EP0317439A1 - Sérum de nature humaine obtenu à partir de fractions résultant du fractionnement de sang ou de plasma humain, son procédé de préparation et réactif de laboratoire contenant ledit sérum - Google Patents

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EP0317439A1
EP0317439A1 EP88402900A EP88402900A EP0317439A1 EP 0317439 A1 EP0317439 A1 EP 0317439A1 EP 88402900 A EP88402900 A EP 88402900A EP 88402900 A EP88402900 A EP 88402900A EP 0317439 A1 EP0317439 A1 EP 0317439A1
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EP
European Patent Office
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sub
reconstituted
fraction
serum
paste
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP88402900A
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German (de)
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Inventor
Pierre Nabet
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BIO FRANCE REACTIFS DEVELOPPEMENT B F R DEVELOPPEM
Original Assignee
Bio France Reactifs Developpement B F R Developpement
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Publication date
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    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/96—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood or serum control standard
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2496/00—Reference solutions for assays of biological material
    • G01N2496/05—Reference solutions for assays of biological material containing blood cells or plasma
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2496/00—Reference solutions for assays of biological material
    • G01N2496/80—Multi-analyte reference solutions containing cholesterol, glucose and the like

Definitions

  • the present invention relates to a serum of human nature obtained from fractions resulting from the fractionation of blood or human plasma, to a laboratory reagent containing said serum, as well as to its process of preparation.
  • fractionation centers In human plasma fractionation centers, it is generally the COHN method - or any method derived from it - that is used to obtain the fractions used in therapy such as coagulation factors, immunoglobulins, albumin, fibrinogen. During these fractionations, certain fractions, in the form of pastes or liquid supernatants, are not used in therapy and are generally destroyed by incineration.
  • the subject of the present invention is a serum of human nature, characterized in that it is reconstituted from at least one residual sub-fraction resulting from the fractionation of human plasma and / or human blood and / or placental blood or retroplacental and in that it has chemical and physico-chemical characteristics similar to those of a natural human serum, in particular with regard to the clarity, the color, the content of different constituents and the electrophoretic profile.
  • paste III the sub-fractions known as paste III, paste IV and supernatant V have valuable properties, in that they allow alone or in combinations between them to reconstitute a serum of human nature whose applications are numerous. .
  • the reconstituted serum according to the invention is characterized in that it is reconstituted from the so-called paste III sub-fraction.
  • the reconstituted serum according to the invention is characterized in that it is reconstituted from the sub-fraction known as IV paste.
  • the reconstituted serum according to the present invention is reconstituted from a mixture of the sub-fractions called paste III and paste IV.
  • it is reconstituted from the sub-fraction known as paste III and / or from the sub-fraction known as paste IV, associated with an intake albumin.
  • This supply of albumin can advantageously consist of the so-called supernatant V sub-fraction.
  • This supply of albumin can also be a solution of human pyrogenic albumin not used in therapy or a solution of albumin of animal origin, in particular a solution of bovine albumin.
  • the reconstituted serum according to the invention it is reconstituted from the sub-fraction called paste III and / or from the sub-fraction called paste IV, to which or to which is added a supply of albumin and / or the so-called fibrinogen supernatant sub-fraction and / or the so-called eluates 1 and II sub-fractions and / or the so-called immunoglobulin sub-fraction.
  • the reconstituted serum according to the invention is in lyophilized form.
  • the reconstituted serum it is in liquid form.
  • said liquid serum is associated with at least one suitable preservative.
  • the reconstituted serum according to the invention is in frozen form.
  • this is formed from a mixture in variable proportions of the sub-fractions called "paste III", “paste IV” and “supernatant V” suitably treated beforehand and whose contents in protein constituents and various parameters are adjusted according to the proportions of said mixture.
  • the fractions resulting from "paste III", “paste IV” and “supernatant V” are present in the mixture in respective proportions by weight of approximately 0-30% of paste III, About 0-30% of IV paste, about 50-70% of V supernatant
  • the present invention also relates to a laboratory reagent, characterized in that it consists of a reconstituted serum according to the invention.
  • this reagent is used for quality control of serum.
