ES2313140T3 - Procedimiento para la determinacion de la concentracion de glucosa, mediante polarizacion de la fluorescencia. - Google Patents
Procedimiento para la determinacion de la concentracion de glucosa, mediante polarizacion de la fluorescencia. Download PDFInfo
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Abstract
Un sistema para el control de la glucosa in vivo, el cual abarca los siguientes componentes: (a) un recipiente que contiene una lectina que enlaza a la glucosa, de una forma preferible, Concanavalina A, dextrano y una sonda, consistente en un fluoroforo y un soporte, y (b) un sensor, para la medición de la polarización de la fluorescencia.
Description
Procedimiento para la determinación de la
concentración de glucosa, mediante polarización de la
fluorescencia.
La presente invención, se refiere a un sistema
susceptible de poderse implantar, el cual puede utilizarse en un
procedimiento para el control de glucosa in vivo, mediante el
cual, se mide la concentración de glucosa, por mediación de la
polarización de la fluorescencia a través de la detección de la
variación de viscosidad de una mezcla (dependiente de la
concentración cambiante de glucosa), la cual contiene una lectina
que liga glucosa, como por ejemplo, Concanavalina A, Dextrano, una
sonda fluorescente, y glucosa.
La polarización de la fluorescencia, es un
procedimiento conocido y eficiente, para el análisis rápido y
homogéneo de las interacciones moleculares en sistemas biológicos y
químicos, el cual se describió, por primera vez, por parte de
Perrin (Perrin, M.F., J. Phys. Radium, 7 (1926), 390 - 401; Jolley,
M.E.; J. Anal. Toxicol. 5 (1981), 236).
Los principios de la polarización de la
fluorescencia, se basan en la excitación de una molécula
fluorescente, el fluoroforo, con luz polarizable. Ésta, conduce a
la emisión de fotones en el plano, el cual es paralelo y vertical
con respecto al plano de excitación, y proporciona informaciones
sobre el entorno local del fluoroforo.
Mediante la medición del giro del plano de
polarización de la luz polarizada irradiada originalmente, puede
observarse la rotación de fluoroforos en solución.
El valor de polarización, en moléculas
estadísticamente orientadas, disueltas, asciende a un valor
comprendido dentro de unos márgenes situados entre 0 y 0,5, en
dependencia de la velocidad de rotación de las moléculas, durante
la duración de vida de la fluorescencia de la condición o estado
excitado. En caso de que la rotación sea rápida en comparación con
la duración de vida de la fluorescencia, entonces, la polarización
de la radiación identificada, es casi nula. Si por el contrario, la
polarización es más lenta, con respecto a la duración o tiempo de
vida de la fluorescencia, entonces, la polimerización en la luz
identificada, es alta. Las moléculas pequeñas, giran rápidamente y
tienen, por lo tanto, un valor de polarización más pequeño. De forma
opuesta, las moléculas grandes, tienen un mayor valor de
polarización, debido a su rotación o giro más lento.
Una ventaja de la polarización de la
fluorescencia, reside en el hecho consistente en que, mediante la
referencia de las diversas porciones de emisión polarizadas, una
tras otra, las oscilaciones de la intensidad, en el sistema óptico
en la solución de muestra, se eliminan automáticamente. Mediante
ello, mediante este procedimiento, no acontecen errores mediante el
sistema óptico, o mediante muestras inconsistentes, como por
ejemplo, mediante diversas y diferentes muestras de fuerte
absorción.
La rotación o giro observado, depende del tiempo
de giro de relajación, y puede influenciarse únicamente, mediante
la temperatura, la viscosidad y el peso molecular del fluoroforo.
Mediante ello, la polarización de la fluorescencia, es un
procedimiento apropiado para medir estos parámetros, de una forma
particular, para medir sus cambios. Por consiguiente, la
polarización de la fluorescencia, es de una gran importancia en el
diagnóstico.
En la patente estadounidense US 6.596.546 B1, se
describe el uso de la polarización estática y dinámica para las
comprobaciones de diagnósticos de reacciones de formación de
complejos. Mediante ésta, se procede a realizar una combinación de
conversión, es decir, la reacción, de un antígeno, el cual se
encuentra marcado con un fluoroforo y se encuentra a disposición
como una solución, con un anticuerpo, el cual se encuentra contenido
en una muestra de suero diluida, con objeto de formar un complejo
inmune. El complejo inmune, se detecta, entonces, mediante la
variación de la polarización de la fluorescencia.
