PROCEDE D'OBTENTION D'UNE HUILE ENRICHIE EN ACIDES GRAS PROCESS FOR OBTAINING AN OIL ENRICHED IN FATTY ACIDS
HYDROXYOCTADECADIENOIQUES (HODE) OU DE SES ESTERS, A PARTIR D'UNHYDROXYOCTADECADIENOIQUES (HODE) OR ITS ESTERS, FROM A
MELANGE HUILEUX CONTENANT DE L'ACIDE LINOLEIQUE, OU SES ESTERSOIL MIXTURE CONTAINING LINOLEIC ACID, OR ITS ESTERS
La présente invention concerne un procédé de préparation d'acides hydroxyoctadécadiénoiques, plus particulièrement l'acide 9-hydroxy-10, 12-octadécadiénoique et l'acide 13- hydroxy-9, 11-octadécadiénoιque, et leur mélange, ainsi que leurs isomères tels que l'acide 9 (R/S) -hydroxy-lOE, 12Z- octadécadiénoique, éventuellement sous forme de leurs esters, plus particulièrement sous forme de leur ester éthylique.The present invention relates to a process for the preparation of hydroxyoctadecadienoic acids, more particularly 9-hydroxy-10, 12-octadecadienoic acid and 13-hydroxy-9, 11-octadecadienoic acid, and their mixture, as well as their isomers such as 9 (R / S) -hydroxy-10E, 12Z-octadecadienoic acid, optionally in the form of their esters, more particularly in the form of their ethyl ester.
Dans la description suivante, l'acide hydroxyoctadécadiénoique est appelé HODE.In the following description, hydroxyoctadecadienoic acid is called HODE.
L'invention concerne un procédé de préparation de l'HODE par oxydation contrôlée de l'acide linoleique et/ou de l'acide linolénique, puis réduction.The invention relates to a process for preparing HODE by controlled oxidation of linoleic acid and / or linolenic acid, then reduction.
L' invention concerne en outre un procédé de préparation de l'HODE à partir de triglycérides riches en acide linoleique et/ou en acide linolénique ou à partir d'acide linoleique et/ou d'acide linolénique sous forme d'acide gras libre ou sous forme d'ester ou de sel, par exemple sous forme d'ester éthylique.The invention further relates to a process for the preparation of HODE from triglycerides rich in linoleic acid and / or linolenic acid or from linoleic acid and / or linolenic acid in the form of free fatty acid or in the form of an ester or a salt, for example in the form of an ethyl ester.
L'invention concerne en outre un médicament, en particulier pour le traitement de l'obésité, contenant comme principe actif l'HODE et des supports acceptables pharmacologiquemen . L'invention concerne aussi un complément alimentaire contenant l'HODE, en particulier pour le traitement de 1 'obésité.The invention further relates to a medicament, in particular for the treatment of obesity, containing as active ingredient HODE and pharmacologically acceptable carriers. The invention also relates to a food supplement containing HODE, in particular for the treatment of obesity.
L'invention concerne de plus un produit cosmétique contenant l'HODE et des supports acceptables cosmétologiquement, plus particulièrement pour le traitement localisé de la surcharge pondérale et de ses conséquences sur l'aspect de la peau, telles que peau d'orange, capitons, culotte de cheval.
D'une manière générale, il est admis que l'augmentation de la fréquence de surcharge pondérale et de l'obésité dans les pays développés est due à une alimentation inadaptée, tant par l'apport calorique global trop important que par une part trop élevée de lipides dans cet apport calorique. Cette part très importante de lipides dans l'alimentation (estimée en moyenne à près de 50 % de l'apport énergétique) peut être réduite dans le cadre de régimes hypocaloriques dans lesquels les matières grasses sont fortement réduites. Cependant, les lipides ne peuvent pas être réduits à moins de 30 % de l'apport énergétique dans la mesure où non seulement ils jouent un rôle important dans la texture et la perception gustative des aliments, mais aussi qu'une quantité minimale est nécessaire dans l'alimentation, notamment pour la biosynthèse des acides gras essentiels et des hormones, et le renouvellement des phospholipides membranaires .The invention further relates to a cosmetic product containing HODE and cosmetologically acceptable supports, more particularly for the localized treatment of overweight and its consequences on the appearance of the skin, such as orange peel, dimples, horse breeches. In general, it is recognized that the increase in the frequency of overweight and obesity in developed countries is due to an inadequate diet, both by the overall caloric intake too high as by a too high share of fat in this calorie intake. This very important part of lipids in the diet (estimated on average at almost 50% of energy intake) can be reduced in the context of low-calorie diets in which fat is greatly reduced. However, lipids cannot be reduced to less than 30% of energy intake since they not only play an important role in the texture and taste perception of food, but also that a minimum amount is necessary in food, especially for the biosynthesis of essential fatty acids and hormones, and the renewal of membrane phospholipids.
