ES2322079T3 - Procedimiento para inhibir el efecto prebiotico de las proteinas alimenticias. - Google Patents

Procedimiento para inhibir el efecto prebiotico de las proteinas alimenticias. Download PDF

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Abstract

Uso de un fosfato alimenticio hidrosoluble, seleccionado de entre el pirofosfato de sodio y el tripolifosfato de sodio, para la preparación de un inhibidor del efecto prebiótico de las proteínas alimenticias frente a la microflora bacteriana bucal de los animales carnívoros domésticos, destinado a la prevención o al tratamiento de los trastornos asociados al desarrollo de la microflora bacteriana bucal de los animales.

Description

Procedimiento para inhibir el efecto prebiótico de las proteínas alimenticias.
La invención se refiere a un procedimiento para inhibir el efecto probiótico o prebiótico de las proteínas alimenticias frente a la microflora bacteriana de la cavidad bucal de los carnívoros domésticos. La invención consiste en inhibir este efecto por medio del uso de fosfatos alimenticios hidrosolubles.
La cavidad bucal de los perros y de los gatos alberga una microflora bacteriana variada, que se clasifica en microflora aerobia y microflora anaerobia. Se encuentra esta microflora sobre las mucosas bucales, sobre los dientes y en la saliva, siendo esta última, debido a su estado acuoso, el medio de desarrollo y también el vehículo de difusión de la microflora.
En el nacimiento, la cavidad bucal del animal es estéril, pero se coloniza rápidamente por las bacterias aerobias y anaerobias en cuanto el joven animal absorbe alimentos. No sólo estos alimentos no son estériles, sino que sus proteínas, difundidas en la saliva, o en forma residual sobre las mucosas, sobre y entre los dientes, favorecen el desarrollo de la microflora microbiana. Se dice entonces que estas proteínas tienen un efecto prebiótico o probiótico frente a la microflora (de pro, por, y bios, vida, al contrario de antibiótico). Se debe observar que la saliva, que está producida estérilmente por las glándulas salivares, nunca podría haber sido un medio de desarrollo y de difusión de la microflora bacteriana sin la presencia de las proteínas alimenticias.
Según la presente invención se usan indiferentemente los términos "prebióticos" o "probióticos" para definir el mismo efecto de favorecer el crecimiento y/o la actividad metabólica de microorganismos.
Desafortunadamente, en los perros y en los gatos, la higiene bucal difícilmente se puede realizar diariamente. El aclarado de la boca con unos desinfectantes, el raspado y el cepillado de los dientes con un dentífrico después de las comidas, no son unas prácticas habituales como en el ser humano. Por otro lado, los perros y los gatos son alimentados cada vez mejor, frecuentemente varias veces al día, o bien con unas raciones "domésticas", o bien con unos alimentos comerciales denominados "petfoods". Estos últimos pueden ser unos alimentos secos, húmedos o semi-húmedos, unos "snacks" o unas golosinas. Sea cual sea su origen o su presentación, todos estos alimentos aportan unas proteínas de origen animal o vegetal, necesarias ciertamente para la nutrición de los animales, pero que dejan unos residuos favorables para el desarrollo de la microflora bacteriana bucal.
El desarrollo habitual de la flora micro-bacteriana puede provocar unos efectos estéticos indeseables, tales como mal aliento transitorio que conviene controlar.
Cuando esta microflora bacteriana se desarrolla de manera excesiva en la cavidad bucal, el animal hospedante puede presentar numerosos trastornos bien conocidos por los criadores y por los veterinarios, por cuanto que los perros y los gatos tienen unos repliegues sobre sus encías que forman unas "bolsas gingivales":
-
halitosis (mal aliento),
-
gingivitis (inflamación de la encía),
-
parodontitis o enfermedad periodontal (inflamación del parodonto, es decir, del conjunto de los tejidos de soporte y de enganche de los dientes),
-
faringitis (inflamación de la mucosa de la faringe),
-
etc.
Este desarrollo excesivo, patológico, se asocia a un trastorno en el control de la flora microbiana que se distingue del desarrollo habitual que provoca simples efectos estéticos indeseables.
