EP1843786A2 - Dcchol chez les nouveau-nes - Google Patents

Dcchol chez les nouveau-nes

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EP1843786A2
EP1843786A2 EP06709107A EP06709107A EP1843786A2 EP 1843786 A2 EP1843786 A2 EP 1843786A2 EP 06709107 A EP06709107 A EP 06709107A EP 06709107 A EP06709107 A EP 06709107A EP 1843786 A2 EP1843786 A2 EP 1843786A2
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
vaccine
dcchol
newborns
mice
antigen
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP06709107A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
François DALENCON
Claire-Anne Siegrist
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sanofi Pasteur Inc
Original Assignee
Sanofi Pasteur Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sanofi Pasteur Inc filed Critical Sanofi Pasteur Inc
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Withdrawn legal-status Critical Current

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    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/105—Delta proteobacteriales, e.g. Lawsonia; Epsilon proteobacteriales, e.g. campylobacter, helicobacter
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
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    • A61K39/12—Viral antigens
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    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/21—Retroviridae, e.g. equine infectious anemia virus
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    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants

Definitions

  • the present invention relates to the use of a vaccine adjuvant for the preparation of a vaccine for the administration of neonatal mammals, as well as to a method of immunizing newborns.
  • the invention relates to the use of
  • Vaccine development is always difficult, but it is particularly complicated when it comes to vaccines for newborns; Indeed, we noticed that when we proceeded to immunization during the 1st months of life, one obtained a smaller amount of antibody that when immunization was performed later; furthermore, the antibodies obtained were generally of shorter duration than when the immunization took place later.
  • T-cell responses obtained at an early stage of life although being rapidly maturing responses, are both qualitatively and quantitatively different from those that are induced at an early stage. later life.
  • newborns would need to be armed very early to be able to fight against a number of pathogens, to which they are likely to be exposed at a very young age, in particular the Human Immunodeficiency Virus, the Respiratory Syncytial Virus, the malaria agent Heicobacter pyori, Haemophilus influenza type B, the polio virus, the hepatitis B virus, the agents of whooping cough, tetanus, diphtheria, meningitis, pneumonia.
  • the Human Immunodeficiency Virus the Respiratory Syncytial Virus
  • the malaria agent Heicobacter pyori Haemophilus influenza type B
  • the polio virus the hepatitis B virus
  • the agents of whooping cough tetanus, diphtheria, meningitis, pneumonia.
  • the present invention relates to the use of DCchol for the preparation of a vaccine composition for administration to newborns.
  • the vaccine composition comprises at least one antigen against infections caused by Heicobacter pyori.
  • the vaccine composition comprises at least the TAT antigen of the AIDS virus.
  • the subject of the invention is also a method of immunizing neonates according to which neonates are administered at least one vaccine antigen, in which the Further improvement is to also administer at least one adjuvant comprising DCchol.
  • newborns are defined as children up to one month old at the time of the first injection.
  • an animal model has been developed. Indeed, although it is difficult to formally compare the immune maturation from one species to another, many experiments have nevertheless validated the hypothesis that whatever the species, the immune maturation always follows the same stages, the difference between the different species residing in the kinetics of passage from one stage to another.
  • the vaccine formulations according to the present invention although intended essentially for administration to human neonates, have been developed on the basis of tests carried out on young mice, the stages of immune maturation from mouse to mouse adult having been demonstrated to be essentially the same as the stages of immune maturation from the human infant to the adult male. In this model, one-month-old human infants are represented by one-week-old mice.
  • the immune response is meant obtaining in the newborn an immune response approximating that obtained in adults; it may especially be an antibody or T-cell response which would be quantitatively increased compared with that generally obtained with the vaccines of the prior art, or else a qualitative modification of the response obtained; the qualitative characteristics of the immune responses which can be expressed by the nature of the antibodies produced, as well as by the nature and the quantity of the cytokines induced, which makes it possible in particular to determine the Th1 or Th2 orientation of the response.
  • the humoral response that is to say the immunoglobulins produced, considering that IgG2a reflect an orientation of the answer in the sense that the ThI 5 and IgG indicate a direction the answer to the type Th2.
  • interferon ⁇ is a Indicator of an orientation ThI
  • Interleukins 4 and 5 are indicators of an orientation Tn2.
  • DCchol within the meaning of the present invention is meant 3 ⁇ -pST- (TSf ', N'-dimethylaminoethane) carbamoyl] cholesterol, which can be obtained from cholesteryl chloroformate and N, N-dimethylethylenediamine, according to the method described in USP 5,283,185 or according to the method described in Example 8 of USP Patent 5,753,262.