Un axe essentiel de la recherche concernant le traitement de l'obésité depuis plusieurs décennies est donc la sélection de "bons lipides", c'est-à-dire, des lipides qui ne sont pas emmagasinés dans l'organisme, mais utilisés comme source d'énergie. Dans ce contexte, il a été établi que la nature des acides gras composant les lipides jouait un rôle fondamental dans leur métabolisme. A titre d'exemple, les acides gras à chaîne courte sont plus thermogènes que les acides gras à chaîne longue.An essential axis of research concerning the treatment of obesity for several decades is therefore the selection of "good lipids", that is to say, lipids which are not stored in the body, but used as a source. of energy. In this context, it has been established that the nature of the fatty acids composing lipids plays a fundamental role in their metabolism. For example, short chain fatty acids are more thermogenic than long chain fatty acids.
On a pu observer que la longueur de chaîne des acides gras a une influence directe sur la dépense énergétique et donc sur leur stockage dans l'organisme.It has been observed that the chain length of fatty acids has a direct influence on energy expenditure and therefore on their storage in the body.
Un des objectifs de l'invention était de trouver une molécule permettant la régulation de 1 'activité ^lipolytique de l'adipocyte c'est-à-dire, capable d'hydrolyser les triglycérides stockés dans les adipocytes en acides gras libres et en glycérols .
On sait que l'adrénaline et la caféine sont deux molécules connues pour leurs effets lipolytiques . Ce sont notamment αes molécules qui augmentent les taux d'adénosme mono phosphate cyclique (AMPc) , première étape de l'activation de la lipolyse. Un des buts de l'invention est donc, entre autres, de trouver une molécule qui active la lipolyse de manière plus importante que la caféine ou l'adrénaline grâce à une stimulation de la production adipocytaire d'AMPc.One of the objectives of the invention was to find a molecule allowing the regulation of the lipolytic activity of the adipocyte, that is to say, capable of hydrolyzing the triglycerides stored in adipocytes into free fatty acids and glycerols . We know that adrenaline and caffeine are two molecules known for their lipolytic effects. These molecules in particular increase the levels of adenosine cyclic mono phosphate (cAMP), the first step in activating lipolysis. One of the aims of the invention is therefore, inter alia, to find a molecule which activates lipolysis more significantly than caffeine or adrenaline by stimulating the adipocyte production of cAMP.
Un autre but de l'invention est de fournir une molécule lipolytique synthétisée à partir de produits se trouvant couramment dans la nature, de manière simple et efficace.Another object of the invention is to provide a lipolytic molecule synthesized from products commonly found in nature, in a simple and effective manner.
Les inventeurs ont découvert de manière surprenante que les dérivés de l'acide gras hydroxyoctadécadiénoique (HODE) présentaient des propriétés thermogéniques intéressantes sans entraîner de toxicité et notamment l'acide 9- hydroxyoctadécadiénoique sous forme d'acide libre ou sous forme d'esters ou de sels.The inventors have surprisingly discovered that the derivatives of hydroxyoctadecadienoic fatty acid (HODE) exhibit interesting thermogenic properties without causing toxicity and in particular 9-hydroxyoctadecadienoic acid in the form of free acid or in the form of esters or salts.
L'invention concerne donc un procédé d'obtention d'une huile enrichie en acide gras hydroxyoctadécadiénoique (HODE) et notamment d'acide 9-hydroxyoctadécadiénoιque (9-HODE), ou de ses esters ou de ses sels, à partir d'un mélange huileux contenant de l'acide linoleique et/ou de l'acide linolénique, ou leurs esters ou leurs sels, caractérisé en ce que l'on effectue une oxydation contrôlée de l'acide linoleique et/ou de l'acide linolénique, ou de leurs esters, en présence d'un catalyseur d'oxydation, l'oxydation étant arrêtée lorsque la teneur totale en HODE, ou de ses esters, est supérieure à au moins 5% et/ou la teneur en isomère acide 9-hydroxy-10, 12-octadecadιenoιque (9- HODE) , ou de ses esters, est supérieure à au moins 1,5 % et en ce que l'on réduit les hydroperoxydes formés lors»- de la réaction d'oxydation, par un réducteur.The invention therefore relates to a process for obtaining an oil enriched with hydroxyoctadecadienoic fatty acid (HODE) and in particular 9-hydroxyoctadecadienenoic acid (9-HODE), or its esters or its salts, from a oily mixture containing linoleic acid and / or linolenic acid, or their esters or their salts, characterized in that a controlled oxidation of linoleic acid and / or linolenic acid is carried out, or of their esters, in the presence of an oxidation catalyst, the oxidation being stopped when the total content of HODE, or of its esters, is greater than at least 5% and / or the content of 9-hydroxy- acid isomer 10, 12-octadecadιenoιque (9- HODE), or its esters, is greater than at least 1.5% and in that the hydroperoxides formed during "- of the oxidation reaction are reduced by a reducing agent.