Se pueden tratar estos trastornos mediante el uso de agentes antimicrobianos (Trevor Chin Quee, Trianthi Roussou y E.C.S. Chan, "In vitro activity of Rodogyl against putative periodontopathic bacteria", Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Vol. 24, nº 3, 1983, p. 445-447; K.S. Kornman, B. Siegrist, W.A. Soskolne y K. Nuki, "The predominant cultivable subgingival flora of beagle dogs following ligature placement and metronidazole therapy", Journal of Periodontal Research, Vol. 16, 1981, p. 251-258).
Sin embargo, estos tratamientos con unos agentes antimicrobianos son frecuentemente tardíos, puesto que se usan sólo cuando ya son bien visibles los trastornos. Por lo tanto, es esencial encontrar unos medios para disminuir el desarrollo excesivo de la microflora bacteriana de la cavidad bucal de los perros y de los gatos, antes de que ésta provoque unos trastornos patológicos.
El solicitante ha descubierto, de manera inesperada, que unos fosfatos alimenticios son capaces de inhibir el efecto prebiótico de las proteínas alimenticias frente a la microflora de la cavidad bucal de los carnívoros domésticos. Es esencial que estos fosfatos sean hidrosolubles para ser activos en la saliva de los animales. Por lo tanto, es preferible usar unos pirofosfatos o unos polifosfatos de sodio. La aportación de fosfato puede llevarse a cabo sola o a través de un alimento, o mediante cualquier preparación veterinaria o no. En todos los casos, el experto en la materia aportará el fosfato a usar en cantidad suficiente para que se encuentre por lo menos en un porcentaje de 0,50% de la saliva.
Según la patente WO 93/25087 de la Universidad de Indiana, los fosfatos, y particularmente el hexametafosfato de sodio, ya han sido usados como agentes quelantes y disolventes para impedir la formación de cristales de calcio que constituyen el sarro dental de los animales domésticos. Sin embargo, esta técnica anterior no ha descrito de ninguna manera el efecto inhibidor de los fosfatos frente a la acción prebiótica de las proteínas alimenticias para la microflora bacteriana de la cavidad bucal.
La presente invención se refiere por lo tanto a un procedimiento de inhibición del efecto prebiótico de las proteínas alimenticias frente a la microflora bacteriana bucal de los animales carnívoros domésticos, consistiendo dicho procedimiento en administrar al animal carnívoro doméstico un inhibidor de efecto prebiótico, comprendiendo el inhibidor un fosfato alimenticio hidrosoluble, seleccionado de entre el pirofosfato de sodio y el tripolifosfato de sodio.
Este procedimiento de inhibición es un procedimiento no terapéutico cuando se trata de controlar el desarrollo habitual de la flora bacteriana.
Este procedimiento puede tener una finalidad terapéutica cuando se trata de controlar el desarrollo excesivo de la flora bacteriana.
Según la presente invención, el inhibidor puede estar constituido por un solo fosfato alimenticio hidrosoluble o por una mezcla de fosfatos alimenticios hidrosolubles.
Los fosfatos alimenticios hidrosolubles son bien conocidos por el experto en la materia, particularmente los autorizados por la Directiva 70/524/CEE, publicada en el Boletín Oficial de la Unión Europea del 25.2.2004.
De manera preferida, el fosfato hidrosoluble es diferente de un hexametafosfato de sodio, y ventajosamente se selecciona de entre los pirofosfatos y los polifosfatos.
Según un modo preferido de realización de la invención, el fosfato alimenticio se usa en una cantidad tal que se encuentra disuelto por lo menos al 0,5% en la saliva de los animales.
Según la invención, el fosfato alimenticio se puede administrar solo a los animales o ser aportado en mezcla con unos alimentos para animales carnívoros domésticos.
Los alimentos se seleccionan de entre las raciones "domésticas", o los alimentos industriales secos, húmedos, semi-húmedos, snacks o golosinas.
De manera ventajosa, la cantidad de fosfato alimenticio en el alimento complementado es superior o igual a 1% en peso, estando preferentemente comprendido entre 1 y 2% en peso.
Según la invención, el inhibidor se puede añadir a los alimentos de manera extemporánea o también mezclado previamente.
Según otro modo de realización de la invención, el inhibidor del efecto prebiótico se administra a los animales carnívoros domésticos en una preparación veterinaria o no.
Los ejemplos no exhaustivos y no limitativos siguientes permiten ilustrar la invención.
