ES2211295B1 - Tetrahidro-beta-carbolinas fenolicas como antioxidantes. - Google Patents
Tetrahidro-beta-carbolinas fenolicas como antioxidantes.Info
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Abstract
Tetrahidro-beta-carbolinas fenólicas como antioxidantes. La presente invención se encuadra en el sector químico y describe un tipo de moléculas antioxidantes basadas en la estructura de tetrahidro-beta-carbolinas con grupos fenólicos, que son eficaces secuestradores de radicales libres, pudiendo terminar los procesos de peroxidación lipídica. La invención tiene que ver con la preparación de los compuestos a partir de precursores naturales (aminoácidos o sus derivados, aminas y aldehídos fenólicos) y su posible aplicación en preparados farmacéuticos, nutracéuticos, alimentos funcionales, y para la prevención del estrés oxidativo.
Description
Tetrahidro-beta-carbolinas
fenólicas como antioxidantes.
La presente invención se encuadra en el sector
químico y describe un tipo de moléculas antioxidantes basadas en la
estructura de
tetrahidro-beta-carbolinas con
grupos fenólicos, que son eficaces secuestradores de radicales
libres, pudiendo terminar los procesos de peroxidación lipídica. La
invención tiene que ver con la preparación de los compuestos a
partir de precursores naturales (aminoácidos o sus derivados,
aminas y aldehídos fenólicos) y su posible aplicación en preparados
farmacéuticos, nutracéuticos, alimentos funcionales, y para la
prevención del estrés oxidativo.
Numerosos procesos biológicos generan intermedios
muy reactivos con electrones desapareados. Se conocen como
radicales libres, y se producen desde reacciones de tipo enzimático
y no enzimático. La naturaleza tóxica de estos radicales se
relaciona con el hecho de que poseen un electrón desapareado que
los hace extremadamente reactivos para interaccionar con otros
radicales, con especies no radicálicas y con macromoléculas como
DNA, lípidos, proteínas y carbohidratos. La mayoría de los
organismos vivos contienen antioxidantes químicos como el
alfa-tocoferol (vitamina E), el ácido ascórbico, el
glutatión y diferentes enzimas antioxidantes como la superóxido
dismutasa, la catalasa y la glutatión peroxidasa que inactivan los
radicales y peróxidos.
Los radicales libres se asocian con un amplio
rango de patologías y enfermedades como la isquemia,
ateroesclerosis, trombosis y embolias, afecciones alérgicas e
inflamatorias como el asma bronquial, artritis reumatoide,
Alzheimer, Parkinson, envejecimiento, cataratas, diabetes, y las
neoplasias. Una posible explicación para estas patologías es que por
razones desconocidas, los agentes de protección contra el daño por
radicales no son suficientemente activos para proteger los tejidos.
La peroxidación lipídica, y la oxidación de proteínas y del ADN
causada por un exceso de generación de radicales puede constituir
una vía de daño significativo en las patologías y enfermedades
anteriores.
Un número de trabajos han evaluado las moléculas
del tipo tetrahidro-beta-carbolina
por su actividad farmacológica como agentes antihipertensivos
(Patente US 4361566, Nov 30, 1982), antimetastásicos (Patente US
6069150, May 30, 2000) o neuromoduladores (Patente US 5861409, Jan.
19, 1999). Moléculas del tipo
tetrahidro-beta-carbolina han
demostrado eficacia como agentes neuroprotectores contra la
peroxidación lipídica y la intoxicación por cianuro potásico en
ratones (Kawashima, et al. Chem. Pharm. Bull. 43,
783-785, 1995). Pari et al. (J. Biol. Chem. 275,
2455, 2000) describieron que determinadas
beta-carbolinas pueden actuar como antioxidantes al
acumularse en tejidos humanos.
Tetrahidro-beta-carbolinas del tipo
de pinolina ejercen actividad antioxidante in vitro similar
al potente antioxidante indólico melatonina (Pähkla et al. J.
