ES2311771T3

ES2311771T3 - Derivados en n-fenilbenzamida como farmacos para el tratamiento de la enfermedad pulmonar obstructiva cronica (epoc).

Info

Publication number: ES2311771T3
Application number: ES04019648T
Authority: ES
Inventors: Lucio Claudio Rovati; Antonio Giordani; Gianfranco Caselli
Original assignee: Rottapharm SpA
Current assignee: Rottapharm SpA
Priority date: 2004-08-19
Filing date: 2004-08-19
Publication date: 2009-02-16
Anticipated expiration: 2024-08-19
Also published as: EP1634595A1; AU2005203706A1; JP2006056890A; DE602004015788D1; SI1634595T1; CA2514373A1; US7482371B2; US20060052427A1; EP1634595B1; PT1634595E; PL1634595T3; ATE404195T1; JP4987268B2; AU2005203706B2; DK1634595T3; CA2514373C

Abstract

El uso de un derivado farmacéuticamente activo de N-fenilbenzamida de Fórmula (I) (Ver fórmula) en la que R 1 es un grupo ciano, nitro, halógeno, hidroxi, alquilo C 1-C 4, metoxi o tetrazol-5-ilo, R 2 es hidrógeno, hidroxi o metoxi, R3 es un grupo tetrazol-5-ilo o hidrógeno, R4 y R5 son hidrógeno si R3 es un grupo tetrazol-5-ilo, o R4 y R5 se seleccionan independientemente entre el grupo constituido por carboxi, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo y carbamoílo si R3 es hidrógeno, y R6 es hidrógeno o metilo, o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para preparar un medicamento para el tratamiento terapéutico de la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC).

Description

Derivados de N-fenilbenzamida como fármacos para el tratamiento de la Enfermedad Pulmonar Obstructiva Crónica (EPOC).

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La presente invención se refiere al uso de derivados de N-fenilbenzamida farmacéuticamente activos para la preparación de un medicamento para el tratamiento de la Enfermedad Pulmonar Obstructiva Crónica (EPOC).

La EPOC es un problema de salud global importante y creciente, se predice que se va a convertir en la quinta causa más habitual de incapacidad en el mundo en 2020, y es igualmente una causa habitual creciente de ingreso hospitalario. La falta de agentes terapéuticos efectivos para tratar esta enfermedad impulsa muchos esfuerzos dentro de la comunidad científica para identificar agentes farmacológicos apropiados capaces de tratar satisfactoriamente esta enfermedad.

En base al conocimiento actual (National Institute of Health National Heart, Lung and Blood Institute: GOLD, Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease: Global Strategy for Diagnosis, Management and Prevention of Chronic Obstructive Pulmonary Disease; actualización de 2003), la EPOC es un estado de enfermedad caracterizado por una limitación en el flujo de aire que no es completamente reversible. La limitación en el flujo de aire normalmente es a la vez progresiva y está asociada con una respuesta inflamatoria anormal de los pulmones a las partículas o gases nocivos, la mayor parte de las veces relacionados con el hábito de fumar. Todos los síntomas, anormalidades funcionales y las complicaciones de la EPOC se explican sobre la base de esta inflamación subyacente y la patología resultante. La limitación crónica en el flujo de aire característica de la EPOC está causada por una mezcla de enfermedad de las vías respiratorias menores (bronquiolitis obstructiva) y destrucción parenquimal (enfisema), cuyas contribuciones relativas varían de persona a persona. La inflamación crónica produce la remodelación y el estrechamiento de las vías respiratorias menores. La destrucción del parénquima pulmonar, igualmente por procesos inflamatorios, conduce a la pérdida de los enlaces alveolares a las vías respiratorias menores y disminuye la capacidad de las vías respiratorias para permanecer abiertas durante la expiración. Los términos "enfisema" y "bronquitis crónica" se usan clínicamente con frecuencia, y se incluyen en la definición de la EPOC. El enfisema, o destrucción de las superficies de intercambio gaseoso de los pulmones (alvéolos), describe una de las varias anormalidades estructurales presentes en los pacientes de EPOC. La bronquitis crónica, o presencia de tos y producción de esputo durante al menos 3 meses en dos años consecutivos, sigue siendo un término clínica y epidemiológicamente útil. Sin embargo, no refleja el importante impacto de la limitación en el flujo de aire sobre la morbilidad y mortalidad en los pacientes de EPOC. Por tanto, el término EPOC define correctamente esta enfermedad en su conjunto.

