ES2328435A1 - Mejora de la patente peptidos derivados de una proteina lactea con actividad inhibidora de la enzima conversora de angiotensina i. - Google Patents
Mejora de la patente peptidos derivados de una proteina lactea con actividad inhibidora de la enzima conversora de angiotensina i. Download PDFInfo
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Abstract
Mejora de la patente peptidos derivados de una proteína láctea con actividad inhibidora de la enzima conversora de angiotensina I. La invención consiste en la utilización de un hidrolizado de lactoferrina que contiene los productos bioactivos derivados de las proteínas lácteas. Se trata de un péptido de quince residuos de aminoácidos (llamado LfcinB17 31), y de otro que es una versión reducida del mismo (llamado LfcinB20 25), derivados de la lactoferrina bovina como inhibidores efectivos de la enzima conversora de la angiotensina (ECA). Los péptidos objetos de la patente obtienen enzimáticamente y dan lugar a péptidos con actividad inhibidora de la enzima convertidora de la angiotensina in vitro y/o ex vivo, midiendo la disminución de la contracción de arterias carótidas de conejo inducida por exposición a angiotensina I. Estos productos nutracéuticos, ya sea como péptido biactivos, son tanto útiles para la industria alimentaría como para la farmacéutica.
Description
Mejora de la patente péptidos derivados de una
proteína láctea con actividad inhibidora de la enzima conversora de
angiotensina I.
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Industria agroalimentaria; Alimentos
funcionales; Ingredientes bioactivos; Farmacología de la
hipertensión
La hipertensión, que consiste en un aumento de
la presión sanguínea superior a la deseable para la salud, es un
problema sanitario bastante serio ya que está relacionada con un
alto riesgo de complicaciones cardio- y
cerebro-vasculares. El accidente cerebrovascular
agudo, también denominado ictus, constituye, después de las
enfermedades isquémicas cardíacas y del cáncer, la tercera causa de
mortalidad y la primera de discapacidad permanente en las
sociedades occidentales avanzadas. La mayoría de accidentes
cerebrovasculares agudos (85%) son de tipo "isquémico", y
tienen su origen en la oclusión aguda por un trombo
("trombosis") o un émbolo ("embolia") de una de las
principales arterias cerebrales, lo que origina un descenso en la
perfusión sanguínea ("isquemia") y consiguiente necrosis
("infarto") de la región cerebral irrigada por dicha arteria.
El resto de accidentes cerebrovasculares (15%) son de tipo
"hemorrágico", originados por la rotura de un vaso sanguíneo
en el propio parénquima cerebral ("hemorragia intracerebral") o
en la superficie cerebral ("hemorragia subaracnoidea").
De lo dicho anteriormente se desprende que en el
desarrollo de estas enfermedades falla la correcta regulación de la
presión arterial sistémica, en la que interviene un complejo
sistema regulador llamado sistema
renina-angiotensina (SRA), y del que forman parte
la renina, la enzima conversora de la angiotensina (ECA), la
aldosterona, y las angiotensinas I y II.
Este SRA es un sistema hormonal circulante, y
concretamente la renina y la ECA son dos peptidasas que forman
parte del mismo y que actúan secuencialmente sobre una serie de
pequeños péptidos, reguladores en última instancia de la presión
sanguínea. En los seres humanos, la renina se libera en el riñón y
la ECA se encuentra presente principalmente en las células
endoteliales vasculares, en los pulmones, en los riñones y en el
cerebro.
Este sistema renina-angiotensina
se activa en determinadas situaciones mediante la actuación de la
renina sobre un péptido precursor denominado angiotensinógeno (de
procedencia hepática), el cual se convierte en el decapéptido
angiotensina I. Esta angiotensina I, inactiva desde el punto de
vista biológico, se transforma a su vez por acción de la ECA en
angiotensina II al separarse el dipéptido a partir de su extremo
C-terminal. La angiotensina II generada es un
potente vasoconstrictor que ejerce su acción tras la unión a sus
receptores específicos denominados "receptores AT_{1}". Dicha
acción se traduce en la contracción de los vasos sanguíneos que
como consecuencia produce un aumento de la presión sanguínea.