Pineal Res. 24. 96-101, 1998). También se ha
descrito el efecto protector de las beta-carbolinas
sobre la peroxidación lipídica debida al agua oxigenada
(H_{2}O_{2}) (García, J.J. et al. 2000, Neurosci. Lett. 294,
1-4, 2000). Así pues, los compuestos indólicos del
tipo tetrahidro-beta-carbolina
pueden exhibir actividad antioxidante.
Actualmente se sabe que los compuestos fenólicos
poseen interesantes propiedades biológicas y químicas debido a sus
propiedades antioxidantes y a la capacidad de inactivar especies
reactivas de oxígeno (ROS). Por ello, se vienen estudiando estos
compuestos para prevenir enfermedades asociadas con el estrés
oxidativo como cáncer, enfermedades cardiovasculares, inflamación,
enfermedades neurodegenerativas y otras. Es bien conocida su acción
contra la peroxidación lipídica, y actualmente existe considerable
interés en los efectos beneficiosos para la salud de ciertos
alimentos y bebidas, -especialmente de vino y té-, ricos en
compuestos fenólicos. El interés se ha centrado en los
tocoferoles, el ácido ferrúlico, las catequinas, y los flavonoides.
Algunos flavonoides y polifenoles tienen actividad antitumoral,
antialérgica, antiplaquetaria, anti-isquémica, y
anti-inflamatoria. Otros, pueden ejercer actividad
antioxidante al inhibir enzimas como lipo-oxigenasas
y ciclo-oxigenasas, quelando iones metálicos, y más
importante, como secuestradores de radicales libres. Esta última
actividad se debe a los grupos hidroxilo fenólicos. Los ácidos
fenólicos, polifenoles y particularmente los flavonoides secuestran
radicales libres donando hidrógeno del grupo hidroxilo reactivo que
forma nuevos radicales fenoxilo estabilizados por resonancia. Son
antioxidantes donadores de hidrógeno.
Un antioxidante se define como una sustancia que
en bajas concentraciones comparado con un sustrato oxidable,
retrasa o previene su oxidación. La presente invención describe
nuevos antioxidantes del tipo de
tetrahidro-beta-carbolinas fenólicas
que son a la vez secuestradores de radicales e inhibidores de la
peroxidación lipídica. En esta invención se conjugan la actividad
antioxidante de la
tetrahidro-beta-carbolina y su
anillo indólico (ver Formula I), similar a compuestos como
melatonina, con la actividad adicional que aportan los clásicos
sustituyentes fenólicos de la vainillina, salicilaldehido,
siringaldehido, etc. Se consigue, pues, un efecto añadido como
antioxidantes e inhibidores de radicales libres. En los tests
realizados, los nuevos antioxidantes son comparables a otros
antioxidantes como el Trolox (análogo soluble de la Vitamina E) y
el ácido ascórbico. Los compuestos descritos podrían utilizarse en
aplicaciones terapéuticas, y en aplicaciones no médicas para la
estabilización de compuestos susceptibles del deterioro oxidativo,
en la preservación de alimentos o productos relacionados, y en
complementos nutricionales, nutracéuticos, alimentos funcionales o
de parafarmacia por sus propiedades antioxidantes para prevenir el
estrés oxidativo.
Algunos compuestos con estructura de
tetrahidro-beta-carbolinas se
encuentran de manera natural en alimentos hasta en varios cientos de
mg/L (caso de la salsa de soja) y se forman durante la producción,
procesado y almacenado de alimentos. Los productos
tetrahidro-beta-carbolina de esta
invención se obtienen por reacción a partir de sustratos naturales
como el aminoácido triptófano, que es un aminoácido esencial en la
dieta, y los aldehídos aromáticos como vainillina, siringaldehído,
salicilaldehido, benzaldehído, que ocurren naturalmente en
extractos vegetales, y se utilizan habitualmente como aromatizantes
en alimentos. La condensación para dar las
tetrahidro-beta-carbolinas fenólicas
que se describe en esta invención podría producirse o favorecerse
en determinados sustratos alimentarios que contengan triptófano y
aldehídos fenólicos o en complementos nutricionales
antioxidantes.
