EA048552B1 - КОМПОЗИЦИИ иРНК СРЕДСТВ ПРОТИВ ХАНТИНГТИНА (HTT) И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к средствам и композициям на основе двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНКи), направленным на ген Хантингтина (НТТ), например экзон 1 гена НТТ, а также к способам ингибирования экспрессии гена НТТ и способам лечения субъектов, имеющих НТТассоциированное заболевание или нарушение, например болезнь Хантингтона, с применением таких дцРНКи средств и композиций.

Description

Родственные заявки

Настоящая заявка испрашивает преимущества приоритета по предварительной заявке на патент США 62/929174, поданной 1 ноября 2019 года, все содержание которой включено в настоящий документ посредством отсылки.

Список последовательностей

Настоящая заявка содержит Список последовательностей, который был представлен в электронном виде в формате ASCII и настоящим включен посредством отсылки во всей своей полноте. Указанная копия ASCII, созданная 26 октября 2020 года, имеет название 121301_10320_SL.txt и размер 1468832 байта.

Уровень техники

Болезнь Хантингтона - прогрессирующее нейродегенеративное заболевание, характеризующееся двигательными нарушениями, потерей когнитивных функций и психическими проявлениями (Martin and Gusella (1986) N. Engl. J. Med. 315:1267-1276). Оно наследуется по аутосомно-доминантному типу и поражает приблизительно 1/10000 человек в большинстве популяций европейского происхождения (Harper, P.S. et al., Huntington's Disease, W.B. Saunders, Philadelphia, 1991). Отличительным признаком болезни Хантингтона является отчетливое хореическое двигательное нарушение, которое обычно незаметно начинается на четвертом-пятом десятилетии жизни и постепенно ухудшается в течение 10-20 лет до наступления смерти. Иногда болезнь Хантингтона проявляется у подростков, при этом обычно с манифестацией более тяжелых симптомов, включая ригидность и более быстрое течение. Начало болезни Хантингтона в несовершеннолетнем возрасте связано с преобладанием передачи аллеля, ассоциированного с заболеванием, по отцовской линии. Нейропатология болезни Хантингтона также имеет характерный паттерн с избирательной потерей нейронов, которая наиболее выражена в хвостатом ядре и скорлупе полосатого тела головного мозга.

Было показано, что болезнь Хантингтона вызывается увеличением глутаминового повтора в экзоне 1 гена, называемого IT15 или Хантингтин (HTT). Хотя этот ген широко экспрессируется и необходим для нормального развития, патология болезни Хантингтона ограничена головным мозгом по причинам, которые до сих пор плохо изучены. У пациентов, имеющих БХ (аутосомно-доминантное заболевание), удлинение полиглутаминового повтора приводит к образованию транскрипта дикого типа, полноразмерного мутантного транскрипта, содержащего удлиненный полиглутаминовый тракт, а также укороченного мутантного транскрипта, содержащего удлиненный полиглутаминовый тракт. Было показано, что, хотя продукт гена Хантингтина экспрессируется на одинаковых уровнях у пациентов и контрольной группы, именно удлинение полиглутаминового повтора и присутствие полноразмерного мутантного транскрипта и укороченного мутантного транскрипта вызывают токсический эффект.

Эффективного лечения болезни Хантингтона в настоящее время не существует. Хореические движения и возбужденное поведение можно подавлять, обычно лишь частично, нейролептиками (например, хлорпромазином) или резерпином, пока не возникнут побочные эффекты в виде сильной вялости, гипотензии или паркинсонизма. Кроме того, несмотря на значительные успехи в области РНКи и лечения болезни Хантингтона, сохраняется потребность в средстве, которое сможет вызывать селективный и эффективный саленсинг гена БХ с использованием собственного аппарата РНКи клетки и будет обладать как высокой биологической активностью, так и стабильностью in vivo, и которое сможет эффективно ингибировать экспрессию гена-мишени, Хантингтона.

Сущность изобретения

В настоящем изобретении предложены композиции РНКи средства, которые воздействуют на опосредованное РНК-индуцированным комплексом сайленсинга (RISC) расщепление РНК-транскриптов гена хантингина (HTT). Ген HTT может присутствовать внутри клетки, например клетки субъекта, такого как человек. В настоящем изобретении также предложены способы применения композиций РНКисредства согласно настоящему изобретению для ингибирования экспрессии гена HTT или для лечения субъекта, у которого было бы эффективным ингибирование или снижение экспрессии гена HTT, например субъекта, страдающего или склонного к развитию заболевания, ассоциированного с HTT.

В одном аспекте настоящее изобретение относится к средству на основе двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК) для ингибирования экспрессии хантингина (HTT), где дцРНК средство включает смысловую цепь и антисмысловую цепь, образующие двухцепочечную область, где смысловая цепь включает по меньшей мере 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 21 последовательный нуклеотид, отличающийся не больше чем на 3, 2, 1 или 0 нуклеотидов от нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 1, и антисмысловая цепь включает по меньшей мере 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 21 последовательный нуклеотид, отличающийся не больше чем на 3, 2, 1 или 0 нуклеотидов от нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 6, и где один или больше липофильных фрагментов конъюгированы с одной или больше внутренними положениями по меньшей мере на одной цепи.

В некоторых вариантах осуществления нуклеотидная последовательность смысловой цепи включает любую из нуклеотидных последовательностей смысловой цепи в любой из табл. 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 21, 24, 25, 27-30, 32 и 33.

В некоторых вариантах осуществления смысловая цепь включает по меньшей мере 15 последовательных нуклеотидов, отличающихся не больше чем на 0, 1, 2 или 3 нуклеотида из любой из последова

- 1 048552 тельностей нуклеотидов

618-640, 1215-1237, 1248-1270, 1403-1425, 4051-4073, 4393-4415, 4398-4420, 4403-4425, 4441-4463, 4518-4540, 4548-4570, 5105-5127, 5215-5237, 5217-5239, 5221-5243, 266, 422-5388, 5372-5394, 5450-5472, 55095531, 5883-5905, 6009-6031, 6010-6032, 6011-6033, 6012-6034, 6013-6035, 6014-6036, 60156397, 63937, 6512-6534, 7523-7545, 7525-7547, 7526-7548, 9127-9149, 9531-9553 или 95389560 SEQIDNO:!.

В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь включает по меньшей мере 15 последовательных нуклеотидов, отличающихся не больше чем на 0, 1, 2 или 3 нуклеотида из любой из нуклеотидных последовательностей антисмысловой цепи двойной спирали, выбранных из группы, состоящей из

AD-953769.1, AD-953778.1, AD-953784.1, AD-953786.1, AD-953849.1, AD-953854.1, AD-953855.1, AD-953857.1, AD-953862.1, AD953866.1, AD-953867.1, AD-953880.1, AD-953883.1, AD-953884.1, AD-953885.1,AD953886.1, AD-953887.1, AD-953888.1, AD-953889.1, AD-953891.1, AD-953896.1,AD953898.1, AD-953899.1, AD-953900.1, AD-953901.1, AD-953902.1, AD-953903.1,AD953904.1, AD-953907.1, AD-953911.1, AD-953921.1, AD-953923.1, AD-953924.1,AD953932.1 и AD-953933.1, AD-953937.1.

В некоторых вариантах осуществления липофильный фрагмент конъюгирован посредством линкера или носителя.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к двухцепочечной рибонуклеиновой кислоте (дцРНК) для ингибирования экспрессии хантингина (HTT) в клетке, где дцРНК включает смысловую цепь и антисмысловую цепь, образующие двухцепочечную область, где антисмысловая цепь включает область комплементарности с мРНК, кодирующей HTT, и где область комплементарности включает по меньшей мере 15, например 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 21, последовательных нуклеотидов, отличающихся не больше чем на 3, 2, 1 или 0 нуклеотидов от любой антисмысловой нуклеотидной последовательности в любой из табл. 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 21, 24, 25, 27 -30, 32 и 33.

Смысловая цепь, антисмысловая цепь или и смысловая цепь, и антисмысловая цепь могут быть конъюгированы с одним или больше липофильными фрагментами. В некоторых вариантах осуществления липофильный фрагмент конъюгирован с одним или больше внутренними положениями в двухцепочечной области дцРНК средства, например, одна или больше липофильных фрагментов могут быть конъюгированы с одним или больше внутренними положениями на антисмысловой цепи. В некоторых вариантах осуществления один или больше липофильных фрагментов конъюгированы с одним или больше внутренними положениями по меньшей мере на одной цепи посредством линкера или носителя.

В некоторых вариантах осуществления липофильность липофильного фрагмента, измеренная по logKow, превышает 0.

В некоторых вариантах осуществления гидрофобность дцРНК средства, измеренная по несвязанной фракции в анализе связывания с белками плазмы дцРНК средства, превышает 0,2. В некоторых вариантах осуществления анализ связывания с белками плазмы представляет собой анализ изменения электрофоретической подвижности с использованием такого белка, как сывороточный альбумин человека.

В некоторых вариантах осуществления внутренние положения включают все положения кроме двух концевых положении с каждого конца смысловой цепи или антисмысловой цепи. В других вариантах осуществления внутренние положения включают все положения кроме трех концевых положений с каждого конца смысловой цепи или антисмысловой цепи.

В некоторых вариантах осуществления внутренние положения не включают область сайта расщепления смысловой цепи, например, внутренние положения включают все положения кроме положений 912, считая от 5'-конца смысловой цепи, или внутренние положения включают все положения кроме положений 11-13, считая от 3'-конца смысловой цепи.

В некоторых вариантах осуществления внутренние положения не включают область сайта расщепления антисмысловой цепи. В других вариантах осуществления внутренние положения включают все положения кроме положений 12-14, считая от 5'-конца антисмысловой цепи, или внутренние положения включают все положения кроме положений 11-13 на смысловой цепи, считая от 3'-конца, и положений 12-14 на антисмысловой цепи, считая от 5'-конца.

В некоторых вариантах осуществления один или больше липофильных фрагментов конъюгированы с одним или больше внутренними положениями, выбранными из группы, состоящей из положений 4-8 и 13-18 на смысловой цепи и положений 6-10 и 15-18 на антисмысловой цепи, считая от 5'-конца каждой цепи.

- 2 048552

В некоторых вариантах осуществления один или больше липофильных фрагментов конъюгированы с одним или больше внутренними положениями, выбранными из группы, состоящей из положений 5, 6, 7, 15 и 17 на смысловой цепи и положений 15 и 17 на антисмысловой цепи, считая от 5'-конца каждой цепи.

В некоторых вариантах осуществления положения в двухцепочечной области не включают область сайта расщепления смысловой цепи.

В некоторых вариантах осуществления смысловая цепь имеет длину 21 нуклеотид, антисмысловая цепь имеет длину 23 нуклеотида, и липофильный фрагмент конъюгирован в положении 20, положении 15, положении 1, положении 7, положении 6 или положении 2 смысловой цепи или в положении 16 антисмысловой цепи.

В других вариантах осуществления длина смысловой цепи составляет 21 нуклеотид, длина антисмысловой цепи составляет 23 нуклеотида, и липофильный фрагмент конъюгирован в положении 21, положении 20, положении 15, положении 1, положении 7, положении 6 или положении 2 смысловой цепи или в положении 16 антисмысловой цепи.

В некоторых вариантах осуществления липофильный фрагмент является алифатическим, алициклическим или полиалициклическим соединением.

В некоторых вариантах осуществления липофильный фрагмент выбран из группы, состоящей из липидов, холестерина, ретиноевой кислоты, холевой кислоты, адамантануксусной кислоты, 1пиренмасляной кислоты, дигидротестостерона, 1,3-бис-O(гексадецил)глицерина, геранилоксигексанола, гексадецилглицерина, борнеола, ментола, 1,3-пропандиола, гептадецильной группы, пальмитиновой кислоты, миристиновой кислоты, O3-(олеоил)литохолевой кислоты, O3-(олеоил)холеновой кислоты, диметокситритила или феноксазина.

В некоторых вариантах осуществления липофильный фрагмент содержит насыщенную или ненасыщенную С4-С30 углеводородную цепь и необязательную функциональную группу, выбранную из группы, состоящей из гидроксила, амина, карбоновой кислоты, сульфоната, фосфата, тиола, азида и алкина.

В некоторых вариантах осуществления липофильный фрагмент содержит насыщенную или ненасыщенную С₆-С18 углеводородную цепь.

В некоторых вариантах осуществления липофильный фрагмент содержит насыщенную или ненасыщенную С₁₆ углеводородную цепь. В некоторых вариантах осуществления насыщенная или ненасыщенная С₁₆ углеводородная цепь конъюгирована в положении 6, считая от 5'-конца цепи.

В некоторых вариантах осуществления липофильный фрагмент конъюгирован посредством носителя, который заменяет один или больше нуклеотидов во внутреннем положении(ях) или двухцепочечной области. В некоторых вариантах осуществления носитель представляет собой циклическую группу, выбранную из группы, состоящей из пирролидинила, пиразолинила, пиразолидинила, имидазолинила, имидазолидинила, пиперидинила, пиперазинила, [1,3]диоксоланила, оксазолидинила, изоксазолидинила, морфолинила, тиазолидинила, изотиазолидинила, хиноксалинила, пиридазинонила, тетрагидрофуранила и декалинила; или представляет собой ациклический фрагмент на основе серинольного или диэтаноламинового скелета.

В некоторых вариантах осуществления липофильный фрагмент конъюгирован с дцРНК средством через линкер, содержащий эфирную, тиоэфирную, карбамидную, карбонатную, аминовую, амидную, малеимид-тиоэфирную, дисульфидную, фосфодиэфирную, сульфонамидную связь, продукт кликреакции или карбамат.

В некоторых вариантах осуществления липофильный фрагмент конъюгирован с азотистым основанием, остатком сахара или межнуклеозидной связью.

В некоторых вариантах осуществления дцРНК средство включает по меньшей мере один модифицированный нуклеотид. В некоторых вариантах осуществления не больше пяти нуклеотидов смысловой цепи и не больше пяти нуклеотидов антисмысловой цепи являются немодифицированными нуклеотидами. В других вариантах осуществления все нуклеотиды смысловой цепи и все нуклеотиды антисмысловой цепи включают модификацию.

В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из модифицированных нуклеотидов выбран из группы дезоксинуклеотида, 3'-концевого дезокситиминового (dT) нуклеотида, 2'-Ометилмодифицированного нуклеотида, 2'-фтормодифицированного нуклеотида, 2'-дезоксимодифицированного нуклеотида, замкнутого нуклеотида, разомкнутого нуклеотида, конформационно ограниченного нуклеотида, ограниченного этил-нуклеотида, абазического нуклеотида, 2'-аминомодифицированного нуклеотида, 2'-О-аллил-модифицированного нуклеотида, 2'-С-алкил-модифицированного нуклеотида, 2'-гидрокси-модифицированного нуклеотида, 2'-метоксиэтилмодифицированного нуклеотида, 2'-О-алкилмодифицированного нуклеотида, морфолинонуклеотида, фосфорамидата, содержащего неприродное основание нуклеотида, тетрагидропиран-модифицированного нуклеотида, 1,5-ангидрогексит-модифицированного нуклеотида, циклогексенил-модифицированного нуклеотида, нуклеотида, включающего 5'-фосфоротиоатную группу, нуклеотида, включающего 5'-метилфосфонатную группу, нуклеотида, включающего 5'-фосфат или миметик 5'-фосфата, нуклеотида, включающего винилфосфонат, нуклеотида, включающего аденозингликоль-нуклеиновую кислоту (GNA), нуклеотида, включающе

- 3 048552 го S-изомер тимидингликолевой нуклеиновой кислоты (GNA), нуклеотида, включающего 2-гидроксиметилтетрагидрофуран-5-фосфат, нуклеотида, включающего 2'-дезокситимидин-3'-фосфат, нуклеотида, включающего 2'-дезоксигуанозин-3'-фосфат, и концевого нуклеотида, связанного с производным холестерина и бисдециламидной группой додекановой кислоты; и их комбинации.

В других вариантах осуществления модифицированный нуклеотид выбран из группы, состоящей из 2'-дезокси-2'-фтормодифицированного нуклеотида, 2'-дезоксимодифицированного нуклеотида, 3'концевых дезокситиминовых нуклеотидов (dT), замкнутого нуклеотида, абазического нуклеотида, 2'аминомодифицированного нуклеотида, 2'-алкилмодифицированного нуклеотида, морфолинонуклеотида, фосфорамидата и нуклеотида, включающего неприродное основание.

В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из модифицированных нуклеотидов выбран из группы, состоящей из дезоксинуклеотида, 2'-О-метилмодифицированного нуклеотида, 2'фтормодифицированного нуклеотида, 2'-дезоксимодифицированного нуклеотида, гликоль-модифицированного нуклеотида (GNA), и винилфосфонатного нуклеотида; и их комбинаций.

В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна из модификаций нуклеотидов представляет собой термически дестабилизирующую модификацию нуклеотида. В некоторых вариантах осуществления термически дестабилизирующая модификация нуклеотида выбрана из группы, состоящей из абазической модификации; некомплементарности с противостоящим нуклеотидом в двойной спирали; и дестабилизирующей модификации сахара, 2'-дезоксимодификации, ациклического нуклеотида, разомкнутых нуклеиновых кислот (UNA) и глицерин-нуклеиновой кислоты (GNA).

В некоторых вариантах осуществления модифицированный нуклеотид содержит короткую последовательность 3'-концевых дезокситиминовых нуклеотидов (dT).

В некоторых вариантах осуществления модификации нуклеотидов представляют собой 2'-С-метил, GNA и 2'-фтор модификации.

В некоторых вариантах осуществления дцРНК средство дополнительно включает по меньшей мере одну фосфоротиоатную межнуклеотидную связь. В некоторых вариантах осуществления дцРНК средство включает 6-8 фосфоротиоатных межнуклеотидных связей. В одном варианте осуществления фосфоротиоатная или метилфосфонатная межнуклеотидная связь находится на 3'-конце одной цепи. Необязательно цепь представляет собой антисмысловую цепь. В другом варианте осуществления цепь представляет собой смысловую цепь. В близком варианте осуществления фосфоротиоатная или метилфосфонатная межнуклеотидная связь находится на 5'-конце одной цепи. Необязательно цепь представляет собой антисмысловую цепь. В другом варианте осуществления цепь представляет собой смысловую цепь. В другом варианте осуществления фосфоротиоатная или метилфосфонатная межнуклеотидная связь находится и на 5'-, и на 3'-конце одной цепи. Необязательно цепь представляет собой антисмысловую цепь. В другом варианте осуществления цепь представляет собой смысловую цепь.

В некоторых вариантах осуществления каждая цепь имеет длину не больше 30 нуклеотидов.

В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна цепь содержит 3'-выступающий конец по меньшей мере из 1 нуклеотида или 3'-выступающий конец по меньшей мере из 2 нуклеотидов.

Двухцепочечная области может иметь длину 15-30 пар нуклеотидов; 17-23 пары нуклеотидов; 17-25 пар нуклеотидов; 23-27 пар нуклеотидов; 19-21 пару нуклеотидов или 21-23 пары нуклеотидов.

Каждая цепь может включать 19-30 нуклеотидов; 19-23 нуклеотида или 21-23 нуклеотида.

В некоторых вариантах осуществления дцРНК средство дополнительно включает направляющий лиганд, который обеспечивает направленную доставку в ткань печени. В некоторых вариантах осуществления направляющий лиганд представляет собой конъюгат GalNAc.

В некоторых вариантах осуществления двухцепочечное РНКи средство дополнительно включает направляющий лиганд, который направленно взаимодействует с рецептором, опосредующим доставку в ткань ЦНС, например гидрофильный лиганд.

В некоторых вариантах осуществления направляющий лиганд является С16 лигандом. В одном варианте осуществления лиганд представляет собой:

где В представляет собой нуклеотидное основание или аналог нуклеотидного основания, где В необязательно является аденином, гуанином, цитозином, тимином или урацилом.

В некоторых вариантах осуществления липофильный фрагмент или направляющий лиганд конъюгирован через биорасщепляемый линкер, выбранный из группы, состоящей из ДНК, РНК, дисульфида, амида, функционализированных моносахаридов или олигосахаридов галактозамина, глюкозамина, глюкозы, галактозы, маннозы и их комбинаций.

В некоторых вариантах осуществления 3'-конец смысловой цепи защищен посредством концевого кэпа, который представляет собой циклическую группу, содержащую амин, где указанная циклическая

- 4 048552 группа выбрана из группы, состоящей из пирролидинила, пиразолинила, пиразолидинила, имидазолинила, имидазолидинила, пиперидинила, пиперазинила, [1,3]диоксоланила, оксазолидинила, изоксазолидинила, морфолинила, тиазолидинила, изотиазолидинила, хиноксалинила, пиридазинонила, тетрагидрофуранила и декалинила.

В некоторых вариантах осуществления дцРНК средство дополнительно включает концевую хиральную модификацию, присутствующую на первой межнуклеотидной связи на 3'-конце антисмысловой цепи, имеющей атом фосфора указанной связи в Sp-конфигурации, концевую хиральную модификацию, присутствующую на первой межнуклеотидной связи на 5'-конце антисмысловой цепи, имеющей атом фосфора указанной связи в Rp-конфигурации, и концевую хиральную модификацию, присутствующую на первой межнуклеотидной связи на 5'-конце смысловой цепи, имеющей атом фосфора указанной связи в Rp-конфигурации или в Sp-конфигурации.

В некоторых вариантах осуществления дцРНК средство дополнительно включает концевую хиральную модификацию, присутствующую на первой и второй межнуклеотидных связях на 3'-конце антисмысловой цепи, имеющей атом фосфора указанной связи в Sp-конфигурации, концевую хиральную модификацию, присутствующую на первой межнуклеотидной связи на 5'-конце антисмысловой цепи, имеющей атом фосфора указанной связи в Rp-конфигурации, и концевую хиральную модификацию, присутствующую на первой межнуклеотидной связи на 5'-конце смысловой цепи, имеющей атом фосфора указанной связи в Rp или Sp-конфигурации.

В некоторых вариантах осуществления дцРНК средство дополнительно включает концевую хиральную модификацию, присутствующую на первой, второй и третьей межнуклеотидных связях на 3'конце антисмысловой цепи, имеющей атом фосфора указанной связи в Sp-конфигурации, концевую хиральную модификацию, присутствующую на первой межнуклеотидной связи на 5'-конце антисмысловой цепи, имеющей атом фосфора указанной связи в Rp-конфигурации, и концевую хиральную модификацию, присутствующую на первой межнуклеотидной связи на 5'-конце смысловой цепи, имеющей атом фосфора указанной связи в Rp или Sp-конфигурации.

В некоторых вариантах осуществления дцРНК средство дополнительно включает концевую хиральную модификацию, присутствующую на первой и второй межнуклеотидных связях на 3'-конце антисмысловой цепи, имеющей атом фосфора указанной связи в Sp-конфигурации, концевую хиральную модификацию, присутствующую на третьей межнуклеотидной связи на 3'-конце антисмысловой цепи, имеющей атом фосфора указанной связи в Rp-конфигурации, концевую хиральную модификацию, присутствующую на первой межнуклеотидной связи на 5'-конце антисмысловой цепи, имеющей атом фосфора указанной связи в Rp-конфигурация, и концевую хиральную модификацию, присутствующую на первой межнуклеотидной связи на 5'-конце смысловой цепи, имеющей атом фосфора указанной связи в Rp или Sp-конфигурации.

В некоторых вариантах осуществления дцРНК средство дополнительно включает концевую хиральную модификацию, присутствующую на первой и второй межнуклеотидных связях на 3'-конце антисмысловой цепи, имеющей атом фосфора указанной связи в Sp-конфигурации, концевую хиральную модификацию, присутствующую на первой и второй межнуклеотидных связях на 5'-конце антисмысловой цепи, имеющей атом фосфора указанной связи в Rp-конфигурации, и концевую хиральную модификацию, присутствующую на первой межнуклеотидной связи на 5'-конце смысловой цепи, имеющей атом фосфора указанной в Rp или Sp-конфигурации.

В некоторых вариантах осуществления дцРНК средство дополнительно включает фосфат или миметик фосфата на 5'-конце антисмысловой цепи. В некоторых вариантах осуществления миметик фосфата представляет собой 5'-винилфосфонат (VP).

В некоторых вариантах осуществления пара оснований в 1 положении 5'-конца антисмысловой цепи двойной спирали представляет собой пару оснований AU.

В некоторых вариантах осуществления смысловая цепь содержит в общей сложности 21 нуклеотид, и антисмысловая цепь содержит в общей сложности 23 нуклеотида.

Дополнительный аспект настоящего изобретения относится к двухцепочечному РНКи средству для ингибирования экспрессии гена хантингтина (HTT), где двухцепочечное РНКи средство, направленное против HTT, включает смысловую цепь и антисмысловую цепь, образующие двухцепочечную область, где смысловая цепь включает по меньшей мере 15, например 15, 16, 17, 18, 19 или 20, последовательных нуклеотидов, отличающихся не больше чем на 3 нуклеотида (т.е. отличающихся на 3, 2, 1 или 0 нуклеотидов) от любой из нуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 1-5, и антисмысловая цепь включает по меньшей мере 15, например 15, 16, 17, 18, 19 или 20, последовательных нуклеотидов, отличающихся не больше чем на 3 нуклеотида (т.е. отличающихся на 3, 2, 1 или 0 нуклеотидов) от любой из нуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 6-10; где замена любого тимина на урацил в последовательностях, представленных в SEQ ID NO: 1-10 (при сравнении выровненных последовательностей), не считается различием, которое способствует отличию не больше чем на 3 нуклеотида от любой из нуклеотидных последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 1-10, где практически все нуклеотиды смысловой цепи включают модификацию, которая представляет собой 2'-О-метил-модификацию, GNA или 2'фтормодификацию, где смысловая цепь включает две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи на 5'

- 5 048552 конце, где практически все нуклеотиды антисмысловой цепи включают модификацию, выбранную из группы, состоящей из 2'-О-метил-модификации и 2'-фтормодификации, где антисмысловая цепь включает две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи на 5'-конце и две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи на 3'-конце, причем смысловая цепь конъюгирована с одним или больше липофильными, например С16, лигандами.

Другой аспект настоящего изобретения относится к двухцепочечному РНКи средству для ингибирования экспрессии гена хантингтина (HTT), где двухцепочечное РНКи средство, направленное на HTT, включает смысловую цепь и антисмысловую цепь, образующую двухцепочечную область, где смысловая цепь включает по меньшей мере 15, например 15, 16, 17, 18, 19 или 20, последовательных нуклеотидов, отличающихся не больше чем на 3 нуклеотида (т.е. отличающихся на 3, 2, 1 или 0 нуклеотидов) от любой из нуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 1-5, и антисмысловая цепь включает по меньшей мере 15 последовательных нуклеотидов, отличающихся не больше чем на 3 нуклеотида (т.е. отличающихся на 3, 2, 1 или 0 нуклеотидов) от любой из нуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 6-10, где замена любого тимина на урацил в последовательностях, представленных в SEQ ID NO: 1-10 (при сравнении выровненных последовательностей), не считается различием, которое способствует отличию не больше чем на 3 нуклеотида от любой из нуклеотидных последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 1-10; где смысловая цепь включает по меньшей мере один 3'-концевой нуклеотид дезокситимин (dT), а антисмысловая цепь включает по меньшей мере один 3'-концевой нуклеотид дезокситимин (dT).

Дополнительный аспект настоящего изобретения относится к средству на основе двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (РНКи) для ингибирования экспрессии гена хантингтина (HTT), где РНКи средство имеет смысловую цепь и антисмысловую цепь, и где антисмысловая цепь включает область комплементарности, которая включает по меньшей мере 15 последовательных нуклеотидов, отличающихся не больше чем на 3 нуклеотида (т.е. отличающихся на 3, 2, 1 или 0 нуклеотидов), например, по меньшей мере 15 нуклеотидов (т.е. отличающихся на 3, 2, 1 или 0 нуклеотидов), по меньшей мере 19 нуклеотидов (т.е. отличающихся на 3, 2, 1 или 0 нуклеотидов), от любой из последовательностей нуклеиновых оснований антисмысловой цепи в табл. 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 21, 24, 25, 27-30, 32 и 33. В одном варианте осуществления РНКи средство включает одну или больше из следующих модификаций: 2'-О-метилмодифицированный нуклеотид, 2'-фтормодифицированный нуклеотид, 2'-Салкилмодифицированный нуклеотид, нуклеотид, включающий гликольнуклеиновую кислоту (GNA), фосфоротиоат (PS) и винилфосфонат (VP). Необязательно РНКи средство включает по меньшей мере одну из следующих модификаций: 2'-О-метилмодифицированный нуклеотид, 2'-фтормодифицированный нуклеотид, 2'-С-алкилмодифицированный нуклеотид, нуклеотид, включающий гликольнуклеиновую кислоту (GNA), фосфоротиоат и винилфосфонат (VP).

В другом варианте осуществления РНКи средство включает четыре или больше PS модификаций, необязательно от шести до десяти PS модификаций, необязательно восемь PS модификаций.

В дополнительном варианте осуществления каждая из смысловой цепи и антисмысловой цепи РНКи средства включает 5'-конец и 3'-конец, и РНКи средство включает восемь PS модификаций, расположенных на каждой из предпоследней и последней межнуклеотидных связей от соответствующих 3'- и 5'-концов каждой смысловой и антисмысловой цепей РНКи средства.

В другом варианте осуществления каждая из смысловой цепи и антисмысловой цепи РНКи средства включает 5'-конец и 3'-конец, и РНКи средство включает только один нуклеотид, включающий GNA. Необязательно нуклеотид, включающий GNA, расположен на антисмысловой цепи на седьмом нуклеотидном остатке от 5'-конца антисмысловой цепи.

В дополнительном варианте осуществления каждая из смысловой цепи и антисмысловой цепи РНКи средства включает 5'-конец и 3'-конец, и РНКи средство включает от одного до четырех 2'-Салкилмодифицированных нуклеотидов. Необязательно 2'-С-алкилмодифицированный нуклеотид представляет собой 2'-С16-модифицированный нуклеотид. Необязательно РНКи средство включает один 2'С-алкил, например, С16-модифицированный нуклеотид. Необязательно один 2'-С-алкил, например, С16модифицированный нуклеотид, расположен на смысловой цепи в положении шестого нуклеинового основания от 5'-конца смысловой цепи.

В другом варианте осуществления каждая из смысловой цепи и антисмысловой цепи РНКи средства включает 5'-конец и 3'-конец, а РНКи средство включает два или более 2'-фтормодифицированных нуклеотида. Необязательно каждая из смысловых и антисмысловых цепей РНКи средства включает два или более 2'-фтормодифицированных нуклеотида. Необязательно 2'-фтормодифицированные нуклеотиды расположены на смысловой цепи в положениях нуклеиновых оснований 7, 9, 10 и 11 от 5'-конца смысловой цепи, и на антисмысловой цепи в положениях нуклеиновых оснований 2, 14 и 16 от 5'-конца смысловой цепи антисмысловой цепи.

В дополнительном варианте осуществления каждая из смысловой цепи и антисмысловой цепи РНКи средства включает 5'-конец и 3'-конец, и РНКи средство включает одну или больше модификаций VP. Необязательно РНКи средство включает одну модификацию VP на 5'-конце антисмысловой цепи.

В еще одном варианте осуществления каждая из смысловой цепи и антисмысловой цепи РНКи средства включает 5'-конец и 3'-конец, и РНКи средство включает два или более 2'-О-метилмодифици

- 6 048552 рованных нуклеотида. Необязательно РНКи средство включает 2'-О-метилмодифицированные нуклеотиды во всех положениях нуклеиновых оснований, не модифицированных 2'-фтор, 2'-С-алкил или гликольнуклеиновой кислотой (GNA). Необязательно два или больше 2'-О-метилмодифицированных нуклеотида расположены на смысловой цепи в положениях 1, 2, 3, 4, 5, 8, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 и 21 от 5'конца смысловой цепи и на антисмысловой цепи в положениях 1, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 15, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и 23 от 5'-конца антисмысловой цепи.

В одном варианте осуществления все нуклеотиды смысловой цепи и все нуклеотиды антисмысловой цепи являются модифицированными нуклеотидами.

В другом варианте осуществления каждая цепь содержит 19-30 нуклеотидов.

В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь РНКи средства включает по меньшей мере одну термически дестабилизирующую модификацию двойной спирали в пределах первых 9 нуклеотидных положений 5'-области или ее предшественника. Необязательно термически дестабилизирующая модификация двойной спирали представляет собой одно или больше из следующего:

где B представляет собой нуклеиновое основание.

Настоящее изобретение также относится к клеткам, содержащим любое из дцРНК средств согласно изобретению, и фармацевтическим композициям для ингибирования экспрессии гена, кодирующего HTT, включающим любое из дцРНК средств согласно изобретению.

В одном варианте осуществления двухцепочечное РНКи средство находится в незабуференном растворе. Необязательно незабуференный раствор представляет собой физиологический раствор или воду. В другом варианте осуществления двухцепочечное РНКи средство находится в буферном растворе. Необязательно буферный раствор включает ацетат, цитрат, проламин, карбонат или фосфат или их любую комбинацию. В другом варианте осуществления буферный раствор представляет собой фосфатносолевой буферный раствор (PBS). В другом аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, которая включает двухцепочечное РНКи средство согласно настоящему изобретению и липидный состав. В одном варианте липидный состав включает липидную наночастицу (ЛНЧ).

В дополнительном аспекте настоящего изобретения предложен способ ингибирования экспрессии гена HTT в клетке, включающий: (а) контакт клетки с двухцепочечным РНКи средством согласно настоящему изобретению или фармацевтической композицией согласно настоящему изобретению; и (b) поддерживание клетки, полученной в этапе (а), в течение времени, достаточного для деградации мРНКтранскрипта гена HTT, осуществляя, таким образом, ингибирование экспрессии гена HTT в клетке.

В одном варианте осуществления клетка находится в организме субъекта.

Необязательно субъектом является человек.

В некоторых вариантах осуществления субъектом является макак-резус, яванский макак, мышь или крыса. В некоторых вариантах осуществления экспрессия HTT ингибируется РНКи средством по меньшей мере приблизительно на 50%.

В некоторых вариантах осуществления у субъекта-человека диагностировано HTT-ассоциированное заболевание, например, болезнь Хантингтона.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложен способ лечения субъекта с диагнозом HTT-ассоциированного заболевания, например болезни Хантингтона, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества двухцепочечного РНКи средства согласно изобретению или фармацевтической композиции согласно изобретению, осуществляя, таким образом, лечение субъекта.

В одном варианте осуществления лечение включает улучшение по меньшей мере одного признака или симптома заболевания. В другом варианте осуществления лечение включает предотвращение прогрессирования заболевания.

В некоторых вариантах осуществления дцРНК средство вводят субъекту в дозе от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 50 мг/кг.

В некоторых вариантах осуществления дцРНК средство вводят субъекту интратекально. В одном варианте осуществления способ снижает экспрессию гена HTT в тканях головного мозга (например, по

- 7 048552 лосатого тела) или позвоночника. Необязательно тканью головного мозга или позвоночника является полосатое тело, кора головного мозга, мозжечок, шейный отдел позвоночника, поясничный отдел позвоночника или грудной отдел позвоночника.

В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает измерение уровня HTT в образце, полученном у субъекта.

В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ ингибирования экспрессии хантингтина (HTT) у субъекта, включающий: введение субъекту терапевтически эффективного количества двухцепочечного РНКи средства согласно изобретению или фармацевтической композиции согласно изобретению, осуществляя, таким образом, ингибирование экспрессии HTT у субъекта.

В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает введение субъекту дополнительного средства, подходящего для лечения или предупреждения HTT-ассоциированного нарушения.

Краткие описания фигур

Фиг. 1 представляет собой график, на котором показаны уровни мРНК человеческого HTT дикого типа в печени мышей, экспрессирующих часть человеческого HTT дикого типа (посредством AAV). Этим мышам подкожно вводили однократную дозу 3 мг/кг указанных дцРНК дуплексов, направленных на экзон 1 транскрипта HTT человека, в день 14 после введения дозы AAV. Показанные уровни человеческого HTT нормализованы по отношению к контролям, получавшим AAV, через 14 дней после введения дозы миРНК.

Фиг. 2 представляет собой график, на котором показаны уровни мРНК человеческого HTT дикого типа в печени мышей, экспрессирующих часть человеческого HTT дикого типа (посредством AAV). Этим мышам подкожно вводили однократную дозу 3 мг/кг указанных дцРНК дуплексов, направленных на экзон 1 транскрипта HTT человека, в день 14 после введения дозы AAV. Показанные уровни HTT человека нормализовали по контролям, получавшим AAV, через 14 дней после введения дозы миРНК.

Фиг. 3А представляет собой график, на котором показаны уровни мРНК полноразмерного мутантного человеческого HTT в печени мышей YAC128, которым подкожно вводили однократную дозу 10 мг/кг указанных дцРНК дуплексов, направленных на экзон 1 транскрипта человеческого HTT, в день 7 после введения дозы. Показанные уровни человеческого HTT нормализовали по уровням при введении PBS.

Фиг. 3В представляет собой Вестерн-блоттинг, на котором показаны уровни мутантного человеческого белка HTT и мышиного белка HTT дикого типа в печени мышей YAC128, которым подкожно вводили однократную дозу 10 мг/кг указанных дцРНК дуплексов, направленных на экзон 1 транскрипта человеческого HTT, в день 7 после введения дозы.

Фиг. 3С представляет собой гистограмму, на которой показаны уровни мутантного человеческого белка HTT в печени мышей YAC128, которым подкожно вводили однократную дозу 10 мг/кг указанных дцРНК дуплексов, направленных на экзон 1 транскрипта человеческого HTT, в день 7 после введения дозы. Показанные уровни мутантного человеческого HTT нормализовали к уровням при введении PBS.

Фиг. 4А представляет собой график, на котором показаны уровни мРНК полноразмерного мутантного HTT в печени мышей YAC128, которым подкожно вводили однократную дозу 10 мг/кг указанных дцРНК дуплексов, направленных на экзон 1 транскрипта HTT, в день 7 после введения дозы. Показанные уровни полноразмерного мутантного человеческого HTT нормализовали по уровням при введении PBS.

Фиг. 4В представляет собой гистограмму, на которой показана количественное определение уровней мутантного белка HTT в печени мышей YAC128, которым подкожно вводили однократную дозу 10 мг/кг указанных дцРНК дуплексов, направленных на экзон 1 транскрипта HTT, в день 7 после введения дозы. Показанные уровни мутантного человеческого HTT нормализовали по уровням при введении PBS.

Фиг. 5 представляет собой график, на котором показаны уровни мРНК полноразмерного мутантного человеческого HTT в печени мышей YAC128, которым подкожно вводили однократную дозу 10 мг/кг указанных дцРНК дуплексов, направленных на экзон 1 транскрипта HTT, в день 7 после введения дозы. Показанные уровни человеческого HTT нормализовали по уровням при введении PBS.

Фиг. 6 представляет собой график, на котором показаны уровни мРНК полноразмерного мутантного человеческого HTT у мышей YAC128, которым подкожно вводили однократную дозу 10 мг/кг указанных дцРНК дуплексов, в день 7 после введения дозы, и соответствующие уровни полноразмерного мутантного человеческого белка HTT в печени. Показанные уровни мутантных человеческих мРНК и белка HTT нормализовали по уровням при введении PBS.

Фиг. 7 представляет собой график, на котором показаны уровни мРНК мутантного полноразмерного человеческого HTT у мышей YAC128, которым подкожно вводили однократную дозу 10 мг/кг указанных дцРНК дуплексов, в день 7 после введения дозы. Показанные уровни мутантного человеческого HTT нормализовали по уровням при введении PBS.

Фиг. 8А и 8В представляют собой графики, на которых показаны уровни полноразмерной мРНК человеческого HTT в фибробластах человека, трансфицированных 10 нМ или 50 нМ указанных дцРНК дуплексов, направленных на различные экзоны или конкретно экзон 1 человеческого HTT. Фибробласты были получены из Института Кориелла, от взрослого здорового контрольного пациента (Контроль, GM02153), пациента с БХ, развившейся в зрелом возрасте (Взрослый, GM04478), и пациента с БХ, раз

- 8 048552 вившейся в несовершеннолетнем возрасте (Ювенильный, GM09197). Показанные уровни HTT нормализовали по контролям с имитацией трансфекции.

Фиг. 9А и 9В представляют собой графики, на которых показаны уровни полноразмерной мРНК человеческого HTT в фибробластах человека, трансфицированных 10 нМ или 50 нМ указанных дцРНК дуплексов, направленных на различные экзоны или конкретно экзон 1 человеческого HTT. Фибробласты были получены из Института Кориелла, от взрослого здорового контрольного пациента (Контроль, GM02153), пациента с БХ, развившейся в зрелом возрасте (Взрослый, GM04478), и пациента с БХ, развившейся в несовершеннолетнем возрасте (Ювенильный, GM09197). Показанные уровни HTT нормализовали по контролям с имитацией трансфекции.

Фиг. 10A-10D представляют собой графики, на которых показаны уровни полноразмерной мРНК человеческого HTT в фибробластах человека, трансфицированных 10 нМ или 50 нМ указанных дцРНК дуплексов, направленных на различные экзоны или конкретно экзон 1 человеческого HTT. Фибробласты были получены из Института Кориелла, от взрослого здорового контрольного пациента (Контроль, GM02153), пациента с БХ, развившейся в зрелом возрасте (Взрослый, GM04478), и пациента с БХ, развившейся в несовершеннолетнем возрасте (Ювенильный, GM09197). Показанные уровни HTT нормализовали по контролям с имитацией трансфекции.

Фиг. 11A-11D представляют собой графики, на которых показаны уровни полноразмерной мРНК HTT в фибробластах человека, трансфицированных 10 нМ или 50 нМ указанных дцРНК дуплексов, направленных на различные экзоны или конкретно экзон 1 человеческого HTT. Фибробласты были получены из Института Кориелла, от взрослого здорового контрольного пациента (Контроль, GM02153), пациента с БХ, развившейся в зрелом возрасте (Взрослый, GM04478), и пациента с БХ, развившейся в несовершеннолетнем возрасте (Ювенильный, GM09197). Показанные уровни HTT нормализовали по контролям с имитацией трансфекции.

Фиг. 12 представляет собой график, на котором показаны уровни мРНК полноразмерного мутантного человеческого HTT в печени мышей YAC 128 или мышей дикого типа, экспрессирующих часть человеческого HTT дикого типа (AAV), которым подкожно вводили однократную дозу указанных дцРНК дуплексов, направленных на полноразмерный транскрипт HTT, в указанные дни после введения дозы. Показанные уровни HTT нормализовали по уровням при введении PBS.

Фиг. 13A-D представляют собой графики, на которых показаны уровни полноразмерной мРНК человеческого HTT в печени мышей, экспрессирующих часть человеческого HTT дикого типа посредством AAV. Этим мышам подкожно вводили однократную дозу 3 мг/кг указанных дцРНК дуплексов, направленных на полноразмерный транскрипт HTT, через 14 дней после введения дозы. Уровни HTT показаны относительно контролей, обработанных AAV, через 14 дней после введения дозы миРНК.

Подробное описание изобретения

В настоящем изобретении предложены РНКи композиции, которые вызывают опосредованное РНК-индуцированным комплексом сайленсинга (RISC) расщепление РНК-транскриптов гена хантингтина (HTT). Ген HTT может находиться внутри клетки, например, клетки субъекта, такого как человек. Применение таких иРНК создает возможность направленной деградации мРНК соответствующего гена (гена HTT) у млекопитающих.

Молекулы иРНК согласно изобретению были разработаны для направленного воздействия на ген HTT, включая части гена, которые являются консервативными в ортологах HTT млекопитающих других видов. Молекулы иРНК согласно изобретению также были разработаны для направленного воздействия на конкретную часть гена HTT, экзон 1, например, обеспечивая, таким образом, направленное воздействие на полноразмерный транскрипт дикого типа, полноразмерный мутантный транскрипт, а также на усеченный мутантный транскрипт. Без ограничения теорией, считается, что комбинация или подкомбинация вышеуказанных свойств и конкретных сайтов-мишеней, например, экзона 1, или специфических модификаций в этих иРНК придают молекулам иРНК согласно изобретению повышенную эффективность, стабильность, активность, устойчивость при хранении и безопасность.

Таким образом, в настоящем изобретении также предложены способы применения композиций РНКи согласно изобретению для ингибирования экспрессии гена HTT или для лечения субъекта, имеющего нарушение, при котором было бы эффективным ингибирование или снижение экспрессии гена HTT, например, HTT-ассоциированное заболевание, например, болезнь Хантингтона (БХ).

РНКи средства согласно изобретению включают цепь РНК (антисмысловую цепь), содержащую область длиной приблизительно 30 нуклеотидов или меньше, например, длиной

15-30, 15-29, 15-28, 15-27, 15-26, 15-25, 15-24, 15-23, 15-22, 15-21, 15-20, 15-19, 1518, 15-17, 18-30, 18-29, 18-28, 18- 27, 18-26, 18-25, 18-24, 18-23, 18-22, 18-21, 18-20, 19-30, 19-29, 19-28, 19-27, 19-26, 19-25, 19-24, 19-23, 19-22, 19-21, 19-20, 20-30, 20-29, 20-28, 2027, 20-26, 20-25, 20-24, 20-23, 20-22, 20-21, 21-30, 21-29, 21-28, 21-27, 21-26, 21-25, 21-24, 21-23 или 21-22 нуклеотида, при этом такая область по существу комплементарна по меньшей мере части мРНК

- 9 048552 транскрипта гена HTT. В некоторых вариантах осуществления РНКи средства согласно изобретению включают цепь РНК (антисмысловую цепь), содержащую область длиной приблизительно 21-23 нуклеотида, при этом указанная область по существу комплементарна, по меньшей мере, части мРНК транскрипта гена HTT.

В некоторых вариантах осуществления РНКи средства согласно изобретению включают цепь РНК (антисмысловую цепь), которая может включать более протяженные цепи, например, до 66 нуклеотидов, например, длиной 36-66, 26-36, 25-36, 31-60, 22-43, 27-53 нуклеотида, содержащие участок по меньшей мере из 19 последовательных нуклеотидов, который по существу комплементарен по меньшей мере части мРНК транскрипта гена HTT. Такие РНКи средства с более протяженными антисмысловыми цепями предпочтительно включают вторую цепь РНК (смысловую цепь) длиной 20-60 нуклеотидов, где смысловая и антисмысловая цепи образуют дуплекс из 18-30 последовательных нуклеотидов.

Применение таких РНКи средств делает возможной направленную деградацию мРНК гена HTT у млекопитающих. Таким образом, способы и композиции, включающие указанные РНКи средства, могут применяться для лечения субъекта, у которого может быть эффективным снижение уровней или активности белка HTT, такого как субъект, страдающий HTT-ассоциированным заболеванием, таким как болезнь Хантингтона (БХ).

Следующее подробное описание раскрывает способы получения и применения композиций, содержащих РНКи средства, для ингибирования экспрессии гена HTT, а также композиции и способы лечения субъектов, страдающих заболеваниями и нарушениями, при которых может быть эффективным ингибирование или снижение экспрессии генов.

I. Определения.

Для того чтобы настоящее изобретение можно было легче понять, сначала даются определения некоторых терминов. Кроме того, следует отметить, что при каждом указании значения или диапазона значений параметра, предполагается, что значения и диапазоны, промежуточные по отношению к указанным значениям, также должны являться частью настоящего описания.

Если по контексту не требуется иное, термины в единственном числе используются в настоящем документе для обозначения одного или больше чем одного (т.е. по меньшей мере одного) грамматического объекта. Например, элемент означает один элемент или больше чем один элемент, например множество элементов.

Термин включающий используется в настоящем документе для обозначения и используется попеременно с фразой включающий, без ограничения. Термин или используется в настоящем документе для обозначения и попеременно с термином и/или, если из контекста явно не следует иное.

Термин приблизительно используется в настоящем документе для обозначения типичных диапазонов допусков в данной области техники. Например, приблизительно можно понимать как приблизительно 2 стандартных отклонения от среднего значения. В некоторых вариантах осуществления приблизительно означает ±10%. В некоторых вариантах осуществления приблизительно означает ±5%. Если приблизительно присутствует перед рядом чисел или диапазоном, то подразумевается, что приблизительно может относится к каждому из чисел в ряду или диапазоне.

Термин по меньшей мере перед числом или серией чисел понимается как включающий число, соседствующее с термином по меньшей мере, и все последующие числа или целые числа, которые могут быть логически включены, как явно следует из контекста. Например, количество нуклеотидов в молекуле нуклеиновой кислоты должно быть целым числом. Например, по меньшей мере 18 нуклеотидов из 21-нуклеотидной молекулы нуклеиновой кислоты означает, что 18, 19, 20 или 21 нуклеотид обладают указанным свойством. Если по меньшей мере присутствует перед рядом чисел или диапазоном, то подразумевается, что по меньшей мере может относится к каждому из чисел в ряду или диапазоне.

При использовании в настоящем документе термины не более чем или меньше чем следует понимать как значение, примыкающее к фразе, а также логически меньшие значения или целые числа, как логично следует из контекста, до нуля. Например, дуплекс с выступающим концом не больше 2 нуклеотидов имеет выступающий конец одной цепи длиной 2, 1 или 0 нуклеотидов. Если перед рядом чисел или диапазоном присутствует не больше чем, подразумевается, что не больше чем может относиться к каждому из чисел в ряду или диапазоне.

Используемые в настоящем документе методы обнаружения могут включать определение того, что количество присутствующего аналита ниже уровня количественного обнаружения метода.

В случае противоречия между указанным сайтом-мишенью и нуклеотидной последовательностью смысловой или антисмысловой цепи указанная последовательность имеет преимущество.

В случае противоречия между химической структурой и химическим названием химическая структура имеет преимущество.

Термин HTT или хантингтин, также известный как хантингтин, белок болезни Хантингтона, IT15, БХ, белок БХ или LOMARS, относится к хорошо известному гену, который кодирует белок, HTT, который широко экспрессируется, необходим для нормального развития, и гену заболевания, связанному с болезнью Хантингтона, нейродегенеративным заболеванием, характеризующимся потерей нейронов полосатого тела, вызванной удлиненным, нестабильным тринуклеотидным повтором (CAG) в

- 10 048552 гене хантингтина, который транслируется в виде полиглутаминового повтора в белковом продукте.

Примеры нуклеотидных и аминокислотных последовательностей HTT можно найти, например, в GenBank под номером доступа NM_002111.8 (HTT Homo sapiens, SEQ ID NO: 1, обратный комплемент, SEQ ID NO: 6); под номером доступа в GenBank NM_010414.3 (HTT Mus musculus, SEQ ID NO: 2; обратный комплемент, SEQ ID NO: 7); под номером доступа в GenBank: NM_024357.3 (HTT Rattus norvegicus, SEQ ID NO: 3, обратный комплемент, SEQ ID NO: 8); под номером доступа в GenBank: XM_015449989.1 (HTT Масаса fascicularis, SEQ ID NO: 4, обратный комплемент, SEQ ID NO: 9); и под номером доступа в GenBank: XM_028848247.1 (HTT Масаса mulatta, SEQ ID NO: 5, обратный комплемент, SEQ ID NO: 10).

Дополнительные примеры последовательностей HTT можно найти в общедоступных базах данных, например, в GenBank, OMIM и UniProt.

Дополнительную информацию по HTT можно найти, например, на сайте www. ncbi .nlm.nih. gov/gene/3 064.

Полное содержание каждого из вышеуказанных номеров доступа в GenBank и номеров в базе данных Gene включено в настоящий документ посредством отсылки на дату подачи настоящей заявки.