Le mélange huileux de départ est une huile végétale renfermant plus de 40 % en poids d'acide linoleique et/ou d'acide linolénique sous forme de triglycérides, telle que
l'huile de mais, de bourrache, de carthame, de soja, d'onagre, de tournesol, de pépins de cassis, germes de ble, de chanvre, de pépins de courge, de lin.The starting oily mixture is a vegetable oil containing more than 40% by weight of linoleic acid and / or linolenic acid in the form of triglycerides, such as oil of corn, borage, safflower, soybeans, evening primrose, sunflower, blackcurrant seeds, wheat germ, hemp, pumpkin seeds, flaxseed.
Le mélange huileux de départ est un mélange huileux contenant plus de 40 % en poids d'acide linoleique et/ou d'acide linolénique, de préférence, contenant 75 % de linoleate d' ethyle.The starting oily mixture is an oily mixture containing more than 40% by weight of linoleic acid and / or linolenic acid, preferably containing 75% of ethyl linoleate.
La teneur finale dans l'huile enrichie en HODE totaux ou en 9-HODE est au moins 5%, respectivement 1,5 % en poids. De préférence, la teneur finale dans l'huile enrichie en HODE totaux ou en 9-HODE est respectivement comprise entre 10 et 12 % en poids et entre 2,2 et 2,5 % en poids.The final content in the oil enriched in total HODE or in 9-HODE is at least 5%, respectively 1.5% by weight. Preferably, the final content in the oil enriched in total HODE or in 9-HODE is respectively between 10 and 12% by weight and between 2.2 and 2.5% by weight.
Le catalyseur d'oxydation est un halogène de fer, de cuivre, de préférence FeCl3. Le réducteur est de préférence NaBH4.The oxidation catalyst is a halogen of iron, copper, preferably FeCl 3 . The reducing agent is preferably NaBH 4 .
L'invention concerne en outre l'huile enrichie en acide gras hydroxyoctadecadiénoique (HODE) ou ses esters ou ses sels, obtenue comme décrit ci-dessus.The invention further relates to the oil enriched in hydroxyoctadecadienoic fatty acid (HODE) or its esters or its salts, obtained as described above.
De plus l'invention concerne un médicament pour le traitement de l'obesite contenant comme principe actif l'acide gras 9-hydroxyoctadecadιenoιque (9-HODE) ou ses esters ou ses sels, acceptables pharmacologiquement, de préférence sous forme d'huile enrichie obtenue comme décrit ci-dessus.In addition, the invention relates to a medicament for the treatment of obesity containing as active principle the fatty acid 9-hydroxyoctadecadιenoιque (9-HODE) or its esters or its salts, acceptable pharmacologically, preferably in the form of enriched oil obtained as described above.
L'invention concerne en outre un complément alimentaire pour le traitement de l'obesite contenant comme principe actif l'acide gras 9-hydroxyoctadecadιenoιque (9-HODE) ou ses esters ou ses sels acceptables pharmacologiquement, de préférence sous forme d'huile enrichie obtenue comme décrit ci-dessus.The invention further relates to a food supplement for the treatment of obesity containing as active principle the fatty acid 9-hydroxyoctadecadιenoιque (9-HODE) or its esters or its pharmacologically acceptable salts, preferably in the form of enriched oil obtained as described above.
L'invention concerne de plus un produit cosmétique pour le traitement de l'obesite contenant comme principe actif l'acide gras 9-hydroxyoctadecadιenoιque (9-HODE) ou ses esters ou ses sels acceptables cosmetologiquemen , de préférence sous forme d'huile enrichie obtenue comme décrit ci-dessus.
Selon l'invention, on obtient l'acide hydroxyoctadécadiénoïque (HODE) par oxydation contrôlée de l'acide linoleique et/ou de l'acide linolénique. Ces acides gras sont présents dans de nombreuses huiles végétales. Par exemple, les huiles végétales suivantes renferment plus de 40 % d'acide linoleique sous forme de triglycérides : l'huile de bourrache, de carthame, de soja, d'onagre, de tournesol, de pépins de cassis, de germes de blé, de chanvre, de pépins de courge, de lin. Selon un premier mode de réalisation de l'invention, on peut obtenir l'HODE à partir de triglycérides riches en acide linoleique et/ou linolénique. Ce procédé est intéressant dans la mesure où il permet d'utiliser une huile végétale naturelle donc parfaitement adaptée à une utilisation par voie orale, mais présente l'inconvénient de limiter considérablement la teneur finale en isomère 9-HODE. En effet, le fait que l'acide linoleique et/ou linolénique soit sous forme de glycérides limite l'effet d'oxydation, qui est la première étape de la préparation du 9-HODE, mais surtout la teneur en acide linoleique de l'ordre de 40 à 50 % parmi l'ensemble des acides gras de l'huile naturelle limite la teneur finale en 9-HODE.The invention further relates to a cosmetic product for the treatment of obesity containing as active principle the fatty acid 9-hydroxyoctadecadιenoιque (9-HODE) or its esters or its cosmetically acceptable salts, preferably in the form of enriched oil obtained as described above. According to the invention, hydroxyoctadecadienoic acid (HODE) is obtained by controlled oxidation of linoleic acid and / or linolenic acid. These fatty acids are present in many vegetable oils. For example, the following vegetable oils contain more than 40% linoleic acid in the form of triglycerides: borage oil, safflower, soybeans, evening primrose, sunflower, blackcurrant seeds, wheat germ, hemp, pumpkin seeds, flax. According to a first embodiment of the invention, the HODE can be obtained from triglycerides rich in linoleic and / or linolenic acid. This process is advantageous insofar as it makes it possible to use a natural vegetable oil, therefore perfectly suitable for use by the oral route, but has the drawback of considerably limiting the final content of the 9-HODE isomer. Indeed, the fact that linoleic and / or linolenic acid is in the form of glycerides limits the oxidation effect, which is the first step in the preparation of 9-HODE, but above all the linoleic acid content of the in the order of 40 to 50% among all the fatty acids in natural oil limits the final content of 9-HODE.
