EP3490534A1 - Composition orale d'anticorps anti-tnf alpha - Google Patents

Composition orale d'anticorps anti-tnf alpha

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Publication number
EP3490534A1
EP3490534A1 EP17749664.3A EP17749664A EP3490534A1 EP 3490534 A1 EP3490534 A1 EP 3490534A1 EP 17749664 A EP17749664 A EP 17749664A EP 3490534 A1 EP3490534 A1 EP 3490534A1
Authority
EP
European Patent Office
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pharmaceutical composition
antibody
composition according
release
antibodies
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP17749664.3A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Christine Gaucher
Nadège HANDKE
Cécile JAUME
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LFB SA
Original Assignee
LFB SA
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Filing date
Publication date
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Publication of EP3490534A1 publication Critical patent/EP3490534A1/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/1652—Polysaccharides, e.g. alginate, cellulose derivatives; Cyclodextrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons

Definitions

  • the present invention relates to compositions for oral administration of an anti-tumor necrosis factor alpha (TNFa) antibody.
  • TNFa anti-tumor necrosis factor alpha
  • TNF alpha is a pro-inflammatory cytokine that is secreted by and interacts with cells of the immune system. TNFa has been shown to be involved in many human diseases, including chronic inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis, Crohn's disease, ulcerative colitis, and multiple sclerosis.
  • Several anti-TNFa antibodies are currently under development. Two antibodies are already commercially available: infliximab (Remicade®), and adalimumab (Humira®), in injectable forms subcutaneously or intravenously.
  • anti-TNFa antibody therapy particularly systemic, may have undesirable side effects, including the occurrence of bacterial infections such as tuberculosis (Jarequi-Amezaga et al., Journal of Crohn's and Colitis). 2013, 7 (3), 208-212), or Listeria infections (Abreu et al., Journal of Crohn's and colitis, 2013, 7 (2), 175-182) or Candida (Huang et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition, 2013, 56 (4), pages 23-6).
  • anti-TNFa antibody formulations for oral administration are currently under development. However none is marketed and there is still a need to provide compositions to improve the efficacy and / or safety of anti-TNFa antibodies administered orally.
  • the subject of the present invention is therefore a pharmaceutical composition for oral administration, comprising an anti-tumor necrosis factor alpha (TNFa) antibody and at least one or more pharmaceutically acceptable excipients chosen from the group comprising: a carboxymethyl-dextran, a chitosan, a cyclodextrin or a combination thereof.
  • TNFa anti-tumor necrosis factor alpha
  • the antibody dissociates from human TNFa with the following constants: Kd less than 1 x 10 "8 M (preferably less than 1 x 10" 9 M, more preferably less than 1 x 10 "10 M, still more preferably less than 1x10” 11 M ) and Koff of 1 x 10 "3 sec" 1 or less, both determined by a resonant test surface plasmon ( "surface plasmon resonance”).
  • the antibody is neutralizing. In particular, it neutralizes the biological function of TNFa by blocking its interaction with TNF receptors p55 and p75 located on the cell surface.
  • the antibody-neutralizing capacity can be tested by a standard test, in particular by measuring the ability of the antibody to neutralize human TNF cytotoxicity on human fibroblast cells (L929) with an IC50 of 1x10 "7 M or less, preferably less than 1 x 10 "8 M, more preferably less than 1 x 10" 9 M, or even more preferably less than 1 x 10 "10 M.
  • the anti-TNF alpha antibody is a monoclonal antibody.
  • the anti-TNF alpha antibody according to the invention may be an antibody of a mammal such as a mouse, or may be humanized, or entirely human. In a particularly advantageous embodiment, the anti-TNF alpha antibody is a human monoclonal antibody.
  • the anti-TNF alpha antibody according to the invention has a heavy chain comprising SEQ ID No.1 and a light chain comprising SEQ ID No.2.
  • SEQ ID NO: 1 SEQ ID No.1
  • the anti-TNF alpha antibody may be adalimumab, infliximab or golimumab.
  • the anti-TNF alpha antibody is adalimumab.
  • Adalimumab is an immunoglobulin G (IgG) composed of two light kappa chains and two lgG1 heavy chains.
  • the antibody used in the present invention can be produced by any technique well known to those skilled in the art.
  • the antibody according to the invention is a recombinant antibody.
  • the antibody may be produced recombinantly in a host cell, transformed with one or more vectors that allow the expression and / or the secretion of the nucleotide sequences coding for the heavy chain and / or the light chain of the antibody.
  • the vector generally comprises a promoter, translation initiation and termination signals, as well as appropriate transcriptional regulatory regions. It is stably maintained in the host cell and may optionally have particular signals that specify the secretion of the translated protein. These different elements are chosen and optimized by those skilled in the art depending on the cellular host used.
  • Such vectors are prepared by methods commonly used by those skilled in the art, and the resulting clones can be introduced into a suitable host by standard methods, such as lipofection, electroporation, the use of polycationic agents, thermal shock, or chemical methods.
  • the cellular host may be chosen from prokaryotic or eukaryotic systems, for example bacterial cells, but also yeast cells or animal cells, in particular non-human mammalian cells.
  • Mammalian cells preferred for the production of the monoclonal antibody are the YB2 / 0 rat line, the CHO hamster line, in particular the CHO dhfr- and CHO Lecl3 lines, PER.C6TM (Crucell), 293, K562, NSO, SP2 / 0, BHK or COS. Insect cells can also be used.
  • the anti-TNF alpha antibody is produced in non-human mammalian mammary epithelial cells. Another mode of production is the expression of the recombinant antibody in transgenic organisms, for example in plants (Ayala et al., Methods Mol Biol., 2009; 483, pp.
  • the anti-TNF alpha antibody is produced in the milk of a non-human transgenic mammal.
  • the antibody is produced in the milk of non-human transgenic mammals genetically modified to produce this glycoprotein.
  • the mammal may be for example a goat, ewe, females of bison, buffalo, camel, llama, mouse, rat, or a cow, sow, rabbit, or mare.
  • the antibody is produced in transgenic goat's milk.
  • the secretion of the antibody by the mammary glands involves controlling the expression of the antibody in a tissue-dependent manner.
  • control methods are well known to those skilled in the art.
  • the control of the expression is carried out thanks to sequences allowing the expression of the glycoprotein in a particular tissue of the animal. These include promoter sequences of "WAP”, “ ⁇ -casein”, “ ⁇ -lactoglobulin” and optionally signal peptide type sequences.
  • the antibody is produced in the mammary glands of a transgenic goat, using an expression vector comprising the sequence of the two chains, under the control of a 5 ' ⁇ -casein promoter.
  • a method for extracting proteins of interest from transgenic animal milk is described in patent EP 0 264 166.
  • more than 4 grams of antibody per liter of milk are produced, advantageously more than 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35 grams per liter, even more advantageously up to 70 grams per liter.
  • the antibody produced by animal transgenesis in particular in the mammary glands of a transgenic goat, is in the form of a population of anti-TNF ⁇ antibodies which exhibit glycosylation with a high level of galactosylation, by example greater than 60%, preferably greater than 70%, more preferably at least 80%.
  • the fucosylation rate of all the antibodies in the population is at least 50%, and in particular at least 60%.
  • the anti-TNFa antibody population comprises antibodies which comprise mono-galactosyl N-glycans.
  • the anti-TNFa antibody population comprises antibodies which comprise bi-galactosylated N-glycans.
  • the ratio of the level of galactosylation of the antibodies of the population and the fucosylation rate of the antibodies of the population is between 1, 0 to 1, 4.
  • at least 35% of the antibodies in the population comprise bi-galactosyl N-glycans and at least 25% of the antibodies in the population comprise mono-galactosyl N-glycans.
  • the sialylation rate of the antibodies is at least 50%, preferably at least 70%, or at least 90%.
  • the antibodies are totally sialylated.
  • N-glycans are not regulated by coding, as is the case with proteins, but is primarily dependent on the expression and activity of specific glycosyltransferases in a cell.
  • a glycoprotein such as the Fc fragment of an antibody, normally exists as a heterogeneous population of glycoforms that carry different glycans on the same protein backbone.
  • a highly galactosylated antibody population is an antibody population in which the galactosylation level of all antibodies in the population is at least 50%, at least 60%, at least 70% at least 80%, at least 90%, up to 100% galactosylation.
  • the galactosylation rate of all the antibodies in the population is at least 60%.
  • the level of galactosylation can be determined with the following formula:
  • N represents the number of N-glycans analyzed on a chromatogram, for example a normal phase high performance liquid chromatography spectrum (NP HPLC),
  • “Galactose number” represents the number of galactoses on the glycan antenna corresponding to the peak
  • “Number of A” represents the number of N-acetylglucosamine units on the antenna of the glycan form corresponding to the peak (excluding the two N-acetylglucosamine units of the common framework structure of glycans)
  • % Relative area is the percentage of the area under the corresponding peak.
  • the level of galactosylation of the antibodies of the antibody population can be determined, for example, by releasing the N-glycans from the antibodies, by solving the N-glycans on a chromatogram, by identifying the N-glycanic oligosaccharide motif which corresponds to a specific peak, determining the intensity of the peak and applying the data to the formula mentioned above.
  • Antibodies that are galactosyl include antibodies that have mono- galactosyl N-glycans and bi-galactosyl N-glycans.
  • the highly galactosylated antibody population comprises antibodies that include mono-galactosylated N-glycans, which may or may not be sialylated.
  • the highly galactosylated antibody population at least 1%, at least 5%, at least 10%, at least 15%, at least 20%, at least 25%, at least 30%, at least 40%, at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%, up to 100% of the N-glycans of the antibodies include mono-galactosylated N-glycans.
  • at least 25% of the antibodies comprise mono-galactosyl N-glycans.
  • the population includes antibodies that include bi-galactosylated N-glycans, which may or may not be sialylated.
  • at least 1%, at least 5%, at least 10%, at least 15%, at least 20%, at least 25%, at least 30%, at least 40%, at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%, up to 100% of the N-glycans of the antibodies include bi-galactosylated N-glycans.
  • the population of highly galactosylated antibodies at least 35% of the antibodies comprise bi-galactosylated N-glycans.
  • the population comprises antibodies which comprise mono-galactosylated N-glycans, which may or may not be sialylated, and antibodies which include bi-galactosylated N-glycans, which may or may not be sialylated.
  • At least 1%, at least 5%, at least 10%, at least 15%, at least 20%, at least 25%, at least 30%, at least 40%, at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%, up to 99% of the N-glycans of the antibodies comprise mono-galactosylated N-glycans, and at least 1%, at least 5%, at least 10%, at least 15%, at least 20%, at least 25%, at least 30%, at least 40%, at least 50%, at least 60%, at least less than 70%, at least 80%, at least 90%, up to 99% of the N-glycans of the antibodies comprise bi-galactosylated N-glycans.
  • At least 25% of the antibodies comprise mono-galactosyl N-glycans, and at least 35% of the antibodies comprise bi-galactosyl N-glycans.
  • the anti-TNF ⁇ antibody is produced by the mammary epithelial cells of a non-human transgenic mammal and is produced exogenously in the mammary gland.
  • the therapeutic antibodies thus produced have a high level of galactosylation, and possibly increased levels of alpha-2,6 sialic acid terminal linkages on their Fc-linked glycans residues.
  • the antibody has a high mannose glycosylation profile.