Además de contribuir a la formación de la angiotensina II, la ECA
también actúa sobre otro péptido circulante, el nonapéptido llamado
bradiquinina, potente agente vasodilatador que pierde esta
característica al ser hidrolizado.
Por todo lo expuesto anteriormente, la
interferencia farmacológica con el SRA podría tener efectos
beneficiosos en el tratamiento de los desórdenes vasculares
asociados con la hipertensión. La inhibición de la actividad ECA
permitiría disminuir la formación de angiotensina II además de
reducir la pérdida de funcionalidad de la bradiquinina, evitando de
esta manera la acción vasoconstrictora de la primera y potenciando
la acción vasodilatadora de la segunda. A este respecto se ha
puesto de manifiesto en numerosos estudios la eficacia de los
inhibidores de ECA reduciendo la morbilidad y la mortalidad en
pacientes con fallo cardíaco, síndrome
cardio-metabólico y diabetes.
A pesar de su demostrada eficacia en el
tratamiento de las enfermedades cardiovasculares asociadas a la
hipertensión, los fármacos inhibidores del ECA disponibles en la
actualidad no pueden considerarse la opción definitiva. Por su falta
de especificidad estos fármacos no son bien tolerados por algunos
pacientes en los que se presentan efectos secundarios indeseables
como tos seca y angioedema; además, no bloquean completamente la
síntesis de angiotensina II ya que ésta sigue otras vías de
síntesis que no dependen del ECA. Es necesario, por lo tanto,
encontrar nuevos inhibidores del ECA con mayor especificidad y que
puedan ser co-administrados con otros fármacos,
como por ejemplo los "bloqueadores del receptor de
angiotensina", para el tratamiento óptimo de los desórdenes
vasculares de origen hipertensivo ligados al SRA a la vez que se
minimizan los efectos secundarios antes citados. Incluso y según
las características de los inhibidores seleccionados, podría
conseguirse una aproximación mas natural del tratamiento al añadir
dichos inhibidores a los alimentos, lo cual produciría un efecto
positivo tanto sobre dicho tratamiento como sobre la prevención de
los síntomas inherentes a la hipertensión.
Hasta la fecha se han publicado numerosos
trabajos bibliográficos relacionados con la inhibición de ECA
mediante el empleo de pequeños péptidos sintéticos como principales
responsables de dicha inhibición. Estos péptidos presentan una gran
variabilidad pues tienen diferentes longitudes y estructuralmente
difieren en las secuencias de los aminoácidos que los constituyen
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la enzima conversora de angiotensina i].
\global\parskip1.000000\baselineskip
Así mismo, también se han llevado a cabo
estudios con el fin de aislar e identificar inhibidores de carácter
natural presentes en los alimentos. En numerosos casos se ha
llegado a identificar como responsables ciertos péptidos naturales
llegando incluso a la determinación de su secuencia. De esta manera
se han podido sintetizar la mayoría de ellos con el fin de confirmar
su actividad. Como materia prima, se emplean proteínas tanto de
origen animal como vegetal [WO2005012355 Bioactive peptides derived
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Por otra parte, las Lactoferrinas (LF) son
glicoproteínas abundantes en la leche materna de mamíferos y tienen
múltiples funciones biológicas, entre las que destacan sus
propiedades antimicrobianas [Farnaud, S. y Evans, R. W. (2003).