Como se ha anticipado anteriormente, la EPOC se define por la inflamación crónica del conjunto de vías respiratorias, parénquima y vasculatura pulmonar. La intensidad, así como las características celulares y moleculares de la inflamación, varían con el progreso de la enfermedad. Con el tiempo, la inflamación daña los pulmones y lleva a los cambios patológicos característicos de la EPOC (Sutherland E. R. y col. Management of Chronic Obstructive Pulmonary Disease. N. Engl. J. Med. 2004; 350: 2689-97; Hogg J. C. y col. The nature of small-airways obstruction in Chronic Obstructive Pulmonary Disease. N. Engl. J. Med. 2004; 350: 2645-53).

De hecho, la EPOC se caracteriza por un aumento de neutrófilos, macrófagos y linfocitos T (especialmente CD8^{+}) en diferentes partes de los pulmones. Se produce también un aumento de eosinófilos en algunos pacientes, particularmente durante las exacerbaciones. Estos incrementos se alcanzan por aumento en la aparición, supervivencia y/o activación de células inflamatorias. Muchos estudios revelan una correlación entre el número de células inflamatorias de diferentes tipos en el pulmón y la gravedad de la EPOC.

Se usa terapia farmacológica para evitar y controlar los síntomas, reducir la frecuencia y gravedad de las exacerbaciones, mejorar el estado de salud y mejorar la tolerancia al ejercicio. Por tanto, el tratamiento de la EPOC depende fuertemente de los fármacos antiinflamatorios y broncodilatadores.

Ninguna de las medicaciones existentes para la EPOC ha demostrado modificar la disminución a largo plazo de la función pulmonar que es la marca distintiva de esta enfermedad.

La solicitud internacional de patente WO 90/09989 anterior de nuestro grupo se refiere a derivados de N-fenilbenzamida de Fórmula (I):

1

en la que R_{1} es un grupo ciano, nitro, halógeno, hidroxi, C_{1}-C_{4} alquilo metoxi o tetrazol-5-ilo, R_{2} es hidrógeno, hidroxi o metoxi, R_{3} es un grupo tetrazol-5-ilo o hidrógeno, R_{4} y R_{5} son hidrógeno si R_{3} es un grupo tetrazol-5-ilo, o R_{4} y R_{5} se seleccionan independientemente entre el grupo constituido por carboxi, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo y carbamoílo si R_{3} es hidrógeno y R_{6} es hidrógeno o metilo.

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Estos compuestos se han reivindicado en el documento WO 90/09989 para controlar la secreción gástrica y como agentes protectores para la membrana de mucosa gastroentérica.

Finalmente, los compuestos de Fórmula (I) se han mencionado como agentes adecuados para el tratamiento farmacológico de varias dolencias que se pueden atribuir a hipersensibilidad a los alérgenos, tales como asma bronquial, rinitis alérgica y conjuntivitis.

Entre los compuestos de Fórmula (I), el derivado de Fórmula (Ia) [N-4-(1H-tetrazol-5-il)fenil-4-(1H-tetrazol-5-il)benzamida], Andolast, CR2039, en el que R_{2}, R_{4}, R_{5} y R_{6} son hidrógeno y R_{1} y R_{3} son grupos tetrazol-5-ilo, se encontró que tenía propiedades farmacológicas particularmente prometedoras para el tratamiento del asma (Revel L. y col. CR 2039, a new bis-(1H-tetrazol-5-yl)phenylbenzamide derivative with potential for the topical treatment of asthma. Eur. J. Pharmacol. 1992; 229: 45-53). Las formulaciones farmacéuticas adecuadas para el uso del compuesto (Ia) para el tratamiento del asma se han descrito en el documento US 5976576.

