EP0215081A1 - Preparations of immunoglobulines presenting high titres of blocking antibodies - Google Patents

Preparations of immunoglobulines presenting high titres of blocking antibodies

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Publication number
EP0215081A1
EP0215081A1 EP19860901887 EP86901887A EP0215081A1 EP 0215081 A1 EP0215081 A1 EP 0215081A1 EP 19860901887 EP19860901887 EP 19860901887 EP 86901887 A EP86901887 A EP 86901887A EP 0215081 A1 EP0215081 A1 EP 0215081A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
igg
preparations
approximately
solution
advantageously
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP19860901887
Other languages
German (de)
French (fr)
Inventor
Marion Steinbuch
Jean-Pierre Soulier
Bernard Poupot
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CENTRE NATIONAL DE TRANSFUSION SANGUINE
Original Assignee
CENTRE NATIONAL DE TRANSFUSION SANGUINE
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Filing date
Publication date
Application filed by CENTRE NATIONAL DE TRANSFUSION SANGUINE filed Critical CENTRE NATIONAL DE TRANSFUSION SANGUINE
Publication of EP0215081A1 publication Critical patent/EP0215081A1/en
Withdrawn legal-status Critical Current

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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • the subject of the invention is preparations of immunoglobulins having in particular high titers of antiallergenic blocking antibodies, their preparation and their applications for the treatment of allergies.
  • Allergic manifestations are linked to the presence of antibodies of the IgE or reactin type present on the surface of the effector cells of the immunity and in the circulating blood.
  • allergen-specific IgE antibodies are present at high levels in sensitized subjects. Antibodies of the IgG type directed against these same allergens exert a protective effect with respect to the anaphylactic reactions arising from the meeting of IgE and allergens. These IgG antibodies are called blocking antibodies * . Their presence can be demonstrated in the serum of subjects who do not have an allergic reaction. Their rate rises during desensitization cures with allergen extracts (pollens, mites, or venoms of hymenoptera), their rise being concomitant with the decrease in clinical manifests. 5
  • the precipitate which forms contains the fractions I (fibrinogen, factor VIII) and II + III (IgG, factors II, VII, IX, X and the and J globulins).
  • the preparations based on IgG used in therapy are generally obtained from fractions II + III.
  • the inventors have found that by treating under set conditions the entire precipitate A , it is possible to select preparations based on IgG with a higher titer of anti-blocking antibodies. allergens, making it possible to reduce allergic manifestations with greater efficiency.
  • the invention therefore aims to provide new preparations based on IgG having immunomodulatory anti-allergenic properties.
  • the preparations based on IgG according to the invention are characterized in that they have a titer in IgG of subclass 4, or IgG 4, of at least en ⁇ about 4% and in anti-allergenic blocking antibodies, in particular anti-pollen and anti-mite at least about 20 u / ml of preparation approximately, generally at least about 15 u / ml.
  • the IgG preparations of the invention have, in addition to an IgG 4 titer of at least about 4 **, a level of polymer chains of at least about 10%.
  • polymer is understood to mean in the following a chain of IgG monomer units, whatever their mode of interaction.
  • the IgG-based preparations of the invention have, in addition to their titer in IgG 4 of at least about 4%, and their level in polymer chains of at least about 10% , anti-allergenic blocking antibody titers, in particular anti-pollen and anti-mite approximately 20 u / ml of preparation, generally at least approximately 15 u / ml.
  • the above preparations contain on average 80 to 90%, in particular approximately 85% of IgG, 7 to 15%, in particular 10% in approximately IgA, and 3 to 8., especially around 5% of Ig.
  • the invention also relates to a process for the fractionation of IgG preparations meeting the characteristics defined above.
  • the fractions of IgG obtained by alcoholic precipitation of human plasma are subjected to the action of a saturated linear fatty acid, preferably from C4 to C12, and the soluble part is recovered.
  • cryoprecipite contains an important part in particular Factor VIII, fibrinogen, fibronectin.
  • the supernatant of cryoprecipite can be used in place of plasma for the preparation of precipitate A ,.
  • the solution collected is subjected to at least one purification step.
  • the IgG fractions used as starting material are of the type of those resulting from alcoholic fractionation of human plasma using 95% ethanol, in quantity sufficient for a final concentration of 19 to 22%, at pH 5.85, with gradual lowering of the temperature down to - 10 * C.
  • Precipitate A is redissolved for the purposes of fractionation using saturated fatty acid.
  • the saturated fatty acid is added at a rate of approximately 10 to 50 g / l, preferably 20 g / l to the tam ⁇ pon solution containing precipitate A, for a concentration of this solution in proteins of the order from 20 to 30 g / 1, preferably about 25 g / 1.
  • the fatty acid is added in the form of an emulsion to the buffer solution.
  • the precipitate formed is collected, for example, by centrifugation, for the purposes of other industrial uses.
  • the supernatant which contains the desired fractions is recovered.
  • a particularly preferred fatty acid making it possible to protect IgG with great selectivity, consists of caprylic acid.
  • the fatty acid solution obtained is advantageously subjected to at least one pu ⁇ rification step.
  • an adjuvant endowed with an affinity for fatty acids in particular, a salt such as tri-calcium phosphate.
  • a salt such as tri-calcium phosphate.
  • the pH is advantageously adjusted to about 6.5.
  • the excess adjuvant is removed, for example, by centrifugation and the solution thus clarified is recovered and filtered, for example on activated carbon.
  • the fatty acid solution is directly filtered, for example, on active char ⁇ without carrying out the step of adding tricalcium phosphate.
  • Appropriate methods include alcoholic precipitation or a separation process based on the size difference between Ig and fatty acids such as dialysis, ultrafiltration or tangential ultrafiltration.
  • the pH of the treated solution is advantageously adjusted to approximately 7.
  • Satisfactory conditions for alcoholic precipitation include the addition of alcohol, advantageously ethanol, to a final concentration of approximately 20 to 40%, in particular of the order of 30%, at a temperature below ambient, preferably on the solution cooled to about 0 ° C, the temperature is lowered to -10 ° C to -15 ° C, especially -12 * C. during the addition of alcohol.
  • the precipitate formed is collected.
  • the clarified solution advantageously IgG mentioned above or the precipitate collected 1'issue of alcohol precipitation are felicituse ⁇ ment processed to have preparations jecta- i ble -
  • This treatment includes an operation such as dialysis or ultrafiltration.
  • the high titers of anti-allergenic blocking antibodies of the preparations of the invention and, according to another aspect, their high content of IgG polymer make them particularly suitable for the treatment of allergies. Their interest is further increased due
  • the invention therefore also relates to the application of the preparations defined above, as active principles of medicaments.
  • Double-blind clinical experiments carried out with the preparations of the invention, injected into a sensitized patient, have shown the efficacy of these preparations in passive immunotherapy and in part have made it possible to significantly reduce the allergic manifestations observed in seasonal diseases.
  • the medicaments of the invention can be used for the treatment of allergic conditions, in particular seasonal pollinosis or seasonal or non allergic rhinitis due to pollen or house dust.
  • These drugs constitute desensitization adjuvants which are particularly advantageous at the start of desensitization by reinforcing and supplementing desensitization, by allowing the amounts of allergens injected to progress more rapidly and by avoiding the use of corticosteroid therapy.
  • This passive immunotherapy does not interfere with active immunotherapy (desensitization).
  • the injection of anti-allergen IgG antibodies does not prevent the rise of IgG antibodies observed during desensitization.
  • the drugs of the invention can therefore be used in conjunction with desensitization treatments, whether old or recent.
  • the advantage of the medicaments of the invention is more important during a resurgence of allergic manifestations after a viral disease having led to a temporary functional immuno-depression, of aperiodic spasmodic coryza and of rhino-tracheobron- allergic chites due in particular to house dust.
  • the medicaments of the invention are injectable intramuscularly.
  • sterile, nonpyrogenic, non-toxic preparations of pH 6, 4 to 7.2 approximately, advantageously containing around 100 to 170 g / l of total protein.
  • Their antibody activity is greater than 15 u / ml as anti-pollen and greater than 15 u / ml as anti-mites.
  • the electrophoretic purity of these preparations is greater than approximately 90% and the osmolarity is of the order of 250 to 500 mOsm / l.
  • solutions advantageously contain an antiseptic, preservative agent such as sodium ercurothiolate. Doses less than or equal to 1 for About 10,000 of this agent is found to be suitable. They also contain a solubilising and stabilizing agent such as glycocolle. Appropriate glycocolle concentrations are of the order of 18 to 25 g / l. The sodium and chloride contents> are approximately
  • the dosages which can be used are given below in the case of: a) moderate allergic manifestations, and b) slight immunodeficiencies of immunomodulation disorders or allergic manifestations severe: a)
  • the attending physician will reserve the right, if the case arises, to modify the above dosage, in accordance with specific cases.
  • Example n'1 process for obtaining a fraction of I ⁇ G according to the invention
  • the precipitate A. which contains the fractions I + II + III is in the form of a paste. 2) Caprylic fractionation a) re-solution
  • the precipitate is redissolved in an acetic buffer / acetate mixture of pH 4.8-4.9 obtained by mixing a 0.05 M solution of acetic acid and a 0.05 M solution of sodium acetate.
  • 9 l of buffer are used per kg of dough. It serves ob ⁇ progressive dilaceration of the pulp in the buffer at a temperature of 20 to 22 ° C.
