tienen una homología
de secuencia de al menos el 85%, preferiblemente del 90%, más
preferiblemente del 95% de homología con la secuencia de aminoácidos
como se ilustra en la SEC ID Nº: 6. Se prefiere incluso más un
nivel de homología del 98%, del 99% o incluso del 100%.
De nuevo, otra forma de esta realización se
refiere a una proteína de 37,2 kD de Ornithobacterium
rhinotracheale y a fragmentos inmunogénicos de la misma, que
tienen una homología de secuencia de aminoácidos de al menos el 80%
con la secuencia de aminoácidos como se ilustra en la SEC ID Nº:
8.
En una forma preferida, la realización se
refiere a tales proteínas de Ornithobacterium rhinotracheale
y fragmentos inmunogénicos de las mismas, que tienen una homología
de secuencia de al menos el 85%, preferiblemente del 90%, más
preferiblemente del 95% de homología con la secuencia de aminoácidos
como se ilustra en la SEC ID Nº: 8. Se prefiere incluso más un
nivel de homología del 98%, del 99% o incluso del 100%.
Otra forma más de esta realización se refiere a
una proteína de 45,6 kD de Ornithobacterium rhinotracheale y
a fragmentos inmunogénicos de la misma, que tienen una homología de
secuencia de aminoácidos de al menos el 80% con la secuencia de
aminoácidos como se ilustra en la SEC ID Nº: 10.
En una forma preferida, la realización se
refiere a tales proteínas de Ornithobacterium rhinotracheale
y fragmentos inmunogénicos de las mismas, que tienen una homología
de secuencia de al menos el 85%, preferiblemente del 90%, más
preferiblemente del 95% de homología con la secuencia de aminoácidos
como se ilustra en la SEC ID Nº: 10. Se prefiere incluso más un
nivel de homología del 98%, del 99% o incluso del 100%.
Otra forma más de esta realización se refiere a
una proteína de 42,2 kD de Ornithobacterium rhinotracheale y
a fragmentos inmunogénicos de la misma, que tienen una homología de
secuencia de aminoácidos de al menos el 80% con la secuencia de
aminoácidos como se ilustra en la SEC ID Nº: 12.
En una forma preferida, la realización se
refiere a tales proteínas de Ornithobacterium rhinotracheale
y a fragmentos inmunogénicos de las mismas, que tienen una
homología de secuencia de al menos el 85%, preferiblemente del 90%,
más preferiblemente el 95% de homología con la secuencia de
aminoácidos como se ilustra en la SEC ID Nº: 12. Se prefiere
incluso más un nivel de homología del 98%, del 99% o incluso del
100%.
Y de nuevo, otra forma de esta realización se
refiere a una proteína de 34,0 kD de Ornithobacterium
rhinotracheale y a fragmentos inmunogénicos de la misma, que
tienen una homología de secuencia de aminoácidos de al menos el 80%
con la secuencia de aminoácidos como se ilustra en la SEC ID Nº:
14.
En una forma preferida, la realización se
refiere a tales proteínas de Ornithobacterium rhinotracheale
y a fragmentos inmunogénicos de las mismas, que tienen una
homología de secuencia de al menos el 85%, preferiblemente del 90%,
más preferiblemente el 95% de homología con la secuencia de
aminoácidos como se ilustra en la SEC ID Nº: 14. Se prefiere
incluso más un nivel de homología del 98%, del 99% o incluso del
100%.
Finalmente, otra forma de esta realización se
refiere a una proteína de 32,9 kD de Ornithobacterium
rhinotracheale y a fragmentos inmunogénicos de la misma, que
tienen una homología de secuencia de aminoácidos de al menos el 80%
con la secuencia de aminoácidos como se ilustra en la SEC ID Nº:
16.
En una forma preferida, la realización se
refiere a tales proteínas de Ornithobacterium rhinotracheale
y a fragmentos inmunogénicos de las mismas, que tienen una
homología de secuencia de al menos el 85%, preferiblemente del 90%,
más preferiblemente el 95% de homología con la secuencia de
aminoácidos como se ilustra en la SEC ID Nº: 16. Se prefiere
incluso más un nivel de homología del 98%, del 99% o incluso del
100%.
Otra forma de esta realización se refiere a
tales proteínas de Ornithobacterium rhinotracheale y
fragmentos inmunogénicos de dichas proteínas de acuerdo con la
invención, donde las proteínas y los fragmentos inmunogénicos de
las mismas están codificados por un ácido nucleico de acuerdo con la
invención.
Se comprenderá que, para las proteínas
particulares incluidas en este documento, pueden existir variaciones
naturales entre cepas individuales de Ornithobacterium
rhinotracheale. Estas variaciones se pueden demostrar por una
diferencia o diferencias de aminoácidos en la secuencia global o por
deleciones, sustituciones, inserciones, inversiones o adiciones de
un aminoácido o aminoácidos en dicha secuencia. Las sustituciones de
aminoácidos que no alteran esencialmente las actividades biológicas
e inmunológicas se han descrito, por ejemplo, por Neurath et
al en "The Proteins" Academic Press New York (1979). Las
sustituciones de aminoácidos entre aminoácidos relacionados o
sustituciones que han tenido lugar frecuentemente en la evolución
son, entre otras, Ser/Ala, Ser/Gly, Asp/Gly, Asp/Asn, IIe/Val
(véase Dayhof, M. D., Atlas of protein sequence and structure, Nat.
Biomed. Res. Found., Washington D.C., 1978, vol. 5, supl. 3). Otras
sustituciones de aminoácidos incluyen Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly,
Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Thr/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Leu/Ile,
Leu/Val y Ala/Glu. Basándose en esta información, Lipman y Pearson
desarrollaron un método para la comparación rápida y sensible de
proteínas (Science, 227, 1435-1441, 1985) y para
determinar la similitud funcional entre proteínas homólogas. Tales
sustituciones de aminoácidos de las realizaciones ilustrativas de
esta invención, así como variaciones que tienen deleciones y/o
inserciones, pertenecen al alcance de la invención siempre que las
proteínas resultantes conserven su inmunorreactividad. Esto explica
por qué las proteínas de Ornithobacterium rhinotracheale de
acuerdo con la invención, cuando se aíslan de diferentes aislados de
campo, puede tener niveles de homología de tan solo el 80%,
mientras que todavía representan la misma proteína con las mismas
características inmunológicas. Las variaciones en la secuencia de
aminoácidos de una cierta proteína de acuerdo con la invención que
todavía proporcionan una proteína capaz de inducir una respuesta
inmune contra infección por Ornithobacterium rhinotracheale
o al menos contra las manifestaciones clínicas de la infección se
consideran "que no influyen esencialmente en la
inmunogenicidad".
Cuando una proteína se usa, por ejemplo, con
propósitos de vacunación para generar anticuerpos, sin embargo, no
es necesario usar toda la proteína. También es posible usar un
fragmento de esta proteína que sea capaz, como tal o acoplado a un
vehículo tal como, por ejemplo, KLH, de inducir una respuesta inmune
contra esa proteína, un denominado fragmento inmunogénico. Se
entiende que un "fragmento inmunogénico" es un fragmento de la
proteína de longitud completa que todavía ha conservado su
capacidad de inducir una respuesta inmune en un hospedador
vertebrado, por ejemplo, comprende un epítopo de célula B o T. En
resumen, un fragmento inmunogénico es un fragmento que es capaz de
inducir una respuesta antigénica contra una proteína de
Ornithobacterium rhinotracheale de acuerdo con la invención.
En este momento, está disponible una diversidad de técnicas para
identificar de forma sencilla fragmentos de ADN que codifican
fragmentos antigénicos (determinantes). El método descrito por
Geysen et al (Solicitud de Patente WO 84/03564, Solicitud de
Patente WO 86/06487, Patente de Estados Unidos Nº 4.833.092, Proc.
Natl Acad. Sci. 81: 3998-4002 (1984), J. Imm. Meth.
102, 259-274 (1987), el denominado método PEPSCAN
es un método fácil de realizar, rápido y bien establecido para la
detección de epítopos; las regiones inmunológicamente importante de
la proteína. El método se usa a nivel mundial y, como tal, se conoce
bien por el especialista en la técnica. Este método (empírico) es
especialmente adecuado para la detección de epítopos de células B.