Термин HTT при использовании в настоящем документе также относится к вариациям гена HTT, включающим варианты, представленные в базе данных SNP. Были идентифицированы многочисленные вариации последовательностей в гене HTT, которые можно найти, например, в NCBI dbSNP и UniProt (см., например, www.ncbi.nlm.nih.gov/snp/?LinkName=gene_snp&from_uid=3064, полное содержание которых включено в настоящее описание посредством отсылки на дату подачи настоящей заявки.

При использовании в настоящем документе термин последовательность-мишень относится к непрерывной части нуклеотидной последовательности молекулы мРНК, образующейся во время транскрипции гена HTT, включая мРНК, которая является продуктом РНК-процессинга первичного продукта транскрипции. В одном варианте осуществления часть-мишень последовательности будет иметь достаточную длину, чтобы она могла служить в качестве субстрата для РНКи-направленного расщепления в этой части нуклеотидной последовательности молекулы мРНК, которая образуется во время транскрипции гена HTT, или рядом с ней.

Последовательность-мишень имеет длину приблизительно 15-30 нуклеотидов. Например, последовательность-мишень может иметь длину от приблизительно 15-30 нуклеотидов,

15-29, 15-28, 15-27, 15-26, 15-25, 15-24, 15-23, 15-22, 15-21, 15-20, 15-19, 1518, 15-17, 18-30, 18-29, 18-28, 18-27, 18-26, 18-25, 18-24, 18-23, 18-22, 18-21, 18-20, 19-30, 19-29, 19-28, 19-27, 19-26, 19-25, 19-24, 19-23, 19-22, 19-21, 19-20, 20-30, 20-29, 20-28, 2027, 20-26, 20-25, 20-24, 20-23, 20-22, 20-21, 21-30, 21-29, 21-28, 21-27, 21-26, 21-25, 21-24, 21-23 или 21-22 нуклеотида. В некоторых вариантах осуществления последовательность-мишень имеет длину 19-23 нуклеотида, необязательно 21-23 нуклеотида. Диапазоны и длины, промежуточные с указанными выше диапазонами и длинами, также рассматриваются как составляющие часть описания.

При использовании в настоящем документе термин цепь, включающая последовательность относится к олигонуклеотиду, включающему цепь нуклеотидов, которая описана последовательностью, представленную с использованием стандартной номенклатуры нуклеотидов.

G, C, A, T и U обычно обозначают нуклеотид, который в качестве основания содержит гуанин, цитозин, аденин, тимидин и урацил соответственно, в контексте модифицированного или немодифицированного нуклеотида. Впрочем, следует понимать, что термин рибонуклеотид или нуклеотид также может относиться к модифицированному нуклеотиду, как более подробно описано ниже, или к суррогатному замещающему остатку (см., например, табл. 1). Специалисту в данной области хорошо известно, что гуанин, цитозин, аденин, тимидин и урацил могут быть заменены другими остатками без существенного изменения свойств спаривания оснований олигонуклеотида, включающего нуклеотид, несущий такой замещающий остаток. Например, без ограничения, нуклеотид, включающий в качестве основания инозин, может образовывать пару оснований с нуклеотидами, содержащими аденин, цитозин или урацил. Следовательно, нуклеотиды, содержащие урацил, гуанин или аденин, могут быть заменены в нуклеотидных последовательностях дцРНК, представленных в настоящем описании, нуклеотидом, содержащим, например, инозин. В другом примере аденин и цитозин в любом положении олигонуклеотида могут быть заменены гуанином и урацилом соответственно, с образованием неоднозначной пары оснований G-U с мРНК-мишенью. Последовательности, содержащие такие замещающие остатки, подходят для композиций и способов, представленных в настоящем описании.

Термины иРНК, РНКи средство, иРНК средство, средство РНК-интерференции при попеременном использовании в настоящем документе, относятся к средству, которое содержит РНК, как этот термин определен в настоящем документе, и которое опосредует направленное расщепление РНКтранскрипта при посредстве РНК-индуцированного комплекса сайленсинга (RISC). РНК-интерференция (РНКи) представляет собой процесс, который направляет сиквенс-специфическую деградацию мРНК. РНКи модулирует, например ингибирует, экспрессию HTT в клетке, например, в клетке субъекта, такого

- 11 048552 как субъект-млекопитающее.

В одном варианте осуществления РНКи средство согласно изобретению включает одноцепочечную РНКи, которая взаимодействует с последовательностью РНК-мишени, например, последовательностью мРНК-мишени HTT, направляя расщепление РНК-мишени. Без ограничения какой-либо теорией, считается, что длинная двухцепочечная РНК, вводимая в клетки, расщепляется на короткие двухцепочечные интерферирующие РНК (миРНК), включающие смысловую цепь и антисмысловую цепь, эндонуклеазой III типа, известной как Dicer (Sharp et al. (2001) Genes Dev. 15:485). Dicer - фермент, подобный рибонуклеазе-Ш, процессирует эти дцРНК с образованием малых интерферирующих РНК длиной 19-23 пар оснований с характерными 3'-оверхенгами из двух оснований (Bernstein, et al. (2001) Nature 409:363). Затем эти миРНК включаются в РНК-индуцированный комплекс сайленсинга (RISC), где одна или больше геликаз раскручивают дуплекс миРНК, позволяя комплементарной антисмысловой цепи направлять распознавание мишени (Nykanen, et al. (2001) Cell 107:309). При связывании с соответствующей мРНКмишенью одна или больше эндонуклеаз в RISC расщепляют мишень, индуцируя сайленсинг (Elbashir, et al. (2001) Genes Dev. 15:188). Таким образом, в одном аспекте изобретение относится к одноцепочечной РНК (оцРНК) (антисмысловой цепи миРНК дуплекса), которая образуется в клетке и способствует формированию комплекса RISC, вызывающему сайленсинг гена-мишени, т.е. гена HTT. Таким образом, термин миРНК также используется в настоящем документе для обозначения РНКи, как описано выше.

В другом варианте осуществления РНКи средство может быть одноцепочечной РНК, которую вводят в клетку или организм для ингибирования мРНК-мишени. Одноцепочечные РНКи средства связываются с эндонуклеазой RISC - Argonaute 2, которая затем расщепляет мРНК-мишень. Одноцепочечные миРНК обычно состоят из 15-30 нуклеотидов и химически модифицированы. Дизайн и тестирование одноцепочечных РНК описаны в патенте США 8,101,348 и в публикации Lima et al. (2012) Cell 150:883894, полное содержание которых включено в настоящее описание посредством отсылки. Любая из последовательностей антисмысловых нуклеотидов, описанных в настоящем документе, может использоваться в виде одноцепочечной миРНК, как описано в настоящем документе, или в виде химически модифицированной способами, описанными в публикации Lima et al. (2012) Cell 150:883-894.

В другом варианте осуществления РНКи средство для применения в композициях и способах настоящего изобретения представляет собой двухцепочечную РНК и указано в настоящем документе как двухцепочечное РНКи средство, молекула двухцепочечной РНК (дцРНК), дцРНК средство или дцРНК. Термин дцРНК относится к комплексу молекул рибонуклеиновых кислот, имеющих структуру двойной спирали, состоящую из двух антипараллельных и по существу комплементарных цепей нуклеиновой кислоты, имеющих смысловую и антисмысловую ориентацию по отношению к РНКмишени, т.е. гену HTT. В некоторых вариантах осуществления изобретения двухцепочечная РНК (дцРНК) инициирует деградацию РНК-мишени, например мРНК, посредством механизма посттранскрипционного сайленсинга гена, называемого в настоящем документе как РНК-интерференция или РНКи.

Как правило, молекула дцРНК может включать рибонуклеотиды, однако, как подробно описано в настоящем документе, каждая или обе цепи могут также включать один или больше нерибонуклеотидов, например, дезоксирибонуклеотид, модифицированный нуклеотид. Кроме того, при использовании в настоящем описании, РНКи средство может включать рибонуклеотиды с химическими модификациями; РНКи средство может включать существенные модификации множества нуклеотидов. При использовании в настоящем документе термин модифицированный нуклеотид относится к нуклеотиду, имеющему, независимо, модифицированный остаток сахара, модифицированную межнуклеотидную связь или модифицированное нуклеиновое основание. Таким образом, термин модифицированный нуклеотид включает замены, добавления или удаления, например, функциональной группы или атома в межнуклеозидных связях, остатках сахара или нуклеиновых основаниях. Модификации, подходящие для применения в средствах согласно изобретению, включают все типы модификаций, раскрытых в настоящем документе или известных в уровне техники. Любые подобные модификации, при использовании в молекуле типа миРНК, охвачены термином РНКи средство в рамках настоящего описания и формулы изобретения.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения включение дезоксинуклеотида, если таковой присутствует в РНКи средстве, может рассматриваться как составляющее модифицированный нуклеотид.

Дуплексная область может иметь любую длину, которая обеспечивает специфичную деградацию требуемой РНК-мишени по пути RISC, и может иметь длину приблизительно 15-36 пар оснований, например, длину приблизительно 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 или 36 пар оснований, например, длину приблизительно

- 12 048552

15-30, 15-29, 15-28, 15-27, 15-26, 15-25, 15-24, 15-23, 15-22, 15-21, 15-20, 15-19, 15-18, 15-17, 18-30, 18-29, 18-28, 18-27, 18-26, 18-25, 18-24, 18-23, 18-22, 18-21, 1820, 19-30, 19-29, 19-28, 19-27, 19-26, 19-25, 19-24, 19-23, 19-22, 19-21, 19-20, 20-30, 20-29, 20-28, 20-27, 20-26, 20-25, 20-24, 20-23, 20-22, 20-21, 21-30, 21-29, 21-28, 21-27, 21-26, 2125, 21-24, 21-23 или 21-22 пары оснований. В некоторых вариантах осуществления длина дуплексной области составляет 1921 пару оснований, например, 21 пару оснований. Диапазоны и длины, промежуточные по отношению к указанным выше диапазонам и длинам, также рассматриваются как составляющие часть настоящего описания.

Две цепи, образующие двухспиральную структуру, могут быть разными частями одной более крупной молекулы РНК или отдельными молекулами РНК. Если две цепи являются частью одной более крупной молекулы и, следовательно, связаны непрерывной цепью нуклеотидов между 3'-концом одной цепи и 5'-концом соответствующей другой цепи, образуя двухспиральную структуру, соединительная цепь РНК называется петлей шпильки. Петля шпильки может включать по меньшей мере один неспаренный нуклеотид. В некоторых вариантах осуществления петля шпильки может включать по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 20, по меньшей мере 23 или больше неспаренных нуклеотидов или нуклеотидов, не направленных на сайт-мишень дцРНК. В некоторых вариантах осуществления петля шпильки может включать 10 или меньше нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления петля шпильки может включать 8 или меньше неспаренных нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления петля шпильки может включать 4-10 неспаренных нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления петля шпильки может включать 4-8 нуклеотидов.

Когда две по существу комплементарные цепи дцРНК состоят из отдельных молекул РНК, эти молекулы не должны обязательно, но могут быть ковалентно связаны. В некоторых вариантах осуществления, когда две цепи ковалентно соединены способом, отличным от непрерывной цепи нуклеотидов между 3'-концом одной цепи и 5'-концом соответствующей другой цепи, с образованием дуплексной структуры, соединительная структура называется линкер (хотя следует отметить, что некоторые другие структуры, определенные в других частях настоящего документа, также могут называться линкером). Цепи РНК могут содержать одинаковое или разное количество нуклеотидов. Максимальное количество пар оснований является количеством нуклеотидов в самой короткой цепи дцРНК за вычетом любых выступающих концов или оверхенгов, присутствующих в дуплексе. В дополнение к дуплексной структуре, РНКи может включать оверхенги длиной один или больше нуклеотидов. В одном варианте осуществления РНКи средства, по меньшей мере одна цепь содержит 3'-оверхенг по меньшей мере из 1 нуклеотида. В другом варианте осуществления по меньшей мере одна цепь включает 3'-оверхенг по меньшей мере из 2 нуклеотидов, например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 нуклеотидов. В других вариантах осуществления по меньшей мере одна цепь РНКи средства включает 5'-оверхенг по меньшей мере из 1 нуклеотида. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна цепь включает 5'-оверхенг по меньшей мере из 2 нуклеотидов, например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 нуклеотидов. В других вариантах осуществления 3'- и 5'-концы одной цепи РНКи средства включают оверхенг по меньшей мере из 1 нуклеотида.

В одном варианте осуществления РНКи средство согласно изобретению представляет собой дцРНК, каждая цепь которой независимо включает 19-23 нуклеотида, которая взаимодействует с последовательностью РНК-мишени, например, последовательностью РНК-мишени HTT, направляя расщепление РНКмишени.

При использовании в настоящем документе термин нуклеотидный оверхенг относится по меньшей мере к одному неспаренному нуклеотиду, выступающему из дуплексной структуры РНКи средства, например, дцРНК. Например, когда 3'-конец одной цепи дцРНК выходит за пределы 5'-конца другой цепи или наоборот, возникает нуклеотидный оверхенг. ДцРНК может включать выступ по меньшей мере из одного нуклеотида; в альтернативе оверхенг может включать по меньшей мере два нуклеотида, по меньшей мере три нуклеотида, по меньшей мере четыре нуклеотида, по меньшей мере пять нуклеотидов или больше. Выступающий нуклеотид может включать или состоять из аналога нуклеотида/нуклеозида, включая дезоксинуклеотид/нуклеозид. Оверхенг(и) может быть на смысловой цепи, антисмысловой цепи или их любой комбинации. Кроме того, нуклеотид(ы) оверхенга могут находиться на 5'-конце, 3'-конце или на обоих концах антисмысловой или смысловой цепи дцРНК.

В одном варианте осуществления антисмысловая цепь дцРНК содержит 1-10 нуклеотидов, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 нуклеотидов, выступающих на 3'-конце или 5'-конце. В одном варианте смысловая цепь дцРНК содержит 1-10 нуклеотидов, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 нуклеотидов, выступающих на 3'-конце или 5'-конце. В другом варианте осуществления один или больше нуклеотидов в оверхенге заменены нуклеозидтиофосфатом.

В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь дцРНК содержит 1-10 нуклеотидов,

- 13 048552 например, 0-3, 1-3, 2-4, 2-5, 4-10, 5-10, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 нуклеотидов, выступающие на 3'-конце или 5'-конце. В одном варианте смысловая цепь дцРНК содержит 1-10 нуклеотидов, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 нуклеотидов, выступающих на 3'-конце или 5'-конце. В другом варианте осуществления один или больше нуклеотидов в оверхенге заменены нуклеозидтиофосфатом.

В некоторых вариантах осуществления оверхенг смысловой цепи или антисмысловой цепи может включать удлиненные участки длиной более 10 нуклеотидов, например, длиной 1-30 нуклеотидов, 2-30 нуклеотидов, 10-30 нуклеотидов или 10-15 нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления удлиненный оверхенг находится на смысловой цепи дуплекса. В некоторых вариантах осуществления удлиненный оверхенг присутствует на 3'-конце смысловой цепи дуплекса. В некоторых вариантах осуществления удлиненный оверхенг присутствует на 5'-конце смысловой цепи дуплекса. В некоторых вариантах осуществления удлиненный оверхенг находится на антисмысловой цепи дуплекса. В некоторых вариантах осуществления удлиненный оверхенг присутствует на 3'-конце антисмысловой цепи дуплекса. В некоторых вариантах осуществления удлиненный оверхенг присутствует на 5'-конце антисмысловой цепи дуплекса. В некоторых вариантах осуществления один или больше нуклеотидов в оверхенге заменены нуклеозидтиофосфатом. В некоторых вариантах осуществления оверхенг включает самокомплементарную часть, в результате чего оверхенг способен образовывать шпилечную структуру, стабильную в физиологических условиях.

В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один конец по меньшей мере одной цепи выходит за пределы дуплексной направляющей области, включая структуры, в которых одна из цепей включает термодинамически стабилизирующую структуру четырехнуклеотидной петли или тетрапетли (см., например, патенты США 8513207 и 8927705, а также WO 2010033225, полное содержание которых включено в настоящий документ посредством отсылки). Такие структуры могут включать одноцепочечные удлинения (с одной или обеих сторон молекулы), а также двухцепочечные удлинения.

В некоторых вариантах осуществления 3'-конец смысловой цепи и 5'-конец антисмысловой цепи соединены полинуклеотидной последовательностью, содержащей рибонуклеотиды и/или дезоксирибонуклеотиды, где полинуклеотидная последовательность необязательно включает последовательность тетрапетли. В некоторых вариантах осуществления смысловая цепь имеет длину 25-35 нуклеотидов.

Тетрапетля может содержать рибонуклеотиды, дезоксирибонуклеотиды, модифицированные нуклеотиды и их комбинации. Обычно тетрапетля содержит от 4 до 5 нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления петля содержит последовательность, представленную как GAAA. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один нуклеотид петли (GAAA) включает модификацию нуклеотида. В некоторых вариантах осуществления модифицированный нуклеотид включает 2'-модификацию. В некоторых вариантах осуществления 2'-модификация представляет собой модификацию, выбранную из группы, состоящей из 2'-аминоэтила, 2'-фтора, 2'-О-метила, 2'-О-метоксиэтила, 2'-аминодиэтоксиметанола, 2'адем и 2'-дезокси-2'-фтор^-арабинонуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления модифицированы все нуклеотиды петли. В некоторых вариантах осуществления G в последовательности GAAA включает 2'-ОН. В некоторых вариантах осуществления каждый из нуклеотидов в последовательности GAAA включает 2'-О-метил модификацию. В некоторых вариантах осуществления каждый из А в последовательности GAAA включает 2'-ОН, a G в последовательности GAAA включает 2'-О-метил модификацию. В предпочтительных вариантах осуществления, в некоторых вариантах осуществления, каждый из А в последовательности GAAA включает 2'-О-метоксиэтил (МОЕ) модификацию, a G в последовательности GAAA включает 2'-О-метил модификацию; или каждый из А в последовательности GAAA включает 2'-адем модификацию, a G в последовательности GAAA включает 2'-О-метил модификацию. См., например, публикацию PCT WO 2020/206350, полное содержание которой включено в настоящий документ посредством отсылки.

Иллюстративный 2'адем-модифицированный нуклеотид показан ниже:

N NH₂

Термины тупой или тупой конец при использовании в настоящем документе в отношении дцРНК, означают, что на данном концевом участке дцРНК нет неспаренных нуклеотидов или аналогов нуклеотидов, т.е. нет нуклеотидного оверхенга. Один или оба конца дцРНК могут быть тупыми. Когда оба конца дцРНК тупые, говорят, что дцРНК имеет тупые концы. Для ясности, дцРНК с тупыми концами - это дцРНК, которая является тупой на обоих концах, т.е. не имеет нуклеотидного оверхенга на обоих концах молекулы. Чаще всего такая молекула будет двухцепочечной по всей своей длине.

Термин антисмысловая цепь или направляющая цепь относится к цепи РНКи средства, напри

- 14 048552 мер, дцРНК, которая включает область, которая по существу комплементарна последовательностимишени, например, мРНК HTT.

При использовании в настоящем документе термин область комплементарности относится к области антисмысловой цепи, которая по существу комплементарна последовательности, например последовательности-мишени, например, нуклеотидной последовательности HTT, как определено в настоящем документе. Если область комплементарности не полностью комплементарна последовательностимишени, некомплементарные пары нуклеотидов могут присутствовать во внутренних или концевых областях молекулы. Как правило, наиболее допустимые некомплементарные нуклеотиды находятся в концевых областях, например, в пределах 5, 4, 3 или 2 нуклеотидов от 5'- или 3'-конца РНКи средства. В некоторых вариантах осуществления двухцепочечное РНК средство согласно изобретению включает некомплементарный нуклеотид в антисмысловой цепи. В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь двухцепочечного РНК средства согласно изобретению включает не более 4 некомплементарных нуклеотидов с мРНК-мишенью, например, антисмысловая цепь включает 4, 3, 2, 1 или 0 некомплементарных нуклеотидов с мРНК-мишенью. В некоторых вариантах осуществления антисмысловое двухцепочечное РНК средство согласно изобретению включает не больше 4 некомплементарных нуклеотидов со смысловой цепью, например, антисмысловая цепь включает 4, 3, 2, 1 или 0 некомплементарных нуклеотидов со смысловой цепью. В некоторых вариантах осуществления двухцепочечное РНК средство согласно изобретению включает некомплементарный нуклеотид в смысловой цепи. В некоторых вариантах осуществления смысловая цепь двухцепочечного РНК средства согласно изобретению включает не больше 4 некомплементарных нуклеотидов с антисмысловой цепью, например, смысловая цепь включает 4, 3, 2, 1 или 0 некомплементарных нуклеотидов с антисмысловой цепью. В некоторых вариантах осуществления некомплементарный нуклеотид находится, например, в пределах 5, 4, 3 нуклеотидов от 3'-конца иРНК. В другом варианте осуществления некомплементарный нуклеотид присутствует, например, в 3'-концевом нуклеотиде иРНК средства. В некоторых вариантах осуществления некомплементарный нуклеотид(ы) не присутствует в затравочной области.

Таким образом, РНКи средство, описанное в настоящем документе, может содержать один или больше нуклеотидов, образующих некомплементарные пары с последовательностью-мишенью. В одном варианте осуществления РНКи средство, описанное в настоящем документе, содержит не больше 3 некомплементарных нуклеотидов (т.е. 3, 2, 1 или 0 некомплементарных нуклеотидов). В одном варианте осуществления РНКи средство, описанное в настоящем документе, содержит не больше 2 некомплементарных нуклеотидов. В одном варианте осуществления РНКи средство, описанное в настоящем документе, содержит не больше 1 некомплементарного нуклеотида. В одном варианте осуществления РНКи средство, описанное в настоящем документе, содержит 0 некомплементарных нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления, если антисмысловая цепь РНКи средства содержит нуклеотиды, образующие некомплементарные пары с последовательностью-мишенью, такой некомплементарный нуклеотид может быть необязательно ограничен последними 5 нуклеотидами либо от 5'-, либо от 3'-конца области комплементарности. Например, в таких вариантах осуществления, в случае РНКи средства длиной 23 нуклеотида, цепь, которая комплементарна области гена HTT, обычно не содержит какой-либо некомплементарный нуклеотид в пределах 13 центральных нуклеотидов. Способы, описанные в настоящем документе, или способы, известные в уровне техники, можно применять для определения, обеспечивает ли РНКи средство, содержащее нуклеотид, образующий некомплементарную пару с последовательностью-мишенью, эффективное ингибирование экспрессии гена HTT.

Рассмотрение эффективности РНКи средств с некомплементарными нуклеотидами при ингибировании экспрессии гена HTT является важным, особенно если известно, что конкретная область комплементарности в гене HTT имеет полиморфную вариацию последовательности в пределах популяции.

Термин смысловая цепь или сопровождающая цепь при использовании в настоящем документе относится к цепи РНКи средства, которая включает область, которая по существу комплементарна области антисмысловой цепи, в соответствии с определением данного термина в настоящем документе.

При использовании в настоящем документе термин область расщепления относится к области, расположенной непосредственно рядом с сайтом расщепления. Сайт расщепления представляет собой сайт на мишени, в котором происходит расщепление. В некоторых вариантах осуществления область расщепления содержит три основания на каждом конце сайта расщепления и непосредственно рядом с ним. В некоторых вариантах осуществления область расщепления содержит два основания на каждом конце сайта расщепления и непосредственно рядом с ним. В некоторых вариантах осуществления сайт расщепления находится конкретно в сайте, связанном с нуклеотидами 10 и 11 антисмысловой цепи, и область расщепления включает нуклеотиды 11, 12 и 13.

При использовании в настоящем документе и если не указано иное, термин комплементарный, в случае его использования для описания первой нуклеотидной последовательности по отношению ко второй нуклеотидной последовательности, относится к способности олигонуклеотида или полинуклеотида, включающего первую нуклеотидную последовательность, гибридизоваться и образовывать дуплексную структуру при некоторых условиях с олигонуклеотидом или полинуклеотидом, включающим вторую нуклеотидную последовательность, как будет понятно специалисту в данной области.

- 15 048552

Комплементарные последовательности в РНКи средстве, например, в дцРНК, как описано в настоящем документе, включают спаривание оснований олигонуклеотида или полинуклеотида, включающего первую нуклеотидную последовательность, с олигонуклеотидом или полинуклеотидом, включающим вторую нуклеотидную последовательность, по всей длине одной или обеих нуклеотидных последовательностей. Такие последовательности могут называться в настоящем документе полностью комплементарными по отношению друг к другу. Впрочем, если первая последовательность указана в настоящем документе как по существу комплементарная по отношению ко второй последовательности, две последовательности могут быть полностью комплементарными, или они могут образовывать одну или больше, но обычно не больше 5, 4, 3 или 2, некомплементарных пар оснований при гибридизации дуплекса до 30 пар оснований, сохраняя при этом способность к гибридизации в условиях, наиболее подходящих для их конечного применения, например, ингибирования экспрессии генов по пути RISC. Впрочем, если два олигонуклеотида предназначены для образования при гибридизации одного или больше одноцепочечных выступающих концов, то такие выступающе концы не должны считаться некомплементарными нуклеотидами в отношении определения комплементарности. Например, дцРНК, включающая один олигонуклеотид длиной 21 нуклеотид и другой олигонуклеотид длиной 23 нуклеотида, где более длинный олигонуклеотид включает последовательность из 21 нуклеотида, полностью комплементарную более короткому олигонуклеотиду, все же может называться полностью комплементарной в целях, описанных в настоящем документе.

Комплементарные последовательности при использовании в настоящем документе также могут включать, или могут быть полностью образованы из не уотсон-криковских пар оснований или пар оснований, образованных из неприродных и модифицированных нуклеотидов, в той мере, в какой выполняются указанные выше требования в отношении их способности гибридизации. Такие не уотсонкриковские пары оснований включают, без ограничения, спаривание неоднозначных или хугстиновских G:U оснований.

Термины комплементарный, полностью комплементарный и по существу комплементарный в настоящем документе могут использоваться в отношении совпадения оснований между смысловой цепью и антисмысловой цепью дцРНК или между антисмысловой цепью РНКи средства и последовательностью-мишенью, как будет понятно из контекста их применения.

При использовании в настоящем документе полинуклеотид, который по существу комплементарен, по меньшей мере, части матричной РНК (мРНК), относится к полинуклеотиду, который по существу комплементарен непрерывной части представляющей интерес мРНК (например, мРНК, кодирующей HTT). Например, полинуклеотид комплементарен, по меньшей мере, части мРНК HTT, если последовательность по существу комплементарна непрерывной части мРНК, кодирующей HTT.

Таким образом, в некоторых вариантах осуществления антисмысловые полинуклеотиды, раскрытые в настоящем документе, полностью комплементарны последовательности-мишени HTT. В других вариантах осуществления антисмысловые полинуклеотиды, раскрытые в настоящем документе, по существу комплементарны последовательности-мишени HTT компонента комплемента и содержат непрерывную нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 80% комплементарна по всей своей протяженности эквивалентному участку нуклеотидной последовательности любой из SEQ ID NO: 1-5 или фрагменту любой из SEQ ID NO: 1-5, например комплементарна приблизительно на 85%, приблизительно на 90%, приблизительно на 91%, приблизительно на 92%, приблизительно на 93%, приблизительно на 94%, приблизительно на 95%, приблизительно на 96%, приблизительно на 97%, приблизительно на 98% или приблизительно на 99%.

В других вариантах осуществления антисмысловые полинуклеотиды, раскрытые в настоящем документе, по существу комплементарны последовательности-мишени HTT и включают непрерывную нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере приблизительно на 80% комплементарна по всей своей протяженности любой из нуклеотидных последовательностей смысловой цепи в любой из табл. 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 21, 24, 25, 27-30, 32 и 33, или фрагмент любой из нуклеотидных последовательностей смысловой цепи в любой из табл. 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 21, 24, 25, 27-30, 32 и 33, например, комплементарны приблизительно на 85%, приблизительно на 90%, приблизительно на 91%, приблизительно на 92%, приблизительно на 93%, приблизительно на 94%, приблизительно на 95%, приблизительно на 96%, приблизительно на 97%, приблизительно на 98%, приблизительно на 99% или на 100%.

В одном варианте осуществления РНКи средство согласно изобретению включает смысловую цепь, которая по существу комплементарна антисмысловому полинуклеотиду, который, в свою очередь, является таким же, как последовательность-мишень HTT, и где полинуклеотид смысловой цепи включает непрерывную нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере приблизительно на 80% комплементарна по всей своей протяженности эквивалентному участку нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 6-10 или фрагменту любой из SEQ ID NO: 6-10, например комплементарна приблизительно на 85%, приблизительно на 90%, приблизительно на 91%, приблизительно на 92%, приблизительно на 93%, приблизительно на 94%, приблизительно на 95%, приблизительно на 96%, приблизительно на 97%, приблизительно на 98%, приблизительно на 99% или на 100%.

- 16 048552

В некоторых вариантах осуществления иРНК согласно изобретению включает смысловую цепь, которая по существу комплементарна антисмысловому полинуклеотиду, который, в свою очередь, комплементарен последовательности-мишени HTT, и где полинуклеотид смысловой цепи включает непрерывную нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере приблизительно на 80% комплементарна по всей своей протяженности любой из нуклеотидных последовательностей антисмысловой цепи в любой из табл. 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 21, 24, 25, 27-30, 32 и 33, или фрагмент любой из нуклеотидных последовательностей антисмысловой цепи в любой из табл. 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 21, 24, 25, 27-30, 32 и 33, например, комплементарна приблизительно на 85%, приблизительно на 90%, приблизительно на 91%, приблизительно на 92%, приблизительно на 93%, приблизительно на 94%, приблизительно на 95%, приблизительно на 96%, приблизительно на 97%, приблизительно на 98%, приблизительно на 99% или на 100%.

В одном варианте осуществления по меньшей мере частичное подавление экспрессии гена HTT оценивают по уменьшению количества мРНК HTT, которая может быть выделена или обнаружена в первой клетке или группе клеток, в которых транскрибируется ген HTT, и которые были обработаны таким образом, что экспрессия гена HTT была ингибирована, по сравнению со второй клеткой или группой клеток, по существу идентичных первой клетке или группе клеток, но которые не были подвергнуты такой обработке (контрольные клетки). Степень ингибирования может быть выражена следующим образом:

jvFFFi н, контрольных клерках- fvPHK н обработанных кле^ткэх) ----------------------------------------------------------------------------------------------------· 10 0 S (мРНК в контрольных клетках)

Фраза контакт клетки с РНКи средством, таким как дцРНК, используемая в настоящем документе, включает осуществление контакта с клеткой любым возможным способом. Контакт клетки с РНКи средством включает контакт клетки in vitro с РНКи средством или контакт клетки in vivo с РНКи средством. Контакт может осуществляться непосредственно или опосредованно. Так, например, РНКи средство может быть приведено в физический контакт с клеткой лицом, выполняющим метод, или, в альтернативе, РНКи средство может быть помещен в ситуацию, которая обеспечит или вызовет его последующий контакт с клеткой.

Контакт с клеткой in vitro может быть осуществлен, например, путем инкубирования клетки с РНКи средством. Контакт с клеткой in vivo может быть осуществлен, например, путем инъекции РНКи средства в ткань или рядом с тканью, в которой расположена клетка, или путем инъекции РНКи средства в другую область, например, в центральную нервную систему (ЦНС), необязательно путем интратекальной, интравитреальной или другой инъекции, или в кровоток, или в подкожное пространство, чтобы средство затем достигало ткань, в которой расположена клетка, подлежащая контакту. Например, РНКи средство может содержать или может быть связано с лигандом, например липофильным фрагментом или фрагментами, как описано ниже и дополнительно описано, например, в PCT/US2019/031170, который включен в настоящий документ посредством отсылки, который направляет или иным образом стабилизирует РНКи средство в интересующем участке, например, в ЦНС. Также возможны комбинации способов контакта in vitro и in vivo. Например, клетка также может быть приведена в контакт in vitro с РНКи средством и затем трансплантирована субъекту.

В одном варианте осуществления контакт клетки с РНКи средством включает введение или доставку РНКи средства в клетку путем облегчения или осуществления захвата или абсорбции клеткой. Абсорбция или захват РНКи средства может проходить посредством спонтанных диффузионных или активных клеточных процессов или с помощью вспомогательных средств или устройств. Введение РНКи средства в клетку может осуществляться in vitro или in vivo. Например, при введении in vivo РНКи средство можно вводить путем инъекции в участок ткани или вводить системно. Введение in vitro в клетку включает способы, известные в уровне техники, такие как электропорация и липофекция. Дополнительные методы описаны ниже или известны в уровне техники.

Термин липофильный или липофильный фрагмент в широком смысле относится к любому соединению или химическому фрагменту, обладающему сродством к липидам. Один из путей характеристики липофильности липофильного фрагмента является коэффициент распределения между октаноломводой, logK_ow, где K_ow представляет собой отношение концентрации химического вещества в октанольной фазе к его концентрации в водной фазе двухфазной системы в равновесии. Коэффициент распределения в октаноле-воде представляет собой лабораторно измеряемое свойство вещества. Однако его также можно предсказывать, используя коэффициенты, относящиеся к структурным компонентам химического вещества, которые вычисляют при использовании неэмпирических или эмпирических методов (см., например, публикацию Tetko et al., J. Chem. Inf. Comput. Sci. 41:1407-21 (2001), которая полностью включена в настоящий документ посредством отсылки). Он обеспечивает термодинамическую величину тенденции вещества предпочитать неводную или масляную среду, а не воду (т.е. его гидрофильный/липофильный баланс). В принципе, химическое вещество является липофильным по своей природе, если его logKow выше 0. Как правило, липофильная молекула имеет logKow больше 1, больше 1,5, больше 2, больше 3, больше 4, больше 5 или больше 10. Например, теоретическое значение logK_ow для 6-амино

- 17 048552 гексанола составляет приблизительно 0,7. При использовании такого же метода теоретическое значение logKow холестерил-Н-(гексан-6-ол)карбамата составляет 10,7.

Липофильность молекулы может изменяться в зависимости от функциональной группы, которую она несет. Например, добавление гидроксильной группы или аминогруппы на конец липофильной молекулы может увеличить или уменьшить значение коэффициента распределения (например, logK_ow) липофильной молекулы.

В альтернативе гидрофобность двухцепочечного РНКи средства, конъюгированного с одним или больше липофильными фрагментами, можно измерять по его характеристикам связывания с белком. Например, в некоторых вариантах осуществления можно определить, что несвязанная фракция в анализе связывания с белками плазмы двухцепочечного РНКи средства положительно коррелирует с относительной гидрофобностью двухцепочечного РНКи средства, которая затем может положительно коррелировать с сайленсирующей активностью двухцепочечного РНКи средства.

В одном варианте осуществления определенный анализ связывания с белками плазмы представляет собой анализ сдвига электрофоретической подвижности (EMSA) с использованием белка сывороточного альбумина человека. Примерный протокол этого анализа связывания подробно проиллюстрирован, например, в PCT/US2019/031170. Гидрофобность двухцепочечного РНКи средства, измеренная по фракции несвязанной миРНК в анализе связывания, превышает 0,15, превышает 0,2, превышает 0,25, превышает 0,3, превышает 0,35, превышает 0,4, превышает 0,45 или превышает 0,5 для опосредованной доставки миРНК in vivo.

Таким образом, конъюгирование липофильных фрагментов с внутренним положением(ями) двухцепочечного РНКи средства обеспечивает оптимальную гидрофобность для опосредованной доставки миРНК in vivo.

Термин липидная наночастица или ЛНЧ представляет собой везикулу, включающую липидный слой, инкапсулирующий фармацевтически активную молекулу, такую как молекула нуклеиновой кислоты, например, РНКи средство или плазмида, с которой транскрибируется РНКи средство. ЛНЧ описаны, например, в патентах США 6858225, 6815432, 8158601 и 8058069, полное содержание которых включено в настоящий документ посредством отсылки.

При использовании в настоящем документе термин субъект представляет собой животное, такое как млекопитающее, включая примата (например, человека, не относящегося к человеку примата, например, обезьяну и шимпанзе) или непримата (например, крысу или мышь). В предпочтительном варианте осуществления субъектом является человек, такой как человек, который подвергается лечению или оценке на предмет заболевания, нарушения или состояния, при котором может быть эффективным снижение экспрессии HTT; человек, подверженный риску развития заболевания, нарушения или состояния, при котором может быть эффективным снижение экспрессии HTT; человек, имеющий заболевание, нарушение или состояние, при котором может быть эффективным снижение экспрессии HTT; или человек, проходящий лечение заболевания, нарушения или состояния, при котором может быть эффективным снижение экспрессии HTT, как описано в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления субъектом является женщина. В других вариантах осуществления субъектом является мужчина. В одном варианте осуществления субъектом является взрослый субъект. В одном варианте осуществления субъектом является субъект педиатрического профиля. В другом варианте осуществления субъектом является несовершеннолетний субъект, то есть субъект, не достигший возраста 20 лет.

При использовании в настоящем документе термин лечение относится к полезному или требуемому результату, включающему, без ограничения, облегчение или улучшение одного или больше признаков или симптомов, связанных с экспрессией гена HTT или продукцией белка HTT, например, HTTассоциированных заболеваний, например, болезни Хантингтона. Лечение также может означать увеличение выживаемости по сравнению с ожидаемой выживаемостью в отсутствии лечения.

Термин более низкий в контексте уровня HTT у субъекта или маркера или симптома заболевания относится к статистически значимому снижению такого уровня. Снижение может составлять, например, по меньшей мере 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95% или больше. В некоторых вариантах осуществления снижение составляет по меньшей мере 20%. В некоторых вариантах осуществления снижение маркера заболевания, например уровня экспрессии белка или гена, составляет по меньшей мере 50%. Более низкий в контексте уровня HTT у субъекта предпочтительно ниже уровня, принятого за диапазон нормальных значений для лица, не имеющего такого нарушения. В некоторых вариантах осуществления более низкий представляет собой уменьшение различия между уровнем маркера или симптома у субъекта, страдающего заболеванием, и уровнем, приемлемым в диапазоне нормальных значений для лица, например, уровнем снижения массы тела между лицом с ожирением и лицом с весом, находящимся в границах диапазона нормальных значений.

При использовании в настоящем документе термин профилактика или предупреждение, в случае использования в отношении заболевания, нарушения или состояния, при котором может быть эффективным снижение экспрессии гена HTT или продукции белка HTT, относится к снижению вероятности развития у субъекта симптома, связанного с таким заболеванием, нарушением или состоянием, например, симптома HTT-ассоциированного заболевания. Отсутствие развития заболевания, нарушения или

- 18 048552 состояния или уменьшение развития симптома, связанного с таким заболеванием, нарушением или состоянием (например, по меньшей мере приблизительно на 10% по клинически принятой шкале для такого заболевания или нарушения), или проявление отсроченных симптомов (например, отсроченных на дни, недели, месяцы или годы) считается эффективной профилактикой.

При использовании в настоящем документе термин HTT-ассоциированное заболевание или HTTассоциированное нарушение следует понимать как любое заболевание или нарушение, при котором может быть эффективным снижение экспрессии и/или активности HTT. Иллюстративные HTT-ассоциированные заболевания включают болезнь Хантингтона.

Болезнь Хантингтона, также известная как БХ, хорея Хантингтона, большая хорея, хроническая прогрессирующая хорея и наследственная хорея, представляет собой аутосомно-доминантное генетическое заболевание, характеризующееся хореиформными движениями и прогрессирующим ухудшением интеллекта, обычно начинающееся в среднем возрасте (от 35 до 50 лет). Болезнь в равной степени поражает представителей обоих полов. Хвостатое ядро атрофируется, популяция мелких клеток дегенерирует, а уровни нейротрансмиттеров, гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК) и субстанции P, снижаются. Эта дегенерация приводит к появлению характерных желудочков в форме вагонетки, наблюдаемых на КТ.

Симптомы и признаки БХ развиваются незаметно. Наиболее явными симптомами БХ являются аномальные движения тела, называемые хореей, и нарушение координации, но заболевание также влияет на ряд умственных способностей и некоторые аспекты личности. Эти физические симптомы обычно становятся заметными после сорока лет, но могут возникнуть в любом возрасте. Если возраст манифестации меньше 20 лет, то заболевание известно как ювенильная БХ.

Деменция или психические расстройства, начиная от апатии и раздражительности и заканчивая ярко выраженным биполярным или шизофрениформным расстройством, могут предшествовать двигательному нарушению или могут развиваться во время его течения. Первым поведенческим проявлением может быть ангедония или асоциальное поведение. Моторные проявления включают прерывистые движения конечностей, ритмичную походку, моторную имперсистенцию (неспособность поддерживать двигательное действие, например, высовывание языка), лицевую гиперкинезию, атаксию и дистонию.

БХ вызвана удлинением тринуклеотидных повторов в гене Хантингтина (HTT) и является одним из нескольких заболеваний, связанных с полиглутаминовыми повторами (или поли^) трактом). Это приводит к образованию удлиненной формы мутантного белка хантингтина (mHtt), который вызывает гибель клеток в определенных областях мозга.

Терапевтически эффективное количество при использовании в настоящем документе, включает количество РНКи средства, которое при введении субъекту, имеющему HTT-ассоциированное заболевание, является достаточным для эффективного лечения заболевания (например, за счет уменьшения, улучшения или сохранения существующего заболевания или одного или более симптомов заболевания). Терапевтически эффективное количество может изменяться в зависимости от РНКи средства, способа введения средства, заболевания и его тяжести, а также анамнеза, возраста, веса, семейного анамнеза, генетического состава, типов предшествующего или сопутствующего лечения, если таковые присутствуют, и других индивидуальных особенностей субъекта, подлежащего лечению.

Профилактически эффективное количество при использовании в настоящем документе включает количество РНКи средства, которое при введении субъекту, имеющему HTT-ассоциированное нарушение, является достаточным для предотвращения или облегчения заболевания или одного или более симптомов заболевания. Облегчение заболевания включает замедление течения заболевания или уменьшение тяжести развивающегося впоследствии заболевания. Профилактически эффективное количество может изменяться в зависимости от РНКи средства, способа введения средства, степени риска заболевания и анамнеза, возраста, веса, семейного анамнеза, генетического состава, типов предшествующего или сопутствующего лечения, если таковые присутствуют, и других индивидуальных особенностей пациента, подлежащего лечению.

Терапевтически эффективное количество или профилактически эффективное количество также включает количество РНКи средства, которое оказывает некоторый желаемый местный или системный эффект при разумном соотношении пользы/рисков, применимом к любому лечению. РНКи средство, применяемое в способах согласно настоящему изобретению, могут вводить в количестве, достаточном для получения разумного соотношения пользы/рисков, применимого к такому лечению.

Фраза фармацевтически приемлемый используется в настоящем документе для обозначения таких соединений, материалов, композиций или лекарственных форм, которые, в рамках обоснованной клинической оценки, подходят для применения в контакте с тканями человека и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или других проблем или осложнений, соответствующих разумному соотношению пользы/рисков.

Фраза фармацевтически приемлемый носитель при использовании в настоящем документе означает фармацевтически приемлемый материал, композицию или носитель, такой как жидкий или твердый наполнитель, разбавитель, вспомогательное вещество, технологическую добавку (например, смазывающее вещество, тальк, стеарат магния, кальция или цинка, или стеариновую кислоту) или инкапсулирую

- 19 048552 щий растворитель материал, участвующий в переносе или транспортировке рассматриваемого соединения из одного органа или части тела в другой орган или часть тела. Каждый носитель приемлемым в том смысле, что он должен быть совместимым с другими ингредиентами состава и не токсичным для субъекта, подвергаемого лечению. Некоторые примеры материалов, которые могут служить в качестве фармацевтически приемлемых носителей, включают: (1) сахара, такие как лактозу, глюкозу и сахарозу; (2) крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал; (3) целлюлозу и ее производные, такие как натрий-карбоксиметилцеллюлозу, этилцеллюлозу и ацетат целлюлозы; (4) порошок трагаканта; (5) солод; (6) желатин; (7) смазывающие вещества, такие как стеарат магния, лаурилсульфат натрия и тальк; (8) вспомогательные вещества, такие как масло какао и воск для суппозиториев; (9) масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло, сафлоровое масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло; (10) гликоли, такие как пропиленгликоль; (11) полиолы, такие как глицерин, сорбит, маннит и полиэтиленгликоль; (12) сложные эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат; (13) агар; (14) буферные вещества, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия; (15) альгиновую кислоту; (16) апирогенную воду; (17) изотонический раствор хлорида натрия; (18) раствор Рингера; (19) этиловый спирт; (20) pH-буферные растворы; (21) сложные полиэфиры, поликарбонаты или полиангидриды; (22) наполнители, такие как полипептиды и аминокислоты; (23) компонент сыворотки, такой как сывороточный альбумин, ЛПВП и ЛПНП; и (22) другие нетоксичные совместимые вещества, используемые в фармацевтических составах.

Термин образец при использовании в настоящем документе включает набор подобных жидкостей, клеток или тканей, выделенных у субъекта, а также жидкостей, клеток или тканей, присутствующих у субъекта. Примеры биологических жидкостей включают кровь, сыворотку и серозные жидкости, плазму, спинномозговую жидкость, глазные жидкости, лимфу, мочу, слюну и т.п. Образцы тканей могут включать образцы тканей, органов или локализованных областей. Например, образцы могут быть получены из определенных органов, частей органов или жидкостей или клеток внутри этих органов. В некоторых вариантах осуществления образцы могут быть получены из головного мозга (например, всего головного мозга или некоторых сегментов головного мозга, например полосатого тела, или некоторых типов клеток головного мозга, таких как, например, нейроны и глиальные клетки (астроциты, олигодендроциты, микроглиальные клетки)). В некоторых вариантах осуществления образец, полученный у субъекта относится к крови, забранной у субъекта, или плазме или сыворотке крови, полученных из нее. В других вариантах осуществления образец, полученный у субъекта относится к ткани головного мозга (или ее субкомпонентам) или ткани сетчатки (или ее субкомпонентам), полученной у субъекта.

II. РНКи средства согласно изобретению.

В настоящем документе описаны РНКи средства, которые ингибируют экспрессию гена HTT. В одном варианте осуществления РНКи средство включает молекулы двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК) для ингибирования экспрессии гена HTT в клетке, такой как клетка субъекта, например млекопитающего, такого как человек, имеющий HTT-ассоциированное заболевание, например, болезнь Хантингтона. ДцРНК включает антисмысловую цепь, содержащую область комплементарности, которая комплементарна по меньшей мере части мРНК, образующейся при экспрессии гена HTT.

Область комплементарности имеет длину приблизительно 15-30 нуклеотидов или меньше. При контакте с клеткой, экспрессирующей ген HTT, РНКи средство ингибирует экспрессию гена HTT (например, человеческого гена, гена примата, гена не примата) по меньшей мере на 50%, как определено, например, при анализе с помощью ПЦР или метода на основе разветвленной ДНК (рДНК), или метода на основе белка, такого как иммунофлуоресцентный анализ с использованием, например, методик Вестернблоттинга или проточной цитометрии. В одном случае уровень нокдауна определяют в клетках Cos7 при использовании метода анализа Dual-Luciferase assay.

ДцРНК включает две цепи РНК, которые комплементарны и гибридизуются с образованием дуплексной структуры в условиях, в которых будет использоваться дцРНК. Одна цепь дцРНК (антисмысловая цепь) включает область комплементарности, которая по существу комплементарна, а обычно полностью комплементарна, последовательности-мишени. Последовательность-мишень может быть получена на основе последовательности мРНК, образующейся во время экспрессии гена HTT. Другая цепь (смысловая цепь) включает область, комплементарную антисмысловой цепи, в результате чего две цепи гибридизуются и образуют дуплексную структуру при объединении в подходящих условиях. Как описано в других разделах настоящего документа и как известно в уровне техники, комплементарные последовательности дцРНК также могут содержаться в виде самокомплементарных областей одной молекулы нуклеиновой кислоты, а не в виде отдельных олигонуклеотидов.

Как правило, дуплексная структура имеет длину 15-30 пар оснований, например, длину

- 20 048552

15-29, 15-28, 15-27, 15-26, 15-25, 15-24, 15-23, 15-22, 15-21, 15-20, 15-19, 15-18, 1517, 18-30, 18-29, 18-28, 18-27, 18-26, 18-25, 18-24, 18-23, 18-22, 18-21, 18-20, 19-30, 19-29, 19-28, 19-27, 19-26, 19-25, 19-24, 19-23, 19-22, 19-21, 19-20, 20-30, 20-29, 20-28, 20-27, 2026, 20-25, 20-24,20-23, 20-22, 20-21, 21-30, 21-29, 21-28, 21-27, 21-26, 21-25, 21-24, 21-23 или 21-22 пары оснований. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления дуплексная структура имеет длину 18-25 пар оснований, например длину

18-25, 18-24, 1823, 18-22, 18-21, 18-20, 19-25, 19-24, 19-23, 19-22, 19-21, 19-20, 20-25, 20-24,20-23, 20-22, 2021, 21-25, 21-24, 21-23, 21-22, 22-25, 22-24, 22-23, 23-25, 23-24 или 24-25 пар оснований, например длину 19-21 пару оснований. Диапазоны и длины, промежуточные по отношению к указанным выше диапазонам и длинам, также рассматриваются как часть изобретения.

Аналогичным образом, область комплементарности с последовательностью-мишенью имеет длину 15-30 нуклеотидов, например длину

15-29, 15-28, 15-27, 15-26, 1525, 15-24, 15-23, 15-22, 15-21, 15-20, 15-19, 15-18, 15-17, 18-30, 18-29, 18-28, 18-27, 18-26, 18-25, 18-24, 18-23, 18-22, 18-21, 18-20, 19-30, 19-29, 19-28, 19-27, 19-26, 19-25, 19-24, 1923, 19-22, 19-21, 19-20, 20-30, 20-29, 20-28, 20-27, 20-26, 20-25, 20-24,20-23, 20-22, 20-21, 2130, 21-29, 21-28, 21-27, 21-26, 21-25, 21-24, 21-23 или 21-22 нуклеотида, например длину 19-23 нуклеотида или 21-23 нуклеотида. Диапазоны и длины, промежуточные по отношению к указанным выше диапазонам и длинам, также рассматриваются как часть изобретения.

В некоторых вариантах осуществления дуплексная структура имеет длину 19-30 пар оснований. Аналогичным образом, область комплементарности с последовательностью-мишенью имеет длину 19-30 нуклеотидов.

В некоторых вариантах осуществления дцРНК имеет длину 15-23 нуклеотидов, длину 19-23 нуклеотидов или длину 25-30 нуклеотидов. В целом дцРНК имеет достаточную длину, чтобы она могла служить субстратом для фермента Dicer. Например, из уровня техники известно, что дцРНК с длиной больше чем приблизительно 21-23 нуклеотида могут служить в качестве субстратов для Dicer. Для среднего специалиста также будет очевидным, что область РНК, служащая мишенью при расщеплении, чаще всего будет частью более крупной молекулы РНК, часто молекулы мРНК. В соответствующих случаях часть мРНК-мишени является непрерывной последовательностью мРНК-мишени достаточной длины, чтобы она могла быть субстратом для РНКи-направленного расщепления (т.е. расщепления по пути RISC).

