ES2317741A1 - Composition for solar protection based on algae and liquenes extracts. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding) - Google Patents

Composition for solar protection based on algae and liquenes extracts. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding) Download PDF

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ES2317741A1 ES200601662A ES200601662A ES2317741A1 ES 2317741 A1 ES2317741 A1 ES 2317741A1 ES 200601662 A ES200601662 A ES 200601662A ES 200601662 A ES200601662 A ES 200601662A ES 2317741 A1 ES2317741 A1 ES 2317741A1
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Abstract

Composition for solar protection based on extracts of algae and lichens. The present invention is framed in the biotechnological sector and describes the potential use as antioxidant substances of mycosporin-like amino acids (maas), specifically of porphyra-334 isolated from the red algae porphyra leucosticta and of mycosporine-gly isolated from the lichen lichina pygmaea, in addition to its application in the preparation of compositions for sun protection. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)

Description

Composición para protección solar a base de extractos de algas y líquenes.Composition for sun protection based on algae and lichen extracts.

Sector de la técnicaTechnical sector

La presente invención se encuadra en el sector biotecnológico y describe el potencial uso como sustancias antioxidantes de extractos purificados de determinados metabolitos secundarios denominados aminoácidos tipo micosporina (MAAs) aislados de algas rojas y líquenes marinos además de su posible aplicación en productos para protección solar.The present invention is part of the biotechnology sector and describes the potential use as antioxidants of purified extracts of certain secondary metabolites called mycosporin-type amino acids ( MAAs ) isolated from red algae and marine lichens in addition to their possible application in sunscreen products.

Estado de la técnicaState of the art

La radiación ultravioleta (UV) tanto procedente del sol como de fuentes artificiales es potencialmente nociva para los organismos a varios niveles. En humanos, la radiación UVB (longitud de onda = 280-315 nm) es responsable de la producción de eritema actínico, quemaduras solares y carcinogénesis además de estar directamente relacionada con procesos de inmunosupresión mientras que la radiación UVA (longitud de onda=315-400 nm) es la responsable del bronceado inmediato de la piel, del fotoenvejecimiento y la fotosensibilización cutánea. La radiación UVA es capaz de reaccionar con moléculas de oxígeno para dar lugar a oxígeno singlete y anión superóxido, capaces ambos de inducir lesiones de las membranas celulares, desnaturalización proteica y roturas en los enlaces de ADN (Black, H. S., 1993, In: J. Fuchs and L. Packer -eds.- Oxidative stress in Dermatology, Marcel Dekker, New York pp. 243-269).Ultraviolet (UV) radiation both coming from the sun as from artificial sources is potentially harmful to Organisms at various levels. In humans, UVB radiation (wavelength = 280-315 nm) is responsible for the production of actinic erythema, sunburn and carcinogenesis in addition to being directly related to processes of immunosuppression while UVA radiation (length of wave = 315-400 nm) is responsible for tanning immediate skin, photoaging and skin photosensitization. UVA radiation is capable of react with oxygen molecules to give rise to oxygen singlet and superoxide anion, both capable of inducing lesions of cell membranes, protein denaturation and tears in DNA bonds (Black, H. S., 1993, In: J. Fuchs and L. Packer -eds.- Oxidative stress in Dermatology, Marcel Dekker, New York pp. 243-269).

Las respuestas fotobiológicas a la radiación UV dependen de la energía del flujo de fotones incidente y de la eficacia relativa de la energía fotónica para producir un efecto biológico determinado. La capacidad de absorción depende de la naturaleza de las moléculas, siendo las más absorbentes las que contienen grupos cromóforos, como son las proteínas de la queratina, los dobles enlaces de los compuestos orgánicos insaturados, anillos bencénicos, melanina, lipoproteínas, purinas y pirimidinas de los ácidos nucleicos, etc.Photobiological responses to UV radiation depend on the energy of the incident photon flux and the relative efficacy of photonic energy to produce a specific biological effect. The absorption capacity depends on the nature of the molecules, the most absorbent being those containing chromophores groups , such as keratin proteins, double bonds of unsaturated organic compounds, benzene rings, melanin, lipoproteins, purines and pyrimidines. nucleic acids, etc.

El espectro de acción de cada molécula es único, ya que viene fijado por la configuración electrónica de sus átomos y determina las longitudes de onda absorbidas por una molécula que inducen una respuesta fotobiológica específica e indica cuales de dichas longitudes de onda son más aptas para producir un efecto biológico (Rundel R. D.,1983, Physiol. Plant. 58: 360-366). Un espectro de acción no es más que una función que refleja el efecto de una determinada longitud de onda sobre una variable biológica, ya sea a nivel molecular (el daño en ADN) o a nivel de organismo (el crecimiento de las plantas). Cuando el espectro de radiación espectral de emisión del sol o de cualquier fuente de emisión artificial se multiplica por el espectro biológico en unidades relativas se obtiene el espectro de radiación biológicamente efectiva, es decir, aquellas longitudes de onda que potencialmente son las responsables de causar un efecto determinado. En la actualidad se conocen numerosos espectros de acción que describen alteraciones y anomalías relacionadas con la radiación UV, como es el caso de patologías cutáneas como el eritema (McKinlay A.F. & Diffey B.L.,1987, CIE Research Note, CIE-Journal, 6: 17-22), daño en ADN (Setlow, R.B.,1974, Proc Natl. Acad. Sci. USA, 71: 3363-3366), fotocarcinogénesis (De Gruijl F.R., Sterenborg H.J.C.M., Forbes P.D., Davies R.E., Cole C., Kelfkens G., van Weelden H., Slaper H. & van der Leun J.C., 1993, Cancer Res. 53: 53-60), inmunosupresión (De Fabo, E.C. & Noonan F.P., 1983, J. Exp. Med, 158: 84-98), inmunosupresión sistémica (De Fabo E.C. & Kripke M.L., 1980, Photochem Photobiol 32:183), fotoisomerización del cis-urocánico (Gibbs N.K., Norval M., Traynor N.J., Wolf M., Johnson B.E. & Crosby J., 1993, Photochem Photobiol 57: 584-590), formación de radicales oxidantes como el oxígeno singlete (Hanson K.M. & Simon J.D., 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. Usa. 95:10576-10578), elastosis (Wulf H.D., Poulsen T., Davies R.E. & Urbach F., 1989, Photodermatology 6: 44-51) y fotoenvejecimiento (Bisset, D.L., Hannon, D.P. & Orr, T.V., 1989, Photochem. Photobiol. 50: 763-769).The spectrum of action of each molecule is unique, since it is set by the electronic configuration of its atoms and determines the wavelengths absorbed by a molecule that induce a specific photobiological response and indicates which of these wavelengths are more apt to produce a biological effect (Rundel RD, 1983, Physiol. Plant . 58: 360-366). An action spectrum is nothing more than a function that reflects the effect of a certain wavelength on a biological variable, either at the molecular level (DNA damage) or at the organism level (plant growth). When the spectral radiation spectrum of the sun's emission or of any source of artificial emission is multiplied by the biological spectrum in relative units, the biologically effective radiation spectrum is obtained, that is, those wavelengths that are potentially responsible for causing a determined effect Currently, numerous action spectra are known that describe alterations and anomalies related to UV radiation, such as skin diseases such as erythema (McKinlay AF & Diffey BL, 1987, CIE Research Note, CIE-Journal, 6: 17 -22), DNA damage (Setlow, RB, 1974, Proc Natl. Acad. Sci. USA , 71: 3363-3366), photocarcinogenesis (De Gruijl FR, Sterenborg HJCM, Forbes PD, Davies RE, Cole C., Kelfkens G., van Weelden H., Slaper H. & van der Leun JC, 1993, Cancer Res . 53: 53-60), immunosuppression (De Fabo, EC & Noonan FP, 1983, J. Exp. Med , 158: 84 -98), systemic immunosuppression (De Fabo EC & Kripke ML, 1980, Photochem Photobiol 32: 183), photoisomerization of cis-urocanic (Gibbs NK, Norval M., Traynor NJ, Wolf M., Johnson BE & Crosby J., 1993, Photochem Photobiol 57: 584-590), formation of oxidizing radicals such as singlet oxygen (Hanson KM & Simon JD, 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. Usa . 95: 10576-10578), elastosis (Wulf HD, Poulsen T., Davies RE & Urbach F., 1989, Photodermatology 6: 44-51) and photoaging (Bisset, DL, Hannon, DP & Orr, TV, 1989, Photochem. Photobiol 50: 763-769).