  • this reagent is used for the calibration of equipment, in biology and medical analysis laboratories.
  • the reagent according to the invention can in particular be used as a protein matrix for the calibration of a specific substance which is added to it in known quantities.
  • the present invention also relates to a process for the preparation of a reconstituted serum, characterized in that at least one sub-fraction called paste III and / or paste IV is homogenized in an appropriate physiological solute, in that the suspension obtained is dialyzed then in that the dialyzed suspension thus obtained is clarified and its protein concentration is adjusted, so as to obtain a reconstituted serum according to the invention, put in a form suitable for its preservation.
  • each pasty sub-fraction is dialyzed against a physiological solute identical or different from that used for homogenization, through a membrane with a cutting zone of at least 1000 daltons.
  • Homogenization and dialysis eliminate organic solvents, balance ions and substrates and redissolve the maximum of proteins.
  • said dialyzed suspension is clarified by ultracentrifugation.
  • said dialyzed suspension is clarified by filtration.
  • the clarification is carried out directly or after prior precipitation of the lipoproteins.
  • the precipitation of the lipoproteins is carried out by any known technique, in particular by the method of BURNSTEIN-SCHOLNICK and MORFIN.
  • the protein concentration is adjusted by ultrafiltration on a membrane with a cut-off area of 10,000 daltons, so that the protein concentration is between 50 and 70 g / I.
  • an addition of albumin is added to at least one pasty sub-fraction treated as described above.
  • the supply of albumin is advantageously constituted by the so-called supernatant V, the said supernatant being concentrated to an appropriate value and dialyzed against an appropriate physiological solution.
  • the supernatant V is concentrated by ultrafiltration on a membrane with a cut-off area of 10,000 daltons, so as to obtain a protein content of between 30 and 80 g / l.
  • the different suspensions and / or solutions obtained are mixed in variable proportions, advantageously from 0 to 30% of a solution obtained from paste III, from 0 to 30% of a solution obtained from IV paste and from 50 to 70% of an albumin solution, to obtain a reconstituted serum.
  • said reconstituted serum is further put into a form suitable for its preservation by lyophilization, sterilizing filtration or freezing.
  • the invention also comprises other provisions, which will emerge from the description which follows, which refers to examinations of implementation of the method according to the invention. It should be understood, however, that these examples are given solely by way of illustration of the subject of the invention, of which they do not in any way constitute a limitation.
  • the fractionation is carried out as shown in diagrams 1 and II, which reproduce the stages of the COHN fractionation process.
  • the framed fractions are residual subfractions which are not used in therapy and the underlined fractions are fractions currently used in therapy.
  • Paste III is obtained after isolation of fibrinogen, factors VIII and super VIII and PPSB.
  • IV paste is obtained after isolation of fibrinogen, factors VIII and super VIII, PPSB and immunoglobulins.
  • Pastes III and IV are homogenized in two volumes of an appropriate physiological solution such as the normal RINGER solution or modified as follows NaCl 585 g; KCI 37 g; urea 30 g; creatinine 1 g; glucose 100 g: NaH 2 P0 4 , H 2 0 6.8 g; ferrous ammonium sulfate, 6 H 2 0 2 g; NaHCO 3 340 g; ZnS0 4 .2H 2 O1,5g; C U S0 4 1.25 g; MgCl 2 , 6 H 2 0 20 g; the suspension obtained is dialyzed for at least 24 hours against a physiological solution, using a membrane with a cut-off threshold of at least 1000 daltons, at the rate of 1 liter of suspension for 50 liters of counter-dialysis liquid , which allows the elimination of alcohol, the re-solution of a maximum of proteins, and the balancing of ions and substrates.
  • an appropriate physiological solution such as the normal
  • the suspensions obtained are clarified by centrifugation or by filtration, either directly or after precipitation of the lipoproteins by any known technique and, in particular, by the method of BURNSTEIN-SCHOLNICK and MORFIN (1970); the protein concentration is adjusted to approximately 50 g / l by ultrafiltration on a membrane with a cut-off area of 10,000 daltons.
