ES2319807T3 - Proceso para obtener zeaxantina a partir de algas. - Google Patents

Abstract

Un proceso para obtener zeaxantina de algas, caracterizado porque (a) algas azul-verde seleccionadas del grupo de cepas que consisten de Anacystis nidulans (L-1402-1), Synechococcus sp. (PCC 7942) y Synechocystis sp. (PCC 6803) se cultivan en la presencia de 0.1 a 20 mM de sales de ácido acético calculado en el medio de cultivo para producir zeaxantina hasta que se alcanza un contenido de antioxidante deseado. b) las algas se cosechan y se utiliza como un producto y/o c) el contenido de zeaxantina se separa de la biomasa restante.

Description

Proceso para obtener zeaxantina a partir de algas.

Objeto de la invención

La presente invención se relaciona con un proceso obtener zeaxantina a partir de algas específicas y el uso de cepas de alga específicas para la producción de zeaxantina y productos enriquecido con zeaxantina.

Estado de la técnica

La Zeaxantina, junto con luteína, es un componente esencial de pigmento macular en la retina del ojo. Un nivel bajo recaptación de este caratenoide particular incrementa el riesgo de degeneración macular relacionada (AMD) y cataratas, que conduce a deterioro visual y ceguera adquirida, y son asuntos clave de calidad de vida entre millones de personas de edad avanzada. Uno de los primeros estudios a gran escala sobre los carotenoides es el Estudio de Control de Casos de enfermedad Ocular, en el que la dieta se compara con el riesgo de desarrollar AMD. Los resultados encuentran un riesgo significativamente inferior de desarrollar la enfermedad ocular en personas que muestran altas cantidades de luteína y zeaxantina en su sangre. También, las personas que han seguido una dieta con grandes cantidades de luteína y zeaxantina desarrollan un riesgo significativamente menor de AMD que aquellas cuya dieta contiene la menor cantidad (tan baja como 1.2 mg por día). Estudios dietarios confirman la asociación entre el consumo frecuente de espinaca o acelga, que son fuentes particularmente buenas de luteína y zeaxantina y de bajo riesgo de AMD. Resultados similares se encuentran en un análisis reciente de un estudio dietario de los Estados Unidos llamado el Tercer Examen Nacional de Nutrición y Salud o NHANES III. Este análisis también muestra que consumir luteína y zeaxantina se asocia con un riesgo reducido de desarrollar AMD. Mientras que la luteína es relativamente abundante en el alimento que comemos, la zeaxantina que no se puede obtener fácilmente a través de una dieta bien balanceada, y así se debe agregar como un aditivo del alimento.

La Zeaxantina (3,3'-dihidroxi-\beta-caroteno) representa un carotenoide oxigenado o xantófilo. El sistema de unión doble conjugado determina su color (amarillo-rojo) y es responsable para la acción biológica.

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Las propiedades fisiológicas de la zeaxantina y particularmente su función como un antioxidante se deben a su potencial para inactivar el oxígeno único y para apagar los radicales activos. Hoy en día, la zeaxantina se produce principalmente sintéticamente en razón al contenido de este carotenoide en fuentes naturales se considera que es baja para cualquier producción industrial bajo condiciones económicas. Por ejemplo, la zeaxantina está presente en algunas bacterias (por ejemplo Flavobacterium, Paracoccus, Halobacterium, Xanthobacter o Erwinia) y plantas más grandes, en donde ellos juegan un papel en el Ciclo así llamado Xantófilo. En el caso de Flavobacterium el contenido volumétrico en la zeaxantina es 10.6 mg/l después de un mejoramiento de seis veces al utilizar intermedios diferentes del ciclo de ácido cítrico. Con respecto a la micro-alga Neospongiococcum excentricum, el contenido de zeaxantina del tipo silvestre es 0.35 mg/g de peso seco. En un mutante constitutivo de solución salina Dunaliella se ha encontrado que el contenido de zeaxantina es aproximadamente 6 mg/g de peso seco [Ver Jin et al. Biotechnol. Bioeng. 81: 15-124 (2002)].

