ES2200311T3

ES2200311T3 - Mutacion apc asociada con el cancer colorectal familiar en los judios ashkenazi.

Info

Publication number: ES2200311T3
Application number: ES98903558T
Authority: ES
Inventors: Steve Laken; Stephen Gruber; Gloria Petersen; Kenneth Kinzler; Bert Vogelstein
Original assignee: Johns Hopkins University
Current assignee: Johns Hopkins University
Priority date: 1997-01-31
Filing date: 1998-01-21
Publication date: 2004-03-01
Anticipated expiration: 2018-01-21
Also published as: US6013461A; DE69814622T2; IL131167A; EP0981644B1; EP0981644A1; WO1998033940A1; ATE240407T1; DK0981644T3; PT981644E; IL131167A0; DE69814622D1; US5879890A; AU6030498A; CA2278781A1

Abstract

Durante el seguimiento rutinario en un paciente con un historial familiar de cáncer colorrectal de las mutaciones truncantes del gen APC, se identificó una nueva mutación carente de sentido. En posteriores evaluaciones, se encontró que el 6% de los judíos Ashkenazis llevan esta mutación y que estaba presente en aproximadamente un 20% de los judíos Ashkenazis con un historial familiar de CRC. Se suministran sondas, procedimientos y equipos para identificar individuos afectados con esta mutación carente de sentido.

Description

Mutación APC asociada con el cáncer colorectal familiar en los judíos Ashkenazi.

El Gobierno de los Estados Unidos conserva ciertos derechos en la invención, ya que dió soporte a los inventores con las subvenciones CA 43460 y CA 62924 del NIH.

Campo técnico de la invención

La presente invención se refiere a la detección de un gen que predispone a los portadores al cáncer colorectal.

Antecedentes de la invención

De los 160.000 nuevos casos de cáncer colorectal (CRC) diagnosticado cada año en los Estados Unidos, un 15% por lo menos tienen un componente hereditario. Dos síndromes bien definidos, la Poliposis Adenomatosa Familiar (FAP) y el Cáncer Colorectal Hereditario No-Polipósico (HNPCC), representan hasta el 5% de los casos familiares. Las mutaciones que truncan el APC son responsables de la FAP, y los genes defectuosos que reparan los desemparejamientos provocan la HNPCC. Sin embargo, los genes responsables de la mayoría de los casos familiares son desconocidos. Es necesario en la técnica contar con herramientas adicionales y de información para identificar los genes del cáncer familiar.

Resumen de la invención

Constituye un objetivo de la presente invención proporcionar una sonda de ácido nucleico alelo específica.

Constituye otro objetivo de la presente invención proporcionar métodos para determinar la presencia de una mutación en un gen APC.

Constituye un objetivo de la presente invención proporcionar un equipo útil para determinar una mutación en un gen APC.

Este y otros objetivos de la invención se logran proporcionando una sonda de ácido nucleico alelo-específica que comprende la secuencia ácido nucleica de una región de un APC mutante humano o de su equivalente ribonucleótido, en el que dicha región contiene una transversión T a A en el nucleótido 3920.

En otra forma de realización de la invención se proporciona un método para determinar la presencia en un probando de una mutación en el APC que se asocia con una historia familiar de cáncer colorectal entre los Judíos Ashkenazi. El método comprende la etapa de:

determinar la presencia de una mutación de transversión de T a A en el nucleótido 3920 en un gen APC de un probando.

Según otra forma de realización de la invención, se proporciona otro método para determinar la presencia en un probando de una mutación en el APC que se asocia con una historia familiar de cáncer colorectal entre los Judíos Ashkenazi. El método comprende la etapa de:

determinar la presencia de una lisina en el aminoácido 1307 de la proteína APC del probando.

En otra forma más de realización de la invención, se proporciona un tercer método para determinar la presencia en un probando de una mutación en el APC que se asocia con una historia familiar de cáncer colorectal entre los Judíos Ashkenazi. El método comprende la etapa de:

determinar la presencia de un codón de lisina en el codón 1307 de un gen APC del probando.

