ES2316293B1 - Metodo para detectar una disfuncion endotelial. - Google Patents
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Abstract
Método para detectar una disfunción
endotelial.
La presente invención se refiere a un método
para detectar una disfunción endotelial en un paciente mediante la
administración de desmopresina y la posterior determinación del
nivel del factor de von Willebrand en una muestra aislada de suero
o plasma.
Description
Método para detectar una disfunción
endotelial.
La presente invención se refiere al uso de la
desmopresina en un método de diagnóstico de la disfunción
endotelial a través de la determinación del nivel del factor de von
Willebrand.
El endotelio participa de forma importante en la
conservación de la homeostasis vascular mediante la secreción y
liberación de diversas sustancias vasoactivas (moléculas de
adhesión, citoquinas, óxido nítrico, etc). Por este motivo, cuando
existe una alteración en su estructura o función, el lecho vascular
es incapaz de responder de forma fisiológica frente a diferentes
noxas o estímulos que se producen en el organismo. La disfunción
endotelial desencadenada por diversos factores, como por ejemplo la
diabetes mellitus, representa la pérdida de esta capacidad del
endotelio para modular el comportamiento fisiológico del lecho
vascular y representa un estadio temprano de la aterosclerosis.
La disfunción endotelial puede ser evaluada
clínicamente a través de mediciones de vasodilatación dependiente
de endotelio, y también por marcadores plasmáticos como endotelina
1, factor von Willebrand, trombomodulina y moléculas de adhesión de
monocitos. Sin embargo ninguno de ellos por sí solo logra reflejar
la indemnidad de la función endotelial. Hasta ahora la evaluación
más eficaz de la función endotelial se logra a través de la
respuesta vasodilatadora a un estímulo farmacológico o mecánico.
Entre los factores identificados como estimuladores de la función
del endotelio se encuentran acetilcolina, sustancia P, serotonina,
bradicinina y trombina, que actúan en relación a receptores de
membrana adosados a sistemas de transducción de proteínas G.
También el roce provocado por un aumento del flujo sanguíneo
constituye un estímulo mecánico de la vasodilatación a través de la
liberación de óxido nítrico. El marcador de lesión endotelial más
estudiado ha sido el factor von Willebrand (fvW). Aproximadamente
el 85% del fvW plasmático deriva del endotelio vascular y el 15%
restante es de origen plaquetario (Mannucci PM. et al.,
Arterioscler Thromb Vasc Biol 1998; 18: 1359-62).
En la célula endotelial, la mayor parte de fvW maduro y su
propéptido (97 kDa) se almacena junto con otras moléculas
(t-PA, P-selectina,
IL-8, endotelina) en los denominados cuerpos de
Weibel-Palade. Las principales funciones del fvW son
las de actuar como proteína transportadora del factor VIII y como
proteína adhesiva de matriz intersticial y de las plaquetas al
subendotelio. Existen diversos estudios que han demostrado un
incremento de los niveles plasmáticos basales de fvW en los
pacientes diabéticos en comparación con los controles sanos, pero no
existe acuerdo sobre si este aumento se produce sólo en presencia
de complicaciones vasculares, o bien, puede detectarse incluso en
estadios precoces. En cualquier caso, los niveles de fvW son
mayores cuando existen complicaciones vasculares. Varios grupos han
demostrado que los niveles elevados de este marcador guardan
relación con la presencia y grado de retinopatía, nefropatía y
neuropatía. Además, se ha demostrado que las concentraciones
elevadas de fvW son un factor independiente predictor de mortalidad
de origen cardiovascular, tanto en población diabética como no
diabética (Jager A. et al., Arterioscler Thromb Vasc Biol
1999; 19: 3071-3078). Sin embargo, existe un gran
solapamiento entre los valores de fvW detectados en la población
sana y en la población diabética con disfunción endotelial, por lo
que su determinación no tiene utilidad en la práctica clínica
diaria.
La superficie de las células endoteliales está
recubierta de receptores, que permiten al endotelio realizar
múltiples funciones, que se encuentran en continua investigación.
