ES2326504B1 - Metodo de carga de muestras para electroforesis sumergida en gel de agarosa. - Google Patents
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Abstract
Método de carga de muestras para electroforesis
sumergida en gel de agarosa.
La presente invención se refiere a un método de
carga de muestras de ácidos nucleicos para electroforesis sumergida
en gel de agarosa donde la carga de cada muestra individualizada se
realizada mediante a) la obtención de la muestra líquida de ácidos
nucleicos a analizar; b) la obtención de un soporte sólido
individual; c) la adsorción de la muestra líquida en el soporte
sólido individual; y d) el depósito del soporte sólido individual
conteniendo la muestra en un pocillo del gel de agarosa para el
desarrollo de la electroforesis de los ácidos nucleicos en el gel,
donde la carga de las muestras se realiza antes de sumergir el gel
de agarosa en un tampón de migración. Asimismo se contempla el
dispositivo de carga para llevar a cabo dicho método y el kit de
electroforesis basado en el empleo de dicho dispositivo.
Description
Método de carga de muestras para electroforesis
sumergida en gel de agarosa.
La presente invención tiene su campo de
aplicación dentro del área de la Biología Molecular, concretamente
en el campo de las técnicas de electroforesis. En particular, esta
invención se refiere a un método de carga de muestras de ácidos
nucleicos para electroforesis sumergida en gel de agarosa, así como
al dispositivo que emplea dicho método y a un kit de electroforesis
basado en dicho dispositivo.
La electroforesis es una técnica analítica de
separación de macromoléculas. La separación tiene lugar debido a la
diferente movilidad que presentan las macromoléculas cargadas cuando
son sometidas a la influencia de un campo eléctrico como
consecuencia de su relación carga/masa.
Los ácidos nucleicos son macromoléculas cargadas
negativamente, debido a la presencia de grupos fosfato en su
estructura. La naturaleza del enlace fosfodiéster de las cadenas
polinucleotídicas condiciona la carga de un ácido nucleico, que es
aproximadamente igual al número de grupos fosfato.
La electroforesis se realiza en cubetas
apropiadas, generalmente horizontales, con un electrodo a cada
extremo, y requiere dos elementos indispensables: la fase móvil y
la fase estacionaria. La fase móvil es el medio amortiguado que
permite la movilidad de las moléculas cargadas hacia los electrodos
correspondientes cuando se genera un campo eléctrico. La fase
estacionaria o soporte, es un polímero de naturaleza gelatinosa con
un tamaño de poro homogéneo que se haya sumergido y embebido en la
fase móvil.
El polímero utilizado para el análisis
electroforético de ácidos nucleicos de gran tamaño (100
pb-10 kb) es la agarosa. Esta técnica consiste en
armar un gel de agarosa, con pequeñas hendiduras o pocillos en un
extremo donde se depositan las muestras a analizar. El gel es
sometido a corriente eléctrica de modo que los ácidos nucleicos,
cargados negativamente, se desplazan por el gel hacia el polo
positivo. Transcurrida la electroforesis, la localización relativa
de los fragmentos se determina mediante distintos métodos de
detección. La tinción con bromuro de etidio, una sonda fluorescente
tras iluminación con luz UV, es un método generalizado de detección
de fragmentos de ADN, ya que la sonda se intercala entre la doble
hélice de ADN y emite luz. La separación efectiva de los fragmentos
de ADN o ARN (resolución) depende tanto de la masa como de la carga
de los distintos fragmentos (relación carga/masa).
En las técnicas habitualmente realizadas, el
depósito de las muestras de ácidos nucleicos en los pocillos del
gel de agarosa se realiza en fase líquida, según la siguiente
metodología estándar:
- -
- la muestra a migrar se mezcla con un buffer o tampón de carga que le confiere mayor densidad,
- -
- el gel se coloca en la cubeta de electroforesis y se cubre con el tampón de migración, de manera que queda sumergido,
- -
- se toma un pequeño volumen de la solución de la muestra, que puede oscilar entre 5 y 30 microlitros, según el caso, con una micropipeta automática de precisión, y se deposita en un pocillo del gel previamente practicado al efecto.
\vskip1.000000\baselineskip
Las micropipetas de precisión son de coste
elevado y, además, deben manejarse con sumo cuidado para evitar su
descalibración. Así, el depósito de la muestra en fase líquida debe
realizarse de manera precisa y muy cuidadosa para evitar flujos
bruscos que provoquen la salida de la muestra del pocillo y por
tanto la pérdida de la muestra que se desea analizar. Por otra
parte, debe evitarse la perforación de la base del pocillo con la
punta de la micropipeta.