Los espectros de acción son una herramienta fundamental en campos como la fotobiología y medicina ya que permite incluso correlacionar causas/efectos en los mecanismos que desencadenan una patología.Action spectra are a tool. fundamental in fields such as photobiology and medicine since it even allows correlating causes / effects in the mechanisms that They trigger a pathology.

La disminución de la capa de ozono detectada en estas últimas décadas junto a mayores exposiciones a la radiación UV por causas laborales, estéticas, ocio, etc., han incrementado los efectos nocivos en la salud humana de la radiación UV y se ha producido un incremento de la incidencia de cáncer de piel.The decrease in the ozone layer detected in these last decades together with greater radiation exposures UV due to work, aesthetic, leisure, etc., have increased  harmful effects on human health of UV radiation and it has produced an increase in the incidence of skin cancer.

En el mercado existen muchos protectores solares que se presentan como eficaces frente a las radiaciones UVA y UVB. El efecto protector de los filtros está bien establecido en lo que respecta a radiación UVB, se utiliza el factor de protección solar (FPS), tomándose como marcador oficial únicamente la protección frente al eritema actínico (quemadura solar). Sin embargo, respecto a la radiación UVA, a pesar de que muchos productos reivindican protección contra la misma, no existe un sistema estandarizado de evaluación y, por lo tanto, es difícil discernir el nivel de prevención que otorgan. Es más, un problema de muchos de los filtros solares del mercado, de origen sintético, es que provocan reacciones de fotosensibilidad en algunos individuos.There are many sunscreens in the market which are presented as effective against UVA and UVB radiation. The protective effect of the filters is well established in what Regarding UVB radiation, the sun protection factor is used (FPS), taking only the protection as official marker against actinic erythema (sunburn). However, respect to UVA radiation, although many products claim protection against it, there is no standardized system of evaluation and therefore it is difficult to discern the level of prevention they grant. Moreover, a problem with many of the filters solar of the market, of synthetic origin, is that they cause reactions of photosensitivity in some individuals.

Los aminoácidos tipo micosporina (MAAs), presentes en multitud de organismos acuáticos, son compuestos que tienen una estructura química caracterizada por un anillo de ciclohexenona o ciclohexenimina con aminoácidos o aminoalcoholes incorporados en dichos anillos. Estas moléculas, debido a su estructura química, son eficaces como filtros de la radiación ultravioleta entre 300 y 350 nm. Los MAAs disipan térmicamente, de modo muy eficiente, la energía absorbida procedente de la radiación UV sin producir residuos de la fotolisis de las moléculas. Todo ello, unido a la alta fotoestabilidad in vitro (Conde, F. R., Churio, M. S. & Previtali, C. M., 2000, J Photochem. Photobiol. 56:139-144; Conde, F. R., Churio, M. S. & Previtali, C. M., 2004, Photochemical and Photobiological Sciences 3: 960-967) e in vivo (Adams, N. L. & Shick, J. M., 2001, Mar. Biol. 138:267-280) son atributos de un buen fotoprotector frente a la radiación UV.Mycosporin-like amino acids ( MAAs ), present in many aquatic organisms, are compounds that have a chemical structure characterized by a cyclohexenone or cyclohexenimine ring with amino acids or amino alcohols incorporated into said rings. These molecules, due to their chemical structure, are effective as filters of ultraviolet radiation between 300 and 350 nm. The MAAs thermally dissipate, in a very efficient way, the energy absorbed from the UV radiation without producing residues of the photolysis of the molecules. All this, together with high in vitro photostability (Count, FR, Churio, MS & Previtali, CM, 2000, J Photochem. Photobiol . 56: 139-144; Count, FR, Churio, MS & Previtali, CM, 2004, Photochemical and Photobiological Sciences 3: 960-967) and in vivo (Adams, NL & Shick, JM, 2001, Mar. Biol . 138: 267-280) are attributes of a good photoprotector against UV radiation.

En algas rojas, los MAAs pueden además tener actividad antioxidante, inicialmente se demostró in vitro en mycosporine-gly (Dunlap, W. C. & Yamamoto, Y., 1995, Comp. Biochem. Physiol. B 112:105-114). Nakayama y colaboradores (1999) encontraron que el usijirene aislado del alga roja Porphyra yezoensis tenía una alta actividad antioxidante (Nakayama, R., Tamura, Y., Kikuzaki, H. & Nakatani, N., 1999, J Am. Oil Chem. Soc. 76: 649-653). Esta propiedad podría estar también relacionada con la capacidad de los MAAs extraídos de Porphyra yezoensis para bloquear la producción de fotodímeros de timina (Misonou T., Saitoh J., Oshiba S., Tokitomo Y., Maegawa M., Inoue Y., Hori H. & Sakurai T., 2003, Mar. Biotechnol. 5: 194-200). Además, ciertos MAAs son capaces de secuestrar radicales libres hidrosolubles e inhibir en un alto porcentaje la peroxidación lipídica y la formación de radicales superóxido (P200502161, P200502162). Una gran parte de los organismos acuáticos vegetales contienen aminoácidos tipo micosporina. Los aminoácidos tipo micosporina que se encuentran en algunos animales marinos son obtenidos a partir de la dieta. Existe una gran variedad en lo que respecta al contenido de cada uno de ellos en especies diferentes, siendo las algas rojas y los líquenes los que presentan concentraciones más altas en la mayoría de los casos. El alga roja Porphyra leucosticta presenta del orden de 3-6 mg/gPS del MAA porphyra-334 mientras que el liquen Lichina pygmaea del orden de 1-1.5 mg/gPS de mycosporine-gly.In red algae, MAAs may also have antioxidant activity, initially demonstrated in vitro in mycosporine-gly (Dunlap, WC & Yamamoto, Y., 1995, Comp. Biochem. Physiol. B 112: 105-114). Nakayama et al. (1999) found that the usijirene isolated from the red seaweed Porphyra yezoensis had a high antioxidant activity (Nakayama, R., Tamura, Y., Kikuzaki, H. & Nakatani, N., 1999, J Am. Oil Chem. Soc . 76: 649-653). This property could also be related to the ability of MAAs extracted from Porphyra yezoensis to block the production of thymine photodimers (Misonou T., Saitoh J., Oshiba S., Tokitomo Y., Maegawa M., Inoue Y., Hori H. & Sakurai T., 2003, Mar. Biotechnol . 5: 194-200). In addition, certain MAAs are capable of sequestering water-soluble free radicals and inhibiting lipid peroxidation and superoxide radical formation in a high percentage (P200502161, P200502162). A large part of plant aquatic organisms contain mycosporin-like amino acids. The mycosporin-like amino acids found in some marine animals are obtained from the diet. There is a great variety in regard to the content of each of them in different species, with red algae and lichens having the highest concentrations in most cases. The red seaweed Porphyra leucosticta has the order of 3-6 mg / gPS of the MAA porphyra-334 while the lichen Lichina pygmaea of the order of 1-1.5 mg / gPS of mycosporine-gly .

