ES2324438A1 - Metodo para la obtencion de plaquetas. - Google Patents

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Abstract

Método para la obtención de plaquetas. El método parte de la extracción de sangre periférica de la flexura del brazo con un tubo de extracción sanguínea (1) provisto de un émbolo (2) con su correspondiente vástago (3) que facilita la extracción, de manera que tras dicha extracción se utiliza en mismo tubo para la fase de centrifugación de la sangre previa rotura del vástago (3) y cierre del tubo con su tapón (4). La centrifugación se lleva a cabo con el tubo (1) en situación invertida, es decir con su tapón (4) orientado hacia el fondo de la centrifugadora (5), de manera que los glóbulos rojos se acumulan junto a dicho tapón, lo que permite a término del centrifugado y tras la retirada de dicho tapón, expulsar al exterior dichos glóbulos rojos mediante accionamiento sobre el embolo (2), quedando en el tubo (1) un suero sobrenadante rico en plaquetas, que se somete a una segunda fase de centrifugación para eliminación de los glóbulos rojos residuales, obteniéndose finalmente un concentrado de plaquetas que se decanta en un tubo limpio para su posterior utilización.

Description

Método para la obtención de plaquetas.
Objeto de la invención
La presente invención se refiere a un nuevo método para la obtención de plaquetas, a partir de sangre, mediante separación de las mismas en un concentrado rico en ellas.
El objeto de la invención es conseguir una notable simplificación en el proceso de concentración de las plaquetas, con un protocolo reproducible en cualquier centrifugadora, y en un proceso cerrado, en el que la sangre permanece en el mismo tubo, lo que minimiza el riesgo de contaminación.
Antecedentes de la invención
Desde un punto de vista general, cualquier método para la obtención de plaquetas comienza con la extracción de sangre periférica de la flexura del brazo, y a partir de aquí pueden establecerse dos grandes grupos de métodos, unos que necesitan gran cantidad de sangre, del orden de cincuenta centímetros cúbicos, y otros que necesitan una cantidad mucho menor y que, en este aspecto, son los mas deseables.
El inconveniente fundamental de las técnicas actuales en las que se necesita poca cantidad de sangre consiste en que se trata de métodos muy difíciles de reproducir, en los que existe además un considerable riesgo de contaminación de las muestras, ya que es necesario pipetear en los tubos para hacer la separación de las diferentes fracciones de sangre. Además los rangos de velocidad de centrifugación, o lo que es lo mismo la fuerza de la gravedad o fuerza centrífuga residual a la que se someten, no está muy acotada y los diferentes métodos tienen un amplio espectro de velocidades sin llegar a una en común.
Esto supone que el resultado final de muchos de ellos sea un coagulo de fibrina y no realmente un concentrado de plaquetas, con lo que los resultados finales de su aplicación clínica no son uniformes y existe controversia respecto de su utilidad debido a que no puede asegurarse la cantidad de plaquetas existente en dicho coágulo.
Parte de esta problemática se resuelve con los métodos que utilizan gran cantidad de sangre, ya que estos son métodos cerrados en los que la contaminación es menos posible. Sin embargo la gran cantidad de sangre que necesitan los invalidan para procedimientos clínicos con escasa disponibilidad de sangre, requiriendo además de unos consumibles desechables excesivamente caros, lo que a su vez los hace inviables en procesos clínicos de patologías pequeñas o mas sencillas debido a su alto coste.
Descripción de la invención
El método que la invención propone resuelve de forma plenamente satisfactoria la problemática anteriormente expuesta, ya que perteneciendo al grupo de los que requieren de poca cantidad de sangre evita la problemática inherente a estos últimos a la vez que ofrece las ventajas de los métodos convencionales con utilización de gran cantidad de sangre.
Para ello y de forma más concreta el método de la invención parte de la utilización de tubos de extracción sanguínea citratados, con la particularidad de disponer de un embolo que facilita la extracción de sangre. Con dichos tubos se realiza la extracción, y a continuación se procede a la rotura del vástago para accionamiento del embolo de los mismos, en orden a utilizar los mismos tubos para la fase de centrifugación de la sangre, de manera que la obtención y la centrifugación de la misma se llevará a cabo en el mismo recipiente, lo que supone la evitación de riesgos de contaminación por trasvase de la misma.
En función del problema clínico planteado en cada caso, más concretamente en función de la cantidad necesaria de plaquetas para solucionar dicho problema, será necesario extraer entre dos y seis tubos de sangre de cinco centímetros cúbicos de capacidad.
De acuerdo con otra de las características de la invención los citados tubos, en lugar de situarse en la centrifugadora con su tapón de apertura orientado hacia arriba, se disponen en posición inversa, de forma que al terminar la fase de centrifugación quedan situados en la parte más próxima al tapón de apertura los elementos de mayor peso, concretamente los glóbulos rojos, mientras que por encima de ellos queda un suero sobrenadante en el que se encuentra el concentrado de plaquetas.
Esta fase operativa de centrifugado se lleva a cabo durante tres minutos, en sangre base de 800 g.
