ES2310757T3

ES2310757T3 - Acidos grasos omega-3 para el tratamiento de la artrosis canina.

Info

Publication number: ES2310757T3
Application number: ES04780570T
Authority: ES
Inventors: Dale A. Fritsch; Dennis E. Jewell; William D. Schoenherr
Original assignee: Hills Pet Nutrition Inc
Current assignee: Hills Pet Nutrition Inc
Priority date: 2003-08-11
Filing date: 2004-08-10
Publication date: 2009-01-16
Anticipated expiration: 2024-08-10
Also published as: JP2007502276A; CN101653436B; CN101653436A; CA2529749C; DE602004015472D1; ZA200601096B; WO2005018630A1; JP2012116865A; CN1835745A; ATE402695T1; MXPA05013757A; AU2004266601B2; RU2422140C2; RU2006107197A; AU2004266601A1; EP1656130B1; EP1656130A1; DK1656130T3; CN100558352C; CA2529749A1

Abstract

Utilización de EPA en la fabricación de un medicamento para prevenir o disminuir el proceso degenerativo del cartílago articular en un perro que tiene artrosis o en la fabricación de un medicamento para disminuir la probabilidad de que un perro desarrolle artrosis, en la que el medicamento comprende EPA a una concentración de, al menos, el 0,2% en peso y hay que administrar el medicamento al perro en una cantidad que proporciona al menos 27,5 mg de EPA/kg de masa corporal.

Description

Ácidos grasos omega-3 para el tratamiento de la artrosis canina.

La artrosis es un enfermedad degenerativa de las articulaciones que se produce con frecuencia en los humanos y en los animales de compañía (Richardson et al., Vet. Clin. North. Amer. Small Animal Practice, 27: 883-911, 1997; Curtis et al., Drug. Disc. Today, 9: 165-172, 2004). La enfermedad implica el deterioro progresivo del cartílago articular con una inflamación mínima (Schoenherr et al., en Small Animal Clinical Nutrition, 4ª ed., Hand et al. Eds., Walsworth Publishing Company, Marcelline, MO, 2000, 907-921; Hedborn et al., Cell. Mol. Life. Sci. 59: 45-53, 2002; Pool, Front Biosci, 4: D662-70, 1990). El tratamiento de la artrosis incluye tratamientos farmacológicos, intervención quirúrgica, administración de alimentos medicinales y tratamiento con dieta. Sin embargo, los enfoques de tratamiento actuales se han centrado en el alivio sintomático y, como tales, no han tenido un éxito completo a la hora de tratar la enfermedad o de tratar las enfermedades subyacentes. Por consiguiente, siguen siendo necesarios nuevos métodos para tratar la artrosis en los humanos y los animales de compañía.

La patente de los Estados Unidos US-A-5.843.919 describe la utilización de una combinación de glucosamina y un ácido graso omega-3 cuya combinación se dice que es eficaz para controlar los síntomas de la artritis. Particularmente, se indica que la glucosamina es el condroprotector y que el ácido graso omega-3 es un compuesto antiinflamatorio.

La patente internacional WO-99/04762 se refiere a la mejora o el mantenimiento de la concentración de ácidos grasos esenciales en la membrana celular. En particular, se reivindica un efecto sinérgico de un ácido graso esencial y un disulfuro biocompatible.

En el J. Nutr., vol. 132, 3003, 1684S-1636S se describe la utilización de mejillones de labios verdes para mejorar los signos artríticos en los perros.

El artículo en Canine Practice, vol. 17, n.º 6, 1992, págs. 6 a 8 intenta describir el tratamiento de perros que padecen artritis de cadera con complementos de ácidos grasos.

Compendio

En consecuencia, los inventores de la presente memoria han tenido éxito a la hora de descubrir que la administración de una cantidad eficaz de ácidos grasos omega-3, en particular el ácido eicosapentaenoico (EPA), puede proporcionar un nuevo método para el tratamiento de la artrosis en los perros.

Por lo tanto, la presente invención se refiere al uso del EPA en la fabricación de un medicamento para prevenir o aliviar el proceso degenerativo del cartílago articular en un perro que tiene artrosis, o en la fabricación de un medicamento para disminuir la probabilidad de que un perro desarrolle artrosis, en el que el medicamento comprende EPA a una concentración de al menos el 0,2% en peso y el medicamento se debe administrar al perro en una cantidad que proporcione al menos 27,5 mg de EPA/kg de masa corporal.

Preferiblemente, el medicamento comprende EPA a una concentración de al menos el 0,3% en peso.

En una realización preferida, el medicamento puede comprender una dieta que comprende EPA a una concentración de al menos el 0,2% en peso o, preferiblemente, una concentración de al menos el 0,3% en peso.

Los usos de la presente invención restauran un funcionamiento casi normal de la articulación en un perro con artrosis.