Специалисту в данной области также будет известно, что дуплексная область является основной функциональной частью дцРНК, например, дуплексная область приблизительно из 15-36 пар оснований, например из

15-36, 15-35, 15-34, 15-33, 15-32, 1531, 15-30, 15-29, 15-28, 15-27, 15-26, 15-25, 15-24, 15-23, 15-22, 15-21, 15-20, 15-19, 15-18, 15-17, 18-30, 18-29, 18-28, 18-27, 18-26, 18-25, 18-24, 18-23, 18-22, 18-21, 18-20, 19-30, 1929, 19-28, 19-27, 19-26, 19-25, 19-24, 19-23, 19-22, 19-21, 19-20, 20-30, 20-29, 20-28, 20-27, 20-26, 20-25, 20-24,20-23, 20-22, 20-21, 21-30, 21-29, 21-28, 21-27, 21-26, 21-25, 21-24, 21-23 или 21-22 пар оснований, например 19-21 пары оснований. Таким образом, в одном варианте осуществления, в той степени, в какой он процессируется в виде функционального дуплекса, например, из 15-30 пар оснований, который направлен на требуемую РНК для расщепления, молекула РНК или комплекс молекул РНК, имеющих дуплексную область больше чем из 30 пар оснований, представляет собой дцРНК. Таким образом, для среднего специалиста в данной области будет очевидным, что в одном варианте осуществления миРНК представляет собой дцРНК. В другом варианте осуществления дцРНК является неприродной миРНК. В другом варианте осуществления РНКи средство, пригодное для направленного воздействия на экспрессию HTT, не образуется в клетке-мишени при расщеплении более крупной дцРНК.

ДцРНК, как описано в настоящем документе, может дополнительно включать один или больше одноцепочечных нуклеотидных оверхенгов, например 1, 2, 3 или 4 нуклеотида. Нуклеотидный оверхенг может включать или состоять из аналога нуклеотида/нуклеозида, включая дезоксинуклеотид/нуклеозид. Оверхенг(и) может быть на смысловой цепи, антисмысловой цепи или их любой комбинации. Кроме того, нуклеотид(ы) оверхенга может находиться на 5'-конце, 3'-конце или на обоих концах антисмысло

- 21 048552 вой или смысловой цепи дцРНК.

ДцРНК может быть синтезирована с помощью стандартных методов, известных в уровне техники. Двухцепочечные РНКи соединения согласно изобретению могут быть получены с использованием двухстадийной методики. Сначала отдельно получают индивидуальные цепи двухцепочечной молекулы РНК. Затем цепи-компоненты отжигаются. Индивидуальные цепи миРНК соединения могут быть получены с применением жидкофазного и/или твердофазного органического синтеза. Преимущество органического синтеза состоит в том, что олигонуклеотидные цепи, содержащие неприродные или модифицированные нуклеотиды, могут быть легко получены. Аналогичным образом, одноцепочечные олигонуклеотиды согласно изобретению могут быть получены с применением жидкофазного и/или твердофазного органического синтеза.

В одном аспекте дцРНК согласно изобретению включает по меньшей мере две нуклеотидные последовательности, смысловую последовательность и антисмысловую последовательность. Последовательность смысловой цепи для HTT может быть выбрана из группы последовательностей, представленных в любой из табл. 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 21, 24, 25, 27-30, 32 и 33, и соответствующая нуклеотидная последовательность антисмысловой цепи смысловой цепи может быть выбрана из группы последовательностей в любой из табл. 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 21, 24, 25, 27-30, 32 и 33. В этом аспекте одна из двух последовательностей комплементарна другой из двух последовательностей, причем одна из последовательностей по существу комплементарна последовательности мРНК, образующейся при экспрессии гена HTT. Таким образом, в этом аспекте дцРНК будет включать два олигонуклеотида, где один олигонуклеотид описан как смысловая цепь (сопровождающая цепь) в любой из табл. 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 21, 24, 25, 27-30, 32 и 33, а второй олигонуклеотид описан как соответствующая антисмысловая цепь (направляющая цепь) смысловой цепи в любой из табл. 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 21, 24, 25, 27-30, 32 и 33.

В одном варианте осуществления по существу комплементарные последовательности дцРНК содержатся в отдельных олигонуклеотидах. В другом варианте осуществления по существу комплементарные последовательности дцРНК содержатся в одном олигонуклеотиде.

Следует понимать, что хотя последовательности в табл. 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 21, 24, 25, 27-30, 32 и 33 описаны как модифицированные или конъюгированные последовательности, РНК в РНКи средстве согласно изобретению, например дцРНК согласно изобретению, может включать любую из последовательностей, представленных в любой из табл. 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 21, 24, 25, 27-30, 32 и 33, которая является немодифицированной, неконъюгированной или модифицирована или конъюгирована иначе, чем описано в них. Например, хотя смысловые цепи средств согласно изобретению, показанные в табл. 3, 9, 12, 15, 17, 27, 29 и 32, конъюгированы с лигандом GalNAc, такие средства могут быть конъюгированы с молекулой, которая направляет доставку в ЦНС, например, лигандом С16, как описано в настоящем документе. Липофильный лиганд может быть включен в любое из положений, предусмотренных в настоящей заявке.

Специалисту в данной области техники хорошо известно, что дцРНК, имеющие дуплексную структуру примерно из 20-23 пар оснований, например 21 пары оснований, объявлены особенно эффективными в индукции РНК-интерференции (Elbashir et al. (2001) EMBO J., 20:6877-6888). Однако другие исследователи обнаружили, что эффективными также могут быть более короткие или более длинные дуплексные структуры РНК (Chu and Rana (2007) RNA 14:1714-1719; Kim et al. (2005) Nat Biotech 23:222-226). В вариантах осуществления, описанных выше, в силу природы олигонуклеотидных последовательностей, представленных в настоящем документе, дцРНК, описанные в настоящем документе, могут включать по меньшей мере одну цепь длиной не меньше 21 нуклеотида. Можно разумно ожидать, что более короткие дуплексы, за исключением нескольких нуклеотидов на одном или обоих концах, могут быть такими же эффективными по сравнению с описанными выше дцРНК. Следовательно, дцРНК, имеющие последовательность по меньшей мере из 15, 16, 17, 18, 19, 20 или больше последовательных нуклеотидов, которые происходят из одной из последовательностей, представленных в настоящем документе, и различающиеся по своей способности ингибировать экспрессию гена HTT не больше чем на 10, 15, 20, 25 или 30% ингибирования от дцРНК, содержащей полную последовательность, с использованием in vitro анализа с Cos7 и концентрацией 10 нМ РНК средства и ПНР-анализа, как представлено в приведенных ниже примерах, считаются включенными в объем настоящего изобретения.

Кроме того, РНК, описанные в настоящем документе, идентифицируют сайт(ы) в транскрипте HTT, который чувствителен к RISC-опосредованному расщеплению. Таким образом, в настоящем изобретении дополнительно представлены РНКи средства, направленные на такой сайт(ы). При использовании в настоящем документе, говорят, что РНКи средство направлено на конкретный сайт транскрипта РНК, если РНКи средство вызывает расщепление транскрипта в любом положении этого конкретного сайта. Такое РНКи средство обычно включает по меньшей мере приблизительно 15 последовательных нуклеотидов, предпочтительно по меньшей мере 19 нуклеотидов, из одной из последовательностей, представленных в настоящем документе, соединенных с дополнительными нуклеотидными последовательностями, взятыми из области, смежной с выбранной последовательностью в гене HTT.

- 22 048552

III. Модифицированные РНКи средства согласно изобретению.

В одном варианте осуществления РНК РНКи средства согласно изобретению, например дцРНК, является немодифицированной и не включает, например, химических модификаций или конъюгирования, известных в данной области и описанных в настоящем документе. В предпочтительных вариантах осуществления РНК РНКи средства согласно изобретению, например дцРНК, химически модифицирована для улучшения стабильности или других полезных характеристик. В некоторых вариантах осуществления изобретения по существу все нуклеотиды РНКи средства согласно изобретению модифицированы. В других вариантах осуществления настоящего изобретения все нуклеотиды РНКи средства согласно изобретению модифицированы. РНКи средства согласно изобретению, в которых по существу все нуклеотиды модифицированы, модифицированы в значительной степени, но не полностью, и могут включать не больше 5, 4, 3, 2 или немодифицированные нуклеотиды. В других вариантах осуществления настоящего изобретения РНКи средства согласно изобретению могут включать не больше 5, 4, 3, 2 или 1 модифицированного нуклеотида.

Нуклеиновые кислоты, представленные в описании, могут быть синтезированы или модифицированы способами, хорошо известными в данной области, такими как описанные в справочнике Current protocols in Nuclear acid chemistry, Beaucage, S.L. et al. (Edrs.), John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, USA, который настоящим включен в настоящее описание посредством отсылки. Модификации включают, например, концевые модификации, например, модификации 5'-конца (фосфорилирование, конъюгирование, инвертированные связи) или модификации 3'-конца (конъюгирование, ДНК нуклеотиды, инвертированные связи и т.д.); модификации оснований, например, замену стабилизирующими основаниями, дестабилизирующими основаниями или основаниями, которые образуют пары с расширенным набором партнеров, удаление оснований (абазические нуклеотиды) или конъюгированные основания; модификации сахара (например, в 2'-положении или 4'-положении) или замену сахара; или модификации скелета, включая модификацию или замену фосфодиэфирных связей. Конкретные примеры РНКи средств, применимые в вариантах осуществления, описанных в настоящем документе, включают, без ограничения перечисленными, РНК, содержащие модифицированные скелеты или не содержащие природных межнуклеозидных связей. РНК с модифицированным скелетом включают, помимо прочего, такие РНК, которые не имеют атома фосфора в скелете. В рамках настоящего описания, и как иногда описывается в уровне техники, модифицированные РНК, которые не содержат атом фосфора в межнуклеозидном скелете, также могут считаться олигонуклеозидами. В некоторых вариантах осуществления модифицированное РНКи средство будет иметь атом фосфора в своем межнуклеозидном скелете.

Модифицированные скелеты РНК включают, например, фосфоротиоаты, хиральные фосфоротиоаты, фосфородитиоаты, фосфотриэфиры, аминоалкилфосфотриэфиры, метил-и другие алкилфосфонаты, включая 3'-алкиленфосфонаты и хиральные фосфонаты, фосфинаты, фосфорамидаты, включая 3'аминофосфорамидат и аминоалкилфосфорамидаты, тионофосфорамидаты, тионоалкилфосфонаты, тионоалкилфосфотриэфиры и боранофосфаты, имеющие обычные 3'-5' связи, их аналоги с 2'-5' связями, а также соединения с обратной полярностью, в которых соседние пары нуклеозидных остатков связаны 3'5'^5'-3' или 2'-5'^5'-2'. Также включены различные соли, смешанные соли и формы свободных кислот. В некоторых вариантах осуществления изобретения дцРНК средства согласно изобретению находятся в форме свободной кислоты. В других вариантах осуществления изобретения дцРНК средства согласно изобретению присутствуют в форме соли. В одном варианте осуществления дцРНК средства согласно изобретению присутствуют в форме натриевой соли. В некоторых вариантах осуществления, когда дцРНК средства согласно изобретению присутствуют в форме натриевой соли, ионы натрия присутствуют в средстве в качестве противоионов по существу для всех фосфодиэфирных и/или фосфоротиотатных групп, присутствующих в средстве. Средства, в которых практически все фосфодиэфирные и/или фосфоротиоатные связи имеют противоион натрия, включают не больше 5, 4, 3, 2 или 1 фосфодиэфирной и/или фосфоротиоатной связи без противоиона натрия. В некоторых вариантах осуществления, когда дцРНК средства согласно изобретению присутствуют в форме натриевой соли, ионы натрия присутствуют в средстве в качестве противоионов для всех фосфодиэфирных и/или фосфоротиотатных групп, присутствующих в средстве.

Репрезентативные патенты США, в которых описано получение вышеуказанных фосфоросодержащих соединений, включают, без ограничения перечисленным, патенты США

3,687,808; 4,469,863; 4,476,301; 5,023,243; 5,177,195; 5,188,897; 5,264,423; 5,276,019;

5,278,302; 5,286,717; 5,321,131; 5,399,676; 5,405,939; 5,453,496; 5,455,233; 5,466,677;

5,476,925; 5,519,126; 5,536,821; 5,541,316; 5,550,111; 5,563,253; 5,571,799; 5,587,361;

5,625,050; 6,028,188; 6,124,445; 6,160,109; 6,169,170; 6,172,209; 6,239,265; 6,277,603;

6,326,199; 6,346,614; 6,444,423; 6,531,590; 6,534,639; 6,608,035; 6,683,167; 6,858,715;

6,867,294; 6,878,805; 7,015,315; 7,041,816; 7,273,933; 7,321,029;

и патент США RE39464, полное содержание каждого из которых включено в настоящий документ посредством отсылки.

- 23 048552

Модифицированные скелеты РНК, которые не содержат атом фосфора, имеют скелеты, которые образованы короткоцепочечными алкильными или циклоалкильными межнуклеозидными связями, смешанными гетероатомами и алкильными или циклоалкильными межнуклеозидными связями, или одной или больше короткоцепочечными гетероатомными или гетероциклическими межнуклеозидными связями. К ним относятся такие, которые имеют морфолиновые связи (частично образованные из сахарной части нуклеозида); силоксановые скелеты; сульфидные, сульфоксидные и сульфоновые скелеты; формацетильные и тиоформацетильные скелеты; метиленформацетильные и тиоформацетильные скелеты; алкенсодержащие скелеты; сульфаматные скелеты; метилениминовые и метиленгидразиновые скелеты; сульфонатные и сульфаниламидные скелеты; амидные скелеты; и другие, содержащие смешанные N, О, S и СН2 компоненты.

Репрезентативные патенты США, в которых описано получение вышеуказанных олигонуклеозидов, включают, без ограничения перечисленными, патенты США

5,034,506;

5,166,315; 5,185,444; 5,214,134; 5,216,141; 5,235,033; 5,64,562; 5,264,564; 5,405,938;

5,434,257; 5,466,677; 5,470,967; 5,489,677; 5,541,307; 5,561,225; 5,596,086; 5,602,240;

5,608,046; 5,610,289; 5,618,704; 5,623,070; 5,663,312; 5,633,360; 5,677,437 и 5,677,439, полное содержание каждого из которых включено в настоящий документ посредством отсылки. В других вариантах осуществления предусмотрены подходящие миметики РНК для применения в РНКи средствах, в которых и сахар, и межнуклеозидная связь, то есть скелет, нуклеотидных звеньев заменены новыми группами. Исходные звенья сохраняют для гибридизации с соответствующим целевым соединением нуклеиновой кислоты. Одно такое олигомерное соединение, миметик РНК, которое, как было показано, обладает превосходными свойствами гибридизации, называется пептидо-нуклеиновой кислотой (ПНК). В соединениях ПНК сахарный скелет РНК заменен амидсодержащим скелетом, в частности, аминоэтилглициновым скелетом. Нуклеиновые основания сохранены и связаны напрямую или не напрямую с азаатомами азота амидной части скелета. Репрезентативные патенты США, в которых описано получение соединений ПНК, включают, без ограничения, патенты США 5539082; 5714331 и 5719262, полное содержание каждого из которых включено в настоящий документ посредством отсылки. Дополнительные соединения ПНК, подходящие для применения в РНКи средствах согласно изобретению, описаны, например, в Nielsen et al., Science, 1991, 254, 1497-1500.

Некоторые варианты осуществления, представленные в описании, включают РНК с фосфоротиоатными скелетами и олигонуклеозиды с гетероатомными скелетами и, в частности, -CH2-NH-CH2-, -СН₂N(CH₃)-O-CH₂- [известные как метиленовый (метилимино) или MMI скелет], -CH₂-O-N(CH₃)-CH₂-, -CH₂N(CH₃)-N(CH₃)-CH₂- и -N(CH₃)-CH₂-CH₂- [где нативная фосфодиэфирная цепь представлена как -О-Р-ОCH2-] в указанном выше патенте США 5489677, и амидные скелеты в указанном выше патенте США 5602240. В некоторых вариантах осуществления РНК, представленные в настоящем документе, имеют структуры морфолинового скелета, как указано выше в US 5034506.

Модифицированные РНК также могут содержать один или больше замещенных остатков сахара. РНКи средства, например дцРНК, представленные в настоящем документе, могут включать одно из следующего в 2'-положении: ОН; F; O-, S- или N-алкил; О-, S- или N-алкенил; О-, S- или N-алкинил; или Оалкил-О-алкил, где алкил, алкенил и алкинил могут быть замещенным или незамещенным C₁-C_1o алкилом или С2-С10 алкенилом и алкинилом. Примеры подходящих модификаций включают О[(СН₂)_пО]_шСН₃, О(СН2)пОСНз, O(CH2)nNH2, О(СН2)пСНз, O(CH₂)nONH₂ и O(CH₂)nON[(CH₂)nCH₃)]₂, где n и m равны от 1 до приблизительно 10. В других вариантах осуществления дцРНК включают одно из следующего в 2'положении: C₁-C_1o низший алкил, замещенный низший алкил, алкарил, аралкил, О-алкарил или О- аралкил, SH, SCH3, OCN, Cl, Br, CN, CF3, OCF3, SOCH3, SO2CH3, ONO2, NO2, N3, NH2, гетероциклоалкил, гетероциклоалкарил, аминоалкиламино, полиалкиламино, замещенный силил, РНК-расщепляющую группу, репортерную группу, интеркалятор, группу для улучшения фармакокинетических свойств РНКи средства или группу для улучшения фармакодинамических свойств РНКи средства, а также другие заместители, обладающие аналогичными свойствами. В некоторых вариантах осуществления модификация включает 2'-метоксиэтокси (2'-О-СН₂СН₂ОСН₃, также известную как 2'-О-(2-метоксиэтил) или 2'-МОЕ) (Martin et al., Helv. Chim. Acta, 1995, 78:486-504), то есть алкокси-алкоксигруппу. Другой иллюстративной модификацией является 2'-диметиламинооксиэтокси, т.е. группа O(CH₂)₂ON(CH₃)₂, также известная как 2'-DMAOE, как описано в приведенных ниже примерах, и 2'-диметиламиноэтоксиэтокси (также известная в уровне техники как 2'-О-диметиламиноэтоксиэтил или 2'-DMAEOE), т.е. 2'-O-CH₂-O-CH₂N(CH₂)₂. Дополнительные иллюстративные модификации включают: 5'-Me-2'-F нуклеотиды, 5'-Me-2'ОМе нуклеотиды, 5'-Me-2'-дезоксинуклеотиды (как R-, так и S-изомеры в этих трех семействах); 2'алкоксиалкил; и 2'-NMA (N-метилацетамид).

Другие модификации включают 2'-метокси (2'-OCH₃), 2'-аминопропокси (2'-OCH₂CH₂CH₂NH₂), 2'О-гексадецил и 2'-фтор (2'-F). Аналогичные модификации также могут быть сделаны в других положениях на РНК РНКи средства, в частности в З'-положении сахара на З'-концевом нуклеотиде или в 2'-5' связанных двухцепочечных РНК и в 5'-положении 5'-концевого нуклеотида. РНКи средства также могут

- 24 048552 содержать миметики сахара, такие как циклобутильные группы, вместо пентофуранозилового сахара. Репрезентативные патенты США, в которых рассказывается о получении таких структур модифицированного сахара, включают, без ограничения перечисленными, патенты США

4,981,957; 5,118,800; 5,319,080; 5,359,044; 5,393,878; 5,446,137; 5,466,786; 5,514,785;

5,519,134; 5,567,811; 5,576,427; 5,591,722; 5,597,909; 5,610,300; 5,627,053; 5,639,873;

5,646,265; 5,658,873; 5,670,633 и 5,700,920, некоторые из которых принадлежат настоящему заявителю. Полное содержание каждого из вышеуказанных патентов включено в настоящий документ посредством отсылки.

РНКи средство согласно изобретению также может включать модификации или замены нуклеиновых оснований (часто называемых в данной области просто основаниями). При использовании в настоящем документе немодифицированные или природные нуклеиновые основания включают пуриновые основания аденин (А) и гуанин (G) и пиримидиновые основания тимин (T), цитозин (C) и урацил (U). Модифицированные нуклеиновые основания включают другие синтетические и природные нуклеиновые основания, такие как 5-метилцитозин (5-me-Q, 5-гидроксиметилцитозин, ксантин, гипоксантин, 2аминоаденин, 6-метил- и другие алкилпроизводные аденина и гуанина, 2-пропил- и другие алкилпроизводные аденина и гуанина, 2-тиоурацил, 2-тиотимин и 2-тиоцитозин, 5-галоген-урацил и цитозин, 5пропинилурацил и цитозин, 6-азо-урацил, цитозин и тимин, 5-урацил (псевдоурацил), 4-тиоурацил, 8галоген, 8-амино, 8-тиол, 8-тиоалкил, 8-гидрокси и другие 8-замещенные аденины и гуанины, 5-галоген, в частности 5-бром, 5-трифторметил и другие 5-замещенные урацилы и цитозины, 7-метилгуанин и 7метиладенин, 8-азагуанин и 8-азааденин, 7-деазагуанин и 7-даазааденин, и 3-деазагуанин и 3деазааденин. Другие нуклеиновые основания включают основания, раскрытые в патенте США 3687808, основания, раскрытые в Modified Nucleosides in Biochemistry, Biotechnology and Medicine, Herdewijn, P. ed. Wiley-ВЧ, 2008; основания, раскрытые в The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, страницы 858-859, Kroschwitz, J.L., ed. John Wiley & Sons, 1990, основания, раскрытые в Englisch et al. (1991) Angewandte Chemie, International Edition, 30:613, и раскрытые в Sanghvi, Y.S., Chapter 15, dsRNA Research and Applications, страницы 289-302, Crooke, S.T. and Lebleu, В., Ed., CRC Press, 1993. Некоторые из этих нуклеиновых оснований особенно полезны для повышения аффинности связывания олигомерных соединений, представленных в изобретении. К ним относятся 5-замещенные пиримидины, 6азапиримидины и N-2, N-6 и 0-6 замещенные пурины, включая 2-аминопропиладенин, 5пропинилурацил и 5-пропинилцитозин. Было показано, что замены 5-метилцитозином повышают стабильность дуплекса нуклеиновых кислот на 0,6-1,2°С (Sanghvi, Y.S., Crooke, S.T. и Lebleu, В., Eds., dsRNA Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278) и являются примерами замен оснований, особенно в комбинации с 2'-О-метоксиэтильными модификациями остатков сахара.

Репрезентативные патенты США, в которых описано получение некоторых из указанных выше модифицированных нуклеиновых оснований, а также других модифицированных нуклеиновых оснований, включают, без ограничения перечисленными, указанные выше патенты США

3,687,808, 4,845,205; 5,130,30; 5,134,066;

5,175,273; 5,367,066; 5,432,272; 5,457,187; 5,459,255; 5,484,908; 5,502,177; 5,525,711;

5,552,540; 5,587,469; 5,594,121, 5,596,091; 5,614,617; 5,681,941; 5,750,692; 6,015,886;

6,147,200; 6,166,197; 6,222,025; 6,235,887; 6,380,368; 6,528,640; 6,639,062; 6,617,438;

7,045,610; 7,427,672 и 7,495,088, полное содержание каждого из которых настоящим включено в настоящий документ посредством отсылки.

РНКи средство согласно изобретению также может быть модифицировано для включения одной или больше замкнутых нуклеиновых кислот (ЗНК). Замкнутая нуклеиновая кислота представляет собой нуклеотид, содержащий модифицированный остаток рибозы, который включает дополнительный мостик, соединяющий 2'- и 4'-атомы углерода. Такая структура эффективно запирает рибозу в 3'-эндо структурной конформации. Было показано, что добавление замкнутых нуклеиновых кислот в миРНК повышает стабильность миРНК в сыворотке и снижает нецелевые эффекты (Elmen, J. et al. (2005) Nucleic Acids Research 33(1):439-447; Mook OR et al. (2007) Mol Canc Ther 6(3):833-843, Grunweller A. et al. (2003) Nucleic Acids Research 31(12):3185-3193).

РНКи средство согласно изобретению также может быть модифицировано для включения одного или больше остатков бициклического сахара. Бициклический сахар представляет собой фуранозильное кольцо, модифицированное мостиковым соединением двух атомов. Бициклический нуклеозид (BNA) представляет собой нуклеозид, содержащий остаток сахара, включающий мостик, соединяющий два атома углерода сахарного кольца с образованием бициклической кольцевой системы. В некоторых вариантах осуществления мостик соединяет 4'-углерод и 2'-углерод кольца сахара. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления средство согласно изобретению может включать одну или больше замкнутых нуклеиновых кислот (ЗНК). Замкнутая нуклеиновая кислота представляет собой нуклеотид, содер

- 25 048552 жащий модифицированный остаток рибозы, который содержит дополнительный мостик, соединяющий 2'- и 4'-атомы углерода. Другими словами, ЗНК представляет собой нуклеотид, содержащий фрагмент бициклического сахара, содержащий мостик 4'-СН₂-О-2'. Такая структура эффективно запирает рибозу в 3'-эндо структурной конформации. Было показано, что добавление замкнутых нуклеиновых кислот в миРНК повышает стабильность миРНК в сыворотке и снижает нецелевые эффекты (Elmen, J. et al. (2005) Nucleic Acids Research 33(1):439-447; Mook O.R. et al. (2007) Mol Canc Ther 6(3):833-843, Grunweller A. et al. (2003) Nucleic Acids Research 31(12):3185-3193). Примеры бициклических нуклеозидов для применения в полинуклеотидах согласно изобретению включают, без ограничения, нуклеозиды, содержащие мостик между 4'- и 2'-атомами рибозильного кольца. В некоторых вариантах осуществления антисмысловые полинуклеотидные средства согласно изобретению включают один или больше бициклических нуклеозидов, содержащих 4'^2' мостик. Примеры таких бициклических нуклеозидов с 4'^2' мостиком включают, без ограничения перечисленными, 4'-(СН₂)-О-2' (ЗНК); 4'-(CH2)-S-2'; 4'-(CH₂)₂-O-2' (ENA); 4'СН(СН₃)-О-2' (также называемые затрудненные этилом или cEt) и 4'-СН(СН₂ОСН₃)-О-2' (а также его аналоги; см., например, патент США 7399845); 4'-С(СН₃)(СН₃)-О-2' (а также его аналоги; см., например, патент США 8278283); 4'-CH2-N(OCH₃)-2' (а также его аналоги; см., например, патент США 8278425); 4'CH2-O-N(CH₃)-2' (см., например, патентную публикацию США 2004/0171570); 4'-CH2-N(R)-O-2', где R представляет собой H, С1-С₁₂ алкил или защитную группу (см., например, патент США 7427672); 4'-СН₂С(Н)(СН₃)-2' (см., например, Chattopadhyaya et al., J. Org. Chem., 2009, 74, 118-134); и 4'-СН₂-С(=СН₂)-2' (а также его аналоги; см., например, патент США 8278426). Полное содержание каждого из вышеуказанных источников включено в настоящий документ посредством отсылки.

Дополнительные репрезентативные патенты США и патентные публикации США, в которых описано получение замкнутых нуклеотидов нуклеиновых кислот, включают, без ограничения перечисленными, следующее: патенты США 6268490; 6525191; 6670461; 6770748; 6794499; 6998484; 7053207; 7034133; 7084125; 7399845; 7427672; 7569686; 7741457; 8022193; 8030467; 8278425; 8278426; 8278283; US 2008/0039618; и US 2009/0012281, полное содержание каждого из которых настоящим включено в настоящий документ посредством отсылки.

Любой из указанных выше бициклических нуклеозидов может быть получен с одной или более стереохимическими конфигурациями сахаров, включая, например, a-L-рибофуранозу и e-D-рибофуранозу (см. WO 99/14226).

РНКи средство согласно изобретению также может быть модифицировано путем включения одного или больше затрудненных этилнуклеотидов. При использовании в настоящем документе термин затрудненный этилнуклеотид или cEt представляет собой замкнутую нуклеиновую кислоту, включающую остаток бициклического сахара, включающий мостик 4'-СН(СН₃)-О-2'. В одном варианте осуществления затрудненный этилнуклеотид находится в S-конформации, именуемой в настоящем документе ScEt.

РНКи средство согласно изобретению также может включать один или больше конформационно ограниченных нуклеотидов (CRN). CRN представляют собой аналоги нуклеотидов с линкером, соединяющим атомы углерода С2' и С4' рибозы или атомы углерода С3 и -С5' рибозы. CRN запирает кольцо рибозы в стабильной конформации и увеличивает аффинность гибридизации с мРНК. Линкер имеет достаточную длину, чтобы кислород располагался в оптимальном положении для стабильности и аффинности, что приводит к уменьшению неплоского колебания кольца рибозы.

Репрезентативные публикации, в которых описано получение некоторых из указанных выше CRN, включают, без ограничения перечисленными, US 2013/0190383; и WO 2013/036868, полное содержание каждой из которых настоящим включено в настоящий документ посредством отсылки.

В некоторых вариантах осуществления РНКи средство согласно изобретению включает один или более мономеров, которые представляют собой UNA нуклеотиды (разомкнутая нуклеиновая кислота). UNA представляет собой разомкнутую ациклическую нуклеиновую кислоту, в которой любая из связей сахара была удалена с образованием разомкнутого сахарного остатка. В одном примере UNA также включает мономер с удалением связей между С1'-С4' (т.е. ковалентной связи углерод-кислород-углерод между атомами углерода С1' и С4'). В другом примере была удалена связь С2'-С3' (т.е. ковалентная углерод-углеродная связь между атомами углерода С2' и С3') сахара (см. Nuc. Acids Symp. Series, 52, 133-134 (2008) и Fluiter et al., Mol. Biosyst, 2009, 10, 1039, включенные в настоящий документ посредством отсылки).

Репрезентативные публикации США, в которых описано получение UNA, включают, помимо прочего, US 8314227; и патентные публикации США 2013/0096289; 2013/0011922; и 2011/0313020, полное содержание которых настоящим включено в настоящий документ посредством отсылки.

Потенциально стабилизирующие концевые модификации молекул РНК могут включать N(ацетиламинокапроил)-4-гидроксипролинол (Hyp-C6-NHAc). №(капроил-4-гидроксипролинол (Нур-С6), №(ацетил-4-гидроксипролинол (Hyp-NHAc), тимидин-2'-О-дезокситимидин (эфир), №(аминокапроил)-4гидроксипролинол (Нур-С6-амино), 2-докозаноил-уридин-3-фосфат, инвертированное основание dT(idT) и пр. Описание этой модификации можно найти в WO 2011/005861.

- 26 048552

Другие модификации РНКи средства согласно изобретению включают 5'-фосфат или миметик 5'фосфата, например, 5'-концевой фосфат или миметик фосфата на антисмысловой цепи РНКи средства. Подходящие миметики фосфата описаны, например, в патенте США 2012/0157511, полное содержание которого включено в настоящий документ посредством отсылки.

А. Модифицированные РНКи средства, включающие мотивы согласно изобретению.

В некоторых аспектах изобретения двухцепочечные РНКи средства согласно изобретению включают средства с химическими модификациями, как описано, например, в заявке WO 2013/075035, полное содержание которой включено в настоящий документ посредством отсылки. Как показано в настоящем документе и в WO 2013/075035, превосходный результат может быть получен при введении одного или более мотивов трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов в смысловую цепь или антисмысловую цепь РНКи средства, в частности, в сайт расщепления или около него. В некоторых вариантах осуществления смысловая цепь и антисмысловая цепь РНКи средства могут быть полностью модифицированы. Введение этих мотивов прерывает порядок модификации, если таковой присутствует, смысловой или антисмысловой цепи. РНКи средство может быть необязательно конъюгировано с липофильным лигандом, например лигандом С16, например, на смысловой цепи. РНКи средство может быть необязательно модифицировано путем модификации (А)-гликоль-нуклеиновои кислоты (GNA), например, на одном или более остатках антисмысловой цепи. Полученные РНКи средства обладают превосходной активностью при сайленсинге генов.

Таким образом, в изобретении предложены двухцепочечные РНКи средства, способные ингибировать экспрессию гена-мишени (т.е. гена HTT) in vivo. РНКи средство включает смысловую цепь и антисмысловую цепь. Каждая цепь РНКи средства может иметь длину 15-30 нуклеотидов. Например, каждая цепь может иметь длину 16-30 нуклеотидов, длину 17-30 нуклеотидов, длину 25-30 нуклеотидов, длину 27-30 нуклеотидов, длину 17-23 нуклеотида, длину 17-21 нуклеотид, длину 17-19 нуклеотидов, длину 1925 нуклеотидов, длину 19-23 нуклеотидов, длину 19-21 нуклеотид, длину 21-25 нуклеотидов или длину 21-23 нуклеотида. В некоторых вариантах осуществления каждая цепь имеет длину 19-23 нуклеотида.

Смысловая цепь и антисмысловая цепь обычно образуют дуплексную двухцепочечную РНК (дцРНК), также именуемую в настоящем документе как РНКи средство. Дуплексная область РНКи средства может иметь длину 15-30 пар нуклеотидов. Например, дуплексная область может иметь длину 16-30 пар нуклеотидов, длину 17-30 пар нуклеотидов, длину 27-30 пар нуклеотидов, длину 17-23 пары нуклеотидов, длину 17-21 пара нуклеотидов, длину 17-19 пар нуклеотидов, длину 19-25 пар нуклеотидов, длину 19-23 пары нуклеотидов, длину 19-21 пара нуклеотидов, длину 21-25 пар нуклеотидов или длину 21-23 пары нуклеотидов. В другом примере дуплексная область выбрана из длины 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 и 27 нуклеотидов. В предпочтительных вариантах осуществления дуплексная область имеет длину 19-21 пара нуклеотидов.

В одном варианте осуществления РНКи средство может содержать одну или больше выступающих концевых областей или кэпирующих групп на 3'-конце, 5'-конце или на обоих концах одной или обеих цепей. Оверхенг может иметь длину 1-6 нуклеотидов, например, длину 2-6 нуклеотидов, длину 1-5 нуклеотидов, длину 2-5 нуклеотидов, длину 1-4 нуклеотида, длину 2-4 нуклеотида, длину 1-3 нуклеотида, длину 2-3 нуклеотида или длину 1-2 нуклеотида. В предпочтительных вариантах осуществления выступающая область нуклеотидного оверхенга имеет длину 2 нуклеотида. Оверхенги могут быть результатом того, что одна цепь длиннее другой, или результатом расположения двух цепей одинаковой длины со смещением друг относительно друга. Оверхенг может образовывать некомплементарный нуклеотид с мРНК-мишенью, или он может быть комплементарным последовательности гена-мишени, или может быть другой последовательностью. Первая и вторая цепи также могут быть соединены, например дополнительными основаниями, с образованием шпильки или другими линкерами, не содержащими оснований.

В одном варианте осуществления каждый из нуклеотидов в выступающей концевой области РНКи средства может независимо представлять собой модифицированный или немодифицированный нуклеотид, включающий, без ограничения, модифицированный 2'-сахар, такой как 2-F, 2'-О-метил, тимидин (Т) и любые их комбинации.

Например, ТТ может представлять собой выступающую концевую последовательность на любом конце любой цепи. Оверхенг может образовывать некомплементарный нуклеотид с мРНК-мишенью, или он может быть комплементарным последовательности гена-мишени, или может быть другой последовательностью.

5'- или 3'-оверхенги на смысловой цепи, антисмысловой цепи или обеих цепях РНКи средства могут быть фосфорилированы. В некоторых вариантах осуществления выступающая область(и) содержит два нуклеотида, содержащих фосфоротиоат между двумя нуклеотидами, где два нуклеотида могут быть одинаковыми или разными. В одном варианте осуществления выступающий конец присутствует на 3'-конце смысловой цепи, антисмысловой цепи или обеих цепей. В одном варианте осуществления такой 3'оверхенг присутствует в антисмысловой цепи. В одном варианте осуществления этот 3'-оверхенг присутствует в смысловой цепи.

РНКи средство может содержать только один оверхенг, что может усиливать интерференционную

- 27 048552 активность РНКи, не влияя на ее общую стабильность. Например, одноцепочечный выступающий конец может быть расположен на 3'-конце смысловой цепи или, в альтернативе, на 3'-конце антисмысловой цепи. РНКи также может иметь тупой конец, расположенный на 5'-конце антисмысловой цепи (или 3'конце смысловой цепи), или наоборот. Как правило, антисмысловая цепь РНКи имеет выступающий нуклеотид на 3'-конце, при этом 5'-конец - тупой. Без ограничения теорией, асимметричный тупой конец на 5'-конце антисмысловой цепи и выступающий 3'-конец антисмысловой цепи способствуют включению направляющей цепи в процесс RISC.

В одном варианте осуществления РНКи средство представляет собой имеющий два тупых конца олигомер длиной 19 нуклеотидов, где смысловая цепь содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'F модификаций на трех последовательных нуклеотидах в положениях 7, 8, 9 от 5'-конца. Антисмысловая цепь содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'-О-метил-модификаций на трех последовательных нуклеотидах в положениях 11, 12, 13 от 5'-конца.

В другом варианте осуществления РНКи средство представляет собой имеющий два тупых конца олигомер длиной 20 нуклеотидов, где смысловая цепь содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'F модификаций на трех последовательных нуклеотидах в положениях 8, 9, 10 от 5'-конца. Антисмысловая цепь содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'-О-метил-модификаций на трех последовательных нуклеотидах в положениях 11, 12, 13 от 5'-конца.

В еще одном варианте осуществления РНКи средство представляет собой имеющий два тупых конца олигомер длиной 21 нуклеотид, где смысловая цепь содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'F модификаций на трех последовательных нуклеотидах в положениях 9, 10, 11 от 5'-конца. Антисмысловая цепь содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'-О-метил-модификаций на трех последовательных нуклеотидах в положениях 11, 12, 13 от 5'-конца.

В одном варианте осуществления РНКи средство содержит смысловую цепь из 21 нуклеотида и антисмысловую цепь из 23 нуклеотидов, где смысловая цепь содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'-F модификаций трех последовательных нуклеотидов в положениях 9, 10, 11 от 5'-конца; антисмысловая цепь содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'-О-метил-модификаций на трех последовательных нуклеотидах в положениях 11, 12, 13 от 5'-конца, при этом один конец РНКи средства - тупой, а другой конец содержит 2 выступающих нуклеотида. Предпочтительно выступающий конец из 2 нуклеотидов находится на 3'-конце антисмысловой цепи. Когда 2 выступающих нуклеотида находятся на 3'конце антисмысловой цепи, между тремя концевыми нуклеотидами могут присутствовать две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи, где два из трех нуклеотидов являются выступающими нуклеотидами, а третий нуклеотид представляет собой спаренный нуклеотид, идущий после выступающего нуклеотида. В одном варианте осуществления РНКи средство дополнительно содержит две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи между тремя концевыми нуклеотидами как на 5'-конце смысловой цепи, так и на 5'конце антисмысловой цепи. В одном варианте осуществления каждый нуклеотид в смысловой цепи и антисмысловой цепи РНКи средства, включая нуклеотиды, которые являются частью мотивов, представляют собой модифицированные нуклеотиды. В одном варианте осуществления каждый остаток независимо модифицирован 2'-О-метилом или 3'-фтором, например, в чередующемся мотиве. Необязательно РНКи средство дополнительно включает лиганд (например, липофильный лиганд, необязательно С16 лиганд).

В одном варианте осуществления РНКи средство включает смысловую и антисмысловую цепи, где смысловая цепь имеет длину 25-30 нуклеотидных остатков, где, начиная с 5'-концевого нуклеотида (положение 1), положения с 1 по 23 первой цепи включают по меньшей мере 8 рибонуклеотидов; антисмысловая цепь имеет длину 36-66 нуклеотидных остатков и, начиная с 3'-концевого нуклеотида, включает по меньшей мере 8 рибонуклеотидов в положениях, спаренных с положениями 1-23 смысловой цепи с образованием дуплекса; где по меньшей мере 3'-концевой нуклеотид антисмысловой цепи не спарен со смысловой цепью, и до 6 последовательных 3'-концевых нуклеотидов не спарены со смысловой цепью, образуя в результате 3'-концевой выступающий конец из 1-6 нуклеотидов; где 5'-конец антисмысловой цепи содержит от 10 до 30 последовательных нуклеотидов, которые не спарены со смысловой цепью, образуя в результате 10-30 нуклеотидный одноцепочечный 5'-оверхенг; где по меньшей мере 5'-концевые и 3'-концевые нуклеотиды смысловой цепи спарены с нуклеотидами антисмысловой цепи, когда смысловая и антисмысловая цепи выровнены с максимальной комплементарностью, образуя, таким образом, по существу дуплексную область между смысловой и антисмысловой цепями; и антисмысловая цепь обладает достаточной комплементарностью РНК-мишени на протяжении по меньшей мере 19 рибонуклеотидов антисмысловой цепи, чтобы экспрессия гена-мишени снижалась при введении двухцепочечной нуклеиновой кислоты в клетку млекопитающего; и где смысловая цепь содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'-F модификаций на трех последовательных нуклеотидах, причем по меньшей мере один из мотивов находится в сайте расщепления или рядом с ним.

Антисмысловая цепь содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'-О-метил-модификаций на трех последовательных нуклеотидах в сайте расщепления или рядом с ним.

В одном варианте осуществления РНКи средство включает смысловую и антисмысловую цепи, где РНКи средство включает первую цепь длиной по меньшей мере 25 и не больше 29 нуклеотидов и вторую

- 28 048552 цепь длиной не больше 30 нуклеотидов по меньшей мере с одним мотивом из трех 2'-О-метилмодификаций на трех последовательных нуклеотидах в положениях 11, 12, 13 от 5'-конца; где 3'-конец первой цепи и 5'-конец второй цепи образуют тупой конец, и вторая цепь на 3'-конце на 1-4 нуклеотида длиннее первой цепи, где область дуплексной области, которая имеет длину по меньшей мере 25 нуклеотидов, и вторая цепь являются достаточно комплементарными мРНК-мишени на протяжении по меньшей мере 19 нуклеотидов второй цепи для снижения экспрессии гена-мишени при введении РНКи средства в клетку млекопитающего, и где расщепление Dicer РНКи средства предпочтительно дает миРНК, включающую 3'-конец второй цепи, снижая, таким образом, экспрессию гена-мишени у млекопитающего. Необязательно РНКи средство дополнительно включает лиганд.

В одном варианте осуществления смысловая цепь РНКи средства содержит по меньшей мере один мотив из трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов, где один из мотивов находится в сайте расщепления в смысловой цепи.

В одном варианте осуществления антисмысловая цепь РНКи средства может также содержать по меньшей мере один мотив из трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов, где один из мотивов находится в сайте расщепления или рядом с ним в антисмысловой цепи.

В случае РНКи средства, имеющего дуплексную область длиной 17-23 нуклеотида, сайт расщепления антисмысловой цепи обычно находится в положениях 10, 11 и 12 от 5'-конца. Таким образом, мотивы трех одинаковых модификаций могут присутствовать в положениях 9, 10, 11; положениях 10, 11, 12; положениях 11, 12, 13; положениях 12, 13, 14 или положениях 13, 14, 15 антисмысловой цепи, при отсчете начиная с 1-го нуклеотида от 5'-конца антисмысловой цепи или отсчете начиная с 1-го спаренного нуклеотида в дуплексной области от 5'-конца антисмысловой цепи. Сайт расщепления в антисмысловой цепи также может изменяться в зависимости от длины дуплексной области РНКи от 5'-конца.

Смысловая цепь РНКи средства может содержать по меньшей мере один мотив из трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов в сайте расщепления цепи; и антисмысловая цепь может содержать по меньшей мере один мотив из трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов в сайте расщепления цепи или рядом с ним. Когда смысловая цепь и антисмысловая цепь образуют дуплекс дцРНК, смысловая цепь и антисмысловая цепь могут быть выровнены таким образом, что один мотив из трех нуклеотидов на смысловой цепи и один мотив из трех нуклеотидов на антисмысловой цепи имеют по меньшей мере один перекрывающийся участок нуклеотидов, то есть по меньшей мере один из трех нуклеотидов мотива в смысловой цепи образует пару оснований по меньшей мере с одним из трех нуклеотидов мотива в антисмысловой цепи. В альтернативе могут перекрываться по меньшей мере два нуклеотида или могут перекрываться все три нуклеотида.

В одном варианте осуществления смысловая цепь РНКи средства может содержать больше одного мотива из трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов. Первый мотив может присутствовать в сайте расщепления цепи или рядом с ним, а другие мотивы могут быть фланговой модификацией. Термин фланговая модификация в настоящем документе относится к мотиву, находящемуся в другой части цепи, который отделен от мотива в сайте или рядом с сайтом расщепления той же цепи. Фланговая модификация либо граничит с первым мотивом, либо отделена от него по меньшей мере одним или более нуклеотидами. Когда мотивы непосредственно примыкают друг к другу, то тогда химия мотивов отличается, а когда мотивы разделены одним или более нуклеотидами, химия может быть такой же или другой. Могут присутствовать две или больше фланговых модификаций. Например, если присутствуют две фланговых модификации, каждая фланговая модификация может присутствовать на одном конце по отношению к первому мотиву, который находится в сайте или рядом с сайтом расщепления, или с любой стороны от основного мотива.

Как и смысловая цепь, антисмысловая цепь РНКи средства может содержать больше одного мотива из трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов, при этом по меньшей мере один из мотивов находится в сайте или рядом с сайтом расщепления цепи. Такая антисмысловая цепь также может содержать одну или больше выровненных фланговых модификаций, аналогично фланговым модификациям, которые могут присутствовать на смысловой цепи.

В одном варианте осуществления фланговая модификация смысловой цепи или антисмысловой цепи РНКи средства обычно не включает первые один или два концевых нуклеотида на 3'-конце, 5'-конце или на обоих концах цепи.

В другом варианте фланговая модификация на смысловой цепи или антисмысловой цепи РНКи средства обычно не включает первые один или два спаренных нуклеотида в дуплексной области на 3'конце, 5'-конце или обоих концах цепи.

Когда смысловая цепь и антисмысловая цепь РНКи средства содержат по меньшей мере одну фланговую модификацию, фланговые модификации могут находиться на одном и том же конце дуплексной области и могут иметь один, два или три перекрывающихся нуклеотида.

Когда смысловая цепь и антисмысловая цепь РНКи средства содержат по меньшей мере две фланговых модификации, смысловая цепь и антисмысловая цепь могут быть выровнены таким образом, что две модификации, по одной на каждой цепи, попадают на один конец дуплексной области, имеющей один, два или три перекрывающихся нуклеотида; две модификации, по одной на каждой цепи, попадают

- 29 048552 на другой конец дуплексной области, имеющей один, два или три перекрывающихся нуклеотида; две модификации, по одной на цепи, попадают на каждую сторону основного мотива, имеющего один, два или три перекрывающихся нуклеотида в дуплексной области.

В одном варианте осуществления РНКи средство содержит нуклеотид(ы), некомплементарный мишени, в пределах дуплекса, или их комбинации. Некомплементарный нуклеотид может присутствовать в области оверхенга или в дуплексной области. Пара оснований может быть ранжирована по своей склонности вызывать диссоциацию или плавление (например, по свободной энергии ассоциации или диссоциации конкретной пары; наиболее простой подход состоит в проверке пар на индивидуальной основе, хотя также может использоваться анализ следующего соседа или аналогичный анализ). С точки зрения стимуляции диссоциации: A:U предпочтительнее G:C; G:U предпочтительнее G:C; и I:C предпочтительнее G:C (1=инозин). Некомплементарные нуклеотиды, например, неканонические или отличные от канонических пары (как описано в другой части настоящего документа), предпочтительнее канонических (А:Т, A:U, G:C) пар; и пары, которые включают универсальное основание, предпочтительнее канонических пар.

В одном варианте осуществления РНКи средство содержит по меньшей мере одну из первых 1, 2, 3, 4 или 5 пар оснований в дуплексных областях от 5'-конца антисмысловой цепи, независимо выбранных из группы: A:U, G:U, I:C, и некомплементарные пары, например, неканонические или отличные от канонических пары, или пары, которые включают универсальное основание, что способствует диссоциации антисмысловой цепи на 5'-конце дуплекса.

В одном варианте осуществления нуклеотид в положении 1 в дуплексной области от 5'-конца антисмысловой цепи выбран из группы, состоящей из A, dA, dU, U и dT. В альтернативе по меньшей мере одна из первых 1, 2 или 3 пар оснований в дуплексной области от 5'-конца антисмысловой цепи представляет собой пару оснований AU. Например, первая пара оснований в дуплексной области от 5'-конца антисмысловой цепи представляет собой пару оснований AU.

В другом варианте осуществления нуклеотид на 3'-конце смысловой цепи представляет собой дезокситимин (dT). В другом варианте осуществления нуклеотид на 3'-конце антисмысловой цепи представляет собой дезокситимин (dT). В одном варианте осуществления присутствует короткая последовательность дезокситиминовых нуклеотидов, например, два нуклеотида dT на 3'-конце смысловой или антисмысловой цепи.

В одном варианте осуществления последовательность смысловой цепи может быть представлена формулой (I):

5' n_p-Na-(XXX)i-Nb-YYY-Nb-(ZZZ)j-N_a-nq 3' (I) в которой каждое i и j независимо равно 0 или 1;

каждое p и q независимо равно 0-6;

каждый N_a независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 0-25 модифицированных нуклеотидов, причем каждая последовательность включает по меньшей мере два по-разному модифицированных нуклеотида;

каждый N_b независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 0-10 модифицированных нуклеотидов;

каждый n_p и n_q независимо представляет собой нуклеотид в выступающем конце;

где Nb и Y не имеют одну и ту же модификацию; и каждый XXX, YYY и ZZZ независимо представляет собой один мотив из трех идентичных модификаций на трех последовательных нуклеотидах. Предпочтительно YYY представляет собой 2'-F модифицированные нуклеотиды.

В одном варианте осуществления N_a или Nb включают модификации переменного профиля.

В одном варианте осуществления мотив YYY присутствует в сайте или рядом с сайтом расщепления смысловой цепи. Например, когда РНКи средство имеет дуплексную область длиной 17-23 нуклеотидов, мотив YYY может присутствовать в сайте или рядом с сайтом расщепления (например: может присутствовать в положениях 6, 7, 8, 7, 8, 9, 8, 9, 10, 9, 10, 11, 10, 11, 12 или 11, 12, 13) смысловой цепи, при отсчете начиная с 1-го нуклеотида от 5'-конца; или, необязательно, при отсчете начиная с 1-го спаренного нуклеотида в дуплексной области от 5'-конца.

В одном варианте осуществления i равно 1, a j равно 0, или i равно 0, a j равно 1, или и i, и j равны 1. Смысловая цепь может быть, таким образом, представлена следующими формулами:

5' np-Na-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq 3' (1b); 5' np-Na-XXX-Nb-YYY-Na-nq 3' (1с); или 5' np-Na-XXX-Nb-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq 3' (Id).

Если смысловая цепь представлена формулой (Ib), Nb представляет собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов.

Каждый N_a независимо может представлять собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов.

- 30 048552

Когда смысловая цепь представлена в виде формулы (Ic), Nb представляет собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Каждый N_a может независимо представлять собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов.

Когда смысловая цепь представлен в виде формулы (Id), каждый Nb независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Предпочтительно Nb равен 0,1, 2, 3, 4, 5 или 6. Каждый N_a может независимо представлять собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов.

Каждый из X, Y и Z может быть одним и тем же или отличаться друг от друга. В других вариантах осуществления i равно 0, a j равно 0, и смысловая цепь может быть представлена формулой:

5' Пр-Na-YYY-Na-nq 3' (la).

Если смысловая цепь представлена формулой (Ia), каждый N_a независимо может представлять собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов.

