ES2301716T3 - Utilizacion de un ligando marcado con especificidad para la molecula de cd4 humana, para la preparacion de un agente de diagnostico destinado al analisis de modelos de migracion y/o distribucion de poblaciones de celulas. - Google Patents
Utilizacion de un ligando marcado con especificidad para la molecula de cd4 humana, para la preparacion de un agente de diagnostico destinado al analisis de modelos de migracion y/o distribucion de poblaciones de celulas. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2301716T3 ES2301716T3 ES02804582T ES02804582T ES2301716T3 ES 2301716 T3 ES2301716 T3 ES 2301716T3 ES 02804582 T ES02804582 T ES 02804582T ES 02804582 T ES02804582 T ES 02804582T ES 2301716 T3 ES2301716 T3 ES 2301716T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- human
- cells
- fab
- chosen
- set consisting
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
- A61K41/10—Inactivation or decontamination of a medicinal preparation prior to administration to an animal or a person
- A61K41/13—Inactivation or decontamination of a medicinal preparation prior to administration to an animal or a person by ultrasonic waves
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56966—Animal cells
- G01N33/56972—White blood cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
- G01N2333/70514—CD4
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Rehabilitation Therapy (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Utilización de un ligando marcado con especificidad para la molécula de CD4 humana, escogido entre el conjunto que se compone de fragmentos de anticuerpos escogidos entre el conjunto que se compone de los F(ab'')2, Fab'' y Fab del anticuerpo Max. 16H5, y de fragmentos de anticuerpos recombinantes, escogidos entre el conjunto que se compone de los F(ab'')2, Fab'' y Fab del anticuerpo Max. 16H5, para la preparación de un agente de diagnóstico in vivo destinado al análisis de modelos de migración y/o distribución de determinadas poblaciones de células, que comprenden células que llevan la CD4, en individuos humanos.
Description
Utilización de un ligando marcado con
especificidad para la molécula de CD4 humana, para la preparación de
un agente de diagnóstico destinado al análisis de modelos de
migración y/o distribución de poblaciones de células.
El invento se refiere a la utilización de un
ligando marcado con especificidad para la molécula de CD4 humana,
escogido entre el conjunto que se compone de fragmentos de
anticuerpos escogidos entre el conjunto que se compone de los
F(ab')2, Fab' y Fab del anticuerpo Max. 16H5, y de fragmentos
de anticuerpos recombinantes, escogidos entre el conjunto que se
compone de los F(ab')2, Fab' y Fab del anticuerpo Max. 16H5,
para la preparación de un agente de diagnóstico in vivo
destinado al análisis de modelos de migración y/o distribución de
determinadas poblaciones de células, que comprenden células que
llevan la CD4, en individuos humanos.
La glicoproteína monómera CD4 es la molécula
característica de las superficies celulares de linfocitos T
ayudadores. Ella tiene un peso molecular de 55 kDa y se compone de
una región extracelular, de una parte hidrófoba transmembranosa así
como de una parte citoplasmática. La CD4 humana es expresada no sólo
en linfocitos T ayudadores humanos, sino también, en una densidad
menor, en precursores de linfocitos T en la médula ósea y en el
timo. En el caso de los seres humanos, también los monocitos, los
macrófagos, las células dendríticas y los granulocitos eosinófilos
llevan la molécula de CD4 [Marsh &
Pelchen-Matthews, 1996]. El gen de la CD4 humana
está localizado sobre el brazo corto del cromosoma 12 [véase Isobe
y colaboradores, 1986].
La molécula de CD4 es asignada a la superfamilia
de las inmunoglobulinas debido a sus cuatro dominios extracelulares
[D1 - D4], que son similares a los de las inmunoglobulinas [véase
Maddon y colaboradores, 1985]. El dominio terminal de amino 1 (D1)
posee una estructura similar a la de un dominio variable de una
inmunoglobulina. En común con el dominio 2 (D2), él forma una
estructura rígida con una longitud de 60 Angstrom. Los dominios D1
y D2 están unidos a través de una articulación flexible con los
dominios D3 y D4.
Los ligandos de CD4 naturales más importantes
son moléculas de la clase II del complejo de histocompatibilidad
principal (en inglés "major histocompatibility complex", MHC)
situadas sobre unas denominadas células que presentan antígenos
(APZ de Antigen Präsentierenden Zellen). En este caso se trata de
unas células especializadas del sistema inmunitario, que preparan
estructuras antigénicas y hacen a éstas reconocibles para respuestas
inmunitarias. Los dominios extracelulares D1 y D2 de la molécula de
CD4 se asocian principalmente con regiones no polimorfas de la
cadena 2 de la molécula de la clase II del MHC [véase Clayton y
colaboradores, 1989; Cammarota y colaboradores, 1992].
Posiblemente, también la cadena a2 de la molécula de la clase II del
MHC (MHC-II), es también importante para la
interacción con la CD4 [véase Vignali y colaboradores, 1996].
Las moléculas de CD4 pueden asociarse unas con
otras a través de sus dominios D1, con lo que resultan unos
oligómeros funcionales, que estabilizan al complejo entre el
receptor de células T (TZR de T Zell Rezeptor) y el péptido del MHC
II, y aumentan la eficiencia de la transducción de señales [véase Li
y colaboradores, 1998]. A través de los dominios próximos D3 y D4,
la CD4 puede asociarse también con el complejo entre el TZR y la
CD3 [véase Vignali y colaboradores, 1996]. La molécula de CD4
refuerza la estimulación de las células T, que es específica para
antígenos, durante la interacción del TZR con el
MHC-II que presenta un péptido de antígeno. El
sistema de receptor concomitante de CD4 hace posible, por
consiguiente, no sólo un aumento de la sensibilidad para antígenos,
sino también el mantenimiento de una alta especificidad para
antígenos [véase König y colaboradores,
1996].
1996].
La CD4 participa activamente en la transducción
de señales en los linfocitos T. Su dominio citoplasmático está
asociado por enlaces no covalentes con una
proteína-tirosina cinasa (p56Ick) de la denominada
familia src, que es específica para las células T [véase Veilette y
colaboradores, 1988). La parte próxima del dominio citoplasmático
de CD4 interactúa a través de restos de cisteína con la región del
extremo terminal de N de la p56Ick [véase Turner y colaboradores,
1990].
Otros ligandos naturales de CD4 para la CD4
humana son la gp120 del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH),
la citocina quimiotáctica IL-16 así como ciertas
inmunoglobulinas. Los sitios de fijación para la gp120 y el
MHC-II no son idénticos, pero están situados muy
próximos uno junto a otro y se solapan parcialmente. La gp120 del
VIH se fija predominantemente al dominio D1 de la molécula de CD4
[véase Clayton y colaboradores, 1989]. La infección de células CD4+
(es decir positivas para la CD4) con un VIH conduce a la pérdida de
la expresión de CD4 sobre la superficie celular [véase Hoxie y
colaboradores, 1986a]. De esta manera se restringe la capacidad de
las células infectadas, para interactuar con el
MHC-II de las APZ, y se favorece la progresión de
la enfermedad.
Unas Inflamaciones crónicas y crónicas -
recidivantes aparecen en conexión con muchas enfermedades, en las
que es importante el sistema inmunitario. Diferentes órganos o
respectivamente tejidos pueden ser afectados por inflamaciones
crónicas recidivantes. Al contrario que las inflamaciones agudas, en
los focos de inflamación se acumulan unos tipos de células
fundamentalmente distintos en el aspecto cualitativo. Éstas pueden
ser identificadas con ayuda de moléculas superficiales específicas.
Una de estas moléculas es la molécula de CD4 humana, que es
expresada, entre otros organismos, en linfocitos T ayudadores,
monocitos, macrófagos, células dendríticas y granulocitos
eosinófilos con diferente intensidad. Estas células, en particular
los linfocitos T, constituyen una población esencial de las células
inflamatorias crónicas.
Determinados anticuerpos monoclonales pueden
reconocer a la molécula de CD4 humana de una manera altamente
específica, pueden fijarse a su estructura proteínica y, por
consiguiente, pueden fijarse de una manera altamente específica a
células que expresan la CD4 humana en la inflamación.
En condiciones fisiológicas, estas células
inflamatorias se presentan en un estado inactivo de diferenciación
y siguen unos modelos característicos de migración y/o distribución
en órganos linfáticos primarios y secundarios, así como en la
sangre circulante.
Además, a partir de células que llevan la CD4
humana se pueden desarrollar unas células tumorales, que pueden dar
origen a la génesis de enfermedades tumorales malignas o benignas.
En el caso de determinadas enfermedades tumorales, p.ej. de
determinados linfomas, en tal contexto la expresión de la molécula
de CD4 humana puede permanecer conservada.
La determinación cualitativa y cuantitativa de
células que expresan la CD4 es, por lo tanto, un método de
diagnóstico inmunológico in vitro establecido y consagrado.
Mientras que el análisis por citometría de flujo hace posible una
determinación cuantitativa en una sangre periférica, con
procedimientos inmunohistológicos ex vivo, es decir después
de una biopsia de tejidos sospechosos, se pueden analizar sus
modelos de distribución local.
Sin embargo, ambos métodos no están en situación
de proporcionar una información objetiva acerca de modelos de
migración y/o distribución de las células T ayudadoras en un
organismo vivo o respectivamente acerca de la posible acumulación y
de su magnitud en tejidos y órganos enfermos. Esto tiene las
siguientes causas:
- (1)
- una sangre periférica contiene, con como máximo 5%, una proporción sólo limitadamente representativa de todas las células corporales, que expresan la CD4 humana.
