EP4499652A1 - Glycérophospholipides synthétiques comprenant au moins une fonction réactive, leur procédé de préparation et leurs utilisations dans différentes applications - Google Patents

Glycérophospholipides synthétiques comprenant au moins une fonction réactive, leur procédé de préparation et leurs utilisations dans différentes applications

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EP4499652A1
EP4499652A1 EP23712920.0A EP23712920A EP4499652A1 EP 4499652 A1 EP4499652 A1 EP 4499652A1 EP 23712920 A EP23712920 A EP 23712920A EP 4499652 A1 EP4499652 A1 EP 4499652A1
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EP
European Patent Office
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formula
group
glycerophospholipid
residue
azide
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Withdrawn
Application number
EP23712920.0A
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German (de)
English (en)
Inventor
Sébastien BALIEU
Pierre-Yves Renard
Maité MONTERO-HADJADJE
Nicolas VITALE
Aurélien COCQ
Antoine SCHLICHTER
Rémy FERLET
Alexandre Haefele
Lina RIACHY
Alexander Wolf
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Insa Rouen Normandie
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Universite de Rouen
Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM
Original Assignee
Insa Rouen Normandie
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Universite de Rouen
Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM
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Filing date
Publication date
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    • G01N33/483—Physical analysis of biological material
    • G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material

Definitions

  • Synthetic glycerophospholipids comprising at least one reactive function, their preparation process and their uses in different applications.
  • the present invention applies to the field of glycerophospholipids (GPL) which can be used for biological studies.
  • the invention relates to new GPL compounds comprising at least one reactive function which does not interfere with biological processes, to their preparation process, and to their uses in different applications.
  • Glycerophospholipids (GPL) represent the most abundant class of cellular lipids. They are also the main constituents of membrane bilayers and are involved in numerous cellular processes such as mobility, energy production, and intracellular trafficking. In particular, they are directly involved in numerous intracellular signaling pathways.
  • LPGs are amphiphilic lipids, that is to say they have a hydrophilic part (polar head) and a hydrophobic part (non-polar tail).
  • LPGs are built around a glycerol molecule, where two hydroxyl groups are esterified with different fatty acids and the third hydroxyl group is replaced by phosphoric acid.
  • the polar phosphate head in the sn-3 position giving its generic name to GPL and some of its biological properties.
  • GPL phosphatidylcholine
  • PC phosphatidylcholine
  • Other GPLs are also naturally present such as phosphatidylethanolamine (PE), phosphatidylserine (PS), phosphatidylinositol (PI), phosphatidic acid (PA), and phosphatidylglycerol (PG).
  • PE phosphatidylethanolamine
  • PS phosphatidylserine
  • PI phosphatidylinositol
  • PA phosphatidic acid
  • PG phosphatidylglycerol
  • a cell can contain several thousand different phospholipids.
  • the fluorophore is positioned at the level of the phosphate polar head via the S1-S2 connecting spacer arm.
  • One of the examples has the following structure: .
  • the aforementioned probes have the disadvantage of being too distant in terms of structures from the molecules whose subcellular distribution they are supposed to illustrate. Indeed, the polar heads of glycerophospholipids ensure the specificity of the interaction with certain proteins, and the nature of the fatty acid chains also plays an important role in the functions of GPL, and in interactions with proteins. Consequently, all modifications in these areas (polar head or fatty acids) clearly jeopardize the recognition of GPLs by their mobilizing proteins, potentially modifying their biological functions, and therefore bias or make impossible interpretations of the experiments carried out with these probes.
  • the aim of the present invention is to overcome the drawbacks of the aforementioned prior art and to provide synthetic glycerophospholipids whose main characteristics of natural glycerophospholipids are retained while guaranteeing their use as molecular tools in the field of biology.
  • Another aim of the present invention is to provide a process for preparing such synthetic glycerophospholipids that is simple, convergent, economical, and allows access to glycerophospholipids of varied structures.
  • the aim of the invention is achieved by the compounds and the process which will be described below.
  • the present invention thus has as its first object a synthetic glycerophospholipid corresponding to the following formula (I): in which: * the OR 1 group is chosen from a hydroxyl group, a choline residue, an ethanolamine residue, a glycerol residue, a serine residue, an inositol residue, an inositol monophosphate residue, a residue of inositol bisphosphate, a residue of inositol trisphosphate, a residue of glycerophosphate, a residue of glucose, a residue of inositolglycan, and a residue of any hydroxy compound capable of forming a phosphodiester group in the sn-3 position belonging to a subclass of natural LPG, * R 2 represents an unsaturated, mono- or polyunsaturated aliphatic chain, comprising at least 14 carbon atoms, and * R 3 represents a saturated aliphatic chain comprising at least 10 carbon atoms.
  • the GPLs of formula (I) of the invention respect the nature of the lipid chains (ie a saturated fatty acid chain in the sn-1 position and an unsaturated fatty acid chain in the sn-2 position) and the polar head phosphate in the sn-3 position, which provides access to molecular tools with better reliability. Furthermore, they carry a discrete azide function of small size in the so-called “sn-0” position which does not significantly modify their properties and can serve as an attachment point for a marker or any biological probe, in particular by chemistry click. This discrete azide function thus makes it possible to provide adequate molecular tools for a detailed exploration of the localization and different roles in vitro, in vivo or in cellulo of GPL.
  • this discrete azide function can then be used once the GPL of formula (I) is introduced in vitro, in cellulo or in vivo to graft different chemical tools (fluorophore, photoactivatable crosslinking agent, radiolabel, etc. ...) allowing biological studies without having to restart a specific synthesis of the glycerophospholipid skeleton.
  • the term "remainder" of a hydroxyl compound means this same hydroxyl compound in which the hydrogen atom has been removed from the hydroxyl function of said hydroxyl compound to form the OR 1 group of the phosphodiester.
  • the compound of formula (I) comprises two chiral centers, the first in position sn-2 whose configuration is fixed so as to correspond to that of natural LPGs, and the second in position sn-1 which has two possible configurations.
  • Said compound of formula (I) can thus be chosen from a compound of formula (I)-C1, a compound of formula (I)-C2, and a mixture of compounds of formula (I)-C1 and of formula (I) -C2, said formulas (I)-C1 and (I)-C2 being as defined below: .
  • the compound (I) is a compound (I)-C1.
  • R 1 The OR 1 group is preferably chosen from a hydroxyl group, a choline residue, an ethanolamine residue, a glycerol residue, a serine residue, and an inositol residue.
  • R 2 represents an unsaturated, mono- or polyunsaturated aliphatic chain, comprising at least 14 carbon atoms. It preferably comprises from 16 to 24 carbon atoms, and particularly preferably from 16 to 20 carbon atoms.
  • the unsaturated aliphatic chain can comprise from 1 to 6 unsaturations, and preferably from 1 to 3 unsaturations. Each of the unsaturations can be of Z or E configuration.
  • the unsaturated aliphatic chain is preferably an unsubstituted unsaturated aliphatic chain.
  • the unsaturated aliphatic chain is preferably a linear (ie unbranched) unsaturated aliphatic chain.
  • R 3 represents a saturated aliphatic chain comprising at least 10 carbon atoms. It preferably comprises from 14 to 30 carbon atoms, and particularly preferably from 14 to 24 carbon atoms.
  • the saturated aliphatic chain is preferably an unsubstituted saturated aliphatic chain.
  • the saturated aliphatic chain is preferably a linear (ie unbranched) saturated aliphatic chain.
  • the glycerophospholipid (GPL) is chosen from the compounds of formulas (Ia) to (Ie) presented in the following table:
  • the second object of the invention is a process for preparing an LPG of formula (I) as defined in the first object of the invention, characterized in that it comprises at least the following steps: i) a step of preparation of a phosphotriester of formula (IV) comprising a diacetal function implementing the functionalization of a diacetal derivative of (2S,3S)-butane-1,2,3,4-tetrol corresponding to formula (III) with a dialkyl halogenophosphate of formula (IV) in a basic medium, according to the following diagram: , in which R 4 represents a C1-C5 alkyl group or a benzyl group, and R 5 represents a C1-C5 alkyl group, ii) a step of deprotection in an acid medium of the diacetal function of the phosphotriester of formula (IV) to form a diol of formula (V) comprising a primary alcohol, according to the following diagram: , in which R 4 is as defined in the invention,
  • the process of the invention allows easy access to LPGs of formula (I) according to a convergent synthesis route using a synthesis intermediate of formula (VII) common to all LPGs of formula (I). Consequently, the regio- and stereo-selective introduction of the saturated and unsaturated fatty acid chains is carried out as late as possible, ie during the two penultimate stages. This is all the more important for the introduction of the unsaturated fatty acid chain since the unsaturations can be sensitive to certain reaction conditions and/or oxidize easily.
  • the paramethoxybenzyl group (PMB) makes it possible in particular to protect the alcohol function in the sn-2 position throughout the process of the invention until the introduction of the unsaturated fatty acid chain.
  • Step i) is a step of preparing a phosphotriester of formula (IV) comprising a diacetal function implementing the functionalization of a diacetal derivative of (2S,3S)-butane-1,2,3 ,4-tetrol corresponding to formula (III) with a dialkyl halogenophosphate of formula (IV) in a basic medium.
  • the diacetal derivative of (2S,3S)-butane-1,2,3,4-tetrol corresponding to formula (III) which is used in step i) already has the good stereochemistry on the sn-2 position to access LPG of formula (I). This stereochemistry is preserved throughout the process of the invention.
  • Step i) makes it possible to introduce a protected phosphate function in the sn-3 position of the diacetal derivative (III).
  • This step i) is carried out in a basic medium, for example in the presence of a base chosen from potassium tertbutanolate (tBuOK), NaH, NaNH2, and KH.
  • Step i) is preferably carried out at a temperature ranging from -20°C to 50°C.
  • Step i) can be carried out in a solvent such as dichloromethane, tetrahydrofuran (THF) or toluene.
  • the dialkyl halogenophosphate of formula (IV) is preferably chosen from dialkyl chlorophosphates such as dimethylchlorophosphate.
  • R 4 preferably represents a methyl group.
  • R 5 preferably represents a methyl group.
  • Step ii) is a step of deprotection in an acid medium of the diacetal function of the phosphotriester of formula (IV) to form a diol of formula (V) comprising a primary alcohol function.
  • two alcohol functions are obtained including a primary alcohol function in position sn-0.
  • This step ii) can be carried out in a solvent chosen from lower alcohols (ie C1-C4), such as methanol, ethanol, or isopropanol.
  • Step ii) is carried out in the presence of an acid chosen from hydrochloric acid (HCl), and any other suitable acid.
  • step ii) is carried out by acid methanolysis, in the presence of HCl.
  • Step ii) is preferably carried out at room temperature (ie 18-25°C).
  • Step iii) Step iii) is a step of selective protection of the primary alcohol function of the diol of formula (V) to form a monoalcohol of formula (VI) comprising a primary alcohol function protected by an R 6 group.
  • Step iii) is preferably carried out in the presence of a compound R 6 Y, Y being a halogen atom chosen from a chlorine, bromine and iodine atom.
  • Step iii) is preferably carried out in the presence of a base, and possibly a catalyst.
  • the base can be chosen from diisopropylethylamine (DIPEA), triethylamine (TEA), potassium carbonate (K2CO3), sodium hydroxide (NaOH), and potash (KOH).
  • the catalyst can be chosen from tin-based catalysts such as Bu2SnO.
  • the R 6 group is preferably a tosyl group.
  • Y is preferably a chlorine atom.
  • step iii) is carried out in the presence of tosylate chloride, a base, and a tin-based catalyst.
  • Step iii) can be carried out in an aprotic solvent such as toluene.
  • Step iii) is preferably carried out at room temperature (ie 18-25°C).
  • Step iv) is a step of nucleophilic substitution of the primary alcohol function protected by an R 6 group of the monoalcohol of formula (VI) to form an azide of formula (VII) comprising an alcohol function. This step iv) allows the introduction of the azide function thanks to the displacement of the -OR 6 group by nucleophilic substitution.
  • Step iv) is preferably carried out in the presence of an azide compound chosen from sodium azide, potassium azide, tetrabutylammonium iodide, diphenylphosphoryl azide, and trimethylsilyl azide.
  • Step iv) is preferably carried out at a temperature ranging from 0°C to 100°C.
  • Step iv) is generally carried out in a polar solvent, preferably capable of solubilizing azide salts, such as dimethylformamide (DMF).
  • This azide of formula (VII) is a key intermediate compound in the synthesis of synthetic LPGs of formula (I). Thanks to this, GPL carrying various fatty acid chains in sn-1 and sn-2 positions can be obtained in just three steps.
  • the reaction crude may comprise the azide of formula (VII) mixed with the following azide of formula (VII'): , in which the phosphate triester has been partly deprotected (deprotection of an R 4 group).
  • the yield of this step iv) can be improved by treatment of the reaction crude obtained at the end of step iv) with a diazomethane derivative such as trimethylsilyldiazomethane, 1-(mesitylene-2-sulfonyl)-3- nitro-1H-1,2,4-triazole, SiO2Cl, CsF/MeI, or trimethylorthoformate; and an alcohol R 4 OH, R 4 being as defined in the invention, in order to produce the azide of formula (VII).
  • a diazomethane derivative such as trimethylsilyldiazomethane, 1-(mesitylene-2-sulfonyl)-3- nitro-1H-1,2,4-triazole, SiO2Cl, CsF/MeI, or trimethylorthoformate
  • R 4 OH, R 4 being as defined in the invention, in order to produce the azide of formula (VII).
  • Step v) is a step of esterification of the alcohol function of the azide of formula (VII) with a saturated fatty acid of formula (VIII) to form an azide of formula (IX) comprising a fatty acid chain saturated with formula and an alcohol function protected by a paramethoxybenzyl group (PMB).
  • PMB paramethoxybenzyl group
  • This step v) can use a coupling agent, in particular chosen from carbodiimides such as N,N'-dicyclohexylcarbodiimide (DCC), N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide (EDCl), N -cyclohexyl-N'-isopropylcarbodiimide (CIC), or N,N'-diisopropylcarbodiimide (DIC); and optionally a catalyst such as dimethylamidopyridine (DMAP), or pyridine.
  • Step v) is generally carried out in a non-nucleophilic solvent such as dichloromethane or chloroform.
  • Step v) is preferably carried out at room temperature (ie 18-25°C).
  • the fatty acid of formula (VIII) can be chosen from stearic acid, caproic acid, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, arachidic acid, behenic acid, lignoceric acid, cerotic acid, montanic acid, and melissic acid.
  • Step vi) comprises a sub-step vi-1) of deprotection of the paramethoxybenzyl group of the azide of formula (IX) to form an azide of formula (X) comprising an alcohol function, followed by a sub-step -step vi-2) of esterification of the alcohol function of the azide of formula (X) with an unsaturated fatty acid of formula (XI), to form an azide of formula (XII) comprising a saturated fatty acid chain , an unsaturated fatty acid chain, and a phosphotriester function.
  • Substep vi-1) can be carried out in the presence of a deprotection agent chosen from 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone (DDQ), ammonium nitrate and cerium (CAN), aluminum trichloride (AlCl3) in the presence of ethane thiol (EtSH), tin tetrachloride (SnCl4) in the presence of phenyl thiol (PhSH), or cerium trichloride (CeCl3) in the presence sodium iodide (NaI).
  • a deprotection agent chosen from 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone (DDQ), ammonium nitrate and cerium (CAN), aluminum trichloride (AlCl3) in the presence of ethane thiol (EtSH), tin tetrachloride (SnCl4) in the presence of
  • Substep vi-1) is preferably carried out at a temperature ranging from -20°C to 50°C.
  • substep vi-1) is carried out in the presence of 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone, and at a temperature ranging from -20°C to 50 °C.
  • the alcohol of formula (X) obtained is directly used in substep vi-2), in particular without a purification step and immediately. This helps prevent its degradation.
  • Substep vi-2) can use a coupling agent, in particular chosen from carbodiimides such as N,N'-dicyclohexylcarbodiimide (DCC), N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide (EDCl ), N-cyclohexyl-N'-isopropylcarbodiimide (CIC), or N,N'-diisopropylcarbodiimide (DIC); and optionally a catalyst such as dimethylamidopyridine (DMAP), or pyridine.
  • DCC N,N'-dicyclohexylcarbodiimide
  • EDCl N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide
  • CIC N-cyclohexyl-N'-isopropylcarbodiimide
  • DIC N,N'-diisopropylcarbodiimide
  • Substep vi-2) is preferably carried out at a temperature ranging from -25°C to 0°C.
  • the fatty acid of formula (XI) may be chosen from oleic acid, linoleic acid, lauroleic acid, myristoleic acid, palmitoleic acid, vaccenic acid, gadoleic acid, ketoleic acid, erucic acid, selacholeic acid, linolenic acid, eleostearic acid, arachidonic acid, cuplanodonic acid, elaidic acid, and petroselinic acid.
  • sub-steps vi-1) and vi-2) make it possible to promote the deprotection of the PMB group while avoiding the reaction of the ester carried by the azide of formula (X) on itself by an intramolecular transesterification mechanism which would then induce a loss of regioselectivity in the localization of the fatty acid chains which can be followed by phosphorus NMR.
  • the deprotection of the R 4 groups can be carried out in the presence of a reagent chosen from bromotrimethylsilane, butylamine, ammonia, trimethylamine, triethylamine, boron tribromide (BBr3), pyridine, l sodium iodide (NaI), and lithium cyanide (LiCN).
  • Step vii) is preferably carried out in a solvent such as chloroform, DMF, or toluene.
  • Step vii) is preferably carried out at room temperature (ie 18-25°C).
  • the diacetal derivative of (2S,3S)-butane-1,2,3,4-tetrol corresponding to formula (III) as used in step i) can be prepared from a dialkyl-L- tartrate of formula (XIII) following: in which R 7 is a C1-C5 alkyl group, and preferably a methyl group.
  • the diacetal derivative (III) can be obtained using a method similar to that described by Namysio et al., J. Prakt. Chem., 1999, 341, 6, 557-561.
  • the diacetal derivative (III) is obtained according to the steps described in the following diagram:
  • This method includes in particular the protection of dimethyl-L-tartrate in the form of a diacetal followed by two successive reductions of the esters and the opening of the acetal to form a triol whose two adjacent alcohol functions are then protected by a dialkylketal .
  • the diacetal derivative (III) can also be obtained according to the steps described in the following diagram:
  • the third object of the invention is a modified glycerophospholipid corresponding to the following formula (XIV): in which: * OR' 1 represents an OR 1 group as defined in the invention or a photoactivatable group, * R 2 and R 3 are as defined in the first subject of the invention, and * R 8 and R 9 , independently of each other, are chosen from a fluorophore group, a photocrosslinkable group, a radiolabel group , and a hydrogen atom; or the groups R 8 and R 9 together form a group chosen from a fluorophore group, a photocrosslinkable group, and a radiolabel group.
  • Modified LPGs of formula (XIV) retain the structure and stereochemistry of natural LPGs.
  • the fluorophore group can be chosen from fluorophores based on nitrobenzooxadiazole (NBD), fluorophores with xanthene motif, carborhodamines, cyanines, coumarins, and polycyclic aromatic hydrocarbons such as pyrenes or porphyrins.
  • NBD nitrobenzooxadiazole
  • fluorophores fluorophores with xanthene motif
  • carborhodamines cyanines
  • coumarins and polycyclic aromatic hydrocarbons
  • Coumarins, nitrobenzooxadiazole (NBD) fluorophores, and carborhodamines are preferred.