В одном варианте осуществления последовательность антисмысловой цепи РНКи может быть представлена формулой (II):

5' n_q'-Na'-(Z'Z'Z')k-Nb'-Y'YY'-Nb'-(X'X'X')i-Na'-n_p' 3' (II) в которой каждое k и l независимо равно 0 или 1;

каждое р' и q' независимо равно 0-6;

каждый Na' независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 0-25 модифицированных нуклеотидов, причем каждая последовательность включает по меньшей мере два по-разному модифицированных нуклеотида;

каждый N_b' независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 0-10 модифицированных нуклеотидов;

каждый n_p' и n_q' независимо представляет собой нуклеотид в выступающем конце;

где N_b' и Y' не имеют одну и ту же модификацию; и каждый Х'Х'Х', Y'Y'Y' и Z'Z'Z' независимо представляет собой один мотив из трех идентичных модификаций на трех последовательных нуклеотидах.

В одном варианте осуществления N_a' или Nb' включают модификации переменного профиля.

Мотив Y'Y'Y' присутствует в сайте или рядом с сайтом расщепления антисмысловой цепи. Например, когда РНКи средство имеет дуплексную область длиной 17-23 нуклеотида, мотив Y'Y'Y' может присутствовать в положениях 9, 10, 11; 10, 11, 12; 11, 12, 13; 12, 13, 14; или 13, 14, 15 антисмысловой цепи, при отсчете начиная с 1-го нуклеотида от 5'-конца; или, необязательно, при отсчете начиная с 1-го спаренного нуклеотида в дуплексной области, от 5'-конца. Предпочтительно мотив Y'YY' присутствует в положениях 11, 12, 13.

В одном варианте осуществления все нуклеотиды в мотиве Y'YY' 2'-OMe модифицированы.

В одном варианте осуществления k равно 1, а l равно 0, или k равно 0, а l равно 1, или k и l равны 1.

Антисмысловая цепь может быть, таким образом, представлена следующими формулами:

5' n_q'-Na'-Z'Z'Z'-Nb'-Y'Y'Y'-Na'-n_p' 3' (ПЬ); 5' n_q'-Na'-Y'Y'Y'-Nb'-X'X'X'-n_p' 3' (Пс); или 5' n_q'-Na'-Z'Z'Z'-Nb'-YY'Y'-Nb'-X'X'X'-Na'-n_p' 3' (lid).

Если антисмысловая цепь представлена формулой (IIb), Nb' представляет собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Каждый N_a' независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов.

Когда антисмысловая цепь представлена в виде формулы (IIc), N_b' представляет собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Каждый Na' независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов.

Когда антисмысловая цепь представлена в виде формулы (IId), каждый N_b' независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Каждый N_a' независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов. Предпочтительно N_b равен 0, 1, 2, 3, 4, 5 или 6.

В других вариантах осуществления k равно 0, а l равно 0, и антисмысловая цепь может быть представлена формулой:

5’ np'-Na'-Y'Y'Y'-Na'-nq' 3' (la).

Если антисмысловая цепь представлена в виде формулы (IIa), каждый N_a' независимо представляет

- 31 048552 собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов.

Каждый из X', Y' и Z' может быть одним и тем же или может отличаться друг от друга.

Каждый нуклеотид смысловой цепи и антисмысловой цепи может быть независимо модифицирован ЗНК, HNA, CeNA, 2'-метоксиэтилом, 2'-О-метилом, 2'-О-аллилом, 2'-С-аллилом, 2'-гидроксилом или 2'фтором. Например, каждый нуклеотид смысловой цепи и антисмысловой цепи независимо модифицирован 2'-О-метилом или 2'-фтором. Каждый X, Y, Z, X', Y' и Z', в частности, могут представлять собой 2'-Ометил-модификацию или 2'-фтормодификацию.

В одном варианте осуществления смысловая цепь РНКи средства может содержать мотив YYY, присутствующий в положениях 9, 10 и 11 цепи, когда дуплексная область имеет длину 21 нт, при отсчете начиная с 1-го нуклеотида от 5'-конца, или, необязательно, при отсчете начиная с 1-го спаренного нуклеотида в дуплексной области от 5'-конца; и Y представляет собой 2'-F модификацию. Смысловая цепь может дополнительно содержать мотив XXX или мотивы ZZZ в качестве фланговых модификаций на противоположном конце дуплексной области; при этом каждый XXX и ZZZ независимо представляет собой 2'-ОМе модификацию или 2'-F модификацию.

В одном варианте осуществления антисмысловая цепь может содержать мотив Y'Y'Y', присутствующий в положениях 11, 12, 13 цепи, при отсчете начиная с 1-го нуклеотида от 5'-конца, или, необязательно, при отсчете начиная с 1-го спаренного нуклеотида в дуплексной области от 5'-конца; и Y' представляет собой 2'-O-метил-модификацию. Антисмысловая цепь может дополнительно содержать мотив Х'Х'Х' или мотивы Z'Z'Z' в качестве фланговых модификаций на противоположном конце дуплексной области; и каждый Х'Х'Х' и Z'Z'Z' независимо представляет собой 2'-ОМе модификацию или 2'-F модификацию.

Смысловая цепь, представленная выше любой из формул (Ia), (Ib), (Ic) и (Id), образует дуплекс с антисмысловой цепью, представленной любой из формул (IIa), (IIb), (IIc) и (IId), соответственно.

Таким образом, РНКи средства для применения в способах согласно изобретению могут включать смысловую цепь и антисмысловую цепь, где каждая цепь содержит 14-30 нуклеотидов, и где РНКи дуплекс представлен следующей формулой (III):

РНКи дуплекс, включают формулы, представленные ниже:

Iсмысловая: 5' n_p-N_a-(XXX)i-Nb-YYY-Nb-(ZZZ)j-N_a-n_q 3' антисмысловая: 3' n_p'-N_a'-(X'X'X')k-Nb'-Y'Y'Y'-Nb'-(Z'Z'Z')i-Na'-n_q' 5' (Щ) в которой каждое i, j, k и l независимо равно 0 или 1;

каждое р, р', q, и q' независимо равно 0-6;

каждый N_a и N_a' независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 0-25 модифицированных нуклеотидов, причем каждая последовательность включает по меньшей мере два по-разному модифицированных нуклеотида;

каждый N_b и N_b' независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 0-10 модифицированных нуклеотидов; где каждый n_p', n_p, n_q' и n_q, каждый из которых может присутствовать или может не присутствовать, независимо представляет собой нуклеотид в выступающем конце; и каждый XXX, YYY, ZZZ, Х'Х'Х, Y'Y'Y' и Z'Z'Z' независимо представляет собой один мотив из трех идентичных модификаций на трех последовательных нуклеотидах.

В одном варианте осуществления i равно 0, a j равно 0; или i равно 1, a j равно 0; или i равно 0, a j равно 1; или i и j равны 0; или i и j равны 1. В другом варианте осуществления k равно 0, а l равно 0; или k равно 1, а l равно 0; k равно 0, а l равно 1; или k и l равны 0; или k и l равны 1.

Иллюстративные комбинации смысловой цепи и антисмысловой цепи, образующих

5' Пр-Na-YYY-n_a-n_q 3'

3’ np'-Na'-Y'Y'Y'-Na'nq' 5' (Ша)

5' Пр-Na-YYY-Nb-Z z Z-n_a-n_q 3'

3' np'-Na'-Y'Y'Y'-Nb'-Z'Z'Z'-Na'nq' 5' (IUb)

5' n_p-Na-XXX-Nb-YYY-Na-n_q 3'

3' np'-Na'-X'X'X'-Nb'-Y'Y'Y'-Na'-nq' 5' (Ilie)

5' np-Na-X X X-nb-YYY-n_b-ZZZ-n_a-n_q 3'

3' n_p'-Na'-X'X'X'-Nb'-Y'Y'Y'-Nb'-Z'Z'Z'-Na-n_q' 5' (md)

Если РНКи средство представлено формулой (IIIa), каждый N_a независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов.

Когда РНКи средство представлено формулой (IIIb), каждый N_b независимо представляет собой

- 32 048552 олигонуклеотидную последовательность, включающую 1-10, 1-7, 1-5 или 1-4 модифицированных нуклеотида. Каждый Na независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов.

Когда РНКи средство представлено в виде формулы (IIIc), каждый Nb, N_b' независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Каждый N_a независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов.

Когда РНКи средство представлен в виде формулы (IIId), каждый N_b, N_b' независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Каждый Na, Na' независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, включающую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов. Каждый Na, Na', Nb и Nb' независимо включает модификации переменного профиля.

В одном варианте осуществления, когда РНКи средство представлено формулой (IIId), модификации Na являются 2'-О-метил или 2'-фтор модификациями. В другом варианте осуществления, когда РНКи средство представлено формулой (IIId), модификации N_a являются 2'-О-метил или 2'-фтор модификациями, и np'>0, и по меньшей мере один np' связан с соседним нуклеотидом фосфоротиоатной связью. В еще одном варианте осуществления, когда РНКи средство представлено формулой (Hid), модификации N_a являются 2'-О-метил или 2'-фтор модификациями, n_p'>0, и по меньшей мере один n_p' связан с соседним нуклеотидом фосфоротиоатной связью, и смысловая цепь конъюгирована с одним или больше С16 (или родственными) фрагментами, присоединёнными через бивалентный или тривалентный разветвленный линкер (описанный ниже). В другом варианте осуществления, когда РНКи средство представлено формулой (IIId), модификации Na являются 2'-О-метил или 2'-фтор модификациями, np'>0, и по меньшей мере один np' связан с соседним нуклеотидом фосфоротиоатной связью, смысловая цепь включает по меньшей мере одну фосфоротиоатную связь, и смысловая цепь конъюгирована с одним или больше липофильными, например С16 (или родственными), фрагментами, необязательно присоединенными через бивалентный или тривалентный разветвленный линкер.

В одном варианте осуществления, когда РНКи средство представлено формулой (IIIa), модификации N_a являются 2'-О-метил или 2'-фтор модификациями, n_p'>0, и по меньшей мере один n_p' связан с соседним нуклеотидом фосфоротиоатной связью, смысловая цепь включает по меньшей мере одну фосфоротиоатную связь, и смысловая цепь конъюгирована с одним или больше липофильными, например, С16 (или родственными), фрагментами, присоединенными через бивалентный или тривалентный разветвленный линкер.

В одном варианте осуществления РНКи средство представляет собой мультимер, содержащий по меньшей мере два дуплекса, представленные формулой (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc) и (IIId), где дуплексы соединены линкером. Линкер может быть расщепляемым или нерасщепляемым. Необязательно мультимер дополнительно включает лиганд. Каждый из дуплексов может быть направлен против одного и того же гена или двух разных генов; или каждый из дуплексов может быть направлен против одного и того же гена в двух разных сайтах-мишенях.

В одном варианте осуществления РНКи средство представляет собой мультимер, содержащий три, четыре, пять, шесть или больше дуплексов, представленных формулой (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc) и (IIId), где дуплексы соединены линкером. Линкер может быть расщепляемым или нерасщепляемым. Необязательно мультимер дополнительно включает лиганд. Каждый из дуплексов может быть направлен против одного и того же гена или двух разных генов; или каждый из дуплексов может быть направлен против одного и того же гена в двух разных сайтах-мишенях.

В одном варианте осуществления два РНКи средства, представленные формулой (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc) и (IIId), соединены друг с другом на 5'-конце и одном или обоих 3'-концах и, необязательно, конъюгированы с лигандом. Каждое из средств может быть направлен против одного и того же гена или двух разных геном; или каждое из средств может быть направлен против одного и того же гена в двух разных сайтах-мишенях.

В различных публикациях описаны мультимерные РНКи средства, которые могут применяться в способах согласно изобретению. Такие публикации включают WO 2007/091269, WO 2010/141511, WO 2007/117686, WO 2009/014887 и WO 2011/031520; и US 7858769, все содержание каждой из которых настоящим включены в настоящий документ посредством отсылки.

В некоторых вариантах осуществления композиции и способы согласно изобретению включают винилфосфонатную (VP) модификацию РНКи средства, как описано в настоящем документе. В иллюстративных вариантах осуществления винилфосфонат согласно изобретению имеет следующую структуру:

\ О~ . Р о \ о^-

Винилфосфонат согласно настоящему изобретению может быть присоединен к антисмысловой или смысловой цепи дцРНК согласно изобретению. В некоторых предпочтительных вариантах осуществле

- 33 048552 ния винилфосфонат согласно настоящему изобретению присоединен к антисмысловой цепи дцРНК, необязательно на 5'-конце антисмысловой цепи дцРНК.

Винилфосфатные модификации также рассматриваются для композиций и способов настоящего изобретения. Примером структура винилфосфата является:

=\ н о - Р - он

I он

i. Термически дестабилизирующие модификации.

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК может быть оптимизирована для РНКинтерференции путем включения термически дестабилизирующих модификаций в затравочную область антисмысловой цепи (т.е. в положения 2-9 на 5'-конце антисмысловой цепи) для снижения или ингибирования сайленсинга нецелевых генов. Было обнаружено, что дцРНК с антисмысловой цепью, включающей по меньшей мере одну термически дестабилизирующую модификацию дуплекса в пределах первых 9 положений нуклеотидов, считая от 5'-конца антисмысловой цепи, обладают сниженной активностью сайленсинга нецелевых генов. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь включает по меньшей мере одну (например, одну, две, три, четыре, пять или больше) термически дестабилизирующую модификацию дуплекса в пределах первых 9 положений нуклеотидов 5'области антисмысловой цепи. В некоторых вариантах осуществления одна или больше термически дестабилизирующих модификаций дуплекса расположены в положениях 2-9 или, предпочтительно, в положениях 4-8 от 5'-конца антисмысловой цепи. В некоторых дополнительных вариантах осуществления термически дестабилизирующая модификация(и) дуплекса расположена в положении 6, 7 или 8 от 5'конца антисмысловой цепи. В некоторых других дополнительных вариантах осуществления термически дестабилизирующая модификация дуплекса расположена в положении 7 от 5'-конца антисмысловой цепи. Термин термически дестабилизирующая модификация(и) включает модификацию(и), которая приводит к дцРНК с более низкой общей температурой плавления (Т_п) (предпочтительно Т_п на один, два, три или четыре градуса ниже), чем Т_п дцРНК без такой модификации(й). В некоторых вариантах осуществления термически дестабилизирующая модификация дуплекса расположена в положении 2, 3, 4, 5 или 9 от 5'-конца антисмысловой цепи.

Термически дестабилизирующие модификации могут включать, без ограничения ими, абазическую модификацию; нарушение комплементарности с противоположным нуклеотидом в противоположной цепи; и модификацию сахара, такую как 2'-дезокси модификация, или ациклический нуклеотид, например, разомкнутые нуклеиновые кислоты (UNA) или гликоль-нуклеиновая кислота (GNA).

Примеры абазических модификаций включают, без ограничения, следующее:

где R=H, Me, Et или ОМе; R'=H, Me, Et или ОМе; R=H, Me, Et или ОМе

Mod2 (2'-OMe абазический спейсер)

Mod3 (З'-ОМе)

Mod4 Mods (5*-Ме) (Нур-спейсер)

X = ОМе, F где В является модифицированным или немодифицированным нуклеиновым основанием. Примеры модификаций сахара включают, без ограничения, следующие:

- 34 048552

О I

2’-дезокси

н разомкнутая нуклеиновая кислота

R= Н, ОН, О-алкил '7 Z^R' R о-У о гликоль-нуклеиновая кислота

R= Н, ОН, О-алкил

Ь-1 гл икол ь-нукл ей н овая кислота

R= Н, ОН, О-алкил разомкнутая нуклеиновая кислота

R= Н, ОН. СН₃, С Н ₂С Н₃, О-алкил, NH₂, NHMe, NMe₂

R' = H, ОН, СН₃. СН₂СН₃, О-алкил,ΝΗ₂, NHMe. NMe₂ R = H, ОН, СН₃, СН₂СН₃, О-алкил, NH₂, NHMe, NMe₂ R'= H, ОН, СН₃, СН₂СН₃, О-алкил, NH₂, NHMe, NMe₂ R' = H,OH CH₃, CH₂CH₃, О-алкил, NH₂, NHMe, NMe₂ о R 9

R = Н, метил, этил где В является модифицированным или немодифицированным нуклеиновым основанием.

В некоторых вариантах осуществления термически дестабилизирующая модификация дуплекса выбрана из группы, состоящей из:

где В является модифицированным или немодифицированным нуклеиновым основанием, и звездочка на каждой структуре обозначает R, S или рацемический.

Термин ациклический нуклеотид относится к любому нуклеотиду, имеющему ациклический сахар рибозы, например, где любые из связей между атомами углерода рибозы (например, С1'-С2', С2'-С3', С3'-С4', С4'-О4' или С1'-О4') отсутствуют, или по меньшей мере один из атомов углерода или кислорода рибозы (например, С1', С2', С3', С4' или O4') независимо или в комбинации отсутствует в нуклеотиде. В некоторых вариантах осуществления ациклический нуклеотид представляет собой:

где В является модифицированным или немодифицированным нуклеиновым основанием, R¹ и R² независимо представляют собой H, галоген, OR3 или алкил; и R3 представляет собой H, алкил, циклоалкил, арил, аралкил, гетероарил или сахар). Термин UNA относится к разомкнутой ациклической нуклеиновой кислоте, в которое любая из связей сахара была удалена с образованием разомкнутого сахарного остатка. В одном примере UNA также охватывает мономеры с удаленными связями между С1'-С4' (т.е. ковалентная углерод-кислород-углеродная связь между С1' и С4' атомами углерода). В другом примере удалена связь С2'-С3' (т.е. ковалентная углерод-углеродная связь между С2' и С3' атомами углерода) сахара (см. публикации Mikhailov et. al., Tetrahedron Letters, 26 (17): 2059 (1985); и Fluiter et al., Mol. Biosyst, 10: 1039 (2009), которые настоящим включены посредством отсылок во всей своей полноте). Ациклическое производное обеспечивает повышенную гибкость скелета, не влияя на уотсон-криковское спаривание оснований. Ациклический нуклеотид может быть связан через 2'-5' или 3'-5' связь.

Термин 'GNA' относится к гликоль-нуклеиновой кислоте, которая является полимером, подобным

- 35 048552

ДНК или РНК, но отличается по составу своего скелета тем, что она состоит из повторяющихся глицериновых звеньев, связанных фосфодиэфирными связями:

Термически дестабилизирующей модификацией дуплекса могут быть нарушения комплементарности (т.е. некомплементарные пары оснований) между термически дестабилизирующим нуклеотидом и противоположным нуклеотидом на противоположной цепи в дцРНК дуплексе. Примеры некомплементарных пар оснований включают: G:G, G: А, G:U, G:T, A:A, A:C, C:C, C:U, C:T, U:U, T:T, U:T или их комбинацию. Другие некомплементарные пары оснований, известные в уровне техники, также предусмотрены в настоящем изобретении. Некомплементарные пары могут присутствовать между нуклеотидами, которые являются природными нуклеотидами или модифицированными нуклеотидами, т.е. спаривание оснований с нарушением комплементарности может присутствовать между нуклеиновыми основаниями соответствующих нуклеотидов независимо от модификаций на сахаре рибозы нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК содержит по меньшей мере одно нуклеиновое основание с ошибочным спариванием, которое является 2'-дезокси нуклеиновым основанием; например, 2'дезокси нуклеиновое основание присутствует на смысловой цепи.

В некоторых вариантах осуществления термически дестабилизирующая модификация дуплекса в затравочной области антисмысловой цепи включает нуклеотиды с нарушенным W-C Н-связыванием с комплементарным основанием на мРНК-мишени, такие как:

Дополнительные примеры абазического нуклеотида, модификаций ациклических нуклеотидов (включая UNA и GNA) и модификаций с нарушением комплементарности подробно описаны в заявке WO 2011/133876, которая полностью включена в настоящий документ посредством отсылки.

Термически дестабилизирующие модификации также могут включать универсальное основание с пониженной или отсутствующей способностью образовывать водородные связи с противоположными основаниями и фосфатные модификации.

В некоторых вариантах осуществления термически дестабилизирующая модификация дуплекса включает нуклеотиды с неканоническими основаниями, такие как, помимо прочего, модификации нуклеиновых оснований с нарушенной или полностью устраненной способностью образовывать водородные связи с основаниями в противоположной цепи. Такие модификации нуклеиновых оснований были оценены на предмет дестабилизации центральной области дцРНК дуплекса, как описано в WO 2010/0011895, которая полностью включена в настоящий документ посредством отсылки. Примерами модификаций нуклеиновых оснований являются:

- 36 048552

В некоторых вариантах осуществления термически дестабилизирующая модификация дуплекса в затравочной области антисмысловой цепи включает один или больше α-нуклеотидов, комплементарных основанию на мРНК-мишени, таких как:

где R представляет собой H, ОН, OCH₃, F, NH2, NHMe, NMe2 или О-алкил.

Примерами фосфатных модификаций, которые, как известно, снижают термическую стабильность дцРНК дуплексов по сравнению с обычными фосфодиэфирными связями, являются:

Алкил в группе R может быть С₁-С₆ алкилом. Конкретные алкилы в группе R включают, без ограничения, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, пентил и гексил.

Как будет понятно специалисту в данной области техники, с учетом того, что функциональная роль нуклеиновых оснований определяет специфичность РНКи средства согласно изобретению, тогда как модификации нуклеиновых оснований могут быть выполнены различными способами, как описано в настоящем документе, например, для введения дестабилизирующих модификаций в РНКи средство согласно изобретению, например, с целью усиления воздействия на мишень по сравнению с нецелевым воздействием, диапазон модификаций, которые доступны и, как правило, присутствуют в РНКи средствах согласно изобретению, обычно намного больше в случае модификаций не нуклеиновых оснований, например, модификаций сахарных групп или фосфатных скелетов полирибонуклеотидов. Такие модификации более подробно описаны в других разделах настоящего описания и прямо предусмотрены для РНКи средств согласно изобретению, которые содержат либо нативные нуклеиновые основания, либо модифицированные нуклеиновые основания, как описано выше или в другой части настоящего документа.

В дополнение к антисмысловой цепи, включающей термически дестабилизирующую модификацию, дцРНК также может включать одну или больше стабилизирующих модификаций. Например, дцРНК может включать по меньшей мере две (например, две, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять или больше) стабилизирующих модификаций. Без ограничений все стабилизирующие модификации могут присутствовать в одной цепи. В некоторых вариантах осуществления как смысловая, так и антисмысловая цепи включают по меньшей мере две стабилизирующие модификации. Стабилизирующая модификация может присутствовать на любом нуклеотиде смысловой цепи или антисмысловой цепи. Например, стабилизирующая модификация может присутствовать на каждом нуклеотиде смысловой или антисмысловой цепи; каждая стабилизирующая модификация может присутствовать в чередующемся порядке на смысловой цепи или антисмысловой цепи; или смысловая цепь или антисмысловая цепь включают обе стабилизирующие модификации в чередующемся порядке. Чередующийся порядок стабилизирующих модификаций смысловой цепи может быть таким же или отличаться от чередующегося порядка в антисмысловой цепи, при этом порядок чередования стабилизирующих модификаций в смысловой цепи может быть смещен относительно порядка чередования стабилизирующих модификаций в антисмысловой цепи.

В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь содержит по меньшей мере две (на

- 37 048552 пример, две, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять или больше) стабилизирующих модификаций. Без ограничений стабилизирующая модификация d антисмысловой цепи может присутствовать в любых положениях. В некоторых вариантах осуществления антисмысловые модификации включают стабилизирующие модификации в положениях 2, 6, 8, 9, 14 и 16 от 5'-конца. В некоторых других вариантах осуществления антисмысловой фрагмент содержит стабилизирующие модификации в положениях 2, 6, 14 и 16 от 5'-конца. В некоторых других вариантах осуществления антисмысловая цепь включает стабилизирующие модификации в положениях 2, 14 и 16 от 5'-конца.

В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь включает по меньшей мере одну стабилизирующую модификацию, примыкающую к дестабилизирующей модификации. Например, стабилизирующая модификация может быть нуклеотидом на 5'-конце или 3'-конце дестабилизирующей модификации, т.е. в положении -1 или +1 от положения дестабилизирующей модификации. В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь включает стабилизирующую модификацию на каждом из 5'конца и 3'-конца дестабилизирующей модификации, т.е. в положении -1 и +1 от положения дестабилизирующей модификации.

В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь включает по меньшей мере две стабилизирующие модификации на 3'-конце дестабилизирующей модификации, т.е. в положениях +1 и +2 от положения дестабилизирующей модификации.

В некоторых вариантах осуществления смысловая цепь включает по меньшей мере две (например, две, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять или больше) стабилизирующих модификаций. Без ограничений стабилизирующая модификация смысловой цепи может присутствовать в любых положениях. В некоторых вариантах осуществления смысловая цепь включает стабилизирующие модификации в положениях 7, 10 и 11 от 5'-конца. В некоторых других вариантах осуществления смысловая цепь включает стабилизирующие модификации в положениях 7, 9, 10 и 11 от 5'-конца. В некоторых вариантах осуществления смысловая цепь включает стабилизирующие модификации в положениях, противоположных или комплементарных положениям 11, 12 и 15 антисмысловой цепи, считая от 5'-конца антисмысловой цепи. В некоторых других вариантах осуществления смысловая цепь включает стабилизирующие модификации в положениях, противоположных или комплементарных положениям 11, 12, 13 и 15 антисмысловой цепи, считая от 5'-конца антисмысловой цепи. В некоторых вариантах осуществления смысловая цепь включает блок из двух, трех или четырех стабилизирующих модификаций.

В некоторых вариантах осуществления смысловая цепь не включает стабилизирующую модификацию в положении, противоположном или комплементарном термически дестабилизирующей модификации дуплекса в антисмысловой цепи.

Примеры термостабилизирующих модификаций включают, без ограничения этим, 2'фтормодификации. Другие термостабилизирующие модификации включают, без ограничения, LNA.

В некоторых вариантах осуществления дцРНК согласно изобретению включает по меньшей мере четыре (например, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять или больше) 2'-фтор-нуклеотида. Без ограничений все 2'-фтор-нуклеотиды могут присутствовать в одной цепи. В некоторых вариантах осуществления как смысловая, так и антисмысловая цепи включают по меньшей мере два 2'-фтор-нуклеотида. 2'-фтормодификация может присутствовать на любом нуклеотиде смысловой или антисмысловой цепи. Например, 2'-фтормодификация может присутствовать на каждом нуклеотиде смысловой или антисмысловой цепи; каждая 2'-фтормодификация может чередоваться на смысловой или антисмысловой цепи; или смысловая цепь или антисмысловая цепь включают обе 2'-фтормодификации в чередующемся порядке. Порядок чередования 2'-фтормодификаций на смысловой цепи может быть таким же или отличаться от антисмысловой цепи, при этом порядок чередования 2'-фтормодификаций на смысловой цепи может быть смещен относительно порядка чередования 2'-фтормодификаций на антисмысловой цепи.

В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь включает по меньшей мере два (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять или больше) 2'-фтор-нуклеотида. Без ограничений 2'-фтормодификация в антисмысловой цепи может присутствовать в любых положениях. В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь включает 2'-фтор-нуклеотиды в положениях 2, 6, 8, 9, 14 и 16 от 5'-конца. В некоторых других вариантах осуществления антисмысловая цепь включает 2'-фтор-нуклеотиды в положениях 2, 6, 14 и 16 от 5'-конца. В некоторых других вариантах осуществления антисмысловая цепь включает 2'-фтор-нуклеотиды в положениях 2, 14 и 16 от 5'-конца.

В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь включает по меньшей мере один 2'фтор-нуклеотид, примыкающий к дестабилизирующей модификации. Например, 2'-фтор-нуклеотид может быть нуклеотидом на 5'-конце или 3'-конце дестабилизирующей модификации, т.е. в положении -1 или +1 от положения дестабилизирующей модификации. В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь включает 2'-фтор-нуклеотид на каждом из 5'-конца и 3'-конца дестабилизирующей модификации, т.е. в положениях -1 и +1 от положения дестабилизирующей модификации.

В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь включает по меньшей мере два 2'-фторнуклеотида на 3'-конце дестабилизирующей модификации, т.е. в положениях +1 и +2 от положения дестабилизирующей модификации.

В некоторых вариантах осуществления смысловая цепь включает по меньшей мере два (например,

- 38 048552 два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять или больше) 2'-фторнуклеотида. Без ограничений 2'-фтормодификация в смысловой цепи может присутствовать в любых положениях. В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь включает 2'-фторнуклеотиды в положениях 7, 10 и 11 от 5'-конца. В некоторых других вариантах осуществления смысловая цепь включает 2'-фторнуклеотиды в положениях 7, 9, 10 и 11 от 5'-конца. В некоторых вариантах осуществления смысловая цепь включает 2'фторнуклеотиды в положениях, противоположных или комплементарных положениям 11, 12 и 15 антисмысловой цепи, считая от 5'-конца антисмысловой цепи. В некоторых других вариантах осуществления смысловая цепь включает 2'-фтор-нуклеотиды в положениях, противоположных или комплементарных положениям 11, 12, 13 и 15 антисмысловой цепи, считая от 5'-конца антисмысловой цепи. В некоторых вариантах осуществления смысловая цепь включает блок из двух, трех или четырех 2'-фторнуклеотидов.

В некоторых вариантах осуществления смысловая цепь не включает 2'-фторнуклеотид в положении, противоположном или комплементарном термически дестабилизирующей модификации дуплекса в антисмысловой цепи.

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению включает смысловую цепь из 21 нуклеотида (нт) и антисмысловую цепь из 23 нуклеотидов (нт), где антисмысловая цепь включает по меньшей мере один термически дестабилизирующий нуклеотид, где по меньшей мере один термически дестабилизирующий нуклеотид присутствует в затравочной области антисмысловой цепи (т.е. в положениях 2-9 на 5'-конце антисмысловой цепи), где один конец дцРНК является тупым, тогда как другой конец включает 2 нт оверхенг, и где дцРНК необязательно дополнительно обладает по меньшей мере одной (например, одной, двумя, тремя, четырьмя, пятью, шестью или всеми семью) из следующих характеристик: (i) антисмысловая цепь включает 2, 3, 4, 5 или 6 2'-фтормодификаций; (ii) антисмысловая цепь включает 1, 2, 3, 4 или 5 фосфоротиоатных межнуклеотидных связей; (iii) смысловая цепь конъюгирована с лигандом; (iv) смысловая цепь включает 2, 3, 4 или 5 2'-фтормодификаций; (v) смысловая цепь включает 1, 2, 3, 4 или 5 фосфоротиоатных межнуклеотидных связей; (vi) дцРНК включает по меньшей мере четыре 2'-фтормодификации; и (vii) дцРНК включает тупой конец на 5'-конце антисмысловой цепи. Предпочтительно 2 нт оверхенг находится на 3'-конце антисмысловой цепи.

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению включает смысловую и антисмысловую цепи, где: смысловая цепь имеет длину 25-30 нуклеотидных остатков, где, начиная с 5'-концевого нуклеотида (положение 1), положения 1-23 указанной смысловой цепи включают по меньшей мере 8 рибонуклеотидов; антисмысловая цепь имеет длину 36-66 нуклеотидных остатков и, начиная с 3'-концевого нуклеотида, не меньше 8 рибонуклеотидов в положениях, спаренных с положениями 1 -23 смысловой цепи с образованием дуплекса; где по меньшей мере 3'-концевой нуклеотид антисмысловой цепи не спарен со смысловой цепью, и до 6 последовательных 3'-концевых нуклеотидов не спарены со смысловой цепью, образуя в результате 3'-концевой одноцепочечный оверхенг из 1-6 нуклеотидов; где 5'-конец антисмысловой цепи включает 10-30 последовательных нуклеотидов, которые не спарены со смысловой цепью, образуя в результате одноцепочечный 5'-оверхенг из 10-30 нуклеотидов; где по меньшей мере 5'-концевые и 3'-концевые нуклеотиды смысловой цепи спарены с нуклеотидами антисмысловой цепи, когда смысловая и антисмысловая цепи выровнены с максимальной комплементарностью, образуя в результате по существу дуплексную область между смысловой и антисмысловой цепями; и антисмысловая цепь в достаточной степени комплементарна РНК-мишени на протяжении по меньшей мере 19 рибонуклеотидов антисмысловой цепи для снижения экспрессии гена-мишени при введении указанной двухцепочечной нуклеиновой кислоты в клетку млекопитающего; и где антисмысловая цепь содержит по меньшей мере один термически дестабилизирующий нуклеотид, где по меньшей мере один термически дестабилизирующий нуклеотид присутствует в затравочной области антисмысловой цепи (т.е. в положениях 2-9 5'-конца антисмысловой цепи). Например, термически дестабилизирующий нуклеотид присутствует между положениями, противоположными или комплементарными положениям 14-17 5'-конца смысловой цепи, и где дцРНК необязательно дополнительно обладает по меньшей мере одной (например, одной, двумя, тремя, четырьмя, пятью, шестью или всеми семью) из следующих характеристик: (i) антисмысловая цепь включает 2, 3, 4, 5 или 6 2'-фтормодификаций; (ii) антисмысловая цепь включает 1, 2, 3, 4 или 5 фосфоротиоатных межнуклеотидных связей; (iii) смысловая цепь конъюгирована с лигандом; (iv) смысловая цепь включает 2, 3, 4 или 5 2'-фтормодификаций; (v) смысловая цепь включает 1, 2, 3, 4 или 5 фосфоротиоатных межнуклеотидных связей; и (vi) дцРНК включает по меньшей мере четыре 2'-фтормодификации; и (vii) дцРНК включает дуплексную область длиной 12-30 пар нуклеотидов.

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению включает смысловую и антисмысловую цепи, где указанная молекула дцРНК включает смысловую цепь длиной по меньшей мере 25 и не больше 29 нуклеотидов и антисмысловую цепь длиной не больше 30 нуклеотидов, при этом смысловая цепь включает модифицированный нуклеотид, который подвержен ферментативному расщеплению, в положении 11 от 5'-конца, где 3'-конец указанной смысловой цепи и 5'-конец указанной антисмысловой цепи образуют тупой конец, и указанная антисмысловая цепь на 1-4 нуклеотида длиннее на своем 3'-конце, чем смысловая цепь, где дуплексная область имеет длину по меньшей мере 25 нуклеотидов, и указанная антисмысловая цепь в достаточной степени комплементарна мРНК-мишени по мень

- 39 048552 шей мере на протяжении 19 нт указанной антисмысловой цепи для снижения экспрессии гена-мишени при введении указанной молекулы дцРНК в клетку млекопитающего, и где расщепление dicer указанной дцРНК предпочтительно приводит к образованию миРНК, включающей указанный 3'-конец указанной антисмысловой цепи, снижая, таким образом, экспрессию гена-мишени у млекопитающего, где антисмысловая цепь включает по меньшей мере один термически дестабилизирующий нуклеотид, где по меньшей мере один термически дестабилизирующий нуклеотид присутствует в затравочной области антисмысловой цепи (т.е. в положении 2-9 на 5'-конце антисмысловой цепи), и где дцРНК необязательно дополнительно обладает по меньшей мере одной (например, одной, двумя, тремя, четырьмя, пятью, шестью или всеми семью) из следующих характеристик: (i) антисмысловая цепь включает 2, 3, 4, 5 или 6 2'фтормодификаций; (ii) антисмысловая цепь включает 1, 2, 3, 4 или 5 фосфоротиоатных межнуклеотидных связей; (iii) смысловая цепь конъюгирована с лигандом; (iv) смысловая цепь включает 2, 3, 4 или 5 2'-фтормодификаций; (v) смысловая цепь включает 1, 2, 3, 4 или 5 фосфоротиоатных межнуклеотидных связей; и (vi) дцРНК включает по меньшей мере четыре 2'-фтормодификации; и (vii) дцРНК имеет дуплексную область длиной 12-29 пар нуклеотидов.

В некоторых вариантах осуществления каждый нуклеотид в смысловой и антисмысловой цепях молекулы дцРНК может быть модифицирован. Каждый нуклеотид может быть модифицирован одной и той же или другой модификацией, которая может включать одно или больше изменений одного или обоих несвязывающих атомов кислорода фосфата или одного или больше связывающих атомов кислорода фосфата; изменение компонента рибозного сахара, например, 2'-гидроксила рибозного сахара; полную замену фосфатной группы дефосфо линкерами; модификацию или замену природного основания; и замену или модификацию рибозо-фосфатного скелета.

Поскольку нуклеиновые кислоты представляют собой полимеры, состоящие из субъединиц, многие из модификаций присутствуют в положении, которое повторяется в нуклеиновой кислоте, например, модификация основания или фосфатной группы, или несвязывающего атома О фосфатной группы. В некоторых случаях модификация будет присутствовать во всех рассматриваемых положениях в нуклеиновой кислоте, но во многих случаях она не присутствует. Например, модификация может присутствовать только в 3'-или 5'-концевом положении, может присутствовать только в концевой области, например, в положении на концевом нуклеотиде или в последних 2, 3, 4, 5 или 10 нуклеотидах цепи. Модификация может присутствовать в двухцепочечной области, одноцепочечной области или в обеих этих областях. Модификация может присутствовать только в двухцепочечной области РНК или может присутствовать только в одноцепочечной области РНК. Например, фосфоротиоатная модификация в положении несвязывающего О может присутствовать только на одном или обоих концах, может присутствовать только в концевой области, например, в положении на концевом нуклеотиде или в последних 2, 3, 4, 5, или 10 нуклеотидах в цепи, или может присутствовать в двухцепочечных и одноцепочечных областях, в частности на концах. 5'-конец или концы могут быть фосфорилированы.

Можно, например, повысить стабильность, включить конкретные основания в оверхенги или включить модифицированные нуклеотиды или аналоги нуклеотидов в одноцепочечные оверхенги, например, в 5'- и/или 3'-оверхенг. Например, может быть желательным включить в оверхенги пуриновые нуклеотиды. В некоторых вариантах осуществления все или некоторые из оснований в 3'- или 5'-оверхенге могут быть модифицированы, например, модификацией, описанной в настоящем документе. Модификации могут включать, например, использование модификаций в 2'-положении сахара рибозы с модификациями, известными в данной области, например, использование дезоксирибонуклеотидов, 2'-дезокси-2'-фтор (2'-F) или 2'-О-метилмодифицированных нуклеотидов вместо рибосахара нуклеинового основания, и модификаций в фосфатной группе, например, фосфоротиоатных модификаций. Овергхенги не должны обязательно гомологичными с целевой последовательности.

В некоторых вариантах осуществления каждый остаток смысловой цепи и антисмысловой цепи независимо модифицирован LNA, HNA, CeNA, 2'-метоксиэтилом, 2'-О-метилом, 2'-О-аллилом, 2'-Саллилом, 2'-С-аллилом, 2'-дезокси или 2'-фтором. Цепи могут содержать больше одной модификации. В некоторых вариантах осуществления каждый остаток смысловой цепи и антисмысловой цепи независимо модифицирован 2'-О-метилом или 2'-фтором. Следует понимать, что такие модификации являются дополнительными по меньшей мере к одной термически дестабилизирующей модификации дуплекса, присутствующей в антисмысловой цепи.

На смысловой и антисмысловой цепях, как правило, присутствуют по меньшей мере две разные модификации. Эти две модификации могут быть 2'-дезокси, 2'-О-метил или 2'-фтор модификациями, ациклическими нуклеотидами или другими. В некоторых вариантах осуществления каждая из смысловой и антисмысловой цепей содержит два по-разному модифицированных нуклеотида, выбранных из 2'-Ометила или 2'-дезокси. В некоторых вариантах осуществления каждый остаток смысловой цепи и антисмысловой цепи независимо модифицирован 2'-О-метилнуклеотидом, 2'-дезоксинуклеотидом, 2'-дезокси2'-фторнуклеотидом, 2'-О-Ы-метилацетамидо (2'-O-NMA) нуклеотидом, 2'-О-диметиламиноэтоксиэтил (2'-O-DMAEOE) нуклеотидом, 2'-О-аминопропил (2'-О-АР) нуклеотидом или 2'-apa-F нуклеотидом. Опять же, следует понимать, что эти модификации являются дополнительными по меньшей мере к одной термически дестабилизирующей модификации дуплекса, присутствующей в антисмысловой цепи.

- 40 048552

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению содержит модификации в чередующемся порядке, в частности, в областях B1, B2, В3, В1', В2', В3', В4'. Термин чередующийся мотив или чередующийся порядок при использовании в настоящем документе относится к мотиву, имеющему одну или несколько модификаций, причем каждая модификация присутствует на чередующихся нуклеотидах одной цепи. Чередующийся нуклеотид может относиться к одному на каждые два нуклеотида или по одному на каждые три нуклеотида, или к аналогичному порядку. Например, если каждый из А, В и С представляет собой один тип модификации нуклеотида, чередующийся мотив может быть

АВАВАВАВАВАВАВ..., ААВВААВВААВВ...,

ААВААВААВААВ..., АААВАААВАААВ.АААВВВАААВВВ... или АВС АВС АВС АВС...

и т.д. Тип модификаций, содержащихся в чередующемся мотиве, может быть одинаковым или разным. Например, если каждый из А, В, С, D представляет собой один тип модификации нуклеотида, чередующийся порядок, т.е. модификации каждого второго нуклеотида, может быть одинаковым, но каждая из смысловых или антисмысловых цепей может быть выбрана из нескольких возможностей модификаций в чередующемся порядке, таких как АВАВАВ..., АСАСАС..., BDBDBD... или CDCDCD... и т.д.

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению включает порядок модификации чередующегося мотива на смысловой цепи по сравнению с порядком модификации чередующегося мотива на антисмысловой цепи. Смещение может быть таким, что модифицированная группа нуклеотидов смысловой цепи соответствует модифицированной по-разному группе нуклеотидов антисмысловой цепи и наоборот. Например, когда смысловая цепь спарена с антисмысловой цепью в дцРНК дуплексе, чередующийся мотив в смысловой цепи может начинаться с АВАВАВ с 5'-3' цепи, а чередующийся мотив в антисмысловой цепи может начинаться с ВАВАВА с 3'-5' цепи в дуплексной области. В качестве еще одного примера, чередующийся мотив в смысловой цепи может начинаться с ААВВААВВ с 5'-3' цепи, а чередующийся мотив в антисмысловой цепи может начинаться с ВВААВВАА с 3'-5' цепи в дуплексной области, при этом происходит полное или частичное смещение порядков модификации между смысловой цепью и антисмысловой цепью.

Молекула дцРНК согласно изобретению может дополнительно включать по меньшей мере одну фосфоротиоатную или метилфосфонатную межнуклеотидную связь. Модификация фосфоротиоатной или метилфосфонатной межнуклеотидной связи может присутствовать на любом нуклеотиде смысловой цепи и/или антисмысловой цепи, в любом положении цепи. Например, модификация межнуклеотидной связи может присутствовать на каждом нуклеотиде смысловой или антисмысловой цепи; каждая модификация межнуклеотидной связи может присутствовать в чередующемся порядке на смысловой цепи или антисмысловой цепи; или смысловая цепь или антисмысловая цепь включает обе модификации межнуклеотидной связи в чередующемся порядке. Порядок чередования модификации межнуклеотидной связи на смысловой цепи может быть таким же или может отличаться от антисмысловой цепи, и порядок чередования модификации межнуклеотидной связи в смысловой цепи может быть смещен относительно порядка чередования модификации межнуклеотидной связи на антисмысловой цепи.

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК включает модификацию фосфоротиоатной или метилфосфонатной межнуклеотидной связи в области оверхенга. Например, область оверхенга включает два нуклеотида, имеющих фосфоротиоатную или метилфосфонатную межнуклеотидную связь между двумя нуклеотидами. Модификации межнуклеотидной связи также могут быть сделаны для соединения нуклеотидов в оверхенге с концевыми парами нуклеотидов в дуплексной области. Например, по меньшей мере 2, 3, 4 или все нуклеотиды в оверхенге могут быть связаны фосфоротиоатной или метилфосфонатной межнуклеотидной связью, и, необязательно, могут присутствовать дополнительные фосфоротиоатные или метилфосфонатные межнуклеотидные связи, связывающие нуклеотид в оверхенге со спаренным нуклеотидом, который находится рядом с нуклеотидом в оверхенге. Например, по меньшей мере две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи могут присутствовать между тремя концевыми нуклеотидами, два из которых находятся в оверхенге, а третий является спаренным нуклеотидом рядом с нуклеотидом в оверхенге. Предпочтительно эти три концевых нуклеотида могут присутствовать на 3'конце антисмысловой цепи.

В некоторых вариантах осуществления смысловая цепь молекулы дцРНК включает 1-10 блоков из двух-десяти фосфоротиоатных или метилфосфонатных межнуклеотидных связей, разделенных 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 фосфатными межнуклеотидными связями, где одна из фосфоротиоатных или метилфосфонатных межнуклеотидных связей расположена в любом положении олигонуклеотидной последовательности, и указанная смысловая цепь спарена с антисмысловой цепью, включающей любую комбинацию фосфоротиоатных, метилфосфонатных и фосфатных межнуклеотидныъ связей, или с антисмысловой цепью, включающей фосфоротиоатную или метилфосфонатную, или фосфатную связь.

В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь молекулы дцРНК включает два блока

- 41 048552 из двух фосфоротиоатных или метилфосфонатных межнуклеотидных связей, разделенных 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18 фосфатными межнуклеотидными связями, где одна из фосфоротиоатных или метилфосфонатных межнуклеотидных связей расположена в любом положении в олигонуклеотидной последовательности, и указанная антисмысловая цепь спарена со смысловой цепью, включающей любую комбинацию фосфоротиоатных, метилфосфонатных и фосфатных межнуклеотидных связей, или антисмысловой цепью, включающей фосфоротиоатную или метилфосфонатную, или фосфатную связь.

В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь молекулы дцРНК включает два блока из трех фосфоротиоатных или метилфосфонатных межнуклеотидных связей, разделенных 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 фосфатными межнуклеотидными связями, где одна из фосфоротиоатных или метилфосфонатных межнуклеотидных связей расположена в любом положении в олигонуклеотидной последовательности, и указанная антисмысловая цепь спарена со смысловой цепью, включающей любую комбинацию фосфоротиоатных, метилфосфонатных и фосфатных межнуклеотидных связей, или антисмысловой цепью, включающей фосфоротиоатную или метилфосфонатную, или фосфатную связь.

В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь молекулы дцРНК включает два блока из четырех фосфоротиоатных или метилфосфонатных межнуклеотидных связей, разделенных 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 фосфатными межнуклеотидными связями, где одна из фосфоротиоатных или метилфосфонатных межнуклеотидных связей расположена в любом положении олигонуклеотидной последовательности, и указанная антисмысловая цепь спарена со смысловой цепью, включающей любую комбинацию фосфоротиоатных, метилфосфонатных и фосфатных межнуклеотидных связей, или антисмысловой цепью, включающей фосфоротиоатную или метилфосфонатную, или фосфатную связь.

В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь молекулы дцРНК включает два блока из пяти фосфоротиоатных или метилфосфонатных межнуклеотидных связей, разделенных 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 фосфатными межнуклеотидными связями, где одна из фосфоротиоатных или метилфосфонатных межнуклеотидных связей расположена в любом положении в олигонуклеотидной последовательности, и указанная антисмысловая цепь спарена со смысловой цепью, включающей любую комбинацию фосфоротиоатных, метилфосфонатных и фосфатных межнуклеотидных связей, или антисмысловой цепью, включающей фосфоротиоатную или метилфосфонатную, или фосфатную связь.

В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь молекулы дцРНК включает два блока из шести фосфоротиоатных или метилфосфонатных межнуклеотидных связей, разделенных 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 фосфатными межнуклеотидными связями, где одна из фосфоротиоатных или метилфосфонатных межнуклеотидных связей расположена в любом положении в олигонуклеотидной последовательности, и указанная антисмысловая цепь спарена со смысловой цепью, включающей любую комбинацию фосфоротиоатных, метилфосфонатных и фосфатных межнуклеотидных связей, или антисмысловой цепью, включающей фосфоротиоатную или метилфосфонатную, или фосфатную связь.

В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь молекулы дцРНК включает два блока из семи фосфоротиоатных или метилфосфонатных межнуклеотидных связей, разделенных 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 фосфатными межнуклеотидными связями, где одна из фосфоротиоатных или метилфосфонатных межнуклеотидных связей разположена в любом положении в олигонуклеотидной последовательности, и указанная антисмысловая цепь спарена со смысловой цепью, включающей любую комбинацию фосфоротиоатных, метилфосфонатных и фосфатных межнуклеотидных связей, или антисмысловой цепью, включающей фосфоротиоатную или метилфосфонатную, или фосфатную связь.

В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь молекулы дцРНК включает два блока из восьми фосфоротиоатных или метилфосфонатных межнуклеотидных связей, разделенных 1, 2, 3, 4, 5 или 6 фосфатными межнуклеотидными связями, где одна из фосфоротиоатных или метилфосфонатных межнуклеотидных связей расположена в любом положении в олигонуклеотидной последовательности, и указанная антисмысловая цепь спарена со смысловой цепью, включающей любую комбинацию фосфоротиоатных, метилфосфонатных и фосфатных межнуклеотидных связей, или антисмысловой цепью, включающей фосфоротиоатную или метилфосфонатную, или фосфатную связь.

В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь молекулы дцРНК включает два блока из девяти фосфоротиоатных или метилфосфонатных межнуклеотидных связей, разделенных 1, 2, 3 или 4 фосфатными межнуклеотидными связями, где одна из фосфоротиоатных или метилфосфонатных межнуклеотидных связей расположена в любом положении в олигонуклеотидной последовательности, и указанная антисмысловая цепь спарена со смысловой цепью, включающей любую комбинацию фосфоротиоатных, метилфосфонатных и фосфатных межнуклеотидных связей, или антисмысловой цепью, включающей фосфоротиоатную или метилфосфонатную, или фосфатную связь.

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению дополнительно включает одну или более модификаций фосфоротиоатной или метилфосфонатной межнуклеотидной связи в пределах 1-10 концевых положений смысловой или антисмысловой цепи. Например, по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 нуклеотидов могут быть связаны фосфоротиоатной или метилфосфонатной межнуклеотидной связью на одном или обоих концах смысловой или антисмысловой цепи.

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению дополнительно

- 42 048552 включает одну или более модификаций фосфоротиоатных или метилфосфонатных межнуклеотидных связей в пределах 1-10 внутренней области дуплекса каждой смысловой или антисмысловой цепи. Например, по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 нуклеотидов могут быть связаны фосфоротиоатной метилфосфонатной межнуклеотидной связью в положениях 8-16 дуплексной области, считая от 5'-конца смысловой цепи; молекула дцРНК необязательно может дополнительно включать одну или более модификаций фосфоротиоатных или метилфосфонатных межнуклеотидных связей в пределах 1-10 концевых положений.

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению дополнительно включает от одной до пяти модификаций фосфоротиоатной или метилфосфонатной межнуклеотидной связи в положениях 1-5 и от одной до пяти модификаций фосфоротиоатной или метилфосфонатной межнуклеотидной связи в положениях 18-23 смысловой цепи (считая от 5'-конца), и от одной до пяти модификаций фосфоротиоатной или метилфосфонатной межнуклеотидной связи в положениях 1 и 2 и от одной до пяти в пределах положений 18-23 антисмысловой цепи (считая от 5'-конца).

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению дополнительно включает одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1-5 и одну модификацию фосфоротиоатной или метилфосфонатной межнуклеотидной связи в положениях 18-23 смысловой цепи (считая от 5'-конца), и одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1 и 2 и две модификации фосфоротиоатной или метилфосфонатной межнуклеотидной связи в положениях 18-23 антисмысловой цепи (считая от 5'-конца).

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению дополнительно включает две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1-5 и одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 18-23 смысловой цепи (считая от 5'конца), и одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1 и 2 и две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 18-23 антисмысловой цепи (считая от 5'-конца).

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению дополнительно включает две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1-5 и две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 18-23 смысловой цепи (считая от 5'конца), и одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1 и 2 и две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 18-23 антисмысловой цепи (считая от 5'-конца).