- (2)
- en cada individuo existen unas considerables variabilidades de un día a otro en los números de las células periféricas que expresan la CD4 humana,
- (3)
- los números de las células que expresan la CD4 humana no hacen posible en ningún caso la identificación y la localización de acumulaciones limitadas en el espacio en focos de inflamaciones crónicas o la localización de células degeneradas que expresan la CD4 humana en tumores;
- (4)
- la probabilidad de que una biopsia se encuentre con la zona decisiva para el diagnóstico de un foco de inflamación o de un tumor o de una metástasis, es sólo pequeña;
- (5)
- a partir del material de la biopsia no se pueden sacar conclusiones acerca de la extensión real en el espacio de la zona de la inflamación o del tumor o de la metástasis; y
- (6)
- un control de la evolución o respectivamente de la terapia sólo es posible mediante biopsias repetidas y trae consigo una considerable carga para los afectados.
Becker y colaboradores (1990) describen la
utilización del anticuerpo completo marcado Max.16H5 para el
análisis de modelos de migración y/o distribución de poblaciones de
células, que comprenden células que llevan la CD4 humana, en
individuos humanos.
El documento de patente de los EE. UU. US
6.146.614 describe un procedimiento para la determinación de la
distribución y de la migración de linfocitos en mamíferos mediando
utilización de procedimientos para la generación de imágenes, y la
utilización de estas determinaciones para el diagnóstico de la
evolución de diferentes enfermedades, así como para la vigilancia
de la respuesta a diversas terapias para tales enfermedades y para
la identificación de medicamentos destinados al tratamiento de
estas enfermedades. Los ejemplos del documento US 6.146.614
conciernen a la utilización de anticuerpos monoclonales dirigidos
contra el antígeno de CD4 de ratón. Un ejemplo se refiere a la
utilización de uno de tales anticuerpos para la marcación de células
humanas. Este ejemplo, no obstante, está en contradicción con el
hecho, conocido generalmente, de que no existe ninguna reactividad
cruzada entre la CD4 humana y la CD4 murina. El Ejemplo 7 de la
presente solicitud muestra, por lo tanto, un correspondiente
ejemplo comparativo, a partir del que se desprende manifiestamente
que el anticuerpo descrito en el documento US 6.146.614, dirigido
contra la CD4 murina, no tiene reacciones cruzadas de ningún tipo
con la CD4 humana. El procedimiento descrito en el documento US
6.146.614 no se adecua, por lo tanto, para la determinación del
modelo de distribución y migración de células que llevan la CD4 en
individuos humanos.
A causa de las limitaciones arriba descritas de
los métodos de diagnóstico habituales, existe una necesidad
apremiante de un procedimiento destinado a la determinación no
invasiva de los modelos de migración y/o distribución y de la
acumulación de células inflamatorias y de células tumorales, que
llevan moléculas superficiales de CD4, así como su redistribución o
respectivamente disolución en condiciones terapéuticas (control de
una terapia).
El invento está basado, por lo tanto, en la
misión de superar las desventajas precedentemente descritas del
estado de la técnica. En particular, es una misión del invento poder
determinar los modelos de migración y/o distribución de células que
expresan la CD4 humana en individuos humanos mediando evitación de
medidas invasivas de diagnóstico.
Una misión adicional del invento es determinar
de una manera segura, eficaz y sencilla, los modelos de migración
y/o distribución de células que llevan la CD4 humana en pacientes
con un diagnóstico (por sospecha) de enfermedades inflamatorias
crónicas, de enfermedades infecciosas o de enfermedades tumorales o
la evolución de una terapia inmunosupresora después un trasplante
en individuos humanos.
Una misión adicional del invento consiste en
hacer posible la diferenciación entre focos de inflamaciones
crónicas, como en el caso de enfermedades autoinmunitarias, e
inflamaciones agudas, tales como inflamaciones debidas a
infecciones, que se basan en el reconocimiento de que en materiales
infiltrados de inflamaciones crónicas se presentan más células con
el mencionado antígeno superficial que en materiales infiltrados de
inflamaciones agudas. Así, en la membrana sinovial inflamada
crónicamente en el caso de una artritis reumatoide se pueden
detectar de una manera acrecentada células que expresan la CD4. La
relación de CD4 a CD8 es aquí de 2 a 7 veces mayor en comparación
con la de la sangre periférica [Immunology of rheumatic
diseases.(inmunología de enfermedades reumáticas). Coordinadores de
edición S. Gupta y N. Talal, Plenum Medical Book Company, Nueva
York y Londres, 1985]. Además de esto, la activación específica para
un antígeno de linfocitos T ayudadores tiene como consecuencia un
aumento manifiesto de la expresión superficial de la CD4 [véase
Ridgeway y colaboradores, 1998, J. Immunology 161:
714-720].
Una misión adicional del invento es la de hacer
posibles la localización y la determinación de la extensión en el
espacio y de la intensidad de focos de inflamaciones en el caso de
enfermedades autoinmunitarias, así como de valorar la evolución de
enfermedades autoinmunitarias, o la influencia de medidas
terapéuticas en el caso de enfermedades autoinmunitarias.
Una misión adicional del invento es localizar de
una manera segura, eficaz y sencilla tumores que expresan la CD4
humana, o respectivamente sus metástasis en individuos humanos con
un diagnóstico (por sospecha) de enfermedades malignas y benignas
del sistema hematopoyético, determinar la extensión en el espacio de
tumores que llevan la CD4 humana, o respectivamente de sus
metástasis, y valorar la evolución de enfermedades tumorales
(control de la evolución) y de medidas terapéuticas en el caso de
enfermedades tumorales (control de la terapia).
Conforme al invento, los problemas planteados
por estas misiones se resuelven mediante la utilización de un
ligando marcado con especificidad para la molécula de CD4 humana,
escogido entre el conjunto que se compone de fragmentos de
anticuerpos escogidos entre el conjunto que se compone de los
F(ab')2, Fab' y Fab del anticuerpo Max. 16H5, y de
fragmentos de anticuerpos recombinantes, escogidos entre el conjunto
que se compone de los F(ab')2, Fab' y Fab del anticuerpo
Max. 16H5, para la preparación de un agente de diagnóstico destinado
al análisis de modelos de migración y/o distribución de
determinadas poblaciones de células, que comprenden células que
llevan la CD4 humana, en individuos humanos.
La situación en el espacio o respectivamente la
disposición de células que llevan la CD4 humana en poblaciones de
células en el organismo humano, se designa, en el sentido del
presente invento, como modelo de distribución. La situación o la
disposición de células que expresan la CD4 humana se refiere a su
distribución en los tejidos propios o en tejidos ajenos y
materiales sintéticos introducidos, o respectivamente a su
disposición junto a las interfases de los mencionados tejidos
ajenos y de materiales sintéticos. La distribución de partículas
que llevan la CD4 humana resulta después de su administración en el
organismo humano. Los modelos de distribución se pueden determinar
tanto para todo el organismo como también para ciertas partes del
organismo.
Para las partículas que llevan la CD4 humana, la
molécula de CD4 humana se puede producir en sistemas recombinantes
de producción (recCD4). Con los recCD4 se pueden revestir entonces
unos soportes adecuados de diferentes tamaños. Los materiales de
soporte pueden ser partículas de materiales sintéticos, pero también
unas estructuras, que están rodeadas por membranas y que contienen
en su interior unas sustancias terapéuticamente activas. Así, la
molécula de CD4 humana se puede colocar como una estructura de
reconocimiento (en inglés "guide", de guía) junto a soportes o
partículas o vesículas, tales como p.ej. liposomas, a fin de
conducir a éstos, p.ej. llenos con sustancias farmacológicas, junto
a células diana, que por su parte llevan moléculas que interactúan
con la CD4. En los casos de estas moléculas se trata de unos
miembros de los antígenos de la clase II del MHC (en el caso de
seres humanos, antígenos de la clase II de HLA, es decir antígenos
de leucocitos humanos), que son expresados en diferentes células
corporales, tales como p.ej. monocitos, macrófagos, células
dendríticas, células B, y que pueden ser regulados en sentido
ascendente en una serie de células adicionales mediando la acción
de factores del medio de entorno, tales como p.ej. determinadas
citocinas. Puesto que la regulación en sentido ascendente de las
moléculas de la clase II del MHC se pone en conexión con procesos de
patogénesis, se establece la posibilidad de dirigir de una manera
guiada por la CD4 humana unas sustancias farmacológicamente activas
hacia determinadas zonas de tejidos. Las partículas que llevan la
CD4 se pueden emplear, por ejemplo, para el descubrimiento de
estructuras complementarias, p.ej. para la proteína superficial
gp120 del VIH, y confieren un enriquecimiento local de sustancias
activas antivirales. Sin embargo, también se puede concebir el
recurso de fijar anticuerpos anti-CD4 o fragmentos
de tales anticuerpos como guías moleculares hacia partículas,
moléculas o vesículas, que luego se dirigen hacia zonas de tejidos
que llevan la
CD4.
CD4.
Por un modelo de migración de las células o
respectivamente de las partículas, que llevan la CD4 humana, en el
sentido del presente invento se entiende el movimiento de las
células o partículas que llevan la CD4 humana en el organismo
humano, incluyendo a sus tejidos y a la sangre periférica. La
migración de las células o partículas que llevan la CD4 humana se
puede determinar para todo el organismo o para determinadas partes u
órganos del mismo.
Las células que expresan la CD4 humana en el
sentido del presente invento pueden comprender monocitos,
macrófagos, células dendríticas y células de Langerhans,
granulocitos eosinófilos y linfocitos T ayudadores. En determinados
casos, estas células están contenidas en la composición de
materiales infiltrados inflamatorios en el caso de enfermedades
autoinmunitarias, enfermedades infecciosas, enfermedades malignas o
en el caso de trasplantes o respectivamente implantaciones. En
otros casos, estas células están modificadas (degeneradas) en su
regulación de tal manera que forman tumores. Otros casos conciernen
a complicaciones después de un trasplante de órganos o tejidos, o
después de una implantación de materiales sustitutivos sintéticos.