La structure du produit de départ est un triglycéride d'acide linoleique ou un ester d'acide linoleique de formule générale suivante (I) :The structure of the starting product is a linoleic acid triglyceride or a linoleic acid ester of the following general formula (I):
dans laquelle X est un reste triglycéryle o.u un reste Etin which X is a triglyceryl residue or a residue Et
(éthyle) ou tout autre reste alkyle inférieur en 'C!-C6.(ethyl) or any other lower alkyl at ' C ! -C 6 .
Un tel composé possède une double liaison en position 9,10 et une double liaison en position 12,13. Par oxydation contrôlée, on obtient selon l'invention les composés de formules générales (II) et (III) suivantes :
Such a compound has a double bond in position 9.10 and a double bond in position 12.13. By controlled oxidation, the following compounds of general formulas (II) and (III) are obtained according to the invention:
qui est l'ester glycéryle ou alkyle de l'acide 9-hydroxy-10, 12- octadécadiénoique, ouwhich is the glyceryl or alkyl ester of 9-hydroxy-10, 12-octadecadienoic acid, or
qui est l'ester glycéryle ou alkyle de l'acide 13-hydroxy-9, 11- octadécadiénoique .which is the glyceryl or alkyl ester of 13-hydroxy-9, 11-octadecadienoic acid.
Par oxydation contrôlée de (I) on obtient donc un mélange d'isomères (II) et (III).By controlled oxidation of (I) a mixture of isomers (II) and (III) is therefore obtained.
L'acide linolénique existe sous deux formes : l'acide α- linolénique (ou acide (Z, Z, Z) 9, 12, 15-octadécatriénoιque) et l'acide γ-linolénique (ou acide (Z, Z, Z) 6, 9, 12- octadécatπénoique) . On effectue la reaction d'oxydation en présence d'un catalyseur d'oxygénation tel qu'un halogenure de fer, de cuivre, de préférence FeCl3. La reaction a une durée variable de 12 à 78 heures et a une température entre -20°C et 40°C, a pression atmosphérique et/ou sous pression réduite. On suit le degré d'oxydation par différents critères :Linolenic acid exists in two forms: α-linolenic acid (or acid (Z, Z, Z) 9, 12, 15-octadecatrienoic) and γ-linolenic acid (or acid (Z, Z, Z) 6, 9, 12- octadecatπenoic). The oxidation reaction is carried out in the presence of an oxygenation catalyst such as an iron or copper halide, preferably FeCl 3 . The reaction has a variable duration from 12 to 78 hours and at a temperature between -20 ° C and 40 ° C, at atmospheric pressure and / or under reduced pressure. The degree of oxidation is followed by different criteria:
- dosage des hydroxydes formes par chromatographie en phase gazeuse ; évolution de l'absorbance dans la, domaine de l'ultraviolet a 235 + 5 nm ; - variation de l'indice de refraction.- determination of the hydroxides formed by gas chromatography; absorbance evolution in the, ultraviolet domain at 235 + 5 nm; - variation of the refraction index.
Lorsque le pourcentage en poids de compose (II) (9-HODE) ou le pourcentage en poids du mélange de composes (II) et (III)
atteint de 1 a 20 %, on réduit le mélange, a savoir, on réduit les hydroperoxydes formes lors de l'oxydation. On utilise une solution ethanolique de NaBH4 ou une solution ethanolique de tout autre agent réducteur que l'on ajoute par parties au mélange reactionnel. On maintient la température du mélange entre 4 et 25°C. La réduction est terminée lorsque la température devient constante. On neutralise le milieu reactionnel a pH6-7 en ajoutant une solution d'acide, de préférence une solution d'un acide acceptable pharmacologiquement et/ou cosmetologiquement, par exemple de l'acide citrique.When the percentage by weight of compound (II) (9-HODE) or the percentage by weight of the mixture of compounds (II) and (III) reached from 1 to 20%, the mixture is reduced, namely, the hydroperoxides formed during the oxidation are reduced. An ethanolic solution of NaBH 4 or an ethanolic solution of any other reducing agent is used which is added in parts to the reaction mixture. The temperature of the mixture is maintained between 4 and 25 ° C. The reduction is complete when the temperature becomes constant. The reaction medium is neutralized to pH6-7 by adding an acid solution, preferably a solution of an acid which is pharmacologically and / or cosmetologically acceptable, for example citric acid.