  • a "high mannose glycosylation profile” refers to an antibody that contains at least one oligomannose or antibody composition in which at least 30% of the antibody contains at least one oligomannose. In some embodiments at least 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% or more of the antibodies' sugars are non-fucosylated oligomannoses. In other embodiments less than 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5% or less of the sugars of the antibodies contain fucose. In another embodiment, the antibodies have a low fucose content and a high oligomannose content.
  • At least 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% or 90% or more of the antibodies' sugars are oligomannose and less than 50%, 40%, 30%, 20%, 10% or 5% of the sugars of the antibodies contain fucose.
  • at least 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% or 90% or more of the antibodies' sugars are of nonfucosylated oligomannose and less than 50%, 40%, 30%, 20%, 10% or 5% of the sugars of the antibodies contain fucose.
  • the oligosaccharides containing mannose may advantageously contain from 5 to 9 mannoses.
  • An oligosaccharide containing Y mannoses is described by the term ManY.
  • oligosaccharides containing mannose may include Man5, Man6, Man7, Man8 and Man9.
  • the antibody such as Adalimumab produced transgenically, has a high content of Man6.
  • the major sugar is Man5.
  • at least 10%, 15%, or more of the sugars are Man5.
  • at least 20% of the sugars are of Man5.
  • the major sugar is Man6.
  • At least 10%, 15%, or more of the sugars of the transgenically produced antibody are Man6.
  • at least 20% of the sugars are of Man6.
  • the major sugar is Man7.
  • at least 10%, 15% or more of the sugars are Man7.
  • at least 20% of the sugars are Man7.
  • High affinity means an affinity at least equal to 2 ⁇ 10 6 M -1 , preferably at least 2 ⁇ 10 7 M -1 , 2 ⁇ 10 8 M -1 or 2 ⁇ 10 9 M -1 , as determined by Scatchard analysis. or BIAcore technology (Label-free surface plasmon resonance based technology). This receptor is found on many immune cells, including natural killer cells, macrophages, neutrophils, and mast cells.
  • anti-TNF ⁇ antibody populations produced in mammary gland epithelial cells are superior, in terms of binding to soluble TNF ⁇ , to antibodies produced in cells that are not mammary gland epithelial cells.
  • anti-TNF ⁇ antibody populations produced in mammary gland cells are superior, in terms of transmembrane TNF ⁇ binding, to antibodies produced in cells that are not mammary gland epithelial cells.
  • the anti-TNF ⁇ antibody may be the antibody described in the international application WO2014 / 125374.
  • the pharmaceutical composition of the invention as defined above is devoid of at least one of the following excipients: caprylic acid or a salt of caprylate, glucose, fructose, galactose, mannose, sorbose, sucrose, ribose, deoxyribose, sucrose, maltitol, inulin, lecithin, trehalose, lactose, maltose, raffinose, mannitol, sorbitol, glycerol, arabitol, lactitol, xylitol, polypropylene glycol, polyethylene glycol, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, polysorbate 20, polysorbate 80, poloxamers, polyoxyethylene alkyl ethers, polyoxyethylene alkylphenylpolyoxyethylene ethers, polyoxyethylene-polyoxypropylene copolymer, sodium dodecylsulphate, sodium succinate, sodium chloride
  • lacking means that the composition of the invention does not contain caprylic acid or salt of caprylate, glucose, fructose, galactose, mannose, sorbose, sucrose , ribose, deoxyribose, sucrose, maltitol, inulin, lecithin, trehalose, lactose, maltose, raffinose, mannitol, sorbitol, glycerol, arabitol, lactitol, xylitol , polypropylene glycol, polyethylene glycol, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, polysorbate 20, polysorbate 80, poloxamers, polyoxyethylene alkyl ethers, alkylphenylpolyoxyethylene ethers, copolymer of polyoxyethylene-polyoxypropylene, sodium dodecylsulphate, sodium succinate, sodium chloride, sodium citrate, citric acid
  • the pharmaceutical composition of the invention as defined above is devoid of anticoagulant-effect molecule, in particular EDTA.
  • the pharmaceutical composition of the invention as defined above is devoid of surfactant, in particular polysorbate 20, polysorbate 80 or poloxamer.
  • the pharmaceutical composition of the invention as defined above is devoid of a laxative molecule, in particular mannitol, sorbitol, glycerol, lactitol or xylitol.
  • excipients mentioned above have in particular been discarded because of their anticoagulant activity such as EDTA, or because they present a risk of developing Crohn's disease when ingested, such as in particular polysorbate 20, the polysorbate 80 or poloxamer, or because these excipients may have a laxative effect, such as in particular mannitol, maltitol, lactitol, xylitol or sorbitol.
  • the pharmaceutical composition for oral administration comprises: a monoclonal antibody anti-tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha), as active principle, and
  • TNF-alpha monoclonal antibody anti-tumor necrosis factor alpha
  • CMD carboxymethyl dextran
  • the pharmaceutical composition for oral administration comprises: a monoclonal antibody anti-tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha), as active ingredient, and
  • chitosan as a pharmaceutically acceptable excipient.
  • the pharmaceutical composition for oral administration comprises: a monoclonal antibody anti-tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha), as active ingredient, and
  • cyclodextrin as a pharmaceutically acceptable excipient.
  • the cyclodextrin may be chosen from ⁇ -cyclodextrin, ⁇ -cyclodextrin, ⁇ -cyclodextrin, one of their derivatives, such as in particular a hydroxypropyl, hydroxyethyl, ethyl or methyl derivative, a cyclodextrin. sulfobutyl beta-ether, a branched cyclodextrin, a cyclodextrin-based polymer or a mixture thereof.
  • the cyclodextrin may be hydroxypropyl- ⁇ -cyclodextrin (or HPBCD).
  • the pharmaceutical composition for oral administration comprises: a monoclonal antibody anti-tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) as active principle, and
  • HPBCD Hydroxypropyl-3-cyclodextrin
  • the pharmaceutical composition for oral administration comprises: a monoclonal antibody anti-tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) as active principle, and
  • CMD carboxymethyl dextran
  • HPBCD ⁇ hydroxypropyl-3-cyclodextrin
  • the pharmaceutical composition for oral administration comprises: a monoclonal antibody anti-tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) as active principle, and
  • CMD carboxymethyl-dextran
  • chitosan a combination of carboxymethyl-dextran (CMD) and chitosan, as a pharmaceutically acceptable excipient.
  • the pharmaceutical composition for oral administration comprises: a monoclonal antibody anti-tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) as active principle, and
  • a combination of a cyclodextrin, especially ⁇ hydroxypropyl- ⁇ -cyclodextrin (HPBCD) and chitosan, as a pharmaceutically acceptable excipient especially ⁇ hydroxypropyl- ⁇ -cyclodextrin (HPBCD) and chitosan, as a pharmaceutically acceptable excipient.
  • HPBCD ⁇ hydroxypropyl- ⁇ -cyclodextrin
  • the pharmaceutical composition for oral administration comprises: a monoclonal antibody to tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) as the active ingredient, and
  • CMD carboxymethyl dextran
  • HPBCD ⁇ hydroxypropyl-3-cyclodextrin
  • chitosan a combination of carboxymethyl dextran (CMD), cyclodextrin, especially ⁇ hydroxypropyl-3-cyclodextrin (HPBCD) and chitosan, as a pharmaceutically acceptable excipient.
  • the pharmaceutical composition for oral administration may further comprise at least one amino acid.
  • the amino acid may be chosen from arginine, glycine, lysine, histidine, glutamate, glutamine, asparagine, isoleucine, leucine, alanine, phenylalanine, threonine, tyrosine, tryptophan, methionine, serine, proline, cysteine, selenocysteine, proline, valine, a derivative salt thereof, such as a hydrochloride or a phosphate, or a mixture of these.
  • the amino acid is chosen from hydrophilic amino acids.
  • the amino acid is glycine or one of these derived salts, such as glycine hydrochloride.
  • the amino acid is arginine or one of these derived salts, such as arginine hydrochloride.
  • the pharmaceutical composition for oral administration comprises: a monoclonal antibody anti-tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) as active principle,
  • TNF-alpha monoclonal antibody anti-tumor necrosis factor alpha
  • CMD carboxymethyl dextran
  • an amino acid in particular glycine, optionally in its hydrochloride form.
  • the pharmaceutical composition for oral administration comprises: a monoclonal antibody anti-tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) as active principle,
  • TNF-alpha monoclonal antibody anti-tumor necrosis factor alpha
  • the pharmaceutical composition for oral administration comprises: a monoclonal antibody anti-tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) as active principle,
  • cyclodextrin in particular hydroxypropyl-3-cyclodextrin (HPBCD), as a pharmaceutically acceptable excipient
  • an amino acid in particular glycine, optionally in its hydrochloride form.
  • the pharmaceutical composition for oral administration comprises: a monoclonal antibody anti-tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) as active principle,
  • TNF-alpha monoclonal antibody anti-tumor necrosis factor alpha
  • CMD carboxymethyl dextran
  • HPBCD hydroxypropyl-3-cyclodextrin
  • an amino acid in particular glycine, optionally in its hydrochloride form.
  • the pharmaceutical composition for oral administration comprises: a monoclonal antibody anti-tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) as active principle,
  • TNF-alpha monoclonal antibody anti-tumor necrosis factor alpha
  • CMD carboxymethyl-dextran
  • chitosan a combination of carboxymethyl-dextran (CMD) and chitosan, as a pharmaceutically acceptable excipient
  • an amino acid in particular glycine, optionally in its hydrochloride form.
  • the pharmaceutical composition for oral administration comprises: a monoclonal antibody anti-tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) as active principle,
  • TNF-alpha monoclonal antibody anti-tumor necrosis factor alpha
  • HPBCD hydroxypropyl- ⁇ -cyclodextrin
  • chitosan as a pharmaceutically acceptable excipient
  • an amino acid in particular glycine
  • the pharmaceutical composition for oral administration consists of: a monoclonal antibody anti-tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) as active principle, and
  • CMD carboxymethyl dextran
  • the pharmaceutical composition for oral administration consists of: a monoclonal antibody anti-tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) as active principle,
  • CMD carboxymethyl dextran
  • a cyclodextrin in particular hydroxypropyl-3-cyclodextrin (HPBCD).
  • HPBCD hydroxypropyl-3-cyclodextrin
  • the pharmaceutical composition for oral administration consists of: a monoclonal antibody anti-tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) as active principle,
  • CMD carboxymethyl dextran
  • HPBCD hydroxypropyl-3-cyclodextrin
  • an amino acid in particular glycine, optionally in its hydrochloride form.
  • the pharmaceutical composition for oral administration consists of: a monoclonal antibody anti-tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) as active principle, and
  • chitosan as a pharmaceutically acceptable excipient.
  • the pharmaceutical composition according to the invention is in solid form.
  • the pharmaceutical composition in solid form can be obtained by any technique well known to those skilled in the art.
  • the pharmaceutical composition in solid form can be obtained by lyophilization, drying atomization or by spray drying.
  • compositions of the present invention may be in any of the galenical forms normally used for oral administration, especially in the form of tablets, capsules, capsules, lozenges, powder, syrup or any form for solid oral preparation or in any form of oral preparation.
  • the composition is in the form of a prolonged-release and / or delayed-release formulation.
  • extended-release and / or delayed-release formulation means a dosage form adapted to targeted release in the gastrointestinal tract, and in particular the intestine.