Se piensa en complicaciones que pueden conducir a la pérdida del
material trasplantado o implantado (reacciones inmunológicas de
rechazo).
Una sustancia o un compuesto, que puede
interactuar específicamente con células que llevan la CD4, se
designa en el sentido de la presente divulgación como un ligando.
Un ligando puede interactuar p.ej. con determinadas moléculas, que
son expresadas sobre la superficie de células o que están fijadas
sobre la superficie de partículas, en este caso con moléculas de
CD4. El ligando puede ser cualquier sustancia o cualquier compuesto
arbitraria/o con la propiedad de interactuar exclusivamente o de
manera ampliamente predominante con la molécula superficial de CD4,
y de fijarse a ésta.
El agente de diagnóstico utilizable conforme al
invento comprende un ligando marcado, altamente afín, con
especificidad para la molécula de CD4 humana, escogido entre el
conjunto que se compone de fragmentos de anticuerpos escogidos
entre el conjunto que se compone de los F(ab')2, Fab' y Fab
del anticuerpo Max. 16H5, y de fragmentos de anticuerpos
recombinantes, escogidos entre el conjunto que se compone de los
F(ab')2, Fab' y Fab del anticuerpo Max. 16H5.
De manera especialmente preferida el ligando
marcado reconoce a un epítopo en el dominio D1 de la molécula de
CD4 humana.
Además, los fragmentos de anticuerpos o los
fragmentos de anticuerpos recombinantes pueden reconocer
preferiblemente a una de las secuencias mostradas en desde SEQ ID
NO. 1 hasta SEQ ID NO. 6 y fijarse a ella. De manera especialmente
preferida, los fragmentos de anticuerpos o los fragmentos de
anticuerpos recombinantes reconocen al epítopo de conformación
(véase la Figura 2) de la CD4 humana y se fijan a ella. Los
fragmentos de anticuerpos o los fragmentos de anticuerpos
recombinantes son anticuerpos anti-CD4.
Hay anticuerpos policlonales o monoclonales, en
particular el anticuerpo monoclonal Max. 16H5. Todos los anticuerpos
pueden ser, no obstante, inmunógenos y después de su administración
a un organismo humano pueden inducir reacciones inmunológicas
dirigidas contra ellos mismos. Los ligandos más pequeños son menos
inmunógenos.
El invento utiliza ligandos más pequeños, a
saber fragmentos de anticuerpos, del anticuerpo monoclonal Max.
16H5, escogidos entre el conjunto que se compone de los
F(ab')_{2}, Fab' y Fab.
Un ejemplo de un ligando más pequeño es el OKT3
(Orthoklon). El Orthoklon es un anticuerpo monoclonal
anti-CD3 humana, que es formado por células del
hibridoma de un ratón, y que es utilizado por la entidad Ortho
Pharmaceutical, por ejemplo, para el tratamiento de reacciones
inmunológicas de rechazo después de trasplantes. Otros anticuerpos
monoclonales o fragmentos de anticuerpos monoclonales, por ejemplo,
dirigidos contra la CD4 humana, se pueden producir de un modo en sí
conocido mediando utilización de la técnica del hibridoma.
Otros ejemplos de anticuerpos o fragmentos de
anticuerpos, que se producen con métodos recombinantes en
microorganismos, tales como anticuerpos monocatenarios, por ejemplo
el Fv monocatenario = single chain Fv (scFv), estructuras similares
a anticuerpos, por ejemplo, minicuerpos, y otros fragmentos, que se
pueden fijar específicamente a una molécula superficial, tal como
la CD4 humana (human-CD4), por ejemplo, anticuerpos
recombinantes.
Además, como ligando hay también proteínas,
glicoproteínas, péptidos, compuestos miméticos de péptidos,
compuestos de hidrocarburos alifáticos y cíclicos y aptámeros, que
se fijan con una alta especificidad a una molécula superficial, tal
como de CD4 humana. El nombre de compuesto mimético de péptido
designa a un compuesto, que no es ningún péptido, pero que se
parece a éste en lo que se refiere a propiedades importantes, tales
como el tamaño y la distribución de cargas eléctricas. Un aptámero
es una estructura de ADN o ARN con una alta afinidad para las
mencionadas moléculas superficiales, p.ej. la CD4 humana.
La marcación del ligando se puede efectuar
mediante cualquier molécula de marcación, que haga posible la
localización en el tiempo y en el espacio del ligando marcado, con
procedimientos para la generación de imágenes en la medicina.
El ligando marcado se escoge preferiblemente
entre el conjunto que se compone de emisores de rayos gamma,
emisores de positrones, un material magnético, un material de
contraste de densidades y sus mezclas.
El ligando marcado puede ser un emisor de rayos
gamma, que comprende uno o varios radioisótopos, escogidos entre el
conjunto que se compone de indio-111,
tecnecio-99m, tecnecio-99,
yodo-132, otros radioisótopos para procedimientos
para la generación de imágenes en la medicina, y sus mezclas. El
radioisótopo es de manera especialmente preferida
tecnecio-99m o indio-111.
En otra forma de realización preferida, el
ligando marcado es un emisor de positrones, que comprende uno o
varios isótopos, escogidos entre el conjunto que se compone de
flúor-18, carbono-11,
yodo-124, otros isótopos para procedimientos para
la generación de imágenes en la medicina, y sus mezclas.
El ligando marcado puede comprender, en una
forma de realización adicional preferida, un material magnético,
escogido entre el conjunto que se compone de sustancias
paramagnéticas, tales como gadolinio, sustancias
superparamagnéticas, partículas de óxidos de hierro hidratados,
otros materiales para procedimientos para la generación de imágenes
en la medicina, y sus mezclas.
El ligando marcado puede comprender también un
material de contraste de densidades.
Las células que llevan la CD4 humana se escogen
preferiblemente entre el conjunto que se compone de linfocitos T y
B, monocitos, macrófagos, células dendríticas y células de
Langerhans y granulocitos eosinófilos, en particular los linfocitos
se pueden escoger entre un conjunto o una población, que comprende
células no linfocitarias.
El análisis del modelo de migración y/o
distribución de poblaciones de células, que comprenden células que
llevan la CD4 humana, se puede efectuar mediante la interacción
específica del agente de diagnóstico con células que llevan la CD4
humana, después de una administración del ligando marcado a
individuos humanos. La interacción específica del agente de
diagnóstico in vivo da como resultado células marcadas. Estas
células participan decisivamente en el material infiltrado de la
inflamación, especialmente en el caso de inflamaciones crónicas.
Alternativamente, el análisis del modelo de
migración y distribución de poblaciones de células, que comprenden
células que llevan la CD4 humana, se puede efectuar fuera de un
organismo humano mediante una interacción específica con
poblaciones de células, que proceden de un organismo humano y que
contienen células que llevan la CD4. También en este caso la
interacción específica da como resultado células marcadas, que son
introducidas en un organismo. Una marcación de células fuera del
cuerpo para su utilización en el mismo paciente, es absolutamente
usual en la medicina nuclear. Sin embargo, hasta ahora las células
son marcadas de esta manera directamente con isótopos diferentes.
Esto tiene o bien motivos técnicos (es necesaria una alta
concentración para la marcación), esto sirve para la protección de
la salud del paciente (la radiactividad no fijada es eliminada antes
de la devolución al paciente) y/o motivos económicos (los productos
valiosos se utilizan eficazmente, en unos volúmenes muy pequeños,
para la marcación.
La marcación fuera del organismo humano se puede
efectuar en este caso de la siguiente manera: Se extrae sangre del
paciente. A partir de esta sangre se extraen y preparan unas células
y fuera del cuerpo éstas se incuban con ligandos marcados con
isótopos, p.ej. anticuerpos anti-CD4. Después de
esto se elimina el ligando no fijado y la preparación purificada de
células se inyecta de nuevo al mismo paciente. Luego, con los
procedimientos conocidos y descritos (una cámara de rayos gamma o
una sonda detectora), se vigila la distribución de las células
marcadas en el cuerpo. Es interesante la utilización de este
procedimiento, por ejemplo, cuando se inyectan células marcadas
durante la operación quirúrgica en tumores o en el entorno
circundante de tumores. Ellas buscan entonces los vasos linfáticos
efluentes y los nódulos linfáticos que están dispuestos detrás. De
esta manera, se consigue comprobar con una sonda detectora a modo de
un lapicero, todavía durante la operación quirúrgica, a qué nódulos
linfáticos han afluido preferiblemente estas células. Estos nódulos
linfáticos particularmente frecuentados son también el lugar
probable de la metastatización, de tal manera que el cirujano puede
eliminarlos inmediatamente.
Mediante la utilización conforme al invento del
agente de diagnóstico, con ayuda de procedimientos para la
generación de imágenes en la medicina, se pueden determinar en el
organismo los modelos de migración y/o distribución de células, que
llevan moléculas superficiales de CD4. La posibilidad de la
representación visual de modelos de migración y/o distribución en
condiciones normales y patológicas permite determinar el grado y la
progresión de enfermedades, en las que dichas células son
importantes desde el punto de vista clínico.
En particular, mediante un análisis de los
modelos de migración y/o distribución de células que llevan la CD4
humana, con ayuda de la utilización conforme al invento del agente
de diagnóstico, se localizan focos de inflamaciones crónicas en el
organismo humano y se diferencian con respecto de inflamaciones
agudas. El análisis de modelos de migración y/o distribución de
células que llevan la CD4 humana, se adecua además para el
esclarecimiento de diagnósticos por sospecha, para la vigilancia (en
inglés "monitoring") de la evolución clínica y para el control
del éxito de terapias anti-inflamatorias.