El problema complejo que subyace a la presente invención ha sido por lo tanto desarrollar un proceso que permita obtener zeaxantina a partir de fuentes naturales en producciones mayores comparado con el estado de la técnica, más particularmente de algas que muestran simultáneamente

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una proporción de crecimiento específica \mu en medio de altas condiciones de por lo menos 0.07 h^{-1} (medido bajo condiciones fototrópicas utilizando el medio inorgánico);

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Una proporción zeaxantina/luteína de más de 10;

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Un factor obtenido mediante multiplicación de la proporción de crecimiento y productividad volumétrica de zeaxantina de por lo menos 0,01 mgl-^{1}h^{-2};

\bullet

una proporción de clorofila/zeaxantina de menos de 10, y

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Una productividad de zeaxantina volumétrica de por lo menos 0.04 mg 1^{-1}h^{-1}.

En adición, el material de partida debe ser fácil para cultivar y cosechar de tal manera que sea posible llevar a cabo la reacción en un fotobioreactor. Finalmente, las fuentes deben ser libres de cualesquier toxinas perjudiciales o para cultivar bajo tales condiciones que no producen toxina para evitar la formación de toxina perjudicial, y ser resistentes contra la contaminación.

Descripción de la invención

La presente invención reivindica un proceso para obtener zeaxantina, que se caracteriza porque

(a)

algas azul-verde seleccionadas del grupo de cepas que consisten de Anacystis nidulans (L-1402-1), Synechococcus sp. (PCC 7942) y Synechocystis sp. (PCC 6803) se cultivan en la presencia de 0.1 a 20 mM sales de ácido acético para producir zeaxantina hasta que se alcanza un contenido deseado del antioxidante,

(b)

las algas se cosechan y formulan para un producto y/o

(c)

el contenido de zeaxantina se separa de la biomasa restante.

De forma sorprendente, se ha encontrado que las algas azul-verde (cianobacterias) de los tipos citados, particularmente Anacystis nidulans (L-1402-1), exhiben una producción poderosa de zeaxantina que rellena los requerimientos de complejo como se destacó anteriormente, que permite obtener el producto de valor alto en una cantidad significativamente mayor comparado con cualquier otro microorganismo conocido o planta reportada en el estado de la técnica. Las algas azul-verde citadas en general, y en particular Anacystis, también muestran un número de ventajas adicionales; comparado con otras algas ellas exhiben un crecimiento rápido (el doble del tiempo de 3.6 a 5.3 h), no se agrupan y son fácilmente manejados, de tal manera que ellos son adecuados para cultivo, especialmente en fotobioreactores tubulares. Ellas auto crecen o mixotróficamente en un medio mineral barato y muy simple y son resistentes con respecto a la contaminación.

Algas azul-verde

Entre las tres cepas citadas anteriormente, se prefiere Anacystis nidulans (L-1402-1) ya que no solo exhibe la más alta productividad con respecto a zeaxantina, sino que también muestra la mejor resistencia contra contaminantes, y la proporción d crecimiento más rápida. No obstante, se debería entender que la presente invención no se limita a este tipo de formas, si no que también abarca cualesquier mutantes de estas cepas que incluyen formas obtenidas mediante modificación genética o ingeniería.

Condiciones de cultivo

Muchas condiciones de cultivo y medios de cultivo se conocen para cultivos madre en escala pequeña y cultivos a gran escala de células de algas. Sin embargo, para los propósitos de la presente invención, se encuentra que las condiciones de cultivo y medio óptimas son actualmente las condiciones de cultivo simple relacionadas y medios descritos aquí adelante, éstas por lo tanto son una de la más preferidas de acuerdo con la invención. Por ejemplo, la temperatura es algunas veces un factor crítico para el crecimiento de las algas. Se ha encontrado que se alcanzan condiciones muy favorables entre 20 y 40ºC con un óptimo de aproximadamente 30ºC.

En una modalidad preferida de la invención, las algas crecen mixotróficamente (con nutrientes adicionales para mejorar el crecimiento celular), más particularmente, el medio de Arnon se ha encontrado para soportar el crecimiento en una forma óptima, preferiblemente si se combina con nitratos. La proporción de crecimiento se incrementa mediante la adición de sales de ácido acético, en particular acetato de sodio, en cantidades de 0.1 a 20, preferiblemente aproximadamente 15 mM.

Finalmente, la irradiación también es un parámetro crítico. Tanto como se concierne para detección y pruebas de planta pilotos, se utilizan lámparas de haluro de mercurio y el cultivo se lleva a cabo bajo una irradiación de luz de 500 tao 1,500, y preferiblemente de aproximadamente 1,200 \muEm-^{2}s^{-1}. Para la producción, por supuesto, se prefieren condiciones de luz natural.