Todavía, en otra forma de realización de la invención, se proporciona un equipo para detectar una mutación en el APC que predispone a los portadores al cáncer colorectal. El equipo comprende:

un par de iniciadores oligonucleótidos para amplificar por lo menos una parte del exón 15 del APC que comprende el nucleótido 3920; y

una sonda alelo-específica que comprende la secuencia de ácido nucleico de una región de un APC mutante humano o de su equivalente ribonucleótido, en la que dicha región contiene en el nucleótido 3920 una transversión de T a A.

Estas y otras formas de realización de la invención serán evidentes para los expertos en la materia después de leer la presente exposición, y proporcionarán la técnica con las herramientas y métodos para la detección rápida y fácil de un alelo particular que está asociado con el cáncer colorectal familiar.

Descripción breve de los dibujos Figura 1 Ensayos IVSP de los codones APC 1099 a 1693

Figura 1a. Los carriles marcados "N" contienen polipéptidos de pacientes sin la mutación I1307K y el carril "M" contiene polipéptidos de los pacientes heterocigóticos indiciados respecto la mutación I1307K. Las flechas se dirigen al doblete de los polipéptidos truncados que se encuentran en el paciente con la mutación. La razón para el doblete en la posición indicada no está clara, pero podría representar dos sucesos independientes de deslizamiento en el tracto (A)_{8}.

Figura 1b. Secuencia de los productos PCR de los pacientes indiciados. La secuencia salvaje es AAA ATA AAA y la secuencia mutante es AAA AAA AAA, que predice la sustitución de una lisina por una isoleucina en el codón 1307. Las flechas se dirigen al sitio de mutación heterocigótico.

Figura 2 Genealogías de los probandos con la mutación I1307K

Los pacientes afectos con CRC se señalan mediante símbolos rellenos, los pacientes con pólipos se señalan mediante cuadrados sombreados, y los pacientes con otros cánceres se señalan mediante cruces. Los tipos de cánceres y la edad en el diagnóstico se indican cuando se conocen. Los individuos con la mutación I1307K se denominan como "+", y los individuos en los que se ensayó esta mutación y se encontró que no la portaban, se indican como "-".

Descripción detallada

Constituye un descubrimiento de estos inventores que una mutación particular de falso sentido en el gen APC predomina en la población judía Ashkenazi. Esta mutación se asocia con cáncer colorectal familiar. Además, aparece asociada con un conjunto de síntomas distinto del causado por las mutaciones bien conocidas que truncan el APC. Esta mutación, más que ser la causa de los miles de pólipos que se encuentran a menudo en los pacientes FAP típicos, parece causar la "poliposis atenuada", es decir, una frecuencia de pólipos mucho más baja.

La mutación causa una sustitución de isoleucina a lisina en el aminoácido 1307 de APC. Se ha encontrado que ésto ha tenido como causa una mutación de transversión T a A en el nucleótido 3920. Oligonucleótidos alelo específicos que contienen una parte del gen APC que contiene esta mutación pueden utilizarse para detectar los que llevan la mutación en la población en general o en la población Ashkenazi, o en familias con cánceres colorectales en la población Ashkenaki. Los oligonucleótidos pueden utilizarse como sondas para la hibridación. Pueden utilizarse como iniciadores, por ejemplo, para la PCR alelo específica. También pueden utilizarse para generar polipéptidos inmunogénicos o proteínas de fusión para emplearlos en la generación de anticuerpos específicos que reconozcan el epítopo mutante.

Con objeto de determinar si un individuo en concreto (probando) posee la mutación, su ADN, ARN o proteínas pueden examinarse para evidenciar la mutación. Si se examinan los ácidos nucleicos, se comprobaría la presencia de una mutación que daría lugar a una lisina en el aminoácido 1307. Si se examinan las proteínas, la presencia de lisina puede determinarse directamente en las proteínas mediante secuenciación o utilizando reactivos inmunológicos específicos, tales como anticuerpos monoclonales o anticuerpos policlonales monoespecíficos que reconocen el epítopo mutante pero no la forma salvaje de la proteína APC. De modo similar, los ácidos nucleicos pueden secuenciarse para determinar la presencia de las mutaciones. Para detectar éstas, pueden utilizarse cualquier técnica única o combinaciones de ellas. Por ejemplo, el ARN puede transcribirse inversamente y expresarse in vitro, y la proteína sintetizada in vitro puede analizarse mediante métodos conocidos en la técnica. Alternativamente, el ARN puede transcribirse inversamente A ADN, y éste amplificarse utilizando PCR, y los productos PCR sondeados con una sonda alelo-específica.

