ES2225299T3

ES2225299T3 - Estuche y procedimiento para la determinacion del estado redox en la orina.

Info

Publication number: ES2225299T3
Application number: ES00990818T
Authority: ES
Inventors: Kristian Glagau; Ralf-Siegbert Hauck
Original assignee: Orthomol Pharmazeutische Vertriebsgesellschaft mbH
Current assignee: Orthomol Pharmazeutische Vertriebsgesellschaft mbH
Priority date: 2000-12-22
Filing date: 2000-12-22
Publication date: 2005-03-16
Anticipated expiration: 2020-12-22
Also published as: TR200402619T4; EP1344058B1; US6835554B2; US20030087330A1; DK1344058T3; ATE271222T1; EP1344058A1; AU2001230163A1; WO2002018942A1; DE50007096D1

Abstract

Estuche para la determinación del estado redox en la orina, que comprende: (a) por lo menos un reactivo seleccionado entre el conjunto de los compuestos de la fórmula general (I) en la que R1 representa H o alquilo de C1-C10, y R2 representa alquilo de C1-C10, y R3 y R4, independientemente uno de otro, representan H, alquilo de C1-C10, arilo de C6-C14, NH2, NHR, NR2, NHCOR, OH, OR, OCOR, SH, SR, F, Cl, Br, CF3 o CCl3, estando los grupos arilo eventualmente sustituidos con uno o varios sustituyentes seleccionados entre el conjunto que consta de alquilo de C1-C6, NH2, NHR, NR2, NHCOR, OH, OR, OCOR, SH, SR, F, Cl, Br, CF3 y CCl3, y representando R en cada caso un alquilo de C1-C6, y pudiéndose escoger varios grupos R eventualmente de modo independiente unos de otros, (b) por lo menos un ácido, y (c) una escala de colores destinada a la comparación visual de colores, asignándose a los colores individuales de la escala un determinado estado redox de la orina que se ha de investigar.

Description

Estuche y procedimiento para la determinación del estado redox en la orina.

El presente invento se refiere a un estuche y a un procedimiento para la determinación del estado redox en la orina. En particular, el invento se refiere a un estuche y a un procedimiento de unas índoles tales que la determinación del estado redox se puede llevar a cabo de una manera especialmente sencilla, basándose en la reacción cromática con un reactivo seleccionado entre el conjunto de los derivados de indol mediante una comparación visual de los colores, es decir a simple vista.

Antecedentes del invento

El organismo humano está sometido, en particular en las actuales condiciones medioambientales, a un gran número de cargas, mediante las cuales se generan radicales libres en las células del cuerpo. A estas cargas pertenecen, por ejemplo, el humo de los cigarrillos, los gases de escape de los automóviles, la radiación UV (ultravioleta) y otros diferentes agentes nocivos. Los radicales libres generados, a los que pertenecen p.ej. también radicales de oxígeno libres, generan, en múltiples y variadas reacciones consecutivas, productos patógenos de degradación, que pueden dañar persistentemente a diferentes componentes de las células del cuerpo. Las consecuencias de estos daños son p.ej. un envejecimiento prematuro, pero también enfermedades graves tales como p.ej. una diabetes o un cáncer.

Con el fin de hacer inofensivos, es decir fijar a los radicales libres, que aparecen en una medida limitada incluso en condiciones medioambientales ideales, el cuerpo de un ser humano ha desarrollado una serie de sistemas con acción anti-oxidante. Estos sistemas, sin embargo, entre otras cosas dependiendo de los hábitos de vida y de la situación medioambiental especial de un ser humano, están sobrecargados, de tal manera que el cuerpo no puede hacer inofensivos a los radicales libres en un grado suficiente. En tales casos, es necesario estimular o apoyar a los sistemas anti-oxidativos propios del cuerpo mediante la ingestión de suplementos alimentarios especiales (formulaciones de micronutrientes a base de vitaminas y elementos traza (oligoelementos)). En el caso de un tratamiento de esta índole, la cantidad de los medicamentos administrados, o bien de las sustancias suplementarias ingeridas, deberá ser adaptada a la carga real del cuerpo con radicales libres.

Idealmente, la determinación de la carga por radicales libres debe poderse llevar a cabo por el propio paciente respectivo sin gran esfuerzo, de una manera rápida y barata. Tal determinación se puede llevar a cabo, por lo tanto, en particular con ayuda de muestras de orina.

El documento de patente de los EE.UU. US-5.726.063 describe indoles sustituidos con arilo en la posición 2 para la determinación colorimétrica del dialdehído malónico y de otros enaldehídos como índices de la peroxidación de lípidos en medios acuosos.