  • fluorophore groups which can be used according to the invention, mention may be made of the fluorophores from the Alexa Fluor range marketed by the company Molecular Probes.
  • the photocrosslinkable group as R 8 and/or R 9 may comprise (or consist of) an aryl azide group, a diazirine group, a diazo group, a benzophenone group, a benzophenone derivative group, a tetrazole group, or a quinoxalinone group.
  • the radiolabel group may comprise (or consist of) fluorine 18, carbon 11, iodine 123, iodine 124, or a complex of gallium 67, indium 111m, technetium 99m or thallium 201
  • R 8 is a hydrogen atom and R 9 is a fluorophore group
  • R 9 is a hydrogen atom and R 8 is a fluorophore group
  • the groups R 8 and R 9 together form a fluorophore group.
  • the photoactivatable group as OR' 1 may comprise an aromatic group containing one or more nitro -NO2 functions such as a group orthonitrobenzyl or orthonitroindoline, a coumarin group such as a coumarin-4-yl group, or a quinoline group.
  • the fourth object of the invention is a process for preparing a modified glycerophospholipid of formula (XIV) as defined in the third object of the invention, characterized in that it comprises at least one step A) of preparing contact of a synthetic glycerophospholipid of formula (I) as defined in the first subject of the invention or obtained according to a process as defined in the second subject of the invention, with an alkyne corresponding to the following formula (XV) : in which R 8 and R 9 are as defined in the invention.
  • Step A) can be carried out by Huisgen cycloaddition, by Huisgen cycloaddition catalyzed by copper salts (CuAAC), or by Huisgen cycloaddition using a strained alkyne (SPAAC).
  • Huisgen cycloaddition using a constrained alkyne (SPAAC) is preferred. This synthesis route makes it possible to overcome the cytotoxicity of copper.
  • the alkyne of formula (XV) is preferably a strained alkyne, in particular comprising a cyclooctyne group such as a difluorocyclooctyne group (DIFO), a difluorobenzocyclooctyne group (DIFBO), a dibenzocyclooctyne group (DIBO), a biarylazacyclooctynone group (BARAC ), or a bicyclo[6.1.0]nonyne (BCN) group.
  • a cyclooctyne group such as a difluorocyclooctyne group (DIFO), a difluorobenzocyclooctyne group (DIFBO), a dibenzocyclooctyne group (DIBO), a biarylazacyclooctynone group (BARAC ), or a bicyclo[6.1.0]nonyn
  • Step A) can be carried out before or after bringing the synthetic LPG (I) into contact with a biological medium, and preferably after bringing the synthetic LPG (I) into contact with a biological medium.
  • step A) is carried out after bringing the synthetic LPG (I) into contact with a biological medium.
  • the method then further comprises, before step A), a step a) of bringing the synthetic LPG (I) into contact with a biological medium, in particular in vitro, in vivo, ex vivo or in cellulo, and preferably in vitro or ex vivo. Consequently, it is possible to address the synthetic GPL (I) in a cell, then to incorporate on the glycerol skeleton according to step A) different functional groups, which will in particular depend on the envisaged application. When R' 1 is a photoactivatable group, said group can be introduced before or after step A).
  • the process makes it possible to guarantee the conservation of the structure and stereochemistry of natural GPLs, of the unmodified polar head, possibly caged by a photolabile group to avoid their metabolization before the biological study, and of the fatty acid chains intact and correctly positioned.
  • a single synthetic LPG (I) allows access to several types of modified LPG (XIV) and thus access to varied applications for a single synthetic LPG (I) prepared. This thus makes it possible to obtain modified GPLs (XIV) having greater structural proximity compared to natural GPLs and to have great flexibility and diversity in the choice of tools for biological studies.
  • the fifth object of the invention is the use of a synthetic glycerophospholipid of formula (I) as defined in the first object of the invention or obtained according to a process as defined in the second object of the invention; or a modified glycerophospholipid (XIV) as defined in the third object of the invention or obtained according to a process as defined in the fourth object of the invention, as a molecular tool, in particular in the field of biology, or as a biological probe, especially for biological studies.
  • These synthetic glycerophospholipids of formula (I) and modified glycerophospholipids of formula (XIV) cannot, for example, be used to understand the cellular processes and/or the biological functions of natural GPLs depending on the types of polar head and/or fatty acid chains.
  • GPL GPL
  • synthetic GPLs of formula (I) can interact, just like natural GPLs, with mobilizing proteins such as Spo20p-GFP which fluoresces in green (see example 3 of the application below), or chromogranin A (or CgA).
  • modified GPLs of formula (XIV) can interact, like natural GPLs, with mobilizing proteins such as chromogranin A (or CgA).
  • GPL (I) and (XIV) can be used in the form of a kit for dosing and/or localizing biomolecules, such as proteins.
  • the sixth object of the invention is the use of a synthetic glycerophospholipid of formula (I) as defined in the first object of the invention or obtained according to a process as defined in the second object of the invention; or a modified glycerophospholipid of formula (XIV) as defined in the third object of the invention or obtained according to a process as defined in the fourth object of the invention, as a diagnostic tool, and preferably in as an in vitro or ex vivo diagnostic tool.
  • In vitro diagnosis is carried out outside the human body in a biological medium.
  • Ex vivo diagnosis is carried out outside the human body on a biological medium that has undergone prior treatment before use.
  • the invention relates to a process implementing the contacting of a synthetic glycerophospholipid of formula (I) as defined in the first subject of the invention or obtained according to a process as defined in the second object of the invention; or a modified glycerophospholipid of formula (XIV) as defined in the third subject of the invention or obtained according to a process as defined in the fourth subject of the invention, with a biological medium for diagnosis, and in particular to locate and/or identify the different proteins that interact with it.
  • the seventh object of the invention is a synthetic glycerophospholipid of formula (I) as defined in the first object of the invention or obtained according to a process as defined in the second object of the invention; or a modified glycerophospholipid of formula (XIV) as defined in the third object of the invention or obtained according to a process as defined in the fourth object of the invention, for its medical use.
  • the invention relates to the use of a synthetic glycerophospholipid of formula (I) as defined in the first subject of the invention or obtained according to a process as defined in the second subject of the invention ; or a modified glycerophospholipid of formula (XIV) as defined in the third object of the invention or obtained according to a process as defined in the fourth object of the invention, for obtaining or preparing a medicament intended for therapeutic use (ie for obtaining or preparation of a medicine for therapeutic treatment).
  • the invention also relates to a treatment method comprising the administration of a synthetic glycerophospholipid of formula (I) as defined in the first subject of the invention or obtained according to a process as defined in the second subject of the invention ; or a modified glycerophospholipid of formula (XIV) as defined in the third subject of the invention or obtained according to a process as defined in the fourth subject of the invention, in particular in therapeutic quantity, to a patient.
  • a treatment method comprising the administration of a synthetic glycerophospholipid of formula (I) as defined in the first subject of the invention or obtained according to a process as defined in the second subject of the invention ; or a modified glycerophospholipid of formula (XIV) as defined in the third subject of the invention or obtained according to a process as defined in the fourth subject of the invention, in particular in therapeutic quantity, to a patient.
  • GPL (I) and (XIV) comprising three successive unsaturations on the unsaturated fatty acid chain can be used to improve the secretion of neurotransmitters by neurosecretory cells and/or treat diseases of the nervous system, in particular related normal or pathological aging, or linked to mental retardation (Fragile X, Coffin Lowry Syndrome).
  • Figure 1 represents confocal microscopy images of media comprising different GPLs incubated with PC12 cells expressing Spo20p-GFP.
  • Figure 2 represents the percentage of colocalization of the Spo20p-GFP protein and different GPLs at the plasma membrane.
  • Figure 3 represents light microscopy images of liposomes containing different GPLs.
  • Figure 4 shows confocal microscopy images of liposomes containing different GPLs.
  • Figure 5 shows confocal microscopy images of liposomes containing different GPLs incubated with a GgA-AF633 protein.
  • the reagents are from commercial sources (Sigma-Aldrich, Acros, Alfa-Aesar) as well as the solvents (Sigma-Aldrich, Acros) and were used as received from the manufacturers without specific treatment unless otherwise indicated.
  • NMR nuclear magnetic resonance
  • Electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS) data were acquired using a spectrometer sold under the trade name LCT Premier XE by Waters Acquity. Exact mass measurements (HRMS) were carried out with a Synapt G2 HDMS system and an electrospray source equipped with a lockspray® system. The experiments were carried out with a positively charged C18 column of Waters Acquity BEH reference having the following specificities: 1.7 ⁇ m; 2.1-50mm.
  • the gradient used is as follows: 98%/2% H 2 O/ACN to 100% ACN in 4 min and 1.3 min to 100% ACN with a flow rate of 0.25 ml.min ⁇ 1 . 0.5 ml are injected, and the source temperature is set at 120°C and the desolvation temperature at 300°C, with voltages of 2200 V for the detector and 3000 V for the capillary.
  • the ultra-high performance liquid chromatography (UHPLC) analyzes were recorded on a device sold under the trade name Ultimate 3000 by Thermo Fisher. The experiences have been carried out on a Hypersil GOLD reference C18 column having the following specifications: 3 ⁇ m; 2.1 - 50mm.
  • the gradient used is as follows: 95%/5% ACN/H2O to 100% H2O in 6 min with a flow rate of 0.6 ml.min ⁇ 1 and a pressure of 450 Bar. 10 ⁇ L are injected and an oven temperature is set at 25 °C. The products were analyzed with a UV detector at 254 nm and 270 nm. Elemental analyzes were recorded on a device sold under the trade name Flash 2000 by Thermo Fisher - EAGER 300. Determination of the general formula of an organic compound by the mass percentage of each of the elements (C, H, N, S ) present in said compound is obtained by integrating the chromatography peaks of each of the elements.
  • the surfaces thus integrated are pointed on a calibration line in order to determine the concentration of each of the elements. Results are provided with an absolute accuracy of 0.4%.
  • Each sample is weighed precisely in a tin basket.
  • the standard used for the calibration range is 2.5-Bis(5-tert-butyl-benzoxazol-2-yl)thiophene (BBOT) with the following composition: %C: 72.53; %H: 6.09; %N: 6.51; %S: 7.44.
  • Infrared spectra were produced with a spectrophotometer sold under the trade name Perkin Elmer 100 FTIR (attenuated total reflectance technique or ATR using a diamond as crystal). The products are analyzed directly on the diamond.
  • Example 1 synthesis of compound Ia Preparation of the GPL precursor (S)-2-[(S)-2,2-dimethyl-1,3-dioxolan-4-yl]-2-(4-methoxybenzyloxy)ethan-1 -ol (S)-2-[(S)-2,2-dimethyl-1,3-dioxolan-4-yl]-2-(4-methoxybenzyloxy)ethan-1-ol was prepared according to the 5 steps illustrated in the following diagram: First step: The first step is a reaction to convert the aldehyde into a diacetal.
  • Second step is a step of protection of dimethyl L-tartrate in acetal form.
  • the crude mixture is cooled to room temperature and 250 ml of dichloromethane (CH2Cl2 or DCM) is added, then the reaction is stopped with excess K2CO3.
  • the crude mixture is stirred for an additional hour to obtain a yellow colored mixture.
  • the crude mixture is filtered and the solvents are evaporated under reduced pressure to obtain a light yellow solid which is purified by chromatography with silica gel (eluent: petroleum ether + 0.1% triethylamine (Et 3 N)/acetate ethyl (AcOEt) ). This purification step can be replaced by washing the light yellow solid with cyclohexane.
  • the third step is a step of reduction of ester functions into alcohol functions. 46 g (160 mmol) of the diester as prepared in the previous step are dissolved in 750 ml of methanol under an inert atmosphere. The resulting mixture is stirred at 0°C and 18.2 g (480 mmol, 3 equiv.) of NaBH4 is added in portions.
  • the fourth step is a step of opening the acetal to form a triol whose sn-1 position is released while the sn-2 position is still protected. 30 g (125 mmol) of the diol prepared in the previous step are dissolved in 750 ml of dry tetrahydrofuran (THF) under an inert atmosphere.
  • the resulting mixture is cooled to 0°C and 83.1 ml (291.2 mmol, 7 equiv.) of BH3 ⁇ Me2S is added dropwise at 0°C.
  • the resulting mixture is stirred for 30 min at room temperature then for 3 h at 75°C.
  • the resulting mixture is cooled to 0°C and the excess borane is gently hydrolyzed with methanol.
  • the mixture obtained is stirred for 30 min at room temperature and the solvents are evaporated under reduced pressure.
  • the residue is treated twice again with 250 ml of methanol and evaporated under reduced pressure.
  • the crude solid obtained is extracted twice with CH2Cl2 and the insoluble white solid containing the boron salts is filtered.
  • the fifth step is a protection reaction of the two alcohol functions in the form of a dimethylacetal. 14 g of triol as prepared in the previous step (58.6 mmol) are dissolved in dry acetone (145 ml) under an inert atmosphere.
  • the first step is a functionalization of the alcohol function in the sn-3 position of the diacetal (IIIa) to form a phosphotriester (IVa).
  • the third step is a step of selective functionalization of the primary alcohol function.
  • a yellow aqueous phase appears.
  • a 1M HCl solution is added with vigorous stirring until the pH of the aqueous phase is approximately 1-2.
  • the organic phase is separated and the aqueous phase is extracted twice with 40 ml of DCM.
  • the organic phases are combined, dried over magnesium sulfate and the solvent is evaporated.
  • a crude oil is obtained and purified by chromatography on silica gel (eluent: EtOAc/MeOH).
  • the fourth step is a nucleophilic substitution step to replace the tosylate with the azide.
  • a first quantity of dimethylated phosphate (VIIa) is obtained.
  • the aqueous phase obtained during the extraction of dimethyl phosphate with chloroform includes monomethyl phosphate (VII'a). 100 ml of chloroform are added to the aqueous phase which is then cold acidified with HCl (1M) until a pH equal to 1 is reached. The monomethylated phosphate is then extracted from the aqueous phase with chloroform (5*100 ml. The organic phases are combined and dried over MgSO4 then the solvents are evaporated.
  • the monomethyl phosphate is then remethylated by diluting it in methanol and using TMSCHN2 (0.6 M or 2 M in hexane) which is added until the mixture remains yellow and stirred for 30 min.
  • the product obtained (VIIa) does not require purification and represents a second quantity of dimethylated phosphate (VIIa).
  • the first and second quantities of product (VIIa) are combined and correspond to (2S,3S)-4-azido-3-hydroxy-2-((4-methoxybenzyl)oxy)butyl dimethyl phosphate in the form of a yellow oil clear translucent with a total yield of 53%.
  • Formula: C14H22N3O7P, Molar mass 375.31 g. mol ⁇ 1 .
  • the fifth step is a step of esterification of the free alcohol function in the sn-1 position with a saturated fatty acid.
  • the sixth step is a step of deprotection of the paramethoxybenzyl group (PMB) followed by a step of esterification of the free alcohol function in the sn-2 position with an unsaturated fatty acid.
  • PMB paramethoxybenzyl group
  • the resulting mixture turns dark green.
  • the aqueous phase is extracted twice with 20 ml of cold DCM, and the organic phases are combined and washed with 20 ml of a saturated NaHCO3 solution, dried over MgSO4 and the solvents are evaporated under reduced pressure.
  • the alcohol obtained (Xa) is in the form of an orange-yellow oil. 162 mg (0.65 mmol, 1.5 equiv.) of oleic acid (XIa) are dissolved in 7 ml of dry DCM under an inert atmosphere at 0°C.
  • phosphate diester (XIIa) as prepared in the previous step 50 mg (0.64 ⁇ mole) of phosphate diester (XIIa) as prepared in the previous step are dissolved in 3 ml of CDCl3 previously neutralized with K2CO3 and the resulting solution is stored on a molecular sieve under an inert atmosphere. Then, 21 ⁇ L (160 ⁇ mole, 2.5 equiv.) of bromotrimethylsilane (TMSBr) are added and the resulting mixture is stirred for 5 h at room temperature under a neutral atmosphere. 1 ml of water (H2O) is added and the solvents are evaporated. The crude product is purified by chromatography on silica gel (water/methanol, C18AQ column sold by Interchim).
  • aqueous phosphate-buffered saline PBS
  • pH 7.2 aqueous phosphate-buffered saline
  • DDQ aqueous phosphate-buffered saline
  • the reaction medium is diluted with 10 ml of cold DCM and 10 ml of a cold saturated NaHCO3 solution.
  • the resulting mixture turns dark green.
  • the aqueous phase is extracted twice with 40 ml of cold DCM, and the organic phases are combined and washed with 40 ml of cold saturated NaHCO3 solution, dried over MgSO4, and the solvents are evaporated under reduced pressure.
  • the alcohol obtained is in the form of a yellow-orange oil.
  • 283 mg (1.02 mmol, 2 equiv.) of linoleic acid are dissolved in 5 ml of dry DCM under an inert atmosphere at 0°C.
  • 159 mg (0.78 mmol, 1.5 equiv.) of DCC and 63 mg (0.52 mmol, 1 equiv.) of DMAP are added and the resulting mixture is stirred for 5 min at room temperature under an inert atmosphere. .
  • LPG (Ia) LPG (Ia)
  • GPL C1 a natural LPG PA 18:1-18:0
  • C1 Cellular medium without GPL is used as a control (hereinafter referred to as C1).
  • Spo20p-GFP is mainly found in the nucleus and cytoplasm of cells.
  • LPG (Ib) LPG (Ib)
  • GPL C2 a natural LPG PA 18:2-18:0
  • Avanti Polar Lipids are incubated for 5 min at a concentration of 100 ⁇ M, with PC12 cells expressing Spo20p-GFP.
  • Cellular medium without GPL is used as a control (hereinafter referred to as C2).
  • Figure 1 shows confocal microscopy images obtained using a device sold under the trade name SP5II by the company Leica, of the two control media C1 and C2 ( Figures 1 a and 1 d respectively), of the medium after incubation with the comparative GPL C1 (figure 1 b), of the medium after incubation with the GPL (Ia) of the invention (figure 1 c), of the medium after incubation with the comparative GPL C2 (figure 1 e), and of the medium after incubation with the GPL (Ib) of the invention ( Figure 1 f).
  • the GPLs (Ia) and (Ib) of the invention cause recruitment of the Spo20p-GFP protein to the plasma membrane of PC12 cells in the same way as the corresponding natural GPLs do.
  • a marker hereinafter called Membright is incubated for 5 minutes on the cells in the media as prepared above to specifically mark the plasma membrane of the cells.
  • Figure 2 shows the percentage of colocalization of the Spo20p-GFP protein and different GPLs in the plasma membrane, said percentage being determined using Image J software. Therefore, thanks to the synthetic GPL(I)s of the invention , it is possible to locate and identify the different proteins that interact with them.
  • Example 5 use of GPL (XIVa) as a molecular tool In this example the interaction is highlighted between GPL (XIVa) which fluoresces in the green (thanks to the fluorophore based on nitrobenzoadiazole) and a protein mobilizing phosphatidic acids (PA), the CgA-AF633 protein which fluoresces in red.
  • GPL (XIVa) which fluoresces in the green
  • PA protein mobilizing phosphatidic acids
  • giant liposomes composed of 96% by mass of dioleoylphosphatidylcholine (DOPC) and 4% by mass of GPL (XIVa), and for comparison, giant liposomes composed of 96% by mass of dioleoylphosphatidylcholine (DOPC) and 4% by mass of a natural LPG modified with a fluorophore based on nitrobenzoadiazole: PA 18:1–6:0 NBD sold under the reference 810175C by Avanti Polar Lipids, at a concentration of 1mM, are prepared using the method of assisted swelling with polyvinyl alcohol (well known as “PVA assisted swelling method” as described in Carmon et al., FASEB J., 2020, 34:6769–6790).
