EP4203702A1 - Utilisation d 'un hydrolysat à hautes teneurs en acides aminés libres dans un aliment pour les crevettes en croissance - Google Patents

Utilisation d 'un hydrolysat à hautes teneurs en acides aminés libres dans un aliment pour les crevettes en croissance

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Publication number
EP4203702A1
EP4203702A1 EP21766491.1A EP21766491A EP4203702A1 EP 4203702 A1 EP4203702 A1 EP 4203702A1 EP 21766491 A EP21766491 A EP 21766491A EP 4203702 A1 EP4203702 A1 EP 4203702A1
Authority
EP
European Patent Office
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weight
hydrolyzate
content ranging
ranging
relative
Prior art date
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Pending
Application number
EP21766491.1A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Pierrick KERSANTE
Joël Duperray
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bretagne Chimie Fine SAS
Original Assignee
Bretagne Chimie Fine SAS
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Filing date
Publication date
Application filed by Bretagne Chimie Fine SAS filed Critical Bretagne Chimie Fine SAS
Publication of EP4203702A1 publication Critical patent/EP4203702A1/fr
Pending legal-status Critical Current

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Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/20—Animal feeding-stuffs from material of animal origin
    • A23K10/26—Animal feeding-stuffs from material of animal origin from waste material, e.g. feathers, bones or skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/80—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for aquatic animals, e.g. fish, crustaceans or molluscs

Definitions

  • the present invention relates to the field of aquaculture and more particularly to shrimp farming. More specifically, the invention relates to a food composition comprising a keratin hydrolyzate with a high content of free amino acids for feeding shrimp at the post-larval stage as well as the use of compositions comprising a keratin hydrolyzate with a high content of free amino acids. for feeding shrimp at the post-larval stage.
  • patent application WO2020130770A1 describes the use of a probiotic composition for feeding shrimp larvae comprising bacteria of the Lactobacillus spp type. , Bacillus spp and Bifidobacterium spp, a lyophilisate of Saccharomyces cerevisiae, proteins of animal or vegetable origin, vitamins, calcium, mono- and polysaccharides, fatty acids.
  • CA3071308 A1 targets a hydrolyzate with a high content of free amino acids defined by its free valine, isoleucine and leucine content as well as the use of the hydrolyzate for animal feed.
  • Natural keratin materials mainly comprise polypeptides of high molecular weight and of a highly branched structure making them not very accessible to enzymes. This natural keratin material is not easily digestible. However, it is known that the hydrolysis of keratin materials into amino acids improves their digestibility.
  • the keratin hydrolysates offered for sale, in particular as ingredients for formulating recipes in animal nutrition or as raw materials for animal feed, are generally obtained by very partial hydrolysis. These hydrolysates generally have a high molecular mass due to the presence of high levels of so-called “linked” amino acids which form peptides. Typically the average molecular weight of commercial compositions is at least 5000 daltons. These keratin hydrolysates are relatively indigestible and contain very little or no free amino acids. Indeed, it is technically difficult and expensive industrially to obtain a keratin hydrolyzate having a very high level of free amino acids. In addition, excessive hydrolysis presents a risk of denaturation and destruction of amino acids.
  • the authors of the present invention have succeeded in preparing a food for feeding shrimp comprising a particular keratin hydrolyzate in which almost all the amino acids are free amino acids, in particular the amino acids among the most difficult to obtain in free form during the hydrolysis process such as valine, leucine, isoleucine are obtained in free form.
  • the free amino acids obtained according to the invention in particular valine, leucine, isoleucine, are not damaged or denatured.
  • the present invention relates to a food composition for feeding shrimp aged 10 to 90 days, preferably 20 to 50 days, containing a keratin hydrolyzate comprising at least 88% by weight of free amino acids relative to the total weight of the amino acids of the hydrolyzate, the rest of the amino acids of the hydrolyzate being in the form of peptides having a molecular mass less than or equal to 800 Dalton, said hydrolyzate comprising arginine in a content ranging from 5 to 8% by weight relative to the total weight of the hydrolyzate, glutamic acid in a content ranging from 8 to 13% by weight relative to the total weight of the hydrolyzate, proline in a content ranging from 8 to 13% by weight relative to the total weight of the hydrolyzate.
  • the present invention also relates to the use of a keratin hydrolyzate comprising at least 88% by weight of free amino acids relative to the total weight of the amino acids of the hydrolyzate, the rest of the amino acids of hydrolyzate being in the form of peptides having a mass molecular weight less than or equal to 800 Dalton, said hydrolyzate comprising arginine in a content ranging from 5 to 8% by weight relative to the total weight of the hydrolyzate, glutamic acid in a content ranging from 8 to 13% by weight relative to the total weight of the hydrolyzate, proline in a content ranging from 8 to 13% by weight relative to the total weight of the hydrolyzate, in a feed for the feeding of shrimp aged from 10 to 90 days, preferably 20 to 50 days.
  • said food comprises from 0.5 to 10%, preferably from 1 to 6% by weight of hydrolyzate relative to the total weight of the food.
  • said preferably complete food is used for feeding shrimp from the post-larval stage, that is to say at least 10 days old, preferably at least 20 days old. and up to 90 days of age, preferably up to 50 days of age.
  • the present invention relates to the use of a hydrolyzate in said food according to the invention to improve the palatability effect of said food.
  • the present invention also relates to the use of a hydrolyzate in said food according to the invention to increase the biomass of shrimp.
  • post-larval stage within the meaning of the present invention, is meant shrimp which have a stage of anatomical development identical to that of adult shrimp, that is to say a stage subsequent to the Mysis stage.
  • shrimp at the post-larval stage are between 10 days old (stage PL1) and 29 days (stage PL20) at the time of their transfer to farming.
  • stage PL1 10 days old
  • stage PL20 29 days
  • the 20 days of the post-larval stage are named PL1, PL2, ... until PL20 , they correspond respectively to the 10th day, 11th day... until the 29th day of age of the shrimps.
  • the expression “from the post-larval stage” means from the io th day of age of the shrimp and the expression “from the juvenile stage” means from the 50 th day age of shrimp.
  • the food, object of the present invention is dedicated to feeding farmed shrimp at a stage from the post-larval stage and extending up to 8 weeks of growth.
  • the food, object of the present invention is dedicated to the feeding of farmed shrimp having an average individual weight ranging from 0.003 g to 4 g.
  • “shrimp” is meant any type of decapod crustacean, in particular the following species: Litopenaeus vannamei and Penaeus monodon
  • 0.5% to 10% is meant all the following values 0.5; 1; 1,5,2; 2.5;3;3.5; 4; 4.5; 5;5.5; 6; 6.5; 7; 7.5; 8; 8.5;9; 9.5, 10.
  • the hydrolyzate used according to the present invention is distinguished by its high rate of amino acids in the free form: at least 88% by weight of free amino acids relative to the total weight of the amino acids of the hydrolyzate, the remainder also being in highly hydrolyzed form since the remainder of the amino acids of the hydrolyzate being in the form of peptides having a molecular mass less than or equal to 800 Dalton.
  • the hydrolyzate used according to the present invention is also distinguished by its particular contents of arginine, glutamic acid and proline.
  • the hydrolyzate has the following composition of total amino acids: an aspartic acid content ranging from 5 to 8% by weight, preferably ranging from 6 to 7% by weight; a threonine content ranging from 4 to 6% by weight, preferably from 4 to 5% by weight; a serine content ranging from 9 to 14% by weight, preferably ranging from 10 to 12% by weight; a glutamic acid content ranging from 9 to 11%; a glycine content ranging from 6 to 9% by weight, preferably ranging from 7 to 8% by weight; an alanine content ranging from 4 to 6% by weight, preferably from 4 to 5% by weight; a valine content ranging from 6 to 10% by weight, preferably ranging from 7 to 8% by weight; a methionine content ranging from 0.1 to 0.6% by weight; an isoleucine content ranging from 4 to 6% by weight, preferably ranging from 4 to 5% by weight; a leucine
  • the hydrolyzate has a cystine content ranging from 1 to 2.5% by weight, preferably ranging from 1 to 2% by weight and a tyrosine content ranging from 0.1 to 1% by weight relative to the total weight of the hydrolyzate.
  • amino acids are assayed according to a method adapted from regulation EC 152/2009.
  • the amino acids are separated by chromatography in particular HPLC (or "HPLC" in English language) in particular with an ion exchange column and assayed by reaction with ninhydrin and photometric detection generally at 570 nm.
  • the hydrolyzate comprises the following free amino acids: at least 95% of aspartic acid in the free form by weight relative to the total weight of aspartic acid in the hydrolyzate; at least 95% threonine in free form by weight relative to the total weight of threonine in the hydrolyzate; at least 95% serine in free form by weight relative to the total weight of serine in the hydrolyzate; at least 93% glutamic acid in free form by weight relative to the total weight of glutamic acid in the hydrolyzate; at least 93% glycine in free form by weight relative to the total weight of glycine in the hydrolyzate; at least 93% alanine in free form by weight relative to the total weight of alanine in the hydrolyzate; at least 93% of methionine in free form by weight relative to the total weight of methionine in the hydrolyzate; at least 93% of phenylalanine in free form by weight relative to the total weight of phenylalanine in free form
  • the free amino acids are not denatured.
  • the hydrolyzate used according to the invention has high levels of free branched amino acids: valine, leucine and isoleucine.
  • these branched amino acids are known to be more difficult to release under identical conditions of use.
  • the content of total amino acids (free and bound) of the hydrolyzate used according to the invention ranges from 40% to 95%, preferably 45% to 92% by weight relative to the total weight of the hydrolyzate, the hydrolyzate further comprising mineral matter and water.
  • the amino acids of the hydrolyzate according to the invention are essentially free amino acids.
  • the mineral content of said hydrolyzate preferably NaCI or KCI, is less than or equal to 9% by weight, preferably less than 8% by weight relative to the total weight of the hydrolyzate. This level of mineral matter is determined after calcining the hydrolyzate at 550°C for 4 hours.
  • the complete feed according to the invention has advantageous nutritional properties, and bioavailability as well as a high or even very high palatability with respect to shrimp at the postlarval stage.
  • An advantage of the hydrolyzate used according to the present invention is that it is very digestible.
  • the true digestibility of amino acids is 96.8%, which gives it rapid assimilation by shrimp.
  • the digestibility is measured in vivo according to the method described by ZM Larbier, AM Chagneau and M. Lessire in “Effect of protein intake on true digestibility of amino acids in rapeseed meals for adult roosters force fed with moistened feed”. Animal Feed Science and Technology. 34 (1991) 255-260.
  • the hydrolyzate used according to the invention is also soluble in water, indeed 1 g of hydrolyzate is soluble in 5 mL of water.
  • the hydrolyzate contains a very large majority of water-soluble amino acids in number and in weight.
  • the low level of cystine and tyrosine in the hydrolyzate preferably used also contributes to making it very water-soluble.
  • This solubility gives it interesting properties for the implementation and development of organoleptic characteristics within the final product, in particular a high palatability. This high palatability has been observed even when the hydrolyzate is used at relatively low doses, in particular when it is used in an amount ranging from 0.5 to 10%, preferably from 1 to 6% by weight relative to the total weight of the food.
  • the hydrolyzate used according to the invention is obtained by a preparation process in which the keratin material is a keratin material, preferably poultry, comprising at least the following steps, in this order:
  • the hydrolyzate according to the invention is obtained from natural keratin materials, advantageously from poultry feathers.
  • poultry we can mention hens, chickens, turkeys, ducks, geese...
  • the hydrolyzate according to the present invention is not obtained from human keratin such as the hair.
  • the process for preparing the keratin hydrolyzate according to the invention implements at least one chemical hydrolysis by means of an acid under conditions suitable for obtaining a hydrolyzate comprising at least 88% by weight of amino acids. free with respect to the total weight of the amino acids of the hydrolyzate, the rest of the amino acids of the hydrolyzate being in the form of peptides having a molecular mass less than or equal to 800 Dalton.