  • the salt form of DCchol in particular chloride, is used.
  • vaccine composition is meant a composition comprising at least one vaccine antigen of interest for the immunization of newborns. It may be a monovalent vaccine composition, that is to say comprising a single type of antigen, or a combination vaccine comprising several antigens for simultaneously immunizing against one or more diseases.
  • Antigens susceptible to be adjuvanted by the present invention may be of various nature; they may be proteins, peptides, oligo- or polysaccharides (conjugated or otherwise), viruses or portions of viruses, etc., more generally any antigen of interest to be introduced into a vaccine composition. pediatric.
  • the present invention does not relate to the use of DCchol for adjuvanting vaccine compositions which, instead of including the antigens themselves, would include antigens in the form of their "precursor" which is DNA.
  • the present invention is of particular interest in the case of certain diseases likely to affect a newborn from the first moments of his life; it is for example AIDS, malaria, ...
  • the vaccine composition may be administered by any of the routes customarily used for the administration of vaccines, and in particular by the subcutaneous, intramuscular, transcutaneous and intradermal routes.
  • the administration schedule is advantageously a scheme providing for at least 2 successive administrations: an era the administration followed by a booster after some time, the era the administration being carried out in the 1st month of life.
  • the vaccine composition prepared according to the invention exhibits increased immunogenicity without, however, experiencing increased reactogenicity.
  • the reactogenicity can be appreciated in different ways; in the mouse, the following observations are made: - local reactogenicity: at the injection site verification of the presence or absence of an inflammatory granuloma with or without a scar preventing hair growth, - systemic reactogenicity: weekly weighing to check if the weight gain is normal or not.
  • the vaccine compositions according to the invention may also comprise all the elements sometimes present in the compositions according to the prior art, such as preservatives, stabilizers or others.
  • Vaccine composition comprising the TAT protein.
  • Vaccine compositions comprising as antigen a detoxified TAT III B protein are prepared.
  • This detoxified protein and its method of preparation are described in detail in the application WO99 / 33346 where it is identified by the term carboxymethyl TAT.
  • This recombinant TAT antigen is present in solution at 2 g / l.
  • the vaccine compositions are prepared either with an adjuvant according to the prior art, that is to say aluminum oxyhydroxide or a squalene-based emulsion, or according to the invention with DCchol; in addition, in order to be able to demonstrate the adjuvant power of the various products tested, a composition comprising only the antigen in saline solution is also prepared.
  • the composition comprising aluminum oxyhydroxide is prepared from a suspension of 8 g / l, supplied by Superfos Biosector.
  • the emulsion is prepared by mixing with Trulaturrax for a few seconds 0.18 g of Tween TM 80 (supplied by Merck) 0.16 g of sorbitan trioleate (supplied by Seppic under the name Montane VG TM 85) and 1.29 g of g squalene (supplied by the company Fluka) in sufficient water for 30 ml.
  • the liposomal composition of DCchol is prepared by dispersing 1.3 g of
  • Anotop TM (Whatmann) with a porosity of 0.2 ⁇ m.
  • compositions prepared is diluted in a saline solution which finally contains 50 mmol / l of Tris (hydroxymethyl) aminomethane and 100 mmol / l of sodium chloride, the pH being adjusted to 7.4.
  • Vaccine doses having the following composition are then obtained:
  • mice and 1-week old "newborn" mice are available in groups of 6 to 8 (groups of mice) or 5 to 6 (groups of adult mice). Experiments were performed with 2 subcutaneous injections of the same vaccine formulation at OJ and D21. Blood samples are taken after the booster injection. The immunoglobulins specific for TAT are assayed by ELISA technique. A total of 10 to 40 mice per formulation was tested in several independent experiments: for DC-Chol: 27 adults, 38 neonates, for aluminum oxyhydroxide: 18 adults, 22 neonates; for the emulsion: 10 adults and 16 neonates and in saline: 10 adults and 15 neonates. The results obtained are shown in FIG. 1 which indicates, for each of the formulations tested, the total amount of IgG antibody expressed in 10 g of arbitrary ELISA titers.
  • Vaccine compositions having as antigen the recombinant urease of Heilobacter pylori are prepared.
  • This urease has already been described as a potential candidate for the manufacture of a vaccine against stomach ulcers induced by the bacteria Heicobacter pylori.
  • a process for its preparation is described in the following publication: Journal of
  • the vaccinating compositions are prepared in the same manner as described in the preceding example, except to replace at the time of final mixing, the suspension comprising the Tat antigen, with a suspension comprising urease.
  • Vaccine doses of 50 ⁇ l are obtained, each time comprising 10 ⁇ g of urease and either 200 ⁇ g of DCchol or 200 ⁇ g of AlOOH.
  • mice Male Balb / c mice and 1 week old mice are available, divided into groups of
  • mice 5-8 (groups of adult mice, or groups of suckling mice).
  • Blood sampling is carried out after the injection ere, after 1 reminder and possibly after the 2 nd point (in the case of Experiments 3 and 4).
  • the immunoglobulins specific for urease are assayed by ELISA technique.
  • mice injected before the era can not be achieved without sacrificing the animals.