Fair y Jolley (Nasir, M.S:; Jolley, M.E.;
Combinational Chemistry & high Troughput Screening, -Química
combinatoria y tamizado de alto caudal-, 2 (1999), 177 - 190m
Bentham Science Publishers B.V.), describen la utilización de la
polarización de la fluorescencia como herramienta analítica para
inmunoensayos, por ejemplo, para comprobación de proteínas de
suero, anticuerpos y hormonas, para la comprobación de toxinas en
simientes y en la detección de drogas.
Mediante las comprobaciones de este tipo, se
emplean, de una forma general, los antígenos o anticuerpos marcados
con fluorescencia, cuya polarización se mide. Mediante su reacción
con anticuerpos específicos o antígenos, es decir, después de la
formación de un complejo antígeno - anticuerpo, el cual conduce al
aumento de su peso molecular efectivo, se tiene como resultado un
aumento de la polarización de la fluorescencia.
La utilización de la polarización de la
fluorescencia como herramienta para el análisis de los complejos
polielectrolitos e hidrogeles, se describe por parte de Rangarajan
et al. (Rangarajan, B., Coons, L.S.; Scranton, A.B.;
Biomaterials, -Biomateriales-, 17 (1996), 649 - 661). Mediante este
procedimiento, el fluoroforo se enlaza de una forma covalente, con
el polímero analizado.
Una desventaja, en los procedimientos de
diagnóstico conocidos, en los cuales acontece una medición de la
polarización de la fluorescencia, reside en el hecho de que, es
necesaria una costosa optimización del marcador, es decir, del
fluoroforo y su enlace al antígeno o, respectivamente, al
anticuerpo, con objeto de que, la formación propia de complejos, no
se convierta en un estorbo. Por lo demás, los marcadores, los cuales
deben detectarse mediante variaciones de la polarización de la
fluorescencia, deben enlazarse, de una forma covalente, en la
molécula marcada, puesto que, los pequeños movimientos relativos,
reducen ya la polimerización de la fluorescencia y, con ello, la
señal útil.
Como procedimientos analíticos adicionales, los
cuales se utilizan con los fluoroforos, se conoce el procedimiento
de transferencia de energía y de resonancia de la fluorescencia
(FRET, del alemán,
Fluoreszenz-Resonanz-Energietransfer-Verfahren).
Mediante el procedimiento FRET, acontece la transferencia exenta de
radiación, de la energía de los fotones, desde un fluoroforo
excitado (el donante), a otro fluoroforo (el receptor o aceptor
(aceptante)), si la distancia entre ambos, no asciende a un valor
superior a 1 - 10 nm. Esta transferencia de energía, acontece de una
forma exenta de radiación, esencialmente, mediante una interacción
dipolo/dipolo. Mediante el procedimiento FRET, se pueden comprobar,
por ejemplo, interacciones moleculares entre parejas de proteínas o
variaciones estructurales en una molécula (entre otros, la
actividad enzimática, o la conformación DNA/RNA)(Gordon, G.W.;
Berry, G. et al.; J. Biophys.; 74 (1998), 2702 - 2713 y Xia,
Z.; Liu Y.; J. Biophys.; 81 (2001), 2395 – 2402).
Una desventaja, en el procedimiento FRET, reside
en el hecho de que para el procedimiento FRET, solamente son
apropiados determinados pares de fluoroforos, puesto que, además de
otras condiciones, como las consistentes en la orientación de
dipolos, y la suficiente duración o tiempo de vida de la
fluorescencia, el espectro de emisión del donante, debe solaparse
con el espectro excitación del aceptor o receptor. Son necesarias
dos marcaciones, a cuyo efecto, el procedimiento FRET, es todavía
más costoso que la polarización de la fluorescencia.
Según el estado actual de la técnica, se conocen
diversos procedimientos para la comprobación de la glucosa. Ehwald
et al., (Ehwald, R.; Ballerstädt, R.; Dautzenberg, H.;
Analytical Biochemistry; 234 (1)(1996), 1-8),
describen la comprobación de glucosa, por mediación de la reacción
de formación de complejos Concanavalina A
(ConA)-Dextrano. La formación de complejos, se
interrumpe o se perjudica, mediante la glucosa, mediante lo cual,
resulta una variación de la viscosidad. Las complejación y sus
variaciones y, con ello, la concentración de la glucosa, pueden,
por lo tanto, medirse mediante viscosimetría. Una desventaja,
mediante la utilización de este procedimiento, para la comprobación
de la glucosa, reside en el hecho de que, el procedimiento
viscosimétrico, es muy costoso, desde el punto de vista
técnico.