El equilibrio preciso entre introducir la punta
de la micropipeta en el pocillo a una altura que no perfore la base
del mismo y realizar un impulso adecuado del líquido que contiene la
muestra hace de ésta una técnica difícil para personas que la
efectúan por primera vez o que no la llevan a cabo de forma
regular.
No obstante, el depósito de la muestra es una
etapa clave en la migración electroforética y, en caso de no
ejecutarse correctamente, impide obtener resultados de
electroforesis.
En base a este hecho, existen documentos en el
estado de la técnica que tienen el objetivo común de facilitar el
depósito de las muestras en los geles de electroforesis.
Así, en el documento US 6376231, se describe un
cargador para el depósito de varias muestras, formado por un papel
intercambiador de cationes para cromatografía, para electroforesis
vertical en gel de poliacrilamida, diseñado para la totalidad del
gel.
Por otra parte, los documentos US5681437 y
US5683915 describen un mecanismo para depositar simultáneamente una
pluralidad de muestras sobre un medio en fase sólida planar, tal
como el usado en técnicas cromatográficas, electroforéticas o
cromatografía en capa fina, o sobre medios de crecimiento planares,
tales como agarosa o tejido.
En el documento US 99/12025 se describe un
cargador de muestras en fase sólida para la totalidad del gel,
similar al descrito en US 6376231. Al igual que en este documento,
la finalidad de su mecanismo es su empleo en electroforesis en
geles verticales de poliacrilamida. Así, se describe un soporte
sólido de polietersulfona o nylon capaz de inmovilizar muestras de
ensayo de forma reversible para facilitar la carga de las mismas en
geles de electroforesis.
Sin embargo, en ninguno de los documentos
mencionados se define un dispositivo de carga de soporte sólido
para electroforesis sumergida en geles de agarosa. Además, en los
métodos descritos se emplea la totalidad del gel. Por otra parte,
el diseño de estos sistemas no permite eliminar el uso de
micropipetas a la hora de depositar las muestras en los soportes de
carga.
Los documentos WO9627787 y WO9800706 se refieren
a un dispositivo de carga para electroforesis sumergida en gel de
agarosa, basado en un cargador de muestras para la totalidad del
gel, es decir, para la carga simultánea de una pluralidad de
muestras, cuyo diseño consiste en un medio sólido poroso donde se
depositan las muestras para posteriormente transferirlas al gel. La
forma de este medio soporte es la del peine utilizado habitualmente
para formar los pocillos durante la polimerización del gel. El
material del cargador es una membrana de nylon o nitrocelulosa.
Este dispositivo ha sido diseñado para proceder a la carga de las
muestras en el gel una vez sumergido en el buffer de migración.
Este tipo de cargadores presentan dos
inconvenientes. Por un lado, la introducción del cargador (peine)
debe realizarse con bastante precisión, ya que cada una de las
zonas de muestra (púas del peine) debe quedar bien alojada en cada
uno de los pocillos del gel, ya que, si alguna queda fuera, la
difusión no se realizaría correctamente. La complejidad, por tanto,
viene derivada del hecho de tener que introducir simultáneamente
todas las púas en los correspondientes pocillos, teniendo en cuenta
que la solución migratoria se encuentra cubriendo el gel.
Por otro lado, el peine es un cargador para
varias muestras, lo cual dificulta la deposición de las muestras
individuales. Esto supone una barrera metodológica importante cuando
son personas distintas las que depositan cada una de las muestras,
por ejemplo, en labores de docencia, en las que cada alumno va a
depositar una muestra y debe realizarla en el mismo cargador que el
resto de los alumnos.
Además, el diseño de este cargador tampoco evita
el empleo de micropipetas de precisión para el depósito de las
muestras.
Así, pese a que los dispositivos de carga
descritos tienen el objetivo común de facilitar el depósito de las
muestras en los geles de electroforesis, no existen referencias
bibliográficas en el estado de la técnica que permitan eliminar el
empleo de micropipetas de precisión.
Por tanto, los mecanismos descritos han sido
desarrollados solamente para su utilización en investigación. La
migración electroforética con fines docentes es difícil y por tanto
se hace necesario resolver el problema del depósito de las muestras
en gel de agarosa.
