ES2312282B1 - Metodo de atrapamiento e inmovilizacion de enzimas oxidoreductasas y sus usos. - Google Patents
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Abstract
Método de atrapamiento e inmovilización de
enzimas oxidoreductasas y sus usos.
Consiste en un método nuevo de atrapamiento e
inmovilización de las enzimas oxidoreductasas sobre cualquier
superficie metálica o de otro material sólido, como grafito, que se
basa en el uso de la mezcla de Glutaraldehido como agente de
entrecruzamiento y Nafion como aditivo protector.
Los dispositivos así fabricados pueden usarse
como biosensores para medir analitos de interés (fenoles, glucosa,
colesterol, lactosa...), y para lograr biorreactores que se pueden
usar en procesos de tratamiento de aguas residuales contaminadas
por los fenoles a titulo de ejemplo, sin descartar la posibilidad de
su uso en la síntesis limpia.
Description
Método de atrapamiento e inmovilización de
enzimas oxidoreductasas y sus usos.
La presente invención describe:
- 1-
- Un método nuevo de atrapamiento e inmovilización de las enzimas oxidoreductasas sobre cualquier superficie metálica o de otro material sólido, como grafito.
- 2-
- Los dispositivos así fabricados pueden usarse como biosensores para medir analitos de interés (fenoles, glucosa, colesterol, lactosa...), y para lograr biorreactores que se pueden usar en procesos de tratamiento de aguas residuales contaminadas por los fenoles a titulo de ejemplo, sin descartar la posibilidad de su uso en la síntesis limpia.
Generalmente las técnicas de inmovilización de
enzimas en la superficie de un metal o material sólido pueden ser
clasificadas en dos tipos:
- \medcirc
- Física, en la cual podemos incluir: la absorción, que implica enlaces de tipo débil o interacciones electrostáticas; el atrapamiento, debido a la estructura permeable de algunas matrices de inmovilización; la encapsulación, favorecida por el carácter híbrido de algunas resinas que ofrecen entornos favorables a las enzimas.
- \medcirc
- Química, por medio de enlaces covalentes entre la enzima y el electrodo, gracias a un agente químico que actúa como puente entre ambas partes, o por medio de entrecruzamiento cuando se trata de un agente químico que actúa no sólo para enlazar las enzimas con la superficie sólida sino también para entrecruzar las enzimas entre sí.
La presente invención está basada en la sinergia
de dos de las técnicas citadas, el entrecruzamiento y la
encapsulación. Por primera vez se hace uso de una mezcla de
glutaraldehido y de Nafion para inmovilizar enzimas en superficies
sólidas.
En la bibliografía aparecida hasta ahora, el
glutaraldehido se suele usar, por su carácter bifuncional, para
crear enlaces intermoleculares entre las enzimas, lo cual conduce a
un capa estable y previene la lixiviación de las mismas por el medio
de reacción. Esta estrategia conduce también a interacciones entre
las enzimas y a una desnaturalización de esas sustancias, lo que
provoca una drástica disminución de su actividad biocatalítica. Por
otro lado, el uso del Nafion en una matriz de atrapamiento de las
enzimas está basado en dos razones: su efecto protector frente a
algunos interferentes o inhibidores, gracias a su carga negativa
que se debe a la existencia de grupos sulfonados en su estructura
(Nistor, et al. Anal. Chim. Acta 387, pp.
309-326); y su carácter híbrido
(hidrofóbico-hidrofílico), por el cual cuando se usa
mezclado por ejemplo con sol-gel, conduce a un
material orgánico-inorgánico previniendo el
agrietamiento del biomaterial final (Kim, et al. Anal. Chim.
Acta 479, pp. 143-150; Choi, et al. Anal.
Chim. Acta 537, pp. 179-187). A pesar de la
abundancia de los trabajos que usan esos dos materiales para
fabricar biosensores o biorreactores, el uso de esos dos agentes
conjuntamente para lograr una matriz estable de atrapamiento nunca
fue comunicado.
La novedad principal del método desarrollado
consiste en el uso por primera vez de una mezcla de glutaraldehido
como agente de entrecruzamiento y de Nafion como aditivo protector,
para lograr una matriz de atrapamiento de las enzimas.
