EP1242817A2 - Verfahren zur feststellung neurologisch relevanter eigenschaften eines materials - Google Patents

Verfahren zur feststellung neurologisch relevanter eigenschaften eines materials

Info

Publication number
EP1242817A2
EP1242817A2 EP00987424A EP00987424A EP1242817A2 EP 1242817 A2 EP1242817 A2 EP 1242817A2 EP 00987424 A EP00987424 A EP 00987424A EP 00987424 A EP00987424 A EP 00987424A EP 1242817 A2 EP1242817 A2 EP 1242817A2
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
neurologically relevant
neurologically
relevant material
nematode
neurotoxic
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP00987424A
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Claudia Rudolph
Gerhard Weidner
Marius HÖNER
Karlheinz Tovar
Peter Riederer
Manfred Gerlach
Ralf Baumeister
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sanofi Aventis Deutschland GmbH
Original Assignee
Elegene AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Elegene AG filed Critical Elegene AG
Publication of EP1242817A2 publication Critical patent/EP1242817A2/de
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5082—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms
    • G01N33/5085—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms of invertebrates
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/43504—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from invertebrates
    • G01N2333/43526—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from invertebrates from worms
    • G01N2333/4353—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from invertebrates from worms from nematodes
    • G01N2333/43534—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from invertebrates from worms from nematodes from Caenorhabditis

Definitions

  • the present invention relates to a method for determining neurological properties of a material;
  • the present invention relates to a method for examining the suitability of a material as a pharmaceutical for mammals, that is, among others, humans.
  • neurologically relevant means that the material can have an influence on the central nervous system of humans in particular, for example as a neurotoxic substance or as a substance or a material which can cancel or alleviate the action of the neurotoxic substance.
  • material in the sense of the present invention means that either a single substance or compositions of several substances are used.
  • the invention thus relates to a method for determining a neurologically relevant property of a material, wherein at least one nematode is used which works with at least one neurologically relevant material (agonist / antagonist) and optionally with a second neurologically relevant material of opposite direction of action (antagonist / agonist). is offset and wherein a deviation from or in the case of the use of a first and second neurologically relevant material a maintenance or resetting of a normal state allows a determination of the neurological relevance of at least one of the materials used.
  • the method according to the invention can be used in particular to determine whether a certain material is likely to have a positive influence on disease-related changes in the central nervous system, particularly of humans.
  • a neurotoxic substance will regularly be used as the first neurologically relevant material in the method according to the invention.
  • this method is also suitable for identifying genes which are involved in the expression of the action of neurotoxic substances.
  • the invention thus consists in a method in which nematodes are first subjected to a mutagenesis and the genetically modified animals or their offspring are then mixed with a neurologically relevant material, as described above.
  • Those animals in which no behavioral or morphological anomalies or differences in comparison to non-mutagenized animals can be observed can carry genes which have been altered, inactivated or destroyed by the mutagenesis and whose products are not or in any other way than in non- mutagenized animals act.
  • the method described thus serves to identify genes which mediate or suppress the expression of the action, for example of neurotoxic substances.
  • the invention thus furthermore relates to a method for identifying neurologically relevant genes, in which nematodes are first subjected to targeted mutagenesis and then the genetically modified animals or their offspring are exposed to at least one neurologically relevant material, as described above.
  • Neurologically relevant gene in the context of the present aspect of the invention means that the gene is involved in the expression of the action of a neurologically relevant material in some way. This neurological relevance can be, for example, that the mutated nematode has a different reaction (behavior or morphology) to neurotoxic substances compared to the non-mutated nematode.
  • the nematodes can be exposed to the materials to be examined in a variety of ways. For example, it is possible to cultivate the animals in petri dishes with an agar which contains neurotoxic substances on the one hand and the substances of interest on the other. But you can also easily in the animals bathe examining materials. This variant is not only particularly simple, but also enables easier standardization of the concentrations and higher throughput in a screening system. Populations of the animals are used for an investigation, which are then incubated with different solutions of the materials and in different concentrations. The inventors' experiments have now shown that substances which can revert neurotoxically induced Parkinson's in both human and non-human primates can also do so in C. elegans. This shows that C.
  • elegans can be used as a suitable model system for Parkinson's.
  • the observation, namely the reversion or prevention of the behavioral anomaly or the morphological change after neurotoxin treatment allows a conclusion to be drawn about the possible effectiveness and the site of action of a material whose suitability as a pharmaceutical is to be investigated.
  • C. elegans as an animal model for examining materials with regard to their suitability as a pharmaceutical in humans or other mammals allows reliable predictions, in particular when it comes to the reactions to neurotoxic substances and the reversion or prevention of these reactions. It has been shown that behavioral anomalies can be brought about in a simple manner by adding neurotoxic substances to nematodes kept in liquid culture.
  • test animals of the roundworm C. elegans
  • a defined developmental stage e.g. Ll larval stage
  • liquid medium e.g. 20 ° C
  • they were exposed to the neurotoxic substance MPTP in concentrations between 16-500 ⁇ g / ml for a few hours to several days (e.g. in Figure A after three days).
  • FIGS. A, B A pronounced phenotype was observed in an observation period of a few minutes to several days (in FIGS. A, B on day 6). This can result in severe movement disorders, reduced progeny or morphological changes.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Feststellung neurologisch relevanter Eigenschaften eines Materials, wobei ein Nematode eingesetzt wird.