Descripción del invento

El presente invento está basado, por consiguiente, en la misión de determinar el estado redox en la orina de una manera sencilla, es decir a simple vista. Por la expresión "determinación del estado redox" se ha de entender en este contexto la obtención de una información cuantitativa, semicuantitativa o cualitativa acerca de la concentración o bien de la presencia de radicales libres en el cuerpo de un ser humano, es decir acerca de la carga oxidativa del organismo. Como una sustancia indicadora para esta información sirve el dialdehído malónico en la orina, pudiéndose determinar, no obstante, eventualmente también otras sustancias relevantes.

El problema planteado por esta misión se resuelve mediante un estuche para la determinación del estado redox en la orina, que comprende:

(a): por lo menos un reactivo seleccionado entre el conjunto de los compuestos de la fórmula general (I)

1

\quad: en la que R_{1} representa H o alquilo de C_{1}-C_{10}, y

\quad: R_{2} representa alquilo de C_{1}-C_{10}, y

\quad: R_{3} y R_{4}, independientemente uno de otro, representan H, alquilo de C_{1}-C_{10},

\quad: arilo de C_{6}-C_{14}, NH_{2}, NHR, NR_{2}, NHCOR, OH, OR, OCOR, SH, SR, F, Cl, Br, CF_{3} o CCl_{3},

\quad: estando los grupos arilo eventualmente sustituidos con uno o varios sustituyentes seleccionados entre el conjunto que consta de alquilo de C_{1}-C_{6}, NH_{2}, NHR, NR_{2}, NHCOR, OH, OR, OCOR, SH, SR, F, Cl, Br, CF_{3} y CCl_{3}, y

\quad: representando R en cada caso un alquilo de C_{1}-C_{6}, y pudiéndose escoger varios grupos R eventualmente de modo independiente unos de otros,

(b): por lo menos un ácido, y

(c): una escala de colores destinada a la comparación visual de colores, asignándose a los colores individuales de la escala un determinado estado redox de la orina que se ha de investigar.

De acuerdo con otra forma de realización del invento, se pone a disposición también un procedimiento para la determinación del estado redox en la orina, que comprende las siguientes etapas:

(a): entremezclar una muestra de orina que se ha de investigar con

(i): por lo menos un reactivo seleccionado entre el conjunto de los compuestos de la fórmula general (I)

2

\quad: en la que R_{1} representa H o alquilo de C_{1}-C_{10}, y

\quad: R_{2} representa alquilo de C_{1}-C_{10}, y

\quad: R_{3} y R_{4}, independientemente uno de otro, representan H, alquilo de C_{1}-C_{10}, arilo de C_{6}-C_{14}, NH_{2}, NHR, NR_{2}, NHCOR, OH, OR, OCOR, SH, SR, F, Cl, Br, CF_{3} o CCl_{3},

\quad: y

(ii): por lo menos un ácido y

(b): después de que se haya ajustado una coloración estable de la muestra, comparar visualmente la coloración de la muestra con una escala de colores, estando asignado a los colores individuales de la escala un determinado estado redox de la orina que se ha de investigar.

El estuche conforme al invento y el procedimiento conforme al invento están basados en una reacción cromática, que manifiesta el reactivo de la fórmula (I) en condiciones ácidas al entremezclarlo con la muestra de orina que se ha de investigar. Esta reacción cromática conduce a la formación de un colorante que está coloreado de una manera característica para el reactivo inicial, siendo la intensidad de la coloración dependiente de la carga oxidativa sobre el organismo. En este caso, la coloración es tanto más intensa cuanto más fuerte sea esta carga, es decir cuanto más alta sea la concentración de radicales libres en el cuerpo. Por regla general, el color de la muestra, que es perceptible a simple vista, después de la formación del colorante, es influido también por el color inicial de la orina investigada.

Esta reacción cromática es provocada en particular por la presencia del dialdehído malónico en la orina investigada. El dialdehído malónico es un producto de descomposición de determinados hidroperóxidos, que se forman mediante la oxidación de ácidos grasos insaturados de la membrana celular en el organismo. Puesto que el estrés oxidativo conduce a una oxidación aumentada de los lípidos de la célula, éste da lugar también a un aumento de la concentración del dialdehído malónico en la orina. Este aumento se puede comprobar con ayuda del estuche conforme al invento y por medio del procedimiento conforme al invento, de tal manera que, en particular en dependencia de la intensidad de la carga, se puedan adoptar medidas en contra de ésta, tales como p.ej. el reforzamiento de la defensa anti-oxidativa mediante ingestión de vitaminas apropiadas y elementos traza y/o modificación del modo de vivir (hábito de fumar, alimentación, entorno de vivienda y trabajo).