  • intestine is meant here all parts of the intestine, especially the colon.
  • Such compositions are particularly useful in the treatment of inflammatory bowel diseases because they allow local action at the site of the infection (especially small intestine or colon). They also limit the passage of antibodies in the bloodstream, limiting the side effects related to anti-TNFa antibodies.
  • the pharmaceutical composition in the form of a sustained-release and / or delayed-release formulation comprising the anti-TNF ⁇ antibody and at least one pharmaceutically acceptable excipient as described above may be formulated into solid dosage forms, such as tablets or capsules.
  • the pharmaceutical composition in the form of a prolonged-release and / or delayed-release formulation comprising the anti-TNF ⁇ antibody and at least one pharmaceutically acceptable excipient as described above may further comprise at least one coating agent. .
  • the coating agent by virtue of its resistance to the acidic pH of the stomach (between 1 and 3), makes it possible in particular to protect the composition comprising the anti-TNF ⁇ antibody and at least one pharmaceutically acceptable excipient of the acidic pH of the stomach and their release in the small intestine and the colon where the pH values are close to 7.
  • the coating agent may be an agent film-forming agent, preferably gastro-soluble or a coating agent.
  • the coating agent may be chosen from the group comprising: acrylic acid derivatives, methacrylic acid derivatives, ethyl acrylate derivatives, hydroxypropyl methylcellulose derivatives, polyvinyl acetate derivatives phatlates; poly (methyl acrylate -co-methyl methacrylate -co-methacrylic acid, poly (methacrylate acid -co-methyl methacrylate), sold especially under the names Eudragit ® S100 ® Eudragit FS30D, Eudragit ® L100, Eudragit ® L12,5 Eudragit ® L30D- 55, Eudragit ®, L100-55, Eudragit ® S12,5, hydroxypropylmethylcellulose (HPMCP), succinyl hydroxypropylmethylcellulose acetate, also known as HPMCAS and marketed under the name AQOAT ®, Shellac or a mixture thereof .
  • HPMCAS hydroxypropylmethylcellulose
  • the pharmaceutical composition in the form of a sustained-release and / or delayed-release formulation comprising the anti-TNF ⁇ antibody and at least one pharmaceutically acceptable excipient as described above may comprise a monolayer of a single coating agent, a monolayer consisting of a mixture of several coating agents, a multilayer consisting of a single coating agent; a multilayer consisting of a mixture of several different coating agents or a superposition of several monolayers consisting of a single coating agent.
  • formulations can be used which are coated with degradable polymers by the colon microorganisms (more particularly by bacterial enzymes such as azoreductases and glycosidases), for example azo polymers having a high degree of hydrophilicity.
  • Gels and hydrogels may also be used, including polysaccharide hydrogels.
  • compositions of the invention may comprise or be combined with other therapeutic agents useful in the treatment of inflammatory diseases or autoimmune diseases.
  • Another aspect of the invention relates to a method of preparing a sustained release and / or delayed release pharmaceutical composition, said method comprising: a) a step of mixing the anti-TNF alpha antibody with one or more pharmaceutically acceptable excipients selected from the group consisting of: carboxymethyl dextran, chitosan, cyclodextrin or a combination thereof. b) a drying step, particularly by atomization, of the composition obtained in step a), c) A coating step.
  • step c) of coating can be carried out by any technique well known to those skilled in the art.
  • the coating step c) can be carried out by coating, by coating, in particular by adding film-forming agents, by spraying, by enteric coating in a fluidized bed, by dry coating, by stripping coating.
  • dry coating is meant any solvent-free process using a mechanical action to coat a solid pharmaceutical form with a discrete or continuous layer of inert or active powders. For example, it makes it possible to obtain composite particles comprising several layers of different compositions.
  • step c) of coating can be carried out with one or more coating agents by applying: a monolayer consisting of a single coating agent, or
  • a multilayer consisting of a mixture of several coating agents, or a superposition of several monolayers consisting of a single coating agent, each of the monolayers having a different coating agent.
  • a sustained release and / or delayed release pharmaceutical composition comprising an anti-tumor necrosis factor alpha (TNFa) antibody and at least one or more pharmaceutically acceptable excipients selected from the group consisting of: a carboxymethyl-dextran , a chitosan, a cyclodextrin or a combination thereof, for its use in the treatment of inflammatory diseases or autoimmune diseases.
  • TNFa anti-tumor necrosis factor alpha
  • Another aspect of the invention is a method of treating inflammatory diseases or autoimmune diseases comprising administering to a patient in need thereof a sustained release pharmaceutical composition comprising an anti-tumor necrosis factor alpha antibody. (TNFa) and at least one or more pharmaceutically acceptable excipients selected from the group consisting of: carboxymethyl dextran, chitosan, cyclodextrin or a combination thereof.
  • Figure 1 Results of the functional test at T0, T + 2 hours and T + 5 hours after passing through the SHI ME® system.
  • the formulations are presented in the following order (from left to right): 1 / without excipients, 21 HPBCD, 3 / CMD, 4 / HPBCD + CMD, 5 / HPCD + EDTA, 6 / Polysorbate 20 + EDTA + Trehalose, 7 / Poloxamer 188 + EDTA + Trehalose, 8 / CMD + Polysorbate 20 + Arginine, 9 / CMD + Polysorbate 20 + Glycine, 10 / Chitosan.
  • anti-TNF ⁇ antibodies used are those described in the international application WO2014 / 125374 of the Applicant.
  • HPBCD Hydroxypropyl-beta-cyclodextrin
  • Poloxamer 188 1 .25 mg / mL
  • the anti-TNF ⁇ antibody formulations in the presence of the different excipients are set at 5, 40 and 50 ° C for 3, 7 and 14 days.
  • the formulations are the subject of the following analyzes:
  • SEC Size Exclusion Chromatography
  • anti-TNF ⁇ antibody formulation samples are diluted to 2 mg / mL in PBS buffer (10mM Na 2 HPO 4 + 1.8mM KH 2 PO 4 + 2.7mM KCl + 137mM NaCl) and then centrifuged for 5 minutes at 15,000g. The supernatants are transferred into flasks, deposited in chromatography gel for separation and then each peak is detected by absorbance measurement at 280 nm.
  • DLS Dynamic Light Scattering
  • the functional activity test consists of an antibody binding test to membrane TNF ⁇ proteins with flow cytometric detection, making it possible to determine the conservation of the binding activity of the antibody to its target.
  • Poloxamer 188 1, 25 mg / mL Good Good
  • results considered to be good make it possible to preserve both the quantity and the quality of the protein, especially after stress at 50 ° C. for 14 days (preservation of the quantity of proteins and preservation of the distribution profile of the forms of the protein).
  • the total protein level decreased significantly for formulations comprising carbopol, lecithin, SLS, albumin, inulin, and maltitol, indicating the formation of insoluble proteins that were removed by centrifugation.
  • Pic 1 Pic 2 Pic 3 Pic 2 Pic 3 monomers (others) (others) Monomers (others) (others)
  • SLS sulfate
  • results in DLS confirm that formulations comprising Carbopol (971P and 974P), inulin, lecithin, maltitol, do not maintain the stability of the anti-TNFa antibody.
  • the other formulations show good preservation of the protein, particularly in the presence of excipients CMD, chitosan, glycine or HPBCD.
  • Formulations considered compatible (good results only) in SEC and DLS are then tested for functional activity.
  • the formulations comprising the excipients Carbopol 971P, Carbopol 974P, lecithin, inulin and maltitol are determined to be incompatible with the anti-TNF ⁇ antibody, because of the formation of white flakes (flocculation of the formulation), indicating that the protein of interest and / or the protein and its excipient have precipitated.
  • the test makes it possible to evaluate the formation of dry powder and the possible need for addition of protectants (surfactants and / or amino acids) during the drying step.
  • protectants surfactants and / or amino acids
  • the drying atomization of the placebo solutions was optimized on a laboratory-scale drying sprayer type B-290 (Buchi, Flawil, Switzerland).
  • the test is then carried out with the excipients and with the addition of anti-TNFa antibodies.
  • the dried spray drying particles are collected in a tank attached to a cyclone. After the process, the powder is cooled to room temperature and transferred to a glass bottle.
  • the powders obtained have a residual moisture content of less than 15% by weight.
  • the powders are then reconstituted in acetate buffer (500 ⁇ for 5 mg of powder) to control the possible negative impact of the spray drying step. All the powders have a good preservation of the quantity and the quality of the anti-TNFa antibody protein.
  • Example 2 The formulations of Example 2, previously selected to provide the stability of the anti-TNF ⁇ antibody and dried, are then tested for oral administration. In particular, an assay was performed in a model mimicking the ascending colon (SHIME® System from ProDigest) to study the effect of each formulation.
  • SHIME® System from ProDigest
  • Jurkat cells transfected to express the membrane TFNa are incubated with 100 ⁇ l of anti-TNF antibody at different concentrations (0 to 100 ⁇ l / ml, final concentration) at 4 ° C. for 30 minutes. After washing the goat anti-Fc IgG antibody coupled with phycoerythrin (100 ⁇ l of a 1: 100 dilution) was added at 4 ° C for 30 minutes.
  • the cells are washed and the mean fluorescence intensity (MFI) measured by flow cytometry.
  • MFI mean fluorescence intensity
  • a response curve is established with the reference antibody (anti-TNF ⁇ antibody in PBS buffer) to define the minimum concentration of antibodies giving the plateau. All samples are tested at 0.125 ⁇ g ml. The results are expressed as a percentage with respect to a reference and standardized.
  • formulations comprising surfactants (polysorbate 20 or Poloxamer 188) because these, although perfectly tolerated in intravenous or subcutaneous administration, are suspected to be responsible, when ingested, for an increased risk of developing inflammatory bowel disease such as Crohn's disease.
  • formulations comprising molecules with anticoagulant effect, such as EDTA formulations comprising polyols, in particular mannitol, maltitol, sorbitol, glycerol, lactitol, or xylitol which may have a laxative effect.
  • Example 5 Oral formulation with release in the gastrointestinal tract The following formulations:
  • the coating agents tested are preferably enteric coatings because of the acid sensitivity of the antibody, in particular derivatives of acrylic acids, derived from methacrylic acids, ethyl acrylate derivatives, hydroxypropyl methylcellulose derivatives, derivatives thereof.
  • polyvinyl acetate phatlates in particular Eudragit® FS30D, Eudragit® S100, Eudragit® L100, Eudragit®L12.5, Eudragit® L30D-55, Eudragit® L100-55, Eudragit® S12.5, HPMC AS (AQOAT®), HPMCP®, Shellac.

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Abstract

La présente demande concerne une composition pharmaceutique pour administration orale, comprenant un anticorps monoclonal anti-facteur de nécrose tumorale alpha (TNFα) et au moins un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables choisis dans le groupe comprenant: un carboxyméthyle-dextran, un chitosan, une cyclodextrine ou une combinaison de ceux-ci, ainsi que l'utilisation de cette composition dans le traitement des maladies inflammatoires ou des maladies auto-immunes.

Description

COMPOSITION ORALE D'ANTICORPS ANTI-TNF ALPHA
La présente invention concerne des compositions pour l'administration par voie orale d'un anticorps anti-facteur de nécrose tumorale alpha (TNFa).