Un cierto número de trabajos han evaluado la capacidad fotoprotectora de extractos de plantas, cianobacterias, líquenes, etc., que contenían sustancias capaces de absorber la radiación UV. Concretamente extractos del liquen Collema inhibían la formación de dímeros de timina y presentaban resultados positivos en ensayos de supervivencia de queratinocitos humanos (WO 03/020236 A2).A certain number of works have evaluated the photoprotective capacity of plant extracts, cyanobacteria, lichens, etc., which contained substances capable of absorbing UV radiation. Specifically, extracts of lichen Collema inhibited the formation of thymine dimers and presented positive results in human keratinocyte survival assays (WO 03/020236 A2).

Otros autores han mezclado MAAs tales como mycosporine-gly, palythine, asterina-330, palythinol, palythene, porphyra-334, mycosporine-gly-valine, shinorine y MAA-357 provenientes de organismos marinos antárticos consiguiendo emulsiones hidro-oleosas con factores de protección solar de al menos 2 pero calculado a través de cambios en la eficiencia del fotosistema II en cultivos de cianobacterias, a través de la fluorescencia de la clorofila, F_{v}/F_{m} (WO 00/24369). Dichas composiciones son reivindicadas comprendiendo, además de un MAA, al menos un carrier, un carotenoide o derivado con actividad protectora frente a la radiación solar, y un compuesto polifenólico o derivado también con dicha actividad. De forma similar, el documento WO 02/39974 reivindica composiciones para el cuidado personal que comprenden un MAA seleccionado del grupo palythine, palythine serine, palythinol, asterina, mycosporine-2-glycine, shinorine, porphyra-334, N-methyl mycosporine serine, N-methyl mycosporine threonine, mycosporine-glycine valine, palythenic acid, usijirene y palythene; y el uso de dicho MAA en combinación con un agente fotoprotector adicional para la preparación de composiciones para protección frente a radiación UV.Other authors have mixed MAAs such as mycosporine-gly, palythine, asterine-330, palythinol, palythene, porphyra-334, mycosporine-gly-valine, shinorine and MAA-357 from Antarctic marine organisms getting hydro-oily emulsions with protective factors solar of at least 2 but calculated through changes in the efficiency of photosystem II in cyanobacterial cultures, through the fluorescence of chlorophyll, F v / F m (WO 00/24369). Said compositions are claimed comprising, in addition to an MAA , at least one carrier , a carotenoid or derivative with protective activity against solar radiation, and a polyphenolic compound or derivative also with said activity. Similarly, WO 02/39974 claims personal care compositions comprising an MAA selected from the palythine, palythine serine, palythinol, asterine, mycosporine-2-glycine, shinorine, porphyra-334, N-methyl mycosporine serine group, N-methyl mycosporine threonine, mycosporine-glycine valine, palythenic acid, usijirene and palythene ; and the use of said MAA in combination with an additional photoprotective agent for the preparation of compositions for protection against UV radiation.

En el presente documento se presentan formulaciones que incluyen extractos de dos aminoácidos tipo micosporina concretos, porphyra-334 y mycosporine-gly, obtenidos con un alto grado de pureza a partir de Porphyra leucosticta y Lichina pygmaea, respectivamente, y que se pueden formular juntos o por separado. El potencial fotoprotector de estas cremas se compara con otra formulación que contiene el mismo porcentaje de filtros solares que la crema mezcla de porphyra-334 + mycosporine-gly pero formulada a partir de dos filtros usados como estándares por el método COLIPA y que se encuentran con frecuencia en fotoprotectores comerciales: octilmetoxicinamato (OMC), con máximos de absorción en el ultravioleta B, y butilmetoxidibenzoilmetano (BMDM), que protege en la región del UVA. El Factor de Protección Solar (FPS) se calcula a partir del espectro de acción del eritema utilizando el método Diffey (in vitro) que permite calcular potenciales de protección no sólo de patologías relacionadas con la radiación UVB sino también aquellas relacionadas básicamente con la radiación UVA, como son la formación de oxígeno singlete desencadenante de los procesos de fotoenvejecimiento.This document presents formulations that include extracts of two specific mycosporin-type amino acids, porphyra-334 and mycosporine-gly , obtained with a high degree of purity from Porphyra leucosticta and Lichina pygmaea , respectively, and which can be formulated together or separately. The photoprotective potential of these creams is compared with another formulation that contains the same percentage of sunscreens as the porphyra-334 + mycosporine-gly mixed cream but formulated from two filters used as standard by the COLIPA method and found with frequency in commercial photoprotectors: octylmethoxycinnamate (OMC), with maximum absorption in ultraviolet B, and butylmethoxydibenzoylmethane (BMDM), which protects in the UVA region. The Sun Protection Factor (SPF) is calculated from the spectrum of action of the erythema using the Diffey method ( in vitro ) that allows to calculate protection potentials not only of pathologies related to UVB radiation but also those basically related to UVA radiation , as are the formation of singlet oxygen triggering the photoaging processes.

Por primera vez se presenta una composición fotoprotectora compuesta exclusivamente por extractos de dos moléculas con alto nivel de purificación, que presenta valores de protección mejorados a si se formulan por separado, y cuyo potencial fotoprotector ante importantes patologías causadas o agravadas por la radiación UV es comparable a cremas que incluyen filtros solares comerciales. A diferencia de los documentos WO 00/24369 y WO 02/39974, considerados los más próximos en el estado de la técnica, las características de los MAAs purificados y de las composiciones que los incluyen y que se presentan en el actual documento hacen prescindible (aunque no excluye la posibilidad) la inclusión adicional de otros agentes fotoprotectores, algo especificado de forma explícita en los referidos documentos. Por otra parte, los MAAs referidos en el presente documento difieren del grupo de MAAs contemplado en el documento WO 02/39974, puesto que mycosporine-glycine y mycosporine-2- glycine no son estrictamente el mismo compuesto.For the first time, a photoprotective composition composed exclusively of extracts of two molecules with a high level of purification is presented, which has improved protection values as they are formulated separately, and whose photoprotective potential against important pathologies caused or aggravated by UV radiation is comparable. to creams that include commercial sunscreens. Unlike documents WO 00/24369 and WO 02/39974, considered the closest in the state of the art, the characteristics of purified MAAs and the compositions that include them and which are presented in the present document make expendable ( although it does not exclude the possibility) the additional inclusion of other photoprotective agents, something explicitly specified in the aforementioned documents. On the other hand, the MAAs referred to herein differ from the group of MAAs contemplated in WO 02/39974, since mycosporine-glycine and mycosporine-2- glycine are not strictly the same compound.