Un procedimiento adicional para la determinación
de la glucosa, se basa en procedimiento FRET, el cual se describe
por parte de McCartney et al., (McCartney, L. et al.;
Analytical Biochemistry; 292 (2), (2001), 216 - 221). Tanto la
Concanavalina A, como también el dextrano, pueden marcarse mediante
un fluoroforo. El marcaje, provoca que, mediante la formación de
complejos, acontezca una transferencia de energía efectiva en el
complejo, desde el primer fluoroforo, al segundo fluoroforo (FRET).
La adición de glucosa, conduce a la disociación del complejo,
mediante lo cual, disminuye la intensidad de la radiación procedente
del segundo fluoroforo. Una gran desventaja de la comprobación de
la glucosa, con el procedimiento FRET, reside en el hecho de que,
tanto la Concanavalina A, como también el dextrano, deben marcarse
con un fluoroforo. Adicionalmente, además, los correspondientes
fluoroforos, deben presentar unas propiedades de fluorescencia
apropiadas. También, la reabsorción de la radiación enviada desde
el primer fluoroforo, a través del segundo fluoroforo, reduce la
señal útil, puesto que ésta, acontece también sin complejación.
Por lo demás, se conocen distintos
procedimientos para el control continuo de la glucosa, in
vivo e in vitro:
- Microdiálisis y comprobación enzimática fuera
del cuerpo;
- Viscosimetría con Concanavalina A/dextrano
(GlucOnline®);
- Sensores electroquímicos con reacción
enzimática de la glucosa en el cuerpo (Minimed®);
- Sensores a largo plazo, los cuales trabajan,
por ejemplo, a base de Concanavalina A y dextrano, según el
procedimiento FRET.
No obstante, no se conoce ningún procedimiento o
sistema, en el cual se realice un control de la glucosa in
vivo, para la determinación de la concentración de glucosa, o
una determinación in vitro de la concentración de glucosa,
in vitro, mediante polarización de la fluorescencia.
Una finalidad de la presente invención es, por
lo tanto, el superar, por lo menos parcialmente, las desventajas
del estado actual de la técnica, y el proporcionar un sistema, el
cual, mediante un procedimiento sencillo y preciso, pueda
utilizarse en el control de la glucosa in vivo, mediante
polarización de la fluorescencia.
Esta finalidad, se consigue mediante un sistema
técnicamente sencillo, para el control in vivo de la glucosa,
en el cual, la formación del complejo, a base de una lectina que se
enlaza a la glucosa, y dextrano, de una forma especial, a base de
Concanavalina A y dextrano, no se perturba o interrumpe, mediante su
marcaje con un fluoroforo.
Se ha encontrado ahora un sistema, para el
control de la glucosa in vivo, el cual abarca los siguientes
componentes:
(a) un recipiente que contiene una lectina que
enlaza a la glucosa, de una forma preferible, Concanavalina A,
dextrano y una sonda, consistente en un fluoroforo y un soporte,
y
(b) un sensor, para la medición de la
polarización de la fluorescencia.
El sistema mencionado anteriormente, arriba, es
apropiado para la utilización en un procedimiento para el control
de la glucosa, in vivo, el cual abarca la implantación de un
recipiente o depósito permeable para la glucosa, con un espacio
interior, el cual contiene una mezcla de una lectina que enlaza a la
glucosa, de una forma preferible, Concavanalin A, dextrano, y una
sonda, consistente en un fluoroforo y un soporte, y un sensor para
la medición de la polarización de la fluorescencia, en el cuerpo de
un individuo, y la medición de la concentración de glucosa,
mediante la detección de una variación de la viscosidad, en el
espacio interior del recipiente o depósito, mediante polarización
de la fluorescencia.
De una forma preferible, el procedimiento,
abarca las siguientes etapas:
(a) llenado de un recipiente o depósito, con una
mezcla que contiene una lectina que enlaza a la glucosa, de una
forma preferible, Concanavalina A, dextrano y una sonda, consistente
en un fluoroforo y un soporte,
(b) cerrado de depósito,
(c) unión del depósito con un sensor, de una
forma preferible, un conductor de la luz, para la radiación y la
irradiación,
(d) implantación de sistema de esta forma
obtenido, bajo la piel de un individuo, y,
(e) medición de la concentración de glucosa,
mediante la detección de la variación de viscosidad, por mediación
de la polarización de la fluorescencia.