ARRIERE-PLAN TECHNOLOGIQUE
Le TNF alpha (ou TNFa) est une cytokine pro-inflammatoire qui est sécrétée par et interagit avec les cellules du système immunitaire. Le TNFa a été montré comme étant impliqué dans de nombreuses maladies humaines, notamment des maladies inflammatoires chroniques comme l'arthrite rhumatoïde, la maladie de Crohn, la colite ulcéreuse, ou encore la sclérose en plaques. Plusieurs anticorps anti-TNFa sont actuellement en développement. Deux anticorps sont déjà commercialisés : l'infliximab (Remicade®), et l'adalimumab (Humira®), sous formes injectables par voie sous-cutanée ou intraveineuse.
Plusieurs études ont néanmoins rapporté que la thérapie par anticorps anti-TNFa, notamment par voie systémique, pouvait présenter des effets secondaires indésirables, notamment la survenue d'infections bactériennes telles que la tuberculose (Jarequi- Amezaga et al., Journal of Crohn's and colitis, 2013, 7(3), pages 208-212), ou d'infections par la Listeria (Abreu et al., Journal of Crohn's and colitis, 2013, 7(2), pages 175-182) ou par Candida (Huang et al., Journal of paediatric gastroentology and nutrition, 2013, 56(4), pages 23-6).
C'est pourquoi des formulations d'anticorps anti-TNFa pour une administration par voie orale sont actuellement en développement. Toutefois aucune n'est commercialisée et il existe encore un besoin de mettre à disposition des compositions permettant d'améliorer l'efficacité et/ou l'innocuité des anticorps anti-TNFa administrés par voie orale. La présente invention a donc pour objet une composition pharmaceutique pour administration orale, comprenant un anticorps anti-facteur de nécrose tumorale alpha (TNFa) et au moins un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables choisis dans le groupe comprenant : un carboxyméthyle-dextran, un chitosan, une cyclodextrine ou une combinaison de ceux-ci. Au sens de la présente invention, on entend par « anticorps anti-TNF alpha » ou « anticorps anti-TNFa», tout anticorps se liant spécifiquement au TNFa humain. Avantageusement, l'anticorps se dissocie du TNFa humain selon les constantes suivantes: Kd inférieur à 1 x10" 8 M (avantageusement inférieur à 1 x10"9 M, plus avantageusement inférieur à 1 x10"10 M, encore plus avantageusement inférieur à 1x10"11 M) et Koff de 1 x10"3 s"1 ou moins, toutes deux déterminées par un test de résonance des plasmons de surface (« surface plasmon résonance »). De préférence l'anticorps est neutralisant. En particulier, il neutralise la fonction biologique du TNFa en bloquant son interaction avec les récepteurs du TNF p55 et p75 situés à la surface cellulaire. La capacité de neutralisation de l'anticorps peut être testée par un test standard, notamment en mesurant la capacité de l'anticorps à neutraliser la cytotoxicité du TNFa humain sur des cellules de fibroblastes humains (L929), avec une CI50 de 1x10"7 M ou moins, avantageusement inférieure à 1 x10"8 M, plus avantageusement inférieure à 1 x10"9 M, ou encore plus avantageusement inférieure à 1 x10"10 M.
Dans un mode de réalisation avantageux, l'anticorps anti-TNF alpha est un anticorps monoclonal. L'anticorps anti-TNF alpha selon l'invention peut être un anticorps d'un mammifère tel qu'une souris, ou peut-être humanisé, ou encore entièrement humain. Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, l'anticorps anti-TNF alpha est un anticorps monoclonal humain.
Dans un mode de réalisation avantageux, l'anticorps anti-TNF alpha selon l'invention possède une chaîne lourde comprenant la SEQ ID No.1 et une chaîne légère comprenant la SEQ ID No.2. SEQ ID NO: 1
MEFGLSWLFLVAILKGVQCEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYA MHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMN SLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSS KSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 2
MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLA WYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYN RAPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWK VDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVT KSFNRGEC Dans un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'anticorps anti-TNF alpha peut être l'adalimumab, l'infliximab ou le golimumab. Dans un mode de réalisation encore plus avantageux de l'invention, l'anticorps anti-TNF alpha est l'adalimumab. L'adalimumab est une immunoglobuline G (IgG) composée de deux chaînes légères kappa et de deux chaînes lourdes lgG1 .
L'anticorps utilisé dans la présente invention peut être produit par toute technique bien connue de l'homme du métier. Avantageusement, l'anticorps selon l'invention est un anticorps recombinant.
Dans un mode de réalisation particulier, l'anticorps peut être produit par recombinaison dans une cellule hôte, transformée avec un ou des vecteur(s) qui permettent l'expression et/ou la sécrétion des séquences nucléotidiques codant pour la chaîne lourde et/ou la chaîne légère de l'anticorps. Le vecteur comporte généralement un promoteur, des signaux d'initiation et de terminaison de la traduction, ainsi que des régions appropriées de régulation de la transcription. Il est maintenu de façon stable dans la cellule hôte et peut éventuellement posséder des signaux particuliers qui spécifient la sécrétion de la protéine traduite. Ces différents éléments sont choisis et optimisés par l'homme du métier en fonction de l'hôte cellulaire utilisé. De tels vecteurs sont préparés par des méthodes couramment utilisées par l'homme du métier, et les clones résultant peuvent être introduits dans un hôte approprié par des méthodes standard, telles que la lipofection, l'électroporation, l'utilisation d'agents polycationiques, le choc thermique, ou des méthodes chimiques. L'hôte cellulaire peut être choisi parmi des systèmes procaryotes ou eucaryotes, par exemple des cellules bactériennes mais également des cellules de levure ou des cellules animales, en particulier des cellules de mammifères non-humain. Les cellules de mammifère préférées pour la production de l'anticorps monoclonal sont la lignée de rat YB2/0, la lignée de hamster CHO, en particulier les lignées CHO dhfr- et CHO Lecl3, PER.C6TM (Crucell), 293, K562, NSO, SP2/0, BHK ou COS. On peut également utiliser des cellules d'insectes. Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, l'anticorps anti-TNF alpha est produit dans des cellules épithéliales mammaires de mammifère non-humain. Un autre mode de production est l'expression de l'anticorps recombinant dans des organismes transgéniques, par exemple dans des plantes (Ayala M Et al., Methods Mol Biol., 2009;483, pages 103-34.) ou dans le lait d'animaux transgéniques tels que la lapine, la chèvre ou le porc (Pollock, D.P et al. Journal of Immunological Methods, 1999, 231 , pages 147-157). Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, l'anticorps anti- TNF alpha est produit dans le lait d'un mammifère transgénique non-humain.
Selon un mode de réalisation préféré, l'anticorps est produit dans le lait de mammifères transgéniques non humains, modifiés génétiquement pour produire cette glycoprotéine. Le mammifère peut être par exemple une chèvre, brebis, les femelles du bison, buffle, chameau, lama, souris, rat, ou encore une vache, truie, lapine, ou jument. Avantageusement, l'anticorps est produit dans du lait de chèvre transgénique.
La sécrétion de l'anticorps par les glandes mammaires, permettant sa présence dans le lait du mammifère transgénique, implique le contrôle de l'expression de l'anticorps de manière tissu-dépendante. De telles méthodes de contrôle sont bien connues de l'homme du métier. Le contrôle de l'expression est effectué grâce à des séquences permettant l'expression de la glycoprotéine dans un tissu particulier de l'animal. Il s'agit notamment des séquences promotrices de type « WAP », « β-caséine », « β-lactoglobuline » et éventuellement des séquences de type peptide signal. Avantageusement, on produit l'anticorps dans les glandes mammaires d'une chèvre transgénique, en utilisant un vecteur d'expression comprenant la séquence des deux chaînes, sous le contrôle d'un promoteur 5' β-caséine. Un procédé d'extraction de protéines d'intérêt à partir du lait d'animaux transgénique est décrit dans le brevet EP 0 264 166. De manière avantageuse, il est produit plus de 4 grammes d'anticorps par litre de lait, de manière avantageuse plus de 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35 grammes par litre, de manière encore plus avantageuse jusqu'à 70 grammes par litre.
De manière avantageuse, l'anticorps produit par transgénèse animale, en particulier dans les glandes mammaires d'une chèvre transgénique, est sous la forme d'une population d'anticorps anti-TNFa qui présentent une glycosylation avec un taux de galactosylation élevé, par exemple supérieur à 60%, de préférence supérieur 70%, de préférence encore d'au moins 80%. Selon un autre aspect particulier de l'invention, le taux de fucosylation de l'ensemble des anticorps de la population est d'au moins 50%, et notamment d'au moins 60%.
Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, la population d'anticorps anti-TNFa comprend des anticorps qui comprennent des N-glycannes mono-galactosylés. Selon un autre mode de réalisation particulier de l'invention, la population d'anticorps anti- TNFa comprend des anticorps qui comprennent des N-glycannes bi-galactosylés.
Selon un autre mode de réalisation particulier de l'invention, le rapport du taux de galactosylation des anticorps de la population et du taux de fucosylation des anticorps de la population est compris entre 1 ,0 à 1 ,4. Selon un autre mode de réalisation particulier de l'invention, au moins 35% des anticorps dans la population comprend des N-glycannes bi- galactosylés et au moins 25% des anticorps dans la population comprend des N-glycannes mono-galactosylés. Selon un autre mode de réalisation particulier de l'invention, le taux de sialylation des anticorps est d'au moins 50%, de préférence d'au moins 70%, ou encore d'au moins 90%.
Selon un autre mode de réalisation particulier de l'invention, les anticorps sont totalement sialylés.
La biosynthèse des N-glycannes n'est pas régulée par une codification, comme cela est le cas avec les protéines, mais est principalement dépendante de l'expression et de l'activité des glycosyltransférases spécifiques dans une cellule. Ainsi, une glycoprotéine, tel le fragment Fc d'un anticorps, existe normalement comme une population hétérogène de glycoformes qui portent différents glycannes sur le même squelette de protéines.
Une population d'anticorps hautement galactosylés, est une population d'anticorps dans laquelle le taux de galactosylation de l'ensemble des anticorps de la population est d'au moins 50%, d'au moins 60%, d'au moins 70%, d'au moins 80%, d'au moins 90%, jusqu'à 100% de galactosylation.
Selon un mode particulier de la population d'anticorps hautement galactosylés, le taux de galactosylation de l'ensemble des anticorps de la population est d'au moins 60%. Le taux de galactosylation peut être déterminé avec la formule suivante :
(nombre de galactose) x (%Surface relative)
(Nombre de A) dans laquelle
« n » représente le nombre de pics N-glycannes analysés sur un chromatogramme, par exemple d'un spectre de chromatographie en phase liquide à haute performance en phase normale (NP HPLC),
« Nombre de Galactose » représente le nombre de galactoses sur l'antenne du glycanne correspondant au pic, « Nombre de A » représente le nombre de motifs N-acétyl-glucosamine sur l'antenne de la forme glycannique correspondant au pic (à l'exclusion des deux motifs N-acétyl- glucosamine de la structure charpente commun des glycannes), et
« % surface relative » correspond au pourcentage de l'aire sous le pic correspondant. Le taux de galactosylation des anticorps de la population d'anticorps peut être déterminé, par exemple, en libérant les N-glycannes des anticorps, en résolvant les N-glycannes sur un chromatogramme, en identifiant le motif d'oligosaccharide du N-glycanne qui correspond à un pic spécifique, en déterminant l'intensité du pic et en appliquant les données à la formule mentionnée ci-dessus. Des anticorps qui sont galactosylés incluent des anticorps qui ont des N-glycannes mono- galactosylés et des N-glycannes bi-galactosylés.