Otro sector de aplicación para el análisis de
modelos de migración y/o distribución de células que llevan la CD4
humana es el descubrimiento de células malignas (células tumorales),
en las que son expresadas las mencionadas moléculas superficiales y
que interactúan con el agente de diagnóstico, de tal manera que
resultan células tumorales marcadas. En particular, el análisis de
modelos de migración y/o distribución de células que llevan la CD4
humana puede servir para la localización de tumores del sistema
hematopoyético o respectivamente de sus metástasis, siempre y
cuando que en éstos sea expresada la mencionada molécula
superficial.
Por lo demás, con ayuda del agente de
diagnóstico se puede llevar a cabo una denominada inmunoterapia
radiológica (RIT). Para la RIT los radioisótopos de diagnóstico se
intercambian por los que tienen una fuerte radiación \alpha y/o
\beta, tales como p.ej. los Re-186,
Re-188, J-131, Y-90,
Sm-153 como emisores de rayos \beta y
Bi-213 como emisor de rayos \alpha. En este caso,
pasan a utilizarse también anticuerpos derivatizados de igual
manera, sus fragmentos o respectivamente ligandos. Para las
moléculas derivatizadas con DTPA, éstos son p.ej.
In-111 e Y-90. También los
J-123 y J-131 así como los
Tc-99 y Re-188 representan otros
pares de isótopos para el diagnóstico y la terapia. La radiación
\alpha y/o \beta emitida por los radioisótopos utilizados
terapéuticamente, destruye a las células que se encuentran en el
entorno directo del agente terapéutico inmunológico radiológico o
respectivamente que fueron marcadas por éste. De esta manera se
pueden aniquilar de manera selectiva células tumorales marcadas o
respectivamente células inflamatorias dañinas u otras células
indeseadas. En este contexto es ventajoso el hecho de que no sólo la
célula, que lleva la molécula de CD4, sino también las células
directamente circundantes son dañadas o destruidas. El tejido que se
encuentra a mayor distancia no es perjudicado.
Los agentes de diagnóstico conformes al invento
se pueden emplear, además de esto, para la representación y la
cuantificación de células inflamatorias en el caso de enfermedades
infecciosas, p.ej. enfermedades provocadas por virus. De esta
manera resultan posibles valoraciones de estadios, controles de la
evolución y de la terapia, p.ej. de hinchamientos de los nódulos
linfáticos, de determinadas enfermedades tumorales y una vigilancia
de terapias antivirales.
En particular, la utilización conforme al
invento se adecua para el análisis de modelos de migración y/o
distribución de determinadas poblaciones de células en individuos
humanos en el caso de enfermedades o de diagnósticos por sospecha
para enfermedades de los siguientes círculos de formas:
Enfermedades autoinmunitarias, enfermedades
infecciosas, enfermedades malignas y benignas del sistema
hematopoyético, enfermedades infecciosas o enfermedades para las
que se supone una importancia patogenética de linfocitos T que
llevan la CD4 o que llevan la CD8.
Las enfermedades autoinmunitarias pueden ser la
artritis reumatoide, la esclerosis múltiple, el lupus eritematoso
sistémico, la psoriasis o una enfermedad inflamatoria de los
intestinos, tal como la enfermedad de Crohn o la colitis ulcerosa.
Las enfermedades malignas o benignas pueden ser enfermedades del
sistema hematopoyético, tales como un mieloma, un linfoma o una
leucemia, o tumores sólidos, tales como un melanoma, el carcinoma
de células renales, un carcinoma de ovario o un carcinoma de los
pulmones. Pueden ser enfermedades infecciosas todas las
enfermedades que son provocadas por bacterias o virus, por ejemplo,
el VIH.
La utilización conforme al invento del ligando
marcado como agente de diagnóstico puede servir también para la
determinación de modelos de migración y/o distribución de células
que llevan la CD4, en presencia de uno o varios materiales
trasplantados en un individuo humano, tales como células, tejidos u
órganos y/o materiales implantados, tales como un material
sustitutivo de tejidos o vasos, elementos de depósito (de liberación
retardada), bombas o
filtros.
filtros.
La determinación de los modelos de migración y/o
distribución se lleva a cabo preferiblemente mediante procedimientos
para la generación de imágenes en la medicina, tales como la
formación radiológica de imágenes, procedimientos de resonancia
magnética o eventualmente procedimientos para la generación de
imágenes por tomografía apoyada en ordenadores. La formación de
imágenes se puede componer de fotografías o bien individuales o en
serie. Ella se puede efectuar mediante una fotografía total o
mediante fotografías parciales del individuo (exploración, en
inglés scanning).
El modelo de migración y/o distribución de un
ligando que está marcado con un emisor de rayos gamma, se puede
determinar con una cámara de rayos gamma o con una cámara para la
tomografía de emisión de fotones individuales (en inglés "single
photon emission computed tomography", SPECT). Los emisores de
positrones se pueden determinar p.ej. mediante una tomografía de
emisión de positrones (en inglés "positron emission
tomography", PET). Los modelos de migración y/o distribución de
partículas magnéticas en el organismo se pueden determinar mediante
una tomografía de resonancia magnética (MRT del inglés magnetic
resonance tomography) o una formación de imágenes por resonancia
magnética (MRI del inglés magnetic resonance imaging). Se conocen la
utilización de estos procedimientos médicos de formación de
imágenes y el trato con éstos.
Preferiblemente, el procedimiento para la
generación de imágenes en la medicina es un análisis (una
exploración del inglés scan) de cuerpo entero. El invento incluye
también exploraciones de partes individuales del cuerpo o de
órganos. Las exploraciones pueden llevarse a cabo durante minutos,
horas, días o semanas, o durante más largo tiempo, después de una
administración del ligando marcado. El momento exacto depende de
diferentes factores, p.ej. del tipo y de la cantidad del ligando
marcado, del comportamiento de la células o partículas que llevan
la CD4 humana, o de las evoluciones de las enfermedades. El factor
de tiempo exacto se puede determinar con ayuda de algoritmos de
optimización, que son aplicados usualmente por un personal
especializado con experiencia. El procedimiento para la generación
de imágenes en la medicina se finaliza con exploraciones
individuales o en serie.
Mediante la utilización conforme al invento del
ligando marcado como agente de diagnóstico para el análisis de
modelos de migración y/o distribución de células que llevan la CD4,
se puede determinar además la respuesta terapéutica o la eficacia
de la terapia en un individuo humano, que sufre de una o varias de
las mencionadas enfermedades. El individuo es tratado con una
terapia para la(s) correspondiente(s)
enfermedad(es). El modelo de migración y/o distribución de
células que llevan la CD4 es determinado en el individuo tratado
como reacción a la terapia con procedimientos para la generación de
imágenes en la medicina. Esto se efectúa comprobando si la terapia
modifica los modelos de migración y/o distribución de células que
expresan la CD4 humana.
Mediante la utilización conforme al invento del
ligando marcado como agente de diagnóstico para el análisis de
modelos de migración y/o distribución de células que llevan la CD4,
se puede estimar también el potencial de un compuesto o de un
medicamento destinado a la modificación de los modelos de migración
y/o distribución de células que llevan la CD4 humana en el
organismo humano, determinándose con ayuda de procedimientos para
la generación de imágenes en la medicina, tal como se ha descrito
precedentemente, si el compuesto o el medicamento modifica los
modelos de migración y/o distribución de las células que expresan la
CD4 humana en el organismo humano. Los modelos de migración y/o
distribución están modificados, cuando ellos se desvían de un modelo
normalizado de migración y/o distribución.
La utilización conforme al invento del ligando
marcado como agente de diagnóstico para el análisis de modelos de
migración y/o distribución de células que llevan la CD4, puede
servir también para la identificación de medicamentos destinados al
tratamiento de enfermedades autoinmunitarias, enfermedades tumorales
o enfermedades infecciosas, determinándose si el compuesto o el
medicamento modifica los modelos de migración y/o distribución de
células que expresan la CD4 humana en el organismo humano. Los
modelos de migración y/o distribución, obtenidos mediante la
administración del compuesto o del medicamento, se comparan con los
existentes en individuos humanos, que no sufren una de las
enfermedades antes mencionadas.
La utilización conforme al invento del ligando
marcado como agente de diagnóstico para el análisis de modelos de
migración y/o distribución de células que llevan la CD4, permite
también la determinación de la realización óptima de una terapia
inmunosupresora después de un trasplante de células, tejidos u
órganos, que no son autólogas/os o potencialmente inmunógenos por
otros motivos para el receptor, así como después de una implantación
de materiales sintéticos y semisintéticos para el reemplazo o para
la ayuda de tejidos y órganos y de sus funciones, determinándose
con ayuda de procedimientos para la generación de imágenes en la
medicina, tal como se han descrito precedentemente, si los modelos
de migración y/o distribución de células que llevan la CD4 humana se
han modificado de tal manera que se pueda sacar una conclusión
acerca de la existencia de una reacción inflamatoria o
respectivamente de una reacción inmunológica asociada con el
material trasplantado/implantado. Esta conclusión se puede sacar o
bien a través de una desviación de dichos modelos de migración y/o
distribución con respecto de modelos normalizados o a través de una
desviación de modelos, que se habían determinado en un momento
anterior en el mencionado individuo.
Otro objeto del presente invento es una
composición, que comprende un ligando marcado con especificidad para
la molécula de CD4, escogido entre el conjunto que se compone de
fragmentos de anticuerpos escogidos entre el conjunto que se
compone de los F(ab')2, Fab' y Fab del anticuerpo Max. 16H5,
y de fragmentos de anticuerpos recombinantes, escogidos entre el
conjunto que se compone de los F(ab')2, Fab' y Fab del
anticuerpo Max. 16H5, y células o partículas que llevan la CD4.