La presente patente comprende una formulación en crema compuesta por una mezcla de extractos de los aminoácidos tipo micosporina, porphyra-334 y mycosporine-gly, en un porcentaje de 4.1% y 2.9% respectivamente, que presenta unos excelentes resultados in vitro frente a la protección de diferentes efectos nocivos provocados por la radiación UV.The present patent comprises a cream formulation composed of a mixture of extracts of the mycosporine-type amino acids, porphyra-334 and mycosporine-gly , in a percentage of 4.1% and 2.9% respectively, which presents excellent results in vitro against protection of different harmful effects caused by UV radiation.

Descripción detallada de la invenciónDetailed description of the invention

Los solicitantes han comprobado que tras la purificación de extractos de los aminoácidos tipo micosporina porphyra-334 extraído del alga P. leucosticta y mycosporine-gly extraído del liquen L. pygmaea, y su presentación combinada en formulación cosmética destinada a su aplicación tópica en piel, estos MAAs ejercen una acción físico-química de filtro, al absorber la radiación en un amplio espectro de longitudes de onda (300-400 nm) y limitando la cantidad de radiación UV que alcanza la piel, además de poseer un alto potencial de secuestro de radicales libres hidrosolubles y radicales superóxido, e inhibir la peroxidación lipídica (P200502161, P200502162). Sus propiedades de absorción confieren al preparado un gran potencial in vitro para la prevención de cáncer de piel y demás patologías asociadas a la exposición a la radiación ultravioleta como las quemaduras, inflamación e irritación de la piel. Se presenta una formulación de origen natural capaz de ofrecer protección efectiva frente a la producción de eritema, daño en ADN, fotocarcinogénesis, inmunosupresión local y sistémica, fotoisomerización del cis-urocánico, formación de radicales oxidantes como el oxígeno singlete, elastosis y fotoenvejecimiento.The applicants have verified that after the purification of extracts of the mycosporin - type amino acids porphyra-334 extracted from the P. leucosticta and mycosporine-gly algae extracted from lichen L. pygmaea , and its combined presentation in cosmetic formulation intended for topical application on skin, These MAAs exert a physical-chemical filter action, by absorbing radiation in a broad spectrum of wavelengths (300-400 nm) and limiting the amount of UV radiation that reaches the skin, in addition to having a high potential for sequestration of Water-soluble free radicals and superoxide radicals, and inhibit lipid peroxidation (P200502161, P200502162). Its absorption properties give the preparation a great potential in vitro for the prevention of skin cancer and other pathologies associated with exposure to ultraviolet radiation such as burns, inflammation and skin irritation. A formulation of natural origin is presented, capable of offering effective protection against the production of erythema, DNA damage, photocarcinogenesis, local and systemic immunosuppression, cis-urocanic photoisomerization, formation of oxidizing radicals such as singlet oxygen, elastosis and photoaging.

Se presenta como una excelente alternativa de origen natural a los filtros químicos que actualmente se encuentran en el mercado.It is presented as an excellent alternative to natural origin to the chemical filters that are currently found in the market.

Descripción de los dibujosDescription of the drawings

Figura 1. Estructura química de los MAAs mycosporine-gly (A) y porphyra-334 (B) aislados del liquen marino Lichina pygmaea y del alga roja Porphyra leucosticta, respectivamente.Figure 1. Chemical structure of the mycosporine-gly (A) and porphyra-334 (B) MAAs isolated from the marine lichen Lichina pygmaea and the red algae Porphyra leucosticta , respectively.

Figura 2. Fotografía del rectángulo en la espalda donde se aplicó uniformemente la crema evaluada tras la exposición a una radiación equivalente a 6.5, 8 y 9.5 MEDs tras 24 horas después de la aplicación.Figure 2. Photograph of the rectangle in the back where the cream evaluated was applied evenly after exposure to radiation equivalent to 6.5, 8 and 9.5 MEDs after 24 hours after application.

Figura 3. Espectros relativos de absorción de las diferentes formulaciones con máximos de absorción a 334 nm para la formulación 1 (conteniendo como MAA sólo porphyra-334, simbolizada como "P-334"), 308 nm para la formulación 2 (conteniendo como MAA sólo mycosporine-gly, simbolizada como "M-gly") y amplios espectros en la región del UV (con máximo de absorción a 320 nm) para la formulación 3 que contiene una mezcla de ambas MAAs (porphyra-334 y mycosporine-gly, simbolizada como "Mezcla") y formulación 4 que corresponde a la crema de referencia (compuesta por una mezcla de filtros químicos, octilmetoxicinamato y butilmetoxidibenzoilmetano, utilizados como filtros de referencia de potencial de fotoprotección por la asociación COLIPA, y simbolizada como "Referencia").Figure 3. Relative absorption spectra of the different formulations with absorption maximums at 334 nm for formulation 1 (containing as MAA only porphyra-334 , symbolized as "P-334"), 308 nm for formulation 2 (containing as MAA only mycosporine-gly , symbolized as "M-gly") and broad spectra in the UV region (with maximum absorption at 320 nm) for formulation 3 containing a mixture of both MAAs (porphyra-334 and mycosporine-gly , symbolized as "Mixture") and formulation 4 corresponding to the reference cream (consisting of a mixture of chemical filters, octylmethoxycinnamate and butylmethoxydibenzoylmethane, used as reference filters of photoprotection potential by the COLIPA association, and symbolized as "Reference") .

Figura 4. Espectro de transmitancia en % de las 4 formulaciones así como de la fórmula base empleada en las mismas (combinación de Neo PCL y propilenglicol). Las formulaciones 2 (conteniendo como MAA sólo mycosporine-gly, simbolizada como "M-gly"), 3 (contiene una mezcla de ambas MAAs, porphyra-334 y mycosporine-gly, simbolizada como "Mezcla") y 4 (compuesta por una mezcla de filtros químicos, octilmetoxicinamato y butilmetoxidibenzoilmetano, utilizados como filtros de referencia de potencial de fotoprotección por la asociación COLIPA, y simbolizada como "Referencia") presentan valores de transmitancia similares en la región del UVB mientras que la formulación 1 (conteniendo como MAA sólo porphyra-334, simbolizada como "P-334") presenta valores más altos, sobre todo en la región más eritematógena.Figure 4. Transmittance spectrum in% of the 4 formulations as well as the base formula used in them (combination of Neo PCL and propylene glycol). Formulations 2 (containing as MAA only mycosporine-gly , symbolized as "M-gly"), 3 (contains a mixture of both MAAs, porphyra-334 and mycosporine-gly , symbolized as "Mixture") and 4 (composed of one mixture of chemical filters, octylmethoxycinnamate and butylmethoxydibenzoylmethane, used as reference filters of photoprotection potential by the COLIPA association, and symbolized as "Reference") have similar transmittance values in the UVB region while formulation 1 (containing as MAA only porphyra-334 , symbolized as "P-334") has higher values, especially in the more erythematogenic region.

Figura 5. Factor de protección solar monocromático (eritema) para las 4 formulaciones. Las formulaciones 2, 3 y 4 presentan valores en torno a 12 en la región del UVB mientras que la formulación 1 es menos efectiva.Figure 5. Sun protection factor Monochromatic (erythema) for the 4 formulations. Formulations 2, 3 and 4 have values around 12 in the UVB region while formulation 1 is less effective.

