ES2296688T3 - Inmunoensayo para la deteccion de anfetaminas y sus derivados. - Google Patents
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Abstract
Método para determinar un analito seleccionado del grupo compuesto por anfetamina, metanfetamina y metilendioxianfetaminas de síntesis en una muestra biológica, comprendiendo los pasos de: a. Combinar una muestra sospechosa de contener dicho analito con un primer anticuerpo específico para anfetamina y con reactividad cruzada con análogos de anfetamina de metilendioxifenilalkilamina, un segundo anticuerpo específico para metanfetamina y con reactividad cruzada con análogos de anfetamina de metilendioxifenilalkilamina, y un complejo comprendiendo un ligando de dicho analito unido a una fracción de marcado, b. Medir la presencia o la cantidad del complejo que continúa unido o no unido a tales anticuerpos como consecuencia de un desplazamiento competitivo del analito, y c. Comparar la presencia o la cantidad del complejo medido en el paso (b) con la presencia o la cantidad de un complejo similar medido en una muestra de referencia conteniendo una cantidad conocida de una sustancia seleccionada del grupo compuesto por metilendioxianfetaminas de síntesis, siendo tratada la muestra de referencia de acuerdo con los pasos (a) y (b).
Description
Inmunoensayo para la detección de anfetaminas y
sus derivados.
El presente invento hace referencia en general
al ámbito de la medición de un analito en un medio líquido. Más
concretamente, hace referencia a un ensayo para la medición de una
droga de abuso en una muestra biológica. En particular, el invento
hace referencia a un método de inmunoensayo muy sensible para la
detección de anfetaminas, metanfetaminas y metilenodioxianfetaminas
de síntesis tales como 3,4-metilendioximetanfetamina
(MDMA) en muestras biológicas.
Los análogos de anfetamina de
metilendioxifenilalkilamina son una serie de compuestos conocidos
como anfetaminas "de diseño". Como se representa en la figura
1, estas drogas psicotrópicas son derivados de anillo sustituido
relacionadas químicamente con la mescalina. Entre ellas figuran
metilendioxianfetamina (MDA), metilendioximetanfetamina (MDMA,
también conocida como éxtasis), metilendioxietilanfetamina (MDEA),
N-metilbenzodioxazol-yl-butanamina
(MBDB),
benzodioxazol-5'-yl-2-butanamina
(BDB) y
4-hidroxi-3-metoximetanfetamina
(HMMA), siendo la MDMA la más común de ellas.
Se ha demostrado que la MDA es el metabolito
tanto de la MDMA como de la MDEA. Varios estudios realizados en
animales han demostrado que la MDMA se metaboliza por
N-desmetilación, desaminación,
O-metilación y O-conjugación con
glucurónido y/o metabolitos sulfatados. En la orina se detectan la
droga precursora (MDMA), 3,4-metilendioxilanfetamina
(MDA),
4-hidroxi-3-metoximetanfetamina
(HMMA),
3-hidroxi-4-metoximetanfetamina,
4-hidroxi-3-metoxifenilacetona,
3,4-metilendioxifenilacetona y
3,4-dihidroxifenilacetona. La mayoría de estos
metabolitos también se encuentran presentes en la sangre.
Las matrices biológicas que se estudian más
habitualmente para detectar MDMA, MDA, MDEA y MBDB son la orina y
la sangre, y están muy documentadas en las publicaciones. Más
recientemente, se ha informado de la determinación de estas drogas
de síntesis en otras muestras biológicas como la saliva, el sudor y
el pelo. En estas matrices, la droga precursora se detecta en
concentraciones superiores que sus metabolitos.
El abuso de estas anfetaminas de síntesis está
aumentando en todo el mundo, y su detección por medio de métodos de
cribado se está convirtiendo en un asunto cada vez más importante.