Por eso la disfunción endotelial es la responsable de numerosas
enfermedades como la arteriosclerosis, la hipertensión arterial, la
sepsis, la trombosis, la vasculitis, hemorragias, etc.
Actualmente se define la disfunción endotelial
como la imposibilidad del vaso sanguíneo de aumentar su diámetro en
respuesta a un estímulo conocido, ocasionado por una insuficiente
generación de agentes vasodilatadores en el endotelio. En arterias
sanas se observa dilatación dependiente del endotelio en respuesta
a estímulos vasoactivos (isquemia, acetilcolina) mientras que en
diferentes estados patológicos se ha demostrado ausencia de este
efecto vasodilatador, o incluso un efecto constrictor, producto del
predominio del efecto directo de acetilcolina sobre receptores
muscarínicos del músculo liso subyacente.
La diabetes mellitus es una enfermedad muy
prevalente (6-10% de la población española) y de
enorme impacto socio-sanitario que vendrá
condicionado fundamentalmente por las severas complicaciones que
produce, tanto macroangiopáticas (cardiopatía isquémica, enfermedad
cerebrovascular, arteriopatía periférica), como microangiopáticas
(retinopatía, nefropatía, neuropatía). En la fisiopatología de
todas estas complicaciones vasculares de la diabetes, la disfunción
endotelial desempeña un papel de primera magnitud. Por lo tanto, no
cabe duda que el desarrollo de técnicas que permitan cuantificar la
disfunción endotelial, no sólo aportarán mayor conocimiento
fisiopatológico de las complicaciones vasculares de la diabetes
sino que permitirán identificarlas en estadios iniciales
(subclínicos), es decir antes de que puedan demostrarse mediante
métodos convencionales.
Para valorar la disfunción endotelial se han
desarrollado técnicas invasivas y no invasivas como son la
coronariografía con test de acetilcolina o la medición con
eco-doppler de alta resolución de los cambios en el
diámetro y flujo de la arteria braquial tras someterla a varios
estímulos. No obstante, ambas pruebas precisan de un equipamiento
específico y deben ser llevadas a cabo por expertos. En
consecuencia, su coste económico es elevado y su uso se limita
actualmente a la investigación clínica.
Por lo tanto, existe una necesidad de disponer
de un método alternativo que permita detectar una disfunción
endotelial en un sujeto.
La solución propuesta por los inventores
consiste en la utilización de la desmopresina para inducir un
incremento plasmático del fvW y de este modo valorar, de manera
específica, la presencia de disfunción endotelial debido a que la
variación de los niveles plasmáticos de fvW después de la
administración de desmopresina en un paciente afectado de tal
disfunción es menor que la variación en el caso de que no exista
dicha disfunción.
La desmopresina
(1-desamino-8-D-arginina-vasopresina,
DDAVP) es un análogo estructural de la hormona hipofisaria natural
arginina vasopresina. La desmopresina se utiliza en el tratamiento
terapéutico de hemorragias y prevención de hemorragias, en
pacientes con hemofilia A leve y enfermedad de Von Willebrand (tipo
I, cuya actividad coagulante del factor VIII sea superior al 5%) que
responden positivamente a la dosis de prueba. En casos
excepcionales también se pueden tratar manifestaciones moderadas de
estas enfermedades.
La DDAVP estimula la exocitosis de los cuerpos
de Weibel-Palade de la célula endotelial actuando
específicamente sobre los receptores V2 de la vasopresina (Kaufmamm
JE. et al. J Clin Invest 2000; 106: 107-116).
Estos receptores no se encuentran presentes en las plaquetas por lo
que el incremento plasmático de fvW tras la estimulación con DDAVP
es exclusivamente a expensas del endotelio vascular.