  • the mixture is left for about 2 hours at rest, for the purpose of homogenization.
  • the protein level is around 25 g / l.
  • caprylic precipitation ⁇ addition of caprylic acid.
  • caprylic acid (99% purity - ref. 193- erck) are added, with stirring. After the end of the introduction, the stirring is continued for another 45 minutes.
  • an emulsion containing 20 g / l of caprylic acid (99% purity - ref. 193-Merck) is added, with stirring, to the protein solution. Stirring is continued until the appearance of a protein precipitate, the duration of this operation being in this case reduced. ⁇ : centrifugation.
  • the pH of the supernatant is adjusted to 6.5 using 1N NaOH.
  • ⁇ addition of tricalcium phosphate.
  • Tricalcium phosphate is added in an amount of 2 g / l of supernatant and the mixture is stirred for 30 minutes. ⁇ : centrifugation.
  • the phosphate is removed by centrifugation carried out under the above conditions. ⁇ : filtration.
  • the supernatant is filtered on plates containing activated carbon (for example plates of Seitz AKS4).
  • the operation lasts approximately 1 hour.
  • ⁇ pH adjustment.
  • Ethanol qs 30% is added to the solution precooled to 0 # C. During the addition of alcohol, we - lower the temperature to -12 * C. According to an alternative embodiment of the method according to the invention, this precipitation can be replaced by an ultrafiltration as described below in step ⁇ . ⁇ : centrifugation.
  • the solution is first centrifuged with a flow rate of 30 l / h (a Sharples AS 16 device is used).
  • the precipitate is redissolved at a rate of 5 l / kg in 60 l of NaCl buffer: 8 g / 1, glycine: 4.5 g / 1 (in the case of dialysis) or 11 g / 1 (in the case of l 'ultra ⁇ filtration).
  • the pH is adjusted to 7.5 if necessary.
  • the protein level is around 50 g / l. ⁇ -. dialysis or ultra iltration.
  • the solution previously filtered, is dialyzed against NaCl (4.5 g / 1) at + 4 "C for approximately 10 hours.
  • the protein level (approximately 140 g / 1) is checked.
  • the osmolarity of the solution is adjusted to approximately 300 mOsm / 1 using glycine (11 g / 1).
  • Sodium merthiolate (1 p 10 000) is added, then filtered sté ⁇ rilly on a filter with pore diameters of 0.22 ⁇ .
  • the protein level Prior to distribution in a syringe, the protein level is adjusted to a minimum of 100 g / l (in practice 105 to 100 g / l).
  • the doses of salts, glycocolle and merthiolate are supplemented according to dilution, then they are filtered sterile. These preparations are preferably stored at a temperature of the order of +2 to +6 * C.
  • the product obtained in step ⁇ described above is directly filtered on plates containing activated carbon, according to the method described in step ⁇ above, without going through steps ⁇ and ⁇ above, in particular when the supernatant is not present in a milky or opalescent form.
  • IgG 4 is constituted by a pool of 50 healthy blood donors whose IgG 4 level is 0.4 g / 1.
  • the IgG preparations according to the invention contain on average 85% of IgG, 10% of IgA and 5% of IgM. Their IgG 4 level is greater than or equal to 4
  • the control plasma pool contained 3% IgG 4.
  • Anti-allergenic antibodies are measured by a radioimmunological test in solid phase.
  • Nitro-cellulose disks on which the allergen extracts have been covalently coupled are incubated with dilutions of seru s or immunoglobulins. After several washes, the discs are incubated with the staphylococcal protein labeled with iodine 125 (Department of Radioisotopes. CNTS).
  • Protein A binds with a high affinity to the Fc part of 93% of human IgG. After 18 h of contacts, the unbound protein A is eluted by a series of washes.
  • the amount of protein A linked to IgG is measured by a gamma radiation counter and expressed in% relative to the total amount of radioactivity introduced into the reaction.
  • the allergens extracted from grass pollen are absorbed on microtiter plates and then brought into contact with solutions of the invention.
  • the presence of IgG fixed by allergens is revealed by an immunoglobulin labeled with alkaline phosphatase or peroxidase.
  • Sigmoidal curves are obtained by expressing the optical density as a function of the dilution of the solutions.
  • the activity of a serum pool of 100 donors (2 ml of each serum) serves as a reference and contains by definition 1 unit / ml. It is measured with dilutions of serum between 1/200 and 1/25. A reference curve is established between the dilution of the serum pool and the percentage of binding of protein A-
  • the therapeutic gamma globulin solutions are diluted so as to obtain a percentage of protein fixation corresponding to dilutions of approximately 1/100 of the pool of sera.
  • IgG antibodies are assayed for their activity vis-à-vis at least one extract of grass pollen (phleum pratense, or Dactylis glomerata) and an extract of mites (Der atophagoids pteronyssinus).
  • the anti-allergenic blocking antibody titer of the IgG preparations according to the invention is at least 15 u / ml anti-pollen and 15 u / ml anti-mites.
  • the average of the anti-pollen activity of 16 batches of preparation according to the invention is 23 u / ml, the level of anti-mites being identical or slightly higher Rate of polymers Permeation chromatography is carried out with a gel separating PM proteins between 20,000 and 350,000 daltons.
  • AcA 34 (LKB) 100 g of proteins are deposited in 2.5 ml.
  • the elution rate is 20 ml / h.
  • the peaks are detected at 280 mm (measurement of the optical density " ).
  • the surface is evaluated by plani etry. The results obtained show that the polymer levels of the IgG preparations of the invention are greater than 10% (average of 5 batches 15%) while the fractions of immunoglobulins fractionated by alcohol Q rarely exceed 5% (average of 13 batches 4.5%).
  • Example No. 2 results of testing cli ⁇ lunches made with solutions prepared according 1'invention.
  • a series of intramuscular injections of preparation according to the invention was carried out, at a rate of 20 ml / week, for 5 weeks.
  • the preparation has been used in allergic subjects, without prejudging the original link of the allergy with pollens or mites.
  • Activity was assessed by daily observation of the symptoms of the disease.
  • Clinical manifestations (nasal, ocular and respiratory) were noted.
  • Out of 33 patients subjected to this treatment 15 very good results were obtained, 10 good results, 8 failures were observed.
  • the placebo group differs from the group of patients treated with the preparation according to the invention by a statistically lower "symptom score" during the last three weeks of treatment and by significantly lower drug consumption.
  • the various tests carried out have shown that the tolerance of the IgG preparations according to the invention is always satisfactory and that an improvement in the clinical signs of the disease has been observed.

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Abstract

Les préparations à base d'IgG de l'invention présentent un titre en IgG 4 d'au moins 4% et un taux de chaînes polymère d'au moins 10%, leur titre en anticorps anti-allergènes anti-pollens et anti-acariens étant d'au moins 4 u/ml de préparation.The IgG preparations of the invention have an IgG 4 titer of at least 4% and a level of polymer chains of at least 10%, their titer of anti-allergen anti-pollen and anti-mite antibodies being at least 4 u / ml of preparation.

Description

Préparations d'iπuαunoglobulines présentant des titres élevés en anticorps bloquants.Iπuαunoglobulin preparations with high titers of blocking antibodies.
L'invention a pour objet des préparations d'im- munoglobulines présentant notamment des titres élevés en anticorps bloquants antiallergènes, leur préparation et leurs applications pour le traitement d'allergies.The subject of the invention is preparations of immunoglobulins having in particular high titers of antiallergenic blocking antibodies, their preparation and their applications for the treatment of allergies.
Les manifestations allergiques sont liées à la 0 présence d'anticorps de type IgE ou réagines présentes à la surface des cellules effectrices de 1'immunité et dans le sang circulant.Allergic manifestations are linked to the presence of antibodies of the IgE or reactin type present on the surface of the effector cells of the immunity and in the circulating blood.
Ces anticorps IgE spécifiques des allergènes sont présents à des taux élevés chez les sujets sensibi¬ 5 lisés. Les anticorps de type IgG dirigés contre ces mê¬ mes allergènes exercent un effet protecteur vis-à-vis des réactions anaphylactiques nées de la rencontre IgE et allergènes . Ces anticorps IgG sont appelés anticorps* bloquants. Leur présence peut être mise en évidence dans 0 le sérum des sujets ne présentant pas de réaction aller¬ gique. Leur taux s'élève lors des cures de désensibili¬ sation par des extraits d'allergènes (pollens, acariens, ou venins d'hyménoptères), leur élévation étant concomi¬ tante avec la diminution des manif stations cliniques. 5These allergen-specific IgE antibodies are present at high levels in sensitized subjects. Antibodies of the IgG type directed against these same allergens exert a protective effect with respect to the anaphylactic reactions arising from the meeting of IgE and allergens. These IgG antibodies are called blocking antibodies * . Their presence can be demonstrated in the serum of subjects who do not have an allergic reaction. Their rate rises during desensitization cures with allergen extracts (pollens, mites, or venoms of hymenoptera), their rise being concomitant with the decrease in clinical manifests. 5
Diverses préparations à base d'IgG sont utili¬ sées actuellement pour diminuer les réactions allergi¬ ques. Ces préparations sont obtenues par extraction à partir de plasma humain. La méthode d' extraction de 0 Kistler P., Nitschmann H. et Lergier . décrite dans Helvetica Chimica Acta (1954), 37, p.866-873, modifiée par Kistler P. et Nitschmann H. comme décrit dans Vox Sanguinis 1962, t.7, Vol.4, P.414-424, est généralement utilisée. 5 Cette méthode, basée sur le fractionnement al¬ coolique, comprend l'addition à du plasma d'alcool, jusqu'à une concentration finale en alcool de 19 ou 22 ., à un pH de 5,85.Various preparations based on IgG are currently used to reduce allergic reactions. These preparations are obtained by extraction from human plasma. The extraction method of 0 Kistler P., Nitschmann H. and Lergier. described in Helvetica Chimica Acta (1954), 37, p.866-873, modified by Kistler P. and Nitschmann H. as described in Vox Sanguinis 1962, t.7, Vol.4, P.414-424, is generally used . 5 This method, based on alcoholic fractionation, comprises adding alcohol to the plasma, up to a final alcohol concentration of 19 or 22, at a pH of 5.85.