  • the percentage of peptides—having a molecular mass less than or equal to 800 Dalton—in the hydrolyzate generally ranges from 5 to 12% by weight relative to the total weight of the hydrolyzate.
  • the chemical hydrolysis of the keratin is carried out using an acid, preferably a strong acid chosen from hydrochloric, phosphoric and sulfuric acids, preferably hydrochloric acid.
  • an acid preferably a strong acid chosen from hydrochloric, phosphoric and sulfuric acids, preferably hydrochloric acid.
  • the strong acid is used in a concentration ranging from 10 to 30%, preferably from 15 to 25%.
  • the chemical hydrolysis is generally carried out for a period ranging from 1 hour to 8 hours, preferably ranging from 6 to 7 hours at a temperature ranging from 110 to 115° C.
  • the chemical hydrolysis is carried out in two stages:
  • a second chemical hydrolysis preferably acidic, carried out at a temperature ranging from 100 to 115°C for a period ranging from 5 to 8 hours, the two hydrolyses being able to be carried out without an intermediate pause step or by carrying out an intermediate pause stage of between 1 hour and 7 days.
  • the first chemical hydrolysis is carried out at 72° C. for 4.5 hours and the second chemical hydrolysis is carried out at 107° C. for 6 hours, an intermediate break of 24 to 80 hours being carried out between the two chemical hydrolyses. .
  • the chemical hydrolysis carried out in one or more stages, is advantageously followed by at least one stage of extraction of the cystine and of the tyrosine.
  • the cystine and tyrosine extraction step is carried out using a base, preferably chosen from sodium hydroxide, potassium hydroxide, preferably sodium hydroxide.
  • a base preferably chosen from sodium hydroxide, potassium hydroxide, preferably sodium hydroxide.
  • the addition of a base to the hydrolyzate makes it possible to precipitate the less soluble amino acids (cystine, tyrosine mainly), thus making them separable from the liquid phase by suitable techniques, such as filtration or draining.
  • the chemical hydrolysis and cystine and tyrosine extraction steps can be followed by optional drying steps, for example by spray drying.
  • the step of extracting cystine and tyrosine can be followed by an optional step of recovering certain amino acids from the precipitate by redissolving the latter in acid, then reprecipitating with a base, the amino acids to be recovered then being in the liquid phase.
  • the hydrolyzate used according to the present invention comprises less than 1% by weight of tyrosine relative to the total weight of the hydrolyzate, preferably less than 0.5%, more preferably the hydrolyzate does not contain tyrosine.
  • the hydrolyzate does not contain tyrosine. The only traces of tyrosine being due to the limits of the operating conditions and the equipment used during the extraction step.
  • the hydrolyzate according to the present invention comprises less than 2.5%, preferably less than 1.5% and preferably less than 1% by weight of cystine relative to the total weight of the hydrolyzate. , more preferably, the hydrolyzate does not contain cystine.
  • hydrolyzate according to the invention is not obtained following a reduction by electrolysis, it does not comprise cysteine.
  • the present invention relates to the use of a particular keratin hydrolyzate in a food for feeding growing shrimp, advantageously the complete food comprises from 0.5 to 10%, preferably from 1 to 6% by weight of hydrolyzate relative to the total weight of the food
  • the food can be a complete food or a complementary food, preferably, the food is a complete food.
  • complete food we generally mean a food providing in a balanced manner to the individual who ingests it all the materials and nutrients necessary for its life and its development.
  • Complementary food qualifies a food distributed in addition to the usual food, generally to specifically supplement the diet with one or more particular ingredients.
  • the complete feed is formulated according to a classic recipe for complete feed, respectively complementary, for feeding shrimp in the post-larval state and/or at a growth stage between the post-larval state and an age of 90 days.
  • the food preferably the complete food, has advantageous nutritional properties, and bioavailability as well as a potency or very high palatability levels for shrimp at the post-larval stage or at a growth stage between the post-larval stage and an age of 90 days.
  • the food is a complete food comprising at least the following components: at least one marine animal flour, at least one fish oil, wheat flour, calcium, phosphorus, sodium, soy lecithin, cholesterol, taurine and a premix of vitamins selected from the group consisting of vitamins A, group B, C, D3, E, K3, and trace elements selected from the group consisting by iron, copper, manganese, zinc, cobalt and selenium.
  • the complete food comprises fish meal and marine animal meal, other than fish, chosen from squid meal, squid liver meal and krill meal.
  • the complete food comprises fish meal, krill meal and squid or squid liver meal.
  • the complete feed comprises 45 to 55% by weight of fishmeal relative to the total weight of said complete feed.
  • the complete feed comprises from 3 to 10% by weight of flour from marine animals other than fish relative to the total weight of said complete feed.
  • wheat flour As vegetable flour, wheat flour and wheat gluten can be used in the complete feed.
  • the complete feed comprises 35 to 45% by weight of wheat flour relative to the total weight of said complete feed.
  • the complete food comprises at least one oil chosen from fish oils, crustacean oils and oils of vegetable origin.
  • the complete feed comprises from 3 to 10% by weight of fish oil(s) relative to the total weight of said complete feed.
  • the complete feed advantageously comprises a premix of vitamins and trace elements, ready to be introduced into the final formulation, called Premix.
  • the premix comprises in particular vitamins A, group B, C, D3, E and K3, as well as trace elements such as iron, copper, manganese, zinc, cobalt and selenium, lecithin of soy, meso-inositol, choline chloride, taurine, cholesterol, asthaxanthin, organic acids, calcium, phosphorus, salt, potassium chloride. It may further include amino acids such as lysine, methionine and tryptophan.
  • trace elements such as iron, copper, manganese, zinc, cobalt and selenium, lecithin of soy, meso-inositol, choline chloride, taurine, cholesterol, asthaxanthin, organic acids, calcium, phosphorus, salt, potassium chloride. It may further include amino acids such as lysine, methionine and tryptophan.
  • the complete feed comprises an amount ranging from 1 to 5% by weight of Premix relative to the total weight of the complete feed.
  • Nicovita Origin 0.5 is used between 21 days (PL12) and 29 days (PL20) and Nicovita Origin 0.8 between 30 days (PL21) and 90 days.
  • the complete feed used according to the invention can be formulated with the ingredients usually used in compositions for feeding shrimp, in particular humectants, thickeners, texture agents,
  • the keratin hydrolyzate is incorporated into the complete feed by mixing said hydrolyzate with the other components of the complete feed.
  • the keratin hydrolyzate is applied by coating on the surface of the complete food.
  • the methods used to carry out these “coating” or “top-coating” steps, in particular by spraying (“spray-coating”) fall within the competence of those skilled in the art.
  • the complete feed is introduced directly into the water.
  • the complete feed is used so as to administer a quantity ranging from 0.003 g to 2.500 g of hydrolyzate used according to the invention per 100 shrimp.
  • hydrolyzate makes it possible to obtain a complete and balanced food, a source of free amino acids, and which makes it possible to dispense with food proteins of vegetable and/or animal origin of molecular structure. complex and of high molecular weight.
  • the use of the hydrolyzate allows a better assimilation of the nutrients present in the food and in particular in the complete food.
  • the shrimp are fed with said complete food throughout the post-larval stage and advantageously until the start of the juvenile stage—corresponding to the 50th day of age of the shrimp.
  • the invention also relates to the use of the hydrolyzate in a food, preferably complete, as a prebiotic to modify the composition of the intestinal flora of shrimp.
  • This use which makes it possible to contribute to the growth of intestinal bacteria promoting intestinal balance, is suitable for good absorption of nutrients in farming conditions where the intake of diversified foods is limited.
  • the hydrolyzate was used for feeding growing shrimp whose age is between 10 and 90 days. Under these rearing conditions, the hydrolyzate makes it possible to improve the appetite of the shrimp for the complete feed.
  • the shrimp fed with the preferably complete food used according to the invention have suitable properties for marketing in terms of color and size.
  • the present invention also relates to a method for increasing the biomass of shrimps in which said shrimps are fed from the post-larval stage, preferably from the 19th day of age, then for at least 15 days, preferably at least 21 days, preferably at least 35 days and advantageously at least 56 days with a food, preferably complete, comprising from 0.5 to 10% preferably from 1 to 6% of the keratin hydrolyzate according to the present invention.
  • Optimal rearing conditions [0100] The particular hydrolyzate has been used for feeding healthy growing shrimp ranging in age from 10 to 90 days, preferably from 20 to 50 days.
  • the rearing conditions can also lead to a reduction in the number of healthy shrimp.
  • the rearing conditions can be such that the percentage of shrimp survival is affected.
  • the present invention thus relates to the use of the hydrolyzate according to the present invention in a food, preferably complete, for feeding healthy shrimp from the post-larval stage, in particular from 10 days of age.
  • (PL1) to increase the biomass of said shrimp, in particular the biomass of shrimp whose age is between 19 and 29 days -corresponding to the post-larval stage PL10 to PL20-, and 28 days more from this stage, preferably the biomass of shrimp whose age is between 20 and 50 days.
  • Biomass means the total weight of live animals at a given stage of breeding. The individual weight is calculated by dividing the biomass by the number of animals present at the given stage of rearing.
  • the use of the hydrolyzate according to the present invention contributes to a good development of the shrimps from the quantitative point of view.
  • the present invention also relates to the use of a hydrolyzate in a food according to the invention, for feeding healthy shrimp from the post-larval stage corresponding to 10 to 29 days to increase the number of said shrimp present. at the end of the post-larval period and/or the number of shrimp whose age is between 19 to 29 days and 28 days older, preferably the number of shrimp whose age is between 20 and 50 days.
  • the duration of shrimp feeding from the post-larval stage is generally continued for at least 15 days, preferably for at least 21 days and even more preferably for at least 28 days.
  • the present invention thus aims at a process for increasing the biomass of healthy shrimps in which said shrimps are fed from the post-larval stage, preferably from the 19th day of age, then for at least 15 days, from preferably for at least 21 days and even more preferably for at least 28 days, with a preferably complete feed comprising from 0.5 to 10%, preferably from 1 to 6% of the hydrolyzate according to the present invention.
  • the present invention also relates to a method for increasing the number of healthy shrimp, in which said shrimp are fed from the post-larval stage, preferably from the 19th day of age, then for at least 15 days. , preferably for at least 21 days and preferably for at least 28 days, with a preferably complete food, comprising from 0.5 to 10% preferably from 1 to 6% of a keratin hydrolyzate according to the present invention .
  • the particular hydrolyzate has been used for feeding growing shrimp, the age of which is between 10 and 90 days, preferably between 20 and 90 days and preferably between 40 and 90 days, the shrimp being reared in the presence of pathogenic microorganisms.
  • Feeding the shrimp with the particular hydrolyzate used according to the invention from the post-larval stage makes it possible to reinforce the resistance of the shrimp in the presence of pathogenic microorganisms, in particular by increasing the immune defences.
  • the present invention relates to the use of the hydrolyzate according to the invention in a food, preferably complete, for feeding shrimp from the post-larval stage corresponding to 10 to 29 days to increase the biomass of said shrimp reared in the presence of pathogenic microorganisms, in particular the biomass of shrimp whose age is between 19 to 29 days and 90 days, preferably between 20 and 90 days, and preferably between 40 and 90 days.
  • the duration of feeding the shrimp from the post-larval stage is preferably continued for at least 21 days, preferably for at least 35 days and even more preferably for at least 56 days.
  • the present invention thus relates to a method for increasing the biomass of shrimp reared in the presence of pathogenic microorganisms, in which said shrimp are fed from the post-larval stage, preferably from the 19th day of age. , then for at least 21 days, preferably for at least 35 days and more preferably for at least 56 days with a food, preferably complete, comprising from 0.5 to 10% preferably from 1 to 6% of the hydrolyzate according to the invention.
  • the present invention also relates to the use of the hydrolyzate according to the present invention in a food, preferably complete food, for food prawns from the post-larval stage corresponding to 10 to 29 days to increase the survival of said prawns reared in the presence of pathogenic microorganisms, in particular the survival of prawns whose age is between 19 to 29 days and 90 days, preferably between 20 and 90 days and preferably between 40 and 90 days.