Al terminar la fase de centrifugado se procede a la eliminación de los glóbulos rojos, que se desechan en un tubo sucio, eliminación que se lleva a cabo colocando unas palomillas en el tubo e impulsando el embolo del mismo de manera que pueda verse como a través de la extremidad correspondiente del tapón van saliendo los glóbulos rojos, manteniéndose la presión hasta que se observe que la fase roja solo ocupe el tapón, momento en el que se interrumpe la presión y se desconectan las palomillas.
El producto restante, es decir el suero sobrenadante se somete a nueva fase de centrifugado a 500 g durante ocho minutos, depositándose los posibles restos de glóbulos rojos en la parte inferior del tubo, es decir junto al tapón y justo por encima del concentrado de plaquetas.
Los 500 mililitros mas próximos al tapón de salida serán los que albergan el concentrado de plaquetas y los que se decantan en un tubo limpio para su posterior utilización o el recipiente del injerto donde se coagulará con cloruro cálcico como en el resto de métodos de obtención.
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Descripción de los dibujos
Para complementar la descripción que se está realizando y con objeto de ayudar a una mejor comprensión de las características del invento, de acuerdo con un ejemplo preferente de realización práctica del mismo, se acompaña como parte integrante de dicha descripción, un juego de dibujos en donde con carácter ilustrativo y no limitativo, se ha representado lo siguiente:
Figura 1: muestra un detalle en perspectiva de la fase de extracción de sangre superficial, en la que se observa la utilización de un tubo provisto de embolo para facilitar la extracción.
Figura 2: muestra la fase de acoplamiento de los tubos a la centrifugadora, inmediatamente previa al centrifugado.
Figura 3: muestra el resultado de dicha fase de centrifugado, concretamente la estratificación en el seno de los tubos de los distintos componentes sanguíneos.
Figura 4: muestra el proceso de decantación de las fases sanguíneas.
Figura 5: muestra, finalmente y mediante una perspectiva como en el caso de las figuras anteriores, el plasma rico en plaquetas obtenido por el procedimiento de invención tras un trasvase a un segundo tubo convencional.
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Realización preferente de la invención
De acuerdo con las figuras reseñadas, el método comienza con una fase de extracción de sangre periférica, de la flexura del brazo, tal como muestra la figura 1, para lo que se utiliza un tubo de extracción sanguínea citratado (1), como los comercializados por Sarstedt S-monovette ref. 21.067.001, tubos que tienen la peculiaridad de incorporar un émbolo (2), con su correspondiente vástago de accionamiento (3), que facilita la extracción de sangre, estando además dicho tubo provisto del correspondiente tapón (4).
Tras la extracción de sanguínea se procede a la rotura del vástago (3), de manera que el tubo pueda ser introducido en una máquina centrifugadora (5), tal como muestra la figura 2, es decir que se utiliza el mismo recipiente para la extracción y para la centrifugación, minimizando el riesgo de contaminación de la sangre.
Tal como muestra también la figura 2, el tubo o los tubos (1) se introducen en la centrifugadora (5) con el tapón de apertura (4) orientado hacia abajo, tras haberles sacado todo el aire, en contra de lo que es convencional, de manera que los componentes de mayor peso de la sangre y por efecto de la propia centrifugación, se sitúan en las proximidades del tapón. Esto trae consigo que los glóbulos rojos, que son precisamente los de mayor peso, se sitúen cerca del tapón en situación de fácil eliminación, mientras que el suero sobrenadante con las plaquetas se sitúa a un nivel interior a término de dicha fase de centrifugación, que se realiza en base de 800 g durante un tiempo de tres minutos.
Colocando unas palomillas sobre el tapón del tubo y manteniendo la posición vertical para evitar que se mezcle actuando sobre el émbolo (2), por ejemplo colocando unas palomillas sobre el tubo, van saliendo al exterior los glóbulos rojos, que se desechan en un tubo sucio (9), manteniendo la presión en el seno del tubo principal hasta la observación de que sólo quedan glóbulos rojos en el tapón, momento en el que se interrumpe la presión y se desconectan las palomillas, ya que el resto del contenido del tubo es el portador de las plaquetas.
Seguidamente se somete a este suero resultante a una nueva fase de centrifugado, a 500 g durante un tiempo de ocho minutos, de manera que los posibles restos de glóbulos rojos se sitúan en la parte inferior del tubo, justo por encima del concentrado en plaquetas.
Los 500 mililitros mas próximos al tapón de salida (4) son los que albergan el concentrado en plaquetas, el cual debe someterse finalmente a una fase de decantación en un tubo limpio (6) donde nuevamente se establece una posible sedimentación de glóbulos rojos residuales (7) en su fondo, y por encima de él, el concentrado en plaquetas (8), listo para su utilización.
Como se deduce de lo anteriormente expuesto el protocolo correspondiente al método de la invención resulta fácilmente reproducible en cualquier centrifugadora (5) no necesitando elementos específicos y complicados para su puesta en práctica.
Paralelamente el método de la invención minimiza el riesgo de contaminación ya que es un proceso cerrado en el que la sangre permanece en el mismo tuvo desde el momento de la extracción hasta el momento de la obtención del concentrado de plaquetas, y solo sale de dicho tubo para ser utilizado.
Finalmente simplifica la obtención del concentrado de plaquetas ya que no es necesario ni pipetear la sangre de unos tubos a otros ni utilizar complicados y costosos sistemas de separación que encarecen el producto.
El protocolo es de fácil, simple y corto aprendizaje, obteniendo resultados muy fiables y aptos para su utilización en procesos clínicos.