Ejemplos
Para todos los experimentos, se ha extraído la microflora bacteriana de la cavidad bucal, se ha conservado en un medio de conservación, y después se ha cultivado en saliva artificial según el siguiente protocolo:
Extracción de la microflora bacteriana y preparación del inóculo
Se han anestesiado dos gatos machos de raza "europea", que pesan aproximadamente 5,50 kg, con 0,3 ml de medetomidina en disolución a 0,085 g/100 ml (Domitor, ND) y 0,26 ml de ketamina en disolución a 10 g/1.000 ml (Imalgène 1000, ND).
En cada animal así inmovilizado, se aspira estérilmente la saliva con una pipeta o se rasca la base de los dientes, las encías, y las bolsas gingivales con el dorso de un escalpelo estéril.
Se transfiere el conjunto de las muestras y se diluye bien en 100 ml de un medio de conservación estéril (medio tiocolato con resazurina de Biokar adicionado con 25% de glicerol). El medio de conservación que contiene las muestras se transfiere a unos tubos de microperlas (Cryobilles, ND de AES). Después, estos tubos se incuban durante 6 horas en autoclave a 37ºC, en vasija bajo CO_{2}, antes de ser congelados para servir ulteriormente.
Durante el uso ulterior, cada tubo se descongela a temperatura ambiente, y después se incuba durante 12 horas a 37ºC, en vasija bajo CO_{2}. Se cuentan las bacterias aerobias y anaerobias según los métodos descritos a continuación. Después, se diluye el contenido de cada tubo con el medio de conservación estéril para obtener un inóculo de 5.000 (3.70 Log10) gérmenes revivificables en 0,2 ml.
Método de recuento de las bacterias
La microflora aerobia se cultiva y después se cuenta sobre un medio tripticasa soja (Biokar) incubado a 37ºC durante 48 horas.
La microflora anaerobia se cultiva y después se cuenta sobre un medio de Schaedler (Biokar) adicionado con 5% de sangre desfibrinada estéril de cordero, incubado a 37ºC, bajo CO_{2} en vasija, durante 48 horas.
Saliva artificial
La saliva artificial de base se prepara según la tabla 31 de la página 244 de la obra Biological Handbooks-Metabolism, compiled and edited by Philip L. Altman y Dorothy S. Dittmer, publicada por la Federation of American Societies for Experimental Biology, 1968.
Esta saliva de base se adiciona con L-cisteína a razón de 0,5 g/litro para bajar su potencial redox a fin de poder hacer crecer en ella al mismo tiempo la microflora bacteriana aerobia y la microflora bacteriana anaerobia. El conjunto se denominará a continuación "saliva artificial".
Experimentación
Se reparte la saliva artificial en unos tubos de ensayo a razón de 20 ml por tubo. Cada tubo está adicionado o no con proteína, en presencia o no del fosfato a ensayar. Cada tratamiento está compuesto por dos tubos.
El conjunto se introduce en autoclave a 110ºC durante 15 minutos.
Cada tubo se inocula a continuación con 0,2 ml del inóculo descrito anteriormente. El conjunto se incuba en autoclave a 37ºC, sin agitación.
Al cabo de 24, ó 48 ó 72 horas de incubación, se cuenta la flora aerobia y la flora anaerobia según los métodos descritos anteriormente.
El resultado de cada tratamiento es la media de los recuentos de dos tubos de ensayo expresada en Log10 de las C.F.U. (Colony Forming Units) por ml de saliva artificial.
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Experimento 1
Los tratamientos han sido las incorporaciones de una harina de carne de ave deshidratada (proteína DSH, de la Société des Protéines Industrielles, 56230 Berric, Francia, que titula el 70% de materias nitrogenadas totales) a razón respectivamente de 0, 0,5, 1,0 y 1,5% en la saliva artificial.
La tabla 1 muestra que, en ausencia de la proteína, la microflora bacteriana aerobia y anaerobia no crece, o crece muy difícilmente en la saliva artificial sola. Pero en cuanto la proteína está presente, incluso en porcentajes tan bajos como 0,5%, la microflora tanto aerobia como anaerobia "estalla" a partir de 24 horas de incubación.
Este experimento muestra claramente el efecto prebiótico de esta proteína alimenticia frente a la microflora bacteriana bucal.
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Experimento 2
En este experimento, se ensaya la inhibición del efecto prebiótico de un hidrolizado secado de proteína de ave (proteína MP9007 de la Société des Protéines Industrielles que titula el 72,5% de materias nitrogenadas totales), incorporado al porcentaje de 1% en la saliva artificial, en presencia del fosfato trisódico con el porcentaje de 5 ó
10%.
