EP4408585A1 - Dispositif de lavage - Google Patents

Dispositif de lavage

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Publication number
EP4408585A1
EP4408585A1 EP22783041.1A EP22783041A EP4408585A1 EP 4408585 A1 EP4408585 A1 EP 4408585A1 EP 22783041 A EP22783041 A EP 22783041A EP 4408585 A1 EP4408585 A1 EP 4408585A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
laboratory
washing device
grams
container holder
rotations
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
EP22783041.1A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Fabien AUBÉ
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Seylab
Original Assignee
Seylab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Seylab filed Critical Seylab
Publication of EP4408585A1 publication Critical patent/EP4408585A1/fr
Pending legal-status Critical Current

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Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L9/00—Supporting devices; Holding devices
    • B01L9/06—Test-tube stands; Test-tube holders
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/34—Purifying; Cleaning
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
    • G01N35/0098—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor involving analyte bound to insoluble magnetic carrier, e.g. using magnetic separation
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2400/00—Moving or stopping fluids
    • B01L2400/04—Moving fluids with specific forces or mechanical means
    • B01L2400/0403—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific forces
    • B01L2400/0409—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific forces centrifugal forces
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2400/00—Moving or stopping fluids
    • B01L2400/04—Moving fluids with specific forces or mechanical means
    • B01L2400/0403—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific forces
    • B01L2400/043—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific forces magnetic forces
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
    • G01N2035/00465—Separating and mixing arrangements
    • G01N2035/00524—Mixing by agitating sample carrier
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
    • G01N2035/00465—Separating and mixing arrangements
    • G01N2035/00564—Handling or washing solid phase elements, e.g. beads

Definitions

  • magnetic particles and in particular of magnetic beads, in the context of purification processes is widespread. This is often, without the following list being exhaustive, the purification of cells or biological macromolecules such as isolated proteins, antibodies and nucleic acids.
  • Magnetic particles in particular magnetic beads, are used to purify these cells and/or these biological macromolecules.
  • the element to be purified attaches to the magnetic particles, which allows it to be separated from the surrounding environment.
  • the protocols allowing these purifications involve, among other things, several stages of successive washing of these magnetic particles.
  • the magnetic particles are placed in test tubes with the presence of a washing solution, these tubes being on a rack;
  • test tubes are moved one by one from the rack to a shaker
  • test tubes are stirred in order to resuspend the magnetic beads in the washing solution and thus wash them;
  • test tubes are removed one by one from the stirrer and placed on a magnetic rack. Thanks to the action of the near magnetic field, the magnetic particles are pressed against the walls of the test tubes;
  • the soiled washing solution is removed, for example by means of the use of a pipette, and changed by a clean washing solution.
  • test tubes are to be treated simultaneously and 5 successive washes are recommended, this is very daunting and the test tubes are handled hundreds of times (24 multiplied by 5 multiplied by 2, therefore 240 manipulations), which which is time consuming and can lead to sample reversals, lab staff fatigue, etc.
  • a handling error for example an inversion of samples, will be very difficult, if not impossible, to detect and may distort the entire handling.
  • test tubes are intended to be reused.
  • this application does not disclose a magnetic laboratory container holder base capable of being linked to said laboratory container holder, nor rotation speeds compatible with washing magnetic particles.
  • test tube holder permanently fixed to an axis of rotation.
  • laboratory container refers to any laboratory supply likely to contain solutions or suspensions in particular. These may, for example, be test tubes which can be closed by means of a suitable stopper or any other means of closure.
  • the interval described as being “between A and B” includes the “A" and "B” terminals.
  • the invention therefore relates first of all to a washing device 1, comprising:
  • a laboratory container holder 2 comprising M fastening means 3 for laboratory containers, with M>1, said fastening means 3 being arranged along at least one axis (x);
  • a stirring means 5 capable of being reversibly linked to said laboratory container holder 2 and capable of inducing rotations along an axis of rotation (y) parallel to said at least one axis (x) of said laboratory container holder 2 when the latter is linked to said stirring means 5;
  • a base 6 of laboratory container holder 2 comprising at least one magnet, said base 6 being capable of being reversibly linked to said laboratory container holder 2.
  • said laboratory container holder 2 comprises as many fixing means as capacity in terms of laboratory containers.
  • a fixing means therefore makes it possible to fix a laboratory container and L fixing means make it possible to fix L laboratory containers.
  • said laboratory container holder base 6 2 comprising at least one magnet and said stirring means 5 cannot be assembled.
  • the magnetic base 6 will not be able, in any case, to disturb the washing of the magnetic particles, which must be out of any magnetic field during washing. The risk of error at this level is completely eliminated.
  • a manipulator will not be able, mechanically, to mount the base 6 on the stirring means 5.
  • said washing device 1 is a device for washing magnetic laboratory particles, for example magnetic beads.
  • said washing device 1 is a device for washing magnetic laboratory particles, for example magnetic beads, in which said magnetic laboratory particles are not grouped together when the stirring means 5 is linked to said door laboratory containers 2.
  • the laboratory magnetic particles have a largest dimension between 10 nanometers and 1 millimeter.
  • the laboratory magnetic beads have a diameter between 20 and 100 nanometers.
  • the laboratory magnetic particles have a largest dimension between 100 nanometers and 1 millimeter.
  • the laboratory magnetic particles have a largest dimension between 200 nanometers and 1 millimeter.
  • the laboratory magnetic particles have a largest dimension between 10 nanometers and 100 micrometers.
  • the laboratory magnetic particles have a largest dimension between 1 and 5 micrometers.
  • the laboratory magnetic particles have a larger dimension of about 2.8 micrometers.
  • the laboratory magnetic beads have a diameter between 10 nanometers and 100 micrometers.
  • the laboratory magnetic beads have a diameter between 1 and 5 micrometers.
  • the magnetic beads have a diameter between 10 nanometers and 1 millimeter.
  • the magnetic beads have a diameter between 100 nanometers and 1 millimeter.
  • the magnetic beads have a diameter between 200 nanometers and 1 millimeter.
  • all the non-electrical parts of said washing device 1 are made of a material which is not susceptible to corrosion.
  • all the non-electrical parts of said washing device 1 are made of a plastic material and/or of resin.
  • all the non-electrical parts of said washing device 1 are made of a plastic material.
  • all the non-electrical parts of said washing device 1 are made of resin.
  • all the non-electrical parts of said device 1 are made of a material chosen from the group consisting of polylactic acid (PLA) and glycolized polyester (PETG).
  • PLA polylactic acid
  • PETG glycolized polyester
  • all the non-electrical and non-magnetic parts of said washing device 1 are printed in three dimensions, and are made of a material chosen from the group consisting of polylactic acid (PLA) and glycolized polyester ( PETG).
  • PLA polylactic acid
  • PETG glycolized polyester
  • Three-dimensional printing has the advantage of being very simple to implement. In addition, it also allows the insertion of magnets in the base 6 of the laboratory container holder 2, which makes it possible to produce a unique piece. In addition, certain parts of the stirring means 5 are hollow with cavities allowing the passage of the electric cables and the arrangement of the electric components (motor, etc.), which 3D printing makes it possible to produce. Finally, this limits the non-sealed junctions, and therefore contributes to the sealing/tropicalization of the agitation means 5.
  • said base 6 of laboratory container holder 2 comprising at least one magnet is able to be reversibly linked to said laboratory container holder 2 and to collect magnetic laboratory particles within said laboratory containers.
  • said laboratory container holder 2 comprises a carrier plate 7 as well as a detachable stabilizing base 8 of said carrier plate.
  • the magnetic base 6 can for example be inserted between the carrier plate 7 and the detachable stabilizer base 8.
  • the carrier plate 7 can be changed while retaining the same detachable stabilizer base.
  • said laboratory container holder 2 comprises a plurality of carrier plates 7 as well as a detachable stabilizer base 8 of said carrier plates 7.
  • each carrier plate 7 can be used separately with the stabilizer base 8, in particular to carry out agitation by means of the agitator 5.
  • said laboratory container holder 2 comprises a plurality of carrier plates 7 as well as a detachable stabilizing base 8 of said carrier plates 7, said carrier plates being adapted to different laboratory containers.
  • said laboratory container holder 2 comprises a plurality of carrier plates 7 as well as a detachable stabilizing base 8 of said carrier plates 7, said carrier plates comprising fixing means 3 different in number of fixing means and/or or in dimensions of fastening means.
  • said laboratory container holder 2 comprises a plurality of carrier plates 7 as well as a detachable stabilizer base 8 of said carrier plates 7, and said carrier plates 7 are each of a different color. Thus, they will be very easily differentiable and will save time for the user.
  • said device 1 comprises between 2 and 10 different carrier plates 7.
  • said device 1 comprises between 2 and 10 carrier plates 7 different and having different colors.
  • said carrier plate comprises several legs 4, said fixing means 3 are holes with flats, and said detachable stabilizing base 8 comprises means for fixing to said stirring means 5.
  • said laboratory container holder 2 comprises stabilizing means, preferably legs 4.
  • the carrier plate 7 can serve as a rack even in the absence of a stabilizing base. 8, as it is stabilized by 4 feet.
  • the laboratory container holder 2 consists of said carrier plate 7.
  • said laboratory container holder 2 comprises stabilizing means allowing it to hold in a position allowing it to accommodate the laboratory containers vertically to prevent their contents from overturning.
  • these stabilizing means are legs 4. This is particularly advantageous, as it allows complete stabilization.
  • the laboratory container holder 2 is provided with laboratory containers, it will remain stable, and all the more stable as the number of feet 4 will be high.
  • said laboratory container holder 2 comprises a number of feet 4 comprised between 2 and 10, preferably comprised between 3 and 7, and preferably 5.
  • said laboratory container holder 2 comprises 3 feet 4.