  • a solution obtained from the supernatant fraction V is mixed with 0 to 30% of a solution obtained from paste III and 0 to 30% of a solution obtained from dough IV.
  • a reconstituted serum is obtained, the characteristics of which are given in Table I.
  • the reconstituted serum, sterile filtered on a 0.20 ⁇ m membrane and stored in a sterile bottle has a shelf life of at least 2 years, as also shown in Table I.

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Abstract

Sérum de nature humaine obtenu à partir de fractions résultant du fractionnement de sang ou de plasma humain, un réactif de laboratoire contenant ledit sérum, ainsi que son procédé de préparation. Ce sérum de nature humaine est reconstitué à partir d'au moins une sous-fraction résiduelle résultant du fractionnement du plasma humain et/ou du sang humain et/ou du sang placentaire ou rétroplacentaire et en ce qu'il présente des caractéristiques chimiques et physicochimiques semblables à celles d'un sérum humain naturel, notamment en ce qui concerne la limpidité, la couleur, la teneur en différents constituants et le profil électrophorétique.

Description

  • La présente invention est relative à un sérum de nature humaine obtenu à partir de fractions résultant du fractionnement de sang ou de plasma humain, à un réactif de laboratoire contenant ledit sérum, ainsi qu'à son procédé de préparation.
  • On sait que l'utilisation de standards d'origine humaine (sérums ou plasmas de contrôle) est obligatoire en biologie clinique chaque fois que des tests de détermination de paramètres, utilisent une méthode de nature immunologique, ou lorsqu'il s'agit de mettre en évidence une activité biologique spécifique de nature humaine, comme c'est le cas, notamment des enzymes, des facteurs de la coagulation ou des facteurs du complément. On sait que la plupart des standards humains actuellement utilisés sont des sérums humains complets naturels ou du sang placentaire ou rétroplacentaire. Or, tous ces produits sont de disponibilité réduite, de coût élevé et ils sont de plus réservés à des usages thérapeutiques.
  • Des sérums étalons ont été proposés dans l'Art antérieur et proviennent essentiellement de sang complet.
  • En particulier :
    • - la demande de brevet européen n° 0131 826 décrit un sérum de contrôle à base de sérum humain ou animal, associé à un tampon qui permet d'obtenir un pH physiologique. L'utilisation d'un tel tampon donne une certaine stabilité ;
    • - le brevet américain n° 4 158 544 enseigne un procédé de préparation de sérum étalon par traitement d'un plasma citraté, qui est d'abord décitraté, puis coagulé, le caillot de fibrine étant éliminé après concentration et le sérum concentré étant additionné d'un alkylènepolyol.
  • Toutefois, les sérums proposés résultent d'un pool limité en ce qui concerne les teneurs de ces constituants, en sorte que la stabilité de la composition est aléatoire d'un lot à l'autre.
  • Dans les centres de fractionnement du plasma humain, c'est généralement la méthode de COHN - ou toute méthode qui en est dérivée - qui est utilisée pour obtenir les fractions utilisées en thérapeutique telles que facteurs de la coagulation, immunoglobulines, albumine, fibrinogène. Au cours de ces fractionnements, certaines fractions, sous forme de pâtes ou de surnageants liquides, ne sont pas utilisées en thérapeutique et sont généralement détruites par incinération.
  • Compte-tenu de la difficulté de disposer facilement d'un sérum humain entier pour une utilisation non thérapeutique, notamment comme réactifs, de la difficulté de disposer de grandes quantités de sang placentaire et du coût important de ces produits, les Inventeurs se sont donné pour but de pourvoir à un substitut d'un tel sérum, provenant du fractionnement du sang ou du plasma humain, qui répond aux besoins de la pratique tant au niveau du coût que des quantités disponibles, tout en présentant une grande stabilité tant dans sa composition que dans son aptitude à sa conservation.
  • En effet, le nombre de dosages immunologiques effectués par les laboratoires d'analyses médicales est en augmentation considérable du fait de l'évolution des méthodes de diagnostic. Il en résulte un accroissement de la demande en sérums de calibration ou de contrôle qui, pour ce type de dosages, doivent nécessairement être des produits d'origine humaine (immunoprécipitation, immunonéphélométrie, immunoenzymologie ou radioimmunologie).