La presente invención presenta compuestos con
estructura de tipo
tetrahidro-beta-carbolinas fenólicas
de la Formula I
donde los sustituyentes R_{1},
R_{2}, R_{3}, R_{4}, pueden ser hidrógeno (H), hidroxilo
(OH) o metoxilo (OCH_{3}), R_{5} puede ser H, o bien COOH,
COOCH_{3}, COOCH_{2}CH_{3}, y R_{6} puede ser H ó OH, de
utilidad como antioxidantes y secuestradores de radicales
libres.
Se caracterizan por presentar capacidad de
donación de electrones y de átomos de hidrógeno contribuyendo a la
actividad antioxidante total e inhibidora de la peroxidación
lipídica y de otras macromoléculas. Los compuestos de esta
invención contienen a la vez un anillo indólico que es secuestrador
de radicales y también sustituyentes hidroxilo en el anillo
bencénico (fenoles) que aportan las características de
secuestradores de radicales peroxilo en la oxidación lipídica. Al
contener dos grupos reactivos pueden ser antioxidantes más potentes
porque actúan con dos mecanismos de secuestro de radicales:
transferencia electrónica simple y transferencia de hidrógeno.
La preparación de las sustancias de la Formula I
o extractos crudos de ellas, a partir de los compuestos puros de
partida, o a partir de extractos naturales de plantas,
microorganismos, o subproductos que contengan triptófano,
triptamina, sus análogos, 5-hidroxitriptofano,
5-hidroxitriptamina o los correspondientes ésteres
de aminoácido y compuestos aldehídos fenólicos (como extracto de
vainillina, de anisaldehído, siringaldehído, aldehído salicílico u
otros aldehídos aromáticos naturales similares), se realiza por
reacción en medios acuosos ácidos preferiblemente entre pH 1 y 3,
por calentamiento entre 45 y 100ºC, con posterior secado con
métodos convencionales. O alternativamente, por reacción del
aminoácido, éster de aminoácido o amina correspondiente con el
aldehído aromático en medio alcohólico a reflujo y posterior
acidificación para obtener las
tetrahidro-beta-carbolinas
fenólicas, que se secan y purifican por procedimientos
convencionales.
Al actuar como antioxidantes y secuestradores de
radicales libres, los productos anteriores puros, en extractos o
preparados que los contengan podrían utilizarse en preparados o
formulaciones farmacéuticas para la prevención y el tratamiento
terapéutico de enfermedades o afecciones relacionadas con los
radicales libres, en productos de parafarmacia, en alimentos
funcionales, complementos nutricionales y preparados nutracéuticos,
y en la industria alimentaria como potenciales antioxidantes, bien
como aditivos, o preferiblemente generados de manera natural a
través de procesos similares a los descritos aquí para su
formación.
Figura 1. Eliminación del radical
ABTS^{\bullet+} por compuestos de la presente invención y su
comparación con los antioxidantes Trolox (forma soluble en agua de
la vitamina E) y ácido ascórbico. Concentración final en el ensayo
10 \muM. Se observa que la capacidad inhibidora de este radical
es superior en los compuestos señalados que en los antioxidantes
comunes como Trolox y ácido ascórbico.
Figura 2. Inhibición de la oxidación lipídica
catalizada por Fe(II) (oxidación del ácido linoleico) in
vitro por los compuestos señalados así como de BHA
(Butil-hidroxianisol) y del Trolox. Se observa
inhibición significativa de la degradación lipídica medida como
formación de malondialdehído y de 4-hidroxinonenal
cuando se incuba en presencia de las
tetrahidro-beta-carbolinas fenólicas
de la invención.
Se han preparado compuestos del tipo
tetrahidro-beta-carbolina descritos
en esta invención (Fórmula I) en fase acuosa/ácida partiendo de
productos naturales como vainillina y/o aldehídos semejantes y
L-triptófano y/o sus análogos como
5-hidroxitriptófano, triptófano etil éster o aminas.