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la tecnología del DNA recombinante, con vistas a obtener efectos
terapéuticos o para su utilización en alimentos funcionales [Nandi,
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péptidos derivados de LF en fase avanzada de desarrollo para su
utilización como fármacos [Zasloff, M. (2002). Antimicrobial
peptides of multicellular organisms. Nature 415,
389-395]. En concreto, las Lactoferricinas (Lfcin)
son péptidos aislados de la región N-terminal de LF
por digestión con pepsina, los cuales presentan propiedades
antimicrobianas [Bellamy, W., Takase, M., Yamauchi, K., Wakabayashi,
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primaria de la lactoferricina bovina (LfcinB) corresponde a los
residuos 17-41 de LF y tiene potente actividad
antimicrobiana [Bellamy, W., Takase, M., Yamauchi, K., Wakabayashi,
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La hidrólisis enzimática de las LF, también da
lugar a una mezcla de péptidos con diferentes propiedades
biológicas tales como capacidad antimicrobiana [Min, S. y Krochta,
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En la presente invención se describe la
aplicación de un hidrolizado enzimático de LF, obtenido mediante
digestión con pepsina, previamente descrito como antimicrobiano
[Murdock, C.A. y Matthews, K.R. (2002). Antibacterial activity of
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antitumor activity and selectivity of
lactoferrin-derived peptides. Journal of Peptide
Research 60, 187-197] y ahora caracterizado en
la presente invención por tener actividad inhibidora de ECA.
Como cualquier experto en el tema puede
apreciar, dicho hidrolizado de LF contiene necesariamente o bien
los péptidos SEQ ID NO 1 o SEQ ID NO2, descritos en la PATENTE
ES200600881 o bien péptidos que contengan secuencias de dichos
péptidos.
La inhibición de la actividad ECA se manifiesta
en ensayos realizados in vitro, midiendo la inhibición de la
conversión de un sustrato artificial (HHL,
Hipuril-Histidil-Leucina), y en
ensayos realizados ex vivo, midiendo la disminución de la
contracción de arterias carótidas de conejo inducida por exposición
a angiotensina I.
La presente invención está relacionada con los
sectores farmacológico y de la industria agroalimentaria y consiste
en la aplicación de un hidrolizado enzimático de LF obtenido con
pepsina como inhibidor efectivo de la enzima conversora de la
angiotensina (ECA) que se halla implicada en la formación del
compuesto angiotensina II que es un vasoconstrictor responsable,
entre otras causas/mecanismos, de la hipertensión. La actividad
inhibidora se manifiesta por una reducción de la actividad ECA
determinada en ensayos in vitro, así como por una reducción
de la contracción ECA dependiente ex vivo empleando
segmentos de arterias. Se describe la potencial utilización del
hidrolizado inhibidor de ECA, o de péptidos inhibidores derivados
del mismo, como compuestos bioactivos para el control de la
hipertensión. En el apartado de ejemplos particulares, se describe
la actividad inhibidora de ECA tanto del hidrolizado como de dichos
péptidos cuando se emplean como sustratos
Hipuril-Histidil-Leucina (HHL) y
angiotensina I. La actividad inhibidora se ha demostrado en
condiciones in vitro empleando ECA purificada a partir de
riñón de cerdo y ex vivo empleando segmentos de arteria
carótida de conejo.
En la presente invención se describe la
aplicación de un hidrolizado enzimático de LF obtenido con pepsina
con actividad de inhibición de la enzima conversora de angiotensina
(ECA), implicada en los mecanismos de control de la presión
arterial. En sendos ejemplos particulares, se describe su
utilización como inhibidor de ECA mediante el empleo de sustratos
artificiales como el
Hipuril-Histidil-Leucina (HHL) o
naturales como la angiotensina I, así como su efecto inhibidor
sobre la contracción ECA-dependiente de segmentos de
arterias de conejo.
Los inhibidores descritos en la presente
invención son el hidrolizado enzimático de LF obtenido con pepsina
así como los péptidos bioactivos derivados del mismo, entre los
cuales podrían encontrarse la secuencia de quince aminoácidos SEQ
ID NO 1 y la de seis aminoácidos SEQ ID NO 2 descritos en el
documento de patente de invención ES200600881 y distinta de los
péptidos inhibidores de ECA conocidos anteriormente
[Guan-Hong Li, Guo-Wei Le,
Yong-Hui Shi y Sundar Shrestha (2004). Angiotensin
I-converting enzyme inhibitory peptides derived
from food proteins and their physiological and pharmacological
effects. Nutrition Research 24, 469-486;
Dziuba, J., Minkiewicz, P., Nalecz, D. y Iwaniak, A. (1999).