Description

Verfahren zur Feststellung neurologisch relevanter Eigenschaften eines Materials
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Feststellung neurologischer Eigenschaften eines Materials; insbesondere betrifft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Untersuchung der Eignung eines Materials als Pharmakon für Säugetiere, das heißt unter anderem Menschen.
Die Entwicklung neuer Medikamente dauert durchschnittlich insgesamt 10 bis 12 Jahre. Ein Großteil dieser Zeit besteht zunächst darin, zielgerichtet ein Material zu finden, das sich für eine bestimmte Indikation eignen soll. Häufig geht die Zahl der zunächst einmal erwogenen Substanzen in die Hunderttausende. Somit besteht ein besonderes Bedürfnis nach einem einfachen und schnellen Testverfahren, nach dem sich die zu untersuchenden Substanzen grundsätzlich als geeignet oder ungeeignet zuordnen lassen. Es sind zur Zeit aber keine Verfahren bekannt, mit denen man in hoher Zuverlässigkeit eine Voraussage über eine mögliche Wirksamkeit beim Menschen (oder anderen Säugetieren) ermitteln kann. Selbstverständlich bieten sich hierzu Tiermodelle an, die aber hinsichtlich ihres Voraussagewertes entweder wenig zuverlässig und/oder sehr aufwendig sind. Konventionelle Tiermodelle werden zudem in zunehmendem Maße allgemein abgelehnt, da sie mit Qualen für die Tiere verbunden sind (beispielsweise Hunde und Affen) . Andererseits wird aber von Tiermodellen regelmäßig gefordert, daß sie eine große Ähnlichkeit zu dem menschlichen Organismus aufweisen, damit eine gewisse Wahrscheinlichkeit für die aus den Tierversuchen gewonnen Kenntnisse bezüglich ihrer Übertragbarkeit auf den Menschen gewährleistet ist.
Es besteht ein besonderes Bedürfnis nach einem Tiermodell, das einen hohen Voraussagewert hat und entweder konventionelle Tiermodelle ersetzen oder doch zumindest den Umfang der Versuche mit höheren Lebewesen (wie Säugetieren) Q 3 >
Φ o er
3 p g;
P 3 Φ o P) P- tr n rt -
Φ Φ P
3 p 3 " Q tx) P
Φ O
O rr d er Φ Φ
P 3 P
Ω ÜJ
3" tu
ΓT O Φ
P P-
3 Φ er Q p Φ c
Φ 3"
3 Φ P) c p- i— ■
Φ 3 ΓT C
P Φ P
H cn 3
P tQ
P 3 er 0 er
Φ P N
3 3 s: P
PJ cn
Φ 1— '
P- N £) e
3 P p: Φ
Φ ω n cn
3 ΓT - r
PJ ω Φ Q 3 ΓT
P Q. Φ r
P o
• P
P- P 3
ΓT ö 3 tn J P- IQ
ΓT Φ Φ
P- Φ cn
< H- 0
Φ PJ 3 3
3 er φ
Φ ω Φ
P- P
Φ
H
Rückschluß auf neurologisch relevante Eigenschaften der ersten und/oder des zweiten neurologisch relevanten Materials. "Neurologisch relevant" bedeutet im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung, daß das Material einen Einfluß auf das Zentralnervensystem von insbesondere Menschen nehmen kann, beispielsweise als neurotoxische Substanz oder als eine Substanz oder ein Material, das die Wirkung der neurotoxischen Substanz aufheben bzw. lindern kann. Der Begriff "Material" im Sinne der vorliegenden Erfindung bedeutet, daß entweder eine einzelne Substanz oder Zusammensetzungen aus mehreren Substanzen zum Einsatz kommen.