Le précipité qui se forme, app >elé précipité £, renferme les fractions I (fibrinogene, facteur VIII) et II + III (IgG, facteurs II, VII, IX, X et les a et J globulines) .The precipitate which forms, called the precipitate, contains the fractions I (fibrinogen, factor VIII) and II + III (IgG, factors II, VII, IX, X and the and J globulins).
Les préparations à base d'IgG utilisées en thé¬ rapeutique sont généralement obtenues à partir des frac¬ tions II + III.The preparations based on IgG used in therapy are generally obtained from fractions II + III.
En étudiant ce fractionnement, les inventeurs ont constaté qu'en traitant dans des conditions détermi¬ nées l'ensemble du précipité A,, il est possible de sé¬ lectionner des préparations à base d'IgG à titre plus élevé en anticorps bloquants anti-allergènes, permettant de réduire avec une plus grande efficacité les manifes¬ tations allergiques.By studying this fractionation, the inventors have found that by treating under set conditions the entire precipitate A ,, it is possible to select preparations based on IgG with a higher titer of anti-blocking antibodies. allergens, making it possible to reduce allergic manifestations with greater efficiency.
L'invention a donc pour but -de fournir de nou¬ velles préparations à base d'IgG possédant des propri¬ étés immunomodulatrices anti-allergènes.The invention therefore aims to provide new preparations based on IgG having immunomodulatory anti-allergenic properties.
Elle vise également à fournir un procédé permet¬ tant de sélectionner de telles préparations à partir de plasma.It also aims to provide a method allowing both to select such preparations from plasma.
Elle vise, en outre, les applications de ces préparations pour le traitement de manifestations al¬ lergiques par immunothérapie passive.It further relates to the applications of these preparations for the treatment of allergic manifestations by passive immunotherapy.
Les préparations à base d'IgG selon l'inven¬ tion sont caractérisées en ce qu'elles présentent un ti¬ tre en IgG de la sous-classe 4, ou IgG 4, d'au moins en¬ viron 4 % et des titres en anticorps bloquants anti-al¬ lergènes, en particulier anti-pollens et anti-acariens d'au moins environ 20 u/ml de préparation environ, géné¬ ralement d'au moins environ 15 u/ml. Selon un autre aspect, les préparations à base d'IgG de l'invention présentent, outre un titre en IgG 4 d'au moins environ 4 **, un taux de chaînes polymères d'au moins environ 10 % .The preparations based on IgG according to the invention are characterized in that they have a titer in IgG of subclass 4, or IgG 4, of at least en¬ about 4% and in anti-allergenic blocking antibodies, in particular anti-pollen and anti-mite at least about 20 u / ml of preparation approximately, generally at least about 15 u / ml. According to another aspect, the IgG preparations of the invention have, in addition to an IgG 4 titer of at least about 4 **, a level of polymer chains of at least about 10%.
Par polymère, on entend dans ce qui suit un en¬ chaînement de motifs monomères d'IgG, quel que soit leur mode d'interaction.The term “polymer” is understood to mean in the following a chain of IgG monomer units, whatever their mode of interaction.
Selon encore un autre aspect, les préparations à base d'IgG de l'invention présentent en plus de leur ti¬ tre en IgG 4 d'au moins environ 4 % , et de leur taux en chaînes polymères d'au moins envrion 10 % , des titres en anticorps bloquants anti-allergènes, en particulier an¬ ti-pollens et anti-acariens d'environ 20 u/ml de prépa¬ ration, généralement d'au moins environ 15 u/ml.According to yet another aspect, the IgG-based preparations of the invention have, in addition to their titer in IgG 4 of at least about 4%, and their level in polymer chains of at least about 10% , anti-allergenic blocking antibody titers, in particular anti-pollen and anti-mite approximately 20 u / ml of preparation, generally at least approximately 15 u / ml.
Les préparations ci-dessus, selon une disposi¬ tion de l'invention renferment en moyenne 80 à 90 % , no¬ tamment 85 % environ d'IgG, 7 à 15 % , notamment 10 % en¬ viron d'IgA, et 3 à 8 ., notamment 5 % environ d'Ig .The above preparations, according to a disposition of the invention contain on average 80 to 90%, in particular approximately 85% of IgG, 7 to 15%, in particular 10% in approximately IgA, and 3 to 8., especially around 5% of Ig.
Dans la suite de la description, l'expression "préparations d'.IgGH désigne des préparations à base d'IgG.In the following description, the expression "preparations of IgG H designates preparations based on IgG.
L'invention vise également un procédé de frac¬ tionnement de préparations d'IgG répondant aux caracté¬ ristiques définies ci-dessus.The invention also relates to a process for the fractionation of IgG preparations meeting the characteristics defined above.
Conformément à ce procédé, on soumet les frac¬ tions d'IgG obtenues par précipitation alcoolique de plasma humain à l'action d'un acide gras linéaire satu¬ ré, de préférence de C4 à C12, et on récupère la partie soluble.In accordance with this process, the fractions of IgG obtained by alcoholic precipitation of human plasma are subjected to the action of a saturated linear fatty acid, preferably from C4 to C12, and the soluble part is recovered.
On notera que le plasma humain peut subir au préalable le traitement suivant : le plasma congelé est réchauffé progressivement à moins de +5*C. Il se présen¬ te sous forme d'une solution contenant un précipité. Le cryoprécipite contient une part importante notamment du Facteur VIII, de fibrinogene, de la fibronectine. Le surnageant du cryoprécipite peut être employé à la place de plasma pour la préparation du précipité A,.Human plasma can be noted that the following treatment beforehand: frozen plasma is gradually warmed to less than 5 * C. It présen¬ you as a solution containing a precipitate. The cryoprecipite contains an important part in particular Factor VIII, fibrinogen, fibronectin. The supernatant of cryoprecipite can be used in place of plasma for the preparation of precipitate A ,.
Selon une disposition avantageuse, la solution recueillie est soumise à au moins une étape de purifica¬ tion.According to an advantageous arrangement, the solution collected is subjected to at least one purification step.
Dans un mode préféré de réalisation de 1'inven¬ tion, les fractions d'IgG utilisées comme matière de dé¬ part sont du type de celles résultant de fractionnement alcoolique de plasma humain à l'aide d'éthanol à 95 % , en quantité suffisante pour une concentration finale de 19 à 22 % , à pH 5,85, avec abaissement graduel de la température jusqu'à - 10*C.In a preferred embodiment of the invention, the IgG fractions used as starting material are of the type of those resulting from alcoholic fractionation of human plasma using 95% ethanol, in quantity sufficient for a final concentration of 19 to 22%, at pH 5.85, with gradual lowering of the temperature down to - 10 * C.
Ce type de fractionnement alcoolique est décrit- par Kistler et Nitschmann dans la référence donnée ci- dessus.This type of alcoholic fractionation is described by Kistler and Nitschmann in the reference given above.
L'addition d'alcool au plasma conduit à la for¬ mation d'un précipité A, qui renferme les fractions I + II + III.The addition of alcohol to the plasma leads to the formation of a precipitate A, which contains the fractions I + II + III.
Le précipité A est remis en solution aux fins du fractionnement à l'aide de l'acide gras saturé.Precipitate A is redissolved for the purposes of fractionation using saturated fatty acid.
On utilise avantageusement une solution tampon de pH 4, 5 à 5,5 de préférence voisin de 4,8, à une tem¬ pérature comprise entre 15 et 30*C, de préférence 22*C.Is advantageously used a buffer solution of pH 4, 5 to 5.5 preferably close to 4.8, at a tem¬ perature of between 15 and 30 ° C, preferably 22 ° C.
L'acide gras saturé est ajouté à raison d'envi¬ ron 10 à 50 g/1, de préférence 20 g/1 à la solution tam¬ pon renfermant le précipité A, pour une concentration de cette solution en protéines de l'ordre de 20 à 30 g/1, de préférence d'environ 25 g/1.The saturated fatty acid is added at a rate of approximately 10 to 50 g / l, preferably 20 g / l to the tam¬ pon solution containing precipitate A, for a concentration of this solution in proteins of the order from 20 to 30 g / 1, preferably about 25 g / 1.
Avantageusement, l'acide gras est ajouté sous forme d'une émulsion dans la solution tampon. Le précipité formé est recueilli, par exemple, par centrifugation, aux fins d'autres utilisations in¬ dustrielles. Le surnageant qui renferme les fractions recherchées est récupéré.Advantageously, the fatty acid is added in the form of an emulsion to the buffer solution. The precipitate formed is collected, for example, by centrifugation, for the purposes of other industrial uses. The supernatant which contains the desired fractions is recovered.