Preferiblemente, las células o partículas que llevan la CD4 son
células o partículas que llevan la CD4 humana.
De manera preferida, la composición es un agente
terapéutico o de diagnóstico, de manera especialmente preferida la
composición es un agente de diagnóstico para la determinación de los
modelos de migración y/o distribución de células o partículas que
llevan la CD4 en un individuo, preferiblemente en un individuo
humano.
El ligando marcado y las células que llevan la
CD4 son tal como se han descrito precedentemente. Las partículas se
escogen preferiblemente entre partículas esféricas de diferentes
materiales. Las partículas pueden ser, por ejemplo, liposomas. Las
partículas que llevan la CD4 pueden interactuar con estructuras
complementarias, p.ej. sobre células corporales, bacterias o virus,
marcar a éstas/os, o transportar sustancias activas a su
proximidad. Las partículas pueden contener también un medicamento,
preferiblemente un agente de diagnóstico o un agente
terapéutico.
La composición conforme al invento, en
particular el agente de diagnóstico, se adecua para la determinación
de la migración de células que expresan la CD4 humana, o
respectivamente de partículas sintéticas en individuos humanos.
Para esta finalidad, las células que llevan la CD4, tales como p.ej.
células inflamatorias, o partículas con los ligandos marcados, se
incuban de tal manera que se obtenga una composición conforme al
invento, que comprende células o partículas marcadas. Esta
composición, en particular el agente de diagnóstico, que comprende
células o partículas marcadas, se puede administrar a un paciente, y
se puede determinar su modelo de migración y/o distribución
mediante procedimientos para la generación de imágenes en la
medicina, tal como se han descrito precedentemente.
La composición conforme al invento, en
particular el agente de diagnóstico, se puede preparar mediante
puesta en contacto del ligando marcado, escogido entre el conjunto
que se compone de fragmentos de anticuerpos escogidos entre el
conjunto que se compone de los F(ab')2, Fab' y Fab del
anticuerpo Max. 16H5, y de fragmentos de anticuerpos recombinantes,
escogidos entre el conjunto que se compone de los F(ab')2,
Fab' y Fab del anticuerpo Max. 16H5, con las células y/o partículas
que llevan la CD4. Las células que llevan la CD4 pueden proceder o
bien del mismo individuo humano, en el que se han de determinar los
modelos de migración y/o distribución de las células que llevan la
CD4, o de otro individuo humano distinto. La preparación de la
composición, en particular del agente de diagnóstico, se puede
llevar a cabo in vitro de tal manera que un ligando marcado
interactúe específicamente con células o partículas que llevan la
CD4, con lo que resultan células o partículas que llevan la CD4
humana. Cuando la composición conforme al invento comprende células
que llevan la CD4, ventajosamente las células que llevan la CD4
humana no tienen que ser separadas ni aisladas para la marcación
específica con el ligando. Ellas se pueden presentar por ejemplo en
una población celular. Una tal población celular se puede incubar,
para la marcación de las células que llevan la CD4 humana, con el
ligando marcado. Por ejemplo, una sangre periférica se puede
incubar con el ligando marcado, con lo que se obtiene un agente de
diagnóstico conforme al invento. El ligando marcado interactúa con
las células o partículas que llevan la CD4 humana, de tal manera
que resultan células o partículas marcadas específicamente. El
término interactuar significa en este caso p.ej. fijar, asociar,
formar complejos o conjugar.
La administración del ligando marcado a un
individuo humano se puede llevar a cabo con todos los métodos, que
hacen posible la interacción específica de éste con células o
partículas que llevan la CD4 humana en el organismo humano,
resultando o formándose células o partículas marcadas que llevan la
CD4 humana. Los métodos comprenden una inyección, una infusión, una
introducción en elementos de depósito, una implantación, una
ingestión por vía oral y la administración por vía rectal, así como
la aplicación local. El método de administración preferido es la
inyección, que se puede efectuar p.ej. por vía intravenosa,
intradérmica, subcutánea, intramuscular o intraperitoneal. En
determinados casos, se aplican métodos de administración múltiples o
combinados. El ligando marcado se puede presentar en una forma
disuelta o coloidal, siendo adecuados los líquidos de vehículo para
una administración a organismos humanos, tales como p.ej. agua o una
solución salina fisiológica para una inyección.
El agente de diagnóstico conforme al invento se
puede utilizar en una dosis, que se sitúa preferiblemente entre
0,01 mg/kg y 7 mg/kg de peso corporal. En el caso de que el ligando
sea un anticuerpo, la dosis se sitúa preferiblemente entre 0,2
mg/investigación y 7 mg/investigación o respectivamente entre 0,003
mg/kg y 0,1 mg/kg de peso corporal. La cantidad de la radiactividad
necesaria es determinada por el isótopo utilizado y puede ser
determinada por un personal especializado con experiencia. Cuando el
ligando está marcado con un isótopo radiactivo, la actividad
utilizada puede situarse entre 1,5 y 10,0 mCi por cada dosis
individual en el caso del indio-111, entre 10 y 30
mCi por cada dosis individual en el caso del
tecnecio-99, entre 5 y 10 mCi por cada dosis
individual en el caso del yodo-123, entre 5 y 10 mCi
por cada dosis individual en el caso del yodo-124,
entre 10 y 20 mCi mCi por cada dosis individual en el caso del
flúor-18 y entre 20 y 30 mCi por cada dosis
individual en el caso del carbono-11.
Cuando el agente de diagnóstico comprende
partículas que llevan la CD4 humana, éste se puede preparar in
vitro de tal manera que un ligando marcado, tal como se ha
descrito precedentemente, pueda interactuar específicamente con las
partículas, con lo que se obtiene un agente de diagnóstico conforme
al invento, que comprende partículas que llevan la CD4 humana.
La administración de las partículas marcadas,
que llevan la CD4 humana, al organismo humano se puede efectuar
mediante diversos métodos, tal como se han descrito precedentemente
en lo que respecta al agente de diagnóstico conforme al invento,
que comprende células que llevan la CD4, y ligandos marcados.
La determinación de los modelos de migración y/o
distribución de la composición conforme al invento, en particular
del agente de diagnóstico conforme al invento, se puede emplear
ventajosamente en los mismos sectores de aplicación que se han
descrito precedentemente en lo que respecta a la utilización
conforme al invento de los ligandos marcados con especificidad para
la molécula de CD4 humana.
En un aspecto adicional, la presente divulgación
se refiere a un procedimiento para la determinación del grado y de
la progresión de enfermedades, en las que son importantes desde el
punto de vista clínico las células que llevan la CD4 humana, y que
comprende las etapas de
a) poner a disposición un análisis in
vivo del modelo de migración y/o distribución de células que
llevan la CD4 humana en un individuo,
b) poner a disposición un análisis in
vivo del modelo de migración y/o distribución de células que
llevan la CD4 humana en un individuo y
c) determinar las desviaciones de los análisis
puestos a disposición en la etapa a) y en la etapa b), con lo que
se determinan el grado y la progresión de la enfermedad.
El análisis puesto a disposición en la etapa a)
y en la etapa b) se puede obtener preferiblemente mediante la
administración de un ligando marcado o del agente de diagnóstico
conforme al invento a un individuo, tal como se ha descrito
precedentemente, y mediante la determinación del modelo de migración
y/o distribución de células que llevan la CD4 o del agente de
diagnóstico en un individuo, con procedimientos para la generación
de imágenes en la medicina, tal como se ha descrito asimismo
anteriormente.
El análisis puesto a disposición en la etapa a),
es preferiblemente de un individuo humano enfermo. La enfermedad se
escoge preferiblemente entre el conjunto que se compone de
enfermedades autoinmunitarias, enfermedades tumorales, enfermedades
infecciosas y crisis por rechazos después de trasplantes, tal como
se han descrito precedentemente.
El análisis clásico en la etapa b) es
preferiblemente el análisis del modelo de migración y/o distribución
de células que llevan la CD4 humana en un individuo no enfermo.
El análisis clásico en la etapa b) es
preferiblemente de un modelo de migración y/o distribución de un
individuo, que se obtiene a partir de un análisis precedente del
mismo individuo humano.
En la etapa a) se puede poner a disposición
también el análisis del modelo de migración y/o distribución de
células que llevan la CD4 humana en un individuo, que se había
sometido adicionalmente a una terapia dirigida contra la
enfermedad. La terapia consiste preferiblemente en la administración
de un compuesto o de un medicamento. La respuesta del individuo a
la terapia está caracterizada porque, con procedimientos para la
generación de imágenes en la medicina, se determina si la terapia
modifica los modelos de migración y/o distribución de células que
llevan la CD4 humana. Preferiblemente, estos modelos se comparan con
los del individuo enfermo, por ejemplo antes del comienzo de la
terapia o en un momento temprano de la terapia, o con los de
individuos no enfermos.
Seguidamente se ilustra el invento con ayuda de
Figuras y Ejemplos.
\vskip1.000000\baselineskip
La Figura 1 muestra
borrones-puntos (en inglés
dot-blots) de transferencia de una coloración
específica de linfocitos T ayudadores murinos y humanos. Los
borrones-puntos representan las siguientes
coloraciones dobles: A. Células de ratón: CD3 murina/CD4 murina (GK
1,5); B. Células humanas: CD3 humana/CD4 humana (Max. 16H5); C.
Células de ratón: CD3 murina/CD4 humana (Max. 16H5); D. células
humanas: CD3 humana/CD4 murina (CK 1.5).
La Figura 2 muestra la representación del
isótopo de conformación de la CD4 humana en el modelo de
casquete.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
1
El Ejemplo describe la producción y la
purificación de un anticuerpo monoclonal de ratón con especificidad
para la CD4 humana, así como su disociación enzimática en fragmentos
Fab'.
