EP4658773A1 - Composition enzymatique pour le traitement de la plaque dentaire et du biofilm bactérien de la plaque et pour le blanchiment naturel de l'émail des dents - Google Patents

Composition enzymatique pour le traitement de la plaque dentaire et du biofilm bactérien de la plaque et pour le blanchiment naturel de l'émail des dents

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EP4658773A1
EP4658773A1 EP24702955.6A EP24702955A EP4658773A1 EP 4658773 A1 EP4658773 A1 EP 4658773A1 EP 24702955 A EP24702955 A EP 24702955A EP 4658773 A1 EP4658773 A1 EP 4658773A1
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EP
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enzyme
mutanase
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complex according
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Definitions

  • the technical field of the invention is that of hygiene products and oral cosmetics.
  • the present invention relates to a novel enzyme complex capable of preventing the formation of dental plaque, caries and tartar, while achieving natural whitening of the enamel.
  • the present invention also relates to a novel form of prevention and treatment of dental bacterial biofilm by said enzyme complex.
  • the sugar provided by food is broken down into glucans by cariogenic bacteria in the oral cavity, which form a bacterial biofilm on tooth enamel.
  • a bacterial biofilm is an organized and structured community of bacterial cells entangled in an extracellular matrix of variable density and composition.
  • the majority of dental biofilm matrix is made up of polysaccharides. In fact, up to 40% of the dry weight of dental biofilm is composed of polysaccharides.
  • this bacterial biofilm grows in thickness on the teeth, first forming soft dental plaque, composed of soluble glucans (known as (1 - 6)-a-D-glucan or dextrans), then plaque. hard dental formed by the transformation of said dextrans into water-insoluble glucans (known as (1 -3)-a-D-glucan or mutanes).
  • Streptococcus mutans is the main cause of the formation of bacterial biofilm, the main cause of cavities, because it uses dietary sucrose to produce lactic acid and synthesize extracellular polysaccharides. in particular (1 -3) and (1 -6)-aD-glucans, which promote the formation of biofilms and increase the resistance of microorganisms in the biofilm. Lactic acid demineralizes the tooth surface, which promotes the formation of dental plaque and periodontitis.
  • the acidic biofilm formed by Streptococcus mutans is very resistant to the hostile environment, host immunity and antimicrobial treatments, notably lysozyme. The latest research on dental pathology shows the difficulty of eliminating these streptococci protected within the matrix by the bacterial biofilm. [0010] There is therefore a need to prevent the proliferation of Streptococcus mutans.
  • Lactoperoxidase is an enzyme that is known for its bactericidal effect in the presence of hydrogen peroxide and thiocyanate, in particular against Streptococcus mutans. It is known to provide these three substances by providing exogenous lactoperoxidase, glucose oxidase and potassium thiocyanate. In this type of composition, however, the formation of hydrogen peroxide is insufficient for the bactericidal effect of the lactoperoxidase to significantly affect the Streptococcus mutans biofilm from the point of view of reducing the formation of caries and/or tartar. Furthermore, the provision of exogenous glucose in this type of composition is not recommended in the field of oral hygiene. This solution is therefore not satisfactory for preventing the proliferation of Streptococcus mutans.
  • the invention offers a solution to the problems mentioned above, by providing an enzymatic complex whose composition, which is based in particular on a synergistic action of its different constituents, results from numerous studies carried out by the applicant. Of natural origin, this enzymatic complex is respectful of the overall health of the consumer and has no side effects.
  • One aspect of the invention relates to an enzyme complex for use in the treatment of dental plaque and the bacterial biofilm of plaque and for the natural whitening of tooth enamel, comprising the following compounds: a saccharase enzyme, a mixture of glucanohydrolase enzymes comprising a dextranase, a mutanase having an exolytic activity and obtained from a fungus, and a mutanase having an endolytic activity and obtained from a bacterium, a glycoside hydrolase enzyme, an oxidoreductase enzyme, a peroxidase enzyme.
  • the mixture of glucanohydrolase enzymes comprises a mixture of chimeric glucanases comprising a dextranase and a mutanase linked by genetic engineering.
  • the mutanase having exolytic activity is obtained from a fungus Trichoderma Harzianum.
  • the mutanase having endolytic activity is obtained from a bacterium Paracoccus Mutanolyticus, Paenibacillus or Streptomyces
  • the saccharase enzyme is an isomaltase enzyme or an invertase enzyme.
  • the glycoside hydrolase enzyme is an amyloglucosidase enzyme, preferably an amylo-a-1,6 glucosidase.
  • the oxidoreductase enzyme is a glucose oxidase.
  • the peroxidase enzyme is a lactoperoxidase.
  • the enzymatic complex comprises the following compounds: a saccharase, preferably an invertase or an isomaltase, a dextranase, a mixture of mutanases comprising a mutanase having an exolytic activity and obtained from a fungus, and a mutanase having endolytic activity and obtained from a bacteria, an amyloglucosidase, preferably an amylo-a-1,6 glucosidase, a glucose oxidase, and a lactoperoxidase.
  • the enzymatic complex comprises the following compounds, the percentages indicated being percentages by volume: from 10 to 30%, preferably from 15 to 25%, of a saccharase, from 1 to 10%, preferably 4 to 7%, dextranase, 10 to 40%, preferably 15 to 30%, mixture comprising a mutanase having exolytic activity and obtained from a fungus and a mutanase having endolytic activity and obtained from a bacteria, from 20 to 60%, preferably from 30 to 50%, from an amyloglucosidase, preferably from an amylo-a-1,6 glucosidase, from 5 to 20%, preferably from 7 to 15% , glucose oxidase, and 1 to 10%, preferably 4 to 7%, lactoperoxidase.
  • the enzymatic complex further comprises lysozyme.
  • Another aspect of the invention relates to an oral composition for use in the treatment of dental plaque and the bacterial biofilm of plaque and the natural whitening of tooth enamel, which comprises an enzyme complex as described above. .
  • the oral composition comprises from 1.4 to 3%, preferably from 2.0 to 2.5%, of enzymatic complex.
  • the oral composition further comprises lactoferrin.
  • the oral composition further comprises: from 20 to 60%, preferably from 30 to 50%, of sorbitol, from 1 to 20%, preferably from 5 to 10%, of xylitol , from 0 to 3%, preferably from 1 to 2%, of polysorbate 80, from 0 to 3%, preferably from 1 to 2%, of polysorbate 20, from 0 to 0.5%, preferably from 0.1 to 0 .2%, sodium saccharinate, 0 to 5%, preferably 1 to 2%, colloidal silica, 0 to 3%, preferably 1 to 2%, dimethicone, 0 to 5%, preferably 1 to 2%, mint flavor and/or mint essential oils, 0.1 to 0.5%, preferably 0.1 to 0.3%, zinc citrate, 0 to 0 .5%, preferably 0.1 to 0.2%, potassium thiocyanate, 0 to 0.5%, preferably 0.1 to 0.2%, preservative, and water, according to a sufficient quantity to reach
  • the oral composition is in the form of paste, liquid, gel, mouthwash, nebulosity, spray, capsule, tablet or chewing gum.
  • the glycolytic enzymatic system of the invention makes it possible to significantly reduce the toxicity of Streptococcus mutans.
  • This enzymatic complex acts on dietary sucrose so as to deprive the bacteria of their substrate but also by directly degrading the cell wall of these streptococci.
  • the enzyme complex according to the invention advantageously reduces the quantity of sucrose available in the oral cavity by transforming it into ose monomers (glucose) and fructose, which deprives cariogenic bacteria of metabolic substrate, greatly reduces the production of soluble and insoluble glucans, and thus contributes to the reduction of bacterial biofilm.
  • the complex enzymatic according to the invention advantageously prevents the formation of bacterial biofilm and disassembles existing biofilms.
  • the destruction of the bacterial biofilm also reduces the formation of dental plaque, which is smelly and yellows the teeth under the effect of tobacco or dyes such as coffee or tea.