  • Figure 3 shows light microscopy images of liposomes containing the commercial GPL PA 18:1–6:0 NBD ( Figure 3 a) and liposomes containing the GPL (XIVa) of the invention ( Figure 3 b).
  • Figure 4 shows images obtained using a confocal microscope sold under the trade name SP5 by the company Leica, of a liposome containing the commercial GPL PA 18:1–6:0 NBD (figure 4 a) and liposomes containing the GPL (XIVa) of the invention ( Figure 4 b), thus indicating that the GPL (XIVa) of the invention participates in the formation of giant liposomes.
  • FIG. 5 shows images obtained using the confocal microscope of the liposomes containing the commercial GPL PA 18:1–6:0 NBD incubated with the CgA-AF633 protein ( Figures 5 a, 5 b, 5 c) and liposomes containing the GPL (XIVa) of the invention incubated with the CgA-AF633 protein ( Figures 5 d, 5 e, 5 f).
  • the excitation wavelength is 463 nm and that of detection is 539 nm to allow visualization of the GPLs which fluoresce in the green; in Figures 5 b and 5 e, the excitation wavelength is 633 nm and that of detection 648 nm to allow visualization of the CgA-AF633 protein which fluoresces in the red; Figures 5 c and 5 f result from the superposition of Figures 5a and 5b then Figures 5 d and 5 e, respectively, in order to visualize both the GPL which fluoresces in the green and the CgA-AF633 protein which fluoresces in the red.
  • Example 6 synthesis of a GPL fluorescent probe (XIVa') from GPL (Ia) . 50 mg (66 ⁇ mole) of compound (Ia) as prepared in Example 1 were dissolved in 330 ⁇ l of freshly distilled pyridine. 50.5 mg (330 ⁇ mole, 5 equivalents) of o-nitrobenzyl alcohol and 330 ⁇ l (3.29 mmol, 50 equivalents) of trichloroacetonitrile were added. The reaction was sealed with a Teflon septum and irradiated for 60 min at 90°C (power of 120W maximum).
  • This compound comprises, in relation to compound (XIVa), a photoactivatable group OR' 1 as defined in the invention on the polar head.
  • Example 7 synthesis of a GPL fluorescent probe (XIVa-2) from GPL (Ia) The carboxylic acid “ATTO 746N” (5.00 mg, 6.70 ⁇ mole) was dissolved in dichloromethane (150 ⁇ l).
  • N-(3-Dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide (2.50 mg, 16.1 ⁇ mole) and the amine ADIBO C6 (4.70 mg, 14.7 ⁇ mole) were added and the mixture was was stirred at room temperature. during 2 hours.
  • 2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethylaminium tetrafluoroborate or TBTU (3.23 mg, 10.1 ⁇ mole) and N,N-diisopropylethylamine (DIPEA, 1 .75 ⁇ l, 10.1 umole) were added. After 1 hour, the reaction was complete. The solvent was removed under reduced pressure.
  • This crude product of formula (XVa-2) was carried out in the following step without purification.
  • the crude product (XVa-2) (6.33 mg, 6.7 ⁇ mole) and the GPL Ia as prepared in Example 1 (7.99 mg, 10.6 ⁇ mole) were solubilized in CHCl3. After 1 day, the solvent was removed under reduced pressure.
  • the crude product is purified by chromatography on silica gel (eluent: gradient of 5% methanol up to 20% in CH2Cl2, column “Viridis Silica 5 ⁇ , 150 x 4.60 mm) to give a blue solid (XIVa- 2) (5 mg, yield of 38% after 2 steps).
  • Example 8 synthesis of a GPL fluorescent probe (XIVa-3) from GPL (Ia) .
  • the compound (XIIa) as prepared in Example 1 (83 mg, 106 mmol, 1 equivalent) and 7-(prop-2-yn-1-yloxy)-2H-chromen-2-one (52.8 mg, 264 ⁇ mole, 2.5 equivalents) were solubilized in tetrahydrofuran (THF) (4 ml).
  • Example 9 synthesis of a GPL fluorescent probe (XIVa-4) from GPL (Ia)
  • the compound of formula (XIVa-3) as prepared in Example 8 (95 mg, 99.5 ⁇ mole, 1 equivalent) was solubilized in pyridine (450 ⁇ l), then N-trityléhanolmine (151 mg, 497 ⁇ mole, 5 equivalents) and trichloroacetonitrile (450 ⁇ l) were added.
  • the reaction mixture was heated to 90°C for 1 hour in microwave.
  • the crude product obtained was purified by chromatography on silica gel with liquid deposition (dichloromethane) and an eluent (gradient from 100% ethyl acetate to 100% isopropanol) to obtain the intermediate compound in the form of a brown solid with a yield of 92% (114 mg).
  • the reaction turned yellow when the acid was added, and was stirred for 3 hours. at room temperature.
  • the reaction was monitored by UPLC (“Phenomenex Kinetex” 2.6 ⁇ PFP 100 ⁇ 150 x 4.60 mm) with a UV detector (at 254 nm) to follow the appearance of the free trityl group at 8.72 min) and a fluorescent detector (at 320 nm) to follow the transition from the intermediate compound at 12.4 min to the product (XIVa-5) at 12.2 min.
  • Molar mass 999.6193 g mol ⁇ 1 .

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Abstract

La présente invention s'applique au domaine des glycérophospholipides (GPL) utilisables pour les études biologiques. En particulier, l'invention est relative à de nouveaux composés GPL comprenant au moins une fonction réactive n'interférant pas avec les processus biologiques, à leur procédé de préparation, et à leurs utilisations dans différentes applications.

Description

Glycérophospholipides synthétiques comprenant au moins une fonction réactive, leur procédé de préparation et leurs utilisations dans différentes applications La présente invention s’applique au domaine des glycérophospholipides (GPL) utilisables pour les études biologiques. En particulier, l’invention est relative à de nouveaux composés GPL comprenant au moins une fonction réactive n’interférant pas avec les processus biologiques, à leur procédé de préparation, et à leurs utilisations dans différentes applications. Les glycérophospholipides (GPL) représentent la classe la plus abondante de lipides cellulaires. Ils sont également les principaux constituants des bicouches membranaires et interviennent lors de nombreux processus cellulaires tels que la mobilité, la production d’énergie, et le trafic intracellulaire. En particulier, ils sont impliqués directement dans de nombreuses voies de signalisation intracellulaire. Ce sont des lipides amphiphiles, c’est-à-dire qu’ils possèdent une partie hydrophile (tête polaire) et une partie hydrophobe (queue apolaire). Les GPL sont construits autour d'une molécule de glycérol, où deux groupements hydroxyles sont estérifiés par différents acides gras et le troisième groupement hydroxyle est remplacé par l'acide phosphorique. Un GPL naturel chez les mammifères peut être représenté par la formule développée ci-dessous : dans laquelle on distingue un squelette glycérol sur lequel sont greffées : - en position dite sn-3 du squelette glycérol, une tête phosphate polaire, fonctionnalisée (R1 ≠ H) ou non (R1 = H), - en position dite sn-2 du squelette glycérol, une chaine d’acide gras (p + q + 3 atomes de carbone) insaturée, mono- ou polyinsaturée (non représentée), de longueur variable, et - en position dite sn-1 du squelette glycérol, généralement une chaine d’acide gras (n + 1 atomes de carbone) saturée, de longueur variable. La tête phosphate polaire en position sn-3 donnant son nom générique aux GPL et certaines de ses propriétés biologiques. Il existe une vingtaine de sous- classes de GPL selon le type de groupe R1 présent sur la tête polaire : le plus abondant des GPL est la phosphatidylcholine (PC) qui porte une tête choline. D’autres GPL sont également naturellement présents tels que la phosphatidyléthanolamine (PE), la phosphatidylsérine (PS), le phosphatidylinositol (PI), l’acide phosphatidique (PA), et le phosphatidylglycérol (PG). Une cellule peut contenir plusieurs milliers de phospholipides différents. Leur métabolisme étant rapide et bien souvent complexe, il s’avère extrêmement difficile de connaitre à chaque instant la localisation et le rôle précis de tel ou tel phospholipide. Des équipes de recherche se sont par conséquent intéressées à la synthèse de sondes basées sur les structures des glycérophospholipides, par exemple contenant des groupements fluorescents. Certaines de ces sondes sont d’ailleurs commercialisées et sont représentées sur le schéma ci-dessous. En particulier, le groupe fluorophore (représenté dans un cadre) est ajouté soit en remplacement d’une partie d’une chaine d’acide gras (18:0-6:0 NBD PA et TOPFLUOR PI(4,5)P2), soit sur la tête polaire phosphate ((18:1)2 DANSYL PS).
. D’autres sondes ont également été décrites dans la demande de brevet NZ577912 A. Celle-ci porte sur des marqueurs cellulaires fluorescents solubles dans l’eau répondant à la structure F-S1-S2-L, dans laquelle F est un fluorophore, S1-S2 est un bras espaceur reliant F à L, L est un lipide choisi parmi les glycérophospholipides diacylés et dialkylés, et la structure F-S1-S2-L inclut la sous-structure suivante -C(=R)-NH-(CH2)m-NH-C(=O)-(CH2)n-C(=O)- dans laquelle m et n vont indépendamment de 3 à 6 et R est O ou S. Dans les exemples, le fluorophore est positionné au niveau de la tête polaire phosphate via le bras espaceur de liaison S1-S2. Un des exemples présente la structure suivante : . Cependant, les sondes précitées présentent l’inconvénient d’être trop éloignées en termes de structures des molécules dont elles sont censées illustrer la distribution subcellulaire. En effet, les têtes polaires des glycérophospholipides assurent la spécificité de l’interaction avec certaines protéines, et la nature des chaines d’acide gras joue également un rôle important dans les fonctions des GPL, et dans les interactions avec les protéines. Par conséquent, toutes les modifications dans ces zones (tête polaire ou acides gras) mettent clairement en péril la reconnaissance des GPL par leurs protéines mobilisatrices, modifiant potentiellement leurs fonctions biologiques, et de ce fait biaisent ou rendent impossibles des interprétations des expériences réalisées avec ces sondes. Par ailleurs, ces sondes sont synthétisées avec un fluorophore particulier, ce qui impose la synthèse d’une nouvelle sonde avec un fluorophore différent pour faire varier les propriétés photophysiques de la sonde en cas de besoin. Il existe par conséquent un besoin en nouvelles sondes glycérophospholipides présentant une structure plus proche de celle des GPL naturels, faciles à préparer, et pouvant être utilisées dans différentes applications et en particulier en tant qu’outils moléculaires dans le domaine de la biologie. Ainsi, le but de la présente invention est de pallier les inconvénients de l’art antérieur précité et de fournir des glycérophospholipides synthétiques dont les caractéristiques principales des glycérophospholipides naturels sont conservées tout en garantissant leur utilisation en tant qu’outils moléculaires dans le domaine de la biologie. Un autre but de la présente invention est de fournir un procédé de préparation de tels glycérophospholipides synthétiques simple, convergent, économique, et permettant un accès à des glycérophospholipides de structures variées. Le but de l’invention est atteint par les composés et le procédé qui vont être décrits ci-après. La présente invention a ainsi pour premier objet un glycérophospholipide synthétique répondant à la formule (I) suivante : dans laquelle : * le groupe OR1 est choisi parmi un groupe hydroxyle, un reste de choline, un reste d’éthanolamine, un reste de glycérol, un reste de sérine, un reste d’inositol, un reste d’inositol monophosphate, un reste d’inositol bisphosphate, un reste d’inositol trisphosphate, un reste de glycérophosphate, un reste de glucose, un reste d’inositolglycane, et un reste de tout composé hydroxylé capable de former un groupe phosphodiester en position sn-3 appartenant à une sous-classe des GPL naturels, * R2 représente une chaine aliphatique insaturée, mono- ou polyinsaturée, comprenant au moins 14 atomes de carbone, et * R3 représente une chaine aliphatique saturée comprenant au moins 10 atomes de carbone. Les GPL de formule (I) de l’invention respectent la nature des chaines lipidiques (i.e. une chaine d’acide gras saturée en position sn-1 et une chaine d’acide gras insaturée en position sn-2) et de la tête polaire phosphate en position sn-3, ce qui permet d’accéder à des outils moléculaires présentant une meilleure fiabilité. Par ailleurs, ils portent une fonction discrète azoture de petite taille en position dite « sn-0 » qui ne modifie pas significativement leurs propriétés et peut servir de point d’accroche d’un marqueur ou de toute sonde biologique, notamment par chimie click. Cette fonction discrète azoture permet ainsi de procurer des outils moléculaires adéquats pour une exploration fine de la localisation et des différents rôles in vitro, in vivo ou in cellulo des GPL. D’une part, elle n’interfère pas avec les processus biologiques, ce qui devrait permettre de conserver les propriétés biologiques des GPL quelles que soient les chaines lipidiques, et par conséquent de comprendre de façon précise le rôle des différentes chaines présentes dans les GPL. D’autre part, cette fonction discrète azoture peut ensuite être utilisée une fois que le GPL de formule (I) est introduit in vitro, in cellulo ou in vivo pour y greffer différents outils chimiques (fluorophore, agent de réticulation photoactivable, radiomarqueur, etc…) permettant les études biologiques sans avoir à devoir recommencer une synthèse spécifique du squelette glycérophospholipidique. Au sens de la présente invention, on entend par « reste » d’un composé hydroxylé, ce même composé hydroxylé dans lequel on a enlevé l’atome d’hydrogène de la fonction hydroxyle dudit composé hydroxylé pour former le groupe OR1 du phosphodiester. À titre d’exemple, un reste de choline est le groupe OR1 = -O-(CH2)2-N+(CH3)3, la choline correspondant au composé hydroxylé H-O-(CH2)2-N+(CH3)3. Comme expliqué dans la partie introductive, il existe une vingtaine de sous- classes de GPL naturels chez les mammifères selon le type de groupe R1 présent sur la tête polaire. Au sens de la présente invention, le composé de formule (I) comprend deux centres chiraux, le premier en position sn-2 dont la configuration est fixée de manière à correspondre à celle des GPL naturels, et le deuxième en position sn- 1 qui a deux configurations possibles. Ledit composé de formule (I) peut ainsi être choisi parmi un composé de formule (I)-C1, un composé de formule (I)-C2, et un mélange des composés de formule (I)-C1 et de formule (I)-C2, lesdites formules (I)-C1 et (I)-C2 étant telles que définies ci-dessous : . De préférence, le composé (I) est un composé (I)-C1. Définition de R1 Le groupe OR1 est de préférence choisi parmi un groupe hydroxyle, un reste de choline, un reste d’éthanolamine, un reste de glycérol, un reste de sérine, et un reste d’inositol. Définition de R2 R2 représente une chaine aliphatique insaturée, mono- ou polyinsaturée, comprenant au moins 14 atomes de carbone. Elle comprend de préférence de 16 à 24 atomes de carbone, et de façon particulièrement préférée de 16 à 20 atomes de carbone. La chaine aliphatique insaturée peut comprendre de 1 à 6 insaturations, et de préférence de 1 à 3 insaturations. Chacune des insaturations peut être de configuration Z ou E. La chaine aliphatique insaturée est de préférence une chaine aliphatique insaturée non substituée. La chaine aliphatique insaturée est de préférence une chaine aliphatique insaturée linéaire (i.e. non ramifiée). Définition de R3 R3 représente une chaine aliphatique saturée comprenant au moins 10 atomes de carbone. Elle comprend de préférence de 14 à 30 atomes de carbone, et de façon particulièrement préférée de 14 à 24 atomes de carbone. La chaine aliphatique saturée est de préférence une chaine aliphatique saturée non substituée. La chaine aliphatique saturée est de préférence une chaine aliphatique saturée linéaire (i.e. non ramifiée). Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, le glycérophospholipide (GPL) est choisi parmi les composés de formules (Ia) à (Ie) présentés dans le tableau suivant :
