ES2188412B2 - Preparacion de medios de cultivo agar y caldo tenacibaculum maritimum (agar tm y caldo tm). - Google Patents
Preparacion de medios de cultivo agar y caldo tenacibaculum maritimum (agar tm y caldo tm).Info
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Abstract
Preparación de medios de cultivo Agar y Caldo Tenacibaculum maritimum (Agar TM y Caldo TM) para el aislamiento y cultivo de la bacteria Tenacibaculum maritimum causante de la enfermedad Tenacibaculosis marina que afecta a peces cultivados en agua de mar a nivel mundial. El medio Agar Tenacibaculum maritimum se prepara por disolución en agua destilada de una mezcla definida de sales, peptona bacteriológica, extracto de levadura y Agar bacteriológico. El medio Caldo Tenacibaculum maritimum se prepara por disolución en agua destilada de una mezcla definida de sales, peptona bacteriológica y extracto de levadura. El medio Agar Tenacibaculum maritimum puede ser utilizado para el aislamiento de Tenacibaculum maritimum a partir de peces, agua de mar y sedimento; y el medio Caldo Tenacibaculum maritimum puede utilizarse para el enriquecimiento de las muestras o la obtención de masa celular.
Description
Preparación de medios de cultivo Agar y Caldo
Tenacibaculum maritimum (Agar TM y Caldo TM).
La Tenacibaculosis (antes Flexibacteriosis)
marina, causada por la especie Tenacibaculum maritimum(antes
Flexibacter maritimus), es una de las enfermedades
bacterianas más importantes que afectan a peces marinos a nivel
mundial. Este microorganismo presenta un estricto requerimiento de
sales inorgánicas para su crecimiento que no puede ser cubierta
mediante la simple adición de NaCl a los medios de cultivo
preparados en agua dulce. La presencia en el medio de los iones
Ca^{+2} y Mg^{+2} favorece el crecimiento del microorganismo,
mientras que el SO_{4}^{+2} es ligeramente inhibitorio. Por todo
ello, para el aislamiento de este microorganismo se ha sugerido el
uso de medios no selectivos con bajo contenido en nutrientes como
son el medio Anacker y Ordal Agar (AOA) (Anacker y Ordal, 1959.
Journal of Bacteriology 78: 25-32), o modificaciones
del mismo como el medio
Triptona-Casaminoácidos-Extracto de
Levadura (TCY) (Hikida et al, 1979. Bulletin of the Japanese Society
of Scientific Fisheries 45: 421-428), o el medio
Flexibacter maritimus(FMM) (Pazos et al, 1996. Journal of
Fish Diseases 19: 193-197). Además de los medios no
selectivos antes citados, se ha descrito el medio selectivo para
Flexibacter sp (SFM), medio de Hsu y Shots, que contiene
antimicrobianos (Austin y Austin, 1993. Bacterial Fish Pathogens:
Diseases in Farmed and Wild Fish, 2^{nd} edn. Ellis Horwood Ltd,
Chichester). Todos estos medios deben ser preparados en agua de mar
al 70 %.
Los resultados obtenidos en nuestro laboratorio
(Pazos et al, 1996 opus cited), indican que los medios SFM y FMM
tienen similar capacidad de inhibición de las bacterias marinas
heterotróficas, favoreciendo el aislamiento de T. maritimum.
Sin embargo, el medio SFM tiene la desventaja de contener neomicina
y seleccionar sólo las cepas de T. maritimum resistentes a
este agente quimioterápico. Uno de los principales inconvenientes
que presentan todos los medios anteriormente descritos, para su uso
rutinario en un laboratorio, es que para su preparación requieren
agua de mar, cuya composición y salinidad varía en función de la
procedencia geográfica.
Alternativamente, se ha sugerido (Frerichs, 1993.
In: ``Bacterial Diseases of Fish'', ed. by V. Inglish, R. J. Roberts
y N. R. Bromage, pp.257-283. Blackwell Scientific
Publications, Oxford) el uso del medio comercial Agar Marino (AM),
para el aislamiento de T. maritimum, y que no requiere agua
de mar para su preparación. Sin embargo, nuestros estudios indican
que el medio AM al igual que el medio AOA no son los más adecuados
para el aislamiento de este microorganismo a partir de tejidos de
peces o muestras ambientales puesto que favorecen el crecimiento de
otras bacterias marinas heterotróficas que tienen efecto inhibidor
sobre T. maritimum.
Otro aspecto destacable es que en los medios AOA,
FMM y SFM las colonias bacterianas presentan las características
típicas descritas para la especie (color amarillo pálido, planas, de
bordes irregulares y fuertemente adherentes al medio), lo cual
facilita la identificación de T. maritimum, mientras que en
el medio AM las colonias de T. maritimum son redondeadas y de
color amarillo-anaranjado, lo cual no permite su
diferenciación con respecto a otras bacterias marinas
pigmentadas.
En base a lo expuesto anteriormente, se puede
concluir que para el aislamiento de T. maritimum a partir de
peces, agua de mar y sedimento, el medio más adecuado es el FMM dado
que proporciona un buen crecimiento de la bacteria a la vez que
inhibe el de otras bacterias marinas heterotróficas competidoras sin
necesidad de utilizar antimicrobianos.
Con el fin de solventar el problema de la
variabilidad en composición/salinidad del agua de mar que puede
afectar el crecimiento del microorganismo preparamos los dos medios
Agar y Caldo de Tenacibaculum maritimum (Agar TM y Caldo TM)
objeto de la presente invención.