Un acide gras particulièrement préféré, per¬ mettant de protéger avec une grande sélectivité des IgG est constitué par l'acide caprylique.A particularly preferred fatty acid, making it possible to protect IgG with great selectivity, consists of caprylic acid.
Compte tenu des applications thérapeutiques des préparations d'IgG de l'invention, la solution d'acide gras obtenue, plus spécialement la solution caprylique, est soumise avantageusement à au moins une étape de pu¬ rification.Given the therapeutic applications of the IgG preparations of the invention, the fatty acid solution obtained, more especially the caprylic solution, is advantageously subjected to at least one pu¬ rification step.
Il s'agit, en particulier, d'éliminer l'acide gras lié aux protéines et 1'acide gras en excès.This is, in particular, to eliminate the fatty acid bound to proteins and the excess fatty acid.
A cet égard, il est avantageux d'utiliser selon une variante un adjuvant doté d'une affinité pour les acides gras, notamment, un sel tel que le phosphate tri- calcique. Auparavant, le pH est ajusté avantageusement à environ 6,5.In this regard, it is advantageous to use, according to a variant, an adjuvant endowed with an affinity for fatty acids, in particular, a salt such as tri-calcium phosphate. Previously, the pH is advantageously adjusted to about 6.5.
Des concentrations de l'ordre de 1 à 5 g/1 d'ad¬ juvant, notamment de l'ordre de 2 à 4 s'avèrent satis¬ faisantes pour effectuer la séparation recherchée.Concentrations of the order of 1 to 5 g / 1 of adjuvant, in particular of the order of 2 to 4, prove to be satisfactory for carrying out the desired separation.
L'adjuvant en excès est éliminé, par exemple, par centrifugation et la solution ainsi clarifiée est récupérée et filtrée par exemple sur du charbon actif. selon une autre variante, la solution d'acide gras est directement filtrée, par exemple, sur du char¬ bon actif sans procéder à l'étape d'addition de phosphate tricalcique.The excess adjuvant is removed, for example, by centrifugation and the solution thus clarified is recovered and filtered, for example on activated carbon. according to another variant, the fatty acid solution is directly filtered, for example, on active char¬ without carrying out the step of adding tricalcium phosphate.
D'autres étapes de purification permettent de parfaire, si on le souhaite, la séparation entre l'acide gras et la préparation d'IgG de l'invention.Other purification steps make it possible to perfect, if desired, the separation between the fatty acid and the IgG preparation of the invention.
Des méthodes appropriées comprennent la préci¬ pitation alcoolique ou encore un procédé de séparation basé sur la différence de taille entre les Ig et les acides gras tels que la dialyse, 1'ultrafiltration ou l'ultrafiltration tangentielle.Appropriate methods include alcoholic precipitation or a separation process based on the size difference between Ig and fatty acids such as dialysis, ultrafiltration or tangential ultrafiltration.
Lorsqu'on effectue une précipitation alcoolique, le pH de la solution traitée est avantageusement ajusté à environ 7.When alcoholic precipitation is carried out, the pH of the treated solution is advantageously adjusted to approximately 7.
Des conditions satisfaisantes pour la précipita¬ tion alcoolique comprennent l'addition d'alcool, avanta¬ geusement d'éthanol jusqu'à une concentration finale d'environ 20 à 40 % , notamment de l'ordre de 30 % , à température inférieure à l'ambiante, de préférence sur la solution refroidie à environ 0*C dont la température est abaissée jusqu'à -10*C à -15*C, en particulier -12*C environ durant l'addition d'alcool. Le précipité formé est recueilli. La solution avantageusement clarifiée d'IgG évoquée ci-dessus ou le précipité recueilli à 1'issue de la précipitation alcoolique sont avantageuse¬ ment traités afin de disposer de préparations i jecta- bles-Satisfactory conditions for alcoholic precipitation include the addition of alcohol, advantageously ethanol, to a final concentration of approximately 20 to 40%, in particular of the order of 30%, at a temperature below ambient, preferably on the solution cooled to about 0 ° C, the temperature is lowered to -10 ° C to -15 ° C, especially -12 * C. during the addition of alcohol. The precipitate formed is collected. The clarified solution advantageously IgG mentioned above or the precipitate collected 1'issue of alcohol precipitation are avantageuse¬ ment processed to have preparations jecta- i ble -
Ce traitement comprend une opération du type de la dialyse ou encore de l'ultrafiltration.This treatment includes an operation such as dialysis or ultrafiltration.
De bonnes conditions d'injecti<ζn par voie intra¬ musculaire sont réalisées avec des préparations renfer- mant environ 100 g/1 de protéines. Ces concentrations sont obtenues par exemple par dialyse contre NaCl à rai¬ son de 3 à 7 g/1 de NaCl, de préférence d'environ 4,5 g/1, à une température inférieure à l'ambiante, avanta¬ geusement d'environ 4*C. L'osmolarité de la solution est ajustée à envi¬ ron 250 à 500 mOsM/l, notamment à environ 300 m0sm/l, à l'aide, par exemple, d'un agent solubilisant et stabili¬ sant tel que le glycocolle.Good conditions for injecti <conditionsn intramuscularly are achieved with preparations containing about 100 g / l of protein. These concentrations are obtained for example by dialysis against NaCl because of 3 to 7 g / 1 of NaCl, preferably around 4.5 g / 1, at a temperature below ambient, advantageously about 4 * C. The osmolarity of the solution is adjusted to about 250 to 500 mOsM / l, in particular to about 300 mOsm / l, using, for example, a solubilizing and stabilizing agent such than the glycocolle.
Grâce à ces dispositions, il est possible de sé- lectionner, à partir de l'ensemble du précipité les préparations d'IgG de grand intérêt. Les titres élevés en anticorps bloquants antial- lergènes des préparations de l'invention et, selon un autre aspect, leur teneur élevée en polymère d'IgG les rendent particulièrement appropriés pour le traitement des allergies. Leur intérêt est encore accru en raisonThanks to these provisions, it is possible to select, from the entire precipitate, the IgG preparations of great interest. The high titers of anti-allergenic blocking antibodies of the preparations of the invention and, according to another aspect, their high content of IgG polymer make them particularly suitable for the treatment of allergies. Their interest is further increased due
« de leur tolérance élevée."Of their high tolerance.
L'invention vise donc également l'application des préparations définies ci-dessus, en tant que princi¬ pes actifs de médicaments.The invention therefore also relates to the application of the preparations defined above, as active principles of medicaments.
Les expérimentations cliniques en double aveugle réalisées avec les préparations de l'invention, injec¬ tées à un patient sensibilisé, ont montré l'efficacité de ces préparations dans une immunothérapie passive et en partie ont permis de diminuer de manière importante les manifestations allergiques observées dans les pol- linoses saisonnières.Double-blind clinical experiments carried out with the preparations of the invention, injected into a sensitized patient, have shown the efficacy of these preparations in passive immunotherapy and in part have made it possible to significantly reduce the allergic manifestations observed in seasonal diseases.
Les médicaments de 1' invention sont utilisables pour le traitement des affections allergiques, en parti¬ culier des pollinoses saisonnières ou des rhinites al¬ lergiques saisonnières ou non, dues aux pollens ou aux poussières de maison.The medicaments of the invention can be used for the treatment of allergic conditions, in particular seasonal pollinosis or seasonal or non allergic rhinitis due to pollen or house dust.
Chez les sujets atteints de rhumes des foins, l'injection répétée à des intervalles réguliers, permet de prévenir ou d'atténuer les manifestations cliniques de l'allergie, qu'elles soient nasales, oculaires ou respiratoires.In subjects with hay fever, repeated injection at regular intervals can prevent or reduce the clinical manifestations of the allergy, whether nasal, ocular or respiratory.
Ces médicaments constituent des adjuvants de la désensibilisation particulièrement intéressants en début de désensibilisation en renforçant et en complétant la désensibilisation, en permettant une progression plus rapide des quantités d'allergènes injectés et en évitant le recours à la corticothérapie. Cette immunothérapie passive n'interfère pas avec l'immunothérapie active (désensibilisation). L'in¬ jection d'anticorps IgG anti-allergènes n'empêche pas la montée des anticorps IgG observée lors de la désensibi¬ lisation. Les médicaments de l'invention peuvent donc être utilisés conjointement avec les cures de désensibi¬ lisation qu'elles soient anciennes ou récentes.These drugs constitute desensitization adjuvants which are particularly advantageous at the start of desensitization by reinforcing and supplementing desensitization, by allowing the amounts of allergens injected to progress more rapidly and by avoiding the use of corticosteroid therapy. This passive immunotherapy does not interfere with active immunotherapy (desensitization). The injection of anti-allergen IgG antibodies does not prevent the rise of IgG antibodies observed during desensitization. The drugs of the invention can therefore be used in conjunction with desensitization treatments, whether old or recent.
Ils sont également utilisables en cas d'échec de désensibilisation ou de désensibilisation tardive.They can also be used in the event of failure of desensitization or late desensitization.
L'intérêt des médicaments de l'invention est de plus important lors d'une recrudescence des manifesta¬ tions allergiques après une maladie virale ayant entraî¬ né une immuno-dépression fonctionnelle temporaire, de coryza spasmodique apériodique et de rhino-trachéo-bron- chites allergiques dues en particulier aux poussières de maison.The advantage of the medicaments of the invention is more important during a resurgence of allergic manifestations after a viral disease having led to a temporary functional immuno-depression, of aperiodic spasmodic coryza and of rhino-tracheobron- allergic chites due in particular to house dust.