En trabajos realizados con sujetos afectos de la
enfermedad de von Wilebrand se ha observado que tras la
administración de DDAVP los niveles plasmáticos de fvW experimentan
un rápido incremento de hasta 3-5 veces (Mannucci
M. et al., Blood 1997; 90: 2515-2521).
La elevación en los niveles plasmáticos del
factor VIII y del FvW ocurre no sólo en los pacientes con
deficiencias, sino también en individuos sanos y en pacientes que
ya tienen niveles altos de estos factores.
De manera general, cuando la desmopresina se
administra por vía endovenosa los niveles máximos de fvW se
consiguen entre los 30 y 60 minutos, mientras que cuando la
administración es subcutánea o intranasal el pico máximo se logra
entre los 90 y 120 minutos. Independientemente de este hecho, las
tres vías de administración han demostrado ser igual de eficaces.
También se puede administrar por vía oral, aunque los tiempos de
respuesta son algo
superiores.
superiores.
Aún siendo conocido que el incremento plasmático
de fvW tras la estimulación con desmopresina es exclusivamente a
expensas del endotelio vascular y que los valores basales de fvW en
caso de disfunción endotelial están más elevados respecto a los
valores basales en caso de individuos sanos, la desmopresina no ha
sido utilizada para valorar de manera específica la presencia de
disfunción endotelial a partir de la respuesta de liberación del
fvW en comparación con la dada en individuos sanos.
Por otro lado, en Diabetología 1982; 23/5:
452-5 se describe que un estudio realizado empleando
sujetos normales y pacientes diabéticos
insulino-dependientes, donde los pacientes tenían un
nivel basal de fvW plasmático superior al basal de sujetos
normales. De acuerdo con los resultados experimentales citados en
este estudio, la administración de desmopresina indujo un
incremento del doble de los niveles plasmáticos del fvW en ambos
grupos. Por lo que de acuerdo con los datos experimentales recogidos
en esta publicación, no hay diferencia entre la respuesta a
desmopresina entre pacientes diabéticos
insulino-dependientes (pacientes donde existe una
agresión continuada sobre el endotelio) e individuos sanos, aunque
el valor basal de fvW fuera mayor en pacientes que en individuos
sanos.
Contrariamente a lo esperado, los inventores de
la presente invención han encontrado que en el caso de disfunción
endotelial, la respuesta de liberación del fvW tras la
administración de desmopresina es inferior a la observada en caso
de que el sujeto no sufra dicha disfunción. Así, en sujetos con un
endotelio sano la administración de desmopresina induce la
degranulación de los cuerpos de Weibel-Palade, y en
consecuencia produce un incremento de los niveles plasmáticos de
fvW; mientras que en caso de disfunción endotelial, se ha
encontrado de manera sorprendente que la cantidad de fvW almacenada
en los cuerpos de Weibel-Palade es menor y en
consecuencia el incremento de los niveles plasmáticos de fvW tras
el estímulo con desmopresina también está disminuido. Por lo tanto,
es posible la utilización del estímulo con desmopresina para
valorar de forma sencilla la presencia de disfunción
endotelial.
El método de la invención resulta ser de menor
coste económico a los utilizados hasta la fecha, sencillo y de
fácil aplicabilidad clínica para la detección de disfunción
endotelial. Este método permitirá identificar un grupo de sujetos
con lesión vascular precoz, en los que la implementación de las
medidas terapéuticas necesarias para conseguir los objetivos de buen
control metabólico y de los factores de riesgo asociados será
prioritaria.
La valoración de la concentración de fvW tras la
administración de desmopresina puede resultar igualmente útil para
la evaluación de disfunción endotelial en grupos con riesgo
cardiovascular (fumadores, hipertensos, dislipémicos, obesos) y
para evaluar el efecto de fármacos sobre la función endotelial.
De acuerdo con un primer aspecto de la presente
invención, ésta proporciona un método para detectar una disfunción
endotelial, que comprende:
a) administrar al paciente
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;
b) obtener una muestra de suero y/o plasma del
paciente;
c) medir el nivel de factor de von Willebrand en
la muestra aislada obtenida en la etapa b);
d) determinar la variación del nivel obtenido en
la etapa c) respecto a un valor basal obtenido a partir de una
muestra recogida antes de la administración de
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;
y
e) comparar la variación determinada en la etapa
d) con la variación observada en un individuo sano, de manera que
si existe una diferencia entre ambas variaciones será indicativo de
una disfunción endotelial.