También, dada la secuencia del gen que codifica cualquier proteína,
los algoritmos informáticos son capaces de indicar fragmentos de
proteína específicos como los epítopos inmunológicamente
importantes basándose en su concordancia secuencial y/o estructural
con epítopos que ahora se conocen. La determinación de estas
regiones está basada en una combinación de los criterios de
hidrofilicidad de acuerdo con Hopp y Woods (Proc. Natl. Acad. Sci.
78: 38248-3828 (1981)) y los aspectos de estructura
secundaria de acuerdo con Chou y Fasman (Advances in Enzymology 47:
45-148 (1987) y Patente de Estados Unidos Nº
4.554.101). Los epítopos de células T se pueden predecir asimismo a
partir de la secuencia por ordenador con la ayuda del criterio de
anfifilicidad de Berzofsky (Science 235, 1059-1062
(1987) y Solicitud de Patente de Estados Unidos 07/005.885). Una
revisión condensada se encuentra en Shan Lu en common principles:
Tibtech 9: 238-242 (1991), Good et al en
Malaria epitopes; Science 235: 1059-1062 (1987), Lu
para una revisión; Vaccine 10: 3-7 (1992),
Berzofsky para HIV-epitopes; The FASEB Journal 5:
2412-2418 (1991). Un fragmento inmunogénico tiene
habitualmente una longitud mínima de 8 aminoácidos, preferiblemente
más de 8, tal como 9, 10, 12, 15 o incluso 20 aminoácidos. Los
ácidos nucleicos que codifican tal fragmento, por lo tanto, tienen
una longitud de al menos 24, pero preferiblemente 27, 30, 36, 45 o
incluso 60 ácidos
nucleicos.
nucleicos.
Por lo tanto, una forma de otra realización más
de la invención se refiere a vacunas para combatir infección por
Ornithobacterium rhinotracheale, que comprenden una proteína
de Ornithobacterium rhinotracheale o fragmentos inmunogénicos
de la misma, de acuerdo con la invención como se ha descrito
anteriormente junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Otra realización más de la presente invención se
refiere a una proteína de Ornithobacterium rhinotracheale de
acuerdo con la invención o fragmentos inmunogénicos de la misma para
el uso en una vacuna.
Otra realización más de la presente invención se
refiere al uso de un ácido nucleico, o fragmento de ADN, una
molécula de ADN recombinante, un vehículo recombinante vivo, una
célula hospedadora o un proteína o un fragmento inmunogénico de la
misma de acuerdo con la invención para la fabricación de una vacuna
para combatir la infección por Ornithobacterium
rhinotracheale.
\newpage
Un modo de preparar una vacuna de acuerdo con la
invención es cultivar la bacteria, seguido de purificación
bioquímica de una proteína de Ornithobacterium rhinotracheale
o un fragmento inmunogénico de la misma, de la bacteria. Sin
embargo, esto es un modo para preparar la vacuna que requiere mucho
tiempo.
Por lo tanto, es mucho más conveniente usar los
productos de expresión del gen que codifica una proteína de
Ornithobacterium rhinotracheale o fragmentos inmunogénicos de
la misma en vacunas. Esto es posible por primera vez ahora debido a
que en la presente invención se proporcionan los ácidos nucleicos
que codifican las proteínas de Ornithobacterium
rhinotracheale.
Las vacunas basadas en los productos de
expresión de estos genes se pueden preparar de forma sencilla
mezclando la proteína de acuerdo con la invención o fragmentos
inmunogénicos de la misma de acuerdo con la invención con un
vehículo farmacéuticamente aceptable como se describe más
adelante.
Alternativamente, una vacuna de acuerdo con la
invención puede comprender vehículos recombinantes vivos como se ha
descrito anteriormente, capaces de expresar la proteína de acuerdo
con la invención o fragmentos inmunogénicos la misma. Tales
vacunas, por ejemplo, basadas en un vehículo de Salmonella o
un vehículo vírico, por ejemplo, un vector de virus Herpes tiene la
ventaja con respecto a vacunas de subunidades que imitan mejor el
modo natural de infección de Ornithobacterium
rhinotracheale. Además, su auto-propagación es
una ventaja, ya que solamente son necesarias pequeñas cantidades
del vehículo recombinante para la inmunización.
Las vacunas también se pueden basar en células
hospedadoras como se ha descrito anteriormente, que comprenden la
proteína o fragmentos inmunogénicos de la misma de acuerdo con la
invención.
Todas las vacunas que se han descrito
anteriormente contribuyen a la vacunación activa, es decir, activan
el sistema de defensa del hospedador.
Alternativamente, se pueden generar anticuerpos,
por ejemplo, en conejos o se pueden obtener a partir de líneas
celulares productoras de anticuerpos como se describe más adelante.
Tales anticuerpos se pueden administrar entonces a los pollos. Este
método de vacunación, vacunación pasiva, es la vacunación de
elección cuando un animal ya está infectado y no hay tiempo para
permitir que se active la respuesta inmune natural. También es el
método preferido para vacunar animales que tienden a alta presión
de infección repentina. Los anticuerpos administrados contra la
proteína de acuerdo con la invención o fragmentos inmunogénicos de
la misma, en estos casos, se unen directamente a Ornithobacterium
rhinotracheale. Esto tiene la ventaja de que disminuye o
detiene la multiplicación de Ornithobacterium rhinotracheale.
Por lo tanto, otra forma más de esta realización de la invención se
refiere a una vacuna para combatir infección por Ornithobacterium
rhinotracheale que comprende anticuerpos contra una proteína de
Ornithobacterium rhinotracheale de acuerdo con la invención o
un fragmento inmunogénico de esa proteína y un vehículo
farmacéuticamente aceptable.
Otra realización más de esta invención se
refiere a anticuerpos contra una proteína de Ornithobacterium
rhinotracheale de acuerdo con la invención o un fragmento
inmunogénico de esa proteína.
Los métodos para la producción a gran escala de
anticuerpos de acuerdo con la invención también se conocen en la
técnica. Tales métodos dependen de la clonación de (fragmentos de)
la información genética que codifica la proteína de acuerdo con la
invención en un fago filamentoso para la presentación en fagos.
Tales técnicas se describen, entre otros, en la "Antibody
Engineering Page" bajo "filamentous phage display" en
http://aximt1.imt.uni-marburg.de/-rek/aepphage.html.
y en artículos de revisión de Cortese, R. et al., (1994) en
Trends Biotechn. 12: 262-267; de Clarckson, T.
& Wells, J. A. (1994), en Trends Biotechn. 12:
173-183; por Marks, J. D. et al., (1992) en
J. Biol. Chem. 267: 16007-16010; por Winter, G.
et al., (1994) en Annu. Rev. Immunol. 12:
433-455 y por Little, M. et al., (1994)
Biotechn. Adv. 12: 539-555. Los fagos se usan
posteriormente para explorar bibliotecas de expresión de camélido
que expresan anticuerpos de cadena pesada de camélido. (Muyldermans,
S. y Lauwereys, M., Journ. Molec. Recogn. 12:
131-140 (1999) y Ghahroudi, M. A., et al.,
FEBS Letters 414: 512-526 (1997)). Las células de
la biblioteca que expresan los anticuerpos deseados se pueden
replicar y se pueden usar posteriormente para expresión a gran
escala de anticuerpos.
Otra realización más se refiere a un método para
la preparación de una vacuna de acuerdo con la invención que
comprende la mezcla de anticuerpos de acuerdo con la invención y un
vehículo farmacéuticamente aceptable.
Un modo alternativo y eficaz de vacunación es la
vacunación directa con ADN que codifica el antígeno pertinente. La
vacunación directa con ADN que codifica proteínas ha sido exitosa
para muchas proteínas diferentes. (Como se revisa, por ejemplo, en
Donnelly et al., The Immunologist 2: 20-26
(1993)). Este modo de vacunación también es muy atractivo para la
vacunación de pollo contra la infección por Ornithobacterium
rhinotracheale. Por lo tanto, otras formas más de esta
realización de la invención se refieren a vacunas que comprenden
ácidos nucleicos que codifican una proteína de acuerdo con la
invención o fragmentos inmunogénicos de la misma, que comprenden
fragmentos de ADN que comprenden tales ácido nucleicos o que
comprenden moléculas de ADN recombinante de acuerdo con la invención
y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Los ejemplos de plásmido de ADN que son
adecuados para el uso en una vacuna de ADN de acuerdo con la
invención son plásmido de clonación o expresión convencionales para
células hospedadoras bacterianas, eucariotas y de levadura, estando
muchos de dichos plásmidos disponibles en el mercado. Los ejemplos
bien conocidos de tales plásmidos son pBR322 y pcDNA3 (Invitrogen).