Los compuestos obtenidos se caracterizaron por
^{1}H-RMN y ^{13}C-RMN y se
analizaron mediante HPLC-fluorescencia y
absorbancia. Se utilizaron dos sistemas acoplados en serie para la
detección: fluorescencia (270 nm excitación y 343 nm emisión) y
absorbancia a 254 nm. Los productos se caracterizaron por
HPLC-MS con ionización de electrospray en modo
positivo. El proceso de producción es mediante una condensación
denominada de Pictet-Spengler realizada en un solo
paso en medio ácido entre pH 1 y pH 3, y temperatura entre 45 y
100ºC, preferentemente entre 60 y 80ºC. El aminoácido
L-triptófano reaccionó con aldehídos aromáticos o
extractos de ellos como benzaldehído, salicilaldehído,
anisaldehído, vainillina, y siringaldehído dando lugar a las
correspondientes
tetrahidro-beta-carbolina-3-carboxilato
fenólicas. Esta reacción ocurre por una ciclación intramolecular de
la base de Schiff proporcinando
tetrahidro-beta-carbolinas
1,3-disustituidas con diferentes sustituyentes en
el C-1 del anillo de tetrahidropirido dependiendo
del aldehído implicado.
Tetrahidro-beta-carbolinas
1,3-disustituídas contienen dos diastereoisómeros
(1S,3S a y 1R,3S b) que
pueden resolverse por RP-HPLC. La asignación de
los diastereoisómeros se basó en el NOE positivo de las señales de
H-1 y H-3 en el isómero cis
(a) así como en las señales de H-1,
C-1 y C-3 en RMN. Mediante
RP-HPLC se logra la separación de los dos
diastereoisómeros que pueden así obtenerse de manera pura.
Se produce la condensación entre el aminoácido
L-triptófano, análogos como
5-hidroxitriptófano o sus ésteres, o aminas
correspondientes como serotonina y triptamina en compuestos puros o
provenientes de extractos naturales o subproductos, y diferentes
aldehídos fenólicos de origen sintético o preferentemente de origen
natural para dar
tetrahidro-beta-carbolinas
fenólicas. Como procedimiento general el aminoácido
(L-Triptofano o derivados) disuelto en 0.05 N
H_{2}SO_{4} se agita con el correspondiente aldehído fenólico
aromático o un extracto de él entre 4 y 15 días, preferible 6 y 8
días, calentando para dar una mezcla de reacción que se seca por
procedimientos convencionales de secado como por ejemplo, secado en
aire caliente, por calor a vacío, atomización, o liofilización.
Un método alternativo de preparación de los
compuestos de la invención mucho más rápido, entre 2 y 10 horas,
preferiblemente 3 y 5 horas, consiste en la reacción del
triptofanato sódico seco previamente formado en medio básico
(hidróxido sódico) y evaporado a vacío, por reacción a reflujo con
el aldehído fenólico aromático en alcohol, preferiblemente metanol,
y posterior acidificación (adición de una disolución
metánolica-HCl en frío) con secado y purificación
posterior por métodos convencionales. Este mismo método alternativo
se puede aplicar con los otros derivados indólicos como ésteres de
triptófano, 5-hydroxitriptófano, triptamina o
serotonina mediante reacción con el aldehído fenólico en medio
alcohólico a reflujo y posterior acidificación con una solución de
HCl-metanol para obtener las
tetrahidro-beta-carbolinas
correspondientes.
El primer procedimiento se utiliza en la
preparación de productos conteniendo los compuestos de la invención
a partir de soluciones acuosas-ácidas que contengan el aminoácido
esencial triptófano, 5-hidroxitriptófano, sus
ésteres, o aminas y sustancias naturales aromatizantes como
vainillina o aldehído salicílico, siríngico o anisaldehído por
calentamiento prolongado y agitación. La formación de los
derivados
tetrahidro-beta-carbolina-3-carboxílico
fenólicos podría, así, generarse durante la producción o el
procesado de alimentos por una reacción similar a la descrita
arriba. En cambio el método alternativo en alcohol se utiliza para
lograr la preparación rápida y con buen rendimiento de los
compuestos objeto de la invención.