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Abstract

L'invention a pour objet l'utilisation d'un adjuvant particulier, le DCchol pour la préparation de compositions vaccinales destinées à être administrées à des nouveau-nés.

Description

DCchol chez les nouveau-nés
La présente invention est relative à l'utilisation d'un adjuvant vaccinal pour la préparation d'un vaccin destiné à l'administration de mammifères nouveau-nés, ainsi qu'à une méthode d'immunisation de nouveau-nés. En particulier, l'invention est relative à l'utilisation de
DCchol pour la préparation d'un vaccin pour nouveau-nés.
La mise au point de vaccins est toujours difficile, mais elle est particulièrement compliquée lorsqu'il s'agit de vaccins destinés aux nouveau-nés; en effet, on a remarqué que lorsqu'on procédait à l'immunisation durant le 1er mois de la vie, on obtenait une moins grande quantité d'anticorps que lorsque l'immunisation était réalisée plus tard ; en outre, les anticorps obtenus étaient généralement d'une durée de vie plus courte que lorsque l'immunisation avait lieu plus tardivement.
D'autre part, il semblerait que les réponses des cellules T obtenues à un stade précoce de la vie, bien qu'étant des réponses qui maturent rapidement, soient des réponses différentes à la fois qualitativement et quantitativement de celles qui sont induites à un stade ultérieur de la vie.
Cependant, les nouveau-nés auraient besoin d'être très tôt armés pour pouvoir lutter contre un certain nombre de pathogènes, auxquels ils sont susceptibles d'être exposés très jeunes, en particulier le virus de l'Immunodéiicience Humaine, le Virus Respiratoire Syncytial, l'agent du paludisme, Heïicobacter pyîori, Haemophilus influenza type B, le virus de la polio, celui de l'hépatite B, les agents de la coqueluche, du tétanos, de la diphtérie, de la méningite, de la pneumonie.
En conséquence, il existe un besoin fort de pouvoir disposer de compositions vaccinales permettant d'immuniser efficacement des nouveau-nés. Pour répondre à ce besoin, la présente invention a pour objet l'utilisation de DCchol pour la préparation d'une composition vaccinale destinée à être administrée à des nouveau-nés.
Selon un mode particulier, la composition vaccinale comprend au moins un antigène contre les infections provoquées par Heïicobacter pyîori.
Selon un autre mode particulier, la composition vaccinale comprend au moins l'antigène TAT du virus du SIDA.
L'invention a également pour objet une méthode d'immunisation de nouveau-nés selon laquelle on administre aux nouveau-nés au moins un antigène vaccinal, dans laquelle le perfectionnement consiste à administrer également au moins un adjuvant comprenant du DCchol.
De nombreux avantages de la présente invention apparaîtront à la lecture de la description détaillée qui va suivre, en référence à la Figure I qui illustre les résultats obtenus à l'exemple 1.
Aux fins de la présente description, on entend par nouveau-nés, des enfants âgés d'un mois au plus au moment où ils reçoivent la première injection.
Etant donné le fait qu'il est souhaitable de réduire autant que possible les essais cliniques menés chez les humains, et en particulier chez les enfants et les nouveau-nés, un modèle animal a été développé. En effet, bien qu'il soit difficile de comparer formellement la maturation immune d'une espèce à l'autre, de nombreuses expériences ont cependant permis de valider l'hypothèse que quelle que soit l'espèce, la maturation immune suit toujours les mêmes étapes, la différence entre les différentes espèces résidant dans la cinétique de passage d'une étape à l'autre. Aussi, les formulations vaccinales selon la présente invention, bien que destinées essentiellement à l'administration à des nouveau-nés humains, ont été mises au point sur la base de tests réalisés sur des souriceaux, les étapes de maturation immunitaire du souriceau à la souris adulte ayant été démontrée comme essentiellement les mêmes que les étapes de maturation immunitaire du nouveau-né humain à l'homme adulte. Dans ce modèle, les nouveau-nés humains d'un mois sont représentés par des souriceaux âgés d'une semaine.