Los fragmentos de ADN o las moléculas de ADN recombinante de acuerdo
con la invención deben ser capaces de inducir la expresión de
proteína de las secuencias de nucleótidos. Los fragmentos de ADN o
las moléculas de ADN recombinante pueden comprender una o más
secuencias de nucleótidos de acuerdo con la invención. Además, los
fragmentos de ADN o las moléculas de ADN recombinante pueden
comprender otras secuencias de nucleótidos tales como los
oligonucleótidos inmunoestimulantes que tienen dinucleótidos CpG no
metilados o secuencias de nucleótidos que codifican otras proteínas
antigénicas o citocinas de potenciación con adyuvante.
La secuencia de nucleótidos de acuerdo con la
presente invención o el plásmido de ADN que comprende una secuencia
de nucleótidos de acuerdo con la presente invención, preferiblemente
unido operativamente a una secuencia reguladora de la
transcripción, a usar en la vacuna de acuerdo con la invención,
puede estar desnudo o empaquetado en un sistema de suministro. Los
sistemas de suministro adecuados son vesículas lipídicas, iscoms,
dendrómeros, niosomas, matrices de polisacáridos y similares (véase
más adelante), todos conocidos bien en la técnica. También muy
adecuadas como sistema de suministro son bacterias vivas atenuadas
tales como especies de Salmonella y virus vivos atenuados
tales como vectores de virus Herpes, como se ha mencionado
anteriormente.
Las vacunas de ADN se pueden administrar, por
ejemplo, de forma sencilla mediante aplicación intradérmica tal
como por el uso de un inyector sin aguja. Este modo de
administración suministra el ADN directamente a las células del
animal a vacunar. Las cantidades de ADN en el intervalo entre 10 pg
y 1000 \mug proporcionan buenos resultados. Preferiblemente, se
usan cantidades en el intervalo de microgramos entre 1 y 100
\mug.
En una realización adicional, la vacuna de
acuerdo con la presente invención comprende uno o más antígenos
adicionales obtenidos de un virus o microorganismo patógeno para
aves de corral, un anticuerpo contra tal antígeno o información
genética que codifica dicho antígeno.
Por supuesto, tales antígenos pueden ser, por
ejemplo, otros antígenos de Ornithobacterium rhinotracheale.
Es beneficioso combinar, en una vacuna, dos o más de las proteínas o
fragmentos inmunogénicos de las mismas de acuerdo con la invención,
anticuerpos contra tales proteínas o fragmentos inmunogénicos de las
mismas o información genética que codifica tales proteínas o
fragmentos inmunogénicos de las mismas. Además de esto, es
beneficioso incluir en una vacuna de acuerdo con la invención
antígenos procedentes de otro microorganismo o virus patógeno para
aves de corral, un anticuerpo contra tal antígeno o información
genética que codifica dicho antígeno.
Preferiblemente, el virus o microorganismo se
selecciona entre el grupo que consiste en virus de peste aviar,
virus de Bronquitis Infecciosa, Enfermedad de Bursa Infecciosa
(Gumboro), Virus de la Enfermedad de Marek, agente de Anemia del
pollo, Reovirus Aviar, Mycoplasma gallisepticum, Virus de la
Rinotraqueitis del Pavo, Haemophilus paragallinarum
(Coriza), Poxvirus de Pollo, virus de la encefalomielitis aviar,
virus de la Peste de Pato, virus de la Enfermedad de Newcastle,
virus del síndrome de Caída de Huevo, virus de Laringotraqueitis
Infecciosa, Virus Herpes de Pavos, especies de Eimeria,
Ornithobacterium rhinotracheale, Pasteurella multocida, Mycoplasma
synoviae, especies de Salmonella y E. coli.
Las vacunas basadas en las proteínas de
Ornithobacterium rhinotracheale de acuerdo con la invención
también son muy adecuadas como vacunas marcadoras. Una vacuna
marcadora es una vacuna que permite diferenciar entre pollos
vacunados e infectados en campo, por ejemplo, basándose en el panel
de anticuerpos característico, diferente del panel de anticuerpos
inducido por infección de tipo silvestre. Se induce un panel de
anticuerpos diferente, por ejemplo, cuando una proteína
inmunogénica presente en una bacteria de tipo silvestre no está
presente en una vacuna: entonces el hospedador no preparará
anticuerpos contra esa proteína después de la vacunación. Por
tanto, una vacuna basada en una proteína de Ornithobacterium
rhinotracheale de acuerdo con la invención induciría solamente
anticuerpos contra esa proteína, mientras que una vacuna basada en
Ornithobacterium rhinotracheale de tipo silvestre vivo, vivo
atenuado o completo inactivado induciría anticuerpos contra todas o
la mayoría de las proteínas bacterianas. Un simple ensayo ELISA, que
tiene pocillos que comprenden una proteína de acuerdo con la
invención y pocillos que comprenden otra proteína de acuerdo con la
invención es suficiente para ensayar el suero de pollos y para
indicar si los pollos están vacunados con una vacuna de subunidades
de acuerdo con la invención o han padecido infección de campo por
Ornithobacterium rhinotracheale; los pollos vacunados con
una vacuna que comprende una proteína de acuerdo con la invención no
tendrían anticuerpos contra otra proteína de acuerdo con la
invención. Los pollos que se han encontrado con una infección de
campo por Ornithobacterium rhinotracheale, sin embargo,
tendrían anticuerpos contra todas las proteínas inmunogénicas de
Ornithobacterium rhinotracheale y, por tanto, también contra
otra proteína de acuerdo con la invención.
Todas las vacunas de acuerdo con la presente
invención comprenden un vehículo farmacéuticamente aceptable. Un
vehículo farmacéuticamente aceptable puede ser, por ejemplo, agua
estéril o una solución salina fisiológica estéril. En una forma más
compleja, el vehículo puede ser, por ejemplo, un tampón.
Los métodos para la preparación de una vacuna
comprenden la mezcla de una proteína o un fragmento inmunogénico de
la misma, de acuerdo con la invención y/o anticuerpos contra esa
proteína o un fragmento inmunogénico de la misma y/o un ácido
nucleico y/o un fragmento de ADN, una molécula de ADN recombinante,
un vehículo recombinante vivo o una célula hospedadora de acuerdo
con la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Las vacunas de acuerdo con la presente invención
también pueden contener en una presentación preferida una sustancia
inmunoestimuladora, un denominado adyuvante. Los adyuvantes
comprenden en general sustancias que refuerzan la respuesta inmune
del hospedador de un modo no específico. En la técnica se conocen
varios adyuvantes diferentes. Los ejemplos de adyuvantes usados
frecuentemente en vacunas de pollo son dipéptidos de muramilo,
lipopolisacáridos, varios glucanos y glicanos y Carbopol^{(R)} (un
homopolímero). La vacuna también puede comprender un denominado
"vehículo". Un vehículo es un compuesto al que se adhiere la
proteína, sin unirse covalentemente al mismo. Tales vehículos son,
entre otros, bio-microcápsulas, microalginatos,
liposomas y macrosoles, todos conocidos en la técnica. Una forma
especial de tal vehículo, en el que el antígeno se incluye
parcialmente en el vehículo, es el denominado ISCOM (documentos EP
109.942, EP 180.564, EP 242.380). Además, la vacuna puede
comprender uno o más compuestos con actividad superficial o
emulsionantes adecuados, por ejemplo, Span o Tween.
Con frecuencia, la vacuna se mezcla con
estabilizantes, por ejemplo, para proteger proteínas con tendencia
a degradación contra que sean degradadas, para mejorar la vida útil
de la vacuna o para mejorar la eficacia de secado por congelación.
Los estabilizantes útiles son, entre otros, SPGA (Bovarnik et
al; J. Bacteriology 59: 509 (1950)), hidratos de carbono, por
ejemplo, sorbitol, manitol, trehalosa, almidón, sacarosa, dextrano
o glucosa, proteínas tales como albúmina o caseína o productos de
degradación de las mismas y tampones, tales como fosfatos de metal
alcalino.
Además, la vacuna se puede suspender en un
diluyente fisiológicamente aceptable. No es necesario decir que en
la presente invención también se incluyen otros modos de potenciar
con adyuvante, añadir compuestos o diluyentes de vehículo,
emulsionar o estabilizar una proteína.