  • the present invention also relates to a method for increasing the survival of shrimp reared in the presence of pathogenic microorganisms, in which said shrimp are fed from the post-larval stage, preferably from the 19th day, then for at least 21 days, preferably for at least 35 days and more preferably for at least 56 days with a preferably complete food, comprising from 0.5 to 10% preferably from 1 to 6% of a keratin hydrolyzate according to the present invention.
  • a tyrosine and cystine extraction step is carried out, adjusting the pH to 5 using sodium hydroxide.
  • the amino acids which precipitate (mainly cystine and tyrosine) are separated by spinning. Spin water is recovered. The precipitate is redissolved in dilute hydrochloric acid, then reprecipitated by adding sodium hydroxide solution, and drained again. The waters of this second spinning are added to those of the first spinning.
  • the solution obtained is dried by atomization. 4200 kg of hydrolyzate are obtained in dry form.
  • Table 2 shows, for each amino acid present, the content of total amino acids (free and bound) relative to the total weight of the hydrolyzate, as well as the weight fraction of free amino acids (AA) / amino acids ( AA) totals.
  • the amino acids are separated by chromatography (HPLC or
  • the dry matter content of the hydrolyzate is 98.6% by weight.
  • composition A shown in Table 3 below.
  • Table 4 shows the vitamin and trace element contents provided by the premix (premix) incorporated at 2% in composition A.
  • Table 5 presents the nutritional values of composition A.
  • two complete feeds were prepared from composition A: a feed A in the form of 0.5 mm grain size granules named Formulation A-0.5 and a feed A in the form of 0.8 mm grain size granules named Formulation A-0.8.
  • composition A-0.5 control
  • two complete feed compositions in accordance with the invention B and C comprising respectively 1 and 5% of hydrolyzate described in Example 2 were prepared.
  • composition A-08 control
  • three complete food compositions in accordance with the invention B, C and D comprising respectively 1, 5 and 10% of hydrolyzate described in Example 2 were prepared .
  • the seven formulations are named: Formulation A-0.5; Formulation A-0.8; Formulation B-0.5; Formulation B-0.8; Formulation C-0.5; Formulation C-0.8; Formulation D-0.8.
  • compositions A, B and C formulated in the form of granules with a particle size of 0.5 mm are intended for shrimp from stage PL12 to PL20 and compositions A, B, C and D formulated in the form of granules with a particle size of 0.8 mm are intended for prawns from stage PL21 to 90 days of age.
  • Formulations B to D are prepared by mixing the hydrolyzate with water according to weight ratios: 3/5 hydrolyzate and 2/5 water.
  • this solution is homogenized and applied as a coating on formulation A-0.5 or on formulation A-0.8 according to the ratios required to obtain Formulation B-0.5 (at 1% hydrolyzate) ; Formulation B-0.8 (1% hydrolyzate); Formulation C-0.5 (5% hydrolyzate); Formulation C-0.8 (5% hydrolyzate) and Formulation D-0.8 (10% hydrolyzate).
  • Formulation A-0.5 and Formulation A-0.8 were prepared in the same manner by applying water to the base composition.
  • the shrimps used are post-larval Litopeaneus vannamei white shrimps 19 to 29 days old, with an average individual weight of 0.005 g for the shrimps of example 3.1 and 0.028 g for the shrimps of example 3.2 .
  • the absence of infections on these shrimps was confirmed by PCR analyses.
  • the daily doses of complete feed, and consequently of hydrolyzate, distributed in grams per 100 shrimp are calculated according to a percentage of the shrimp biomass present for each day of the rearing period. This percentage is 100 on the first day of feed distribution and gradually decreases to 8.6% after 28 days as detailed in Table 7 below.
  • the shrimp in example 3.1 are fed for 28 days while the shrimp in example 3.2 are fed for 21 days.
  • Table 8 shows the evolution of survival and biomass in examples 3.1 and 3.2, respectively after 28 and 21 days of growth. [0162] [Table 8]
  • hydrolyzate according to the present invention in a complete feed at a level of 1 to 5% for the feeding of healthy shrimp from the post-larval stage allows an increase in the biomass of the shrimp of between + 3.8% and + 13.1%.
  • compositions B and C (Formulations B-0.5 and C-0.5) in comparison with composition A. This increase is significant for these two criteria for composition B in example 3.2 and for the number of shrimp for composition C in example 3.1.
  • the farming of the shrimps of Examples 3.1 and 3.2 was continued for 4 weeks with the formulations with a particle size of 0.8 mm. Additional formulation D-0.8 was added to the experimental device. Apart from this, the continuation of the shrimp farming of example 3.1 corresponds to Examples 3.3 and 3.5 and the continuation of the shrimp farming of Example 3.2 corresponds to Examples 3.4 and 3.6.
  • the shrimp are fed by hand, with Formulation A-0.8; Formulation B-0.8; Formulation C-0.8 or Formulation D-0.8.
  • the daily doses of complete feed (and consequently of hydrolyzate) distributed in grams per 100 shrimps are calculated according to a percentage of the shrimp biomass present for each day of the rearing period. This percentage is 100 on the first day of feed distribution and gradually decreases to 3.6% after 70 days as detailed in Table 9 below.
  • the “EMS” group corresponds to rearing in the presence of Vibrio parahaemolyticus bacteria
  • - the “WSSV” group corresponds to breeding in the presence of the white spot disease virus.
  • Table 10 corresponds to the results obtained with the EMS individuals group
  • Table 11 corresponds to the results obtained with the WSSV individuals group.
  • compositions B, C and D allow an increase in the biomass in most cases and also an increase in the survival (number of living individuals at the end of the experiment). This increase is statistically significant for the biomass and for the survival with compositions C and D of examples 3.4 and 3.3 respectively. This increase is statistically significant for the survival of the shrimp having received compositions B, C and D for examples 3.5 and 3.6.

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Abstract

Utilisation d'un hydrolysat de kératine comprenant au moins 88% en poids d'acides aminés libres par rapport au poids total des acides aminés de l'hydrolysat, le reste des acides aminés de l'hydrolysat étant sous la forme de peptides présentant une masse moléculaire inférieure ou égale à 800 Dalton, ledit hydrolysat comprenant de l'arginine en une teneur allant de 5 à 8% en poids par rapport au poids total de l'hydrolysat, de l'acide glutamique en une teneur allant de 8 à 13% en poids par rapport au poids total de l'hydrolysat,de la proline en une teneur allant de 8 à 13% en poids par rapport au poids total de l'hydrolysat, dans un aliment pour l'alimentation des crevettes âgées de 10 à 90 jours.

Description

UTILISATION D 'UN HYDROLYSAT À HAUTES TENEURS EN ACIDES AMINÉS LIBRES DANS UN ALIMENT POUR LES CREVETTES EN CROISSANCE
[0001] La présente invention se rapporte au domaine de l’aquaculture et plus particulièrement de l’élevage des crevettes. Plus spécifiquement l’invention concerne une composition alimentaire comprenant un hydrolysat de kératine à hautes teneurs en acides aminés libres pour l’alimentation des crevettes au stade post larvaire ainsi que l’utilisation de compositions comprenant un hydrolysat de kératine à hautes teneurs en acides aminés libres pour l’alimentation des crevettes au stade post-larvaire.
[0002] Art antérieur
[0003] La consommation de crevettes est en augmentation constante ces dernières années, à titre d’exemple, la production mondiale de crevettes d’élevage a atteint 4 millions de tonnes en 2018 avec une augmentation de 3 à 5 % sur cette année 2018. Cette augmentation de la production n’est pas possible sans utilisation d’adjuvants de formulation, ni sans régulation des conditions du milieu notamment des taux d’oxygène et salinité de l’eau, température, pH notamment pour freiner, empêcher le développement de micro-organismes pathogènes. Or tous ces facteurs ne sont pas sans impacter l’environnement, le développement et la qualité de ces crustacés.
[0004] Face à ces problèmes, des supplémentations alimentaires tels que des probiotiques ont déjà été proposées, ainsi la demande de brevet W02020130770A1 décrit l’utilisation d’une composition probiotique pour l’alimentation des larves de crevettes comprenant des bactéries de type Lactobacillus spp, Bacillus spp et Bifidobacterium spp, d’un lyophilisât de Saccharomyces cerevisiae, de protéines d’origine animale ou végétale, de vitamines, de calcium, de mono- et polysaccharides, d’acides gras. En outre CA3071308 A1 vise un hydrolysat à hautes teneurs en acides aminés libres défini par ses teneurs en valine, isoleucine et leucine libres ainsi que l’utilisation de l’hydrolysat pour l’alimentation des animaux. L’extrait internet Kera Aqua® : Boosters d’ ingéré et de croissance pour les crevettes et poissons. URL : https://web.archive.org/web/20191101082514://www.bcf- lifesciences.com/fr/applications/aquaculture/ décrit l’utilisation d’un hydrolysat de kératine de volaille dans l’alimentation des crevettes et l’article « Free Amino Acids Mix Made of Poultry Keratin as a New Functional Ingredient for White Shrimp (Litopeaneus vannamei) Feed », Universal journal of agricultural research, vol.7 n°6 concerne une étude sur l’utilisation d’un mélange d’acides aminés libres issus de kératine de volaille dans l’alimentation des crevettes adultes. Aucun de ces documents ne vise l’alimentation des crevettes au stade post-larvaire.
[0005] Il demeure cependant toujours un besoin d’aliments complets et complémentaires adaptés aux différents stades de l’élevage des crevettes permettant leur développement optimal en termes de biomasse et de qualité.
[0006] De manière surprenante et avantageuse les inventeurs ont mis en évidence qu’une solution à ce problème pouvait être apportée en utilisant un hydrolysat de matières kératiniques particulier, hautement digestible, dans l’alimentation des crevettes à partir du stade post-larvaire.
[0007] Les matières kératiniques naturelles comprennent majoritairement des polypeptides de haut poids moléculaire et à la structure très ramifiée les rendant peu accessibles aux enzymes. Cette matière kératinique naturelle est peu digestible. Cependant, il est connu que l’hydrolyse des matières kératiniques en acides aminés permet d’en améliorer la digestibilité.
[0008] Les hydrolysats de kératine proposés à la vente notamment à titre d’ingrédients de formulation de recettes en nutrition animale ou de matière première pour l’alimentation animale sont généralement obtenus par hydrolyse très partielle. Ces hydrolysats présentent généralement une masse moléculaire élevée due à la présence de taux élevés d’acides aminés dits « liés » formant des peptides. Typiquement la masse moléculaire moyenne des compositions du commerce est d’au moins 5 000 daltons. Ces hydrolysats de kératine sont relativement peu digestibles et contiennent très peu voire pas d’acides amines libres. En effet, il est techniquement difficile et coûteux sur le plan industriel d’obtenir un hydrolysat de kératine présentant un taux d’acides aminés libres très élevé. En outre une hydrolyse trop poussée présente un risque de dénaturation et de destruction des acides aminés. [0009] L’obtention de tels hydrolysats requiert un savoir-faire basé sur l’utilisation et la maîtrise d’intrants chimiques concentrés ainsi que de procédés relevant du domaine du génie chimique. Ce haut niveau d’exigences techniques explique que la majorité des hydrolysats protéiques présents sur le marché sont issus d’une hydrolyse partielle et moins complète se traduisant par une proportion plus faible en acides aminés libres.
[0010] Les auteurs de la présente invention sont parvenus à préparer un aliment pour l’alimentation des crevettes comprenant un hydrolysat de kératine particulier dans lequel la quasi-totalité des acides aminés sont des acides aminés libres, en particulier les acides aminés parmi les plus difficiles à obtenir sous forme libre lors du procédé d’hydrolyse tels que la valine, la leucine, l’isoleucine sont obtenus sous forme libre. En outre, les acides aminés libres obtenus selon l’invention, en particulier la valine, la leucine, l’isoleucine, ne sont pas endommagés ni dénaturés.
[0011] D’autres aspects, avantages, propriétés de la présente invention sont présentés dans la description et les exemples qui suivent.