En el caso de los geles de almidón para la
separación electroforética de proteínas obtenidas de extractos
crudos celulares (Allozyme Electrophoresis Techniques used by the
Gene Conservation
Laboratory;<http://www.cf.adfg.state.
ak.us/geninfo/research/genetics/techfac/electro2.php>), la carga de muestras se realiza en fase sólida. Sin embargo, esta electroforesis difiere de la electroforesis en geles de agarosa en:
ak.us/geninfo/research/genetics/techfac/electro2.php>), la carga de muestras se realiza en fase sólida. Sin embargo, esta electroforesis difiere de la electroforesis en geles de agarosa en:
- -
- la finalidad de la separación. La electroforesis en gel de almidón se utiliza para la separación de proteínas, principalmente para diferenciar entre sus isoformas. Sin embargo, la electroforesis en geles de agarosa sumergidos se utiliza para separar fragmentos de ácidos nucleicos;
- -
- la naturaleza del medio de soporte de este tipo de electroforesis es de almidón hidrolizado en lugar de agaro- sa;
- -
- la colocación del gel se lleva a cabo de forma similar a una electroforesis de acetato de celulosa o poliacriliamida, donde el gel hace contacto con el buffer de electroforesis exclusivamente por sus extremos. El gel de agarosa de las electroforesis sumergidas, a diferencia de los anteriores, se halla inmerso en el buffer de electroforesis; y que
- -
- la carga de la muestra en los geles de almidón se realiza en fase sólida, insertando el gel una mecha empapada en la muestra. Estas mechas son eliminadas del gel cuando han transcurrido 15 minutos desde el comienzo de la migración electroforética. Sin embargo, la carga de la muestra en geles de agarosa se realiza mediante depósito de la solución de ácidos nucleicos a estudiar mezclada con buffer de carga en el pocillo del gel destinado al efecto.
\vskip1.000000\baselineskip
La electroforesis de ácidos nucleicos en geles
de almidón no ha utilizado nunca el soporte de muestra en medio
sólido debido a que los ácidos nucleicos se purifican y disuelven en
un buffer, a diferencia de las proteínas que van a ser separadas
mediante electroforesis en gel de almidón. Éstas últimas se
encuentran en un extracto crudo y por tanto, mezcladas con todos
los restos celulares y en ocasiones adheridas a membranas. Por estos
motivos, el depósito de proteínas no purificadas se realiza en fase
sólida, mientras que las muestras purificadas, tanto de proteínas
como de ácidos nucleicos se cargan en fase líquida.
Así, los autores de la presente invención, a la
luz de las necesidades del estado de la técnica, han desarrollado
un nuevo método de carga de muestras de ácidos nucleicos en
electroforesis sumergida en gel de agarosa mucho más sencillo y
económico que los empleados habitualmente, que consiste en evitar la
fase líquida y cambiarla por su depósito en fase sólida, evitando
el empleo de micropipetas de precisión, lo que facilita el depósito
de muestras.
Además, este método permite la carga de las
muestras individualizadas, a diferencia de los métodos descritos en
el estado de la técnica que coinciden en el depósito simultáneo de
múltiples muestras, empleando la totalidad del gel.
Por tanto, una vez superada la barrera
metodológica que hasta ahora suponía la carga de las muestras, la
presente invención permite que la Electroforesis sumergida en gel
de agarosa sea de aplicación en múltiples circunstancias, entre las
que destacan las prácticas con finalidad docente, permitiendo el
desarrollo de kits de prácticas de Biología Molecular.
Así, la simplificación del método de carga de la
presente invención permite su uso por parte de personal no
entrenado, obteniendo resultados equivalentes a los conseguidos en
los laboratorios de investigación por los métodos
tradicionales.
Figura 1. A) Dispositivo de carga de muestras de
ácidos nucleicos para electroforesis en gel de agarosa: (P) pinzas;
(M) muestra líquida; (S) soportes sólidos individuales; B) Método de
carga de muestras de ácidos nucleicos para electroforesis en gel de
agarosa: b.1) Inserción con pinzas (P) del soporte sólido individual
(S) en la muestra líquida (M) para su adsorción; b.2) Depósito con
pinzas (P) del soporte individual (S) conteniendo la muestra (M) en
un pocillo (p) del gel de agarosa (G).
En primer lugar, la presente invención se
refiere a un método de carga en soporte sólido de muestras
individualizadas de ácidos nucleicos para electroforesis sumergida
en gel de agarosa.
Asimismo, otro objeto de la invención se refiere
a un dispositivo para el depósito de muestras individualizadas de
ácidos nucleicos basado en el método anterior.