Los preparados conteniendo los compuestos de la
invención (Fórmula I) tienen poder antioxidante y actúan como
secuestradores de radicales libres. Para medir la actividad como
secuestradores de radicales se ha utilizado el radical
ABTS^{+\bullet} (ácido
2,2'-Azinobis-(3-etilbenzotiazolina-6-sulfónico)).
Una vez sintetizado, el
2,2'-Azinobis-(3-etilbenzotiazolina-6-sulfónico)
(ABTS) radical catiónico se diluye en tampón PBS 5 mM, pH 7.2, y se
sigue su eliminación durante el tiempo en presencia del
antioxidante. Los compuestos
tetrahidro-beta-carbolinas
fenólicas, Trolox (ácido
6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametilcroman-2-carboxílico)
y el ácido ascórbico se disuelven en agua a 1 mM, y se usan en el
ensayo de inhibidores de radicales en las concentraciones entre 1.67
y 20 \muM, midiendo el porcentaje de inhibición del radical en
función del tiempo. La capacidad antioxidante se mide en
comparación con el Trolox, un análogo soluble de la vitamina E, que
se utiliza como estándar. La capacidad antioxidante de los
compuestos obtenidos medida como TEAC (mM) (Capacidad antioxidante
equivalente a Trolox) en un tiempo fijo de 5 min se establece como
la concentración de Trolox con un porcentaje de inhibición del
radical equivalente a la sustancia en
cuestión.
cuestión.
La peroxidación lipídica es un mecanismo bien
establecido de daño celular en plantas y animales, así como de
deterioro de alimentos (enranciamiento). Este proceso conduce a la
producción de peróxidos lipídicos y aldehídos de degradación que
conlleva pérdida de la función de la membrana celular y de su
integridad. Las
tetrahidro-beta-carbolina fenólicas
obtenidas se estudiaron como inhibidores de la peroxidación
lipídica in vitro mediante un ensayo en el que el ácido
graso linoleico (1 mg/ml) se incuba (37ºC) en presencia de
catalizadores de la peroxidación como metales catiónicos (Fe^{2+})
(200 \muM). Después de dos horas, se determina la concentración
de agentes de degradación lipídica (aldehídos) que aparecen como
consecuencia de la peroxidación lipídica como el malondialdehído y
el 4-hidroxinonenal por reacción con
N-metil-2-fenilindol
y ácido metanosulfónico y determinación colorimétrica de los
cromóforos resultantes.
Las
tetrahidro-beta-carbolinas fenólicas
descritas en la presente invención contienen un anillo indólico y
sustituyentes fenólicos, y son buenos antioxidantes como
inhibidores de radicales y de la peroxidación lipídica. Estos datos
sugieren su utilidad para la prevención de la oxidación de las
lipoproteínas y otras condiciones relacionadas con el estrés
oxidativo. Asimismo, como los compuestos de partida de los que
derivan son compuestos naturales que están presentes en alimentos
(triptófano, 5-hidroxitriptófano o aminas
correspondientes, y agentes aromatizantes como vainillina), y su
obtención es mediante una reacción simple por calentamiento en medio
ácido o ácido/alcohólico, podrían generarse en extractos de
alimentos, en preparados de tipo nutracéutico, o para la obtención
de alimentos con propiedades funcionales en la prevención del
estrés oxidativo. Estos compuestos podrían ser útiles como
antioxidantes en productos alimenticios, cosméticos o
farmacéuticos.
Como productos de partida se utilizan el
aminoácido L-Triptófano (1.5 mmoles) y aldehído
salicílico (340 \muL), que se obtienen comercialmente, se
disuelven en un medio acuoso-ácido de 0.05 N H_{2}SO_{4} y se
hacen reaccionar en un matraz agitando primeramente a 40ºC durante
la noche y después a 70ºC durante 6 días para dar finalmente un
precipitado sólido del ácido (1S,3S)- y
(1R,3S)-1-(o-hidroxifenil)-1,2,3,4-tetrahidro-\beta-carbolina-3-
carboxílico (2a-cis, 2b-trans). 2a:2b (1:2.5)
(347 mg, 75%). 2b: ^{1}H-RMN
(CD_{3}OD+TFA) \delta (ppm): 3.52, 3.74 (m, 2H,
H-4), 4.52 (dd, 1H, H-3, J_{3,4a}=
8.6 Hz, J_{3,4b}= 5.6 Hz), 6.57 (s, 1H, H-1),
7.03-7.75 (m, 8H, indol, Ph).