[0012] La présente invention a pour objet une composition alimentaire pour l’alimentation des crevettes âgées de 10 à 90 jours, de préférence de 20 à 50 jours, contenant un hydrolysat de kératine comprenant au moins 88% en poids d’acides aminés libres par rapport au poids total des acides aminés de l’hydrolysat, le reste des acides aminés de l’hydrolysat étant sous la forme de peptides présentant une masse moléculaire inférieure ou égale à 800 Dalton, ledit hydrolysat comprenant de l’arginine en une teneur allant de 5 à 8% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat, de l’acide glutamique en une teneur allant de 8 à 13% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat, de la proline en une teneur allant de 8 à 13% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat.
[0013] La présente invention vise aussi l’utilisation d’un hydrolysat de kératine comprenant au moins 88% en poids d’acides aminés libres par rapport au poids total des acides aminés de l’hydrolysat, le reste des acides aminés de l’hydrolysat étant sous la forme de peptides présentant une masse moléculaire inférieure ou égale à 800 Dalton, ledit hydrolysat comprenant de l’arginine en une teneur allant de 5 à 8% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat, de l’acide glutamique en une teneur allant de 8 à 13% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat, de la proline en une teneur allant de 8 à 13% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat, dans un aliment pour l’alimentation des crevettes âgées de 10 à 90 jours, de préférence de 20 à 50 jours.
[0014] De préférence, ledit aliment comprend de 0,5 à 10%, de préférence de 1 à 6% en poids d’hydrolysat par rapport au poids total de l’aliment.
[0015] Avantageusement, ledit aliment de préférence complet est utilisé pour l’alimentation des crevettes à partir du stade post-larvaire, c’est-à-dire âgées d’au moins 10 jours, de préférence âgées d’au moins 20 jours et jusqu’à un âge de 90 jours, de préférence jusqu’à un âge de de 50 jours.
[0016] En particulier, la présente invention vise l’utilisation d’un hydrolysat dans ledit aliment selon l’invention pour améliorer l’effet d’appétence dudit aliment.
[0017] La présente invention vise aussi l’utilisation d’un hydrolysat dans ledit aliment selon l’invention pour augmenter la biomasse des crevettes.
[0018] Définitions
[0019] Par « stade post-larvaire » au sens de la présente invention, on entend les crevettes qui présentent un stade de développement anatomique identique à celui des crevettes adultes c’est-à-dire un stade postérieur au stade Mysis. Généralement les crevettes au stade post-larvaire ont un âge compris entre 10 jours (stade PL1 ) et 29 jours (stade PL20) au moment de leur transfert en élevage. Après le stade post-larvaire, les crevettes entrent dans la phase « de croissance » à un stade dit juvénile, avant de passer aux stades subadulte, puis adulte. Généralement les 20 jours du stade post-larvaire sont nommés PL1 , PL2, ...jusqu’à PL20, ils correspondent respectivement au 10éme jour, 11 éme jour... jusqu’au 29éme jour d’âge des crevettes. [0020] Dans le présent texte, l’expression « à partir du stade post-larvaire » signifie à partir du ioeme jour d’âge des crevettes et l’expression « à partir du stade juvénile » signifie à partir du 50eme jour d’âge des crevettes.
[0021 ] Dans le tableau 1 sont présentés les différents stades de développement des crevettes. Bien entendu ces durées sont données à titre indicatif, elles sont susceptibles de varier en fonction du développement biologique et des conditions d’élevage des crevettes.
[0022] [Tableau 1 ]
[0023] Dans la suite du texte, l’expression « X jours » ou « Xème jour » en référence à l’âge des crevettes, est à considérer en prenant comme point de départ le jour de naissance des crevettes qui est le jour 0.
[0024] L’aliment, objet de la présente invention, est dédié à l’alimentation des crevettes d’élevage à un stade à partir du stade post-larvaire et s’étendant jusqu’à 8 semaines de croissance. L’aliment, objet de la présente invention, est dédié à l’alimentation des crevettes d’élevage présentant un poids individuel moyen allant de 0,003 g à 4 g. [0025] Par « crevettes » on entend tout type de crustacés décapodes notamment les espèces suivantes : Litopenaeus vannamei et Penaeus monodon
[0026] Par de « 0,5% à 10% », on entend toutes les valeurs suivantes 0,5 ; 1 ; 1 ,5, 2 ; 2,5 ;3 ;3,5 ; 4 ; 4,5 ; 5 ;5,5 ; 6 ; 6,5 ; 7 ; 7,5 ; 8 ; 8,5 ;9 ; 9,5, 10.
[0027] Hydrolysat
[0028] L’hydrolysat utilisé selon la présente invention se distingue par son taux élevé d’acides aminés sous forme libre : au moins 88% en poids d’acides aminés libres par rapport au poids total des acides aminés de l’hydrolysat, le reste étant également sous forme très hydrolysée puisque le reste des acides aminés de l’hydrolysat étant sous la forme de peptides présentant une masse moléculaire inférieure ou égale à 800 Dalton.
[0029] L’hydrolysat utilisé selon la présente invention se distingue également par ses teneurs particulières en arginine, acide glutamique et proline.
[0030] Ainsi, selon une première variante préférée, l’hydrolysat présente la composition suivante en acides aminés totaux : une teneur en acide aspartique allant de 5 à 8 % en poids, de préférence allant de 6 à 7 % en poids ; une teneur en thréonine allant de 4 à 6 % en poids, de préférence de 4 à 5 % en poids ; une teneur en sérine allant de 9 à 14 % en poids, de préférence allant de 10 à 12 % en poids; une teneur en acide glutamique allant de 9 à 11 % ; une teneur en glycine allant de 6 à 9 % en poids, de préférence allant de 7 à 8 % en poids; une teneur en alanine allant de 4 à 6 % en poids, de préférence de 4 à 5 % en poids ; une teneur en valine allant de 6 à 10 % en poids, de préférence allant de 7 à 8 % en poids; une teneur en méthionine allant de 0,1 à 0,6 % en poids ; une teneur en isoleucine allant de 4 à 6 % en poids, de préférence allant de 4 à 5 % en poids ; une teneur en leucine allant de 6 à 9 % en poids, de préférence allant de 7 à 8 % en poids; une teneur en phénylalanine allant de 2 à 5 % en poids ; une teneur en lysine allant de 1 à 3 % en poids, une teneur en histidine allant de 0,4 à 1 % en poids ; une teneur en arginine allant de 5,5 à 6,5 % en poids ; une teneur en proline allant de 8.5 à 11 % en poids , une teneur en tryptophane inférieure à 0,1 % ,de préférence 0 % en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat.
[0031] Selon une deuxième variante particulière préférée, l’hydrolysat présente une teneur en cystine allant de 1 à 2,5 % en poids, de préférence allant de 1 à 2 % en poids et une teneur en tyrosine allant de 0,1 à 1% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat.
[0032] Les acides aminés sont dosés selon une méthode adaptée du règlement CE 152/2009.
[0033] Selon cette méthode, pour la détermination des quantités d’acides aminés totaux une hydrolyse au moyen d’un acide est préalablement effectuée.
[0034] Pour la détermination des quantités d’acides aminés libres et totaux, les acides aminés sont séparés par chromatographie en particulier CLHP (ou « HPLC » en langue anglaise) notamment avec colonne échangeuse d’ions et dosés par réaction avec la ninhydrine et détection photométrique généralement à 570 nm.
[0035] Selon une troisième variante préférée, l’hydrolysat comprend les acides aminés libres suivants : au moins 95% d’acide aspartique sous forme libre en poids par rapport au poids total d’acide aspartique dans l’hydrolysat ; au moins 95% de thréonine sous forme libre en poids par rapport au poids total de thréonine dans l’hydrolysat ;au moins 95% de sérine sous forme libre en poids par rapport au poids total de sérine dans l’hydrolysat ; au moins 93 % d’acide glutamique sous forme libre en poids par rapport au poids total d’acide glutamique dans l’hydrolysat ; au moins 93% de glycine sous forme libre en poids par rapport au poids total de glycine dans l’hydrolysat ;au moins 93% d’alanine sous forme libre en poids par rapport au poids total d’alanine dans l’hydrolysat ; au moins 93% de méthionine sous forme libre en poids par rapport au poids total de méthionine dans l’hydrolysat ; au moins 93% de phénylalanine sous forme libre en poids par rapport au poids total de phénylalanine dans l’hydrolysat ; au moins 95%, de proline sous forme libre en poids par rapport au poids total de proline dans l’hydrolysat. [0036] Comme présenté au tableau 2, la majorité des acides aminés sont au moins à 95% sous forme libre par rapport au poids total dudit acide aminé dans l’hydrolysat.
[0037] Les acides aminés libres ne sont pas dénaturés. En outre l’hydrolysat utilisé selon l’invention présente des taux élevés en acides aminés ramifiés libres : valine, leucine et isoleucine. Or ces acides aminés ramifiés sont connus pour être plus difficiles à libérer dans des conditions de mise en oeuvre identiques.
[0038] Avantageusement, la teneur en acides aminés totaux (libres et liés) de l’hydrolysat utilisé selon l’invention va de 40% à 95%, de préférence 45% à 92% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat, l’hydrolysat comprenant en outre de la matière minérale et de l’eau. Comme déjà mentionné les acides aminés de l’hydrolysat selon l’invention sont essentiellement des acides aminés libres.
[0039] De préférence, le taux de matière minérale dudit hydrolysat, de préférence NaCI ou KCI, est inférieur ou égal à 9 % en poids, de préférence inférieure à 8% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat. Ce taux de matière minérale est déterminé après calcination de l’hydrolysat à 550°C pendant 4 heures.
[0040] L’aliment complet selon l’invention présente des propriétés nutritionnelles avantageuses, et une biodisponibilité ainsi qu’un pouvoir d’appétence élevés voire très élevés vis-à-vis des crevettes au stade postlarvaire.
[0041] Un avantage de l’hydrolysat utilisé selon la présente invention est qu’il est très digestible. La digestibilité vraie des acides aminés est de 96,8 %, ce qui lui confère une assimilation rapide par les crevettes. La digestibilité est mesurée in vivo selon la méthode décrite par Z. M. Larbier, A.M. Chagneau and M. Lessire dans « Effect of protein intake on true digestibility of amino acids in rapeseed meals for adult roosters force fed with moistened feed ». Animal Feed Science and Technology. 34 (1991 ) 255-260. [0042] L’hydrolysat utilisé selon l’invention est également soluble dans l’eau, en effet 1 g d’hydrolysat est soluble dans 5 mL d’eau. En effet l’hydrolysat contient une très grande majorité d’acides aminés hydrosolubles en nombre comme en poids. De plus, le faible taux de cystine et de tyrosine dans l’hydrolysat utilisé de manière préférée contribue aussi à le rendre très hydrosoluble. Cette solubilité lui confère des propriétés intéressantes pour la mise en œuvre et le développement de caractéristiques organoleptiques au sein du produit final, en particulier un pouvoir d’appétence élevé. Ce pouvoir d’appétence élevé a été observé même lorsque l’hydrolysat est utilisé à des doses relativement faibles notamment lorsqu’il est utilisé en une quantité allant de 0,5 à 10%, de préférence de 1 à 6% en poids par rapport au poids total de l’aliment.
[0043] Il a également été observé que les acides aminés de l’hydrolysat présentent une bonne diffusion dans l’eau ce qui permet une bonne détection par les crevettes, ce qui favorise les capacités d’attraction de l’aliment sur lesdites crevettes.