  • said laboratory container holder 2 comprises 5 feet 4.
  • M is between 2 and 48, preferably between 6 and 36, preferably between 16 and 24.
  • said laboratory container holder 2 comprises fixing means 3 of different kinds, and more precisely which make it possible to fix different laboratory containers.
  • the various laboratory containers may in particular have different volume capacities.
  • the washing device 1 it will be possible to wash magnetic particles, including within tubes of different capacities within the same laboratory manipulation.
  • At least one fixing means 3 is suitable for fixing a laboratory container chosen from the group of laboratory containers with a capacity of 0.5 milliliters, 1.5 milliliters, 2 milliliters, 5 milliliters, 15 milliliters, or 50 milliliters.
  • At least two fixing means 3 are suitable for fixing a laboratory container chosen from the group of laboratory containers with a capacity of 0.5 milliliters, 1.5 milliliters, 2 milliliters, 5 milliliters, 15 milliliters, or 50 milliliters.
  • At least five fixing means 3 are suitable for fixing a laboratory container chosen from the group of laboratory containers with a capacity of 0.5 milliliters, 1.5 milliliters, 2 milliliters, 5 milliliters, 15 milliliters, or 50 milliliters.
  • said magnet is capable of collecting said magnetic laboratory particles within said laboratory containers.
  • said magnet is capable of collecting said magnetic laboratory particles within said laboratory containers, said collecting taking place at least 1 millimeter above the bottom of said laboratory container. This embodiment is preferred because if a pipette is used to remove the soiled medium, then removal of the soiled medium without magnetic particle removal will be facilitated.
  • At least one fixing means 3, and preferably all of the fixing means 3, are holes capable of mechanically retaining the laboratory containers.
  • 3D printing it is possible to support any container by making a corresponding custom-made hole.
  • the laboratory container holder 2 comprises the carrier plate 7 as well as the stabilizing base 8. Indeed, in the latter case, it will suffice to print in 3D a new carrier plate 7 to have an entire device adapted to said new very particular laboratory containers.
  • these holes have a flat part allowing better mechanical action of said hole on said laboratory containers, they are called in the context of the present application “holes with flats”.
  • At least one fixing means 3, and preferably all of the fixing means 3, are holes with flats capable of mechanically retaining the laboratory containers.
  • said fixing means 3 are arranged on said x axis. This embodiment is particularly suitable for obtaining strictly identical agitation between the different laboratory containers. Indeed, all laboratory containers undergo exactly the same mechanical stresses during shaking.
  • said fixing means 3 are arranged on either side of said at least one axis x. This embodiment is particularly suitable for maximizing the number of fastening means 3 while maintaining an overall size of the laboratory container holder 2 that is reduced.
  • said fixing means 3 are arranged along two axes x1 and x2. This embodiment is particularly preferred, insofar as it allows simultaneous agitation of a large number of laboratory containers.
  • said fixing means 3 are arranged along two axes x1 and x2, both parallel to the axis of rotation y.
  • said fixing means 3 are arranged on the axes x1 and x2, both parallel to the axis of rotation y.
  • said fixing means 3 are arranged along two axes x1 and x2, both parallel to the axis of rotation y, and x1 and x2 are equidistant from said axis of rotation y.
  • said fixing means 3 are arranged on the axes x1 and x2, both parallel to the axis of rotation y, and x1 and x2 are equidistant from said axis of rotation y.
  • said fixing means 3 are numbered N.
  • This embodiment is very advantageous, insofar as it allows possible note taking relating to each laboratory container during handling.
  • the numbers are arranged in such a way that all the fixing means 3 can be aligned with a single 180° rotation of said laboratory container holder 2. For example, such an embodiment is presented in .
  • said stirring means 5 is a rotary stirrer.
  • said stirring means 5 is a rotary drum stirrer.
  • said stirring means 5 is powered by electric current.
  • said stirring means 5 comprises an electric power supply and an electric motor.
  • said stirring means 5 comprises an electric power supply, an electric motor, as well as a controller 9.
  • said stirring means 5 comprises a display screen 10. This screen can for example display the number of revolutions per minute as well as a countdown.
  • the controller 9 makes it possible to predetermine the following parameters: the speed of rotation, determined by the number of rotations per minute when the rotations are complete or the number of "to and fro" per minute when the translations are "back and forth”, as well as the duration of the agitation (in minutes).
  • the controller 9 makes it possible to determine the following parameters: the speed of rotation, determined by the number of rotations per minute when the rotations are complete or the number of "to and fro" per minute when the translations are "back and forth", as well as the duration of the agitation (in minutes).
  • the controller 9 makes it possible to predetermine the following parameters: the speed of rotation, as well as the duration of the agitation.
  • the controller 9 makes it possible to determine the following parameters: the speed of rotation, as well as the duration of the agitation.
  • controlling the duration of the agitation is also very important. In fact, too short an agitation can lead to a poor quality wash. Conversely, stirring for too long can lead to degradation of the magnetic particles.
  • said stirring means 5 is powered by electric current from a rechargeable battery.
  • a rechargeable battery This is particularly advantageous, as the mobility of the agitator is greatly improved.
  • the stirrer is plugged into the mains, the stirrer is within a refrigerator, and the power cable passes through the joint of the refrigerator; this is imperfect from the point of view of size, and dangerous (risk of electrocution and short-circuiting, in particular due to humidity).
  • said stirring means 5 is able to induce complete rotations. In one embodiment, said stirring means 5 is able to induce complete rotations because there is no mechanical obstacle to said rotations. In one embodiment, said stirring means 5 is able to induce successive complete rotations. This type of rotation will be particularly suitable in general, because it induces very strong turbulence inside laboratory containers, which allows the realization of a quality wash. For example, in the aforementioned application CN207976333, no complete rotation can take place because there are mechanical obstacles limiting the amplitude of the rotation, which is very disadvantageous in the completely different context of the invention.
  • said stirring means 5 is able to induce successive complete rotations, and these rotations are carried out at a rate of between 10 and 100 rotations per minute, preferably between 15 and 80 rotations per minute, of preferably between 30 and 70 rotations per minute, preferably between 40 and 60 rotations per minute, preferably 50 rotations per minute.
  • said agitation means 5 is able to induce successive complete rotations for a time comprised between 1 minute and 24 hours, preferably comprised between 2 minutes and 10 hours, preferably comprised between 30 minutes and 5 hours. . It is important that the duration is sufficient to carry out a good wash, without being too long so as not to damage the magnetic particles.
  • said stirring means 5 is able to induce successive complete rotations, and these rotations are carried out at a rate of between 10 and 100 rotations per minute and for a time of between 1 minute and 24 hours.
  • said stirring means 5 is able to induce rotations of the "back and forth" type according to an amplitude of between 10 and 180 degrees. This type of rotation will be particularly suitable in case of fear concerning the tightness of said laboratory containers.
  • said base 6 comprises a plurality of magnets.
  • said magnets are of grade N52.
  • the attraction force of said magnets is between 1kg and 100kg, preferably between 10kg and 40kg, preferably around 25kg.
  • said magnets are permanent magnets. This is very advantageous: the magnetic field is continuous, it does not cause electricity consumption or variations over time.
  • the three dimensions of at least one magnet correspond to the following intervals: 5-15 millimeters, 15-25 millimeters and 30-50 millimeters.
  • the three dimensions of the magnets correspond to the following ranges: 8-12 millimeters, 18-22 millimeters and 35-45 millimeters.
  • At least one magnet has a smallest dimension greater than 3 millimeters, preferably greater than 5 millimeters, preferably greater than 7 millimeters.
  • all of the magnets have a smallest dimension greater than 3 millimeters, preferably greater than 5 millimeters, preferably greater than 7 millimeters.
  • said base 6 comprises an alternation of magnets and recessed parts compatible with the feet 4 of the laboratory container holder 2. This embodiment is particularly preferred, because it allows total stabilization of the laboratory container holder 2 within said base 6.
  • the magnets are arranged in such a way that the magnetic environment of the interior of the laboratory containers is identical from one laboratory container to another. This embodiment is particularly preferred, because it will allow in particular perfect repeatability and identity between the different laboratory containers with regard to the collection of magnetic particles.
  • said stirring means 5 is physically separate. In particular, it is not attached to a work surface, which allows it to be moved easily.
  • the distance between each fixing means and the axis of rotation is between 10 millimeters and 15 millimeters.
  • all the fixing means have an identical distance from the axis of rotation. In one embodiment, it is between 10 millimeters and 15 millimeters. This is particularly advantageous, since the washing will be identical from one laboratory container to another.
  • the washing device 1 according to the invention has a mass comprised between 1500 grams and 4000 grams, preferably comprised between 2000 grams and 3500 grams, preferably comprised between 2300 grams and 2700 grams.
  • the washing device 1 according to the invention has a mass of less than 4000 grams, preferably less than 3000 grams, preferably less than 2500 grams.
  • said laboratory container holder 2 has a mass comprised between 10 grams and 1000 grams, preferably comprised between 20 grams and 500 grams, preferably comprised between 200 grams and 300 grams.
  • said laboratory container holder 2 has a mass of less than 1000 grams, preferably less than 500 grams, preferably less than 300 grams.
  • said stirring means 5 has a mass comprised between 200 grams and 3000 grams, preferably comprised between 500 grams and 2000 grams, preferably comprised between 1000 grams and 1500 grams.
  • said stirring means 5 has a mass of less than 3000 grams, preferably less than 2000 grams, preferably less than 1500 grams.
  • said base 6 has a mass comprised between 100 grams and 2000 grams, preferably comprised between 400 grams and 1200 grams, preferably comprised between 700 grams and 1000 grams.
  • said base 6 has a mass of less than 2000 grams, preferably less than 1000 grams, preferably less than 900 grams.