En una modalidad preferida de la presente invención, las células se cultivan en un fotobioreactor, preferiblemente un fotobioreactor de panel o tubular, que tiene la ventaja de un área de superficie muy grande con respecto a su volumen para la producción a gran escala óptima de células de algas en su fase de crecimiento. Usualmente, tales bioreactores tienen un volumen en el rango de 100 a 35,000 litros, que depende de la escala de producción que se desea, y que como componentes integrales contienen tubos disponibles comercialmente hechos de PVC, acrílico (plexiglás), policarbonato o vidrio, que tiene un diámetro de aproximadamente 3 a 5 cm. En operación, las células de cultivo se hacen circular a través del dispositivo en agua potable al que se agrega CO_{2}, utilizando una bomba. Los cultivos verdes de los cultivos madre líquidos (o inocular) se inoculan en dicho fotobioreactor, en el que las algas se burbujean con un gas que contiene CO_{2} que contiene gas similar a mezcla de CO_{2} en aire o CO_{2} como el componente de gas principal. Burbujerar y bombear también sirven para prevenir la división celular. Para la escala de producción en un fotoreactor tubular, se puede aplicar 90 a 100% de CO_{2} puro, también se prefieren CO_{2} no costosos de plantas industriales (por ejemplo de un proceso de cal viva).

La concentración celular inicial en el fotobioreactor durante el proceso el cultivo se ajusta preferiblemente de aproximadamente 0.1 a 0.3 * 10^{6} células/ml en concentraciones celulares (masa seca) entre 0,1 - 8 g biomasa seca/l, mediante la dilución con el medio de cultivo modificado fresco. La intensidad de luz se mantiene usualmente en el rango de entre 500 y 1,500 PE*m^{-2}s^{-1} como se proporciona por lámparas de haluro de mercurio o como luz natural. Se ha encontrado ventajoso para mantener la temperatura en el fotobioreactor en el rango entre 25 y 28ºC. Al utilizar un alojamiento en vidrio como una puerta de entada al cuarto del cultivo que se mantiene fácilmente a temperaturas entre 32ºC en Europa central y norte en tiempo de verano. En adición, el fotobioreactor tubular y colocar la puerta de entrada tiene la ventaja de operación controlada y de largo plazo, limpia, y si el fotobioreactor se hace de tubos de vidrio en lugar de plástico esto no requiere mantenimiento extensivo o remozamiento con el fin de operar durante un lago tiempo. Adicionalmente, las condiciones de cultivo son extremadamente costosas ya que las células que crecen en un medio mineral barato de agua potable con la adición de dióxido de carbono como, esencialmente, la fuente principal de nutriente.

Cosecha y recuperación de zeaxantina

Con el fin de obtener zeaxantina o un producto enriquecido con zeaxantina de las células de algas cultivadas, muchos procedimientos se han descrito, por ejemplo, los procedimientos en la WO 89/006910. Mientras estos procedimientos se pueden emplear de acuerdo con la presente invención, el procedimiento preferido es que de la centrifugación, o sedimentación o filtración bajo vacío para concentrar las células, y secado de las células concentradas. La masa celular seca luego se almacena preferiblemente a temperaturas bajas (por ejemplo, - 20ºC o aún menos) bajo condiciones libres de oxígeno, por ejemplo, mediante empaque al vacío o, preferiblemente, mediante la introducción en bolsas plásticas o similares junto con nitrógeno (N_{2}) para remover el oxígeno.

En otra modalidad preferida de la invención, el proceso comprende las siguientes etapas adicionales:

(i) Cosechar las células cultivadas en la etapa (b) al recolectar dichas células para formar una suspensión concentrada,

(ii) agregar opcionalmente antioxidantes y emulsificantes para dicha suspensión, y

(iii) interrumpir las células recolectadas y secarlas para obtener una zeaxantina o un producto enriquecido con zeaxantina.

Generalmente, la recolección y concentración de dichas células se lleva a cabo mediante centrifugación, o sedimentación o filtración bajo vacío, y el secado de dichas células se hace mediante liofilización, secado combinado y molido (molido de vórtice de aire), o secado por rociado.

