KOSMETISCHES ODER PHARMAZEUTISCHES MITTEL COSMETIC OR PHARMACEUTICAL AGENT
Die Erfindung betrifft ein kosmetisches oder pharmazeutisches Mittel/ das ein Flavolignan und Tocopherol oder einen Ester davon enthält.The invention relates to a cosmetic or pharmaceutical agent / which contains a flavolignan and tocopherol or an ester thereof.
Oxidative und reduktive Vorgänge im cellulären Bereich spielen eine zentrale Rolle im Metabolismus. Dabei ent¬ stehen hochreaktive/ kurzlebige StoffWechselzwischenprodukte/ nämlich freie Radikale. Sauerstoff adikale/ wie das Super- oxidradikalanion/ das Hydroperoxidradikal und das Hydroxyl- radikal/ spielen dabei eine besondere Rolle.Oxidative and reductive processes in the cellular area play a central role in metabolism. This results in highly reactive / short-lived metabolic intermediates / namely free radicals. Oxygen adicals / such as the super oxide radical anion / the hydroperoxide radical and the hydroxyl radical / play a special role here.
Das Auftreten von freien Radikalen kann Cytotoxizitä Ver¬ änderung von Enzymen/ Angriff auf Nukleinsäuren/ Lipid- peroxidation und Verlust der Integrität zellulärer Membranen zur Folge haben. Damit verbunden sind beispielsweise be- stimmte Krankheiten und rapide Alterung.The occurrence of free radicals can result in cytotoxicity changes in enzymes / attack on nucleic acids / lipid peroxidation and loss of the integrity of cellular membranes. For example, certain illnesses and rapid aging are associated with this.
Freie Radikale können im allgemeinen durch eine Reihe von Reaktionen oder Substanzen aus der Umwelt in der Zelle erzeugt werden. Eine Möglichkeit hierfür ist eine Photolyse durch UV-Bestrahlung. Es gilt als gesichert/ daß UV-Strahlung/ die in die oberen Zellschichten eindringen kann/ an der Ent¬ stehung von malignen Hautkarzinomen und der Alterung der Haut beteiligt sind.Free radicals can generally be generated in the cell by a variety of environmental reactions or substances. One possibility for this is photolysis by UV radiation. It is considered certain that UV radiation, which can penetrate into the upper cell layers, is involved in the development of malignant skin carcinomas and the aging of the skin.
Um die Bildung von freien Radikalen zu unterdrücken/ bedient man sich reduzierender Radikalfänger (Antioxidantien) zu
denen beispielsweise Vitamin C und E und Silymarin zählen. So beschreibt beispielsweise die EP-A-180 505 ein kosmeti¬ sches Mittel in zwei Teilen zur Verzögerung des Alterns der Haut. Der eine, hydrophile Teil umfaßt einen Wirkstoff, der unter anderem Silymarin sein kann. Der andere, hydrophobe Teil des Mittels umfaßt beispielsweise unverseifbare Soja¬ bestandteile, unverseifbare Avokadobestandteile, Nußöl etc.In order to suppress the formation of free radicals, reducing radical scavengers (antioxidants) are used which include, for example, vitamins C and E and silymarin. For example, EP-A-180 505 describes a cosmetic agent in two parts for delaying the aging of the skin. The one, hydrophilic part comprises an active ingredient, which can be, inter alia, silymarin. The other, hydrophobic part of the composition comprises, for example, unsaponifiable soy constituents, unsaponifiable avocado constituents, nut oil, etc.
Die FR-A-2 597 337 beschreibt ebenfalls ein kosmetisches Mittel zur Verzögerung des Alterns der Haut. Auch diesesFR-A-2 597 337 also describes a cosmetic agent for delaying the aging of the skin. This too
Mittel liegt in zwei Teilen vor, wobei der eine Teil zahl¬ reiche Bestandteile, darunter Silymarin enthält. Der öllös- liche Teil enthält ebenfalls zahlreiche Bestandteile, wobei auch natürlich Tocopherole genannt sind. Aufgrund des in zwei Teilen konfektionierten Mittels soll mehr Wirkstoff in der öligen und wäßrigen Phase gelöst werden können.Agent is in two parts, one part containing numerous components, including silymarin. The oil-soluble part also contains numerous constituents, of course tocopherols are also mentioned. Because the agent is made up in two parts, more of the active ingredient should be able to be dissolved in the oily and aqueous phase.