Finalmente, es objeto de la presente invención
un kit de electroforesis de muestras de ácidos nucleicos sumergida
en gel de agarosa que comprende el dispositivo de carga
mencionado.
La electroforesis sumergida en gel de agarosa es
uno de los métodos más utilizados en Biología Molecular. Hasta
ahora, el depósito de la muestra era uno de los problemas
principales ya que requería el uso de micropipetas de precisión, de
elevado precio y cierto grado de habilidad y/o entrenamiento. Por
este motivo, al no existir en el mercado prácticas docentes de
análisis de ácidos nucleicos que hayan resuelto este problema, la
posibilidad de realizar prácticas básicas de Biología Molecular en
los laboratorios de enseñanza secundaria es casi inexistente.
Para cubrir estas necesidades, los autores de la
presente invención han desarrollado un método de carga alternativo
de manera que, en uno de los aspectos principales de la presente
invención, se contempla un método de carga de muestras de ácidos
nucleicos (ADN y ARN) para electroforesis sumergida en gel de
agarosa en el que la carga de cada muestra individualizada
comprende las siguientes etapas:
- a)
- obtención de la muestra líquida de ácidos nucleicos a analizar;
- b)
- obtención de un soporte sólido individual;
- c)
- adsorción de la muestra líquida obtenida en a) en el soporte sólido individual obtenido en b); y
- d)
- depósito del soporte sólido individual conteniendo la muestra en un pocillo del gel de agarosa para el desarrollo de la electroforesis de los ácidos nucleicos en el gel.
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La carga de las muestras sobre el gel de
agarosa se realiza antes de sumergir el gel de agarosa en el tampón
de migración. De esta forma, la carga de la muestra se realiza de
forma más sencilla y se evitan errores que puedan hacer inválida la
muestra. Una vez colocada la muestra correctamente y sin que se haya
podido difundir, se vierte la solución migratoria.
Las muestras se pueden depositar sobre el gel
antes de introducir el conjunto gel-muestra en la
cubeta de electroforesis. También se contempla la posibilidad de
que el gel se encuentre en la cubeta (sin el tampón de migración) y
se proceda a la colocación de la muestra sobre el gel.
En una realización preferida de la invención, el
soporte sólido individual empleado es de celulosa, de tipo papel
grueso, altamente absorbente y de tramo resistente, con un área
similar a la del pocillo del gel de agarosa de electroforesis donde
se depositará la muestra.
La adsorción de la muestra en el soporte sólido
individual se realiza introduciendo dicho soporte en un recipiente
(vial, tubo eppendorf, etc..) que contiene un volumen de muestra
líquida suficiente para impregnar el soporte sólido.
Finalmente, el depósito de la muestra se lleva a
cabo simplemente mediante la inserción del soporte sólido
individual conteniendo la muestra en un pocillo del gel, con la
ayuda de accesorios que no requieren ningún tipo de entrenamiento
por parte del usuario, como por ejemplo unas pinzas.
Otro aspecto principal de la invención se
refiere el dispositivo para la carga de muestras de ácidos nucleicos
para electroforesis sumergida en gel de agarosa mediante el método
descrito (figura 1 (A)).
Así, el dispositivo estaría formado por un juego
de tubos conteniendo la muestra líquida a analizar (M), un juego de
soportes sólidos individuales (S), preferiblemente de celulosa, con
un área equivalente a la del pocillo (p) del gel (G) y unas pinzas
(P) para introducir el soporte en la muestra y posteriormente
depositarlo en el pocillo.
Finalmente, otro aspecto de la invención se
refiere a un kit de electroforesis de muestras de ácidos nucleicos
sumergida en gel de agarosa que comprende el dispositivo de carga
descrito.
En base a la presente invención, la metodología
convencional ha podido ser mejorada en varios puntos.
- -
- En primer lugar, como se ha mencionado anteriormente, no es necesario colocar el gel en la cubeta de electroforesis antes de depositar las muestras.
- -
- Además, se evita el uso de micropipetas automáticas de precisión para depositar la muestra, ya que el depósito del soporte sólido se realiza fácilmente con la ayuda de unas pinzas.
- -
- Finalmente, no se corre el riesgo de perder la muestra durante su depósito en el gel, ya que al estar en medio sólido no se sale del pocillo debido a efectos de manipulación.