  • La présente invention a pour objet un sérum de nature humaine, caractérisé en ce qu'il est reconstitué à partir d'au moins une sous-fraction résiduelle résultant du fractionnement du plasma humain et/ou du sang humain et/ou du sang placentaire ou rétroplacentaire et en ce qu'il présente des caractéristiques chimiques et physico-chimiques semblables à celles d'un sérum humain naturel, notamment en ce qui concerne la limpidité, la couleur, la teneur en différents constituants et le profil électrophorétique.
  • Il y a lieu de rappeler que le fractionnement de COHN, tel qu'illustré sur les schémas 1 et Il annexés, comprend un certain nombre d'étapes qui seront brièvement décrites ci-après :
    • - lorsque du plasma additionné d'une solution d'ACD (acide citrique, citrate de sodium, sel de calcium, glucose et eau) est traité par de l'éthanol à 10 % à -2 C, il donne lieu à une "pâte I" à partir de laquelle on récupère du fibrinogène et à une sous-fraction dite "surnageant 1" ;
    • - lorsque du plasma additionné d'ACD est cryoprécipité à -40 C, on obtient un cryoprécipité qui contient le facteur VIII et le facteur super VIII et un "surnageant du cryoprécipité" ;
    • - les surnageants de ces traitements, réunis et traités à l'éthanol à 19%, à pH 5,85 et à -5°C donnent lieu : d'une part à une "pâte II33 qui, par traitement par de l'éthanol à 13 o/o, à pH 5,10 et à -30°C, donne lieu à une pâte III" qui est une sous-fraction résiduelle qui est non-utilisée et à un surnageant III qui par traitement par l'éthanol à 25 %, à pH 7,2 et à -7°C, en présence de NaCI 3 g/I, permet de récupérer les immunoglobulines ;
    • . d'autre part à un surnageant II, qui par traitement à l'éthanol à 38 %, à pH 6,10 et à -5° C, donne lieu à une "pâte IV" qui est une sous-fraction résiduelle qui est non-utilisée et à un surnageant IV qui par traitement par l'éthanol à 41 %, à pH 4,85 et à-12° C, donne lieu à une "pâte V", essentiellement constituée par de l'albumine et à un surnageant V, sous-fraction résiduelle qui est non-utilisée.
  • Or, les Inventeurs se sont aperçus que les sous-fractions dites pâte III, pâte IV et surnageant V présentent des propriétés précieuses, en ce qu'elles permettent seules ou en combinaisons entre elles de reconstituer un sérum de nature humaine dont les applications sont nombreuses.
  • En conséquence, selon un mode de réalisation avantageux du sérum reconstitué conforme à l'invention, celui-ci est caractérisé en ce qu'il est reconstitué à partir de la sous-fraction dite pâte III.
  • Selon un autre mode de réalisation avantageux du sérum reconstitué conforme à l'invention, celui-ci est caractérisé en ce qu'il est reconstitué à partir de la sous-fraction dite pâte IV.
  • Selon encore un autre mode de réalisation avantageux du sérum reconstitué conforme à la présente invention, celui-ci est reconstitué à partir d'un mélange des sous-fractions dites pâte III et pâte IV. Selon un autre mode de réalisation avantageux du sérum reconstitué conforme à l'invention, celui-ci est reconstitué à partir de la sous-fraction dite pâte III et/ou de la sous-fraction dite pâte IV, associée(s) à un apport d'albumine.
  • Cet apport d'albumine peut avantageusement être constitué par la sous-fraction dite surnageant V.
  • Cet apport d'albumine peut également être une solution d'albumine humaine pyrogène non-utilisée en thérapeutique ou une solution d'albumine d'origine animale, notamment une solution d'albumine bovine. Selon encore un autre mode de réalisation avantageux du sérum reconstitué conforme à l'invention, celui-ci est reconstitué à partir de la sous-fraction dite pâte III et/ou de la sous-fraction dite pâte IV, à laquelle ou auxquelles est ajouté un apport d'albumine et/ou la sous-fraction dite surnageant fibrinogène et/ou les sous-frac tions dites éluats 1 et Il et/ou la sous-fraction dite surnageant des immunoglobulines.