L’invention a pour deuxième objet un procédé de préparation d’un GPL de formule (I) tel que défini dans le premier objet de l’invention, caractérisé en ce qu’il comprend au moins les étapes suivantes : i) une étape de préparation d’un phosphotriester de formule (IV) comprenant une fonction diacétal mettant en œuvre la fonctionnalisation d’un dérivé diacétal du (2S,3S)-butane-1,2,3,4-tétrol répondant à la formule (III) avec un dialkyl halogénophosphate de formule (IV) en milieu basique, selon le schéma suivant : , dans lequel R4 représente un groupe alkyle en C1-C5 ou un groupe benzyle, et R5 représente un groupe alkyle en C1-C5, ii) une étape de déprotection en milieu acide de la fonction diacétal du phosphotriester de formule (IV) pour former un diol de formule (V) comprenant un alcool primaire, selon le schéma suivant : , dans lequel R4 est tel que défini dans l’invention, iii) une étape de fonctionnalisation sélective de l’alcool primaire du diol de formule (V) pour former un monoalcool de formule (VI) comprenant un alcool primaire modifié par un groupe R6 (fonction OR6), selon le schéma suivant : , dans lequel R4 est tel que défini dans l’invention et R6 est choisi parmi les groupes suivants : tosyle, mésyle, et triflate, iv) une étape de substitution nucléophile de la fonction OR6 du monoalcool de formule (VI) pour former un azoture de formule (VII) comprenant une fonction alcool, selon le schéma suivant : , v) une étape d’estérification de la fonction alcool de l’azoture de formule (VII) avec un acide gras saturé de formule (VIII) pour former un azoture de formule (IX) comprenant une chaine d’acide gras saturée et une fonction alcool protégée par un groupe paraméthoxybenzyle (PMB), selon le schéma suivant : , dans lequel R3 et R4 sont tels que définis dans l’invention, vi) une étape comprenant une sous-étape vi-1) de déprotection du groupe paraméthoxybenzyle de l’azoture de formule (IX) pour former un azoture de formule (X) comprenant une fonction alcool, suivie d’une sous-étape vi-2) d’estérification de la fonction alcool de l’azoture de formule (X) avec un acide gras insaturé de formule (XI), pour former un azoture de formule (XII) comprenant une chaine d’acide gras saturée, une chaine d’acide gras insaturée, et une fonction phosphotriester, selon le schéma suivant : , dans lequel R2 est tel que défini dans l’inventiion, et vii) une étape de déprotection des groupes R4 pour former un composé de formule (I) dans laquelle OR1 = OH, éventuellement suivie d’une étape de préparation d’un composé de formule (I) dans laquelle OR1 ≠ OH. Le procédé de l’invention permet d’accéder facilement à des GPL de formule (I) selon une voie de synthèse convergente mettant en œuvre un intermédiaire de synthèse de formule (VII) commun à tous les GPL de formule (I). Par conséquent, l’introduction régio- et stéréo- sélective des chaines d’acide gras saturée et insaturée est effectuée le plus tard possible, i.e. lors des deux avant-dernières étapes. Cela est d’autant plus important pour l’introduction de la chaine d’acide gras insaturée puisque les insaturations peuvent être sensibles à certaines conditions réactionnelles et/ou s’oxyder facilement. Le groupe paraméthoxybenzyle (PMB) permet notamment de protéger la fonction alcool en position sn-2 tout au long du procédé de l’invention jusqu’à l’introduction de la chaine d’acide gras insaturée. Par ailleurs, la déprotection du groupe phosphate par les groupes R4 est effectuée lors d’une dernière étape afin de faciliter les purifications et/ou d’éviter la formation de produits secondaires lors des étapes précédentes. Etape i) L’étape i) est une étape de préparation d’un phosphotriester de formule (IV) comprenant une fonction diacétal mettant en œuvre la fonctionnalisation d’un dérivé diacétal du (2S,3S)-butane-1,2,3,4-tétrol répondant à la formule (III) avec un dialkyl halogénophosphate de formule (IV) en milieu basique. En particulier, le dérivé diacétal du (2S,3S)-butane-1,2,3,4-tétrol répondant à la formule (III) qui est utilisé dans l’étape i) possède d’ores et déjà la bonne stéréochimie sur la position sn-2 pour accéder aux GPL de formule (I). Cette stéréochimie est conservée tout au long du procédé de l’invention. L’étape i) permet d’introduire une fonction phosphate protégée en position sn- 3 du dérivé diacétal (III). Cette étape i) est effectuée en milieu basique, par exemple en présence d’une base choisie parmi le tertbutanolate de potassium (tBuOK), NaH, NaNH2, et KH. L’étape i) est de préférence réalisée à une température allant de -20°C à 50°C. L’étape i) peut être effectuée dans un solvant tel que le dichlorométhane, le tétrahydrofurane (THF) ou le toluène. Le dialkyl halogénophosphate de formule (IV) est de préférence choisi parmi les dialkyl chlorophosphates tel que le diméthylchlorophosphate. R4 représente de préférence un groupe méthyle. R5 représente de préférence un groupe méthyle. Etape ii) L’étape ii) est une étape de déprotection en milieu acide de la fonction diacétal du phosphotriester de formule (IV) pour former un diol de formule (V) comprenant une fonction alcool primaire. Lors de cette étape ii), deux fonctions alcool sont obtenues dont une fonction alcool primaire en position sn-0. Cette étape ii) peut être effectuée dans un solvant choisi parmi les alcools inférieurs (i.e. en C1-C4), tels que le méthanol, l’éthanol, ou l’isopropanol. L’étape ii) est réalisé en présence d’un acide choisi parmi l’acide chlorhydrique (HCl), et tout autre acide approprié. Selon un mode de réalisation préféré, l’étape ii) est effectuée par méthanolyse acide, en présence d’HCl. L’étape ii) est de préférence réalisée à température ambiante (i.e. 18-25°C). Etape iii) L’étape iii) est une étape de protection sélective de la fonction alcool primaire du diol de formule (V) pour former un monoalcool de formule (VI) comprenant une fonction alcool primaire protégée par un groupe R6. L’étape iii) est de préférence effectuée en présence d’un composé R6Y, Y étant un atome d’halogène choisi parmi un atome de chlore, de brome et d’iode. L’étape iii) est de préférence mise en œuvre en présence d’une base, et éventuellement d’un catalyseur. La base peut être choisie parmi la diisopropyléthylamine (DIPEA), la triéthylamine (TEA), le carbonate de potassium (K2CO3), la soude (NaOH), et la potasse (KOH). Le catalyseur peut être choisi parmi les catalyseurs à base d’étain tels que Bu2SnO. Le groupe R6 est de préférence un groupe tosyle. Y est de préférence un atome de chlore. Dans un mode de réalisation préféré, l’étape iii) est effectuée en présence du chlorure de tosylate, d’une base, et d’un catalyseur à base d’étain. L’étape iii) peut être effectuée dans un solvant aprotique tel que le toluène. L’étape iii) est de préférence réalisée à température ambiante (i.e. 18-25°C). Etape iv) L’étape iv) est une étape de substitution nucléophile de la fonction alcool primaire protégée par un groupe R6 du monoalcool de formule (VI) pour former un azoture de formule (VII) comprenant une fonction alcool. Cette étape iv) permet l’introduction de la fonction azoture grâce au déplacement du groupe -OR6 par substitution nucléophile. L’étape iv) est de préférence effectuée en présence d’un composé azoture choisi parmi l’azoture de sodium, l’azoture de potassium, l’iodure de tétrabutylammonium, l’azoture de diphénylphosphoryle, et l’azoture de triméthylsilyle. L’étape iv) est de préférence réalisée à une température allant de 0°C à 100°C. L’étape iv) est généralement effectuée dans un solvant polaire, de préférence capable de solubiliser les sels d’azoture, tel que le diméthylformamide (DMF). Cet azoture de formule (VII) est un composé intermédiaire clé dans la synthèse des GPL synthétiques de formule (I). Grâce à celui-ci, des GPL portant des chaines d’acide gras variées en positions sn-1 et sn-2 peuvent être obtenus en seulement trois étapes. À l’issue de l’étape iv), le brut de réaction peut comprendre l’azoture de formule (VII) en mélange avec l’azoture de formule (VII’) suivant : , dans laquelle le triester de phosphate a été en partie déprotégé (déprotection d’un groupe R4). Le rendement de cette étape iv) peut être améliorée par traitement du brut de réaction obtenu à l’issue de l’étape iv) avec un dérivé du diazométhane tel que le triméthylsilyldiazométhane, le 1-(mésitylène-2-sulfonyl)-3-nitro-1H-1,2,4- triazole, SiO2Cl, CsF/MeI, ou du triméthylorthoformate ; et un alcool R4OH, R4 étant tel que défini dans l’invention, afin de conduire à l’azoture de formule (VII). L’étape v) est une étape d’estérification de la fonction alcool de l’azoture de formule (VII) avec un acide gras saturé de formule (VIII) pour former un azoture de formule (IX) comprenant une chaine d’acide gras saturée de formule et une fonction alcool protégée par un groupe paraméthoxybenzyle (PMB). Cette étape v) peut mettre en œuvre un agent couplage, en particulier choisi parmi les carbodiimides tel que le N,N'-dicyclohexylcarbodiimide (DCC), le N- (3-diméthylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide (EDCl), le N-cyclohexyl-N'- isopropylcarbodiimide (CIC), ou le N,N'-diisopropylcarbodiimide (DIC) ; et éventuellement un catalyseur tel que le diméthylamidopyridine (DMAP), ou la pyridine. L’étape v) est généralement effectuée dans un solvant non nucléophile tel que le dichlorométhane, ou le chloroforme. L’étape v) est de préférence réalisée à température ambiante (i.e. 18-25°C). L’acide gras de formule (VIII) peut être choisi parmi l’acide stéarique, l’acide caproïque, l’acide laurique, l’acide myristique, l’acide palmitique, l’acide arachidique, l’acide béhénique, l’acide lignocérique, l’acide cérotique, l’acide montanique, et l’acide mélissique. Etape vi) L’étape vi) comprend une sous-étape vi-1) de déprotection du groupe paraméthoxybenzyle de l’azoture de formule (IX) pour former un azoture de formule (X) comprenant une fonction alcool, suivie d’une sous-étape vi-2) d’estérification de la fonction alcool de l’azoture de formule (X) avec un acide gras insaturé de formule (XI), pour former un azoture de formule (XII) comprenant une chaine d’acide gras saturée, une chaine d’acide gras insaturée, et une fonction phosphotriester. La sous-étape vi-1) peut être effectuée en présence d’un agent de déprotection choisi parmi le 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone (DDQ), le nitrate d’ammonium et de cérium (CAN), le trichlorure d’aluminium (AlCl3) en présence d’éthane thiol (EtSH), le tétrachlorure d’étain (SnCl4) en présence de phényl thiol (PhSH), ou le trichlorure de cérium (CeCl3) en présence d’iodure de sodium (NaI). La sous-étape vi-1) est de préférence mise en œuvre dans un mélange de solvant biphasique tel qu’un mélange de dichlorométhane et d’eau. La sous-étape vi-1) est de préférence réalisée à une température allant de - 20°C à 50°C. Dans un mode de réalisation préféré, la sous-étape vi-1) est effectuée en présence de 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone, et à une température allant de -20°C à 50°C. À l’issue de la sous-étape vi-1), l’alcool de formule (X) obtenu est directement engagé dans la sous-étape vi-2), en particulier sans étape de purification et immédiatement. Cela permet ainsi d’éviter sa dégradation. La sous-étape vi-2) peut mettre en œuvre un agent couplage, en particulier choisi parmi les carbodiimides tel que le N,N'-dicyclohexylcarbodiimide (DCC), le N-(3-diméthylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide (EDCl), le N-cyclohexyl-N'- isopropylcarbodiimide (CIC), ou le N,N'-diisopropylcarbodiimide (DIC) ; et éventuellement un catalyseur tel que le diméthylamidopyridine (DMAP), ou la pyridine. La sous-étape vi-2) est généralement effectuée dans un solvant non nucléophile tel que le dichlorométhane, ou le chloroforme. La sous-étape vi-2) est de préférence réalisée à une température allant de - 25°C à 0°C. L’acide gras de formule (XI) peut être choisi parmi l’acide oléique, l’acide linoléique, l’acide lauroléique, l’acide myristoléique, l’acide palmitoléique, l’acide vaccénique, l’acide gadoléique, l’acide cétoléique, l’acide érucique, l’acide sélacholéique, l’acide linolénique, l’acide éléostéarique, l’acide arachidonique, l’acide cuplanodonique, l’acide élaïdique, et l’acide pétrosélinique. Les gammes de température des sous-étapes vi-1) et vi-2) ainsi que la mise en œuvre de la sous-étape vi-2) directement après la sous-étape vi-1) permettent de favoriser la déprotection du groupe PMB tout en évitant la réaction de l’ester porté par l’azoture de formule (X) sur lui-même par un mécanisme de trans- estérification intramoléculaire qui induirait alors une perte de régiosélectivité dans la localisation des chaines d’acide gras qui peut être suivie par RMN du phosphore. Etape vii) L’étape vii) consiste en la déprotection des groupes R4 pour former un composé de formule (I) dans laquelle OR1 = OH, éventuellement suivie d’une étape de préparation d’un composé de formule (I) dans laquelle OR1 ≠ OH La déprotection des groupes R4 peut être effectuée en présence d’un réactif choisi parmi le bromotriméthylsilane, la butylamine, l’ammoniaque, la triméthylamine, la triéthylamine, le tribromure de bore (BBr3), la pyridine, l’iodure de sodium (NaI), et le cyanure de lithium (LiCN). L’étape vii) est de préférence effectuée dans un solvant tel que le chloroforme, le DMF, ou le toluène. L’étape vii) est de préférence réalisée à température ambiante (i.e. 18-25°C). À l’issue de l’étape vii), un GPL de formule (I) comprenant une tête polaire phosphate (R1 = H) est obtenu. Le dérivé diacétal du (2S,3S)-butane-1,2,3,4-tétrol répondant à la formule (III) tel qu’utilisé dans l’étape i) peut être préparé à partir d’un dialkyl-L-tartrate de formule (XIII) suivante : dans laquelle R7 est un groupe alkyle en C1-C5, et de préférence un groupe méthyle. En particulier, le dérivé diacétal (III) peut être obtenu selon une méthode similaire à celle décrite par Namysio et al., J. Prakt. Chem., 1999, 341, 6, 557- 561. Selon une forme de réalisation particulièrement préférée de l’invention le dérivé diacétal (III) est obtenu selon les étapes décrites dans le schéma suivant :
avec R5 étant tel que défini précédemment. Cette méthode comprend notamment la protection du diméthyl-L-tartrate sous forme d’un diacétal suivie de deux réductions successives des esters et de l’ouverture de l’acétal pour former un triol dont les deux fonctions alcool adjacentes sont ensuite protégées par un dialkylcétal. Le dérivé diacétal (III) peut également être obtenu selon les étapes décrites dans le schéma suivant :
avec R5 étant tel que défini précédemment. Cette méthode comprend notamment la monoprotection sélective du diméthyl- L-tartrate suivie de deux réductions successives des esters et de la protection par un dialkylcétal des deux fonctions alcool adjacentes. L’invention a pour troisième objet un glycérophospholipide modifié répondant à la formule (XIV) suivante : dans laquelle : * OR’1 représente un groupe OR1 tel que défini dans l’invention ou un groupe photoactivable, * R2 et R3 sont tels que définis dans le premier objet de l’invention, et * R8 et R9, indépendamment l’un de l’autre, sont choisis parmi un groupe fluorophore, un groupe photoréticulable, un groupe radiomarqueur, et un atome d’hydrogène ; ou les groupes R8 et R9 forment ensemble un groupe choisi parmi un groupe fluorophore, un groupe photoréticulable, et un groupe radiomarqueur. Les GPL modifiés de formule (XIV) conservent la structure et la stéréochimie des GPL naturels. Le groupe fluorophore peut être choisi parmi les fluorophores à base de nitrobenzooxadiazole (NBD), les fluorophores à motif xanthène, les carborhodamines, les cyanines, les coumarines, et les hydrocarbures polycycliques aromatiques comme les pyrènes ou les porphyrines. Les coumarines, les fluorophores à base de nitrobenzooxadiazole (NBD), et les carborhodamines sont préférés. À titre d’exemples de groupes fluorophores utilisables selon l’invention, on peut citer les fluorophores de la gamme Alexa Fluor commercialisés par la société Molecular Probes. Le groupe photoréticulable en tant que R8 et/ou R9, peut comprendre (ou être constitué d’) un groupe azoture d'aryle, un groupe diazirine, un groupe diazo, un groupe benzophénone, un groupe dérivé de la benzophénone, un groupe tétrazole, ou un groupe quinoxalinone. Le groupe radiomarqueur peut comprendre (ou être constitué de) du fluor 18, du carbone 11, de l’iode 123, de l’iode 124, ou un complexe de gallium 67, d’indium 111m, de technétium 99m ou de thallium 201. De préférence, R8 est un atome d’hydrogène et R9 est un groupe fluorophore, R9 est un atome d’hydrogène et R8 est un groupe fluorophore, ou les groupes R8 et R9 forment ensemble un groupe fluorophore. Le groupe photoactivable en tant que OR'1 peut comprendre un groupe aromatique contenant un ou plusieurs fonctions nitro -NO2 tel qu’un groupe orthonitrobenzyle ou orthonitroindoline, un groupe coumarinique tel qu’un groupe coumarine-4-yle, ou un groupe quinoline. L’invention a pour quatrième objet, un procédé de préparation d’un glycérophospholipide modifié de formule (XIV) tel que défini dans le troisième objet de l’invention, caractérisé en ce qu’il comprend au moins une étape A) de mise en contact d’un glycérophospholipide synthétique de formule (I) tel que défini dans le premier objet de l’invention ou obtenu selon un procédé tel que défini dans le deuxième objet de l’invention, avec un alcyne répondant à la formule (XV) suivante : dans laquelle R8 et R9 sont tels que définis dans l’invention. L’étape A) peut être effectuée par cycloaddition de Huisgen, par cycloaddition de Huisgen catalysée par des sels de cuivre (CuAAC), ou par cycloaddition de Huisgen mettant en œuvre un alcyne contraint (SPAAC). La cycloaddition de Huisgen mettant en œuvre un alcyne contraint (SPAAC) est préférée. Cette voie de synthèse permet notamment de s’affranchir de la