Compuesto de Fórmula (Ia) (Andolast, CR2039):

2

El asma es la otra principal enfermedad obstructiva crónica de las vías respiratorias caracterizada por una inflamación subyacente de las vías respiratorias. El asma y la EPOC comparten sus síntomas principales, pero éstos son generalmente más variables en el asma que en la EPOC. Además, la limitación en el flujo de aire en el asma es más a menudo completamente reversible, tanto espontáneamente como con tratamiento, mientras que en la EPOC nunca es completamente reversible y normalmente es progresiva, si continúa la exposición a los agentes nocivos. En el asma hay también más evidencia de hiperrespuesta de las vías respiratorias (HVR), es decir, una respuesta broncoconstrictora anormal a los estímulos.

La inflamación subyacente crónica de las vías respiratorias es también muy diferente: en el asma es principalmente eosinofílica e impulsada por los linfocitos T CD4^{+}, particularmente con la subpoblación Th2, que libera una familia de citoquinas incluyendo IL-4, IL-5 y IL-13. Inversamente, la inflamación crónica en la EPOC es neutrofílica y caracterizada por la presencia de un aumento en el número de macrófagos y linfocitos T CD8^{+}.

Finalmente, las respuestas al tratamiento del asma y la EPOC son también radicalmente diferentes. A pesar del principal componente inflamatorio crónico en ambas enfermedades, los corticosteroides son significativamente más efectivos en el asma que en la EPOC, siendo esta última más sensible a broncodilatadores tales como los agonistas \beta2 adrenérgicos y anticolinérgicos.

El limitado valor de los corticosteroides en la reducción de la inflamación en la EPOC sugiere que se necesitan nuevos tipos de tratamientos antiinflamatorios no esteroideos. Hay varias nuevos enfoques de tratamiento antiinflamatorio en la EPOC incluyendo, por ejemplo, inhibidores de la fosfodiesterasa, inhibidores del factor de transcripción NF-_{K}B, bloqueantes de la adhesión molecular, inhibidores de la metaloproteinasa de la matriz y abridores del canal del potasio (K^{+}). Este último tiene varias características que serán beneficiosas en la EPOC, tal como se describirá más adelante.

Se pensaba que la actividad farmacológica de los compuestos de Fórmula (I) y, particularmente del compuesto (Ia), se debía principalmente a las propiedades antialérgicas de este tipo de compuestos, de los que se ha demostrado que bloquean la liberación de histamina (Makovec F. y col. Antiallergic and cytoprotective activity of new N-phenylbenzamide acid derivatives. J. Med. Chem. 1992; 35:3633-40), de ahí su indicación clínica para el tratamiento de la rinitis alérgica y del asma.

Hallazgos farmacológicos inesperados indican en la actualidad que los compuestos de Fórmula (I) tal como se han definido más arriba y en particular el compuesto (Ia), Andolast, alivian los diferentes componentes de la respuesta inflamatoria de las vías respiratorias, actuando a través de un mecanismo no identificado con anterioridad.

De hecho, el Andolast disminuye las respuestas inflamatorias tanto mediadas por anticuerpos como mediadas por células inflamatorias en sujetos atópicos.

Con respecto a lo anterior, el Andolast ha demostrado un potente efecto inhibidor sobre la síntesis de IgE dependiente de IL-4 por linfocitos B humanos procedentes de donantes alérgicos. Este efecto lleva a la disminución de la sensibilización de los mastocitos inducida por alérgenos y en consecuencia a la inhibición de la liberación del mediador dependiente de IgE, incluyendo histamina, que es responsable de la inflamación de las vías aéreas y AHR en el asma bronquial atópica.

Con respecto a los procesos mediados por células, los datos procedentes de pacientes asmáticos leves a moderados indicaron que un curso de tratamiento estándar con Andolast es capaz de inducir un efecto inhibitorio sobre la producción de linfocitos T (Th2) de la citoquina reclutadora de eosinófilos IL-5, con la consiguiente disminución en el porcentaje de eosinófilos en el esputo. Puesto que estos procesos mediados por células son efectivos en sujetos tanto atópicos como no atópicos, este efecto puede contribuir a la disminución de la inflamación de las vías aéreas y AHR en ambos tipos de pacientes.