Modos de realización de la invenciónEmbodiments of the invention

La presente invención se refiere a una nueva composición a base de extractos y concentrados purificados obtenidos a partir del alga marina Porphyra leucosticta Thuret in Le Jolis (familia Bangiaceae, Orden Bangiales, Clase Bangiophyceae, Phylum Rhodophyta) y del liquen Lichina pygmaea (Lightf.) C. Agardh (familia Lichinaceae, Orden Lichinales, Phylum Fungi), con acción de filtro de radiación ultravioleta destinado a su aplicación tópica.The present invention relates to a new composition based on purified extracts and concentrates obtained from the seaweed Porphyra leucosticta Thuret in Le Jolis (family Bangiaceae, Order Bangiales, Class Bangiophyceae, Phylum Rhodophyta ) and lichen Lichina pygmaea (Lightf.) C. Agardh (family Lichinaceae, Order Lichinales, Phylum Fungi ), with ultraviolet radiation filter action intended for topical application.

En una realización preferida, dicha composición contiene una mezcla de extractos de los aminoácidos tipo micosporina, porphyra-334 y mycosporine-gly, en un porcentaje de 4.1% y 2.9% respectivamente destinada para uso tópico con un alto potencial como agente protector de la piel contra las agresiones provocadas por la radiación solar (UVA y UVB).In a preferred embodiment, said composition contains a mixture of mycosporine, porphyra-334 and mycosporine-gly- type amino acid extracts , in a percentage of 4.1% and 2.9% respectively intended for topical use with a high potential as a skin protective agent against aggressions caused by solar radiation (UVA and UVB).

Purificación de porphyra-334 y mycosporine-gly a escala preparativaPurification of porphyra-334 and mycosporine-gly on a preparative scale

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La extracción a escala preparativa se realizó extrayendo 60-80 g de peso fresco del material biológico en 1 L de metanol al 20% (v/v) e incubándose en un baño termostático a 45ºC durante 2 horas. Posteriormente se centrifugó el extracto a 14000 rpm durante 15 minutos y se evaporó el metanol de la muestra usando rotoevaporación al vacío para concentrar el extracto.The Preparatory scale extraction was performed by extracting 60-80 g fresh weight of the biological material in 1 20% methanol (v / v) and incubating in a thermostatic bath to 45 ° C for 2 hours. Subsequently, the extract was centrifuged at 14000 rpm for 15 minutes and the methanol was evaporated from the sample using vacuum rotary evaporation to concentrate the abstract.

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La purificación se realizó en tres pasos consecutivos en los que se combinaron técnicas cromatográficas de absorción mediante la aplicación de carbono activo, precipitación de polisacáridos tras añadir a la muestra metanol 100% y separación final mediante cromatografia de intercambio iónico (resina Dowex 50 W x 8-100). Para la elución de porphyra-334 y mycosporine-gly, se utilizó agua bidestilada, con un pH ligeramente alcalino (pH 7.2). Tras el proceso de purificación, se obtuvieron soluciones acuosas de MAAs con alto grado de pureza.The purification was performed in three consecutive steps in which chromatographic absorption techniques were combined by the application of active carbon, precipitation of polysaccharides after adding 100% methanol to the sample and final separation by ion exchange chromatography (Dowex 50 W x 8 resin -100). For the elution of porphyra-334 and mycosporine-gly , double distilled water was used, with a slightly alkaline pH (pH 7.2). After the purification process, aqueous solutions of MAAs with high purity were obtained.

Los MAAs se identificaron y cuantificaron en un equipo de cromatografia líquida de alta resolución (HPLC). Para el análisis se empleó como fase estacionaria la columna C_{8} (Sphereclone^{TM}, Phenomenex, Alemania) de tamaño 250 x 4.6 mm, empaquetada con micropartículas porosas de silica de 5 \mum de diámetro con superficie derivatizada con una cadena alifática de 8 átomos de carbono (octadecil silano). La fase móvil empleada fue metanol al 2.5% (v/v) con un 0.1% de ácido acético (v/v) bombeada isocráticamente a una velocidad de flujo de 0.5 mL min^{-1}. La detección y cuantificación se realizó con un detector de fotodiodos UV-visible (Photodiode Array Detector Waters 996).The MAAs were identified and quantified in a high performance liquid chromatography (HPLC) equipment. For the analysis, the C 8 column (Sphereclone ™, Phenomenex, Germany) of size 250 x 4.6 mm, packed with porous silica microparticles of 5 µm in diameter with surface derivatized with a chain was used as stationary phase aliphatic of 8 carbon atoms (octadecyl silane). The mobile phase used was 2.5% (v / v) methanol with 0.1% acetic acid (v / v) isocratically pumped at a flow rate of 0.5 mL min -1. Detection and quantification was performed with a UV-visible photodiode detector (Photodiode Array Detector Waters 996).

       \global\parskip0.950000\baselineskip\ global \ parskip0.950000 \ baselineskip
    
Preparado de una crema para uso tópicoPreparing a cream for topical use

Una vez que se obtuvieron los extractos purificados en fase acuosa de porphyra-334 y mycosporine-gly, se procedió a elaborar el producto cosmético de la presente invención. Para el preparado de la crema solar se empleó como fórmula base la combinación de Neo PCL y propilenglicol además de un extracto acuoso que contenía los distintos filtros solares. Las proporciones entre los tres componentes fueron 4:1:14 (en % peso/volumen para Neo PCL, % volumen/volumen para propilenglicol y para extracto acuoso), y 19.6% p/v, 4.9% v/v, y 68.6% v/v en la composición o formulación final, respectivamente. La formulación se realizó a una temperatura de 60ºC. Las composiciones eran químicamente estables y resistentes a la fotodegradación, de fácil absorción por la piel y capaces de crear una película continua y uniforme. Se fabrican cuatro formulaciones, dos de ellas contienen los MAAs, porphyra-334 y mycosporine-gly en porcentajes aproximados del 5% en el extracto acuoso, otra contiene una mezcla de ambos MAAs presentándose como mayoritaria la porphyra-334 (4.1% en el extracto acuoso). Por último y como referencia se utilizó una formulación compuesta por una mezcla de filtros químicos, octilmetoxicinamato y butilmetoxidibenzoilmetano, utilizados como filtros de referencia de potencial de fotoprotección por la asociación COLIPA (European Cosmetic Toiletry and Perfumery Association), con máximos de absorción en el ultravioleta B y ultravioleta A respectivamente (2.65 y 4.46% en el extracto acuoso). El volumen final de cada composición (formulaciones 1 a 4), atendiendo a los porcentajes de cada componente en la misma indicados más arriba, fue de 250 \muL en las realizaciones preferidas especificadas, no siendo relevante dicho volumen final y sí las proporciones de los componentes en la misma y entre ellos mismos. Los porcentajes indicados para cada MAA corresponde a la concentración de los mismos en el extracto acuoso comprendido en la composición o formulación.Once the purified aqueous phase extracts of porphyra-334 and mycosporine-gly were obtained , the cosmetic product of the present invention was processed. The combination of Neo PCL and propylene glycol was used as the base formula in addition to an aqueous extract containing the different sunscreens. The ratios between the three components were 4: 1: 14 (in% weight / volume for Neo PCL,% volume / volume for propylene glycol and for aqueous extract), and 19.6% w / v, 4.9% v / v, and 68.6% v / v in the final composition or formulation, respectively. The formulation was performed at a temperature of 60 ° C. The compositions were chemically stable and resistant to photodegradation, easily absorbed through the skin and capable of creating a continuous and uniform film. Four formulations are manufactured, two of them contain the MAAs, porphyra-334 and mycosporine-gly in approximate percentages of 5% in the aqueous extract, another contains a mixture of both MAAs with porphyra-334 as a majority (4.1% in the extract aqueous). Finally, and as a reference, a formulation consisting of a mixture of chemical filters, octylmethoxycinnamate and butylmethoxydibenzoylmethane, used as reference filters of photoprotection potential by the European Cosmetic Toiletry and Perfumery Association , with ultraviolet absorption maxima was used. B and ultraviolet A respectively (2.65 and 4.46% in the aqueous extract). The final volume of each composition (formulations 1 to 4), according to the percentages of each component indicated therein, was 250 µL in the specified preferred embodiments, said final volume not being relevant and the proportions of the components in it and among themselves. The percentages indicated for each MAA correspond to their concentration in the aqueous extract included in the composition or formulation.