^{13}C-RMN (CD_{3}OD+TFA) \delta (ppm): 23.43
(C-4), 52.22 (C-1), 53.51
(C-3), 107.73 (C-4a), 112.55
(C-8), 116.67 (Ph), 119.11 (C-5),
120.76 (C-6), 121.44 (Ph), 123.89
(C-7), 127.74 (C-4b), 132.84
(C-9a), 134.84 (Ph), 138.69 (C-8a),
157.31 (Ph-OH), 171.18 (COOH).
RP-HPLC-ESI-MS (Rt
18.41 min): (M+H)^{+} 309, (M+H-73) 236.
2a: ^{1}H-NMR (CD_{3}OD+TFA) \delta
(ppm): 4.80 (dd, 1H, H-3, J_{3,4a}= 11.9 Hz,
J_{3,4b}= 5.1 Hz), 6.46 (s, 1H, H-1).
^{13}C-RMN (CD_{3}OD+TFA) 8 (ppm): 54.82
(C-1), 57.86 (C-3).
RP-HPLC-ESI-MS (Rt
16.8 min): (M+H)^{+} 309, (M+H-73) 236.
El compuesto del ejemplo 2ab presenta un
valor TEAC (mM) (Actividad antioxidante equivalente a Trolox) de
2.64 mM medido como la inhibición del radical ABTS^{\bullet+} y
una inhibición lipídica del 71% con 100 \muM en el test de
oxidación del ácido linoleico.
a) El aminoácido natural
L-triptófano (1.5 mmoles) y el aldehído fenólico
vainillina (251 mg) de procedencia comercial, disueltos en 0.05 N
H_{2}SO_{4}, se hacen reaccionar agitando primeramente a 40ºC
durante la noche y después a 70ºC durante 8 días, para dar
finalmente un sólido precipitado de ácido (1S,3S)- y
(1R,3S)-1-(4'-hidroxi-3'-metoxifenil)-1,2,3,4-tetrahidro-\beta-
carbolina-3-carboxílico
(4a-cis, 4b-trans) 4a:4b (1.1: 1) (259 mg,
51%). El filtrado se evapora para dar 4a:4b (1: 2.75) (137 mg, 27%)
como un sirope. 4b: ^{1}H-RMN (CD_{3}OD
+ TFA) \delta (ppm): 3.49 (m, 2H, H-4), 3.99 (s,
3H, OCH_{3}), 4.30 (dd, 1H, H-3, J_{3,4a}= 8.1
Hz, J_{3,4b}= 5.9 Hz), 6.16 (s, 1H, H-1),
6.94-7.74 (m, 7H, indol and Ph).
^{13}C-RMN (CD_{3}OD + TFA) \delta (ppm):
23.69 (C-4), 53.30 (C-3), 56.50
(OCH_{3}), 57.14 (C-1), 107.54
(C-4a), 112.62 (C-8), 114.17,
116.77 (Ph), 119.20 (C-5), 120.84
(C-6), 124.04 (C-7), 124.50, 126.08
(Ph), 127.12 (C-4b), 129.40 (C-9a),
138.75 (C-8a, Ph), 149.88 (Ph), 171.14 (COOH).
RP-HPLC-ESI-MS (Rt
16.4 min): (M+H)+ 339, (M+H-73) 266. 4a:
^{1}H-RMN (CD_{3}OD + TFA) \delta (ppm): 4.35
(dd, 1H, H-3, J_{3,4a}= 12.0 Hz, J_{3,4b}= 5.1
Hz), 5.91 (s, 1H, H-1). ^{13}C-RMN
(CD_{3}OD + TFA) \delta (ppm): 57.66 (C-3),
60.29 (C-1). Otras señales como 4b.