  • Selon un autre mode de réalisation du sérum reconstitué conforme à l'invention, celui-ci est sous forme lyophilisée.
  • Selon encore un autre mode de réalisation du sérum reconstitué, celui-ci est sous forme liquide.
  • Selon une disposition avantageuse de ce mode de réalisation, ledit sérum liquide est associé à au moins un conservateur approprié.
  • Selon encore un autre mode de réalisation du sérum reconstitué conforme à l'invention, celui-ci est sous forme congelée.
  • Selon un mode de réalisation avantageux du sérum reconstitué, celui-ci est formé d'un mélange en proportions variables des sous-fractions dites "pâte III", "pâte IV" et "surnageant V" convenablement traitées au préalable et dont les teneurs en constituants protéiques et en divers paramètres sont ajustées en fonction des proportions dudit mélange.
  • Selon une disposition avantageuse de ce mode de réalisation, les fractions issues de "pâte III", "pâte IV" et "surnageant V" sont présentes dans le mélange dans des proportions respectives en poids de 0-30 % environ de pâte III, de 0-30 % environ de pâte IV, de 50-70 % environ de surnageant V.
  • Le sérum reconstitué, conforme à la présente invention, présente les avantages suivants :
    • - il utilise les fractions habituellement rejetées par les Centres de Transfusion, et permet ainsi l'obtention d'un sérum à coût très réduit ;
    • - il correspond à un milieu standardisé, stable et reproductible, dont la composition est proche ou identique de celle du sérum humain physiologique.
  • La présente invention a egalement pour objet un réactif de laboratoire, caractérisé en ce qu'il est constitué par un sérum reconstitué conforme à l'invention.
  • Selon l'une des applications de ce réactif, il est utilisé pour les contrôles de qualité de sérum.
  • Selon une autre des applications de ce réactif, il est utilisé pour l'étalonnage des appareillages, dans les laboratoires de biologie et d'analyses médicales.
  • Le réactif conforme à l'invention peut notamment être utilisé comme matrice protéique pour l'étalonnage d'une substance spécifique qui lui est ajoutée en quantités connues.
  • La présente invention a également pour objet un procédé de préparation d'un sérum reconstitué, caractérisé en ce qu'au moins une sous-fraction dite pâte III et/ou pâte IV est homogénéisée dans un soluté physiologique approprié, en ce que la suspension obtenue est dialysée puis en ce que la suspension dialysée ainsi obtenue est clarifiée et sa concentration protéique est ajustée, de manière à obtenir un sérum reconstitué conforme à l'invention, mis sous une forme appropriée à sa conservation.
  • Selon un mode de mise en oeuvre avantageux de ce procédé de préparation, chaque sous-fraction pâteuse est dialysée contre un soluté physiologique identique ou différent de celui utilisé pour l'homogénéisation, à travers une membrane à zone de coupure d'au moins 1 000 daltons.
  • L'homogénéisation et la dialyse permettent d'éliminer les solvants organiques, d'équilibrer en ions et substrats et de redissoudre le maximum de protéines.
  • Selon un autre mode de mise en oeuvre avantageux de ce procédé de préparation, ladite suspension dialysée est clarifiée par ultracentrifugation.
  • Selon encore un autre mode de mise en oeuvre de ce procédé de préparation, ladite suspension dialysée est clarifiée par filtration.
  • Conformément à l'invention, la clarification est effectuée directement ou après précipitation préalable des lipoprotéines.
  • La précipitation des lipoprotéines est réalisée par toute technique connue, notamment par la méthode de BURNSTEIN-SCHOLNICK et MORFIN.
  • Selon un autre mode de mise en oeuvre de ce procédé, l'adjustement de la concentration en protéines est réalisé par ultrafiltration sur membrane à zone de coupure de 10 000 daltons, de manière à ce que la concentration protéique soit comprise entre 50 et 70 g/I.