On extrait les composes (II) et (III) par de l'hexane ou tout autre solvant organique pouvant les solubiliser. On lave la phase organique avec de l'eau jusqu'à neutralité. On sèche ensuite la phase organique sur du sulfate de sodium ou du sulfate de magnésium anhydre. Puis on évapore le filtrat sous vide.The compounds (II) and (III) are extracted with hexane or any other organic solvent capable of dissolving them. The organic phase is washed with water until neutral. The organic phase is then dried over sodium sulfate or anhydrous magnesium sulfate. Then the filtrate is evaporated under vacuum.
Le produit obtenu est un liquide huileux jaune clair possédant une odeur légèrement aromatique. Il possède une teneur totale de composes (II) et (III) (déterminée par chromatographie en phase gazeuse) supérieure a 5% en poids et une teneur en compose (II) [acide 9 (R/S) hydroxy-lOE, 12Z-octadecadιenoιque ou ester de l'acide 9 (R/S) hydroxy-lOE, 12Z-octadecadιenoιque] supérieure a 1,5 % en poids. Selon un deuxième mode de réalisation de l'invention qui est préfère, le produit de départ est un mélange huileux contenant 75 % en poids de lmoleate d'ethyle.The product obtained is a light yellow oily liquid with a slightly aromatic odor. It has a total content of compounds (II) and (III) (determined by gas chromatography) greater than 5% by weight and a content of compound (II) [acid 9 (R / S) hydroxy-lOE, 12Z- octadecadιenoιque or ester of 9 (R / S) hydroxy-10E, 12Z-octadecadιenoιque acid] greater than 1.5% by weight. According to a second preferred embodiment of the invention, the starting product is an oily mixture containing 75% by weight of ethyl moleate.
Le principe est le même que celui décrit pour le premier mode de réalisation de l'invention. On effectue une oxydation sélective du lmoleate d'ethyle puis une réduction des hydroperoxydes formes et une purification par lavages successifs. On obtient une huile jaune clair, d'odeur spécifique, contenant environ 2,5 % en poids d'acide 9-hydroxy- 10E, 12Z-octadecadιenoιque (sous forme d'ester éthylique) et
12 % d'un mélange des composes (II) et (III) (sous forme d'esters ethyliques) . La fonction hydroxyle peut être en position 9 ou 13 et les doubles liaisons sous forme conjuguée en 10,12 (trans, trans et cis, trans) et en position 9,11 (trans, trans et cis, trans) .The principle is the same as that described for the first embodiment of the invention. Selective oxidation of the ethyl loleate is carried out, followed by reduction of the hydroperoxides formed and purification by successive washings. A light yellow oil, of specific odor, is obtained containing approximately 2.5% by weight of 9-hydroxy-10E, 12Z-octadecadιenoιque acid (in the form of ethyl ester) and 12% of a mixture of the compounds (II) and (III) (in the form of ethyl esters). The hydroxyl function can be in position 9 or 13 and the double bonds in conjugated form in 10.12 (trans, trans and cis, trans) and in position 9.11 (trans, trans and cis, trans).
Exemple de préparation d'une huile enrichie en HODE à partir d'un mélange contenant 75 % de lmoleate d'ethyle.Example of the preparation of an oil enriched in HODE from a mixture containing 75% of lmoleate of ethyl.
1. Oxydation1. Oxidation
Dans un reacteur thermostate on introduit 500 g de lmoleate d'ethyle a 75 %. On ajoute 0,500 g de FeCl3 anhydre (catalyseur d'oxydation), on porte le mélange a une température voisine de 25-27°C et on le maintient sous agitation régulière.500 g of ethyl lmoleate at 75% are introduced into a thermostatic reactor. 0.500 g of anhydrous FeCl 3 (oxidation catalyst) is added, the mixture is brought to a temperature in the region of 25-27 ° C and kept under regular stirring.
On fait buller de l'oxygène (qualité technique) dans le milieu reactionnel a l'aide d'un filtre en acier inoxydable ou en bronze, d'une porosité de 2 a 4 μm (du genre filtre HPLC ou filtre a particules pour gaz) . On maintient ce bullage fin à un débit de 1 litre/m pendant 48 a 72 heures.Oxygen is bubbled (technical quality) in the reaction medium using a stainless steel or bronze filter, with a porosity of 2 to 4 μm (of the HPLC filter type or particle filter for gases ). This fine bubbling is maintained at a flow rate of 1 liter / m for 48 to 72 hours.