  • Soluble glucans are transformed into saccharide dimers or trimers by the mixture of glucanohydrolase enzymes, these saccharide derivatives then being transformed into ose monomers by the action of the glycoside hydrolase enzyme, preferably amyloglucosidase, for example amylo-a-1,6 glucosidase, which hydrolyzes the (1 -6)-a-D saccharide bonds of ose dimers and trimers.
  • the glycoside hydrolase enzyme preferably amyloglucosidase, for example amylo-a-1,6 glucosidase, which hydrolyzes the (1 -6)-a-D saccharide bonds of ose dimers and trimers.
  • the residual saccharide derivatives coming from the degradation of the glucans of dental plaque are then transformed into ose monomers by a glycoside hydrolase enzyme hydrolyzing the saccharide (1 -6)-aD, while the ose monomers are transformed by the enzyme oxidoreductase to D-glucono-delta-lactone, but also especially to hydrogen peroxide.
  • the oxidoreductase enzyme forms hydrogen peroxide from ose monomers.
  • the formation of hydrogen peroxide is advantageous because it has an antiseptic effect actively participating in eliminating Streptococcus mutans, and a natural whitening effect on the enamel, which contributes to a more beautiful appearance of the teeth.
  • the enzymatic complex according to the invention provides several sources of hydrogen peroxide in the oral cavity, by the in situ transformation of sucrose, saccharide dimers and trimers, and soluble glucans. and glucans insoluble in ose monomers, that is to say in glucose.
  • the glucose thus available on a regular basis, allows, through its transformation by the enzyme gluco-oxidase, to produce hydrogen peroxide directly in contact with the teeth in a regular, gentle and lasting manner, for an optimal effect with regard to oral hygiene and enamel whitening.
  • the quantity of glucose present in the oral cavity at any time advantageously remains much lower and therefore much less harmful than when exogenous glucose is supplied.
  • the hydrogen peroxide generated in situ thanks to the enzymatic complex according to the invention is produced in a much lower quantity than that usually used for teeth whitening which is supplied exogenously, but it is also present in the oral cavity for a longer period, which makes it possible to provide a satisfactory progressive whitening effect, without being accompanied by the usual effects encountered with a massive and exogenous supply of hydrogen peroxide, namely: demineralization of the hard tissues of the tooth , irritation of the mucous membranes, reaction with filling materials, premature wear of the enamel with hypersensitivity and weakening of the teeth.
  • the peroxidase enzyme advantageously transforms the thiocyanate naturally present in saliva into hypothiocyanate, which is a powerful bactericide and further reinforces the action of the enzymatic complex of the invention with regard to dental health. To reinforce this effect, it is also possible to add exogenous thiocyanate.
  • a saccharase preferably an invertase or an isomaltase
  • this enzyme breaks down the starch and glycogen possibly present in the oral cavity into dimers of oses (maltose) which are then transformed into ose monomers by an alpha amylase naturally present in saliva.
  • lysozyme to the enzymatic complex according to the invention is advantageous in that it hydrolyzes the polysaccharide cell wall of bacteria and, in the absence of the bacterial biofilm generated by Streptococcus mutans, presents a strong bactericidal activity actively participating in the 'oral hygiene. Indeed, the bactericidal activity of the enzymatic complex according to the invention is reinforced by lysozyme which acts more effectively “after” the disappearance of the bacterial biofilm.
  • the enzymatic complex according to the invention ensures the following beneficial effects while being respectful of the overall health of the consumer and without side effects: an anti-cariogenic sugar action in inhibiting the acidic transformation of dietary sugars and therefore a preventive effect against cavities, an action of destructuring the bacterial biofilm of dental plaque and therefore a preventive effect against periodontal diseases and tartar, an action of cleaning up the microbiota of the cavity oral by reduction of pathogenic bacteria under the effect of stimulation of the salivary lactoperoxidase system, a gentle and prolonged action of whitening of dental enamel by natural production of hydrogen peroxide.
  • lactoferrin to an oral composition comprising an enzyme complex, by ensuring the chelation of iron necessary for the binding of the polysaccharides of the microbial envelope, necessary for the survival of cariogenic streptococci, advantageously leads to better eradication of the Streptococcus mutans biofilm and participates in the synergy mentioned above. Indeed, lactoferrin lyses the bacterial membrane of many organisms, including acidogenic streptococci, and thus significantly increases the body's immune defenses.
  • Streptococcus mutans uses dietary sucrose to synthesize extracellular polysaccharides (EPS) in order to promote the formation of bacterial biofilms.
  • EPS extracellular polysaccharides
  • a-(1-6) (dextran)-linked glucose polymer with a-(1-3) (mutane) branch linkages plays a crucial role in regulating of the formation and virulence of the cariogenic biofilm by influencing the physical and biochemical properties of the biofilm.
  • Cariogenic biofilm can promote the accumulation and adhesion of microorganisms and accelerate the coherence of bacterial cells with each other and with the apatite surface, thereby modulating the initial stages of cariogenic biofilm development and proliferation and facilitating the formation of dental plaque. mature.
  • the EPS matrix protects microorganisms from hostile influences, affects the diffusion of substances into and out of the biofilm, and helps concentrate metal ions and other physiological nutrients in a microenvironment.
  • the cariogenic biofilm hinders the diffusion of host-induced antibiotics and antimicrobial factors into the deeper layers of the biofilm, thereby increasing the resistance of microorganisms in the biofilm.
  • DexA dextranase hydrolyzes the a-1,6 bonds of dextran and produces isomaltoligosaccharides of different sizes.
  • Dextranase DexA is crucial in the bacterial biofilm formation process and considered responsible for the pathogenic plaque ecosystem: DexA dextranase hydrolyzes glucans as potential storage polysaccharides to provide nutrients for bacteria metabolism and controlling the quantity and content of extracellular glucans to make it more adhesive.
  • the effect of the dextranase DexA can be competed by an external dextranase enzyme.
  • the saccharide derivatives thus obtained give ose monomers which, under the action of oxidoreductase enzymes, produce hydrogen peroxide which triggers the highly bactericidal salivary lactoperoxidase reaction and results in the disappearance of the bacterial biofilm.
  • enzyme complex we mean here a stable association and according to a defined structure of a number of different proteins whose various enzymatic activities will in an ordered manner contribute to the development of a synergistic activity on a target substrate.
  • the enzymatic complex according to the invention is intended for oral use in order to improve oral health and whiten tooth enamel.
  • a saccharase enzyme in particular capable of hydrolyzing the [3-2.6 and/or [3-2.1] bonds of sucrose
  • a mixture of glucanohydrolase enzymes in particular capable of hydrolyzing (1 -3)-aD-glucans and (1 -6)-aD-glucans
  • a glycoside-hydrolase enzyme in particular capable of hydrolyzing the bonds (1 -6)- aD saccharides of ose dimers and trimers
  • an oxidoreductase enzyme in particular capable of decomposing ose monomers to form hydrogen peroxide
  • a peroxidase enzyme in particular capable of transforming thiocyanate into hypothiocyanate in the presence of hydrogen peroxide .
  • the saccharase enzyme capable of hydrolyzing the [3-2,6 and/or [3-2,1] bonds of sucrose is preferably an invertase or an isomaltase, degrading sucrose into glucose and fructose.
  • the mixture of glucanohydrolase enzymes degrades dental plaque into ose dimers or trimers. It is preferably a mixture of mutanase and dextranase. Dextranase degrades soft dental plaque by transforming soluble dextrans into type 1,6 saccharide polymers dimers or ose trimers, while mutanase degrades insoluble mutans of hard plaque by transforming them into type 1,3 saccharide polymers ose dimers or trimers.
  • a mutanase having an exolytic activity and a mutanase having an endolytic activity are preferred.
  • a mutanase having exolytic activity it is possible to use a mutanase obtained from a fungus, in particular the fungus Trichoderma Harzianum.
  • a mutanase having endolytic activity it is possible to use a mutanase obtained from a bacterium, in particular the bacterium Paracoccus Mutanolyticus, the bacterium Paenibacillus or the bacterium Streptomyces.