La determinación del estado redox con ayuda del estuche conforme al invento, o mediante el procedimiento conforme al invento, se efectúa entremezclando entre sí el reactivo, el ácido y la muestra de orina a la temperatura ambiente, después de lo cual se ajusta la coloración, dependiente en particular de la intensidad de la carga oxidativa. La reacción cromática está terminada, por regla general, en el transcurso de 15 a 60 minutos, y, en formas de realización preferidas, en el transcurso de 15 a 30 minutos. Después de esto, es decir tan pronto como no aumente ya la intensidad de la coloración, se comprueba esta intensidad mediante comparación con una escala de colores, es decir a simple vista. En este caso, la escala de colores consta de un cierto número de elementos discretos de color, que están dispuestos de manera correspondiente a su intensidad y cuyos colores corresponden a la coloración de la solución de muestra, después de haberse terminado la reacción cromática, según sea el estado redox.

Breve descripción de los dibujos

Las Figuras 1 hasta 3 muestran unas formas de realización preferidas de sistemas de dos o más cámaras, utilizables conforme al invento.

Las Figuras 4 hasta 6 muestran unas formas de realización preferidas de tiras de ensayo, utilizables conforme al invento.

Descripción de formas de realización preferidas

En el caso de los reactivos de la fórmula general (I) se trata de derivados de indol. En la fórmula (I) R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} pueden representar, entre otras cosas, un grupo alquilo con 1 a 10 átomos de carbono. Ejemplos de tales grupos alquilo son metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, sec.-butilo, iso-butilo, terc.-butilo, pentilo y hexilo. Se prefieren los grupos alquilo con 1 a 6 átomos de carbono y se prefieren especialmente los que tienen de 1 a 4 átomos de carbono. Un grupo alquilo especialmente preferido es metilo.

En la fórmula (I) R^{3} y R^{4} pueden representar, entre otras cosas, también un grupo arilo con 6 a 14, de manera preferida 6 a 10 átomos de carbono. Este grupo arilo puede estar eventualmente sustituido con uno o varios sustituyentes seleccionados entre el conjunto que consta de alquilo de C_{1}-C_{6}, NH_{2}, NHR, NR_{2}, NHCOR, OH, OR, OCOR, SH, SR, F, Cl, Br, CF_{3} y CCl_{3}, representando R en cada caso un alquilo de C_{1}-C_{6}, y pudiéndose escoger varios grupos R eventualmente de modo independiente unos de otros. Un grupo arilo especialmente preferido es fenilo.

En la fórmula (I), R^{3} y R^{4} pueden representar también NH_{2}, NHR, NR_{2}, NHCOR, OH, OR, OCOR, SH, SR, F, Cl, Br, CF_{3} o CCl_{3}, representando R en cada caso un alquilo de C_{1}-C_{6}, y pudiéndose escoger varios grupos R eventualmente de modo independiente unos de otros. En el caso de estos grupos se trata en particular de sustituyentes con un efecto mesómero positivo. Un grupo especialmente preferido de este tipo es metoxi.

Reactivos preferidos de la fórmula general (I) son: 2-metil-indol y 1,2-dimetil-indol.

Estos reactivos se prefieren, en particular a la vista de su estabilidad o bien de la estabilidad en almacenamiento a largo plazo de sus soluciones y/o a la vista de su disponibilidad en una forma (muy) pura.

Conforme al invento se utiliza un ácido, pudiéndose tratar de un ácido inorgánico o de un ácido orgánico. Ácidos apropiados son p.ej. ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido metanosulfónico, ácido cítrico, ácido oxálico, ácido trifluoroacético o ácido tricloroacético. Se emplea de manera especialmente preferida el ácido clorhídrico.

El reactivo y/o el ácido se pueden emplear en forma de una solución en el seno de un disolvente apropiado. En principio, son apropiados todos los disolventes que sean miscibles con agua y que no actúen de una manera fuertemente tóxica. Son apropiados en particular alcoholes inferiores, tales como metanol, etanol, propanol, isopropanol o butanol, pero en sistemas cerrados por ejemplo también acetonitrilo, tetrahidrofurano o hexametil-triamida de ácido fosfórico. Se prefieren etanol e isopropanol, entre los cuales se prefiere especialmente el citado en último lugar.

Cuando el reactivo se emplea en forma de una solución, su concentración en ésta es, por regla general, de 0,1 a 50 mmol/l, de manera preferida de 5 a 15 mmol/l, de manera especialmente preferida de 7 a 12 mmol/l.