überraschenderweise wurde nun gefunden, daß eine Kombination aus einer Flavolignanverbindung und Tocopherol oder einem Ester davon in synergistischer Weise als Radikalfänger wirken und daher in einem kosmetischen oder pharmazeuti¬ schen Mittel zur Anwendung kommen können, das insbesondere zur Verhinderung des Alterns der Haut brauchbar ist.Surprisingly, it has now been found that a combination of a flavolignan compound and tocopherol or an ester thereof act synergistically as radical scavengers and can therefore be used in a cosmetic or pharmaceutical agent which is particularly useful for preventing aging of the skin.
Gegenstand der Erfindung ist daher ein kosmetisches oder pharmazeutisches Mittel, das mindestens ein Flavolignan und Tocopherol und/oder einen Ester davon enthält.The invention therefore relates to a cosmetic or pharmaceutical composition which contains at least one flavolignan and tocopherol and / or an ester thereof.
Bei den in dem erfindungsgemäßen Mittel zur Anwendung kom¬ menden Flavolignanen handelt es sich insbesondere um Silymarin oder Derivate davon. Silymarin wird aus der Silberdistel Silibu marianum extrahiert. Es ist ein Ge¬ misch aus mehreren Flavolignanen, nämlich Silibin, Silibinin, Silidianin und Silichristin. Herstellung und Gewinnung des Silymarinextraktes und der Einzelverbindungen sind bei¬ spielsweise beschrieben in DE-A-19 23 082, DE-A-29 14 330, DE-A-35 37 656 und Arzneim.-Forsch. 24, Nr.4, 466-471 (1974).The flavolignans used in the agent according to the invention are, in particular, silymarin or derivatives thereof. Silymarin is extracted from the silver thistle Silibu marianum. It is a mixture of several flavolignans, namely silibin, silibinin, silidianin and silichristin. The preparation and recovery of the silymarin extract and the individual compounds are described, for example, in DE-A-19 23 082, DE-A-29 14 330, DE-A-35 37 656 and drug research. 24, No. 4, 466-471 (1974).
Brauchbare Silymarinderivate sind insbesondere Salze und
Additionsverbindungen (Komplexverbindungen) des Silymarins, wie die Salze des Silymarins mit Monoaminopolyhydroxyalko- holen, z.B. 1-Methylaminoglucose, beschrieben in DE-A- 23 02 593; Silibinin-Hemisuccinat und Silymarin-Cyclodextri Komplexe, wie beschrieben in EP-A-90 118 964. Auf den Inhalt der genannten Anmeldungen wird in vollem Umfang Bezug ge¬ nommen.Useful silymarin derivatives are in particular salts and Addition compounds (complex compounds) of silymarin, such as the salts of silymarin with monoaminopolyhydroxy alcohols, for example 1-methylaminoglucose, described in DE-A-23 02 593; Silibinin hemisuccinate and silymarin-cyclodextri complexes, as described in EP-A-90 118 964. Reference is made in full to the content of the applications mentioned.
In den erfindungsgemäßen Mitteln können sowohl das Silymarin gemisch als auch eine oder mehrere der Einzelverbindungen zu Anwendung kommen. Die Flavolignane, und insbesondere Silymarin können auch in Form von Additionssalzen einge¬ setzt werden.Both the silymarin mixture and one or more of the individual compounds can be used in the agents according to the invention. The flavolignans, and in particular silymarin, can also be used in the form of addition salts.
Die erfindungsgemäß zur Anwendung kommenden Tocopherole sind Verbindungen mit Vitamin E-Charakter. Es handelt sich dabei um α-, ß- γ- und δ-Tocopherol, wobei α-Tocopherol be¬ vorzugt ist. Besonders bevorzugt ist die Anwendung der Ester von Tocopherol mit einer aliphatischen Carbonsäure mi 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, insbesondere Essigsäure.The tocopherols used according to the invention are compounds with a vitamin E character. These are α-, β-γ- and δ-tocopherol, with α-tocopherol being preferred. The use of the esters of tocopherol with an aliphatic carboxylic acid having 1 to 4 carbon atoms, in particular acetic acid, is particularly preferred.
Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform enthalten die er¬ findungsgemäßen Mittel auch ein Proteinhydrolysat. Das Molekulargewicht des Proteinhydrolysats liegt im allgemeinen im Bereich von 300 - 50 000, insbesondere 500 - 25 000 Dalto Die Proteinhydrolysate könnnen von pflanzlichem oder tieri¬ schem Protein stammen, z.B. von Weizen- oder Sojaprotein, Kollagen etc. Geeignete Proteinhydrolysate sind im Handel erhältlich, z.B. Gluadin AGP (Fa.Henkel) , erhalten durch enzymatische Hydrolyse von Weizenprotein, pH-Wert 4,5 - 5,0 (10%ige Lösung), Molekulargewicht 2000 - 25 000, oder Nutrilan L (Fa.Henkel) , erhalten durch saure Hydrolyse von Kollagen, pH-Wert 5,5 - 6,5, Molekulargewicht 500 - 2000.According to a preferred embodiment, the agents according to the invention also contain a protein hydrolyzate. The molecular weight of the protein hydrolyzate is generally in the range of 300-50,000, in particular 500-25,000, Dalto. The protein hydrolyzates can originate from vegetable or animal protein, e.g. of wheat or soy protein, collagen, etc. Suitable protein hydrolyzates are commercially available, e.g. Gluadin AGP (Henkel), obtained by enzymatic hydrolysis of wheat protein, pH 4.5-5.0 (10% solution), molecular weight 2000-25000, or Nutrilan L (Henkel), obtained by acid Hydrolysis of collagen, pH 5.5 - 6.5, molecular weight 500 - 2000.
Nach einer weiteren bevorzugten Ausführungsform enthalten die erfindungsgemäßen Mittel mindestens eine Aminosäure,
-insbesondere Methionin oder Cystein. Zweckmäßigerweise kommt eine Aminosäuremischung zur Anwendung, z.B. das im Handel er¬ hältliche Produkt ASM-Cl (Fa.Degussa) mit folgender Amino-According to a further preferred embodiment, the agents according to the invention contain at least one amino acid, - especially methionine or cysteine. An amino acid mixture is expediently used, for example the commercially available product ASM-Cl (from Degussa) with the following amino
Lys 2,50%Lys 2.50%
Orn 7,94%Orn 7.94%
Phe 1,04%Phe 1.04%
Pro 1,02%Per 1.02%
Ser 19,48%Ser 19.48%
Thr 5,16%Thr 5.16%
Trp 1,01%Trp 1.01%
Tyr 1,43%
Val 3,62%.Tyr 1.43% Val 3.62%.
oder eine -Aminosäuremischung folgender Zusammensetzung:or an amino acid mixture of the following composition:
Das Mengenverhältnis von Flavolignan zu Tocopherol oder einem Ester davon kann in einem weiten Bereich variieren. Im allge- ° meinen liegt die Gewichtsmenge an Tocopherol bzw. einem Ester davon zu Flavolignan im Bereich von 5:1 bis 20:1, insbesonde¬ re 10:1 bis 20:1. Wenn ein Proteinhydrolysat oder eine Amino¬ säure(mischung) in dem Mittel vorhanden sind, so beträgt das Gewichtsverhältnis von Tocopherol oder einem Ester davon zu Proteinhydrolysat oder Aminosäure(mischung) im allgemeinen 2:1 bis 15:1, insbesondere 3:1 bis 10:1.The quantitative ratio of flavolignan to tocopherol or an ester thereof can vary within a wide range. In general, the amount by weight of tocopherol or an ester thereof to flavolignan is in the range from 5: 1 to 20: 1, in particular 10: 1 to 20: 1. If a protein hydrolyzate or an amino acid (mixture) is present in the composition, the weight ratio of tocopherol or an ester thereof to protein hydrolyzate or amino acid (mixture) is generally 2: 1 to 15: 1, in particular 3: 1 to 10 :1.
Die erfindungsgemäßen Mittel können übliche Zusatzstoffe ent¬ halten. Hier sind insbesondere zu erwähnen Mittel zur Pflege der Haut, wie kationische quaternäre Polymere; Befeuchtungs¬ mittel, wie Glycerin, Sorbit, Pentaerythrit, Inosit, Pyrroli- doncarbonsäure und die Salze davon; künstliche Bräunungsmit¬ tel, wie Dihydroxyaceton, Erythrulose, Glycerinaldehyd, α-Dialdehyde, wie 2,3-Dihydroxysuccinaldehyd, gegebenenfalls zusammen mit weiteren Farbstoffen für die Haut; Sonnenschutz¬ mittel; Antiperspirantien; Deodorantien; adstringierende Mit¬ tel; erfrischende und stärkende Produkte; Extrakte von tieri¬ schen und pflanzlichen Geweben; Parfümwässer; Farbstoffe; un¬ gesättigte höhere Fettsäuren, Vitamine, Hormone, Antibiotika etc.The agents according to the invention can contain conventional additives. Particularly worth mentioning here are skin care products, such as cationic quaternary polymers; Moisturizing agents such as glycerol, sorbitol, pentaerythritol, inositol, pyrrolidonecarboxylic acid and the salts thereof; artificial tanning agents, such as dihydroxyacetone, erythrulose, glyceraldehyde, α-dialdehydes, such as 2,3-dihydroxysuccinaldehyde, optionally together with other dyes for the skin; Sunscreen; Antiperspirants; Deodorants; astringent agents; refreshing and strengthening products; Extracts from animal and vegetable tissues; Perfume waters; Dyes; unsaturated higher fatty acids, vitamins, hormones, antibiotics etc.