  • Selon un autre mode de mise en oeuvre avantageux du procédé de préparation du sérum reconstitué, on ajoute un apport d'albumine à au moins une sous-fraction pâteuse traitée comme décrit ci-dessus.
  • Selon une disposition avantageuse de ce mode de mise en oeuvre, l'apport d'albumine est avantageusement constitué par la sous-fraction dite surnageant V, ledit surnageant étant concentré jusqu'à une valeur appropriée et dialysé contre un soluté physiologique approprié.
  • Selon une modalité avantageuse de cette disposition, le surnageant V est concentré par ultrafiltration sur membrane à zone de coupure de 10 000 daltons, de manière à obtenir une teneur en protéines comprise entre 30 et 80 g/1.
  • Selon un autre mode de mise en oeuvre, les différentes suspensions et/ou solutions obtenues sont mélangées en proportions variables, avantageusement de 0 à 30 % d'une solution obtenue à partir de la pâte III, de 0 à 30 % d'une solution obtenue à partir de la pâte IV et de 50 à 70 % d'une solution d'albumine, pour obtenir un sérum reconstitué.
  • Selon un autre mode de mise en oeuvre avantageux du procédé de préparation du sérum reconstitué conforme à l'invention, on ajoute en outre d'autres fractions résiduelles du fractionnement de COHN et notamment au moins l'une des fractions choisie dans le groupe qui comprend le "surnageant fibrinogène", les "éluats I et II" et "le surnageant des immunoglobulines".
  • Conformément à l'invention, ledit sérum reconstitué est en outre mis sous une forme convenable à sa conservation par lyophilisation, filtration stérilisante ou congélation.
  • Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comporte encore d'autres dispositions, qui ressortiront de la description qui va suivre, qui se réfère à des examens de mise en oeuvre du procédé conforme à l'invention. Il doit être bien entendu toutefois, que ces exemples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation.
    • Exemple 1 - Préparation d'un sérum reconstitué conforme à l'invention :
  • 1) Fractionnement selon la méthode de COHN du plasma humain prélevé sur ACD.
  • On procède au fractionnement comme montré sur les schémas 1 et II, qui reproduisent les étapes du processus de fractionnement de COHN.
  • Dans ces schémas, les fractions encadrées sont des sous-fractions résiduelles qui sont non-utilisées en thérapeutique et les fractions soulignées sont des fractions actuellement utilisées en thérapeutique. De nombreuses autres variantes existent et, en particulier, des variantes dans lesquelles le polyéthylène glycol est utilisé à la place ou en plus de l'alcool, dans certaines étapes.
    • 2) Préparation des pâtes III et IV
  • La pâte III est obtenue après isolement du fibrinogène, des facteurs VIII et super VIII et du PPSB.
  • La pâte IV est obtenue après isolement du fibrinogène, des facteurs VIII et super VIII, du PPSB et des immunoglobulines.
  • Les pâtes III et IV sont homogénéisées dans deux volumes d'un soluté physiologique approprié tel que le soluté de RINGER normal ou modifié comme suit NaCI 585 g ; KCI 37 g ; urée 30 g ; créatinine 1 g ; glucose 100 g : NaH2P04, H20 6,8 g ; sulfate d'ammonium ferreux, 6 H20 2 g ; NaHCO3 340 g ; ZnS04, 2H2O1,5g; CUS04 1,25 g ; MgCl2, 6 H20 20 g ; la suspension obtenue est dialysée au moins 24 heures contre un soluté physiologique, à l'aide d'une membrane à seuil de coupure d'au moins 1 000 daltons, à raison de 1 litre de suspension pour 50 litres de liquide de contre-dialyse, ce qui permet l'élimination de l'alcool, la remise en solution d'un maximum des protéines, et l'équilibrage en ions et substrats.
  • Les suspensions obtenues sont clarifiées par centrifugation ou par filtration, soit directement, soit après précipitation des lipoprotéines par toute technique connue et, en particulier, par la méthode de BURNSTEIN-SCHOLNICK et MORFIN (1970) ; la concentration protéique est ajustée à environ 50 g/I par ultrafiltration sur membrane à zone de coupure de 10 000 daltons.