Database of biologically active peptide sequences. Nahrung
43, 190-195; Fujita, H., Yokoyama, K. y Yoshikawa,
M. Classification and antihypertensive activity of angiotensin
i-converting enzyme inhibitory peptides derived
from food proteins. Jounal of Food Science 65,
564-569; Reed, J. D., Edwards, D. L., y Gonzalez, C.
F. (1997)].
En la presente invención se describen ensayos
experimentales que ilustran la actividad del hidrolizado en
condiciones experimentales in vitro, utilizando ECA
purificada de riñón de cerdo y un sustrato artificial denominado
HHL El primero de los sustratos permite llevar a cabo una serie de
ensayos encaminados a conocer la capacidad inhibidora, mientras que
el segundo permite contrastar los resultados obtenidos con el
anterior y además comprobar dicha capacidad inhibidora de ECA en el
caso de utilizar sustratos naturales. Como prueba de la
especificidad de la inhibición, en la presente invención también se
describe la ausencia de actividad inhibidora in vitro con LF
sin hidrolizar y pepsina de secuencia relacionada, pero distinta a
la de los dos inhibidores descritos.
La actividad inhibidora del hidrolizado descrito
en la presente invención se manifiesta con una reducción de la
actividad de la ECA al llevar a cabo los ensayos in vitro en
las condiciones establecidas, como queda demostrado mediante los
ensayos experimentales descritos en la presente invención.
La actividad inhibidora del hidrolizado descrito
en la presente invención también se manifiesta con una reducción de
la contracción ECA-dependiente de arteria carótida
de conejo, inducida mediante la adición de angiotensina I en
ensayos ex vivo.
Considerando las propiedades del hidrolizado
descrito en la presente invención, es obvio para todo aquel experto
en el tema su potencial utilización como aditivo alimentario,
compuesto o fármaco de utilidad en la prevención o frente a
enfermedades que tengan como causa o sintomatología la hipertensión
arterial.
Figura 1. Efecto de la concentración del
hidrolizado de LF (en \mug/ml) sobre la actividad in vitro
de la ECA (medida como actividad residual o porcentaje de la
actividad de la reacción control sin inhibidor añadido) cuando
utiliza como sustrato HHL. Cada punto representa la media de
actividad residual \pm desviación estándar de un número variable
de, al menos tres determinaciones independientes, para cada
concentración del hidrolizado. La curva representa el mejor ajuste
a una curva sigmoidal de cuatro parámetros (coeficiente de
regresión, r=0,98) que permitió calcular un EC_{50} de 161\pm9
\mug/ml (p<0,0001) (Programa informático SigmaPlot v 8.0). ECA
res: Actividad ECA Residual (%); HFL. Hidrolizado lactoferrina.
Figura 2. Registro de tensión isométrica de un
experimento representativo en el que se muestra el efecto inhibidor
del hidrolizado de LF (a una concentración de 760 \mug/ml) sobre
la contracción ECA-dependiente inducida por
angiotensina I (1 \muM) en un segmento de arteria carótida de
conejo. El experimento va precedido por una contracción con
solución despolarizante (KCl) para comprobar la viabilidad de la
preparación. T-I Tensión Isométrica. L. lavado. T.
tiempo.
1. Obtención del hidrolizado de
lactoferrina. Para la obtención del hidrolizado de lactoferrina
se ha utilizado como enzima la pepsina siguiendo el protocolo
descrito por Tomita et al. (1991) (Potent Antibacterial
Peptides Generated by Pepsin Digestion of Bovine Lactoferrin. J.