  • mixture of glucanohydrolase enzymes instead of a mixture of mutanase and dextranase, it is also possible to use a mixture of chimeric glucanases comprising a dextranase and a mutanase linked by genetic engineering.
  • the enzyme glycoside hydrolase is an enzyme which reduces ose dimers or trimers into saccharide monomers, that is to say glucose. It is preferentially an amyloglucosidase, more preferably an enzyme amylo-a-1,6 glucosidase. Amyloglucosidase transforms sugar derivatives into glucose.
  • the oxidoreductase enzyme is an enzyme which transforms glucose into hydrogen peroxide. It is preferably a glucose oxidase, also referred to as gluco-oxidase.
  • the enzyme gluco-oxidase converts glucose into D-glucono-delta-lactone and hydrogen peroxide.
  • D-glucono-delta-lactone is an acidity regulator. In the oral cavity, it partially transforms into gluconic acid.
  • the peroxidase enzyme transforms the thiocyanate into hypothiocyanate according to the following reaction:
  • the peroxidase enzyme is preferably a lactoperoxidase.
  • hypothiocyanate a strong bactericide, limits the growth of bacteria in the oral cavity.
  • the enzymatic complex according to the invention preferably has the following composition (the percentages indicated are percentages by volume):
  • Invertase 10 to 30%, preferably 15 to 25%,
  • Mutanase from 10 to 40%, preferably from 15 to 30%,
  • Dextranase from 1 to 10%, preferably from 4 to 7%
  • Amyloglucosidase from 20 to 60%, preferably from 30 to 50%
  • Glucose oxidase from 5 to 20%, preferably from 7 to 15%
  • Lactoperoxidase from 1 to 10%, preferably 4 to 7%.
  • the table below gives an example of a CET control formulation of an enzyme complex with a high quantity of amyloglucosidase and without mutanase, and three examples of CE1 -3 formulations for the enzyme complex according to the invention. The percentages indicated are volume percentages.
  • CE1 formulation gave more satisfactory results than the CET formulation. Indeed, compared to control subjects, in subjects participating in the study for six months and having used this formulation, we noticed a lower quantity of dental plaque in the oral cavity, as well as a clear whitening of the tooth enamel (+1 shade of white).
  • CE2 formulation gave more satisfactory results than the CET formulation. Indeed, compared to control subjects, in subjects participating in the study for six months and having used this formulation, we noticed a lower quantity of dental plaque in the oral cavity, as well as a clear whitening of the tooth enamel (+1 shade of white).
  • Formulation CE3 gave more satisfactory results than formulations CE1 and CE2. Indeed, compared to control subjects, in subjects participating in the study for six months and having used this formulation, we noticed a virtual absence of dental plaque in the oral cavity, as well as a strong whitening of the tooth enamel (+2 shades of white).
  • the enzymatic complex according to the invention may also comprise lysozyme.
  • the enzymatic complex preferably comprises 0.1 to 0.4% by weight of lysozyme, more preferably 0.2%. It can also preferably comprise from 0 to 0.4% by weight of saccharase, preferably an invertase or an isomaltase, more preferably 0.2% by weight.
  • the enzymatic complex according to the invention can be used in an oral composition for oral health and whitening of enamel.
  • This oral composition can for example be in the form of paste, liquid, gel, mouthwash, nebulosity, spray, capsule, tablet or chewing gum.
  • the oral composition for oral and dental use according to the invention preferably has the following composition (the enzymatic complex is that described above and the percentages indicated are percentages by weight):
  • Enzymatic complex from 1.4 to 3%, preferably from 2.0 to 2.5%
  • Sorbitol 20 to 60%, preferably 30 to 50%
  • Xylitol from 1 to 20%, preferably from 5 to 10%,
  • Polysorbate 80 0 to 3%, preferably 1 to 2%,
  • Polysorbate 20 0 to 3%, preferably 1 to 2%,
  • Sodium saccharinate 0 to 0.5%, preferably 0.1 to 0.2%,
  • Colloidal silica 0 to 5%, preferably 1 to 2%,
  • Dimethicone 0 to 3%, preferably 1 to 2%
  • Mint flavor and/or mint essential oils 0 to 5%, preferably 1 to 2%,
  • Zinc citrate 0.1 to 0.5%, preferably 0.1 to 0.3%,
  • Potassium thiocyanate from 0 to 0.5%, preferably from 0.1 to 0.2%
  • Preservative from 0 to 0.5%, preferably from 0.1 to 0.2%
  • the preservative is preferably citric acid.
  • the oral composition according to the invention may also comprise lactoferrin, preferably from 0 to 0.4% by weight, more preferably 0.1%.
  • the CO1 formulation gave more satisfactory results than the COT formulation. Indeed, compared to the placebo vs CO1 formulation vs chlorhexidine, we noticed a high quantity of Streptococcus salivarius in the placebo, a low quantity of Streptococcus salivarius in the CO1 formulation and a zero quantity in the formulation based on chlorhexidine.
  • the CO2 formulation gave more satisfactory results than the COT formulation and the CO1 formulation. Indeed, compared to the placebo vs CO2 formulation vs chlorhexidine, we noticed a high quantity of Streptococcus salivarius in the placebo, a zero quantity of Streptococcus salivarius in the CO2 formulation and a zero quantity in the chlorhexidine-based formulation.
  • the CO3 formulation gave results as satisfactory as the CO2 formulation. Indeed, compared to the placebo vs. CO3 formulation vs. chlorhexidine, a high amount of Streptococcus salivarius was noted in the placebo, a zero amount of Streptococcus salivarius in the CO3 formulation and a zero amount in the chlorhexidine-based formulation.

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Abstract

Un aspect de l'invention concerne un complexe enzymatique pour la santé bucco-dentaire, pour utilisation dans un traitement de la plaque dentaire et du biofilm bactérien de la plaque dentaire et pour le blanchiment naturel de l'émail, comprenant une combinaison des composés suivants : - une enzyme saccharase, notamment apte à hydrolyser les liaisons β-2,6 et/ou β-2,1 du saccharose; - un mélange d'enzymes glucanohydrolases comprenant une mutanase ayant une activité exolytique et obtenue à partir d'un fungus, et une mutanase ayant une activité endolytique et obtenue à partir d'une bactérie, notamment apte à hydrolyser les (1-3)-α-D-glucanes et (1-6)-α-D-glucanes - une enzyme glycoside hydrolase, notamment apte à hydrolyser les liaisons (1-6)-α-D osidiques des dimères et trimères d'oses; - une enzyme oxyde réductase, notamment apte à former du peroxyde d'hydrogène à partir de glucose et des monomères d'oses; une enzyme peroxydase, notamment apte à transformer le thiocyanate en hypothiocyanate en présence de peroxyde d'hydrogène.

Description

COMPOSITION ENZYMATIQUE POUR LE TRAITEMENT DE LA PLAQUE DENTAIRE ET DU BIOFILM BACTÉRIEN DE LA PLAQUE ET POUR LE BLANCHIMENT NATUREL DE L’ÉMAIL DES DENTS
DOMAINE TECHNIQUE DE L’INVENTION
[0001] Le domaine technique de l’invention est celui des produits d’hygiène et des cosmétiques bucco-dentaires.
[0002] La présente invention concerne un nouveau complexe enzymatique apte à prévenir la formation de la plaque dentaire, des caries et du tartre, tout en réalisant un blanchiment naturel de l’émail. La présente invention concerne également une nouvelle forme de prévention et de traitement du biofilm bactérien dentaire par ledit complexe enzymatique.
ARRIERE-PLAN TECHNOLOGIQUE DE L’INVENTION
[0003] Le sucre apporté par l’alimentation, constitué à plus de 90 % par du saccharose, est dégradé en glucanes par les bactéries cariogènes de la cavité buccale, qui forment un biofilm bactérien sur l’émail des dents. Un biofilm bactérien est une communauté organisée et structurée de cellules bactériennes enchevêtrées dans une matrice extracellulaire de densité et de composition variables. La majorité de la matrice des biofilms dentaires est constituée de polysaccharides. En effet, jusqu’à 40 % du poids sec du biofilm dentaire est composé de polysaccharides. En présence de saccharose, ce biofilm bactérien croit en épaisseur sur les dents en formant d’abord la plaque dentaire molle, composée de glucanes solubles (connus sous le nom de (1 - 6)-a-D-glucane ou dextranes), puis la plaque dentaire dure formée par la transformation desdites dextranes en glucanes insolubles dans l’eau (connus sous le nom de (1 -3)-a-D-glucane ou mutanes).