[0044] Procédé de préparation de l’hydrolysat
[0045] Avantageusement l’hydrolysat utilisé selon l’invention est obtenu par un procédé de préparation dans lequel la matière kératinique est une matière kératinique de préférence de volaille, comprenant au moins les étapes suivantes, dans cet ordre :
- soumettre la matière kératinique à au moins une hydrolyse chimique au moyen d’un acide dans des conditions aptes à obtenir un hydrolysat comprenant au moins 88% en poids d’acides aminés libres par rapport au poids total des acides aminés de l’hydrolysat, le reste des acides aminés de l’hydrolysat étant sous la forme de peptides présentant une masse moléculaire inférieure ou égale à 800 Dalton,
-de préférence extraire la tyrosine et la cystine dudit hydrolysat de préférence au moyen d’une base;
-éventuellement sécher. [0046] L’hydrolysat selon l’invention est obtenu à partir de matières kératiniques naturelles, avantageusement à partir de plumes de volailles. A titre de volailles, on peut citer les poules, poulets, dindes, canards, oies...
[0047] En particulier, l’hydrolysat selon la présente invention n’est pas obtenu à partir de kératine humaine tels que les cheveux.
[0048] Le procédé de préparation de l’hydrolysat de kératine selon l’invention met en œuvre au moins une hydrolyse chimique au moyen d’un acide dans des conditions aptes à obtenir un hydrolysat comprenant au moins 88% en poids d’acides aminés libres par rapport au poids total des acides aminés de l’hydrolysat, le reste des acides aminés de l’hydrolysat étant sous la forme de peptides présentant une masse moléculaire inférieure ou égale à 800 Dalton.
[0049] Le pourcentage en peptides - présentant une masse moléculaire inférieure ou égale à 800 Dalton- dans l’hydrolysat va généralement de 5 à 12 % en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat.
[0050] L’hydrolyse chimique de la kératine est réalisée au moyen d’un acide de préférence un acide fort choisi parmi les acides chlorhydrique, phosphorique et sulfurique, de préférence l’acide chlorhydrique. De préférence l’acide fort est utilisé en une concentration allant de 10 à 30%, de préférence de 15 à 25%.
[0051] L’hydrolyse chimique est généralement effectuée pendant une durée allant de 1 heure à 8 heures, de préférence allant de 6 à 7 heures à une température allant de 110 à 115°C.
[0052] Selon une variante particulière, l’hydrolyse chimique est effectuée en deux étapes :
-une première hydrolyse chimique, de préférence acide, réalisée à une température allant de 60 à 80°C pendant une période allant de 4 à 5 heures puis
-une deuxième hydrolyse chimique, de préférence acide, réalisée à une température allant de 100 à 115°C pendant une période allant de 5 à 8 heures, les deux hydrolyses pouvant être réalisées sans étape de pause intermédiaire ou en effectuant une étape de pause intermédiaire comprise entre 1 heure et 7 jours.
[0053] Plus précisément la première hydrolyse chimique est réalisée à 72°C pendant 4,5 heures et la deuxième hydrolyse chimique est réalisée à 107°C pendant 6 heures, une pause intermédiaire de 24 à 80 heures étant effectuée entre les deux hydrolyses chimiques.
[0054] L’hydrolyse chimique, réalisée en une ou plusieurs étapes, est avantageusement suivie d’au moins une étape d’extraction de la cystine et de la tyrosine.
[0055] L’étape d’extraction de la cystine et de la tyrosine est réalisée au moyen d’une base, de préférence choisie parmi l’hydroxyde de sodium, l’hydroxyde de potassium, de préférence l’hydroxyde de sodium. L’ajout d’une base à l’hydrolysat permet de faire précipiter les acides aminés les moins solubles (cystine, tyrosine majoritairement), les rendant ainsi séparables de la phase liquide par des techniques adéquates, telles que la filtration ou l’essorage.
[0056] Les étapes d’hydrolyse chimique et d’extraction de la cystine et de la tyrosine peuvent être suivies d’étapes optionnelles de purification de l’hydrolysat obtenu.
[0057] Les étapes d’hydrolyse chimique et d’extraction de la cystine et de la tyrosine peuvent être suivies d’étapes optionnelles de séchage par exemple par atomisation.
[0058] Les étapes de purification et de séchage sont des étapes classiques dont la mise en œuvre relève des compétences de l’homme du métier.
[0059] L’étape d’extraction de la cystine et de la tyrosine peut être suivie d’une étape optionnelle de récupération de certains acides aminés du précipité par redissolution de celui-ci dans l’acide, puis reprécipitation avec une base, les acides aminés à récupérer se trouvant alors dans la phase liquide.
[0060] De préférence, l’hydrolysat utilisé selon la présente invention comprend moins de 1 % en poids de tyrosine par rapport au poids total de l’hydrolysat, de manière préférée moins de 0,5%, de manière encore préférée, l’hydrolysat ne contient pas de tyrosine. Les seules traces de tyrosine étant dues aux limites des conditions opératoires et du matériel mis en œuvre lors de l’étape d’extraction.
[0061] De préférence, l’hydrolysat selon la présente invention comprend moins de 2,5%, de préférence moins de 1 ,5% et de manière préférée moins de 1 % en poids de cystine par rapport au poids total de l’hydrolysat, de manière encore préférée, l’hydrolysat ne contient pas de cystine.
[0062] En outre, dans la mesure où l’hydrolysat selon l’invention n’est pas obtenu suite à une réduction par électrolyse, il ne comprend pas de cystéine.
[0063] Aliment
[0064] Comme déjà mentionné, la présente invention vise l’utilisation d’un hydrolysat de kératine particulier dans un aliment pour l’alimentation des crevettes en croissance, avantageusement l’aliment complet comprend de 0,5 à 10%, de préférence de 1 à 6% en poids d’hydrolysat par rapport au poids total de l’aliment
[0065] L’aliment peut être un aliment complet ou un aliment complémentaire, de préférence, l’aliment est un aliment complet.
[0066] Par « aliment complet », on entend généralement un aliment fournissant de façon équlibrée à l’individu qui l’ingère toutes les matières et les nutriments nécessaires à sa vie et à son développement.
[0067] L’aliment complémentaire qualifie un aliment distribué en plus de la nourriture habituelle, généralement pour compléter spécifiquement l’alimentation en un ou plusieurs ingrédients particuliers.
[0068] L’aliment complet, respectivement complémentaire, est formulé selon une recette classique d’aliment complet, respectivement complémentaire, pour l’alimentation des crevettes à l’état post-larvaire et/ou à un stade de croissance compris entre l’état post-larvaire et un âge de 90 jours.
[0069] L’aliment, de préférence l’aliment complet, présente des propriétés nutritionnelles avantageuses, et une biodisponibilité ainsi qu’un pouvoir d’appétence élevés voire très élevés vis-à-vis des crevettes au stade postlarvaire ou à un stade de croissance compris entre l’état post-larvaire et un âge de 90 jours.
[0070] De préférence l’aliment est un aliment complet comprenant au moins les composants suivants : au moins une farine d’animal marin, au moins une huile de poisson, de la farine de blé, du calcium, du phosphore, du chlorure de sodium, de la lécithine de soja, du cholestérol, de la taurine et un prémélange de vitamines choisies dans le groupe constitué par les vitamines A, du groupe B, C, D3, E, K3, et d’oligoéléments choisis dans le groupe constitué par le fer, le cuivre, le manganèse, le zinc, le cobalt et le sélénium.
[0071 ] A titre de farines d’animaux marins, les farines de poissons, la farine de calamar ou de foie de calamar ou encore la farine de krill peuvent être utilisées. Selon une première variante de l’invention, l’aliment complet comprend une farine de poissons et une farine d’animal marin, autre que le poisson, choisie parmi la farine de calamar, la farine de foie de calamar et la farine de krill. Selon une deuxième variante de l’invention, l’aliment complet comprend une farine de poissons, de la farine de krill et de la farine de calamar ou de foie de calamar.
[0072] De manière préférée, l’aliment complet comprend de 45 à 55% en poids de farines de poissons par rapport au poids total dudit aliment complet.
[0073] De manière préférée, l’aliment complet comprend de 3 à 10% en poids de farine d’animaux marins autre que le poisson par rapport au poids total dudit aliment complet.
[0074] A titre de farine végétale, la farine de blé et le gluten de blé peuvent être utilisés dans l’aliment complet.
[0075] De manière préférée, l’aliment complet comprend de 35 à 45% en poids de farine de blé par rapport au poids total dudit aliment complet.
[0076] A titre d’autres sources de protéines, la levure de bière peut être utilisée dans l’aliment complet. [0077] A titre de matière grasse, l’aliment complet comprend au moins une huile choisie parmi les huiles de poissons, les huiles de crustacés et les huiles d’origine végétale.
[0078] De manière préférée, l’aliment complet comprend de 3 à 10% en poids d’huile(s) de poisson(s) par rapport au poids total dudit aliment complet.
[0079] En outre l’aliment complet comprend avantageusement un prémélange de vitamines et d’oligoéléments, prêt à être introduit dans la formulation finale, dénommé Premix.
[0080] Le prémélange comprend notamment des vitamines A, du groupe B, C, D3, E et K3, ainsi que des oligoéléments tels le fer, le cuivre, le manganèse, le zinc, le cobalt et le sélénium, de la lécithine de soja, du méso-inositol, du chlorure de choline, de la taurine, du cholestérol, de l’asthaxanthine, des acides organiques, du calcium, du phosphore, du sel, du chlorure de potassium. Il peut en outre comprendre des acides aminés tels que la lysine, la méthionine et le tryptophane.
[0081] De manière préférée, l’aliment complet comprend une quantité allant de 1 à 5% en poids de Premix par rapport au poids total de l’aliment complet.
[0082] A titre d’aliment complet, on peut utiliser les produits commercialisés par la société Nicovita sous la dénomination Nicovita Origin 0.5 et Nicovita Origin 0.8. De préférence Nicovita Origin 0.5 est utilisé entre 21 jours (PL12) et 29 jours (PL20) et Nicovita Origin 0.8 entre 30 jours (PL21 ) et 90 jours.
[0083] L’aliment complet utilisé selon l’invention peut être formulé avec les ingrédients usuellement utilisés dans les compositions pour l’alimentation des crevettes, notamment les agents humectants, les épaississants, les agents de texture, les émulsifiants, les agents de saveur, les agents d’enrobage, les conservateurs, les antioxydants, les colorants, les extraits de plantes, les ingrédients non protéiques tels que des amidons purifiés, les fibres végétales, les minéraux. Bien entendu, l’homme du métier veillera à choisir ces excipients de manière à ne pas altérer les propriétés de l’aliment complet. [0084] L’aliment complet pour l’alimentation animale conforme à l’invention peut être formulé selon une des présentations suivantes : une préparation sèche contenant moins de 15% poids d’eau, de préférence sous forme de granulés, ou une préparation humide comprenant au moins 50% poids d’eau et 85% poids d’eau au maximum.
[0085] Selon une première variante, l’hydrolysat de kératine est incorporé dans l’aliment complet par mélange dudit hydrolysat avec les autres composants de l’aliment complet.
[0086] Selon une deuxième variante, l’hydrolysat de kératine est appliqué par enrobage en surface de l’aliment complet. Les méthodes utilisées pour réaliser ces étapes de « coating » ou « top-coating », notamment par pulvérisation (« spray-coating ») relèvent des compétences de l’homme du métier.
[0087] La formulation de l’aliment complet pour l’alimentation animale conforme à l’invention met en œuvre des procédés classiques qui font partie des compétences générales de l’homme du métier.
[0088] L’aliment complet est introduit directement dans l’eau.
[0089] Généralement l’aliment complet est utilisé de manière à administrer une quantité allant de 0,003g à 2,500g d’hydrolysat utilisé selon l’invention pour 100 crevettes.
[0090] Utilisations
[0091 ] L’utilisation de l’hydrolysat permet l’obtention d’un aliment complet et équilibré, source d’acides aminés libres, et qui permet de s’affranchir des protéines alimentaires d’origine végétale et/ou animale de structure moléculaire complexe et de poids moléculaire important. L’utilisation de l’hydrolysat permet une meilleure assimilation des nutriments présents dans l’alimentation et en particulier dans l’aliment complet.
[0092] Ainsi l’utilisation de l’hydrolysat selon la présente invention dans un aliment, de préférence complet, pour l’alimentation des crevettes à partir du stade post-larvaire notamment à partir du 10ème jour (PL1 ) et de préférence à partir du 19ème jour (PL10) puis pendant au moins 15 jours, de préférence au moins 21 jours, de manière préférée au moins 35 jours et avantageusement au moins 56 jours permet d’augmenter la biomasse desdites crevettes.