Cuando el ácido se emplea en forma de una solución, su concentración en ésta es, por regla general, de 0,1 a 5 mol/l, de manera preferida de 0,5 a 1,5 mol/l, de manera especialmente preferida de 0,9 a 1,2 mol/l.

De manera preferida, como ácido se emplea una solución de ácido clorhídrico en metanol, etanol o isopropanol, prefiriéndose especialmente una solución de ácido clorhídrico en isopropanol.

Puesto que la coloración de la muestra de orina investigada depende, por regla general, también del color de la orina que se ha de investigar, es decir de su coloración más o menos intensa de amarillo, es conveniente poner a disposición diferentes escalas de colores para los respectivos colores de las orinas iniciales. Estas escalas pueden estar dispuestas en particular en forma de una matriz de colores, verificándose que la primera línea de la matriz contiene los colores de orinas que entran en cuestión, cuya coincidencia se comprueba primeramente mediante comparación con la orina sin tratar. La comparación del color con el de la muestra después de haberse terminado la reacción cromática se lleva a cabo entonces dentro de aquella columna de la matriz cromática, que había sido comprobada y establecida por la coincidencia del color de la orina inicial.

En lo que se refiere al esfuerzo para llevar a cabo la determinación del estado redox con ayuda del estuche conforme al invento, o por medio del procedimiento conforme al invento, los componentes necesarios para ello, es decir el reactivo y el ácido, se ponen a disposición o se emplean de tal forma que su distribución en porciones o su manipulación sean simplificadas todo lo más que sea posible. No obstante, en este contexto se ha de tener en cuenta que ciertas soluciones del reactivo tienen, en condiciones ácidas, una escasa estabilidad en almacenamiento, de tal manera que el reactivo y el ácido se pueden poner en contacto uno con otro tan sólo poco antes de llevar a cabo la determinación propiamente dicha.

De acuerdo con una forma especial de realización del invento, el reactivo o una solución de éste se encierra, por lo tanto, en un recipiente, y de este modo se separa con respecto del ácido, pudiéndose este recipiente destruir o abrir fácilmente mediante una acción mecánica deliberada, y estando dispuesto este recipiente de tal manera que el reactivo entra en contacto directamente con el ácido y/o con una solución de éste y/o con la muestra de orina por medio de la destrucción o la apertura del recipiente. En el caso del citado recipiente se puede tratar p.ej. de una ampolla de vidrio. Esta ampolla de vidrio puede estar dispuesta, por su parte, dentro de un recipiente, que contiene el ácido o bien una solución de éste, y al que se le añade la muestra de orina para realizar la determinación. Por el hecho de que la ampolla de vidrio se rompe dentro del recipiente, de tal manera que se entremezclan el contenido de la ampolla y el del recipiente, se puede inducir la reacción cromática.

De manera correspondiente, se puede encerrar el ácido, en lugar del reactivo, en un recipiente separado, que está dispuesto tal y como se ha descrito anteriormente, y que se abre o destruye de una manera correspondiente.

Una forma de realización adicional de un sistema de dos cámaras, utilizable conforme al invento, se representa esquemáticamente en la Figura 1. El sistema representado en ésta consta de dos recipientes 11 y 16, que están provistos en cada caso de dos roscas cilíndricas 12 ó 14, a través de las cuales éstos se pueden unir uno con otro. Para realizar esta unión, una boca 13, estructurada en forma puntiaguda, del recipiente 11 perfora a una membrana 15, con la que está cerrado el recipiente 16. En el recipiente 16 se encuentra uno de los componentes 17 de la reacción (el reactivo o el ácido), mientras que el otro componente (el ácido o el reactivo) está contenido en el recipiente 11, y accede al recipiente 16 tan sólo después de haberse perforado la membrana 15. De manera ventajosa, el recipiente 11 se puede estructurar como una botella de material sintético, que puede ser aplastada, a fin de transferir su contenido al recipiente 16. En este caso, la muestra de orina que se ha de investigar puede ser aspirada también dentro del recipiente 11, antes de que sea transferida al recipiente 16 en común con uno de los componentes de la reacción.