    • 3) Préparation de la solution d'agent d'apport protéique supplémentaire :
  • La fraction surnageant V est obtenue en 1) après precipitation de l'albumine.
  • Elle est concentrée par ultrafiltration sur une membrane à zone de coupure de 10 000 daltons jusqu'à l'obtention de teneurs protéiques de 30 à 80 g/I ; la solution ainsi obtenue est ensuite dialysée, dans les mêmes conditions que pour les fractions III et IV, contre un soluté physiologique pour rééquilibrer en électrolytes et en substrats et pour éliminer le restant de l'alcool.
    • 4) Préparation du sérum proprement dit.
  • On mélange avantageusement 50 à 70 % d'une solution obtenue à partir de la fraction surnageant V, avec 0 à 30 % d'une solution obtenue à partir de la pâte III et 0 à 30 % d'une solution obtenue à partir de la pâte IV. On obtient un sérum reconstitué dont les caractéristiques sont reportées dans le tableau I.
  • Le sérum reconstitué, filtré stérilement sur une membrane 0,20 µm et conservé en flacon stérile a une conservation d'au moins 2 ans, comme montré également dans le tableau I.
    Figure imgb0001
  • Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes de mise en oeuvre, de réalisation et d'application qui viennent d'être décrits de façon plus explicite ; elle en embrasse au contraire toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre ni de la portée de la présente invention.

Claims (30)

1) Sérum de nature humaine, caractérisé en ce qu'il est reconstitué à partir d'au moins une sous-fraction résiduelle résultant du fractionnement du plasma humain et/ou du sang humain et/ou du sang placentaire ou rétroplacentaire et en ce qu'il présente des caractéristiques chimiques et physico-chimiques semblables à celles d'un sérum humain naturel, notamment en ce qui concerne la limpidité, la couleur, la teneur en différents constituants et le profil électrophorétique.
2°) Sérum reconstitué selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est reconstitué à partir de la sous-fraction dite pâte III.
3°) Sérum reconstitué selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est reconstitué à partir de la sous-fraction dite pâte IV.
4°) Sérum reconstitué selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est reconstitué à partir d'un mélange des sous-fractions dites pâte III et pâte IV.
5°) Sérum reconstitué selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'il comprend en outre un apport d'albumine.
6°) Sérum reconstitué selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'apport d'albumine est constitué par la sous-fraction dite surnageant V.
7°) Sérum reconstitué selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu'il est
reconstitué à partir de la sous-fraction dite pâte III et/ou de la sous-fraction dite pâte IV, à laquelle ou auxquelles est ajouté un apport d'albumine et/ou la sous-fraction dite surnageant fibrinogène et/ou la sous-fraction dite éluats I et Il et/ou la sous-fraction dite surnageant des immunoglobulines.
8°) Sérum reconstitué selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce qu'il est sous forme lyophilisée.
9°) Sérum reconstitué selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce qu'il est sous forme liquide.
10°) Sérum reconstitué selon la revendication 9, caractérisé en ce que ledit sérum liquide est associé à au moins un conservateur approprié.
11°) Sérum reconstitué selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce qu'il est sous forme congelée.
12°) Sérum reconstitué selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisé en ce qu'il est formé d'un mélange en proportions variables des sous-fractions dites "pâte III", "pâte IV" et "surnageant V" convenablement traitées au préalable et dont les teneurs en constituants protéiques et en divers paramètres sont ajustées en fonction des proportions dudit mélange.
13°) Sérum reconstitué selon la revendication 12, caractérisé en ce que les fractions issues de "pâte III", "pâte IV" et "surnageant V" sont présentes dans le mélange dans des proportions respectives en poids de 0-30 % environ de pâte III, de 0-30 % environ de pâte IV, de 50-0 % environ de surnageant V.
14°) Réactif de laboratoire, caractérisé en ce qu'il est constitué par un sérum reconstitué selon l'une quelconque des revendications 1 à 13.
15° ) Réactif selon la revendication 14, caractérisé en ce qu'il est appliqué aux contrôles de qualité.