On contrôle le taux d'oxydation soit :The oxidation rate is controlled either:
- par mesure de l'indice de refraction a 20°C sur le produit brut du milieu reactionnel ;- By measuring the refractive index at 20 ° C on the crude product of the reaction medium;
- par mesure de l'absorbance en UV a 234 nm (détection des dienes conjugues) ; par dosage en chromatographie phase vapeur après réduction de l'échantillon prélevé dans le reacteur. On arrête l'oxydation lorsque la teneur en 9-HODE et/ou HODE totaux sont respectivement de 2 , 2 % a 2 , 5 % et de 10 % a 12 %.- by measuring the UV absorbance at 234 nm (detection of conjugated dienes); by determination in vapor phase chromatography after reduction of the sample taken from the reactor. The oxidation is stopped when the content of total 9-HODE and / or HODE is respectively 2, 2% to 2, 5% and 10% to 12%.
2. Réduction2. Reduction
On rajoute dans le mélange hydroperoxyde 0,16 g d ' antioxydant du type Coviox T70. On préparé une solution ethanolique de NaBH4 a 2% (poids/volume) et on la refroidit a0.16 g of an antioxidant of the Coviox T70 type is added to the hydroperoxide mixture. An ethanolic 2% NaBH 4 solution (weight / volume) is prepared and cooled to
4°C environ. On fait couler cette solution réductrice lentement et en plusieurs tractions sur le mélange n\ droperoxyde coût en
44863About 4 ° C. This reducing solution is poured slowly and in several tractions over the n \ droperoxide mixture cost in 44863
maintenant la température du milieu reactionnel inférieure à 25°C (environ 20°C) .now the temperature of the reaction medium below 25 ° C (about 20 ° C).
La phase de réduction est terminée lorsque la température est constante lorsque l'on maintient l'agitation à température ambiante (1 heure environ) .The reduction phase is completed when the temperature is constant when the stirring is maintained at room temperature (approximately 1 hour).
La réaction de réduction libère de l'hydrogène.The reduction reaction releases hydrogen.
3. Neutralisation à pH 6-73. Neutralization at pH 6-7
On ajoute au mélange reactionnel, lentement sous agitation, 100 ml d'une solution d'acide citrique à 25 % dans l'éthanol. Il peut se produire une libération d'hydrogène et parfois une précipitation de citrate de sodium.100 ml of a 25% solution of citric acid in ethanol are added to the reaction mixture, slowly with stirring. Release of hydrogen and sometimes precipitation of sodium citrate may occur.
4. Extraction, décantation, lavage et séchage4. Extraction, decantation, washing and drying
On ajoute au milieu reactionnel, sous agitation rapide, 500 ml de n-hexane puis 500 ml d'eau et on laisse décanter. Après séparation des deux phases, on récupère la phase organique.500 ml of n-hexane and then 500 ml of water are added to the reaction medium, with rapid stirring, and the mixture is left to settle. After separation of the two phases, the organic phase is recovered.
On lave cette phase organique jusqu'à neutralité des eaux de lavage, puis on sèche par filtration sur environ 140 g de sulfate de sodium anhydre. 5. EvaporationThis organic phase is washed until the washing waters are neutral, then it is dried by filtration over approximately 140 g of anhydrous sodium sulfate. 5. Evaporation
On ajoute à la phase organique 0,16 g d' antioxydant (Coviox T70) et on évapore sous vide le n-hexane a une température voisine de 50°C a 60°C.0.16 g of antioxidant (Coviox T70) is added to the organic phase and the n-hexane is evaporated under vacuum at a temperature in the region of 50 ° C to 60 ° C.
6. Conditionnement et stockage On conserve l'huile obtenue dans un récipient en verre brun ou en fût sous azote et à une température inférieure à 10°C.6. Packaging and storage The oil obtained is stored in a brown glass container or in a barrel under nitrogen and at a temperature below 10 ° C.
Propriétés pharmacologiquesPharmacological properties
Le but de l'invention est de trouver une molécule ayant une activité sur la lipolyse, c'est-à-dire, capable de favoriser l'hydrolyse des triglycérides stockes dans les èdipocytes, les acides gras libres ainsi libères étant ensuite metabolises.The object of the invention is to find a molecule having an activity on lipolysis, that is to say, capable of promoting the hydrolysis of the triglycerides stored in the edipocytes, the free fatty acids thus released being then metabolized.
Etude pharmacologique sur les adipocytes humainsPharmacological study on human adipocytes
Cette étude a pour but d'étudier l'effet du 9-HODE sur la production d'AMPc (adenos e monophosphate cyclique) qui est un
activateur de la lipolyse, dans les adipocytes humains. On étudie l'effet du 9-HODE par rapport a celui de l'adrénaline et de la caféine qui sont deux molécules connues pour leurs effets stimulants de la lipolyse. On a trouve qu'une concentration de ÎO"4 M de 9-HODE entraîne une augmentation de l'AMPc équivalente à celle de 10"3 M de caféine et supérieure à celle obtenue, quelle que soit la concentration, à celle de l'adrénaline.The purpose of this study is to study the effect of 9-HODE on the production of cAMP (cyclic adenos e monophosphate) which is a activator of lipolysis, in human adipocytes. We study the effect of 9-HODE compared to that of adrenaline and caffeine which are two molecules known for their stimulating effects of lipolysis. It was found that a concentration of IO "4 M 9-HODE causes an increase of cAMP equivalent to that of 10" 3 M caffeine and higher than that obtained, regardless of the concentration, to that of the adrenaline.