Las vacunas de acuerdo con la invención que se
basan en la proteína de acuerdo con la invención o fragmentos
inmunogénicos de la misma se pueden administrar de forma muy
adecuada en cantidades que varían entre 1 y 100 microgramos de
proteína por animal, aunque en principio se pueden usar dosis
menores. Una dosis que supera 100 microgramos, aunque
inmunológicamente será muy adecuada, será menos atractiva por
motivos comerciales.
Las vacunas basadas en un vehículo recombinante
vivo atenuado, tales como los virus y bacterias LRC que se han
descrito anteriormente, se pueden administrar en dosis mucho
menores, debido a que se multiplican por sí mismos durante la
infección. Por lo tanto, las cantidades muy adecuadas variarían
entre 10^{3} y 10^{9} UFC/UFP para, respectivamente,
bacterias/virus.
Las vacunas de acuerdo con la invención se
pueden administrar, por ejemplo, por vía intradérmica, por vía
subcutánea, por vía intramuscular, por vía intraperitoneal, por vía
intravenosa o en superficies de la mucosa tal como por vía oral o
por vía intranasal. Las vacunas de vehículo recombinante vivo o
vacunas de vector se pueden administrar de forma más eficaz por
pulverización, por aerosol o por administración en el agua de
bebida.
\vskip1.000000\baselineskip
Para la construcción de una biblioteca de
expresión de la cepa O-95029 Nº 16279 de serotipo G
de Ornithobacterium rhinotracheale se aisló ADN genómico de
células cultivadas en caldo Todd Hewitt (THB) durante 24 horas a
37ºC en un agitador de 100 rpm de acuerdo con el método descrito en
Maniatis/Sambrook (Sambrook, J. et al. Molecular cloning: a
laboratory manual. ISBN
0-87969-309-6). Se
obtuvieron fragmentos de ADN de 1-4 kb por digestión
con enzimas de restricción y se ligaron en brazos de vector
\lambdaTriplEx (Clontech, Palo Alto, CA, EEUU). Se realizó el
empaquetamiento posterior usando el extracto de empaquetamiento
in vitro de Stratagene (La Jolla, CA, EEUU). Se usaron
células de Escherichia coli XL1 Blue, cultivadas en caldo
Luria Bertani (LB) complementado con MgSO_{4} 10 mM y
maltosa al 0,2% para la transfección. La complejidad de la
biblioteca de expresión construida se ensayó 6,9 y contenía el 97%
de recombinantes.
La biblioteca de expresión de serotipo G de
Ornithobacterium rhinotracheale se exploró con antisueros
policlonales dirigidos contra organismos vivos completos de varios
serotipos de Ornithobacterium rhinotracheale. Los sueros se
recogieron de pollos de engorde que estaban vacunados por
pulverización con aerosol con bacterias vivas de
Ornithobacterium rhinotracheale de serotipo B (cepa GGD
1261), serotipo G (cepa O-95029 Nº 16279) o serotipo
M (cepa TOP 98036 4500) a las dos semanas de edad. Tres semanas más
tarde, los pollos se expusieron por vía intravenosa a serotipo A de
Ornithobacterium rhinotracheale (cepa B3263/91). Se
recogieron sueros una semana después de la exposición. Todas las
aves vacunadas mostraron patología reducida (que variaba del 10% al
60%) en comparación con aves de control no vacunadas. Antes del uso
en la exploración de la biblioteca de expresión, los antisueros se
adsorbieron con lisado de células de Escherichia coli XL1
Blue como se describe en Maniatis/Sambrook (Sambrook, J. et
al. Molecular cloning: a laboratory manual. ISBN
0-87969-309-6) para
reducir una señal de fondo específica.
La biblioteca de expresión se exploró por
transferencia de placas usando una exploración inicial de
aproximadamente 20.000 placas. El procedimiento se realizó como se
describe en el manual de los fabricantes (Clontech, Palo Alto, CA,
EEUU). Todas las exploraciones de bibliotecas se realizaron en
condiciones nativas. En resumen, las células de Escherichia
coli XL1 Blue infectadas por fagos se sembraron en agar superior
LB en placas de agar LB ambas complementadas con MgSO_{4}10 mM.
Después, las placas se incubaron a 42ºC durante 4 horas. Un disco
de filtro de nitrocelulosa (Schleicher y Schuell, Dassel, Alemania),
embebido previamente en IPTG 10 mM, se puso en cada placa para
inducir la expresión de las proteínas codificadas por los insertos
clonados de Ornithobacterium rhinotracheale. Después de 4
horas de incubación a 37ºC todos los filtros se eliminaron de las
placas. Después del lavado y el bloqueo, los filtros se incubaron
con antisuero de pollo (combinado de 10 animales, dilución 1:250).
El antisuero usado en la primera exploración se obtuvo de pollos
vacunados con vacuna viva con el serotipo G de Ornithobacterium
rhinotracheale seguido de una exposición al serotipo A de
Ornithobacterium rhinotracheale. Como anticuerpo secundario
se usó IgG de conejo anti-pollo con peroxidasa
(Nordic, Tilburg, Países Bajos) a dilución 1:1000. Como sustrato se
usó la solución Vector SG (Vector, Burlingame, CA, EEUU). De la
exploración inicial de 20.000 placas, 200 placas reactivas se
localizaron en las placas de agar y se aislaron. Se repitió una
transferencia de placa y exploración como se ha descrito
anteriormente dos veces dando como resultado 175 placas reactivas
individuales, puras. Después, los clones puros se aplicaron de
forma puntual in duplo sobre una césped de agar superior de
E. coli XL1 Blue para dar placas confluentes de
aproximadamente 5 mm de diámetro. De nuevo se realizó una
transferencia de placas y los filtros se incubaron con los
antisueros obtenidos de aves vacunadas con vacuna viva con el
serotipo B o serotipo M de Ornithobacterium rhinotracheale
antes de la exposición a serotipo A de Ornithobacterium
rhinotracheale. De las 175 placas reactivas, se seleccionaron
30 placas porque presentaban reactividad cruzada con sueros de aves
vacunadas con vacuna viva con el serotipo B, serotipo G o serotipo
M de Ornithobacterium rhinotracheale y expuestas al serotipo
A de Ornithobacterium rhinotracheale.
\vskip1.000000\baselineskip
Los insertos de ADN de las 30 placas
seleccionadas se analizaron para identificar las fases de lectura
abierta que codifican las proteínas antigénicas. Se usaron
cebadores oligonucleotídicos diseñados para los brazos del vector
\lambda TriplEx tanto para la amplificación por PCR como la
secuenciación. Se realizó PCR en un volumen de reacción final de 50
\mul que contenía dNTP 50 \muM (Promega, Wl, EEUU), 10 pmol de
ambos cebadores, 20 U/ml de polimerasa Supertaq plus y 10X de
tampón Supertaq (ambos de HT Biotechnology Ltd, Cambridge, RU) en
agua. Se añadió ADN de fago seleccionando una placa recién sembrada
usando un palillo y transfiriendo este ADN desde el palillo a la
mezcla de reacción. Se usaron las siguientes condiciones:
desnaturalización a 94ºC durante 3 min, seguido de 30 ciclos de
desnaturalización a 94ºC durante 1 min, hibridación a 50ºC durante
2 min y elongación a 68ºC durante 2 min 30 s, seguido de una
extensión final a 68ºC durante 10 min. Para determinar la secuencia
de nucleótidos de los insertos de ADN amplificado, se realizó una
reacción de secuencia (94ºC 10 s; 50ºC 5 s; 60ºC 2 min durante 25
ciclos) usando la mezcla de reacción Big dye Terminator Ready
(Qiagen Inc., CA, EEUU), 50 ng de ADN de molde (producto de PCR) y
2,4 pmol de cebador en un volumen de reacción de 20 \mul.
Después del análisis de secuencia, los 30 clones
parecieron representar 8 genes diferentes. Ya que la mayoría de las
fases de lectura abierta eran una fusión con el gen de lacZ del
vector \lambdaTriplEx, el extremo 5' del gen estaba ausente. Por
este motivo se realizó una reacción de secuencia usando cebadores
internos y ADN cromosómico del serotipo G de Ornithobacterium
rhinotracheale como un molde para secuenciar el hueco 5'
ausente.