El término disfunción endotelial, tal y como se
entiende en la presente invención se puede definir como un
desequilibrio en la biodisponibilidad de sustancias activas de
origen endotelial que predispone a la inflamación, la
vasoconstricción y el incremento de la permeabilidad vascular, y que
puede facilitar el desarrollo de arteriosclerosis, agregación
plaquetaria y trombosis.
La respuesta a la administración de desmopresina
puede variar de un individuo a otro. En ocasiones, particularmente
en el tratamiento de la enfermedad de von Willebrand, los pacientes
se suelen someter a una prueba de administración terapéutica a fin
de determinar su nivel de respuesta individual. Por lo tanto,
aunque de forma no limitativa, la dosis a administrar de
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina o su sal farmacéuticamente aceptable para llevar a cabo
el método descrito en la presente invención, puede ser adaptada de
acuerdo con el nivel de respuesta individual de cada paciente.
Por lo tanto, de acuerdo con una realización de
la presente invención, la cantidad de
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina o su sal farmacéuticamente aceptable administrada se
corresponde con una cantidad suficiente para provocar la
degranulación de los cuerpos de Weibel-Palade, y en
consecuencia producir un incremento de los niveles plasmáticos de
fvW.
Según una realización preferida, la cantidad
administrada de
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina está comprendida entre 0,2 y 4 \mug/Kg de peso. Más
preferiblemente, la cantidad administrada de
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina es de 0,3 \mug/Kg de peso. Diferentes formas de
administración pueden ser empleadas sin que la elección de una
forma de administración determinada suponga una limitación para los
propósitos de la presente invención. Generalmente la
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina se administra por vía endovenosa, subcutánea, oral o
intranasal. Preferentemente la vía de administración es
endovenosa.
La
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina (desmopresina) puede preferiblemente utilizarse en la
forma de una sal farmacéuticamente aceptable. Es preferible, a los
efectos de la realización de la presente invención, la utilización
de acetato de desmopresina.
De acuerdo con una realización de la presente
invención, los valores del factor de von Willebrand pueden ser
medidos empleando diferentes técnicas conocidas por el experto.
Entre las técnicas generalmente empleadas se pueden citar la
técnica de inmunoensayo enzimático ELISA y la inmunoturbidimetría.
De manera preferida, el método empleado para la medición del nivel
del factor de von Willebrand es un inmunoensayo enzimático
ELISA.
Según una forma de realización preferida de la
presente invención, la medición del nivel del factor de von
Willebrand se lleva a cabo en un periodo de entre 10 y 240 minutos
tras la administración de
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina. Más preferentemente entre 90 y 120 minutos.
El método de la presente invención, puede
emplearse para determinar el grado de progresión de la disfunción
endotelial en un paciente. Para la determinación del grado de
progresión de la disfunción endotelial en un paciente, se deberá
realizar el método de la invención y comparar los resultados
obtenidos con los resultantes en la repetición del mismo una vez
transcurrido un periodo de tiempo determinado, de manera que la
variación encontrada entre dichas primera y segunda medición indica
la progresión del daño o disfunción endotelial.
De acuerdo con segundo aspecto de la invención,
ésta proporciona un método para identificar un agente para el
tratamiento de la disfunción endotelial, que comprende llevar a
cabo las etapas (a) - (e) según las reivindicación 1, y porque
comprende además:
f) administrar simultánea o secuencialmente al
paciente
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma y el
agente candidato a fármaco;
g) obtener una muestra de suero y/o plasma del
paciente;
h) medir el nivel de factor de von Willebrand en
la muestra aislada obtenida en la etapa (g);
i) determinar la variación del nivel obtenido en
la etapa (h) respecto a un valor basal obtenido a partir de una
muestra recogida antes de la administración de
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;
j) comparar la variación determinada en la etapa
(d) con la variación observada en la etapa (i), de manera que si la
variación de la etapa (i) es mayor que la variación de la etapa
(d), es indicativo de que el agente es candidato a fármaco para el
tratamiento de dicha disfunción.