[0004] Dans le cas d’une alimentation majoritairement sucrée, le pH de la plaque dentaire devient acide et favorise la formation de caries, tandis que dans le cas d’une alimentation majoritairement carnée, le pH devient basique et la plaque dure se calcifie pour donner du tartre qu’il devient très difficile à éliminer.
[0005] D’après un rapport de l’OMS de 2021 , en 2020, 3,5 milliards de personnes dans le monde souffrent de problèmes dentaires liés à la formation de caries et/ou de tartre. De même, d’après les données de l’ American National Health and Nutrition Examination Survey en 2018, 59 % des adolescents de 12 à 19 ans et 92 % des adultes de 20 à 64 ans ont souffert de caries dentaires dans leurs dents permanentes.
Il existe donc toujours un besoin pour réduire ces phénomènes.
[0006] Les approches actuelles pour réduire la plaque dentaire comprennent le nettoyage mécanique, les produits chimiques, les applications de fluorure et les agents antibactériens à action antiseptique à large spectre comme la chlorhexidine. Bien qu’efficaces à court terme, ces thérapies apportent toutes des effets secondaires. En effet, le nettoyage mécanique est connu pour provoquer des problèmes de sensibilité dentaire et des problèmes de saignement des gencives, les produits chimiques sont connus pour représenter un risque sanitaire, l’utilisation du fluorure peut causer des problèmes indésirables majeurs pour la santé humaine, tout en n’ayant qu’un effet modeste sur la prévention des caries dentaires, et la chlorhexidine peut causer des taches sur les dents et des obturations sur les caries. De plus, il a été démontré que l’utilisation d’antiseptiques et de produits chimiques perturbe le microbiote commensal, augmentant les caractéristiques pathogènes et la cytotoxicité des cellules hôtes et causant d’autres effets néfastes sur la santé buccodentaire.
[0007] Ces solutions ne sont donc pas satisfaisantes.
[0008] Il est de plus en plus préféré d’utiliser des traitements plus préventifs et plus respectueux de la santé globale du consommateur, avec des effets secondaires minimes, comme l’utilisation de probiotiques, de prébiotiques ou de substances naturelles, mais leur utilité thérapeutique est notoirement limitée.
[0009] Parmi les bactéries pathogènes de la cavité buccale, le Streptococcus mutans est le principal responsable de la formation de biofilm bactérien, principale cause des caries, car il utilise le saccharose alimentaire pour produire de l’acide lactique et synthétiser des polysaccharides extracellulaires, en particulier des (1 -3) et (1 -6)-a-D-glucanes, qui favorisent la formation de biofilms et accroissent la résistance des microorganismes dans le biofilm. L’acide lactique déminéralise la surface dentaire, ce qui favorise la formation de plaque dentaire et de parodontite. Le biofilm acide formé par le Streptococcus mutans est très résistant à l’environnement hostile, à l’immunité de l’hôte et aux traitements antimicrobiens, notamment au lysozyme. Les dernières recherches sur la pathologie dentaire montrent la difficulté d’éliminer ces streptocoques protégés au sein de la matrice par le biofilm bactérien. [0010] Il existe donc un besoin pour empêcher la prolifération de Streptococcus mutans.
[0011] La lactoperoxydase est une enzyme qui est connue pour son effet bactéricide en présence de peroxyde d'hydrogène et de thiocyanate, notamment à l’encontre de Streptococcus mutans. Il est connu de fournir ces trois substances en apportant de la lactoperoxydase exogène, de la glucose oxydase et du thiocyanate de potassium. Dans ce type de compositions, la formation de peroxyde d'hydrogène est cependant insuffisante pour que l’effet bactéricide de la lactoperoxydase affecte le biofilm de Streptococcus mutans de manière significative du point de vue de la réduction de la formation des caries et/ou du tartre. En outre, l'apport de glucose exogène de ce type de compositions est déconseillé dans le domaine de l'hygiène bucco-dentaire. Cette solution n’est donc pas satisfaisante pour empêcher la prolifération de Streptococcus mutans.
[0012] De manière générale, le problème majeur dans la lutte contre les caries et le tartre, et pour préserver des dents saines et belles, est donc d’avoir chaque jour une plaque dentaire à pH neutre et la plus physiologique possible. Les recherches récentes sur les pathologies dentaires montrent que le meilleur moyen pour les éviter est de pouvoir éradiquer les biofilms bactériens. Dans ce but, il convient notamment d’empêcher la formation du biofilm de Streptococcus mutans et de désassembler les biofilms existants afin de les remplacer par la plaque physiologique, c’est-à-dire le biofilm naturel protecteur qui entoure une dent saine et qui est constitué de salive et de microbiote de la cavité buccale.
[0013] Outre le fait d’avoir les dents saines, il est aussi souhaité d’avoir les dents les plus belles possibles. Il existe ainsi un besoin constant de blanchir l’émail des dents afin de lutter contre leur jaunissement, causé notamment par le vieillissement et la formation de la plaque dentaire insoluble.
[0014] Les documents FR 2651433, FR 2822700, FR 3020758, FR 2803199 et WO 2021/14421 1 divulguent chacun un complexe enzymatique pour la santé bucco- dentaire, mais aucun de ces documents ne divulgue de mélange d’enzymes glucanohydrolases comprenant une mutanase ayant une activité exolytique et obtenue à partir d’un fungus, et une mutanase ayant une activité endolytique et obtenue à partir d’une bactérie. RESUME DE L’INVENTION
[0015] L’invention offre une solution aux problèmes évoqués précédemment, en fournissant un complexe enzymatique dont la composition, qui repose notamment sur une action en synergie de ses différents constituants, résulte de nombreuses études effectuées par le déposant. D’origine naturelle, ce complexe enzymatique est respectueux de la santé globale du consommateur et ne présente pas d’effets secondaires.
[0016] Un aspect de l’invention concerne un complexe enzymatique pour utilisation dans un traitement de la plaque dentaire et du biofilm bactérien de la plaque et pour le blanchiment naturel de l’émail des dents, comprenant les composés suivants : une enzyme saccharase, un mélange d’enzymes glucanohydrolases comprenant une dextranase, une mutanase ayant une activité exolytique et obtenue à partir d’un fungus, et une mutanase ayant une activité endolytique et obtenue à partir d’une bactérie, une enzyme glycoside hydrolase, une enzyme oxydoréductase, une enzyme peroxydase.
[0017] Selon un aspect de l’invention, le mélange d’enzymes glucanohydrolases comprend un mélange de glucanases chimériques comprenant une dextranase et une mutanase liées par génie génétique.
[0018] Selon autre un aspect de l’invention, la mutanase ayant une activité exolytique est obtenue à partir d’un fungus Trichoderma Harzianum.
[0019] Selon un aspect supplémentaire de l’invention, la mutanase ayant une activité endolytique est obtenue à partir d’une bactérie Paracoccus Mutanolyticus, Paenibacillus ou Streptomyces
[0020] Selon un aspect de l’invention, l’enzyme saccharase est une enzyme isomaltase ou une enzyme invertase.
[0021] Selon un autre aspect de l’invention, l’enzyme glycoside hydrolase est une enzyme amyloglucosidase, de préférence une amylo-a-1 ,6 glucosidase. [0022] Selon un aspect supplémentaire de l’invention, l’enzyme oxydoréductase est une glucose oxydase.
[0023] Selon un aspect de l’invention, l’enzyme peroxydase est une lactoperoxydase.