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению дополнительно включает две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1-5 и две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 18-23 смысловой цепи (считая от 5'конца), и одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях в положениях 1 и 2 и одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 18-23 антисмысловой цепи (считая от 5'-конца).

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению дополнительно включает одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1-5 и одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 18-23 смысловой цепи (считая от 5'конца), и две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 18-23 смысловой цепи модификации межнуклеотидной связи в положениях 1 и 2 и две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 18-23 антисмысловой цепи (считая от 5'-конца).

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению дополнительно включает одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1-5 и одну в положениях 18-23 смысловой цепи (считая от 5'-конца), и две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях положения 1 и 2 и одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 18-23 антисмысловой цепи (считая от 5'-конца).

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению дополнительно включает одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1-5 (считая от 5'конца) смысловой цепи и две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1 и 2, и одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 18-23 антисмысловой цепи (считая от 5'-конца).

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению дополнительно включает две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1-5 (считая от 5'конца) смысловой цепи и одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1 и 2, и две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 18-23 антисмысловой цепи (считая от 5'-конца).

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению дополнительно включает две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1-5 и одну в положениях 18-23 смысловой цепи (считая от 5'-конца), и две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1 и 2 и одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в по

- 43 048552 ложениях 18-23 антисмысловой цепи (считая от 5'-конца).

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению дополнительно включает две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1-5 и одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 18-23 смысловой цепи (считая от 5'конца), и две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1 и 2 и две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 18-23 антисмысловой цепи (считая от 5'конца).

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению дополнительно включает две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1-5 и одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 18-23 смысловой цепи (считая от 5'конца), и одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1 и 2 и две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 18-23 антисмысловой цепи (считая от 5'-конца).

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению дополнительно включает две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1 и 2 и две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 20 и 21 смысловой цепи (считая от 5'конца), и одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положении 1 и одну в положении 21 антисмысловой цепи (считая от 5'-конца).

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению дополнительно включает одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положении 1 и одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положении 21 смысловой цепи (считая от 5'-конца), и две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1 и 2 и две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 20 и 21 антисмысловой цепи (считая от 5'конца).

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению дополнительно включает две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1 и 2 и две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 21 и 22 смысловой цепи (считая от 5'конца), и одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положении 1 и одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положении 21 антисмысловой цепи (считая от 5'конца).

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению дополнительно включает одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положении 1 и одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положении 21 смысловой цепи (считая от 5'-конца), и две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1 и 2 и две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 21 и 22 антисмысловой цепи (считая от 5'конца).

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению дополнительно включает две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1 и 2 и две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 22 и 23 смысловой цепи (считая от 5'конца), и одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положении 1 и одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положении 21 антисмысловой цепи (считая от 5'конца).

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению дополнительно включает одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положении 1 и одну модификацию фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положении 21 смысловой цепи (считая от 5'-конца), и две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 1 и 2 и две модификации фосфоротиоатной межнуклеотидной связи в положениях 23 и 23 антисмысловой цепи (считая от 5'конца).

В некоторых вариантах осуществления соединение согласно изобретению включает паттерн хиральных центров скелета. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает по меньшей мере 5 межнуклеотидных связей в Sp-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает по меньшей мере 6 межнуклеотидных связей в Sp-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает по меньшей мере 7 межнуклеотидных связей в Sp-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает по меньшей мере 8 межнуклеотидных связей в Sp-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает по меньшей мере 9 межнуклеотидных связей в Sp-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает по меньшей мере 10 межнуклеотидных связей в Sp-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает по меньшей мере 11 межнуклеотидных связей в Spконфигурации. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает по меньшей мере 12 межнуклеотидных связей в Sp-конфигурации. В некоторых вариантах осущест

- 44 048552 вления общий паттерн основных хиральных центров включает по меньшей мере 13 межнуклеотидных связей в Sp-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает по меньшей мере 14 межнуклеотидных связей в Sp-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает по меньшей мере 15 межнуклеотидных связей в Sp-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает по меньшей мере 16 межнуклеотидных связей в Sp-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает по меньшей мере 17 межнуклеотидных связей в Sp-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает по меньшей мере 18 межнуклеотидных связей в Sp-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает по меньшей мере 19 межнуклеотидных связей в Sp-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает не больше 8 межнуклеотидных связей в Rp-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает не больше 7 межнуклеотидных связей в Rp-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает не больше 6 межнуклеотидных связей в Rp-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает не больше 5 межнуклеотидных связей в Rp-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает не больше 4 межнуклеотидных связей в Rp-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает не больше 3 межнуклеотидных связей в Rp-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает не больше 2 межнуклеотидных связей в Rp-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает не больше 1 межнуклеотидной связи в Rp-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает не больше 8 межнуклеотидных связей, которые не являются хиральными (в качестве неограничивающего примера, фосфодиэфирных). В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает не больше 7 межнуклеотидных связей, которые не являются хиральными. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает не больше 6 межнуклеотидных связей, которые не являются хиральными. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает не больше 5 межнуклеотидных связей, которые не являются хиральными. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает не больше 4 межнуклеотидных связей, которые не являются хиральными. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает не больше 3 межнуклеотидных связей, которые не являются хиральными. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает не больше 2 межнуклеотидных связей, которые не являются хиральными. В некоторых вариантах осуществления обычная структура хиральных центров скелета включает не больше 1 межнуклеотидной связи, которая не является хиральной. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает по меньшей мере 10 межнуклеотидных связей в Sp-конфигурации и не больше 8 межнуклеотидных связей, которые не являются хиральными. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает по меньшей мере 11 межнуклеотидных связей в Sp-конфигурации и не больше 7 межнуклеотидных связей, которые не являются хиральными. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает по меньшей мере 12 межнуклеотидных связей в Sp-конфигурации и не больше 6 межнуклеотидных связей, которые не являются хиральными. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает по меньшей мере 13 межнуклеотидных связей в Sp-конфигурации и не больше 6 межнуклеотидных связей, которые не являются хиральными. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает по меньшей мере 14 межнуклеотидных связей в Sp-конфигурации и не больше 5 межнуклеотидных связей, которые не являются хиральными. В некоторых вариантах осуществления общий паттерн хиральных центров скелета включает по меньшей мере 15 межнуклеотидных связей в Sp-конфигурации и не больше 4 межнуклеотидных связей, которые не являются хиральными. В некоторых вариантах осуществления межнуклеотидные связи в Sp-конфигурации необязательно являются смежными или несмежными. В некоторых вариантах осуществления межнуклеотидные связи в Rp-конфигурации необязательно являются смежными или несмежными. В некоторых вариантах осуществления межнуклеотидные связи, которые не являются хиральными, необязательно являются смежными или несмежными.

В некоторых вариантах осуществления соединение согласно изобретению включает блок, который представляет собой стереохимический блок. В некоторых вариантах осуществления блок представляет собой Rp-блок в том смысле, что каждая межнуклеотидная связь блока представляет собой Rp. В некоторых вариантах осуществления 5'-блок представляет собой Rp-блок. В некоторых вариантах осуществления 3'-блок представляет собой Rp-блок. В некоторых вариантах осуществления блок представляет собой Sp-блок в том смысле, что каждая межнуклеотидная связь блока представляет собой Sp-блок. В некоторых вариантах осуществления 5'-блок представляет собой Sp-блок. В некоторых вариантах осуществления 3'-блок представляет собой Sp-блок. В некоторых вариантах осуществления предложенные олиго

- 45 048552 нуклеотиды включают как Rp-блоки, так и Sp-блоки. В некоторых вариантах осуществления предложенные олигонуклеотиды включают один или больше Rp-блоков, но не включают Sp-блоки. В некоторых вариантах осуществления предложенные олигонуклеотиды включают один или больше Sp-блоков, но не включают Rp-блоки. В некоторых вариантах осуществления предложенные олигонуклеотиды включают один или больше РО-блоков, в которых каждая межнуклеотидная связь представляет собой природную фосфатную связь.

В некоторых вариантах осуществления соединение согласно изобретению включает 5'-блок, который представляет собой Sp-блок, в котором каждый остаток сахара включает 2'-F модификацию. В некоторых вариантах осуществления 5'-блок представляет собой Sp-блок, в котором каждая межнуклеотидная связь представляет собой модифицированную межнуклеотидную связь, а каждый остаток сахара включает 2'-F модификацию. В некоторых вариантах осуществления 5'-блок представляет собой Sp-блок, в котором каждая межнуклеотидная связь представляет собой фосфоротиоатную связь, а каждый остаток сахара включает 2'-F модификацию. В некоторых вариантах осуществления 5'-блок включает 4 или более нуклеозидных звеньев. В некоторых вариантах осуществления 5'-блок включает 5 или более нуклеозидных звеньев. В некоторых вариантах осуществления 5'-блок включает 6 или более нуклеозидных звеньев. В некоторых вариантах осуществления 5'-блок включает 7 или более нуклеозидных звеньев. В некоторых вариантах осуществления 3'-блок представляет собой Sp-блок, в котором каждый остаток сахара включает 2'-F модификацию. В некоторых вариантах осуществления 3'-блок представляет собой Sp-блок, в котором каждая межнуклеотидная связь представляет собой модифицированную межнуклеотидную связь, а каждый остаток сахара включает 2'-F модификацию. В некоторых вариантах осуществления 3'блок представляет собой Sp-блок, в котором каждая межнуклеотидная связь представляет собой фосфоротиоатную связь, а каждый остаток сахара включает 2'-F модификацию. В некоторых вариантах осуществления 3'-блок включает 4 или более нуклеозидных звеньев. В некоторых вариантах осуществления 3'блок включает 5 или более нуклеозидных звеньев. В некоторых вариантах осуществления 3'-блок включает 6 или более нуклеозидных звеньев. В некоторых вариантах осуществления 3'-блок включает 7 или более нуклеозидных звеньев.

В некоторых вариантах осуществления соединение согласно изобретению включает тип нуклеозида в области или олигонуклеотид, за которым следует определенный тип межнуклеотидной связи, например, природная фосфатная связь, модифицированная межнуклеотидная связь, хиральная межнуклеотидная Rp-связь, хиральная межнуклеотидная Sp-связь и т.д. В некоторых вариантах осуществления после А следует Sp. В некоторых вариантах осуществления после А следует Rp. В некоторых вариантах осуществления после А следует природная фосфатная связь (РО). В некоторых вариантах осуществления после U следует Sp. В некоторых вариантах осуществления после U следует Rp. В некоторых вариантах осуществления после U следует природная фосфатная связь (РО). В некоторых вариантах осуществления после С следует Sp. В некоторых вариантах осуществления после С следует Rp. В некоторых вариантах осуществления после С следует природная фосфатная связь (РО). В некоторых вариантах осуществления после G следует Sp. В некоторых вариантах осуществления после G следует Rp. В некоторых вариантах осуществления после G следует естественная фосфатная связь (РО). В некоторых вариантах осуществления после С и U следует Sp. В некоторых вариантах осуществления после С и U следует Rp. В некоторых вариантах осуществления после С и U следует естественная фосфатная связь (РО). В некоторых вариантах осуществления после А и G следует Sp. В некоторых вариантах осуществления после А и G следует Rp.

В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь содержит фосфоротиоатные межнуклеотидные связи между положениями нуклеотидов 21 и 22 и между положениями нуклеотидов 22 и 23, где антисмысловая цепь содержит по меньшей мере одну термодестабилизирующую модификацию дуплекса, расположенную в затравочной области антисмысловой цепи (т.е. в положениях 2-9 на 5'-конце антисмысловой цепи), и где дцРНК необязательно дополнительно содержит по меньшей мере одну (например, одну, две, три, четыре, пять, шесть, семь или все восемь) из следующих характеристик: (i) антисмысловая цепь включает 2, 3, 4, 5 или 6 2'-фтормодификаций; (ii) антисмысловая цепь включает 3, 4 или 5 фосфоротиоатных межнуклеотидных связей; (iii) смысловая цепь конъюгирована с лигандом; (iv) смысловая цепь включает 2, 3, 4 или 5 2'-фтормодификаций; (v) смысловая цепь включает 1, 2, 3, 4 или 5 фосфоротиоатных межнуклеотидных связей; (vi) дцРНК включает по меньшей мере четыре 2'фтормодификации; (vii) дцРНК включает дуплексную область длиной 12-40 пар нуклеотидов; и (viii) дцРНК имеет тупой конец на 5'-конце антисмысловой цепи.

В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь включает фосфоротиоатные межнуклеотидные связи между нуклеотидами в положениях 1 и 2, между нуклеотидами в положениях 2 и 3, между нуклеотидами в положениях 21 и 22 и между нуклеотидами в положениях 22 и 23, где антисмысловая цепь содержит по меньшей мере одну термически дестабилизирующую модификацию дуплекса, расположенную в затравочной области антисмысловой цепи (т.е. в положениях 2-9 на 5'-конце антисмысловой цепи), и где дцРНК необязательно дополнительно обладает по меньшей мере одной (например, одной, двумя, тремя, четырьмя, пятью, шестью, семью или всеми восемью) из следующих характеристик: (i) антисмысловая цепь включает 2, 3, 4, 5 или 6 2'-фтормодификаций; (ii) смысловая цепь конъюгирована с лигандом; (iii) смысловая цепь включает 2, 3, 4 или 5 2'-фтормодификаций; (iv) смысловая цепь

- 46 048552 включает 1, 2, 3, 4 или 5 фосфоротиоатных межнуклеотидных связей; (v) дцРНК включает по меньшей мере четыре 2'-фтормодификации; (vi) дцРНК включает дуплексную область длиной 12-40 пар нуклеотидов; (vii) дцРНК включает дуплексную область длиной 12-40 пар нуклеотидов; и (viii) дцРНК имеет тупой конец на 5'-конце антисмысловой цепи.

В некоторых вариантах осуществления смысловая цепь включает фосфоротиоатные межнуклеотидные связи между положениями нуклеотидов 1 и 2 и между положениями нуклеотидов 2 и 3, где антисмысловая цепь содержит по меньшей мере одну термодестабилизирующую модификацию дуплекса, расположенную в затравочной области антисмысловой цепи (т.е. в положениях 2-9 на 5'-конце антисмысловой цепи), и где дцРНК необязательно дополнительно содержит по меньшей мере одну (например, одну, две, три, четыре, пять, шесть, семь или все восемь) из следующих характеристик: (i) антисмысловая цепь включает 2, 3, 4, 5 или 6 2'-фтормодификаций; (ii) антисмысловая цепь включает 1, 2, 3, 4 или 5 фосфоротиоатных межнуклеотидных связей; (iii) смысловая цепь конъюгирована с лигандом; (iv) смысловая цепь включает 2, 3, 4 или 5 2'-фтормодификаций; (v) смысловая цепь включает 3, 4 или 5 фосфоротиоатных межнуклеотидных связей; (vi) дцРНК включает по меньшей мере четыре 2'фтормодификации; (vii) дцРНК включает дуплексную область длиной 12-40 пар нуклеотидов; и (viii) дцРНК имеет тупой конец на 5'-конце антисмысловой цепи.

В некоторых вариантах осуществления смысловая цепь включает фосфоротиоатные межнуклеотидные связи между положениями нуклеотидов 1 и 2 и между положениями нуклеотидов 2 и 3, антисмысловая цепь включает фосфоротиоатные межнуклеотидные связи между положениями нуклеотидов 1 и 2, между положениями нуклеотидов 2 и 3, между положениями нуклеотидов 21 и 22, и между положениями нуклеотидов 22 и 23, где антисмысловая цепь содержит по меньшей мере одну термодестабилизирующую модификацию дуплекса, расположенную в затравочной области антисмысловой цепи (т.е. в положениях 2-9 на 5'-конце антисмысловая цепь), и где дцРНК необязательно дополнительно обладает по меньшей мере одной (например, одной, двумя, тремя, четырьмя, пятью, шестью или всеми семью) из следующих характеристик: (i) антисмысловая цепь включает 2, 3, 4, 5 или 6 2'-фтормодификаций; (ii) смысловая цепь конъюгирована с лигандом; (iii) смысловая цепь включает 2, 3, 4 или 5 2'фтормодификаций; (iv) смысловая цепь включает 3, 4 или 5 фосфоротиоатных межнуклеотидных связей; (v) дцРНК включает по меньшей мере четыре 2'-фтормодификации; (vi) дцРНК включает дуплексную область длиной 12-40 пар нуклеотидов; и (vii) дцРНК имеет тупой конец на 5'-конце антисмысловой цепи.

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению включает некомплементарный мишени нуклеотид(ы) в пределах дуплекса или их комбинации. Некомплементарный нуклеотид может присутствовать в области оверхенга или области дуплекса. Пара оснований может быть ранжирована по своей склонности вызывать диссоциацию или плавление (например, по свободной энергии ассоциации или диссоциации конкретной пары; наиболее простой подход состоит в проверке пар на индивидуальной основе, хотя также может использоваться анализ следующего соседа или аналогичный анализ). С точки зрения стимуляции диссоциации: A:U предпочтительнее G:C; G:U предпочтительнее G:C; и Т:С предпочтительнее G:C (1=инозин). Некомплементарные нуклеотиды, например, неканонические или отличные от канонических пары (как описано в другой части настоящего документа), предпочтительнее канонических (А:Т, A:U, G:C) пар; и пары, которые включают универсальное основание, предпочтительнее канонических пар.

В одном варианте осуществления молекула дцРНК согласно изобретению включает по меньшей мере одну из первых 1, 2, 3, 4 или 5 пар оснований в дуплексных областях от 5'-конца антисмысловой цепи, которые могут быть независимо выбраны из группы: A:U, G:U, I:C, и некомплементарные пары, например, неканонические или отличные от канонических пары, или пары, которые включают универсальное основание, что способствует диссоциации антисмысловой цепи на 5'-конце дуплекса.

В одном варианте осуществления нуклеотид в положении 1 в дуплексной области от 5'-конца антисмысловой цепи выбран из группы, состоящей из A, dA, dU, U и dT. В альтернативе по меньшей мере одна из первых 1, 2 или 3 пар оснований в дуплексной области от 5'-конца антисмысловой цепи представляет собой пару оснований AU. Например, первая пара оснований в дуплексной области от 5'-конца антисмысловой цепи представляет собой пару оснований AU.

Было обнаружено, что введение 4'-модифицированного или 5'-модифицированного нуклеотида на 3'-конец фосфодиэфирной (РО), фосфоротиоатной (PS) или фосфородитиоатной (PS2) связи динуклеотида в любом положении одноцепочечного или двухцепочечного олигонуклеотида может оказывать стерический эффект в отношении межнуклеотидной связи и, следовательно, защищать или стабилизировать ее от воздействия нуклеаз.

В некоторых вариантах осуществления 5'-модифицированный нуклеозид вводят на 3'-конец динуклеотида в любом положении одноцепочечной или двухцепочечной миРНК. Например, 5'-алкилированный нуклеозид может быть введен на 3'-конец динуклеотида в любое положение одноцепочечной или двухцепочечной миРНК. Алкильная группа в 5'-положении рибозного сахара может быть рацемическим или хирально чистым R- или S-изомером. Примером 5'-алкилированного нуклеозида является 5'метилнуклеозид. 5'-метил может быть либо рацемическим, либо хирально чистым R- или S-изомером.

- 47 048552

В некоторых вариантах осуществления 4'-модифицированный нуклеозид вводят на З'-конец динуклеотида в любом положении одноцепочечной или двухцепочечной миРНК. Например, 4'-алкилированный нуклеозид может быть введен на 3'-конец динуклеотида в любое положение одноцепочечной или двухцепочечной миРНК. Алкильная группа в 4'-положении рибозного сахара может быть рацемическим или хирально чистым R- или S-изомером. Примером 4'-алкилированного нуклеозидп является 4'метилнуклеозид. 4'-метил может быть либо рацемическим, либо хирально чистым R- или S-изомером. В альтернативе 4'-О-алкилированный нуклеозид может быть введен на 3'-конец динуклеотида в любое положение одноцепочечной или двухцепочечной миРНК. 4'-О-алкил рибозного сахара может быть рацемическим или хирально чистым R- или S-изомером. Примером 4'-О-алкилированного нуклеозида является 4'-О-метилнуклеозид. 4'-О-метил может быть либо рацемическим, либо хирально чистым R- или Sизомером.

В некоторых вариантах осуществления 5'-алкилированный нуклеозид вводят в любое положение смысловой или антисмысловой цепи дцРНК, при этом такая модификация сохраняет или улучшает эффективность дцРНК. 5'-алкил может быть либо рацемическим, либо хирально чистым R- или Sизомером. Примером 5'-алкилированного нуклеозида является 5'-метилнуклеозид. 5'-метил может быть либо рацемическим, либо хирально чистым R- или S-изомером.

В некоторых вариантах осуществления 4'-алкилированный нуклеозид вводят в любое положение смысловой или антисмысловой цепи дцРНК, при этом такая модификация сохраняет или улучшает эффективность дцРНК. 4'-алкил может быть либо рацемическим, либо хирально чистым R- или Sизомером. Примером 4'-алкилированного нуклеозида является 4'-метилнуклеозид. 4'-метил может быть либо рацемическим, либо хирально чистым R- или S-изомером.

В некоторых вариантах осуществления 4'-О-алкилированный нуклеозид вводят в любое положение смысловой или антисмысловой цепи дцРНК, при этом такая модификация сохраняет или улучшает эффективность дцРНК. 5'-алкил может быть либо рацемическим, либо хирально чистым R- или Sизомером. Примером 4'-О-алкилированного нуклеозида является 4'-О-метилнуклеозид. 4'-О-метил может быть либо рацемическим, либо хирально чистым R- или S-изомером.

В некоторых вариантах осуществления молекула дцРНК согласно изобретению может включать связи 2'-5' (с 2'-Н, 2'-ОН и 2'-ОМе и с Р=О или P=S). Например, модификации 2'-5'-связей можно использовать для повышения устойчивости к нуклеазам или для ингибирования связывания смысловой цепи с антисмысловой цепью, или их можно использовать на 5'-конце смысловой цепи, чтобы препятствовать активации смысловой цепи посредством RISC.

В другом варианте осуществления молекула дцРНК согласно изобретению может включать Lcaxapa (например, L-рибозу, L-арабинозу с 2'-Н, 2'-ОН и 2'-ОМе). Например, такие модификации с Lсахарами можно использовать для повышения устойчивости к нуклеазам или для ингибирования связывания смысловой цепи с антисмысловой цепью, или их можно использовать на 5'-конце смысловой цепи, чтобы препятствовать активации смысловой цепи посредством RISC.

В различных публикациях описаны мультимерные миРНК, которые можно использовать с дцРНК согласно настоящему изобретению. Такие публикации включают WO 2007/091269, US 7858769, WO 2010/141511, WO 2007/117686, WO 2009/014887 и WO 2011/031520, которые настоящим полностью включены в настоящий документ.

Как более подробно описано ниже, РНКи средство, которое содержит конъюгирования одной или более углеводных молекул с РНКи средством, может оптимизировать одно или более свойств РНКи средства. Во многих случаях углеводная молекула будет присоединена к модифицированной субъединице РНКи средства. Например, рибозный сахар одной или более рибонуклеотидных субъединиц дцРНК средства может быть заменен другим фрагментом, например неуглеводным (предпочтительно циклическим) носителем, к которому присоединен углеводный лиганд. Рибонуклеотидная субъединица, в которой был таким способом заменен сахар рибоза, именуется в настоящем документе субъединицей с модификацией путем замены рибозы (RRMS). Циклический носитель может быть карбоциклической кольцевой системой, т.е. все атомы в кольце являются атомами углерода, или гетероциклической кольцевой системой, т.е. один или больше атомов в кольце могут быть гетероатом, например, азотом, кислородом, серой. Циклический носитель может быть моноциклической кольцевой системой или может содержать два или больше колец, например, конденсированных колец. Циклический носитель может быть полностью насыщенной кольцевой системой или может содержать одну или больше двойных связей.

Лиганд может быть присоединен к полинуклеотиду при посредстве носителя. Носители включают: (i) по меньшей мере одну точку присоединения к скелету, предпочтительно две точки присоединения к скелету и (ii) по меньшей мере одну точку привязывания. Точка присоединения к скелету при использовании в настоящем документе относится к функциональной группе, например гидроксильной группе, или, как правило, связи, доступной и подходящей для включения носителя в скелет, например фосфатный или модифицированный фосфатный, например серосодержащий, скелет рибонуклеиновой кислоты. Точка привязывания (ТАР) в некоторых вариантах осуществления относится к атому в составляющем кольце циклического носителя, например, атому углерода или гетероатому (отличному от атома, который обеспечивает точку присоединения к скелету), который присоединяет выбранную моле

- 48 048552 кулу. Такая молекула может быть, например, углеводом, например моносахаридом, дисахаридом, трисахаридом, тетрасахаридом, олигосахаридом и полисахаридом. Необязательно выбранная молекула соединена промежуточной связью с циклическим носителем. Таким образом, циклический носитель часто будет включать функциональную группу, например аминогруппу, или, как правило, предоставлять связь, подходящую для включения или присоединения другого химического соединения, например лиганда, к составляющему кольцу.

РНКи средства могут быть конъюгированы с лигандом посредством носителя, где носитель может быть циклической группой или ациклической группой; предпочтительно циклическая группа выбрана из пирролидинила, пиразолинила, пиразолидинила, имидазолинила, имидазолидинила, пиперидинила, пиперазинила, [1,3]диоксолана, оксазолидинила, изоксазолидинила, морфолинила, тиазолидинила, изотиазолидинила, хиноксалинила, пиридазинонила, тетрагидрофурила и декалина; предпочтительно ациклическая группа выбрана из сериноловой цепи или диэтаноламиновой цепи.

В некоторых конкретных вариантах осуществления РНКи средство для применения в способах согласно настоящему изобретению представляет собой средство, выбранное из группы средств, перечисленных в любой из табл. 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 21, 24, 25, 27-30, 32 и 33. Такие средства могут дополнительно включать лиганд.

IV. Молекулы иРНК, конъюгированные с лигандами.

Другая модификация РНК в иРНК согласно изобретению включает химическое связывание с иРНК одного или больше лигандов, молекул или конъюгатов, которые улучшают активность, клеточное распределение или клеточный захват иРНК, например, в клетку. Такие молекулы включают, без ограничения перечисленными, липидные молекулы, такие как молекулу холестерина (Letsinger et al., Proc. Natl. Acid. Sci. USA, 1989, 86: 6553-6556), холевую кислоту (Manoharan et al., Biorg. Med. Chem. Let., 1994, 4:1053-1060), тиоэфир, например берил^-тритилтиол (Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660:306-309; Manoharan et al. al., Biorg. Med. Chem. Let., 1993, 3:2765-2770), тиохолестерин (Oberhauser et al., Nucl.Acids Res., 1992, 20:533-538), алифатическую цепь, например, додекандиоловые или ундецильные остатки (Saison-Behmoaras et al., EMBO J, 1991, 10:1111-1118; Kabanov et al., FEBS Lett, 1990, 259:327-330; Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75:49-54), фосфолипид, например, ди-гексадецил-рацглицерин илитриэтиламмоний-1,2-ди-О-гексадецил-рац-глицеро-3-фосфонат (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995), 36:3651-3654; Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18:3777-3783), полиаминовую или полиэтиленгликолевую цепь (Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14:969-973) или адамантануксусную кислоту (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651-3654), пальмитильную группу (Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264:229-237), или молекулу октадециламина или гексиламинокарбонилоксихолестерина (Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther, 1996, 277:923-937).

В некоторых вариантах осуществления лиганд изменяет распределение, таргетинг или время жизни иРНК средства, в которое он включен. В некоторых вариантах осуществления лиганд обеспечивает повышенную аффинность к выбранной мишени, например, молекуле, клетке или типу клеток, компартменту, например, клеточному или органному компартменту, ткани, органу или области тела, например, по сравнению с соединением, в котором не содержится такой лиганд. Типичные лиганды не будут участвовать в спаривании дуплекса в дуплексной нуклеиновой кислоте.

Лиганды могут включать природное вещество, такое как белок (например, человеческий сывороточный альбумин (ЧСА), липопротеин низкой плотности (ЛПНП) или глобулин); углевод (например, декстран, пуллулан, хитин, хитозан, инулин, циклодекстрин или гиалуроновую кислоту); или липид. Лиганд также может быть рекомбинантной или синтетической молекулой, такой как синтетический полимер, например, синтетическая полиаминокислота. Примеры полиаминокислот включают полиаминокислоту, которая представляет собой полилизин (PLL), поли-Ь-аспарагиновую кислоту, поли-Ь-глутаминовую кислоту, сополимер стирола и малеинового ангидрида, сополимер поли^-лактида-ко-гликолида), сополимер дивинилового эфира и малеинового ангидрида, сополимер №(2-гидроксипропил)метакриламида (ГГГМА), полиэтиленгликоль (ПЭГ), поливиниловый спирт (ПВС), полиуретан, поли(2этилакриловую кислоту), полимеры N-изопропилакриламида или полифосфазин. Примеры полиаминов включают: полиэтиленимин, полилизин (PLL), спермин, спермидин, полиамин, псевдопептид-полиамин, пептидомиметик полиамин, дендримерный полиамин, аргинин, амидин, протамин, катионный липид, катионный порфирин, четвертичную соль полиамина или а-спиральный пептид.

Лиганды также могут включать направляющие группы, например вещество, направленно взаимодействующее с клеткой или тканью, например, лектин, гликопротеин, липид или белок, например, антитело, которое связывается с определенным типом клеток, таким как клетка почки. Направляющей группой может быть тиротропин, меланотропин, лектин, гликопротеин, поверхностно-активный белок А, углевод муцин, многовалентная лактоза, многовалентная галактоза, N-ацетилгалактозамин, N-ацетилглюкозамин, многовалентная манноза, многовалентная фукоза, гликозилированные полиаминокислоты, многовалентная галактоза, трансферрин, бисфосфонат, полиглутамат, полиаспартат, липид, холестерин, стероид, желчная кислота, фолат, витамин В12, биотин или RGD-пептид или миметик RGD-пептида. В некоторых вариантах осуществления лиганд представляет собой многовалентную галактозу, например N-ацетилгалактозамин.

- 49 048552

Другие примеры лигандов включают красители, интеркаляторы (например, акридины), сшивающие агенты (например, псорален, митомицин С), порфирины (ТРРС4, тексафирин, сапфирин), полициклические ароматические углеводороды (например, феназин, дигидрофеназин), искусственные эндонуклеазы (например, ЭДТА), липофильные молекулы, например, холестерин, холевую кислоту, адамантануксусную кислоту, 1-пиренмасляную кислоту, дигидротестостерон, 1,3-бис-О(гексадецил)глицерин, геранилоксигексильную группу, гексадецилглицерин, борнеол, ментол, 1,3-пропандиол, гептадецильную группу, пальмитиновую кислоту, миристиновую кислоту, 03-(олеоил)литохолевую кислоту, О3(олеоил)холеновую кислоту, диметокситритил или феноксазин) и конъюгаты пептидов (например, пептид антеннапедии, Tat-пептид), алкилирующие агенты, фосфат, амино, меркапто, ПЭГ (например, ПЭГ40К), МПЭГ, [МПЭГ]2, полиамино, алкил, замещенный алкил, радиоактивно меченые маркеры, ферменты, гаптены (например, биотин), облегчающие транспорт/всасывание (например, аспирин, витамин Е, фолиевую кислоту), синтетические рибонуклеазы (например, имидазол, бисимидазол, гистамин, имидазольные кластеры, конъюгаты акридин-имидазола, Eu3⁺ комплексы тетраазамакроциклов), динитрофенил, HRP или АР.

Лиганды могут быть белками, например, гликопротеинами или пептидами, например, молекулами, обладающими специфическим сродством к колиганду, или антителами, например, антителом, которое связывается с определенным типом клеток, таким как раковая клетка, эндотелиальная клетка или костная клетка. Лиганды могут также включать гормоны и рецепторы гормонов. Они также могут включать непептидные соединения, такие как липиды, лектины, углеводы, витамины, кофакторы, многовалентную лактозу, многовалентную галактозу, N-ацетилгалактозамин, N-ацетилглюкозамин, многовалентную маннозу или многовалентную фукозу. Лиганд может быть, например, липополисахаридом, активатором р38 MAP киназы или активатором NF-kB.

Лиганд может быть веществом, например лекарственным средством, которое может увеличивать захват иРНК средства клеткой, например, путем нарушения цитоскелета клетки, например, путем нарушения клеточных микротрубочек, микрофиламентов или промежуточных филаментов. Лекарственным средством может быть, например, таксон, винкристин, винбластин, цитохалазин, нокодазол, джасплакинолид, латрункулин А, фаллоидин, свинхолид А, инданоцин или миосервин.

В некоторых вариантах осуществления лиганд, присоединенный к иРНК, как описано в настоящем документе, действует как модулятор фармакокинетики (модулятор ФК). Модуляторы ФК включают липофилы, желчные кислоты, стероиды, аналоги фосфолипидов, пептиды, белоксвязывающие средства, ПЭГ, витамины и т.д. Примеры модуляторов ФК включают, без ограничения перечисленными, холестерин, жирные кислоты, холевую кислоту, литохолевую кислоту, диалкилглицериды, диацилглицериды, фосфолипиды, сфинголипиды, напроксен, ибупрофен, витамин Е, биотин и т.д. Также известно, что олигонуклеотиды, которые содержат некоторое количество фосфоротиоатных связей, связываются с белком сыворотки, таким образом, короткие олигонуклеотиды, например, олигонуклеотиды приблизительно из 5 оснований, 10 оснований, 15 оснований или 20 оснований, включающие множество фосфоротиоатных связей в скелете, также могут применяться в настоящем изобретении в качестве лигандов (например, в качестве ФК модулирующих лигандов). Кроме того, аптамеры, которые связывают компоненты сыворотки (например, белки сыворотки), также подходят для применения в качестве ФК модулирующих лигандов в вариантах осуществления, описанных в настоящем документе.

Лиганд-конъюгированные иРНК согласно изобретению могут быть синтезированы при использовании олигонуклеотида, который несет боковую реакционноспособную функциональную группу, например, полученную в результате присоединения линкерной молекулы к олигонуклеотиду (как описано ниже). Такой реакционноспособный олигонуклеотид может непосредственно реагировать с доступными в продаже лигандами, лигандами, которые синтезированы с любой из различных защитных групп, или лигандами, к которым присоединен линкерный фрагмент.

Олигонуклеотиды, используемые в конъюгатах согласно изобретению, могут быть легко и рутинно получены с помощью хорошо известного метода твердофазного синтеза. Оборудование для такого синтеза продают несколько поставщиков, включая, например, Applied Biosystems® (Foster City, Calif.). Любые другие способы такого синтеза, известные из уровня техники, могут использоваться дополнительно или в качестве альтернативы. Также известно применение аналогичных методов для получения других олигонуклеотидов, таких как фосфоротиоаты и алкилированные производные.

В лиганд-конъюгированных олигонуклеотидах и несущих молекулу лиганда сиквенс-специфических связанных нуклеозидах согласно настоящему изобретению олигонуклеотиды и олигонуклеозиды могут быть собраны на подходящем ДНК-синтезаторе с использованием стандартных предшественников нуклеотидов или нуклеозидов, или предшественников конъюгатов нуклеотидов или нуклеозидов, которые уже несут линкерный фрагмент, предшественников лиганд-нуклеотид или нуклеозид-конъюгатов, которые уже несут молекулу лиганда, или ненуклеозидных лиганд-несущих структурных блоков.

При использовании предшественников нуклеотид-конъюгатов, которые уже несут линкерный фрагмент, обычно завершают синтез сиквенс-специфичных связанных нуклеозидов, после чего молекулу лиганда подвергают реакции с линкерным фрагментом с образованием лиганд-конъюгированного олиго

- 50 048552 нуклеотида. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотиды или связанные нуклеозиды согласно настоящему изобретению синтезируют с помощью автоматического синтезатора при использовании фосфорамидитов, полученных из лиганд-нуклеозид конъюгатов, в дополнение к стандартным фосфорамидитам и нестандартным фосфорамидитам, которые доступны в продаже и обычно используются в синтезе олигонуклеотидов.

А. Липидные конъюгаты.

В некоторых вариантах осуществления лиганд или конъюгат представляет собой липид или молекулу на основе липида. Такой липид или молекула на основе липида обычно может связывать сывороточный белок, такой как человеческий сывороточный альбумин (ЧСА). ЧСА-связывающий лиганд обеспечивает распределение конъюгата в ткани-мишени, например, в ткани-мишени, отличной от почки. Например, тканью-мишенью может быть печень, включая паренхиматозные клетки печени. Другие молекулы, которые могут связывать ЧСА, также могут использоваться в качестве лигандов. Например, можно использовать напроксен или аспирин. Липид или лиганд на основе липида может: (а) повышать устойчивость конъюгата к деградации, (b) усиливать направленную доставку или транспорт в клетку-мишень или клеточную мембрану, или (с) можно использоваться для регуляции связывания с сывороточным белком, например, ЧСА.

Лиганд на основе липида может использоваться для модулирования, например контроля (например, ингибирования), связывания конъюгата с тканью-мишенью. Например, липид или лиганд на основе липида, который связывается с ЧСА более сильно, с меньшей вероятностью будет направляться в почки и, следовательно, с меньшей вероятностью будет выводиться из организма. Липид или лиганд на основе липида, который связывается с ЧСА менее сильно, может использоваться для направления конъюгата в почки.

В некоторых вариантах осуществления лиганд на основе липида связывает ЧСА. Например, лиганд может связывать ЧСА с достаточной аффинностью, в результате чего повышается распределение конъюгата в ткани, не относящейся к почкам. Однако аффинность обычно не настолько сильная, чтобы связывание ЧСА-лиганда было необратимым.

В некоторых вариантах осуществления лиганд на основе липидов слабо связывает или вообще не связывает ЧСА, при этом распределение конъюгата в почках повышается. Вместо лиганда на основе липида или в дополнение к нему также могут использоваться другие фрагменты, которые направленно взаимодействуют с клетками почек.

В другом аспекте лиганд представляет собой молекулу, например витамин, которая захватывается клеткой-мишенью, например, пролиферирующей клеткой. Они особенно полезны для лечения нарушений, характеризующихся нежелательной клеточной пролиферацией, например, злокачественного или незлокачественного типа, например раковых клеток. Примеры витаминов включают витамин А, Е и K. Другие иллюстративные витамины включают витамин В, например фолиевую кислоту, В12, рибофлавин, биотин, пиридоксаль или другие витамины или питательные вещества, поглощаемые раковыми клетками. Также включены ЧСА и липопротеины низкой плотности (ЛГГНП).

В. Средства, проникающие в клетки.

В другом аспекте лиганд представляет собой проникающее в клетку средство, такое как спиральное проникающее в клетку средство. В некоторых вариантах осуществления средство является амфипатическим. Иллюстративное средство представляет собой пептид, такой как tat-пептид или пептид антеннопедии. Если средство представляет собой пептид, то он может быть модифицирован, включая пептидилмиметик, инвертомеры, непептидные или псевдопептидные связи и использование D-аминокислот. Спиральное средство обычно является α-спиральным средством и может иметь липофильную и липофобную фазу.

Лиганд может быть пептидом или пептидомиметиком. Пептидомиметик (также называемый в настоящем документе олигопептидомиметиком) представляет собой молекулу, способную укладываться в определенную трехмерную структуру, подобную природному пептиду. Присоединение пептидов и пептидомиметиков к иРНК средствам может влиять на фармакокинетическое распределение иРНК, например, за счет улучшения клеточного распознавания и абсорбции. Молекула пептида или пептидомиметика может иметь длину приблизительно 5-50 аминокислот, например, приблизительно 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 аминокислот.

Пептид или пептидомиметик может быть, например, проникающим в клетку пептидом, катионным пептидом, амфипатическим пептидом или гидрофобным пептидом (например, состоящим в основном из Tyr, Trp или Phe). Пептидным фрагментом может быть дендримерный пептид, конформационно ограниченный пептид или сшитый пептид. В другом альтернативном варианте пептидный фрагмент может включать гидрофобную последовательность транслокации в мембрану (MTS). Примером гидрофобного MTS-содержащего пептида является RFGF, имеющий аминокислотную последовательность AAVALLPAVLLALLAP (SEQ ГО NO: И).

Аналог RFGF (например, аминокислотная последовательность AALLPVLLAAP (SEQ ID NO: 12)), содержащий гидрофобную MTS, также может быть направляющим фрагментом. Пептидный фрагмент

- 51 048552 может быть доставляющим пептидом, который может переносить большие полярные молекулы, включая пептиды, олигонуклеотиды и белок, через клеточные мембраны. Например, было обнаружено, что последовательности Tat белка ВИЧ (GRKKRRQRRRPPQ (SEQID NO: 13)) и белка антеннапедии Drosophila (RQIKIWFQNRMKWKK (SEQ ID NO: 14)) способны функционировать в качестве доставляющих пептидов. Пептид или пептидомиметик может кодироваться случайной последовательностью ДНК, такой как пептид, идентифицированный из библиотеки фагового дисплея или комбинаторной библиотеки одна сфера - одно соединение (ОВОС) (Lam et al., Nature, 354:82-84, 1991). Как правило, пептид или пептидомиметик, привязанный к дцРНК средству через встроенную мономерную единицу, представляет собой пептид, направленный на клетку, такой как пептид аргинин-глицин-аспарагиновая кислота (RGD) или миметик RGD. Длина пептидного фрагмента может варьировать от приблизительно 5 аминокислот до приблизительно 40 аминокислот. Пептидные фрагменты могут иметь структурную модификацию, например, для улучшения стабильности или непосредственных конформационных свойств. Может использоваться любая из структурных модификаций, описанных ниже.

RGD-пептид для применения в композициях и способах согласно изобретению может быть линейным или циклическим и может быть модифицирован, например, гликозилирован или метилирован, для облегчения направленной доставки в конкретную ткань(и). RGD-содержащие пептиды и пептидомиметики могут включать D-аминокислоты, а также синтетические RGD-миметики. В дополнение к RGD могут использоваться другие фрагменты, направленные на интегриновый лиганд. Предпочтительные конъюгаты такого лиганда направленно взаимодействуют с РЕСАМ-1 или VEGF.

RGD-пептидный фрагмент может использоваться для направленного взаимодействия с конкретным типом клеток, например, опухолевыми клетками, такими как эндотелиальные опухолевые клетки или опухолевые клетки рака молочной железы (Zitzmann et al., Cancer Res., 62:5139-43, 2002). RGD-пептид может способствовать направленной доставки дцРНК средства в опухоли множества других тканей, включая легкие, почки, селезенку или печень (Aoki et al., Cancer Gene Therapy 8:783-787, 2001). Как правило, RGD-пептид будет способствовать направлению иРНК в почки. RGD-пептид может быть линейным или циклическим и может быть модифицирован, например, гликозилирован или метилирован, для облегчения направленной доставки в определенные ткани. Например, гликозилированный RGD-пептид может доставлять иРНК средство в опухолевую клетку, экспрессирующей оУв3 (Haubner et al., Jour. Nucl. Med., 42:326-336, 2001).

Проникающий в клетку пептид способен проникать в клетку, например, в микробную клетку, такую как клетка бактерии или гриба, или в клетку млекопитающего, такую как клетка человека. Проникающим в микробную клетку пептидом может быть, например, α-спиральный линейный пептид (например, LL-37 или цекропин Р1), пептид, содержащий дисульфидную связь (например, α-дефензин, βдефензин или бактенецин), или пептид, содержащий только одну или две доминирующие аминокислоты (например, PR-39 или индолицидин). Проникающий в клетку пептид также может включать сигнал ядерной локализации (NLS). Например, проникающий в клетку пептид может быть двухкомпонентным амфипатическим пептидом, таким как MPG, который получают при слиянии пептидного домена gp41 ВИЧ-1 и NLS большого Т-антигена SV40 (Simeoni et al., Nucl. Acids Res. 31:2717-2724, 2003).

С. Углеводные конъюгаты.

В некоторых вариантах осуществления композиций и способов согласно изобретению иРНК дополнительно включает углевод. Конъюгированные с углеводами иРНК удобны для доставки нуклеиновых кислот in vivo, а также композиций, подходящих для терапевтического применения in vivo, как описано в настоящем документе. При использовании в настоящем документе углевод относится к соединению, которое либо представляет собой углевод как таковой, состоящий из одного или больше моносахаридных звеньев, содержащих по меньшей мере 6 атомов углерода (которые могут быть линейными, разветвленными или циклическими), причем с каждым атомом углерода связан атом кислорода, азота или серы; или к соединению, содержащему в качестве своей части углеводный фрагмент, состоящий из одного или больше моносахаридных звеньев, каждое из которых содержит по меньшей мере шесть атомов углерода (который может быть линейным, разветвленным или циклическим), причем с каждым атомом углерода связан атом кислорода, азота или серы. Репрезентативные углеводы включают сахара (моно-, ди-, три- и олигосахариды, содержащие от приблизительно 4, 5, 6, 7, 8 или 9 моносахаридных звеньев) и полисахариды, такие как крахмалы, гликоген, целлюлозу и полисахаридные камеди. Конкретные моносахариды включают сахара С5 и выше (например, С5, С6, С7 или С8); ди- и трисахариды включают сахара, имеющие две или три моносахаридные единицы (например, С5, С6, С7 или С8).

В некоторых вариантах осуществления углеводный конъюгат включает моносахарид.

В некоторых вариантах осуществления моносахарид представляет собой N-ацетилгалактозамин (GalNAc). Конъюгаты GalNAc, которые включают одно или больше производных N-ацетилгалактозамина (GalNAc), описаны, например, в патенте США 8106022, полное содержание которого настоящим включено в настоящий документ посредством отсылки. В некоторых вариантах осуществления конъюгат GalNAc служит в качестве лиганда, который направляет иРНК в конкретные клетки. В некоторых вариантах осуществления конъюгат GalNAc направляет иРНК в клетки печени, например, выступая в качест

- 52 048552 ве лиганда для асиалогликопротеинового рецептора клеток печени (например, гепатоцитов).

В некоторых вариантах осуществления углеводный конъюгат включает одно или больше производных GalNAc. Производные GalNAc могут быть присоединены через линкер, например двухвалентный или трехвалентный разветвленный линкер. В некоторых вариантах осуществления конъюгат GalNAc конъюгирован с 3'-концом смысловой цепи. В некоторых вариантах осуществления конъюгат GalNAc конъюгирован с иРНК средством (например, с 3'-концом смысловой цепи) через линкер, например линкер, описанный в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления конъюгат GalNAc конъюгирован с 5'-концом смысловой цепи. В некоторых вариантах осуществления конъюгат GalNAc конъюгирован с иРНК средством (например, с 5'-концом смысловой цепи) через линкер, например линкер, описанный в настоящем документе.

В некоторых вариантах осуществления изобретения GalNAc или производное GalNAc присоединены к иРНК средству согласно изобретению через одновалентный линкер. В некоторых вариантах осуществления GalNAc или производное GalNAc присоединены к иРНК средству согласно изобретению через двухвалентный линкер. В других вариантах осуществления изобретения GalNAc или производное GalNAc присоединены к иРНК средству согласно изобретению через трехвалентный линкер. В других вариантах осуществления изобретения GalNAc или производное GalNAc присоединены к иРНК средству согласно изобретению через четырехвалентный линкер.

В некоторых вариантах осуществления двухцепочечные РНКи средства согласно изобретению включают один GalNAc или производное GalNAc, присоединенное к иРНК средству. В некоторых вариантах осуществления двухцепочечные РНКи средства согласно изобретению включают множество (например, 2, 3, 4, 5 или 6) GalNAc или производных GalNAc, каждое из которых независимо присоединено к множеству нуклеотидов двухцепочечного РНКи средства через множество одновалентных линкеров.

В некоторых вариантах осуществления, например, когда две цепи иРНК средства согласно изобретению являются частью одной более крупной молекулы, соединенной непрерывной цепью нуклеотидов между 3'-концом одной нити и 5'-концом соответствующей другой цепи, образующей петлю шпильки, содержащую множество неспаренных нуклеотидов, то тогда каждый неспаренный нуклеотид в петле шпильки может независимо включать GalNAc или производное GalNAc, присоединенное через одновалентный линкер. Петля шпильки также может быть сформирована удлиненным оверхенгом в одной цепи дуплекса.

В некоторых вариантах осуществления, например, когда две цепи иРНК средства согласно изобретению являются частью одной более крупной молекулы, соединенной непрерывной цепью нуклеотидов между 3'-концом одной нити и 5'-концом соответствующей другой цепи, образующей петлю шпильки, содержащую множество неспаренных нуклеотидов, то тогда каждый неспаренный нуклеотид в петле шпильки может независимо включать GalNAc или производное GalNAc, присоединенное через одновалентный линкер. Петля шпильки также может быть сформирована удлиненным оверхенгом в одной цепи дуплекса.

В некоторых вариантах осуществления конъюгат GalNAc представляет собой:

В некоторых вариантах осуществления РНКи средство присоединено к конъюгату углевода через линкер, как показано на следующей схеме, где X представляет собой О или S:

- 53 048552

В некоторых вариантах осуществления РНКи средство конъюгировано с L96, как определено в табл. 1 и показано ниже:

В некоторых вариантах осуществления углеводный конъюгат для применения в композициях и способах согласно изобретению выбран из группы, состоящей из:

- 54 048552

- 55 048552

- 56 048552

- 57 048552

где Y представляет собой О или S, и n равно 3-6 (формула XXIV);

- 58 048552

где Y представляет собой О или S, и n равно 3-6 (формула XXV);

где X представляет собой О или S (формула XXVII);

- 59 048552

- 60 048552

В некоторых вариантах осуществления углеводный конъюгат для применения в композициях и способах согласно изобретению является моносахаридом. В некоторых вариантах осуществления моносахаридом является N-ацетилгалактозамин, такой как:

Другой репрезентативный углеводный конъюгат для применения в вариантах осуществления, описанных в настоящем документе, включает, без ограничения:

(Формула XXXVI), когда один из X или Y является олигонуклеотидом, а другой водородом.

В некоторых вариантах осуществления подходящий лиганд является лигандом, раскрытым в WO 2019/055633, все содержание которой включено в настоящий документ посредством отсылки. В одном варианте осуществления лиганд включает структуру, представленную ниже:

(NAG37)s

В некоторых вариантах осуществления РНКи средства согласно изобретению могут включать ли- 61 048552 ганды GalNAc, даже если такие лиганды GalNAc, как предполагается в настоящее время, будут иметь ограниченное применение для предпочтительного интратекального/ЦНС пути(ей) доставки согласно настоящему изобретению.

В некоторых вариантах осуществления изобретения GalNAc или производное GalNAc присоединены к иРНК средству согласно изобретению через одновалентный линкер. В некоторых вариантах осуществления GalNAc или производное GalNAc присоединены к иРНК средству согласно изобретению через двухвалентный линкер. В других вариантах осуществления изобретения GalNAc или производное GalNAc присоединены к иРНК средству согласно изобретению через трехвалентный линкер.

В одном варианте осуществления двухцепочечные РНКи средства согласно изобретению включают один или более GalNAc или производных GalNAc, присоединенных к иРНК средству. GalNAc может быть присоединен к любому нуклеотиду через линкер на смысловой цепи или антисмысловой цепи. GalNac может быть присоединен к 5'-концу смысловой нити, 3'-концу смысловой нити, 5'-концу антисмысловой нити или 3'-концу антисмысловой нити. В одном варианте осуществления GalNAc присоединен к 3'-концу смысловой цепи, например, через трехвалентный линкер.