RP-HPLC-ESI-MS (Rt
16.0 min): (M+H)^{+} 339, (M+H-73)
266.
b) Como método alternativo se hace reaccionar el
triptofanato sódico (1,5 mmoles) con vainillina (1,5 mmoles) en
metanol a reflujo durante 2,5 horas. Se adiciona una solución
metanólica-HCl (2 M) en frío, se elimina el
disolvente a vacío, se redisuelve en agua y se extrae con acetato de
etilo. Finalmente se obtienen la
tetrahidro-beta-carbolina
4a-cis 4b-trans como un precipitado sólido desde la
fase acuosa.
El compuesto del ejemplo 4ab presenta un
valor TEAC (mM) (Actividad antioxidante equivalente a Trolox) de
2.04 mM medido como la inhibición del radical ABTS^{\bullet+} y
una inhibición lipídica del 67% a 100 \muM en el test de
oxidación del ácido linoleico.
Se utilizan como productos de partida el
aminoácido natural L-triptófano (1.5 mmoles) y el
aldehído fenólico siringaldehido (300 mg) de procedencia comercial,
disueltos en un medio acuoso-ácido de 0.05 N H_{2}SO_{4} y se
hacen reaccionar agitando primeramente a 40ºC y más tarde a 70ºC
durante 6 días para dar un sólido precipitado de ácido
(1S,3S)- y
(1R,3S)-1-(4'-hidroxi-3',5'-dimetoxifenil)-1,2,3,4-tetrahidro-\beta-
carbolina-3-carboxílico
(5a-cis, 5b-trans). 5a:5b (1.1: 1) (254 mg,
46%). Una mezcla (1: 1.2) de 5a:5b (138 mg, 25%) se obtiene
después de la evaporación del filtrado. 5a
^{1}H-RMN (CD_{3}OD+TFA) \delta (ppm): 3.77
(m, 2H, H-4), 3.974.02 (2s, 6H,
(OCH_{3})_{2}), 4.80 (dd, 1H, H-3,
J_{3,4a}= 12.1 Hz, J_{3,4b}= 5.3 Hz), 6.01 (s, 1H,
H-1), 6.85, 6.98 (2s, 2H, Ph),
7.2-7.65 (m, 4H, indol).
^{13}C-RMN (CD_{3}OD+TFA) \delta (ppm): 23.73
(C-4), 56.91 (OCH_{3}), 57.69
(C-3), 60.58 (C-1), 108.30
(C-4a), 108.47 (Ph), 112.56 (C-8),
119.25 (C-5), 120.84 (C-6), 124.04
(C-7), 124.45 (Ph), 127.16 (C-4b),
129.43 (C-9a), 138.78 (C-8a),
149.73, 158.84, 160.24 (Ph), 171.06 (COOH).
RP-HPLC-ESI-MS (Rt
15.95 min): (M+H)^{+} 369, (M+H-73) 296.
5b ^{1}H-RMN (CD_{3}OD+TFA) \delta
(ppm): 4.72 (m, 1H, H-3), 6.22 (s, 1H,
H-1). ^{13}C-RMN (CD_{3}OD+TFA)
\delta (ppm): 53.60 (C-3), 57.37
(C-1). Otras señales como 5a.
RP-HPLC-ESI-MS (Rt
16.8 min): (M+H)^{+} 369, (M+H-73)
296.
El compuesto del ejemplo 5ab presenta un
valor TEAC (mM) (Actividad antioxidante equivalente a Trolox) de
2.46 mM medido como la inhibición del radical ABTS^{\bullet+} y
una inhibición lipídica del 70% a 50 \muM en el test de
oxidación del ácido linoleico.
Claims (6)
1. Compuestos
tetrahidro-beta-carbolinas fenólicas
(enantiómeros, racematos, o sales de ellos) caracterizados
por la fórmula general de la Fórmula I,
donde los sustituyentes R_{1},
R_{2}, R_{3}, R_{4}, pueden ser hidrógeno (H), hidroxilo (OH)
o metoxilo (OCH_{3}), R_{5} puede ser H, o bien COOH,
COOCH_{3}, COOCH_{2}CH_{3}, y R_{6} puede ser H ó OH, y por
presentar actividad como antioxidantes y secuestradores de
radicales libres dada su capacidad de donación de electrones y de
átomos de hidrógeno contribuyendo a la actividad antioxidante total
e inhibidora de la peroxidación lipídica y de otras macromoléculas
biológicas.