Les médicaments de l'invention sont injectables par voie intramusculaire.The medicaments of the invention are injectable intramuscularly.
Ils sont présentés avantageusement sous la forme de seringues, auto-injectables par voie intramusculaire contenant, par exemple, 5 ou 10 ml d'une solution à 100 g par litre de préparation d'IgG selon l'invention.They are advantageously presented in the form of syringes, self-injectable by the intramuscular route containing, for example, 5 or 10 ml of a 100 g solution per liter of IgG preparation according to the invention.
Des préparations d'IgG préférées répondent aux caractéristiques suivantes :Preferred IgG preparations have the following characteristics:
Il s'agit de préparations stériles, apyrogènes, atoxiques de pH 6, 4 à 7,2 environ, renfermant avanta¬ geusement de l'ordre de 100 à 170 g/1 de protéines tota¬ les. Leur activité en anticorps est supérieure à 15 u/ml en tant qu'anti-pollens et supérieure à 15 u/ml en tant qu'anti-acariens. La pureté électrophorétique de ces préparations est supérieure à 90 % environ et l'osmola- rité est de l'ordre de 250 à 500 mOsm/l.These are sterile, nonpyrogenic, non-toxic preparations of pH 6, 4 to 7.2 approximately, advantageously containing around 100 to 170 g / l of total protein. Their antibody activity is greater than 15 u / ml as anti-pollen and greater than 15 u / ml as anti-mites. The electrophoretic purity of these preparations is greater than approximately 90% and the osmolarity is of the order of 250 to 500 mOsm / l.
Ces solutions renferment avantageusement un agent antiseptique, conservateur tel que le ercurothio- late de sodium. Des doses inférieures ou égales à 1 pour 10 000 environ de cet agent s'avèrent appropriées. Elles comportent, en outre, un agent de solubilisatioπ et de stabilisation tel que le glycocolle. Des concentrations appropriées en glycocolle sont de l'ordre de 18 à 25 g/1. Les teneurs en sodium et en chlorure > sont d'environThese solutions advantageously contain an antiseptic, preservative agent such as sodium ercurothiolate. Doses less than or equal to 1 for About 10,000 of this agent is found to be suitable. They also contain a solubilising and stabilizing agent such as glycocolle. Appropriate glycocolle concentrations are of the order of 18 to 25 g / l. The sodium and chloride contents> are approximately
7 g/1.7 g / 1.
A titre d'exemple, on donne ci-après les posolo- gies utilisables dans le cas : a) de manifestations al¬ lergiques moyennes, et b) de déficits immunitaires lé¬ gers de troubles de 1'immunomodulation ou de manifes¬ tations allergiques sévères : a)By way of example, the dosages which can be used are given below in the case of: a) moderate allergic manifestations, and b) slight immunodeficiencies of immunomodulation disorders or allergic manifestations severe: a)
-poids du malade inférieur à 60 kg : 2 injec¬ tions de 5 ml par semaine pendant trois semaines,-weight of the patient less than 60 kg: 2 injections of 5 ml per week for three weeks,
-poids du malade supérieur à 60 kg : 2 injec¬ tions de 10 ml par semaine pendant trois semaines. b)-weight of the patient greater than 60 kg: 2 injections of 10 ml per week for three weeks. b)
-poids du malade inférieur à 60 kg : 3 à 4 in¬ jections de 5ml par semaine pendant trois semaines,-weight of the patient less than 60 kg: 3 to 4 injections of 5ml per week for three weeks,
-poids du malade supérieur à 60 kg : 3 à 4 in¬ jections de 10 ml par semaine pendant trois semaines.-weight of the patient greater than 60 kg: 3 to 4 injections of 10 ml per week for three weeks.
Le médecin traitant se réservera, le cas éché¬ ant, la possibilité de modifier la posologie ci-dessus, en onction de cas particuliers.The attending physician will reserve the right, if the case arises, to modify the above dosage, in accordance with specific cases.
Exemple n'1 : procédé d'obtention d'une fraction d'IσG selon l'inventionExample n'1: process for obtaining a fraction of IσG according to the invention
1 ) Préparation de la matière de départ par frac¬ tionnement alcoolique à partir du plasma.1) Preparation of the starting material by alcoholic fractionation from the plasma.
On décongèle de manière ménagée du plasma pro¬ venant de poches ou de flacons de poolages, ou des po¬ ches individuelles conservées à -40*C.Were thawed in a controlled manner the pro¬ plasma from pockets or flasks poolages, or stored po¬ individual tasks at -40 ° C.
On réchauffe progressivement par passage en chambre froide à -10"C et 0*C puis on décongèle dans un bain- marie à +3*C, de telle sorte que la température finale demeure inférieure à +3*C. Après vérification du taux de protéines, du pH et examen bactériologique, et élimination du cryopréci¬ pite, on effectue un fractionnement par 1'éthanol selon la méthode de Nitschmann- Kistler dont il est question ci-dessus.It is gradually warmed by passing through a cold room to -10 "C and 0 * C and then thawed in a water bath at +3 * C, so that the final temperature remains below +3 * C. After verification of the protein level, of the pH and bacteriological examination, and elimination of the cryoprecipitate, an ethanol fractionation is carried out according to the Nitschmann-Kistler method which is discussed above.
On rappelle que les étapes principales de ce fractionnement alcoolique comprennent : l'ajustage du taux de protéines à 50 g/1 à l'aide d'une solution de chlorure de sodium à 0,5 g % , la précipitation des immunoglobulines à pH 5,85 par = 1'éthanol à 95 % en quantité suffisante pour une concentration finale de 19 % (ou 22 % ) en faisant graduellement baisser la température jusqu'à -10*C,It will be recalled that the main stages of this alcoholic fractionation include: adjusting the protein level to 50 g / l using a sodium chloride solution at 0.5 g%, precipitation of the immunoglobulins at pH 5 85 = 1'éthanol by 95% in sufficient quantity for a final concentration of 19% (or 22%) by gradually lowering the temperature to -10 ° C,
- la centrifugation et la récupération du préci¬ pité constituant les immunoglobulines (précipité A) , et, le cas échéant,- centrifugation and recovery of the precipitate constituting the immunoglobulins (precipitate A), and, where appropriate,
- la congélation à -25*C.- freezing at -25 * C.
Le précipité A. ui renferme les fractions I + II + III se présente sous forme de pâte. 2) Fractionnement caprylique a) remise en solutionThe precipitate A. which contains the fractions I + II + III is in the form of a paste. 2) Caprylic fractionation a) re-solution
Le précipité est remis en solution dans un mé¬ lange tampon acétique/acétate de pH 4,8-4,9 obtenu par mélange d'une solution 0,05 M d'acide acétique et d'une solution 0,05 M d'acétate de sodium.The precipitate is redissolved in an acetic buffer / acetate mixture of pH 4.8-4.9 obtained by mixing a 0.05 M solution of acetic acid and a 0.05 M solution of sodium acetate.
On utilise 9 1 de tampon par kg de pâte. On ob¬ serve une dilaceration progressive de la pâte dans le tampon, à une température de 20 à 22*C.9 l of buffer are used per kg of dough. It serves ob¬ progressive dilaceration of the pulp in the buffer at a temperature of 20 to 22 ° C.
On laisse le mélange environ 2 heures au repos, aux fins d'homogénéisation.The mixture is left for about 2 hours at rest, for the purpose of homogenization.
Le taux de protéines est d'environ 25 g/1. b) précipitation caprylique α : addition d'acide caprylique.The protein level is around 25 g / l. b) caprylic precipitation α: addition of caprylic acid.
On ajoute, sous agitation, 20 g/1 d'acide caprylique (pureté 99 % - réf. 193- erck). Après la fin de l'introduction, on continue l'agitation pendant enco¬ re 45 minutes.20 g / l of caprylic acid (99% purity - ref. 193- erck) are added, with stirring. After the end of the introduction, the stirring is continued for another 45 minutes.
Selon une variante de réalisation, on ajoute, sous agitation, à la solution de protéines, une emulsion renfermant 20 g/1 d'acide caprylique (pureté 99 % - réf. 193-Merck). On continue l'agitation jusqu'à l'apparition d'un précipité de protéines, la durée de cette opération étant dans ce cas réduite. β : centrifugation.According to an alternative embodiment, an emulsion containing 20 g / l of caprylic acid (99% purity - ref. 193-Merck) is added, with stirring, to the protein solution. Stirring is continued until the appearance of a protein precipitate, the duration of this operation being in this case reduced. β: centrifugation.
Sans laisser la suspension se refroidir, on cen¬ trifuge avec un débit d'environ 50 1/h (appareil : Shar- ples AS 16). Le précipité obtenu (environ 30 kg pour 40 kg), contenant des glycoprotéines et de l'albumine, peut être recueilli et réutilisé pour d'autres applica¬ tions industrielles, par exemple comme source d'albumi¬ ne. On recueille le surnageant (environ 360 à 380 1). γ : ajustement du pH.Without allowing the suspension to cool, it is centrifuged with a flow rate of approximately 50 l / h (device: Sharples AS 16). The precipitate obtained (approximately 30 kg for 40 kg), containing glycoproteins and albumin, can be collected and reused for other industrial applications, for example as a source of albumen. The supernatant is collected (approximately 360 to 380 l). γ: pH adjustment.