A une concentration de 10"3 M de 9-HODE, la concentration d'AMPc est 10 fois supérieure à celle obtenue avec la caféine (7,940 fentomoles d' AMPc/million d'adipocytes contre 799).At a concentration of 10 -3 M of 9-HODE, the concentration of cAMP is 10 times greater than that obtained with caffeine (7,940 fentomoles of cAMP / million adipocytes against 799).
Ces résultats permettent de conclure que le 9-HODE est, in vitro, un puissant activateur de la lipolyse grâce à une stimulation de la production adipocytaire d'AMPc supérieure à celle des molécules de caféine et d'adrénaline. Etudes chez le ratThese results allow us to conclude that 9-HODE is, in vitro, a potent activator of lipolysis thanks to a stimulation of the adipocyte production of cAMP greater than that of the caffeine and adrenaline molecules. Studies in rats
On réalise l'étude sur douze rats qui sont d'abord soumis à une restriction alimentaire (simulation d'un régime) pendant deux semaines, puis qui reçoivent une alimentation normale (reprise de poids) associée ou non à l'administration d'une huile de tournesol traitée selon le procédé de la présente invention et contenant 2% en poids de 9-HODE. On utilise un groupe témoin qui reçoit l'huile de tournesol dépourvue de 9- HODE. Après onze jours de traitement, on mesure la masse grasse dans les deux groupes.The study is carried out on twelve rats which are first subjected to a food restriction (simulation of a diet) for two weeks, then who receive a normal diet (weight gain) associated or not with the administration of a sunflower oil treated according to the process of the present invention and containing 2% by weight of 9-HODE. A control group is used which receives sunflower oil devoid of 9-HODE. After eleven days of treatment, the fat mass is measured in the two groups.
Les résultats obtenus montrent dans le groupe recevant l'huile de tournesol contenant 2% en poids de 9-HODE que la masse grasse est significativement (p<0,001) moins importante deThe results obtained show in the group receiving sunflower oil containing 2% by weight of 9-HODE that the fat mass is significantly (p <0.001) less
25 % à celle mesurée dans le groupe placebo (21,8 g par rapport à 29,5 g dans le groupe témoin) . h 25% to that measured in the placebo group (21.8 g compared to 29.5 g in the control group). h
L'administration par voie orale d'huile de tournesol contenant 2% en poids de 9-HODE permet donc de diminuer de manière statistiquement significative la masse de graisse des rats traites par cette huile végétale.
Etude de pénétration cutanéeThe oral administration of sunflower oil containing 2% by weight of 9-HODE therefore makes it possible to statistically significantly reduce the fat mass of rats treated with this vegetable oil. Skin penetration study
On réalise une étude de pénétration cutanée in vitro sur de la peau humaine avec des cellules de FRANZ Ces cellules comportent une surface de peau humaine de 1,76 cm2 sur laquelle on dépose 800 μg de 9-HODE. Apres 6 heures de contact, on effectue un dosage du 9-HODE par chromatographie en phase gazeuse a la surface de l'échantillon de peau humaine, dans l'epiderme, dans le derme et dans la phase réceptrice.A skin penetration study is carried out in vitro on human skin with FRANZ cells. These cells comprise a surface of human skin of 1.76 cm 2 on which 800 μg of 9-HODE are deposited. After 6 hours of contact, a 9-HODE assay is carried out by gas chromatography on the surface of the sample of human skin, in the epidermis, in the dermis and in the receptor phase.
La répartition du 9-HODE est la suivante : - surface de la peau : 33 %The distribution of 9-HODE is as follows: - skin surface: 33%
- epiderme : 11 %- epidermis: 11%
- derme : 32 %- dermis: 32%
- phase réceptrice : 24 %- receiving phase: 24%
Le 9-HODE présente donc un pouvoir de pénétration cutanée important lui permettant d'agir directement au niveau des adipocytes .9-HODE therefore has significant skin penetrating power allowing it to act directly at the level of adipocytes.
Etudes cliniques du 9-HODE9-HODE clinical studies
Etude clinique évaluant l'efficacité d'un gel cosmétique contenant 0,5 % de 9-HODE On réalise une étude clinique chez vingt femmes présentant un excès de tissus adipeux au niveau des cuisses ("culotte de cheval"). Les volontaires ont applique pendant un mois, deux fois par jour, un gel contenant 0,5 % de 9-HODE sur chaque cuisse. Le critère d'efficacité est la mesure de la circonférence de la cuissse a deux niveaux.Clinical study evaluating the effectiveness of a cosmetic gel containing 0.5% of 9-HODE A clinical study is carried out in twenty women with excess fatty tissue in the thighs ("horse breeches"). The volunteers applied for a month, twice a day, a gel containing 0.5% of 9-HODE on each thigh. The efficiency criterion is the measurement of the thigh circumference on two levels.