Par amélioration de la réponse immune selon l'invention, on entend l'obtention chez le nouveau-né d'une réponse immune se rapprochant de celle obtenue chez l'adulte; il peut notamment s'agir d'une réponse en anticorps ou en cellules T qui serait quantitativement augmentée par rapport à celle généralement obtenue avec les vaccins de l'art antérieur, ou encore d'une modification qualitative de la réponse obtenue; les caractéristiques qualitatives des réponses immunes pouvant s'exprimer par la nature des anticorps produits, ainsi que par la nature et la quantité des cytokines induites, ce qui permet en particulier de déterminer l'orientation ThI ou Th2 de la réponse. Chez les souris, lorsqu'on s'intéresse à la réponse humorale, c'est-à-dire aux immunoglobulines produites, on considère que les IgG2a traduisent une orientation de la réponse dans le sens ThI5 et que les IgGl traduisent une orientation de la réponse vers le type Th2. Lorsqu'on regarde les cytokines produites, on considère que PInterféron γ est un indicateur d'une orientation ThI, alors que les Interleukines 4 et 5 sont des indicateurs d'une orientation Tn2.
Par DCchol au sens de la présente invention, on entend du 3β pST-( TSf', N'- dimethylaminoethane) carbamoyl] cholestérol, qui peut être obtenu à partir de cholesteryl chloroformate et de N, N-dimethylethylenediamine, selon la méthode décrite dans le brevet USP 5,283,185 ou encore selon la méthode décrite à l'exemple 8 du brevet USP 5,753,262. De façon préférentielle, on utilise la forme saline du DCchol, en particulier le chlorure.
Par composition vaccinale, on entend une composition comprenant au moins un antigène vaccinal d'intérêt pour l' immunisation des nouveau-nés. Il peut s'agir d'une composition vaccinale monovalente, c'est-à-dire comprenant un seul type d'antigène, ou d'une combinaison vaccinale comprenant plusieurs antigènes permettant d'immuniser simultanément contre une ou plusieurs maladies. Les antigènes susceptibles d'être adjuvés grâce à la présente invention peuvent être de nature diverse; il peut s'agir de protéines, de peptides, d'oligo- ou poly-saccharides (conjugués ou non), de virus ou portions de virus,...etc., plus généralement de tout antigène intéressant à introduire dans une composition vaccinale pédiatrique. La présente invention ne concerne pas l'utilisation du DCchol pour adjuver des compositions vaccinales qui, au lieu de comprendre les antigènes eux-mêmes, comprendraient les antigènes sous forme dé leur « précurseur » qu'est l'ADN. La présente invention présente un intérêt particulier dans le cas de certaines maladies susceptibles d'affecter un nouveau-né dès les premiers instants de sa vie; il s'agit par exemple du SIDA, du paludisme, ...
Selon l'invention, la composition vaccinale peut être administrée par toutes les voies habituellement utilisées pour l'administration de vaccins, et notamment par voie sous cutanée, intramusculaire, transcutanée et intradermique. Le schéma d'administration est avantageusement un schéma prévoyant au moins 2 administrations successives : une lère administration suivie d'un rappel quelque temps après, la lère administration étant effectuée dans le 1er mois de vie. Avantageusement, la composition vaccinale préparée selon l'invention présente une immunogénicité accrue sans pour autant connaître une réactogénicité augmentée. La réactogénicité peut être appréciée de différentes manières; chez la souris, on effectue les surveillances suivantes : - réactogénicité locale : au site d'injection vérification de la présence ou non d'un granulome inflammatoire avec présence ou non d'une cicatrice empêchant la pousse des poils, - réactogénicité systémique : pesée hebdomadaire permettant de vérifier si la prise de poids est normale ou pas. De façon classique, les compositions vaccinales selon l'invention peuvent également comprendre tous les éléments parfois présents dans les compositions selon l'art antérieur, tels que conservateurs, stabilisants ou autres.
Les exemples qui suivent illustrent quelques modes de réalisation de la présente invention.
1. Composition vaccinale comprenant la protéine TAT.