On ajuste le pH du surnageant à 6,5 à l'aide de NaOH 1N. δ : addition du phosphate tricalcique.The pH of the supernatant is adjusted to 6.5 using 1N NaOH. δ: addition of tricalcium phosphate.
On ajoute du phosphate tricalcique à raison de 2 g/l de surnageant et on soumet à agitation pendant 30 minutes. ε : centrifugation.Tricalcium phosphate is added in an amount of 2 g / l of supernatant and the mixture is stirred for 30 minutes. ε: centrifugation.
On élimine le phosphate par une centrifugation effectuée selon les conditions ci-dessus. η : filtration.The phosphate is removed by centrifugation carried out under the above conditions. η: filtration.
Le surnageant est filtré sur des plaques contenant du charbon actif (par exemple plaques de Seitz AKS4). L'opération dure 1 heure environ. ζ : ajustement du pH.The supernatant is filtered on plates containing activated carbon (for example plates of Seitz AKS4). The operation lasts approximately 1 hour. ζ: pH adjustment.
On ajuste le pH à 7 avec NaOH. λ : précipitation des IgG par 1*éthanol à 30 % .The pH is adjusted to 7 with NaOH. λ: precipitation of IgG with 1% ethanol at 30%.
On ajoute de l'éthanol qsp 30 % sur la solution prérefroidie à 0#C. Durant l'addition d'alcool, on - baisse la te prérature à -12*C. Selon une variante de réalisation du procédé selon l'invention, cette précipi¬ tation peut être remplacée par une ultrafiltration telle que décrite ci-après à 1'étape ι . θ : centrifugatio .Ethanol qs 30% is added to the solution precooled to 0 # C. During the addition of alcohol, we - lower the temperature to -12 * C. According to an alternative embodiment of the method according to the invention, this precipitation can be replaced by an ultrafiltration as described below in step ι. θ: centrifugation.
La solution est centrifugée tout d'abord avec un débit de 30 1/h (on utilise un appareil Sharples AS 16).The solution is first centrifuged with a flow rate of 30 l / h (a Sharples AS 16 device is used).
On recueille pour 40 kg de précipité &, environ 12 kg de précipité, bleuâtre, qui présente un aspect visqueux.Is collected for 40 kg of precipitate &, about 12 kg of precipitate, bluish, which has a viscous appearance.
K : remise en solution.K: re-solution.
Le précipité est remis en solution à raison de 5 1/kg dans 60 1 d'un tampon NaCl : 8 g/1, glycocolle : 4,5 g/1 (cas de la dialyse) ou 11 g/1 (cas de l'ultra¬ filtration) .The precipitate is redissolved at a rate of 5 l / kg in 60 l of NaCl buffer: 8 g / 1, glycine: 4.5 g / 1 (in the case of dialysis) or 11 g / 1 (in the case of l 'ultra¬ filtration).
Le pH est ajusté à 7,5 si nécessaire. Le taux de protéines est d'environ 50 g/1. ι -. dialyse ou ultra iltration.The pH is adjusted to 7.5 if necessary. The protein level is around 50 g / l. ι -. dialysis or ultra iltration.
La solution, préalablement filtrée, est dialysée contre NaCl (4,5 g/1) à +4"C durant environ 10 heures. On vérifie le taux de protéines (environ 140 g/1).The solution, previously filtered, is dialyzed against NaCl (4.5 g / 1) at + 4 "C for approximately 10 hours. The protein level (approximately 140 g / 1) is checked.
On ajuste l'osmolarité de la solution à environ 300 mOsm/1 à l'aide de glycocolle (11 g/1). On ajoute du merthiolate de sodium (1 p 10 000), puis on filtre sté¬ rilement sur un filtre avec des diamètres de pores de 0,22 μ.The osmolarity of the solution is adjusted to approximately 300 mOsm / 1 using glycine (11 g / 1). Sodium merthiolate (1 p 10 000) is added, then filtered sté¬ rilly on a filter with pore diameters of 0.22 μ.
Préalablement à la répartition en seringue, on ajuste le taux de protéines à 100 g/1 minimum (en pra- tique 105 à 100 g/1). On complète les doses de sels, de glycocolle et de merthiolate selon dilution puis on fil¬ tre stérilement. Ces préparations sont conservées de préférence à une température de l'ordre de +2 à +6*C.Prior to distribution in a syringe, the protein level is adjusted to a minimum of 100 g / l (in practice 105 to 100 g / l). The doses of salts, glycocolle and merthiolate are supplemented according to dilution, then they are filtered sterile. These preparations are preferably stored at a temperature of the order of +2 to +6 * C.
Selon une variante de réalisation du procédé selon l'invention, le produit obtenu à l'étape γ décrite ci-dessus est directement filtré sur des plaques contenant du charbon actif, selon la méthode décrite à l'étape η ci-dessus, sans passer par les étapes ζ et ε ci-dessus, en particulier quand le surnageant ne se pré¬ sente pas sous une forme laiteuse ou opalescente.According to an alternative embodiment of the method according to the invention, the product obtained in step γ described above is directly filtered on plates containing activated carbon, according to the method described in step η above, without going through steps ζ and ε above, in particular when the supernatant is not present in a milky or opalescent form.
Evaluation des taux d'IgG, d'I A, d'IσM et de la sous-classe IαG 4 des IgG :Evaluation of the IgG, I A, IσM and IαG 4 subclass of IgG levels:
On opère selon la technique décrite par ancini et col dans Immuno Che istry, n*3, p.235, 1965. On uti¬ lise un antisérum spécifique du commerce (de marque Nordic ou Croix rouge Hollandaise par exemple) , et des témoins de taux d'IgG ou IgA ou IgM connu. Le témoin pour les IgG 4 est constitué par un pool de 50 donneurs de sang sains dont le taux d'IgG 4 est de 0,4 g/1.One operates according to the technique described by ancini and col in Immuno Che istry, n * 3, p.235, 1965. One uses a specific commercial antiserum (of Nordic brand or Dutch Red Cross for example), and witnesses of known IgG or IgA or IgM level. The control for IgG 4 is constituted by a pool of 50 healthy blood donors whose IgG 4 level is 0.4 g / 1.
Les résultats montrent que les préparations d'IgG selon l'invention contiennent en moyenne 85 % d'IgG, 10 % d'IgA et 5 % d'IgM. Leur taux d'IgG 4 est supérieur ou égal à 4The results show that the IgG preparations according to the invention contain on average 85% of IgG, 10% of IgA and 5% of IgM. Their IgG 4 level is greater than or equal to 4
La comparaison de six lots de préparation selon l'invention et six lots de gamma globulines fractionnées par l'alcool donne un taux moyen de 4,5 % d'IgG 4 pour les premières et de 2 % pour les secondes. Le pool de plasma témoin contenait 3 % d'IgG 4.The comparison of six batches of preparation according to the invention and six batches of gamma globulin fractionated by alcohol gives an average level of 4.5% of IgG 4 for the first and of 2% for the second. The control plasma pool contained 3% IgG 4.
Dosage de l'activité des anticorps anti- allergènes de type IgG (anticorps bloquants) : a) principe de dosage :Determination of the activity of anti-allergenic antibodies of the IgG type (blocking antibodies): a) dosing principle:
1- Les anticorps anti-allergènes sont mesurés par un test radio-immunologique en phase solide. Des disques de nitro-cellulose sur lesquels ont été couplés d'une manière covalente les extraits d'allergènes sont incubés avec des dilutions de séru s ou d'immunoglobuli¬ nes. Après plusieurs lavages, les disques sont incubés avec la protéine du staphylocoque marquée à l'iode 125 (service des Radio-isotopes. C.N.T.S.). La protéine A se fixe avec une haute affinité sur la partie Fc de 93 % des IgG humaines. Après 18 h de contacts, la protéine A non fixée est élue par une série de lavages.1- Anti-allergenic antibodies are measured by a radioimmunological test in solid phase. Nitro-cellulose disks on which the allergen extracts have been covalently coupled are incubated with dilutions of seru s or immunoglobulins. After several washes, the discs are incubated with the staphylococcal protein labeled with iodine 125 (Department of Radioisotopes. CNTS). Protein A binds with a high affinity to the Fc part of 93% of human IgG. After 18 h of contacts, the unbound protein A is eluted by a series of washes.
La quantité de protéine A liée aux IgG est mesu¬ rée par un compteur de rayonnement gamma et exprimée en % par rapport à la quantité totale de radioactivité in- troduite dans la réaction.The amount of protein A linked to IgG is measured by a gamma radiation counter and expressed in% relative to the total amount of radioactivity introduced into the reaction.
2- Selon une autre méthode, de type Elisa (Enzyme linked immuno-sorbent assay) , les allergènes extraits du pollen de graminées sont absorbés sur des plaques de microtitration puis mis en contact avec des solutions de l'invention. La présence d'IgG fixées par les allergènes est révélée par une immunoglobuline mar¬ quée à la phosphatase alcaline ou à la peroxydase. Des courbes de forme sigmoïdale sont obtenues en exprimant la densité optique en fonction de la dilution des solu¬ tions.2- According to another method, of the Elisa type (Enzyme linked immuno-sorbent assay), the allergens extracted from grass pollen are absorbed on microtiter plates and then brought into contact with solutions of the invention. The presence of IgG fixed by allergens is revealed by an immunoglobulin labeled with alkaline phosphatase or peroxidase. Sigmoidal curves are obtained by expressing the optical density as a function of the dilution of the solutions.