Se diseñaron cebadores oligonucleotídicos para
amplificar las fases de lectura abierta de longitud completa que
codifican los 8 antígenos con reactividad cruzada (Or01, Or02, Or03,
Or04, Or11, Or77, Or98A y Or98B) de ADN genómico de serotipo G de
Ornithobacterium rhinotracheale cepa 0-95029
Nº 16279 (véase la Tabla 1). Los cebadores oligonucleotídicos 5'
contienen un sitio de restricción (subrayado) que precede al codón
de inicio ATG (negrita) seguido de secuencias obtenidas del gen de
interés (cursiva). Los oligonucleótidos 3' contienen secuencias
codificantes (cursiva) seguido de un sitio de restricción
(subrayado). Los productos de PCR se clonaron en el vector de
expresión de interés. Los productos de ligación se transformaron
hasta células hospedadoras E. coli BL21 (DE3) codón RIL
pLysS (Novagen, Madison, Wl, EEUU) para la expresión de proteína.
Mediante el uso del vector plasmídico pET (pET22b) y un sistema de
expresión de ARN polimerasa de T7 (Novagen, Madison, Wl, EEUU), las
proteínas recombinantes se expresaron en E. coli, con un
péptido líder de E. coli pelB fusionado en la porción amino
terminal (los péptidos líder de Ornithobacterium
rhinotracheale de proteínas Or02, Or03, Or11 y Or77 se
sustituyeron) y 6 restos de histidina en la porción en carboxi
terminal de la proteína. Se usó la cepa de E. coli BL21
(DE3) codón RIL pLysS (Novagen, Madison, Wl, EEUU) para un alto
nivel de expresión durante la inducción con IPTG como se describe en
el manual del sistema pET (Novagen, Madison, Wl, EEUU).
\vskip1.000000\baselineskip
Se aislaron antígenos recombinantes expresados
en E. coli del sobrenadante (Or77), se purificaron por
cromatografía de afinidad de metales usando resina talon (Clontech
Inc., Palo Alto, CA, EEUU) como se describe por el fabricante (Or03,
Or04, Or98A y Or98B), o mediante ciclos repetidos de congelación -
descongelación, sonificación y centrifugación (Or01, Or02 y Or11).
Se usó electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE) seguido de
tinción con azul brillante de Coomassie para evaluar la pureza de
las proteínas recombinantes. Se estimaron las concentraciones de
proteína usando albúmina sérica bovina como el patrón.
Todas las proteínas recombinantes purificadas
(Or01, Or02, Or03, Or04, Or11, Or77, Or98A y Or98B) se formularon
individualmente en una emulsión de agua en aceite. Además, se
formularon cinco vacunas de subunidades diferentes (A, B, C, D y E)
que contenían diferentes composiciones de los 8 antígenos
recombinantes (tabla 2). La tinción con Coomassie de las 5 vacunas
de combinación mostró bandas de proteína claramente identificables
que se corresponden a proteínas recombinantes Or01, Or02 y Or77. Ya
que los pesos moleculares de Or03, Or04 y Or11 y los pesos
moleculares de Or98A y Or98B son aproximadamente iguales, no se
pudieron distinguir bandas de proteínas individuales (figura 1).
Todas las proteínas están presentes en concentraciones
aproximadamente iguales de 50 mg/antígeno/l (25 \mug/dosis). Por
lo tanto, la carga antigénica total de la vacuna A a D es 200 mg/l.
La concentración de antígeno de la vacuna E es 400 mg/l. El fondo
de proteína es material restante de la cepa de E. coli usada
para expresar los antígenos recombinantes de Ornithobacterium
rhinotracheale.
Se estudió la capacidad de las diferentes
vacunas de subunidades de estimular la respuesta inmune humoral
para producir anticuerpos específicos de proteína mediante inyección
subcutánea de 0,5 ml de vacuna a pollos de engorde SPF de 2 semanas
de edad. Cuatro semanas después de la vacunación se recogieron
muestras séricas y se ensayaron para la presencia de anticuerpos
reactivos contra las proteínas recombinantes. Se realizó
transferencia de Western semiseca de acuerdo con Towbin, H.,
Staehlin, T. y Gordon, J. (1979) Proc. Nat. Acad. Sci. 76:
43-50. La fase de proteína de las vacunas se
transfirió e incubó con suero combinado (dilución 1:100) de aves
vacunadas y no vacunadas. Los sueros obtenidos de aves vacunadas con
cada una de las 8 vacunas individuales Or01 a Or98B mostraron
reactividad específica de proteína (figura 2). La Figura 3 muestra
la reactividad de antisueros obtenidos de aves vacunadas con la
vacuna de subunidades A a E (véase la tabla 2 y la figura 1),
dirigidos contra las mismas vacunas en transferencia de Western. Por
ejemplo: se carga la transferencia A con las vacunas A, B, C, D y E
(correspondiendo a los carriles A a E). El suero usado para la unión
de anticuerpo primario se obtiene de aves vacunadas con la vacuna A
(se corresponde al número de transferencia). Por este motivo, en
este suero están presentes anticuerpos
\alpha-Or01, \alpha-Or02,
\alpha-Or03 y \alpha-Or04. En
la transferencia A, estas cuatro proteínas se tiñen en el carril A,
D y E, que son los carriles que se cargaron con las tres vacunas
que contienen estos antígenos (A, D y E). La transferencia B se
carga como la transferencia A y el suero usado se obtiene de aves
vacunas con la vacuna B. Los anticuerpos
\alpha-Or77, \alpha-Or11,
\alpha-Or03 y \alpha-Or04 tiñen
los antígenos correspondientes en la transferencia B en los
carriles B, C y E. Los demás antígenos que no estaban presentes en
la vacuna B no se pudieron detectar en esta transferencia. En la
transferencia E, todas las proteínas se tiñen debido a que la vacuna
E contiene los ocho antígenos de Ornithobacterium
rhinotracheale. El suero usado en la transferencia de Western F
se obtiene de aves no vacunadas que sirvieron como un control
negativo. No se pudieron detectar antígenos recombinantes de
Ornithobacterium rhinotracheale usando este suero.
\vskip1.000000\baselineskip
Para evaluar la capacidad protectora cruzada de
la respuesta de anticuerpos inducida por diferentes vacunas de
subunidades (vacunas combinadas A, B, C, D, E y la vacuna individual
Or77), se realiza un experimento animal. Se vacunaron pollos de
engorde SPF a las 2 semanas de edad como se ha descrito
anteriormente. A las 5 semanas de edad, las aves se sensibilizaron
con ND LaSota (dosis: 1*10^{6} E.I.D. por ave) por pulverización
con aerosol. A las 6 semanas de edad las aves se expusieron a la
cepa B3263/91 de serotipo A de Ornithobacterium
rhinotracheale (exposición heteróloga). La exposición se realizó
por pulverización con aerosol de un cultivo bacteriano fresco que
contenía 8,5*10^{8} unidades formadoras de colonias (UFC) por ml
de THB. Durante la exposición por aerosol, el cultivo bacteriano se
administró como una pulverización fina a las aves en un aislador de
aproximadamente 1,5 m^{3}, usando un pulverizador de pintura
comercial. La neblina desarrollada en los aisladores se mantuvo
durante al menos 10 min con la circulación de aire cerrada. Los
grupos de control de exposición y grupos de sensibilización con el
ND se incluyeron en el ensayo. Una semana después de la exposición,
a las 7 semanas de edad, las aves se sacrificaron y las lesiones
orgánicas se puntuaron macroscópicamente usando un sistema de
puntuación de Ornithobacterium rhinotracheale para enfermedad
respiratoria del siguiente modo: para sacos aéreos torácicos, 0 =
ninguna anormalidad, 1 = un saco aéreo afectado gravemente por
aerosaculitis fibrinosa o focos limitados de tamaño de cabeza de
alfiler o exudados fibrinosos en ambos sacos aéreos, 2 = ambos
sacos aéreos afectados gravemente por aerosaculitis fibrinosa; para
sacos aéreos abdominales, 0 = ninguna anormalidad, 1 = focos de
tamaño de cabeza de alfiler o exudados fibrinosos o aerosaculitis
fibrinosa ligeramente difusa, 2 = aerosaculitis fibrinosa grave. La
puntuación de aerosaculitis se proporciona como la suma de ambas
puntuaciones. Para pulmones, 0 = ninguna anormalidad, 1 = neumonía
unilateral, 2 = neumonía bilateral. Las puntuaciones de grupo
promedio se dan como un porcentaje de la máxima puntuación posible.
Se realizó análisis estadístico usando ANOVA de una vía no
paramétrico de Kruskal-Wallis.