Gegenstand der Erfindung ist somit ein Verfahren zur Feststellung einer neurologisch relevanten Eigenschaft eines Materials, wobei man zumindest einen Nematoden einsetzt, der mit zumindest einem neurologisch relevanten Material (Agonist/Antagonist) und gegebenenfalls mit einem zweiten neurologisch relevanten Material entgegengesetzter Wirkungsrichtung (Antagonist/Agonist) versetzt wird und wobei eine Abweichung von oder im Falle des Einsatzes eines ersten und zweiten neurologisch relevanten Materials eine Beibehaltung bzw. Rückstellung eines Normalzustands eine Feststellung über die neurologische Relevanz zumindest eines der eingesetzten Materialien erlaubt.
Das erfindungsgemäße Verfahren kann insbesondere dazu dienen festzustellen, ob ein bestimmtes Material aller Wahrscheinlichkeit nach einen positiven Einfluß auf krankheitsbedingte Veränderungen des Zentralnervensystems von insbesondere Menschen nimmt. In diesem Fall wird im erfindungsgemäßen Verfahren regelmäßig eine neurotoxische Substanz als erstes neurologisch relevantes Material zum Einsatz kommen. Ein Nematode der vor, zugleich mit oder nach einer Exponierung mit einer neurotoxischen Substanz, wie beispielsweise 6-OHDA oder MPTP, einem zweiten neurologisch relevanten Material, deren neurologische Relevanz noch festzustellen ist, ausgesetzt wird, zeigt eine Veränderung, die eindeutige Rückschlüsse über die nachgefragte neurologische Relevanz erlauben. So zeigt der Nematode infolge des Einflusses einer neurotoxologischen Substanz eine φ TJ s: Di Hi ^^ ET Φ W H ~ P g φ TJ < > Hi
P- P Φ Φ Φ cn Φ P- P- 3 t-i 3 P P- tr Φ 3 Φ
3 O cn P cn . P t) iQ i rr rt 3 P P D cn
Φ N Φ rt < φ 3 Di O Φ Φ cn P l-ti Φ rt
P φ 3 g ISl P- o P P Φ O P P Φ 3 P P Q
3 rt Φ P 3 P 3 P TJ cn P- rt P ET cn Φ
3 rt 3 cn (Q N iQ > C P N X P cn
Φ cn P- P rt φ Φ P X — Ω rt o Φ P rt
P P Ω ΓT Φ P- P < er Φ • ET - Ei 3 P Φ
P rt ET O 3 P O N iQ Φ < cn
O N Φ Di N Hi P Φ Ei Φ Di P N iQ rt 3 Φ Φ Φ Φ Di P Φ P P Φ rt
O Di 3 3 H* 3 Hi Φ cn P Hl P i Φ
X Φ P 3 Φ Φ g 3 3 Φ Hi P -
P- P PJ P ω Φ cn P- P- rt Φ P c p: ω cn 3 φ 3 ΓT Ω P g N P- cn 3 Ω 3
Ω pl rt P- 3 IQ Er D. P r 3 cn rt X Φ
ET P- TJ Φ 3 P- O Φ rt rt φ φ Φ rr P
Φ Φ P P 3 3 cn 1 Φ Φ s: P 3 P - P
3 P 0 cn P rt M cn P P- cn - cn O φ N P iJd ^ Φ P- P- P φ P rt
~ Φ Ω Φ 0 P- iQ P P Di P- s: Ω p: O
P 3 tr iQ 1— ' Φ 3 P rt O ET CΛ X er D. rr Φ Φ iQ rt P cn - P cn er P rr P- cn P- cn 3 Φ cn Φ 3 P 3 Φ 3 cn rt φ P 3 3 φ 3 (Q Φ Ξ Di 3 P- iQ cn Ω
P rr P p: i ET P- P- P- P- tr
3 Φ N 3 CΛ Φ P > Q Ω Φ P rt 3 Di Ω Φ
N P- Di P- 3 3 P ET 3 P Φ ET
3 P Q P O P Φ N Di N 3 P M
ET P Φ P 3 3 • Φ P D H-
Φ er tn P- £ s: cn P P- - öd P 3 N M P- iQ