Un sistema de dos cámaras, utilizable conforme al invento, puede estar estructurado también tal y como se muestra esquemáticamente en la Figura 2. El sistema mostrado en ella consta de dos recipientes 23 y 27, que están provistos de roscas cilíndricas 25 y 26, y que de este modo pueden ser unidos herméticamente uno con otro. En el recipiente 23, por medio de una membrana 24 se forma una cámara 22, que contiene uno de los componentes de la reacción (el reactivo o el ácido). Mediante apriete de la espiga puntiaguda 21 se perfora la membrana 24, de tal manera que el componente de la reacción, que está contenido en la cámara 22, entra en contacto con el otro componente 28 (el ácido o el reactivo), que está contenido en el recipiente 27. La muestra de orina que se ha de investigar se puede introducir en el recipiente 27 ventajosamente antes de haberse perforado la membrana 24, pero eventualmente también después de haber entremezclado el reactivo y el ácido.

En una modificación del sistema mostrado en la Figura 2, se puede suprimir también la espiga puntiaguda 21, cuando la rosca y la membrana están estructuradas de tal manera que la membrana se desgarre al enroscar conjuntamente los recipientes.

Otra variante ventajosa de un sistema de múltiples cámaras, utilizable conforme al invento, se muestra en la Figura 3. También este sistema consta de dos recipientes 34 y 37, que pueden ser unidos uno con otro a través de roscas cilíndricas 35 y 36. El reactivo y el ácido están contenidos en este caso en dos cámaras 32 y 33 que están estructuradas en unión con el recipiente 34, y se ponen en contacto una con otra mediante accionamiento del troquel 31. En el caso de este sistema, el recipiente 37 puede estar estructurado ventajosamente en forma de un vaso que sirve directamente para la recepción de la muestra de orina.

En lo que se refiere a la dosificación y a la manipulación del reactivo, éste puede presentarse ventajosamente, aparte de en una forma pura, también en forma de un material triturado con un material de soporte neutro en forma de un polvo, una tableta o sobre un soporte sólido (p.ej. una tira de material sintético). Como materiales de soporte neutros entran en cuestión p.ej.: sales neutras de metales alcalinos, tales como p.ej. cloruro sódico, o soportes inertes que tienen una densidad más alta, tales como p.ej. SiO_{2}. La relación del peso del reactivo al del material de soporte es en este caso, por regla general, desde 1 : 0 (el reactivo puro) hasta 1 : 1.000, de manera preferida desde 1 : 0 hasta 1 : 200.

Para poder facilitar la realización de la determinación del estado redox, el estuche conforme al invento puede contener un recipiente destinado a la recepción directa de la orina segregada. Este recipiente puede estar estructurado p.ej. en forma de un sencillo vaso. Por lo demás, el estuche conforme al invento puede contener p.ej. un medio de pipeteo. Éste puede servir en particular para transferir una cantidad medida de la orina que se ha de investigar desde el recipiente anteriormente citado, que está destinado a la recepción de la muestra, a aquel recipiente, en el que se lleva a cabo la reacción cromática. Como medio de pipeteo se pueden utilizar en particular las pipetas de un solo uso, usuales en el comercio.

Por lo demás, el estuche conforme al invento puede contener un recipiente de análisis, en el que la reacción cromática se lleva a cabo mediante entremezcladura del reactivo, del ácido y de la muestra de orina. De acuerdo con una forma de realización especialmente ventajosa, la escala de colores puede estar unida con el recipiente de análisis de tal manera que la solución de muestra y los elementos de color individuales de la escala se encuentren en una proximidad espacial inmediata, de tal manera que la comparación de los colores se puede llevar a cabo directamente, es decir de un vistazo.

De acuerdo con otra forma ventajosa de realización del invento, el reactivo y el ácido se incorporan ambos en forma sólida en una tira de ensayo, que se puede sumergir directamente en la muestra que se ha de investigar. En este caso, como ácido se emplea de manera preferida ácido cítrico, ácido oxálico o ácido tricloroacético.

Una sencilla forma de realización de una tira de ensayo de este tipo se representa esquemáticamente en la Figura 4. En el caso de la tira de ensayo 44 allí mostrada, el ácido se ha aplicado en dos zonas discretas 41 y 43, entre las que se encuentra una zona 42, que contiene el reactivo. Cuando la tira de ensayo se ha sumergido en la muestra de orina que se ha de investigar, el ácido se difunde dentro de la zona 42 con reactivo, donde se inicia la reacción cromática. Después de haberse terminado ésta, el color de esta zona se compara con la escala de colores.

Una tira de ensayo, utilizable conforme al invento, puede estar estructurada también en forma de una cajita de ensayo, mostrada esquemáticamente en la Figura 5. La cajita 52 contiene una tira de material de velo, sobre la que se aplica la muestra de orina en la zona de la abertura 53. La muestra se propaga entonces a través de la tira en la dirección indicada por la flecha 51. En la zona 54 se aplica el ácido. Éste es recogido por la solución en su camino hacia la zona 55, que contiene el reactivo, iniciándose la reacción cromática en esta zona 55. La comparación del color se puede llevar a cabo entonces a través de una correspondiente abertura.