Die erfindungsgemäßen Mittel können insbesondere in einer zur
The agents according to the invention can be used in particular in a
topischen Verabreichung geeigneten Form vorliegen. Zu diesem Zweck kommt es im allgemeinen in Form einer Creme, Lösung, Gel oder Emulsion zur Anwendung. Außer den zuvor erwähnten Bestandteilen können die Mittel auch übliche Adjuvantien hierfür enthalten, beispielsweise Konservierungsmittel, Sequestriermittel, Verdickungsmittel, Emulgatoren etc.appropriate topical administration form. For this purpose it is generally used in the form of a cream, solution, gel or emulsion. In addition to the ingredients mentioned above, the agents can also contain customary adjuvants for this, for example preservatives, sequestering agents, thickeners, emulsifiers, etc.
Wenn das Mittel in Form einer Creme vorliegt, kann der Träger auf der Grundlage von Seifen oder Fettalkoholen in Gegenwart von Emulgatoren formuliert sein. Die Seifen können ausgehen von natürlichen oder synthetischen C, -,-C,„-Fettsäuren (beispielsweise Laurinsäure, Myristinsäure, Palmitinsäure, Stearinsäure) in einer Menge von 10 bis 30 Gew.-% sowie Alkalinisierungs itteln (wie Natriumhydroxid/ Kaliumhydroxid/ Ammoniak/ Mono ethanolamin, Diethanola in, Triethanolamin) gebildet sein.If the agent is in the form of a cream, the carrier can be formulated on the basis of soaps or fatty alcohols in the presence of emulsifiers. The soaps can originate from natural or synthetic C, -, - C, "- fatty acids (e.g. lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid) in an amount of 10 to 30% by weight as well as alkalizing agents (such as sodium hydroxide / potassium hydroxide / ammonia / Mono ethanolamine, diethanola in, triethanolamine).
Die Cremes können außerdem Adjuvantien, wie Fettamide und Fettalkohole, enthalten. Brauchbare Fettamide sind insbe- sondere Mono- oder Diethanolamide der Kokosfettsäuren, Laurin¬ säure oder Ölsäure in einer Menge bis zu 10 Gew.-%/ bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels. Brauchbare Fettalkohole sind insbesondere Oleylalkohol, Myristylalkohol, Cetylalkohol, Stearylalkohol oder Isostearylalkohol in einer Menge bis zu 10 Gew.-%/ bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels.The creams can also contain adjuvants such as fatty amides and fatty alcohols. Useful fatty amides are, in particular, mono- or diethanolamides of coconut fatty acids, lauric acid or oleic acid in an amount of up to 10% by weight / based on the total weight of the agent. Usable fatty alcohols are in particular oleyl alcohol, myristyl alcohol, cetyl alcohol, stearyl alcohol or isostearyl alcohol in an amount of up to 10% by weight / based on the total weight of the agent.
Die Cremes können auch auf Basis von natürlichen oder synthetischen C.2-C.g-Alkoholen zusammen mit Emulgatoren formuliert sein. Brauchbare Fettalkohole sind insbesondere Kokosfettalkohol, Myristylalkohol, Cetylalkohol/ Stearyl¬ alkohol/ Hydroxystearylalkohol in einer Menge von 5 bis 25 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels.The creams can also be based on natural or synthetic C. 2 -C. g -alcohols can be formulated together with emulsifiers. Usable fatty alcohols are in particular coconut oil alcohol, myristyl alcohol, cetyl alcohol / stearyl alcohol / hydroxystearyl alcohol in an amount of 5 to 25% by weight, based on the total weight of the agent.