De acuerdo con la presente invención, se ha encontrado sorprendentemente en la actualidad que los compuestos de Fórmula (I) tal como se han definido más arriba están dotados de una actividad excelente para la activación de los canales del K^{+} dependientes del calcio (Ca^{2+}), destacando de esta forma dichos compuestos como agentes farmacológicos inesperadamente adecuados particularmente para el tratamiento de la EPOC, tal como se detallará más adelante.

De esta forma, un aspecto de la presente invención es el uso de un compuesto de Fórmula (I) tal como se ha definido más arriba para la preparación de un medicamento para el tratamiento de la EPOC.

Compuestos preferidos para uso en la presente invención son los compuestos de Fórmula (I) como se definió más arriba en la que R_{1} es un grupo tetrazol-5-ilo. Un compuesto particularmente preferido es el compuesto (Ia), en el que R_{2}, R_{4}, R_{5} y R_{6} son hidrógeno y R_{3} son grupos tetrazol-5-ilo.

Las propiedades anteriormente mencionadas de apertura de los canales del K^{+} se han demostrado en experimentos de los que se informará en el apartado de descripción detallada de la invención. En estos experimentos, el Andolast fue capaz de inhibir la activación de las neuronas sensoriales primarias vagales (según se determina mediante la inhibición de la movilización del Ca^{2+} intracelular estimulada por estímulos eléctricos despolarizantes, EFS), para inhibir la denominada inflamación neurogénica de las vías respiratorias que se deriva de la liberación neuronal de taquiquininas y péptido relacionado con el gen de la calcitonina (CGRP) y la broncoconstricción consecuente. Estos efectos se eliminan completamente mediante el inhibidor del canal del K^{+} de alta conductancia caribdotixina, demostrando de esta manera que estos efectos farmacológicos están mediados por la apertura de dichos canales de K^{+}.

Los canales de iones son proteínas transmembrana, que catalizan el transporte de iones inorgánicos a través de la membrana celular. Los canales de K^{+} representan el grupo de canales de iones más amplio y diverso. La actividad de los canales de K^{+} contribuye significativamente a la generación del potencial de membrana en reposo y de corrientes de repolarización/hiperpolarización en una amplia variedad de tipos de célula. La musculatura lisa y los nervios de las Vías respiratorias expresan canales de K^{+} que están implicados en la regulación de la actividad contráctil y de los reflejos neuronales en este nivel. Al menos tres tipos de dichos canales están presentes en las vías respiratorias, más exactamente canales activados por Ca^{2+}, dependientes del voltaje retrasado/rectificado y canales de K^{+} sensibles al ATP.

Los canales de K^{+} activados por Ca^{2+} (K_{Ca}) se diferencian de la mayor parte del resto de canales de K^{+} en que su activación se encuentra bajo un doble control, ya que se activan tanto por el aumento de la concentración de Ca^{2+} intracelular como por la despolarización de la membrana. Los canales K_{Ca} se subdividen a su vez en tres grupos principales en función de sus propiedades físicas de conductancia monocanal: conductancia baja (SK_{Ca}), conductancia media (IK_{Ca}) y conductancia elevada (alta) (BK_{Ca}). Aunque de estos tres subgrupos el BK_{Ca} es el más estudiado, algunos trabajos recientes se dirigen a las propiedades farmacológicas de SK_{Ca} e IK_{Ca} (Jensen B. S. y col; WO 00/33834, 15 Jun. 2000; Use of isatin derivatives as ion channel activating agents).

En las células de la musculatura lisa de vías respiratorias (ASM), los canales BK_{Ca} activan un mecanismo de retroalimentación negativa mediante el cual las acciones de los estímulos despolarizantes y/o agentes de movilización de Ca^{2+} se antagonizan o terminan como resultado de la hiperpolarización producida por los movimientos exteriores de K^{+} que restauran la estabilidad eléctrica de la membrana celular.

Como se ha adelantado anteriormente, muchos estudios in vitro e in vivo, realizados tanto en animales como en seres humanos, han demostrado que los abridores de los canales de K^{+} son capaces de inducir la hiperpolarización de las células ASM, broncodilatación, supresión de la hiperrespuesta de las vías respiratorias (AHR), e inhibición de los reflejos neuronales.