Dairy Science. 74 (12), 4137-4142). Dicho método
consiste en preparar una solución de lactoferrina al 5%
(peso/volumen) en agua destilada, ajustando el pH de la misma a 3
con HCI. A esta solución se le añade la pepsina a una concentración
final del 3% en peso y la mezcla se incuba a 37ºC durante 4 horas
en agitación (200 rpm.). La reacción se detiene calentando a 80ºC
durante 15 minutos y se alcaliniza llevándola a pH 7 con NaOH.
Posteriormente se centrifuga a 4000 rpm durante 30 minutos
recuperándose en el sobrenadante los péptidos solubilizados. El
hidrolizado así obtenido contenía 7.6 mg de proteína/ml.
2. Ensayos in vitro de inhibición de
la actividad ECA sobre el sustrato artificial HHL. En estos
ensayos, la capacidad inhibidora del hidrolizado se determinó
midiendo por HPLC (del inglés high performance liquid
chromatography) el ácido hipúrico resultante de la hidrólisis
del sustrato artificial HHL
(Hipuril-Histidil-Leucina) basándose
en el método propuesto en la literatura [Wu, J. P., Aluko, R. E., y
Muir, A. D. (2002). Improved method for direct
high-performance liquid chromatography assay of
angiotensin-converting
enzyme-catalyzed reactions. Journal of
Chromatography A 950, 125-130]. La mezcla de
reacción tiene un volumen de 225 \mul y está constituida por 50
\mul de HHL 25 mM en tampón Tris HCl 200 mM pH 8.3 con NaCl 600
mM y ZnCl_{2} 10 \muM, 75 \mul de una solución de ACE en el
mismo tampón que corresponden a 1.5 mU de actividad, y un volumen
hasta 100 \mul de hidrolizado según la concentración final
deseada en el ensayo. El enzima y el inhibidor se preincuban
durante 15 minutos a 37ºC y a continuación se añade el sustrato
incubándose el conjunto 30 minutos a dicha temperatura. La reacción
se detiene añadiendo 25 \mul de HCl 6M. Para la determinación
cromatográfica del ácido hipúrico liberado se utiliza una columna de
fase inversa C18, la elución se lleva a cabo empleando un gradiente
de acetonitrilo en agua con TFA 0.05% y se determina el ácido
hipúrico midiendo la absorbancia a 228 nm. Los resultados aparecen
en la Tabla 1 como actividad residual de las determinaciones de
actividad ACE en presencia del hidrolizado mostrando una inhibición
significativa para el mismo pero no para los controles negativos
(LF sin hidrolizar y pepsina).
3. Ensayos in vitro de inhibición de
la actividad ECA sobre el sustrato HHL para el cálculo del
IC_{50}. El protocolo experimental descrito en el apartado
anterior se repitió empleando diferentes concentraciones de
hidrolizado expresadas como \mug/ml. Se efectuaron al menos tres
series de experimentos completos e independientes con todas las
concentraciones, calculando para cada una de ellas la media y su
desviación. La representación gráfica del valor medio
correspondiente a la actividad residual para cada una de las
concentraciones de péptido ensayadas se muestra en la Figura 1. A
partir de estos resultados se calculó la concentración de
hidrolizado que inhibe al 50% la actividad ECA sobre angiotensina I
(IC_{50}), siendo el valor obtenido 161\pm9 \mug/ml (media
aritmética t desviación estándar de la media).
4. Ensayos ex vivo de inhibición de la
contracción de arterias aisladas. Para los ensayos ex
vivo se utilizó el hidrolizado de LF a las concentraciones de
76, 228 y 760 lag de proteína/ml en el ensayo. La preparación
experimental consistió en obtener segmentos cilíndricos (3 mm) de
arterias aisladas (arteria carótida de conejo blanco New Zealand),
los cuales se dispusieron en un baño de órganos diseñado para
registrar los cambios de tensión isométrica en la pared vascular
[Salom, J. B., Burguete, M. C., Pérez-Asensio, F.