Brauchbare Emulgatoren sind:Usable emulsifiers are:
Oxethylierte oder polyglycerinierte Fettalkohole, beispiels¬ weise polyethoxylierter Oleylalkohol, oxethylenierter Cetyl-
alkohol, oxethylenierter Cetylstearylalkohol, oxethylenierter Oleocetylalkohol, oxethylenierter Stearylalkohol, poly- glycerierter Oleylalkohol, polyoxethylenierte C8-C. --Fett¬ alkohole etc. Diese nicht-ionischen Emulgatoren liegen im im allgemeinen in einer Menge von 5 bis 25 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels, vor.Oxethylated or polyglycerolated fatty alcohols, for example polyethoxylated oleyl alcohol, oxyethylenated cetyl alcohol, oxyethylenated cetylstearyl alcohol, oxyethylenated oleocetyl alcohol, oxyethylenated stearyl alcohol, polyglycerated oleyl alcohol, polyoxethylenated C 8 -C. - Fatty alcohols etc. These non-ionic emulsifiers are generally present in an amount of 5 to 25% by weight, based on the total weight of the agent.
Weitere brauchbare Emulgatoren sind Ester höherer Fettsäuren, wie Stearinsäure mit Polyalkoholen, wie Glycerin, Sorbit/ Propylenglykol/ Polyethylenglykolen/ etc. sowie gegebenen¬ falls oxethylierte Alkylsulfate, wie Triethanolamin, Lauryl- sulfat/ oxethyliertes Natriumlaurylethersulfat und oxethyliertes Monoethanolaminlaurylethersulfat.Other emulsifiers which can be used are esters of higher fatty acids, such as stearic acid with polyalcohols, such as glycerol, sorbitol / propylene glycol / polyethylene glycols etc., and, if appropriate, oxyethylated alkyl sulfates, such as triethanolamine, lauryl sulfate / oxyethylated sodium lauryl ether sulfate and oxyethylated monoethanolamine lauryl ether sulfate.
Wenn die erfindungsgemäßen Mittel in Form von Emulsionen vorliegen/ können diese auf Basis nicht-ionischer oder anionischer Tenside formuliert sein. Nicht-ionische Emulsionen umfassen im allgemeinen öle und/oder Wachse/ Fettalkohole, polyethoxylierte Fettalkohole/ wie beispiels¬ weise Stearylalkohol oder polyethoxylierter Cetylstearyl¬ alkohol. Anionische Emulsionen werden im allgemeinen ausgehend von Seifen formuliert.If the agents according to the invention are in the form of emulsions, these can be formulated on the basis of non-ionic or anionic surfactants. Nonionic emulsions generally include oils and / or waxes / fatty alcohols, polyethoxylated fatty alcohols / such as, for example, stearyl alcohol or polyethoxylated cetylstearyl alcohol. Anionic emulsions are generally formulated from soaps.
Geeignete Lösungsmittel für Lösungen und Gele sind Wasser oder Wasser-Alkohol-Mischungen, z.B. Wasser/Ethanol oder Wasser/Isopropanol. Geeignete Gelbildner sind insbesondereSuitable solvents for solutions and gels are water or water-alcohol mixtures, e.g. Water / ethanol or water / isopropanol. Suitable gelling agents are in particular
Cellulosederivate, wie Carboxymethylcellulose, Hydroxyethyl- cellulose,und Polyacrylsäuren (z.B. Carbopole) .Cellulose derivatives, such as carboxymethyl cellulose, hydroxyethyl cellulose, and polyacrylic acids (e.g. carbopole).
Die erfindungsgemäßen Mittel besitzen zellprotektive Wirksam- keit und sind daher in der Lage, den Alterungsprozeß derThe agents have cell protective effectiveness of an d are therefore in a position to the aging process of
Haut wirksam zu verzögern. Dies konnte sowohl durch in vitro als auch durch in vivo Untersuchungen nachgewiesen werden.Effectively delay skin. This could be demonstrated by in vitro as well as in vivo investigations.