El depósito empleado en el procedimiento,
contiene una mezcla de un complejo de lectina - dextrano, de una
forma preferible, un complejo de Concanavalina A - dextrano, y una
sonda. El valor de polarización de esta mezcla, se por mediación
del sensor, mediante la sonda, la cual contiene un fluoroforo.
Después de la implantación del depósito o recipiente, en el cuerpo
de un individuo, se difunde glucosa, en el depósito o recipiente,
procedente de los fluidos corporales, de una forma particular,
procedente de la sangre o a través del citoplasma. La glucosa,
influencia la formación del complejo de lectina - dextrano, de una
forma preferible, la formación del complejo Concanavalina A -
dextrano. Mediante ello, resulta una variación de la viscosidad, de
la mezcla contenida en el depósito o recipiente. Esta variación de
la viscosidad, provoca una variación de la polarización de la
fluorescencia del fluoroforo contenido en la mezcla, de tal forma
que, la variación de la concentración de glucosa, puede
determinarse mediante la medición del valor de polarización. De una
forma preferible, se lleva a cabo una determinación continua de la
concentración de
glucosa.
glucosa.
El procedimiento, puede utilizarse para el
control, in vivo, de la glucosa D y L. De una forma
preferible, éste se utiliza para el control in vivo de la
glucosa D.
El procedimiento, se diferencia, así, de este
modo, de los procedimientos conocidos correspondientes al estado
actual de la técnica, por el hecho consistente en que, ni la lectina
que enlaza a la glucosa, ni el dextrano, deben marcarse con un
fluoroforo. Por lo demás, no se detecta ninguna variación del peso
molecular, sino la variación de viscosidad de la mezcla.
En el procedimiento, no acontece ninguna
interrupción o perturbación de la formación del complejo a base de
la lectina que enlaza a la glucosa, y dextrano, de una forma
particular, a base de Concanavalina A y dextrano, mediante la
sonda. Otras materias, perjudican sólo únicamente si, como la
glucosa, se enlazan a la lectina, de una forma particular, a la
Concanavalina A. Tales tipos de materias, se hallan, en el cuerpo
humano, normalmente, únicamente en reducidas concentraciones.
Una ventaja adicional del procedimiento, reside
en el hecho de que, la sonda, puede elegirse en miras a un sencillo
aparato o herramienta. Por lo demás, el procedimiento, facilita la
posibilidad de emplear sencillos aparatos o herramientas -en
comparación con el procedimiento FRET y con la viscosimetría-, de
tal forma que, mediante el procedimiento en concordancia con la
presente invención, puede prescindirse de la fluídica completa
(bomba, tubos flexibles).
Una ventaja adicional del procedimiento, con
respecto a los procedimientos convencionales a base de enzimas,
para el control continuo de la glucosa, reside en el hecho de que no
acontece ninguna reacción enzimática, con lo cual, el procedimiento
en concordancia con la presente invención, es apropiado para una
duración de utilización, más larga. Por lo demás, no son necesarias
ningunas barreras de difusión, para la minimización de las
perturbaciones o interrupciones, puesto que no entran en escena
ningunos productos de reacción no deseados, como por ejemplo,
peróxido de hidrógeno.
Como depósitos o recipientes, para la ejecución
del procedimiento, entran en consideración depósitos o recipientes
flexibles o rígidos, a base de materiales fisiológicamente
compatibles, los cuales son permeables para la glucosa, e
impermeables para la lectina que enlaza a la glucosa, de una forma
particular, para la Concanavalina A, y para la sonda. De una forma
particular, entran en consideración los depósitos o recipientes a
base de membranas semipermeables, que se conocen a raíz de la
literatura especializada, como por ejemplo, a base membranas de
celulosa y/o de derivados de celulosa, poliamida y/o derivados de
poliamida, polisulfonas y/o derivados de polisulfona. De una forma
especialmente preferida, como depósito o recipiente, se utiliza un
saquito o bolsita de membrana, a base de celulosa regenerada.
Los límites de exclusión de la membrana, se
seleccionan de tal forma que, la lectina que enlaza a la glucosa,
de una forma preferible la Concanavalina A, el dextrano, y la sonda
marcada de forma fluorescente, no pueden penetrar a través suyo. Se
prefieren los límites de exclusión < 100 kDa, de una forma
preferible, < 50 kDa, de una forma especialmente preferible, de
10 - 10 kDa.