También se provee un equipo útil para la utilización de dicha técnica. Contiene iniciadores para amplificar el exón 15 (la totalidad o por lo menos la parte que incluye el codón 1307), así como una sonda alelo-específica, según la invención. Otros componentes opcionales del equipo incluyen instrucciones escritas, una ADN polimerasa para llevar a cabo la PCR, tampones, sondas para detectar otras mutaciones en APC, transcriptasa inversa, recipientes reactivos, membranas para hibridaciones.

La evidencia de que la mutación I1307K causa la enfermedad, es triple. En primer lugar, la mutación tiene lugar en un gen guardián crítico para suprimir la iniciación del proceso neoplásico, y en una región del APC que se cree es esencial para su apropiado funcionamiento. En segundo lugar, la frecuencia de la mutación es marcadamente más alta en casos indiciarios de pacientes con cáncer colorectal familiar que en la población general Ashkenazi. Y en tercer lugar, dentro de tales familias, se encontró la mutación en todos menos uno de los 11 pacientes con neoplasia colorectal. Esta mutación no causa ciertamente los miles de pólipos que se encuentran a menudo en los pacientes FAP típicos con mutaciones truncantes en la tercera zona de la región codificante del APC. El fenotipo más cercano se parece al de los pacientes con "poliposis atenuada" debida a las mutaciones truncantes en el extremo amino de APC. Será intrigante determinar, en estudios futuros más grandes, si la presencia de I1307K es suficiente para conferir predisposición CRC, o si otros factores genéticos o ambientales se combinan con I1307K para provocar tal predisposición.

Estos resultados, por tanto, tienen implicaciones sustanciales para la predisposición al cáncer colorectal en la población Ashzenaki. Estudios anteriores han demostrado que otras mutaciones, incluyendo las que predisponen al cáncer mamario, pueden encontrarse con una frecuencia elevada en esta población, aunque no tan habitualmente como I1307K (Nature Medicine 2 (11) 1179-1183) (Cancer Research 56(15) 3409-3414). Hasta ahora, nuestros resultados no impulsarán al rastreo generalizado de I1307K0 en Ashkenazis para, pues el riesgo relativo de cáncer asociado con esta mutación en ausencia de una historia familiar de XRTX, todavía no se ha establecido. Sin embargo, en las familias en las que dos o más individuos tienen neoplasia CR, nuestros resultados sugieren que los individuos con I1307K tienen un alto riesgo de cáncer colorectal (por lo menos, un riesgo vital del 30%, juzgado a partir de las genealogías que se muestran en la fig 2 y suposiciones conservadoras). Como están disponibles medidas efectivas para limitar la morbilidad por CRC mediante ensayos genéticos en familias apropiadamente seleccionadas, parece justificada una evaluación posterior de esta cuestión. Finalmente, será de interés determinar si mutaciones adicionales de sentido erróneo del APC podrían contribuir al cáncer colorectal familiar en otras poblaciones.

La exposición anterior describe generalmente la presente invención. Un conocimiento más completo puede obtenerse aludiendo a los siguientes ejemplos específicos que se dan a conocer sólo con propósitos ilustrativos en la presente memoria y no tienen la intención de limitar el alcance de la invención.