P Φ D. 3 P- P- (Q rt • Φ P- P P- Φ Φ
< ω P Φ P P Φ P- P N P 3 3 IQ 3
O rr P: D. Di TJ φ rt P "1 tn Di P- 3 M cn
P P- Ω ö P P- P 1 Φ φ 3 P P Ω
IQ X P 3 Φ p: P < LO P- cn Di 3 Hi t
Φ § Φ P P P- IQ P ^ » rt rt Φ tQ P- P
P rt 3 I-1 3 E3 rt Hl Di φ 0^ cn cn Ei Hl
P Φ P- Φ N P- cn 1 Φ rt Φ Pi rt
Hi ω X rt (Q P P Φ rt α 3 P- P- P
Φ - P: P P > Ei N ω P- P- 3 Φ 3 3
3 3 rt O: er Pi Φ > rt ET rt Φ P- Φ IQ
Φ Di 3 P- iTÖ P- er Φ K 3 3 cn cn P Φ < Φ Φ ω Ω §: D i Φ P
- P 3 Φ P P- P- ET Φ P Φ 3 3 g P
Ω - Φ Ω iQ 3 P- P 0 3 Φ P Ω
P ET > ET Ei Φ Ω 3 X P g rt ET
3 3 er TJ P P- 3 ET (Q 3 N P Φ Φ
Di M p: s: O 3 Hl • P P O 3 P P
P- 3 Φ T5 Q P- 3 Φ ET rt P P- I—1 iQ 3 P- P X α IQ P- Φ O rt P cn
Φ Ξ P- Ω P P 3 3 X O
IQ P- Ω ET P Φ Ei < Φ * P- Di cn Φ
Φ P ET P rt P- rt D O P H cn Φ P-
3 X 3 P- Ω P- 3 P Ω 3 P 3
P: P P IQ 0 ET P- Φ ET er 3 3 rr cn P Φ cn
Φ iQ cn P- Φ rt 3 Ei
P 3 3 P-
3
dem Normalzustand verändertes Verhalten oder eine veränderte Morphologie (wie z.B. Veränderung neuronaler Strukturen) nicht mehr zeigen, nachdem sie dem Material ausgesetzt wurden .
Analog zu der oben beschriebenen Erfindung ist dieses Verfahren auch dazu geeignet, Gene zu identifizieren, die an der Ausprägung der Wirkung neurotoxischer Substanzen beteiligt sind. Die Erfindung besteht somit in einem Verfahren, bei dem Nematoden zunächst einer Mutagenese unterworfen werden und die so genetisch veränderten Tiere oder deren Nachkommen dann mit einem neurologisch relevanten Material, wie oben beschrieben, versetzt werden. Diejenigen Tiere, bei denen sich keine oder im Vergleich zu nicht- mutagenisierten Tieren andersartige Anomalien in Verhalten oder Morphologie beobachten lassen, können Gene tragen, welche durch die Mutagenese verändert, inaktiviert oder zerstört wurden und deren Produkte nicht oder in anderer Weise als bei nicht-mutagenisierten Tieren wirken. Das beschriebene Verfahren dient somit dazu, Gene zu identifizieren, die die Ausprägung der Wirkung beispielsweise neurotoxischer Substanzen vermitteln oder unterdrücken.
Gegenstand der Erfindung ist somit weiterhin ein Verfahren zur Identifizierung von neurologisch relevanten Genen, bei dem man zunächst Nematoden gezielt einer Mutagenese unterwirft und im Anschluß daran die genetisch veränderten Tiere bzw. deren Nachkommen mit zumindest einem neurologisch relevanten Material, wie zuvor beschrieben, aussetzt. "Neurologisch relevantes Gen" bedeutet im Zusammenhang mit dem vorliegenden Aspekt der Erfindung, daß das Gen an der Ausprägung der Wirkung eines neurologisch relevanten Materials in irgendeiner Weise beteiligt ist. Diese neurologische Relevanz kann beispielsweise darin liegen, daß der mutierte Nematode gegenüber dem nicht-mutierten Nematoden eine andere Reaktion (Verhalten oder Morphologie) gegenüber neurotoxischen Substanzen zeigt. Die neurologische Relevanz eines Gens kann sich aber auch darin zeigen, daß nach einer Exponierung mit einem neurotoxischen Material eine Anomalie eintritt, die sich nicht dadurch revertieren oder unterdrücken läßt, daß man den mutierten Nematoden mit einem neurologisch relevanten Material mit entgegengesetzter Wirkung aussetzt.