В других вариантах осуществления двухцепочечные РНКи средства согласно изобретению включают множество (например, 2, 3, 4, 5 или 6) GalNAc или производных GalNAc, каждый из которых независимо присоединен к множеству нуклеотидов двухцепочечного РНКи средства через множество линкеров, например, одновалентных линкеров.

В некоторых вариантах осуществления, например, когда две цепи иРНК средства согласно изобретению являются частью одной более крупной молекулы, соединенной непрерывной цепью нуклеотидов между 3'-концом одной цепи и 5'-концом соответствующей другой цепь с образованием петли шпильки, включающей множество неспаренных нуклеотидов, причем каждый неспаренный нуклеотид в петле шпильки может независимо включать GalNAc или производное GalNAc, присоединенные через одновалентный линкер.

В некоторых вариантах осуществления углеводный конъюгат дополнительно включает один или больше дополнительных лигандов, как описано выше, таких как, без ограничения перечисленными, модулятор ФК или проникающий в клетку пептид.

Дополнительные углеводные конъюгаты и линкеры, подходящие для применения в настоящем изобретении, включают описанные в заявках WO 2014/179620 и WO 2014/179627, полное содержание каждой из которых включено в настоящее описание посредством отсылки.

D. Линкеры.

В некоторых вариантах осуществления конъюгат или лиганд, описанный в настоящем документе, может быть присоединен к иРНК олигонуклеотиду при использовании различных линкеров, которые могут быть расщепляемыми или нерасщепляемыми.

Термин линкер или линкерная группа означает органический фрагмент, который соединяет две части соединения, например ковалентно связывает две части соединения. Линкеры обычно включают прямую связь или атом, такой как кислород или серу, звено, такое как NR8, С(О), C(O)NH, SO, SO₂, SO2NH, или цепь атомов, такую как, без ограничения перечисленным, замещенный или незамещенный алкил, замещенный или незамещенный алкенил, замещенный или незамещенный алкинил, арилалкил, арилалкенил, арилалкинил, гетероарилалкил, гетероарилалкенил, гетероарилалкинил, гетероциклилалкил, гетероциклилалкенил, гетероциклилалкинил, арил, гетероарил, гетероциклил, циклоалкил, циклоалкенил, алкиларилалкил, алкиларилалкенил, алкиларилалкинил, алкениларилалкил, алкениларилалкенил, алкениларилалкинил, алкиниларилалкил, алкиниларилалкенил, алкиниларилалкинил, алкилгетероарилалкил, алкилгетероарилалкенил, алкилгетероарилалкинил, алкенилгетероарилалкил, алкенилгетероарилалкенил, алкенилгетероарилалкинил, алкинилгетероарилалкил, алкинилгетероарилалкенил, алкинилгетероарилалкинил, алкилгетероциклилалкил, алкилгетероциклилалкенил, алкилгетероциклилалкинил, алкенилгетероциклилалкил, алкенилгетероциклилалкенил, алкенилгетероциклилалкинил, алкинилгетероциклилалкил, алкинилгетероциклилалкенил, алкинилгетероциклилалкинил, алкиларил, алкениларил, алкиниларил, алкилгетероарил, алкенилгетероарил, алкинилгерероарил, в которых один или более метиленов могут прерываться или оканчиваться О, S, S(O), SO₂, N(R8), C(O), замещенным или незамещенным арилом, замещенным или незамещенным гетероарилом, замещенным или незамещенным гетероциклом; где R8 представляет собой водород, ацил, алифатическую или замещенную алифатическую группу. В некоторых вариантах осуществления линкер содержит в пределах приблизительно 1-24 атомов, 2-24, 324, 4-24, 5-24, 6-24, 6-18, 7-18, 8-18 атомов, 7-17 атомов, 8-17, 6-16, 7-16 или 8-16 атомов.

Расщепляемая линкерная группа является достаточно стабильной вне клетки, но при попадании в клетку-мишень расщепляется с высвобождением двух частей, удерживаемых линкером вместе. В предпочтительном варианте осуществления расщепляемая линкерная группа расщепляется по меньшей мере приблизительно в 10 раз, 20 раз, 30 раз, 40 раз, 50 раз, 60 раз, 70 раз, 80 раз, 90 раз или более, или по меньшей мере приблизительно в 100 раз быстрее в клетке-мишени или при первом референсном условии (которое, например, может быть выбрано для имитации или воспроизведения внутриклеточных условий), чем в крови субъекта, или при втором референсном условии (которое, например, может быть выбрано для имитации или воспроизведения условий, существующих в крови или сыворотке).

- 62 048552

Расщепляемые линкерные группы чувствительны к расщепляющим факторам, например pH, окислительно-восстановительному потенциалу или присутствию расщепляющих молекул. Как правило, расщепляющие факторы более распространены или присутствуют в более высоких количествах или обладают более высокой активностью внутри клеток, чем в сыворотке или крови. Примеры таких расщепляющих факторов включают: окислительно-восстановительные реагенты, которые подобраны для конкретных субстратов или не обладают субстратной специфичностью, включающие, например, окисляющие или восстанавливающие ферменты или восстановители, такие как меркаптаны, присутствующие в клетках, которые могут разрушать линкерную группу, расщепляемую при воздействии окислительновосстановительных реагентов, в результате восстановления; эстеразы; эндосомы или вещества, которые могут создавать кислую среду, например, такие, которые создают pH пять или ниже; ферменты, которые могут вызывать гидролиз или расщепление линкерной группы, расщепляемой в кислотных условиях, действуя как общая кислота, пептидазы (которые могут быть субстрат-специфичными) и фосфатазы.

Расщепляемая линкерная группа, такая как дисульфидная связь, может быть чувствительна к pH. pH сыворотки крови человека составляет 7,4, тогда как средний внутриклеточный pH немного ниже и колеблется в пределах приблизительно 7,1-7,3. В эндосомах pH более кислый, в диапазоне 5,5-6,0, и лизосомы имеют еще более кислый pH около 5,0. Некоторые линкеры будут содержать расщепляемую линкерную группу, которая расщепляется при предпочтительном pH, с высвобождением катионного липида из лиганда внутри клетки или в нужном компартменте клетки.

Линкер может включать расщепляемую линкерную группу, которую расщепляет конкретный фермент. Тип расщепляемой линкерной группы, включенной в линкер, может зависеть от клетки, являющейся мишенью. Например, лиганд, направленный на печень, может быть связан с катионным липидом через линкер, который включает сложноэфирную группу. Клетки печени богаты эстеразами, поэтому линкер будет расщепляться более эффективно в клетках печени, чем в типах клеток, которые не богаты эстеразами. Другие типы клеток, богатых эстеразами, включают клетки легких, коры почек и яичек.

Линкеры, которые содержат пептидные связи, могут использоваться для направленной доставки в типы клеток, богатые пептидазами, такие как клетки печени и синовиоциты.

Как правило, пригодность кандидатной расщепляемой линкерной группы можно оценивать путем тестирования способности расщепляющего реагента (или условия) расщеплять кандидатную линкерную группу. Также будет желательно протестировать кандидатную расщепляемую линкерную группу на устойчивость к расщеплению в крови или при контакте с другой тканью, не являющейся мишенью. Таким образом, можно определить относительную чувствительность к расщеплению при первом и втором состояниях, где первое состояние выбирают как показатель расщепления в клетке-мишени, а второе выбирают как показатель расщепления в других тканях или биологических жидкостях, например, крови или сыворотке. Оценки можно проводить в бесклеточных системах, в клетках, в культуре клеток, в культуре органов или тканей или на интактных животных. Может быть предпочтительным произвести первоначальные оценки в бесклеточных условиях или условиях культуры и подтвердить их последующими оценками на интактных животных. В предпочтительных вариантах осуществления полезные соединениякандидаты расщепляются в клетке (или в условиях in vitro, выбранных для имитации внутриклеточных условий) при сравнении с кровью или сывороткой (или в условиях in vitro, выбранных для имитации внеклеточных условий).

i. Редокс-расщепляемые линкерные группы.

В некоторых вариантах осуществления расщепляемая линкерная группа представляет собой редоксрасщепляемую линкерную группу, которая расщепляется при восстановлении или окислении. Примером редокс-расщепляемой линкерной группы является дисульфидная линкерная группа (-S-S-). Чтобы определить, является ли кандидатная расщепляемая линкерная группа подходящей расщепляемой при восстановлении линкерной группой или, например, подходящей для применения с конкретным фрагментом иРНК и конкретным направляющим средством, можно обратиться к способам, описанным в настоящем документе. Например, кандидата можно оценивать путем инкубирования с дитиотреитолом (ДТТ) или другим восстановителем при использовании реагентов, известных в данной области техники, которые имитируют скорость расщепления, наблюдаемую в клетке, например клетке-мишени. Кандидаты также можно оценивать в условиях, которые подобраны так, чтобы имитировать условия в крови или сыворотке. В одном случае соединения-кандидаты расщепляются не больше чем на 10% в крови. В других вариантах осуществления полезные соединения-кандидаты разрушаются по меньшей мере в 2, 4, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или приблизительно в 100 раз быстрее в клетке (или в условиях in vitro, подобранных для имитации внутриклеточных условий), чем в крови (или в условиях in vitro, подобранных для имитации внеклеточных условий). Скорость расщепления соединений-кандидатов можно определять с помощью стандартных анализов ферментативной кинетики в условиях, подобранных для имитации внутриклеточной среды, и сравнивать с условиями, подобранными для имитации внеклеточной среды.

ii. Расщепляемые линкерные группы на основе фосфата.

В некоторых вариантах осуществления расщепляемый линкер включает расщепляемую линкерную группу на основе фосфата. Расщепляемая линкерная группа на основе фосфата расщепляется агентами, которые разлагают или гидролизуют фосфатную группу. Примером агента, расщепляющего фосфатные

- 63 048552 группы в клетках, являются такие ферменты, как фосфатазы в клетках. Примерами линкерных групп на основе фосфата являются -O-P(O)(ORk)-O-, -O-P(S)(ORk)-O-, -O-P(S)(SRk)-O-, -S-P(O)(ORk)-O-, -OP(O)(ORk)-S-, -S-P(O)(ORk)-S-, -O-P(S)(ORk)-S-, -S-P(S)(ORk)-O-, -O-P(O)(Rk)-O-, -O-P(S)(Rk)-O-, -SP(O)(Rk)-O-, -S-P(S)(Rk)-O-, -S-P(O)(Rk)-S-, -O-P(S)(Rk)-S-. Предпочтительными вариантами осуществления являются -О-Р(О)(ОН)-О-, -O-PCSXOH)^-, -O-P(S)(SH)-O-, -S-P(O)(OH)-O-, -O-P(O)(OH)-S-, -SP(O)(OH)-S-, -O-P(S)(OH)-S-, -S-P(S)(OH)-O-, -O-P(O)(H)-O-, -O-P(S)(H)-O-, -S-P(O)(H)-O, -S-P(S)(H)-O-, -S-P(O)(H)-S-, -O-P(S)(H)-S-. Предпочтительным вариантом осуществления является -О-Р(О)(ОН)-О-. Эти кандидаты можно оценивать при использовании способов, аналогичных описанным выше.

iii. Литерные группы, расщепляемые кислотой.

В некоторых вариантах осуществления расщепляемый линкер включает расщепляемую кислотой линкерную группу. Расщепляемая кислотой линкерная группа представляет собой линкерную группу, которая расщепляется в кислотных условиях. В предпочтительных вариантах осуществления расщепляемые кислотой линкерные группы расщепляются в кислой среде с pH приблизительно 6,5 или ниже (например, приблизительно 6,0, 5,75, 5,5, 5,25, 5,0 или ниже) или с помощью таких агентов, как ферменты, которые могут действовать как общая кислота. В клетке определенные органеллы с низким pH, такие как эндосомы и лизосомы, могут обеспечивать среду расщепления для расщепляемых кислотой линкерных групп. Примеры расщепляемых кислотой линкерных групп включают, без ограничения перечисленными, гидразоны, сложные эфиры и сложные эфиры аминокислот. Расщепляемые кислотой группы могут иметь общую формулу -C=NN-, C(O)O или -ОС(О). В предпочтительном варианте осуществления атом углерода, присоединенный к атому кислорода сложного эфира (алкоксигруппы), представляет собой арильную группу, замещенную алкильную группу или третичную алкильную группу, такую как диметилпентил или трет-бутил. Эти кандидаты можно оценивать при использовании методов, аналогичных описанным выше.

iv. Сложноэфирные расщепляемые линкерные группы.

В некоторых вариантах осуществления расщепляемый линкер содержит расщепляемую линкерную группу на основе сложного эфира. Расщепляемая сложноэфирная линкерная группа расщепляется в клетках ферментами, такими как эстеразы и амидазы. Примеры сложноэфирных расщепляемых линкерных групп включают, без ограничения, сложные эфиры алкиленовых, алкениленовых и алкиниленовых групп. Сложноэфирные расщепляемые линкерные группы имеют общую формулу -С(О)О- или -ОС(О)-. Эти кандидаты можно оценивать при использовании методов, аналогичных описанным выше.

v. Расщепляемые линкерные группы на основе пептидов.

В еще одном варианте осуществления расщепляемый линкер содержит расщепляемую линкерную группу на основе пептида. Расщепляемая линкерная группа на основе пептида расщепляется такими ферментами, как пептидазы и протеазы, в клетках. Расщепляемые линкерные группы на основе пептидов представляют собой пептидные связи, образованные между аминокислотами с получением олигопептидов (например, дипептидов, трипептидов и т.д.) и полипептидов. Расщепляемые группы на основе пептидов не включают амидную группу (-C(O)NH-). Амидная группа может быть образована любым алкиленом, алкениленом или алкинеленом. Пептидная связь является особым типом амидной связи, образующейся между аминокислотами с получением пептидов и белков. Расщепляемая группа на основе пептида обычно ограничена пептидной связью (т.е. амидной связью), образованной между аминокислотами, с получением пептидов и белков, и не включает всю амидную функциональную группу. Расщепляемые линкерные группы на основе пептидов имеют общую формулу NHCHRAC(O)NHCHRBC(O)-, где RA и RB представляют собой R-группы двух соседних аминокислот. Эти кандидаты можно оценивать при использовании методов, аналогичных описанным выше.

В некоторых вариантах осуществления иРНК согласно изобретению конъюгирована с углеводом через линкер. Неограничивающие примеры иРНК-углеводных конъюгатов с линкерами композиций и способов согласно изобретению включают, без ограничения:

- 64 048552

- 65 048552

(Формула XLIV), когда один из X или Y является олигонуклеотидом, другой является водородом.

В некоторых вариантах осуществления композиций и способов изобретения лиганд представляет собой одно или больше производных GalNAc (N-ацетилгалактозамина), присоединенных через двухвалентный или трехвалентный разветвленный линкер.

В некоторых вариантах осуществления дцРНК согласно изобретению конъюгирован с двухвалент

- 66 048552 ным или трехвалентным разветвленным линкером, выбранным из группы структур, показанных в любой формуле (XLV)-(XLVI):

)2Α _r2A__γ2Α [_2A

s p2B _q2B __r2B ₍3A_r3A__J3A_|_3A

P-1R_q3b__r3b

Формула XXXXV

Формула XLVI

Формула xlVII

Формула xlvIII или

5A l_|_5B

5C где q2A, q2B, q3A, q3B, q4A, q4B, q5A, q5B и q5C независимо для каждого случая представляют собой 0-20, и где повторяющееся звено может быть одинаковым или разным;

каждый Р^2А, Р^2В, Р^3А, Р^3в, Р^4А, Р^4В, Р^5А, Р^5В, Р^5С, Т^2А, Т^2В, Т^3А, Т^3в, Т^4А, Т^4В, Т^4А, Т^5В, Т^5С независимо для каждого случая отсутствует, представляет собой СО, NH, О, S, ОС(О), NHC(O), CH₂, CH2NH или СН2О;

q^2a, q^2b, q^3a, q^3b, q^4a, q^4b, q^5a, q^5b, q^5c независимо для каждого случая отсутствуют, представляют собой алкилен, замещенный алкилен, где один или более метиленов могут прерываться или оканчиваться одним или более из О, S, S(O), SO₂, N(Rⁿ), C(R')=C(R), С=С или С(О);

каждый R^2A, R^2B, R^3A, R^3B, R^4A, R^4B, R^5A, R^5B, R^5C независимо для каждого случая отсутствует, представляет собой NH, О, S, СН2, C(O)O, C(O)NH, NHCH(Ra)C(O), -C(O)-CH(R^a)-NH-, CO, CH=N-O,

или гетероциклил;

L^2A, L^2B, L^3A, L^3B, L^4A, L^4B, L^5A, L^5B и L^5C представляют собой лиганд; т.е. каждый независимо для каждого случая моносахарид (такой как GalNAc), дисахарид, трисахарид, тетрасахарид, олигосахарид или полисахарид; и Ra представляет собой боковую цепь аминокислоты или Н. Трехвалентное конъюгирование производных GalNAc особенно предпочтительно для использования с РНКи средствами для ингибирования экспрессии гена-мишени, такими как конъюгаты формулы (XLIX):

р5В q5B__R5B ..............................у5В_|_5В

Ь,5В p5 A_q5A__r5A

_T5A_[_5A p5C_Q5C__R5C

y5C_|_5C

Формула XLIX где L^5A, L^5B и L^5C представляют собой моносахарид, такой как производное GalNAc.

Примеры подходящих конъюгатов двухвалентных и трехвалентных разветвленных линкерных групп с производными GalNAc включают, без ограничения, структуры, перечисленные выше в формулах II, VII, XI, X и XIII.

Репрезентативные патенты США, в которых описано получение РНК-конъюгатов, включают, без ограничения перечиленными, патенты США

- 67 048552

4,828,979; 4,948,882; 5,218,105;

5,525,465;	5,541,313;	5,545,730;	5,552,538;	5,578,717,	5,580,731;	5,591,584;	5,109,124;
5,118,802;	5,138,045;	5,414,077;	5,486,603;	5,512,439;	5,578,718;	5,608,046;	4,587,044;
4,605,735;	4,667,025;	4,762,779;	4,789,737;	4,824,941;	4,835,263;	4,876,335;	4,904,582;
4,958,013;	5,082,830;	5,112,963;	5,214,136;	5,082,830;	5,112,963;	5,214,136;	5,245,022;
5,254,469;	5,258,506;	5,262,536;	5,272,250;	5,292,873;	5,317,098;	5,371,241,	5,391,723;
5,416,203,	5,451,463;	5,510,475;	5,512,667;	5,514,785;	5,565,552;	5,567,810;	5,574,142;
5,585,481;	5,587,371;	5,595,726;	5,597,696;	5,599,923;	5,599,928;	5,688,941;	6,294,664;

6,320,017; 6,576,752; 6,783,931; 6,900,297; 7,037,646 и 8,106,022, все содержание каждого из которых настоящим включено в настоящий документ посредством отсылки.

Не нужно, чтобы все положения в данном соединении были обязательно одинаково модифицированы, и фактически больше чем одна из вышеуказанных модификаций может быть включена в одно соединение или даже в один нуклеозид в иРНК. Настоящее изобретение также включает иРНК соединения, которые являются химерными соединениями.

Химерные иРНК соединения или химеры в контексте настоящего изобретения представляют собой иРНК соединения, предпочтительно дцРНК средства, которые содержат две или больше химически различных областей, каждая из которых состоит по меньшей мере из одного мономерного звена, т.е. нуклеотида в случае дцРНК соединения. Такие иРНК обычно содержат по меньшей мере одну область, в которой РНК модифицирована таким образом, чтобы придавать иРНК повышенную устойчивость к деградации нуклеазами, улучшенный захват клетками или повышенную аффинность связывания с нуклеиновой кислотой-мишенью. Дополнительная область иРНК может служить субстратом для ферментов, способных расщеплять гибриды РНК:ДНК или РНК:РНК. Например, РНКаза Н представляет собой клеточную эндонуклеазу, которая расщепляет цепь РНК дуплекса РНК:ДНК. Таким образом, активация РНКазы Н приводит к расщеплению РНК-мишени, что значительно повышает эффективность иРНК при ингибировании экспрессии генов. Следовательно, сопоставимые результаты часто могут быть получены с более короткими иРНК, когда используются химерные дцРНК, по сравнению с фосфоротиоат-дезокси дцРНК, которые гибридизуются с той же областью-мишенью. Расщепление РНК-мишени можно обнаруживать стандартным способом с помощью гель-электрофореза и, при необходимости, с помощью методов гибридизации ассоциированных нуклеиновых кислот, известных в данной области.

В некоторых случаях РНК в иРНК может быть модифицирована нелигандной группой. Ряд нелигандных молекул был конъюгирован с иРНК для повышения активности, клеточного распределения или клеточного захвата иРНК, и методики для проведения такого конъюгирования доступны в научной литературе. Такие нелигандные фрагменты включают молекулы липидов, таких как холестерин (Kubo, T. et al., Biochem. Biophys. Res. Comm., 2007, 365(1):54-61; Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86:6553), холевая кислота (Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1994, 4:1053), тиоэфир, например гексил-Б-тритилтиол (Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1994, 4:1053). et al., Ann.NYAcad.Sci., 1992, 660:306; Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3:2765), тиохолестерин (Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20:533), алифатическую цепь, например додекандиоловые или ундецильные остатки (Saison-Behmoaras et al., EMBO J., 1991, 10:111; Kabanov et al., FEBS Lett, 1990, 259:327; Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75:49), фосфолипид, например ди-гексадецил-рац-глицерин или триэтиламмоний1,2-ди-О-гексадецил-рац-глицеро-3-Н-фосфонат (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651; Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18:3777), цепь полиамина или полиэтиленгликоля (Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 19 95, 14:969) или адамантануксусную кислоту (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651), пальмитильную группу (Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264:229), или молекулу октадециламина или гексиламинокарбонилоксихолестерина (Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther, 1996, 277:923). Репрезентативные патенты США, в которых описано получение таких конъюгатов РНК, перечислены выше. Типичные протоколы конъюгирования включают синтез РНК, несущих аминолинкер в одном или более положениях последовательности. Затем аминогруппу подвергают реакции с конъюгируемой молекулой при использовании соответствующих связывающих или активирующих реагентов. Реакцию конъюгирования можно проводить либо с РНК, которая остается связанной с твердой подложкой, либо после снятия РНК в жидкой фазе. Очистка конъюгата РНК с помощью ВЭЖХ обычно дает чистый конъюгат.

V. Доставка РНКи средства согласно изобретению.

Доставка РНКи средства согласно изобретению в клетку, например, в клетку в организме субъекта, такого как субъект-человек (например, субъект, нуждающийся в этом, такой как субъект, страдающий HTT-ассоциированным нарушением, например болезнью Хантингтона), может быть достигнута несколькими различными способами. Например, доставка может быть осуществлена путем контакта клетки с РНКи средством согласно изобретению in vitro или in vivo. Доставка in vivo также может быть выполне

- 68 048552 на напрямую путем введения композиции, включающей РНКи средство, например дцРНК, субъекту. В альтернативе доставка in vivo может быть выполнена опосредованно путем введения одного или более векторов, которые кодируют и направляют экспрессию РНКи средства. Такие альтернативные варианты дополнительно обсуждаются ниже.

В целом, любой способ доставки молекулы нуклеиновой кислоты (in vitro или in vivo) может быть адаптирован для применения с РНКи средством согласно изобретению (см., например, Akhtar S. and Julian RL., (1992) Trends Cell. Biol. 2(5): 139-144 и WO 94/02595, которые полностью включены в настоящий документ посредством отсылки). При доставке in vivo факторы, которые следует учитывать при доставке РНКи средства, включают, например, биологическую стабильность доставляемого средства, предотвращение неспецифических эффектов и накопление доставленного средства в ткани-мишени. Неспецифические эффекты РНКи средства можно свести к минимуму путем местного введения, например, путем прямой инъекции или имплантации в ткань, или путем наружного введения препарата. Местное введение в участок лечения максимально повышает локальную концентрацию средства, ограничивает воздействие средства на системные ткани, которые в противном случае могут быть повреждены средством или которые могут вызывать деградацию средства, и позволяет вводить более низкую общую дозу РНКи средства. Несколько исследований показали успешный нокдаун продуктов генов при локальном введении РНКи средства. Например, внутриглазная доставка дцРНК VEGF путем интравитреальной инъекции яванским макакам (Tolentino, MJ. et al. (2004) Retina 24:132-138) и субретинальных инъекций мышам (Reich, SJ. et al. (2003) Mol. Vis. 9:210-216) предотвращает неоваскуляризацию в экспериментальной модели возрастной макулодистрофии. Кроме того, прямая внутриопухолевая инъекция дцРНК мышам уменьшает объем опухоли (Pille, J. et al. (2005) Mol. Ther. 11:267-274) и может увеличить выживаемость мышей с опухолями (Kim, WJ. et al. (2006) Mol. Ther. 14:343-350; Li, S. et al. (2007) Mol. Ther. 15:515523). РНК-интерференция также продемонстрировала успех при локальной доставке в ЦНС путем прямой инъекции (Dorn, G. et al. (2004) Nucleic Acids 32:e49; Tan, P.H. et al. (2005) Gene Ther. 12:59-66; Makimura, H. и др. (2002) BMC Neurosci., 3:18; Shishkina, G.T., et al. (2004), Neuroscience 129:521-528; Thakker, E.R., et al. (2004) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101:17270-17275; Akaneya, Y., et al. (2005) J. Neurophysiol. 93:594-602) и в легкие путем интраназального введения (Howard, K.A. et al. (2006) Mol. Ther. 14:476-484; Zhang, X. et al. (2004) J. Biol. Chem. 279:10677-10684; Bitko, V. et al. (2005) Nat. Med. 11:5055). В случае системного введения РНКи средства для лечения заболевания, РНК может быть модифицирована или альтернативно доставлена с применением системы доставки лекарственного средства; оба метода позволяют предотвратить быструю деградацию дцРНК эндо- и экзонуклеазами in vivo. Модификация РНК или фармацевтического носителя также может обеспечивать направленную доставку РНКи средства в ткань-мишень и избежать нежелательных нецелевых эффектов (например, без ограничения теорией, было установлено, что применение GNA, как описано в настоящем документе, вызывает дестабилизацию затравочной области дцРНК, что приводит к усилению предпочтения таких дцРНК в направлении эффективности воздействия на мишень по сравнению с нецелевыми эффектами, поскольку такие нецелевые эффекты в значительной степени ослабляются дестабилизацией такой затравочной области). РНКи средства могут быть модифицированы путем химического конъюгирования с липофильными группами, такими как холестерин, для улучшения захвата клетками и предотвращения деградации. Например, РНКи средство, направленное против АроВ, конъюгированное с липофильной молекулой холестерина, системно вводили мышам, что привело к нокдауну мРНК ароВ как в печени, так и в тощей кишке (Soutschek, J. et al. (2004) Nature 432:173-178). Было показано, что конъюгирование РНКи средства с аптамером ингибирует рост опухоли и опосредует регрессию опухоли в модели рака предстательной железы на мышах (McNamara, JO. et al. (2006) Nat. Biotechnol. 24:1005-1015). В альтернативном варианте осуществления РНКи средство может быть доставлено с применением систем доставки лекарственных средств, таких как наночастицы, дендример, полимер, липосомы или катионная система доставки. Положительно заряженные катионные системы доставки облегчают связывание молекулы РНКи средства (отрицательно заряженной), а также усиливают взаимодействие на отрицательно заряженной клеточной мембране, обеспечивая эффективный захват РНКи средства клеткой. Катионные липиды, дендримеры или полимеры можно связывать с РНКи средством, либо индуцировать образование везикул или мицелл (см., например, Kim SH. et al. (2008) Journal of Controlled Release 129(2): 107-116), которые заключают в себе РНКи средство. Образование везикул или мицелл дополнительно препятствует деградации РНКи средства при системном введении. Способы получения и введения катионных комплексов РНКи средства находятся в рамках компетенции специалиста в данной области (см., например, публикации Sorensen, DR., et al. (2003) J. Mol. Biol. 327:761-766; Verma, UN et al. (2003) Clin. Cancer Res. 9:1291-1300; Arnold, AS et al. (2007) J. Hypertens. 25:197-205, которые полностью включены в настоящий документ посредством отсылки). Некоторые неограничивающие примеры систем доставки лекарственных средств, подходящих для системной доставки РНКи средств, включают DOTAP (Sorensen, D.R., et al. (2003), см. выше; Verma, U.N. et al. (2003), см. выше), Олигофектамин, твердые липидные частицы с нуклеиновой кислотой (Zimmermann, T.S. et al. (2006) Nature 441:111-114), кардиолипин (Chien, P.Y. et al. (2005) Cancer Gene Ther. 12:321-328; Pal, A. et al. (2005) Int J. Oncol. 26:1087-1091), полиэтиленимин (Bonnet M.E. et al. (2008) Pharm. Res. Aug 16, электронная публикация до выхода в печать; Aigner, А. (2006) J. Biomed. Bio

- 69 048552 technol. 71659), пептиды Arg-Gly-Asp (RGD) (Liu, S. (2006) Mol. Pharm. 3:472-487) и полиамидоамины (Tomalia, DA. et al. (2007) Biochem. Soc. Trans. 35:61-67; Yoo, H. et al. (1999) Pharm. Res. 16:1799-1804). В некоторых вариантах осуществления РНКи средство образует комплекс с циклодекстрином для системного введения. Способы введения и фармацевтические композиции РНКи средств и циклодекстринов можно найти в патенте США 7427605, который полностью включен в настоящий документ посредством отсылки.

Некоторые аспекты настоящего изобретения относятся к способу снижения экспрессии генамишени HTT в клетке, включающему контакт указанной клетки с двухцепочечным РНКи средством согласно настоящему изобретению. В одном варианте осуществления клетка представляет собой внепеченочную клетку, необязательно клетку ЦНС.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способу снижения экспрессии гена-мишени HTT у субъекта, включающему введение субъекту двухцепочечного РНКи средства согласно настоящему изобретению.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способу лечения субъекта с нарушением ЦНС, включающему введение субъекту терапевтически эффективного количества двухцепочечного HTTнаправленного РНКи средства согласно изобретению, осуществляя, таким образом, лечение субъекта. Типичные нарушения ЦНС, которые можно лечить способом согласно изобретению, включают болезнь Хантингтона.

В одном варианте осуществления двухцепочечное РНКи средство вводят интратекально. При интратекальном введении двухцепочечного РНКи средства способ может снижать экспрессию генамишени HTT в ткани головного мозга (например, полосатого тела) или позвоночника, например в коре головного мозга, мозжечке, шейном отделе позвоночника, поясничном отделе позвоночника и грудном отделе позвоночника.

Для удобства изложения составы, композиции и способы в этом разделе обсуждаются в основном в отношении модифицированных миРНК соединений. Однако следует понимать, что такие составы, композиции и способы могут применяться на практике с другими миРНК соединениями, например, с немодифицированными миРНК соединениями, при этом такая практика находится в рамках настоящего изобретения. Композиция, включающая РНКи средство, может быть доставлена субъекту разными путями. Иллюстративные пути введения включают: интратекальный, внутривенный, наружный, ректальный, анальный, вагинальный, назальный, ингаляционный и глазной.

РНКи средства согласно изобретению могут быть включены в фармацевтические композиции, подходящие для введения. Такие композиции обычно включают один или более типов РНКи средства и фармацевтически приемлемый носитель. При использовании в настоящем документе термин фармацевтически приемлемый носитель подразумевает включение любых возможных растворителей, дисперсионных сред, покрытий, антибактериальных и противогрибковых средств, изотонических веществ и веществ, замедляющих всасывание, и т.п., совместимых с фармацевтическим введением. Применение таких сред и средств для фармацевтически активных веществ хорошо известно в уровне техники. За исключением случаев, когда какие-либо обычные среды или средства несовместимы с активным соединением, предусмотрено их применение в композициях. В композиции также могут быть включены дополнительные активные соединения.

Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению можно вводить несколькими способами в зависимости от того, требуется ли местное или системное лечение, а также от подвергаемой лечению области. Введение может быть наружным (включая глазное, вагинальное, ректальное, интраназальное, трансдермальное), пероральным или парентеральным. Парентеральное введение включает внутривенную капельную, подкожную, внутрибрюшинную или внутримышечную инъекцию, интратекальное или интравентрикулярное введение.

Путь и участок введения могут быть выбраны для улучшения направленной доставки. Например, для направленной доставки в мышечные клетки логичным выбором будет внутримышечная инъекция в представляющие интерес мышцы. Направленное воздействие на клетки легких можно осуществлять путем введения РНКи средства в аэрозольной форме. На эндотелиальные клетки сосудов можно направленно воздействовать путем нанесения покрытия с РНКи средством на баллонный катетер и механического введения РНК.

Составы для наружного применения могут включать трансдермальные пластыри, мази, лосьоны, кремы, гели, капли, суппозитории, спреи, жидкости и порошки. Могут быть необходимы или желательны обычные фармацевтические носители, водные, порошковые или масляные основы, загустители и т.п. Также могут быть полезны презервативы с покрытием, перчатки и т.п.

Композиции для перорального введения включают порошки или гранулы, суспензии или растворы в воде, сиропы, настойки или неводные среды, таблетки, капсулы, леденцы или пастилки. В случае таблеток носители, которые могут использоваться, включают лактозу, цитрат натрия и соли фосфорной кислоты. В таблетках обычно используются различные разрыхлители, такие как крахмал, и смазывающие вещества, такие как стеарат магния, лаурилсульфат натрия и тальк. В случае перорального введения в форме капсул полезными разбавителями являются лактоза и высокомолекулярные полиэтиленгликоли.

- 70 048552

Если для перорального применения требуются водные суспензии, композиции нуклеиновых кислот можно комбинировать с эмульгирующими и суспендирующими веществами. При необходимости могут быть добавлены некоторые подсластители или ароматизаторы.

Композиции для интратекального или интравентрикулярного введения могут включать стерильные водные растворы, которые также могут содержать буферы, разбавители и другие подходящие добавки.

Составы для парентерального введения могут включать стерильные водные растворы, которые также могут содержать буферы, разбавители и другие подходящие добавки. Интравентрикулярная инъекция может быть облегчена при помощи интравентрикулярного катетера, например, подсоединенного к резервуару. Для внутривенного применения можно контролировать общую концентрацию растворенных веществ, чтобы препарат был изотоническим.

В одном варианте осуществления введение композиции миРНК соединения, например, двухцепочечного миРНК соединения или оциРНК соединения, является парентеральным, например, внутривенным (например, струйно или в виде распределяемой инфузии), внутрикожным, внутрибрюшинным, внутримышечным, интратекальным, интравентрикулярным, внутричерепным, подкожным, чресслизистым, трансбуккальным, подъязычным, эндоскопическим, ректальным, пероральным, вагинальным, наружным, ингаляционным, интраназальным, уретральным или глазным. Введение может осуществлять субъект или другое лицо, например, лицо, предоставляющее медицинские услуги. Лекарство может поставляться в установленных дозах или в дозаторе, который выдает установленную дозу. Выбранные способы доставки более подробно обсуждаются ниже.

А. Интратекальное введение.

В одном варианте осуществления двухцепочечное РНКи средство доставляют путем интратекальной инъекции (т.е. инъекции в спинномозговую жидкость, которая омывает ткань головного и спинного мозга). Интратекальная инъекция РНКи средств в спинномозговую жидкость может быть выполнена в виде болюсной инъекции или с помощью мининасосов, которые могут быть имплантированы под кожу, обеспечивая регулярное и постоянное поступление миРНК в спинномозговую жидкость. Спинномозговая жидкость циркулирует из хороидного сплетения, где она вырабатывается, вниз вокруг спинного мозга и ганглиев задних корешков, а затем вверх, мимо мозжечка и через кору к арахноидальным грануляциям, где жидкость может выходить из ЦНС, поэтому, в зависимости от размера, стабильности и растворимости вводимых соединений, молекулы, доставляемые интратекально, могут поражать мишени во всей ЦНС.

В некоторых вариантах осуществления интратекальное введение осуществляется с помощью насоса. Насос может представлять собой хирургически имплантированный осмотический насос. В одном варианте осуществления осмотический насос имплантируют в субарахноидальное пространство спинномозгового канала для облегчения интратекального введения.

В некоторых вариантах осуществления интратекальное введение осуществляют с помощью системы интратекальной доставки фармацевтического препарата, включающей резервуар, содержащий определенный объем фармацевтического средства, и насос, предназначенный для доставки части фармацевтического средства, содержащегося в резервуаре. Более подробную информацию об этой системе интратекальной доставки можно найти в заявке WO 2015/116658, которая полностью включена посредством отсылки.

Количество интратекально вводимых РНКи средств может варьировать в зависимости от конкретного гена-мишени, при этом подходящее количество, которое нужно применять, может быть определено индивидуально для каждого гена-мишени. Обычно такое количество составляет от 10 мкг до 2 мг, предпочтительно от 50 до 1500 мкг, более предпочтительно от 100 до 1000 мкг.

В. Кодируемые вектором РНКи средства согласно изобретению.

РНКи средства, направленные на ген HTT, могут экспрессироваться с единиц транскрипции, встроенных в векторы ДНК или РНК (см., например, Couture, A, et al., TIG. (1996), 12:5-10; WO 00/22113, WO 00/22114 и US 6,054,299). Экспрессия предпочтительно является долговременной (месяцы или дольше) в зависимости от конкретной используемой конструкции и типа ткани или клетки-мишени. Эти трансгены можно вводить в виде линейной конструкции, кольцевой плазмиды или вирусного вектора, который может быть интегрируемым или неинтегрируемым вектором. Трансген также может быть сконструирован так, чтобы он мог наследоваться в виде внехромосомной плазмиды (Gassmann, et al. (1995) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:1292).

Индивидуальная цепь или цепи РНКи средства могут транскрибироваться с промотора на векторе экспрессии. Если две отдельные цепи нужно экспрессировать для получения, например, дцРНК, два отдельных вектора экспрессии можно вводить совместно (например, путем трансфекции или инфицирования) в клетку-мишень. В альтернативе каждая отдельная цепь дцРНК может транскрибироваться промоторами, каждый из которых расположен на одной и той же экспрессионной плазмиде. В одном варианте осуществления дцРНК экспрессируется в виде полинуклеотидов с инвертированными повторами, соединенных линкерной полинуклеотидной последовательностью, при этом дцРНК имеет структуру стебля и петли.

Векторы для экспрессии РНКи средства обычно представляют собой ДНК плазмиды или вирусные

- 71 048552 векторы. Векторы экспрессии, совместимые с эукариотическими клетками, предпочтительно совместимые с клетками позвоночных, могут использоваться для получения рекомбинантных конструкций для экспрессии РНКи средства, как описано в настоящем документе. Доставка векторов, экспрессирующих РНКи средство, может быть системной, например, путем внутривенного или внутримышечного введения, путем введения в клетки-мишени, эксплантированные у пациента, с последующим повторным введением в организм пациента, или любым другим способом, который позволяет осуществить введение в нужную клетку-мишень.

Вирусные векторные системы, которые могут использоваться со способами и композициями, описанными в настоящем документе, включают, без ограничения перечисленными: (а) аденовирусные векторы; (b) ретровирусные векторы, в том числе, без ограничения, лентивирусные векторы, вирус лейкоза мышей Молони и т.д.; (с) векторы на основе аденоассоциированного вируса; (d) векторы на основе вируса простого герпеса; (е) векторы на основе SV 40; (f) полиомавирусные векторы; (g) папилломавирусные векторы; (h) пикорнавирусные векторы; (i) поксвирусные векторы, такие как ортопоксвирусы, например, векторы на основе вируса осповакцины, или авипоксвирусы, например, вирусы оспы канареек или оспы кур; и (j) хелпер-зависимый или выпотрошенный аденовирус. Также могут использоваться репликационно-дефектные вирусы. Различные векторы могут интегрироваться или могут не интегрироваться в геном клеток. При необходимости конструкции могут включать вирусные последовательности для трансфекции. В альтернативе конструкция может быть включена в векторы, способные к эписомной репликации, например, векторы EPV и EBV. Конструкции для рекомбинантной экспрессии РНКи средства обычно требуют регуляторных элементов, например, промоторов, энхансеров и т.д., чтобы обеспечить экспрессию РНКи средства в клетках-мишенях. Другие аспекты, которые следует учитывать в отношении векторов и конструкций, известны в уровне техники.

VI. Фармацевтические композиции согласно изобретению.

Настоящее описание также включает фармацевтические композиции и составы, которые включают РНКи средства согласно изобретению. В одном варианте осуществления в настоящем документе предложены фармацевтические композиции, содержащие РНКи средство, как описано в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтические композиции, содержащие РНКи средство, могут применяться при лечении заболевания или нарушения, связанного с экспрессией или активностью HTT, например, болезни Хантингтона.

В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции согласно изобретению являются стерильными. В другом варианте осуществления фармацевтические композиции согласно изобретению не содержат пирогенов или являются апирогенными.

Такие фармацевтические композиции изготавливают в соответствии со способом доставки. Одним из примеров являются композиции, изготовленные для системного введения посредством парентеральной доставки, например, внутривенной (в/в), внутримышечной (в/м) или подкожной (п/к) доставки. Другим примером являются композиции, изготовленные для прямой доставки в ЦНС, например, путем интратекальной или интравитреальной инъекции, необязательно путем инфузии в головной мозг (например, полосатое тело), такой как непрерывная инфузия с помощью инфузионного насоса.

Фармацевтические композиции согласно изобретению можно вводить в дозах, достаточных для ингибирования экспрессии гена HTT. Как правило, подходящая доза РНКи средства согласно изобретению будет находиться в диапазоне от приблизительно 0,001 до приблизительно 200,0 мг на килограмм массы тела реципиента в сутки, как правило, в диапазоне примерно от 1 до 50 мг на килограмм массы тела в сутки.

Схема введения повторных доз может включать введение терапевтического количества РНКи средства на регулярной основе, например, от одного раза в месяц до одного раза в шесть месяцев. В некоторых вариантах осуществления РНКи средство вводят от приблизительно одного раза в квартал (т.е. примерно один раз каждые три месяца) до приблизительно двух раз в год.

После начальной схемы лечения (например, насыщающей дозы) процедуры лечения можно проводить реже.

В других вариантах осуществления однократная доза фармацевтических композиций может быть длительно действующей, при этом последующие дозы вводят с интервалами не больше 1, 2, 3 или 4 или более месяцев. В некоторых вариантах осуществления изобретения однократную дозу фармацевтических композиций согласно изобретению вводят один раз в месяц. В других вариантах осуществления изобретения однократную дозу фармацевтических композиций согласно изобретению вводят от одного раза в квартал до двух раз в год.

Специалисту в данной области техники будет очевидно, что некоторые факторы могут влиять на дозировку и график введения, необходимые для эффективного лечения субъекта, включая, без ограничения, тяжесть заболевания или нарушения, предыдущее лечение, общее состояние здоровья или возраст субъекта и другие имеющиеся заболевания. Более того, лечение субъекта терапевтически эффективным количеством композиции может включать однократное лечение или серию лечений.

Достижения в области генетики мышей позволили создать ряд моделей на мышах для изучения различных заболеваний человека, таких как БХ, при лечении которых могло бы быть эффективным сни

- 72 048552 жение экспрессии HTT. Такие модели можно применять для тестирования РНКи средств in vivo, а также для определения терапевтически эффективной дозы. Подходящие модели на грызунах известны в уровне техники и включают, например, модели, описанные, например, в публикациях Cepeda, et al. (ASN Neuro (2010) 2(2):e00033) и Pouladi, et al. (Nat Reviews (2013) 14:708).

Фармацевтические композиции согласно изобретению можно вводить несколькими способами в зависимости от того, требуется ли местное или системное лечение, и от области, подлежащей лечению. Введение может быть наружным (например, с помощью трансдермального пластыря), ингаляционным, например, путем ингаляции или инсуффляции порошков или аэрозолей, в том числе с помощью небулайзера; внутритрахеальным, интраназальным, эпидермальным и трансдермальным, пероральным или парентеральным. Парентеральное введение включает внутривенную, внутриартериальную, подкожную, внутрибрюшинную или внутримышечную инъекцию или инфузию; подкожное, например с помощью имплантированного устройства; или внутричерепное, например, внутрипаренхиматозное, интратекальное или интравентрикулярное введение.

РНКи средства могут быть доставлены таким образом, чтобы направленно воздействовать на конкретную ткань, такую как ЦНС (например, нейрональная, глиальная или сосудистая ткань головного мозга).

Фармацевтические композиции и составы для наружного применения могут включать трансдермальные пластыри, мази, лосьоны, кремы, гели, капли, суппозитории, спреи, жидкости и порошки. Могут быть необходимы или желательны обычные фармацевтические носители, водные, порошкообразные или масляные основы, загустители и т.п. Также могут использоваться презервативы с покрытием, перчатки и т.п. Подходящие составы для наружного применения включают составы, в которых РНКи средства, представленные в изобретении, находятся в смеси с веществом для наружной доставки, таким как липиды, липосомы, жирные кислоты, сложные эфиры жирных кислот, стероиды, хелатообразующие и поверхностно-активные вещества. Подходящие липиды и липосомы включают нейтральные (например, диолеоилфосфатидил DOPE этаноламин, димиристоилфосфатидилхолин DMPC, дистеаролифосатидилхолин), отрицательно заряженные (например, димиристоилфосфатидилглицерин DMPG) и катионные (например, диолеоилтетраметиламинопропил DOTAP и диолеоилфосфатидилэтаноламин DOTMA). РНКи средства, представленные в изобретении, могут быть инкапсулированы в липосомы или могут образовывать с ними комплексы, в частности с катионными липосомами. В альтернативе РНКи средства могут образовывать комплексы с липидами, в частности, с катионными липидами. Подходящие жирные кислоты и сложные эфиры включают, без ограничения перечисленными, арахидоновую кислоту, олеиновую кислоту, эйкозановую кислоту, лауриновую кислоту, каприловую кислоту, каприновую кислоту, миристиновую кислоту, пальмитиновую кислоту, стеариновую кислоту, линолевую кислоту, линоленовую кислоту, дикапрат, трикапрат, моноолеин, дилаурин, глицерил-1-монокапрат, 1-додецилазациклогептан-2-он, ацилкарнитин, ацилхолин или сложный Cl_-20-алкиловый эфир (например, изопропилмиристат, IPM), моноглицерид, диглицерид или их фармацевтически приемлемую соль. Составы для наружного применения подробно описаны в патенте США 6747014, который включен в настоящий документ посредством отсылки.

А. Составы РНКи средств, включающие мембранные молекулярные ансамбли.

РНКи средство для применения в композициях и способах согласно изобретению может быть изготовлено в составе для доставки в виде мембранного молекулярного ансамбля, например липосомы или мицеллы. При использовании в настоящем документе термин липосома относится к везикуле, состоящей из амфифильных липидов, расположенных по меньшей мере в одном бислое, например в одном бислое или во множестве бислоев. Липосомы включают однослойные и многослойные везикулы, которые имеют мембрану, сформированную из липофильного материала, и водное внутреннее пространство. Водная часть содержит композицию РНКи средства. Липофильный материал изолирует водное внутреннее пространство от внешней водной среды, которая обычно не включает композицию РНКи средства, хотя в некоторых примерах может включать. Липосомы могут применяться для переноса и доставки активных ингредиентов в участок действия. Поскольку липосомальная мембрана структурно подобна биологическим мембранам, при нанесении липосом на ткань липосомальный бислой сливается с бислоем клеточных мембран. По мере слияния липосомы и клетки внутреннее водное содержимое, которое включает РНКи средство, доставляется в клетку, где РНКи средство может специфически связываться с РНКмишенью и может опосредовать РНКи. В некоторых случаях липосомы также специально направлены, например, для направления РНКи средства в определенные типы клеток.

Липосомы, содержащие РНКи средство, могут быть получены различными способами. В одном примере липидный компонент липосомы растворяют в детергенте, при этом образуются мицеллы с липидным компонентом. Например, липидный компонент может быть амфипатическим катионным липидом или липидным конъюгатом. Детергент может иметь высокую критическую концентрацию мицеллообразования и может быть неионогенным. Примеры детергентов включают холат, CHAPS, октилглюкозид, дезоксихолат и лауроилсаркозин. Затем препарат РНКи средства добавляют к мицеллам, которые включают липидный компонент. Катионные группы липида взаимодействуют с РНКи средством и конденсируются вокруг РНКи средства с образованием липосомы. После конденсации детергент удаляют,

- 73 048552 например при диализе, с получением липосомного препарата РНКи средства.

При необходимости соединение-носитель, которое способствует конденсации, могут добавлять во время реакции конденсации, например, путем контролируемого добавления. Например, соединениеноситель может быть полимером, отличным от нуклеиновой кислоты (например, спермином или спермидином). Также pH можно регулировать до значений, способствующих конденсации.

Способы получения стабильных носителей для доставки полинуклеотидов, которые включают комплекс полинуклеотида/катионного липида в качестве структурных компонентов носителя для доставки, дополнительно описаны, например, в заявке WO 96/37194, полное содержание которой включено в настоящий документ посредством отсылки. Образование липосом также может включать один или более аспектов иллюстративных способов, описанных в Feigner, P.L. et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8:7413-7417; патенте США 4897355; патенте США 5171678; Bangham et al. (1965) M. Mol Biol. 23:238; Olson et al. (1979) Biochim. Biophys. Acta 557:9; Szoka et al. (1978) Proc. Natl. Acad. Sci. 75: 4194; Mayhew et al. (1984) Biochim. Biophys. Acta 775:169; Kim et al. (1983) Biochim. Biophys. Acta 728:339; и Fukunaga et al. (1984) Endocrinol 115:757. Обычно используемые методики получения липидных агрегатов подходящего размера для применения в качестве средств доставки включают обработку ультразвуком и замораживание-оттаивание с экструзией (см., например, Mayer et al. (1986) Biochim. Biophys. Acta 858:161). Микрофлюидизацию можно использовать, когда нужны однородно малые (от 50 до 200 нм) и относительно единообразные агрегаты (Mayhew et al. (1984) Biochim. Biophys. Acta 775:169). Эти способы легко можно адаптировать для упаковки препаратов РНКи средства в липосомы.

Липосомы подразделяются на два широких класса. Катионные липосомы представляют собой положительно заряженные липосомы, которые взаимодействуют с отрицательно заряженными молекулами нуклеиновой кислоты с образованием стабильного комплекса. Положительно заряженный комплекс нуклеиновой кислоты/липосомы связывается с отрицательно заряженной поверхностью клетки и интернализируется в эндосоме. Из-за кислого pH внутри эндосом липосомы разрываются, высвобождая свое содержимое в цитоплазму клетки (Wang et al. (1987) Biochem. Biophys. Res. Commun., 147:980-985).

Липосомы, которые чувствительны к pH или отрицательно заряжены, захватывают нуклеиновые кислоты, а не образуют с ними комплексы. Поскольку и нуклеиновая кислота, и липид заряжены одинаково, происходит скорее отталкивание, чем образование комплекса. Тем не менее, некоторое количество нуклеиновой кислоты находится внутри водной среды таких липосом. Чувствительные к pH липосомы использовались для доставки нуклеиновых кислот, кодирующих ген тимидинкиназы, в клеточные монослои в культуре. Экспрессию экзогенного гена обнаруживали в клетках-мишенях (Zhou et al. (1992) Journal of Controlled Release, 19:269-274).

Один из основных типов липосомной композиции включает фосфолипиды, отличные от природного фосфатидилхолина. Нейтральные липосомные композиции, например, могут быть получены из димиристоилфосфатидилхолина (DMPC) или дипальмитоилфосфатидилхолина (DPPC). Анионные липосомальные композиции обычно образуются из димиристоилфосфатидилглицерина, тогда как анионные фузогенные липосомы образуются главным образом из диолеоилфосфатидилэтаноламина (DOPE). Другой тип липосомной композиции образуется из фосфатидилхолина (ФХ), такого как, например, соевый ФХ и яичный ФХ. Другой тип образуется из смесей фосфолипидов, фосфатидилхолина или холестерина.