Las lectinas que enlazan a la glucosa, de una
forma particular, la Concanavalina A y la dextrosa, son conocidas,
y comercialmente obtenibles en el mercado, éstas se mezclan según
procedimientos conocidos y, además, eventualmente, se disuelven en
un agente diluyente, como por ejemplo, en una solución tampón
convencional.
Para la realización del procedimiento, entra en
consideración el dextrano con un peso molecular medio
correspondiente a un valor comprendido dentro de unos márgenes que
van de 10 kDa a 1000 kDa, de una forma preferible, de 20 kDa a 500
kDa, de una forma especialmente preferible, de 100 kDa a 200
kDa.
Para la realización del procedimiento, entran en
consideración todas las lectinas que enlazan a la dextrosa, como
por ejemplo, Concanavalina A (ConA), Lens
culinaris-Agglutin y Pealectin-I
(PSA). De una forma especialmente preferible, en el procedimiento,
se utiliza la Concanavalina A.
Mediante la concentración de la lectina que
enlaza a la glucosa y dextrano, de una forma preferible,
Concanavalina A y dextrano, puede procederse a ajustar una
determinada gama valores de medición.
La concentración de la lectina que enlaza a la
glucosa, de una forma particular, de una forma particular, de la
Concanavalina A, asciende a un porcentaje correspondiente a un valor
del 0,2 - 5%, de una forma preferible, del 0,5 - 2% y, de una forma
especialmente preferible, del 0,5 - 1%.
La concentración de dextrano, asciende a un
porcentaje correspondiente a un valor del 1 - 20%, de una forma
preferible, del 3 - 10% y, de una forma especialmente preferible,
del 5 - 8%.
La sonda, consiste en un fluoroforo y un
soporte. El fluoroforo y el soporte, deben unirse de una forma
covalente.
Como fluoroforo, entran en consideración, de una
forma preferible, todos los fluoroforos, los cuales tengan un
tiempo de vida o duración de la florescencia, correspondiente a un
valor comprendido dentro de unos márgenes situados entre 10 y 1000
ns, de una forma preferible, > 100 ns, y una longitud de onda,
correspondiente a un valor comprendido dentro de unos márgenes que
van de 400 a 800 nm. Los fluoroforos, deben ser de una larga
duración de vida, con objeto de que, durante el transcurso de tiempo
relativamente prolongado de la correlación de la rotación o giro
del soporte, éstos muestren una sensibilidad suficiente para las
variaciones de viscosidad. A dicho efecto, entran en consideración,
principalmente, los complejos de metales de transición, como por
ejemplo, los derivados de
rutenio-tris-bipiridilo. Éstos
pueden también obtenerse comercialmente en el mercado, como
isocianatos, o como ésteres de
N-hidroxi-succinimida y, con ello,
poder ser directamente aplicables para el marcaje del soporte. De
una forma especialmente preferida, se utiliza el
bis-(bipiridin)-5-(isotiocianato-fenantolin)-Ru(PF_{8})_{2}.
Como soportes, entran en consideración los
polímeros fisiológicamente compatibles, por ejemplo, los polímeros
orgánicos, como por ejemplo, el polietileno o los copolímeros de
polietileno y los biopolímeros, como los polipéptidos y las
proteínas, como por ejemplo, la albúmina de suero. De una forma
especialmente preferible, se utilizan las proteínas. Para la
realización del procedimiento en concordancia con la presente
invención, de una forma preferible, se utilizan soportes, los
cuales no presenten ningún enlace, o ningún enlace significativo, a
la lectina que enlaza glucosa, de una forma preferible, a la
Concanavalina A, dextrano y/o al complejo Concanavalina A/dextrano,
bajo las condicione del proceso. Esto se cumple, habitualmente, en
el caso de las proteínas.
El peso molecular de la sonda, que consiste en
el fluoroforo y el soporte, debe ser lo suficientemente alto como
para que, la sonda, no se pueda difundir hacia fuera de la bolsa. El
peso molecular de la sonda, puede ascender, de una forma
preferible, a un valor comprendido dentro de unos márgenes que van
de 20 kDa a 500 kDa.
Como sensores para la medición de la
polarización de la fluorescencia, entran en consideración, para la
realización del procedimiento en concordancia con la presente
invención, de una forma preferible, los sensores ópticos, como por
ejemplo, los conductores de la luz, por ejemplo, las fibras de
cuarzo o las fibras de vidrio, o los polímeros conductores de la
luz.