  • the invention also relates to a kit comprising a washing device 1 according to the invention, as well as a plurality of laboratory containers each comprising a hermetic cap.
  • said kit preferably comprises at least 2, preferably at least 4, preferably at least 6, preferably at least 8, preferably at least 10, preferably at least 12, preferably at least 14 , preferably at least 16, preferably at least 18, preferably at least 20, preferably at least 22, preferably at least 24, preferably at least 26, preferably at least 28, preferably at least 30, of preferably at least 32, preferably at least 34, preferably at least 36 laboratory containers each comprising a hermetic cap.
  • the invention also relates to a washing method using the washing device 1 according to the invention.
  • washing device 1 The embodiments described for the washing device 1 are therefore also applicable to the washing process.
  • the invention therefore also relates to a method for washing magnetic particles, comprising the following steps:
  • step A bringing together said magnetic particles and a washing solution in several laboratory containers;
  • step B assembly of the laboratory containers on a laboratory container holder 2;
  • steps A, B and C can be done in any order;
  • step E dissociation of said laboratory container holder 2 and of said stirring means 5;
  • step F mounting of said laboratory container holder 2 on a base 6 adapted to the laboratory container holder 2 comprising at least one magnet able to be reversibly linked to said laboratory container holder 2 and to gather said magnetic laboratory particles within said laboratory containers;
  • said laboratory magnetic particles are magnetic beads.
  • steps A-G are repeated between 2 and 100 times.
  • steps A-G are repeated between 2 and 50 times.
  • steps A-G are repeated between 2 and 20 times.
  • the laboratory container holder 2 comprising feet 4 as well as 24 means 3 for fixing laboratory containers which are holes with flats arranged on the axes x1 and x2, the stirring means 5 with an axis of rotation y parallel to the axes x1 and x2 when the laboratory container holder 2 is installed on the stirring means 5, as well as the base 6 of the laboratory container holder 2 comprising twelve magnets taken in the mass.
  • the base 6 also includes recesses which correspond to the feet of the laboratory container holder 2. When the laboratory container holder 2 is installed on said base 6, the feet 4 of said laboratory container holder 2 fit into the recesses of said base 6.
  • FIG. 1 perspective view of the device 1 for washing magnetic laboratory particles according to the invention, with the laboratory container holder 2 mounted on the stirring means 5.
  • FIG. 1 perspective view of a laboratory container holder 2 according to the invention comprising 24 fixing means 3 being holes with flats.
  • the holes with flats are of different sizes, and therefore suitable for different laboratory containers. It is thus possible to shake laboratory containers of different volumes at the same time.
  • FIG. 7 perspective view of two different carrier plates 7, these carrier plates 7 include in particular different fixing means 3, these two carrier plates 7 can be adapted to the same detachable stabilizing base 8.
  • Each carrier plate comprises feet 4.
  • the base stabilizer comprises fixing means 11 to the stirring means 5 (stirring means 5 not shown).
  • the two carrier plates 7 have different colors (not visible in the figure).
  • the fixing means 3 are numbered by engraving or printing on said laboratory container holder. The numbers are arranged in such a way that it suffices that said laboratory container holder 2 is turned over by 180° for all the laboratory containers to be easily accessible. In the case where the laboratory container holder 2 is produced by 3D printing, the numbers can thus also be printed.
  • Example 1 Use of a device according to the invention in the context of manipulation chromatin immunoprecipitation
  • Chromatin immunoprecipitation was performed on 12 samples.
  • the chromatin is immunoprecipitated using a specific anti-P65-RELA antibody and a non-specific IgG control antibody.
  • the manipulation will therefore involve twice 12 samples, therefore 24 samples.
  • the washing device 1 used is that shown in .
  • PBS Phosphate Buffered Saline
  • step I the use of the device according to the invention allows a single manipulation (of the laboratory container holder) which is used from sub-step 8. and which is placed, during sub-step 9., directly on the stirring medium.
  • Step IV Washing the Magnetic Beads
  • test tubes remain on the rack from the end of sub-step 1 until sub-step 3.
  • step V.1 Add 30 ⁇ l of beads washed and stored at 4°C (step V.1) per tube.
  • test tubes remain on the rack from the end of sub-step 1 until sub-step 5.
  • Step VIII Elution, reverse crosslink and purification
  • Steps Number of manipulations using the device according to the invention Number of manipulations without using the device according to the invention Cold room trips without using the device according to the invention Stage I 1 12 1 Stage II 0 0 1 Stage III 0 0 0 Stage IV 0 0 10 Stage V 2 48 2 Stage VI 3 72 3 Stage VII (if signal/noise too low) 15 (29) 360 (696) 15 (29) Stage VIII 0 0 0 TOTAL (if weak signal/noise) 21 (35) 492 (828) 32 (46) Table 1: Contribution of the use of the device according to the invention

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Abstract

Dispositif de lavage (1), comprenant : - un porte contenants de laboratoire (2) comprenant M moyens de fixation (3) de contenants de laboratoires, avec M>1, lesdits moyens de fixation (3) étant disposés le long d'au moins un axe (x); - un moyen d'agitation (5) apte à être lié de manière réversible audit porte contenants de laboratoire (2) et apte à induire des rotations selon un axe de rotation (y) parallèle audit au moins un axe (x) dudit porte contenants de laboratoire (2) lorsque ce dernier est lié audit moyen d'agitation (5); - une base (6) de porte contenants de laboratoire (2) comprenant au moins un aimant, ladite base (6) étant apte à être liée de manière réversible audit porte contenants de laboratoire (2).

Description

    Dispositif de lavage
  • L'utilisation de particules magnétiques, et notamment de billes magnétiques, dans le cadre de procédés de purification est largement répandue. Il s’agit bien souvent, sans que la liste suivante soit limitative, de la purification de cellules ou de macromolécules biologiques comme par exemple des protéines isolées, des anticorps et des acides nucléiques.
  • Les particules magnétiques, notamment les billes magnétiques, sont utilisés pour purifier ces cellules et/ou ces macromolécules biologiques.
  • L’élément à purifier se fixe sur les particules magnétiques, ce qui permet de le séparer du milieu environnant.
  • Les protocoles permettant ces purifications impliquent entre autres plusieurs étapes de lavages successifs de ces particules magnétiques.
  • Classiquement, ces lavages sont réalisés selon le protocole simplifié suivant :
  • - les particules magnétiques sont disposées dans des tubes à essai avec présence d’une solution de lavage, ces tubes se trouvant sur un portoir ;
  • - les tubes à essai sont déplacés un par un du portoir à un agitateur ;
  • - les tubes à essai sont mis en agitation afin de resuspendre les billes magnétiques dans la solution de lavage et ainsi les laver ;
  • - après arrêt de l’agitation, les tubes à essai sont retirés un par un de l’agitateur et placés sur un portoir magnétique. Grâce à l’action du champ magnétique proche, les particules magnétiques sont plaquées aux parois des tubes à essai ;
  • - enfin, la solution de lavage souillée est retirée, par exemple au moyen de l’utilisation d’une pipette, et changée par une solution de lavage propre.
  • Ces étapes sont répétées un certain nombre de fois, jusqu’à ce que les particules magnétiques soient correctement lavées, conformément aux préconisations dépendantes de l’utilisation qui en est faite. Plus de dix, voire plus de vingt lavages peuvent être nécessaires, selon les protocoles appliqués.
  • Ce protocole de lavage, bien que fonctionnel, présente un certain nombre d’inconvénients.
  • En particulier, il nécessite un grand nombre d’interventions humaines et de gestes répétitifs, susceptibles d’être sources d’erreurs, en particulier d’inversions d’échantillons, et de désagrément pour le personnel de laboratoire (fatigue de la main, etc.).
  • Ensuite, la répétabilité de l’agitation, c’est-à-dire la mesure dans laquelle l’homogénéisation a été la même d’un tube à essai à l’autre, est imparfaite.
  • Par exemple, lorsque 24 tubes à essai sont à traiter simultanément et que 5 lavages successifs sont préconisés, cela est très rébarbatif et les tubes à essai sont manipulés des centaines de fois (24 multiplié par 5 multiplié par 2, donc 240 manipulations), ce qui prend du temps et peut conduire à des inversions d'échantillons, une fatigue du personnel de laboratoire, etc.
  • Il est à préciser qu’une erreur de manipulation, par exemple une inversion d’échantillons, sera très difficile, voire impossible, à détecter et pourra fausser l’entièreté de la manipulation.
  • En outre, un temps quasi infini pourra être passé à essayer de trouver la source de l’erreur, sans toutefois l’identifier systématiquement.
  • Dans l’art antérieur, certaines démarches ont été entreprise s’agissant de matériels de laboratoire.
  • Dans la demande US20140113278, il est divulgué un dispositif de lavage comprenant une partie aimantée.
  • Dans la demande EP2835178, il est décrit un dispositif de lavage de tubes à essais, lesdits tubes à essais sont destinés à être réutilisés.
  • Par exemple, cette demande ne divulgue pas de base de porte contenants de laboratoire aimantée apte à être liée audit porte contenants de laboratoire, ni de vitesses de rotation compatible avec un lavage de particules magnétiques.
  • Dans la demande CN107402154, il est décrit un porte tubes à essai fixé de manière permanente à un axe de rotation.
  • Dans la demande CN207976333, il est décrit un dispositif d’un bloc présentant une possibilité d’agitation en « va-et-vient » entre deux électroaimants.
  • Par ailleurs certains dispositifs sont vendus, comme par exemple le produit DiaMag® commercialisé par la société Diagenode. Dans le cadre de l’utilisation de ce dispositif, les échantillons ne sont pas maintenus par ledit dispositif, ce qui nécessite l’emploi d’éléments supplémentaires de fixation. Ils ne sont pas non plus disposés le long d’un axe.
  • Ces solutions ne sont pas satisfaisantes.