Dans un mode de réalisation particulier, la population d'anticorps hautement galactosylés comprend des anticorps qui comprennent des N-glycannes mono-galactosylés, qui peuvent ou non être sialylés. Selon un aspect particulier de la population d'anticorps hautement galactosylés, au moins 1 %, au moins 5%, au moins 10%, au moins 15%, au moins 20%, au moins 25%, au moins 30%, au moins 40%, au moins 50%, au moins 60%, au moins 70%, au moins 80%, au moins 90%, jusqu'à 100% des N-glycannes des anticorps comprennent des N-glycannes mono-galactosylés. Selon encore un mode particulier de l'invention, dans la population d'anticorps hautement galactosylés, au moins 25% des anticorps comprennent des N-glycannes mono-galactosylés.
Selon un aspect particulier de la population d'anticorps hautement galactosylés, la population comprend des anticorps qui comprennent des N-glycannes bi-galactosylés, qui peuvent ou non être sialylés. Selon un aspect particulier de la population d'anticorps hautement galactosylés, au moins 1 %, au moins 5%, au moins 10%, au moins 15%, au moins 20%, au moins 25%, au moins 30%, au moins 40%, au moins 50%, au moins 60%, au moins 70%, au moins 80%, au moins 90%, jusqu'à 100% des N-glycannes des anticorps comprennent des N-glycannes bi-galactosylés. Selon encore un mode particulier de l'invention, dans la population d'anticorps hautement galactosylés, au moins 35% des anticorps comprennent des N-glycannes bi-galactosylés. Selon encore un autre aspect de la population d'anticorps hautement galactosylés, la population comprend des anticorps qui comprennent des N-glycannes mono-galactosylés, qui peuvent ou non être sialylés, et des anticorps qui comprennent des N-glycannes bi- galactosylés, qui peuvent ou non être sialylés. Selon un aspect particulier de la population d'anticorps hautement galactosylés, au moins 1 %, au moins 5%, au moins 10%, au moins 15%, au moins 20%, au moins 25%, au moins 30%, au moins 40%, au moins 50%, au moins 60%, au moins 70%, au moins 80%, au moins 90%, jusqu'à 99% des N-glycannes des anticorps comprennent des N-glycannes mono-galactosylés, et au moins 1 %, au moins 5%, au moins 10%, au moins 15%, au moins 20%, au moins 25%, au moins 30%, au moins 40%, au moins 50%, au moins 60%, au moins 70%, au moins 80%, au moins 90%, jusqu'à 99% des N-glycannes des anticorps comprennent des N-glycannes bi-galactosylés.
Selon un autre aspect particulier de la population d'anticorps hautement galactosylés, au moins 25% des anticorps comprennent des N-glycannes mono-galactosylés, et au moins 35% des anticorps comprennent des N-glycannes bi-galactosylés.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, l'anticorps anti-TNFa est produit par les cellules épithéliales mammaires d'un mammifère transgénique non humain et est produit dans la glande mammaire de manière exogène. Les anticorps thérapeutiques produits ainsi présentent un taux de galactosylation élevé, et éventuellement des taux augmentés de liaisons terminales d'acide sialique alpha-2,6 sur leurs résidus glycanes liés au fragment Fc.
Dans certains modes de réalisation, l'anticorps présente un profil de glycosylation à teneur élevée en mannose. Tel qu'utilisé ici, un « profil de glycosylation à forte teneur en mannose » désigne un anticorps qui contient au moins un oligomannose ou une composition d'anticorps dans laquelle au moins 30% de l'anticorps contient au moins un oligomannose. Dans certains modes de réalisation au moins 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou plus des sucres des anticorps sont des oligomannoses non fucosylés. Dans d'autres modes de réalisation moins de 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5% ou moins des sucres des anticorps contiennent du fucose. Dans un autre mode de réalisation, les anticorps ont une faible teneur en fucose et une forte teneur en oligomannose. Ainsi, dans d'autres modes de réalisation, au moins 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90% ou plus des sucres des anticorps sont de oligomannose et moins de 50%, 40%, 30%, 20%, 10% ou 5% des sucres des anticorps contiennent du fucose. Ainsi, dans un autre mode de réalisation au moins 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90% ou plus des sucres des anticorps sont de oligomannose non fucosylé et moins de 50%, 40%, 30%, 20%, 10% ou 5% des sucres des anticorps contiennent du fucose.
Selon un aspect particulier, les oligosaccharides contenant du mannose peuvent contenir avantageusement de 5 à 9 mannoses. Un oligosaccharide contenant Y mannoses est décrits par le terme ManY. Par exemple, des oligosaccharides contenant du mannose peuvent inclure Man5, Man6, Man7, Man8 et Man9. Dans certains modes de réalisation, l'anticorps, tel que l'Adalimumab produit de manière transgénique présente une haute teneur en Man6. Dans certains modes de réalisation, le sucre majeur est le Man5. Dans certains modes de réalisation, au moins 10%, 15%, ou plus des sucres sont du Man5. Avantageusement, au moins 20% des sucres sont du Man5. Dans d'autres modes de réalisation, le sucre majeur est le Man6. Dans certains modes de réalisation, au moins 10%, 15%, ou plus des sucres de l'anticorps produit de manière transgénique sont du Man6. Avantageusement, au moins 20% des sucres sont du Man6. Dans d'autres modes de réalisation, le sucre majeur est le Man7. Dans certains modes de réalisation, au moins 10%, 15% ou plus des sucres sont du Man7. Avantageusement, au moins 20% des sucres sont du Man7.
Sont particulièrement avantageux les anticorps qui présentent un profil à fort taux de galactose ou mannose, comme décrits ci-dessus, en ce qu'ils présentent une forte affinité pour le récepteur FcYRIIIa (CD16). Par forte affinité, on désigne une affinité au moins égale à 2x106 M"1, de préférence au moins égale à 2x107 M"1, 2x108 M"1 ou 2x109 M"1, telle que déterminée par l'analyse Scatchard ou la technologie BIAcore (Label-free surface plasmon résonance based technology). Ce récepteur est trouvé sur de nombreuses cellules immunitaires, parmi lesquelles les cellules tueuses naturelles, les macrophages, les neutrophiles, et les cellules mastocytaires.
Cette affinité pour le CD 16 permet une amélioration des activités de cytotoxicité dépendante du complément (CDC), ou à médiation cellulaire dépendante des anticorps (ADCC) ou encore des phénomènes de phagocytose des cellules cibles, par rapport à des anticorps non hautement galactosylés ou non hautement mannosylés. Dans certains modes de réalisation, les populations d'anticorps anti-TNFa produites dans des cellules épithéliales de glandes mammaires sont supérieures, en termes de liaison au TNFa soluble, aux anticorps produits dans des cellules qui ne sont pas des cellules épithéliales de glandes mammaires. Dans certains modes de réalisation, les populations d'anticorps anti-TNFa produites dans des cellules de glandes mammaires sont supérieures, en termes de liaison au TNFa transmembranaire, aux anticorps produits dans des cellules qui ne sont pas des cellules épithéliales de glandes mammaires. Les tests pour déterminer le niveau de liaison au TNFa soluble ou au TNFa transmembranaire sont bien établis (voir par exemple Horiuchi et al.,Rheumatology et al. 49, page 1215). Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, l'anticorps anti-TNFa peut être l'anticorps décrit dans la demande internationale WO2014/125374.
Dans un mode de réalisation particulier, la composition pharmaceutique de l'invention telle que définie précédemment est dépourvue d'au moins un des excipients suivants : d'acide caprylique ou d'un sel de caprylate, de glucose, de fructose, de galactose, de mannose, de sorbose, de saccharose, de ribose, de désoxyribose, de sucrose, de maltitol, d'inuline, de lécithine, de tréhalose, de lactose, de maltose, de raffinose, de mannitol, de sorbitol, de glycérol, d'arabitol, de lactitol, de xylitol, de polypropylène glycol, de polyéthylène glycol, d'ester d'acides gras de sorbitane polyoxyéthylène, de polysorbate 20, de polysorbate 80, de poloxamers, d'éthers d'alkyles de polyoxyéthylène, d'éthers d'alkylphènylpolyoxyéthylène, de copolymère de polyoxyéthylène-polyoxypropylène, de dodécylsulphate de sodium, de succinate de sodium, de chlorure de sodium, de citrate de sodium, d'acide citrique monohydraté, de phosphate de sodium dibasique dihydraté, de phosphate de sodium monobasique dihydraté, de phosphate de sodium monobasique monohydraté ou d'EDTA.
Au sens de la présente invention, le terme « dépourvue » signifie que la composition de l'invention ne contient pas d'acide caprylique ou de sel de caprylate, de glucose, de fructose, de galactose, de mannose, de sorbose, de saccharose, de ribose, de désoxyribose, de sucrose, de maltitol, d'inuline, de lécithine, de tréhalose, de lactose, de maltose, de raffinose, de mannitol, de sorbitol, de glycérol, d'arabitol, de lactitol, de xylitol, de polypropylène glycol, de polyéthylène glycol, d'ester d'acides gras de sorbitane polyoxyéthylène, de polysorbate 20, de polysorbate 80, de poloxamers, d'éthers d'alkyles de polyoxyéthylène, d'éthers d'alkylphènylpolyoxyéthylène, de copolymère de polyoxyéthylène-polyoxypropylène, de dodécylsulphate de sodium, de succinate de sodium, de chlorure de sodium, de citrate de sodium, d'acide citrique monohydraté, de phosphate de sodium dibasique dihydraté, de phosphate de sodium monobasique dihydraté, de phosphate de sodium monobasique monohydraté ou d'EDTA ou qu'ils sont présents en une quantité négligeable, en particulier une quantité inférieure à 0,001 % (m/m). Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la composition pharmaceutique de l'invention telle que définie précédemment est dépourvue de molécule à effet anticoagulant, en particulier d'EDTA. Dans un autre mode de réalisation particulièrement avantageux, la composition pharmaceutique de l'invention telle que définie précédemment est dépourvue de tensioactif, en particulier de polysorbate 20, de polysorbate 80 ou de poloxamer.
Dans un autre mode de réalisation particulièrement avantageux, la composition pharmaceutique de l'invention telle que définie précédemment est dépourvue de molécule à effet laxatif, en particulier de mannitol, de sorbitol, de glycérol, de lactitol ou de xylitol.
Les excipients mentionnés ci-dessus ont notamment été écartés du fait de leur activité anticoagulante comme notamment l'EDTA, ou du fait qu'ils présenteraient un risque de développer une maladie de Crohn lorsqu'ils sont ingérés, comme notamment le polysorbate 20, le polysorbate 80 ou le poloxamer, ou du fait que ces excipients peuvent avoir un effet laxatif, comme notamment le mannitol, le maltitol, le lactitol, le xylitol ou le sorbitol.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique pour administration orale comprend : un anticorps monoclonal anti-facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-alpha), comme principe actif, et
du carboxyméthyle-dextran (CMD), comme excipient pharmaceutiquement acceptable.
Dans un autre mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique pour administration orale comprend : - un anticorps monoclonal anti-facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-alpha), comme principe actif, et
du chitosan, comme excipient pharmaceutiquement acceptable.