Los medios Agar TM y Caldo TM tienen una
composición parecida a la descrita en la patente de número de
publicación: ES2139549 para el medio FMM, pero con la excepción de
que los medios propuestos no requieren agua de mar para su
preparación al incluir una mezcla definida de sales posibilitando su
producción industrial y posterior comercialización y, por tanto, el
uso de este medio en cualquier parte del mundo. El medio Agar TM
puede ser utilizado para el aislamiento del microorganismo a partir
de peces o de muestras ambientales (agua de mar o sedimento) y el
medio Caldo TM puede emplearse para el enriquecimiento de muestras o
la obtención de masa celular.
La comparación de los medios sólidos Agar FM y
Agar TM, tanto en condiciones de laboratorio (utilizando cultivos
puros de cepas de T. maritimum) como en condiciones de campo
(muestras de peces, sedimento y agua), indican que el medio Agar TM
es de utilidad para el aislamiento de la bacteria con fines de
diagnóstico así como para su cultivo rutinario en laboratorio.
La composición de los medios es la siguiente:
\dotable{\tabskip6pt#\hfil\+#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{ \+ gramos (g)\cr Peptona bacteriológica \+ 5,0\cr Extracto de Levadura \+ 0,5\cr Cloruro Sódico \+ 19,4\cr Cloruro de Magnesio \+ 5,9\cr Sulfato Sódico \+ 3,24\cr Cloruro Cálcico \+ 1,8\cr Cloruro Potásico \+ 0,55\cr Bicarbonato Sódico \+ 0,16\cr Acetato Sódico \+ 0,01 pH Final: 7,4 \pm 0,2\cr Bromuro Potásico \+ 0,08\cr Cloruro de Estroncio \+ 0,034\cr Acido Bórico \+ 0,022\cr Silicato Sódico \+ 0,004\cr Fluoruro Sódico \+ 0,0024\cr Nitrato Amónico \+ 0,0016\cr Fosfato Disódico \+ 0,008\cr Agar bacteriológico \+ 15\cr Total gramos \+ 51,7\cr}
\dotable{\tabskip6pt#\hfil\+#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{ \+ gramos (g)\cr Peptona bacteriológica \+ 5,0\cr Extracto de Levadura \+ 0,5\cr Cloruro Sódico \+ 19,4\cr Cloruro de Magnesio \+ 5,9\cr Sulfato Sódico \+ 3,24\cr Cloruro Cálcico \+ 1,8\cr Cloruro Potásico \+ 0,55\cr Bicarbonato Sódico \+ 0,16\cr Acetato Sódico \+ 0,01 pH Final: 7,4 \pm 0,2\cr Bromuro Potásico \+ 0,08\cr Cloruro de Estroncio \+ 0,034\cr Acido Bórico \+ 0,022\cr Silicato Sódico \+ 0,004\cr Fluoruro Sódico \+ 0,0024\cr Nitrato Amónico \+ 0,0016\cr Fosfato Disódico \+ 0,008\cr Total gramos \+ 36,7\cr}
Suspender 51,7 gramos del Agar TM en un litro de
agua destilada. Disolver por calentamiento agitando constantemente y
hervir durante 1 min. Esterilizar en autoclave a 121ºC durante 15
minutos. El medio preparado es de color ámbar claro y
transparente.
Suspender 36,7 gramos del Caldo TM en un litro de
agua destilada. Disolver por calentamiento agitando constantemente y
hervir durante 1 min. Esterilizar en autoclave a 121ºC durante 15
minutos. El medio preparado es de color ámbar claro y
transparente.
Los medios Agar TM y Caldo TM deben almacenarse a
temperaturas de 2-8ºC, debido a que son altamente
higroscópicos.
Claims (2)
1. Preparación de medios de cultivo Agar y Caldo
Tenacibaculum maritimum para el aislamiento y cultivo de
Tenacibaculum maritimum caracterizado por la
disolución en agua destilada de Peptona bacteriológica (5 g/L),
Extracto de levadura (0,5 g/L), Cloruro Sódico (19,4 g/L), Cloruro
de Magnesio (5,9 g/L), Sulfato sódico (3,24 g/L), Cloruro Cálcico
(1,8 g/L), Cloruro Potásico (0,55 g/L), Bicarbonato Sódico (0,16
g/L), Acetato Sódico (0,01 g/L), Bromuro Potásico (0,08 g/L),
Cloruro de Estroncio (0,034 g/L), Ácido Bórico (0,022 g/L), Silicato
Sódico (0,004 g/L), Fluoruro Sódico (0,0024 g/L), Nitrato Amónico
(0,0016 g/L), Fosfato Disódico (0,008 g/L).
2. Preparación del medio de cultivo Agar
Tenacibaculum maritimum para el aislamiento y cultivo de
Tenacibaculum maritimum, según la reivindicación 1,
caracterizado por la disolución en agua destilada de todos
los componentes descritos en la reivindicación 1, y además por la
adición de Agar bacteriológico (15 g/L).
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---|---|---|---|---|
GB1234226A (es) * | 1967-05-26 | 1971-06-03 | ||
US5587313A (en) * | 1995-03-10 | 1996-12-24 | University Of Maryland | Method for fermentation of marine bacteria |
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GB1234226A (es) * | 1967-05-26 | 1971-06-03 | ||
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Also Published As
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