Ejemplo 1

Este ejemplo describe el descubrimiento de la mutación de sentido erróneo I1307K en APC. El ensayo del gen APC de los pacientes FAP se lleva a cabo rutinariamente utilizando el ensayo in vitro de proteínas sintetizadas (IVSP). Este ensayo se realiza mediante amplificación PCR de un segmento de ADN, con un iniciador 5' que contiene sitios para la transcripción de T7 y la traslación a mamíferos. Después de la transcripción y traslación de los productos PCR, los polipéptidos se separan mediante electroforesis. Durante dicho rastreo, se encontró que un paciente de 39 años de edad con adenomas colorectales múltiples (CRA) tenía una proteína truncada que se había predicho que estaría dispuesta entre los codones 1099 y 1693 en el exón 15 (Figura 1a). Sorprendentemente, la secuenciación de la región pertinente de APC de este paciente no reveló mutaciones truncantes, identificándose en su lugar una única alteración, que consistía en la transversión de T a A en el nucleótido 3920. Esta mutación dió lugar a una sustitución de lisina por isoleucina en el codón 1307, en la región del APC (residuos 1020-2075) responsable de la unión a la \beta-catenina (Figura 1b). Distintos experimentos, incluyendo ensayos IVSP sobre los productos PCR clonados, mostraron que el truncamiento consistía en un fenómeno in vitro causado por la mutación de sustitución de T a A, y que se encontraron proteínas APC no truncadas en los linfocitos del paciente.

Métodos IVSP

IVSP se llevó a cabo esencialmente tal como se describe en Powell et al. Los productos PCR que contenían el codón 1307 se amplificaron con los iniciadores 5' gga gga tcc tgt agg aat ggt atc tcg-3' y 5'- gga tcc taa tac gac tca cta tag gga gac cac cat ggt ttc tcc ata cag gtc acg g-3' (obtenido de la Agencia del ADN, Malvern, PA). Se transcribieron y trasladaron in vitro, utilizando reactivos disponibles en Promega (Madison, WI). Los productos PCR se purificaron a partir de geles de agarosa y se clonaron en el vector pZero (Clontech, Palo alto, CA). Los clones se secuenciaron utilizando Thermo Sequinasa (Amersham, Arlington Heigts, IL). Los productos PCR de los clones se utilizaron entonces como matrices para las reacciones IVSP.

Ejemplo 2

Este ejemplo demuestra que el truncamiento observado in vitro se debió presumiblemente al "deslizamiento" de uno de los enzimas utilizados para IVSP en el tracto (A)_{8} creado por la mutación.

Para determinar si la mutación I1307K era responsable de la proteína truncada que se había encontrado en el ensayo IVSP, los productos PCR se clonaron en E. coli. Los clones que contenían la secuencia salvaje o la mutada se aislaron y utilizaron para el análisis IVSP. La secuencia mutante clonada produjo tanto la proteína truncada como la proteína con su longitud completa en una proporción de \sim1:3. Estos resultados muestran claramente que una mutación de sentido erróneo puede producir una proteína truncada cuando se evalúa in vitro.

Para determinar si una proteína truncada se produjo a partir de la mutación I1307K in vivo, se inmunotransfirieron extractos proteicos de las células linfoblásticas del paciente utilizando un anticuerpo dirigido contra el extremo amino de APC; no se detectó proteína APC truncada. Para aumentar la sensibilidad de la inmunotransferencia, empleamos MAMA (análisis de mutación mono-alélica). Las células linfoblásticas del paciente indiciado se fusionaron con células de hamster, aislándose los híbridos que contenían un único cromosoma 5 humano. Esto hace posible evaluar los productos génicos del alelo I1307K en ausencia del alelo de tipo salvaje; sólo se detectó todavía la proteína de longitud completa (datos que no se muestran).

\newpage

También consideramos la posibilidad de que el tracto (A)_{8} procedente de la mutación I1307K (Fig 1b), pudiera crear una secuencia homopolimérica inestable que podría mutar in vivo mediante el "deslizamiento" de la polimerasa. Esto podría causar un cambio del marco de lectura a través de una inserción o deleción de un residuo A dentro del tracto (A)_{8}. Para probar esta hipótesis, un tumor colorectal embebido en parafina de este paciente se microdiseccionó para aislar las células cancerosas del tejido normal circundante. El ADN purificado de estas células se utilizó para amplificar la región que contenía la mutación. No se detectaron inserciones o deleciones en el tracto I1307K (datos que no se muestran). Además, se ensayaron otros microsatélites del tumor del paciente (véase Métodos), y la ausencia de inestabilidad en estas secuencias hicieron improbable que este paciente tuviera HNPCC.