Dans un autre mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique pour administration orale comprend : - un anticorps monoclonal anti-facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-alpha), comme principe actif, et
une cyclodextrine, comme excipient pharmaceutiquement acceptable.
Dans un mode de réalisation avantageux de l'invention, la cyclodextrine peut être choisie parmi Γα-cyclodextrine, la β-cyclodextrine, la γ-cyclodextrine, un de leurs dérivés, comme notamment un dérivé hydroxypropyle, hydroxyéthyle, éthyle ou méthyle, une cyclodextrine béta éther sulfobutyle, une cyclodextrine branchée, un polymère à base de cyclodextrine ou un mélange de ceux-ci. Avantageusement, la cyclodextrine peut être Γ hydroxypropyl-β- cyclodextrine (ou HPBCD).
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique pour administration orale comprend : un anticorps monoclonal anti-facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-alpha) comme principe actif, et
Γ hydroxypropyl-3-cyclodextrine (HPBCD), comme excipient pharmaceutiquement acceptable.
Dans un autre mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique pour administration orale comprend : un anticorps monoclonal anti-facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-alpha) comme principe actif, et
une combinaison de carboxyméthyle-dextran (CMD), et de cyclodextrine, notamment de Γ hydroxypropyl-3-cyclodextrine (HPBCD), comme excipient pharmaceutiquement acceptable.
Dans un autre mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique pour administration orale comprend : un anticorps monoclonal anti-facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-alpha) comme principe actif, et
une combinaison de carboxyméthyle-dextran (CMD) et de chitosan, comme excipient pharmaceutiquement acceptable.
Dans un autre mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique pour administration orale comprend : un anticorps monoclonal anti-facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-alpha) comme principe actif, et
une combinaison d'une cyclodextrine, notamment de Γ hydroxypropyl-β- cyclodextrine (HPBCD) et de chitosan, comme excipient pharmaceutiquement acceptable.
Dans un autre mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique pour administration orale comprend : un anticorps monoclonal anti-facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-alpha) comme principe actif, et
une combinaison de carboxyméthyle-dextran (CMD), de cyclodextrine, notamment de Γ hydroxypropyl-3-cyclodextrine (HPBCD) et de chitosan, comme excipient pharmaceutiquement acceptable.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique pour administration orale peut comprendre en outre au moins un acide aminé. Au sens de la présente invention, l'acide aminé peut être choisi parmi l'arginine, la glycine, la lysine, l'histidine, le glutamate, la glutamine, l'asparagine, l'isoleucine, la leucine, l'alanine, la phénylalanine, la thréonine, la tyrosine, le tryptophane, la méthionine, la sérine, la proline, la cystéine, la sélénocystéine, la proline, la valine, un de leurs sels dérivés, comme notamment un chlorhydrate ou un phosphate, ou un mélange de ceux-ci. Avantageusement, l'acide aminé est choisi parmi les acides aminés hydrophiles. Dans un mode de réalisation avantageux, l'acide aminé est la glycine ou un de ces sels dérivés, comme le chlorhydrate de glycine. Dans un autre mode de réalisation particulièrement avantageux, l'acide aminé est l'arginine ou un de ces sels dérivés, comme le chlorhydrate d'arginine.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique pour administration orale comprend : - un anticorps monoclonal anti-facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-alpha) comme principe actif,
du carboxyméthyle-dextran (CMD), comme excipient pharmaceutiquement acceptable, et
un acide aminé, en particulier la glycine, éventuellement sous sa forme chlorhydrate.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique pour administration orale comprend : un anticorps monoclonal anti-facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-alpha) comme principe actif,
- du chitosan, comme excipient pharmaceutiquement acceptable, et
un acide aminé, en particulier la glycine, éventuellement sous sa forme chlorhydrate. Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique pour administration orale comprend : un anticorps monoclonal anti-facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-alpha) comme principe actif,
- une cyclodextrine, en particulier l'hydroxypropyl-3-cyclodextrine (HPBCD), comme excipient pharmaceutiquement acceptable,
un acide aminé, en particulier la glycine, éventuellement sous sa forme chlorhydrate.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique pour administration orale comprend : un anticorps monoclonal anti-facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-alpha) comme principe actif,
une combinaison de carboxyméthyle-dextran (CMD) et une cyclodextrine, en particulier l'hydroxypropyl-3-cyclodextrine (HPBCD), comme excipient
pharmaceutiquement acceptable, et
un acide aminé, en particulier la glycine, éventuellement sous sa forme chlorhydrate.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique pour administration orale comprend : - un anticorps monoclonal anti-facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-alpha) comme principe actif,
une combinaison de carboxyméthyle-dextran (CMD) et du chitosan, comme excipient pharmaceutiquement acceptable, et
un acide aminé, en particulier la glycine, éventuellement sous sa forme chlorhydrate.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique pour administration orale comprend : un anticorps monoclonal anti-facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-alpha) comme principe actif,
- une combinaison d'une cyclodextrine, notamment de Γ hydroxypropyl-β- cyclodextrine (HPBCD) et de chitosan, comme excipient pharmaceutiquement acceptable et un acide aminé, en particulier la glycine, éventuellement sous sa forme chlorhydrate.
Dans un autre mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique pour administration orale consiste en : un anticorps monoclonal anti-facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-alpha) comme principe actif, et
du carboxyméthyle-dextran (CMD), comme excipient pharmaceutiquement acceptable.
Dans un autre mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique pour administration orale consiste en : un anticorps monoclonal anti-facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-alpha) comme principe actif,
du carboxyméthyle-dextran (CMD), et
une cyclodextrine, en particulier l'hydroxypropyl-3-cyclodextrine (HPBCD).
Dans un autre mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique pour administration orale consiste en : un anticorps monoclonal anti-facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-alpha) comme principe actif,
une combinaison de carboxyméthyle-dextran (CMD) et de cyclodextrine, en particulier l'hydroxypropyl-3-cyclodextrine (HPBCD), comme excipient pharmaceutiquement acceptable,
un acide aminé, en particulier la glycine, éventuellement sous sa forme chlorhydrate.
Dans un autre mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique pour administration orale consiste en : un anticorps monoclonal anti-facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-alpha) comme principe actif, et
du chitosan, comme excipient pharmaceutiquement acceptable.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la composition pharmaceutique selon l'invention est sous forme solide. La composition pharmaceutique sous forme solide peut être obtenue par toute technique bien connue de l'homme du métier. Avantageusement, la composition pharmaceutique sous forme solide peut être obtenue par lyophilisation, atomisation de séchage ou par séchage par vaporisation.
Les compositions de la présente invention peuvent se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées pour une administration orale, notamment sous forme de comprimés, de gélules, de capsules, des tablettes, de poudre, de sirop ou de toute forme pour préparation orale solide ou sous toute forme de préparation buvable.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la composition se présente sous la forme d'une formulation à libération prolongée et/ou retardée. Au sens de la présente invention, on entend par « formulation à libération prolongée et/ou retardée », une forme galénique adaptée à une libération ciblée au niveau du tractus gastro-intestinal, et en particulier de l'intestin. Par « intestin » on entend ici toutes les parties de l'intestin, en particulier le côlon. De telles compositions sont particulièrement utiles dans le traitement des maladies inflammatoires de l'intestin, car elles permettent une action locale au site de l'infection (notamment intestin grêle ou côlon). Elles limitent en outre le passage des anticorps dans la circulation sanguine, limitant les effets secondaires liés aux anticorps anti- TNFa.
Plusieurs stratégies existent pour préparer des médicaments administrés par voie orale, dont le ou les principes actifs ne sont libérés qu'au niveau de l'intestin, de préférence qu'au niveau du côlon. Certaines stratégies comprennent la liaison covalente du médicament avec un support. Peuvent aussi être utilisés des excipients et véhicules qui sont dégradés par les bactéries du côlon. Toutes ces stratégies sont bien connues de la personne du métier.
Dans un mode de réalisation particulier, la composition pharmaceutique sous la forme d'une formulation à libération prolongée et/ou retardée comprenant l'anticorps anti-TNFa et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable tel que décrit ci-dessus peut être formulée sous des formes posologiques solides, comme des comprimés ou gélules. Avantageusement, la composition pharmaceutique sous la forme d'une formulation à libération prolongée et/ou retardée comprenant l'anticorps anti-TNFa et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable tel que décrit ci-dessus peut comprendre en outre au moins un agent d'enrobage. L'agent d'enrobage, de par sa résistance au pH acide de l'estomac (compris entre 1 et 3) permet notamment de protéger la composition comprenant l'anticorps anti-TNFa et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable du pH acide de l'estomac et leur libération dans l'intestin grêle et le côlon où les valeurs de pH sont proches de 7. Avantageusement, l'agent d'enrobage peut être un agent filmogène, de préférence gastro-soluble ou un agent de dragéification. Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, l'agent d'enrobage peut être choisi dans le groupe comprenant : dérivés d'acides acryliques, dérivés d'acides méthacryliques, dérivés d'acrylate d'éthyl, dérivés d'hydroxypropylméthylcellulose, dérivés de polyvinylacétate phatlates; poly(acrylate de méthyle -co- méthacrylate de méthyl -co- acide méthacrylique, poly(acide méthacrylate -co- méthacrylate de méthyle), notamment commercialisé sous les noms Eudragit® S100 Eudragit® FS30D, Eudragit® L100, Eudragit®L12,5, Eudragit® L30D- 55, Eudragit®, L100-55, Eudragit® S12,5, hydroxypropylméthylcellulose (HPMCP), succinyl acétate d'hydroxypropylméthylcellulose, également appelé HPMCAS et commercialisé sous le nom AQOAT®, Shellac ou un mélange de ceux-ci.
Dans un mode de réalisation particulier, la composition pharmaceutique sous la forme d'une formulation à libération prolongée et/ou retardée comprenant l'anticorps anti-TNFa et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable tel que décrit ci-dessus peut comprendre une monocouche d'un seul agent d'enrobage, une monocouche constituée d'un mélange de plusieurs agents d'enrobage, une multicouche constituée d'un seul agent d'enrobage; une multicouche constituée d'un mélange de plusieurs agents d'enrobage différents ou une superposition de plusieurs monocouches constituées d'un seul agent d'enrobage.
Dans un autre mode de réalisation, on peut utiliser des formulations qui sont revêtues avec des polymères dégradables par les micro-organismes du côlon (plus particulièrement par les enzymes bactériennes comme des azoréductases et glycosidases), par exemple des polymères azoïques ayant un degré élevé d'hydrophilie. Des gels et hydrogels peuvent également être utilisés, notamment des hydrogels à base de polysaccharides.
Les compositions de l'invention peuvent comprendre ou être associées à d'autres agents thérapeutiques utiles dans le traitement des maladies inflammatoires ou des maladies auto- immunes.
Un autre aspect de l'invention concerne un procédé de préparation d'une composition pharmaceutique à libération prolongée et/ou retardée, ledit procédé comprenant : a) Une étape de mélange de l'anticorps anti-TNF alpha avec un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables choisis dans le groupe comprenant : un carboxyméthyle- dextran, un chitosan, une cyclodextrine ou une combinaison de ceux-ci. b) Une étape de séchage, particulièrement par atomisation, de la composition obtenue à l'étape a), c) Une étape d'enrobage.