Para llevar a cabo el método para identificar un
agente para el tratamiento de la disfunción endotelial en un
paciente en necesidad de dicho tratamiento, la cantidad de
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina o su sal farmacéuticamente aceptable administrada, la
forma de administración, la técnica empleada para la determinación
del nivel del factor de von Willebrand, el tiempo transcurrido
desde la administración de
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina y la medición del nivel del factor de von Willebrand,
son los descritos anteriormente en la presente invención.
De acuerdo con un tercer aspecto de la presente
invención, ésta proporciona el uso de la
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma para
detectar una disfunción endotelial.
Un cuarto aspecto de la presente invención, se
refiere a un kit que comprende medios para llevar a cabo el método
para detectar una disfunción endotelial de acuerdo con la presente
invención.
En una realización preferida de la presente
invención, el kit comprende:
a)
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;
b) medios para determinar el nivel del factor de
von Willebrand en una muestra de suero y/o plasma;
c) instrucciones para llevar a cabo el análisis
e interpretación de resultados.
Según una forma preferida de la presente
invención, el kit comprende como medio para determinar el nivel del
factor de von Willebrand en la muestra un inmunoensayo enzimático
ELISA.
El endotelio hace referencia a una capa
unicelular de células endoteliales que recubre vasos sanguíneos
(arteriales y venosos), vasos linfáticos, cavidades cardiacas,
cuerpos cavernosos y cámara anterior del ojo. Se ha demostrado que
el endotelio vascular sintetiza y libera diversos factores vaso
activos de gran importancia en la fisiología y patología
vasculares, entre ellos cabe destacar la prostaciclina (PGl_{2}),
el tromboxano A_{2} (TXA_{2}), el factor relajante derivado del
endotelio (FRDE), la endotelina (ET), el factor hiperpolarizante
derivado del endotelio (FHDE) y los factores constrictores derivados
del endotelio (FCDE). El recubrimiento endotelial tiene funciones
vasoconstrictoras y vasodilatadoras, procoagulantes y
anticoagulantes, proinflamatorias y antiinflamatorias, promueve el
crecimiento celular y lo inhibe y favorece y detiene el proceso de
angiogénesis. El endotelio interviene activamente en reacciones
inmunológicas (lupus eritematoso sistémico, esclerodermia, fenómeno
de Raynaud, psoriasis, preeclampsia, enfermedad de Kawasaki, evento
asmático), respuesta inflamatoria (artritis reumatoidea),
crecimiento tumoral y proceso metastásico. De modo que el método de
la presente invención puede encontrar utilidad como método de
prevención y/o seguimiento de la progresión de una condición
asociada con una disfunción endotelial o en las que una alteración
de la función endotelial puede ser un mecanismo preponderante de
enfermedad.
De acuerdo con una realización preferida, la
condición asociada con una disfunción endotelial o en la que una
alteración de la función endotelial puede ser un mecanismo
preponderante de enfermedad es una alteración macroangiopática y/o
microangiopática (preferiblemente relativa a la microcirculación de
la retina, riñones y sistema nervioso) relacionada con la diabetes
mellitus.
A lo largo de la descripción y las
reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no
pretenden excluir otras características técnicas, aditivos,
componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos,
ventajas y características de la invención se desprenderán en parte
de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los
siguientes ejemplos y dibujos se proporcionan a modo de
ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente
invención.
La Fig. 1 muestra la variación del nivel del fvW
en un individuo sano (pacientes con diabetes mellitus tipo 1 de
menos de 5 años de evolución sin complicaciones micro ni
macroangiopáticas, e.d. sin disfunción endotelial), antes (basal) y
tras la administración de desmopresina
(post-DDAVP).