Con respecto a este último punto, es importante reseñar que hay una estrecha interacción entre los nervios de las vías respiratorias y la inflamación. Muchos mediadores inflamatorios pueden modular los nervios colinérgicos y sensoriales mediante la activación de los receptores de las terminales nerviosas (Barnes P. J. Modulation of neurotransmission in airways. Physiol. Rev. 1992; 72: 699-729). Los nervios sensoriales liberan principalmente neuropéptidos, tales como taquiquininas (por ejemplo, sustancia P, SP y neuroquinina A, NKA) y CGRP. Cuando se libera desde los terminales centrales, están asociados con la transmisión del dolor y con la activación de los reflejos protectores (por ejemplo, tos). Sin embargo, los nervios sensoriales a su vez pueden también amplificar la inflamación de las vías respiratorias cuando se activan por estímulos mecánicos y químicos (por ejemplo, el humo del tabaco). Generando impulsos antidrómicos y un reflejo del axón local que libera los mismos neuropéptidos de las terminales periféricas, llevando a una contracción excitadora noradrenérgica nocolinérgica (eNANC) y a la inflamación neurogénica. Esta inflamación neurogénica se describe en muchos órganos y se ha documentado en el tracto respiratorio superior e inferior en diferentes especies (Barnes P. J. NANC nerves and neuropeptides. In: Barnes P. J., Rogers I. W., Thomson N. C. (Eds.) 1998, Academic Press, London, 423-58; Maggi C. A. y col. Neuropeptides as regulators of airways function: vasoactive intestinal peptide and the tachykinins. Physiol. Rev. 1995; 75: 277-322). De hecho, además de la contracción de la musculatura lisa y por tanto la broncoconstricción directa, estos neuropéptidos inducen una serie de respuestas inflamatorias que incluyen la estimulación de de secreción de la glándula submucosa, vasodilatación, aumento de la permeabilidad vascular, estimulación de mastocitos, estimulación de linfocitos B y T, estimulación de macrófagos, quimioatracción de eosinófilos y neutrófilos y adhesión vascular de neutrófilos. La idea de que los nervios sensoriales pueden amplificar y diseminar la respuesta inflamatoria ha suscitado considerable atención, ya que puede contribuir a la inflamación en la enfermedad de las vías respiratorias, tales como asma y EPOC (Joos G F y col. The role of neural inflammation in asthma and Chronic Obstructive Pulmonary Disease. Ann. N.Y. Acad. Sci. 2003; 992: 218-30). Las taquiquininas también estimulan la neurotransmisión colinérgica facilitando la liberación de acetilcolina en las terminales de los nervios colinérgicos y estimulando la transmisión gangliónica (Watson N. y col. Endogenous tachykinins facilitate transmission through parasympathetic ganglia in guinea pig trachea. Br. J. Pharmacol. 1993; 109: 751-59).

De importancia por lo menos similar con respecto al papel de los nervios de las vías respiratorias en la patogénesis de EPOC es el hecho de que el componente reversible principal del estrechamiento de las vías respiratorias en EPOC es un incremento del tono broncomotor colinérgico, que por lo demás representa sólo uno de los muchos factores que contribuyen a la obstrucción bronquial en el asma. Por tanto, los anticolinérgicos son incluso más efectivos que los agonistas \beta2 adrenérgicos en pacientes de EPOC. Se ha sugerido que los pacientes de EPOC se podrían beneficiar de las propiedades farmacológicas de los abridores de los canales de K^{+}, que son capaces de desequilibrar la transmisión gangliónica y de reducir la liberación de acetilcolina desde los terminales de los nervios. Los efectos moduladores de estos fármacos sobre la neurotransmisión colinérgica se confirmaron por su mayor acción inhibidora ejercida en cobayas frente a la broncoconstricción inducida mediante estimulación vagal, en comparación con la desencadenada mediante la infusión intravenosa de acetilcolina.

Las propiedades relajantes de los agentes activantes de BK_{Ca} en la musculatura lisa de las vías respiratorias, junto con la implicación de dichos canales en la liberación de varios mediadores inflamatorios y en la transmisión neuronal, sugiere que la EPOC es un objetivo prometedor para los agentes farmacológicos que actúan como abridores de los canales de K_{Ca} (G. Pelaia y col. Potential role of potassium channel openers in the treatment of asthma and Chronic Obstructive Pulmonary Disease. Life Sci. 2002;70: 977-90).