La Figura 4 muestra la capacidad de protección
cruzada de las 5 vacunas de subunidades diferentes A a E. El grupo
de control de exposición no se vacunó pero se sensibilizó y expuso y
mostró la mayor puntuación. Las aves vacunadas con la vacuna E (que
contenía los 8 antígenos) mostró una protección prácticamente
completa comparable a los resultados del grupo que no recibió
vacunación y exposición pero que se sensibilizó con el virus de la
Enfermedad de Newcastle. Se pudo observar una protección cruzada
ligeramente menor, pero todavía significativa (P < 0,05) en aves
vacunadas con la vacuna A, B y C. La vacuna de combinación D mostró
protección cruzada de menor significación (p = 0,19). Las aves no
tratadas no mostraron lesiones orgánicas. Como se puede observar en
la figura 5, los animales vacunados con Or77 (= cepa de serotipo G)
y expuestos a serotipo A también mostraron una reducción
significativa (p < 0,05)) en puntuaciones de lesión respiratoria
en comparación con el grupo de control no vacunado.
Figura 1: Tinción de Coomassie en las 5 vacunas
de combinación (A a E). Cada vacuna contenía una composición
diferente de las 8 proteínas recombinantes purificadas. La vacuna de
subunidades A se corresponde al carril A, la vacuna de subunidades B
se corresponde a carril B, la vacuna de subunidades C se corresponde
al carril C, la vacuna de subunidades D se corresponde al carril D,
la vacuna de subunidades E se corresponde al carril E. Las proteínas
recombinantes con pesos moleculares aproximadamente iguales se
indican por una flecha sencilla.
Figura 2: Reactividad de antisueros
monovalentes, obtenidos de pollos vacunados con la vacuna de
subunidades recombinante sencilla, contra la misma proteína en
transferencia de Western. Las proteínas de vacuna reactivas se
indican por flechas negras.
Figura 3: Reactividad de antisueros, obtenidos
de pollos vacunados con las vacunas de subunidades A a E en
transferencia de Western. Cada transferencia contiene las proteínas
de las vacuna A, B, C, D y E (correspondientes a los carriles A a
E). El suero usado para la exploración se obtiene de aves vacunas
con la vacuna A (transferencia A), vacuna B (transferencia B),
vacuna C (transferencia C), vacuna D (transferencia D) o vacuna E
(transferencia E). El suero usado en la transferencia de Western F
se obtiene de aves no vacunadas. Las proteínas de vacuna reactivas
se indican por una línea negra.
Figura 4: Capacidad protectora cruzada de
vacunas de subunidades A a E, en comparación con grupos de
exposición y de control con NDV, representada como la máxima
puntuación posible de lesión orgánica respiratoria.
Figura 5: Capacidad protectora cruzada de la
vacuna de subunidades Or77, en comparación con los grupos de
exposición y de control con NDV, representada como la máxima
puntuación posible de lesión orgánica respiratoria.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
\global\parskip0.000000\baselineskip
<110> AKZO Nobel N.V.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> Vacunas de subunidades de
Ornithobacterium rhinotracheale
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> 2004.011
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 16
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn versión 3.2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1614
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Ornithobacterium
rhinotracheale
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(1614)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 537
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Ornithobacterium
rhinotracheale
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1572
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Ornithobacterium
rhinotracheale
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(1572)
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 523
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Ornithobacterium
rhinotracheale
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1242
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Ornithobacterium
rhinotracheale
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(1242)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 413
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Ornithobacterium
rhinotracheale
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1023
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Ornithobacterium
rhinotracheale
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(1023)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 340
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Ornithobacterium
rhinotracheale
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1230
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Ornithobacterium
rhinotracheale
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(1230)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 409
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Ornithobacterium
rhinotracheale
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 10
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1140
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Ornithobacterium
rhinotracheale
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(1140)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 11
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 379
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Ornithobacterium
rhinotracheale
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 12
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 918
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Ornithobacterium
rhinotracheale
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(918)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 13
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 305
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Ornithobacterium
rhinotracheale
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 14
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 888
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Ornithobacterium
rhinotracheale
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222>(1)..(888)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 15
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 295
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Ornithobacterium
rhinotracheale
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 16
\vskip1.000000\baselineskip
Claims (52)
1. Ácido nucleico que codifica una proteína
inmunogénica de 59,8 kD de Ornithobacterium rhinotracheale o
una parte de dicho ácido nucleico que codifica un fragmento
inmunogénico de dicha proteína, teniendo dicho ácido nucleico o
dicha parte del mismo una homología de al menos el 80% con el ácido
nucleico del gen de proteína de Ornithobacterium
rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID Nº: 1.
2. Ácido nucleico o parte del mismo de acuerdo
con la reivindicación 1, caracterizado por que la secuencia
tiene una homología de al menos el 85%, preferiblemente del 90%, más
preferiblemente del 95% con el ácido nucleico del gen de proteína de
Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID
Nº: 1.
3. Ácido nucleico que codifica una proteína
inmunogénica de 58,2 kD Ornithobacterium rhinotracheale o una
parte de dicho ácido nucleico que codifica un fragmento inmunogénico
de dicha proteína, teniendo dicho ácido nucleico o dicha parte del
mismo una homología de al menos el 80% con el ácido nucleico del gen
de proteína de Ornithobacterium rhinotracheale como se
ilustra en la SEC ID Nº: 3.
4. Ácido nucleico o parte del mismo de acuerdo
con la reivindicación 3, caracterizado por que la secuencia
tiene una homología de al menos el 85%, preferiblemente del 90%, más
preferiblemente del 95% con el ácido nucleico del gen de proteína de
Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID
Nº: 3.
5. Ácido nucleico que codifica una proteína
inmunogénica de 46,0 kD de Ornithobacterium rhinotracheale o
una parte de dicho ácido nucleico que codifica un fragmento
inmunogénico de dicha proteína, teniendo dicho ácido nucleico o
dicha parte del mismo una homología de al menos el 80% con el ácido
nucleico del gen de proteína de Ornithobacterium
rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID Nº: 5.
6. Ácido nucleico o parte del mismo de acuerdo
con la reivindicación 5, caracterizado por que la secuencia
tiene una homología de al menos el 85%, preferiblemente del 90%, más
preferiblemente del 95% con el ácido nucleico del gen de proteína de
Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID
Nº: 5.
7. Ácido nucleico que codifica una proteína
inmunogénica de 37,2 kD de Ornithobacterium rhinotracheale o
una parte de dicho ácido nucleico que codifica un fragmento
inmunogénico de dicha proteína, teniendo dicho ácido nucleico o
dicha parte del mismo una homología de al menos el 80% con el ácido
nucleico del gen de proteína de Ornithobacterium
rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID Nº: 7.
8. Ácido nucleico o parte del mismo de acuerdo
con la reivindicación 7, caracterizado por que la secuencia
tiene una homología de al menos el 85%, preferiblemente del 90%, más
preferiblemente del 95% con el ácido nucleico del gen de proteína de
Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID
Nº: 7.
9. Ácido nucleico que codifica una proteína
inmunogénica de 45,6 kD de Ornithobacterium rhinotracheale o
una parte de dicho ácido nucleico que codifica un fragmento
inmunogénico de dicha proteína, teniendo dicho ácido nucleico o
dicha parte del mismo una homología de al menos el 80% con el ácido
nucleico del gen de proteína de Ornithobacterium
rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID Nº: 9.
10. Ácido nucleico o parte del mismo de acuerdo
con la reivindicación 9, caracterizado por que la secuencia
tiene una homología de al menos el 85%, preferiblemente del 90%, más
preferiblemente del 95% con el ácido nucleico del gen de proteína de
Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID
Nº: 9.
11. Ácido nucleico que codifica una proteína
inmunogénica de 42,2 kD de Ornithobacterium rhinotracheale o
una parte de dicho ácido nucleico que codifica un fragmento
inmunogénico de dicha proteína, teniendo dicho ácido nucleico o
dicha parte del mismo una homología de al menos el 80% con el ácido
nucleico del gen de proteína de Ornithobacterium
rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID Nº: 11.
12. Ácido nucleico o parte del mismo de acuerdo
con la reivindicación 11, caracterizado por que la secuencia
tiene una homología de al menos el 85%, preferiblemente del 90%, más
preferiblemente del 95% con el ácido nucleico del gen de proteína de
Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID
Nº: 11.