Zhao, H. et al., J. Anal. Toxicology 25,
258-269 (2001) descubrió que el 71% de las muestras
de orina procedentes de asistentes a fiestas "rave" contenían
MDMA o MDA solas o combinadas con anfetamina u otras anfetaminas de
síntesis como MDEA. En la actualidad, no existen inmunoensayos
comerciales diseñados específicamente para la detección de estas
sustancias y, por lo tanto, su detección depende de las
reactividades cruzadas relativas que exhiben en el método de cribado
de anfetamina y metanfetamina utilizado. En general, la reactividad
cruzada de los ensayos para anfetamina y metanfetamina disponibles
comercialmente con respecto a muchos de estos compuestos es baja, lo
que sugiere la posibilidad de que algunas muestras positivas puedan
pasar sin que se detecten.
Los inmunoensayos, en particular los ensayos de
unión competitiva, han demostrado ser especialmente provechosos al
hacer un análisis para detectar drogas de abuso. En los
inmunoensayos de unión competitiva, un analito de una muestra
biológica compite con un reactivo marcado, o análogo de analito o
trazador, por un número limitado de sitios de unión a los
receptores en anticuerpos específicos para el analito y el análogo
de analito. Enzimas como \beta-galactosidasa y
peroxidasa, moléculas fluorescentes como los compuestos de
fluoresceína, compuestos radiactivos como ^{125}|, y las
micropartículas son las sustancias marcadoras que se utilizan
normalmente como trazadores. La concentración de analito en la
muestra determina la cantidad de análogo de analito que se unirá al
anticuerpo. La cantidad de análogo de analito que se unirá es
inversamente proporcional a la concentración de analito en la
muestra porque el analito y el análogo de analito se unen al
anticuerpo en proporción a sus respectivas concentraciones. La
cantidad de análogo de analito libre o unido se puede determinar
después con los métodos apropiados para la marca concreta que se
está utilizando.
La cromatografía de gases/espectrometría de
masas (CG/EM) es muy específica y se ha descrito para detectar al
mismo tiempo MDMA, MDA, anfetamina, metanfetamina, MDEA y sus
metabolitos. Para confirmar y verificar los resultados de un ensayo
inmunológico o de un presunto diagnóstico se requiere por lo general
el análisis de CG/EM. Con esta técnica, se extrae la MDMA o las
drogas de síntesis en fase sólida, después se derivatizan y se
analizan por medio de CG/EM.
En la patente estadounidense nº. 5.501.987
expedida el 26 de marzo de 1996, Ordonez et al. describe un
inmunoensayo de analito doble para la determinación de anfetamina y
metanfetamina utilizando una única molécula de unión marcada que
puede producir una reacción cruzada a distintas sensibilidades en
anticuerpos procedentes de derivados conjugados de anfetamina y
metanfetamina. Los calibradores utilizados se preparan añadiendo
d-anfetamina a una orina normal humana libre de
drogas.
Kunsman et al. (J. Analyt. Toxicol. 14,
1990, páginas 149-153) revelan la aplicación de
inmunoensayos de anfetamina para la detección de
metilendioxianfetaminas de síntesis. Como estándares, se utilizan
soluciones de anfetamina. Kunsman et al. no enseñan el uso
de un estándar compuesto por una cantidad conocida de
metilendioxianfetamina de síntesis.
EP-A-0.674.782
pertenece a la misma familia de patentes que la patente
estadounidense nº. 5.262.333 y revela un inmunoensayo de
polarización fluorescente para la determinación de anfetamina y
metanfetamina en una muestra biológica. El procedimiento descrito
incluye un tratamiento previo de la muestra biológica con periodato
y una proteína de unión a riboflavina para eliminar reactivos
cruzados tales como
\beta-hidroxifenetilamina.
EP-A-0.375.422
describe un inmunoensayo que puede determinar la presencia de
anfetaminas en una muestra sospechosa de contener anfetamina y/o
metanfetamina mediante el empleo de al menos dos conjugados que
constan cada uno de ellos de una marca funcionalmente similar unida
a un análogo de anfetamina y un análogo de metanfetamina,
respectivamente, y un anticuerpo unido a anfetamina y un anticuerpo
unido a metanfetamina, en el que al menos uno de los anticuerpos es
un anticuerpo monoclonal.
Ruangyuttikarn y Moody (J. Analyt. Toxicol. 12
(4): 229-223, 1988) revelan una comparación de tres
inmunoensayos de anfetamina comerciales para la detección de
metanfetamina, metilendioxianfetamina, metilendioximetanfetamina y
metilen-dioxietilanfetamina. Todos los ensayos se
calibraron con anfetamina como referencia.