La presente invención incluye disminuir la probabilidad de que un perro desarrolle artrosis y restaurar un funcionamiento casi normal de la articulación en un perro con artrosis al administrar al perro una composición que comprende EPA en una cantidad de unos 37,5 mg/kg de masa corporal, unos 56,25 mg/kg de masa corporal, unos 75 mg/kg de masa corporal o unos 93,75 mg/kg de masa corporal. Las composiciones utilizadas pueden estar comprendidas en una composición de alimento para animales, un tratamiento para animales o un complemento para animales.

En varias realizaciones, las utilizaciones pueden implicar tratar la artrosis o reducir los síntomas de la enfermedad en un perro. Además, las utilizaciones pueden implicar prevenir el desarrollo de la artrosis en un perro o prevenir o paliar la aparición de síntomas de la enfermedad en el perro.

Las utilizaciones de la presente invención se pueden basar adicionalmente en las composiciones que además comprenden ácidos grasos omega-6 en una cantidad total de no más del 3% en peso y/o una proporción de ácidos grasos omega-6 por ácidos grasos omega-3 de 0,2 a 1,1 y/o una proporción de ácidos grasos omega-6 por EPA de 1,0 a 12,5.

Descripción detallada

Esta presente utilización implica la administración de ácidos grasos omega-3, en particular el EPA, en el tratamiento de la artrosis y los síntomas de estas enfermedades en los mamíferos y, en particular, en los perros.

Los ácidos grasos omega-3, también conocidos como ácidos grasos n-3, son un grupo reconocido de ácidos carboxílicos grasos poliinsaturados. Por lo general, los ácidos grasos omega-3 contienen de 12 a 26 átomos de carbono con dobles enlaces interrumpidos por metileno. Los ácidos grasos omega-3 más importantes desde el punto de vista fisiológico tienen de 18 a 22 carbonos de longitud y la cadena es lineal. Los ácidos grasos n-3 tienen un doble enlace entre los átomos de carbono 3 y 4 medido desde el extremo metilo de la molécula. El ácido eicosapentaenoico (EPA), el ácido docosahexaenoico (DHA) y el ácido \alpha-linolénico (ALA) son ácidos grasos n-3 importantes para tratar la artrosis en los mamíferos, y el EPA es particularmente importante para tratar la artrosis en los perros. También se pueden utilizar derivados de los ácidos grasos omega-3 para tratar la artrosis. Los expertos en la técnica conocen bien muchas clases de derivados. Ejemplos de derivados adecuados son los ésteres, tales como los ésteres de cicloalquilo(C_{1}-C_{30}) ramificados o sin ramificar y/o saturados o insaturados, en particular, los ésteres de alquilo(C_{1}-C_{6}) de ácidos grasos omega-3, en particular el EPA.

Los ácidos grasos omega-3, y en particular el EPA, se pueden administrar a un mamífero, y en particular a un perro, por cualquiera de las vías de administración, tales como, por ejemplo, oral, intranasal, intravenosa, subcutánea y similares. La vía oral es especialmente adecuada, y el EPA se puede administrar por vía oral en una dieta húmeda o seca, bien incorporándolo dentro de la misma o sobre la superficie de cualquier compuesto de la dieta, tales como por pulverización, aglomeración, espolvoreado o precipitación sobre la superficie. Puede estar presente en la dieta nutricional propiamente dicha o en un tentempié, un complemento o una golosina. También puede estar presente en la porción líquida de la dieta tal como agua u otro líquido. El EPA se puede administrar como un polvo, sólido o como un líquido, incluido un gel. Si se desea, el EPA se puede administrar por vía oral en un alimento medicinal o una forma farmacéutica tal como una cápsula, comprimido en forma de cápsula, jeringuilla y similares. Dentro de la forma farmacéutica, el EPA puede estar presente como un polvo o un líquido tal como un gel. Se puede emplear cualquiera de los alimentos medicinales o vehículos farmacéuticos, tal como agua, glucosa, sacarosa y similares, junto con el EPA.

En algunas realizaciones, la presente invención puede implicar composiciones de dieta con EPA, que están esencialmente libres de DHA y/o ALA. Con la terminología esencialmente libres de DHA o ALA o mezclas de los mismos se pretende hacer referencia a que cualquiera o ambos DHA y ALA están sustancialmente ausentes o que sólo están presentes pequeñas cantidades insignificantes de alguno o los dos DHA o ALA, por ejemplo, menos del 0,1%, menos del 0,03%, menos del 0,01%, menos del 0,03% o menos del 0,001%. En las realizaciones que están esencialmente libres de DHA y/o ALA, cualquier cantidad de DHA y/o ALA presente se encuentra a una concentración suficientemente baja de tal forma que no se produce un efecto significativo en un perro con artrosis sobre la enfermedad artrósica, sobre la progresión de la artrosis, o sobre los síntomas producidos por la artrosis.

El EPA es eficaz contra distintas formas de artrosis así como otras formas de artritis, incluida la artritis reumatoide.

El ácido graso omega-3 EPA actúa previniendo el desarrollo de los procesos degenerativos en el cartílago articular o paliando el proceso degenerativo y, por lo tanto, mejora la articulación en los perros con artrosis o en los perros que, si no, podrían padecer artrosis. Este efecto se añade a la acción antiinflamatoria de los ácidos grasos omega-3, que pueden ser de menor importancia en la artrosis canina debido a que la inflamación afecta poco en la artrosis.