Les résultats obtenus démontrent l'efficacité du produit puisque l'on observe une réduction de la circonférence de 6 mm au niveau supérieur et de 5,4 mm au niveau inférieur de la cuisse, ces deux réductions étant statistiquement très significatives.The results obtained demonstrate the effectiveness of the product since there is a reduction in the circumference of 6 mm at the upper level and 5.4 mm at the lower level of the thigh, these two reductions being statistically very significant.
Etude clinique évaluant l'efficacité d'un gel cosmétique contenant 1,5 % de 9-HODEClinical study evaluating the effectiveness of a cosmetic gel containing 1.5% of 9-HODE
Une autre étude a ete réalisée sur 21 femmes présentant une surcharge graisseuse au niveau des cuisses. Le produit étudie
était une solution cosmétique contenant 1,5 % d'HODE et a permis de montrer une réduction statistiquement significative du périmètre des cuisses de 7 mm des le 12è e our d'application et de 10 mm après 24 jours d'application. D'autre part, 80 % des femmes ont observe une amélioration nette de la fermeté de la peau et une réduction de l'aspect "peau d'orange" et des capitons .Another study was carried out on 21 women presenting a fatty overload on the level of the thighs. The product studies was a cosmetic solution containing 1.5% HODE and showed a statistically significant reduction in the thigh perimeter of 7 mm from the 12 th day of application and 10 mm after 24 days of application. On the other hand, 80% of women observed a marked improvement in the firmness of the skin and a reduction in the "orange peel" and dimpling appearance.
Etude clinique évaluant l'augmentation de la thermogénèse après prise orale unique de 9-HODE On réalise une étude sur dix volontaires sains qui ont absorbe de façon aléatoire les produits suivants :Clinical study evaluating the increase in thermogenesis after a single oral intake of 9-HODE We carried out a study on ten healthy volunteers who randomly absorbed the following products:
- huile de tournesol : 20 g- sunflower oil: 20 g
- huile de tournesol : 20 g contenant 2% de 9-HODE Chaque sujet reçoit a une semaine d'intervalle chacun des produits selon un ordre aléatoire (protocole croise ou "cross over") . Les volontaires passent deux heures dans la chambre calorimétrique (dépense énergétique basale), puis absorbent l'un des deux produits au cours d'un repas standardisé de 800 kcal. Et restent 6 heures dans la chambre calorimétrique (dépense énergétique après traitement) .- sunflower oil: 20 g containing 2% 9-HODE Each subject receives one week apart each of the products in a random order (cross or "cross over" protocol). The volunteers spend two hours in the calorimetric room (basal energy expenditure), then absorb one of the two products during a standardized meal of 800 kcal. And stay 6 hours in the calorimetric room (energy expenditure after treatment).
La dépense énergétique (k oule/mmute) moyenne avec les deux produits est • The average energy expenditure (k oule / mmute) with the two products is •
Dépense énergétique Dépense énergétique Basale après traitementEnergy expenditure Basal energy expenditure after treatment
Huile de tournesol 5,76 6,35Sunflower oil 5.76 6.35
Huile de tournesolSunflower oil
+2% de 9-HODE 5,68 6,82+ 2% of 9-HODE 5.68 6.82
La différence de dépense énergétique après traitement est statistiquement significative (p<0,01). Cette augmentation de la thermogénèse de près de 8% est particulièrement intéressante pour le traitement de l'obesite.
4863The difference in energy expenditure after treatment is statistically significant (p <0.01). This increase in thermogenesis of almost 8% is particularly interesting for the treatment of obesity. 4863
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L'invention permet donc de traiter l'obesite par voie orale et la surcharge pondérale localisée par voie topique. Par voie orale, le 9-HODE peut être administre sous forme d'acide ou sous forme de triglycéride. Par voie topique, le 9-HODE est administre de préférence sous forme d'acide libre.The invention therefore makes it possible to treat obesity by the oral route and localized overweight by the topical route. Orally, 9-HODE can be administered as an acid or as a triglyceride. Topically, 9-HODE is preferably administered in the form of free acid.
On peut administrer le 9-HODE comme supplément alimentaire sous forme de gélules, de comprimes, de solution buvable, de pastilles, de pâtes a mâcher etc. et/ou dans les aliments. On peut utiliser le 9-HODE pur ou dilue dans des crèmes, gels, bâtons, pommades, etc.9-HODE can be administered as a dietary supplement in the form of capsules, tablets, oral solution, lozenges, chews, etc. and / or in food. You can use 9-HODE pure or diluted in creams, gels, sticks, ointments, etc.
Applique sur des zones de surcharge pondérale, il permet d'avoir une action directe sur les adipocytes. On peut administrer le 9-HODE comme médicament par voie systemique ou topique pour le traitement de l'obesite. Les doses d'administration sont, par exemple, par voie orale, de 50 a 5 000 mg/ our et par voie locale, de 0,1 a 100 %.
Applied to overweight areas, it has a direct action on fat cells. 9-HODE can be administered as a systemic or topical medication for the treatment of obesity. The administration doses are, for example, orally, 50 to 5,000 mg / day and locally, 0.1 to 100%.