La expresión "individuo", abarca cualquier
animal de sangre caliente, de una forma especialmente exclusiva,
los mamíferos, como por ejemplo, los humanos, y los primates no
humanos, como los chimpancés, y otras especies de simios y de
seres; los animales de granja, tales como las vacas, las cabras, los
cerdos, los gansos, y los caballos; los animales domésticos, tales
como los perros y los gatos; los animales de laboratorio, como por
ejemplo, los animales roedores, como los ratones, las ratas, los
conejillos de indias y semejantes. Deben incluirse los seres
humanos adultos, los niños y los recién nacidos, varones o
hembras.
La implantación del depósito o recipiente, en el
cuerpo de un individuo, acontece según procedimientos
convencionales, por ejemplo, mediante pinchado o perforación. El
depósito o recipiente, se implanta, de una forma preferible, bajo
la piel.
El depósito o recipiente, puede implantarse en
todas las partes del cuerpo adecuadas, de una forma preferible, en
un brazo, o bajo la piel del vientre.
La medición de la concentración de glucosa,
acontece de una forma intermitente, o de una forma continua,
realizándose, de una forma preferible, de una forma continua.
Un objeto o finalidad adicional de la presente
invención, es un sistema para la determinación de la concentración
de glucosa en una muestra líquida, la cual, abarca las siguientes
componentes:
(a) una mezcla que contiene una lectina que
enlaza a la glucosa, de una forma preferible, Concanavalina A,
dextrano y una sonda, consistente en un fluoroforo y un soporte,
y
(b) un sensor, para la medición de la
polarización de la fluorescencia.
Un objeto adicional de la presente invención, es
la utilización de uno de los anteriormente citados sistemas,
arriba, para la determinación de la glucosa, en fluidos corporales,
en muestras residuales, o en alimentos, a cuyo efecto, los cuerpos
corporales, son sangre, suero, plasma y/u orina.
Un objeto adicional de la presente invención, es
una composición de diagnóstico, la cual contiene lectina que enlaza
a la glucosa, de una forma preferible, Concanavalina A, dextrano, y
una sonda consistente en un fluoroforo y un soporte, así como la
utilización de una mezcla que contiene una lectina que enlaza a la
glucosa, de una forma preferible, Concanavalina A, dextrano, y una
sonda, consistente en un fluoroforo y un soporte, para la
fabricación de un medio de diagnóstico.
Claims (10)
1. Un sistema para el control de la glucosa
in vivo, el cual abarca los siguientes componentes:
(a) un recipiente que contiene una lectina que
enlaza a la glucosa, de una forma preferible, Concanavalina A,
dextrano y una sonda, consistente en un fluoroforo y un soporte,
y
(b) un sensor, para la medición de la
polarización de la fluorescencia.
2. Un sistema para la determinación de la
concentración de glucosa en una muestra líquida, la cual, abarca
los siguientes componentes:
(a) una mezcla que contiene una lectina que
enlaza a la glucosa, de una forma preferible, Concanavalina A,
dextrano y una sonda, consistente en un fluoroforo y un soporte,
y
(b) un sensor, para la medición de la
polarización de la fluorescencia.
3. Sistema, según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 ó 2, para la determinación continua de la
concentración de glucosa.
4. Sistema, según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por el hecho de que,
como fluoroforo, se utiliza un fluoroforo de larga duración de
vida, con una duración de vida de la fluorescencia > 100 ns.
5. Sistema, según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 4, caracterizado por el hecho de que,
como soporte, se utiliza una proteína.
6. Sistema, según la reivindicación 1,
caracterizado por el hecho de que, el peso molecular de la
sonda, consistente en el fluoroforo y el soporte, se ajusta de tal
forma que, la sonda, no se difunda hacia fuera del depósito.
7. Uso de un sistema según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, para la determinación de glucosa en una
muestra líquida, la cual abarca fluidos corporales, muestras
residuales ó alimentos.
8. Uso, según la reivindicación 7, en donde, los
fluidos corporales, son sangre, suero, plasma y/u orina.
9. Composición de diagnóstico, que contiene una
lectina que enlaza a la glucosa, de una forma preferible,
Concanavalina A, dextrano y una sonda, consistente en un fluoroforo
y un soporte.
10. Uso de mezcla que contiene una lectina que
enlaza a la glucosa, de una forma preferible, Concanavalina A,
dextrano y una sonda, consistente en un fluoroforo y un soporte,
para la fabricación de un medio de diagnóstico.
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