Métodos Aislamiento del ADN a partir de los tumores embebidos en parafina

Se aisló el ADN a partir de muestras (sobre un portaobjetos) que contenían adenomas colorectales embebidos en parafina del paciente indiciado, tal como se describe previamente (Jen, NEJM, 1993). Para evaluar la estabilidad de la mutación I1307K que expresa la repetición (A)_{8}, se utilizaron los siguientes iniciadores: 5'-agc tga cct agt tcc aat
c-3' y 5'- cag ctg aag atg aaa tag ga-3'. Para evaluar la inestabilidad de los microsatélites en otros loci, se utilizaron los iniciadores y las condiciones descritas en Liu et al, Nature Medicine, 1996.

MAMA

Las células linfoblásticas del caso índice se fusionaron con las células UCW-56 del hamster, utilizando una electroporación BTX. Después de la selección para la retención del cromosoma humano 5, se seleccionaron clones aislados y se evaluaron mediante PCR respecto a la mutación I1307K (tal como se describió anteriormente), para determinar cuál de los dos alelos era retenido. Los clones que contenían cada alelo se utilizaron para los análisis de inmunotransferencia, utilizando anticuerpos y condiciones previamente descritas.

Ejemplo 3

Este ejemplo demuestra la significación biológica de la mutación, examinando su presencia en poblaciones de individuos.

Para evaluar la significación biológica de esta presunta mutación sin sentido, se llevaron a cabo varios análisis. En primer lugar, se diseñó un ensayo de hibridación de un oligonucleótido alelo-específico (ASO) para determinar la frecuencia en la población del I1307K (véase Métodos). Como el paciente era miembro de un grupo parcialmente emparentado (Judíos Ashkenazi), examinamos tanto ésta población como la no-Ashekenazi. No se encontró el I1307K en ninguno de los 243 no-Ashkenazis ensayados, pero se encontró que una proporción especialmente alta de los Ashkenazis portaban la alteración (Tabla 1). La diferencia en el predominio de I1370K entre los Ashkenazis y los no Ashkenazis fue altamente significativa (p< 0,0001 mediante la prueba X^{2}).

Para determinar si la mutación I1307K estaba asociada con CRC en la población Ashkenazi, examinamos 212 Ashkenazis con CRC. Utilizando el ASO, se encontró que el 10,8% de dichos pacientes albergaba el mutante I1307K. En cada uno de estos casos, se utilizó la secuenciación para comprobar los resultados ASO. Esta elevada frecuencia está de acuerdo con la posibilidad de que el I1307K está asociado con la predisposición a CRC, y la diferencia entre los Ashkenazis con CRC y la población Ashkenazi general fue estadísticamente significativa (P< 0,02 mediante la prueba X^{2}). Para explorar posteriormente la relación entre CRC y I1307K, los pacientes con CRC se segregaron según la historia familiar. Cuarenta de los 212 probandos tenían un pariente en primer grado con neoplasia colorectal (bien cáncer, o un tumor benigno -[pólipo]). En los restantes 172 probandos, o bien los parientes en primer grado no mostraban neoplasia colorectal o la historia familiar era desconocida (n=172). El 20% de los probandos de los 40 casos familiares portaban la mutación I1307K, una frecuencia que era altamente significativa cuando se comparaba a la 6,1% que se encontró en la población Ashkenazi general o la 8,7% encontrada en los pacientes de CRC sin historia familiar conocida de neoplasia CR (Tabla 1).