Ces courbes permettent le dosage des IgG anti- allergènes dans la préparation thérapeutiques d" Immuno¬ globulines. b) calcul du nombre d'unités présentes dans les solutions de l'invention :These curves allow the dosage of anti-allergenic IgGs in the therapeutic preparation of Immunoglobulins. B) calculation of the number of units present in the solutions of the invention:
L'activité d'un pool de sérum de 100 donneurs (2 ml de chaque sérum) sert de référence et contient par définition 1 unité/ml. Elle est mesurée avec des dilu¬ tions de sérum comprises entre 1/200 et 1/25. On établit une courbe de référence entre la dilution du pool de sé¬ rum et le pourcentage de fixation de la protéine A-The activity of a serum pool of 100 donors (2 ml of each serum) serves as a reference and contains by definition 1 unit / ml. It is measured with dilutions of serum between 1/200 and 1/25. A reference curve is established between the dilution of the serum pool and the percentage of binding of protein A-
Les solutions de gammaglobulines thérapeutiques sont diluées de manière à obtenir un pourcentage de fi¬ xation de la protéine correspondant à des dilutions d'environ 1/100 du pool de sérums.The therapeutic gamma globulin solutions are diluted so as to obtain a percentage of protein fixation corresponding to dilutions of approximately 1/100 of the pool of sera.
La courbe de référence précédemment établie per¬ met alors de calculer le nombres d'unités/ml d'immuno- globulines anti-allergènes présentes dans la solution thérapeutique. c) normes : Les anticorps IgG sont dosés quant à leur acti¬ vité vis-à-vis d'au moins un extrait de pollen de grami- nées (phleum pratense, ou Dactylis glomerata) et d'un extrait d'acariens (Der atophagoîdes pteronyssinus) .The previously established reference curve then makes it possible to calculate the number of units / ml of anti-allergen immunoglobulins present in the therapeutic solution. c) standards: IgG antibodies are assayed for their activity vis-à-vis at least one extract of grass pollen (phleum pratense, or Dactylis glomerata) and an extract of mites (Der atophagoids pteronyssinus).
Le titre en anticorps bloquants anti-allergènes des préparations d'IgG selon l'invention est au minimum de 15 u/ml anti-pollens et de 15 u/ml anti-acariens. La moyenne de l'activité anti-pollen de 16 lots de' préparation selon l'invention est de 23 u/ml, le taux en anti-acariens étant identique ou légèrement supérieur Taux de polymères On effectue une chromatographie de perméation 5 avec un gel séparant les protéines de PM compris entre 20 000 et 350 000 daltons.The anti-allergenic blocking antibody titer of the IgG preparations according to the invention is at least 15 u / ml anti-pollen and 15 u / ml anti-mites. The average of the anti-pollen activity of 16 batches of preparation according to the invention is 23 u / ml, the level of anti-mites being identical or slightly higher Rate of polymers Permeation chromatography is carried out with a gel separating PM proteins between 20,000 and 350,000 daltons.
Les résultats ci-après ont été obtenus en opé¬ rant comme suit :The following results were obtained by operating as follows:
On utilise une'colonne de 100 cm, diamètre 2,5 Q cm, contenant comme gel le produit commercialisé sous la marque ϋltrogel . AcA 34 (LKB) . On dépose 100 g de pro¬ téines dans 2,5 ml.A column of 100 cm, diameter 2.5 Q cm, containing the product sold under the brand sousltrogel, is used. AcA 34 (LKB). 100 g of proteins are deposited in 2.5 ml.
Le débit d'élution est de 20 ml/h. Les pics sont détectés à 280 mm (mesure de la 5 densité optique"). On évalue la surface par plani étrie. Les résultats obtenus montrent que les taux de polymères des préparations d'IgG de l'invention sont su¬ périeurs à 10 % (moyenne de 5 lots 15 % ) alors que les fractions d'immunoglobulinees fractionnées par l'alcool Q dépassent rarement 5 % (moyenne de 13 lots 4,5 % ) .The elution rate is 20 ml / h. The peaks are detected at 280 mm (measurement of the optical density " ). The surface is evaluated by plani etry. The results obtained show that the polymer levels of the IgG preparations of the invention are greater than 10% (average of 5 batches 15%) while the fractions of immunoglobulins fractionated by alcohol Q rarely exceed 5% (average of 13 batches 4.5%).
L'étude de la composition des fractions monomè¬ res, dimères et polymères des préparations de l'inven¬ tion a montré une variation de composition en i munoglo- buline de chacune des fractions. 5 On rapporte dans le tableau ci-après les diffé¬ rents taux d'IgG, IgA et IgM respectivement mesurés. Préparation de fraction "dimères" "monomères" 1*invention polymériséeThe study of the composition of the monomer, dimer and polymer fractions of the preparations of the invention showed a variation in composition in i munoglobulin of each of the fractions. 5 The table below shows the different IgG, IgA and IgM levels measured respectively. Preparation of "dimer""monomer" fraction 1 * polymerized invention
IgG 85 % 50 % 70 95 % IgA 10 % 10 % *25 5 % IgM 5 % 40 S 5 0 %IgG 85% 50% 70 95% IgA 10% 10% * 25 5% IgM 5% 40 S 5 0%
Exemple n*2 : résultats relatifs aux essais cli¬ niques effectués avec des solutions de préparation selon 1'invention.Example No. 2: results of testing cli¬ lunches made with solutions prepared according 1'invention.
On utilise des solutions à 100 g/1 de prépara¬ tions d'IgG selon l'invention, titrant 15 unités/ml anti-pollens, 15 unités/ml anti-acariens et renfermant en tant qu'additif 1 p 10 000 de mercurothiolate.100 g / l solutions of IgG preparations according to the invention are used, titrating 15 units / ml anti-pollen, 15 units / ml anti-mites and containing as additive 1 p 10,000 of mercurothiolate .
Selon le protocole thérapeutique utilisé, on a effectué une série d'injections intramusculaires de pré¬ paration selon l'invention, à raison de 20 ml/semaine, durant 5 semaines. La préparation a été utilisée chez des sujets allergiques, sans préjuger du lien d'origine de l'allergie avec les pollens ou acariens. L'évaluation de l'activité était effectuée par une observation jour¬ nalière des symptômes de la maladie. Les mani estations cliniques (nasales, oculaires et respiratoires) étaient notées. Sur 33 malades soumis à ce traitement, on a ob¬ tenu 15 très bons résultats, 10 bons résultats, 8 échecs ont été observés.According to the therapeutic protocol used, a series of intramuscular injections of preparation according to the invention was carried out, at a rate of 20 ml / week, for 5 weeks. The preparation has been used in allergic subjects, without prejudging the original link of the allergy with pollens or mites. Activity was assessed by daily observation of the symptoms of the disease. Clinical manifestations (nasal, ocular and respiratory) were noted. Out of 33 patients subjected to this treatment, 15 very good results were obtained, 10 good results, 8 failures were observed.
Dans une autre expérimentation, sur 19 sujets, on a obtenu 8 très bons résultats, 3 bons résultats et 8 échecs.In another experiment, on 19 subjects, 8 very good results, 3 good results and 8 failures were obtained.
Le groupe placebo se distingue du groupe de ma¬ lades traités par la préparation selon 1'invention par un "score symptômes" statistiquement moins important lors des trois dernières semaines du traitement et par une consommation médicamenteuse significativement infé¬ rieure. Les divers essais réalisés ont montré que la tolérance des préparations d'IgG selon l'invention est toujours satisfaisante et qu'une amélioration des signes cliniques de la maladie a été observée.The placebo group differs from the group of patients treated with the preparation according to the invention by a statistically lower "symptom score" during the last three weeks of treatment and by significantly lower drug consumption. The various tests carried out have shown that the tolerance of the IgG preparations according to the invention is always satisfactory and that an improvement in the clinical signs of the disease has been observed.
Les résultats positifs enregistrés montrent une action de régulation sur la réaction immunitaire de ces sujets.The positive results recorded show a regulatory action on the immune response of these subjects.
L'utilisation des préparations selon l'inven¬ tion, telles que définies ci-dessus, en vue d'une acti¬ vité immunomodulatrice, entre également dans le cadre de 1'invention.The use of the preparations according to the invention, as defined above, for an immunomodulatory activity, also comes within the scope of the invention.
Ces phénomènes d'immunomodulation jouent notam¬ ment un rôle important dans le cas de certains déficits immunitaires, en particulier ceux rencontrés chez l'en¬ fant, et en pathologie auto-immune. These immunomodulation phenomena play in particular an important role in the case of certain immune deficits, in particular those encountered in infants, and in autoimmune pathology.

Claims

REVENDICATIONS
1. Préparations à base d'IgG, caractérisées en ce qu'elles présentent un titre en IgG de la sous-classe 4, ou IgG 4 d'au moins environ 4 % et des titres en an- ticorps bloquants anti-allergènes, en particulier anti¬ pollens et anti-acariens d'au moins environ 20 u/ml de préparation environ, généralement d'au moins environ 15 u/ml.1. IgG preparations, characterized in that they have a titer in IgG of subclass 4, or IgG 4 of at least about 4% and titers in anti-allergenic blocking antibodies, in particular anti-pollen and anti-mite of at least about 20 u / ml of preparation approximately, generally of at least about 15 u / ml.