Ward et al. (Journal of Forensic
Sciences, 39 (6), 1994, páginas 1486-1496) revelan
un radioinmunoensayo para la doble detección de anfetamina y
metanfetamina. El método emplea anfetamina o metanfetamina como
calibradores.
Cody y Schwarzhoff (J. Analyt. Toxicol. 17
(1993), páginas 26-30) describen un inmunoensayo de
polarización fluorescente para la detección de anfetamina,
metanfetamina y análogos de anfetamina. También este método utiliza
anfetamina y metanfetamina como calibradores.
Para sorpresa de todos, se ha descubierto que se
puede conseguir un método de inmunoensayo muy específico para la
detección de anfetaminas, metanfetaminas, metilendioxianfetaminas de
síntesis tales como 3,4-metilendioximetanfetamina
(MDMA) en muestras de orina mediante la utilización de un calibrador
que consiste de una sustancia seleccionada del grupo compuesto por
metilendioxianfetaminas de síntesis en orina humana normal libre de
drogas y un anticuerpo que tenga especificidad para la anfetamina o
la metanfetamina y reactividad cruzada con análogos de anfetamina
de metilendioxifenilalkilamina.
El invento apunta a un método para determinar un
analito seleccionado del grupo compuesto por anfetamina,
metanfetamina y metilendioxianfetamina de síntesis en una muestra
biológica, comprendiendo los pasos de:
a. Combinar una muestra sospechosa de contener
dicho analito con un primer anticuerpo específico para anfetamina y
con reactividad cruzada con análogos de anfetamina de
metilendioxifenilalkilamina, un segundo anticuerpo específico para
metanfetamina y con reactividad cruzada con análogos de anfetamina
de metilendioxifenilalkilamina, y un complejo que comprenda un
ligando de dicho analito unido a una fracción de marcado.
b. Medir la presencia o la cantidad del complejo
que continúa unido o no unido a esos anticuerpos como consecuencia
de un desplazamiento competitivo del analito, y
c. Comparar la presencia o la cantidad del
complejo medido en el paso (b) con la presencia o la cantidad de un
complejo similar medido en una muestra de referencia que contenga
una cantidad conocida de una sustancia seleccionada del grupo
compuesto por metilendioxianfetaminas de síntesis, siendo tratada la
muestra de referencia de acuerdo con los pasos (a) y (b).
El invento también se refiere a un método para
determinar un analito seleccionado del grupo compuesto por
anfetamina, metanfetamina y metilendioxianfetaminas de síntesis en
una muestra biológica, comprendiendo los pasos de:
a. Combinar una muestra sospechosa de contener
dicho analito con un anticuerpo seleccionado del grupo compuesto
por anticuerpos específicos para anfetamina y con reactividad
cruzada con análogos de anfetamina de metilendioxifenilalkilamina y
anticuerpos específicos para metanfetaminas y con reactividad
cruzada con análogos de anfetamina de metilendioxifenilalkilamina,
y además con un complejo que comprenda un ligando del analito unido
a una fracción de marcado.
b. Medir la presencia o la cantidad del complejo
que continúa unido o no unido a esos anticuerpos como consecuencia
de un desplazamiento competitivo del analito, y
c. Comparar la presencia o la cantidad del
complejo medido en el paso (b) con la presencia o la cantidad de un
complejo similar medido en una muestra de referencia que contenga
una cantidad conocida de una sustancia seleccionada del grupo
compuesto por metilendioxianfetaminas de síntesis, siendo tratada la
muestra de referencia de acuerdo con los pasos (a) y (b).
En ambos métodos, como muestra se utiliza
preferentemente orina, y como sustancia presente en una muestra de
referencia en una cantidad conocida se utiliza preferentemente
3,4-metilendioximetanfetamina (MDMA).