La utilización de un procedimiento de explante in vitro del cartílago articular de la rodilla, como se demuestra en los ejemplos de más adelante, demostró que el EPA era el único ácido graso omega-3 que disminuía significativamente la inducción de la liberación de los glucosaminoglucanos (GAG) del cartílago. En relación con la prevención de daño en la articulación debido a la artrosis, un grupo diana determinado de mascotas, especialmente perros, son los que se necesitarían para tal asistencia preventiva en oposición a la población general. Por ejemplo, las mascotas, especialmente perros de raza grande, tales como el perro labrador, el rottweiler, el pastor alemán y similares, son más propensos a padecer artrosis, como se demuestra por ser más frecuentes en estas mascotas. Adicionalmente, en las mascotas de más de seis (6) años, especialmente los perros, aparece la artrosis con más frecuencia. El EPA puede ser adicionalmente útil para tratar perros y gatos con artrosis. También pueden acompañar al EPA otros ácidos grasos omega-3 tal como el DHA o el ALA, así como ácidos grasos omega-6, todos los cuales se pueden encontrar en fuentes tales como aceites de pescado, en cantidades relativamente grandes.

La cantidad de EPA que se debe emplear puede variar sustancialmente. Como se muestra en los ejemplos posteriores, se observa una verdadera respuesta a la dosis: cuanto más EPA se administra, el efecto observado contra la artrosis es mayor. Por lo general, un mínimo de al menos el 0,2% en peso basado en la cantidad de una dieta nutritiva que satisfaga los requisitos usuales de un perro o un gato al día. Por ejemplo, se puede emplear una cantidad específica en la ración de alimentos nutritivos usuales al día o se puede proporcionar la misma cantidad diaria al animal en una golosina o complemento diario. Adicionalmente, se puede emplear una combinación de estos métodos o de cualquier otro modo de dosificación siempre y cuando se proporcione la cantidad eficaz de EPA. El margen de cantidades de EPA incluye al menos el 0,2%, al menos el 0,25%, al menos el 0,30%, al menos el 0,4%, al menos el 0,5%, al menos el 0,6% hasta el 2%, hasta el 2,25%, hasta el 2,5%, hasta el 3%, hasta el 4% o hasta el 5% basándose en el peso. Se debe destacar que todos los porcentajes de peso son sobre una base de sustancia seca (BSS). El EPA es un ácido graso omega-3. Generalmente, las proporciones del EPA o del ácido graso omega-3 por ácido graso omega-6 pueden variar significativamente. En varias realizaciones, la proporción omega-6:omega-3 puede ser de 1,10 a 0,2 de omega-6 por 1.0 de omega-3, o de 1,08 a 0,42 de omega-6 por 1,0 de omega-3 y, más particularmente, 0,2, 0,25, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,8, 1,0 o más. En varias realizaciones, la proporción omega 6:EPA puede ser de 12,5 a 1,0 de omega-6 por 1,0 de EPA, o de 12,4 a 1,12 de omega-6 por 1,0 de EPA y más particularmente, 0,2, 0,25, 0,3, 0,4, 0,4, 0,6, 0,8, 1,0, 1,5, 2,0, 2,5, 3, 4, 5, 6, 7,5, 10, 12,5 o mayor. La proporción ácido araquidónico, AA, (un omega-6) por EPA puede ser de 0,28 a 0,01 de AA por 1,0 de EPA, de 0,28 a 0,08 de AA por 1,0 de EPA y más particularmente, 0,01, 0,02, 0,04, 0,06, 0,08, 1,0, 1,5, 1,0, 1,5, 2,8 o más.

El ácido graso omega-3, y en particular el EPA, se puede administrar en cantidades calculadas como mg/kg masa corporal. Así, por ejemplo, se puede esperar que un perro de 20 kg consuma 275 g de dieta al día. Cantidades de EPA en la dieta de 0,2%, aproximadamente el 0,3%, aproximadamente el 4%, aproximadamente el 0,5% o aproximadamente el 0,6% en peso servirían para administrar al perro 27,5 mg/kg de masa corporal, 41,25 mg/kg de masa corporal, 55 mg/kg de masa corporal, 68,75 mg/kg de masa corporal o 82,5 mg/kg de masa corporal, respectivamente. Más particularmente, se puede administrar el EPA en una cantidad de 20 mg/kg de masa corporal, 28 mg/kg de masa corporal, 30 mg/kg de masa corporal, 40 mg/kg de masa corporal, 41 mg/kg de masa corporal, 50 mg/kg de masa corporal, 55 mg/kg de masa corporal, 60 mg/kg de masa corporal, 69 mg/kg de masa corporal, 70 mg/kg de masa corporal, 80 mg/kg de masa corporal, 82 mg/kg de masa corporal, 90 mg/kg de masa corporal, 100 mg/kg de masa corporal, 120 mg/kg de masa corporal, unos 150 mg/kg de masa corporal o mayor.