Conforme al invento, una tira de ensayo puede estar estructurada, o se puede utilizar, también tal como se muestra esquemáticamente en la Figura 6. Aquí, el ácido se encuentra en la zona 63 y el reactivo se encuentra en la zona 62 de la tira 61. La tira 61 se sumerge en la muestra de orina 65 que se ha de investigar, la cual se encuentra en el fondo del recipiente 64. Después de esto, la solución de muestra se propaga mediante fuerzas capilares hacia arriba. De tal modo, ésta pasa a través de la zona 63, en donde recoge al ácido, antes de que en la zona 62 se produzca la reacción cromática.

Ejemplos

El presente invento se ilustra más detalladamente con ayuda de los siguientes Ejemplos.

Ejemplo 1 Determinación del estado redox

De acuerdo con tres variantes diferentes, los componentes (el reactivo y el ácido), indicados en cada caso en la siguiente Tabla 1, se mezclan, en las cantidades asimismo indicadas en la Tabla 1, en cada caso con 1 ml de una orina matinal reciente. La mezcla obtenida de esta manera se agita enérgicamente dentro de un recipiente cerrado y se deja reposar. Después de 15 a 20 minutos la coloración que se ha formado se compara con una escala de colores.

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 1

3

Ejemplo 2 Investigación del comportamiento de reactivos especiales

En este Ejemplo se investigó el comportamiento de los siguientes reactivos A hasta E (verificándose que los reactivos C hasta E no pertenecen a los reactivos utilizables conforme al invento):

4

Como "orina modelo" se utilizaron en este caso soluciones acuosas de dialdehído malónico, y ciertamente con unas concentraciones de 10 \mumol/l o bien 1,0 \mumol/l. (Las concentraciones típicas del dialdehído malónico en la orina humana están situadas en el orden de magnitud de 0,5 a 5 \mumol/l).

Como solución del reactivo sirvió una solución de 100 mg de un reactivo (A hasta E), disueltos en 50 ml de isopropanol. Como solución del ácido sirvió una mezcla de 25 ml de una solución acuosa de HCl al 25% y de 50 ml de isopropanol.

La investigación se efectuó mezclando en cada caso 1 ml de la solución de ensayo con 1 ml de la solución del reactivo y 1 ml de la solución del ácido. La mezcla obtenida de esta manera se agitó enérgicamente dentro de un recipiente cerrado y se dejó reposar a 22ºC. Las coloraciones establecidas se determinaron entonces en cada caso una vez después de 15 a 20 minutos, y una vez más después de 60 minutos, y se indican en la siguiente Tabla 2.

Las coloraciones individuales se determinaron en este caso, respectivamente, mediante comparación con las tablas o los abanicos de colores patrón HKS® (abanicos de retículos "K", edición 1993, de la entidad Hostmann-Steinberg, Celle, distribuidos por la entidad HKVdruck GmbH, Stuttgart), habiéndose indicado en la Tabla 2 en cada caso el código de color (p.ej. "45K") y la saturación o bien el grado de luminosidad (p.ej. 60%) en el caso de un grado de gris de 0%.

Los reactivos A y B proporcionan tonos de color rojo, el reactivo C proporciona un tono de color gris azulado y los reactivos D y E proporcionan unos tonos de color azul.

TABLA 2

5

Con ayuda de estas investigaciones se comprobaron los siguientes escalonamientos de la velocidad de reacción (en cada caso en una secuencia decreciente) de los reactivos individuales:

(a) en el caso de una concentración de dialdehído malónico de 10 \mumol/l:

A = B = C > D > E

(b) en el caso de una concentración de dialdehído malónico de 1,0 \mumol/l:

A > B > C > > D > E

En una investigación análoga con variación del ácido utilizado (de un modo correspondiente al Ejemplo 1, Variante 2; concentración de dialdehído malónico = 10 \mumol/l) se comprobó el siguiente escalonamiento de la velocidad de reacción (en un orden de sucesión decreciente):

ácido clorhídrico >> ácido tricloroacético > ácido oxálico > ácido cítrico.

Ejemplo 3 Seguimiento del estado redox al administrar sustancias micronutrientes con acción oxidante

Partiendo de muestras de orina, no cargadas de manera oxidativa, con unas coloraciones de amarillo de diversa intensidad (de un modo correspondiente a los colores de referencia HKS® 1K, 3K y 5K; compárense los datos dados en el Ejemplo 2) y con ayuda de series de diluciones de dialdehído malónico, para cada color de orina inicial se estableció una escala de colores, cuyos escalonamientos se designaron en lo que sigue con

I (escasa carga oxidativa) hasta III (fuerte carga oxidativa).

