ES2312282B1 - Metodo de atrapamiento e inmovilizacion de enzimas oxidoreductasas y sus usos. - Google Patents
Metodo de atrapamiento e inmovilizacion de enzimas oxidoreductasas y sus usos. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2312282B1 ES2312282B1 ES200702165A ES200702165A ES2312282B1 ES 2312282 B1 ES2312282 B1 ES 2312282B1 ES 200702165 A ES200702165 A ES 200702165A ES 200702165 A ES200702165 A ES 200702165A ES 2312282 B1 ES2312282 B1 ES 2312282B1
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- immobilization
- entrapment
- enzymes
- nafion
- glutaraldehyde
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 title claims abstract description 10
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 title claims abstract description 10
- 229920000557 Nafion® Polymers 0.000 claims abstract description 16
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims abstract description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 27
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 27
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000002210 biocatalytic effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 claims description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 claims description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 claims 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 claims 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 abstract description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 5
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 abstract description 4
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 abstract description 4
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 abstract description 3
- 239000011343 solid material Substances 0.000 abstract description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 abstract description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 abstract description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 abstract description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 abstract description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 abstract description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 abstract description 2
- 229910002804 graphite Inorganic materials 0.000 abstract description 2
- 239000010439 graphite Substances 0.000 abstract description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 abstract description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 238000004065 wastewater treatment Methods 0.000 abstract description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 9
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009499 grossing Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011147 inorganic material Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 239000007769 metal material Substances 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000011814 protection agent Substances 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/14—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an inorganic carrier
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/04—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier entrapped within the carrier, e.g. gel or hollow fibres
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/06—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier attached to the carrier via a bridging agent
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/02—Food
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/18—Water
- G01N33/1826—Organic contamination in water
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
-
- H—ELECTRICITY
- H01—ELECTRIC ELEMENTS
- H01M—PROCESSES OR MEANS, e.g. BATTERIES, FOR THE DIRECT CONVERSION OF CHEMICAL ENERGY INTO ELECTRICAL ENERGY
- H01M8/00—Fuel cells; Manufacture thereof
- H01M8/16—Biochemical fuel cells, i.e. cells in which microorganisms function as catalysts
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E60/00—Enabling technologies; Technologies with a potential or indirect contribution to GHG emissions mitigation
- Y02E60/30—Hydrogen technology
- Y02E60/50—Fuel cells
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Sustainable Energy (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Manufacturing & Machinery (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
Método de atrapamiento e inmovilización de
enzimas oxidoreductasas y sus usos.
Consiste en un método nuevo de atrapamiento e
inmovilización de las enzimas oxidoreductasas sobre cualquier
superficie metálica o de otro material sólido, como grafito, que se
basa en el uso de la mezcla de Glutaraldehido como agente de
entrecruzamiento y Nafion como aditivo protector.
Los dispositivos así fabricados pueden usarse
como biosensores para medir analitos de interés (fenoles, glucosa,
colesterol, lactosa...), y para lograr biorreactores que se pueden
usar en procesos de tratamiento de aguas residuales contaminadas
por los fenoles a titulo de ejemplo, sin descartar la posibilidad de
su uso en la síntesis limpia.
Description
Método de atrapamiento e inmovilización de
enzimas oxidoreductasas y sus usos.
La presente invención describe:
- 1-
- Un método nuevo de atrapamiento e inmovilización de las enzimas oxidoreductasas sobre cualquier superficie metálica o de otro material sólido, como grafito.
- 2-
- Los dispositivos así fabricados pueden usarse como biosensores para medir analitos de interés (fenoles, glucosa, colesterol, lactosa...), y para lograr biorreactores que se pueden usar en procesos de tratamiento de aguas residuales contaminadas por los fenoles a titulo de ejemplo, sin descartar la posibilidad de su uso en la síntesis limpia.
Generalmente las técnicas de inmovilización de
enzimas en la superficie de un metal o material sólido pueden ser
clasificadas en dos tipos:
- \medcirc
- Física, en la cual podemos incluir: la absorción, que implica enlaces de tipo débil o interacciones electrostáticas; el atrapamiento, debido a la estructura permeable de algunas matrices de inmovilización; la encapsulación, favorecida por el carácter híbrido de algunas resinas que ofrecen entornos favorables a las enzimas.
- \medcirc
- Química, por medio de enlaces covalentes entre la enzima y el electrodo, gracias a un agente químico que actúa como puente entre ambas partes, o por medio de entrecruzamiento cuando se trata de un agente químico que actúa no sólo para enlazar las enzimas con la superficie sólida sino también para entrecruzar las enzimas entre sí.