Debe reseñarse que otros abridores de los canales de K^{+}, por ejemplo Cromakalim, han demostrado sin duda que inhiben significativamente la broncoconstricción experimentalmente inducida en modelos animales, y los ensayos clínicos han demostrado que Cromakalim es efectivo en la inflamación crónica de las vías respiratorias. Sin embargo, este fármaco así como sus congéneres Lemakalim y Bimakalim actúan sobre otro tipo de canal del K^{+}, el canal del K^{+} sensible a ATP, K_{ATP}, que es un canal del K^{+} distinto al BK_{Ca}. Los abridores de los canales K_{ATP} han demostrado ser potentes relajantes de la musculatura lisa vascular y su uso está por tanto limitado por los efectos secundarios indeseados tales como la hipotensión. Además, los activadores de este canal carecen de propiedades inhibidoras en la liberación de mediadores inflamatorios e inhibición de la incorporación de células inflamatorias a las vías respiratorias, lo que se ha sugerido como un componente clave del tratamiento de EPOC. Inversamente, estas propiedades han demostrado que el Andolast no es sólo efectivo sobre la inflamación neurogénica mediante la activación de los canales BK_{Ca}, sino que también disminuye las respuestas inflamatorias mediadas por anticuerpos y mediadas por células. Puesto que los canales de K^{+} se expresan en diferentes células inflamatorias e inmunes tales como linfocitos T, neutrófilos, basófilos y macrófagos implicados en la inflamación crónica de las vías respiratorias, se ha propuesto que dichos canales pueden posiblemente contribuir a modular diferentes respuestas inflamatorias de las vías respiratorias. En consecuencia, la abertura de los canales de K^{+} demostrada aquí puede explicar el mecanismo de acción del Andolast también a este respecto, lo que por tanto apoyaría sus propiedades antiinflamatorias globales específicas de las vías respiratorias y sus efectos inhibidores sobre la incorporación de células inflamatorias (posiblemente incluyendo neutrófilos y macrófagos característicos de la inflamación EPOC) modulando la liberación de diferentes quimioquinas y citoquinas.

Tomadas en conjunto, todas estas evidencias apoyan el uso de los derivados de Fórmula (I) y concretamente del compuesto de Fórmula (Ia), Andolast, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de la EPOC, en base a los hallazgos inesperados descritos aquí.

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Efecto del Andolast sobre la inflamación neurogénica y demostración de la implicación del canal K_{Ca}

Estudios específicos han llevado a demostrar que:

a) El Andolast inhibe la movilización del Ca^{2+} intracelular inducido por los estímulos despolarizantes en las neuronas de los ganglios de la raíz dorsal de rata.

b) El Andolast inhibe la liberación de neuropéptido (CGRP) desde los terminales periférico y central de las neuronas sensoriales primarias.

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c) El Andolast inhibe la contracción eNANC resistente a la atropina evocada en bronquios aislados de cobaya mediante la aplicación de estímulos eléctricos (EFS). Esta respuesta contráctil está mediada por la SP/NKA liberada desde las neuronas sensoriales primarias y actúa sobre los receptores de taquiquinina en la musculatura lisa.

d) La caribdotoxina, un inhibidor selectivo de K_{Ca}, es capaz de revertir las actividades del Andolast anteriormente descritas.

Métodos Experimentos con cultivos de neuronas

Se extirparon ganglios de la raíz dorsal (GRD) a ratas de 1-3 días de vida y se disociaron en células separadas de acuerdo con procedimientos bien establecidos. Las células, plaqueadas sobre cubreobjetos de vidrio recubiertos, se cargaron con Fura-2-AM-éster para detectar cambios relativos en el calcio intracelular ([Ca^{2+}]_{i}).

Durante la fluorescencia de Ca^{2+}, las células se excitaron con estimulación eléctrica (10 Hz, 1 ms, 0,40 mA/cm^{2} durante 10 s) dos veces con un periodo de descanso entre cada estimulación de 20 min. Estos experimentos se realizaron en presencia y ausencia de caribdotoxina 100 nM.