cytoxicité du cuivre. L’alcyne de formule (XV) est de préférence un alcyne contraint, en particulier comprenant un groupe cyclooctyne tel qu’un groupe difluorocyclooctyne (DIFO), un groupe difluorobenzocyclooctyne (DIFBO), un groupe dibenzocyclooctyne (DIBO), un groupe biarylazacyclooctynone (BARAC), ou un groupe bicyclo[6.1.0]nonyne (BCN). À titre d’exemple d’alcyne de formule (XV) contraint et comprenant un groupe cyclooctyne, on peut citer le composé (XVa) suivant comprenant en tant que fluorophore la nitrobenzodiazole et en tant qu’alcyne contraint un groupe DIBO : ou le composé (XVa-2) suivant comprenant en tant que fluorophore une carborhodamine et en tant qu’alcyne contraint un groupe DIBO : . L’étape A) peut être effectuée avant ou après la mise en contact du GPL synthétique (I) avec un milieu biologique, et de préférence après la mise en contact du GPL synthétique (I) avec un milieu biologique. Selon une forme de réalisation préférée de l’invention, l’étape A) est effectuée après la mise en contact du GPL synthétique (I) avec un milieu biologique. Selon une forme de réalisation particulièrement préférée de l’invention, le procédé comprend alors en outre avant l’étape A), une étape a) de mise en contact du GPL synthétique (I) avec un milieu biologique, en particulier in vitro, in vivo, ex vivo ou in cellulo, et de préférence in vitro ou ex vivo. Par conséquent, il est possible d’adresser le GPL synthétique (I) dans une cellule, puis d’incorporer sur le squelette glycérol selon l’étape A) différents groupes fonctionnels, qui vont notamment dépendre de l’application envisagée. Lorsque R’1 est un groupe photoactivable, ledit groupe peut être introduit avant ou après l’étape A). Le procédé permet de garantir la conservation de la structure et de la stéréochimie des GPL naturels, de la tête polaire non modifiée, éventuellement cagée par un groupement photolabile pour éviter leur métabolisation avant l’étude biologique, et des chaines d’acide gras intactes et correctement positionnées. De plus, un seul GPL synthétique (I) permet d’accéder à plusieurs types de GPL modifiés (XIV) et ainsi d’accéder à des applications variées pour un seul GPL synthétique (I) préparé. Cela permet ainsi d’obtenir des GPL modifiés (XIV) ayant une plus grande proximité structurale par rapport aux GPL naturels et d’avoir une grande flexibilité et diversité dans le choix des outils pour des études biologiques. L’invention a pour cinquième objet l’utilisation d’un glycérophospholipide synthétique de formule (I) tel que défini dans le premier objet de l’invention ou obtenu selon un procédé tel que défini dans le deuxième objet de l’invention ; ou d’un glycérophospholipide modifié (XIV) tel que défini dans le troisième objet de l’invention ou obtenu selon un procédé tel que défini dans le quatrième objet de l’invention, en tant qu’outil moléculaire, en particulier dans le domaine de la biologie, ou en tant que sonde biologique, en particulier pour les études biologiques. Ces glycérophospholipides synthétiques de formule (I) et glycérophospholipides modifiés de formule (XIV) peuvent pas exemple être utilisés pour comprendre les processus cellulaires et/ou les fonctions biologiques des GPL naturels selon les types de tête polaire et/ou de chaines d’acide gras présents dans lesdits GPL. En particulier, il a été montré que les GPL synthétiques de formule (I) peuvent interagir tout comme les GPL naturels avec des protéines mobilisatrices telles que Spo20p-GFP qui est fluorescente dans le vert (voir exemple 3 de la demande ci-après), ou la chromogranine A (ou CgA). En particulier, il a été montré que les GPL modifiés de formule (XIV) peuvent interagir tout comme les GPL naturels avec des protéines mobilisatrices telles que la chromogranine A (ou CgA). Les GPL (I) et (XIV) peuvent être utilisés sous la forme d’un kit de dosage et/ou de localisation de biomolécules, telles que des protéines. L’invention a pour sixième objet l’utilisation d’un glycérophospholipide synthétique de formule (I) tel que défini dans le premier objet de l’invention ou obtenu selon un procédé tel que défini dans le deuxième objet de l’invention ; ou d’un glycérophospholipide modifié de formule (XIV) tel que défini dans le troisième objet de l’invention ou obtenu selon un procédé tel que défini dans le quatrième objet de l’invention, en tant qu’outil diagnostique, et de préférence en tant qu’outil diagnostique in vitro ou ex vivo. Le diagnostic in vitro est réalisé en dehors du corps humain sur un milieu biologique. Le diagnostic ex vivo est réalisé en dehors du corps humain sur un milieu biologique ayant subi un traitement préalable avant utilisation. En d’autres termes, l’invention concerne un procédé mettant en œuvre la mise en contact d’un glycérophospholipide synthétique de formule (I) tel que défini dans le premier objet de l’invention ou obtenu selon un procédé tel que défini dans le deuxième objet de l’invention ; ou d’un glycérophospholipide modifié de formule (XIV) tel que défini dans le troisième objet de l’invention ou obtenu selon un procédé tel que défini dans le quatrième objet de l’invention, avec un milieu biologique pour le diagnostic, et en particulier pour localiser et/ou identifier les différentes protéines qui interagissent avec celui-ci. L’invention a pour septième objet un glycérophospholipide synthétique de formule (I) tel que défini dans le premier objet de l’invention ou obtenu selon un procédé tel que défini dans le deuxième objet de l’invention ; ou un glycérophospholipide modifié de formule (XIV) tel que défini dans le troisième objet de l’invention ou obtenu selon un procédé tel que défini dans le quatrième objet de l’invention, pour son usage médical. En d’autres termes, l’invention concerne l’utilisation d'un glycérophospholipide synthétique de formule (I) tel que défini dans le premier objet de l’invention ou obtenu selon un procédé tel que défini dans le deuxième objet de l’invention ; ou un glycérophospholipide modifié de formule (XIV) tel que défini dans le troisième objet de l’invention ou obtenu selon un procédé tel que défini dans le quatrième objet de l’invention, pour l'obtention ou la préparation d'un médicament destiné à une utilisation thérapeutique (i.e. pour l'obtention ou la préparation d'un médicament pour un traitement thérapeutique). L’invention concerne également une méthode de traitement comprenant l’administration d'un glycérophospholipide synthétique de formule (I) tel que défini dans le premier objet de l’invention ou obtenu selon un procédé tel que défini dans le deuxième objet de l’invention ; ou un glycérophospholipide modifié de formule (XIV) tel que défini dans le troisième objet de l’invention ou obtenu selon un procédé tel que défini dans le quatrième objet de l’invention, notamment en quantité thérapeutique, à un patient. En particulier, les GPL (I) et (XIV) comprenant trois insaturations successives sur la chaine d’acide gras insaturée peuvent être utilisés pour améliorer la sécrétion des neurotransmetteurs par les cellules neurosécrétrices et/ou traiter des maladies du système nerveux, en particulier liées au vieillissement normal ou pathologique, ou liées aux retards mentaux (Fragile X, Syndrome de Coffin Lowry). Brève description des dessins Les dessins annexés illustre l’invention : La figure 1 représente des images de microscopie confocale de milieux comprenant différents GPL incubés avec des cellules PC12 exprimant Spo20p- GFP. La figure 2 représente le pourcentage de colocalisation de la protéine Spo20p- GFP et de différents GPL au niveau de la membrane plasmique. La figure 3 représente des images de microscopie photonique de liposomes contenant différents GPL. La figure 4 montre des images de microscopie confocale de liposomes contenant différents GPL. La figure 5 montre des images de microscopie confocale de liposomes contenant différents GPL incubés avec une protéine GgA-AF633. D’autres caractéristiques, variantes et avantages de l’utilisation, de la composition phytotoxique, ou du procédé selon l’invention ressortiront mieux à la lecture des exemples de réalisation qui vont suivre, donnés à titre illustratif et non limitatif de l’invention. Exemples Les réactifs sont de source commerciale (Sigma-Aldrich, Acros, Alfa-Aesar) ainsi que les solvants (Sigma-Aldrich, Acros) et ont été utilisés tels que reçus des fabricants sans traitement spécifique sauf indications contraires. Les expériences de résonance magnétique nucléaire (RMN) ont été conduites à l’aide d’un spectromètre vendu sous la dénomination commerciale Avance DPX300 par Bruker fonctionnant à 293°K avec une fréquence de 300,13 MHz pour la RMN du proton (1H), 121,442 MHz pour la RMN du phosphore (31P) et 75,48 MHz pour la RMN du carbone (13C). Les déplacements chimiques sont exprimés en ppm (parties par millions) par comparaison avec une référence interne, du tétraméthylsilane (TMS, δ= 0 ppm) et des calibrations internes sont réalisés en utilisant un signal de solvant résiduel. Les constantes de couplage en RMN du proton sont reportées en hertz et les multiplicités sont spécifiées (s : singulet ; d : doublet ; t : triplet ; m : multiplet ; dd : doublet de doublet). Les données de spectrométrie de masse par ionisation par électronébuliseur (ESI-MS) ont été acquisent en utilisant un spectromètre vendu sous la dénomination commerciale LCT Premier XE par Waters Acquity. Des mesures exactes de masse (HRMS) ont été réalisées avec un système Synapt G2 HDMS et une source d’électrospray équipée d’un système lockspray®. Les expériences ont été réalisées avec une colonne C18 chargée positivement de référence Waters Acquity BEH ayant les spécificités suivantes : 1,7 µm ; 2,1-50 mm. Le gradient utilisé est le suivant : 98%/2% H2O/ACN à 100% ACN en 4 min et 1,3 min à 100% ACN avec un débit de 0,25 ml.min−1. 0,5 ml sont injectés, et la température de la source est fixée à 120°C et la température de désolvatation à 300°C, avec des tensions de 2200 V pour le détecteur et 3000 V pour le capillaire. Les analyses par chromatographie en phase liquide ultra haute performance (UHPLC) ont été enregistrées sur un appareil vendu sous la dénomination commerciale Ultimate 3000 par Thermo Fisher. Les expériences sont été réalisées sur une colonne C18 de référence Hypersil GOLD ayant les spécificités suivantes : 3 µm ; 2,1 - 50 mm. Le gradient utilisé est le suivant : 95%/5% ACN/H2O à 100% d’H2O en 6 min avec un débit de 0.6 ml.min−1 et une pression de 450 Bar. 10 µL sont injectés et une température de four est fixée à 25 °C. Les produits ont été analysés avec un détecteur UV à 254 nm et 270 nm. Des analyses élémentaires ont été enregistrée sur un appareil vendu sous la dénomination commerciale Flash 2000 par Thermo Fisher - EAGER 300. La détermination de la formule générale d’un composé organique par le pourcentage massique de chacun des éléments (C, H, N, S) présents dans ledit composé est obtenu en intégrant les pics de chromatographie de chacun des éléments. Les surfaces ainsi intégrées sont pointées sur une ligne de calibration afin de déterminer la concentration de chacun des éléments. Les résultats sont fournis avec une précision absolue de 0,4%. Chaque échantillon est pesé précisément dans un panier en étain. Le standard utilisé pour la gamme de calibration est le 2,5-Bis(5-tert-butyl-benzoxazol-2- yl)thiophène (BBOT) avec la composition suivante : %C : 72,53 ; %H : 6,09 ; %N : 6,51 ; %S : 7,44. Des spectres Infrarouge ont été réalisés avec un spectrophotomètre vendu sous la dénomination commerciale Perkin Elmer 100 FTIR (technique de réflectance totale atténuée ou ATR mettant en œuvre comme cristal un diamant). Les produits sont analysés directement sur le diamant. Les bandes d’absorption sont exprimées en cm−1. Exemple 1 : synthèse du composé Ia Préparation du précurseur de GPL (S)-2-[(S)-2,2-diméthyl-1,3- dioxolan-4-yl]-2-(4-méthoxybenzyloxy)éthan-1-ol Le (S)-2-[(S)-2,2-diméthyl-1,3-dioxolan-4-yl]-2-(4-méthoxybenzyloxy)éthan- 1-ol a été préparé selon les 5 étapes illustrées dans le schéma suivant : Première étape : La première étape est une réaction permettant de convertir l’aldéhyde en diacétal. 78,5 g de p-méthoxybenzaldéhyde (580 mmole, 70 ml) et 61,5 g de triméthylorthoformate (580 mmole, 68,1 ml, 1 équiv.) ont été agités vigoureusement pendant 5 min dans 25 ml de méthanol (MeOH). Ensuite, 4 gouttes d’HCl à 37% ont été ajoutées, le mélange translucide orange vire au rose translucide et la solution est agitée vigoureusement toute la nuit. Ensuite, 450 mg de K2CO3 sont ajoutés et le mélange résultant est agité vigoureusement pendant 1h. La couleur du mélange vire du rose translucide à du jaune translucide. 300 ml d’éther de pétrole sont alors ajoutés et on observe la formation d’une suspension trouble blanche brillante. Le mélange résultant est filtré et les solvants sont évaporés sous pression réduite. Le produit brut est distillé sous vide (5 mbar, TEbullition = 97 °C) afin d’obtenir du 1- (diméthoxyméthyl)-4-méthoxybenzène sous la forme d’un liquide incolore avec un rendement de 93% (97,7g, 536 mmole). Formule : C10H14O3, Masse molaire = 182,22 g mol−1. Deuxième étape : La deuxième étape est une étape de protection du diméthyl L-tartrate sous forme d’acétal. 40 g de diméthyl L-tartrate (225 mmole, composé (XIIIa)) et 46 g de 1- (diméthoxyméthyl)-4- méthoxybenzène tel que préparé à l’étape précédente (337,5 mmole, 64,5 ml 1,5 équiv.) ont été ajoutés dans 500 ml de toluène sec sous atmopshère inerte. La solution a été agitée vigoureusement et 400 mg d’acide paratoluène sulfonique (APTS) (2,3 mmole, 0,01 équiv.) sont ajoutés et le méthanol formé pendant la réaction est évaporé par distillation. La couleur de la solution vire du rose violet translucide à l’orange et le procédé de distillation est arrêté une fois que le distillat a atteint la température de 110°C. Le mélange brut est refroidi à température ambiante et 250 ml de dichlorométhane (CH2Cl2 ou DCM) sont ajoutés, puis la réaction est stoppée avec un excès de K2CO3. Le mélange brut est agité pendant une heure supplémentaire pour obtenir un mélange coloré jaune. Le mélange brut est filtré et les solvants sont évaporés sous pression réduite pour obtenir un solide jaune clair qui est purifié par chromatographie avec un gel de silice (éluant : éther de pétrole + 0,1% triéthylamine (Et3N)/acétate d’éthyle (AcOEt) ). Cette étape de purification peut être remplacée en lavant le solide jaune clair avec du cyclohexane. Dans les deux cas, un solide blanc est obtenu avec un rendement de 90% correspondant au (4R,5R)-diméthyl-2-(4-méthoxyphényl)-1,3- dioxolane-4,5-dicarboxylate (60 g, 202,5 mmole). Formule : C14H16O7, Masse molaire = 296,27 g mol−1. RMN 1H (300,13 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 3,81 , 3,84 and 3,87 (9H, OCH3) ; 4,84 (d, J=4,0 Hz, 1H, CH(OR)) ; 4,95 (d, J = 4,0 Hz, 1H, CH(OR)) ; 6,09 (s, 1H,CH(OR)2) ; 6,92 (d, J = 8,8 Hz, 2H, CH aromatique) ; 7,51 (d, J= 8,7 Hz, 2H, CH aromatique). RMN 13C (75,49 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 52,6 , 52,7 and 55,1 (3C, OCH3) ; 76,9 , 77,1 (CH(OR)) ; 106,5 (CH(OR)2) ; 113,6 , 127,2 , 128,5 et 160,8 (6C, C aromatique) ; 169,4 and 169,9 (2C, CO2R). Troisième étape : La troisième étape est une étape de réduction des fonctions ester en fonctions alcool. 46 g (160 mmole) du diester tel que préparé à l’étape précédente sont solubilisés dans 750 ml de méthanol sous atmosphère inerte. Le mélange résultant est agité à 0°C et 18,2 g (480 mmole, 3 équiv.) de NaBH4 sont ajoutés par portions. Le mélange résultant est agité pendant 3h à température ambiante. Le solvant est ensuite évaporé sous pression réduite. 500 ml d’acétate d’éthyle sont ajoutés et la solution organique résultante est lavée avec 200 ml de saumure. La phase aqueuse est extraite avec 500 ml d’acétate d’éthyle. Les phases organiques sont combinées et séchées sur MgSO4, filtrées et le solvant est évaporé sous pression réduite. Le produit correspondant au (4S,5S)-2-(4-méthoxyphényl)-1,3-dioxolane-4,5-diyl) diméthanol est obtenu sous la forme d’un solide blanc sans purification avec un rendement de 98% (23,1 g, 96 mmole). Formule : C12H16O5, Masse molaire = 240,25 g mol−1. RMN 1H (300,13 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 2,02 (bs, 2H, OH) ; 3,82 (s, 3H, OCH3) ; 3,90 (4H, CH2OH) ; 4,16 (m, 2H, CH(OR)) ; 5,95 (s, 1H, CH(OR)2) ; 6,92 (d, J = 8,8 Hz, 2H, CH aromatique) ; 7,51 (d, J= 8,7 Hz, 2H, CH aromatique). RMN 13C (75,49 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 55,4 (OCH3) ; 62,4 and 62,5 (CH2OH) ; 78,6 and 79,4 (CH(OR)) ; 103,8 (CH(OR)2) ; 113,9 , 128,1 , 129,4 et 160,7 (6C, C aromatique). Quatrième étape : La quatrième étape est une étape d’ouverture de l’acétal pour former un triol dont la position sn-1 est libérée tandis que la position sn-2 est toujours protégée. 