El anticuerpo monoclonal Max. 16H5 reconoce a un
epítopo en el dominio D1 de la CD4 humana. La inmunoglobulina
(IgG1) se aisló a partir de materiales sobrenadantes de un hibridoma
mediante una cromatografía por afinidad para la proteína A. El
material eluido de la columna con proteína A se neutralizó, se
dializó frente a una PBS, y la concentración de inmunoglobulina se
ajustó a 1 mg/ml. La identidad y la especificidad del anticuerpo
monoclonal se comprobaron mediante una electroforesis en gel con SDS
(dodecil-sulfato de sodio) mediando utilización de
la IgG1 de ratón como testigo, y se detectó en el borrón de
transferencia Western con una CD4 humana recombinante. La fijación
a una CD4 humana expresada naturalmente (bioactividad). se comprobó
mediante una citometría de flujo pasante (FACS) mediando
utilización de un aparato FACScan (de
Becton-Dickinson). Como células indicadoras
sirvieron unas células mononucleares periféricas, humanas,
conservadas criogénicamente (PMBZ), que contenían una proporción
(individualmente diferente) de linfocitos T ayudadores, que expresan
la CD4 humana. Éstos, después de una descongelación, se incubaron
con un anticuerpo anti-CD4 humana, se lavaron y se
determinó cuantitativamente la IgG de ratón fijada con fragmentos
Fab2 de una inmunoglobulina de cabra anti-ratón
(DAKO F 0479), marcados por fluorescencia (FITC), en el
FACScan.
La IgG anti-CD4 total se digirió
con papaína para dar fragmentos Fab' y Fc. La disociación
enzimática se interrumpió correspondientemente a unos períodos de
tiempo de reacción optimizados previamente, y la mezcla de reacción
se fraccionó mediante una cromatografía en columna en presencia de
la proteína A. Los fragmentos Fc se fijan en este caso a la
proteína A y en el material eluido aparecen predominantemente los
fragmentos Fab'. El tamaño (aproximadamente de 50 kD) y la
proporción (aproximadamente de 90%) de la fracción Fab' eluida se
determinaron mediante una electroforesis en gel con SDS. La
bioactividad de la fracción Fab' de un anti CD4 humana, es decir su
capacidad de fijarse selectivamente a una CD4 humana expresada
naturalmente, se determinó cuantitativamente mediante análisis con
un FACS. Para ello PBMZ humanas se incubaron consecutivamente con
fragmentos Fab' y con una inmunoglobulina de cabra
anti-ratón marcada con FITC, y se analizaron en el
citómetro de flujo las células que expresan la CD4 humana.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
2
El Ejemplo describe la derivatización de
fragmentos Fab' de un anti-CD4 humana con un agente
formador de quelatos.
El Fab' de un anti-CD4 humana se
hace reaccionar en un tampón de NaHCO_{3} 0,1 M a través de una
reacción de un anhídrido con el ácido
dietilen-triamina-pentaacético
cíclico (cDTPA). El derivado con DTPA del Fab' se transfiere luego
a un tampón de acetato de sodio 0,5 M de pH 5,4, se enriquece a
través de un filtro de exclusión de 10 kD y se purifica por medio
de una cromatografía con exclusión de tamaños. Unas partes alícuotas
de los fragmentos derivatizados se ajustan a una concentración de
proteína comprendida entre 0,5 y 1 mg/ml y se almacenan hasta la
marcación radioquímica a + 4ºC.
El agente de diagnóstico radiológico se preparó
mediante una marcación con indio-111 del derivado
con DTPA del Fab' de un anti-CD4 humana (período de
tiempo de semidesintegración: 2,6 días, radiación gamma de energía
mediana de aproximadamente 247 keV) inmediatamente antes de una
inyección. Para ello, se incubaron aproximadamente 10 g del
fragmento derivatizado con DTPA con 300 Ci de cloruro de
indio-111 durante 30 min a la temperatura ambiente.
El cloruro de indio libre se separa a través de columnas con
PD-10 con respecto del agente de diagnóstico
radiológico (Fab' de un anti-CD4 humana marcado con
indio-111).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
3
El Ejemplo demuestra que no se diferencian ni la
especificidad ni la bioactividad de un Fab' de un
anti-CD4 del Ejemplo 1 y de un Fab' de un
anti-CD4-DTPA conjugado con DTPA del
Ejemplo 2.
Unas células indicadoras se incubaron con unas
concentraciones, que aumentaban escalonadamente, del Fab' o
respectivamente del Fab' de un anti-CD4 humana
derivatizado con DTPA y los ligandos no fijados se separaron por
lavado con una solución de cloruro de sodio tamponada con fosfato
(PBS). Los ligandos fijados a las células indicadoras (PBMZ
humanas) se incubaron con fragmentos Fab2 de una inmunoglobulina de
cabra anti-ratón (DAKOF0479) marcados por
fluorescencia (FITC), se lavaron de nuevo y se determinó
cuantitativamente en el FACS la fluorescencia de las células que
expresan la CD4 humana.
La especificidad de los fragmentos Fab' de un
anti-CD4 (para la CD4 humana) no es influida por la
derivatización con DTPA. Los fragmentos Fab' de un
anti-CD4, derivatizados con DTPA y no derivatizados,
identifican a unas fracciones de la misma magnitud de células
indicadoras fluorescentes, que llevan la CD4 humana. La actividad
biológica de ambos ligandos era comparable en este caso, se alcanzó
una saturación para la coloración por fluorescencia en las mismas
concentraciones de los Fab' o respectivamente de los
Fab'-DTPA. Asimismo, era comparable la pérdida de
fluorescencia con una concentración descendiente de los
ligandos.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
4
El Ejemplo muestra el enriquecimiento selectivo
de un Fab de un anti-CD4 humana-DTPA
marcado con indio-111 (agente de diagnóstico
radiológico) en tejidos con una alta expresión de la CD4 humana.
Como modelo preclínico para la investigación
in vivo de la biodistribución del agente de diagnóstico
radiológico, pasó a utilizarse un modelo de ratón con una expresión
transgénica de la CD4 humana (ratón CD4/DR3), En lugar de la propia
CD4 ("de tipo salvaje") se expresa la CD4 humana en el modelo
de ratón CD4/DR3, correspondiendo correctamente los modelos de
expresión para la CD4 humana a la distribución natural del receptor
(véase Laub
2001).
2001).
A los ratones CD4/DR3 y a los ratones de tipo
salvaje (C57/BL6) se les inyectaron por vía intravenosa en cada
caso 20 Ci del agente de diagnóstico radiológico: A las 1, 4, 24 y
48 horas después de una inyección se extrajeron órganos linfáticos
y no linfáticos, se pesaron y la radiactividad incorporada se midió
con un contador de rayos gamma (LKB modelo 1282, de
Wallac-Perkin Elmer, Turku Finlandia). Para la
corrección del período de tiempo de semidesintegración se
retuvieron partes alícuotas del agente de diagnóstico radiológico y
se midieron simultáneamente con las muestras. Para el análisis de
la biodistribución, las señales radiactivas (cómputos, en inglés
counts) se convirtieron por cálculo en un % de la actividad
inyectada por cada gramo de tejido.
En ratones CD4/DR3 se midieron unas actividades
aumentadas significativamente en los nódulos linfáticos, en el bazo
y en la médula ósea. En órganos no linfáticos (hígado, músculos,
pulmones y corazón) no se efectuó ningún enriquecimiento del
fragmento Fab' de un anti-CD4 humana, marcado con
indio-111 (véase Laub 2000). En los riñones se
encontraron unas señales, que apuntan a la eliminación por vía renal
del agente de diagnóstico radiológico.
Las investigaciones acerca de la biodistribución
muestran que la distribución del agente de diagnóstico radiológico
en un tejido linfático del ratón CD4/DR3 está basada en
interacciones específicas entre la CD4 humana expresada
transgénicamente y el Fab' de un anti-CD4 humana,
marcado con indio-111.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
5
Con este Ejemplo se demuestra que unas señales
específicas del agente de diagnóstico radiológico requieren la
presencia de la CD4 humana.
A ratones Balb/c (de tipo salvaje) con una
expresión normal de la CD4 de ratón se les inyectaron por vía
intravenosa 20 Ci del agente de diagnóstico radiológico del Ejemplo
2. Después de 1, 4, 24 y 48 horas, de los en cada caso tres de
ratones Balb/c se extrajeron muestras, tal como en el Ejemplo 4, y
se midió la radiactividad incorporada. Solamente en los riñones se
determinaron unas señales aumentadas en todos los momentos, lo que
apunta hacia la eliminación por vía renal del agente de diagnóstico
radiológico o respectivamente del radionúclido. A pesar de que
órganos linfáticos, tales como el bazo, los nódulos linfáticos y la
médula ósea contienen hasta un 20% de células que expresan la CD4
de ratón, aquí no se podían detectar señales de ningún tipo. Los
resultados muestran que el Fab' de un anti-CD4
humana, marcado con In-111 se fija específicamente a
la CD4 humana y no se enriquece inespecíficamente en órganos
linfáticos del ratón.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
6
El Ejemplo demuestra que con el agente de
diagnóstico radiológico se pueden localizar in vivo órganos
y tejidos que tienen una alta proporción de células que expresan la
CD4 humana.