[0024] Selon un autre aspect de l’invention, le complexe enzymatique comprend les composés suivants : une saccharase, de préférence une invertase ou une isomaltase, une dextranase, un mélange de mutanases comprenant une mutanase ayant une activité exolytique et obtenue à partir d’un fungus, et une mutanase ayant une activité endolytique et obtenue à partir d’une bactérie, une amyloglucosidase, de préférence une amylo-a-1 ,6 glucosidase, une glucose oxydase, et une lactoperoxydase.
[0025] Selon un aspect supplémentaire de l’invention, le complexe enzymatique comprend les composés suivants, les pourcentages indiqués étant des pourcentages en volume : de 10 à 30 %, préférentiellement de 15 à 25 %, d’une saccharase, de 1 à 10 %, préférentiellement de 4 à 7 %, de dextranase, de 10 à 40 %, préférentiellement de 15 à 30 %, de mélange comprenant une mutanase ayant une activité exolytique et obtenue à partir d’un fungus et une mutanase ayant une activité endolytique et obtenue à partir d’une bactérie, de 20 à 60 % préférentiellement de 30 à 50 %, d’une amyloglucosidase, de préférence une amylo-a-1 ,6 glucosidase, de 5 à 20 %, préférentiellement de 7 à 15 %, de glucose oxydase, et de 1 à 10 %, préférentiellement de 4 à 7 %, de lactoperoxydase.
[0026] Selon un aspect de l’invention, le complexe enzymatique comprend en outre du lysozyme. [0027] Un autre aspect de l’invention concerne une composition buccale pour utilisation dans un traitement de la plaque dentaire et du biofilm bactérien de la plaque et le blanchiment naturel de l’émail des dents, laquelle comprend un complexe enzymatique tel que décrit précédemment.
[0028] Selon un aspect de l’invention, la composition buccale comprend de 1 ,4 à 3 %, préférentiellement de 2,0 à 2,5 %, de complexe enzymatique.
[0029] Selon un autre aspect de l’invention, la composition buccale comprend en outre de la lactoferrine.
[0030] Selon un aspect supplémentaire de l’invention, la composition buccale comprend en outre : de 20 à 60 %, préférentiellement de 30 à 50 %, de sorbitol, de 1 à 20 %, préférentiellement de 5 à 10 %, de xylitol, de 0 à 3 %, préférentiellement de 1 à 2 %, de polysorbate 80, de 0 à 3 %, préférentiellement de 1 à 2 %, de polysorbate 20, de 0 à 0,5 %, préférentiellement de 0,1 à 0,2 %, de saccharinate de sodium, de 0 à 5 %, préférentiellement de 1 à 2 %, de silice colloïdale, de 0 à 3 %, préférentiellement de 1 à 2 %, de diméthicone, de 0 à 5 %, préférentiellement de 1 à 2 %, d’arome de menthe et/ou d’huiles essentielles de menthe, de 0,1 à 0,5 %, préférentiellement de 0,1 à 0,3 %, de citrate de zinc, de 0 à 0,5 %, préférentiellement de 0,1 à 0,2 %, de thiocyanate de potassium, de 0 à 0,5 %, préférentiellement de 0,1 à 0,2 %, de conservateur, et de l’eau, selon une quantité suffisante pour atteindre 100 %.
[0031] Selon un aspect de l’invention, la composition buccale est sous la forme de pâte, de liquide, de gel, de bain de bouche, de nébulosité, de spray, de capsule, de comprimé ou de chewing-gum.
[0032] Comme cela sera vu en détail ci-après, en associant diverses actions bactériostatiques et bactéricides à l’encontre des streptocoques cariogènes, le système enzymatique glycolytique de l’invention permet de diminuer de manière significative la toxicité des Streptococcus mutans. Ce complexe enzymatique agit sur le saccharose alimentaire de manière à priver les bactéries de leur substrat mais aussi en dégradant directement la paroi cellulaire de ces streptocoques.
[0033] Grâce à l’enzyme saccharase, de préférence une invertase ou une isomaltase, qui hydrolyse les liaisons [3-2,6 et /ou [3-2,1 du saccharose, le complexe enzymatique selon l’invention réduit avantageusement la quantité de saccharose disponible dans la cavité buccale en le transformant en monomères d’oses (glucose) et en fructose, ce qui prive les bactéries cariogènes de substrat métabolique, réduit fortement la production des glucanes solubles et insolubles, et contribue ainsi à la diminution du biofilm bactérien.
[0034] Grâce au mélange d’enzymes glucanohydrolases, qui hydrolyse les liaisons (1 -3) et (1 -6)-a-D-glucane, qui sont des constituants structurels et fonctionnels clés de la matrice du biofilm de Streptococcus mutans, le complexe enzymatique selon l’invention empêche avantageusement la formation de biofilm bactérien et désassemble les biofilms existants. La destruction du biofilm bactérien réduit en outre la formation de la plaque dentaire, qui est malodorante et jaunit les dents sous l’effet du tabac ou de colorants tels que le café ou le thé. Les glucanes solubles sont transformés en dimères ou trimères osidiques par le mélange d’enzymes glucanohydrolases, ces dérivés osidiques étant ensuite transformés en monomères d’oses par l'action de l’enzyme glycoside hydrolase, de préférence l’amyloglucosidase, par exemple l’amylo-a-1 ,6 glucosidase, qui hydrolyse les liaisons (1 -6)-a-D osidiques des dimères et trimères d’oses.
[0035] L’association préférentielle d’une dextranase avec une mutanase, plus préférentiellement issue de différents fungus ou bactéries, ou d’une glucanase chimérique (dextranase-mutanase), montre des effets très satisfaisants visant à empêcher la formation de biofilm de Streptococcus mutans et à désassembler les biofilms existants en quelques minutes à des concentrations nano molaires. Cette association améliore nettement la sensibilité du biofilm aux agents antimicrobiens et antibactériens, tel que le lysozyme, soulignant son grand potentiel dans la lutte contre les caries dentaires liées au biofilm acide. [0036] Les dérivés osidiques résiduels provenant de la dégradation des glucanes de la plaque dentaire sont ensuite transformés en monomères d’oses par une enzyme glycoside hydrolase hydrolysant les (1 -6)-a-D osidiques, tandis que les monomères d’oses sont transformés par l’enzyme oxydoréductase en D-glucono-delta-lactone, mais aussi surtout en peroxyde d’hydrogène. En effet, l’enzyme oxydoréductase forme du peroxyde d’hydrogène à partir des monomères d’oses. La formation de peroxyde d’hydrogène est avantageuse car elle a un effet antiseptique participant activement à éliminer les Streptococcus mutans, et un effet de blanchiment naturel de l’émail, qui participe à une plus belle apparence des dents.
[0037] Ces effets bénéfiques sont avantageusement renforcés par le fait que le complexe enzymatique selon l’invention fournit plusieurs sources de peroxyde d’hydrogène dans la cavité buccale, par la transformation in situ du saccharose, des dimères et trimères osidiques, des glucanes solubles et des glucanes insolubles en monomères d’oses, c’est-à-dire en glucose. Le glucose ainsi disponible de manière régulière, permet par sa transformation par l’enzyme gluco-oxydase, de produire du peroxyde d'hydrogène directement au contact des dents de manière régulière, douce et durable, pour un effet optimal vis-à-vis de l’hygiène bucco-dentaire et du blanchiment de l’émail. Le glucose étant transformé en temps réel, la quantité de glucose présente dans la cavité buccale à chaque instant reste avantageusement bien plus faible et donc beaucoup moins néfaste que lors d’un apport de glucose exogène.
[0038] Le peroxyde d’hydrogène généré in situ grâce au complexe enzymatique selon l’invention est produit selon une quantité beaucoup plus faible que celle habituellement utilisée pour le blanchiment des dents qui est fournie de manière exogène, mais il est aussi présent dans la cavité buccale pendant une durée plus longue, ce qui permet de procurer un effet de blanchiment progressif satisfaisant, sans s’accompagner des effets habituels rencontrés avec un apport massif et exogène en peroxyde d’hydrogène, à savoir : déminéralisation des tissus durs de la dent, irritation des muqueuses, réaction avec les matériaux d’obturation, usure prématurée de l’émail avec hypersensibilité et fragilisation des dents.