Avantageusement, l'étape c) d'enrobage peut être réalisée par toute technique bien connue de l'homme du métier. Dans un mode de réalisation particulier, l'étape c) d'enrobage peut être réalisée par dragéification, par pelliculage, notamment par l'ajout d'agent filmogènes, par atomisation (« spraying »), par enrobage entérique en lit fluidisé, par enrobage à sec, par enrobage effeuillable. Par « enrobage à sec », on entend tout procédé sans solvant utilisant une action mécanique pour recouvrir une forme pharmaceutique solide d'une couche discrète ou continue de poudres inertes ou actives. Il permet par exemple l'obtention de particules composites comportant plusieurs couches de compositions différentes.
Dans un mode de réalisation particulier, l'étape c) d'enrobage peut être réalisée avec un ou plusieurs agents d'enrobage en appliquant : une monocouche constituée d'un seul agent d'enrobage, ou
une monocouche constituée d'un mélange de plusieurs agents d'enrobages, ou - une multicouche constituée d'un seul agent d'enrobage, c'est-à-dire une superposition de plusieurs monocouches constituées du même agent d'enrobage, ou
une multicouche constituée d'un mélange de plusieurs d'agents d'enrobages, ou une superposition de plusieurs monocouches constituées d'un seul agent d'enrobage, chacune des monocouches ayant un agent d'enrobage différent.
Un autre aspect de l'invention concerne une composition pharmaceutique à libération prolongée et/ou retardée comprenant un anticorps anti-facteur de nécrose tumorale alpha (TNFa) et au moins un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables choisis dans le groupe comprenant : un carboxyméthyle-dextran, un chitosan, une cyclodextrine ou une combinaison de ceux-ci, pour son utilisation dans le traitement des maladies inflammatoires ou des maladies auto-immunes.
Un autre aspect de l'invention est une méthode de traitement des maladies inflammatoires ou des maladies auto-immunes comprenant l'administration à un patient qui en a besoin d'une composition pharmaceutique à libération prolongée comprenant un anticorps anti- facteur de nécrose tumorale alpha (TNFa) et au moins un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables choisis dans le groupe comprenant : un carboxyméthyle- dextran, un chitosan, une cyclodextrine ou une combinaison de ceux-ci. FIGURES
Figure 1 : Résultats du test fonctionnel à T0, T+2 heures et T+5 heures après passage dans le système SHI ME®.
Dans cette figure, les 10 formulations sont présentées dans l'ordre suivant (de gauche à droite) : 1/ sans excipients, 21 HPBCD, 3/ CMD, 4/ HPBCD + CMD, 5/ HPCD + EDTA, 6/ Polysorbate 20 + EDTA + Tréhalose, 7/ Poloxamer 188 + EDTA + Tréhalose, 8/ CMD + Polysorbate 20 + Arginine, 9/ CMD + Polysorbate 20 + Glycine, 10/ Chitosan.
Figure 2 : Caractéristiques des différentes formulations testées dans l'exemple 4.
Les exemples suivant illustrent l'invention sans en limiter la portée.
EXEMPLES
Dans les exemples ci-dessous, et sauf mention contraire, les anticorps anti-TNFa utilisés sont ceux décrits dans la demande internationale WO2014/125374 de la Demanderesse.
Exemple 1 : présélection d'excipients par test de compatibilité
Un 1 er essai a été conduit afin de présélectionner plusieurs excipients sur la base de leur bonne compatibilité avec les anticorps anti-TNFa à 1 mg/mL en tampon acétate 10mM à pH 5,5. Les excipients testés sont récapitulés dans le tableau suivant :
Excipients
Albumine humaine sérique 1 .25 mg/mL
Arginine 1 .25 mg/mL
Carbopol 971 P 1 .25 mg/mL
Carbopol 974P 1 .25 mg/mL
Carboxymethyl-Dextran 20 mg/mL
Chitosan 1 .25 mg/mL
Glycine 1 .25 mg/mL
Hydroxypropyl- beta-cyclodextrine (HPBCD) 20 mg/mL
Inuline 20 mg/mL
Lécithine 1 .25 mg/mL
Maltitol 20 mg/mL
Mannitol 20 mg/mL
Na2 EDTA 1 .25 mg/mL
Pluronic F127 1 .25 mg/mL
Poloxamer 188 1 .25 mg/mL
Polysorbate 20 1 .25 mg/mL
Sodium lauryl sulfate (SLS) 1 .25 mg/mL
Sorbitol 20 mg/mL
Tableau 1 : formulations testées en essai de compatibilité
Les formulations d'anticorps anti-TNFa en présence des différents excipients sont mises en stabilité à 5, 40 et 50°C pendant 3, 7 et 14 jours. A chaque étape, les formulations font l'objet des analyses suivantes :
• SEC (Size Exclusion Chromatography) permettant l'analyse des formes monomères, formes de haut poids moléculaire et formes dégradées de l'anticorps anti-TNFa. Cette analyse montre la capacité de la formulation à conserver la protéine dans sa forme d'intérêt (forme active monomère) ainsi que la formation de formes polymérisées et/ou agrégats (formes de haut poids moléculaire pouvant être responsable d'effets secondaires lors de l'administration au patient) et/ou la formation de formes dégradées non actives.
Protocole simplifié : les échantillons de formulation d'anticorps anti-TNFa sont dilués à 2 mg/mL dans un tampon PBS (10mM Na2HP04 + 1 .8 mM KH2P04 + 2.7 mM KCI + 137 mM NaCI) puis centrifugés pendant 5 min à 15 000g. Les surnageants sont transférés dans des flacons, déposés en gel de chromatographie pour séparation puis chaque pic est détecté par mesure d'absorbance à 280 nm.
DLS (Dynamic Light Scattering ou Diffusion dynamique de la lumière) permettant le suivi de l'agrégation d'une formulation. Cette analyse montre la capacité de la formulation à conserver la protéine dans sa forme d'intérêt (forme active monomère) ainsi que la formation d'agrégats (formes de haut poids moléculaire pouvant être responsables d'effet secondaires lors de l'administration au patient ou de perte d'efficacité)
Protocole simplifié : Les échantillons sont dilués à 2mg/mL en eau ultrapure puis analysés par DLS.
Test fonctionnel : Le test d'activité fonctionnelle consiste en un test de liaison de l'anticorps à des protéines TNFa membranaires avec détection par cytométrie en flux, permettant de déterminer la conservation de l'activité de liaison de l'anticorps à sa cible.
Protocole simplifié : 2 x 105 cellules Jurkat transfectées pour exprimer le TFNa membranaire sont incubées avec 100 μΙ d'anticorps anti-TNF à différentes concentrations (0 à 100 μΙ/ml, concentration finale) à 4°C pendant 30 minutes. Après lavage l'anticorps anti-Fc IgG de chèvre couplé à la phycoérythrine (100 μΙ d'une dilution au 1 :100) est ajouté à 4°C pendant 30 minutes. Les cellules sont lavées et l'intensité moyenne de fluorescence (MFI) mesurée par cytométrie en flux. Une courbe de réponse est établie avec l'anticorps référence (anticorps anti-TNFa en tampon PBS) pour définir la concentration minimale d'anticorps donnant le plateau. Tous les échantillons sont testés à 0,125μg ml. Les résultats sont exprimés en pourcentage par rapport à une référence et normalisés comme suit :
Activité conservée = 80-100% de l'activité initiale
Activité légèrement diminuée : 50-80% de l'activité initiale
Perte d'activité : <50% de l'activité initiale Les résultats sont les suivants : Résultats de SEC:
Les résultats de SEC sont présentés dans le tableau 2 :
Excipient Résultats de l'analyse SEC - 14 Résultats de l'analyse jours à 5°C SEC - 14 jours à 50°C
Albumine 1 ,25 mg/mL Moyen Moyen
humaine sérique
Arginine 1 ,25 mg/mL Bon Bon
Carbopol 971 P 1 ,25 mg/mL NA - précipitation de la protéine NA - précipitation de la protéine
Carbopol 974P 1 ,25 mg/mL NA - précipitation de la protéine NA - précipitation de la protéine
Carboxymethyl- 20 mg/mL Bon Bon
Dextran (CMD)
Chitosan 1 ,25 mg/mL NA - conditions analytiques non NA - conditions analytiques adaptées (pH optimum) non adaptées (pH optimum)
Glycine 1 ,25 mg/mL Bon Bon
Hydroxypropyl- 20 mg/mL Bon Bon
beta-
Inuline 20 mg/mL Précipitation de la protéine Précipitation de la protéine
Lécithine 1 ,25 mg/mL Précipitation de la protéine Précipitation de la protéine
Maltitol 20 mg/mL Légère précipitation de la protéine Légère précipitation de la protéine
Mannitol 20 mg/mL Bon Bon
Na2 EDTA 1 ,25 mg/mL Bon Bon Pluronic F127 1 ,25 mg/mL Bon Bon
Poloxamer 188 1 ,25 mg/mL Bon Bon
Polysorbate 20 1 ,25 mg/mL Bon Bon
Sodium lauryl 1 ,25 mg/mL Précipitation de la protéine Précipitation de la protéine sulfate (SLS)
Sorbitol 20 mg/mL Bon Bon
Tableau 2 : Résultats de l'analyse en SEC
Les résultats considérés comme bons permettent de préserver à la fois la quantité et la qualité de la protéine, notamment après stress à 50°C pendant 14 jours (conservation de la quantité de protéines et conservation du profil de distribution des formes de la protéine).
Le taux de protéines total diminue significativement pour les formulations comprenant du carbopol, de la lécithine, du SLS, de l'albumine, de l'inuline, et du maltitol, indiquant la formation de protéines insolubles qui ont été enlevées par centrifugation.
En général, aucune variation de la quantité de protéine et de la distribution des différentes formes de la protéine n'est observée pour les autres formulations testées, montrant que ces formulations sont compatibles avec l'anticorps anti-TNFa.
Résultats de DLS:
Les résultats de DLS sont présentés dans le tableau 3 :
Résultats de distribution d'intensité
Taille moyenne
Intensité (%)
Excipient (diamètre en nm)
Pic 1
Pic 1 : Pic 2 Pic 3 Pic 2 Pic 3 monomères (autres) (autres) Monomères (autres) (autres)
Albumine humaine
sérique 12,5 292,7 0,0 93,8 6,2 0,0
Arginine 12,9 498,6 5131 ,0 81 ,3 16,9 1 ,8
Carbopol® 974P NA - précipitation de la protéine
Carbopol® 971 P NA - précipitation de la protéine
Carboxymethyl- Dextran (CMD) 20,0 2,4 0,0 91 ,0 9,0 0,0
Chitosan 14,5 725,9 0,0 73,2 26,8 0,0
Glycine 14,2 0,0 0,0 100,0 0,0 0,0
Hydroxypropyl- beta-cyclodextrine
(HPBCD) 14,3 2,1 5093,0 87,9 9,0 3,1
Inuline NA - précipitation de la protéine
Lécithine NA - précipitation de la protéine
Maltitol NA - précipitation de la protéine
Mannitol 13,6 5277,0 0,0 98,0 2,0 0,0
Na2 EDTA 13,4 726,0 419,9 92,4 2,9 2,6 Pluronic F127 12,3 349,8 71 ,7 72,3 20,1 7,6
Poloxamer 188 1 1 ,4 171 ,1 0,0 97,2 2,8 0,0
Polysorbate 20
1 1 ,7 0,0 0,0 100,0 0,0 0,0 (Tween 20)
Sodium lauryl
sulfate (SLS) 12,0 0,0 0,0 100,0 0,0 0,0
Sorbitol 14,2 4969,0 0,0 98,0 2,0 0,0
Contrôle (protéine
seule) 13,4 4273,0 723,9 95,1 4,3 0,6
Tableau 3 : Résultats de l'analyse en SEC - résultats de distribution d'intensité à
5°C au jour 5
Les résultats en DLS confirment que les formulations comprenant du Carbopol (971 P et 974P), de l'inuline, de la lécithine, du maltitol, ne permettent pas de maintenir la stabilité de l'anticorps anti-TNFa.