Se inyectaron en cada caso 20 Ci del agente de
diagnóstico radiológico en la vena caudal de ratones de tipo
salvaje y de ratones CD4/DR3 transgénicos, que expresan la CD4
humana en lugar de la CD4 de tipo salvaje. A las 1, 24 y 48 horas
después de una inyección se narcotizaron los animales y éstos se
colocaron en decúbito prono (con la boca hacia abajo) en la zona de
medición de una cámara de rayos gamma (Siemens Icon). Con ayuda de
un colimador planar para radiación gamma de energía mediana, se
registraron durante 30 min las señales de los fotones de rayos
gamma y éstas se recompusieron para dar escintigramas planares del
cuerpo entero. La evaluación ulterior de los escintigramas se
efectuó con un programa lógico (software) para procedimientos para
la generación de imágenes en la medicina (Osiris, Hospital
Universitario de Ginebra, Suiza).
Una hora después de una inyección del agente de
diagnóstico radiológico a ratones que llevaban la CD4 humana y a
ratones de tipo salvaje se detectan unas señales especialmente
intensas en los riñones. En los ratones de tipo salvaje persiste un
fondo poco diferenciable y las señales de los riñones se mantienen
durante todo el período de tiempo de medición, lo que apunta a la
eliminación por vía renal del agente de diagnóstico radiológico,
sin que se llegue a unos enriquecimientos específicos en otros
órganos. En ratones CD4/DR3 con una expresión transgénica de la CD4
humana, a las cuatro horas después de una inyección se encuentran,
junto a las señales de los riñones, también tales señales en la
zona del bazo. En la zona de las extremidades anteriores y
posteriores se miden además unas señales claras, que proceden de
células que expresan la CD4 humana en la médula ósea (p.ej.
linfocitos T ayudadores, granulocitos eosinófilos). Las señales de
fondo están estructuradas más fuertes y apuntan a unos
compartimientos del sistema hematopoyético y linfático, sin que se
llegue a una representación de nódulos linfáticos o tejidos
distinguibles, lo que se puede explicar por la pequeña resolución en
el caso de escintigramas con indio-111
(aproximadamente 4 mm). Los escintigramas de ratones CD4/DR3 a las
24 y 48 horas después de una inyección del agente de diagnóstico
radiológico, muestran un manifiesto retroceso de las señales de los
riñones, a partir de lo cual resulta una representación mejorada del
bazo. Los resultados apuntan a unas proporciones altas de
linfocitos T ayudadores que expresan la CD4 humana, sobre todo en el
bazo [véase Laub 2001, JIM]
Las señales diferenciadas apuntan al
enriquecimiento selectivo del agente de diagnóstico radiológico en
órganos con células que expresan la CD4 humana. Este
enriquecimiento es específico, puesto que no se presenta en ratones
de tipo salvaje sin la CD4 humana transgénica como molécula diana, y
se determina por medio de la interacción específica entre la CD4
humana y fragmentos Fab' de un anti-CD4 humana,
marcados con indio-111.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
7
Con este Ejemplo se demuestra que unos
anticuerpos monoclonales dirigidos contra una CD4 humana o
respectivamente murina no reaccionan de manera cruzada entre
sí.
Una sangre periférica de un ser humano y una
sangre periférica de un ratón se incubaron con anticuerpos
monoclonales marcados con isotiocianato de fluoresceína (FITC),
dirigidos contra la CD4 murina (clon GK 1.5; compárese el documento
US 6.146.614) y contra la CD4 humana (clon Max. 16H5). Para la
detección de los linfocitos T, las suspensiones de células se
incubaron adicionalmente con anticuerpos dirigidos contra la CD3
humana o respectivamente murina, marcados con ficoeritrina (PE).
Después de un período de tiempo de incubación de 30 min, las
suspensiones de células se lavaron y se analizaron por citometría
de flujo (FACScan, de Becton Dickinson).
En suspensiones de células murinas no se
encontraron células ni positivas para CD3 ni negativas para CD3, a
las que se fija también el Max. 16H5 (Cuadrantes UR y UL en el
borrón C). A la inversa, entre las células humanas no se
encontraron células de ningún tipo que fijasen al GK 1.5 (Cuadrantes
UR y UL en el borrón D). Las coloraciones en la Figura 1 muestran,
por consiguiente, que el GK 1.5 sólo se fija a linfocitos T
ayudadores murinos (borrón A) y el Max. 16H5 sólo se fija a
linfocitos T ayudadores humanos (borrón B).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
8
Este Ejemplo muestra la identificación del sitio
de fijación de Max. 16H5 a la región extracelular de la CD4
humana.
Para esto, con ayuda de un robot
Auto-Spot (ASP222) se sintetizaron 177 péptidos de
la secuencia lineal de aminoácidos de los dominios 1 hasta 4
(D1-D4) de la molécula de CD4 humana en zonas
(manchas, en inglés "Spot") de una membrana derivatizada con
espaciadores PEG. Las secuencias peptídicas en las manchas tenían
una longitud de 12 aminoácidos y contenían los en cada caso 10
últimos aminoácidos de la secuencia precedente (retículo:
12-meros con un solapamiento de 10).
Estas membranas se bloquearon con un polvo de
leche al 2% y se incubaron con 10 \mug/ml de Max. 16H5 durante
120 min a la temperatura ambiente. Después de esto, las membranas se
lavaron y se incubaron con un anticuerpo de cabra
anti-ratón marcado con una peroxidasa
(ZAM-POD, de Dianova) durante 75 min a la
temperatura ambiente. Después de otra etapa de lavado adicional, se
efectuó la detección de la ZAM-POD con ayuda de un
substrato quimioluminiscente (Super Signal Wes Dura, de Pierce).
Las señales de quimioluminiscencia sobre la membrana se detectaron
y digitalizaron con ayuda de un lector de imágenes con luminiscencia
(Fujifilm LAS-1000).
De la fijación del Max.16H5 a los péptidos
aplicados en manchas fueron responsables las siguientes secuencias
de aminoácidos:
A partir de las manchas positivas se
reconstruyeron las secuencias de aminoácidos utilizadas para la
fijación del Max. 16H5 en un modelo tridimensional de la CD4
humana. En este caso se puso de manifiesto que el Max. 16H5
interactúa con un sitio de fijación estructurado espacialmente
(epítopo de conformación).
<110> BIOTECTID GmbH
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> Utilización de un ligando marcado
con especificidad para la molécula de CD4 humana para la preparación
de un agente de diagnóstico destinado al análisis de modelos de
migración y/o distribución de poblaciones de células.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> 24222PDE-1_DR
\vskip0.400000\baselineskip
<140>
\vskip0.400000\baselineskip
<141>
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<150> documento DE 101.60.653.2
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
2001-12-11
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn Ver. 2.1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Humana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gly Asp Thr Val Glu Leu Thr Cys Thr Ala Ser
Gln}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Humana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Lys Lys Ser Ile Gln Phe His Trp Lys
Lys}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Humana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Lys Glu Glu Val Gln Leu Leu Val Phe}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Humana
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Pro Ser Val Gln Cys Arg Ser Pro Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Humana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Phe Pro Leu Ala Phe Thr Val Glu Lys Leu Thr
Gly Ser Gly Glu}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Humana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Lys Leu Ile Ile Gln Glu Val Asn Leu Val Val
Met Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
Claims (19)
1. Utilización de un ligando marcado con
especificidad para la molécula de CD4 humana, escogido entre el
conjunto que se compone de fragmentos de anticuerpos escogidos
entre el conjunto que se compone de los F(ab')_{2}, Fab' y
Fab del anticuerpo Max. 16H5, y de fragmentos de anticuerpos
recombinantes, escogidos entre el conjunto que se compone de los
F(ab')_{2}, Fab' y Fab del anticuerpo Max. 16H5, para la
preparación de un agente de diagnóstico in vivo destinado al
análisis de modelos de migración y/o distribución de determinadas
poblaciones de células, que comprenden células que llevan la CD4, en
individuos humanos.
2. Utilización de acuerdo con la reivindicación
1, realizándose que los fragmentos de anticuerpos o los fragmentos
de anticuerpos recombinantes son fragmentos de anticuerpos
monoclonales o se derivan de éstos.
3. Utilización de acuerdo con la reivindicación
1 ó 2, realizándose que los fragmentos de anticuerpos o los
fragmentos de anticuerpos recombinantes reconocen a una de las
secuencias mostradas en las SEQ ID NO. 1 hasta SEQ ID NO. 6, y se
fijan a ellas.
4. Utilización de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 a 3, realizándose que los fragmentos de
anticuerpos o los fragmentos de anticuerpos recombinantes reconocen
al epítopo de conformación de la CD4 humana y se fijan a él.
5. Utilización de acuerdo con una de las
reivindicaciones anteriores, realizándose que la marcación del
ligando se escoge entre el conjunto que se compone de emisores de
rayos gamma, emisores de positrones, un material magnético, un
material de contraste de densidades y sus mezclas.
6. Utilización de acuerdo con la reivindicación
5, realizándose que la marcación del ligando es un emisor de rayos
gamma, que comprende uno o varios radioisótopos, escogidos entre el
conjunto que se compone de indio-111,
tecnecio-99m, tecnecio-99,
yodo-132, otros radioisótopos para procedimientos
para la generación de imágenes en la medicina, y sus mezclas.
7. Utilización de acuerdo con la reivindicación
6, realizándose que el radioisótopo es tecnecio-99m
o indio-111.
8. Utilización de acuerdo con la reivindicación
5, realizándose que la marcación del ligando es un emisor de
positrones, que comprende uno o varios isótopos, escogidos entre el
conjunto que se compone de flúor-18,
carbono-11, yodo-124, otros isótopos
para procedimientos para la generación de imágenes en la medicina, y
sus mezclas.
9. Utilización de acuerdo con la reivindicación
5, realizándose que la marcación del ligando comprende un material
magnético, escogido entre el conjunto que se compone de gadolinio,
sustancias superparamagnéticas, partículas hidratadas de óxidos de
hierro, otros materiales para procedimientos para la generación de
imágenes en la medicina, y sus mezclas.