En primer lugar, las muestras de orina matinal de 61 voluntarios sanos se investigaron en cuanto a su estado redox, procediéndose en particular tal como en el Ejemplo 1, Variante 2. La investigación se efectuó en la misma mañana de la toma de las muestras. En este caso, se obtuvo la siguiente frecuencia de los escalones de carga individuales:

I: 41 voluntarios

II: 15 voluntarios

III: 5 voluntarios

Además de esto, las muestras se investigaron con ayuda de unas correspondientes tiras de ensayo usuales en el comercio, en cuanto a su valor del pH y a su contenido en ácido ascórbico, no pudiéndose comprobar ninguna correlación entre estos valores y el estado redox determinado conforme al invento.

A tres voluntarios, cuyas muestras presentaron al realizar la primera investigación una fuerte carga oxidativa (etapa III), se les administró luego, todavía en el mismo día (día 1), después de la primera toma de muestras de orina, una dosis de una formulación de micronutrientes, usual en el comercio, con los siguientes componentes que tienen una acción anti-oxidante:

vitamina A:	2.500 U.I. = 0,75 g
vitamina C:	950 mg
vitamina E:	150 mg
beta-caroteno:	15 mg

y los siguientes elementos traza (oligoelementos) que son necesarios para diversas enzimas que tienen una acción anti-oxidante:

selenio:	50 \mug
hierro:	0,8 mg
zinc:	10 mg
manganeso:	2 mg
cobre:	0,5 mg.

En cada caso, por la mañana de los días siguientes (días 2 hasta 4) se tomaron de los tres voluntarios, de nuevo, muestras de orina, y éstas se investigaron como en el primer día, no repitiéndose, sin embargo, en los días 2 hasta 4 la administración de la citada formulación de micronutrientes. Los resultados de las investigaciones de estas muestras de orina se indican en la siguiente Tabla 3.

TABLA 3

Voluntario	Día 1	Día 2	Día 3	Día 4
1	III	I	II	III
2	III	I	II	II
3	III	II	III	III

Esta investigación, en particular la escasa carga comprobada en el primer día después de la administración de la formulación que tiene una acción anti- oxidante (día 2), pone de manifiesto claramente que el estuche conforme al invento y respectivamente el procedimiento conforme al invento son apropiados para la evaluación del estado redox.

Claims

1. Estuche para la determinación del estado redox en la orina, que comprende:

6

\quad: en la que R^{1} representa H o alquilo de C_{1}-C_{10}, y

\quad: R^{2} representa alquilo de C_{1}-C_{10}, y

\quad: R^{3} y R^{4}, independientemente uno de otro, representan H, alquilo de C_{1}-C_{10}, arilo de C_{6}-C_{14}, NH_{2}, NHR, NR_{2}, NHCOR, OH, OR, OCOR, SH, SR, F, Cl, Br, CF_{3} o CCl_{3}, estando los grupos arilo eventualmente sustituidos con uno o varios sustituyentes seleccionados entre el conjunto que consta de alquilo de C_{1}-C_{6}, NH_{2}, NHR, NR_{2}, NHCOR, OH, OR, OCOR, SH, SR, F, Cl, Br, CF_{3} y CCl_{3}, y

(b): por lo menos un ácido, y

2. Estuche de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque el reactivo es 2-metil-indol o 1,2-dimetil-indol.

3. Estuche de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque el ácido es ácido clorhídrico.

4. Estuche de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque el reactivo está presente en forma de una solución en el seno de por lo menos un disolvente.

5. Estuche de acuerdo con la reivindicación 4, caracterizado porque la concentración del reactivo en la solución es de 0,1 a 50 mmol/l.

6. Estuche de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque el ácido está presente en forma de una solución en el seno de por lo menos un disolvente.

7. Estuche de acuerdo con la reivindicación 6, caracterizado porque la concentración del ácido en la solución es de 0,1 a 5,0 mol/l.

8. Estuche de acuerdo con una de las reivindicaciones 4 a 7, caracterizado porque el disolvente comprende isopropanol.

9. Estuche de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque el reactivo, o una solución de éste, se contiene y se separa del ácido en un recipiente cerrado, que se puede destruir o abrir fácilmente mediante una acción mecánica deliberada, y que está dispuesto de tal manera que el reactivo entra directamente en contacto con el ácido y/o con una solución de éste y/o con la muestra de orina, mediante la destrucción o apertura del recipiente.