TABLA 1

Series	I1307K +	Total	%
Controles Normales
\hskip0.5cm No-Ashkenazi	0	243	0%^{a}
\hskip0.5cm Ashkenazi	47	766	6,1%^{b}
Pacientes Ashkenazi de Cáncer Colorectal
\hskip0.5cm Total	23	212	10,8%^{c}
\hskip0.5cm Con historial familiar de neoplasia CR	8	40	20,0%^{d}
\hskip0.5cm Sin historial conocido de neoplasia CR	15	172	8,7%^{e}
a respecto a b, p< 0,0001 para X^{2}
b respecto a c, p < 0,02 para X^{2}
b respecto a d, p< 0,01 para X^{2}
c respecto a e, p < 0,05 para X^{2}

Métodos Selección de pacientes

Ashkenazis seleccionados al azar tomados de un grupo que iba a experimentar las pruebas para la enfermedad de Tay-Sachs, se utilizaron como el grupo Ashkenazi de control. Los no-Ashkenazis estaban formados por otro grupo seleccionado al azar de individuos que no eran Judíos y que habían donado muestras de sangre por diversas razones. Se analizaron dos grupos de pacientes Ashkenazis con cáncer colorectal. Un grupo representaba una serie consecutiva de individuos que habían sido tratados por cáncer colorectal en el Memorial Sloan-Kettering. El segundo estaba formado por un grupo de individuos que habían sido evaluados respecto al CRC en el Johns Hopkins Hospital. Este segundo grupo no representaba una serie consecutiva, y mostraba una clara tendencia a constituir un grupo de pacientes con una historia familiar de CRC.

Análisis mutacionales

Se utilizó el ADN genómico como matriz para PCR con los iniciadores siguientes: 5'-gatgaaataggatgtaatcagacg y 5'-cttcgctcacaggatcttcagc. El producto PCR se transfirió a ranuras sobre filtros de nylon y se hibridizó con oligonucleótidos que correspondían a la secuencia de tipo salvaje o a la mutante en el codón 1307 (5'-aatagcagaaataaaagaaaagat o 5'-aaatagcagaaaaaaaagaaaagat, respectivamente). Se llevaron a cabo las hibridaciones a temperatura ambiente durante 1 hora, lavándose entonces durante 30 minutos en 2xSSC, SDS al 0,1% a temperatura ambiente, seguido por un lavado de 2 minutos a 56ºC en 2xSSC, SDS al 0,1%. para confirmar estos resultados de transferencia, los productos PCR que mostraban mutaciones, se secuenciaron con Thermo Sequenasa, utilizando el siguiente iniciador: 5'-gatgaaataggatgtaatcagacg. En dos pacientes con la mutación I1307K, los productos PCR que abarcaban la región codificante entera de APC, se obtuvieron a partir del ADN o del cADN, tal como se describe previamente, secuenciándose directamente.

Ejemplo 4

Este ejemplo demuestra una prueba adicional de asociación entre la mutación I1307K y la enfermedad.

Se examinó su segregación en las familias con cáncer. Se pudo identificar 8 familias en las que por lo menos, dos parientes en primer grado tenían neoplasia colorectal (cáncer o pólipos) y en las que los probandos portaban la alteración I1307K. Once parientes afectados con CRC o CRA se examinaron utilizando la ASO, encontrándose que diez portaban el mutante I1307K (Figura 2); cada uno se confirmó mediante secuenciación. EEs muy improbable que este resultado fuera debido sólo al azar (p< 0,01, probabilidad bayesiana).

Aunque estos datos sugirieron intensamente que la mutación I1307K estaba relacionada intrínsicamente con la predisposición a CRC, quedaba la posibilidad de que esta mutación se encontrara en desequilibrio de unón con otra mutación en el APC. Para excluir esto, se llevó a cabo la secuenciación de la región conflictiva de APC en dos individuos con CRC familiar y la mutación I1307K. Sólo se encontró un polimorfismo silencioso previamente identificado, que hacía improbable que otra mutación de APC en la región secuenciada se estuviera segregando con la enfermedad.