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Como consecuencia de estas mejoras, es posible
utilizar este modelo de carga en cualquier laboratorio no
especializado. Es decir, una vez superada la barrera metodológica
que hasta ahora suponía la carga de las muestras electroforéticas
en geles de agarosa sumergidos, la presente invención permite que
sea de aplicación en múltiples circunstancias, entre las que
destacan las prácticas con finalidad docente.
Así, en caso de estropear el cargador por un mal
uso, únicamente se debe desechar un soporte individual y no un
cargador múltiple, con las ventajas económicas que esto conlleva.
También es importante que, en el caso de la docencia, cada alumno
puede realizar el proceso completo de la electroforesis, puesto que
no solo deposita la muestra en el soporte, sino que además la carga
sobre el gel.
El ejemplo que sigue a continuación ilustra la
presente invención, pero no debe ser considerado como limitación a
los aspectos esenciales del objeto de la misma, tal como han sido
expuestos en los apartados anteriores de esta descripción.
Se partió de un dispositivo de carga de muestras
en geles de agarosa consistente en:
- 1.
- 4-8 tubos de 1.5 ml con 7 microlitros de muestra para ser analizada electroforéticamente.
- 2.
- 1 gel de agarosa al 1% con pocillos de 4x2 mm en un contenedor o sobre hermético.
- 3.
- 4-8 soportes sólidos, papeles de trama resistente y altamente absorbentes de 4x2 mm.
- 4.
- Una pinza.
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Con el desarrollo de este kit se trató de
proporcionar al alumno una práctica que le ayudara a comprender
cómo se realiza un diagnóstico de parentesco. Así, el ejemplo
seleccionado consistió en determinar la relación de parentesco
matrilineal entre un hijo y dos posibles madres biológicas.
Se suministró un kit para el depósito y
migración de muestras electroforéticas consistente en producto
amplificado mediante PCR de una fracción del segmento de
hipervariable II de la región control del ADN mitocondrial de la
presunta madre 1, madre 2, hijo, control negativo de amplificación y
marcador de tamaño; un colorante para la tinción del gel una vez
finalizada la electroforesis; la secuencia de referencia de Anderson
correspondiente al fragmento amplificado y los electroferogramas de
la secuencia de bases del fragmento de la presunta madre 1, madre 2
e hijo. Se incluyó el protocolo de la práctica a desarrollar.
La metodología a seguir consistió en emular el
procedimiento de un laboratorio de Biología Molecular que realiza
esta clase de diagnósticos. En primer lugar se observó la presencia
física de los productos de PCR suministrados en tubos de 1,5 ml. A
continuación se realizó una electroforesis en gel de agarosa para
comprobar la validez de la reacción de PCR y por último se
analizaron los resultados de la secuenciación del producto de PCR
por comparación con la secuencia de referencia de Anderson del ADN
mitocondrial.
La única parte de un diagnóstico de parentesco
que es trasladable a un laboratorio docente no especializado, como
es el caso de los laboratorios de enseñanza secundaria, es la
electroforesis. Los centros de enseñanza secundaria, salvo en el
caso de los que se dedican a Ciclos Formativos, no disponen de
termocicladores para PCR ni mucho menos secuenciadores de ADN. Sin
embargo, en algunos casos disponen de fuente de electroforesis y
cubetas. Incluso en el caso de no disponer de ellas, este
equipamiento puede ser temporalmente prestado o alquilado ya que es
robusto y de pequeño tamaño, por lo que su transporte no es
complicado. Por todas estas razones, se diseñó una práctica que
mostrara la fase de electroforesis, que refleja muy bien una parte
del procedimiento real que se lleva a cabo en los laboratorios de
Biología Molecular especializados en diagnóstico de parentesco. De
esta forma, el alumno de secundaria se familiarizó con los
procedimientos de análisis del ADN, visualizó una parte de ellos y
se facilitó su mejor comprensión de conceptos del programa teórico.
El punto débil de la adecuación de estas prácticas al laboratorio
de enseñanza secundaria es, en gran medida, la dificultad para
cargar las muestras en un gel de agarosa y llevar a cabo una
electroforesis con garantías de éxito, porque si el procedimiento
de depósito de la muestras es defectuoso, los resultados serán
pobres o inexistentes. Sin embargo, el depósito de las muestras en
soporte sólido de la presente invención, en lugar de utilizar el
medio líquido convencional, garantizó el que no se perdieran las
muestras y en consecuencia la electroforesis pudo ser llevada a
cabo con éxito. La eliminación de esta barrera fue la que permitió
el diseño de este kit que en todos los casos garantizó el correcto
depósito de la muestra.