Tal y como ser indicó anteriormente, el EPA puede estar en forma de un alimento proporcionado a la mascota. Ejemplos de tales alimentos son las dietas normales que proporcionan todos los nutrientes, golosinas o complementos del animal. El EPA se puede proporcionar en líquidos o en formas farmacéuticas tales como cápsulas, comprimidos, píldoras, líquidos o incluso administrarse por vía parenteral tal como mediante jeringuilla. El aspecto más importante es que la mascota reciba una cantidad eficaz del EPA para prevenir o tratar la artrosis. En varias realizaciones, la vía de administración puede ser oral y el EPA se puede incorporar en un alimento. Los alimentos se clasifican generalmente en la industria de alimentos para mascotas como "húmedos" o "secos". Un alimento húmedo tiene una cantidad relativamente elevada de agua y normalmente se presenta en una lata o contenedor en el que el aire está sustancial o totalmente excluido. Ejemplos de tales alimentos son "trozos en salsa", partículas sólidas individuales en presencia de una salsa líquida o un material de tipo pan de molde que por lo general toma la forma del receptáculo. El alimento seco por lo general es una sustancia cocinada o preferiblemente moldeada, cortándose esta última en porciones individuales, normalmente conocidas como croquetas. El EPA se incorpora fácilmente en un alimento húmedo mediante los medios convencionales. Se puede utilizar la encapsulación para proteger el EPA de la oxidación del aire en una dieta seca. Adicionalmente, se puede hacer uso de antioxidantes y envasados con nitrógeno. Esto se ejemplifica en la patente de los EE.UU. n.º 4.695.725 que pone un énfasis especial en la microencapsulación de aceites de pescado específicos. Los aceites que tienen niveles elevados de ácidos grasos omega-3 proceden de la saraca (menhaden), del salmón o del bacalao.

Ejemplo 1

Este ejemplo ilustra la liberación del glucosaminoglucano desencadenada por los ácidos grasos omega-3 en el tejido del cartílago canino en cultivo.

El cartílago articular se obtiene de las babillas izquierda y derecha (ambos cóndilos femorales y la meseta tibial) de los perros. Se cultivaron los explantes de cartílago durante 3 días en el medio con suero bovino fetal al 10%, y luego se lavaron 3 veces en un medio sin suero. A continuación se lavaron los explantes durante 6 días en medio sin suero que contiene ácido graso n3 (EPA, ALA o DHA) a 0, 100 ó 300 \mug/ml. Después de pasarse este tiempo en medio con ácido graso, todos los explantes se lavaron 3 veces con medio sin ácidos grasos/sin suero. Los explantes se cultivaron individualmente durante 4 días en 1 ml de ácido graso y medio sin suero que no contiene aditivos (C), ácido retinoico (RA) a 10^{-6} M u oncostatina M (OSM) a 50 ng/ml. Obsérvese que no se pudieron realizar todos los tratamientos en todos los perros por la disponibilidad del cartílago. La liberación de proteoglucano en el medio (\mug/mg de peso húmedo) se midió al finalizar el cultivo. En las tablas siguientes, se ofrecen la media y desviación estándar de la liberación del glucosaminoglucano (GAG) para los cultivos por triplicado de cada uno de los 4 perros. Además, se ofrecen las concentraciones medias de lactato (\mug/mg de peso húmedo) para cada tratamiento.

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 1*

1

Tal y como se muestra en la tabla 1, se produjo una disminución significativa de la liberación de GAG con EPA a 100 \mug/ml en los cultivos tratados con OSM y con 300 \mug/ml en los cultivos tratados con RA y OSM. No se produjo una disminución significativa en la concentración de lactato en el medio con ninguna dosis de EPA.

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 2*

2

Tal y como se muestra en la tabla 2, el EPA, pero no así el ALA ni el DHA, logró disminuir significativamente la liberación de GAG en los cultivos tratados con OSM. No se produjo un efecto significativo sobre la concentración de lactato en el medio con ninguna dosis de ninguno de los ácidos grasos.

TABLA 3*

3

Tal como se muestra en la tabla 3, ninguno de los ácidos grasos alteró significativamente la liberación de GAG del cartílago estimulado por el RA o la OSM en este determinado animal. No se apreciaron cambios en el lactato del medio asociados a las dosis ni a ningún ácido graso.

TABLA 4*

4

Tal y como se muestra en la tabla 4, el EPA a 300 \mug/ml, pero no ningún otro ácido graso a ninguna dosis, disminuyó significativamente la liberación del GAG de los cultivos tratados con RA. El pretratamiento con OSM a 300 \mug/ml produjo en el medio una disminución significativa de la concentración de lactato para el control y los cultivos tratados con RA y OSM.

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Ejemplo 2

Este ejemplo ilustra la incorporación de los ácidos grasos n-3 en las membranas de los condrocitos caninos.

La mayor parte de estos experimentos se realizaron con cultivos en monocapa; sin embargo, en un único experimento se analizó la incorporación de ácidos grasos en cultivos de explantes de cartílago canino.