13. Ácido nucleico que codifica una proteína
inmunogénica de 34,0 kD de Ornithobacterium rhinotracheale o
una parte de dicho ácido nucleico que codifica un fragmento
inmunogénico de dicha proteína, teniendo dicho ácido nucleico o
dicha parte del mismo una homología de al menos el 80% con el ácido
nucleico del gen de proteína de Ornithobacterium
rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID Nº: 13.
\newpage
14. Ácido nucleico o parte del mismo de acuerdo
con la reivindicación 13, caracterizado por que la secuencia
tiene una homología de al menos el 85%, preferiblemente del 90%, más
preferiblemente del 95% con el ácido nucleico del gen de proteína de
Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID
Nº: 13.
15. Ácido nucleico que codifica una proteína
inmunogénica de 32,9 kD de Ornithobacterium rhinotracheale o
una parte de dicho ácido nucleico que codifica un fragmento
inmunogénico de dicha proteína, teniendo dicho ácido nucleico o
dicha parte del mismo una homología de al menos el 80% con el ácido
nucleico del gen de proteína de Ornithobacterium
rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID Nº: 15.
16. Ácido nucleico o parte del mismo de acuerdo
con la reivindicación 15, caracterizado por que la secuencia
tiene una homología de al menos el 85%, preferiblemente del 90%, más
preferiblemente del 95% con el ácido nucleico del gen de proteína de
Ornithobacterium rhinotracheale como se ilustra en la SEC ID
Nº: 15.
17. Fragmento de ADN que comprende un ácido
nucleico de acuerdo con la reivindicación 1-16.
18. Molécula de ADN recombinante que comprende
un ácido nucleico de acuerdo con las reivindicaciones
1-16 o un fragmento de ADN de acuerdo con la
reivindicación 17, bajo el control de un promotor unido
funcionalmente.
19. Vehículo recombinante vivo que comprende un
ácido nucleico de acuerdo con las reivindicaciones
1-16, un fragmento de ADN de acuerdo con la
reivindicación 17 o una molécula de ADN recombinante de acuerdo con
la reivindicación 18.
20. Célula hospedadora que comprende un ácido
nucleico de acuerdo con las reivindicaciones 1-16,
un fragmento de ADN de acuerdo con la reivindicación 17, una
molécula de ADN recombinante de acuerdo con la reivindicación 18 o
un vehículo recombinante vivo de acuerdo con la reivindicación
19.
21. Una proteína inmunogénica de 59,8 kD de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de dicha proteína, teniendo dicha proteína o fragmento inmunogénico
de la misma una homología de secuencia de aminoácidos de al menos el
80% con la secuencia de aminoácidos como se ilustra en la SEC ID Nº:
2.
22. Una proteína inmunogénica de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de dicha proteína, de acuerdo con la reivindicación 21, teniendo
dicha proteína o fragmento inmunogénico de la misma una homología de
secuencia de aminoácidos de al menos el 85%, preferiblemente del
90%, más preferiblemente del 95% con la secuencia de aminoácidos
como se ilustra en la SEC ID Nº: 2.
23. Una proteína inmunogénica de 59,8 kD de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de la misma, caracterizada por que está codificada por un
ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2.
24. Una proteína inmunogénica de 58,2 kD de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de dicha proteína, teniendo dicha proteína o fragmento inmunogénico
de la misma una homología de secuencia de aminoácidos de al menos el
80% con la secuencia de aminoácidos como se ilustra en la SEC ID Nº:
4.
25. Una proteína inmunogénica de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de dicha proteína, de acuerdo con la reivindicación 24, teniendo
dicha proteína o fragmento inmunogénico de la misma una homología de
secuencia de aminoácidos de al menos el 85%, preferiblemente del
90%, más preferiblemente del 95% con la secuencia de aminoácidos
como se ilustra en la SEC ID Nº: 4.
26. Una proteína inmunogénica de 58,2 kD de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de la misma, caracterizada por que está codificada por un
ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 3 ó 4.
27. Una proteína inmunogénica de 46,0 kD de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de dicha proteína, teniendo dicha proteína o fragmento inmunogénico
de la misma una homología de secuencia de aminoácidos de al menos el
80% con la secuencia de aminoácidos como se ilustra en la SEC ID Nº:
6.
28. Una proteína inmunogénica de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de dicha proteína, de acuerdo con la reivindicación 27, teniendo
dicha proteína o fragmento inmunogénico de la misma una homología de
secuencia de aminoácidos de al menos el 85%, preferiblemente del
90%, más preferiblemente del 95% con la secuencia de aminoácidos
como se ilustra en la SEC ID Nº: 6.
29. Una proteína inmunogénica de 46,0 kD de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de la misma, caracterizada por que está codificada por un
ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 5 ó 6.
30. Una proteína inmunogénica de 37,2 kD de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de dicha proteína, teniendo dicha proteína o fragmento inmunogénico
de la misma una homología de secuencia de aminoácidos de al menos el
80% con la secuencia de aminoácidos como se ilustra en la SEC ID Nº:
8.
\newpage
31. Una proteína inmunogénica de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de dicha proteína, de acuerdo con la reivindicación 30, teniendo
dicha proteína o fragmento inmunogénico de la misma una homología de
secuencia de aminoácidos de al menos el 85%, preferiblemente del
90%, más preferiblemente del 95% con la secuencia de aminoácidos
como se ilustra en la SEC ID Nº: 8.
32. Una proteína inmunogénica de 37,2 kD de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de la misma, caracterizada por que está codificada por un
ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 7 u 8.
33. Una proteína inmunogénica de 45,6 kD de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de dicha proteína, teniendo dicha proteína o fragmento inmunogénico
de la misma una homología de secuencia de aminoácidos de al menos el
80% con la secuencia de aminoácidos como se ilustra en la SEC ID Nº:
10.
34. Una proteína inmunogénica de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de dicha proteína, de acuerdo con la reivindicación 33, teniendo
dicha proteína o fragmento inmunogénico de la misma una homología de
secuencia de aminoácidos de al menos el 85%, preferiblemente del
90%, más preferiblemente del 95% con la secuencia de aminoácidos
como se ilustra en la SEC ID Nº: 10.
35. Una proteína inmunogénica de 45,6 kD de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de la misma, caracterizada por que está codificada por un
ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 9 ó 10.
36. Una proteína inmunogénica de 42,2 kD de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de dicha proteína, teniendo dicha proteína o fragmento inmunogénico
de la misma una homología de secuencia de aminoácidos de al menos el
80% con la secuencia de aminoácidos como se ilustra en la SEC ID Nº:
12.
37. Una proteína inmunogénica de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de dicha proteína, de acuerdo con la reivindicación 36, teniendo
dicha proteína o fragmento inmunogénico de la misma una homología de
secuencia de aminoácidos de al menos el 85%, preferiblemente del
90%, más preferiblemente del 95% con la secuencia de aminoácidos
como se ilustra en la SEC ID Nº: 12.
38. Una proteína inmunogénica de 42,2 kD de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de la misma, caracterizada por que está codificada por un
ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 11 ó 12.
39. Una proteína inmunogénica de 34,0 kD de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de dicha proteína, teniendo dicha proteína o fragmento inmunogénico
de la misma una homología de secuencia de aminoácidos de al menos el
80% con la secuencia de aminoácidos como se ilustra en la SEC ID Nº:
14.
40. Una proteína inmunogénica de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de dicha proteína, de acuerdo con la reivindicación 39, teniendo
dicha proteína o fragmento inmunogénico de la misma una homología de
secuencia de aminoácidos de al menos el 85%, preferiblemente del
90%, más preferiblemente del 95% con la secuencia de aminoácidos
como se ilustra en la SEC ID Nº: 14.
41. Una proteína inmunogénica de 34,0 kD de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de la misma, caracterizada por que está codificada por un
ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 13 ó 14.
42. Una proteína inmunogénica de 32,9 kD de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de dicha proteína, teniendo dicha proteína o fragmento inmunogénico
de la misma una homología de secuencia de aminoácidos de al menos el
80% con la secuencia de aminoácidos como se ilustra en la SEC ID
Nº:16.
43. Una proteína inmunogénica de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de dicha proteína, de acuerdo con la reivindicación 42, teniendo
dicha proteína o fragmento inmunogénico de la misma una homología de
secuencia de aminoácidos de al menos el 85%, preferiblemente del
90%, más preferiblemente del 95% con la secuencia de aminoácidos
como se ilustra en la SEC ID Nº: 16.
44. Una proteína inmunogénica de 32,9 kD de
Ornithobacterium rhinotracheale o un fragmento inmunogénico
de la misma, caracterizada por que está codificada por un
ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 15 ó 16.