Formulación 1 (porphyra-334)Formulation 1 (porphyra-334)

Neo PCLNeo PCL
50 mg50 mg

PropilenglicolPropylene glycol
12.5 \muL12.5 µL

Extracto acuosoAqueous extract
175 \muL (al 5.6% de porphyra-334)175 µL (5.6% porphyra-334 )

Máximo de absorciónMaximum of absorption
334 nm334 nm

       \vskip1.000000\baselineskip\ vskip1.000000 \ baselineskip
    
Formulación 2 (mycosporine-gly)Formulation 2 (mycosporine-gly)

Neo PCLNeo PCL
50 mg50 mg

PropilenglicolPropylene glycol
12.5 \muL12.5 µL

Extracto acuosoAqueous extract
175 \muL (al 5.1% de mycosporine-gly)175 µL (5.1% of mycosporine-gly )

Máximo de absorciónMaximum of absorption
308 nm308 nm

       \vskip1.000000\baselineskip\ vskip1.000000 \ baselineskip
    
Formulación 3 (mezcla de porphyra-334 y mycosporine-gly)Formulation 3 (mixture of porphyra-334 and mycosporine-gly)

Neo PCLNeo PCL
50 mg50 mg

PropilenglicolPropylene glycol
12.5 \muL12.5 µL

Extracto acuosoAqueous extract
175 \muL (al 4.1% de porphyra-334 y 2.9% de mycosporine-gly)175 µL (at 4.1% porphyra-334 and 2.9% mycosporine-gly )

Máximo de absorciónMaximum of absorption
320 nm320 nm

       \vskip1.000000\baselineskip\ vskip1.000000 \ baselineskip
    
Formulación 4 (referencia)Formulation 4 (reference)

Neo PCLNeo PCL
50 mg50 mg

PropilenglicolPropylene glycol
12.5 \muL12.5 µL

Extracto acuosoAqueous extract
175 \muL (al 2.65% de octilmetoxicinamato y al 4.46% de butilmetoxidibenzoilmetano)175 µL (at 2.65% octylmethoxycinnamate and at 4.46% butylmethoxidibenzoylmethane)

Máximo de absorciónMaximum of absorption
Banda ancha con máximos de absorción a 310 y 360 nm.Broadband with maximums of absorption at 310 and 360 nm.

       \global\parskip1.000000\baselineskip\ global \ parskip1.000000 \ baselineskip
    
Potencial fotoprotector in vitro del preparado para uso tópico In vitro photoprotective potential of the preparation for topical use

Una vez preparadas las diferentes formulaciones se procedió a la estimación del potencial fotoprotector in vitro de cada una de ellas mediante el protocolo de Diffey y Robson (Diffey, B.L. & Robson, J. (1989). J. Soc. Cosmet. Chem. 40: 127-133). Este método es un protocolo estandarizado por la asociación COLIPA para el cálculo del factor de protección solar de una solución in vitro, el cual nos da la capacidad de fotoprotección de dicha solución contra el potencial de producción de eritema actínico del sol. El fotoprotector (formulación conteniendo sustancias absorbentes o dispersantes de radiación UV) se aplica sobre el soporte adhesivo a una concentración de 2 microlitros por centímetro cuadrado (\muL cm^{-2}). La luz procedente de una fuente de arco de xenón se hace incidir sobre la superficie del adhesivo, sobre la cual se habrá aplicado o no la formulación conteniendo las sustancias absorbentes. El protocolo seguido para el análisis de las diferentes formulaciones fue el siguiente:Once the different formulations were prepared, the in vitro photoprotective potential of each of them was estimated using the Diffey and Robson protocol (Diffey, BL & Robson, J. (1989). J. Soc. Cosmet. Chem. 40 : 127-133). This method is a protocol standardized by the COLIPA association for the calculation of the sun protection factor of an in vitro solution, which gives us the ability to photoprotection of said solution against the potential of actinic erythema production of the sun. The photoprotector (formulation containing UV absorbing or dispersing substances) is applied to the adhesive support at a concentration of 2 microliters per square centimeter (µL cm -2). The light from a source of xenon arc is made to affect the surface of the adhesive, on which the formulation containing the absorbent substances will have been applied or not. The protocol followed for the analysis of the different formulations was as follows:

Sobre un portaobjetos de cristal de cuarzo de 2 mm de grosor se colocó una cinta adhesiva (Transpore 3M), la cual simula la superficie epidérmica de la piel humana. El portaobjetos se colocó sobre una balanza analítica y con una jeringa de 1 mL se aplicaron 2 mg cm^{-2} del producto a evaluar distribuyéndolo en pequeñas gotas a lo largo de toda la superficie. El producto fue distribuido sobre la superficie del portaobjetos con el dedo provisto de un dedal de goma, mediante un suave movimiento circular durante aproximadamente 30 segundos y se dejó secar durante 20 minutos para permitir la rotura de la emulsión. A continuación se efectuó la lectura. Previamente se preparó una muestra de referencia (portaobjetos de cuarzo con la cinta Transpore 3M sin producto) para utilizarlo como línea de base.On a 2 quartz glass slide mm thick an adhesive tape (Transpore 3M) was placed, which simulates the epidermal surface of human skin. The slide it was placed on an analytical balance and with a 1 mL syringe they applied 2 mg cm -2 of the product to be evaluated by distributing it in Small drops along the entire surface. The product was distributed on the surface of the slide with your finger provided with a rubber thimble, by a gentle circular movement for about 30 seconds and allowed to dry for 20 minutes to allow the emulsion to break. Then you He did the reading. A sample of reference (quartz slides with Transpore 3M tape without product) to use as a baseline.