10. Utilización de acuerdo con la reivindicación
5, realizándose que el ligando marcado comprende un material de
contraste de densidades.
11. Utilización de acuerdo con una de las
reivindicaciones anteriores, escogiéndose las células que llevan la
CD4 humana entre el conjunto que se compone de linfocitos T y B,
monocitos, macrófagos, células dendríticas y células de Langerhans
y granulocitos eosinófilos.
12. Utilización de acuerdo con la reivindicación
11, escogiéndose los linfocitos entre un conjunto o una población,
que comprende células no linfocitarias.
13. Utilización de acuerdo con una de las
reivindicaciones anteriores, realizándose que la población celular
procede de un individuo humano.
14. Composición, que comprende un ligando
marcado con especificidad para la molécula de CD4, escogido entre
el conjunto que se compone de fragmentos de anticuerpos, escogidos
entre los F(ab')_{2}, Fab' y Fab del anticuerpo Max. 16H5,
y de fragmentos de anticuerpos recombinantes, escogidos entre el
conjunto que se compone de los F(ab')_{2}, Fab' y Fab del
anticuerpo Max. 16H5, y células o partículas que llevan la CD4
humana.
15. Composición de acuerdo con la
reivindicación 14, realizándose que las células o partículas que
llevan la CD4 son células o partículas que llevan la CD4
humana.
16. Composición de acuerdo con la reivindicación
14 o 15 como agente de diagnóstico.
17. utilización de una composición de acuerdo
con una de las reivindicaciones 14 a 16 para la preparación de un
agente de diagnóstico destinado a la determinación del modelo de
migración y/o distribución en un individuo.
18. Utilización de un ligando marcado con
especificidad para la molécula de CD4 humana, escogido entre el
conjunto que se compone de fragmentos de anticuerpos, escogidos
entre los F(ab')_{2}, Fab' y Fab del anticuerpo Max. 16H5,
y de fragmentos de anticuerpos recombinantes, escogidos entre el
conjunto que se compone de los F(ab')_{2}, Fab' y Fab del
anticuerpo Max. 16H5, para la preparación de un agente de
diagnóstico in vivo destinado a la determinación del grado y
la progresión de enfermedades en las que las células que llevan la
CD4 humana tienen una importancia clínica.
19. Utilización de acuerdo con la reivindicación
18, realizándose que la enfermedad se escoge entre el conjunto que
se compone de las enfermedades autoinmunitarias, las enfermedades
tumorales, las enfermedades infecciosas y las crisis por rechazo
después de trasplantes.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE10160653 | 2001-12-11 | ||
| DE10160653 | 2001-12-11 | ||
| DE10232189 | 2002-07-16 | ||
| DE10232189A DE10232189A1 (de) | 2001-12-11 | 2002-07-16 | Verwendung eines markierten Liganden mit Spezifität für das humane CD4-Molekül zur Herstellung eines Diagnostikums zur Analyse von Wanderungs- und/oder Verteilungsmustern von Zellpopulationen |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2301716T3 true ES2301716T3 (es) | 2008-07-01 |
Family
ID=26010752
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES02804582T Expired - Lifetime ES2301716T3 (es) | 2001-12-11 | 2002-12-09 | Utilizacion de un ligando marcado con especificidad para la molecula de cd4 humana, para la preparacion de un agente de diagnostico destinado al analisis de modelos de migracion y/o distribucion de poblaciones de celulas. |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20050124005A1 (es) |
| EP (1) | EP1454137B1 (es) |
| JP (1) | JP2005512083A (es) |
| AT (1) | ATE386269T1 (es) |
| AU (1) | AU2002356638A1 (es) |
| CA (1) | CA2469901C (es) |
| DE (1) | DE50211704D1 (es) |
| DK (1) | DK1454137T3 (es) |
| ES (1) | ES2301716T3 (es) |
| WO (1) | WO2003050499A2 (es) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2471543A1 (en) | 2010-12-02 | 2012-07-04 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Tolerance induction or immunosupression to prevent in particular Graft-versus-Host-Disease (GvHD) by short-term pre-incubation of transplanted cell suspensions, tissues or organs coated with ligands to cell surface molecules |
| US11180555B2 (en) * | 2014-09-16 | 2021-11-23 | Ubi Us Holdings, Llc. | Antibodies directed against CD4 for the treatment and functional cure of HIV |
| EP3497133A4 (en) | 2016-08-13 | 2020-03-25 | UBI IP Holdings | TREATMENT AND DELAYED VIROLOGICAL REMISSION OF HIV INFECTIONS BY ANTIBODIES AGAINST CD4 IN HAIR-STABILIZED PATIENTS |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998000560A2 (en) * | 1996-07-02 | 1998-01-08 | Massachusetts Institute Of Technology | Method for determining lymphocyte distribution and trafficking in mammals using imaging |
| EP1118858A3 (en) * | 2000-01-12 | 2003-07-09 | Pfizer Limited | Assay method |
-
2002
- 2002-12-09 DK DK02804582T patent/DK1454137T3/da active
- 2002-12-09 AU AU2002356638A patent/AU2002356638A1/en not_active Abandoned
- 2002-12-09 WO PCT/EP2002/013939 patent/WO2003050499A2/de active IP Right Grant
- 2002-12-09 EP EP02804582A patent/EP1454137B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-12-09 CA CA2469901A patent/CA2469901C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-12-09 US US10/498,633 patent/US20050124005A1/en not_active Abandoned
- 2002-12-09 ES ES02804582T patent/ES2301716T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-12-09 AT AT02804582T patent/ATE386269T1/de active
- 2002-12-09 JP JP2003551502A patent/JP2005512083A/ja active Pending
- 2002-12-09 DE DE50211704T patent/DE50211704D1/de not_active Expired - Lifetime
-
2011
- 2011-08-17 US US13/211,414 patent/US20110300069A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2003050499A2 (de) | 2003-06-19 |
| CA2469901C (en) | 2017-07-04 |
| US20050124005A1 (en) | 2005-06-09 |
| EP1454137A2 (de) | 2004-09-08 |
| DE50211704D1 (de) | 2008-03-27 |
| DK1454137T3 (da) | 2008-06-16 |
| WO2003050499A3 (de) | 2003-12-04 |
| US20110300069A1 (en) | 2011-12-08 |
| EP1454137B1 (de) | 2008-02-13 |
| CA2469901A1 (en) | 2003-06-19 |
| AU2002356638A8 (en) | 2003-06-23 |
| ATE386269T1 (de) | 2008-03-15 |
| AU2002356638A1 (en) | 2003-06-23 |
| JP2005512083A (ja) | 2005-04-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Larson et al. | Imaging of melanoma with I-131-labeled monoclonal antibodies | |
| Becker et al. | The use of monoclonal antibodies and antibody fragments in the imaging of infectious lesions | |
| AU2005269820B2 (en) | Methods for diagnosis using anti-cytokine receptor antibodies | |
| McCarthy et al. | In vivo imaging technologies to monitor the immune system | |
| Salmanoglu et al. | Currently available radiopharmaceuticals for imaging infection and the holy grail | |
| Order et al. | Radionuclide immunoglobulin lymphangiography: a case report | |
| Dearling et al. | Detection of intestinal inflammation by MicroPET imaging using a 64Cu-labeled anti-β7 integrin antibody | |
| US6146614A (en) | Method for determining lymphocyte distribution and trafficking in mammals using imaging | |
| Wen et al. | Pd-l1-targeted radionuclide therapy combined with αpd-l1 antibody immunotherapy synergistically improves the antitumor effect | |
| ES2301716T3 (es) | Utilizacion de un ligando marcado con especificidad para la molecula de cd4 humana, para la preparacion de un agente de diagnostico destinado al analisis de modelos de migracion y/o distribucion de poblaciones de celulas. | |
| Anzola et al. | SPECT radiopharmaceuticals for imaging chronic inflammatory diseases in the last decade | |
| Ghai et al. | In vivo quantitative assessment of therapeutic response to bortezomib therapy in disseminated animal models of multiple myeloma with [18 F] FDG and [64 Cu] Cu-LLP2A PET | |
| Li et al. | Noninvasive radionuclide molecular imaging of the CD4-positive T lymphocytes in acute cardiac rejection | |
| Garrood et al. | A novel model for the pre-clinical imaging of inflamed human synovial vasculature | |
| US11666672B2 (en) | Anti-CD33 antibody-guided imaging and treatment of acute myeloid leukemia | |
| Yusufi | Establishment of in vivo imaging strategies for tracking of TCR-transgenic T cells | |
| Signore et al. | Applications of Molecular Small-Animal Imaging in Inflammation and Infection | |
| CN117813326A (zh) | 基于放射的导蛋白-1的检测、伴随测试和治疗方法 | |
| DE10232189A1 (de) | Verwendung eines markierten Liganden mit Spezifität für das humane CD4-Molekül zur Herstellung eines Diagnostikums zur Analyse von Wanderungs- und/oder Verteilungsmustern von Zellpopulationen | |
| Eisenblaetter | downloaded from the King’s Research Portal at https://kclpure. kcl. ac. uk/portal | |
| Freise | ImmunoPET imaging of murine CD4+ T cells using an anti-mouse CD4 antibody fragment | |
| Roivainen et al. | In Vivo Imaging of Inflammation | |
| Daniel et al. | IN‐VIVO TESTING OF TECHNETIUM‐99m‐LABELED MONOCLONAL ANTIBODIES SPECIFIC FOR DIROFILARIA IMMITIS | |
| Yadav | Immunolocalization in SCID mice bearing human tumor using iodine-124 radiolabeled monoclonal antibody JAA-F11 | |
| Glaudemans et al. | The Role of Nuclear Medicine in Inflammatory Diseases: Drug Targets and Clinical Applications |