Die in vitro Untersuchung erfolgte an menschlichen Keratinc- cyten, die mit UV-A-Strahlen zur Induzierung einer über
freie Radikale vermittelten Zellschädigung bestrahlt wurden. Zu diesem Zweck wurden isolierte Keratinocyten von der Vor¬ haut eines zwei Monate Kindes verwendet. Die Keratinocyten wurden kultiviert in MCDB 153 (Irvine® ) plus Ethanolamin, Phosphoethanolamin, Cortison, Insulin, Calcium (0,1 mM) . Die Konzentration an Hypophysenextrakt betrug 0,5% (70 μg/ml) .The in vitro investigation was carried out on human keratin cytocytes, which were used with UV-A rays to induce over free radical mediated cell damage were irradiated. Isolated keratinocytes from the foreskin of a two-month child were used for this purpose. The keratinocytes were cultivated in MCDB 153 (Irvine®) plus ethanolamine, phosphoethanolamine, cortisone, insulin, calcium (0.1 mM). The pituitary extract concentration was 0.5% (70 μg / ml).
Die Zellen werden in Corning-Kulturgefäßen von 100 mm Durch¬ messer in feuchter Atmosphäre mit 5 % C02 bei 37°C gehalten. Die Keratinocyten wurden alle 8 Tage bei gleichbleibenderThe cells are kept in Corning culture vessels with a diameter of 100 mm in a humid atmosphere with 5% CO 2 at 37 ° C. The keratinocytes became steady every 8 days
5 Zelldichte überimpft: 1 x 10 -Zellen/10 ml Kulturmedium.5 cell density inoculated: 1 x 10 cells / 10 ml culture medium.
Die Bestimmung der Wachstumsrate erfolgte colorimetrisch/ basierend auf der metabolischen Aktivität der Zellen mit Hilfe eines Tetrazoliumsalzes (MTT-Test, Mosmann 1983) . Es entwickelte sich eine blaue Farbe, deren Intensität proportional zur Zelldichte ist. Die Absorption bei 570 nm wurde spektral-photometrisch bestimmt.The growth rate was determined colorimetrically / based on the metabolic activity of the cells using a tetrazolium salt (MTT test, Mosmann 1983). A blue color developed, the intensity of which is proportional to the cell density. The absorption at 570 nm was determined spectrophotometrically.
Folgende Testsubstanzen und Lösungen kamen zur Anwendung:The following test substances and solutions were used:
StammlösungenStock solutions
< ,-Tocopherol 150 mg/ml in Ethanol 96 % (A) Cetiol HE 0,1 μl/ml in Hanks-Lösung - ohne Phenolrot - (B)<, -Tocopherol 150 mg / ml in ethanol 96% (A) Cetiol HE 0.1 μl / ml in Hanks solution - without phenol red - (B)
Silibininhemisuccinat 2 mg/ml in Hanks- Lösung - ohne Phenolrot - (C)Silibinin hemisuccinate 2 mg / ml in Hanks' solution - without phenol red - (C)
Gluadin 0,5 mg/ml in Hanks-Lösung - ohneGluadin 0.5 mg / ml in Hanks solution - without
Phenolrot - (D)Phenol red - (D)
Aus diesen Stammlösungen wurden folgende Testlösungen hergestellt:
Gesamtmischung (alle Wirkstoffe)The following test solutions were prepared from these stock solutions: Total mixture (all active ingredients)
A 20 μl B 100 μlA 20 ul B 100 ul
C 100 μlC 100 ul
D 1 mlD 1 ml
Kulturlösung MCDB 153 oder Elektrolytlösung Hanks ohne Phenolrot ad 10 ml.Culture solution MCDB 153 or electrolyte solution Hanks without phenol red ad 10 ml.
TocopherolacetatlösungTocopherol acetate solution
A 20 ml B 100 mlA 20 ml B 100 ml
Kulturlösung MCDB 153 oder Elektrolytlösung Hanks ohneCulture solution MCDB 153 or electrolyte solution Hanks without
Phenolrot' ad 10 ml.Phenol 'ad 10 ml.
SilibininhemisuccinatlösungSilibinin hemisuccinate solution
C 100 μlC 100 ul
Kulturlösung MCDB 153 oder Elektrolytlösung Hanks ohne Phenolrot ad 10 mlCulture solution MCDB 153 or electrolyte solution Hanks without phenol red ad 10 ml
Kontrollecontrol
20 μl Ethanol 98 % B 100 μl D 1 ml20 ul ethanol 98% B 100 ul D 1 ml
Kulturlösung MCDB 153 oder Elektrolytlösung Hanks ohneCulture solution MCDB 153 or electrolyte solution Hanks without
Phenolrot ad 10 ml
Diese Testlösungen werden unverdünnt oder verdünnt auf 1/2, 1/10 und 1/20 angewandt.Phenol red to 10 ml These test solutions are used undiluted or diluted to 1/2, 1/10 and 1/20.