Bei Nematoden der Gattung Caenorhabditis und insbesondere bei Caenorhabditis elegans wurde das Verhalten auf die Gabe von neurotoxischen Substanzen, die auf das zentrale Nervensystem wirken, untersucht. Bei diesem Fadenwurm beobachtet man sowohl in den Larvaistadien Ll, L2 , L3 , L4 (siehe "The Nematode Caenorhabditis elegans"; Wood et al . , Cold Spring Harbor Laboratory, 1988) als auch im Adult-Stadium nach einer Inkubation mit einer neurotoxischen Substanz einen ausgeprägten Phänotyp, der sich z.B. in Bewegungsstörungen, reduzierter Nachkommenschaft oder morphologischen Veränderungen äußert. Dies kann durch mikroskopische Beobachtung des Phänotyps, Bestimmung der Nachkommen pro Tier und Zeitraum oder auch die Detektion von Nervenzellen, die mit bestimmten Farbstoffen markiert wurden (z.B. GFP- Fusionsproteine) , und deren Färbung nach Einwirkung einer neurotoxischen Substanz einer Änderung unterliegt, ermittelt werden. Durch diese neurotoxischen Substanzen wird offensichtlich in die Reizweiterleitungen oder generell in die Funktion oder synaptischen Verknüpfung der Nerven des Fadenwurmes dermaßen eingegriffen, daß dies zu unkontrollierten Bewegungsabläufen führt, vergleichbar mit den Parkinson-Symptomen beim Menschen.
Es wurde nun festgestellt, daß bestimmte chemische Substanzen, welche phar akologische Wirkungen beim Menschen zeigen, auch bei Nematoden trotz deren Behandlung mit einer neurotoxischen Substanz entweder Verhaltensanomalien oder morphologische Veränderungen teilweise oder vollständig revertierten oder verhinderten.
Man kann die Nematoden in verschiedenster Weise den zu untersuchenden Materialien aussetzen. Beispielsweise ist es möglich, die Tiere in Petrischalen mit einem Agar zu kultivieren, der einerseits neurotoxische Substanzen, und andererseits die interessierenden Substanzen enthält. Man kann aber auch in einfacher Weise die Tiere in den zu untersuchenden Materialien baden. Diese Variante ist nicht nur besonders einfach, sondern ermöglicht auch eine leichtere Standardi-sierung der Konzentrationen und einen höheren Durchsatz in einem Screeningsystem. Für eine Untersuchung werden Populationen der Tiere herangezogen, die dann mit unterschiedlichen Lösungen der Materialien und in unterschiedlichen Konzentrationen inkubiert werden. Die Versuche der Erfinder haben nun gezeigt, daß Substanzen, die sowohl im Menschen als auch in nicht menschlichen