En el método del invento, se combina una muestra
sospechosa de contener anfetamina, metanfetamina o una droga
relacionada estructuralmente con un anticuerpo que tenga
especificidad para la anfetamina o la metanfetamina y una molécula
de unión marcada que pueda interactuar con la combinación de
anticuerpo y su correspondiente analito con el fin de detectar la
presencia de los analitos en niveles de corte seleccionados, ya sea
solos o combinados. El anticuerpo o anticuerpos concretos
utilizados deben tener reactividad cruzada con análogos de
anfetamina de metilendioxifenilalkilamina. El presente invento se
puede utilizar con cualquier tipo de formato de inmunoensayo, por
ej.: ensayo de aglutinación turbidométrico, radioinmunoensayo,
inmunoensayo enzimático o inmunoensayo de polarización
fluorescente. Se prefiere utilizar el presente invento en especial
con formatos aglutinométricos que admitan un método instrumental
para la medición de los cambios ocasionados por la reacción de
aglutinación. Para el mencionado análisis aglutinométrico, cabe
utilizar tanto aparatos de ensayo manuales como automáticos. Por
regla general, el instrumental automático funcionará utilizando
multitud de recipientes o depósitos de reactivos de los que se
extraerá con una pipeta la cantidad oportuna de cada reactivo para
añadirla a la muestra. En el caso de inmunoensayos como el ensayo de
aglutinación en cuestión, esto supondrá por lo general al menos dos
de tales recipientes; normalmente, uno para un reactivo de
anticuerpo y el otro para las micropartículas unidas con el ligando
correspondiente. En algunos instrumentos que contengan diluyente,
tampones u otros aditivos para un tratamiento apropiado de la
muestra, puede haber más contenedores o depósitos.
El analizador clínico pipetea los reactivos y
las muestras incorporados, que se introducen en una cubeta donde se
produce la reacción de aglomeración competitiva y se realiza la
medición de la turbidez. Por ejemplo, con el analizador HITACHI 917
(Roche Diagnostics) y el equipo de reactivos ABUSCREEN® OnLine
Amphetamines (Roche Diagnostics, nº. de cat. 1985965), la muestra
de orina se pipetea en la cubeta con diluyente de muestra, seguida
inmediatamente por la cantidad adecuada de reactivo y mezcla de
anticuerpo. Se hace una lectura espectrofotométrica inicial.
Después, se transfiere a la cubeta la cantidad apropiada de reactivo
de micropartículas y se mezcla la reacción. Tras una breve
incubación, se realiza una última medición de la turbidez. El cambio
total en la turbidez (absorbancia) de la reacción se compara con
una curva de calibración y los resultados se presentan en
ng/ml.
El presente invento incluye asimismo un kit de
reactivos de ensayo que comprende, en un envase combinado, un
anticuerpo específico para anfetamina, un anticuerpo específico para
metanfetamina, un complejo que consta de un ligando de anfetamina o
un derivado de anfetamina unido a una fracción de marcado, y un
calibrador que comprende una cantidad conocida de una sustancia
seleccionada del grupo compuesto por metilendioxianfetaminas de
síntesis. Este kit de ensayo ofrece reactivos de ensayo con una
sensibilidad clínica mayor para detectar MDMA y compuestos
relacionados estructuralmente.
El presente invento se refiere a un equipo para
llevar a cabo un ensayo con objeto de determinar un analito
seleccionado del grupo compuesto por anfetamina, metanfetamina y
metilendioxianfetaminas de síntesis en una muestra biológica,
comprendiendo en un envase combinado:
a. Un primer anticuerpo específico para
anfetamina y con reactividad cruzada con análogos de anfetamina de
metilendioxifenilalkilamina,
b. Un segundo anticuerpo específico para
metanfetamina y con reactividad cruzada con análogos de anfetamina
de metilendioxifenilalkilamina,
c. Un complejo que consta de un ligando de
anfetamina o un derivado de anfetamina unido a una fracción de
marcado, y
d. Un calibrador que comprende una cantidad
conocida de una sustancia seleccionada del grupo compuesto por
metilendioxianfetaminas de síntesis.