[0093] De manière préférée, les crevettes sont alimentées avec ledit aliment complet pendant tout le stade post larvaire et avantageusement jusqu’au début du stade juvénile -correspondant au 50éme jour d’âge des crevettes.
[0094] L’invention vise encore l’utilisation de l’hydrolysat dans un aliment, de préférence complet, en tant que prébiotique pour modifier la composition de la flore intestinale des crevettes.
[0095] Cette utilisation qui permet de contribuer à la croissance de bactéries intestinales favorisant l’équilibre intestinal est adéquate pour une bonne absorption des nutriments en conditions d’élevage où les apports en aliments diversifiés sont limités.
[0096] L’hydrolysat a été utilisé pour l’alimentation de crevettes en croissance dont l’âge est compris entre 10 et 90 jours. Dans ces conditions d’élevage, l’hydrolysat permet d’améliorer l’appétence des crevettes pour l’aliment complet.
[0097] Les crevettes alimentées avec l’aliment de préférence complet utilisé selon l’invention présentent des propriétés adéquates pour la commercialisation en termes de couleur et de taille.
[0098] La présente invention vise aussi un procédé pour augmenter la biomasse des crevettes dans lequel lesdites crevettes sont alimentées à partir du stade post-larvaire, de préférence à partir du 19ème jour jour d’âge, puis pendant au moins 15 jours, de préférence au moins 21 jours, de manière préférée au moins 35 jours et avantageusement au moins 56 jours avec un aliment, de préférence complet, comprenant de 0,5 à 10 % de préférence de 1 à 6 % de l’hydrolysat de kératine selon la présente invention.
[0099] Conditions optimales d’élevage [0100] L’hydrolysat particulier a été utilisé pour l’alimentation de crevettes saines en croissance dont l’âge va de 10 à 90 jours, de préférence de 20 à 50 jours.
[0101] Sans vouloir être lié à une quelconque théorie, il semble que l’hydrolysat particulier utilisé selon l’invention permet de réduire l’impact des conditions d’élevage sur les crevettes saines. En effet, les conditions d’élevage conduisent inévitablement à une densité de population plus importante que la densité dans le milieu naturel, en outre la nourriture présente dans cet espace limité est moins abondante et moins diversifiée. Ces conditions font que la croissance des crevettes saines peut être affectée, ce qui se traduit par une plus faible augmentation de la biomasse.
[0102] Par ailleurs, les conditions d’élevage peuvent également conduire à une diminution du nombre de crevettes saines.
[0103] Enfin les conditions d’élevage peuvent être telles que le pourcentage de survie des crevettes soit affecté.
[0104] La présente invention vise ainsi l’utilisation de l’hydrolysat selon la présente invention dans un aliment, de préférence complet, pour l’alimentation des crevettes saines à partir du stade post-larvaire notamment à partir de 10 jours d’ âge (PL1 ) pour augmenter la biomasse desdites crevettes, en particulier la biomasse des crevettes dont l’âge est compris entre 19 à 29 jours -correspondant au stade post-larvaire PL10 à PL20-, et 28 jours de plus à compter de ce stade, de préférence la biomasse des crevettes dont l’âge est compris entre 20 et 50 jours.
[0105] En outre il a été observé que la biomasse totale et le poids individuel sont augmentés.
[0106] On entend par biomasse le poids total des animaux vivants à un stade donné de l’élevage. Le poids individuel est calculé en divisant la biomasse par le nombre d’animaux présents au stade donné de l’élevage.
[0107] L’utilisation de l’hydrolysat selon la présente invention concourt à un bon développement des crevettes au point de vue quantitatif. [0108] La présente invention vise aussi l’utilisation d’un hydrolysat dans un aliment selon l’invention, pour l’alimentation des crevettes saines à partir du stade post-larvaire correspondant à 10 à 29 jours pour augmenter le nombre desdites crevettes présentes en fin de période post-larvaire et/ou le nombre des crevettes dont l’âge est compris entre 19 à 29 jours et 28 jours de plus, de préférence le nombre des crevettes dont l’âge est compris entre 20 et 50 jours.
[0109] La durée de l’alimentation des crevettes à partir du stade post-larvaire est généralement poursuivie pendant au moins 15 jours, de préférence pendant au moins 21 jours et de manière encore préférée pendant au moins 28 jours.
[0110] La présente invention vise ainsi un procédé pour augmenter la biomasse des crevettes saines dans lequel lesdites crevettes sont alimentées à partir du stade post-larvaire, de préférence à partir du 19ème jour d âge, puis pendant au moins 15 jours, de préférence pendant au moins 21 jours et de manière encore préférée pendant au moins 28 jours, avec un aliment de préférence complet comprenant de 0,5 à 10 % de préférence de 1 à 6 % de l’hydrolysat selon la présente invention.
[0111 ] La présente invention vise encore un procédé pour augmenter le nombre de crevettes saines, dans lequel lesdites crevettes sont alimentées à partir du stade post-larvaire, de préférence à partir du 19eme jour d’âge, puis pendant au moins 15 jours, de préférence pendant au moins 21 jours et de manière préférée pendant au moins 28 jours, avec un aliment de préférence complet, comprenant de 0,5 à 10% de préférence de 1 à 6% d’un hydrolysat de kératine selon la présente invention.
[0112] Ces utilisations, procédés qui entrent dans des conditions d’élevage de crevettes saines n’appartiennent pas au domaine thérapeutique.
[0113] Conditions d’élevage en présence de microorganismes pathogènes
[0114] L’hydrolysat particulier a été utilisé pour l’alimentation de crevettes en croissance, dont l’âge est compris entre 10 et 90 jours, de préférence entre 20 et 90 jours et de manière préférée entre 40 et 90 jours, les crevettes étant élevées en présence de micro-organismes pathogènes.
[0115] L’alimentation des crevettes au moyen de l’hydrolysat particulier utilisé selon l’invention à partir du stade post-larvaire permet de renforcer la résistance des crevettes en présence de micro-organismes pathogènes notamment par augmentation des défenses immunitaires.
[0116] Il apparait que l’utilisation de l’hydrolysat selon la présente invention dans un aliment pour l’alimentation des crevettes permet de diminuer l’impact des infections dues à la présence de bactéries et virus pathogènes. Il permet ainsi de ralentir la progression des infections.
[0117] La présente invention vise l’utilisation de l’hydrolysat selon l’invention dans un aliment, de préférence complet, pour l’alimentation des crevettes à partir du stade post-larvaire correspondant à 10 à 29 jours pour augmenter la biomasse desdites crevettes élevées en présence de micro-organismes pathogènes, en particulier la biomasse des crevettes dont l’âge est compris entre 19 à 29 jours et 90 jours, de préférence entre 20 et 90 jours, et de manière préférée entre 40 et 90 jours.
[0118] La durée de l’alimentation des crevettes à partir du stade post-larvaire est de préférence poursuivie pendant au moins 21 jours, de préférence pendant au moins 35 jours et de manière encore préférée pendant au moins 56 jours.
[0119] La présente invention vise ainsi un procédé pour augmenter la biomasse des crevettes élevées en présence de micro-organismes pathogènes, dans lequel lesdites crevettes sont alimentées à partir du stade post-larvaire, de préférence à partir du 19eme jour d’âge, puis pendant au moins 21 jours, de préférence pendant au moins 35 jours et de manière encore préférée pendant au moins 56 jours avec un aliment, de préférence complet, comprenant de 0,5 à 10 % de préférence de 1 à 6 % de l’hydrolysat selon l’invention.
[0120] La présente invention vise aussi l’utilisation de l’hydrolysat selon la présente invention dans un aliment, de préférence complet, pour l’alimentation des crevettes à partir du stade post-larvaire correspondant à 10 à 29 jours pour augmenter la survie desdites crevettes élevées en présence de microorganismes pathogènes en particulier la survie des crevettes dont l’âge est compris entre 19 à 29 jours et 90 jours, de préférence entre 20 et 90 jours et de manière préférée entre 40 et 90 jours.
[0121] La présente invention vise également un procédé pour augmenter la survie des crevettes élevées en présence de microorganismes pathogènes, dans lequel lesdites crevettes sont alimentées à partir du stade post-larvaire, de préférence à partir du 19eme jour, puis pendant au moins 21 jours, de préférence pendant au moins 35 jours et de manière encore préférée pendant au moins 56 jours avec un aliment de préférence complet, comprenant de 0,5 à 10 % de préférence de 1 à 6 % d’un hydrolysat de kératine selon la présente invention.
[0122] Les exemples qui suivent visent à illustrer l’invention sans en limiter la portée.
[0123] Exemples
[0124] Exemple 1- Hydrolysat 1
[0125] Préparation de l’hydrolysat 1
[0126] On introduit 4 500 kg de plumes de volaille dans un réacteur/hydrolyseur de 50 000 litres. Une première étape d’hydrolyse chimique est réalisée en ajoutant 18 000 litres d’acide chlorhydrique (24%), l’hydrolyse est effectuée à 72°C pendant 4,5 heures. Le produit obtenu est stocké pendant 48 heures à température ambiante (pause intermédiaire). Ensuite une deuxième hydrolyse chimique est effectuée dans un réacteur de 20 000 litres en chauffant à 107°C pendant 6 heures sans ajout d’acide. Le produit obtenu est laissé à refroidir.
[0127] Ensuite, une étape d’extraction de la tyrosine et de la cystine est réalisée, en ajustant le pH à 5 au moyen d’hydroxyde de sodium. Les acides aminés qui précipitent (majoritairement cystine et tyrosine) sont séparés par essorage. Les eaux d’essorage sont récupérées. Le précipité est redissous dans l’acide chlorhydrique dilué, puis reprécipité par ajout de solution d’hydroxyde de sodium, et essoré à nouveau. Les eaux de ce deuxième essorage sont adjointes à celles du premier essorage.
[0128] La solution obtenue est séchée par atomisation. [0129] On obtient 4200 kg d’hydrolysat sous forme sèche.
[0130] Résultats- Détermination de la composition de l’hydrolysat
[0131] Le tableau 2 présente, pour chaque acide aminé présent, la teneur en acides aminés totaux (libres et liés) par rapport au poids total de l’hydrolysat, ainsi que la fraction pondérale acides aminés (A. A.) libres / acides aminés (A. A.) totaux.
[0132] Les acides aminés sont séparés par chromatographie (CLHP ou
« HPLC » en langue anglaise) avec colonne échangeuse d’ions et dosés par réaction avec la ninhydrine et détection photométrique à 570 nm. Les acides aminés de l’hydrolysat sont dosés selon une méthode adaptée du règlement CE 152/2009.
[0133] [Tableau 2] poids des acides aminés totaux (libres et liés).
[0135] La teneur en matière sèche de l’hydrolysat est de 98.6% en poids.
[0136] Exemple 2 [0137] Aliment complet pour l’alimentation des crevettes
[0138] On prépare un aliment complet à partir de la composition A présentée dans le tableau 3 ci-dessous.
[0139] [Tableau 3]
[0140] Le tableau 4 présente les teneurs en vitamines et oligoéléments apportés par le prémix (prémélange) incorporé à 2 % dans la composition A.
[0141] [Tableau 4]
[0142] Le tableau 5 présente les valeurs nutritionnelles de la composition A. temps deux aliments complets ont été préparés à partir de la composition A : un aliment A sour forme de granules de granulométrie 0.5 mm nommé Formulation A-0.5 et un aliment A sous forme de granules de granulométrie 0.8 mm nommé Formulation A-0.8.
[0145] Puis à partir de la composition A-0.5 (contrôle) deux compositions d’aliment complet conformes à l’invention B et C comprenant respectivement 1 et 5 % d’hydrolysat décrit à l’exemple 2 ont été préparées. Enfin, à partir de la composition A-08 (contrôle), trois compositions d’aliments complets conformes à l’invention B, C et D comprenant respectivement 1 , 5 et 10 % d’hydrolysat décrit à l’exemple 2 ont été préparées. [0146] Les sept formulations sont nommées : Formulation A-0,5 ; Formulation A-0,8 ; Formulation B-0,5 ; Formulation B-0,8 ; Formulation C-0,5 ; Formulation C-0,8 ; Formulation D-0,8.