[0039] En outre, en présence de peroxyde d’hydrogène, l’enzyme peroxydase transforme avantageusement le thiocyanate présent naturellement dans la salive en hypothiocyanate, qui est un puissant bactéricide et renforce encore l’action du complexe enzymatique de l’invention vis-à-vis de la santé dentaire. Pour renforcer cet effet, il est également possible d’ajouter du thiocyanate exogène.
[0040] L’ajout d’une saccharase, de préférence une invertase ou une isomaltase, au complexe enzymatique selon l’invention est avantageux en ce que cette enzyme décompose l'amidon et le glycogène éventuellement présents dans la cavité buccale en dimères d’oses (maltose) qui sont ensuite transformés en monomères d’oses par une alpha amylase présente naturellement dans la salive.
[0041] L’ajout de lysozyme au complexe enzymatique selon l’invention est avantageux en ce qu’il hydrolyse la paroi cellulaire polyosidique des bactéries et, en absence du biofilm bactérien généré par Streptococcus mutans, présente une forte activité bactéricide participant activement à l’hygiène bucco-dentaire. En effet, l’activité bactéricide du complexe enzymatique selon l’invention est renforcée par le lysozyme qui agit plus efficacement « après » la disparition du biofilm bactérien.
[0042] En résumé, par l’action en synergie de ses composants, le complexe enzymatique selon l’invention assure les effets bénéfiques suivants tout en étant respectueux de la santé globale du consommateur et sans effets secondaires : une action anti-sucre cariogène en inhibant la transformation acide des sucres alimentaires et donc un effet préventif contre les caries, une action de déstructuration du biofilm bactérien de la plaque dentaire et donc un effet préventif contre les maladies parodontales et le tartre, une action d’assainissement du microbiote de la cavité orale par diminution des bactéries pathogènes sous l’effet de stimulation du système lactoperoxydasique salivaire, une action douce et prolongée de blanchiment de l’émail dentaire par production naturelle de peroxyde d’hydrogène.
[0043] L’ajout de lactoferrine dans une composition à usage buccal comprenant un complexe enzymatique, en assurant la chélation du fer nécessaire à la liaison des polysaccharides de l'enveloppe microbienne, nécessaire à la survie des streptocoques cariogènes, conduit avantageusement à une meilleure éradication du biofilm de Streptococcus mutans et participe à la synergie évoquée plus haut. En effet, la lactoferrine lyse la membrane bactérienne de nombreux organismes, dont les streptocoques acidogènes, et augmente ainsi fortement les défenses immunitaires de l'organisme.
[0044] L’invention et ses différentes applications seront mieux comprises à la lecture de la description qui suit.
DESCRIPTION DETAILLEE
[0045] Le Streptococcus mutans utilise le saccharose alimentaire pour synthétiser des polysaccharides extracellulaires (EPS) afin de favoriser la formation de biofilms bactériens. Des études récentes montrent que la matrice EPS, constituée d’un polymère de glucose lié au a-(1-6) (dextrane) avec des liaisons de branche a-(1-3) (mutane) joue un rôle crucial dans la régulation de la formation et de la virulence du biofilm cariogène en influençant les propriétés physiques et biochimiques du biofilm. Le biofilm cariogène peut favoriser l’accumulation et l’adhérence des microorganismes et accélérer la cohérence des cellules bactériennes entre elles et avec la surface apatite, modulant ainsi les étapes initiales du développement et de la prolifération du biofilm cariogène et facilitant la formation de plaque dentaire mature. De plus, en tant que source d’énergie de réserve, la matrice EPS protège les microorganismes des influences hostiles, affecte la diffusion des substances dans et hors du biofilm et aide à concentrer les ions métalliques et d’autres nutriments physiologiques dans un microenvironnement. En tant que barrière physique, le biofilm cariogène entrave la diffusion des antibiotiques et des facteurs antimicrobiens induits par l’hôte dans les couches les plus profondes du biofilm, ce qui accroît la résistance des microorganismes dans le biofilm. Pour faire cela Streptococcus mutans produit une dextranase, DexA, qui hydrolyse les liaisons a-1 ,6 du dextrane et produit des isomaltoligosaccharides de différentes tailles. La dextranase DexA est crucial dans le processus de formation du biofilm bactérien et considéré comme responsable de l’écosystème de la plaque dentaire pathogène : la dextranase DexA hydrolyse les glucanes en tant que polysaccharides de stockage potentiels pour fournir des nutriments pour le métabolisme des bactéries et contrôle de la quantité et de la teneur en glucanes extracellulaires pour le rendre plus adhésif. Néanmoins l’effet de la dextranase DexA peut être concurrencé par une enzyme dextranase d’apport externe.
[0046] Lors des études réalisées afin de sélectionner le complexe enzymatique approprié selon l’invention, il a notamment été cherché à identifier des enzymes qui ciblent et dégradent sélectivement l’EPS. Dans cette étude, il a été constaté que la dextranase montre une activité beaucoup plus élevée dans l’inhibition de la formation de biofilm et la perturbation d’un biofilm préformé lorsqu’il est fourni de manière exogène en association avec une mutanase. Mais plus intéressant encore, il a été constaté que l’utilisation d’une mutanase issue de différentes origines, l’une d’origine fongique d’action exolytique, l’autre bactérienne d’action endolytique comme le streptocoque, ou d’une glucanase chimérique (dextranase-mutanase), empêche la formation de biofilm de Streptococcus mutans de manière très satisfaisante, et désassemble les biofilms existants en quelques minutes à des concentrations nano molaires. Cette association améliore nettement la sensibilité du biofilm aux agents antimicrobiens et au lysozyme, soulignant son grand potentiel dans la lutte contre les caries dentaires liées au biofilm acide.
[0047] Cette action innovante sur le biofilm bactérien associée à une invertase, une isomaltase ou une autre enzyme de la famille des saccharases, qui dégrade le saccharose et ainsi prive les bactéries cariogènes de substrat métabolique, diminue fortement la production de glucanes et ainsi contribue à une diminution sensible du biofilm bactérien. Les dérivés osidiques ainsi obtenus donnent des monomères d’oses qui sous l’action d’enzymes oxydoréductases produisent du peroxyde d’hydrogène qui déclenche la réaction lactoperoxydasique salivaire fortement bactéricide et aboutit à la disparition du biofilm bactérien.
[0048] Par ailleurs ce peroxyde d’hydrogène, produit en faible quantité mais de manière continue, permet de blanchir naturellement et de façon progressive l’émail dentaire évitant ainsi tout problème de sensibilité dentaire.
[0049] Le complexe enzymatique selon l’invention sera décrit en détail ci-après.
[0050] Par complexe d'enzymes on entend ici une association stable et selon une structure définie d’un nombre de protéines différentes dont les diverses activités enzymatiques vont de manière ordonnée concourir à l’élaboration d'une activité synergique sur un substrat cible.
[0051] Le complexe enzymatique selon l’invention est prévu pour une utilisation buccale afin d’améliorer la santé bucco-dentaire et de blanchir l’émail des dents.
[0052] Il comprend une combinaison des constituants suivants : une enzyme saccharase, notamment apte à hydrolyser les liaisons [3-2,6 et/ou [3-2,1 du saccharose, un mélange d’enzymes glucanohydrolases, notamment apte à hydrolyser les (1 -3)-a-D-glucanes et (1 -6)-a-D-glucanes, une enzyme glycoside-hydrolase, notamment apte à hydrolyser les liaisons (1 -6)-a-D osidiques des dimères et trimères d’oses, une enzyme oxydoréductase, notamment apte à décomposer les monomères d’oses pour former du peroxyde d’hydrogène, une enzyme peroxydase, notamment apte à transformer le thiocyanate en hypothiocyanate en présence de peroxyde d’hydrogène.
[0053] L’enzyme saccharase apte à hydrolyser les liaisons [3-2,6 et/ou [3-2,1 du saccharose est de préférence une invertase ou une isomaltase, dégradant le saccharose en glucose et en fructose.