Cortes de vías respiratorias de cobaya y espina dorsal de rata

Se prepararon cortes de traquea y bronquios de cobaya o de espina dorsal de rata y se transfirieron a cámaras de perfusión y se perfundieron. Tras un periodo de equilibrio, se tomaron muestras antes, durante y después de la administración de un estímulo de excitación (KCl 80 mM). Se comparó el efecto del Andolast con el efecto de su vehículo. Se midió la inmunoreactividad tipo CGRP (GCRP-LI) mediante inmunoensayo enzimático (EIA).

En la espina dorsal de rata, los experimentos con Andolast se realizaron igualmente en presencia de caribdotoxina 100 nM.

Bronquios aislados de cobaya

Se montaron anillos bronquiales de cobaya en baños de órganos. Tras un periodo de equilibrio, se estudió la respuesta contráctil eNANC al EFS (5 Hz, 20 s, pulso de 0,5 ms de anchura a 40 V) en presencia de atropina
(1 \muM). Se estudiaron los efectos del Andolast o su vehículo en experimentos paralelos en presencia o ausencia de caribdotoxina 100 nM. También se estudió la capacidad del Andolast para afectar a la actividad broncoconstrictora directa de SP.

Resultados Experimentos con cultivos de neuronas

El EFS indujo un aumento en la movilización de [Ca^{2+}]_{i}, (59 \pm 8% de la respuesta a la ionomicina). Todas las células que responden al EFS respondieron también a capsaicina 0,1 \muM con un aumento de la [Ca^{2+}]_{i}, indicando de esta forma que se trataba de neuronas sensoriales primarias (nociceptores polimodales). La movilización de la [Ca^{2+}]_{i} en respuesta a la ionomicina fue similar tras pretratamiento con Andolast (10 \muM) o su vehículo. El pretratamiento con Andolast disminuyó la respuesta al EFS reducida de una forma dependiente de la concentración en comparación con el efecto del vehículo del Andolast. La respuesta a la capsaicina no quedó afectada por el pretratamiento con Andolast (10 \muM). El efecto inhibidor del Andolast fue revertido completamente con caribdotoxina 100 nM (ChTX). Los datos se ilustran en la Figura 1.

Cortes de espina dorsal de rata y vías respiratorias de cobaya

Tanto en los cortes de espina dorsal de rata como en los cortes de vías respiratorias de cobaya, el Andolast
(0,1-1 \muM) no causó ningún incremento significativo en el flujo de salida de CGRP-LI.

En espina dorsal de rata, el Andolast produjo una inhibición dependiente de la concentración en el flujo de salida de CGRP-LI inducido por un medio alto en K^{+}. La inhibición máxima (48% de vehículo) se consiguió con Andolast (1 \muM). Este efecto fue completamente eliminado con caribdotoxina 100 nM (Figura 2A).

También en cortes de vías respiratorias de cobaya, el Andolast (1 \muM) produjo una inhibición remarcable (67%) del flujo de salida de CGRP-LI inducido por un medio alto en K+ (FIG. 2B).

Bronquios aislados de cobaya

En presencia de atropina, el EFS produjo una respuesta contráctil retardada en anillos de bronquio de cobaya. El pretratamiento con Andolast disminuyó de forma dependiente de la dosis la respuesta contráctil al EFS. La inhibición máxima (45%) se consiguió con Andolast (10 \muM). El Andolast (10 \muM) no afectó a la respuesta contráctil a SP, indicando especificidad por este motivo. En presencia del inhibidor específico de BK_{Ca} caribdotoxina (0,1 \muM), el efecto del Andolast fue completamente eliminado (Figura 3).

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Conclusiones

El Andolast causa la inhibición de:

a) la movilización de Ca^{2+} inducida por EFS en neuronas sensoriales primarias cultivadas;

b) la liberación de neuropéptido sensorial desde cortes de espina dorsal de rata, un tejido enriquecido en terminales de neuronas sensoriales primarias;

c) la liberación de neuropéptido sensorial desde cortes de vías respiratorias de cobaya;

d) la contracción eNANC producida por EFS en bronquio aislado de cobaya.