Más particularmente, mientras cada ciclo de cultivo óptimamente dura aproximadamente de cuatro a seis días, el siguiente procedimiento de cosecha se desarrolla con base en el hecho que las células de algas fácilmente sedimentan una vez recolectado del fotobioreactor. Así, la biomasa celular del fotobioreactor se recolecta en un embudo de volumen grande estándar, por ejemplo un embudo Imhoff, y dejar permanecer durante unas pocas horas (aproximadamente 3-5 horas) para facilitar la sedimentación de las células. Se encuentra que aproximadamente 30% b.w. del volumen total de biomasa del bioreactor representa el sedimento celular mientras el restante aproximado 70% b.w. del volumen recolectado total representa el agua potable utilizado en el cultivo. Esta agua potable se puede así recolectar fácilmente y utilizar para una nueva inoculación de bioreactor y el procedimiento de cultivo (es decir, el agua potable originalmente utilizada es reciclable casi completamente). El cultivo celular precipitado y concentrado anterior luego se recolecta del embudo y sometido a centrifugación o filtración de vacío para células concentradas adicionales. De forma rutinaria, una producción de biomasa de aproximadamente 40% b.w. Los sólidos se obtienen siguiendo la etapa de centrifugación, o aproximadamente 30% b.w. Los sólidos siguen filtración de vacío. Aquí, también, el aproximadamente 60% b.w. del volumen total sometido a centrifugación, o aproximadamente 70% b.w. del volumen total sometido a filtración de vacío, es el volumen de sobrenadante, también se puede recolectar y utilizar para otra ronda del procedimiento de cultivo, este sobrenadante es principalmente agua potable original utilizada en el procedimiento.

La pasta celular concentrada obtenida de la etapa de centrifugación anterior se homogeniza luego y se estabiliza al agregar anti-oxidantes y luego se seca, preferiblemente mediante liofilización, aunque el secado por rociado también se provee para ser efectivo. Tales antioxidantes se seleccionan del grupo que consiste de etoxiquina, hidroxianisol butilada, hidroxitolueno butilada (BHT), tocoferoles, di-terc-butil-paracresol y galato propilo. El antioxidante preferido, sin embargo, es un producto tocoferol natural que contiene 30% b.w. de tocoferol alfa que tiene por lo menos un producto natural real. Usualmente, la cantidad de antioxidante agregada en el procedimiento de molido variará de aproximadamente 0.05 a 5% (p/p) de la cantidad de polvo seco. Los polvos se empacan en una bolsa plástica cargada con gas de nitrógeno para remover el oxígeno (que origina la oxidación del pigmento, Es decir degradación del activo) y luego se almacenan a -20ºC antes, por ejemplo, de procesamiento para preparar el aditivo alimenticio.

La etapa final de producir una zeaxantina o un producto enriquecido con zeaxantina en la forma de partículas pequeñas fácilmente digeridas por los humanos o animales también se puede llevar a cabo en un número de vías como se describió previamente en la técnica. Así, la zeaxantina y otros componentes de algas se procesan para asegurar una alta biodisponibilidad. El procedimiento preferido involucra el uso de un molino de bolas estándar en el que la pasta de biomasa se desintegra como una suspensión en agua en la presencia de cualquier anti-oxidante adecuado para prevenir la oxidación de la zeaxantina. Después de secado, esto proporciona un producto similar a polvo de tamaño de partícula pequeña.

El polvo así obtenido luego se puede utilizar directamente o en mezcla con otros ingredientes como un aditivo para harina de pescado por motivo de coloración o en aplicaciones de alimento similares a complementos dietarios. En otro proceso, las zeaxantinas se pueden concentrar mediante un proceso de extracción que incluye la extracción con disolventes supercríticos por su uso para la formulación del complemento alimenticio o productos farmacéuticos.

Aplicación Industrial

De acuerdo con la enseñanza de la presente invención, se ha encontrado de forma sorprendente que ciertas algas azul-verde exhiben alta productividad para la producción de zeaxantina, especialmente si se cultiva bajo condiciones optimizadas. Otro objeto de la presente descripción se dirige por lo tanto al uso de algas verde azul seleccionadas del grupo de cepas que consisten de Anacystis nidulans (L-1402-1), Synechococcus sp. (PCC 7492) y Synechocystis sp. (PCC 6803), en sus formas silvestres o en la forma de cualquier mutante, que incluye aquellas formas obtenidas de una modificación genética o ingeniería para la producción de zeaxantina o productos enriquecido con zeaxantina. Finalmente, la presente descripción cubre el uso de zeaxantina o productos enriquecidos con zeaxantina, que incluye la biomasa enriquecida de zeaxantina (como se obtiene directamente del cultivo) como un alimento o aditivo de carga o un cosmético o materia prima farmacéutica.