Las ventajas que presenta la matriz aquí
desarrollada sobre las preparadas de forma habitual son varias e
importantes y se pueden explicar mediante la comparación de los
tres esquemas abajo desarrollados:
- \bullet
- A diferencia de los dos métodos corrientes de uso del glutaraldehido para entrecruzar las enzimas, como se muestra en la Figura 1, o para encapsularlas en los sitios hidrofilicos del Nafion, como se muestra en la Figura 2, el método aquí desarrollado aprovecha las ventajas de las dos matrices, como queda recogido en la Figura 3.
- \bullet
- En esta nueva matriz el glutaraldehido además de actuar como agente de enlace entre los grupos funcionales de las enzimas entre sí y de las enzimas con la superficie metálica, enlaza la parte hidrofóbica en la estructura del Nafion con la superficie del metal. Esto impide el desplome de las enzimas y del Nafion.
- \bullet
- Por su parte, el Nafion ofrece entornos muy favorables a la enzima gracias a la encapsulación de dichas sustancias en su parte hidrofílica.
- \bullet
- Esta matriz fue desarrollada y probada en medios muy agresivos que contienen, además de inhibidores de las enzimas, un gran porcentaje de alcohol, y los resultados obtenidos demostraron una gran estabilidad de la actividad de las enzimas, sobre todo cuando se comparan con los obtenidos mediante el uso único de uno de los dos agentes.
- \bullet
- Además, los biosensores amperométricos fabricados gracias al atrapamiento de las enzimas en esta matriz han mostrado una gran sensibilidad a los sustratos de interés o al intercambio de la carga eléctrica directa entre las enzimas y la superficie metálica, lo cual significa que la matriz aquí desarrollada además de ofrecer estabilidad a las enzimas les concede una libre movilidad y desde luego una gran actividad biocatalítica.
Para modificar biológicamente las superficies
metálicas se usaron:
- \bullet
- Las enzimas lacasa, peroxidasa y tirosinasa, suministradas por las casas Fluka o/y Sigma-Aldrisch.
- \bullet
- El Glutaraldehido y el Nafion de concentración 25% y 5%, respectivamente, fueron suministrados por Sigma-Aldrisch.
La funcionalización biológica de las superficies
metálicas se llevó a cabo en varias etapas:
- 1-
- En primer lugar se limpia la superficie metálica mediante un alisado con papel de silicio, en el caso de biosensores se procede a una limpieza electroquímica mediante polarización a potencial variable en una celda de tres electrodos aplicando varios ciclos voltamperométricos.
- 2-
- Se limpia la superficie con agua y se deja secar, mientras se disuelve la enzima en la disolución reguladora adecuada; a esta disolución se le añade el Glutaraldehido y se somete a polimerización en un baño de ultrasonidos, se le añade el Nafion y se mezcla manualmente.
- 3-
- De esta disolución se toma la cantidad adecuada mediante una microjeringa, se deposita sobre el electrodo y se deja secar a temperatura ambiente. Finalmente la proporción másica del Glutaraldehido y el Nafion se optimiza en 1% y 0.5% de volumen depositado, respectivamente.
- 4-
- Pasadas ocho horas, se introduce el biosensor o el biorreactor, ya finalizado su proceso de fabricación, en una disolución reguladora bien agitada y se deja ahí durante 15 min para eliminar los restos de enzima no inmovilizadas en la superficie.
- 5-
- Una vez terminado este proceso se saca, se lava suavemente con la misma disolución reguladora y se guarda sumergido en la misma disolución en frigorífico a 4ºC cuando no está en uso.
Figura 1.- Se muestra el uso de Glutaraldehido
como agente de entrecruzamiento de enzimas.
Figura 2.- Se muestra el uso de Nafion como
agente de protección por encapsulamiento de las enzimas.
Figura 3.- Se muestra el uso de la mezcla de
Glutaraldehido y Nafion, como método de atrapamiento e
inmovilización de enzimas oxidoreductasas.
El método de atrapamiento aquí desarrollado es
susceptible de aplicación industrial ya que puede adaptarse
perfectamente para el atrapamiento de varias sustancias biológicas.