30 g (125 mmole) du diol préparé à l’étape précédente sont solubilisés dans 750 ml de tétrahydrofurane sec (THF) sous atmosphère inerte. Le mélange résultant est refroidi à 0°C et 83,1 ml (291,2 mmole, 7 équiv.) de BH3·Me2S sont ajoutés goutte à goutte à 0°C. Le mélange résultant est agité pendant 30 min à température ambiante puis pendant 3h à 75°C. Le mélange résultant est refroidi à 0°C et l’excès de borane est hydrolysé doucement avec du méthanol. Le mélange obtenu est agité pendant 30 min à température ambiante et les solvants sont évaporés sous pression réduite. Le résidu est traité deux nouvelles fois avec 250 ml de méthanol et évaporé sous pression réduite. Le solide brut obtenu est extrait deux fois avec CH2Cl2 et le solide blanc insoluble contenant les sels de bore est filtré. Les phases organiques sont récupérées, évaporés et le produit résultant est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant : AcOEt/MeOH + 0,1% Et3N). Cette étape de purification peut être remplacée par une recristallisation dans du toluène. Dans les deux cas, le produit correspondant au (2S,3S)-3-(4-méthoxybenzyloxy)-butan-1,2,4-triol est obtenu sous la forme d’un solide blanc avec un rendement de 58% (17,5 g, 72,28 mmole). Formule : C12H18O5, Masse molaire = 242,27 g mol−1. RMN 1H (300,13 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 2,42-2,77 (3H, OH) ; 3,54-3,59 (m, 3H, CH(OR), CH2OH) ; 3,68-3,89 (m, 3H, CH2OH, CH(OH)) ; 3,76 (s, 3H, OCH3); 4,52-4,65 (2d, J=11,3 Hz, 2H, benzyl CH2) ; 6,90 (d, J = 8,7 Hz, 2H, CH aromatique) ; 7,27 (d, J= 8,7 Hz, 2H, CH aromatique). RMN 13C (75,49 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 55,4 (OCH3) ; 60,8 et 63,4 (2C, CH2OH) ; 72,1 (CH(OH)) ; 72,3 (benzyl CH2) ; 79,0 (CH(OR)) ; 114,1 , 129,6 , 129,8 et 159,6 (6C, C aromatique). Cinquième étape : La cinquième étape est une réaction de protection des deux fonctions alcool sous la forme d’un diméthylacétal. 14 g de triol tel que préparé à l’étape précédente (58,6 mmole) sont solubilisés dans de l’acétone sec (145 ml) sous atmosphère inerte. Puis, 21,6 ml (175,8 mmole, 3 équiv.) de diméthoxypropane et 500 mg (2,9 mmole, 5% mole.) d’acide paratoluène sulfonique (PTSA) sont ajoutés et le mélange résultant est agité pendant 1h. La couleur du mélange vire du translucide à du rouge-marron. 460 ml (3,3 mmole) de triéthylamine sont ajoutés et la couleur vire au jaune translucide. Les solvants sont évaporés sous pression réduite et le produit brut est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant : éther de pétrole + 0,1% triéthylamine/EtOAc). Le composé obtenu (IIIa) correspondant au (S)-2- [(S)-2,2-diméthyl-1,3-dioxolan-4-yl]-2-(4-méthoxybenzyloxy)éthan-1-ol est obtenu sous la forme d’une huile translucide jaune clair avec un rendement de 70% (11,53g, 40,9 mmole). Formule : C15H22O5, Masse molaire = 282,27 g mol−1. RMN 1H (300,13 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 1,36 et 1,42 (3H chacun, CH3) ; 2,19 (1H chacun, OH) ; 3,55 (m, 2H, CH2OH) ; 3,65 (m, 1H, CH(OPMB)) ; 3,70 (m, 1H, dioxolane CH2(OR)) ; 3,80 (s, 3H, OCH3) ; 4,00 (dd, J= 8,3 Hz ; 6,4 Hz, 1H, dioxolane CH2(OR)) ; 4,28 (dt, J= 8,3 Hz ; 6,4 Hz, 1H, dioxolane CH(OR)) ; 4,59- 4,72 (2d, J= 11,5 Hz, 2H, benzyl CH2) ; 6,89 (d, J = 8,6 Hz, 2H, CH aromatique) ; 7,27 (d, J= 8,6 Hz, 2H, CH aromatique). RMN 13C (75,49 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 25,4 et 26,5 (CH3) ; 55,4 (OCH3) ; 61,8 (CH2OH) ; 65,7 (dioxolane CH2) ; 72,6 (benzyl CH2) ; 76,8 (dioxolane CH) 78,9 (CH(OPMB)) ; 109,6 (dioxolane C(OR)2(Me)2) ; 114,1 , 129,6 , 129,8 et 159,6 (6C, C aromatique). HRMS (ESI+) m/z calcd. Pour [C15H22O5] [M+NH4]+ : 300,1805 ; trouvée : 300,1815. IR (ν cm−1) : 826 (ν p-disubst. benzene) ; 1032 (ν CH2OH) ; 1110 - 1140 (ν alkyls ethers) ; 1247 (ν C=C-O-C) ; 1370 (ν C-(CH3)2) ; 1375 - 1385 (ν C-CH3) ; 1590 - 1615 (ν aryl) ; 2815 - 2835 (ν O-CH3) Préparation du GPL (Ia) Première étape : La première étape est une fonctionnalisation de la fonction alcool en position sn-3 du diacétal (IIIa) pour former un phosphotriester (IVa). 6 g (21,24 mmole) du diacétal (IIIa) tel que préparé à l’étape précédente sont solubilisés dans 90 ml de DCM sec sous atmosphère inerte. Le mélange résultant est refroidi à 0°C. Puis, 2,98 g (26,58 mmole, 1,25 équiv.) de tert-butanolate de potassium fraichement sublimé sont ajoutés. Le mélange résultant est agité et la couleur du mélange vire au jaune. 2,86 ml (26,58 mmole, 1,2 équiv.) de diméthylchlorophosphate (IIa) fraichement distillé sont ajoutés goutte à goutte à 0°C, le mélange résultant est agité pendant 4h à 0°C. Puis, 72 ml d’une solution saturée de NaHCO3 sont ajoutés et le mélange résultant est agité pendant 1h. La phase organique est séparée et la phase aqueuse est extraite deux fois avec 180 ml de DCM. Les phases organiques sont combinées et lavées deux fois avec 60 mL d’une solution saturée de NaHCO3, séchées, et les solvants sont évaporés sous pression réduite. Le produit brut est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant : éther de pétrole + 0,1% triethylamine/EtOAc). Le composé (IVa) correspondant au [(S)-2-((S)-2,2- diméthyl-1,3-dioxolan-4-yl)-2-((4-méthoxybenzyl)oxy]éthyl diméthyl phosphate est obtenu sous la forme d’une huile jaune clair translucide avec un rendement de 60% (4,93g, 12,6 mmole). Formule : C17H27O8P, Masse molaire = 390,37 g mol−1. RMN 1H (300,13 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 1,34 et 1,41 (3H chacun, CH3); 3,65 (m, 1H, dioxolane CH(OR)) ; 3,67 (m, 1H, dioxolane CH2(OR)); 3,74 et 3,78 (s, 3H chacun, P-OCH3) ; 3,80 (s, 3H, benzyl-OCH3) ; 3,95-4,05 (dd, J= 8,4Hz ; 6,6 Hz, 1H, dioxolane CH2(OR)) ; 4,14-4,27 (m, 3H, CH2 OP(O)(OCH3)2, CH(OPMB)) ; 4,59-4,72 (2d, J= 11,3 Hz, 2H, benzyl CH2) ; 6,87 (d, J = 8,7 Hz, 2H, CH aromatique); 7,28 (d, J= 8,6 Hz, 2H, CH aromatique). RMN 31P (121,442 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 1,27 (P(O)(OMe)2) RMN 13C (75,49 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 25,4 et 26,5 (CH3) ; 54,5 et 54,6 (2d, J= 6,0 Hz, -P(O)(OCH3)2) ; 55,4 (benzyl-OCH3) ; 65,5 (dioxolane CH2); 67,0 (d, J= 6,0 Hz, CH2-OP(O)(OCH3)2) ; 72,8 (benzyl CH2) ; 75,7 (CH(OPMB)); 77,1 (dioxolane CH); 109,6 (dioxolane C(OR)2(Me)2) ; 113,9 , 129,7 , 130,1 et 159,5 (6C, C aromatique). HRMS (ESI+) m/z calcd. Pour [C17H27O8P] [M+H]+ : 391,1522 ; trouvée : 391,1534. IR (ν cm−1) : 820 (ν p-disubst. benzene) ; 1025 (ν P-O-(C)) ; 1110 - 1140 (ν alkyls ethers) ; 1214 (ν C=C-O-C) ; 1247,13 (ν P=O); 1360 - 1370 (ν C-CH3)2)); 1375 - 1385 (ν C-CH3) ; 1590 - 1615 (ν aryl) ; 2815 - 2835 (ν O-CH3) ; 3015 (ν=C-H aryl) Deuxième étape : La deuxième étape est une étape de déprotection des fonctions alcool en positions sn-1 et sn-0. 3,7 g (9,5 mmole) de diacétal (IVa) tel que préparé à l’étape précédente sont solubilisés dans 100 ml de méthanol sec. 1,85 ml d’HCl 1M sont ajoutés goutte à goutte et le mélange résultant est agité pendant 8h à température ambiante. 350 mg de NaHCO3 solide sont ajoutés et le mélange résultant est agité pendant 15 min. Le solvant est évaporé sous pression réduite. 150 ml de DCM sont ajoutés et le mélange est filtré. Le solvant est évaporé sous pression réduite et une huile translucide est obtenue. Le produit brut est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant : EtOAc/MeOH). Le produit (Va) correspondant au (2S,3S)-3,4-dihydroxy-2-((4-méthoxybenzyl)oxy)butyl diméthyl phosphate est obtenu sous la forme d’une huile jaune clair translucide avec un rendement de 82% (2,8g, 8,0 mmole). Formule : C14H23O8P, Masse molaire = 350,30 g mol−1. RMN 1H (300,13 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 2,37 (2H, OH) ; 3,65 (2H, CH2OH); 3,70 (1H, CH(OPMB)) ; 3,73 (1H, CH(OH)) ; 3,75 et 3,79 (s, 3H chacun, P- OCH3) ; 3,81 (s, 3H, benzyl OCH3) ; 4,13-4,30 (2m, 2H, CH2 OP(O)(OCH3)2) ; 4,48-4,72 (2d, J= 11,3 Hz, 2H, benzyl CH2) ; 6,88 (d, J = 8,7 Hz, 2H, CH aromatique) ; 7,27 (d, J= 8,6 Hz, 2H, CH aromatique). RMN 31P (121,442 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 1,51 (P(O)(OMe)2). RMN 13C (75,49 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 54,5 et 54,6 (2d, J= 6,0 Hz,- P(O)(OCH3)2) ; 55,4 (benzyl OCH3) ; 63,4 (CH2OH) ; 66,2 (d, J= 6,0 Hz, CH2- OP(O)(OCH3)2) ; 70,9 (CH(OH)) ; 72,9 (benzyl CH2) ; 77,4 (CH(OPMB)) ; 114,0 ,129,6 , 129,9 et 159,5 (6C, C aromatique). HRMS (ESI+) m/z calcd. Pour [C14H23O8P] [M+H]+ : 351,1209 ; trouvée : 351,1223. IR (ν cm−1) : 820 (ν p-disubst. benzene) ; 1031,76 (ν P-O-(C)) ; 1110 - 1140 (ν alkyls ethers) ; 1180,02 (ν C=C-O-C) ; 1248,02 (ν P=O); 1375 - 1385 (ν C- CH3) ; 1462,86 (ν alkyls CH2); 1590 - 1615 (ν aryl) ; 2815 - 2835 (ν O-CH3) ; 2957,67 (ν alkyls, CH3); 3010 (ν =C-H aryl) ; 3403,97 (ν O-H) Troisième étape : La troisième étape est une étape de fonctionnalisation sélective de la fonction alcool primaire. 3,6 g (10,27 mmole) de diol (Va) tel que préparé à l’étape précédente sont solubilisé dans 15 ml de toluène sec sous atmosphère inerte. 12,8 mg (51,37 µmole, 0,5 mole%) de Bu2SnO sont ajoutés et le mélange résultant est agité pendant 1h. Puis, 1,9 ml (12,33 mmole, 1,2 équiv.) de diisopropyléthylamine (DIPEA) sont ajoutés et le mélange résultant est agité pendant 5 min. Ensuite, 2,06 g (10,79 mmole, 1,1 équiv.) de chlorure de tosyle (TsCl) sont ajoutés et le mélange résultant est agité pendant 4h à température ambiante. Une phase aqueuse jaune apparait. Une solution d’HCl 1M est ajoutée sous agitation vigoureuse jusqu’à ce que le pH de la phase aqueuse soit d’environ 1-2. La phase organique est séparée et la phase aqueuse est extraite deux fois avec 40 ml de DCM. Les phases organiques sont combinées, séchées sur sulfate de magnésium et le solvant est évaporé. Une huile brute est obtenue et purifiée par chromatographie sur gel de silice (éluant : EtOAc/MeOH). Le produit (VIa) correspondant au (2S,3S)-4-((diméthoxyphosphoryl)oxy)-2-hydroxy-3-((4- méthoxybenzyl)oxy)butyl-4-éthylbenzène sulfonate est obtenu sous la forme d’une huile jaune clair translucide avec un rendement de 76% (3,95g, 7,8 mmole). Formule : C21H29O10PS, Masse molaire = 504,49 g mol−1. RMN 1H (300,13 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 2,43 (3H, phényl-CH3) ; 2,92 (1H, OH); 3,70 (m, 1H, CH(OPMB)) ; 3,72 et 3,76 (s, 3H chacun, P-OCH3) ; 3,79 (s, 3H, benzyl OCH3) ; 3,94 (m, 1H, CH(OH)) ; 3,99 (2H, CH2(OR)) ; 4,01-4,15 et 4,17-4,30 (2m, 2*1H, CH2 OP(O)(OCH3)2) ; 4,40-4,62 (2d, J= 11,1 Hz, 2H, benzyl CH2) ; 6,85 (d, J = 8,5 Hz, 2H, CH aromatique) ; 7,20 (d, J= 8,6 Hz, 2H, CH aromatique) ; 7,32 (d, J= 8,1 Hz, 2H, CH aromatique groupe tosyle) ; 7,75 (d, J= 8,2 Hz, 2H, CH aromatique groupe tosyle). RMN 31P (121,442 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 1,48 (P(O)(OMe)2). RMN 13C (75,49 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 21,7 (CH3) ; 54,5 et 54,6 (2d, J= 6,0 Hz, -P(O)(OCH3)2) ; 55,3 (benzyl OCH3) ; 65,3 (d, J= 6,0 Hz, CH2- OP(O)(OCH3)2) ; 68,2 (CH(OH)) ; 69,9 (CH2(OR)) ; 72,9 (benzyl CH2) ; 75,7 (CH(OPMB)) ; 113,9 , 129,7 , 130,1 et 159,5 (6C, C aromatique groupe benzyle) ; 128,3 , 129,8 , 132,6 et 146,1 (6C, C aromatique groupe tosyle). HRMS (ESI+) m/z calcd. Pour [C21H29O10PS] [M+NH4]+ : 522,1563 ; trouvée : 522.1559. IR (ν cm−1) : 814,36 (ν p-disubst. benzene) ; 843,36 (ν S-O) ; 1026,76 (ν P- O-(C)) ; 1095,72 (ν disubst. alcool) ; 1110 - 1140 (ν alkyls ethers) ; 1174 (ν C=C-O-C) ; 1244,85 (ν P=O) ; 1358,05 (ν S=O) ; 1458,70 (ν alkyls CH2) ; 1514,14 - 1612,73 (ν aryl) ; 2815 - 2835 (ν O-CH3) ; 2957,98 (ν alkyls, CH3) ; 3010 (ν =C-H aryl) ; 3368,99 (ν O-H). Quatrième étape : La quatrième étape est une étape de substitution nucléophile pour remplacer le tosylate par l’azoture. 5,7 g (11,3 mmole) de tosylphosphate (VIa) tel que préparé à l’étape précédente sont solubilisés dans 28 ml de diméthylformamide (DMF) sec sous atmosphère inerte. Le mélange résultant est agité et 2,94 g (45,2 mmole, 4 équiv.) d’azoture de sodium sont ajoutés et le mélange résultant est agité pendant 24h à 50°C sous atmosphère inerte. Le produit obtenu est dilué dans du chloroforme (100 ml), puis de l’eau distillée est ajoutée (60 ml). Le phosphate diméthylé (VIIa) est ensuite extrait 3 fois avec du chloroforme (150 ml). Le phosphate diméthylé est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant : EtOAc/MeOH). On obtient une première quantité de phosphate diméthylé (VIIa). La phase aqueuse obtenue lors de l’extraction du phosphate diméthylé avec du chloroforme comprend le phosphate monométhylé (VII’a). 100 ml de chloroforme sont ajoutés à la phase aqueuse qui est ensuite acidifié à froid avec du HCl (1M) jusqu’à atteindre un pH égal à 1. Le phosphate monométhylé est alors extrait de la phase aqueuse avec du chloroforme (5*100 ml. Les phases organiques sont combinées et séchées sur MgSO4 puis les solvants sont évaporés. Le phosphate monométhylé est ensuite reméthylé en le diluant dans du méthanol et en utilisant du TMSCHN2 (0,6 M ou 2 M dans l’hexane) qui est ajouté jusqu’à ce que le mélange reste jaune et agité 30 min. Le produit obtenu (VIIa) ne nécessite pas de purification et représente une deuxième quantité de phosphate diméthylé (VIIa). Les première et deuxième quantités de produit (VIIa) sont combinées et correspondent au (2S,3S)-4-azido-3-hydroxy-2-((4-méthoxybenzyl)oxy)butyl diméthyl phosphate sous la forme d’une huile jaune clair translucide avec un rendement total de 53%. Formule : C14H22N3O7P, Masse molaire = 375,31 g. mol−1. RMN 1H (300,13 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 2,67 (1H, OH) ; 3,25 - 3,43 (2dd, J=12,6 Hz, 6,5 Hz, 2*1H, CH2N3) ; 3,64 (m, 1H, CH(OPMB)) ; 3,76 et 3,80 (s, 3H chacun, POCH3) ; 3,81 (s, 3H, benzyl OCH3) ; 3,83 (m, 1H, CH(OH)) ; 4,05 - 4,19 et 4,20 - 4,31 (2m, 2*1H, CH2OP(O)(OCH3)2) ; 4,47-4,72 (2d, J= 11,2 Hz, 2H, benzyl CH2) ; 6,88 (d, J = 8,5 Hz, 2H, CH aromatique) ; 7,28 (d, J= 8,4 Hz, 2H, CH aromatique). RMN 31P (121,442 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 1,60 (P(O)(OMe)2). RMN 13C (75,49 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 53,1 (CH2N3) ; 54,6 et 54,7 (2d, J= 6,0 Hz, -P(O)(OCH3)2) ; 55,3 (benzyl OCH3) ; 65,3 (d, J= 6,0 Hz, (CH2- OP(O)(OCH3)2); 69,9 (CH(OH)) ; 73,0 (benzyl CH2) ; 76,6 (CH(OPMB)) ; 114,1 , 129,5 , 130,1 et 159,8 (6C, C aromatique). HRMS (ESI+) m/z calcd. Pour [C14H22N3O7P] [M+NH4]+ : 393,1539 ; trouvée : 393.1529. IR (ν cm−1) : 814,36 (ν p-disubst. benzene) ; 1029,53 (ν P-O-(C)) ; 1177,17 (ν alkyls ethers) ; 1248,07 (ν P=O) ; 1459,48 (ν alkyls, CH2) ; 1514,14 - 1612,84 (ν aryl) ; 2100,77 (ν azide) ; 2815-2853 (ν O-CH3) ; 2957,98 (ν alkyls, CH3) ; 3010 (ν =C-H aryl) ; 3375,45 (ν O-H). Cinquième étape : La cinquième étape est une étape d’estérification de la fonction alcool libre en position sn-1 avec un acide gras saturé. 324 mg (1,14 mmole, 1,5 équiv.) d’acide stéarique (VIIIa) sont solubilisés dans 20 ml de DCM sec sous atmosphère inerte. Puis, 236 mg (1,14 mmole, 1,5 équiv.) de N,N’-dicyclohexylcarbodiimide (DCC) et 93 mg (0,78 mmole, 1 équiv.) de 4-Diméthylaminopyridine (DMAP) sont ajoutés et le mélange est agité pendant 5 min à température ambiante sous atmosphère inerte. Ensuite, une solution comprenant 285 mg (0,76 mmole, 1 équiv.) d’azoture (VIIa) tel que préparé à l’étape précédente et 20 ml de DCM sec sont ajoutés au mélange. Le mélange résultant est agité pendant 4h à température ambiante sous atmosphère inerte. Puis, la température est diminuée à 0°C et 15 ml d’acétate d’éthyle sont ajoutés. La phase organique est lavée trois fois avec une solution saturée de NaHCO3, séchée sur MgSO4 et le solvant est évaporé sous pression réduite. Le produit brut est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant : cyclohexane/acétate d’éthyle). Le produit (IXa) correspondant au (2S,3S)-1- azido-4-((diméthoxyphosphoryl)oxy)-3-((4-méthoxybenzyl)oxy)butan-2-yl stéarate est obtenu sous la forme d’un solide blanc avec un rendement de 50% (230mg, 0,36 mmole). Formule : C32H56N3O8P, Masse molaire = 641,75 g mol−1. RMN 1H (300,13 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 0,85 (t, J= 6,6 Hz, 3H, CH3 ; 1,15 - 1,65 (m, 28H, CH2) ; 1,89 (m, 2H, CH2(CH2)C(O)) ; 2,30 (m, 2H, CH2C(O)); 3,40 (2dd, J= 12,8 Hz; 6,8 Hz, 2*1H, CH2N3) ; 3,71 et 3,75 (d, 3H chacun, P OCH3) ; 3,75 (s, 3H, benzyl OCH3) ; 3,77 (m, 1H, CH(OPMB)) ; 4,08 - 4,11 (m, 2H, CH2OP(O)(OCH3)2) ; 4,49-4,67 (2d, J= 11,2 Hz, 2H, benzyl CH2) ; 5,14 (m, 1H, CH(OC(O)CH2) ; 6,86 (d, J = 8,8 Hz, 2H, CH aromatique) ; 7,24 (d, J= 8,6 Hz, 2H, CH aromatique). RMN 31P (121,442 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 1,22 (P(O)(OMe)2). RMN 13C (75,49 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 14,17 (CH3) ; 22,76 - 34,02 (15C, CH2) ; 34,2 (CH2C(O)) ; 50,26 (CH2N3) ; 54,5 and 54,6 (2d, J= 6,0 Hz, -P(O)-(OCH3)2) ; 55,3 (benzyl OCH3) ; 66,7 (d, J= 6,0 Hz, (CH2OP(O)(OCH3)2) ; 70,9 (CH(OC(O)CH2) ; 72,9 (benzyl CH2) ; 75,4 (CH(OPMB)) ; 114,0 , 129,4 , 129,8 et 159,6 (6C, C aromatique) ; 173,0 (OC(O)CH2). HRMS (ESI+) m/z calcd. Pour [C32H56N3O8P] [M+ Na]+ : 664,3703 ; trouvée : 664.3702. IR (ν cm−1) : 850,03 (ν p-disubst. benzène) ; 1039,63 (ν P-O-(C)) ; 1157,17 (ν C-O) ; 1276,71 (ν P=O) ; 1459,48 (ν alkyls, CH2) ; 1514,14 - 1612,84 (ν C=C aryl); 1745,17 (ν C=O) ; 2101,25 (ν azide) ; 2853,16 (ν O-CH3) ; 2923,78 (ν alkyls, CH3). Sixième étape : La sixième étape est une étape de déprotection du groupe paraméthoxybenzyle (PMB) suivie d’une étape d’estérification de la fonction alcool libre en position sn-2 avec un acide gras insaturé. 