Cultivos en monocapa

Durante 24 ó 48 horas, no se produjo ninguna incorporación del ácido graso n-3 18:3 ALA en las membranas de los condrocitos de dos perros. El porcentaje de n-3 18:3 en los condrocitos incubados en el medio solo fue de <1 de 5 (margen = 0,3 a 0,9%), porcentaje que no cambió significativamente (margen = 0,3 a 2,5%) después de incubar 24 ó 48 horas con ALA a 100 ó 300 \mug/ml.

Durante 48 h se produjo una incorporación significativa del ácido graso n-3 20:5 EPA en las membranas de los condrocitos de un perro. El porcentaje de n-3 20:5 aumentó de <1% (margen = 0,2 a 0,6%) a casi el 7% (margen = 5,6 a 8%) cuando los cultivos se trataron con EPA a 100 ó 300 \mug/ml durante 48 h. La incorporación no fue diferente cuando se realizaron los cultivos en presencia o ausencia de FCS al 5%.

Durante 48 h se produjo una incorporación significativa del ácido graso n-3 20:5 EPA, pero no del ácido graso n-3 18:3 ALA, en las membranas de los condrocitos de un perro (dosis de 300 \mug/ml de cada ácido graso). El porcentaje del n-3 20:5 aumentó de <1% a aproximadamente el 15%.

Durante 3 ó 6 días se produjo una incorporación significativa del ácido graso n-3 20:5 EPA en las membranas de los condrocitos de un perro (dosis de EPA de 300 \mug/ml). El porcentaje de n-3 20:5 aumentó de <1% al 16-18% sin ninguna diferencia entre 3 y 6 días de incubación.

Cultivo de explantes

Durante seis días se produjo una incorporación manifiesta del ácido graso n-3 20:5 EPA, pero no del n-3 18:3 DHA ni del ácido graso n-6 AA (ácido araquidónico) en los explantes de cartílago de un perro (dosis de 300 \mug/ml para cada ácido graso). El porcentaje del n-3 20:5 aumentó del 0% (no detectable) a aproximadamente el 2%.

Estos datos indicaron que el EPA, pero no ningún otro ácido graso n-3, se había incorporado en las membranas de los condrocitos caninos en los cultivos de monocapa o de explantes.

Ejemplo 3

Este ejemplo ilustra el efecto de los ácidos grasos n-3 sobre el metabolismo de los condrocitos caninos.

Para evaluar el posible efecto de los ácidos grasos n-3 sobre el metabolismo de las proteínas y los proteoglucanos en cartílago canino, se dispusieron los cultivos como se describió en el ejemplo 1, excepto para los últimos 4 días de cultivo, en los que no se añadieron estímulos catabólicos (a saber, todos los cultivos de "control"). Durante las últimas 24 h de cultivo se añadieron (1) ^{35}SO_{4}, o (2) ^{35}S-metionina y ^{35}S-cisteína al medio para marcar radiactivamente los proteoglucanos y las proteínas recién sintetizados, respectivamente. La incorporación de radiomarcación en la matriz del cartílago se midió al finalizar el cultivo. No se hizo ningún intento por cuantificar la pérdida de material radiomarcado del cartílago durante el periodo de marcación de 24 h. En la tabla 5 que sigue se muestran la media y la desviación estándar de la incorporación de ^{35}SO_{4} ("PG") o ^{35}S-metionina y ^{35}S-cisteína ("PROT") en forma de DPM/mg de peso húmedo.

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 5*

5

Tal y como se muestra en la tabla 5, no hubo un efecto significativo de ninguno de los ácidos grasos n-3 sobre la síntesis de las proteínas y la incorporación en la matriz. El EPA a 100 \mug/ml aumentó significativamente la síntesis e incorporación de proteoglucano. Ninguna otra dosis o ácido graso alteró significativamente la síntesis de proteoglucano ni su incorporación en la matriz del cartílago.

Se utilizó la PCR con transcripción inversa para medir los niveles de expresión del ARNm de las proteinasas de la matriz (agrecanasas 1 y 2), ciclooxigenasas 1 y 2, lipoxigenasas 5 y 12, y las posibles citocinas autocrinas y sus receptores (p. ej., IL-1, IL-6 y TNF).

Los resultados de este estudio hallaron que los ARNm de la agrecanasa 1 y la agrecanasa 2 se expresaban en el tejido del cartílago canino "normal". Además, algunos perros expresaban el ARNm de la ciclooxigenasa 2 (COX-2) aunque no había ningún signo de a enfermedad articular en estos animales. Esto permitió monitorizar los efectos de la complementación con los ácidos grasos n-3 y n-6 sobre la expresión del ARNm de las agrecanasas y la COX-2 en los explantes del cartílago articular canino sin estimular. El EPA fue el único ácido graso capaz de reducir la cantidad de ARNm de las enzimas degradativas, la agrecanasa 1 y la agrecanasa 2, en el cartílago articular canino. Esto demostró la capacidad que tiene el EPA para "apagar" los genes responsables de la degradación del cartílago.