Примеры других способов введения липосом в клетки in vitro и in vivo включают патент США 5283185; патент США 5171678; WO 94/00569; WO 93/24640; WO 91/16024; Feigner, (1994)7. Biol. Chem. 269:2550; Nabel, (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. 90:11307; Nabel, (1992) Human Gene Ther. 3:649; Gershon, (1993) Biochem. 32:7143; и Strauss, (1992) EMBO J. 11:417.

Неионогенные липосомные системы также были исследованы для определения их применимости для доставки лекарственных средств в кожу, в частности, системы, содержащие неионогенное поверхностно-активное вещество и холестерин. Неионогенные липосомные составы, содержащие Novasome™ I (глицерилдилаурат/холестерин/полиоксиэтилен-10-стеариловый эфир) и Novasome™ II (глицерилдистеарат/холестерин/полиоксиэтилен-10-стеариловый эфир), были использованы для доставки циклоспоринаА в слой дермы кожи мышей. Результаты показали, что такие неионогенные липосомные системы эффективно облегчают отложение циклоспорина А в разных слоях кожи (Hu et al. (1994) S.T.P.Pharma. Sci., 4(6):466).

Липосомы также включают стерически стабилизированные липосомы, термин, который при использовании в настоящем документе относится к липосомам, включающим один или больше специализированных липидов, которые при включении в липосомы приводят к увеличению периода циркуляции по сравнению с липосомами, не содержащими таких специализированных липидов. Примерами стерически стабилизированных липосом являются липосомы, в которых часть везикулообразующей липидной части липосомы (А) включает один или более гликолипидов, таких как моносиалоганглиозид GM1, или (В) дериватизирована одним или больше гидрофильными полимерами, такими как молекула полиэтиленгликоля (ПЭГ). Без ограничения какой-либо конкретной теорией, в данной области техники считается, что по меньшей мере для стерически стабилизированных липосом, содержащих ганглиозиды, сфингомиелин или липиды, дериватизированные ПЭГ, увеличенный полупериод существования таких стери

- 74 048552 чески стабилизированных липосом обусловлен снижением захвата клетками ретикулоэндотелиальной системы (RES) (Allen et al. (1987) FEBS Letters, 223:42; Wu et al. (1993) Cancer Research, 53:3765).

В уровне техники известны различные липосомы, содержащие один или более гликолипидов. В публикации Papahadjopoulos et al. (Ann. N.Y. Acad. Sci., (1987), 507:64) сообщается о способности моносиалоганглиозида GM1, галактоцереброзида сульфата и фосфатидилинозита улучшать полупериод существования липосом в крови. Эти результаты были объеснены в публикации Gabizon et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., (1988), 85:6949). В патенте США 4837028 и WO 88/04924 (оба выданы Allen et al.) раскрыты липосомы, включающие (1) сфингомиелин и (2) ганглиозид GM1 или сульфатный эфир галактоцереброзида. В патенте США 5543152 (Webb et al.) описаны липосомы, включающие сфингомиелин. Липосомы, включающие 1,2-sn-димиристоилфосфатидилхолин, раскрыты в WO 97/13499 (Lim et al.).

В одном варианте осуществления используются катионные липосомы. Преимущество катионных липосом состоит в том, что они способны сливаться с клеточной мембраной. Некатионные липосомы, хотя и не способны так же эффективно сливаться с плазматической мембраной, захватываются макрофагами in vivo и могут использоваться для доставки РНКи средств в макрофаги.

Дополнительные преимущества липосом включают следующее: липосомы, полученные из природных фосфолипидов, являются биосовместимыми и биоразлагаемыми; липосомы могут включать широкий спектр водорастворимых и жирорастворимых лекарственных средств; липосомы могут предохранять инкапсулированные РНКи средства в их внутренних компартментах от метаболизма и деградации (Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, volume 1, p. 245). Важными факторами при изготовлении липосомных составов являются поверхностный заряд липидов, размер везикул и водный объем липосом.

Положительно заряженный синтетический катионный липид, №[1-(2,3-диолеилокси)пропил]N.N.N-триметиламмонийхлорид (DOTMA), можно использовать для формирования малых липосом, которые спонтанно взаимодействуют с нуклеиновой кислотой с образованием комплексов липидовнуклеиновых кислот, которые способны сливаться с отрицательно заряженными липидами клеточных мембран клеток культуры тканей, что приводит к доставке РНКи средства (см., например, Feigner, P.L. et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci., USA 8:7413-7417 и патент США 4897355 в отношении описания DOTMA и его применения с ДНК).

Аналог DOTMA, 1,2-бис(олеоилокси)-3-(триметиламмоний)пропан (DOTAP), можно использовать в комбинации с фосфолипидом для образования ДНК-комплексообразующих везикул. Lipofectin™ (Bethesda Research Laboratories, Gaithersburg, Md.) является эффективным средством для доставки высокоанионных нуклеиновых кислот в живых клетки культуры тканей, которые включают положительно заряженные липосомы DOTMA, которые спонтанно взаимодействуют с отрицательно заряженными полинуклеотидами с образованием комплексов. Если используется достаточное количество положительно заряженных липосом, суммарный заряд образующихся комплексов также является положительным. Полученные таким способом положительно заряженные комплексы спонтанно прикрепляются к отрицательно заряженным клеточным поверхностям, сливаются с плазматической мембраной и эффективно доставляют функциональные нуклеиновые кислоты, например, в клетки культур тканей. Другой коммерчески доступный катионный липид, 1,2-бис(олеоилокси)-3,3-(триметиламмоний)пропан (DOTAP) (Boehringer Mannheim, Indianapolis, Indiana), отличается от DOTMA тем, что олеоиловые группы связаны сложноэфирной связью, а не простыми эфирными связями.

Другие зарегистрированные катионные липидные соединения включают такие, которые были конъюгированы с различными молекулами, включая, например, карбоксиспермин, который был конъюгирован с одним из двух типов липидов, и включает такие соединения, как 5-карбоксиспермилглицин диоктаолеоиламид (DOGS) (Transfectam™, Promega, Madison, Wisconsin) и дипальмитоилфосфатидилэтаноламин-5-карбоксиспермиламид (DPPES) (см., например, патент США 5171678).

Другой конъюгат катионного липида включает дериватизацию липида холестерином (DC-Choi), который был изготовлен в виде липосом в комбинации с DOPE (см. Gao, X. and Huang, L., (1991) Biochim. Biophys. Res. Commun. 179:280). Сообщалось, что липополилизин, полученный при конъюгировании полилизина с DOPE, эффективен для трансфекции в присутствии сыворотки (Zhou, X. et al. (1991) Biochim. Biophys. Acta 1065:8). В случае некоторых клеточных линий такие липосомы, содержащие конъюгированные катионные липиды, как утверждается, проявляют меньшую токсичность и обеспечивают более эффективную трансфекцию, чем композиции, содержащие DOTMA. Другие коммерчески доступные катионные липидные продукты включают DMRIE и DMRIE-HP (Vical, La Jolla, California) и липофектамин (DOSPA) (Life Technology, Inc., Gaithersburg, Maryland). Другие катионные липиды, подходящие для доставки олигонуклеотидов, описаны в WO 98/39359 и WO 96/37194.

Липосомные составы особенно подходят для наружного применения, липосомы обладают рядом преимуществ по сравнению с другими составами. Такие преимущества включают снижение побочных эффектов, связанных с высокой системной абсорбцией вводимого лекарственного средства, повышенное накопление вводимого лекарственного средства в нужной мишени и возможность введения РНКи средства в кожу. В некоторых вариантах реализации липосомы используются для доставки РНКи средства в

- 75 048552 клетки эпидермиса, а также для усиления проникновения РНКи средства в ткани дермы, например, в кожу. Например, липосомы можно применять наружно. В литературе была описана наружная доставка лекарственных средств в составе липосом на кожу (см., например, Weiner et al. (1992) Journal of Drug Targeting, vol. 2,405-410 and du Plessis et al. (1992) Antiviral Research, 18:259-265; Mannino, R.J. and FouldFogerite, S., (1998) Biotechniques 6:682-690; Itani, T. et al. (1987) Gene 56:267-276; Nicolau, С. et al. (1987) Meth. Enzymol. 149:157-176; Straubinger, R.M. and Papahadjopoulos, D. (1983) Мей. Enzymol. 101:512-527; Wang, С Y. and Huang, L., (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:7851-7855).

Неионогенные липосомные системы также были исследованы для определения их применимости для доставки лекарственных средств в кожу, в частности системы, включающие неионогенное поверхностно-активное вещество и холестерин. Неионогенные липосомные составы, содержащие Novasome I (глицерилдилаурат/холестерин/полиоксиэтилен-10-стеариловый эфир) и Novasome II (глицерилдистеарат/холестерин/полиоксиэтилен-10-стеариловый эфир), были использованы для доставки лекарственного средства в слой дермы кожи мышей. Такие составы с РНКи средством могут применяться для лечения дерматологического нарушения.

Липосомы, включающие РНКи средства, можно сделать сильно деформируемыми. Такая деформируемость может позволить липосомам проникать через поры, которые меньше среднего радиуса липосомы. Например, трансферосомы представляют собой тип деформируемых липосом. Трансферосомы могут быть получены путем добавления активаторов поверхности раздела, обычно поверхностно-активных веществ, в стандартную липосомную композицию. Трансферосомы, которые включают РНКи средство, могут быть доставлены, например, подкожно при инфицировании для доставки РНКи средства в кератиноциты кожи. Чтобы проникнуть через неповрежденную кожу млекопитающего, липидные везикулы должны пройти через серию мелких пор, каждая диаметром меньше 50 нм, под влиянием подходящего трансдермального градиента. Кроме того, благодаря липидным свойствам эти трансферосомы могут быть самооптимизирующимися (адаптирующимися к форме пор, например, в коже), самовосстанавливающимися и часто достигающими своих мишеней без фрагментации, а часто и самонагружающимися.

Другие составы, соответствующие настоящему изобретению, описаны в предварительных заявках на патент США 61/018616, поданной 2 января 2008 года; 61/018611, поданной 2 января 2008 года; 61/039748, поданной 26 марта 2008 года; 61/047087, поданной 22 апреля 2008 года, и 61/051528, поданной 8 мая 2008 года. В заявке PCT номер PCT/US2007/080331, поданной 3 октября 2007 года, также описаны составы, подходящие для настоящего изобретения.

Трансферосомы, еще один тип липосом, представляют собой сильно деформируемые липидные агрегаты, которые являются привлекательными кандидатами в качестве носителей для доставки лекарственных средств. Трансферосомы можно описать как липидные капли, которые настолько сильно деформируются, что могут легко проникать через поры, которые меньше самой капли. Трансферосомы адаптируются к среде, в которой они используются, например, они самооптимизируются (адаптируются к форме пор кожи), самовосстанавливаются, часто достигают своих мишеней без фрагментации и часто самонагружаются. Для получения трансферосом к стандартной липосомной композиции можно добавлять активаторы поверхности раздела, обычно поверхностно-активные вещества. Трансферосомы использовались для доставки сывороточного альбумина в кожу. Было показано, что опосредованная трансферосомами доставка сывороточного альбумина так же эффективна, как и подкожная инъекция раствора, содержащего сывороточный альбумин.

Поверхностно-активные вещества находят широкое применение в таких составах, как описанные в настоящем документе, особенно в эмульсиях (включая микроэмульсии) и липосомах. Наиболее распространенный способ классификации и ранжирования свойств многих различных типов поверхностноактивных веществ, как природных, так и синтетических, заключается в использовании гидрофильнолипофильного баланса (ГЛБ). Природа гидрофильной группы (также известной как головка) обеспечивает наиболее полезные средства для классификации различных поверхностно-активных веществ, используемых в фармацевтических составах (Rieger, в Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, p. 285).

Если молекула поверхностно-активного вещества не ионизируется, оно классифицируется как неионогенное поверхностно-активное вещество. Неионогенные поверхностно-активные вещества находят широкое применение в фармацевтических и косметических продуктах и могут использоваться в широком диапазоне значений pH. Как правило, их значения ГЛБ колеблются от 2 до приблизительно 18 в зависимости от их структуры. Неионогенные поверхностно-активные вещества включают неионогенные сложные эфиры, такие как сложные эфиры этиленгликоля, сложные эфиры пропиленгликоля, сложные эфиры глицерина, сложные эфиры полиглицерина, сложные эфиры сорбитана, сложные эфиры сахарозы и этоксилированные сложные эфиры. К этому классу также относятся неионогенные алканоламиды и простые эфиры, такие как этоксилаты жирных спиртов, пропоксилированные спирты и этоксилированные/пропоксилированные блок-полимеры. Полиоксиэтилированные поверхностно-активные вещества являются наиболее популярными представителями класса неионогенных поверхностно-активных веществ.

Если молекула поверхностно-активного вещества несет отрицательный заряд при ее растворении

- 76 048552 или диспергировании в воде, то поверхностно-активное вещество классифицируют как анионное. Анионные поверхностно-активные вещества включают карбоксилаты, такие как мыла, ациллактилаты, ациламиды аминокислот, сложные эфиры серной кислоты, такие как алкилсульфаты и этоксилированные алкилсульфаты, сульфонаты, такие как алкилбензолсульфонаты, ацилизетионаты, ацилтаураты и сульфосукцинаты, а также фосфаты. Наиболее важными представителями класса анионных поверхностноактивных веществ являются алкилсульфаты и мыла.

Если молекула поверхностно-активного вещества несет положительный заряд при растворении или диспергировании в воде, то поверхностно-активное вещество классифицируют как катионное. Катионные поверхностно-активные вещества включают соли четвертичного аммония и этоксилированные амины. Соли четвертичного аммония являются наиболее часто используемыми представителями этого класса.

Если молекула поверхностно-активного вещества способна нести как положительный, так и отрицательный заряд, то тогда поверхностно-активное вещество классифицируют как амфотерное. Амфотерные поверхностно-активные вещества включают производные акриловой кислоты, замещенные алкиламиды, N-алкилбетаины и фосфатиды.

Применение поверхностно-активных веществ в лекарственных препаратах, составах и эмульсиях было рассмотрено в литературе (Rieger, в Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, стр. 285).

РНКи средство для применения в способах настоящего изобретения также может быть представлено в виде мицеллярных составов. Мицеллы определены в настоящем документе как определенный тип молекулярного ансамбля, в котором амфипатические молекулы расположены в сферической структуре, при этом все гидрофобные части молекул направлены внутрь, оставляя гидрофильные части в контакте с окружающей водной фазой. Обратное расположение существует в случае, если внешняя среда гидрофобная.

Смешанный мицеллярный состав, подходящий для доставки через трансдермальные мембраны, может быть изготовлен путем смешивания водного раствора композиции миРНК, С8-С22 алкилсульфата щелочного металла и мицеллообразующих соединений. Примеры мицеллообразующих соединений включают лецитин, гиалуроновую кислоту, фармацевтически приемлемые соли гиалуроновой кислоты, гликолевую кислоту, молочную кислоту, экстракт ромашки, экстракт огурца, олеиновую кислоту, линолевую кислоту, линоленовую кислоту, моноолеин, моноолеаты, монолаураты, масло бурачника, масло примулы вечерней, ментол, тригидроксиоксохоланилглицин и его фармацевтически приемлемые соли, глицерин, полиглицерин, лизин, полилизин, триолеин, полиоксиэтиленовые эфиры и их аналоги, полидоканолалкиловые эфиры и их аналоги, хенодезоксихолат, дезоксихолат и их смеси. Соединения, образующие мицеллы, можно добавлять одновременно или после добавления алкилсульфата щелочного металла. Смешанные мицеллы будут образовываться практически при любом типе смешивания ингредиентов, кроме энергичного перемешивания, для получения мицелл меньшего размера.

В одном способе изготавливают первую мицеллярную композицию, которая содержит композицию миРНК и, по меньшей мере, алкилсульфат щелочного металла. Затем первую мицеллярную композицию смешивают по меньшей мере с тремя мицеллообразующими соединениями с образованием смешанной мицеллярной композиции. В другом способе мицеллярную композицию изготавливают путем смешивания композиции миРНК, алкилсульфата щелочного металла и по меньшей мере одного из мицеллообразующих соединений с последующим добавлением остальных мицеллообразующих соединений при интенсивном перемешивании.

В смешанную мицеллярную композицию можно добавлять фенол или м-крезол для стабилизации состава и предохранения от роста бактерий. В альтернативе к мицеллообразующим ингредиентам можно добавить фенол или м-крезол. Изотоническое вещество, такое как глицерин, также можно добавлять после образования смешанной мицеллярной композиции.

Для доставки мицеллярного состава в виде спрея состав может быть помещен в аэрозольный дозатор, после чего дозатор заправляют пропеллентом. Пропеллент, находящийся под давлением, находится в дозаторе в жидком виде. Соотношения ингредиентов подобраны таким образом, чтобы водная и пропеллентная фазы были единым целым, т.е. присутствовала одна фаза. При наличии двух фаз дозатор необходимо встряхнуть перед выпуском порции содержимого, например, через дозирующий клапан. Отмеренная доза фармацевтического препарата выбрасывается из дозирующего клапана в виде тонкой струи.

Пропелленты могут включать водородсодержащие хлорфторуглероды, водородсодержащие фторуглероды, диметиловый эфир и диэтиловый эфир. В некоторых вариантах осуществления может использоваться фреон R134a (1,1,1,2-тетрафторэтан).

Конкретные концентрации основных ингредиентов можно определять с помощью относительно простых экспериментов. Для всасывания в ротовой полости часто нужно увеличить, например по меньшей мере вдвое или втрое, дозу для инъекций или введения через желудочно-кишечный тракт.

В. Липидные частицы.

РНКи средства, например, дцРНК согласно настоящему изобретению, могут быть полностью инкапсулированы в липидном составе, например, LNP или другую частицу нуклеиновой кислоты-липида.

- 77 048552

При использовании в настоящем документе термин LNP относится к стабильной липидной частице нуклеиновой кислоты. LNP обычно содержат катионный липид, некатионный липид и липид, который предотвращает агрегацию частицы (например, ПЭГ-липидный конъюгат). LNP чрезвычайно полезны для системных применений, так как они демонстрируют увеличенный период циркуляции после внутривенной (в/в) инъекции и накапливаются в отдаленных участках (например, участках, физически отделенных от участка введения). LNP включают pSPLP, которые включают инкапсулированный комплекс конденсирующего агента-нуклеиновой кислоты, как указано в WO 00/03683. Частицы согласно изобретению обычно имеют средний диаметр от приблизительно 50 нм до приблизительно 150 нм, более типично от приблизительно 60 нм до приблизительно 130 нм, более типично от приблизительно 70 нм до приблизительно 110 нм, наиболее типично от приблизительно 70 нм до приблизительно 90 нм, и практически нетоксичны. Кроме того, нуклеиновые кислоты, если они присутствуют в липидных частицах с нуклеиновой кислотой согласно изобретению, устойчивы в водном растворе к деградации нуклеазой. Липидные частицы с нуклеиновыми кислотами и способ их получения раскрыты, например, в патентах США 5976567; 5981501; 6534484; 6586410; 6815432; патентной публикации США 2010/0324120 и в WO 96/40964.

В одном варианте осуществления соотношение липида к лекарственному средству (масс/масс соотношение) (например, отношение липида к дцРНК) будет составлять в пределах от приблизительно 1:1 до приблизительно 50:1, от приблизительно 1:1 до приблизительно 25:1, от приблизительно 3:1 до приблизительно 15:1, от приблизительно 4:1 до приблизительно 10:1, от приблизительно 5:1 до приблизительно 9:1 или от приблизительно 6:1 до приблизительно 9:1. Диапазоны, промежуточные по отношению к указанным выше диапазонам, также рассматриваются как часть изобретения.

Некоторые конкретные составы LNP для доставки РНКи средств были описаны в уровне техники, включая, например, составы LNP01, как описано, например, в заявке WO 2008/042973, которая включена в настоящее описание посредством отсылки.

Дополнительные иллюстративные составы липид-дцРНК указаны в привеженной ниже таблице.

	Ионизируемый/катионный липид	катионный липид/некатионный липид/холестерин/ПЭГ-липидный конъюгат Соотношение липида:миРНК
SNALP1	1,2-Дилиноленилокси-Х,Хдиметиламинопропан (DLinDMA)	DLinDMA/DPPC/Холестерин/ПЭГ eDMA (57,1/7,1/34,4/1,4) липид: миРНК -7:1
2-ХТС	2,2-Дилинолеил-4-диметиламиноэтил- [1,3]-диоксолан (ХТС)	ХТС/Г)РРС/Холестерин/ПЭГ-сОМА 57,1/7,1/34,4/1,4 липид: миРНК -7:1
LNP05	2,2-Дилинолеил-4-диметиламиноэтил- [1,3]-диоксолан (ХТС)	ХТС/ОЗРС/Холестерин/ПЭГ-ОМО 57,5/7,5/31,5/3,5 липид: миРНК -6:1
LNP06	2,2-Дилинолеил-4-диметиламиноэтил- [1,3]-диоксолан (ХТС)	ХТС/ОЗРС/Холестерин/ПЭГ-ОМО 57,5/7,5/31,5/3,5 липид: миРНК -11:1
LNP07	2,2-Дилинолеил-4-диметиламиноэтил- [1,3]-диоксолан (ХТС)	ХТС/ОЗРС/Холестерин/ПЭГ-ОМО 60/7,5/31/1,5, липид: миРНК -6:1
LNP08	2,2-Дилинолеил-4-диметиламиноэтил- [1,3]-диоксолан (ХТС)	ХТС/ОЗРС/Холестерин/ПЭГ-ОМО 60/7,5/31/1,5, липид: миРНК -11:1
LNP09	2,2-Дилинолеил-4-диметиламиноэтил- [1,3]-диоксолан (ХТС)	ХТС/ОЗРС/Холестерин/ПЭГ-ОМО 50/10/38,5/1,5 Липид: миРНК 10:1
LNP10	(3 aR, 5 s, 6aS)-N,N-диметил-2,2ди((92,122)-октадека-9,12диенил )тетрагидро-3 аНциклопента[(1] [1,3] диоксол-5 -амин (ALN100)	ALN1 OO/DSPC/Холестерин/ПЭГ- DMG 50/10/38,5/1,5 Липид: миРНК 10:1
LNP11	(62,92,282,312)-гептатриаконта-6,9,28,31тетраен-19-ил-4-(д иметиламино)бутаноат (МСЗ)	МС-3/Г)8РС/Холестерин/ПЭГ-ОМО 50/10/38,5/1,5 Липид: миРНК 10:1
LNP12	1,Г-(2-(4-(2-((2-(бис(2-	Tech Gl/DSPC/Холестерин/ПЭГ-

- 78 048552

	гидроксидодецил)амино)этил)(2- гидроксидодецил)амино)этил)пиперазин- 1 -ил)этилазандиил)дидод екан-2-ол (Т ech G1)	DMG 50/10/38,5/1,5 Липид: миРНК 10:1
LNP13	ХТС	XTC/DSPC/Chol/n3r-DMG 50/10/38,5/1,5 Липид:миРНК: 33:1
LNP14	МСЗ	MC3/DSPC/Chol/H3r-DMG 40/15/40/5 Липид:миРНК: 11:1
LNP15	МСЗ	MC3/DSPC/Chol/H3r-DSG/GalNAc- ПЭГ-DSG 50/10/35/4,5/0,5 Липид:миРНК: 11:1
LNP16	МСЗ	MC3/DSPC/Chol/H3r-DMG 50/10/38,5/1,5 Липид:миРНК: 7:1
LNP17	МСЗ	MC3/DSPC/Chol/H3r-DSG 50/10/38,5/1,5 Липид:миРНК: 10:1
LNP18	МСЗ	MC3/DSPC/Chol/H3r-DMG 50/10/38,5/1,5 Липид:миРНК: 12:1
LNP19	МСЗ	MC3/DSPC/Chol/H3r-DMG 50/10/35/5 Липид:миРНК: 8:1
LNP20	МСЗ	MC3/DSPC/Chol/H3r-DPG 50/10/38,5/1,5 Липид:миРНК: 10:1
LNP21	С12-200	C12-200/DSPC/Chol/H3r-DSG 50/10/38,5/1,5 Липид:миРНК: 7:1
LNP22	ХТС	XTC/DSPC/Chol/HSr-DSG 50/10/38,5/1,5 Липид:миРНК: 10:1

DSPC: дистеароилфосфатидилхолин.

DPPC: дипальмитоилфосфатидилхолин.

ПЭГ-DMG: ПЭГ-дидимиристоилглицерин (С14-ПЭГ или ПЭГ-С14) (ПЭГ со средней молекулярной массой 2000).

ПЭГ-DSG: ПЭГ-дистирилглицерин (С18-ПЭГ или ПЭГ-С18) (ПЭГ со средней молекулярной массой 2000).

ПЭГ-cDMA: ПЭГ-карбамоил-1,2-димиристилоксипропиламин (ПЭГ со средней молекулярной массой 2000 г.).

Составы, включающие SNALP (1,2-дилиноленилокси-Ы,Ы-диметиламинопропан (DLinDMA)), описаны в заявке WO 2009/127060, которая включена в настоящий документ посредством отсылки.

Составы, включающие ХТС, описаны в заявке WO 2010/088537, полное содержание которой включено в настоящий документ посредством отсылки.

Составы, включающие MC3, описаны, например, в патентной публикации США 2010/0324120, полное содержание которой включено в настоящий документ посредством отсылки.

Составы, включающие ALNY-100, описаны в заявке WO 2010/054406, полное содержание которой включено сюда посредством отсылки.

Составы, включающие С12-200, описаны в заявке WO 2010/129709, полное содержание которой включено в настоящий документ посредством отсылки.

Композиции и составы для перорального введения включают порошки или гранулы, микрочастицы, наночастицы, суспензии или растворы в водных или неводных средах, капсулы, гелевые капсулы, саше, таблетки или минитаблетки. Могут присутствовать загустители, ароматизаторы, разбавители, эмульгаторы, диспергирующие добавки или связующие вещества. В некоторых вариантах осуществления составы для перорального введения представляют собой составы, в которых дцРНК, представленные в изобретении, вводят в сочетании с одним или больше поверхностно-активными веществами, усиливающими проникновение, и комплексообразующими веществами. Подходящие поверхностно-активные вещества включают жирные кислоты или их сложные эфиры или соли, желчные кислоты или их соли. Подходящие желчные кислоты/соли желчных кислот включают хенодезоксихолевую кислоту (ХДХК) и урсодезоксихенодезоксихолевую кислоту (УДХК), холевую кислоту, дегидрохолевую кислоту, дезоксихолевую кислоту, глюкохолевую кислоту, гликохолевую кислоту, гликодезоксихолевую кислоту, таурохолевую кислоту, тауродезоксихолевую кислоту, тауро-24,25-дигидрофузидат натрия и гликодигидрофузидат натрия. Подходящие жирные кислоты включают арахидоновую кислоту, ундекановую кислоту, олеиновую

- 79 048552 кислоту, лауриновую кислоту, каприловую кислоту, каприновую кислоту, миристиновую кислоту, пальмитиновую кислоту, стеариновую кислоту, линолевую кислоту, линоленовую кислоту, дикапрат, трикапрат, моноолеин, дилаурин, глицерил-1-монокапрат, 1-додецилазациклогептан-2-он, ацилкарнитин, ацилхолин или их моноглицерид, диглицерид или фармацевтически приемлемую соль (например, натриевую). В некоторых вариантах осуществления используются комбинации усилителей проникновения, например, жирные кислоты/соли в комбинации с желчными кислотами/солями. Одной типичной комбинацией является натриевая соль лауриновой кислоты, каприновой кислоты и УДХК. Другие усилители проникновения включают полиоксиэтилен-9-лауриловый эфир, полиоксиэтилен-20-цетиловый эфир. ДцРНК, представленные в изобретении, могут быть доставлены перорально, в гранулированной форме, в том числе высушенных распылением частиц, или в виде комплексов с образованием микро- или наночастиц. Образующие комплекс с дцРНК вещества включают полиаминокислоты; полиимины; полиакрилаты; полиалкилакрилаты, полиоксэтаны, полиалкилцианоакрилаты; катионизированные желатины, альбумины, крахмалы, акрилаты, полиэтиленгликоли (ПЭГ) и крахмалы; полиалкилцианоакрилаты; ДЭАЭдериватизированные полиимины, поллуланы, целлюлозы и крахмалы. Подходящие комплексообразующие вещества включают хитозан, N-триметилхитозан, поли-Е-лизин, полигистидин, полиорнитин, полиспермины, протамин, поливинилпиридин, политиодиэтиламинометилэтилен P(TDAE), полиаминостирол (например, п-амино), поли(метилцианоакрилат), поли(этилцианоакрилат), поли(бутилцианоакрилат), поли(изобутилцианоакрилат), поли(изогексилцианоакрилат), ДЭАЭ-метакрилат, ДЭАЭ-гексилакрилат, ДЭАЭ-акриламид, ДЭАЭ-альбумин и ДЭАЭ-декстран, полиметилакрилат, полигексилакрилат, поли(О.Рмолочную кислоту), поли^Ь-молочную-ко-гликолевую кислоту (PLGA), альгинат и полиэтиленгликоль (ПЭГ). Составы дцРНК для перорального введения и их получение подробно описаны в патенте США 6887906, US 2003/0027780 и патенте США 6747014, которые включены в настоящий документ посредством отсылки.

Композиции и составы для парентерального, внутрипаренхиматозного (в мозг), подоболочечного, интравентрикулярного или внутрипеченочного введения могут включать стерильные водные растворы, которые также могут содержать буферы, разбавители и другие подходящие добавки, такие как, без ограничения, усилители проникновения, соединения-носители и другие фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные вещества.

Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению включают, без ограничения перечисленными, растворы, эмульсии и составы, содержащие липосомы. Такие композиции могут быть получены из различных компонентов, которые включают, без ограничения перечисленными, предварительно подготовленные жидкости, самоэмульгирующиеся твердые вещества и самоэмульгирующиеся полутвердые вещества. Особенно предпочтительными являются составы, которые таргетно воздействуют на головной мозг при лечении заболеваний или нарушений, ассоциированных с АРР.

Фармацевтические составы согласно настоящему изобретению, которые могут быть представлены в виде единичной лекарственной форме, могут быть изготовлены в соответствии со стандатными технологиями, хорошо известными в фармацевтической промышленности. Такие технологии включают этап объединения активных ингредиентов с фармацевтическим носителем(ями) или вспомогательным веществом(ами). Как правило, составы изготавливают путем однородного и тщательного объединения активных ингредиентов с жидкими носителями и/или тонкоизмельченными твердыми носителями, а затем, при необходимости, формования продукта.

Композиции согласно настоящему изобретению могут быть изготовлены в виде любой из многих возможных лекарственных форм, таких как, без ограничения перечисленными, таблетки, капсулы, гелевые капсулы, жидкие сиропы, мягкие гели, суппозитории и растворы для ректального введения. Композиции согласно настоящему изобретению также могут быть изготовлены в виде суспензий в водной, неводной или смешанной среде. Водные суспензии могут дополнительно содержать вещества, повышающие вязкость суспензии, включающие, например, натрий-карбоксиметилцеллюлозу, сорбит или декстран. Суспензия также может содержать стабилизаторы.

С. Дополнительные составы.

Эмульсии.

Композиции согласно настоящему изобретению могут быть получены и изготовлены в виде эмульсий. Эмульсии обычно представляют собой гетерогенные системы одной жидкости, диспергированной в другой в виде капель, обычно превышающих 0,1 мкм в диаметре (см., например, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, L.V., Popovich N.G., and Ansel H.C., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8^th ed.), New York, NY; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199; Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Volume 1, p. 245; Block in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 2, p. 335; Higuchi et al., in Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 301). Эмульсии часто представляют собой двухфазные системы, включающие две несмешивающихся жидких фазы, тщательно смешанные и диспергированные друг с другом. Как правило, эмульсии могут относиться к типу вода в масле (в/м) или масло в воде (м/в). Когда водная фаза тонко

- 80 048552 разделена и диспергирована в виде мельчайших капель в основной масляной фазе, полученная композиция называется эмульсией вода в масле (в/м). В альтернативе, когда масляная фаза тонко распределена и диспергирована в виде мельчайших капель в основной водной фазе, полученная композиция называется эмульсией масло в воде (м/в). Эмульсии могут содержать дополнительные компоненты помимо дисперсных фаз, а также активное лекарственное средство, которое может присутствовать в виде раствора либо в водной фазе, либо в масляной фазе, либо само по себе в виде отдельной фазы. Фармацевтические вспомогательные вещества, такие как эмульгаторы, стабилизаторы, красители и антиоксиданты, также при необходимости могут присутствовать в эмульсиях. Фармацевтические эмульсии могут также представлять собой множественные эмульсии, которые состоят больше чем из двух фаз, как, например, в случае эмульсий масло в воде в масле (м/в/м) и вода в масле в воде (в/м/в). Такие сложные составы часто обеспечивают некоторые преимущества, которых не имеют простые бинарные эмульсии. Множественные эмульсии, в которых отдельные капельки масла в эмульсии м/в заключают в себе мелкие капельки воды, составляют эмульсию в/м/в. Аналогичным образом, система масляных капель, заключенных в глобулы воды, стабилизированные в непрерывной масляной фазе, образует эмульсию м/в/м.

Эмульсии характеризуются малой или нулевой термодинамической стабильностью. Часто дисперсная или дискретная фаза эмульсии хорошо диспергирована во внешней или непрерывной фазе и поддерживается в таком виде за счет эмульгаторов или вязкости состава. Любая из фаз эмульсии может быть полутвердой или твердой, как в случае мазевых основ и кремов эмульсионного типа. Другие способы стабилизации эмульсий включают использование эмульгаторов, которые могут быть включены в любую фазу эмульсии. Эмульгаторы в широком смысле можно разделить на четыре категории: синтетические поверхностно-активные вещества, природные эмульгаторы, абсорбирующие основы и тонкодисперсные твердые вещества (см., например, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC, 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8^th ed.), New York, NY; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199).

Синтетические сурфактанты, также известные как поверхностно-активные вещества, нашли широкое применение в составе эмульсий и были рассмотрены в литературе (см., например, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, L.V., Popovich N.G., and Ansel HC, 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8^th ed.), New York, NY; Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 285; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, volume 1, p. 199). Поверхностно-активные вещества обычно являются амфифильными и содержат гидрофильную и гидрофобную части. Отношение гидрофильных и гидрофобных свойств поверхностно-активного вещества было названо гидрофильно-липофильным балансом (ГЛБ) и является ценным инструментом для классификации и выбора поверхностно-активных веществ при изготовлении составов. Поверхностно-активные вещества можно подразделить на различные классы в зависимости от природы их гидрофильной группы: неионогенные, анионные, катионные и амфотерные (см., например, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, L.V., Popovich N.G., and Ansel H.C., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8^th ed.), New York, NY Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 285).

Природные эмульгаторы, используемые в составах эмульсий, включают ланолин, пчелиный воск, фосфатиды, лецитин и гуммиарабик. Абсорбирующие основы обладают гидрофильными свойствами, например, могут впитывать воду с образованием эмульсий в/м, сохраняя при этом свою полутвердую консистенцию, как, например, безводный ланолин и гидрофильный вазелин. Тонкодисперсные твердые вещества также использовались в качестве хороших эмульгаторов, особенно в сочетании с поверхностно-активными веществами и в вязких препаратах. К ним относятся полярные неорганические твердые вещества, такие как гидроксиды тяжелых металлов, ненабухающие глины, такие как бентонит, аттапульгит, гекторит, каолин, монтмориллонит, коллоидный силикат алюминия и коллоидный силикат алюминия-магния, пигменты и неполярные твердые вещества, такие как углерод или глицерилтристеарат.

В состав эмульсий также включают большое разнообразие неэмульгирующих материалов, которые вносят свой вклад в свойства эмульсий. Они включают жиры, масла, воски, жирные кислоты, жирные спирты, сложные эфиры жирных кислот, увлажняющие вещества, гидрофильные коллоиды, консерванты и антиоксиданты (Block, в Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N. Y., volume 1, p. 335; Idson, в Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199).

Гидрофильные коллоиды или гидроколлоиды включают природные камеди и синтетические полимеры, такие как полисахариды (например, гуммиарабик, агар, альгиновую кислоту, каррагинан, гуаровую камедь, камедь карайи и трагакант), производные целлюлозы (например, карбоксиметилцеллюлозу и карбоксипропилцеллюлозу) и синтетические полимеры (например, карбомеры, простые эфиры целлюлозы и карбоксивиниловые полимеры). Они диспергируются или набухают в воде с образованием коллоидных растворов, которые стабилизируют эмульсии за счет образования прочных межфазных пленок вокруг капель дисперсной фазы и повышения вязкости внешней фазы.

- 81 048552

Поскольку эмульсии часто содержат ряд ингредиентов, таких как углеводы, белки, стерины и фосфатиды, которые могут легко поддерживать рост микроорганизмов, такие составы часто включают консерванты. Обычно используемые консерванты, входящие в состав эмульсий, включают метилпарабен, пропилпарабен, соли четвертичного аммония, хлорид бензалкония, сложные эфиры п-гидроксибензойной кислоты и борной кислоты. Антиоксиданты также часто добавляют в составы эмульсий, чтобы предотвратить разложение состава. Используемые антиоксиданты могут быть ловушками свободных радикалов, такими как токоферолы, алкилгаллаты, бутилгидроксианизол, бутилгидрокситолуол, или восстановителями, такими как аскорбиновая кислота и метабисульфит натрия, а также синергистами антиоксидантов, такими как лимонная кислота, винная кислота и лецитин.

Применение эмульсионных составов дерматологическим, пероральным и парентеральным путями и способы их изготовления были рассмотрены в литературе (см., например, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, L.V., Popovich N.G., and Ansel H.C., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8^th ed.), New York, NY; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199). Эмульсионные составы для пероральной доставки очень широко применяются из-за простоты их изготовления, а также эффективности с точки зрения всасывания и биодоступности (см., например, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, L.V., Popovich N.G., and Ansel H.C., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8^th ed.), New York, NY; Rosoff, в Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N. Y., volume 1, p. 245; Idson, в Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199). Слабительные средства на основе минерального масла, маслорастворимые витамины и препараты питательных веществ с высоким содержанием жиров входят в число материалов, которые обычно вводят перорально в виде эмульсий м/в.

ii. Микроэмульсии.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения композиции РНКи средств и нуклеиновых кислот изготавливают в виде микроэмульсий. Микроэмульсия может быть определена как система воды, масла и амфифильного вещества, которая представляет собой единый оптически изотропный и термодинамически стабильный жидкий раствор (см., например, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, L.V., Popovich N.G., and Ansel H.C., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8^th ed.), New York, NY; Rosoff, в Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245). Как правило, микроэмульсии представляют собой системы, которые получают сначала путем диспергирования масла в водном растворе поверхностноактивного вещества, а затем добавления достаточного количества четвертого компонента, обычно спирта с промежуточной длиной цепи, с образованием прозрачной системы. Таким образом, микроэмульсии также были описаны как термодинамически стабильные, изотропно-чистые дисперсии двух несмешивающихся жидкостей, которые стабилизированы межфазными пленками поверхностно-активных молекул (Leung and Shah, в: Controlled Release of Drugs: Polymers and Aggregate Systems, Rosoff, M., Ed., 1989, VCH Publishers, New York, p. 185-215). Микроэмульсии обычно получают при объединении от трех до пяти компонентов, которые включают масло, воду, поверхностно-активное вещество, вспомогательное поверхностно-активное вещество и электролит. Тип микроэмульсии вода в масле (в/м) или масло в воде (м/в) зависит от свойств используемого масла и поверхностно-активного вещества, а также от структуры и геометрической упаковки полярных головок и углеводородных хвостов молекул поверхностноактивных веществ (Schott, в Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 271).

Феноменологический подход с использованием фазовых диаграмм был тщательно изучен и дал специалисту в данной области исчерпывающие знания о том, как составлять микроэмульсии (см., например, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, L.V., Popovich N.G., and Ansel H.C., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8^th ed.), New York, NY; Rosoff, в Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245; Block, в Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N. Y., volume 1, p. 335). По сравнению с обычными эмульсиями микроэмульсии обладают таким преимуществом, что они солюбилизируют нерастворимые в воде лекарственные средства в составе термодинамически стабильных капель, которые образуются спонтанно.

Поверхностно-активные вещества, используемые при изготовлении микроэмульсий, включают, без ограничения перечисленными, ионные поверхностно-активные вещества, неионогенные поверхностноактивные вещества, Brij 96, полиоксиэтиленолеиловые эфиры, сложные эфиры полиглицерина и жирных кислот, монолаурат тетраглицерина (ML310), моноолеат тетраглицерина (МО310), моноолеат гексаглицерина (РО310), пентаолеат гексаглицерина (РО500), монокапрат декаглицерина (МСА750), моноолеат декаглицерина (МО750), секвиолеат декаглицерина (SO750), декаолеат декаглицерина (DAO750), отдельно или в комбинации с вспомогательным ПАВ. Вспомогательное поверхностно-активное вещество, обычно спирт с короткой цепью, такой как этанол, 1-пропанол и 1-бутанол, служит для повышения межфазной текучести за счет проникновения в пленку поверхностно-активного вещества и, следовательно, создания неупорядоченной пленки из-за свободного пространства, образующегося между молекулами

- 82 048552 поверхностно-активного вещества. Впрочем, микроэмульсии могут быть получены без использования вспомогательных поверхностно-активных веществ, при этом в уровне техники известны самоэмульгирующиеся микроэмульсионные системы, не содержащие спирта. Водной фазой обычно может быть, без ограничения, вода, водный раствор лекарственного средства, глицерин, ПЭГ300, ПЭГ400, полиглицерины, пропиленгликоли и производные этиленгликоля. Масляная фаза может включать, без ограничения, такие материалы, как Captex 300, Captex 355, Capmul MCM, сложные эфиры жирных кислот, моно-, ди- и триглицериды со средней длиной цепи (С₈-С₁₂), полиоксиэтилированные глицериловые эфиры жирных кислот, жирные спирты, полигликолизированные глицериды, насыщенные полигликолизированные С₈С₁₀ глицериды, растительные масла и силиконовое масло.

Микроэмульсии представляют особый интерес с точки зрения солюбилизации лекарственных средств и улучшения их всасывания. Было предложено использовать микроэмульсии на основе липидов (м/в и в/м) для повышения биодоступности при пероральном введении лекарственных средств, включая пептиды (см., например, патенты США 6191105; 7063860; 7070802; 7,157,099; Constantinides et al., Pharmaceutical Research, 1994, 11, 1385-1390; Ritschel, Meth. Find. Exp. Clin. Pharmacol., 1993, 13, 205). Микроэмульсии обладают такими преимуществами, как улучшенная солюбилизация лекарственного средства, предохранение лекарственного средства от ферментативного гидролиза, возможное улучшение всасывания лекарственного средства благодаря вызванным поверхностно-активным веществом изменениям текучести и проницаемости мембраны, простота изготовления, легкость перорального введения по сравнению с твердыми лекарственными формами, улучшенная клиническая эффективность и снижение токсичности (см., например, патенты США 6191105; 7063860; 7070802; 7157099; Constantinides et al., Pharmaceutical Research, 1994, 11, 1385; Ho et al., J. Pharm. Sci., 1996, 85, 138-143). Часто микроэмульсии могут образовываться спонтанно, при соединении их компонентов вместе при температуре окружающей среды. Это может быть особенно выгодным при изготовлении составов термолабильных лекарственных средств, пептидов или РНКи средств. Микроэмульсии также оказались эффективными при трансдермальной доставке активных компонентов как в косметических, так и в фармацевтических применениях. Ожидается, что микроэмульсионные композиции и составы согласно настоящему изобретению будут способствовать улучшению системного всасывания РНКи средств и нуклеиновых кислот из желудочнокишечного тракта, а также улучшению локального клеточного захвата РНКи средств и нуклеиновых кислот.

Микроэмульсии согласно настоящему изобретению также могут содержать дополнительные компоненты и добавки, такие как сорбитан моностеарат (Grill3), лабразол и вещества, усиливающие проникновение, для улучшения свойств состава и улучшения всасывания РНКи средств и нуклеиновых кислот согласно настоящему изобретению, вещества, усиливающие проникновение, используемые в микроэмульсиях согласно настоящему изобретению, могут быть отнесены к одной из пяти широких категорий: поверхностно-активные вещества, жирные кислоты, соли желчных кислот, комплексообразующие вещества и вещества, не образующие комплексов и не обладающие поверхностно-активными свойствами (Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p. 92). Каждый из этих классов обсуждался выше.

iii. Микрочастицы.

РНКи средство согласно настоящему изобретению может быть включено в частицу, например микрочастицу. Микрочастицы могут быть получены с помощью распылительной сушки, но также могут быть получены другими способами, включая лиофилизацию, выпаривание, сушку в псевдоожиженном слое, вакуумную сушку или комбинацию этих методов.

iv. Усилители проникновения.

В одном варианте осуществления в настоящем изобретении используются различные усилители проникновения для обеспечения эффективной доставки нуклеиновых кислот, в частности РНКи средств, в кожу животных. Большинство лекарственных средств присутствуют в растворе как в ионизированной, так и в неионизированной формах. Однако обычно только растворимые в липидах или липофильные лекарственные соединения легко проникают через клеточные мембраны. Было обнаружено, что даже нелипофильные лекарственные средства могут проникать через клеточные мембраны, если мембрана, которую нужно пересечь, обработана усилителем проникновения. Помимо улучшения диффузии нелипофильных препаратов через клеточные мембраны, усилители проникновения также повышают проницаемость липофильных лекарственных средств.

Усилители проникновения можно отнести к одной из пяти широких категорий, а именно к поверхностно-активным веществам, жирным кислотам, солям желчных кислот, комплексообразующим веществам и не образующим комплексов веществам, не обладающим поверхностно-активными свойствами (см., например, Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92). Каждый из вышеуказанных классов усилителей проникновения описан более подробно ниже.

Поверхностно-активные вещества (или сурфактанты) представляют собой химические соединения, которые при растворении в водном растворе снижают поверхностное натяжение раствора или межфазное натяжение между водным раствором и другой жидкостью, в результате чего всасывание РНКи

- 83 048552 средств через слизистую оболочку усиливается. Помимо солей желчных кислот и жирных кислот, такие усилители проникновения включают, например, лаурилсульфат натрия, полиоксиэтилен-9-лауриловый эфир и полиоксиэтилен-20-цетиловый эфир (см., например, Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92); а также перфторированные эмульсии, такие как FC-43 (Takahashi et al., J. Pharm. Pharmacol., 1988, 40, 252).

Различные жирные кислоты и их производные, которые действуют как усилители проникновения, включают, например, олеиновую кислоту, лауриновую кислоту, каприновую кислоту (н-декановую кислоту), миристиновую кислоту, пальмитиновую кислоту, стеариновую кислоту, линолевую кислоту, линоленовую кислоту, дикапрат, трикапрат, моноолеин (1-моноолеоил-рац-глицерин), дилаурин, каприловую кислоту, арахидоновую кислоту, глицерил-1-монокапрат, 1-додецилазациклогептан-2-он, ацилкарнитины, ацилхолины, их С1_-20 алкиловые эфиры (например, метиловый, изопропиловый и т-бутиловый) и их моно- и диглицериды (т.е. олеат, лаурат, капрат, миристат, пальмитат, стеарат, линолеат и т.д.) (см., например, Touitou, E., et al., Enhancement in Drug Delivery, CRC Press, Danvers, M.A., 2006; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; El Hariri et al., J. Pharm. Pharmacol., 1992, 44, 651-654).

Физиологическая роль желчи включает облегчение диспергирования и всасывания липидов и жирорастворимых витаминов (см., например, Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Brunton, Глава 38 в: Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9^th Ed., Hardman et al., Eds., McGraw-Hill, New York, 1996, pp. 934-935). Различные природные соли желчных кислот и их синтетические производные действуют как усилители проникновения. Таким образом, термин соли желчных кислот включает любые природные компоненты желчи, а также их любые синтетические производные. Подходящие соли желчных кислот включают, например, холевую кислоту (или ее фармацевтически приемлемую натриевую соль, холат натрия), дегидрохолевую кислоту (дегидрохолат натрия), дезоксихолевую кислоту (дезоксихолат натрия), глюкохолевую кислоту (глюкохолат натрия), гликохолевую кислоту (гликохолат натрия), гликодезоксихолевую кислоту (гликодеоксихолат натрия), таурохолевую кислоту (таурохолат натрия), тауродезоксихолевую кислоту (тауродезоксихолат натрия), хенодезоксихолевую кислоту (хенодезоксихолат натрия), урсодезоксихолевую кислоту (УДХК), тауро-24,25-дигидрофузидат натрия (STDHF), гликодигидрофузидат натрия и полиоксиэтилен9-лауриловый эфир (РОЕ) (см., например, Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, page 92; Swinyard, Глава 39 в: Remington's Pharmaceutical Sciences, 18^th Ed., Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990, страницы 782-783; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; Yamamoto et al., J. Pharm. Exp. Ther, 1992, 263, 25; Yamashita et al., J. Pharm. Sci., 1990, 79, 579583).

Комплексообразующие вещества, используемые в сочетании с настоящим изобретением, можно определить как соединения, которые удаляют ионы металлов из раствора при образовании с ними комплексных соединений, в результате чего усиливается всасывание РНКи средств через слизистую оболочку. В отношении их применения в качестве усилителей проникновения в настоящем изобретении, комплексообразующие вещества обладают дополнительным преимуществом, которое состоит в том, что они также служат ингибиторами ДНКазы, поскольку наиболее исследованным ДНК-нуклеазам для катализа требуется ион двухвалентного металла, и поэтому они ингибируются комплексообразующими веществами (Jarrett, J. Chromatogr., 1993, 618, 315-339). Подходящие комплексообразующие вещества включают, без ограничения перечисленными, динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), лимонную кислоту, салицилаты (например, салицилат натрия, 5-метоксисалицилат и гомованилат), Nацильные производные коллагена, лаурет-9 и N-аминоацил-производные бета-дикетонов (енаминов) (см., например, Katdare, A. et al., Excipient development for pharmaceutical, biotechnology, and drug delivery, CRC Press, Danvers, MA, 2006; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, page 92; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; Buur et al., J. Control Rel., 1990, 14, 43-51).

При использовании в настоящем документе усиливающие проникновение соединения, не образующие комплексов и не обладающие поверхностно-активными свойствами, могут быть определены как соединения, которые демонстрируют незначительную активность в качестве комплексообразующих веществ или поверхностно-активных веществ, но которые, тем не менее, улучшают всасывание РНКи средств через слизистую оболочку пищеварительного тракта (см., например, Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33). Этот класс усилителей проникновения включает, например, ненасыщенные циклические производные мочевины, 1-алкил- и 1-алкенилазациклоалканона (Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, страница 92); и нестероидные противовоспалительные средства, такие как диклофенак натрия, индометацин и фенилбутазон (Yamashita et al., J. Pharm. Pharmacol., 1987, 39, 621-626).

Вещества, которые улучшают захват РНКи средств на клеточном уровне, также могут быть добавлены к фармацевтическим и другим композициям согласно настоящему изобретению. Например, также

- 84 048552 известно, что катионные липиды, такие как липофектин (Junichi et al., патент США 5705188), катионные производные глицерина и поликатионные молекулы, такие как полилизин (WO 97/30731), усиливают захват дцРНК клетками.

Для усиления проникновения вводимых нуклеиновых кислот могут использоваться другие вещества, включая гликоли, такие как этиленгликоль и пропиленгликоль, пирролы, такие как 2-пиррол, азоны и терпены, такие как лимонен и ментон.

vi. Вспомогательные вещества.