Ejemplos Análisis de Zeaxantina

Para el análisis de zeaxantina, los pigmentos se extraen con metanol a 70ºC, se centrifuga, el sobrenadante se evapora bajo N_{2} a 30ºC y la píldora se resuspende en acetona, se centrifuga y se analiza mediante HPLC utilizando una columna de cartucho Waters Spherisorb S5 ODS1 4.6 x 250 mm. Los pigmentos se detectan al utilizar un detector de arreglo de fotodiodo.

Condiciones de crecimiento celular

Los cultivos madre de microalgas se hacen crecer fotoautotróficamente en el cultivo de tanda, en 100 ml del medio de cultivo Arnon (medio Arnon, modificado para contener 4 mM de K_{2}HPO_{4} y 20 mM de NaNO_{3}) o medio BG11c (medio azul-verde, www.ccap.ac.uk) en frascos cónicos de 200 ml de capacidad y se ilumina con lámparas fluorescentes a 92 \muE m^{-2}s^{-1}. La temperatura del cultivo es 30ºC. La detección de las cepas para la producción de zeaxantina se desarrolla bajo las siguientes condiciones:

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Cultivos de tanda fotoautotrófica en frascos Roux (750 ml) se inician con células en la fase exponencial de los cultivos madre a 0.7-0.8 mg (clorofilo) l^{-1}

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Irradiación: Continuo, 920-1610 \muEm^{-2}s^{-1} (lámparas de haluro de mercurio)

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Temperatura: 30ºC Burbujeo: Los cultivos se burbujean con aire complementado con 1%(v/v) CO_{2}.

\bullet

Medio de cultivo: Lo mismo como en el caso de cultivo madre.

Se analizan varios parámetros en las diferentes micro-algas, como densidad celular, peso seco, carotenoides y clorofilos, pH, morfología celular y la proporción de crecimiento específica (P). El crecimiento se sigue al determinar la clorofila. Un contenido (mgl-1), o mediante peso seco (gl-1). Para la determinación del peso seco, 5 ml de alícuotas se filtran a través de pesar previamente 0.45 Pm de filtro Millipore de diámetro, se lava dos veces con agua destilada y se seca a 80ºC durante 24 h. La clorofila se determina espectrofotométricamente en extractos de metanol empleando el coeficiente de extinción dado por Mackinney. Para el crecimiento mixotrófico, los cultivos se complementan con 15 a 20 mM de acetato de sodio (experimental) y para la media de optimización de nitrato se complementan con 10 a 40 mM de nitrato de sodio. Para la optimización de la irradiación, se ensayan las irradiaciones de luz de 92 \mum^{-2}s^{-1} a 1610 \muE m^{-2}s^{-1}. La temperatura varía 22ºC a 40ºC en el experimento para la optimización de la temperatura. El medio se optimiza para Anacystis nidulans L-1402; se utiliza el siguiente medio: BG11c, medio Arnon complementado con 20 mM de nitrato, y medio BP (medio Jaworski, catálogo de cepas CCAP).

Selección de cepas de microalgas azul-verde

Las siguientes Tablas 1 y 2 muestran una comparación de cepas de microalgas azul-verde diferentes con respecto a la productividad para zeaxantina (P) y el factor "proporción de crecimiento específica" multiplicado con "productividad de zeaxantina". Como se destacó anteriormente, las algas se cultivan en medio BG11c a 30ºC, la irradiación es 350 Wm^{-2} (1610 \muEm^{-2}s^{-1}). Solo tres de ellos muestran un contenido alto en zeaxantina, en la fase exponencial de crecimiento y en el final del cultivo: Anacystis nidulans L-1402-1, Synechococcus sp. PCC 7942 y Synechocystis sp. PCC 6803. Las tres cepas también exhiben las proporciones de crecimiento específicas más altas. Por lo tanto, estas cepas presentan las productividades de zeaxantina más altas (de 3.0 a 7.9 mg 1^{-1} día-^{1}).

TABLA 1

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TABLA 2

3

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Cinéticas de la acumulación de carotenoides

La Tabla 3 muestras las cinéticas de acumulación de carotenoides diferentes en Anacystis nidulans L-1402-1, que se selecciona para prueba adicional bebido a su alta productividad particular de zeaxantina. La zeaxantina es el carotenoide principal, pero otros carotenoides están presentes en cantidades muy bajas o no detectadas de todos. La zeaxantina en los cultivos se incrementa con el tiempo, cambiando de 1.9 en la fase exponencial a 11.2 mg l^{-1} en la fase estacionaria. Los caratenoides totales siguen la misma tendencia, se incrementa de 2.5 a 14.7 mg l^{-1} del exponencial a la fase estacionaria del cultivo.