Les autres formulations montrent une bonne conservation de la protéine, particulièrement en présence des excipients CMD, chitosan, glycine ou HPBCD.
Résultats du test fonctionnel
Les formulations considérées comme compatibles (bons résultats uniquement) en SEC et en DLS, sont ensuite testées en activité fonctionnelle.
Les résultats du test fonctionnel sont indiqués dans le tableau 4 ci-dessous :
Conclusion
A T0, dès l'ajout de l'anticorps anti-TNFa, les formulations comprenant les excipients Carbopol 971 P, Carbopol 974P, lécithine, inuline et maltitol sont déterminées comme incompatibles avec l'anticorps anti-TNFa, à cause de la formation de flocons blanc (floculations de la formulation), indiquant que la protéine d'intérêt et/ou la protéine et son excipient ont précipité.
L'analyse des résultats de SEC, de SLS et d'activité combinés démontre la compatibilité de l'anticorps anti-TNFa avec les excipients arginine, CMD, chitosan, glycine, HPBCD, mannitol, Na EDTA, Pluronic® F127 et, qui sont donc adaptés à la formulation de l'anticorps.
Exemple 2 : Atomisation de séchage Afin d'obtenir une formulation sous forme sèche, différentes formulations sont soumises à un essai d'atomisation de séchage. Les formulations testées sont récapitulées dans le tableau :
Tableau 5 : Formulations testées en atomisation de séchage
L'essai permet d'évaluer la formation de poudre sèche et le besoin éventuel d'addition de protectants (surfactants et/ou acides aminés) pendant l'étape de séchage. L'atomisation de séchage des solutions placebo (sans ajout de l'anticorps anti-TNFa) a été optimisée sur un atomiseur de séchage à échelle laboratoire type B-290 (Buchi, Flawil, Suisse).
L'essai est ensuite réalisé avec les excipients et avec ajout d'anticorps anti-TNFa. Les particules séchées par atomisation de séchage sont collectées dans un réservoir attaché à un cyclone. Après le procédé, la poudre est refroidie à température ambiante et transférée en flacon verre.
Les paramètres du procédé sont les suivants :
• Température d'arrivée du gaz séchant : 100-150°C
· Température de sortie du gaz séchant: 50-80°C
• Débit d'alimentation : 1 -50 g/min
• Aspiration : 100%
• Gaz : air ou azote
Analyse des poudres reconstituées :
Les poudres obtenues présentent une teneur en humidité résiduelle inférieure à 15% en poids.
Les poudres sont ensuite reconstituées en tampon acétate (500μί pour 5 mg de poudre) afin de contrôler l'impact négatif éventuel de l'étape de séchage par atomisation. Toutes les poudres présentent une bonne conservation de la quantité et de la qualité de la protéine anticorps anti-TNFa.
L'objectif étant d'administrer la composition comprenant les excipients et la protéine d'intérêt par voie orale, avec libération de préférence dans le tractus gastro-intestinal, l'évaluation de la remise en solution des poudres atomisées n'a pas été considérée comme un critère pertinent. Exemple 3 : Formulations adaptées à l'administration par voie orale
Les 10 formulations de l'exemple 2, sélectionnées précédemment comme assurant la stabilité de l'anticorps anti-TNFa et séchées, sont ensuite testées pour l'administration par voie orale. En particulier, un essai a été réalisé dans un modèle mimant le colon ascendant (Système SHIME® de la société ProDigest) afin d'étudier l'effet de chaque formulation.
Les échantillons, après passage dans le système SHIME®, sont soumis à un test d'activité fonctionnel selon le protocole suivant :
2 x 105 cellules Jurkat transfectées pour exprimer le TFNa membranaire sont incubées avec100 μΙ d'anticorps anti-TNF à différentes concentrations (0 à 100 μΙ/ml, concentration finale) à 4°C pendant 30 minutes. Après lavage de l'anticorps anti-Fc IgG de chèvre couplé à la phycoérythrine (100 μΙ d'une dilution au 1 : 100) est ajouté à 4°C pendant 30 minutes.
Les cellules sont lavées et l'intensité moyenne de fluorescence (MFI) mesurée par cytométrie en flux. Une courbe de réponse est établie avec l'anticorps référence (anticorps anti-TNFa en tampon PBS) pour définir la concentration minimale d'anticorps donnant le plateau. Tous les échantillons sont testés à 0,125μg ml. Les résultats sont exprimés en pourcentage par rapport à une référence et normalisés.
Résultats: Les résultats du test fonctionnel à T0, T+2 heures et T+5 heures de l'incubation dans le côlon ascendant sont présentés dans la figure 1 .
Tous les échantillons conservent leur capacité à lier le TNFa membranaire. Les résultats confirment que l'absence d'excipients est délétère pour la conservation de l'activité fonctionnelle de l'anticorps anti-TNFa. De plus, les formulations comprenant du CMD, de l'HPBCD + CMD, de l'HPBCD + EDTA, du CMD + Polysorbate20 + Glycine ou du chitosan montrent un bon effet protecteur de l'activité fonctionnelle de l'anticorps anti- TNFa.
L'essai confirme donc que des formulations comprenant l'anticorps anti-TNFa en présence des excipients CMD, chitosan, EDTA, glycine, HPBCD ou polysorbate20, seuls ou en combinaison, sont donc adaptées à la formulation de l'anticorps pour son administration par voie orale. Exemple 4 : Confirmation des formulations d'intérêt
Les formulations de l'exemple 2 et 3 sont ensuite évaluées au regard de leurs capacités à préserver l'intégrité de l'anticorps et leur inocuité pour l'administration.
Les formulations suivantes sont écartées du fait de leurs effets secondaires potentiels lors de l'administration par voie orale avec libération ciblée dans le tractus gastro-intestinal : les formulations comprenant des tensioactifs (polysorbate 20 ou Poloxamer 188) car ceux-ci, bien que parfaitement tolérés en administration intra-veineuse ou sous- cutanée, sont suspectés d'être responsables, lorsqu'ils sont ingérés, d'une augmentation du risque de développer une maladie inflammatoire de l'intestin telle que la maladie de Crohn. les formulations comprenant des molécules à effet anticoagulant, tel que l'EDTA les formulations comprenant des polyols, en particulier du mannitol, maltitol, sorbitol, glycérol, lactitol, ou du xylitol qui peuvent avoir un effet laxatif.
Les caractéristiques des différentes formulations testées sont présentées dans le tableau de la figure 2.
Les lignes grisées dans le tableau de la figure 2 représentent les formulations non retenues pour une administration par voie orale de l'anticorps anti-TNFa.
Les essais confirment donc que des formulations comprenant l'anticorps anti-TNFa en présence des excipients CMD, chitosan, HPBCD ou glycine, seuls ou en combinaison, sont donc adaptées à la formulation de l'anticorps pour son administration par voie orale.
Exemple 5 : Formulation par voie orale avec libération dans le tractus gastrointestinal Les formulations suivantes :
- anticorps anti-TNFa + CMD
- anticorps anti-TNFa + CMD + HPBCD -
- anticorps anti-TNFa + CMD + HPBCD + Glycine anticorps anti-TNFa + Chitosan
sont ensuite soumises à une étape d'enrobage.
Différents essais sont réalisés afin de tester différents enrobages :
- monocouche d'un agent d'enrobage,
monocouche d'un mélange d'agents d'enrobage,
multicouche d'un agent d'enrobage,
multicouche de plusieurs agents d'enrobage différents,
multicouche d'un mélange d'agents d'enrobage.
Les agents d'enrobage testés sont préférentiellement des enrobages entériques du fait de la sensibilité acide de l'anticorps, notamment des dérivés d'acides acryliques, dérivés d'acides méthacryliques, dérivés d'acrylate d'éthyl, dérivés d'hydroxypropylméthylcellulose, dérivés de polyvinylacétate phatlates ; en particulier Eudragit® FS30D, Eudragit® S100, Eudragit® L100, Eudragit®L12,5, Eudragit® L30D-55, Eudragit® L100-55, Eudragit® S12,5, HPMC AS (AQOAT®), HPMCP®, Shellac.
Les résultats obtenus confirment la bonne libération de l'anticorps anti-TNFa.

Claims

REVENDICATIONS
1 . Composition pharmaceutique pour administration orale, comprenant un anticorps monoclonal anti-facteur de nécrose tumorale alpha (TNFa) et au moins un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables choisis dans le groupe comprenant : un carboxyméthyle-dextran, un chitosan, une cyclodextrine ou une combinaison de ceux-ci.
2. Composition pharmaceutique selon la revendication 1 , dans laquelle la chaîne lourde de l'anticorps anti-TNF alpha comprend la SEQ ID No.1 et dans laquelle la chaîne légère de l'anticorps anti-TNF alpha comprend la SEQ ID No.2.
3. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 1 à 2, dans laquelle l'anticorps anti-TNF alpha est l'adalimumab.
4. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle l'anticorps anti-TNF alpha est produit dans des cellules épithéliales mammaires de mammifère non-humain ou dans le lait d'un mammifère transgénique non-humain.
5. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, comprenant en outre au moins un acide aminé.
6. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que la composition est sous forme solide.
7. Composition pharmaceutique selon la revendication 6, caractérisée en ce que la composition sous forme solide est obtenue par lyophilisation, atomisation de séchage ou par séchage par vaporisation.
8. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce qu'elle se présente sous la forme d'une formulation à libération prolongée et/ou retardée.
9. Composition pharmaceutique à libération prolongée et/ou retardée selon la revendication 8, comprenant en outre au moins un agent d'enrobage.
10. Composition pharmaceutique à libération prolongée et/ou retardée selon la revendication 9, dans laquelle l'agent d'enrobage est choisi dans le groupe comprenant : dérivés d'acides acryliques, dérivés d'acides méthacryliques, dérivés d'acrylate d'éthyl, dérivés d'hydroxypropylméthylcellulose, dérivés de polyvinylacétate phatlates, poly(acrylate de méthyle -co- méthacrylate de méthyl - co- acide méthacrylique, poly(acide méthacrylate -co- méthacrylate de méthyle) et succinyl acétate d'hydroxypropylméthylcellulose ou un mélange de ceux-ci.
1 1 . Procédé de préparation d'une composition pharmaceutique à libération prolongée et/ou retardée selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, ledit procédé comprenant :
a) Une étape de mélange de l'anticorps anti-TNF alpha avec un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables selon la revendication 1 , b) Une étape de séchage, en particulier par atomisation, de la composition obtenue à l'étape a),
c) Une étape d'enrobage utilisant un ou plusieurs agents d'enrobage.
12. Composition pharmaceutique à libération prolongée et/ou retardée selon l'une quelconque des revendications 1 à 10 pour son utilisation dans le traitement des maladies inflammatoires ou des maladies auto-immunes.
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