1.1 Préparation des compositions vaccinales.
On prépare des compositions vaccinales comprenant comme antigène une protéine TAT III B détoxifiée. La protéine TAT a été détoxifiée par une réaction d'alkylation en milieu alcalin par utilisation d'iodoacétamide dans les conditions suivantes : nombre de micromoles d'iodoacétamide = 200 X nombre de micromoles de TAT + nombre de micromoles de DTT. Cette protéine détoxifiée et son procédé de préparation sont décrits en détails dans la demande WO99/33346 où elle est identifiée sous le terme de TAT carboxyméthylée.
Cet antigène TAT recombinante est présent en solution à 2g/l.
Les compositions vaccinales sont préparées soit avec un adjuvant selon l'art antérieur, c'est-à-dire de l'oxyhydroxyde d'aluminium ou une émulsion à base de squalène, soit selon l'invention avec du DCchol; en outre, afin de pouvoir mettre en évidence le pouvoir adjuvant des différents produits testés, on prépare également une composition comprenant uniquement l'antigène en solution saline. La composition comprenant de l'oxyhydroxyde d'aluminium est préparée à partir d'une suspension à 8g/l, fournie par la Société Superfos Biosector.
L'émulsion est préparée en mélangeant à rUltraturrax pendant quelques secondes 0,18g de Tween™ 80 (fourni par Merck) 0,16g de trioléate de sorbitan (fourni par la Société Seppic sous le nom de Montane VG™85) et 1,29 g de squalène (fourni par la Société Fluka) dans de l'eau en quantité suffisante pour 30 ml. On obtient alors une pré-émulsion, qui est homogénéisée au Microfluidiseur MI lO (Microfluidics, Newton MA ) par 20 passages à une pression moteur de 60 psi donner une émulsion mono disperse avec des gouttelettes d'une taille moyenne de 120nm.
La composition liposomale de DCchol est préparée en dispersant 1,3 g de poudre de
DCchol (fourni par la Société Avanti® Polar Lipids Inc) dans 65ml d'eau distillée; la suspension est agitée pendant 15 min à température ambiante (22°C) et 1 heure à 650C. Après refroidissement autour de 39-4O0C, la suspension est filtrée à travers un filtre hydrophile Durapore™ (Millipore) de porosité 0,45 μm et sous pression à travers un filtre
Anotop™(Whatmann) de porosité 0,2 μm.
On obtient alors une suspension de liposomes dont la taille moyenne est de 176nm, et dont la concentration est de 20μg/ml.
Chacune des compositions préparées est diluée dans une solution saline qui contient au final 50mmol/l de Tris(hydroxymethyl)aminométhane et 100 mmol/1 de chlorure de sodium, le pH étant ajusté à 7,4.
On obtient alors des doses vaccinantes ayant la composition suivante :
Nature de Quantité d'adjuvant Quantité Volume de la l'adjuvant d'antigène dose
Aucun (solution iμg 50μg saline uniquement)
AlOOH 200μg iμg 50μg
Emulsion Squalène :2,15mg iμg 50μg
Tween™ 80 : 0,3mg
Trioléate de Sorbitan: 0,26mg
DCchol lOOμg iμg 50μg
1.2 Immunisation des souris
On dispose de souris Balb/c adultes et de souris « nouveau-nées » âgées de 1 semaine réparties en groupes de 6 à 8 (groupes de souriceaux) ou de 5 à 6 (groupes de souris adultes). On réalise des expériences avec 2 injections sous-cutanées de la même formulation vaccinale à JO et à J21. On effectue des prélèvements sanguins après l'injection de rappel. Les immunoglobulines spécifiques de la TAT sont dosées par technique ELISA. Un total de 10 à 40 souris par formulation a été testé dans plusieurs expériences indépendantes : pour le DC-Chol : 27 adultes, 38 nouveau-nés, pour l'oxyhydroxyde d'aluminium : 18 adultes, 22 nouveau-nés; pour l'émulsion : 10 adultes et 16 nouveau-nés et en solution saline : 10 adultes et 15 nouveau-nés. Les résultats obtenus sont indiqués sur la Figure I qui indique, pour chacune des formulations testées, la quantité totale d'anticorps IgG exprimée en 1Og10 des titres arbitraires ELISA
Ces résultats montrent que l'oxyrrydroxyde d'aluminium et l'émulsion qui sont de bons adjuvants chez les souris adultes, ne donnent pas de résultats satisfaisants chez les nouveau- nés; contrairement à eux, le DCchol est capable d'augmenter la réponse irnmune induite par une composition vaccinale lorsqu'elle est administrée à des adultes, mais également lorsqu'elle est administrée à des nouveau-nés. 2. Composition vaccinale comprenant l'uréase de Heîicobacter pylori.