Lo cual puede conducir a dispositivos de medida in situ y/o
en tiempo real de analitos de interés en muestras agroalimentarias,
medioambientales y clínicas. Además, dada la gran estabilidad de la
matriz, incluso en medios orgánicos y de gran agresividad para las
enzimas, este método de atrapamiento puede ser perfectamente
utilizado en la fabricación de biorreactores.
Claims (4)
1. Método de atrapamiento e inmovilización de
enzimas oxidoreductasas caracterizado por el uso de la
mezcla de Glutaraldehido como agente de entrecruzamiento y Nafion
como aditivo protector.
2. Método de atrapamiento e inmovilización de
enzimas oxidoreductasas, según reivindicación 1,
caracterizado porque comprende las siguientes etapas:
Adición, sobre una disolución de la enzima en disolución reguladora,
de la cantidad adecuada de Glutaraldehido y polimerización en baño
de ultrasonidos; adición de Nafion en la cantidad adecuada y
homogeneización; deposición mediante microjeringa de la cantidad
requerida de esta disolución sobre la superficie del
transductor.
3. Uso del método de atrapamiento e
inmovilización de enzimas oxidoreductasas, según reivindicaciones 1
y 2, para la fabricación de dispositivos de medida in situ
y/o en tiempo real de analitos de interés en muestras
agroalimentarias, medioambientales y clínicas.
4. Uso del método de atrapamiento e
inmovilización de enzimas oxidoreductasas, según reivindicaciones 1
y 2, en la fabricación de biorreactores basados en la
inmovilización de sustancias bio-catalizadoras
mediante la mezcla Glutaraldehido-Nafion.
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| WO (1) | WO2009022035A1 (es) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2387661B1 (es) | 2010-12-10 | 2013-10-31 | Biolan Microbiosensores S.L. | Proceso de purificación y estabilización de la enzima gluconato deshidrogenasa (gadh, ec 1.1.99.3); enzima gluconato deshidrogenasa (gadh, ec 1.1.99.3); y uso de la enzima gluconato deshidrogenasa (gadh, ec 1.1.99.3). |
-
2007
- 2007-08-02 ES ES200702165A patent/ES2312282B1/es active Active
-
2008
- 2008-04-25 WO PCT/ES2008/000287 patent/WO2009022035A1/es active Application Filing
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| GHICA, M.E. & BRETT, C.M.A. "{}A glucose biosensor using methyl viologen redox mediator on carbon film electrodes"{}. Analytica Chimica Acta, 2005, Volumen 532, páginas 145-151. Ver resumen; páginas 146-147, apartados 2.3 y 2.4. * |
| LIANG, J.F. et al. "{}Biomedical Application of Immobilized Enzymes"{}. Journal of Pharmaceuticals Sciences, 2000, Volumen 89, Número 8, páginas 979-990. Ver resumen. * |
| OZOEMENA, K.I. & NYOKONG, T. "{}Novel amperometric glucose biosensor based on an ether-linked cobalt(II) phthalocyanine- cobalt(II) tetraphenylporphyrin pentamer as a redox mediator"{}. Electrochimica Acta, 2006, Volumen 51, páginas 5131-5136. Ver resumen; página 5133, apartado 2.3. * |
| RICCI, F. et al. "{}Novel planar glucose biosensors for continous monitoring use"{}. Biosensors and Bioelectronics, 2005, Volumen 20, páginas 1993-2000. Ver páginas 1994-1995, apartado 2.2. * |
| WU, M. et al. "{}A lactate needle-type biosensor for in vivo detection in muscular tissues"{}. Sensors and Actuators B, 2000, Volumen 66, páginas 269-271. Ver introducción; página 269, apartado 2.2.4. * |
| ZOU, Y. et al. "{}Biosensor based on polyaniline-Prussian Blue/ multi-walled carbon nanotubes hybrid composites"{}. Biosensors and Bioelectronics, 2007, Volumen 22, páginas 2666-2674. [Disponible en línea el 01.12.2006]. Ver resumen; página 2670, apartado 2.4. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2009022035A1 (es) | 2009-02-19 |
| ES2312282A1 (es) | 2009-02-16 |
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