J., Centeno, J. M., Torregrosa, G., y Alborch, E. (2002). Acute
relaxant effects of
17-\beta-estradiol through
non-genomic mechanisms in rabbit carotid artery.
Steroids 67, 339-346]. El medio (solución
Ringer-Locke) en el que se hallan inmersos los
segmentos arteriales se mantiene termostatizado a 37ºC y
continuamente burbujeado con una mezcla gaseosa de 95% O_{2} y 5%
CO_{2} que le confiere un pH de 7,3-7,4. Los
experimentos comienzan tras un periodo de 30-60
minutos necesario para alcanzar la estabilización en el tono pasivo
de 2g. Tras comprobar la viabilidad de los segmentos arteriales
mediante contracción con una solución despolarizante
(Ringer-Locke 50 mM KCl), cada segmento arterial se
somete a una primera contracción ECA-dependiente con
Angiotensina I (1 \muM). Tras preincubar los segmentos durante 20
minutos con el hidrolizado objeto de estudio, se indujo una segunda
contracción con Angiotensina I. La Figura 2 refleja el registro de
uno de estos experimentos. Como control, se dejaron algunos
segmentos sin preincubar con inhibidor alguno. La Tabla 2 muestra
el resumen estadístico de todos los experimentos realizados y pone
de manifiesto un efecto inhibitorio significativo del hidrolizado
sobre la contracción de arteria carótida inducida por el
tratamiento con angiotensinal así como el nulo efecto de la pepsina
y la lactoferrina sin hidrolizar.
\newpage
Efecto del hidrolizado de LF, pepsina y LF,
sobre la actividad in vitro de ECA empleando el sustrato
artificial HHL. Se indican los porcentajes de actividad residual de
la ECA -con respecto al control sin inhibidor (valor 100)- para una
concentración de hidrolizado en el ensayo de 760 \mug/ml,
expresándose estos valores como la media \pm desviación estándar
de un número de repeticiones independientes (indicado entre
paréntesis). Los tres valores difieren entre sí con una confianza
del 99% (Test de separación de medias HSD de Tukey)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Efecto inhibidor del hidrolizado de LF, pepsina
y LF sobre la contracción ECA-dependiente con
angiotensina I en arterias aisladas de conejo. Los resultados
indican la contracción de la arteria en respuesta al tratamiento con
angiotensina I (1 \muM), en porcentaje respecto a una respuesta
previa en el mismo segmento arterial, y se expresan como la media ±
desviación estándar de la determinación sobre (n) segmentos
arteriales. El control se realizó sin adición de inhibidor.
Los asteriscos indican diferencias
significativas con respecto al control (Test de Dunnet) con una
confianza del 95% (* p<0,05) y del 99% (** p<0,01).
\global\parskip0.000000\baselineskip
<110> Consejo Superior de Investigaciones
Científicas
\hskip1cmUniversidad de Valencia
\hskip1cmFundación para la Investigación del Hospital de la Fé de Valencia
\hskip1cmManzanares Mir, Paloma
\hskip1cmMarcos López, José Francisco
\hskip1cmEnrique López, María
\hskip1cmVallés Alventosa, Salvador
\hskip1cmCenteno Guil, José María
\hskip1cmSalom Salvanero, Joan Bta
\hskip1cmTorregrosa Bernabé, Germán
\hskip1cmAlborch Domínguez, Enrique
\hskip1cmRuiz Gimenez, Pedro
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> MEJORA DE LA PATENTE PÉPTIDOS
DERIVADOS DE UNA PROTEÍNA LÁCTEA CON ACTIVIDAD INHIBIDORA DE LA
ENZIMA CONVERSORA DE LA ANGIOTENSINA I
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> mejLfcinB
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn version 3.3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Bos taurus
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Phe Lys Cys Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys
Lys Leu Gly Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Bos taurus
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Arg Arg Trp Gln Trp Arg}
Claims (10)
1. Uso de un hidrolizado enzimático de
lactoferrina que comprende un péptido cuya secuencia aminoacídica
comprende la SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, o ambas, como inhibidor de
la enzima conversora de angiotensina I (ECA) in vitro y/o
como inhibidor de la vasoconstricción
ECA-dependiente ex vivo.