La presente invención está basada en la sinergia
de dos de las técnicas citadas, el entrecruzamiento y la
encapsulación. Por primera vez se hace uso de una mezcla de
glutaraldehido y de Nafion para inmovilizar enzimas en superficies
sólidas.
En la bibliografía aparecida hasta ahora, el
glutaraldehido se suele usar, por su carácter bifuncional, para
crear enlaces intermoleculares entre las enzimas, lo cual conduce a
un capa estable y previene la lixiviación de las mismas por el medio
de reacción. Esta estrategia conduce también a interacciones entre
las enzimas y a una desnaturalización de esas sustancias, lo que
provoca una drástica disminución de su actividad biocatalítica. Por
otro lado, el uso del Nafion en una matriz de atrapamiento de las
enzimas está basado en dos razones: su efecto protector frente a
algunos interferentes o inhibidores, gracias a su carga negativa
que se debe a la existencia de grupos sulfonados en su estructura
(Nistor, et al. Anal. Chim. Acta 387, pp.
309-326); y su carácter híbrido
(hidrofóbico-hidrofílico), por el cual cuando se usa
mezclado por ejemplo con sol-gel, conduce a un
material orgánico-inorgánico previniendo el
agrietamiento del biomaterial final (Kim, et al. Anal. Chim.
Acta 479, pp. 143-150; Choi, et al. Anal.
Chim. Acta 537, pp. 179-187). A pesar de la
abundancia de los trabajos que usan esos dos materiales para
fabricar biosensores o biorreactores, el uso de esos dos agentes
conjuntamente para lograr una matriz estable de atrapamiento nunca
fue comunicado.
La novedad principal del método desarrollado
consiste en el uso por primera vez de una mezcla de glutaraldehido
como agente de entrecruzamiento y de Nafion como aditivo protector,
para lograr una matriz de atrapamiento de las enzimas.
Las ventajas que presenta la matriz aquí
desarrollada sobre las preparadas de forma habitual son varias e
importantes y se pueden explicar mediante la comparación de los
tres esquemas abajo desarrollados:
- \bullet
- A diferencia de los dos métodos corrientes de uso del glutaraldehido para entrecruzar las enzimas, como se muestra en la Figura 1, o para encapsularlas en los sitios hidrofilicos del Nafion, como se muestra en la Figura 2, el método aquí desarrollado aprovecha las ventajas de las dos matrices, como queda recogido en la Figura 3.
- \bullet
- En esta nueva matriz el glutaraldehido además de actuar como agente de enlace entre los grupos funcionales de las enzimas entre sí y de las enzimas con la superficie metálica, enlaza la parte hidrofóbica en la estructura del Nafion con la superficie del metal. Esto impide el desplome de las enzimas y del Nafion.
- \bullet
- Por su parte, el Nafion ofrece entornos muy favorables a la enzima gracias a la encapsulación de dichas sustancias en su parte hidrofílica.
- \bullet
- Esta matriz fue desarrollada y probada en medios muy agresivos que contienen, además de inhibidores de las enzimas, un gran porcentaje de alcohol, y los resultados obtenidos demostraron una gran estabilidad de la actividad de las enzimas, sobre todo cuando se comparan con los obtenidos mediante el uso único de uno de los dos agentes.
- \bullet
- Además, los biosensores amperométricos fabricados gracias al atrapamiento de las enzimas en esta matriz han mostrado una gran sensibilidad a los sustratos de interés o al intercambio de la carga eléctrica directa entre las enzimas y la superficie metálica, lo cual significa que la matriz aquí desarrollada además de ofrecer estabilidad a las enzimas les concede una libre movilidad y desde luego una gran actividad biocatalítica.
Para modificar biológicamente las superficies
metálicas se usaron:
- \bullet
- Las enzimas lacasa, peroxidasa y tirosinasa, suministradas por las casas Fluka o/y Sigma-Aldrisch.
- \bullet
- El Glutaraldehido y el Nafion de concentración 25% y 5%, respectivamente, fueron suministrados por Sigma-Aldrisch.
La funcionalización biológica de las superficies
metálicas se llevó a cabo en varias etapas:
- 1-
- En primer lugar se limpia la superficie metálica mediante un alisado con papel de silicio, en el caso de biosensores se procede a una limpieza electroquímica mediante polarización a potencial variable en una celda de tres electrodos aplicando varios ciclos voltamperométricos.
- 2-
- Se limpia la superficie con agua y se deja secar, mientras se disuelve la enzima en la disolución reguladora adecuada; a esta disolución se le añade el Glutaraldehido y se somete a polimerización en un baño de ultrasonidos, se le añade el Nafion y se mezcla manualmente.
- 3-
- De esta disolución se toma la cantidad adecuada mediante una microjeringa, se deposita sobre el electrodo y se deja secar a temperatura ambiente. Finalmente la proporción másica del Glutaraldehido y el Nafion se optimiza en 1% y 0.5% de volumen depositado, respectivamente.