Primaten neurotoxisch induzierten Parkinson revertieren können, dies auch in C. elegans vermögen. Dies zeigt, daß C. elegans als geeignetes Modellsystem für Parkinson eingesetzt werden kann. Die Beobachtung, nämlich die Revertierung oder Verhinderung der Verhaltensanomalie oder der morphologischen Veränderung nach Neurotoxin-Behandlung erlaubt einen Rückschluß auf eine mögliche Wirksamkeit und den Wirkort eines Materials, dessen Eignung als Pharmakon zu untersuchen ist.
Die Untersuchungen der Erfinder haben somit gezeigt, daß die Verwendung von C. elegans als Tiermodell zur Untersuchung von Materialien hinsichtlich ihrer Eignung als Pharmakon beim Menschen oder anderen Säugetieren zuverlässige Voraussagen gestattet, insbesondere wenn es sich um die Reaktionen auf neurotoxische Substanzen und die Revertierung oder Verhinderung dieser Reaktionen handelt. Es hat sich gezeigt, daß man in einfacher Weise durch die Zugabe neurotoxischer Substanzen zu in Flüssigkultur gehaltenen Nematoden die Verhaltensanomalien herbeiführen kann. Eine "normale" Verhaltensweise (= Wildtyp-Verhalten) kann beschrieben werden durch :
I) die Körper der Tiere bewegen sich schlängelnd in ihrer Längsrichtung;
II) schlagende Bewegungen der Nematoden in allen Entwicklungsstadien der Tiere Es konnte beobachtet werden, daß ohne Zugabe weiterer Substanzen regelmäßig mindestens 80% der Tiere normalerweise ein Verhalten gemäß I) und/oder II) zeigten.
Die Erfindung wird in den folgenden Beispielen erläutert.
Beispiele
Etwa 100 Testtiere des Fadenwurmes (C. elegans) mit definiertem Entwicklungsstadium (z.B. Ll-Larvenstadium) wurden pro Ansatz in Flüssigmedium bei konstanter Temperatur (z.B. 20°C) inkubiert. Um das Verhalten oder die Morphologie der Tiere näher zu untersuchen, wurden diese für wenige Stunden bis mehrere Tage der neurotoxischen Substanz MPTP in Konzentrationen zwischen 16-500μg/ml ausgesetzt (z.B. in Figur A nach drei Tagen) .
In einem Beobachtungszeitraum von wenigen Minuten bis mehreren Tagen (in Figuren A,B am Tag 6) wurde ein ausgeprägter Phänotyp beobachtet. Dieser kann sich in starken Bewegungs-Störungen, reduzierter Nachkommenschaft oder morphologischen Veränderungen äußern.
In einem zweiten Versuch wurden wiederum 100 Testtiere des Fadenwurmes wie zuvor beschrieben eingesetzt. Diese Tiere wurden unter anderem drei Tage mit L-DOPA vorinkubiert und es wurde wiederum am dritten Tag die neurotoxische Substanz MPTP zugegeben.
Erstaunlicherweise wird nach einer Inkubation (einige Stunden bis mehrere Tage; z.B. in Figur B nach drei Tagen Vorinkubation) mit L-DOPA der durch MPTP hervorgerufene Phänotyp nicht ausgeprägt.
Dies belegt also, daß Substanzen, die in anderen Tiermodellen Parkinson-Symptome revertieren, dies auch in C. elegans tun.
9596