[0147] Les compositions A, B et C formulées sous forme de granules de granulométrie 0.5 mm, sont destinées aux crevettes du stade PL12 à PL20 et les compositions A, B, C et D formulées sous forme de granules de granulométrie 0.8 mm, sont destinées aux crevettes du stade PL21 à 90 jours d’âge.
[0148] Les formulations B à D sont préparées en mélangeant l’hydrolysat avec de l’eau selon des rapports pondéraux : 3/5 d’hydrolysat et 2/5 d’eau.
[0149] Puis cette solution est homogénisée et appliquée en enrobage sur la formulation A-0,5 ou sur la formulation A-0,8 selon les rapports requis pour obtenir les Formulation B-0,5 (à 1 % d’hydrolysat) ; Formulation B-0,8 (à 1 % d’hydrolysat); Formulation C-0,5 (à 5% d’hydrolysat); Formulation C-0,8 (à 5% d’hydrolysat) et Formulation D-0,8 (à 10% d’hydrolysat).
[0150] Les Formulation A-0,5 et Formulation A-0,8 ont été préparées de la même manière en appliquant de l’eau sur la composition de base.
[0151] Puis apres séchage, un mélange d’huile de poisson et de lécithine de soja (rapport 2 :1 en poids) est appliqué sur chaque formulation pour assurer la stabilité de l’aliment complet.
[0152] Exemple 3 - Etude sur les crevettes d’élevage
[0153] Matériel et méthode
[0154] Les crevettes utilisées sont des crevettes blanches Litopeaneus vannamei post-larvaires de 19 à 29 jours d’âge, de poids moyen individuel de 0,005g pour les crevettes de l’exemple 3.1 et 0,028g pour les crevettes de l’exemple 3.2. L’absence d’infections sur ces crevettes a été confirmée par des analyses par PCR.
[0155] Exemples 3.1 et 3.2- Croissance Phase I
[0156] Pour chacun des exemples 3.1 et 3.2, 27 récipients de 20 litres ont été utilisés, chacun a été rempli de 15 litres d’eau et 90 crevettes y ont été introduites. La qualité de l’eau a été contrôlée deux fois par jour en mesurant les paramètres classiques, les valeurs moyennes sont présentées dans le tableau 6.
[0157] [Tableau 6] [0158] Les crevettes sont nourries à la main, avec les formulations A-0,5, B-
0,5 et C-0,5. Les doses journalières d’aliment complet, et en conséquence d’hydrolysat, distribuées en grammes pour 100 crevettes sont calculées en fonction d’un pourcentage de la biomasse de crevette présente pour chaque jour de la période d’élevage. Ce pourcentage est de 100 le premier jour de la distribution d’aliment et décroit progressivement jusqu’à 8.6% au bout de 28 jours comme le détaille le tableau 7 ci-dessous.
[0159] [Tableau 7]
0160] Les crevettes de l’exemple 3.1 sont nourries pendant 28 jours tandis que les crevettes de l’exemple 3.2 sont nourries pendant 21 jours.
[0161] Le tableau 8 présente l’évolution de la survie et la biomasse dans les exemples 3.1 et 3.2, respectivement après 28 et 21 jours de croissance. [0162] [Tableau 8]
C163] L’analyse statistique des résultats a été réalisée selon l’analyse de la Variance qui permet la comparaison entre elles des moyennes de chaque groupe pour les deux critères considérés ; cette analyse permet d’affirmer si ces moyennes sont différentes ou pas entre elles sur le plan statisitique. Ainsi, les valeurs moyennes figurant dans le tableau avec des lettres différentes sont statistiquement différentes aves un risque d’erreur de 5 % : une valeur notée « a » est différente de « b » mais pas de « ab ».
[0164] L’utilisation de l’hydrolysat selon la présente invention dans un aliment complet à hauteur de 1 à 5 % pour l’alimentation des crevettes saines à partir du stade post-larvaire permet une augmentation de la biomasse des crevettes comprises entre +3.8% et + 13.1 %.
[0165] Dans les deux exemples, on observe une augmentation systématique du nombre de crevettes et de la biomasse pour les compositions B et C (Formulations B-0,5 et C-0,5) en comparaison à la composition A. Cette augmentation est significative pour ces deux critères pour la composition B dans l’exemple 3.2 et pour le nombre de crevette pour la composition C dans l’exemple 3.1 .
[0166] Exemples 3.3 à 3.6- Croissance Phase II
[0167] Les élevages des crevettes des exemples 3.1 et 3.2 ont été poursuivis pendant 4 semaines avec les formulations de granulométrie 0, 8 mm. La formulation supplémentaire D-0.8 a été ajoutée au dispositif expérimental. A ceci près, la poursuite de l’élevage des crevettes de l’exemple 3.1 correspond aux exemples 3.3 et 3.5 et la poursuite de l’élevage des crevettes de l’exemple 3.2 correspond aux exemples 3.4 et 3.6.
[0168] Les crevettes sont nourries à la main, avec les Formulation A-0,8 ; Formulation B-0,8 ; Formulation C-0,8 ou Formulation D-0,8. Les doses journalières d’aliment complet (et en conséquence d’hydrolysat) distribuées en grammes pour 100 crevettes sont calculées en fonction d’un pourcentage de la biomasse de crevette présente pour chaque jour de la période d’élevage. Ce pourcentage est de 100 le premier jour de la distribution d’aliment et décroit progressivement jusqu’à 3.6% au bout de 70 jours comme le détaille le tableau 9 ci-dessous.
[0169] [Tableau 9]
0170] En outre, les populations (36 récipients) des exemples 3.3 et 3.4 ont été divisées en deux groupes :
-le groupe « EMS » correspond à un élevage en présence de bactéries Vibrio parahaemolyticus ; -le groupe « WSSV » correspond à un élevage en présence du virus de la maladie des points blancs.
Le tableau 10 correspond aux résultats obtenus avec le groupe individus EMS
[Tableau 10]
0171] Le tableau 11 correspond aux résultats obtenus avec le groupe individus WSSV.
[0172] [Tableau 11]
[0173] L’utilisation des compositions B, C et D (Formulations B-0,8 ; C-0,8 ; D- 0,8) permet une augmentation de la biomasse dans la plupart des cas et également une augmentation de la survie (nombre d’individus vivants à la fin de l’expérimentation). Cette augmentation est statistiquement significative pour la biomasse et pour la survie avec les compositions C et D des exemples 3.4 et 3.3 respectivement. Cette augmentation est statistiquement significative pour la survie des crevettes ayant reçu les compositions B, C et D pour les exemples 3.5 et 3.6.

Claims

Revendications
[Revendication 1] [Composition alimentaire pour l’alimentation des crevettes âgées de 10 à 90 jours, de préférence de 20 à 50 jours, contenant un hydrolysat de kératine comprenant au moins 88% en poids d’acides aminés libres par rapport au poids total des acides aminés de l’hydrolysat, le reste des acides aminés de l’hydrolysat étant sous la forme de peptides présentant une masse moléculaire inférieure ou égale à 800 Dalton, ledit hydrolysat comprenant de l’arginine en une teneur allant de 5 à 8% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat, de l’acide glutamique en une teneur allant de 8 à 13% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat, de la proline en une teneur allant de 8 à 13% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat, pour la détermination des quantités d’acides aminés libres et totaux, les acides aminés sont séparés par chromatographie.
[Revendication 2] Composition alimentaire selon la revendication 1 comprenant de 0,5 à 10%, de préférence de 1 à 6% en poids d’hydrolysat par rapport au poids total de la composition alimentaire.
[Revendication 3] Composition alimentaire selon la revendication 1 ou 2 dans laquelle l’hydrolysat présente la composition suivante en acides aminés totaux : une teneur en acide aspartique allant de 5 à 8 % en poids, de préférence allant de 6 à 7 % en poids ; une teneur en thréonine allant de 4 à 6 % en poids, de préférence de 4 à 5 % en poids ; une teneur en sérine allant de 9 à 14 % en poids, de préférence allant de 10 à 12 % en poids; une teneur en acide glutamique allant de 9 à 11 % ; une teneur en glycine allant de 6 à 9 % en poids, de préférence allant de 7 à 8 % en poids; une teneur en alanine allant de 4 à 6 % en poids, de préférence de 4 à 5 % en poids ; une teneur en valine allant de 6 à 10 % en poids, de préférence allant de 7 à 8 % en poids; une teneur en méthionine allant de 0,1 à 0,6 % en poids ; une teneur en isoleucine allant de 4 à 6 % en poids, de préférence allant de 4 à 5 % en poids ; une teneur en leucine allant de 6 à 9 % en poids, de préférence allant de 7 à 8 % en poids; une teneur en phénylalanine allant de 2 à 5 % en poids ; une teneur en lysine allant de 1 à 3 % en poids, une teneur en histidine allant de 0,
4 à 1 % en poids ; une teneur en arginine allant de 5,5 à 6,5 % en poids ; une teneur en proline allant de 8.5 à 11 % en poids, une teneur en tryptophane inférieure à 0,1 % ,de préférence 0 % en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat. [Revendication 4] Composition alimentaire selon la revendication précédente dans laquelle l’hydrolysat présente une teneur en cystine allant de 1 à 2,5 % en poids, de préférence allant de 1 à 2 % en poids et une teneur en tyrosine allant de 0,1 à 1 % en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat.
[Revendication 5] Composition alimentaire selon l’une quelconque des revendications précédentes dans laquelle l’hydrolysat comprend les acides aminés libres suivants : au moins 95% d’acide aspartique sous forme libre en poids par rapport au poids total d’acide aspartique dans l’hydrolysat ; au moins 95% de thréonine sous forme libre en poids par rapport au poids total de thréonine dans l’hydrolysat ; au moins 95% de sérine sous forme libre en poids par rapport au poids total de sérine dans l’hydrolysat ; au moins 93 % d’acide glutamique sous forme libre en poids par rapport au poids total d’acide glutamique dans l’hydrolysat ; au moins 93% de glycine sous forme libre en poids par rapport au poids total de glycine dans l’hydrolysat ; au moins 93% d’alanine sous forme libre en poids par rapport au poids total d’alanine dans l’hydrolysat ; au moins 93% de méthionine sous forme libre en poids par rapport au poids total de méthionine dans l’hydrolysat ; au moins 93% de phénylalanine sous forme libre en poids par rapport au poids total de phénylalanine dans l’hydrolysat ; au moins 95%, de proline sous forme libre en poids par rapport au poids total de proline dans l’hydrolysat.
[Revendication 6] Composition alimentaire selon l’une quelconque des revendications précédentes dans laquelle ladite composition alimentaire est un aliment complet comprenant au moins les composants suivants : au moins une farine d’animal marin, au moins une huile de poisson, de la farine de blé, du calcium, du phosphore, du chlorure de sodium, de la lécithine de soja, du cholestérol, de la taurine et un prémélange de vitamines choisies dans le groupe constitué par les vitamines A, du groupe B, C, D3, E, K3, et d’oligoéléments choisis dans le groupe constitué par le fer, le cuivre, le manganèse, le zinc, le cobalt et le sélénium.
[Revendication 7] Utilisation d’un hydrolysat de kératine comprenant au moins 88% en poids d’acides aminés libres par rapport au poids total des acides aminés de l’hydrolysat, le reste des acides aminés de l’hydrolysat étant sous la forme de peptides présentant une masse moléculaire inférieure ou égale à 800 Dalton, ledit hydrolysat comprenant de l’arginine en une teneur allant de 5 à 8% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat, de l’acide glutamique en une teneur allant de 8 à 13% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat, de la proline en une teneur allant de 8 à 13% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat, dans un aliment pour l’alimentation des crevettes âgées de 10 à 90 jours, de préférence de 20 à 50 jours, pour la détermination des quantités d’acides aminés libres et totaux, les acides aminés sont séparés par chromatographie.