- 4-
- Pasadas ocho horas, se introduce el biosensor o el biorreactor, ya finalizado su proceso de fabricación, en una disolución reguladora bien agitada y se deja ahí durante 15 min para eliminar los restos de enzima no inmovilizadas en la superficie.
- 5-
- Una vez terminado este proceso se saca, se lava suavemente con la misma disolución reguladora y se guarda sumergido en la misma disolución en frigorífico a 4ºC cuando no está en uso.
Figura 1.- Se muestra el uso de Glutaraldehido
como agente de entrecruzamiento de enzimas.
Figura 2.- Se muestra el uso de Nafion como
agente de protección por encapsulamiento de las enzimas.
Figura 3.- Se muestra el uso de la mezcla de
Glutaraldehido y Nafion, como método de atrapamiento e
inmovilización de enzimas oxidoreductasas.
El método de atrapamiento aquí desarrollado es
susceptible de aplicación industrial ya que puede adaptarse
perfectamente para el atrapamiento de varias sustancias biológicas.
Lo cual puede conducir a dispositivos de medida in situ y/o
en tiempo real de analitos de interés en muestras agroalimentarias,
medioambientales y clínicas. Además, dada la gran estabilidad de la
matriz, incluso en medios orgánicos y de gran agresividad para las
enzimas, este método de atrapamiento puede ser perfectamente
utilizado en la fabricación de biorreactores.
Claims (4)
1. Método de atrapamiento e inmovilización de
enzimas oxidoreductasas caracterizado por el uso de la
mezcla de Glutaraldehido como agente de entrecruzamiento y Nafion
como aditivo protector.
2. Método de atrapamiento e inmovilización de
enzimas oxidoreductasas, según reivindicación 1,
caracterizado porque comprende las siguientes etapas:
Adición, sobre una disolución de la enzima en disolución reguladora,
de la cantidad adecuada de Glutaraldehido y polimerización en baño
de ultrasonidos; adición de Nafion en la cantidad adecuada y
homogeneización; deposición mediante microjeringa de la cantidad
requerida de esta disolución sobre la superficie del
transductor.
3. Uso del método de atrapamiento e
inmovilización de enzimas oxidoreductasas, según reivindicaciones 1
y 2, para la fabricación de dispositivos de medida in situ
y/o en tiempo real de analitos de interés en muestras
agroalimentarias, medioambientales y clínicas.
4. Uso del método de atrapamiento e
inmovilización de enzimas oxidoreductasas, según reivindicaciones 1
y 2, en la fabricación de biorreactores basados en la
inmovilización de sustancias bio-catalizadoras
mediante la mezcla Glutaraldehido-Nafion.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200702165A ES2312282B1 (es) | 2007-08-02 | 2007-08-02 | Metodo de atrapamiento e inmovilizacion de enzimas oxidoreductasas y sus usos. |
| PCT/ES2008/000287 WO2009022035A1 (es) | 2007-08-02 | 2008-04-25 | Método de atrapamiento e inmovilización de enzimas oxidoreductasas y sus usos |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200702165A ES2312282B1 (es) | 2007-08-02 | 2007-08-02 | Metodo de atrapamiento e inmovilizacion de enzimas oxidoreductasas y sus usos. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2312282A1 ES2312282A1 (es) | 2009-02-16 |
| ES2312282B1 true ES2312282B1 (es) | 2010-02-08 |
Family
ID=40339486
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES200702165A Active ES2312282B1 (es) | 2007-08-02 | 2007-08-02 | Metodo de atrapamiento e inmovilizacion de enzimas oxidoreductasas y sus usos. |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| ES (1) | ES2312282B1 (es) |
| WO (1) | WO2009022035A1 (es) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2387661B1 (es) | 2010-12-10 | 2013-10-31 | Biolan Microbiosensores S.L. | Proceso de purificación y estabilización de la enzima gluconato deshidrogenasa (gadh, ec 1.1.99.3); enzima gluconato deshidrogenasa (gadh, ec 1.1.99.3); y uso de la enzima gluconato deshidrogenasa (gadh, ec 1.1.99.3). |
-
2007
- 2007-08-02 ES ES200702165A patent/ES2312282B1/es active Active
-
2008
- 2008-04-25 WO PCT/ES2008/000287 patent/WO2009022035A1/es active Application Filing
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| GHICA, M.E. & BRETT, C.M.A. "{}A glucose biosensor using methyl viologen redox mediator on carbon film electrodes"{}. Analytica Chimica Acta, 2005, Volumen 532, páginas 145-151. Ver resumen; páginas 146-147, apartados 2.3 y 2.4. * |