Claims

Patentansprüche
1. Verfahren zur Feststellung einer neurologisch relevanten Eigenschaft eines Materials, wobei man zumindest einen Nematoden einsetzt, der mit zumindest einem neurologisch relevanten Material (Agonist/Antagonist ) und gegebenenfalls mit einem zweiten neurologisch relevanten Material entgegengesetzter Wirkungsrichtung
(Antagonist/Agonist) versetzt wird und wobei eine Abweichung von oder im Falle des Einsatzes eines ersten und zweiten neurologisch relevanten Materials eine Beibehaltung bzw. Rückstellung eines Normalzustands eine Feststellung über die neurologische Relevanz zumindest eines der eingesetzten Materialien erlaubt.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Nematode dem Stamm Nematoda angehört .
3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß der Nematode der Gattung Caenorhabditis angehört.
4. Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß das erste neurologisch relevante Material eine neurotoxische Substanz umfaßt.
5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß das zweite neurologisch relevante Material auf seine Eignung als Material zur Behandlung von Erkrankungen des Zentralnervensystems untersucht wird.
6. Verfahren nach Anspruch 4 oder 5, dadurch gekennzeichnet, daß die neurotoxische Substanz 6- Hydroxydopamin oder 1-Methyl-4-phenyl-1 , 2 , 3 , 6- tetrahydropyridin oder eine Vorstufe bzw. ein Derivat der vorstehend genannten Substanzen ist.
7. Verfahren zur Identifizierung eines neurologisch relevanten Gens, dadurch gekennzeichnet, daß Nematoden, deren Reaktion auf eine Exponierung mit zumindest einem neurologisch relevanten Material bekannt ist oder festgestellt wird, einer Mutagenese unterworfen werden, und daß die Nematoden im Anschluß daran zumindest einem neurologisch relevanten Material ausgesetzt werden und durch Feststellung einer Abweichung von der bekannten Reaktion die Identifizierung des neurologisch relevanten Gens erfolgt.
EP00987424A 1999-12-22 2000-12-20 Verfahren zur feststellung neurologisch relevanter eigenschaften eines materials Withdrawn EP1242817A2 (de)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19962263A DE19962263A1 (de) 1999-12-22 1999-12-22 Verfahren zur Feststellung neurologisch relevanter Eigenschaften eines Materials
DE19962263 1999-12-22
PCT/EP2000/013022 WO2001046690A2 (de) 1999-12-22 2000-12-20 Verfahren zur feststellung neurologisch relevanter eigenschaften eines materials

Publications (1)

Publication Number Publication Date
EP1242817A2 true EP1242817A2 (de) 2002-09-25

Family

ID=7933975

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EP00987424A Withdrawn EP1242817A2 (de) 1999-12-22 2000-12-20 Verfahren zur feststellung neurologisch relevanter eigenschaften eines materials

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20030108893A1 (de)
EP (1) EP1242817A2 (de)
AU (1) AU2367201A (de)
DE (1) DE19962263A1 (de)
WO (1) WO2001046690A2 (de)

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6329566B1 (en) * 1997-05-29 2001-12-11 The General Hospital Corporation Methods for the detection, treatment, and prevention of neurodegeneration
EP0996708A4 (de) * 1997-07-11 2004-09-08 Gen Hospital Corp Transgene nematodmodell für neurologische krankheiten mit triplettwiederholungen
US6787125B1 (en) * 1999-04-15 2004-09-07 Devgen Nv Compound screening method
GB9908677D0 (en) * 1999-04-15 1999-06-09 Devgen Nv Compound assay

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See references of WO0146690A2 *