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Efecto de medio de crecimiento

En las siguientes Tablas 4, 5 y 6, los parámetros optimizados con respecto al medio de cultivo, se da la irradiación y la concentración de acetato para Anacystis nidulans. El crecimiento celular más alto, se mide como el contenido de clorofila en los cultivos, se obtiene al utilizar medio Arnon complementado con 20 mM de nitrato, mientras se observa el crecimiento más bajo con medio BG11c. En particular, se observa que la proporción crecimiento específica es mayor en BG11c que en el medio Arnon y BP, sin embargo, el contenido de zeaxantina más alto se encuentra en medio Arnon. Por lo tanto, la producción más alta de zeaxantina ocurre cuando las células se hacen crecer con medio Arnon, complementado con 20 mM de nitrato.

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TABLA 3

4

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TABLA 4

5

En adición, se observa que en las cinéticas de la acumulación zeaxantina por Anacystis nidulans hasta el final de la fase exponencial, la acumulación de zeaxantina en BP y medio Arnon es similar y mayor que en el medio BG11c. Después de esto, el desarrollo del cultivo con medio Arnon acumula mucho más zeaxantina diferente a los otros cultivos.

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Efecto de irradiación de luz

La Tabla 5 refleja el efecto de la irradiación de luz en la producción de zeaxantina para Anacystis nidulans. Se ha encontrado que la irradiación de luz óptima para la producción de zeaxantina es 1,150 \muE m^{-2}s^{-1}. Las proporciones de crecimiento específicas más atas, los contenidos de zeaxantina en mg l^{-1} y producciones de zeaxantina se encuentran en las irradiaciones de 1,610 a 690 \muE m^{-2} s^{-1}, la reducción de la productividad a la mitad o menos o cuando la irradiación es inferior a 690 a 460 \muE m^{-2}s^{-1}. Se observa la misma tendencia con respecto al contenido de clorofila y zeaxantina en mg g^{-1} de peso seco.

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TABLA 5

6

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Efecto de acetato de sodio

La Tabla 6 muestra el efecto de acetato de sodio en el crecimiento, contenido de zeaxantina y productividad de zeaxantina en Anacystis nidulans. La proporción de crecimiento específica se mantiene de aproximadamente 0.1 h^{-1} de 0 a 20 mM de acetato, células mueren en 30 mM de acetato. La zeaxantina máxima en la fase exponencial y el final del cultivo se mantiene alrededor del mismo valor de 0 a 15 mM de acetato, se reduce en concentraciones de acetato mayores. El acetato óptimo en el medio es 15 mM, a pesar que la productividad de zeaxantina se mejora por un 27% cuando se compara con cultivos fotoautotróficos.

Claims (7)

1. Un proceso para obtener zeaxantina de algas, caracterizado porque

(a)

algas azul-verde seleccionadas del grupo de cepas que consisten de Anacystis nidulans (L-1402-1), Synechococcus sp. (PCC 7942) y Synechocystis sp. (PCC 6803) se cultivan en la presencia de 0.1 a 20 mM de sales de ácido acético calculado en el medio de cultivo para producir zeaxantina hasta que se alcanza un contenido de antioxidante deseado.

(b)

las algas se cosechan y se utiliza como un producto y/o

(c)

el contenido de zeaxantina se separa de la biomasa restante.

2. El proceso de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque dichas algas azul-verde representan formas silvestres o cualesquier mutantes de estas cepas que incluye aquellas formas obtenidas mediante modificación genética o ingeniería.

3. El proceso de acuerdo con las reivindicaciones 1 y/o 2, caracterizado porque el cultivo de las algas se conduce en una temperatura de 20 a 40ºC.

4. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque el cultivo se conduce utilizando un medio de cultivo mixotrópico.

5. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque el cultivo se conduce bajo una irradiación de luz de 500 a 1,500 \muEm^{-2}s^{-1}.

6. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque el cultivo se conduce en un fotobioreactor.

7. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque las células cultivadas en la etapa (b) se recolectan para formar una suspensión concentrada, opcionalmente se agregan antioxidantes y emulsificantes para dicha suspensión, y las células recolectadas se interrumpen y se secan para obtener una zeaxantina o un producto enriquecido con zeaxantina.