2.1. Préparation des compositions vaccinales.
On prépare des compositions vaccinales ayant comme antigène l'uréase recombinante de Heîicobacter pylori. Cette uréase a déjà été décrite comme un candidat potentiel pour la fabrication d'un vaccin contre les ulcères de l'estomac induits par la bactérie Heîicobacter pylori. Un procédé pour sa préparation est décrit dans la publication suivante : Journal of
Infectious Diseases, 1995, Jul;172(l):161-72. "Oral immunization with recombinant
Heîicobacter pylori urease induces secretory IgA antibodies and protects mice from challenge with Heîicobacter felis. " Lee CK, Weltzin R, Thomas WD Jr, Kleanthous H5
Ermak TH, Soman G, HiIl JE,Ackerman SK, Monath TP.
Les compositions vaccinantes sont préparées de la même manière que décrit à l'exemple précédent, sauf à remplacer au moment du mélange final, la suspension comprenant l'antigène Tat, par une suspension comprenant de l'uréase.
On obtient des doses vaccinantes de 50μl comprenant à chaque fois lOμg d'uréase et soit 200 μg de DCchol, soit 200 μg d' AlOOH.
2.2 Immunisation des souris.
On dispose de souris Balb/c adultes et de souris âgées de 1 semaine, réparties en groupes de
5 à 8 (groupes de souris adultes, ou groupes de souriceaux).
On réalise des expériences avec 2 injections sous-cutanées de la même formulation vaccinale à JO et à J21 (expériences 1 et 2), ou avec 3 injections à JO, J21 et J36 (expériences 3 et 4).
On effectue des prélèvements sanguins après la lere injection, après le 1er rappel et éventuellement après le 2nd rappel (dans le cas des expériences 3 et 4).
Les immunoglobulines spécifiques de l'uréase sont dosées par technique ELISA.
Les résultats relatifs aux titres mesurés, exprimés en log10 des titres ELISA, relativement aux quantités d'IgGl et d'IgG2a produites chez les souris nouveau-nés sont indiqués dans le tableau ci-après :
Les dosages des quantités d'anticorps présents chez les souriceaux avant la lere injection ne peuvent pas être réalisés sans sacrifier les animaux.
Aussi, il n'est pas possible d'avoir pour un même souriceau, son taux d'anticorps avant immunisation et après immunisation; cependant, un certain nombre de dosages ont quand même été effectués, et bien qu'ils varient en fonction des anticorps maternels, on a pu observer qu'ils étaient en moyenne bien inférieurs à ceux obtenus après la lere injection, ce qui permet bien de valider l'effet de l'immunisation.
Les résultats obtenus montrent que le DCchol permet d'induire chez les nouveau-nés une plus grande quantité d'anticorps que l'oxyhydroxyde d'aluminium.
Dans chacune des expériences réalisées, bien que cela ne soit pas décrit en détail ici, on a également immunisé un même nombre de souris adultes; les résultats obtenus montrent que les titres en anticorps chez les souris adultes sont légèrement plus élevés que chez les souriceaux; par contre, on voit dans la population des adultes que si le DCchol est un aussi bon adjuvant que l'oxyhydroxyde d'aluminium, il ne lui est pas supérieur en ce qui concerne la production d'anticorps.
D'autre part, les critères permettant d'apprécier la réactogénicité des compositions vaccinales sont satisfaisants quelque soit l'adjuvant utilisé.

Claims

REVENDICATIONS
1. Utilisation de DC chol pour la préparation de compositions vaccinales destinées à être administrées à des nouveau-nés.
2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que la composition vaccinale comprend au moins un antigène contre les infections provoquées par Helicobacter pylori
3. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que la composition vaccinale comprend au moins l'antigène TAT du virus du SIDA.
4. Méthode d'immunisation de nouveau-nés, selon laquelle on administre aux nouveau-nés au moins un antigène vaccinal, dans laquelle le perfectionnement consiste à administrer également au moins un adjuvant comprenant du DCchol.
EP06709107A 2005-01-25 2006-01-17 Dcchol chez les nouveau-nes Withdrawn EP1843786A2 (fr)

Applications Claiming Priority (2)

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