[Revendication 8] Utilisation selon la revendication 7 dans laquelle l’aliment comprend de 0,5 à 10%, de préférence de 1 à 6% en poids d’hydrolysat par rapport au poids total de l’aliment.
[Revendication 9] Utilisation selon la revendication 7 ou 8 dans laquelle l’hydrolysat présente la composition suivante en acides aminés totaux : une teneur en acide aspartique allant de 5 à 8 % en poids, de préférence allant de 6 à 7 % en poids ; une teneur en thréonine allant de 4 à 6 % en poids, de préférence de 4 à 5 % en poids ; une teneur en sérine allant de 9 à 14 % en poids, de préférence allant de 10 à 12 % en poids; une teneur en acide glutamique allant de 9 à 11 % ; une teneur en glycine allant de 6 à 9 % en poids, de préférence allant de 7 à 8 % en poids; une teneur en alanine allant de 4 à 6 % en poids, de préférence de 4 à 5 % en poids ; une teneur en valine allant de 6 à 10 % en poids, de préférence allant de 7 à 8 % en poids; une teneur en méthionine allant de 0,1 à 0,6 % en poids ; une teneur en isoleucine allant de 4 à 6 % en poids, de préférence allant de 4 à 5 % en poids ; une teneur en leucine allant de 6 à 9 % en poids, de préférence allant de 7 à 8 % en poids; une teneur en phénylalanine allant de 2 à 5 % en poids ; une teneur en lysine allant de 1 à 3 % en poids, une teneur en histidine allant de 0,4 à 1 % en poids ; une teneur en arginine allant de 5,5 à 6,5 % en poids ; une teneur en proline allant de 8.5 à 11 % en poids , une teneur en tryptophane inférieure à 0,1 % ,de préférence 0 % en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat.
[Revendication 10] Utilisation selon la revendication précédente dans laquelle l’hydrolysat présente une teneur en cystine allant de 1 à 2,5 % en poids, de préférence allant de 1 à 2 % en poids et une teneur en tyrosine allant de 0,1 à
I % en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat.
[Revendication 11] Utilisation selon l’une quelconque des revendications 7 à 10 dans laquelle l’hydrolysat comprend les acides aminés libres suivants : au moins 95% d’acide aspartique sous forme libre en poids par rapport au poids total d’acide aspartique dans l’hydrolysat ; au moins 95% de thréonine sous forme libre en poids par rapport au poids total de thréonine dans l’hydrolysat ; au moins 95% de sérine sous forme libre en poids par rapport au poids total de sérine dans l’hydrolysat ; au moins 93 % d’acide glutamique sous forme libre en poids par rapport au poids total d’acide glutamique dans l’hydrolysat ; au moins 93% de glycine sous forme libre en poids par rapport au poids total de glycine dans l’hydrolysat ; au moins 93% d’alanine sous forme libre en poids par rapport au poids total d’alanine dans l’hydrolysat ; au moins 93% de méthionine sous forme libre en poids par rapport au poids total de méthionine dans l’hydrolysat ; au moins 93% de phénylalanine sous forme libre en poids par rapport au poids total de phénylalanine dans l’hydrolysat ; au moins 95%, de proline sous forme libre en poids par rapport au poids total de proline dans l’hydrolysat.
[Revendication 12] Utilisation selon l’une quelconque des revendications 7 à
I I dans laquelle l’aliment est un aliment complet comprenant au moins les composants suivants : au moins une farine d’animal marin, au moins une huile de poisson, de la farine de blé, du calcium, du phosphore, du chlorure de sodium, de la lécithine de soja, du cholestérol, de la taurine et un prémélange de vitamines choisies dans le groupe constitué par les vitamines A, du groupe B, C, D3, E, K3, et d’oligoéléments choisis dans le groupe constitué par le fer, le cuivre, le manganèse, le zinc, le cobalt et le sélénium.
[Revendication 13] Utilisation d’un hydrolysat dans un aliment selon l’une quelconque des revendications 7 à 12 pour améliorer l’effet d’appétence dudit aliment.
[Revendication 14] Utilisation d’un hydrolysat dans un aliment selon l’une quelconque des revendications 7 à 12 pour augmenter la biomasse des crevettes.
[Revendication 15] Utilisation d’un hydrolysat de kératine selon l’une quelconque des revendications 7 à 12 en tant que prébiotique pour modifier la composition de la flore intestinale des crevettes.
[Revendication 16] Utilisation d’un hydrolysat dans un aliment selon l’une quelconque des revendications 7 à 12 pour l’alimentation des crevettes saines à partir du stade post-larvaire correspondant à 10 à 29 jours pour augmenter le nombre desdites crevettes présentes en fin de période post-larvaire et/ ou le nombre des crevettes dont l’âge est compris entre 19 à 29 jours et 28 jours de plus, de préférence le nombre des crevettes dont l’âge est compris entre 20 et 50 jours.
[Revendication 17] Utilisation d’un hydrolysat dans un aliment selon l’une quelconque des revendications 7 à 12 pour l’alimentation des crevettes à partir du stade post-larvaire correspondant à 10 à 29 jours pour augmenter la biomasse desdites crevettes élevées en présence de microorganismes pathogènes, en particulier la biomasse des crevettes dont l’âge est compris entre 19 à 29 jours et 90 jours, de préférence entre 20 et 90 jours, et de manière préférée entre 40 et 90 jours.
[Revendication 18] Utilisation d’un hydrolysat dans un aliment selon l’une quelconque des revendications 7 à 12 pour l’alimentation des crevettes à partir du stade post-larvaire correspondant à 10 à 29 jours pour augmenter la survie desdites crevettes élevées en présence de microorganismes pathogènes en particulier la survie des crevettes dont l’âge est compris entre 19 à 29 jours et 90 jours, de préférence entre 20 et 90 jours, et de manière préférée entre 40 et 90 jours.
[Revendication 19] Procédé pour augmenter la biomasse des crevettes dans lequel lesdites crevettes sont alimentées à partir du stade post-larvaire, de préférence à partir du 19ème jour jour d’âge, puis pendant au moins 15 jours, de préférence au moins 21 jours, de manière préférée au moins 35 jours et avantageusement au moins 56 jours avec un aliment, de préférence complet, comprenant de 0,5 à 10 % de préférence de 1 à 6 % d’un hydrolysat de kératine, ledit hydrolysat comprenant au moins 88% en poids d’acides aminés libres par rapport au poids total des acides aminés de l’hydrolysat, le reste des acides aminés de l’hydrolysat étant sous la forme de peptides présentant une masse moléculaire inférieure ou égale à 800 Dalton, ledit hydrolysat comprenant de l’arginine en une teneur allant de 5 à 8% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat, de l’acide glutamique en une teneur allant de 8 à 13% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat, de la proline en une teneur allant de 8 à 13% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat.
[Revendication 20] Procédé pour augmenter le nombre de crevettes saines, dans lequel lesdites crevettes sont alimentées à partir du stade post-larvaire, de préférence à partir du 19eme jour d’âge, puis pendant au moins 15 jours, de préférence pendant au moins 21 jours et de manière préférée pendant au moins 28 jours, avec un aliment de préférence complet, comprenant de 0,5 à 10 % de préférence de 1 à 6 % d’un hydrolysat de kératine, ledit hydrolysat comprenant au moins 88% en poids d’acides aminés libres par rapport au poids total des acides aminés de l’hydrolysat, le reste des acides aminés de l’hydrolysat étant sous la forme de peptides présentant une masse moléculaire inférieure ou égale à 800 Dalton, ledit hydrolysat comprenant de l’arginine en une teneur allant de 5 à 8% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat, de l’acide glutamique en une teneur allant de 8 à 13% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat, de la proline en une teneur allant de 8 à 13% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat.
[Revendication 21 ] Procédé pour augmenter la survie des crevettes élevées en présence de microorganismes pathogènes, dans lequel lesdites crevettes sont alimentées à partir du stade post-larvaire, de préférence à partir du I 9eme jour, puis pendant au moins 21 jours, de préférence pendant au moins 35 jours et de manière encore préférée pendant au moins 56 jours avec un aliment de préférence complet, comprenant de 0,5 à 10 % de préférence de 1 à 6 % d’un hydrolysat de kératine, ledit hydrolysat comprenant au moins 88% en poids d’acides aminés libres par rapport au poids total des acides aminés de l’hydrolysat, le reste des acides aminés de l’hydrolysat étant sous la forme de peptides présentant une masse moléculaire inférieure ou égale à 800 Dalton, ledit hydrolysat comprenant de l’arginine en une teneur allant de 5 à 8% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat, de l’acide glutamique en une teneur allant de 8 à 13% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat, de la proline en une teneur allant de 8 à 13% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat.
[Revendication 22] Procédé selon l’une quelconque des revendications 19 à 21 dans lequel l’hydrolysat présente la composition suivante en acides aminés totaux : une teneur en acide aspartique allant de 5 à 8 % en poids, de préférence allant de 6 à 7 % en poids ; une teneur en thréonine allant de 4 à 6 % en poids, de préférence de 4 à 5 % en poids ; une teneur en sérine allant de 9 à 14 % en poids, de préférence allant de 10 à 12 % en poids; une teneur en acide glutamique allant de 9 à 11 % ; une teneur en glycine allant de 6 à 9 % en poids, de préférence allant de 7 à 8 % en poids; une teneur en alanine allant de 4 à 6 % en poids, de préférence de 4 à 5 % en poids ; une teneur en valine allant de 6 à 10 % en poids, de préférence allant de 7 à 8 % en poids; une teneur en méthionine allant de 0,1 à 0,6 % en poids ; une teneur en isoleucine allant de 4 à 6 % en poids, de préférence allant de 4 à 5 % en poids ; une teneur en leucine allant de 6 à 9 % en poids, de préférence allant de 7 à 8 % en poids; une teneur en phénylalanine allant de 2 à 5 % en poids ; une teneur en lysine allant de 1 à 3 % en poids, une teneur en histidine allant de 0,4 à 1 % en poids ; une teneur en arginine allant de 5,5 à 6,5 % en poids ; une teneur en proline allant de 8.5 à 11 % en poids , une teneur en tryptophane inférieure à 0,1 % ,de préférence 0 % en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat.
[Revendication 23] Procédé selon selon l’une quelconque des revendications 19 à 21 dans lequel l’hydrolysat comprend les acides aminés libres suivants : au moins 95% d’acide aspartique sous forme libre en poids par rapport au poids total d’acide aspartique dans l’hydrolysat ; au moins 95% de thréonine sous forme libre en poids par rapport au poids total de thréonine dans l’hydrolysat ; au moins 95% de sérine sous forme libre en poids par rapport au poids total de sérine dans l’hydrolysat ; au moins 93 % d’acide glutamique sous forme libre en poids par rapport au poids total d’acide glutamique dans l’hydrolysat ; au moins 93% de glycine sous forme libre en poids par rapport au poids total de glycine dans l’hydrolysat ; au moins 93% d’alanine sous forme libre en poids par rapport au poids total d’alanine dans l’hydrolysat ; au moins 93% de méthionine sous forme libre en poids par rapport au poids total de méthionine dans l’hydrolysat ; au moins 93% de phénylalanine sous forme libre en poids par rapport au poids total de phénylalanine dans l’hydrolysat ; au moins 95%, de proline sous forme libre en poids par rapport au poids total de proline dans l’hydrolysat.
[Revendication 24] Procédé de préparation de l’hydrolysat utilisé dans l’une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce qu’il est effectué en deux étapes :
-une première hydrolyse chimique réalisée à une température allant de 60 à 80°C pendant une période allant de 4 à 5 heures puis
-une deuxième hydrolyse chimique réalisée à une température allant de 100 à 115°C pendant une période allant de 5 à 8 heures, les deux hydrolyses pouvant être réalisées sans étape de pause intermédiaire ou en effectuant une étape de pause intermédiaire comprise entre 1 heure et 7 jours.
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