Claims (4)

1. Método para la obtención de plaquetas, del tipo de los que parten de una fase inicial de extracción de sangre periférica, preferentemente de la flexura del brazo, caracterizado porque dicha fase de extracción de sangre se lleva a cabo en tubos citratados provistos de un émbolo que facilita su extracción, habiéndose previsto que tras dicha extracción se proceda a la rotura del vástago de accionamiento del citado émbolo del tubo, y la introducción del propio tubo de extracción en una máquina centrifugadora, con la especial particularidad de que dicho tubo se introduce en la centrifugadora en posición invertida, es decir con su tapón de apertura orientado hacia el fondo de la centrifugadora, de manera que los elementos de la sangre de mayor peso quedan situados en las proximidades de dicho tapón, habiéndose previsto que a término de la fase de centrifugado y tras la retirada temporal del tapón, se proceda al accionamiento del émbolo del tubo para impulsar al exterior del mismo los glóbulos rojos acumulados junto a dicho tapón, manteniéndose la presión sobre el émbolo hasta la observación del cambio de color producido por la separación entre los glóbulos rojos y el concentrado de plaquetas, momento en el que se procede nuevamente al cierre del tubo con el citado tapón, y a una segunda fase de centrifugado para eliminación de posibles restos de glóbulos rojos, tras cuya segunda fase de centrifugación y su siguiente eliminación de los restos de glóbulos rojos, el concentrado de plaquetas se decanta en un tubo limpio para su posterior utilización.
2. Método para la obtención de plaquetas, según reivindicación 1ª, caracterizado porque la primera fase de centrifugación se lleva a cabo en sangre base 800 g durante un tiempo de tres minutos.
3. Método para la obtención de plaquetas, según reivindicaciones anteriores caracterizado porque el suero sobrenadante de la primera fase de centrifugado se somete a un segunda fase de centrifugado en 500 g durante
ocho minutos.
4. Método para la obtención de plaquetas, según reivindicaciones anteriores, caracterizado porque en función de la capacidad de plaquetas necesaria para la solución de cada problema clínico específico se utilizan entre dos y seis tubos citratados de cinco centímetros cúbicos.
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