La tabla 2 muestra que el efecto prebiótico de la proteína MP9007 está completamente inhibido por el fosfato trisódico incorporado al 10%, tanto para la microflora aerobia como para la microflora anaerobia.
El efecto inhibidor del fosfato trisódico al 5%, aunque no total, es también muy importante a partir de 24 horas de incubación.
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Experimento 3
En este experimento, se vuelve a ensayar el fosfato trisódico, pero incorporado sólo al 0,5%, frente al efecto prebiótico de la proteína MP9007 incorporada con el porcentaje de 1% en la saliva artificial. Gracias al experimento anterior, se detiene el ensayo después de 24 horas de incubación.
La tabla 3 muestra que el fosfato trisódico incorporado al 0,5% disminuye todavía más el efecto prebiótico de la proteína MP9007, tanto frente a la microflora aerobia (7,75 contra 8,16 Log10) como frente a la microflora anaerobia (7,75 contra 8,54 Log10).
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Experimento 4
El ensayo consiste en ensayar el efecto inhibidor del tripolifosfato de sodio incorporado al 0, 0,5, 1, 1,5 y 2% frente al efecto prebiótico de la proteína MP9007 incorporada al 1% en la saliva artificial.
La tabla 4 muestra que el tripolifosfato de sodio inhibe de manera importante el efecto prebiótico de la proteína.
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Experimento 5
En este ensayo, se ensaya el efecto inhibidor del tripolifosfato de sodio incorporado al 0, 0,5, 1, 1,5 y 2% frente al efecto prebiótico de un hidrolizado de soja deshidratado (Nurish 1500 IP, ND de Solea Company, que titula el 83% de materias nitrogenadas totales) incorporado al 1% en la saliva artificial.
La tabla 5 muestra que el tripolifosfato de sodio, sea cual sea su porcentaje de incorporación, inhibe prácticamente todo el efecto prebiótico de la proteína vegetal usada.
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Experimento 6
En este ensayo, se ha ensayado el efecto inhibidor del tripolifosfato de sodio incorporado al 0, 0,5, 1, 1,5 y 2% frente al efecto prebiótico de un hidrolizado de soja deshidratado (Nurish 1500 IP, ND de Solea Company, que titula el 83% de materias nitrogenadas totales) incorporado al 0,5 y al 1% en la saliva artificial.
Se han usado en este ensayo unas microfloras bucales extraídas de un perro.
Los resultados indicados en la tabla 6 muestran que el tripolifosfato de sodio inhibe el efecto prebiótico del hidrolizado de soja frente a unas microfloras bucales aerobias y anaerobias de perro. El efecto inhibidor es particularmente importante con un porcentaje de incorporación de tripolifosfato igual o superior a 1%.
TABLA 1
1
TABLA 2
2 
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TABLA 3
4
TABLA 4
5
TABLA 5
6
TABLA 6
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Claims (7)

1. Uso de un fosfato alimenticio hidrosoluble, seleccionado de entre el pirofosfato de sodio y el tripolifosfato de sodio, para la preparación de un inhibidor del efecto prebiótico de las proteínas alimenticias frente a la microflora bacteriana bucal de los animales carnívoros domésticos, destinado a la prevención o al tratamiento de los trastornos asociados al desarrollo de la microflora bacteriana bucal de los animales.
2. Uso según la reivindicación 1, en el que el fosfato alimenticio se encuentra disuelto por lo menos al 0,5% en la saliva de los animales.
3. Uso según una de las reivindicaciones 1 a 2, en el que el inhibidor está destinado a ser administrado solo a los animales.
4. Uso según una de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el inhibidor está destinado a ser aportado en mezcla con unos alimentos para animales carnívoros domésticos.
5. Uso según la reivindicación 4, caracterizado porque el inhibidor está destinado a ser añadido a los alimentos de manera extemporánea.
6. Uso según la reivindicación 5, caracterizado porque el inhibidor está destinado a ser mezclado previamente con los alimentos.
7. Uso según una de las reivindicaciones 5 a 6, en el que los alimentos se seleccionan de entre las raciones "domésticas" o los alimentos industriales secos, húmedos, semi-húmedos, snacks o golosinas.
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