100 μl dieser Lösungen werden zu 100 μl Zellkulturmedium zugefügt. Daraus resultieren folgende Testkonzentrationen:100 ul of these solutions are added to 100 ul cell culture medium. This results in the following test concentrations:
1) Tocopherolacetat Silibinhemisuccinat Gluadin1) Tocopherol acetate silibin hemisuccinate gluadin
2) Tocopherolacetat Silibinhemisuccinat Gluadin2) Tocopherol acetate silibin hemisuccinate gluadin
3) Tocopherolacetat Silibinhemisuccinat Gluadin3) Tocopherol acetate silibin hemisuccinate gluadin
4) Tocopherolacetat Silibinhemisuccinat Gluadin
4) Tocopherol acetate silibin hemisuccinate gluadin
Jede Konzentration wurde an fünf Zellkulturen getestet.Each concentration was tested on five cell cultures.
BestrahlungRadiation
Die Erzeugung freier Radikale erfolgte durch UV-A-Be- strahlung mit einer Quecksilberdampflampe Vilber LourmatFree radicals were generated by UV-A radiation using a Vilber Lourmat mercury vapor lamp
(T 40 M). Das Maximum des Emissionsspektrums war bei 365 nm.
2 Eine Intensität von 6 Joules/cm führt zu einer ca. 50%-igen(T 40 M). The maximum of the emission spectrum was at 365 nm. 2 An intensity of 6 joules / cm leads to an approx. 50%
Toxizität auf die Keratinocyten 24 h nach der Bestrahlung. Die Bestrahlung der Keratinocyten erfolgte in Hanks-Lösung ohne Phenolrot. Nach der Bestrahlung wurde die Elektrolyt¬ lösung entfernt und die Zellen für 24 h in ihrem kompletten Kulturmedium belassen. Die cellulare Lebensfähigkeit wurde danach colorimetrisch mit MTT bestimmt.Toxicity to keratinocytes 24 h after radiation. The keratinocytes were irradiated in Hanks solution without phenol red. After the irradiation, the electrolyte solution was removed and the cells were left in their complete culture medium for 24 h. Cellular viability was then determined colorimetrically using MTT.
1010
Zugabe der TestlösungenAdd the test solutions
1. vor der Bestrahlung1. before irradiation
15 Die mit Hanks-Lösung ohne Phenolrot verdünnten Test¬ lösungen werden unmittelbar vor der Bestrahlung zuge¬ geben und bleiben für ca. 45 min in Kontakt mit den Keratinocyten.15 The test solutions diluted with Hanks solution without phenol red are added immediately before the irradiation and remain in contact with the keratinocytes for about 45 minutes.
20 2. nach der Bestrahlung20 2. after radiation
Die mit kompletten Kulturmedium (MCDB 153) verdünnten Testlösungen werden direkt nach der Bestrahlung zuge¬ geben und verbleiben 24 h in Kontakt mit den Keratino- 25 cyten.The test solutions diluted with complete culture medium (MCDB 153) are added directly after the irradiation and remain in contact with the keratinocytes for 24 hours.
Kontrollecontrol
Die Kulturen ohne Wirkstofflösung werden während der Be- ° srahlung mit Aluminiumfolie abgedeckt.The cultures without active ingredient solution are covered with aluminum foil during the irradiation.
Ermittlung der SchutzwirkungDetermination of the protective effect
Die Bestrahlung führt zu einer ca. 50% verringerten Zell¬The radiation leads to an approximately 50% reduced cell
35 aktivität der Keratinocyten = Toxizität. Als Maß für eine
Schutzwirkung gegen freie Radikale kann somit eine ge¬ steigerte Zellausbeute der behandelten Kulturen gegenüber unbehandelten Kontrollen gewertet werden.35 activity of keratinocytes = toxicity. As a measure of one Protective action against free radicals can thus be assessed as an increased cell yield of the treated cultures compared to untreated controls.
Beispiel:Example:
Toxizität behandelt = 50 % Toxizität unbehandelt • = 80 % Steigerung der Zellausbeute = 30 %Treated toxicity = 50% untreated toxicity • = 80% increase in cell yield = 30%
Die Ergebnisse sind in Fig. 1 dargestellt.The results are shown in Fig. 1.