Ejemplo 4

Este estudio ilustra los efectos de los ácidos grasos omega-3 en estudios clínicos sobre la artrosis canina.

Se realizaron tres estudios clínicos en perros domésticos a los que se diagnosticó clínicamente la artrosis. Veterinarios generalistas y traumatólogos especialistas incluyeron en los estudios perros propiedad de sus clientes que satisfacían unos criterios de elegibilidad específicos. Todos los pacientes debían cumplir los siguientes requisitos: tener evidencias radiográficas de artrosis con manifestaciones clínicas medibles de la enfermedad, basándose en los antecedentes relatados por los propietarios de las mascotas y las exploraciones físicas realizadas por los veterinarios; estar, por lo demás, sanos y sin enfermedades concurrentes basándose en una exploración física, hemograma completo, análisis de sangre y análisis de orina, mantener una posología terapéutica si estaban recibiendo medicación o complementos prescritos para la artrosis durante los 30 días previos a la participación en el estudio.

Se realizaron las mediciones siguientes:

Perfil de ácidos grasos en el suero: se determinó mediante un método de cromatografía de gases que implicó la extracción de los ácidos grasos con una mezcla de cloroformo y metanol (2:1), metilación con un reactivo de trifluoruro de boro-metanol (BF_{3}:MeOH) seguido de la detección por ionización en llama. Se identificaron los ésteres de metilo de los ácidos grasos al comparar los tiempos de retención con los de los estándares conocidos y cuantificarlos con un estándar interno.

Evaluación clínica veterinaria: los veterinarios realizaron tanto una exploración física como una evaluación clínica de la artrosis de los pacientes durante la fase de cribado y al concluir cada uno de los intervalos de alimentación durante el transcurso del ensayo clínico. Los veterinarios evaluaron la gravedad de cinco parámetros de la artrosis: cojera, renuencia a cargar peso, reducción del margen de movimientos, renuencia a mantener levantada la extremidad del lado opuesto y dolor en la palpación de la articulación. Se midieron los cambios en los índices de gravedad de cada uno de estos parámetros a lo largo de la duración del periodo de alimentación. Se obtuvo una evaluación clínica veterinaria extensa del impacto de la intervención dietética de la artrosis en los pacientes al combinar los cambios en los índices de gravedad de los cinco parámetros por separado.

Evaluación subjetiva del propietario de la mascota: se solicitó a los propietarios de las mascotas que cumplimentaran un cuestionario de inscripción antes de participar en el estudio y cuestionarios adicionales al finalizar cada uno de los intervalos de alimentación durante el transcurso del ensayo clínico.

- Cuestionario de inscripción: los propietarios de las mascotas puntuaron la frecuencia observada y la gravedad de los signos más corrientes de la artrosis canina, entre ellos dificultad para levantarse del suelo, cojera, rigidez, dolor en la palpación, retraso durante las caminatas, gañido o lloriqueo de dolor, conductas agresivas, dificultad para correr, dificultad para caminar, dificultad para subir escaleras, dificultad para saltar, dificultad para jugar, afectación de la movilidad y nivel global de actividad. Además, los propietarios puntuaron el estado global la artrosis de su mascota.

- Cuestionario de alimentación: los propietarios de las mascotas puntuaron tanto la frecuencia como el cambio de la gravedad de los signos de la artrosis canina que se evaluaron comparativamente durante la inclusión. Además, los propietarios de las mascotas puntuaron la gravedad del dolor de los animales en relación con la artrosis.

Análisis de la marcha sobre una plataforma dinamométrica: se evaluaron los perros en su institución correspondiente utilizando una plataforma dinamométrica biomecánica computerizada a día 0, a las 6 semanas y a las 12 semanas. La plataforma se montó centralmente y se niveló con la superficie de una pasarela de 10 m. Un adiestrador hacía trotar los perros a través de la plataforma dinamométrica y un observador evaluaba cada paso por la plataforma para confirmar el impacto de la pata y la marcha. Se consideraba que el ensayo era válido si había diferencia entre el impacto de la pata delantera y trasera homolateral mientras el perro pasaba trotando por la plataforma dinamométrica a una velocidad de 1,7 a 2,0 m/s, con una variación de aceleración de -0,5 a 0,5 ms^{-2}. Durante cada ensayo, se midió la velocidad de avance del perro utilizando un cronómetro de milisegundos y dos conmutadores fotoeléctricos. Se grabó en video cada ensayo para su revisión y la confirmación de los impactos válidos de las patas. Se procuró que el perro no disparara el cronómetro y que se mantuviera a una velocidad constante (percibida por el adiestrador y el observador) a través de la plataforma durante cada ensayo.

Se obtuvieron cinco ensayos válidos para cada periodo de prueba por cada extremidad afectada y cada extremidad homolateral de cada perro. Se midieron las fuerzas de reacción ortogonales del suelo de la fuerza vertical máxima, el impulso vertical, las fuerza máximas de frenada y propulsión, y los impulsos de frenada y propulsión, y se grabaron con un programa de ordenador especializado (Acquire, Sharon Software, DeWitt, MI). Se normalizaron todas las fuerzas según la masa corporal en kilogramos. Se promediaron los datos de los ensayos válidos para cada extremidad para obtener un valor medio de cada fuerza o impulso en cada periodo de tiempo.