  • Dans le cadre de la présente demande, on appelle « contenant de laboratoire » toute fourniture de laboratoire susceptible de contenir en particulier des solutions ou suspensions. Il peut par exemple s’agir de tubes à essai qui peuvent être fermés au moyen d’un bouchon adapté ou de tout autre moyen de fermeture.
  • Dans le cadre de la présente demande, l’intervalle décrit comme étant « entre A et B » inclut les bornes « A » et « B ».
  • De manière surprenante, il a été mis en évidence par la demanderesse qu’un dispositif de lavage 1 de particules magnétiques de laboratoire permettant d’améliorer le procédé de lavage et présentant un grand nombre d’avantages pouvait être réalisé.
  • L’invention concerne donc tout d’abord un dispositif de lavage 1, comprenant :
  • - un porte contenants de laboratoire 2 comprenant M moyens de fixation 3 de contenants de laboratoires, avec M>1, lesdits moyens de fixation 3 étant disposés le long d’au moins un axe (x) ;
  • - un moyen d’agitation 5 apte à être lié de manière réversible audit porte contenants de laboratoire 2 et apte à induire des rotations selon un axe de rotation (y) parallèle audit au moins un axe (x) dudit porte contenants de laboratoire 2 lorsque ce dernier est lié audit moyen d’agitation 5 ;
  • - une base 6 de porte contenants de laboratoire 2 comprenant au moins un aimant, ladite base 6 étant apte à être liée de manière réversible audit porte contenants de laboratoire 2.
  • Dans un mode de réalisation, ledit porte contenants de laboratoire 2 comprend autant de moyens de fixation que de capacité en termes de contenants de laboratoire. Un moyen de fixation permet donc de fixer un contenant de laboratoire et L moyens de fixations permettent de fixer L contenants de laboratoire.
  • Dans un mode de réalisation, ladite base 6 de porte contenants de laboratoire 2 comprenant au moins un aimant et ledit moyen d’agitation 5 ne sont pas assemblables. Cela est très avantageux car la base aimantée 6 ne pourra, dans tous les cas, pas perturber le lavage des particules magnétiques, qui doivent être hors de tout champ magnétique lors des lavages. Le risque d’erreur à ce niveau est complètement annulé. Un manipulateur ne pourra pas, mécaniquement, monter la base 6 sur le moyen d’agitation 5.
  • Dans un mode de réalisation, ledit dispositif de lavage 1 est un dispositif de lavage de particules magnétiques de laboratoire, par exemple des billes magnétiques.
  • Dans un mode de réalisation, ledit dispositif de lavage 1 est un dispositif de lavage de particules magnétiques de laboratoire, par exemple des billes magnétiques, dans lequel lesdites particules magnétiques de laboratoire ne sont pas regroupées lorsque le moyen d’agitation 5 est lié audit porte contenants de laboratoire 2.
  • Dans un mode de réalisation, les particules magnétiques de laboratoire ont une plus grande dimension comprise entre 10 nanomètres et 1 millimètre.
  • Dans un mode de réalisation, les particules magnétiques de laboratoire ont une plus grande dimension comprise entre 20 et 100 nanomètres.
  • Dans un mode de réalisation, les billes magnétiques de laboratoire ont un diamètre compris entre 20 et 100 nanomètres.
  • Dans un mode de réalisation, les particules magnétiques de laboratoire ont une plus grande dimension comprise entre 100 nanomètres et 1 millimètre.
  • Dans un mode de réalisation, les particules magnétiques de laboratoire ont une plus grande dimension comprise entre 200 nanomètres et 1 millimètre.
  • Dans un mode de réalisation, les particules magnétiques de laboratoire ont une plus grande dimension comprise entre 10 nanomètres et 100 micromètres.
  • Dans un mode de réalisation, les particules magnétiques de laboratoire ont une plus grande dimension comprise entre 1 et 5 micromètres.
  • Dans un mode de réalisation, les particules magnétiques de laboratoire ont une plus grande dimension d’environ 2,8 micromètres.
  • Dans un mode de réalisation, les billes magnétiques de laboratoire ont un diamètre compris entre 10 nanomètres et 100 micromètres.
  • Dans un mode de réalisation, les billes magnétiques de laboratoire ont un diamètre compris entre 1 et 5 micromètres.
  • Dans un mode de réalisation, les billes magnétiques ont un diamètre compris entre 10 nanomètres et 1 millimètre.
  • Dans un mode de réalisation, les billes magnétiques ont un diamètre compris entre 100 nanomètres et 1 millimètre.
  • Dans un mode de réalisation, les billes magnétiques ont un diamètre compris entre 200 nanomètres et 1 millimètre.
  • Dans un mode de réalisation, toutes les parties non-électriques dudit dispositif de lavage 1 sont réalisées dans un matériau qui n’est pas sensible à la corrosion.
  • Dans un mode de réalisation, toutes les parties non-électriques dudit dispositif de lavage 1 sont réalisées dans un matériau plastique et/ou en résine.
  • Dans un mode de réalisation, toutes les parties non-électriques dudit dispositif de lavage 1 sont réalisées dans un matériau plastique.
  • Dans un mode de réalisation, toutes les parties non-électriques dudit dispositif de lavage 1 sont réalisées en résine.
  • Dans un mode de réalisation, toutes les parties non-électriques dudit dispositif 1 sont réalisées dans un matériau choisi dans le groupe constitué de l’acide polylactique (PLA) et du polyester glycolisé (PETG).
  • Dans un mode de réalisation, toutes les parties non-électriques et non magnétiques dudit dispositif de lavage 1 sont imprimées en trois dimensions, et sont réalisées dans un matériau choisi dans le groupe constitué de l’acide polylactique (PLA) et du polyester glycolisé (PETG).
  • L’impression en trois dimensions (impression 3D) présente l’intérêt d’être très simple à mettre en œuvre. En outre, elle permet également l’insertion des aimants dans la base 6 de porte contenants de laboratoire 2, ce qui permet de réaliser une pièce unique. De plus, certaines parties du moyen d’agitation 5 sont creuses avec des cavités permettant de faire passer les câbles électriques et de disposer des composants électriques (moteur, etc.), que l’impression 3D permet de réaliser. Enfin, cela limite les jonctions non-étanches, et participe donc à l’étanchéité/tropicalisation du moyen d’agitation 5.
  • Dans un mode de réalisation, ladite base 6 de porte contenants de laboratoire 2 comprenant au moins un aimant est apte à être liée de manière réversible audit porte contenants de laboratoire 2 et à rassembler des particules magnétiques de laboratoire au sein desdits contenants de laboratoire.
  • Dans un mode de réalisation, ledit porte contenants de laboratoire 2 comprends une plaque porteuse 7 ainsi qu’une base stabilisatrice détachable 8 de ladite plaque porteuse. Ainsi, la base aimantée 6 peut par exemple être insérée entre la plaque porteuse 7 et la base stabilisatrice détachable 8. De plus, dans ce mode de réalisation, la plaque porteuse 7 peut être changée tout en conservant la même base stabilisatrice détachable. Ainsi, lorsque des contenants de laboratoires particuliers et différents des précédents doivent être traités, il suffit à l’utilisateur de changer de plaque porteuse 7.
  • Dans un mode de réalisation, ledit porte contenants de laboratoire 2 comprends une pluralité de plaques porteuses 7 ainsi qu’une base stabilisatrice détachable 8 desdites plaques porteuses 7. Dans ce mode de réalisation, chaque plaque porteuse 7 peut être utilisée séparément avec la base stabilisatrice 8, notamment pour réaliser une agitation au moyen de l’agitateur 5.
  • Dans un mode de réalisation, ledit porte contenants de laboratoire 2 comprends une pluralité de plaques porteuses 7 ainsi qu’une base stabilisatrice détachable 8 desdites plaques porteuses 7, lesdites plaques porteuses étant adaptées à différents contenants de laboratoire.
  • Dans un mode de réalisation, ledit porte contenants de laboratoire 2 comprends une pluralité de plaques porteuses 7 ainsi qu’une base stabilisatrice détachable 8 desdites plaques porteuses 7, lesdites plaques porteuses comportant des moyens de fixation 3 différents en nombre de moyens de fixation et/ou en dimensions de moyens de fixation.
  • Dans un mode de réalisation, ledit porte contenants de laboratoire 2 comprends une pluralité de plaques porteuses 7 ainsi qu’une base stabilisatrice détachable 8 desdites plaques porteuses 7, et lesdites plaques porteuses 7 sont chacune d’une couleur différente. Ainsi, elles seront très facilement différenciables et feront gagner du temps à l’utilisateur.
  • Dans un mode de réalisation, ledit dispositif 1 comprend entre 2 et 10 plaques porteuses 7 différentes.
  • Dans un mode de réalisation, ledit dispositif 1 comprend entre 2 et 10 plaques porteuses 7 différentes et ayant des couleurs différentes.
  • Dans un mode de réalisation, ladite plaque porteuse comprend plusieurs pieds 4, lesdits moyens de fixation 3 sont des trous avec méplats, et ladite base stabilisatrice détachable 8 comprend des moyens de fixation audit moyen d’agitation 5.
  • Dans un mode de réalisation, ledit porte contenants de laboratoire 2 comprend des moyens de stabilisation, de préférence des pieds 4. Ainsi, selon la volonté de l’utilisateur, la plaque porteuse 7 peut servir de portoir même en l’absence de base stabilisatrice 8, car elle est stabilisée par les pieds 4.
  • Dans un mode de réalisation, le porte contenants de laboratoire 2 est constitué par ladite plaque porteuse 7.
  • Dans un mode de réalisation, ledit porte contenants de laboratoire 2 comprend des moyens de stabilisation lui permettant de tenir dans une position lui permettant d’accueillir les contenants de laboratoire à la verticale pour éviter que leur contenu ne se renverse.
  • Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, ces moyens de stabilisation sont des pieds 4. Cela est particulièrement avantageux, car cela permet une stabilisation complète.
  • Ainsi, que le porte contenants de laboratoire 2 soit ou non pourvu de contenants de laboratoire, il restera stable, et d’autant plus stable que le nombre de pieds 4 sera élevé.
  • Dans un mode de réalisation, ledit porte contenants de laboratoire 2 comprend un nombre de pieds 4 compris entre 2 et 10, de préférence compris entre 3 et 7, et de préférence 5.
  • Dans un mode de réalisation préféré, ledit porte contenants de laboratoire 2 comprend 3 pieds 4.
  • Dans un mode de réalisation préféré, ledit porte contenants de laboratoire 2 comprend 5 pieds 4.
  • Il est utile de prévoir un grand nombre de pieds 4, cependant il est également nécessaire de prévoir des espaces, entre les pieds 4, dans lesquels les aimant pourront être insérés. Ainsi, il a été mis en évidence qu’un nombre de pieds 4 compris entre 2 et 10 était optimal.
  • Dans un mode de réalisation, M est compris entre 2 et 48, de préférence entre 6 et 36, de préférence entre 16 et 24.
  • Ici encore, il s’agit de disposer du plus grand nombre de moyens de fixation 3 possible, tout en maintenant une dimension globale du dispositif de lavage 1 compatible avec une manipulation facilitée.
  • Dans un mode de réalisation, ledit porte contenants de laboratoire 2 comprend des moyens de fixation 3 de différentes sortes, et plus précisément qui permettent de fixer différents contenants de laboratoire.
  • Les différents contenants de laboratoire pourront notamment présenter des capacités volumiques différentes. Ainsi, au moyen de l’emploi du dispositif de lavage 1, il sera possible de laver des particules magnétiques, y compris au sein de tubes de contenances différentes au sein de la même manipulation de laboratoire.
  • Par exemple, le porte contenants de laboratoire 2 peut comprendre 24 moyens de fixation 3 (M=24), dont 4 moyens de fixation 3 destinés à la fixation de 4 contenants de laboratoire de contenance 15 millilitres, et 20 moyens de fixation 3 destinés à la fixation de 20 contenants de laboratoire de contenance 1,5 millilitres.
  • Dans un mode de réalisation, au moins un moyen de fixation 3 est adapté à la fixation d’un contenant de laboratoire choisi dans le groupe des contenants de laboratoire de contenance 0,5 millilitres, 1,5 millilitres, 2 millilitres, 5 millilitres, 15 millilitres, ou encore 50 millilitres.
  • Dans un mode de réalisation, au moins deux moyens de fixation 3 sont adaptés à la fixation d’un contenant de laboratoire choisi dans le groupe des contenants de laboratoire de contenance 0,5 millilitres, 1,5 millilitres, 2 millilitres, 5 millilitres, 15 millilitres, ou encore 50 millilitres.
  • Dans un mode de réalisation, au moins cinq moyens de fixation 3 sont adaptés à la fixation d’un contenant de laboratoire choisi dans le groupe des contenants de laboratoire de contenance 0,5 millilitres, 1,5 millilitres, 2 millilitres, 5 millilitres, 15 millilitres, ou encore 50 millilitres.
  • Dans un mode de réalisation, ledit aimant est apte à rassembler lesdites particules magnétiques de laboratoire au sein desdits contenants de laboratoire.
  • Dans un mode de réalisation, ledit aimant est apte à rassembler lesdites particules magnétiques de laboratoire au sein desdits contenants de laboratoire, ledit rassemblement ayant lieu au moins 1 millimètre au-dessus du fond dudit contenant de laboratoire. Ce mode de réalisation est préféré, car si une pipette est utilisée pour retirer le milieu souillé, alors un retrait du milieu souillé sans retrait de particules magnétique sera facilité.
  • Dans un mode de réalisation, au moins un moyen de fixation 3, et de préférence la totalité des moyens de fixation 3, sont des trous susceptibles de retenir mécaniquement les contenants de laboratoire.
  • Grâce à l’impression 3D, il est possible de prendre en charge n’importe quel contenant en faisant un trou correspondant sur-mesure. Par exemple, pour certaines expériences impliquant l’utilisation de nouveaux contenants de laboratoire très particuliers, il sera possible de réaliser un porte contenants de laboratoire 2 adapté par impression 3D. Ceci présente un intérêt certain dans le cadre notamment d’un mode de réalisation préféré, dans lequel le porte contenants de laboratoire 2 comprend la plaque porteuse 7 ainsi que la base stabilisatrice 8. En effet, dans ce dernier cas, il suffira d’imprimer en 3D une nouvelle plaque porteuse 7 pour avoir un dispositif entier adapté auxdits nouveaux contenants de laboratoire très particuliers.
  • De préférence, ces trous présentent une partie plate permettant une meilleure action mécanique dudit trou sur lesdits contenants de laboratoire, ils sont appelés dans le cadre de la présente demande « trous avec méplats ».
  • Dans un mode de réalisation, au moins un moyen de fixation 3, et de préférence la totalité des moyens de fixation 3, sont des trous avec méplats susceptibles de retenir mécaniquement les contenants de laboratoire.
  • Dans un mode de réalisation, lesdits moyens de fixation 3 sont disposés sur ledit axe x. Ce mode de réalisation est particulièrement adapté pour l’obtention d’une agitation strictement identique entre les différents contenants de laboratoire. En effet, tous les contenants de laboratoire subissent exactement les mêmes contraintes mécaniques lors de l’agitation.
  • Dans un mode de réalisation, lesdits moyens de fixation 3 sont disposés de part et d’autre dudit au moins un axe x. Ce mode de réalisation est particulièrement adapté pour maximiser le nombre de moyens de fixation 3 tout en conservant une taille globale du porte contenants de laboratoire 2 réduite.
  • Dans un mode de réalisation, lesdits moyens de fixation 3 sont disposés le long de deux axes x1 et x2. Ce mode de réalisation est particulièrement préféré, dans la mesure où il permet une agitation simultanée d’un grand nombre de contenants de laboratoire.
  • Dans un mode de réalisation, lesdits moyens de fixation 3 sont disposés le long de deux axes x1 et x2, tous deux parallèles à l’axe de rotation y.
  • Dans un mode de réalisation, lesdits moyens de fixation 3 sont disposés sur les axes x1 et x2, tous deux parallèles à l’axe de rotation y.
  • Dans un mode de réalisation préféré, lesdits moyens de fixation 3 sont disposés le long de deux axes x1 et x2, tous deux parallèles à l’axe de rotation y, et x1 et x2 sont équidistants dudit axe de rotation y.
  • Dans un mode de réalisation préféré, lesdits moyens de fixation 3 sont disposés sur les axes x1 et x2, tous deux parallèles à l’axe de rotation y, et x1 et x2 sont équidistants dudit axe de rotation y.
  • Dans un mode de réalisation préféré, lesdits moyens de fixation 3 sont numérotés N. Ce mode de réalisation est très avantageux, dans la mesure où il permet une éventuelle prise de note relative à chaque contenant de laboratoire lors de la manipulation. De plus, dans un mode de réalisation préféré, les numéros sont agencés de telle manière que tous les moyens de fixation 3 peuvent être alignés avec une seule rotation de 180° dudit porte contenants de laboratoire 2. Par exemple, un tel mode de réalisation est présenté en .
  • Dans un mode de réalisation, ledit moyen d’agitation 5 est un agitateur rotatif.
  • Dans un mode de réalisation, ledit moyen d’agitation 5 est un agitateur rotatif à tambour.
  • Dans un mode de réalisation, ledit moyen d’agitation 5 est alimenté par du courant électrique.
  • Dans un mode de réalisation, ledit moyen d’agitation 5 comprend une alimentation électrique et un moteur électrique.
  • Dans un mode de réalisation, ledit moyen d’agitation 5 comprend une alimentation électrique, un moteur électrique, ainsi qu’un contrôleur 9.
  • Dans un mode de réalisation, ledit moyen d’agitation 5 comprend un écran d’affichage 10. Cet écran peut par exemple afficher le nombre de tour par minutes ainsi qu’un compte à rebours.
  • Dans un mode de réalisation, le contrôleur 9 permet de prédéterminer les paramètres suivants : la vitesse de rotation, déterminée par le nombre de rotations par minute lorsque les rotations sont complètes ou le nombre de « va-et-vient » par minute lorsque les translations sont en « va-et-vient », ainsi que la durée de l’agitation (en minutes).
  • Dans un mode de réalisation, le contrôleur 9 permet de déterminer les paramètres suivants : la vitesse de rotation, déterminée par le nombre de rotations par minute lorsque les rotations sont complètes ou le nombre de « va-et-vient » par minute lorsque les translations sont en « va-et-vient », ainsi que la durée de l’agitation (en minutes).
  • Dans un mode de réalisation, le contrôleur 9 permet de prédéterminer les paramètres suivants : la vitesse de rotation, ainsi que la durée de l’agitation.
  • Dans un mode de réalisation, le contrôleur 9 permet de déterminer les paramètres suivants : la vitesse de rotation, ainsi que la durée de l’agitation.
  • Maitriser la vitesse de rotation est crucial. En effet, cette vitesse doit permettre des retournements réguliers indispensables à un lavage de qualité.
  • Par ailleurs, maitriser la durée de l’agitation est également très important. En effet, une agitation trop courte peut donner lieu à un lavage de mauvaise qualité. Inversement, une agitation trop longue peut donner lieu à une dégradation des particules magnétiques.
  • Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, ledit moyen d’agitation 5 est alimenté par du courant électrique issu d’une batterie rechargeable. Ceci est particulièrement avantageux, dans la mesure où la mobilité de l’agitateur est grandement améliorée. Par exemple, ce dernier peut être disposé, si la manipulation de laboratoire l’exige, au sein d’un réfrigérateur, ce qui serait difficile si ce dernier était alimenté par une alimentation secteur. En effet, dans l’art antérieur, on a pu observer la pratique suivante : l’agitateur est branché sur le secteur, l’agitateur est au sein d’un réfrigérateur, et le câble d’alimentation passe par le joint du réfrigérateur ; cela est imparfait du point de vue de l’encombrement, et dangereux (risques d’électrocutions et de courts-circuits, notamment dus à l’humidité).
  • Dans un mode de réalisation, ledit moyen d’agitation 5 est apte à induire des rotations complètes. Dans un mode de réalisation, ledit moyen d’agitation 5 est apte à induire des rotations complètes car il n’existe pas d’obstacle mécanique auxdites rotations. Dans un mode de réalisation, ledit moyen d’agitation 5 est apte à induire des rotations complètes successives. Ce type de rotation sera particulièrement adapté de manière générale, car il induit de très fortes turbulences à l’intérieur contenants de laboratoire, ce qui permet la réalisation d’un lavage de qualité. Par exemple, dans la demande CN207976333 précitée, aucune rotation complète ne peut avoir lieu car il existe des obstacles mécaniques limitant l’amplitude de la rotation, ce qui est très désavantageux dans le tout autre contexte qu’est celui de l’invention.
  • Dans un mode de réalisation, ledit moyen d’agitation 5 est apte à induire des rotations complètes successives, et ces rotations sont réalisées à une cadence comprise entre 10 et 100 rotations par minute, de préférence comprise entre 15 et 80 rotations par minutes, de préférence comprise entre 30 et 70 rotations par minutes, de préférence comprise entre 40 et 60 rotations par minutes, de préférence 50 rotations par minutes.
  • Dans un mode de réalisation, ledit moyen d’agitation 5 est apte à induire des rotations complètes successives durant un temps compris entre 1 minute et 24 heures, de préférence compris entre 2 minutes et 10 heures, de préférence compris entre 30 minutes et 5 heures. Il est important que la durée soit suffisante pour réaliser un bon lavage, sans être trop longue afin de ne pas détériorer les particules magnétiques.
  • Dans un mode de réalisation, ledit moyen d’agitation 5 est apte à induire des rotations complètes successives, et ces rotations sont réalisées à une cadence comprise entre 10 et 100 rotations par minute et durant un temps compris entre 1 minute et 24 heures.
  • Dans un mode de réalisation, ledit moyen d’agitation 5 est apte à induire des rotations de type « va-et-vient » selon une amplitude comprise entre 10 et 180 degrés. Ce type de rotation sera particulièrement adapté en cas de crainte concernant l’étanchéité desdits contenants de laboratoire.
  • Dans un mode de réalisation, ladite base 6 comprend une pluralité d’aimants.
  • Dans un mode de réalisation, lesdits aimants sont de grade N52.
  • Dans un mode de réalisation, la force d’attraction desdits aimants, également appelée « puissance », est comprise entre 1kg et 100kg, de préférence comprise entre 10kg et 40kg, de préférence d’environ 25 kg.
  • Dans un mode de réalisation, lesdits aimants sont des aimants permanents. Ceci est très avantageux : le champ magnétique est continu, il ne provoque pas de consommation d’électricité ni de variations dans le temps.
  • Dans un mode de réalisation, les trois dimensions d’au moins un aimant correspondent aux intervalles suivants : 5-15 millimètres, 15-25 millimètres et 30-50 millimètres.
  • Dans un mode de réalisation, les trois dimensions des aimants correspondent aux intervalles suivants : 8-12 millimètres, 18-22 millimètres et 35-45 millimètres.
  • Dans un mode de réalisation, au moins un aimant a une plus petite dimension supérieure à 3 millimètres, de préférence supérieure à 5 millimètres, de préférence supérieure à 7 millimètres.
  • Dans un mode de réalisation, tous les aimants ont une plus petite dimension supérieure à 3 millimètres, de préférence supérieure à 5 millimètres, de préférence supérieure à 7 millimètres.
  • Dans un mode de réalisation, ladite base 6 comprend une alternance d’aimants et de parties évidées compatibles avec les pieds 4 du porte contenants de laboratoire 2. Ce mode de réalisation est particulièrement préféré, car il permet une totale stabilisation du porte contenants de laboratoire 2 au sein de ladite base 6.
  • Dans un mode de réalisation, les aimants sont disposés de telle manière à ce que l’environnement magnétique de l’intérieur des contenants de laboratoire soit identique d’un contenant de laboratoire à un autre. Ce mode de réalisation est particulièrement préféré, car il permettra notamment une parfaite répétabilité et identité entre les différents contenants de laboratoire eu égard au rassemblement des particules magnétiques.
  • Dans un mode de réalisation, ledit moyen d’agitation 5 est physiquement distinct. Notamment, il n’est pas solidarisé d’un plan de travail, ce qui permet son déplacement de manière facilitée.
  • Dans un mode de réalisation, la distance entre chaque moyen de fixation et l’axe de rotation est comprise entre 10 millimètres et 15 millimètres.
  • Dans un mode de réalisation, tous les moyens de fixation ont une distance à l’axe de rotation identique. Dans un mode de réalisation, elle est comprise entre 10 millimètres et 15 millimètres. Cela est particulièrement avantageux, car le lavage sera identique d’un contenant de laboratoire à l’autre.
  • Dans un mode de réalisation, le dispositif de lavage 1 selon l’invention a une masse comprise entre 1500 grammes et 4000 grammes, de préférence comprise entre 2000 grammes et 3500 grammes, de préférence comprise entre 2300 grammes et 2700 grammes.
  • Dans un mode de réalisation, le dispositif de lavage 1 selon l’invention a une masse inférieure à 4000 grammes, de préférence inférieure à 3000 grammes, de préférence inférieure à 2500 grammes.
  • Dans un mode de réalisation, ledit porte contenant de laboratoire 2 a une masse comprise entre 10 grammes et 1000 grammes, de préférence comprise entre 20 grammes et 500 grammes, de préférence comprise entre 200 grammes et 300 grammes.
  • Dans un mode de réalisation, ledit porte contenant de laboratoire 2 a une masse inférieure à 1000 grammes, de préférence inférieure à 500 grammes, de préférence inférieure à 300 grammes.
  • Dans un mode de réalisation, ledit moyen d’agitation 5 a une masse comprise entre 200 grammes et 3000 grammes, de préférence comprise entre 500 grammes et 2000 grammes, de préférence comprise entre 1000 grammes et 1500 grammes.
  • Dans un mode de réalisation, ledit moyen d’agitation 5 a une masse inférieure à 3000 grammes, de préférence inférieure à 2000 grammes, de préférence inférieure à 1500 grammes.
  • Dans un mode de réalisation, ladite base 6 a une masse comprise entre 100 grammes et 2000 grammes, de préférence comprise entre 400 grammes et 1200 grammes, de préférence comprise entre 700 grammes et 1000 grammes.
  • Dans un mode de réalisation, ladite base 6 a une masse inférieure à 2000 grammes, de préférence inférieure à 1000 grammes, de préférence inférieure à 900 grammes.
  • Avoir un dispositif léger est très avantageux pour des raisons évidentes d’ergonomie et de manipulation.
  • Dans le cadre de la présente demande, comme l’homme du métier l’aura immédiatement compris, toutes les dénominations « parallèle(s) » désignent notamment un ou plusieurs parallélisme(s) dans l’espace.
  • L’invention concerne également un kit comprenant un dispositif de lavage 1 selon l’invention, ainsi qu’une pluralité de contenants de laboratoire comprenant chacun un bouchon hermétique. Dans un mode de réalisation, ledit kit comprend de préférence au moins 2, de préférence au moins 4, de préférence au moins 6, de préférence au moins 8, de préférence au moins 10, de préférence au moins 12, de préférence au moins 14, de préférence au moins 16, de préférence au moins 18, de préférence au moins 20, de préférence au moins 22, de préférence au moins 24, de préférence au moins 26, de préférence au moins 28, de préférence au moins 30, de préférence au moins 32, de préférence au moins 34, de préférence au moins 36 contenants de laboratoire comprenant chacun un bouchon hermétique. Plus le nombre de contenants de laboratoire est élevé, plus le kit est efficace, en ce qu’il permet plus de lavages simultanés.
  • L’invention concerne également un procédé de lavage utilisant le dispositif de lavage 1 selon l’invention.
  • Les modes de réalisation décrits pour le dispositif de lavage 1 sont donc également applicables au procédé de lavage.
  • L’invention concerne donc également un procédé de lavage de particules magnétiques, comprenant les étapes suivantes :
  • - étape A : mise en présence desdits particules magnétiques et d’une solution de lavage au sein de plusieurs contenants de laboratoire ;
  • - étape B : montage des contenants de laboratoire sur un porte contenants de laboratoire 2 ;
  • - étape C : montage du porte contenants de laboratoire 2 sur un moyen d’agitation 5 ; les étapes A, B et C pouvant être réalisées dans n’importe quel ordre ;
  • - étape D : mise sous agitation au moyen du moyen d’agitation 5 puis arrêt de l’agitation ;
  • - étape E : dissociation dudit porte contenants de laboratoire 2 et dudit moyen d’agitation 5 ;
  • - étape F : montage dudit porte contenants de laboratoire 2 sur une base 6 adaptée au porte contenants de laboratoire 2 comprenant au moins un aimant apte à être lié de manière réversible audit porte contenants de laboratoire 2 et à rassembler lesdites particules magnétiques de laboratoire au sein desdits contenants de laboratoire ;
  • - étape G : retrait de ladite solution de lavage.
  • Dans un mode de réalisation, lesdites particules magnétiques de laboratoire sont des billes magnétiques.