La Fig. 2 muestra la variación del nivel del fvW
en pacientes con diabetes mellitus tipo 1 con retinopatía (con
disfunción endotelial), antes (basal) y tras la administración de
desmopresina (post-DDAVP).
El objetivo de este ensayo fue determinar los
cambios de los niveles plasmáticos de fvW después de la
administración de desmopresina en un grupo de pacientes con
diabetes mellitus tipo 1 de menos de 5 años de evolución sin
complicaciones micro ni macroangiopáticas (n=22) y un grupo de
pacientes con diabetes mellitus tipo 1 con retinopatía (n=12).
Estableciendo si existen diferencias significativas entre los dos
grupos que representan la ausencia o presencia de disfunción
endotelial.
La retinopatía diabética es una complicación
microangiopática que se asocia a la presencia de disfunción
endotelial. Se excluyeron a los pacientes con complicaciones de la
diabetes asociadas a disfunción endotelial severa (nefropatía o
macroangiopatía diabética) ya que el propósito de la prueba
planteada (administración de DDAVP) fue identificar la presencia de
disfunción endotelial de forma precoz.
Con el paciente en decúbito supino, se colocó
una vía periférica en una vena del antebrazo. A través de dicha vía
se obtuvieron 4 muestras sanguíneas de cada individuo. Las muestras
de plasma para la determinación de fvW se extrajeron basalmente y a
los 60, 90 y 120 minutos de la administración de desmopresina
subcutánea (dosis= 0.3 \mug/Kg de peso).
En la medición del nivel del fvW se empleó un
kit de ELISA comercializado (IMTEC, Immunodiagnostika GMBH). Los
resultados se expresan en % (equivalente a U/ml). Los datos
recogidos en las figuras 1 y 2, corresponden al pico máximo de von
Willebrand obtenido. Las comparaciones entre el basal y el pico de
fvW se realizaron mediante la prueba t-Student para
datos apareados.
En los pacientes diabéticos sin complicaciones
se produjo un incremento estadísticamente significativo de la
concentración de fvW (unidades: %) después de la administración de
desmopresina (Basal: 139\pm56 vs. Pico: 276\pm134; p=0.001) -
Figura 1.
Sin embargo, en el grupo de pacientes con
complicaciones no se produjo un aumento significativo del fvW tras
la administración de DDAVP (Basal: 167\pm86 vs. Pico:
219\pm118; p=0.2) - Figura 2.
Un incremento del fVW tras el estímulo con
desmopresina inferior a 98% tiene una sensibilidad del 87% y una
especificidad del 67% para el diagnóstico de disfunción endotelial
(Curva ROC).
Estos resultados confirmaron la hipótesis de
trabajo.
Claims (15)
1. Método para detectar una disfunción
endotelial, que comprende:
a) administrar al paciente
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;
b) obtener una muestra de suero y/o plasma del
paciente;
c) medir el nivel del factor de von Willebrand
en la muestra aislada obtenida en la etapa (b);
d) determinar la variación del nivel obtenido en
la etapa (c) respecto a un valor basal obtenido a partir de una
muestra recogida del paciente antes de la administración de
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;
y
e) comparar la variación determinada en la etapa
(d) con la variación observada en un individuo sano, de manera que
si existe una diferencia entre ambas variaciones será indicativo de
una disfunción endotelial.
2. Método de acuerdo con la reivindicación 1,
caracterizado porque en la etapa (a) se administra una
cantidad de
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma
suficiente para producir un incremento de los niveles plasmáticos
del factor de von Willebrand.
3. Método de acuerdo con la reivindicación
anterior 2, caracterizado porque la cantidad administrada en
la etapa (a) está comprendida entre 0,2 y 4 \mug/Kg de peso.
4. Método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones anteriores 1 a 3, caracterizado porque en
la etapa (a) se administra el acetato de
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina.
5. Método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones anteriores 1 a 4, caracterizado porque la
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina se administra por vía endovenosa, subcutánea, oral o
intranasal.