[0054] Le mélange d’enzymes glucanohydrolases dégrade la plaque dentaire en dimères ou trimères d’oses. Il s’agit préférentiellement d’un mélange de mutanase et de dextranase. La dextranase dégrade la plaque dentaire molle en transformant les dextranes solubles en polymères osidiques de type 1 ,6 dimères ou trimères d’oses, tandis que la mutanase dégrade les mutanes insolubles de la plaque dure en les transformant en polymères osidiques de type 1 ,3 dimères ou trimères d’oses.
[0055] Dans le mélange d’enzymes glucanohydrolases, on préfère une mutanase ayant une activité exolytique et une mutanase ayant une activité endolytique. Comme mutanase ayant une activité exolytique, on peut utiliser une mutanase obtenue à partir d’un fungus, notamment le fungus Trichoderma Harzianum. Comme mutanase ayant une activité endolytique, on peut utiliser une mutanase obtenue à partir d’une bactérie, notamment la bactérie Paracoccus Mutanolyticus, la bactérie Paenibacillus ou la bactérie Streptomyces.
[0056] Dans le mélange d’enzymes glucanohydrolases, à la place d’un mélange de mutanase et de dextranase, on peut également utiliser un mélange de glucanases chimériques comprenant une dextranase et une mutanase liées par génie génétique.
[0057] L’enzyme glycoside hydrolase est une enzyme qui réduit les dimères ou trimères d’oses en monomères osidiques, c’est-à-dire en glucose. Il s’agit préférentiellement d’une amyloglucosidase, plus préférentiellement d’une enzyme amylo-a-1 ,6 glucosidase. L’amyloglucosidase transforme les dérivés osidiques en glucose.
[0058] L’enzyme oxydoréductase est une enzyme qui transforme le glucose en peroxyde d’hydrogène. Il s’agit préférentiellement d’une glucose oxydase, également désignée en tant que gluco-oxydase. L’enzyme gluco-oxydase transforme le glucose en D-glucono-delta-lactone et en peroxyde d’hydrogène. Le D-glucono-delta-lactone est un régulateur d'acidité. Dans la cavité buccale, il se transforme partiellement en acide gluconique.
[0059] En présence de peroxyde d’hydrogène, l’enzyme peroxydase transforme le thiocyanate en hypothiocyanate selon la réaction suivante :
[0060] SCN + H2O2 => OSCN + H2O
[0061] L’enzyme peroxydase est préférentiellement une lactoperoxydase.
[0062] L’hypothiocyanate, bactéricide fort, limite la croissance des bactéries dans la cavité buccale.
[0063] Le complexe enzymatique selon l’invention présente préférentiellement la composition suivante (les pourcentages indiqués sont des pourcentages en volume) :
Invertase : de 10 à 30 %, préférentiellement de 15 à 25 %,
Mutanase : de 10 à 40 %, préférentiellement de 15 à 30 %,
Dextranase : de 1 à 10 %, préférentiellement de 4 à 7 %, Amyloglucosidase : de 20 à 60 %, préférentiellement de 30 à 50 %, Glucose oxydase : de 5 à 20 %, préférentiellement de 7 à 15 %, et Lactoperoxydase : de 1 à 10 %, préférentiellement de 4 à 7 %.
[0064] Le tableau ci-dessous donne un exemple de formulation témoin CET de complexe enzymatique avec une forte quantité d’amyloglucosidase et sans mutanase, et trois exemples de formulations CE1 -3 pour le complexe enzymatique selon l’invention. Les pourcentages indiqués sont des pourcentages en volume.
[0065] [Table 1 ]
0066] Lors des essais cliniques réalisés chez des patients pendant six mois par le déposant avec la participation d’un laboratoire de recherche sous la responsabilité d’un docteur en médecine, la formulation CET a donné des résultats peu satisfaisants. En effet, par rapport aux sujets témoins, chez les sujets participant à l’étude pendant six mois et ayant utilisé cette formulation, on a remarqué la présence de plaque dentaire ainsi qu’un très léger blanchiment de l’émail des dents (<1 ton).
[0067] La formulation CE1 a donné des résultats plus satisfaisants que la formulation CET. En effet, par rapport aux sujets témoins, chez les sujets participant à l’étude pendant six mois et ayant utilisé cette formulation, on a remarqué une quantité plus faible de plaque dentaire dans la cavité buccale, ainsi qu’un net blanchiment de l’émail des dents (+1 nuance de blanc).
[0068] La formulation CE2 a donné des résultats plus satisfaisants que la formulation CET. En effet, par rapport aux sujets témoins, chez les sujets participant à l’étude pendant six mois et ayant utilisé cette formulation, on a remarqué une quantité plus faible de plaque dentaire dans la cavité buccale, ainsi qu’un net blanchiment de l’émail des dents (+1 nuance de blanc).
[0069] La formulation CE3 a donné des résultats plus satisfaisants que les formulations CE1 et CE2. En effet, par rapport aux sujets témoins, chez les sujets participant à l’étude pendant six mois et ayant utilisé cette formulation, on a remarqué une quasi-absence de plaque dentaire dans la cavité buccale, ainsi qu’un fort blanchiment de l’émail des dents (+2 nuances de blanc).
[0070] Le complexe enzymatique selon l’invention peut également comprendre du lysozyme. [0071] Le complexe enzymatique comprend de préférence de 0,1 à 0,4 % en poids de lysozyme, plus préférentiellement 0,2 %. Il peut également comprendre de préférence de 0 à 0,4 % en poids de saccharase, de préférence une invertase ou une isomaltase, plus préférentiellement 0,2 % en poids.
[0072] Le complexe enzymatique selon l’invention peut être utilisé dans une composition buccale pour la santé bucco-dentaire et le blanchiment de l’émail.
[0073] Cette composition buccale peut par exemple se présenter sous la forme de pâte, de liquide, de gel, de bain de bouche, de nébulosité, de spray, de capsule, de comprimé ou de chewing-gum.
[0074] La composition buccale à usage bucco-dentaire selon l’invention présente préférentiellement la composition suivante (le complexe enzymatique est celui décrit précédemment et les pourcentages indiqués sont des pourcentages en poids) :
Complexe enzymatique : de 1 ,4 à 3 %, préférentiellement de 2,0 à 2,5 %
Sorbitol : de 20 à 60 %, préférentiellement de 30 à 50 %
Xylitol : de 1 à 20 %, préférentiellement de 5 à 10 %,
Polysorbate 80 : de 0 à 3 %, préférentiellement de 1 à 2 %,
Polysorbate 20 : de 0 à 3 %, préférentiellement de 1 à 2 %,
Saccharinate de sodium : de 0 à 0,5 %, préférentiellement de 0,1 à 0,2 %,
Silice colloïdale : de 0 à 5 %, préférentiellement de 1 à 2 %,
Diméthicone : de 0 à 3 %, préférentiellement de 1 à 2 %,
Arôme de menthe et/ou huiles essentielles de menthe : de 0 à 5 %, préférentiellement de 1 à 2 %,
Citrate de zinc : de 0,1 à 0,5 %, préférentiellement de 0,1 à 0,3 %,
Thiocyanate de potassium : de 0 à 0,5 %, préférentiellement de 0,1 à 0,2 %, Conservateur : de 0 à 0,5 %, préférentiellement de 0,1 à 0,2 %,
Eau : quantité suffisante pour atteindre 100 %.
[0075] Le conservateur est préférentiellement de l’acide citrique. [0076] La composition buccale selon l’invention peut également comprendre de la lactoferrine, de préférence de 0 à 0,4 % en poids, plus préférentiellement 0,1 %.