Se compararon los datos de la fuerza de reacción del suelo entre los grupos que recibieron el tratamiento y los grupos con placebo como una diferencia porcentual entre la extremidad coja y la extremidad homolateral en cada periodo de tiempo. El cambio porcentual de los datos de fuerza del suelo sobre la extremidad coja se comparó al comienzo y al final del periodo de alimentación.

Estudio n.º 1

Se llevó a cabo un estudio canino para evaluar el efecto de una dieta a base de alimentar los perros diagnosticados con artrosis con concentraciones elevadas de ácidos grasos n-3. Se reclutaron 18 veterinarios generalistas para incluir los pacientes en el estudio. Se asignaron un total de 131 perros aleatoriamente a dos tratamientos dietéticos y se alimentaron durante 180 días. Los alimentos de prueba y de control tenían un contenido de macronutrientes similar, pero tenían una composición de ácidos grasos significativamente diferente (tabla 6). La dieta de prueba contenía concentraciones elevadas de ALA, EPA y DHA, y se formuló con una proporción baja de n-6/n-3. La dieta control era un alimento para perros disponible comercialmente líder en ventas, que contiene las concentraciones típicas de ácidos grasos n-3 y la proporción de n-6:n-3 característica de la industria.

TABLA 6*

6

Se registraron los ácidos grasos en el suero y las evaluaciones de los propietarios de mascotas a 0, 45, 90 y 180 días. El perfil de los ácidos grasos en el suero se moduló significativamente con el alimento de prueba. El grupo de prueba tenía una concentración significativamente más elevada de ácidos grasos n-3 (P < 0,01), específicamente EPA, DHA, \alpha-ALA, una concentración significativamente menor de AA (P < 0,01) y una proporción n-6:n-3 significativamente menor (P < 0,01) en comparación con el grupo de control al concluir cada intervalo de alimentación (tabla 7). El grupo de prueba mostró mejoras significativas al levantarse desde el reposo, correr y jugar en el día 45, y caminar en los días 90 y 180 en comparación con el grupo de control basándose en las observaciones de los propietarios de las mascotas (P < 0,05), incluso en presencia de un fuerte efecto placebo (tabla 8).

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 7*

7

TABLA 8*

8

Estudio n.º 2

Se realizó un estudio canino para evaluar el efecto dietético de las concentraciones elevadas de ácidos grasos n-3 en la alimentación de los perros diagnosticados con artrosis. Dos traumatólogos veterinarios incluyeron pacientes en el estudio. Un total de 38 perros se asignaron aleatoriamente a dos tratamientos dietéticos y se alimentaron durante 90 días. Se fabricaron las dietas de control y de prueba a partir de los mismos lotes de alimentos tal y como se describió anteriormente (tabla 6).

Se registraron los ácidos grasos en el suero, el análisis de la marcha en la plataforma dinamométrica y las evaluaciones clínicas veterinarias a 0, 45 y 90 días. El perfil de los ácidos grasos en el suero se moduló significativamente con el alimento de prueba. El grupo de prueba tenía una concentración en el suero significativamente mayor de ácidos grasos n-3 (P < 0,01), específicamente EPA, DHA, ALA, una concentración significativamente menor de AA en el día 90 (P < 0,01) y una proporción n-6:n-3 significativamente menor (P < 0,01) en comparación con el grupo de control al concluir cada intervalo de alimentación (tabla 9).

TABLA 9.*

9

Se evaluó objetivamente una valoración biomecánica de la extremidad con artrosis más grave de los perros utilizando el análisis de la marcha en la plataforma dinamométrica (tabla 10). La medición de la fuerza máxima vertical es el parámetro clave para determinar la carga de peso de la extremidad afectada. No hubo ningún cambio significativo de la fuerza máxima vertical a lo largo de la duración de la alimentación de 90 días para el grupo de control (P = 0,91), mientras que hubo un aumento significativo de la fuerza máxima vertical a lo largo del tiempo para el grupo de prueba (P = 0,01). El porcentaje medio de cambio de la fuerza máxima vertical también fue significativamente diferente entre los grupos (P < 0,05), lo que indica que el grupo de prueba aumentó la carga de peso sobre la extremidad afectada, mientras que el grupo control no mostró ningún cambio en la carga de peso durante el transcurso del estudio. La capacidad de carga de peso también se puede representar mostrando la distribución de la frecuencia del porcentaje de cambio en la fuerza máxima vertical de cada grupo dietético. Sólo el 31% de los animales en el grupo de control mostró una mejora en la carga de peso después de la alimentación durante 90 días, mientras que el 82% de los perros en el grupo de prueba aumentó la carga de peso durante el transcurso del estudio.