2. Uso de un hidrolizado enzimático de
lactoferrina según la reivindicación anterior, para la elaboración
de una formulación para controlar o disminuir la presión arterial,
o para la prevención o el tratamiento de la hipertensión
arterial.
3. Uso de un hidrolizado enzimático de
lactoferrina según cualquiera de las reivindicaciones
1-2, donde las secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 1,
SEQ ID NO: 2, o ambas, presenta cambios conservativos.
4. Uso de un hidrolizado enzimático de
lactoferrina según cualquiera de las reivindicaciones
1-4, donde el hidrolizado de lactoferrina se ha
obtenido por un procedimiento que comprende:
- a.
- preparar una solución de lactoferrina a aproximadamente un 5% (peso/volumen) en agua destilada,
- b.
- ajustar el pH de la solución de lactoferrina de (a) a alrededor de un pH=3,
- c.
- añadir pepsina a una concentración final de aproximadamente 3% en peso a la solución de (b),
- d.
- incubar a una temperatura de alrededor de 37ºC durante aproximadamente 4 horas en agitación (\approx 200 rpm),
- e.
- detener la reacción calentando a aproximadamente 80ºC durante alrededor de 15 minutos, y alcalinizar la solución añadiendo NaOH hasta un pH de aproximadamente 7,
- f.
- Centrifugar la solución durante aproximadamente 30 minutos (= 4000 rpm).
5. Uso de un hidrolizado enzimático de
lactoferrina según cualquiera de las reivindicaciones
2-4, donde la formulación es un producto
funcional.
6. Uso de un hidrolizado enzimático de
lactoferrina según cualquiera de las reivindicaciones
2-5, donde la formulación es un aditivo, ingrediente
o suplemento alimentario funcional.
7. Uso de un hidrolizado enzimático de
lactoferrina según cualquiera de las reivindicaciones
2-4, donde la formulación es una composición
farmacéutica.
8. Uso de un hidrolizado enzimático de
lactoferrina según cualquiera de las reivindicaciones
2-4, donde la formulación es un medicamento.
9. Uso de un hidrolizado enzimático de
lactoferrina según cualquiera de las reivindicaciones
2-4, donde la formulación es un nutracéutico.
10. Uso de un hidrolizado enzimático de
lactoferrina según cualquiera de las reivindicaciones
2-4, donde la formulación es un nuevo alimento.
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2007
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CENTENO, J.M. et al. "Lactoferricin-related peptides with inhibitory effects on ACE-dependent vasoconstriction". J. AGRIC. FOOD CHEM. 26.07.2006. Vol. 54, Nº. 15, páginas 5323-5329; todo el documento. * |
TOMITA, M. et al. "{}Potent antibacterial peptides generated by pepsin digestion of bovine lactoferrin"{}. J. DAIRY SCI. 01.12.1991. Vol. 74, N$^{o}$. 12, páginas 4137-4142; todo el documento. * |
TOMITA, M. et al. "Potent antibacterial peptides generated by pepsin digestion of bovine lactoferrin". J. DAIRY SCI. 01.12.1991. Vol. 74, Nº. 12, páginas 4137-4142; todo el documento. * |
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WO2012117136A1 (es) * | 2011-02-28 | 2012-09-07 | Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) | Fracción de bajo peso molecular de un hidrolizado de lactoferrina para el tratamiento de la hipertensión |
ES2388094A1 (es) * | 2011-02-28 | 2012-10-08 | CONSEJO SUPERIOR DE INVESTIGACIONES CIENTÍFICAS (CSIC) (Titular al 60%) | Fracción de bajo peso molecular de un hidrolizado de lactoferrina para el tratamiento de la hipertensión. |
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ES2321358A1 (es) | 2009-06-04 |
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