[0077] Elle peut aussi comprendre du peroxyde d’hydrogène, par exemple de 0 à 0,1 % et du colorant violet, pour un effet de blanchiment plus immédiat. [0078] Le tableau ci-dessous donne un exemple de formulation témoin COT de composition buccale à usage bucco-dentaire avec absence de complexe enzymatique, et trois exemples de formulations CO1 -3 pour la composition buccale selon l’invention avec le complexe enzymatique CE3. Les pourcentages indiqués sont des pourcentages en poids. [0079] [Table 2] 080] L’efficacité de ces différentes formulations a été testée sur Streptococcus salivarius, qui est de la même famille Viridans que Streptococcus mutans, et une bactérie cocci de type Gram positif tout comme ce dernier, formant également un biofilm en présence de saccharose, et connu pour avoir la même sensibilité face aux antiseptiques et aux antibactériens que Streptococcus mutans. L’efficacité desdites formulations a été comparée à un placebo ne comprenant pas de complexe enzymatique selon l’invention et à une solution pour bain de bouche comprenant 0,12 % de chlorhexidine.
[0081] Lors d’essais cliniques in vitro réalisés par le déposant avec la participation d’un autre laboratoire d'analyses sous la responsabilité d’un docteur en pharmacie, effectués avec le complexe enzymatique CE3, la formulation COT a donné des résultats peu satisfaisants. En effet, par rapport au placebo vs formulation COT vs chlorhexidine, on a remarqué une quantité élevée de Streptococcus salivarius dans le placebo, une quantité encore élevée de Streptococcus salivarius dans la formulation COT et une quantité nulle dans la formulation à base de chlorhexidine.
[0082] La formulation CO1 a donné des résultats plus satisfaisants que la formulation COT. En effet, par rapport au placebo vs formulation CO1 vs chlorhexidine, on a remarqué une quantité élevée de Streptococcus salivarius dans le placebo, une quantité faible de Streptococcus salivarius dans la formulation CO1 et une quantité nulle dans la formulation à base de chlorhexidine.
[0083] La formulation CO2 a donné des résultats plus satisfaisants que la formulation COT et la formulation CO1 . En effet, par rapport au placebo vs formulation CO2 vs chlorhexidine, on a remarqué une quantité élevée de Streptococcus salivarius dans le placebo, une quantité nulle de Streptococcus salivarius dans la formulation CO2 et une quantité nulle dans la formulation à base de chlorhexidine.
[0084] La formulation CO3 a donné des résultats aussi satisfaisants que la formulation CO2. En effet, par rapport au placebo vs formulation CO3 vs chlorhexidine, on a remarqué une quantité élevée de Streptococcus salivarius dans le placebo, une quantité nulle de Streptococcus salivarius dans la formulation CO3 et une quantité nulle dans la formulation à base de chlorhexidine.
[0085] Ainsi, pour une composition buccale à usage bucco-dentaire comprenant un complexe enzymatique selon la formule enzymatique CE3, bien que des effets cliniques aient pu être observés avec une quantité de complexe enzymatique inférieure à 2 %, l’effet bactéricide contre les Streptococcus complètement efficace avec une quantité de complexe enzymatique supérieure ou égale à 2 %.

Claims

REVENDICATIONS
[Revendication 1] Complexe enzymatique pour utilisation dans un traitement de la plaque dentaire et du biofilm bactérien de la plaque et pour le blanchiment naturel de l’émail des dents, caractérisé en ce qu’il comprend les composés suivants :
- une enzyme saccharase,
- un mélange d’enzymes glucanohydrolases comprenant une dextranase, une mutanase ayant une activité exolytique et obtenue à partir d’un fungus, et une mutanase ayant une activité endolytique et obtenue à partir d’une bactérie,
- une enzyme glycoside hydrolase,
- une enzyme oxydoréductase,
- une enzyme peroxydase.
[Revendication 2] Complexe enzymatique selon la revendication 1 , caractérisé en ce que le mélange d’enzymes glucanohydrolases comprend un mélange de glucanases chimériques comprenant une dextranase et une mutanase liées par génie génétique.
[Revendication 3] Complexe enzymatique selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que la mutanase ayant une activité exolytique est obtenue à partir d’un fungus Trichoderma Harzianum.
[Revendication 4] Complexe enzymatique selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la mutanase ayant une activité endolytique est obtenue à partir d’une bactérie Paracoccus Mutanolyticus, Paenibacillus ou Streptomyces.
[Revendication 5] Complexe enzymatique selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l’enzyme saccharase est une enzyme isomaltase ou une enzyme invertase.
[Revendication 6] Complexe enzymatique selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l’enzyme glycoside hydrolase est une enzyme amyloglucosidase, de préférence une amylo-a-1 ,6 glucosidase.
[Revendication 7] Complexe enzymatique selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l’enzyme oxydoréductase est une glucose oxydase.
[Revendication 8] Complexe enzymatique selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l’enzyme peroxydase est une lactoperoxydase.
[Revendication 9] Complexe enzymatique selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu’il comprend les composés suivants :
- une saccharase, de préférence une invertase ou une isomaltase,
- une dextranase,
- un mélange de mutanases comprenant une mutanase ayant une activité exolytique et obtenue à partir d’un fungus, et une mutanase ayant une activité endolytique et obtenue à partir d’une bactérie,
- une amyloglucosidase, de préférence une amylo-a-1 ,6 glucosidase,
- une glucose oxydase, et
- une lactoperoxydase.
[Revendication 10] Complexe enzymatique selon la revendication 8, caractérisé en ce qu’il comprend les composés suivants, les pourcentages indiqués étant des pourcentages en volume :
- de 10 à 30 %, préférentiellement de 15 à 25 %, d’une saccharase,
- de 1 à 10 %, préférentiellement de 4 à 7 %, de dextranase,
- de 10 à 40 %, préférentiellement de 15 à 30 %, de mélange comprenant une mutanase ayant une activité exolytique et obtenue à partir d’un fungus et une mutanase ayant une activité endolytique et obtenue à partir d’une bactérie,
- de 20 à 60 % préférentiellement de 30 à 50 %, d’une amyloglucosidase, de préférence une amylo-a-1 ,6 glucosidase,
- de 5 à 20 %, préférentiellement de 7 à 15 %, de glucose oxydase, et
- de 1 à 10 %, préférentiellement de 4 à 7 %, de lactoperoxydase.
[Revendication 1 1 ] Composition buccale pour utilisation dans un traitement de la plaque dentaire et du biofilm bactérien de la plaque et le blanchiment naturel de l’émail des dents, caractérisée en ce qu’elle comprend un complexe enzymatique selon l’une quelconque des revendications précédentes.
[Revendication 12] Composition buccale selon la revendication 11 , caractérisée en ce qu’elle comprend de 1 ,4 à 3 %, préférentiellement de 2,0 à 2,5 %, de complexe enzymatique.
[Revendication 13] Composition buccale selon la revendication 11 ou 12, caractérisée en ce qu’elle comprend en outre de la lactoferrine.
[Revendication 14] Composition buccale selon l’une quelconque des revendications 11 à 13, caractérisée en ce qu’elle comprend en outre :
- de 20 à 60 %, préférentiellement de 30 à 50 %, de sorbitol,
- de 1 à 20 %, préférentiellement de 5 à 10 %, de xylitol,
- de 0 à 3 %, préférentiellement de 1 à 2 %, de polysorbate 80,
- de 0 à 3 %, préférentiellement de 1 à 2 %, de polysorbate 20,
- de 0 à 0,5 %, préférentiellement de 0,1 à 0,2 %, de saccharinate de sodium,
- de 0 à 5 %, préférentiellement de 1 à 2 %, de silice colloïdale,
- de 0 à 3 %, préférentiellement de 1 à 2 %, de diméthicone,
- de 0 à 5 %, préférentiellement de 1 à 2 %, d’arome de menthe et/ou d’huiles essentielles de menthe,
- de 0,1 à 0,5 %, préférentiellement de 0,1 à 0,3 %, de citrate de zinc,
- de 0 à 0,5 %, préférentiellement de 0,1 à 0,2 %, de thiocyanate de potassium,
- de 0 à 0,5 %, préférentiellement de 0,1 à 0,2 %, de conservateur,
- de l’eau, selon une quantité suffisante pour atteindre 100 %.
[Revendication 15] Composition buccale selon l’une quelconque des revendications 11 à 14, caractérisée en ce qu’elle est sous la forme de pâte, de liquide, de gel, de bain de bouche, de nébulosité, de spray, de capsule, de comprimé ou de chewing- gum.
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