El invento hace referencia además a un equipo
para llevar a cabo un ensayo con objeto de determinar un analito
seleccionado del grupo compuesto por anfetamina, metanfetamina y
metilendioxianfetaminas de síntesis en una muestra biológica,
comprendiendo en un envase combinado:
a. Un anticuerpo seleccionado del grupo
compuesto por anticuerpos específicos para anfetamina y con
reactividad cruzada con análogos de anfetamina de
metilendioxifenilalkilamina y anticuerpos específicos para
metanfetamina y con reactividad cruzada con análogos de anfetamina
de metilendioxifenilalkilamina,
b. Un complejo que consta de un ligando de
anfetamina o un derivado de anfetamina unido a una fracción de
marcado, y
c. Un calibrador que comprende una cantidad
conocida de una sustancia seleccionada del grupo compuesto por
metilendioxianfetaminas de síntesis.
Ambos equipos se utilizan preferentemente con
orina como muestra biológica. Preferentemente, la sustancia que
contiene el calibrador en ambos equipos en una cantidad conocida es
3,4-metilendioximetanfetamina (MDMA).
La figura 1 muestra las estructuras de la
anfetamina, la metanfetamina y las metilendioxianfetaminas de
síntesis;
La figura 2 muestra una curva de respuesta a una
dosis generada utilizando el ensayo del presente invento que
comprende un anticuerpo específico para anfetamina, un anticuerpo
específico para metanfetamina y calibradores que contienen
cantidades conocidas de MDMA;
La figura 3 muestra una curva de respuesta a una
dosis generada utilizando el ensayo del presente invento, que
comprende un anticuerpo específico para anfetamina, un anticuerpo
específico para metanfetamina y calibradores que contienen
cantidades conocidas de MDA.
En la actualidad, no se dispone de equipos de
inmunoensayo comerciales para la determinación de MDMA. La única
forma de establecer la MDMA a través de un inmunoensayo es utilizar
reactivos o un kit de reactivos para determinar anfetamina o
metanfetamina que comprenda un anticuerpo anfetamínico y un
anticuerpo metanfetamínico con alta reactividad cruzada con la
MDMA, y utilizando anfetamina o metanfetamina como calibrador. En el
presente invento se utiliza una sustancia seleccionada del grupo
compuesto por metilendioxianfetaminas de síntesis para calibrar un
ensayo disponible comercialmente que utiliza anticuerpos para
anfetamina y metanfetamina. El uso de un calibrador de
metilendioxianfetamina de síntesis aumentó de manera significativa
la sensibilidad clínica a la MDMA, MBDB, MDA, MDE y BDB sin que se
produjera un aumento importante de la sensibilidad a medicamentos
como las
\beta-hidroxifenilaminas, por ej., efedrina, pseudoefedrina, fentamina, tiramina y fenilpropanolamina (PPA).
\beta-hidroxifenilaminas, por ej., efedrina, pseudoefedrina, fentamina, tiramina y fenilpropanolamina (PPA).
- AMP
- anfetamina
- BDB
- (\pm)-(3,4-metilendioxifenil)-2-butanamina
- HMMA
- 4-hidroxi-3-metoximetanfetamina
- MAMP
- metanfetamina
- MBDB
- (\pm)-N-metil-1-(3,4-metilendioxifenil)-2-butanamina
- MDA
- (\pm)-3,4-metilendioxianfetamina
- MDEA
- (\pm)-3,4-metilendioxietilanfetamina
- MDMA
- (\pm)-3,4-metilendioximetanfetamina
- NT
- no ensayado
- PPA
- fenilpropanolamina.
En la tabla que figura más abajo se indican las
reactividades cruzadas de los análisis comercializados en la
actualidad para MDMA y MDA, de acuerdo con la bibliografía
publicada, así como las reactividades cruzadas con el método del
presente invento.
Por "metilendioxianfetaminas de síntesis"
se entiende el grupo de análogos de anfetamina de
metilendioxifenilalkilamina, entre los que figuran
3,4-metilendioxianfetamina (MDA),
3,4-metilendioximetanfetamina (MDMA, éxtasis),
3,4-metilen-dioxietilanfetamina
(MDEA),
N-metil-1-(3,4-metilendioxifenil)-2-butanamina
(N-metilbenzodioxazol-yl-butanamina)
(MBDB) y
3,4-metilendioxifenil-2-butanamina
(benzodioxazol-5'-yl-2-butanamina)
(BDB).
Los niveles de corte que se indican para cada
método en el cuadro anterior son la concentración de drogas en la
muestra necesaria para que el análisis determine un resultado
positivo.