\newpage

Referencias

1. Kinzler, et al., Cell 87:159-170 ( 1996)

2. Groden, et al., Cell 66:589-600 (1991)

3. Nishisho, et al., Science 253:159-170 (1991)

4. Leach, et al., Cell 75:159-170 (1993)

5. Liu, et al., Nature Medicine 2:169-174 (1996)

6. Fishel, et al., Cell 75:1027-1038 (1993)

7. Papadopoulos et al., Science 263:1625-1629 (1994)

8. Nicolaides, et al., Nature 371:75-80 (1994)

9. Powell, et al., New England Journal of Medicine 329(27):1982-1987 (1993)

10. Rubinfeld et al., Science 262:1731-1734 (1993)

11. Su et al., Science 262:1734-1737 (1993)

12. Morin et al., Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93:7950-7954 (1996)

13. Friedl, et al., Hum.Genet 97:579-584 (1996)

14. Smith, et al., Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:2846-2850 (1993)

15. Papadopoulos, et al., Nature Genetics 11:99-102 (1995)

16. Thibodeau, et al., Science 260:816-819 (1993)

17. Parsons, et al., Cancer Research 55:5548-5550 (1995)

18. Aaltonen, et al., Science 260:812-816 (1993)

Claims

1. Sonda ácido nucleica alelo-específica que comprende la secuencia ácido nucleica de una región de un APC mutante humano o de su equivalente ribonucleótido, en el que dicha región contiene una transversión T a A en el nucleótido 3920.

2. Procedimiento para determinar la presencia en un probando de una mutación en el APC que se asocia con una historia familiar de cáncer colorectal entre los Judios Ashkenazi, el cual procedimiento comprende la etapa de:

determinar la presencia de una mutación de transversión T a A en el nucleótido 3920 en un gen APC de un probando.

3. Procedimiento según la reivindicación 2, en el que una sonda ácido nucleica alelo-específica se hibridiza a un ácido nucleico aislado del probando o a un ácido nucleico amplificado o clonado a partir del probando, en el que la sonda comprende la secuencia ácido nucleica de una región de un APC mutante humano o su equivalente ribonucleótido, en el que dicha región contiene una transversión T a A en el núcleótido 3920.

4. Procedimiento según la reivindicación 2, en el que una región de un gen APC que comprende el codón 1307, es amplificada o clonada, sometiéndosela a la secuenciación nucleótida.

5. Procedimiento para determinar la presencia en un probando de una mutación en el APC que se asocia con una historia familiar de cáncer colorectal entre los Judíos Ashkenazi, el cual procedimiento comprende la etapa de:

6. Procedimiento según la reivindicación 5, en el que un anticuerpo que se une específicamente a un epítopo de APC que comprende la mutación I1307K se pone en contacto con una muestra del probando que contiene una proteína de APC.

7. Procedimiento según la reivindicación 5 en el que una proteína APC aislada del probando o producida utilizando un ácido nucleico APC aislado del probando, se somete a secuenciación de los aminoácidos.

8. Procedimiento para la determinación de la presencia en un probando de una mutación en el gen APC que está asociada con una historia familiar de cáncer colorectal entre los Judíos Ashkenazi, el cual procedimiento comprende la etapa de:

9. Procedimiento según la reivindicación 8 en el que una sonda ácido nucleica alelo-específica se hibridiza a un ácido nucleico aislado del probando o a un ácido nucleico amplificado o clonado a partir del probando, en el que la sonda comprende la secuencia ácido nucleica de una región de un gen APC mutante humano o de su equivalente ribonucleótido, en el que dicha región contiene una transversión de T a A en el nucleótido 3920.

10. Procedimiento según la reivindicación 8 en el que una región de un gen APC que comprende el codón 1307 es amplificada o clonada, y la región se somete a secuenciación nucleótida.

11. Equipo para detectar una mutación en el gen APC que predispone a los portadores al cáncer colorectal, que comprende:

un par de iniciadores oligonucleótidos para amplificar por lo menos una parte del exón 15 del gen APC que comprende el nucleótido 3920; y

una sonda alelo-específica que comprende la secuencia ácido nucleica de una región de un gen APC mutante humano o de su equivalente ribonucleótido, en el que dicha región contiene una transversión de T a A en el nucleótido 3920.