  • Dans un mode de réalisation, les étapes A-G sont répétées entre 2 et 100 fois.
  • Dans un mode de réalisation, les étapes A-G sont répétées entre 2 et 50 fois.
  • Dans un mode de réalisation, les étapes A-G sont répétées entre 2 et 20 fois.
    • Description des figures
  •  : vue en perspective du dispositif de lavage 1 de particules magnétiques de laboratoire selon l’invention, les 3 éléments principaux étant dissociés.
  • Plus précisément, il est visible à la fois le porte contenants de laboratoire 2 comprenant des pieds 4 ainsi que 24 moyens de fixation 3 de contenants de laboratoire qui sont des trous avec méplats disposés sur les axes x1 et x2, le moyen d’agitation 5 avec un axe de rotation y parallèle aux axes x1 et x2 lorsque le porte contenants de laboratoire 2 est installé sur le moyen d’agitation 5, ainsi que la base 6 de porte contenants de laboratoire 2 comprenant douze aimants pris dans la masse.
  • La base 6 comprend également des évidements qui correspondent aux pieds du porte contenants de laboratoire 2. Lorsque le porte contenants de laboratoire 2 est installé sur ladite base 6, les pieds 4 dudit porte contenants de laboratoire 2 s’insèrent dans les évidements de ladite base 6.
  • Il est également visible deux contenants de laboratoires fermés hermétiquement.
  •  : vue en perspective du dispositif de lavage 1 de particules magnétiques de laboratoire selon l’invention, avec le porte contenants de laboratoire 2 monté sur le moyen d’agitation 5.
  • Comme visible, lorsqu’une agitation doit être réalisée, il est impératif que les particules magnétiques soient libres au sein desdits contenants de laboratoire, et donc que la base 6 soit dissociée. Pour des raisons de clarté de la figure, les portes contenants de laboratoire, par exemple les tubes à essai, n’ont pas été représentés sur cette figure, bien qu’ils soient évidemment en place lors de l’agitation. Les axes y, x1 et x2 ne sont pas représentés par souci de clarté de la figure.
  • Il est également visible deux contenants de laboratoires fermés hermétiquement.
  •  : vue en perspective d’un porte contenants de laboratoire 2 selon l’invention comprenant 24 moyens de fixation 3 étant des trous avec méplats.
  • Au sein de ce porte contenants de laboratoire 2, les trous avec méplats sont de différentes tailles, et donc adaptés à différents contenants de laboratoire. Il est ainsi possible d’agiter en même temps des contenants de laboratoire de différents volumes.
  • Il est visible sur la figure quatre types de contenants de laboratoires de différentes contenances, tous fermés hermétiquement.
  •  : vue en perspective de deux plaques porteuses 7 différentes, ces plaques porteuses 7 comportent notamment des moyens de fixation 3 différents, ces deux plaques porteuses 7 peuvent être adaptées à une même base stabilisatrice détachable 8. Chaque plaque porteuse comprend des pieds 4. La base stabilisatrice comprend des moyens de fixation 11 au moyen d’agitation 5 (moyen d’agitation 5 non représenté). Les deux plaques porteuses 7 comportent des couleurs différentes (non visible sur la figure).
  • : vue en perspective d’un porte contenants de laboratoire 2 comprenant M moyens de fixation 3 de contenants de laboratoires, avec M=24, lesdits moyens de fixation 3 étant disposés le long de deux axes parallèles. Ces deux axes ne sont pas représentés sur la figure dans un souci de clarté (afin que les numéros N soient lisibles), ils correspondent aux axes x1 et x2 représentés sur la . Les moyens de fixation 3 sont numérotés par gravure ou impression sur ledit porte contenants de laboratoire. Les numéros sont agencés de telle manière qu’il suffit que ledit porte contenants de laboratoire 2 soit retourné de 180° pour que l’ensemble des contenants de laboratoires soient facilement accessibles. Dans le cas où le porte contenants de laboratoire 2 est réalisée en impression 3D, les numéros peuvent être ainsi également imprimés.
  • Exemple 1 : Utilisation d’un dispositif selon l’invention dans le cadre d’une manipulation d’immunoprécipitation de la chromatine
  • Il a été réalisé une manipulation d’immunoprécipitation de la chromatine sur 12 échantillons. La chromatine est immuno-précipitée grâce à un anticorps spécifique anti-P65-RELA ainsi qu’un anticorps contrôle non spécifique IgG.
  • La manipulation mettra donc en jeu deux fois 12 échantillons, donc 24 échantillons.
  • Dans le cadre du présent exemple, le dispositif de lavage 1 utilisé est celui représenté en .
  • Etape I : Cross- link
  • 1. Préparer et annoter 12 tubes de 1.5 ml correspondant aux 12 échantillons.
  • 2. Laver les 12 boites de cellules avec 5 ml de solution saline tamponnée au phosphate (Phosphate Buffered Saline, ci-après « PBS ») à température ambiante. Enlever le PBS par aspiration.
  • 3. Ajouter 20ml de milieu de culture avec 1% de formaldéhyde par boite. Incuber 10 minutes à température ambiante sur agitateur.
  • 4. Ajouter 3 ml de PBS avec 1M de glycine dans le milieu pour stopper la réaction. Incuber 5 min à température ambiante sur agitateur.
  • 5. Enlever le milieu et rincer 2 fois avec 5 ml de PBS froid.
  • 6. Aspirer le PBS et rajouter 2 ml de PBS froid. Gratter les 12 boites de cellules et les transférer dans un tube 5 ml et garder sur glace.
  • 7. Centrifuger les 12 tubes 5 min à 1500 rpm à 4°C. Jeter surnageant par aspiration.
  • 8. Placer les tubes centrifugés sur un portoir et resuspendre les culots de cellules dans 1 ml de tampon de lyse.
  • 9. Placer les 12 tubes sur un agitateur rotatif et incuber 30 min à 4°C (15 rotations par minutes, ci-après « rpm »).
  • Lors de cette étape I, l’utilisation du dispositif selon l’invention permet une unique manipulation (du porte contenant de laboratoire) qui est utilisé depuis la sous-étape 8. et qui est placé, lors de la sous-étape 9., directement sur le moyen d’agitation.
  • Pour rappel, si le protocole classique avait été employé, il aurait fallu 12 manipulations de plus entre les étapes 8. et 9..
  • Etape II : Fragmentation de la chromatine
  • 1. Récupérer les 12 tubes à 4°C et les centrifuger 5 min à 3000 rpm à 4°C.
  • 2. Transférer les tubes sur un portoir et jeter les surnageants, puis resuspendre les culots dans 1 ml de tampon de fragmentation.
  • 3. Fragmenter les 12 échantillons en utilisant le Covaris.
  • Etape III : Clarification de la chromatine
  • 1. Transférer les lysats dans 12 tubes de 1,5 ml et centrifuger 10 min à 13 000 rpm à 4°C.
  • 2. Transférer les surnageants dans 12 tubes de 1,5 ml et les placer sur glace.
  • 3. Réaliser une extraction au Phénol-Chloroforme sur les 12 tubes afin de récupérer la chromatine purifiée.
  • 4. Réaliser une électrophorèse sur gel d’agarose 2% d’une partie de la chromatine purifiée pour vérifier la fragmentation.
  • 5. Doser la chromatine des 12 échantillons pour déterminer leurs concentrations.
  • 6. Pour chaque échantillon et chaque anticorps, placer 25µg de chromatine dans des tubes 1.5ml et compléter à 1 ml avec du tampon de dilution. Ici nous avons 12 échantillons et 2 anticorps (P65-RELA et IgG contrôle) ce qui nous fait 24 tubes 1.5 ml.
  • Etape IV : Lavage des billes magnétiques
  • 1. Prélever 1.5 ml de billes magnétiques et les placer dans un tube 5 ml.
  • 2. Placer le tube 5 ml sur un portoir magnétique. Enlever le surnageant.
  • 3. Ajouter 4 ml de PBS et incuber sur agitateur rotatif 5 min à 4°C (20 rpm).
  • 4. Répéter 2 fois les étapes 2. et 3. (3 lavages au PBS en tout).
  • 5. Placer le tube 5 ml sur un portoir magnétique. Enlever le surnageant.
  • 6. Ajouter 5 ml de tampon de dilution et incuber sur agitateur rotatif 5 min à 4°C (20 rpm).
  • 7. Répéter 2 fois les étapes 5. et 6. (3 lavages au tampon de dilution en tout).
  • 8. Placer le tube 5 ml sur un portoir magnétique. Enlever le surnageant.
  • 9. Ajouter 1.5 ml de tampon de dilution et incuber sur roue 5 min à 4°C (20 rpm).
  • Etape V : Pré-clearing
  • 1. Ajouter 30 µL de billes lavées (de l’étape IV.9) dans chacun des 24 tubes (de l’étape III.6). Garder le reste des billes à 4°C.
  • 2. Placer les 24 tubes sur un agitateur rotatif 30 min à 4°C (15 rpm).
  • 3. Placer les 24 tubes sur le portoir magnétique. Transférer les surnageants dans des tubes 1,5 ml.
  • Lors de cette étape V, avec l’utilisation du dispositif selon l’invention, les tubes à essais restent sur le portoir de la fin de la sous-étape 1. jusqu’à la sous-étape 3.
  • Pour rappel, si le protocole classique avait été employé, il aurait fallu réaliser 24 manipulations lors de la sous-étape 2. et 24 manipulations lors de la sous-étape 3..
  • Etape VI : Immunoprécipitation
  • 1. Ajouter les anticorps dans les 24 tubes (12 tubes RELA et 12 tubes IgG) : 5 µg d’anticorps pour 25 µg de chromatine.
  • 2. Placer les 24 tubes sur l’agitateur rotatif in incuber sur la nuit à 4°C (10-15 rpm).
  • 3. Placer les 24 tubes sur un portoir.