Sowohl Lösungsmittel (Kontrolle) + Gluadin als auchBoth solvent (control) + gluadin as well
Tocopherolacetat zeigen keine gesteigerte Zellausbeute und damit keine Schutzwirkung. Lediglich Silibinhemisuccinat bewirkt eine leichte Steigerung der Zellausbeute. Das er¬ findungsgemäße Mittel (Gesamtmischung) hingegen steigert die Zellausbeute deutlich dosisabhängig. Diese Schutz¬ wirkung ist gegenüber den Einzelsubstanzen statistisch signifikant (P^ 0,05) und deutlich überadditiv. Der Effekt des Mittels kann daher als synergistisch bezeichnet werden.
Die nachfolgenden Beispiele erläutern die Erfindung ohne sie zu beschränken.Tocopherol acetate show no increased cell yield and therefore no protective effect. Only silibin hemisuccinate causes a slight increase in cell yield. The agent according to the invention (total mixture), on the other hand, increases the cell yield significantly in a dose-dependent manner. This protective effect is statistically significant compared to the individual substances (P ^ 0.05) and clearly superadditive. The effect of the agent can therefore be described as synergistic. The following examples illustrate the invention without restricting it.
Beispiel 1 : CremeExample 1: Cream
%%
PEG-40 Stearat 1,80 Sorbitanstearat 3/60PEG-40 stearate, sorbitan stearate 1.80 3/60
Stearinsäure 0/40Stearic 0/40
Cetearylalkohol 2/00Cetearyl 2/00
Lanolinöl 2/00Lanolin 2/00
Caprylic/Capric/Stearic/Triglycerid 4,00 Cetearylisononanoat 4/00Caprylic / Capric / Stearic / Triglyceride 4.00 cetearyl 4/00
Dimethicon 1,00 dem. Wasser ad 100/00Dimethicone 1.00 dem. Water to 100/00
Methylparaben 0/15Methylparaben 0/15
Phenoxyethanol 0/45 Propylenglykol 0,90Phenoxyethanol 0/45 propylene glycol 0.90
PEG-400 4,00 hydrolisiertes Weizenprotein 0/50PEG-400 4.00 hydrolyzed wheat protein 0/50
Tocopherolacetat 3,00Tocopherol acetate 3.00
Chlorhexidindigluconat 0/04 Silymarin 0/20Chlorhexidindigluconat 0/04 silymarin 0/20
Beispiel 2 : CremeExample 2 : Cream
Glycerinmonostearat 3,60Glycerol monostearate 3.60
Na-Cetearylsulfat 0,80Na cetearyl sulfate 0.80
Cetearylalkohol 3,60Cetearyl alcohol 3.60
Propylenglykolstearat 1,00Propylene glycol stearate 1.00
Octyldodecyllanolat 4,00Octyl dodecyl alcoholate 4.00
Cetearylisononanoat 6,00Cetearyl isononanoate 6.00
Octyldodecanol 6,00Octyldodecanol 6.00
Mineralöl 2,00Mineral oil 2.00
Dimethicon 1,00
Phenoxyethanol und Methylparaben 1,00 und Ethylparaben und Butylparaben demin. Wasser ad 100,00Dimethicone 1.00 Phenoxyethanol and methylparaben 1.00 and ethylparaben and butylparaben demin. Water ad 100.00
Silymarin 0,20Silymarin 0.20
PEG-400 4,00PEG-400 4.00
Tocopherolacetat 3,00Tocopherol acetate 3.00
Weizenproteinhydrolysat (Gluadin AGP) 0/50Wheat protein hydrolyzate (Gluadin AGP) 0/50
Beispiel 3 : 2-Phasen-ProduktExample 3: 2-phase product
Jojobaöl 4,00Jojoba oil 4.00
Tocopherolacetat 2,00Tocopherol acetate 2.00
Octylmethoxycinnamat 3,00Octyl methoxycinnamate 3.00
Tocopherol 0,01Tocopherol 0.01
Mineralöl 16,00 demin. Wasser ad 100,00Mineral oil 16.00 demin. Water ad 100.00
Hyaluronsäure 0,08Hyaluronic acid 0.08
Pyrrolidoncarboxylat Na 0,25Pyrrolidone carboxylate Na 0.25
Natriumacetat 0,25Sodium acetate 0.25
Methylparaben 0,18Methyl paraben 0.18
Phenoxyethanol 0,54Phenoxyethanol 0.54
Propylenglykol 1,08Propylene glycol 1.08
Magnesiumsulfat 1,00Magnesium sulfate 1.00
Silymarin 0,20
Silymarin 0.20