2. Préparations à base d'IgG, caractérisées en ce qu'elles présentent un titre en IgG 4 d'au moins environ 4 % et un taux de chaînes polymères d'au moins environ 10 % .2. IgG-based preparations, characterized in that they have an IgG 4 titer of at least about 4% and a level of polymer chains of at least about 10%.
3. Préparations à base d'IgG, caractérisées en ce qu'elles présentent un titre en IgG 4 d'au moins environ 4 \ , un taux en chaînes polymères d'au moins environ 10 % et des titres en anticorps bloquants an¬ ti-allergènes, en particulier anti-pollens et anti¬ acariens d'environ 20 u/ml de préparation, généralement d'au moins environ 15 u/ml.3. Preparations based on IgG, characterized in that they have an IgG 4 titer of at least about 4 \, a level of polymer chains of at least about 10% and titers of blocking antibodies an¬ ti -allergens, in particular anti-pollen and anti-mites of about 20 u / ml of preparation, generally at least about 15 u / ml.
4. Préparations selon l'une quelconque des re¬ vendications 1 à 3, caractérisées en ce qu'elles renfer¬ ment en moyenne 80 à 90 % , notamment 85 % environ d'IgG, 7 à 15 ., notamment 10 % environ d'IgA, et 3 à 8 ., no¬ tamment 5 % environ d'IgM.4. Preparations according to any one of claims 1 to 3, characterized in that they contain on average 80 to 90%, in particular approximately 85% of IgG, 7 to 15, in particular approximately 10% of 'IgA, and 3 to 8, including about 5% of IgM.
5. Préparations à base d'IgG l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisées en ce qu'il s'a¬ git de préparations stériles, apyrogènes, atoxiques de pH 6,4 à 7,2 environ, renfermant avantageusement de l'ordre de 100 à 170 g/1 de protéines totales, présen¬ tant une activité en anticorps supérieure à 15 u/ml en tant qu'anti-pollens et supérieure à 15 u/ml en tant qu'anti-acariens, une pureté électrophorétique supé¬ rieure à 90 % environ et une osmolarité de l'ordre de 250 à 500 mOsm/l, ces préparations renfermant avantageu¬ sement un agent antiseptique, conservateur, tel que le mercurothiolate de sodium, en particulier, à des doses inférieures ou égales à 1 pour 10 000, ainsi qu'un agent de solubilisation et de stabilisation tel que le glyco- colle, en particulier à raison de 18 à 25 g/1 environ.5. IgG-based preparations any one of claims 1 to 4, characterized in that it consists of sterile, non-pyrogenic, non-toxic preparations of pH 6.4 to 7.2 approximately, advantageously containing of the order of 100 to 170 g / l of total protein, having an antibody activity greater than 15 u / ml as anti-pollen and greater than 15 u / ml as anti-mites, a electrophoretic purity greater than about 90% and an osmolarity of the order of 250 to 500 mOsm / l, these preparations advantageously containing an antiseptic agent, a preservative, such as sodium mercurothiolate, in particular, at doses less than or equal to 1 per 10,000, as well as a solubilizing and stabilization such as glycol adhesive, in particular at a rate of approximately 18 to 25 g / l.
6. Procédé d'obtention de préparations d'IgG de la sous-classe 4 caractérisé en ce qu'on soumet les frac¬ tions d'immunoglobulines obtenues par précipitation al¬ coolique de plasma humain traité ou non traité à l'ac¬ tion d'un acide gras linéaire saturé, de préférence de C4 à C12, et en ce que la partie soluble est soumise avantageusement à au moins une étape de purification.6. Method for obtaining preparations of IgG of subclass 4 characterized in that the immunoglobulin frac¬ tions obtained by alcoholic precipitation of treated or untreated human plasma are subjected to the action of a saturated linear fatty acid, preferably from C4 to C12, and in that the soluble part is advantageously subjected to at least one purification step.
7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que les fractions d'IgG utilisées comme matière de. départ sont du type de celles résultant de fractionne¬ ment alcoolique de plasma humain traité ou non traité à l'aide d'éthanol à 95 % , en quantité suffisante pour une concentration finale de 19 à 22 %, à pH 5,85, avec a- baissement graduel de la température jusqu'à -10*C, l'addition d'alcool conduisant à la formation d'un pré¬ cipité A renfermant les IgG.7. Method according to claim 6, characterized in that the IgG fractions used as material. start are of the type of those resulting from alcoholic fractionation of human plasma treated or untreated with 95% ethanol, in sufficient quantity for a final concentration of 19 to 22%, at pH 5.85, with a- gradual Lowering temperature to -10 ° C, the addition of alcohol leading to the formation of a pré¬ cipité a containing the IgG.
8. Procédé selon la revendication 6 ou 7, carac¬ térisé en ce que le précipité Ar remis en solution, en particulier dans une solution tampon de pH 4,5 à 5,5, de préférence voisin de 4,8, est traité par addition d'un acide gras saturé, en partie par environ 10 à 50 % , de préférence environ 20 g/1 de solution tampon renfermant le précipité A, pour une concentration de cette solution en protéines de l'ordre de 20 à 30 g/1, de préférence8. Method according to claim 6 or 7, charac¬ terized in that the precipitate A r dissolved, in particular in a buffer solution of pH 4.5 to 5.5, preferably close to 4.8, is treated by adding a saturated fatty acid, in part by about 10 to 50%, preferably about 20 g / 1 of buffer solution containing precipitate A, for a concentration of this solution in proteins of the order of 20 to 30 g / 1, preferably
25 g/1.25 g / 1.
9. Procédé selon l'une quelconque des revendica¬ tions 6 à 8, caractérisé en ce qu'on utilise, comme acide gras saturé, de l'acide caprylique. 9. Method according to any one of claims 6 to 8, characterized in that caprylic acid is used as saturated fatty acid.
10. Procédé selon l'une quelconque des reven¬ dications 6 à 9, caractérisé en ce qu'il comporte, en outre, au moins une étape de purification telle que l'addition d'un adjuvant doté d'une affinité pour les acides gras, notamment d'un sel, tel que le phosphate tricalcique, de préférence à raison de 1 à 5 g/1, notam¬ ment de 2 à 4 g/1 et/ou une étape de précipitation alco¬ olique et/ou une séparation basée sur la différence de taille entre les Ig et les acides gras tels que la dia¬ lyse ou l'ultrafiltration.10. A method according to any one of reven¬ dications 6 to 9, characterized in that it further comprises at least one purification step such as the addition of an adjuvant with an affinity for acids fatty, in particular of a salt, such as tricalcium phosphate, preferably at a rate of 1 to 5 g / 1, in particular from 2 to 4 g / 1 and / or an alcoholic precipitation step and / or a separation based on the size difference between the Ig and the fatty acids such as dialysis or ultrafiltration.
11. Procédé selon la revendication 10, caracté¬ risé en ce que 1'étape de précipitation alcoolique est réalisée par addition d'alcool, avantageusement d'étha¬ nol jusqu'à une concentration finale d'environ 20 à11. Process according to claim 10, characterized in that the alcoholic precipitation step is carried out by addition of alcohol, advantageously ethaol to a final concentration of approximately 20 to
40 % , notamment, de l'ordre de 30 % , à température infé¬ rieure à l'ambiante, de préférence sur la solution re¬ froidie à environ 0'C dont la température est abaissée jusqu'à -10'C à -15"C, en particulier -12'C environ du¬ rant l'addition d'alcool, et en ce que la dialyse est effectuée contre NaCl à raison de 3 à 7 g/1 de NaCl, de préférence d'environ 4,5 g/1, à une température infé¬ rieure ^ l'ambiante, avantageusement d'environ 4*C et en ce qu'on ajoute l'osmolarité de la solution à environ 250 à 500 mOsm/1 notamment à environ 300 m0sm/l, à l'aide, par exemple, d'un agent solubilisant et stabili¬ sant tel que le glycocolle.40%, in particular, of the order of 30%, at a temperature below ambient, preferably on the solution cooled to around 0 ° C. whose temperature is lowered to -10 ° C. at - 15 "C, in particular -12 ° C. approximately during the addition of alcohol, and in that the dialysis is carried out against NaCl at a rate of 3 to 7 g / 1 of NaCl, preferably approximately 4, 5 g / 1 at a temperature higher infé¬ ^ ambient, preferably about 4 ° C and in that one adds the osmolarity of the solution to about 250 to 500 mOsm / 1 in particular to about 300 m0sm / l, using, for example, a solubilizing and stabilizing agent such as glycocolle.
12. Médicaments caractérisés en ce qu'ils ren¬ ferment dans leur principe actif au moins une prépara¬ tion d'IgG selon l'une quelconque des revendications 1 à 5.12. Medicines characterized in that they contain in their active principle at least one preparation of IgG according to any one of claims 1 to 5.
13. Médicaments selon la revendication 12, ca¬ ractérisés en ce qu'ils se présentent sous forme de so¬ lutions stériles injectables par voie intramusculaire. 13. Medicines according to claim 12, ca¬ characterized in that they are in the form of sterile solutions injectable intramuscularly.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2646917A1 (en) * 1989-05-12 1990-11-16 Fond Nat Transfusion Sanguine METHOD FOR DETERMINING ANTI-ALLERGEN SPECIFIC IGG ANTI-BODY, IGG4-RICH FRACTION OBTAINED ACCORDING TO THIS PROCESS AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING THIS FRACTION
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Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK139056B (en) * 1976-04-06 1978-12-11 Nordisk Insulinlab Method for recovering immunoglobulin suitable for intravenous administration.

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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