6. Método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones anteriores 1 a 5, caracterizado porque se
administra 0,3 \mug/Kg de peso de acetato de
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina por vía subcutánea.
7. Método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones anteriores 1 a 6, caracterizado porque los
valores del factor de von Willebrand se miden mediante un ensayo
inmunoabsorbente enzimático ELISA.
8. Método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones anteriores 1 a 7, caracterizado porque la
medición del nivel del factor de von Willebrand se lleva a cabo en
un periodo de entre 10 y 240 minutos tras la administración de
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina.
9. Método de acuerdo con la reivindicación 8,
caracterizado porque la medición se lleva a cabo entre 90 y
120 minutos.
10. Método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones anteriores 1 a 9, caracterizado porque la
disfunción endotelial está relacionada con complicaciones
microvasculares y/o macrovasculares relacionadas con la diabetes
mellitus.
11. Método para identificar un agente para el
tratamiento de la disfunción endotelial, que comprende llevar a
cabo las etapas (a) - (e) según la reivindicación 1, y porque
comprende además:
f) administrar simultánea o secuencialmente al
paciente
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma y el
agente candidato a fármaco;
g) obtener una muestra de suero y/o plasma del
paciente;
h) medir el nivel de factor de von Willebrand en
la muestra aislada obtenida en la etapa (g);
i) determinar la variación del nivel obtenido en
la etapa (h) respecto a un valor basal obtenido a partir de una
muestra recogida antes de la administración de
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;
j) comparar la variación determinada en la etapa
(d) con la variación observada en la etapa (i), de manera que si la
variación de la etapa (i) es mayor que la variación de la etapa
(d), es indicativo de que el agente es candidato a fármaco para el
tratamiento de dicha disfunción.
\newpage
12. Uso de la
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma para
detectar una disfunción endotelial.
13. Kit que comprende medios para llevar a cabo
el método de la reivindicación 1.
14. Kit de acuerdo con la reivindicación 13,
caracterizado porque comprende:
a)
1-desamino-8-D-arginina
vasopresina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma;
b) medios para determinar el nivel del factor de
von Willebrand en una muestra de suero y/o plasma;
c) instrucciones para llevar a cabo el análisis
e interpretación de resultados.
15. Kit de acuerdo con la reivindicación 14,
caracterizado porque el medio para determinar el nivel del
factor de von Willebrand en la muestra es un inmunoensayo
enzimático ELISA.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200702179A ES2316293B1 (es) | 2007-07-27 | 2007-07-27 | Metodo para detectar una disfuncion endotelial. |
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|---|---|---|---|
| ES200702179A ES2316293B1 (es) | 2007-07-27 | 2007-07-27 | Metodo para detectar una disfuncion endotelial. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2316293A1 ES2316293A1 (es) | 2009-04-01 |
| ES2316293B1 true ES2316293B1 (es) | 2010-02-05 |
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ID=40434717
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|---|---|---|---|
| ES200702179A Active ES2316293B1 (es) | 2007-07-27 | 2007-07-27 | Metodo para detectar una disfuncion endotelial. |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| ES (1) | ES2316293B1 (es) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2816410B1 (fr) * | 2000-11-09 | 2003-04-18 | Pasteur Institut | Necessaire de detection de la proteine esm-1 et procede de detection mettant en oeuvre ledit necessaire |
-
2007
- 2007-07-27 ES ES200702179A patent/ES2316293B1/es active Active
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| AZUMA, K. et al. "{}A new En Face method is useful to quantitate endothelial damage in vivo"{}. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2003, Volumen 309, páginas 384-390. Ver resumen; página 384, columna 2, párrafo 3. * |
| PORTA, M. "{}Availability of endothelial von Willebrand factor and platelet function in diabetic patients infused with a vasopressin analogue"{}. Diabetologia, 1982, Volumen 23, páginas 452-455. Ver resumen; página 454, columna 2, párrafo 4. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2316293A1 (es) | 2009-04-01 |
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|---|---|---|---|
| EC2A | Search report published |
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