185 mg (0,290 mmole) d’azoture stéarique (IXa) tel que préparé à l’étape précédente sont solubilisés dans 6 ml de DCM sec sous atmosphère inerte. Ensuite, 338 µL de tampon phosphate salin aqueux (PBS) (pH 7,2) contenant 0,15 M NaCl sont ajoutés. 325,95 mg (1,45 mmole, 5 équiv.) de 2,3-Dichloro- 5,6-dicyano-1,4-benzoquinone (DDQ) sont ajoutés à 0°C sous atmosphère inerte pendant 5h. Ensuite, le milieu réactionnel est dilué avec 6 ml de DCM froid et 5 ml d’une solution saturée froide de NaHCO3. Le mélange résultant devient vert foncé. La phase aqueuse est extraite deux fois avec 20 ml de DCM froid, et les phases organiques sont combinées et lavées avec 20 ml d’une solution saturée de NaHCO3, séchées sur MgSO4 et les solvants sont évaporés sous pression réduite. L’alcool obtenu (Xa) est sous la forme d’une huile jaune orangée. 162 mg (0,65 mmole, 1,5 équiv.) d’acide oléique (XIa) sont solubilisés dans 7 ml de DCM sec sous atmosphère inerte à 0°C. Ensuite, 89 mg (0,44 mmole, 1,5 équiv.) de DCC et 36 mg (0,29 mmole, 1 équiv.) de DMAP sont ajoutés et le mélange résultant est agité pendant 5 min à température ambiante sous atmosphère inerte. Puis, une solution comprenant 152 mg (0,290 mmole, 1 équiv.) de l’alcool (Xa) obtenu à l’étape précédente et 7 ml de DCM sec sous atmosphère inerte est ajoutée à 0°C audit mélange. Le mélange résultant est agité pendant 5h à 0°C sous atmosphère inerte. Ensuite, 10 ml d’acétate d’éthyle sont ajoutés. La phase organique est lavée trois fois avec une solution saturée de NaHCO3, séchées sur MgSO4 et le solvant est évaporé sous pression réduite. Le produit brut est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant : cyclohexane/acétate d’éthyle). Le produit (XIIa) correspondant au (2S,3S)-4- azido-1-((diméthoxyphosphoryl)oxy)-3-(stéaroyloxy)butan-2-yl oléate est obtenu sous la forme d’une huile blanche-claire translucide avec un rendement de 50% (111 mg, 0,15 mmole). Formule : C42H80N3O8P, Masse molaire = 786,07 g mol−1. RMN 1H (300,13 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 0,86 (t, J= 6,6 Hz, 6H, 2*CH3) ; 1,25 (m, 48H, CH2) ; 1,61 (m, 2*2H, CH2CH2C(O)O) ; 2,00 (m, 4H, CH2CH=CHCH2) ; 2,32 - 2,38 (m, 2*2H, CH2C(O)O) ; 3,39 - 3,45 (dd, J=13,2 Hz; 5,4 Hz, 1H, CH2N3) ; 3,47 - 3,53 (dd, J= 13,2 Hz; 3,6 Hz, 1H, CH2N3) ; 3,73 et 3,78 (d, 3H chacun, P-OCH3) ; 4,15 - 4,18 (m, 2H, CH2OP(O)(CH3)2) ; 5,27 (m, 2*1H, 2*CH(OC(O)CH2); 5,32 (m, 2H, CH=CH). RMN 31P (121,442 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 1,10 (P(O)(OMe)2). RMN 13C (75,49 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 14,17 (2*CH3) ; 22,70 (2*CH2CH3) ; 24,82 (2*CH2CH2C(O)O) ; 27,34 (CH2CH=CHCH2) ; 29,12 - 31,94 (22C, CH2) ; 34,08 (2*CH2C(O)) ; 50,64 (CH2N3) ; 54,54 et 54,62 (2d, J= 6,0 Hz, -P(O)- (OCH3)2) ; 65,10 (d, J= 6,0 Hz, CH2 OP(O)(OCH3)2) ; 69,69 (CH(OC(O)CH2 stéarique) ; 70,10 (CH(OC(O)CH2 oléique) ; 130,06, 129,67 (CH2CH CHCH2) ; 172,7 (2*OC(O)CH2). HRMS (ESI+) m/z calcd. Pour [C42H80N3O8P] [M+ H]+ : 786,5761 ; trouvée : 786.5759. IR (ν cm−1) : 722,15 (ν Z CH=CH) ; 1039,63 (ν P-O-(C)) ; 1157,46 (ν C-O) ; 1276,71 (ν P=O) ; 1464,53 (ν alkyls, C) ; 1745,17 (ν C=O) ; 2101,75 (ν azide) ; 2853,31 (ν O-CH3) ; 2922,63 (ν alkyls, CH3) Septième étape : La septième étape est une étape de déprotection de la tête phosphate. 50 mg (0,64 µmole) de diester phosphate (XIIa) tel que préparé à l’étape précédente sont solubilisés dans 3 ml de CDCl3 préalablement neutralisé avec K2CO3 et la solution résultante est conservée sur tamis moléculaire sous atmosphère inerte. Ensuite, 21 µL (160 µmole, 2,5 équiv.) de bromotriméthylsilane (TMSBr) sont ajoutés et le mélange résultant est agité pendant 5h à température ambiante sous atmosphère neutre. 1 ml d’eau (H2O) est ajouté et les solvants sont évaporés. Le produit brut est purifié par chromatographie sur gel de silice (eau/méthanol, colonne C18AQ commercialisée par Interchim). Le produit (Ia) correspondant au (2S,3S)-4- azido-2-(oléoyloxy)-3-(stéaroyloxy)butyl hydrogen phosphate (PA 18:1-18:0 modifié) est obtenu sous la forme d’une huile blanche-claire avec un rendement de 31% (15 mg, 0,198 µmole). Formule : C40H75N3O8P–, Masse molaire = 757,07 g mol−1. Exemple 2 : synthèse du GPL (Ib) 330 mg (0,51 mmole) d’azoture stéarique tel que préparé dans l’exemple 1 sont solubilisés dans 10 ml de DCM sec sous atmosphère inerte. Ensuite, 550 µL de tampon phosphate salin aqueux (PBS) (pH 7,2) comprenant 0,15 M NaCl sont ajoutés. 530 mg (2,55 mmole, 5 équiv.) de DDQ sont ajoutés à 0°C sous atmosphère inerte pendant 6h. Ensuite, le milieu réactionnel est dilué avec 10 ml de DCM froid et 10 ml d’une solution saturée froide de NaHCO3. Le mélange résultant devient vert foncé. La phase aqueuse est extraite deux fois avec 40 ml de DCM froid, et les phases organiques sont combinées et lavées avec 40 ml d’une solution saturée froide de NaHCO3, séchées sur MgSO4, et les solvants sont évaporés sous pression réduite. L’alcool obtenu est sous la forme d’une huile jaune-orangée. 283 mg (1,02 mmole, 2 équiv.) d’acide linoléique sont solubilisés dans 5 ml de DCM sec sous atmosphère inerte à 0°C. Ensuite, 159 mg (0,78 mmole, 1,5 équiv.) de DCC et 63 mg (0,52 mmole, 1 équiv.) de DMAP sont ajoutés et le mélange résultant est agité pendant 5 min à température ambiante sous atmosphère inerte. Puis, une solution comprenant 266 mg (0,52 mmole, 1 équiv.) de l’alcool obtenu à l’étape précédente et 5 ml de DCM sec sous atmosphère inerte est ajoutée à 0°C audit mélange. Le mélange résultant est agité pendant 5h à 0°C sous atmosphère inerte. Ensuite, 15 ml d’acétate d’éthyle sont ajoutés. La phase organique est lavée trois fois aves une solution saturée de NaHCO3, séchées sur MgSO4 et le solvant est évaporé sous pression réduite. Le produit brut est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant : cyclohexane/acétate d’éthyle). Le produit correspondant au (2S,3S)-4-azido-1- ((diméthoxyphosphoryl)oxy)-3-(stéaroyloxy)butan-2-yl oléate est obtenu sous la forme d’une huile jaune clair translucide avec un rendement de 50% (200 mg, 0,26 mmole). Formule : C42H78N3O8P, Masse molaire = 784,07 g mol−1. RMN 1H (300,13 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 0,92 (t, J= 6,6 Hz, 6H, 2*CH3) ; 1,30 (m, 44H, CH2) ; 1,67 (m, 2*2H, CH2CH2C(O)O) ; 2,08 (m, 4H, CH2CH=CHCH2) ; 2,35 - 2,40 (m, 2*2H, CH2C(O)O) ; 3,43 - 3,48 (dd, J= 13,2 Hz ; 5,4 Hz, 1H, CH2N3) ; 3,53 - 3,57 (dd, J= 13,2 Hz ; 3,6 Hz, 1H, CH2N3) ; 3,72 et 3,78 (d, 3H chacun, POCH3) ; 4,12 - 4,23 (m, 2H, CH2OP(O)(CH3)2) ; 5,31 (m, 2*1H, 2*CH(OC(O)CH2) ; 5,37 - 5,40 (m, 4H, CH=CH). RMN 31P (121,442 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 1,08 (P(O)(OMe)2). RMN 13C (75,49 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 14,07 et 14,12 (2*CH3) ; 22,58 et 22,70 (2*CH2CH3) ; 24,82 et 24,84 (2*CH2CH2C(O)O) ; 27,21 (CH2CH=CHCH2); 29,12 - 31,94 (22C, CH2) ; 34,07 (2*CH2C(O)) ; 50,64 (CH2N3) ; 54,55 et 54,63 (2d, J= 6,0 Hz, -P(O)-(OCH3)2) ; 65,16 (d, J= 6,0 Hz, CH2OP(O)(OCH3)2) ; 69,69 (CH(OC(O)CH2 stéarique) ; 70,01 (CH(OC(O)CH2 linoléique) ; 127,89 , 128,12 , 129,96 et 130,23 (CH2CH=CHCH2) ; 172,68 et 172,70 (2*OC(O)CH2). HRMS (ESI+) m/z calcd. Pour [C42H78N3O8P] [M+ Na]+: 806,5424 ; trouvée : 806.5426. 50 mg (0,64 µmole) de diester phosphate (XIIb) tel que préparé à l’étape précédente sont solubilisés dans 3 ml de CDCl3 préalablement neutralisé avec K2CO3 et la solution résultante est conservée sur tamis moléculaire sous atmosphère inerte. Ensuite, 21 µL (160 µmole, 2,5 équiv.) de bromotriméthylsilane (TMSBr) sont ajoutés et le mélange résultant est agité pendant 5h à température ambiante sous atmosphère neutre. 1 ml d’eau (H2O) est ajouté et les solvants sont évaporés. Le produit brut est purifié par chromatographie sur gel de silice (eau/méthanol, colonne C18AQ commercialisée par Interchim). Le produit (Ib) correspondant au (2S,3S)-4- azido-2-(linoléoyloxy)-3-(stéaroyloxy)butyl hydrogen phosphate (PA 18:2-18:0 modifié) est obtenu sous la forme d’une huile blanche-claire avec un rendement de 31% (15 mg, 0,198 µmole). Formule : C40H73N3O8P–, Masse molaire = 755,07 g mol−1 Exemple 3 : synthèse d’une sonde fluorescente GPL (XIVa) à partir du GPL (Ia) . 33,09 mg (0,1663 mmole) de 4-chloro-7-nitrobenzo[c][1,2,5]oxadiazole (NBDCl) sont ajoutés à une solution de 132 mg (0,415 mmole, 2,5 équiv.) de cyclooctyne (ADIBO C6 amine) dans 5 ml de MeOH. 140 µL (0,832 mmolz, 5 équiv.) de DIPEA sont ajoutés et le mélange résultant est agité pendant 2h à température ambiante. Ensuite, le solvant est évaporé sous pression réduite. Le produit brut est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant : CH2Cl2/MeOH). Le produit (XVa) correspondant au 1-(11,12- didéhydrodibenzo[b,f]azocin-5(6H)-yl)-6-((7-nitrobenzo[c][1,2,5]oxadiazol-4- yl)amino)hexan-1-one (ADIBO-NBD) est obtenu sous la forme d’une huile jaune verte fluorescente avec un rendement de 57% (45 mg, 94 µmole). Formule : C27H23N5O4, Masse molaire = 481,18 g mol−1. RMN 1H (300,13 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 1,21 – 1,23 (m, 2H) ; 1,25 – 1,42 (m, 4H) ; 1,94 – 2,01 (m, 2H) ; 2,21 – 2,30 (m, 2H) ; 3,65 – 3,70 (d, J= 13,8 Hz, 1H) ; 5,17 – 5,22 (d, J= 13,8 Hz, 1H) ; 6,04 – 6,07 (d, J= 8,7 Hz, 1H) ; 7,26 – 7,42 (m, 4H) ; 7,70 – 7,72 (dd, J= 7,2 Hz ; 1,3 Hz, 1H) ; 8,40 – 8,50 (dd, J= 8,7 Hz ; 3,5 Hz, 1H). 10 mg (0,0132 mmole) du ADIBO-NBD (XVa) tel que préparé à l’étape précédente dans 1 ml de CDCl3 sont ajoutés à une solution comprenant 25,4 mg (0,0527 mmole, 4 équiv.) de GPL Ia tel que préparé dans l’exemple 1 et 3 ml de CDCl3. Le mélange résultant est agité pendant 1h à 40°C. Le solvant est évaporé sous pression réduite. Le produit brut est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant : H2O/MeCN). Le produit (XIVa) correspondant au (2S,3S)-4-(8-(6-((7-nitrobenzo[c][1,2,5]oxadiazol-4-yl) amino)hexanoyl)-8,9- dihydro-1H-dibenzo[b,f][1,2,3]- triazolo[4,5-d]azocin-1-yl)-1- (phosphonooxy)-3-(stéaroyloxy)butan-2-yl oléate est obtenu sous la forme d’une huile jaune verte fluorescente avec un rendement de 90% (14,7 mg, 12 µmole). Formule : C67H99N8O12P, Masse molaire = 1238,71 g mol−1. HRMS (ESI-) m/z calcd. Pour [C67H98N8O12P] [M-H]- : 1237,7047 ; trouvée : 1237,7104. Exemple 4 : utilisation des GLP (Ia) et (Ib) comme outils moléculaires Dans cet exemple il est mis en évidence l’interaction entre le GPL (Ia) ou (Ib) et une protéine mobilisatrice des acides phosphatidiques (PA), la protéine Spo20p-GFP exprimée dans les cellules cibles et qui est fluorescente dans le vert. Pour ce faire, le GPL (Ia), et, à titre comparatif, un GPL naturel PA 18 :1-18 :0 (dénommé ci-après GPL C1) commercialisé sous la référence 840861C par Avanti Polar Lipids, sont incubés pendant 5 min à une concentration de 100 µM, avec des cellules PC12 exprimant Spo20p-GFP. Le milieu cellulaire sans GPL est utilisé comme contrôle (dénommé ci-après C1). Dans ces conditions contrôles, Spo20p-GFP est essentiellement retrouvé dans le noyau et le cytoplasme des cellules. De la même manière, le GPL (Ib), et, à titre comparatif, un GPL naturel PA 18 :2-18 :0 (dénommé ci-après GPL C2) commercialisé sous la référence 840862C par Avanti Polar Lipids sont incubés pendant 5 min à une concentration de 100 µM, avec des cellules PC12 exprimant Spo20p-GFP. Le milieu cellulaire sans GPL est utilisé comme contrôle (dénommé ci-après C2). La figure 1 montre des images de microscopie confocale obtenues à l’aide d’un appareil vendu sous la dénomination commercialeSP5II par la société Leica, des deux milieux de contrôles C1 et C2 (figures 1 a et 1 d respectivement), du milieu après incubation avec le GPL C1 comparatif (figure 1 b), du milieu après incubation avec le GPL (Ia) de l’invention (figure 1 c), du milieu après incubation avec le GPL C2 comparatif (figure 1 e), et du milieu après incubation avec le GPL (Ib) de l’invention (figure 1 f). Comme on peut le voir sur la figure 1, les GPL (Ia) et (Ib) de l’invention entrainent un recrutement de la protéine Spo20p-GFP à la membrane plasmique des cellules PC12 de la même manière que le font les GPL naturels correspondants GPL C1 et GPL C2. Ceci indique que les GPL de l’invention reproduisent deux caractéristiques importantes des PA naturels, à savoir s’insérer dans la membrane plasmique en accédant au feuillet interne et y recruter la protéine Spo20p-GFP. Un marqueur dénommé ci-après Membright (obtenu de Mayeul Collot UMR- 7021, Strasbourg) est incubé 5 minutes sur les cellules des milieux tels que préparés ci-dessus pour marquer spécifiquement la membrane plasmique des cellules. La figure 2 montre le pourcentage de colocalisation de la protéine Spo20p-GFP et de différents GPL dans la membrane plasmique, ledit pourcentage étant déterminé à l’aide du logiciel Image J. Par conséquent, grâce aux GPL (I) synthétiques de l’invention, il est possible de localiser et d’identifier les différentes protéines qui interagissent avec eux. Exemple 5 : utilisation du GPL (XIVa) comme outil moléculaire Dans cet exemple il est mis en évidence l’interaction entre le GPL (XIVa) qui fluoresce dans le vert (grâce au fluorophore à base de nitrobenzoadiazole) et une protéine mobilisatrice des acides phosphatidiques (PA), la protéine CgA- AF633 qui est fluorescente dans le rouge. Pour ce faire, des liposomes géants composés de 96% en masse de dioléoylphosphatidylcholine (DOPC) et de 4% en masse de GPL (XIVa), et à titre comparatif des liposomes géants composés de 96% en masse de dioléoylphosphatidylcholine (DOPC) et de 4% en masse d’un GPL naturel modifié avec un fluorophore à base de nitrobenzoadiazole : PA 18 :1–6 :0 NBD commercialisé sous la référence 810175C par Avanti Polar Lipids, à une concentration de 1mM, sont préparés en utilisant la méthode de gonflement assisté avec de l’alcool polyvinylique (bien connu sous l’anglicisme « PVA assisted swelling method » telle que décrite dans Carmon et al., FASEB J., 2020, 34:6769–6790). La figure 3 montre des images de microscopie photonique des liposomes contenant le GPL commercial PA 18:1–6:0 NBD (figure 3 a) et des liposomes contenant le GPL (XIVa) de l’invention (figure 3 b). La figure 4 montre des images obtenues à l’aide d’un microscope confocal vendu sous la dénomination commerciale SP5 par la société Leica, d’un liposome contenant le GPL commercial PA 18:1–6:0 NBD (figure 4 a) et de liposomes contenant le GPL (XIVa) de l’invention (figure 4 b), indiquant ainsi que le GPL (XIVa) de l’invention participe à la formation de liposomes géants. La CgA, rendue fluorescente dans le rouge du fait de son couplage avec le fluorophore Alexa 633 ou AF633 (CgA-AF633), est incubée à la concentration de 4µM avec les liposomes tels que préparés ci-dessus. La figure 5 montre des images obtenues à l’aide du microscope confocal des liposomes contenant le GPL commercial PA 18:1–6:0 NBD incubés avec la protéine CgA-AF633 (figures 5 a, 5 b, 5 c) et des liposomes contenant le GPL (XIVa) de l’invention incubés avec la protéine CgA-AF633 (figures 5 d, 5 e, 5 f). Dans les figures 5 a et 5 d, la longueur d’onde d’excitation est de 463 nm et celle de détection est de 539 nm pour permettre de visualiser les GPL qui fluorescent dans le vert ; dans les figures 5 b et 5 e, la longueur d’onde d’excitation est de 633 nm et celle de détection de 648 nm pour permettre de visualiser la protéine CgA-AF633 qui fluoresce dans le rouge ; les figures 5 c et 5 f résultent de la superposition des figures 5a et 5b puis des figures 5 d et 5 e, respectivement, afin de visualiser à la fois les GPL qui fluorescent dans le vert et la protéine CgA-AF633 qui fluoresce dans le rouge. Tandis que l’incubation n’entraîne aucune interaction de la protéine CgA-AF633 avec les liposomes contenant le GPL commercial PA 18:1–6:0 NBD, elle entraîne des déformations de la membrane des liposomes contenant le GPL (XIVa) de l’invention (flèches blanches). Par ailleurs, la protéine CgA-AF633 n’interagit qu’avec les liposomes contenant le GPL (XIVa). L’interaction de la CgA-AF633 avec les liposomes se matérialise par une fluorescence jaune, notamment au niveau des déformations membranaires (figure 5 f). Ceci indique que le GPL de l’invention reproduit deux caractéristiques importantes du PA naturel, à savoir interagir avec la protéine CgA et permettre la déformation membranaire. Par conséquent, grâce au GPL (XIVa) synthétique de l’invention, il est possible de localiser et d’identifier des protéines telles que la CgA qui interagissent avec lui. Exemple 6 : synthèse d’une sonde fluorescente GPL (XIVa’) à partir du GPL (Ia) . 