10. Estuche de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque el ácido, o una solución de éste, se contiene y se separa del reactivo en un recipiente cerrado, que se puede destruir o abrir fácilmente mediante una acción mecánica deliberada, y que está dispuesto de tal manera que el ácido entra directamente en contacto con el reactivo y/o con una solución de éste y/o con la muestra de orina, mediante destrucción o apertura del recipiente.

11. Estuche de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque el reactivo está presente en forma sólida.

12. Estuche de acuerdo con la reivindicación 11, caracterizado porque el reactivo está presente en forma de un material triturado con un material de soporte neutro.

13. Estuche de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado porque por lo demás contiene uno de los siguientes elementos: (a) un recipiente para recibir directamente la orina segregada; (b) un medio de pipeteo; (c) un recipiente de análisis, en el que se ponen en contacto la muestra de orina, el reactivo y el ácido.

14. Estuche de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizado porque contiene un recipiente de análisis, en el que se ponen en contacto la muestra de orina, el reactivo y el ácido, y porque la escala de colores está unida con el recipiente de análisis de tal manera que la comparación de colores entre la solución de muestra y la escala de colores se pueda llevar a cabo directamente por medios visuales.

15. Estuche de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque el reactivo y el ácido se incorporan ambos en forma sólida en una tira de ensayo, que se sumerge directamente en la muestra que se ha de investigar.

16. Estuche de acuerdo con la reivindicación 15, caracterizado porque el ácido es ácido cítrico, ácido oxálico o ácido tricloroacético.

17. Procedimiento para la determinación del estado redox en la orina, que comprende las siguientes etapas:

(a): entremezclar una muestra de orina que se ha de investigar con

7

\quad: en la que R^{1} representa H o alquilo de C_{1}-C_{10}, y

\quad: R^{2} representa alquilo de C_{1}-C_{10}, y

\quad: R^{3} y R^{4}, independientemente uno de otro, representan H, alquilo de C_{1}-C_{10}, arilo de C_{6}-C_{14}, NH_{2}, NHR, NR_{2}, NHCOR, OH, OR, OCOR, SH, SR, F, Cl, Br, CF_{3} o CCl_{3},

\quad: estando los grupos arilo eventualmente sustituidos con uno o varios sustituyentes seleccionados entre el conjunto que consta de

\quad: alquilo de C_{1}-C_{6}, NH_{2}, NHR, NR_{2}, NHCOR, OH, OR, OCOR, SH, SR, F, Cl, Br, CF_{3} y CCl_{3}, y

\quad: y

(ii): por lo menos un ácido y

18. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 17, caracterizado porque el reactivo es 2-metil-indol o 1,2-dimetil-indol.

19. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 17 ó 18, caracterizado porque el ácido es ácido clorhídrico.

20. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 17 a 19, caracterizado porque el reactivo se emplea en forma de una solución en el seno de por lo menos un disolvente.

21. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 20, caracterizado porque la concentración del reactivo en la solución es de 0,1 a 50 mmol/l.

22. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 17 a 21, caracterizado porque el ácido se emplea en forma de una solución en el seno de por lo menos un disolvente.

23. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 22, caracterizado porque la concentración del ácido en la solución es de 0,1 a 5,0 mol/l.

24. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 20 a 23, caracterizado porque el disolvente comprende isopropanol.

25. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 17 a 24, caracterizado porque el reactivo empleado, o una solución de éste, primeramente se contiene y se separa del ácido en un recipiente cerrado, que se puede destruir o abrir fácilmente mediante una acción mecánica deliberada, y que está dispuesto de tal manera que el reactivo entra directamente en contacto con el ácido y/o con una solución de éste y/o con la muestra de orina, mediante destrucción o apertura del recipiente.

26. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 17 a 24, caracterizado porque el ácido empleado, o una solución de éste, primeramente se contiene y se separa del reactivo en un recipiente cerrado, que se puede destruir o abrir fácilmente mediante una acción mecánica deliberada, y que está dispuesto de tal manera que el ácido entra directamente en contacto con el reactivo y/o con una solución de éste y/o con la muestra de orina, mediante destrucción o apertura del recipiente.

27. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 17, caracterizado porque el reactivo se emplea en forma sólida.

28. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 27, caracterizado porque el reactivo se emplea en forma de un material triturado con un material de soporte neutro.

29. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 17, caracterizado porque el reactivo y el ácido se incorporan en forma sólida en una tira de ensayo, que se sumerge directamente en la muestra que se ha de investigar.

30. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 29, caracterizado porque el ácido es ácido cítrico, ácido oxálico o ácido tricloroacético.