Estos hallazgos indican que el Andolast ejerce una acción inhibidora sobre la excitación de los terminales periféricos y centrales de las neuronas sensoriales primarias. El efecto inhibidor del Andolast se dirige a una población de nociceptores polimodales que responde a la capsaicina y liberación de neuropéptidos. Estas neuronas están implicadas en el inicio de los reflejos protectores y proinflamatorios y median repuestas neurogénicas inflamatorias. Los hallazgos obtenidos en el presente estudio sugieren que al menos parte de las propiedades antiinflamatorias del Andolast en escenarios clínicos pueden ser debidas a su capacidad para inhibir la excitación de las neuronas sensoriales.

Dos observaciones indican que la acción inhibidora del Andolast sobre las neuronas sensoriales es específica. El Andolast en la mayor concentración usada (10 \muM) no afectó al aumento en la [Ca^{2+}]_{i} producida por ionomicina en neuronas GRD en cultivo. De manera más importante, el Andolast no produjo ningún efecto inhibidor sobre la respuesta contráctil producida por SP en bronquios aislados de cobaya. Esta observación indica que el Andolast no actúa sobre los receptores de taquiquinina y no afecta el flujo de Ca^{2+} hacia el interior de las células de la musculatura lisa, pero más posiblemente actúa en un punto de acción anterior a la unión sobre el terminal del nervio sensorial.

Todas estas actividades "antiinflamatorias" del Andolast fueron completamente revertidas mediante caribdotoxina.

Caribdotoxina es un inhibidor de K_{Ca}. Su capacidad para antagonizar completamente los efectos protectores del Andolast sobre la inflamación neurogénica (es decir, cambios en la [Ca^{2+}]_{i} en rata GRD; liberación de CGRP en espina dorsal de rata; y eNANC en anillos bronquiales aislados de cobaya) apoya la hipótesis de que el mecanismo molecular de la acción del Andolast está ligado a la activación de canales de K^{+} específicos implicados en la inflamación neurogénica.

Los compuestos usados en la presente invención se preparan de acuerdo con los métodos descritos en el documento WO 90/09989.

La presente invención incluye en su ámbito el uso de sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de Fórmula (I) y particularmente de Fórmula (Ia). Las sales representativas usadas en las formulaciones farmacéuticas de los compuestos de Fórmula (I) e (Ia) incluyen sales de metales alcalinos tales como sales de sodio, litio o potasio, sales de alcalinotérreos tales como magnesio, y similares. Formulaciones farmacéuticas preferidas para los compuestos usados en la presente invención son las reivindicadas en el documento US 5976576.

Claims

1. El uso de un derivado farmacéuticamente activo de N-fenilbenzamida de Fórmula (I)

3

en la que R_{1} es un grupo ciano, nitro, halógeno, hidroxi, alquilo C_{1}-C_{4,} metoxi o tetrazol-5-ilo, R_{2} es hidrógeno, hidroxi o metoxi, R_{3} es un grupo tetrazol-5-ilo o hidrógeno, R_{4} y R_{5} son hidrógeno si R_{3} es un grupo tetrazol-5-ilo, o R_{4} y R_{5} se seleccionan independientemente entre el grupo constituido por carboxi, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo y carbamoílo si R_{3} es hidrógeno, y R_{6} es hidrógeno o metilo, o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para preparar un medicamento para el tratamiento terapéutico de la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC).

2. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R_{1} es un grupo tetrazol-5-ilo, R_{2} es hidrógeno, hidroxi o metoxi, R_{3} es un grupo tetrazol-5-ilo o hidrógeno, R_{4} y R_{5} son hidrógeno si R_{3} es un grupo tetrazol-5-ilo, o R_{4} y R_{5} se seleccionan independientemente entre el grupo constituido por carboxi, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo y carbamoílo si R_{3} es hidrógeno, y R_{6} es hidrógeno o metilo.

3. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho derivado farmacéuticamente activo de N-fenilbenzamida es el compuesto (Ia) que tiene la siguiente fórmula

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4. El uso de un derivado farmacéuticamente activo de N-fenilbenzamida según se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para preparar un medicamento para el tratamiento del enfisema pulmonar.

5. El uso de un derivado farmacéuticamente activo de N-fenilbenzamida según se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para preparar un medicamento para el tratamiento de la bronquitis crónica.