50 mg (66 µmole) de composé (Ia) tel que préparé dans l’exemple 1 ont été solubilisés dans 330 µl de pyridine fraîchement distillée. 50,5 mg (330 µmole, 5 équivalents) d'alcool o-nitrobenzyle et 330 µl (3,29 mmole, 50 équivalents) de trichloroacétonitrile ont été ajoutés. La réaction a été scellée avec un septum en téflon et irradiée pendant 60 min à 90°C (puissance de 120W maximum). Ensuite, le solvant a été évaporé sous vide et le produit brut a été purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant : CHCl3/isopropanol) pour donner un composé intermédiaire sous la forme d’une huile avec un rendement de 31% (18,3 mg. HRMS (ESI-) m/z calcd. Pour [C47H81N4O10P] [M-H]-: 891,5609 ; trouvée : 891,5612. À une solution du composé intermédiaire préparé à l’étape précédente (5 mg, 5,60 µmole) dans 0,5 µl de CDCl3 ont été ajoutés 10,8 mg (22,4 µmole, 4 équivalents) d'ADIBO-NBD tel que préparé dans l’exemple 3 (composé XVa) dans 0,5 ml de CDCl3 et le mélange a été agité pendant 4 h à 40 °C. Le solvant a été éliminé sous pression réduite et le produit brut a été purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant : CDCl3/i-PrOH). Le produit (XIVa’) a été obtenu sous la forme d'huile fluorescente jaune-vert avec un rendement de 32 (2,2 mg). Ce composé comprend par rapport au composé (XIVa) un groupe photoactivable OR’1 tel que défini dans l’invention sur la tête polaire. HRMS (ESI-) m/z calcd. Pour [C74H103N9O14 P] [M-H]- : 1372,7368 ; trouvée : 1372,7371. Exemple 7 : synthèse d’une sonde fluorescente GPL (XIVa-2) à partir du GPL (Ia) L'acide carboxylique « ATTO 746N » (5,00 mg, 6,70 µmole) a été dissous dans du dichlorométhane (150 µl). Ensuite, du N-(3-Diméthylaminopropyl)-N′- éthylcarbodiimide (2,50 mg, 16,1 µmole) et l'amine ADIBO C6 (4,70 mg, 14,7 µmole) ont été ajoutés et le mélange a été agité à température ambiante. pendant 2 heures. Ensuite, du 2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3- tetramethylaminium tetrafluoroborate ou TBTU (3,23 mg, 10,1 µmole) et de la N,N-diisopropyléthylamine (DIPEA, 1,75 µl, 10,1 umole) ont été ajoutés. Après 1h, la réaction était complète. Le solvant a été éliminé sous pression réduite. Ce produit brut de formule (XVa-2) a été engagé dans l'étape suivante sans purification. Le produit brut (XVa-2) (6,33 mg, 6,7 µmole) et le GPL Ia tel que préparé dans l’exemple 1 (7,99 mg, 10,6 µmole) ont été solubilisés dans CHCl3. Après 1 jour, le solvant a été éliminé sous pression réduite. Le produit brut est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant : gradient de 5% de methanol jusqu’à 20% dans le CH2Cl2, colonne « Viridis Silica 5µ, 150 x 4,60 mm) pour donner un solide bleu (XIVa-2) (5 mg, rendement de 38% après 2 étapes). HRMS (ESI+) m/z calcd. Pour [C103H148N8O11 P] [M+H]+: 1704.1000; trouvée: 1704.1035. Exemple 8 : synthèse d’une sonde fluorescente GPL (XIVa-3) à partir du GPL (Ia) . Le composé (XIIa) tel que préparé dans l’exemple 1 (83 mg, 106 mmole, 1 équivalent) et le 7-(prop-2-yn-1-yloxy)-2H-chromèn-2-one (52,8 mg, 264 µmole, 2,5 équivalents) ont été solubilisés dans du tétrahydrofurane (THF) (4 ml). Du sulfate de cuivre pentahydraté (59,0 mg, 370 µmole, 3,5 équivalents) et de l'ascorbate de sodium (151 mg, 760 µmole, 7,2 équivalents) ont été ajoutés avec de l'eau (1 ml). La solution a été agitée à température ambiante pendant une nuit. Les solvants ont été éliminés sous pression réduite. Le produit brut a été purifié par chromatographie sur gel de silice avec dépôt solide (célite) et un éluant : gradient de 60% d’acétate d’éthyle dans le cyclohexane) pour obtenir le composé intermédiaire diester de phosphonate sous la forme d’un solide brun avec un rendement de 66% (104 mg). Masse molaire = 970,5927 g mol−1. RMN 1H (300,13 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 7,71 (s, 1H, CH triazole), 7,62 (d, 1H, J = 9,5 Hz, CH coum), 7,37 (m, 1H, CH coum), 6,90 (m, 2H, CH coum), 6,27 (d, 1H, J = 9,5 Hz, CH coum), 5,56 (m, 1H, J = 5,3 Hz, CH squelette glycérol), 5,33 (m, 2H, CH double liaisons), 5,24 (s, 2H, CH2 benz coum), 5,17 (m, 1H, CH squelette glycérol), 4,61 (d, 2H, J = 5,8 Hz, CH2 benz triazole), 4,21 (m, 2H, CH2OP), 3,78 (d, 3H, J = 2,9 Hz, POCH3), 3,74 (d, 3H, J = 2,8 Hz, POCH3), 2,36 (m, 2H*2, CH2CO2), 2,01 (d, 2H*2, , J = 6,1 Hz, CH2CH=CHCH2), 1,57 (dt, 2H*2, J = 33,7 Hz / 7,1 Hz, CH2CH2CO2), 1,24 (s, 48H, CH2 chaines grasses), 0,87 (t, 6H, J = 7 Hz, CH3*2). RMN 31P (121,442 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 1,08 (P(O)(OMe)2). RMN 13C (75,49 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 172,8 (CO ester), 172,5 (CO ester), 161,4 (Cq O éther), 161,2 (CO ester coum), 155,9 (Cq alpha O ester coum), 143,5 (Cq triazole), 143,0 (Car), 130,2 (double liaison), 129,8 (double liaison), 129,0 (Car), 123,9 (CH triazole), 113,6 (Car), 113,2 (Cqar), 112,8 (Car), 102,3 (Car), 69,8 (CH glycérol alpha ester à côté du phosphore, J = 7,6 Hz), 69,2, (CH glycérol alpha ester éloigné du phosphore), 64,9 (CH2 alpha OP, J = 5,2 Hz), 62,3 (CH2 benz coum), 54.8 (2 CH3OP, J = 6,6 Hz), 50,3 (CH2 alpha triazole), 34,1 (CH2 alpha ester), 34,0 (CH2 alpha ester), 32,0 – 22,8 (CH2 chaine grasse), 14,2 (CH3). HRMS (ESI-) m/z calcd. Trouvée : 970.5934. Le composé intermédiaire tel qu’obtenu ci-avant (90 mg, 91.1 µmol, 1 équivalent) a été solubilisée dans du CDCl3 (5 ml) préalablement neutralisé sur du K2CO3 et stocké sur un tamis moléculaire sous atmosphère neutre. Ensuite, du TMSBr fraîchement distillé (69,7 mg, 455 µmol, 5 équivalents) a été ajouté et le mélange a été agité pendant 5h à température ambiante sous atmosphère neutre. Après suivi par RMN 31P, la réaction a été refroidie avec MeOH et évaporée sous pression réduite pour obtenir un produit brut sous la forme d’une huile brune (XVa-3) (95 mg, rendement quantitatif). RMN 1H (300,13 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 8,60 (s, 1H, CH triazole), 7,65 (s, 1H, CH coum), 7,37 (s, 1H, CH coum), 6,92 (s, 2H, coum), 6,21 (s, 1H, coum), 5,68 (s, 1H, CH squelette glycérol), 5,54 – 5,17 (m, 2*1H + 2H + 2H, CH=CH + CH2 benz coum + CH2 benz triazole ), 4,96 (m, 1H, CH squelette glycérol), 4,25 (d, 2H, J = 31,7 Hz, CH2OP), 2,30 (m, 2*2H, CH2CH2CO2), 1,98 (m, 2*2H, CH2CH=CHCH2), 1,49 (d, 2*2H, J = 27,9 Hz, CH2CH2CO2), 1,24 (s, 48H, CH2 chaines grasses), 0,87 (t, 6H, J = 6,5 Hz, CH3). RMN 31P (121,442 MHz, CDCl3), δ (ppm) : -0,94 ppm. Exemple 9 : synthèse d’une sonde fluorescente GPL (XIVa-4) à partir du GPL (Ia) Le composé de formule (XIVa-3) tel que préparé dans l’exemple 8 (95 mg, 99,5 µmole, 1 équivalent) a été solubilisé dans la pyridine (450 µl), puis la N- trityleéhanolmine (151 mg, 497 µmole, 5 équivalents) et le trichloroacétonitrile (450 µl) ont été ajoutés. Le mélange réactionnel a été chauffé à 90°C pendant 1 heure sous micro-ondes. Le produit brut obtenu a été purifié par chromatographie sur gel de silice avec dépôt liquide (dichlorométhane) et un éluant (gradient de 100% d’acétate d’éthyle à 100% d’isopropanol) pour obtenir le composé intermédiaire sous la forme d’un solide brun avec un rendement de 92% (114 mg). Masse molaire = 1241.7288 g/mol RMN 1H (300,13 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 7,78 (s, 1H, CH triazole), 7,51 (m, 8H, 2CH coum + CH trityl), 7,26 (m, 9H, CH trityl), 6,82 (m, 2H, CH coum), 6,20 (d, 1H, J = 9,4 Hz, CH coum), 5,58 – 4,90 (m, 2H + 1H*2 + 2H, CH2 benz coum + 2CH double liaisons + CH2 benz triazole), 4,56 (m, 2H, 2CH squelette glycérol), 4,22 – 3,70 m, 2H*2 + 1H*2, NCH2CH2OP + 2CH2OP), 3,01 (s, 1H, NH), 2,32-2,07 (m, 4H, CH2CO2), 1,98 (m, 2H*2, CH2CH=CHCH2), 1,64 (m, 2H*2, CH2CH2CO2), 1,25 (m, 48H, CH2 chaines grasses), 0,87 (m, 6H, CH3*2) RMN 13C (75,49 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 172,8 (CO ester), 172,3 (CO ester), 161,4 (Cq O éther), 161,2 (CO ester coum), 155,7 (Cq alpha O ester coum), 143,4 (CHar), 142,5 (Cq triazole), 130,1 (CH double liaison chaine grasse), 129,6 (CH double liaison chaine grasse), 129,4 – 128 (CHar trityl + CHar coum + CHa triazole), 113,4 (CHar), 113,0 (Cqar), 112,8 (CHar), 102,1 (CHar), 74,6 (Cq trityl), 70,4 (CH squelette glycérol à côté du phosphore), 69,5 (CH squelette glycérol éloigné du phosphore), 63,7 (CH2 alpha OP, J = 5,2 Hz), 62,1 (CH2 benz coum), 58,8 (CH2O éthanolamine), 50,0 (CH2 benz triazole), 49,2 (CH2N éthanolamine), 34,0 / 34,1 (CH2 alpha ester), 32,0 - 22,8 (CH2 chaine grasse), 14,2 (CH3). RMN 31P (121,442 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 2,01 ppm. HRMS (ESI-) m/z calcd. Trouvée : 1241.7233. Le composé intermédiaire tel que préparé à l’étape précédente (10 mg, 8,05 µmole, 1 équivalent) dans 0,2 ml de dichlorométhane anhydre, et du triéthylsilane (3,74 mg, 32,2 µmole, 4 équivalents) dans 0,1 ml de dichlorométhane sec ont été ajoutés dans un flacon de 1 ml sous atmosphère d'argon. Ensuite, de l'acide trifluoroacétique (3,67 mg, 32,2 µmole, 4 équivalents) dans 0,1 ml de dichlorométhane sec a été ajouté au mélange. La réaction est devenue jaune lors de l'ajout de l'acide, et a été agitée pendant 3h à température ambiante. La réaction a été suivie par UPLC (« Phenomenex Kinetex » 2,6µ PFP 100Å 150 x 4,60 mm) avec un détecteur UV (à 254 nm) pour suivre l'apparition du groupe trityle libre à 8,72 min) et un détecteur fluo (à 320 nm) pour suivre le passage du composé intermédiaire à 12,4 min au produit (XIVa-5) à 12,2 min. Masse molaire = 999,6193 g mol−1. HRMS (ESI-) m/z calcd. Trouvée : 999,6179.

Claims

Revendications 1. Glycérophospholipide synthétique répondant à la formule (I) suivante : dans laquelle : * le groupe OR1 est choisi parmi un groupe hydroxyle, un reste de choline, un reste d’éthanolamine, un reste de glycérol, un reste de sérine, un reste d’inositol, un reste d’inositol monophosphate, un reste d’inositol bisphosphate, un reste d’inositol trisphosphate, un reste de glycérophosphate, un reste de glucose, un reste d’inositolglycane, et un reste de tout composé hydroxylé capable de former un groupe phosphodiester en position sn-3 appartenant à une sous-classe des GPL naturels, * R2 représente une chaine aliphatique insaturée, mono- ou polyinsaturée, comprenant au moins 14 atomes de carbone, et * R3 représente une chaine aliphatique saturée comprenant au moins 10 atomes de carbone.
2. Glycérophospholipide selon la revendication 1, caractérisé en ce que R3 représente une chaine aliphatique saturée comprenant de 14 à 30 atomes de carbone.
3. Glycérophospholipide selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que R2 représente une chaine aliphatique insaturée, mono- ou polyinsaturée, comprenant de 16 à 24 atomes de carbone.
4. Glycérophospholipide selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la chaine aliphatique insaturée comprend de 1 à 6 insaturations.
5. Glycérophospholipide selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu’il est choisi parmi les composés de formules (Ia) à (Ie) présentés dans le tableau suivant :
6. Procédé de préparation d’un glycérophospholipide de formule (I) tel que défini à l’une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu’il comprend au moins les étapes suivantes : i) une étape de préparation d’un phosphotriester de formule (IV) comprenant une fonction diacétal mettant en œuvre la fonctionnalisation d’un dérivé diacétal du (2S,3S)-butane-1,2,3,4-tétrol répondant à la formule (III) avec un dialkyl halogénophosphate de formule (IV) en milieu basique, selon le schéma suivant : , dans lequel R4 représente un groupe alkyle en C1-C5 ou un groupe benzyle, et R5 représente un groupe alkyle en C1-C5, ii) une étape de déprotection en milieu acide de la fonction diacétal du phosphotriester de formule (IV) pour former un diol de formule (V) comprenant un alcool primaire, selon le schéma suivant : , iii) une étape de fonctionnalisation sélective de l’alcool primaire du diol de formule (V) pour former un monoalcool de formule (VI) comprenant un alcool primaire modifié par un groupe R6, selon le schéma suivant : dans lequel R6 est choisi parmi les groupes suivants : tosyle, mésyle, et triflate, iv) une étape de substitution nucléophile de la fonction OR6 du monoalcool de formule (VI) pour former un azoture de formule (VII) comprenant une fonction alcool, selon le schéma suivant : , v) une étape d’estérification de la fonction alcool de l’azoture de formule (VII) avec un acide gras saturé de formule (VIII) pour former un azoture de formule (IX) comprenant une chaine d’acide gras saturée et une fonction alcool protégée par un groupe paraméthoxybenzyle, selon le schéma suivant : , dans lequel R3 est tel que défini dans la revendication 1, 2 ou 5, vi) une étape comprenant une sous-étape vi-1) de déprotection du groupe paraméthoxybenzyle de l’azoture de formule (IX) pour former un azoture de formule (X) comprenant une fonction alcool, suivie d’une sous-étape vi-2) d’estérification de la fonction alcool de l’azoture de formule (X) avec un acide gras insaturé de formule (XI), pour former un azoture de formule (XII) comprenant une chaine d’acide gras saturée, une chaine d’acide gras insaturée, et une fonction phosphotriester, selon le schéma suivant : , dans lequel R2 est tel que défini dans la revendication 1, 3, 4 ou 5, et vii) une étape de déprotection des groupes R4 pour former un composé de formule (I) dans laquelle OR1 = OH, éventuellement suivie d’une étape de préparation d’un composé de formule (I) dans laquelle OR1 ≠ OH. 7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que l’étape iii) est effectuée en présence du chlorure de tosylate, d’une base, et d’un catalyseur à base d’étain. 8. Procédé selon la revendication 6 ou 7, caractérisé en ce que la sous- étape vi-1) est effectuée en présence de 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4- benzoquinone, et à une température allant de -20°C à 50°C. 9. Glycérophospholipide modifié répondant à la formule (XIV) suivante : dans laquelle : * OR’1 représente un groupe OR1 tel que défini à l’une quelconque des revendications 1 ou 5, ou un groupe photoactivable, * R2 et R3 sont tels que définis à l’une quelconque des revendications 1 à 5, et * R8 et R9, indépendamment l’un de l’autre, sont choisis parmi un groupe fluorophore, un groupe photoréticulable, un groupe radiomarqueur, et un atome d’hydrogène ; ou les groupes R8 et R9 forment ensemble un groupe choisi parmi un groupe fluorophore, un groupe photoréticulable, et un groupe radiomarqueur. 10. Procédé de préparation d’un glycérophospholipide modifié de formule (XIV) tel que défini dans la revendication 9, caractérisé en ce qu’il comprend au moins une étape A) de mise en contact d’un glycérophospholipide synthétique de formule (I) tel que défini à l’une quelconque des revendications 1 à 5 ou obtenu selon un procédé tel que défini à l’une quelconque des revendications 6 à 8, avec un alcyne répondant à la formule (XV) suivante : dans laquelle R8 et R9 sont tels que définis dans la revendication 9. 11. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que l’étape A) est effectuée après la mise en contact du glycérophospholipide synthétique (I) avec un milieu biologique et le procédé comprend en outre avant l’étape A), une étape a) de mise en contact du glycérophospholipide synthétique (I) avec un milieu biologique, en particulier in vitro ou ex vivo. 12. Utilisation d’un glycérophospholipide synthétique de formule (I) tel que défini à l’une quelconque des revendications 1 à 5 ou obtenu selon un procédé tel que défini à l’une quelconque des revendications 6 à 8 ; ou d’un glycérophospholipide modifié (XIV) tel que défini dans la revendication 9 ou obtenu selon un procédé tel que défini à l’une quelconque des revendications 10 ou 11, en tant qu’outil moléculaire, ou en tant que sonde biologique. 13. Utilisation d’un glycérophospholipide synthétique de formule (I) tel que défini à l’une quelconque des revendications 1 à 5 ou obtenu selon un procédé tel que défini à l’une quelconque des revendications 6 à 8 ; ou d’un glycérophospholipide modifié de formule (XIV) tel que défini à la revendication 9 ou obtenu selon un procédé tel que défini à l’une quelconque des revendications 10 ou 11, en tant qu’outil diagnostique in vitro ou ex vivo. 14. Glycérophospholipide synthétique de formule (I) tel que défini à l’une quelconque des revendications 1 à 5 ou obtenu selon un procédé tel que défini à l’une quelconque des revendications 6 à 8 ; ou glycérophospholipide modifié de formule (XIV) tel que défini à la revendication 9 ou obtenu selon un procédé tel que défini à l’une quelconque des revendications 10 ou 11, pour son usage médical.
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