45. Un ácido nucleico de acuerdo con las
reivindicaciones 1-16, un fragmento de ADN de
acuerdo con la reivindicación 17, una molécula de ADN recombinante
de acuerdo con la reivindicación 18, un vehículo recombinante vivo
de acuerdo con la reivindicación 19, una célula hospedadora de
acuerdo con la reivindicación 20 o una proteína de acuerdo con las
reivindicaciones 21-44 o un fragmento inmunogénico
de la misma, para el uso en una vacuna.
46. Uso de un ácido nucleico de acuerdo con la
reivindicaciones 1-16, un fragmento de ADN de
acuerdo con la reivindicación 17, una molécula de ADN recombinante
de acuerdo con la reivindicación 18, un vehículo recombinante vivo
de acuerdo con la reivindicación 19, una célula hospedadora de
acuerdo con la reivindicación 20 o una proteína de acuerdo con las
reivindicaciones 21-44 o un fragmento inmunogénico
de la misma para la fabricación de una vacuna para combatir
infección por Ornithobacterium rhinotracheale.
\newpage
47. Vacuna para combatir infección por
Ornithobacterium rhinotracheale, caracterizada por que
comprende un ácido nucleico de acuerdo con las reivindicaciones
1-16, un fragmento de ADN de acuerdo con la
reivindicación 17, una molécula de ADN recombinante de acuerdo con
la reivindicación 18, un vehículo recombinante vivo de acuerdo con
la reivindicación 19, una célula hospedadora de acuerdo con la
reivindicación 20 o una proteína de acuerdo con las reivindicaciones
21-44 o un fragmento inmunogénico de la misma y un
vehículo farmacéuticamente aceptable.
48. Vacuna para combatir infección por
Ornithobacterium rhinotracheale, caracterizada por que
comprende anticuerpos contra una proteína de acuerdo con las
reivindicaciones 21-44 o un fragmento inmunogénico
de dicha proteína y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
49. Vacuna de acuerdo con la reivindicación 47,
caracterizada por que comprende un adyuvante.
50. Vacuna de acuerdo con la reivindicación
47-49, caracterizada por que comprende un
antígeno adicional obtenido de un virus o microorganismo patógeno
para aves de corral, un anticuerpo contra tal antígeno o información
genética que codifica dicho antígeno.
51. Vacuna de acuerdo con la reivindicación 50,
caracterizada por que dicho virus o microorganismo patógeno
para pollos se selecciona entre el grupo que consiste en virus de
peste aviar, virus de Bronquitis Infecciosa, Enfermedad de Bursa
Infecciosa (Gumboro), Virus de la Enfermedad de Marek, agente de
Anemia del pollo, Reovirus Aviar, Mycoplasma gallisepticum,
Virus de la Rinotraqueitis del Pavo, Haemophilus
paragallinarum (Coriza), Poxvirus de Pollo, virus de la
encefalomielitis aviar, virus de la Peste del Pato, virus de la
Enfermedad de Newcastle, virus del síndrome de Caída de Huevo, virus
de Laringotraqueitis Infecciosa, Virus Herpes de Pavos, especies de
Eimeria, Ornithobacterium rhinotracheale, Pasteurella multocida,
Mycoplasma synoviae, especies de Salmonella y E.
coli.
52. Método para la preparación de una vacuna de
acuerdo con las reivindicaciones 47-51,
comprendiendo dicho método la mezcla de un ácido nucleico de acuerdo
con las reivindicaciones 1-16, un fragmento de ADN
de acuerdo con la reivindicación 17, una molécula de ADN
recombinante de acuerdo con la reivindicación 18, un vehículo
recombinante vivo de acuerdo con la reivindicación 19, una célula
hospedadora de acuerdo con la reivindicación 20, una proteína de
acuerdo con las reivindicaciones 21-44 o un
fragmento inmunogénico de la misma o anticuerpos contra una proteína
de acuerdo con las reivindicaciones 21-44 y un
vehículo farmacéuticamente aceptable.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP04075427 | 2004-02-11 | ||
| EP04075427 | 2004-02-11 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2336684T3 true ES2336684T3 (es) | 2010-04-15 |
Family
ID=34854650
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES05701653T Active ES2336684T3 (es) | 2004-02-11 | 2005-02-09 | Vacunas de subunidades de ornithobacterium rhinotracheale. |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20080008718A1 (es) |
| EP (1) | EP1716169B1 (es) |
| JP (1) | JP2007537723A (es) |
| AT (1) | ATE450546T1 (es) |
| AU (1) | AU2005212850B2 (es) |
| BR (1) | BRPI0507281A (es) |
| CA (1) | CA2553703A1 (es) |
| DE (1) | DE602005018021D1 (es) |
| ES (1) | ES2336684T3 (es) |
| MX (1) | MXPA06008760A (es) |
| PL (1) | PL1716169T3 (es) |
| WO (1) | WO2005077972A1 (es) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10973908B1 (en) | 2020-05-14 | 2021-04-13 | David Gordon Bermudes | Expression of SARS-CoV-2 spike protein receptor binding domain in attenuated salmonella as a vaccine |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3992727B2 (ja) * | 1992-10-14 | 2007-10-17 | インターベツト・インターナシヨナル・ベー・ベー | 家禽病を発症させる新規バクテリアとそれから誘導されたワクチン |
| US7314974B2 (en) * | 2002-02-21 | 2008-01-01 | Monsanto Technology, Llc | Expression of microbial proteins in plants for production of plants with improved properties |
-
2005
- 2005-02-09 AT AT05701653T patent/ATE450546T1/de not_active IP Right Cessation
- 2005-02-09 PL PL05701653T patent/PL1716169T3/pl unknown
- 2005-02-09 AU AU2005212850A patent/AU2005212850B2/en not_active Ceased
- 2005-02-09 EP EP05701653A patent/EP1716169B1/en not_active Not-in-force
- 2005-02-09 MX MXPA06008760A patent/MXPA06008760A/es active IP Right Grant
- 2005-02-09 JP JP2006552621A patent/JP2007537723A/ja active Pending
- 2005-02-09 WO PCT/EP2005/050577 patent/WO2005077972A1/en not_active Application Discontinuation
- 2005-02-09 ES ES05701653T patent/ES2336684T3/es active Active
- 2005-02-09 BR BRPI0507281-6A patent/BRPI0507281A/pt not_active IP Right Cessation
- 2005-02-09 DE DE602005018021T patent/DE602005018021D1/de active Active
- 2005-02-09 CA CA002553703A patent/CA2553703A1/en not_active Abandoned
- 2005-02-09 US US10/588,992 patent/US20080008718A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2005212850B2 (en) | 2009-11-26 |
| BRPI0507281A (pt) | 2007-07-03 |
| MXPA06008760A (es) | 2007-01-23 |
| WO2005077972A1 (en) | 2005-08-25 |
| CA2553703A1 (en) | 2005-08-25 |
| AU2005212850A1 (en) | 2005-08-25 |
| ATE450546T1 (de) | 2009-12-15 |
| US20080008718A1 (en) | 2008-01-10 |
| EP1716169B1 (en) | 2009-12-02 |
| JP2007537723A (ja) | 2007-12-27 |
| PL1716169T3 (pl) | 2010-05-31 |
| EP1716169A1 (en) | 2006-11-02 |
| DE602005018021D1 (de) | 2010-01-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10842858B2 (en) | Compositions and methods of enhancing immune responses to Eimeria | |
| KR20210092762A (ko) | 아프리카 돼지 열병 바이러스에 대한 면역원성 조성물 | |
| WO2020063370A2 (zh) | 免疫组合物及其制备方法与应用 | |
| EP2214840B1 (en) | Compositions and methods of enhancing immune responses to flagellated bacterium | |
| US10059747B2 (en) | Crimean-congo haemorrhagic fever virus antigenic composition | |
| ES2199932T3 (es) | Poxvirus recombinante y vacuna estreptococica que contiene proteina m. | |
| AU2009328621A1 (en) | Methods and compositions for use of a coccidiosis vaccine | |
| ES2335668T3 (es) | Vacuna de sub-unidad de lawsonia intracellularis. | |
| ES2336684T3 (es) | Vacunas de subunidades de ornithobacterium rhinotracheale. | |
| ES2279599T3 (es) | Vacuna contra la coccidiosis. | |
| ES2346064T3 (es) | Vacuna subunidad de lawsonia intracellularis. |