2. Un procedimiento de obtención de los
compuestos, según la reivindicación 1, caracterizado porque
se utilizan como precursores aminoácidos naturales como triptófano,
sus ésteres o análogos como 5-hidroxitriptófano,
aminas como triptamina o 5-hidroxitriptamina, y
aldehídos aromáticos naturales como siringaldehído, vainillina,
anisaldehído, salicilaldehído o benzaldehído y sus análogos, y
porque la reacción de síntesis se realiza en medios acuosos ácidos
preferiblemente entre pH 1 y 3, por calentamiento entre 45 y 100ºC,
recuperándose desde el medio de reacción los compuestos indicados en
la reivindicación 1.
3. Un procedimiento de obtención de los
compuestos, según la reivindicación 1, caracterizado porque
se utilizan como precursores aminoácidos naturales como triptófano,
sus ésteres o análogos como 5-hidroxitriptófano,
aminas como triptamina o 5-hidroxitriptamina, y
aldehídos aromáticos naturales como siringaldehído, vainillina,
anisaldehído, salicilaldehído o benzaldehído y sus análogos, y
porque la reacción de síntesis se realiza en un medio orgánico a
reflujo, preferiblemente alcohólico o hidroalcohólico, y posterior
acidificación, recuperándose desde el medio de reacción los
compuestos indicados en la reivindicación 1.
4. Un procedimiento de obtención de los
compuestos, según la reivindicaciones 2 y 3, donde los precursores
de la reacción para obtener los compuestos de la Formula I son
extractos de plantas, alimentos, subproductos alimentarios o
microorganismos que contengan los precursores aminoácidos o aminas,
y aldehídos aromáticos, que tras reaccionar dan lugar a los
compuestos reivindicados en 1.
5. Un procedimiento de obtención de los
compuestos indicados en la reivindicación 1 obtenidos según las
reivindicaciones 2 a 4, donde se concentran, purifican total o
parcialmente y se secan mediante procedimientos convencionales de
concentración, purificación y secado.
6. La utilización de los compuestos indicados en
la reivindicación 1 obtenidos según las reivindicaciones 2 a 5,
caracterizada por usarlos puros, sales de ellos, en
extractos crudos o preparados que los contengan, como antioxidantes
y secuestradores de radicales libres en: (a) preparados
farmacéuticos o cosméticos para la prevención y el tratamiento
terapéutico de enfermedades o afecciones relacionadas con los
radicales libres, (b) en productos de parafarmacia, preparados
nutracéuticos, y en alimentos funcionales, y (c) en la industria
alimentaria como potenciales antioxidantes, o bien como
aditivos.
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|---|---|---|---|
| ES200201705A ES2211295B1 (es) | 2002-07-19 | 2002-07-19 | Tetrahidro-beta-carbolinas fenolicas como antioxidantes. |
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| ES200201705A ES2211295B1 (es) | 2002-07-19 | 2002-07-19 | Tetrahidro-beta-carbolinas fenolicas como antioxidantes. |
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| ES2211295A1 ES2211295A1 (es) | 2004-07-01 |
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| GB9514473D0 (en) * | 1995-07-14 | 1995-09-13 | Glaxo Lab Sa | Chemical compounds |
| CN1160352C (zh) * | 2001-12-19 | 2004-08-04 | 北京大学 | 具有抗HIV和抗癌活性的3-位取代的β-咔啉化合物，制备方法及其组合物和用途 |
-
2002
- 2002-07-19 ES ES200201705A patent/ES2211295B1/es not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| BAILEY, P.D. et al. Synthesis of Polycyclic Indolic Structures. Tetrahedron Letters, 1999, Volumen 40, páginas 4597-4600. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2211295A1 (es) | 2004-07-01 |
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