Una vez obtenidos los espectros de transmitancia a la luz UV de la referencia, muestras y el espectro de emisión del simulador solar se calculó el factor de protección solar monocromático (FPSM) para cada longitud de onda según la siguiente fórmula:Once the transmittance spectra have been obtained in the reference UV light, samples and the emission spectrum of the solar simulator the sun protection factor was calculated Monochromatic (FPSM) for each wavelength according to the following formula:

FPSM(\lambda) = \frac{E_{\lambda} \cdot S_{\lambda} \cdot d\lambda}{E_{\lambda} \cdot S_{\lambda} \cdot T_{\lambda} \cdot d\lambda}FPSM (\ lambda) = \ frac {E _ {\ lambda} \ cdot S _ {\ lambda} \ cdot d \ lambda} {E _ {\ lambda} \ cdot S _ {\ lambda} \ cdot T _ {\ lambda} \ cdot d \ lambda}

Donde:Where:

E_{\lambda} = Espectro eritemático (McKinlay A.F. & Diffey B.L. (1987). CIE Research Note, CIE-Journal, 6: 17-22)E λ = erythematic spectrum (McKinlay A.F. & Diffey B.L. (1987). CIE Research Note, CIE-Journal, 6: 17-22)

S_{\lambda} = Espectro de irradiación solarS λ = Irradiation spectrum solar

T_{\lambda} = Espectro de transmitancia de la muestraT λ = Transmittance spectrum of the sample

El cálculo del factor de protección solar (FPS) para toda la banda de UV con efecto eritemático se realizó de la misma forma pero en vez de utilizar cada longitud de onda de forma pero integrando los valores entre 280-400 nm. Finalmente dicho FPS se expresó matemáticamente por la razón del tiempo de irradiación necesario para alcanzar el umbral eritemático sin filtros ultravioleta.The calculation of the sun protection factor (SPF) for the entire UV band with erythematic effect was performed from the same form but instead of using each wavelength form but integrating the values between 280-400 nm. Finally, said SPF was expressed mathematically for the reason of irradiation time necessary to reach the erythematic threshold without ultraviolet filters.

Como se indica en los antecedentes de la invención, el uso del FPS, el cual solo nos da idea de la acción eritemática de la radiación ultravioleta, no proporciona datos a nivel de protección de otros efectos biológicos, aunque simule el potencial dañino del sol para algunos de ellos como el caso del potencial fotocarcinogénico de la radiación solar. Por ello se ha establecido la capacidad de fotoprotección de las formulaciones a base de extractos purificados de micosporina para un total de 7 efectos biológicos en los que se ha determinado su espectro de acción y descritos en la literatura del campo de la fotobiología. En la tabla 1 se representan los efectos biológicos para los que se han establecido los factores de protección solar y a los que denominamos factor de protección de efecto biológico (FAPEB). El FAPEB puede entenderse como el número de veces que puede permanecer una persona expuesta al sol comparada con una persona sin protección en la piel antes de que experimente el proceso biológico en cuestión.As indicated in the background of the invention, the use of SPF, which only gives us an idea of the action Erythematic of ultraviolet radiation, does not provide data to level of protection from other biological effects, even if it simulates the harmful potential of the sun for some of them as the case of Photocarcinogenic potential of solar radiation. That is why it has established the photoprotection capacity of the formulations to base of purified mycosporin extracts for a total of 7 biological effects in which its spectrum of action and described in the literature of the field of photobiology. In Table 1 represents the biological effects for which have established sun protection factors and those we call the biological effect protection factor (FAPEB). He FAPEB can be understood as the number of times it can remain a person exposed to the sun compared to a person without skin protection before you experience the biological process in question.

Como se observa en la figura 3, porphyra-334 presentó un máximo de absorción en la banda del ultravioleta A (334 nm) mientras que el máximo de mycosporine-gly se situó a 310 nm (UVB). La formulación que contiene una mezcla de ambas presentó una banda ancha de absorción que abarca hasta los 360 nm y cuyo máximo de absorción se situó a 320 nm. El factor de protección solar monocromático (FPSM) para el eritema (figura 5) para la formulación 1 presentó valores máximos de 8 para longitudes de onda en torno a 350 nm (UVA) mientras que las formulaciones 2, 3 y 4 presentaron un FPSM más alto (12) a longitudes de onda más eritematógenas, manteniéndose este valor constante hasta los 350 nm para la formulación 1 y 365 nm para la formulación 2. Al integrar el FPSM entre 300 nm y 400 nm se obtiene el FAPEB para toda la región del ultravioleta que ofrecen las distintas formulaciones en crema, valores que vienen recogidos en la tabla 1 (los valores representan la media y desviación típica –SD- de 4 réplicas; letras diferentes indican diferencias significativas entre las formulaciones para cada uno de los efectos biológicos). Los resultados mostrados en la tabla 1 se presentan como valor medio y la desviación estándar de al menos 4 réplicas. La significación estadística de las medias fue contrastada mediante un Análisis de la Varianza (ANOVA) de un factor seguido de un test de comparaciones múltiples de Tukey (Sokal, R.R. & Rohlf, F.J. (1986) Editorial Reverté 362 pp). El nivel de significación fijado en todos los casos fue del 95% (p<0.05).As seen in Figure 3, porphyra-334 showed a maximum absorption in the ultraviolet A band (334 nm) while the maximum of mycosporine-gly was 310 nm (UVB). The formulation containing a mixture of both had a broad absorption band that covers up to 360 nm and whose absorption maximum was 320 nm. The monochromatic sun protection factor (FPSM) for erythema (Figure 5) for formulation 1 presented maximum values of 8 for wavelengths around 350 nm (UVA) while formulations 2, 3 and 4 presented an additional FPSM high (12) at more erythematogenous wavelengths, keeping this value constant up to 350 nm for formulation 1 and 365 nm for formulation 2. By integrating the FPSM between 300 nm and 400 nm, the FAPEB is obtained for the entire region of the ultraviolet offered by the different cream formulations, values that are included in table 1 (the values represent the mean and standard deviation -SD- of 4 replicates; different letters indicate significant differences between the formulations for each of the biological effects). The results shown in table 1 are presented as mean value and the standard deviation of at least 4 replicates. The statistical significance of the means was checked by means of an Analysis of the Variance (ANOVA) of a factor followed by a Tukey multiple comparisons test (Sokal, RR & Rohlf, FJ (1986) Editorial Reverté 362 pp). The level of significance set in all cases was 95% (p <0.05).

TABLA 1TABLE 1

1one

En lo referente al daño en el ADN, formación de cáncer de piel no melanónico e inmunosupresión local y sistémica, existe una clara diferencia entre la crema que incluye porphyra-334 y el resto de formulaciones (p < 0.05). La crema que contiene la mezcla de MAAs presenta FAPEBs similares a la formulación de referencia. En cuanto a la aparición de eritema, la formulación mezcla y la de referencia no difieren significativamente en el factor de protección, mientras que en la crema con porphyra-334 es significativamente inferior (p < 0.05). En cuanto a la fotoisomerización del ácido urocánico no existen variaciones significativas entre las formulaciones, y en cuanto a la formación de oxígeno singlete, la formulación mezcla presenta FAPEBs similares a la de la porphyra-334 y algo inferiores a la de la crema de referencia.Regarding DNA damage, non-melanonic skin cancer formation and local and systemic immunosuppression, there is a clear difference between the cream that includes porphyra-334 and the rest of the formulations (p <0.05). The cream containing the mixture of MAAs has FAPEBs similar to the reference formulation. Regarding the appearance of erythema, the mixture and the reference formulation do not differ significantly in the protection factor, while in the cream with porphyra-334 it is significantly lower (p <0.05). As for the photoisomerization of urocanic acid, there are no significant variations between the formulations, and as for the formation of singlet oxygen, the mixture formulation has FAPEBs similar to that of porphyra-334 and somewhat lower than that of the reference cream.