| LIANG, J.F. et al. "{}Biomedical Application of Immobilized Enzymes"{}. Journal of Pharmaceuticals Sciences, 2000, Volumen 89, Número 8, páginas 979-990. Ver resumen. * |
| OZOEMENA, K.I. & NYOKONG, T. "{}Novel amperometric glucose biosensor based on an ether-linked cobalt(II) phthalocyanine- cobalt(II) tetraphenylporphyrin pentamer as a redox mediator"{}. Electrochimica Acta, 2006, Volumen 51, páginas 5131-5136. Ver resumen; página 5133, apartado 2.3. * |
| RICCI, F. et al. "{}Novel planar glucose biosensors for continous monitoring use"{}. Biosensors and Bioelectronics, 2005, Volumen 20, páginas 1993-2000. Ver páginas 1994-1995, apartado 2.2. * |
| WU, M. et al. "{}A lactate needle-type biosensor for in vivo detection in muscular tissues"{}. Sensors and Actuators B, 2000, Volumen 66, páginas 269-271. Ver introducción; página 269, apartado 2.2.4. * |
| ZOU, Y. et al. "{}Biosensor based on polyaniline-Prussian Blue/ multi-walled carbon nanotubes hybrid composites"{}. Biosensors and Bioelectronics, 2007, Volumen 22, páginas 2666-2674. [Disponible en línea el 01.12.2006]. Ver resumen; página 2670, apartado 2.4. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2312282A1 (es) | 2009-02-16 |
| WO2009022035A1 (es) | 2009-02-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Guo et al. | Insight of MOF environment-dependent enzyme activity via MOFs-in-nanochannels configuration | |
| Zhang et al. | Biocatalytic membrane based on polydopamine coating: a platform for studying immobilization mechanisms | |
| Liu et al. | pH-switchable, ultrathin permselective membranes prepared from multilayer polymer composites | |
| Jewett et al. | Gallium nitride is biocompatible and non-toxic before and after functionalization with peptides | |
| De Melo et al. | Urea Biosensors Based on Immobilization of Urease into Two Oppositely Charged Clays (Laponite and Zn− Al Layered Double Hydroxides) | |
| Sigolaeva et al. | Engineering systems with spatially separated enzymes via dual-stimuli-sensitive properties of microgels | |
| Gokoglan et al. | Paper based glucose biosensor using graphene modified with a conducting polymer and gold nanoparticles | |
| Jha et al. | Entrapment of live microbial cells in electropolymerized polyaniline and their use as urea biosensor | |
| Yimamumaimaiti et al. | Efficient blood-toleration enzymatic biofuel cell via in situ protection of an enzyme catalyst | |
| JP4604216B2 (ja) | タンパク質の固定方法とタンパク質チップならびに細胞の固定方法および細胞チップ | |
| Wang et al. | Nanoconfinement effects: glucose oxidase reaction kinetics in nanofluidics | |
| CN101735475A (zh) | 一种亲水性聚氨酯多孔载体的制备方法 | |
| Itoh et al. | Electrochemical enzymatic biosensor with long-term stability using hybrid mesoporous membrane | |
| CN103723725B (zh) | 硅烷化活性炭的制备方法、固载化酶的制备方法 | |
| Zhang et al. | Versatile method for coating surfaces with functional and responsive polymer-based films | |
| ES2312282B1 (es) | Metodo de atrapamiento e inmovilizacion de enzimas oxidoreductasas y sus usos. | |
| Kamanina et al. | “3-in-1” hybrid biocatalysts: association of yeast cells immobilized in a sol–gel matrix for determining sewage pollution | |
| Robbins et al. | Surface-Localized Release of Nitric Oxide via Sol− Gel Chemistry | |
| Tran et al. | Covalent linker-free immobilization of conjugatable oligonucleotides on polypropylene surfaces | |
| Ding et al. | Glucose oxidase immobilized in alginate/layered double hydroxides hybrid membrane and its biosensing application | |
| ES2339695T3 (es) | Microsensor para la deteccion de d-aminoacidos. | |
| Misra et al. | Radiation facilitated-immobilized lipase (RaFIL) mini biocatalytic reactor based on epoxy decorated PP tubes: Rapid colorimetric estimation of pesticide Chlorpyrifos | |
| Temani et al. | Activity of cholesterol oxidase immobilized on layered double hydroxide nanomaterials for biosensor application: Acacia salicina scavenging power of hypercholesterolemia therapy | |
| ES2315197B1 (es) | Nuevo biosensor amperometrico, procedimiento de fabricacion y usos. | |
| WO2004079331A3 (en) | Composition and method for immobilizing a substance on a solid-phase support |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EC2A | Search report published |
Date of ref document: 20090216 Kind code of ref document: A1 |