Se partió de un kit similar al descrito en el
ejemplo 1.
Con el desarrollo de este kit se trató de
proporcionar al alumno una práctica que le ayudara a comprender
cómo se realiza un análisis de presencia de material genético
indicativo de que una planta es transgénica. Así, el ejemplo
seleccionado consistió en el análisis de varios ADNs extraídos de
semillas de plantas para determinar si eran o no transgénicas y
diferenciar si se trataba de ADN procedente de semillas de soja o
maíz.
Se suministró un kit para el depósito y
migración de muestras electroforéticas consistente en productos
amplificados mediante PCR de una fracción del promotor 35S y del
terminador NOS de ADN extraído de semillas de soja y maíz
transgénicos autorizados, control negativo de amplificación y
marcador de tamaño y un colorante para la tinción del gel una vez
finalizada la electroforesis. La metodología a seguir fue similar a
la del ejemplo 1.
El evento que dio lugar a la soja transgénica
autorizada que se analizó en la práctica incluía el promotor 35S
del virus del mosaico de la coliflor pero no el terminador NOS. En
el caso del maíz, el evento incluía el promotor 35S pero no el
terminador NOS. Una vez completada la migración electroforética y
obtenida la imagen de los fragmentos electroforéticos, los alumnos
pudieron determinar cuáles de las muestras correspondían a plantas
transgénicas y cuales no. Por otro lado, pudieron establecer cuál de
las muestras analizadas era de soja transgénica y cual de maíz
trans-
génico.
génico.
Al igual que se ha discutido en el ejemplo 1, la
única parte de la detección de organismos modificados genéticamente
que es trasladable a un laboratorio docente no especializado es la
electroforesis. Los centros docentes de enseñanza secundaria, salvo
en el caso de los que se dedican a ciclos formativos, no disponen de
termocicladores para PCR ni mucho menos sistemas de PCR
cuantitativa tales como los empleados en laboratorios especializados
en detección y cuantificación de organismos genéticamente
modificados. Sin embargo, como se ha citado en el ejemplo anterior,
los laboratorios de enseñanza secundaria disponen de fuente de
electroforesis y cubas. Por todas estas razones se diseñó una
práctica que mostrara la fase de electroforesis para ilustrar los
principios del screening de transgénicos.
Como en el ejemplo anterior, el depósito de las
muestras en soporte sólido permitió que la electroforesis se
desarrollara con éxito.
Claims (6)
1. Método de carga de muestras de ácidos
nucleicos para electroforesis sumergida en gel de agarosa
caracterizado porque la carga de cada muestra
individualizada comprende las siguientes etapas:
- a)
- obtención de la muestra líquida de ácidos nucleicos a analizar;
- b)
- obtención de un soporte sólido individual;
- c)
- adsorción de la muestra líquida obtenida en a) en el soporte sólido individual obtenido en b); y
- d)
- depósito del soporte sólido individual conteniendo la muestra en un pocillo del gel de agarosa para el desarrollo de la electroforesis de los ácidos nucleicos en el gel,
donde la carga de las muestras se realiza antes
de sumergir el gel de agarosa en un tampón de migración.
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2. Método, según la reivindicación 1,
caracterizado porque el soporte sólido individual tiene un
área similar a la del pocillo del gel de agarosa en el que se
deposita en la etapa d).
3. Método, según la reivindicación 2,
caracterizado porque el soporte sólido individual es de
celulosa.
4. Método según la reivindicación 1,
caracterizado porque la etapa c) se realiza introduciendo el
soporte sólido individual en un recipiente que contiene un volumen
de muestra líquida suficiente para impregnar dicho soporte.
5. Dispositivo para la carga de muestras de
ácidos nucleicos para electroforesis sumergida en gel de agarosa
según el método de las reivindicaciones 1-4.
6. Kit de electroforesis de muestras de ácidos
nucleicos sumergida en gel de agarosa caracterizado porque
comprende un dispositivo de carga según la reivindicación 5.
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| ES200602190A ES2326504B1 (es) | 2006-08-11 | 2006-08-11 | Metodo de carga de muestras para electroforesis sumergida en gel de agarosa. |
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Applications Claiming Priority (1)
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|---|---|---|---|
| ES200602190A ES2326504B1 (es) | 2006-08-11 | 2006-08-11 | Metodo de carga de muestras para electroforesis sumergida en gel de agarosa. |
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|---|---|
| ES2326504A1 ES2326504A1 (es) | 2009-10-13 |
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