Also Published As

Publication number Publication date
AU2367201A (en) 2001-07-03
US20030108893A1 (en) 2003-06-12
WO2001046690A3 (de) 2002-06-27
WO2001046690A2 (de) 2001-06-28
DE19962263A1 (de) 2001-07-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE69828392T2 (de) Verfahren zur Herstellung eines diagnostischen Standard-Gentranskriptionsmusters
DE3918082C2 (de)
DE3018900A1 (de) Verfahren zum testen der toxizitaet chemischer substanzen unter anwendung von nematoden
EP2279264B1 (de) Verfahren zur charakterisierung der biologischen aktivität von trichuris-eiern
DE60111595T2 (de) Verfahren zur Identifizierung von Verbindungen der Wesens als Therapeutika
EP1242817A2 (de) Verfahren zur feststellung neurologisch relevanter eigenschaften eines materials
ScHüz Pränatale Reifung und postnatale Veränderung im Cortex des Meerschweinchens: Mikroskopische Auswertung eines natürlichen Deprivationsexperimentes I: Pränatale Reifung [Prenatal Development and Postnatal Changes in the Guinea Pig Cortex: Microscopic Evaluation of a Natural Deprivation Experiment I: Prenatal Development]
DE69027025T2 (de) Testverfahren für und behandlung von autoimmunkrankheiten
EP2041682A1 (de) Verfahren zur bestimmung des verhaltens eines biologischen systems nach einer reversiblen störung
DE60225722T2 (de) Verfahren zur identifizierung eines neuen ziels zur verwendung bei der entwicklung von gegen tuberkulose wirksamen therapeutischen modalitäten und arzneistoffen
DE602004013319T2 (de) Hefemodell für die toxizität amyloidogener proteine
Puro Cholinergic transmission by embryonic retinal neurons in culture: inhibition by dopamine
DE19924929C2 (de) Neues Verfahren zur Untersuchung der Eignung eines Materials als Pharmakon
Ruffing et al. Assessment of the importance of neuropediatric diagnostics in the initial clarification of autism
DE102009038520B4 (de) Verfahren und Vorrichtung zur Zellprobendiagnostik
Schreiter et al. Random Sample Test in terms of performance and economics of various laying hen hybrids in Germany 2016–2017
EP1483588A2 (de) Screeningverfahren zum identifizieren protektiver substanzen für die behandlung neurodegenerativer und/oder ischämischer erkrankungen
DE69620783T2 (de) Systemen zum erzeugen und analysieren von stimulus-reaktion ausgangssignalmatrizen
Renner et al. Boundary Conditions for Environmental Effects
DE10128541A1 (de) Screening-Verfahren mit BNPI und DNPI
Wannemüller et al. 28 Neurotische, Belastungs-und somatoforme Störungen
DE4306338C1 (de) Verfahren zur Bestimmung der biologischen Funktion und/oder Charakterisierung von DNA und RNA Sequenzen von Organismen
Bauer Lithium treatment and reduction of suicide risk: evidence and clinical significance
Holsboer Zukunftsstrategien für die Entdeckung neuer Antidepressiva
Kenis Combining morphological, molecular, and biological characters to sort out taxonomical problems in parasitic Hymenoptera. The case of Eubazus spp.(Hymenoptera: Braconidae)

Legal Events

Date Code Title Description
PUAI Public reference made under article 153(3) epc to a published international application that has entered the european phase

Free format text: ORIGINAL CODE: 0009012

AK Designated contracting states

Kind code of ref document: A2

Designated state(s): AT BE CH CY DE DK ES FI FR GB GR IE IT LI LU MC NL PT SE TR

AX Request for extension of the european patent

Free format text: AL;LT;LV;MK;RO;SI

RAP1 Party data changed (applicant data changed or rights of an application transferred)

Owner name: AVENTIS PHARMA DEUTSCHLAND GMBH

17P Request for examination filed

Effective date: 20021227

RAP1 Party data changed (applicant data changed or rights of an application transferred)

Owner name: SANOFI-AVENTIS DEUTSCHLAND GMBH

17Q First examination report despatched

Effective date: 20071012

GRAP Despatch of communication of intention to grant a patent

Free format text: ORIGINAL CODE: EPIDOSNIGR1

GRAS Grant fee paid

Free format text: ORIGINAL CODE: EPIDOSNIGR3

STAA Information on the status of an ep patent application or granted ep patent

Free format text: STATUS: THE APPLICATION IS DEEMED TO BE WITHDRAWN

18D Application deemed to be withdrawn

Effective date: 20100406