TABLA 10

10

Las evaluaciones clínicas subjetivas realizadas por cirujanos traumatólogos veterinarios proporcionaron un apoyo adicional para la eficacia de la dieta de prueba. Basándose en la valoración clínica veterinaria integral, se evaluó como mejorado un porcentaje significativamente mayor de perros entre los que consumieron los alimentos de prueba en comparación con los perros que consumieron el alimento de control (P < 0,05). Los especialistas veterinarios también observaron que un mayor porcentaje de perros en el grupo de prueba mostró una reducción del dolor en la palpación de la articulación en comparación con el grupo de control (P = 0,05).

Estudio n.º 3

Se realizó un estudio canino para determinar el efecto de la dosis de las concentraciones elevadas de ácidos grasos n-3 en la alimentación con perros diagnosticados con artrosis. Veintiocho veterinarios generalistas incluyeron pacientes en el estudio. Un total de 177 perros se asignaron aleatoriamente a tres tratamientos dietéticos y se alimentaron durante 90 días. Aproximadamente dos terceras partes de los perros que participaron en el estudio estaban recibiendo fármacos y/o complementos prescritos para tratar la artrosis, además de consumir las dietas terapéuticas que se estaban evaluando. Los tres alimentos de prueba tenían un contenido de macronutrientes similar, pero variaba su composición de EPA y DHA, conteniendo la variable A las concentraciones más bajas y la variable C las concentraciones más elevadas (tabla 11).

TABLA 11*

11

Se registraron los ácidos grasos en el suero, las evaluaciones de los propietarios de mascotas y las valoraciones clínicas veterinarias a los 0, 21, 45 y 90 días. El perfil de los ácidos grasos en el suero se moduló significativamente con todas las variables dietéticas. Los perros alimentados con las variables de prueba B y C tenían una concentración de ácidos grasos n-3 en el suero significativamente mayor (P < 0,01), específicamente EPA, DHA y ALA, una concentración de ácidos grasos n-6 significativamente menor, específicamente AA (P < 0,01) y una proporción n-6:n-3 significativamente menor (P < 0,01) en comparación con los perros alimentados con la variable de prueba A al concluir cada intervalo de alimentación (tabla 12).

TABLA 12*

12

Los propietarios de las mascotas describieron mejoras en 13 de los 14 signos artrósicos en los perros que estaban consumiendo alguna de las variables dietéticas durante 21 días (tabla 13). Adicionalmente, los propietarios de las mascotas describieron una disminución de la gravedad en 13 de los 14 signos artrósicos individuales en los perros que consumieron alguna de las variables dietéticas durante 90 días (tabla 14). Los propietarios de las mascotas también describieron una reducción significativa de la frecuencia de signos artrósicos observables después de que los perros consumieran alguna de las variables dietéticas durante 90 días (tabla 15).

TABLA 13

13

TABLA 14

14

Se describió que los perros que consumieron las concentraciones mayores de ácidos grasos n-3 tuvieron una mejora de la artrosis y una reducción más significativa de la progresión de la artrosis más significativa que la de los perros que recibieron la dosis más baja, sobre la base de las valoraciones clínicas veterinarias (tabla 16). No hubo una diferencia significativa en la mejora de la artrosis o en la reducción de la progresión de la artrosis entre el grupo que estaba recibiendo los fármacos y/o complementos y el grupo sin medicar (tabla 17). Esto indica que las dietas terapéuticas trabajan sinérgicamente con otros tratamientos o al menos no hacen desechar los otros tratamientos al proporcionar un beneficio adicional a los perros que padecen artrosis.

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Se describió una incidencia extremadamente baja de reacciones adversas o efectos secundarios entre los perros que participaban en este estudio. Se describió que sólo cinco perros de los 215 animales asignados a los alimentos tuvieron diarrea y vómitos, lo que posiblemente se podía atribuir a consumir una de las variables dietéticas. Se describió una incidencia similar de reacciones adversas o efectos secundarios en los perros que consumían las dietas terapéuticas en los dos estudios tratados anteriormente (1/88 y 1/26 para los ejemplos 1 y 2, respectivamente).

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TABLA 15

15

TABLA 16

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TABLA 17

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Claims

1. Utilización de EPA en la fabricación de un medicamento para prevenir o disminuir el proceso degenerativo del cartílago articular en un perro que tiene artrosis o en la fabricación de un medicamento para disminuir la probabilidad de que un perro desarrolle artrosis, en la que el medicamento comprende EPA a una concentración de, al menos, el 0,2% en peso y hay que administrar el medicamento al perro en una cantidad que proporciona al menos 27,5 mg de EPA/kg de masa corporal.

2. Utilización de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el medicamento comprende una dieta que comprende EPA en una cantidad de, al menos, el 0,2% en peso.

3. Utilización de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, en la que el medicamento comprende EPA a una concentración de, al menos, el 0,3% en peso.

4. Utilización de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el medicamento comprende una proporción de ácidos grasos omega-6 por ácidos grasos omega-3 de 0,2 a 1,1.

5. Utilización de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el medicamento comprende una proporción de ácidos grasos omega-6 por EPA de 1,0 a 12,5.

6. Utilización de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el medicamento comprende una composición alimenticia, una golosina o un complemento.