Ensayo in vivo del FPS de una crema con porphyra-334 + mycosporine-gly SPF in vivo test of a cream with porphyra-334 + mycosporine-gly

Para comprobar in vivo algunos de los resultados obtenidos se escogieron a tres voluntarios con un fototipo de piel II definido por DIN-5050, siendo la dosis mínima eritemática (MED) para este fototipo de 250 J m^{-2}. Se dibujó sobre la espalda un rectángulo de 4.5 x 2 cm^{2} y se aplicó uniformemente 2 mL de crema por centímetro cuadrado siguiendo el método de la asociación COLIPA. Se dejó actuar durante 20 minutos y seguidamente la piel fue irradiada con un simulador solar ORIEL 2000 (ORIEL, USA). Se aplicó una radiación equivalente a 6.5, 8 y 9.5 MEDs y el eritema fue evaluado tras 24 horas. La dosis mínima de radiación eritemática fue de 8 MEDs (Figura 2). El FPS in vitro de la crema era aproximadamente de 8, dato que se corrobora con el ensayo in vivo.To verify in vivo some of the results obtained, three volunteers were chosen with a skin phototype II defined by DIN-5050, with the minimum erythematic dose (MED) for this phototype of 250 J m -2. A rectangle of 4.5 x 2 cm2 was drawn on the back and 2 mL of cream was applied uniformly per square centimeter following the COLIPA association method. It was allowed to act for 20 minutes and then the skin was irradiated with an ORIEL 2000 solar simulator (ORIEL, USA). Radiation equivalent to 6.5, 8 and 9.5 MEDs was applied and the erythema was evaluated after 24 hours. The minimum dose of erythematic radiation was 8 MEDs (Figure 2). The in vitro SPF of the cream was approximately 8, which is corroborated by the in vivo assay.

Conclusiones Conclusions

La formulación 3 se presenta como una crema para uso tópico creada a partir de sustancias de origen natural que ofrece protección elevada frente a numerosas lesiones y alteraciones causadas por la radiación ultravioleta.Formulation 3 is presented as a cream for topical use created from substances of natural origin that offers high protection against numerous injuries and alterations caused by ultraviolet radiation.

El uso de una crema que contiene la combinación de porphyra-334 y mycosporine-gly permite la mejora en la capacidad fotoprotectora frente a la radiación solar en comparación con la formulación de ambas MAAs por separado.The use of a cream containing the combination of porphyra-334 and mycosporine-gly allows the improvement in the photoprotective capacity against solar radiation compared to the formulation of both MAAs separately.

La formulación 3 se presenta como una excelente alternativa de origen natural frente a los filtros químicos presentes en el mercado ya que a igual porcentaje de sustancias fotoprotectoras que la crema de referencia (\sim7%) ofrecen resultados similares in vitro e in vivo (eritema).Formulation 3 is presented as an excellent alternative of natural origin against the chemical filters present in the market since at the same percentage of photoprotective substances that the reference cream (\7%) offer similar results in vitro and in vivo (erythema) .

La combinación porphyra-334 - mycosporine-gly por sí sola, o incorporada en determinados porcentajes en cremas fotoprotectoras con filtros químicos comerciales puede suponer un incentivo en la venta de estos productos, al incluir sustancias de origen natural.The combination porphyra-334 - mycosporine-gly alone, or incorporated in certain percentages in photoprotective creams with commercial chemical filters can be an incentive in the sale of these products, including substances of natural origin.

Claims (9)

1. Composición para protección solar que comprende un extracto acuoso con actividad fotoprotectora que consiste en un extracto purificado de porphyra-334, en un extracto purificado de mycosporine-gly, o en una mezcla de ambos extractos purificados.1. Composition for sun protection comprising an aqueous extract with photoprotective activity consisting of a purified extract of porphyra-334 , a purified extract of mycosporine-gly , or a mixture of both purified extracts. 2. Composición para protección solar según reivindicación anterior que comprende además un compuesto autoemulsionable y un alcohol.2. Composition for sun protection according previous claim further comprising a compound self-emulsifying and an alcohol. 3. Composición para protección solar según reivindicación anterior en la que el compuesto autoemulsionable es Neo PCL.3. Composition for sun protection according previous claim wherein the self-emulsifying compound is Neo PCL. 4. Composición para protección solar según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en la que el alcohol es propilenglicol.4. Composition for sun protection according any of the preceding claims wherein the alcohol It is propylene glycol. 5. Composición para protección solar según la reivindicación anterior que comprende Neo PCL al 19.6% p/v, propilenglicol al 4.9% v/v, y un extracto acuoso al 68.6% v/v que consiste en una mezcla de extractos purificados en fase acuosa de porphyra-334 y de mycosporine-gly presentando dichos aminoácidos en una concentración comprendida en el rango 4.1-5.6% y en el rango 2.9-5.1%, respectivamente.5. Sunscreen composition according to the preceding claim comprising 19.6% w / v Neo PCL, 4.9% v / v propylene glycol, and a 68.6% v / v aqueous extract consisting of a mixture of purified extracts in the aqueous phase of porphyra-334 and mycosporine-gly presenting said amino acids in a concentration in the range 4.1-5.6% and in the range 2.9-5.1%, respectively. 6. Composición para protección solar según la reivindicación anterior en la que el extracto acuoso que consiste en una mezcla de extractos purificados en fase acuosa de porphyra-334 y de mycosporine-gly presenta dichos aminoácidos al 4.1% y al 2.9%, respectivamente; y que se caracteriza porque posee un máximo de absorción en la región ultravioleta (320 nm), y por presentar los siguientes valores de factor de protección de efecto biológico para toda la región del ultravioleta obtenidos al integrar el factor de protección solar monocromático entre 300 y 400 nm: 8 frente a eritema, 10 frente a daño de ADN, 8 frente a cáncer de piel no melanómico, 10 frente a inmunosupresión sistémica, 10 frente a inmunosupresión, 10 frente a fotoisomerización de cis-urocánico, y 6 frente a formación de oxígeno singlete.6. Composition for sun protection according to the preceding claim wherein the aqueous extract consisting of a mixture of purified extracts in the aqueous phase of porphyra-334 and mycosporine-gly has said amino acids at 4.1% and 2.9%, respectively; and characterized in that it has a maximum absorption in the ultraviolet region (320 nm), and by presenting the following values of biological effect protection factor for the entire ultraviolet region obtained by integrating the monochromatic sun protection factor between 300 and 400 nm: 8 against erythema, 10 against DNA damage, 8 against non-melanoma skin cancer, 10 against systemic immunosuppression, 10 against immunosuppression, 10 against cis-urocanic photoisomerization, and 6 against formation of singlet oxygen. 7. Producto cosmético que comprende una composición cosmética para protección solar según cualquiera de las reivindicaciones anteriores.7. Cosmetic product comprising a cosmetic composition for sun protection according to any of the previous claims. 8. Uso de la composición para protección solar definida según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en la preparación de un producto cosmético para la protección de la piel humana, del pelo humano o de cualquier superficie frente a la radiación solar.8. Use of sunscreen composition defined according to any of claims 1 to 6 in the Preparation of a cosmetic product for skin protection human, human hair or any surface against the solar radiation. 9. Uso según la reivindicación anterior en la preparación de un producto cosmético para la prevención o reducción del desarrollo de melanomas.9. Use according to the preceding claim in the preparation of a cosmetic product for prevention or reduction of the development of melanomas.
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