16°) Réactif selon la revendication 14, caractérisé en ce qu'il est appliqué à l'étalonnage des appareillages, dans les laboratoires de biologie et d'analyses médicales.
17°) Procédé de préparation d'un sérum reconstitué selon l'une quelconque des revendications 1 à 13, ca ractérisé en ce qu'au moins une sous-fraction dite pâte III et/ou pâte IV est homogénéisée dans un soluté physiologique approprié, en ce que la suspension obtenue est dialysée puis en ce que la suspension dialysée ainsi obtenue est clarifiée et sa concentration protéique est ajustée, de manière à obtenir un sérum reconstitué selon l'une quelconque des revendications 1 à 13, mis sous une forme appropriée à sa conservation.
18) Procédé de préparation selon la revendication 17, caractérisé en ce que chaque sous-fraction pâteuse est dialysée contre un soluté physiologique identique ou différent de celui utilisé pour l'homogénéisation, à travers une membrane à zone de coupure d'au moins 1 000 daltons.
19°) Procédé de préparation selon l'une quelconque des revendications 17 et 18, caractérisé en ce que ladite suspension dialysée est clarifiée par ultracentrifugation.
20°) Procédé de préparation selon l'une quelconque des revendications 17 et 18, caractérisé en ce que ladite suspension dialysée est clarifiée par filtration.
21°) Procédé de préparation selon l'une quelconque des revendications 17 à 20, caractérisé en ce la clarification est effectuée directement sur la suspension dialysée.
22°) Procédé de préparation selon l'une quelconque des revendications 17 à 20, caractérisé en ce que la clarification est effectuée après précipitation préalable des lipoprotéines.
23°) Procédé de préparation selon l'une quelconque des revendications 17 à 22, caractérisé en ce que l'ajustement de la concentration en protéines est réalisé par ultrafiltration sur membrane à zone de coupure de 10 000 daltons, de manière à obtenir une concentration protéique comprise entre 50 et 70 g/I.
24°) Procédé de préparation selon l'une quelconque des revendications 17 à 23, caractérisé en ce qu'on ajoute un apport d'albumine à au moins une sous-fraction pâteuse traitée conformément au procédé selon l'une quelconque des revendications 17 à 23.
25°) Procédé de préparation selon la revendication 24, caractérisé en ce que l'apport d'albumine est constitué par la sous-fraction dite surnageant V, ledit surnageant étant concentré jusqu'à une valeur appropriée et dialysé contre un soluté physiologique approprié.
26°) Procédé de préparation selon l'une quelconque des revendications 24 et 25, caractérisé en ce que le surnageant V est concentré par ultrafiltration sur membrane à zone de coupure de 10 000 daltons, de manière à obtenir une teneur en protéines comprise entre 30 et 80 g/I.
27°) Procédé de préparation selon l'une quelconque des revendications 17 à 26, caractérisé en ce que les différentes suspensions et/ou solutions obtenues sont mélangées en proportions variables, avantageusement de 0 à 30 % d'une solution obtenue à partir de la pâte III, de 0 à 30 % d'une solution obtenue à partir de la pâte IV et de 50 à 70 % d'une solution d'albumine, pour obtenir un sérum reconstitué.
28°) Procédé de préparation selon l'une quelconque des revendications 17 à 27, caractérisé en ce qu'on ajoute en outre les autres fractions résiduelles du fractionnement de COHN et notamment au moins l'une des fractions choisie dans le groupe qui comprend la sous-fraction dite "surnageant fibrinogène", la sous-fraction dite "éluats 1 et II" et la sous-fraction dite " surnageant des immunoglobulines".
29°) Procédé de préparation selon l'une quelconque des revendications 17 à 28, caractérisé en ce que ledit sérum reconstitué est en outre mis sous une forme convenable à sa conservation par une méthode choisie dans le groupe qui comprend la lyophilisation, la filtration stérilisante et la congélation.
EP88402900A 1987-11-20 1988-11-18 Sérum de nature humaine obtenu à partir de fractions résultant du fractionnement de sang ou de plasma humain, son procédé de préparation et réactif de laboratoire contenant ledit sérum Withdrawn EP0317439A1 (fr)

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