Ejemplo
1
Se preparó un primer reactivo de acuerdo con las
instrucciones que acompañan al kit de reactivos ABUSCREEN® OnLine
HS Amphetamine/MDMA (Roche Diagnostics, nº. de cat. 1986619). El
reactivo contenía anticuerpos monoclonales de anfetamina y
metanfetamina (ratón) en un tampón con seroalbúmina bovina y un
conservante.
Ejemplo
2
Se preparó un segundo reactivo de acuerdo con
las instrucciones que acompañan al kit de reactivos ABUSCREEN®
OnLine HS Amphetamine/MDMA (Roche Diagnostics, nº. de cat. 1986619).
El reactivo contenía un derivado de anfetamina conjugado con
micropartículas de látex en un tampón con un conservante.
Ejemplo
3
Los calibradores se prepararon de acuerdo con
las instrucciones que acompañan a los calibradores de MDMA de
ABUSCREEN® OnLine Preciset® (Roche Diagnostics, nº. de cat.
4745556). Las soluciones calibradoras contenían
3,4-metilen dioximetanfetamina en orina humana con
un conservante. Las concentraciones finales de los calibradores
fueron 0, 150, 300 y 600 ng/ml.
\newpage
Ejemplo
4
Los calibradores o muestras de referencia
preparados conforme al Ejemplo 3 se analizaron de acuerdo con las
instrucciones que acompañan al kit de reactivos OnLine utilizando un
analizador HITACHI 917 (Roche Diagnostics) y un valor de corte de
300 ng/ml. Los parámetros utilizados fueron 10 \mug de muestra,
160 \mug de reactivo de anticuerpo y 90 \mug de reactivo de
micropartículas. La reacción se efectuó de forma monocromática (505
nm) en el punto de equivalencia (punto de lectura
19-33). La curva de respuesta a la dosis se muestra
en la figura 2, con el cambio de absorbancia a 505 nm representado
en el eje y, y la concentración de MDMA representada en el eje
x.
Ejemplo
5
Los calibradores o muestras de referencia
preparados como se describe en el Ejemplo 3, salvo por utilizar MDA
en lugar de MDMA, se analizaron de acuerdo con las instrucciones que
acompañan al kit de reactivos OnLine utilizando un analizador
HITACHI 717 (Roche Diagnostics). Los parámetros utilizados fueron 10
\mug de muestra, 160 \mug de reactivo de anticuerpo y 80 \mug
de reactivo de micropartículas. La reacción se efectuó de forma
monocromática (505 nm) en el punto de equivalencia
(27-50). La curva de respuesta a la dosis obtenida
se muestra en la figura 3, con el cambio de absorbancia a 505 nm
representado en el eje y, y la concentración de MDA representada en
el eje x.
Las reactividades cruzadas observadas cuando se
utilizó MDA como calibrador fueron las siguientes:
Ejemplo
6
Se trataron muestras sospechosas de contener
anfetamina, metanfetamina o metilendioxianfetaminas de síntesis, de
acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 4, utilizando
calibradores de MDMA a niveles de 0, 150, 300 y 600 ng/ml. Los
resultados se obtuvieron comparando el cambio de absorbancia a 505
nm en una muestra desconocida con el obtenido con los calibradores
de la concentración conocida. Los resultados obtenidos en 72
muestras de orina tuvieron una concordancia del 100% con un método
cromatográfico de referencia para la detección de anfetaminas de
síntesis.
Claims (12)
1. Método para determinar un analito
seleccionado del grupo compuesto por anfetamina, metanfetamina y
metilendioxianfetaminas de síntesis en una muestra biológica,
comprendiendo los pasos de:
a. Combinar una muestra sospechosa de contener
dicho analito con un primer anticuerpo específico para anfetamina y
con reactividad cruzada con análogos de anfetamina de
metilendioxifenilalkilamina, un segundo anticuerpo específico para
metanfetamina y con reactividad cruzada con análogos de anfetamina
de metilendioxifenilalkilamina, y un complejo comprendiendo un
ligando de dicho analito unido a una fracción de marcado,
b. Medir la presencia o la cantidad del complejo
que continúa unido o no unido a tales anticuerpos como consecuencia
de un desplazamiento competitivo del analito, y
c. Comparar la presencia o la cantidad del
complejo medido en el paso (b) con la presencia o la cantidad de
un complejo similar medido en una muestra de referencia conteniendo
una cantidad conocida de una sustancia seleccionada del grupo
compuesto por metilendioxianfetaminas de síntesis, siendo tratada la
muestra de referencia de acuerdo con los pasos (a) y (b).