  • 4. Ajouter 30 µl de billes lavées et conservées à 4°C (étape V.1) par tube.
  • 5. Placer les 24 tubes sur l’agitateur rotatif et incuber 1 à 2 heures à 4°C (10-15 rpm).
  • Lors de cette étape VI, avec l’utilisation du dispositif selon l’invention, les tubes à essais restent sur le portoir de la fin de la sous-étape 1. jusqu’à la sous-étape 5.
  • Pour rappel, si le protocole classique avait été employé, il aurait fallu réaliser 24 manipulations lors de la sous-étape 2., 24 manipulations lors de la sous-étape 3. et encore 24 manipulations lors de la sous-étape 5..
  • Etape VII : Lavages
  • 1. Placer les 24 tubes sur le portoir magnétique. Jeter le surnageant.
  • 2. Ajouter 1 ml tampon de lavage I dans chaque tube.
  • 3. Placer les 24 tubes sur l’agitateur rotatif et incuber 5 min à 4°C (20 rpm).
  • 4. Placer les 24 tubes sur le portoir magnétique. Jeter le surnageant.
  • 5. Ajouter 1 ml tampon de lavage II dans chaque tube.
  • 6. Placer les 24 tubes sur l’agitateur rotatif et incuber 5 min à 4°C (20 rpm).
  • 7. Placer les 24 tubes sur le portoir magnétique. Jeter le surnageant.
  • 8. Ajouter 1 ml tampon de lavage III dans chaque tube.
  • 9. Placer les 24 tubes sur l’agitateur rotatif et incuber 5 min à 4°C (20 rpm).
  • 10. Placer les 24 tubes sur le portoir magnétique. Jeter le surnageant.
  • 11. Ajouter 1 ml tampon de lavage IV dans chaque tube.
  • 12. Placer les 24 tubes sur l’agitateur rotatif et incuber 5 min à 4°C (20 rpm).
  • 13. Placer les 24 tubes sur le portoir magnétique. Jeter le surnageant.
  • 14. Ajouter 1 ml tampon de lavage V dans chaque tube.
  • 15. Placer les 24 tubes sur l’agitateur rotatif et incuber 5 min à 4°C (20 rpm).
  • 16. Placer les 24 tubes sur le portoir magnétique. Jeter le surnageant.
  • 17. Ajouter 1 ml de tampon d’élution dans chaque tube.
  • 18. Placer les 24 tubes sur l’agitateur rotatif et incuber 5 min à 4°C (20 rpm).
  • 19. Placer les 24 tubes sur le portoir magnétique. Jeter le surnageant.
  • 20. Ajouter 1 ml de tampon d’élution dans chaque tube.
  • 21. Placer les 24 tubes sur l’agitateur rotatif et incuber 5 min à 4°C (20 rpm).
  • 22. Placer les 24 tubes sur le portoir magnétique. Jeter le surnageant.
  • (Si rapport signal/bruit de fond trop faible, doubler tous les lavages ci-dessus)
  • Pour rappel, si le protocole classique avait été employé (sans doublement des lavages), il aurait fallu réaliser 360 manipulations.
  • Etape VIII : Elution, reverse crosslink et purification
  • 1. Resuspendre les billes dans 0.5 ml de tampon d’élution.
  • 2. Ajouter 5 µl de protéinase K (20 mg/mL) dans chaque tube.
  • 3. Incuber au moins 4h à 65°C sur le Thermomixeur (1000 rpm).
  • 4. Ajouter 1 volume de Phenol:Chloroform:Alcool-Isoamylique 25:24:1 (0.5 ml).
  • 5. Vortexer et centrifuger 10 min à 13000 rpm à température ambiante.
  • 6. Récolter la phase aqueuse.
  • 7. Ajouter 1 µl de glycogène et 0.7 volume d’isopropanol (0.35 ml).
  • 8. Vortexer, centrifuger 20 min à 13000 rpm à 4°C.
  • 9. Enlever le surnageant et ajouter 1 ml d’éthanol 70%.
  • 10. Vortexer et centrifuger 5 minutes à 13000 rpm à 4°C.
  • 11. Enlever le surnageant et laisser les culots sécher tubes ouverts.
  • 12. Resuspendre les culots de chromatine immunoprécipitée dans 60 µl d'eau sans DNAse (20 µl si Chip-seq).
  • Un résumé de l’apport de l’utilisation du dispositif selon l’invention est donné dans le Tableau 1.
  • Etapes Nombre de manipulations
    en utilisant le dispositif selon l’invention    		 Nombre de manipulations
    sans utiliser le dispositif selon l’invention    		 Voyages chambre froide sans utiliser le dispositif selon l’invention
    Etape I 1 12 1
    Etape II 0 0 1
    Etape III 0 0 0
    Etape IV 0 0 10
    Etape V 2 48 2
    Etape VI 3 72 3
    Etape VII
    (si signal/bruit trop faible)    		 15
    (29)    		 360
    (696)    		 15
    (29)
    Etape VIII 0 0 0
    TOTAL
    (si signal/bruit faible)    		 21
    (35)    		 492
    (828)    		 32
    (46)
    Tableau 1 : Apport de l’utilisation du dispositif selon l’invention
    •

Claims (20)

  1. Dispositif de lavage (1), comprenant :
    - un porte contenants de laboratoire (2) comprenant M moyens de fixation (3) de contenants de laboratoires, avec M>1, lesdits moyens de fixation (3) étant disposés le long d’au moins un axe (x) ;
    - un moyen d’agitation (5) apte à être lié de manière réversible audit porte contenants de laboratoire (2) et apte à induire des rotations selon un axe de rotation (y) parallèle audit au moins un axe (x) dudit porte contenants de laboratoire (2) lorsque ce dernier est lié audit moyen d’agitation (5) ;
    - une base (6) de porte contenants de laboratoire (2) comprenant au moins un aimant, ladite base (6) étant apte à être liée de manière réversible audit porte contenants de laboratoire (2).
  2. Dispositif de lavage (1) selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit porte contenants de laboratoire (2) comprends une pluralité de plaques porteuses (7) ainsi qu’une base stabilisatrice détachable (8) desdites plaques porteuses (7).
  3. Dispositif de lavage (1) selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ladite base (6) comprend une pluralité d’aimants.
  4. Dispositif de lavage (1) selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu’au moins un aimant a une plus petite dimension supérieure à 3 millimètres, de préférence supérieure à 5 millimètres, de préférence supérieure à 7 millimètres.
  5. Dispositif de lavage (1) selon la revendication 3, caractérisé en ce que lesdits aimants sont de grade N52.
  6. Dispositif de lavage (1) selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ledit porte contenants de laboratoire (2) comprend des moyens de stabilisation, de préférence des pieds (4).
  7. Dispositif de lavage (1) selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que M est compris entre 2 et 48, de préférence entre 6 et 36, de préférence entre 16 et 24.
  8. Dispositif de lavage (1) selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu’au moins un moyen de fixation (3), et de préférence la totalité des moyens de fixation (3), sont des trous susceptibles de retenir mécaniquement les contenants de laboratoire.
  9. Dispositif de lavage (1) selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu’au moins un moyen de fixation (3), et de préférence la totalité des moyens de fixation (3), sont des trous avec méplats susceptibles de retenir mécaniquement les contenants de laboratoire.
  10. Dispositif de lavage (1) selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ledit moyen d’agitation (5) comprend une alimentation électrique, un moteur électrique, ainsi qu’un contrôleur (9).
  11. Dispositif de lavage (1) selon la revendication 10, caractérisé en ce que le contrôleur (9) permet de prédéterminer les paramètres suivants : la vitesse de rotation, ainsi que la durée de l’agitation.
  12. Dispositif de lavage (1) selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu’il a une masse inférieure à 4000 grammes, de préférence inférieure à 3000 grammes, de préférence inférieure à 2500 grammes.
  13. Dispositif de lavage (1) selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ledit porte contenant de laboratoire (2) a une masse inférieure à 1000 grammes, de préférence inférieure à 500 grammes, de préférence inférieure à 300 grammes.
  14. Dispositif de lavage (1) selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ledit moyen d’agitation (5) a une masse inférieure à 3000 grammes, de préférence inférieure à 2000 grammes, de préférence inférieure à 1500 grammes.
  15. Dispositif de lavage (1) selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ladite base (6) a une masse inférieure à 2000 grammes, de préférence inférieure à 1000 grammes, de préférence inférieure à 900 grammes.
  16. Dispositif de lavage (1) selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ledit moyen d’agitation (5) est apte à induire des rotations complètes successives, et ces rotations sont réalisées à une cadence comprise entre 10 et 100 rotations par minute, de préférence comprise entre 15 et 80 rotations par minutes, de préférence comprise entre 30 et 70 rotations par minutes, de préférence comprise entre 40 et 60 rotations par minutes, de préférence 50 rotations par minutes.
  17. Dispositif de lavage (1) selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ledit moyen d’agitation (5) est apte à induire des rotations complètes successives durant un temps compris entre 1 minute et 24 heures, de préférence compris entre 2 minutes et 10 heures, de préférence compris entre 30 minutes et 5 heures. Il est important que la durée soit suffisante pour réaliser un bon lavage, sans être trop longue afin de ne pas détériorer les particules magnétiques.
  18. Dispositif de lavage (1) selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que les trois dimensions d’au moins un aimant correspondent aux intervalles suivants : 5-15 millimètres, 15-25 millimètres et 30-50 millimètres.
  19. Dispositif de lavage (1) selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ladite base (6) de porte contenants de laboratoire (2) comprenant au moins un aimant et ledit moyen d’agitation (5) ne sont pas assemblables
  20. Dispositif de lavage (1) selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu’il constitue un dispositif de lavage de particules magnétiques de laboratoire.
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