2. Método de acuerdo con la reivindicación 1, en
el que la muestra es orina.
3. Método de acuerdo con la reivindicación 2, en
el que la sustancia es
3,4-metilendioximetanfetamina (MDMA).
4. Método para determinar un analito
seleccionado del grupo compuesto por anfetamina, metanfetamina y
metilendioxianfetaminas de síntesis en una muestra biológica,
comprendiendo los pasos de:
a. Combinar una muestra sospechosa de contener
dicho analito con un anticuerpo seleccionado del grupo compuesto
por anticuerpos específicos para anfetamina y con reactividad
cruzada con análogos de anfetamina de metilendioxifenilalkilamina y
anticuerpos específicos para metanfetamina y con reactividad cruzada
con análogos de anfetamina de metilendioxifenilalkilamina, y además
con un complejo comprendiendo un ligando del analito unido a una
fracción de marcado,
b. Medir la presencia o la cantidad del complejo
que continúa unido o no unido a tal anticuerpo como consecuencia de
un desplazamiento competitivo del analito, y
c. Comparar la presencia o la cantidad del
complejo medido en el paso (b) con la presencia o la cantidad de un
complejo similar medido en una muestra de referencia conteniendo una
cantidad conocida de una sustancia seleccionada del grupo compuesto
por metilendioxianfetaminas de síntesis, siendo tratada la muestra
de referencia de acuerdo con los pasos (a) y (b).
5. Método de acuerdo con la reivindicación 4, en
el que la muestra es orina.
6. Método de acuerdo con la reivindicación 5, en
el que la sustancia es
3,4-metilendioximetanfetamina (MDMA).
7. Equipo para realizar un ensayo con objeto de
determinar un analito seleccionado del grupo compuesto por
anfetamina, metanfetamina y metilendioxianfetaminas de síntesis en
una muestra biológica, comprendiendo en un envase combinado:
a. Un primer anticuerpo específico para
anfetamina y con reactividad cruzada con análogos de anfetamina de
metilendioxifenilalkilamina,
b. Un segundo anticuerpo específico para
metanfetamina y con reactividad cruzada con análogos de anfetamina
de metilendioxifenilalkilamina,
c. Un complejo consistente en un ligando de
anfetamina o un derivado de anfetamina unido a una fracción de
marcado, y
d. Un calibrador consistente en una cantidad
conocida de una sustancia seleccionada del grupo compuesto por
metilendioxianfetaminas de síntesis.
8. Equipo de acuerdo con la reivindicación 7, en
el que la muestra es orina.
9. Equipo de acuerdo con la reivindicación 8, en
el que la sustancia es
3,4-metilendioximetanfetamina (MDMA).
10. Equipo para realizar un ensayo con objeto de
determinar un analito seleccionado del grupo compuesto por
anfetamina, metanfetamina y metilendioxianfetaminas de síntesis en
una muestra biológica, comprendiendo en un envase combinado:
a. Un anticuerpo seleccionado del grupo
compuesto por anticuerpos específicos para anfetamina y con
reactividad cruzada con análogos de anfetamina de
metilendioxifenilalkilamina y anticuerpos específicos para
metanfetamina y con reactividad cruzada con análogos de anfetamina
de metilendioxifenilalkilamina,
b. Un complejo consistente en un ligando de
anfetamina o un derivado de anfetamina unido a una fracción de
marcado, y
c. Un calibrador consistente en una cantidad
conocida de una sustancia seleccionada del grupo compuesto por
metilendioxianfetaminas de síntesis.
11. Equipo de acuerdo con la reivindicación 10,
en el que la muestra es orina.
12. Equipo de acuerdo con la reivindicación 11,
en el que la sustancia es
3,4-metilendioximetanfetamina (MDMA).
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