В отличие от соединения-носителя фармацевтический носитель или вспомогательное вещество представляет собой фармацевтически приемлемый растворитель, суспендирующее вещество или любой другой фармакологически инертный носитель для доставки одной или более нуклеиновых кислот животному. Вспомогательное вещество может быть жидким или твердым, причем его выбирают с учетом запланированного способа введения, чтобы обеспечить требуемый объем, консистенцию и т.д. при объединении с нуклеиновой кислотой и другими компонентами данной фармацевтической композиции. Типичные фармацевтические носители включают, без ограничения перечисленными, связующие вещества (например, прежелатинизированный кукурузный крахмал, поливинилпирролидон или гидроксипропилметилцеллюлозу и т.д.); наполнители (например, лактозу и другие сахара, микрокристаллическую целлюлозу, пектин, желатин, сульфат кальция, этилцеллюлозу, полиакрилаты или гидрофосфат кальция и т.д.); смазывающие вещества (например, стеарат магния, тальк, диоксид кремния, коллоидный диоксид кремния, стеариновую кислоту, стеараты металлов, гидрогенизированные растительные масла, кукурузный крахмал, полиэтиленгликоли, бензоат натрия, ацетат натрия и т.д.); разрыхлители (например, крахмал, крахмалгликолят натрия и т.д.); и смачивающие вещества (например, лаурилсульфат натрия и т.д.).

Фармацевтически приемлемые органические или неорганические вспомогательные вещества, подходящие для непарентерального введения, которые не вступают в нежелательные реакции с нуклеиновыми кислотами, также могут использоваться при изготовлении составов композиций согласно настоящему изобретению. Подходящие фармацевтически приемлемые носители включают, без ограничения перечисленными, воду, растворы солей, спирты, полиэтиленгликоли, желатин, лактозу, амилозу, стеарат магния, тальк, кремниевую кислоту, вязкий парафин, гидроксиметилцеллюлозу, поливинилпирролидон и т.п.

Составы для наружного введения нуклеиновых кислот могут включать стерильные и нестерильные водные растворы, неводные растворы в обычных растворителях, таких как спирты, или растворы нуклеиновых кислот в жидких или твердых масляных основах. Растворы также могут содержать буферы, разбавители и другие подходящие добавки. Могут использоваться фармацевтически приемлемые органические или неорганические вспомогательные вещества, подходящие для непарентерального введения, которые не вступают в нежелательные реакции с нуклеиновыми кислотами.

Подходящие фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества включают, без ограничения перечисленными, воду, растворы солей, спирт, полиэтиленгликоли, желатин, лактозу, амилозу, стеарат магния, тальк, кремниевую кислоту, вязкий парафин, гидроксиметилцеллюлозу, поливинилпирролидон и т.п.

vii. Другие компоненты.

Композиции согласно настоящему изобретению могут дополнительно содержать другие вспомогательные компоненты, обычно присутствующие в фармацевтических композициях, на уровнях их использования, установленных в данной области техники. Так, например, композиции могут содержать дополнительные, совместимые, фармацевтически активные вещества, такие как, например, противозудные средства, вяжущие средства, местные анестетики или противовоспалительные средства, или могут содержать дополнительные вещества, пригодные для физического изготовления различных лекарственных форм композиций согласно настоящему изобретению, такие как красители, ароматизаторы, консерванты, антиоксиданты, замутняющие вещества, загустители и стабилизаторы. Однако такие вещества при добавлении не должны существенно препятствовать биологической активности компонентов композиций согласно настоящему изобретению. Составы могут быть стерилизованы и, при желании, смешаны со вспомогательными веществами, например, смазывающими веществами, консервантами, стабилизаторами, смачивающими веществами, эмульгаторами, солями для изменения осмотического давления, буферами, красителями, вкусовыми добавками или ароматическими веществами и т.п., которые не взаимодействуют нежелательным образом с нуклеиновой кислотой(ами) в составе.

Водные суспензии могут содержать вещества, которые повышают вязкость суспензии, включающие, например, натрий карбоксиметилцеллюлозу, сорбит или декстран. Суспензия также может содержать стабилизаторы.

В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции, представленные в изобретении, включают: (а) одно или более РНКи средств и (b) одно или более средств, которые действуют по механизму, отличному от РНКи, и которые могут применяться для лечения HTT-ассоциированного нарушения. Примеры таких средств включают, без ограничения перечисленными, ингибиторы обратного захвата моноаминов, резерпин, противосудорожные средства, антипсихотические средства и антидепрессанты.

- 85 048552

Токсичность и терапевтическую эффективность таких соединений можно определить с помощью стандартных фармацевтических методов на культурах клеток или экспериментальных животных, например, для определения LD50 (дозы, летальной для 50% популяции) и ED50 (дозы, терапевтически эффективной у 50% популяции). Отношение доз между токсическим и терапевтическим эффектами является терапевтическим индексом и может быть выражено как отношение LD₅₀/ED₅₀. Соединения, которые демонстрируют высокие терапевтические индексы, являются предпочтительными.

Данные, полученные в результате тестов на культурах клеток и в исследованиях на животных, могут использоваться при определении диапазона доз для применения у человека. Доза композиций, представленных в настоящем документе, обычно находится в пределах диапазона циркулирующих концентраций, который включает ED50 с низкой токсичностью или без нее. Доза может варьировать в пределах этого диапазона в зависимости от используемой лекарственной формы и используемого пути введения. Для любого соединения, применяемого в способах, представленных в изобретении, терапевтически эффективная доза может быть первоначально оценена по результатам анализов на культурах клеток. Доза может быть определена в моделях на животных для достижения диапазона концентраций циркулирующего соединения в плазме или, при необходимости, полипептидного продукта последовательностимишени (например, достижение сниженной концентрации полипептида), который включает ICso (т.е. концентрация тестируемого соединения, при которой достигается полумаксимальное ингибирование симптомов), как определено в клеточной культуре. Такая информация может использоваться для более точного определения доз, которые можно применять у человека. Уровни в плазме можно измерять, например, с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.

В дополнение к их введению, обсуждаемому выше, РНКи средства, представленные в изобретении, можно вводить в комбинации с другими известными средствами, эффективными при лечении патологических процессов, опосредованных экспрессией нуклеотидных повторов. В любом случае лечащий врач может регулировать количество и время введения РНКи средства в зависимости от результатов, наблюдаемых при использовании стандартных показателей эффективности, известных в данной области или описанных в настоящем документе.

VII. Наборы.

В некоторых аспектах настоящего изобретение обеспечивает наборы, которые включают подходящий контейнер, содержащий фармацевтический состав миРНК соединения, например, двухцепочечного миРНК соединения или оциРНК соединения (например, предшественника, например, более крупного соединения миРНК, которое может быть процессировано с образование оциРНК соединения, или ДНК, которая кодирует миРНК соединение, например, двухцепочечное соединение миРНК или оциРНК соединение или их предшественник).

Такие наборы включают одно или более дцРНК средств и инструкции по применению, например, инструкции по введению профилактически или терапевтически эффективного количества дцРНК средства (средств). ДцРНК средство может находиться во флаконе или предварительно наполненном шприце. Наборы необязательно могут дополнительно включать приспособления для введения дцРНК средства (например, устройство для инъекций, такое как предварительно наполненный шприц) или приспособления для измерения ингибирования С3 (например, приспособления для измерения ингибирования мРНК HTT, белка HTT и/или активности HTT). Такие приспособления для измерения ингибирования HTT могут включать приспособления для получения образца от субъекта, такого как, например, образец спинномозговой жидкости и/или плазмы. Наборы согласно изобретению могут дополнительно включать средства для определения терапевтически эффективного или профилактически эффективного количества.

В некоторых вариантах осуществления отдельные компоненты фармацевтического состава могут быть предоставлены в одном контейнере, например, во флаконе или предварительно заполненном шприце. В альтернативе может быть желательным предоставить компоненты фармацевтического состава по отдельности в двух или более контейнерах, например, один контейнер для препарата миРНК соединения и, по меньшей мере, другой контейнер для соединения-носителя. Набор может быть упакован в нескольких различных конфигурациях, например, один или больше контейнеров в одной коробке. Различные компоненты можно комбинировать, например, в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к набору. Компоненты можно комбинировать в соответствии со способом, описанным в настоящем документе, например, для приготовления и введения фармацевтической композиции. В набор также может входить устройство доставки.

VII. Способы ингибирования экспрессии HTT.

В настоящем изобретении также предложены способы ингибирования экспрессии гена HTT в клетке. Способы включают контакт клетки с РНКи средством, например, двухцепочечным РНКи средством, в количестве, эффективном для ингибирования экспрессии HTT в клетке, осуществляя, таким образом, ингибирование экспрессии HTT в клетке. В некоторых вариантах осуществления изобретения ингибирование HTT осуществляется преимущественно в клетках ЦНС (например, головного мозга).

Контакт клетки с РНКи средством, например двухцепочечным РНКи средством, может осуществляться in vitro или in vivo. Контакт клетки in vivo с РНКи средством включает контакт клетки или группы

- 86 048552 клеток в организме субъекта, например человека, с РНКи средством. Также возможны комбинации способов контакта с клеткой in vitro и in vivo.

Контакт с клеткой может быть прямым или непрямым, как обсуждалось выше. Кроме того, контакт с клеткой может осуществляться при посредстве направляющего лиганда, включающего любой лиганд, описанный в настоящем документе или известный в уровне техники. В некоторых вариантах осуществления направляющий лиганд представляет собой углеводный фрагмент, например, лиганд GalNAc или любой другой лиганд, который направляет РНКи средство в интересующий участок.

Термин ингибирование при использовании в настоящем документе используется попеременно с терминами снижение, сайленсинг, даунрегуляция, подавление и другими подобными терминами и включает любой уровень ингибирования. В некоторых вариантах осуществления уровень ингибирования, например, для РНКи средства согласно настоящему изобретению, можно оценить в условиях культивирования клеток, например, где клетки в клеточной культуре трансфицируют с помощью Lipofectamine™-опосредованной трансфекции при концентрации вблизи от клетки 10 нМ или меньше, 1 нМ или меньше и т.д. Нокдаун для данного РНКи средства можно определить путем сравнения уровней до обработки в клеточной культуре с уровнями после обработки в клеточной культуре, необязательно также при сравнении с клетками, обработанными параллельно с использованием рандомной или другой формы контрольного РНКи средства. Таким образом, нокдаун в клеточной культуре, например, предпочтительно 50% или более, может быть идентифицирован как показатель того, что произошло ингибирование или снижение, даунрегуляция или подавление и т.д. Прямо предполагается, что оценка уровней мРНК-мишени или кодируемого белка (и, следовательно, степени ингибирования и т.д., вызванного РНКи средством согласно настоящему изобретению) также можно оценивать в системах in vivo для РНКи средств согласно настоящему изобретению, при контролируемых должным образом условиях, как описано в уровне техники.

Фраза ингибирование экспрессии гена HTT или ингибирование экспрессии HTT при использовании в настоящем документе включает ингибирование экспрессии любого гена HTT (такого, например, как ген HTT мыши, ген HTT крысы, ген HTT обезьяны или ген HTT человека), а также варианты или мутанты гена HTT, которые кодируют белок HTT. Таким образом, ген HTT может быть геном HTT дикого типа, мутантным геном HTT или трансгенным геном HTT в контексте генетически модифицированной клетки, группы клеток или организма.

Ингибирование экспрессии гена HTT включает любой уровень ингибирования гена HTT, например, по меньшей мере частичное подавление экспрессии гена HTT, такое как ингибирование по меньшей мере на 20%. В некоторых вариантах осуществления ингибирование составляет по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, предпочтительно по меньшей мере 50%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%; или ниже уровня обнаружения метода анализа.

Экспрессию гена HTT можно оценивать по уровню любой переменной, связанной с экспрессией гена HTT, например, по уровню мРНК HTT или уровню белка HTT, или, например, по уровню удлиненного белка C9orf72.

Ингибирование можно оценивать по снижению абсолютного или относительного уровня одной или больше из таких переменных по сравнению с контрольным уровнем. Контрольным уровнем может быть контрольный уровень любого типа, который используется в уровне техники, например, исходный уровень перед введением дозы или уровень, определенный у аналогичного субъекта, в клетке или образце, которые не подвергались лечению или подвергались лечению контролем (таким как, например, контроль только буфером или контроль неактивным средством).

В некоторых вариантах осуществления способов согласно настоящему изобретению экспрессия гена HTT ингибируется по меньшей мере на 20, 30, 40%, предпочтительно по меньшей мере на 50, 60, 70, 80, 85, 90 или 95% или ниже уровня обнаружения анализа. В некоторых вариантах осуществления способы включают клинически значимое ингибирование экспрессии HTT, например, которое продемонстрировано клинически значимым результатом после лечения субъекта средством для снижения экспрессии HTT.

Ингибирование экспрессии гена HTT может проявляться в снижении количества мРНК, экспрессируемой первой клеткой или группой клеток (такие клетки могут присутствовать, например, в образце, полученном у субъекта), в которых ген HTT транскрибируется, и которые подверглись лечению (например, при контакте клетки или клеток с РНКи средством согласно настоящему изобретению или при введении РНКи средства согласно настоящему изобретению субъекту, у которого клетки присутствуют или присутствовали), в результате чего экспрессия гена HTT ингибируется по сравнению со второй клеткой или группой клеток, по существу идентичных первой клетке или группе клеток, но которые не подверглись такой обработке (контрольные клетки, не обработанные РНКи средством или не обработанные РНКи средством, направленно воздействующим на интересующий ген). Степень ингибирования может быть выражена следующим образом:

- 87 048552 (μι-ί-И' ч контрсльнчх клетках) - ι'ηΡΗΚ r обработанных клетках) ----------------------------------------------------------------------------------------------------· 10 О S (мРНК в контрольных клетках)

В других вариантах осуществления ингибирование экспрессии гена HTT можно оценивать по снижению параметра, который функционально связан с экспрессией гена HTT, например, по экспрессии белка HTT. Сайленсинг гена HTT можно определять в любой клетке, экспрессирующей HTT, эндогенный или гетерологичный с экспрессионной конструкции, и с помощью любого анализа, известного в данной области.

Ингибирование экспрессии белка HTT может проявляться в снижении уровня белка HTT, экспрессируемого клеткой или группой клеток (например, уровня белка, экспрессируемого в образце, полученном у субъекта). Как было объяснено выше, для оценки подавления мРНК ингибирование уровней экспрессии белка в обработанной клетке или группе клеток может быть аналогичным образом выражено в процентах от уровня белка в контрольной клетке или группе клеток.

Контрольная клетка или группа клеток, которую можно использовать для оценки ингибирования экспрессии гена HTT, включает клетку или группу клеток, которые еще не подвергались контакту с РНКи средством согласно настоящему изобретению. Например, контрольная клетка или группа клеток могут быть получены от отдельного субъекта (например, человека или животного) до лечения субъекта РНКи средством.

Уровень мРНК HTT, которая экспрессируется клеткой или группой клеток, может быть определен при использовании любого известного в данной области способа оценки экспрессии мРНК. В одном варианте осуществления уровень экспрессии HTT в образце определяют путем обнаружения транскрибируемого полинуклеотида или его части, например, мРНК гена HTT. РНК можно выделять из клеток с использованием методов выделения РНК, включающих, например, экстракцию кислым фенолом/гуанидинизотиоцианатом (RNAzol В; Biogenesis), наборы для получения РНК RNeasy™ (Qiagen®) или PAXgene (PreAnalytix, Switzerland). Типичные форматы анализов с использованием гибридизации рибонуклеиновых кислот, включают ядерные run-on анализы, ОТ-ПЦР, анализы защиты от РНКазы, Нозерн-блоттинг, гибридизацию in situ и микроматричный анализ. Циркулирующая мРНК HTT может быть обнаружена при использовании способов, описанных в WO 2012/177906, полное содержание которой включено в настоящий документ посредством отсылки.

В некоторых вариантах осуществления уровень экспрессии HTT определяют с использованием зонда нуклеиновой кислоты. Термин зонд при использовании в настоящем документе относится к любой молекуле, которая способна селективно связываться со специфичной нуклеиновой кислотой или белком HTT или их фрагментом. Зонды могут быть синтезированы специалистом в данной области или получены из соответствующих биологических препаратов. Зонды могут быть специально разработаны для мечения. Примеры молекул, которые могут использоваться в качестве зондов, включают, без ограничения перечисленными, РНК, ДНК, белки, антитела и органические молекулы.

Выделенную мРНК можно использовать в анализах гибридизации или амплификации, которые включают, помимо прочего, Саузерн- или Нозерн-анализ, анализ методом полимеразной цепной реакции (ПНР) и матрицы зондов. Один из методов определения уровней мРНК включает контакт выделенной мРНК с молекулой нуклеиновой кислоты (зондом), которая может гибридизоваться с мРНК HTT. В одном варианте осуществления мРНК иммобилизируют на твердой поверхности и подвергают контакту с зондом, например, путем разгона выделенной мРНК в агарозном геле и переноса мРНК с геля на мембрану, такую как нитроцеллюлоза. В альтернативном варианте осуществления зонд(ы) иммобилизируют на твердой поверхности, и мРНК подвергают контакту с зондом(ами), например, в матрице генных чипов Affymetrix®. Квалифицированный специалист может легко адаптировать известные способы обнаружения мРНК для использования при определении уровня мРНК HTT.

Альтернативный способ определения уровня экспрессии HTT в образце включает процесс амплификации нуклеиновой кислоты или обратную транскриптазу (для получения кДНК), например, мРНК в образце, например, с помощью ОТ-ПЦР (экспериментальный вариант описан в Mullis, 1987, патент США 4,683,202), лигазной цепной реакции (Barany (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:189-193), самоподдерживающейся репликации последовательности (Guatelli et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:18741878), системы амплификации на основе транскрипции (Kwoh et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:1173-1177), Q-бета репликазы (Lizardi et al. (1988) Bio/Technology 6:1197), репликации по типу катящегося кольца (Lizardi et al., патент США 5854033) или любого другого метода амплификации нуклеиновых кислот с последующим обнаружением амплифицированных молекул с помощью методов, хорошо известных специалистам в данной области. Эти схемы обнаружения особенно полезны для обнаружения молекул нуклеиновых кислот, если такие молекулы присутствуют в очень небольшом количестве. В конкретных аспектах изобретения уровень экспрессии HTT определяют с помощью количественной флуорогенной ОТ-ПЦР (т.е. системы TaqManTM), люциферазного анализа Dual-Glo® или другого известного в данной области способа измерения уровня экспрессии HTT или мРНК.

Уровень экспрессии мРНК HTT можно контролировать с помощью блоттинга на мембране (например, используемого в гибридизационном анализе, таком как Нозерн, Саузерн, дот и т.п.) или микролу

- 88 048552 нок, пробирок для образцов, гелей, сфер или волокон (или любой твердой подложки, содержащей связанные нуклеиновые кислоты). См. патенты США 5770722, 5874219, 5744305, 5677195 и 5445934, которые включены в настоящий документ посредством отсылки. Определение уровня экспрессии HTT также может включать использование зондов на основе нуклеиновых кислот в растворе.

В некоторых вариантах осуществления уровень экспрессии мРНК оценивают с помощью анализов разветвленной ДНК (рДНК) или ПНР в реальном времени (кПЦР). Применение этого метода ПНР описано и проиллюстрировано в примерах, представленных в настоящем документе. Такие методы также можно использовать для обнаружения нуклеиновых кислот HTT.

Уровень экспрессии белка HTT можно определять с использованием любого известного в данной области метода измерения уровней белка. Такие методы включают, например, электрофорез, капиллярный электрофорез, высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ), тонкослойную хроматографию (ТСХ), гипердиффузионную хроматографию, реакции преципитации в жидкости или геле, абсорбционную спектроскопию, колориметрические анализы, спектрофотометрические анализы, проточную цитометрию, иммунодиффузию (одиночную или двойную), иммуноэлектрофорез, Вестернблоттинг, радиоиммуноанализ (РИА), твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА), иммунофлуоресцентный анализ, электрохемилюминесцентный анализ и т.п. Такие анализы также могут использоваться для обнаружения белков, указывающих на присутствие или репликацию белков HTT.

В некоторых вариантах осуществления эффективность способов согласно настоящему изобретению при лечении HTT-ассоциированного заболевания оценивают по снижению уровня мРНК HTT (например, путем оценки уровня HTT в образце спинномозговой жидкости и/или образце плазмы, с помощью биопсии головного мозга или иным способом).

В некоторых вариантах осуществления способов согласно настоящему изобретению РНКи средство вводят субъекту таким образом, что РНКи средство поступает в конкретный участок в организме субъекта. Ингибирование экспрессии HTT можно оценивать с помощью измерений уровня или изменения уровня мРНК HTT или белка HTT в образце, полученном из определенного участка в организме субъекта, например, клеток ЦНС. В некоторых вариантах осуществления способы включают клинически значимое ингибирование экспрессии HTT, например, продемонстрированное клинически значимым результатом после лечения субъекта средством для снижения экспрессии HTT, такое как, например, стабилизация или ингибирование атрофии хвостатого ядра (например, при оценке с помощью волюметрической МРТ (вМРТ)), стабилизация или снижение уровней легких цепей нейрофиламентов (Nfl) в образце спинномозговой жидкости субъекта, снижение мРНК мутантного HTT или расщепленной мРНК или белка мутантного HTT, например, одного или обоих из полноразмерного мРНК или белка мутантного HTT и расщепленной мРНК или белка мутантного HTT, а также стабилизация или улучшение при оценке по единой оценочной шкале болезни Хантингтона (UHDRS).

При использовании в настоящем документе термины обнаружение или определение уровня аналита означают проведение стадий для определения присутствия материала, например, белка, РНК. При использовании в настоящем документе методы обнаружения или определения включают обнаружение или определение уровня аналита, который ниже уровня обнаружения для используемого метода.

IX. Способы лечения или профилактики HTT-ассоциированных заболеваний.

В настоящем изобретении также предложены способы применения РНКи средства согласно изобретению или композиции, содержащей РНКи средство согласно изобретению, для уменьшения или ингибирования экспрессии HTT в клетке. Способы включают контакт клетки с дцРНК согласно настоящему изобретению и поддерживание клетки в течение времени, достаточного для деградации мРНК транскрипта гена HTT, осуществляя, таким образом, ингибирование экспрессии гена HTT в клетке. Снижение экспрессии генов можно оценивать с помощью любых методов, известных в уровне техники. Например, снижение экспрессии HTT можно определять путем определения уровня экспрессии мРНК HTT при использовании методов, стандартных для специалистов в данной области, например Нозерн-блоттинга, кОТ-ПЦР; путем определения уровня белка HTT с использованием стандартных для специалиста в данной области методов, таких как Вестерн-блоттинг, иммунологические методы.

В способах согласно настоящему изобретению контакт с клеткой может осуществляться in vitro или in vivo, т.е. клетка может находиться в организме субъекта.

Клетка, подходящая для лечения с применением способов согласно настоящему изобретению, может быть любой клеткой, которая экспрессирует ген HTT. Клетка, подходящая для применения в способах согласно настоящему изобретению, может быть клеткой млекопитающего, например, клеткой примата (такой как клетка человека или клетка примата, не относящегося к человеку, например, клетка обезьяны или клетка шимпанзе), клеткой не примата (например, клеткой крысы или клеткой мыши). В одном варианте осуществления клетка являетая человеческой клеткой, например, человеческой клеткой ЦНС.

Экспрессия HTT ингибируется в клетке по меньшей мере приблизительно на 30, 40, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или приблизительно 100%, т.е. ниже уровня обнаружения. В предпочтительных вариантах осуществления экспрессия HTT ингибируется по меньшей мере на 50%.

Способы in vivo согласно настоящему изобретению могут включать введение субъекту композиции,

- 89 048552 содержащей РНКи средство, где РНКи средство включает нуклеотидную последовательность, комплементарную по меньшей мере части РНК-транскрипта гена HTT млекопитающего, подлежащего лечению. Если организмом, подлежащим лечению, является млекопитающее, такое как человек, композицию могут вводить любым способом, известным в уровне техники, в том числе, без ограничения этим, пероральным, внутрибрюшинным или парентеральным путями, включая внутричерепное (например, интравентрикулярное, интрапаренхиматозное и интратекальное), внутривенное, внутримышечное, интравитреальное, подкожное, трансдермальное, воздушное (аэрозольное), назальное, ректальное и наружное (включая трансбуккальное и подъязычное) введение. В некоторых вариантах осуществления композиции вводят путем внутривенной инфузии или инъекции. В некоторых вариантах осуществления композиции вводят путем подкожной инъекции. В некоторых вариантах осуществления композиции вводят путем интратекальной инъекции.

В некоторых вариантах осуществления введение осуществляется посредством инъекции депо. Инъекция депо может высвобождать РНКи средство постоянно в течение длительного периода времени. Таким образом, инъекция депо может позволить снизить частоту введения доз, необходимую для получения требуемого эффекта, например, требуемого ингибирования HTT или терапевтического или профилактического эффекта. Инъекция депо также может обеспечить более стабильные концентрации в сыворотке.

Инъекции депо могут включать подкожные инъекции или внутримышечные инъекции. В предпочтительных вариантах осуществления инъекция депо является подкожной инъекцией.

В некоторых вариантах осуществления введение производят с помощью насоса. Насос может быть внешним насосом или насосом, имплантируемым хирургическим путем. В некоторых вариантах осуществления насос представляет собой подкожно имплантируемый осмотический насос. В других вариантах осуществления насос представляет собой инфузионный насос. Инфузионный насос может использоваться для внутричерепных, внутривенных, подкожных, артериальных или эпидуральных инфузий. В предпочтительных вариантах осуществления инфузионный насос представляет собой подкожный инфузионный насос. В других вариантах осуществления насос представляет собой имплантируемый хирургическим путем насос, который доставляет РНКи средство в ЦНС.

Способ введения может быть выбран в зависимости от того, требуется ли местное или системное лечение, и в зависимости от обрабатываемой области. Путь и место введения могут быть выбраны для улучшения таргетинга.

В одном аспекте настоящего изобретения также предложены способы ингибирования экспрессии гена HTT у млекопитающего. Способы включают введение млекопитающему композиции, включающей дцРНК, направленную на ген HTT в клетке млекопитающего, и содержание млекопитающего в течение времени, достаточного для деградации транскрипта мРНК гена HTT, осуществляя, таким образом, ингибирование экспрессию гена HTT в клетке. Снижение экспрессии гена можно оценить любыми способами, известными в данной области техники, а также способами, например, кОТ-ПЦР, описанными в настоящем документе. Снижение продукции белка можно оценивать с помощью любых известных из уровня техники методов и методов, т.е. ИФА, описанных в настоящем документе. В одном варианте осуществления образец биопсии ЦНС или образец спинномозговой жидкости (СМЖ) служит в качестве тканевого материала для контроля снижения экспрессии гена или белка HTT (или его аналогов).

В настоящем изобретении также предложены способы лечения нуждающегося в этом субъекта. Способы лечения согласно настоящему изобретению включают введение РНКи средства согласно настоящему изобретению субъекту, например, субъекту, у которого будет эффективным ингибирование экспрессии HTT, в терапевтически эффективном количестве РНКи средства, направленного на ген HTT, или фармацевтической композиции, включающей РНКи средство, направленное на ген HTT.

Кроме того, в настоящем изобретении предложены способы предупреждения, лечения или ингибирования прогрессирования заболевания или нарушения, ассоциированного с HTT (например, болезни Хантингтона), у субъекта, такого как прогрессирование заболевания или нарушения, ассоциированного с HTT. Способы включают введение субъекту терапевтически эффективного количества любого РНКи средства, например, дцРНК средств, или фармацевтической композиции, предложенной в настоящем документе, осуществляя, таким образом, предупреждение, лечение или ингибирование прогрессирования заболевания или нарушения, ассоциированного с HTT, у субъекта.

РНКи средство согласно настоящему изобретению можно вводить в виде свободного РНКи средства. Свободное РНКи средство вводят в отсутствие фармацевтической композиции. Голое РНКи средство может находиться в подходящем буферном растворе. Буферный раствор может включать ацетат, цитрат, проламин, карбонат или фосфат, или их любую комбинацию. В одном варианте осуществления буферный раствор представляет собой фосфатно-солевой буферный раствор (PBS). Значения pH и осмолярности буферного раствора, содержащего РНКи средство, можно регулировать таким образом, чтобы они подходили для введения субъекту.

В альтернативе РНКи средство согласно настоящему изобретению можно вводить в виде фармацевтической композиции, такой как липосомный состав дцРНК.

Субъекты, у которых может быть эффективным снижение или ингибирование экспрессии гена

- 90 048552

HTT, имеют заболевание, ассоциированное с HTT, например, болезнь Хантингтона.

В описании также представлены способы применения РНКи средства или его фармацевтической композиции, например, для лечения субъекта, у которого может быть эффективным снижение или ингибирование экспрессии HTT, например субъекта, страдающего нарушением, ассоциированным с HTT, в комбинации с другими фармацевтическими препаратами или другие терапевтическими методами, например, с применением известных фармацевтических препаратов или известных терапевтических методов, таких как, например, те, которые в настоящее время применяются для лечения этих нарушений. Например, в некоторых вариантах осуществления РНКи средство, направленное на HTT, вводят в комбинации, например, со средством, применимым для лечения нарушения, ассоциированного с HTT, как описано в другом месте в настоящем документе или известно в данной области. Например, дополнительные средства, подходящие для лечения субъекта, у которого может быть эффективным снижение экспрессии HTT, например, субъекта, имеющего нарушение, ассоциированное с HTT, могут включать средства, применяемые в настоящее время для лечения симптомов HTT. РНКи средство и дополнительные терапевтические средства можно вводить в одно время или в той же комбинации, например, интратекально, или дополнительное терапевтическое средство можно вводить как часть отдельной композиции или в другое время, или другим способом, известным в данной области или описанным в настоящем документе.

Примеры дополнительных терапевтических средств включают, например, ингибитор обратного захвата моноаминов, например, тетрабеназин (Ксеназин), деутетрабеназин (Аустедо) и резерпин, противосудорожное средство, например, вальпроевую кислоту (Депакот, Депакен, Депакон) и клоназепам (Клонопин), антипсихотическое средство, например, рисперидон (Риспердал) и галоперидол (Галдол), и антидепрессант, например, пароксетин (Паксил).

В одном варианте осуществления способ включает введение композиции, представленной в настоящем документе, таким образом, что экспрессия гена-мишени HTT снижается в течение по меньшей мере одного месяца. В предпочтительных вариантах осуществления экспрессия снижается по меньшей мере в течение 2 месяцев, 3 месяцев или 6 месяцев.

Предпочтительно РНКи средства, применимые в способах и композициях, описанных в настоящем документе, специфически направлены на РНК (первичные или процессированные) гена-мишени HTT. Композиции и способы ингибирования экспрессии этих генов с применением РНКи средств могут быть получены и реализованы, как описано в настоящем документе.

Введение дцРНК в соответствии со способами согласно настоящему изобретению может привести к снижению тяжести, признаков, симптомов или маркеров таких заболеваний или нарушений у пациента с HTT-ассоциированным нарушением. Под снижением в данном контексте подразумевается статистически значимое или клинически значимое снижение такого уровня. Снижение может составлять, например, не менее 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95% или приблизительно 100%.

Эффективность лечения или профилактики заболевания можно оценить, например, путем измерения прогрессирования заболевания, ремиссии заболевания, тяжести симптомов, уменьшения боли, качества жизни, дозы лекарственного препарата, необходимой для поддержания эффекта лечения, уровня маркера заболевания или любого другого поддающегося измерению параметра, соответствующего данному заболеванию, подвергаемому лечению или являющемуся объектом профилактики. Специалист в данной области может контролировать эффективность лечения или профилактики путем измерения любого из таких параметров или любой комбинации параметров. Например, эффективность лечения нарушения, ассоциированного с HTT, можно оценивать, например, путем периодического обследования субъекта. Сравнение более поздних показаний с первоначальными показаниями дает врачу представление об эффективности лечения. Специалист в данной области может контролировать эффективность лечения или профилактики путем измерения любого из таких параметров или любой комбинации параметров. В связи с введением РНКи средства, направленного на HTT, или его фармацевтической композиции, эффективный против HTT-ассоциированного нарушения указывает, что введение клинически приемлемым способом приводит к благоприятному эффекту, по меньшей мере, у статистически значимой части пациентов, такому как улучшение симптомов, излечение, уменьшение проявлений заболевания, продление жизни, улучшение качества жизни, или другому эффекту, обычно считающемуся положительным врачами, знакомыми с лечением HTT-ассоциированных заболеваний и связанных с ними причин.

Лечебный или профилактический эффект очевиден, когда имеет место статистически значимое улучшение одного или более параметров статуса заболевания или отсутствие ухудшения или развития симптомов, которые в противном случае можно было бы ожидать. Например, благоприятное изменение поддающегося измерению параметра заболевания не меньше чем на 10%, предпочтительно не меньше чем на 20, 30, 40, 50% или более, может свидетельствовать об эффективном лечении. Эффективность данного лекарственного РНКи средства или состава такого лекарственного средства также можно оценивать с применением экспериментальной модели данного заболевания на животных, как известно в уровне техники. При использовании экспериментальной модели на животных эффективность лечения подтверждается, если наблюдается статистически значимое снижение маркера или симптома.

В альтернативе эффективность можно измерять по снижению тяжести заболевания, как определяет

- 91 048552 специалист в области диагностики на основании клинически принятой шкалы оценки тяжести заболевания. Любое положительное изменение, приводящее, например, к уменьшению тяжести заболевания, измеренному с использованием соответствующей шкалы!, представляет собой адекватное лечение с применением РНКи средства или состава РНКи средства, как описано в настоящем документе.

Субъектам могут вводить терапевтическое количество дцРНК, например, от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 200 мг/кг.

РНКи средство могут вводить интратекально, путем интравитреальной инъекции или путем внутривенной инфузии в течение некоторого периода времени на регулярной основе. В некоторых вариантах осуществления после начальной схемы лечения лечение можно проводить реже. Введение РНКи средства может снижать уровни HTT, например, в клетке, ткани, крови, образце спинномозговой жидкости или другом компартменте пациента по меньшей мере на 20, 30, 40, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98% или по меньшей мере приблизительно 99% или больше. В предпочтительном варианте осуществления введение РНКи средства может снижать уровни HTT, например, в клетке, ткани, крови, образце спинномозговой жидкости или другом компартменте пациента по меньшей мере на 50%.

Перед введением полной дозы РНКи средства пациентам могут вводить меньшую дозу, такую как 5% реакции на инфузию, и контролировать побочные эффекты, такие как аллергическую реакцию. В другом примере пациента могут наблюдать на предмет нежелательных иммуностимулирующих эффектов, таких как повышенные уровней цитокинов (например, ФНО-альфа или INF-альфа).

В альтернативе РНКи средство могут вводить подкожно, т.е. посредством подкожной инъекции. Для доставки субъекту требуемой, например ежемесячной, дозы РНКи средства можно использовать одну или больше инъекций. Инъекции могут повторять в течение некоторого периода времени. Введение могут повторять на регулярной основе. В некоторых вариантах осуществления после начальной схемы лечения процедуры лечения могут проводить реже. Режим введения повторных доз может включать введение терапевтического количества РНКи средства на регулярной основе, например ежемесячно или до одного раза в квартал, два раза в год, один раз в год. В некоторых вариантах осуществления РНКи средство вводят приблизительно от одного раза в месяц до приблизительно одного раза в квартал (т.е. приблизительно один раз в три месяца).

Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют значение, которое обычно известно специалисту в области, к которой относится данное изобретение. Хотя способы и материалы!, аналогичные или эквивалентные описанным в настоящем документе, могут использоваться при практической реализации или при тестировании РНКи средств и способов, представленных в изобретении, подходящие способы и материалы описаны ниже. Все публикации, заявки на патент, патенты и другие источники, указанные в настоящем документе, включены посредством отсылки во всей своей полноте. В случае противоречий настоящее описание, включая определения, будет иметь преимущественную силу. Кроме того, материалы, способы и примеры носят исключительно иллюстративный характер и не предназначены для ограничения.

Примеры

Пример 1. Коструирование, синтез, выбор и оценка in vitro РНКи средств.

В данном примере описаны способы конструирования, синтеза, выбора и оценки in vitro РНКи средств к HTT.

Источник реагентов.

Если источник реагента в настоящем документе не указан конкретно, такой реагент может быть получен от любого поставщика реагентов для молекулярной биологии со стандартом качества/чистоты для применения в молекулярной биологии.

Биоинформатика миРНК, направленные на транскрипт хантингтина человека (HTT; человек NCBI refseqID NM_002111.8; NCBI GeneID: 3064) или транскрипт HTT мыши (HTT; мышь NCBI refseqID NM_010414.3; NCBI GeneID: 15194), были сконструировны при использовании собственных скриптов R и Python. Человеческая мРНК NM_002111 REFSEQ, версия 8, имеет длину 13498 оснований. Мышиная mPHKNM_010414REFSEQ, версия 3, имеет длину 13237 оснований.

Кроме того, миРНК, направленные на экзон 1 транскрипта хантингтина человека (HTT; человек NCBI refseqID NM_002111.8; NCBI GeneID: 3064), были сконструировны при использовании собственных скриптов R и Python.

Подробные списки немодифицированных нуклеотидных последовательностей смысловой и антисмысловой цепей HTT показаны в табл. 2, 5, 8, 11, 14, 18, 21, 25, 28, 30 и 33. Подробные списки модифицированных нуклеотидных последовательностей смысловой и антисмысловой цепей HTT показаны в табл. 3, 6, 9, 12, 15, 17, 20, 24, 27, 29 и 32.

Следует понимать, что по всему тексту настоящей заявки название дуплекса без десятичного знака эквивалентно названию дуплекса с десятичным знаком, который просто относится к номеру партии дуплекса. Например, AD-564727 эквивалентен AD-564727.1.

Культура клеток и трансфекиии.

Клетки трансфицировали путем добавления 4,9 мкл Opti-MEM плюс 0,1 мкл RNAiMAX на лунку (Invitrogen, Carlsbad CA, номер по кат. 13778-150) к 5 мкл дуплексов миРНК на лунку, с 4 повторностями

- 92 048552 каждого дуплекса миРНК, в 384-луночном планшете и инкубировали при комнатной температуре в течение 15 мин. Затем к смеси миРНК добавляли 40 мкл MEDIA, содержащей ~5х 10³ клеток. Клетки инкубировали в течение 24 ч перед очисткой РНК. Эксперименты проводили с концентрацией 50, 10, 1 и 0,1 нМ. Эксперименты по трансфекции проводили в клетках нейробластомы человека ВЕ(2)С (АТСС CRL2268) со средой EMEM:F12 (номер по каталогу Gibco 11765054).

Культура клеток и трансфекция в 384-луночном формате.

Первичные гепатоциты яванского макака (РСН), свежевыделенные менее чем за 1 ч до трансфекции, выращивали в среде для первичных гепатоцитов. Клетки Hep3B выращивали в соответствующих средах. Трансфекцию проводили путем добавления 14,8 мкл Opti-MEM плюс 0,2 мкл Lipofectamine RNAiMax на лунку (Invitrogen, Carlsbad CA, номер по кат. 13778-150) к 5 мкл каждого дуплекса миРНК в отдельной лунке. Затем смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 15 мин. Затем к смеси миРНК добавляли 80 мкл полной питательной среды без антибиотика, содержащей ~2х10⁴ клеток. Клетки инкубировали в течение 24 ч перед очисткой РНК. Эксперименты с однократной дозой Hep3B проводили при конечной концентрации дуплекса 50, 10, 1 и 0,1 нМ. Эксперименты с однократной дозой в РСН проводили при конечной концентрации дуплекса 50, 10, 1 и 0,1 нМ.

Выделение суммарной РНК с использованием набора для выделения мРНК DYNABEADS.

РНК выделяли с использованием автоматизированного протокола на платформе BioTek-EL406 с использованием DYNABEAD (Invitrogen, номер по кат. 61012). Кратко, в планшет с клетками добавляли 70 мкл лизирующего/связывающего буфера и 10 мкл лизирующего буфера, содержащего 3 мкл магнитных гранул. Планшеты инкубировали на электромагнитном шейкере в течение 10 мин при комнатной температуре, затем собирали магнитные гранулы и удаляли супернатант. Затем связанную с гранулами РНК промывали 2 раза 150 мкл промывочного буфера А и один раз промывочным буфером В. Затем гранулы промывали 150 мкл элюирующего буфера, повторно собирали и удаляли супернатант.

Синтез кДНКс использованием набора для обратной транскрипции кДНК ABI High capacity (Applied Biosystems, Foster City, CA, номер по кат. 4368813).

Десять мкл мастер-микса, содержащего 1 мкл 10х буфера, 0,4 мкл 25х дНТФ, 1 мкл 10х случайных праймеров, 0,5 мкл обратной транскриптазы, 0,5 мкл ингибитора РНКазы и 6,6 мкл H2O на реакцию, добавляли к РНК, выделенной выше. Планшеты герметично закрывали, перемешивали и инкубировали на электромагнитном шейкере в течение 10 мин при комнатной температуре с последующим инкубированием в течение 2 ч при 37°С.

ПЦР в реальном времени.

Два мкл кДНК добавляли к мастер-миксу, содержащему 0,5 мкл зонда TaqMan к человеческому или мышиному GAPDH (ThermoFisher, номер по кат. 4352934Е или 4351309) и 0,5 мкл соответствующего зонда HTT (доступного в продаже, например, от Thermo Fisher) и 5 мкл мастер-микса для зондов Lightcycler 480 (номер по кат. 04887301001) на лунку в 384-луночных планшетах (номер по кат. 04887301001). ПЦР в реальном времени проводили в системе для ПЦР в реальном времени LightCycler480 (Roche). Каждый дуплекс тестировали при N=4, и данные нормализовали по клеткам, трансфицированным ненаправленной контрольной миРНК. Для расчета относительного кратного изменения данные ПЦР в реаль ном времени анализировали с использованием метода AACt и нормализовали по анализам, проведенным с клетками, трансфицированными ненаправленной контрольной миРНК.

Результаты скрининга дцРНК средств, перечисленных в табл. 2 и 3, в клетках ВЕ(2)С представлены в табл. 4.

Результаты скрининга дцРНК средств, перечисленных в табл. 5 и 6, в клетках ВЕ(2)С представлены в табл. 7.

Результаты скрининга дцРНК средств, перечисленных в табл. 8 и 9, в клетках ВЕ(2)С представлены в табл. 10.

Результаты скрининга дцРНК средств, перечисленных в табл. 11 и 12, в клетках ВЕ(2)С представлены в табл. 13.

Результаты скрининга дцРНК средств, перечисленных в табл. 14 и 15, в клетках ВЕ(2)С представлены в табл. 16.

Результаты скрининга дцРНК средств, перечисленных в табл. 17 и 18, в клетках ВЕ(2)С представлены в табл. 19.

Результаты скрининга дцРНК средств, перечисленных в табл. 20 и 21, в клетках Hep3B представлены в табл. 22.

Результаты скрининга дцРНК средств, перечисленных в табл. 20 и 21, в клетках первичных гепатоцитов яванского макака (РСН) представлены в табл. 23.

Результаты скрининга дцРНК средств, перечисленных в табл. 24 и 25, в клетках ВЕ(2)С представлены в табл. 26.

Результаты скрининга дцРНК средств, перечисленных в табл. 27 и 28, в клетках ВЕ(2)С представлены в табл. 34.

Результаты скрининга дцРНК средств, перечисленных в табл. 29 и 30, в клетках ВЕ(2)С представ- 93 048552 лены в табл. 31.

Таблица 1

Сокращения нуклеотидных мономеров, используемые для представления последовательностей нуклеиновых кислот. Следует понимать, что эти мономеры, в случае их присутствия в олигонуклеотиде, взаимно связаны 5'-3'-фосфодиэфирными связями

Сокращение А АЬ Abs Af Afs	Нуклеотид(ы) Аденозин-31 -фосфат бета-Е-ад енозин-3 '-фосфат бета-Е-ад енозин-3 '-фосфоротиоат 2'-фтораденозин-3'-фосфат 2'-фтораденозин-3'-фосфоротиоат
As	аденозин-3'-фосфоротиоат
С	цитидин-3'-фосфат
Cb	бета-Е-цитидин-З '-фосфат
Cbs	бета-Е-цитидин-З '-фосфоротиоат
Cf	2'-фторцитидин-3'-фосфат
Cfs	2'-фторцитидин-3'-фосфоротиоат
Cs	цитидин-3'-фосфоротиоат
G	гуанозин-3'-фосфат
Gb	бета-Е-гуанозин-З'-фосфат
Gbs	бета-Е-гуанозин-З'-фосфоротиоат
Gf	2'-фторгуанозин-3'-фосфат
Gfs	2'-фторгуанозин-3'-фосфоротиоат
Gs	гуанозин-3'-фосфоротиоат
T	5'-метилуридин-3'-фосфат
Tf	2'-фтор-5-метилуридин-3'-фосфат
Tfs	2'-фтор-5-метилуридин-3'-фосфоротиоат
Ts	5-метилуридин-3'-фосфоротиоат
U	Уридин-3 '-фосфат
Uf	2'-фторур идин-3'-фосфат
Ufs	2'-фторур идин-3'-фосфоротиоат
Us	уридин -3'-фосфоротиоат
N	любой нуклеотид, модифицированный или немодифицированный
a	2'-О-метиладенозин-3'-фосфат
as	2'-О-метиладенозин-3'-фосфоротиоат
c	2'-О-метилцитидин-3 '-фосфат
cs	2'-О-метилцитидин-3'-фосфоротиоат
g	2'-О-метилгуанозин-3'-фосфат
gs	2'-О-метилгуанозин-3'-фосфоротиоат
t	2'-О-метил-5-метилуридин-3'-фосфат
ts	2'-О-метил-5-метилуридин-3'-фосфоротиоат
u	2'-О-метилур идин-3'-фосфат
us	2'-О-метилуридин-3'-фосфоротиоат
s	фосфоротиоатная связь
LIO	ЬЕ(холестерилкарбоксамидокапроил)-4-гидроксипролинол (Hyp-C6-Chol)
L96	М-[трис(СаШАс-алкил)-амидодеканоил)]-4-гидроксипролинол Нур-(СаШАс-алкил)3
Y34	2-гидроксиметил-тетрагидрофуран-4-метокси-3-фосфат (абазическая 2'ОМе фураноза)
Y44	инвертированная абазическая ДНК (2-гидроксиметил-тетрагидрофуран5-фосфат)
(Agn)	Аденозин-гликоль нуклеиновая кислота (GNA)
(Cgn)	Цитидин-гликоль нуклеиновая кислота (GNA)
(Ggn)	Гуанозин-гликоль нуклеиновая кислота (GNA)
(Tgn)	Тимидин-гликоль нуклеиновая кислота (GNA) S-изомер
P	Фосфат
VP	Финил-фосфонат
dA	2'-дезоксиаденозин-3 '-фосфат
dAs	2'-дезоксиаденозин-3'-фосфоротиоат

- 94 048552

dC	2'-дезоксицитидин-3 '-фосфат
dCs	2'-дезоксицитидин-3'-фосфоротиоат
dG	2'-дезоксигу анозин-3'-фосфат
dGs	2'-дезоксигуанозин-3'-фосфоротиоат
dT	2'-дезокситимидин-3'-фосфат
dTs	2'-дезокситимидин-3'-фосфоротиоат
dU	2'-дезоксиуридин
dUs	2'-дезоксиуридин-3'-фосфоротиоат
(Ahd)	2'-О-гексадецил-аденозин-3'-фосфат
(Ahds)	2'-О-гексадецил-аденозин-3'-фосфоротиоат
(Chd)	2'-О-гексадецил-цитидин-3'-фосфат
(Chds)	2'-О-гексадецил-цитидин-3'-фосфоротиоат
(Ghd)	2'-О-гексадецил-гуанозин-3'-фосфат
(Ghds)	2'-О-гексадецил-гуанозин-3'-фосфоротиоат
(Uhd)	2'-О-гексадецил-уридин-3'-фосфат
(Uhds)	2'-О-гексадецил-уридин-3'-фосфоротиоат
(C2p)	цитидин-2'-фосфат
(G2p)	гуанозин-2'-фосфат
(U2p)	уридин-2'-фосфат
(A2p)	аденозин-2'-фосфат

Немодифицированные последовательности смысловой и антисмысловой цепей дцРНК средств к хантингтину (HTT)

Таблица 2

Название дуплекса	Смысловая последовательность 5 '->3'	SEQ ID NO:	Источник и даапа он	Диапазон	Антисмысловая последовательность Б 1 —>31	SEQ ID NO:	Источник и диапазон	Диапавок
AD384118.1	GGACUAAAACUUUUUAUC AAA	15	NM_010414·3_1201 6-12036 s	12016-12036	UUU GAUAAAAAGUUUUAG UCCCU	216	NM_010414.3-12014- 12036 as	12014-12036
AD380543.1	CUCUGUUACCAGCUACUA CAU	16	NM_010414.3_7846 -7866 G21U s	7846-7866	AUGUAGTAGCUGGUAACA GAGAA	217	NM_010414.3-7844- 7866 CIA as	7844-7866
AD380533.1	CCUGUCCCUUCUCUGUUA CCA	17	NM_010414.3_7836 -7856 s	7836-7856	UGGUAACAGAGAAGGGAC AGGAU	218	NM_010414.3-78347856 as	7834-7856
AD384038.1	UUUGUGAGUCUAGCAUCU GAU	18	NM-010414.3-1191 6-11936 G21U s	11916-11936	AUCAGATG CUAGACUCAC AAAGC	219	NM-010414.3-11914- 11936 CIA as	11914-11936
AD- 380805.1	GAUCAGUGAAGUGGUUCG AUU	19	NM-010414.3-8189 -8209 C21U s	8189-8209	AAU CGAACCACUU CACU G AUCAG	220	NM-010414.3-81878209 GIA as	8187-8209
AD380117.1	CCUCUGGUAUGGAAACUC GGU	20	NM_010414.3-7338 -7358 G21U s	7338-7358	ACCGAGTUUC CAUAC CAG AGGAG	221	NM_010414.3-7336- 7358 CIA as	7336-7358
AD381341.1	AGAGUCCUUGGUCAAGCU AAU	21	NM_010414.3-8789 -8809 G21U s	8789-8809	AUUAGCTUGACCAAGGAC UCUGU	222	NM_010414.3-87878809 CIA as	8787-8809
AD379426.1	UUCAACCUAAGCCUUUUG GCU	22	NM-010414.3-6525 -6545 s	6525-6545	AGCCAAAAGGCUUAGGUU GAACU	223	NM_010414.3-65236545 as	6523-6545
AD- 380888.1	UGACAGAACUACGGAGAG UGU	23	NM-010414.3-8272 -8292 C21U s	8272-8292	ACACUCTCCGUAGUUCUG UCAGC	224	NM-010414.3-82708292 GIA as	8270-8292
AD384841.1	CUCCAUGUGUGCUUGUCA CAU	24	NM_010414.3-1287 1-12891 C21U s	12871-12891	AUGUGACAAGCACACAUG GAGGG	225	NM_010414.3-12869- 12891 GIA as	12869-12891
AD380853.1	CGAACGUACCCAGUUUGA AAU	25	ΝΜ-0104Ϊ4.3-8237 -8257 s	8237-8257	AUUUCAAACU GG GUAC GU UCGGU	22 6	NM-010414.3-82358257 as	8235-8257
AD379602.1	AUACCACAUCAUACCAGU CUU	26	NM-010414.3-6739 -6759 C21U s	6739-6759	AAGACUGGUAUGAUGUGG UAUCA	227	NM_010414.3-6737- 6759 GIA as	6737-6759
AD382484.1	CUGCAUGUGACAAAGUUU AUU	27	NM-010414.3-1012 9-10149 G21U s	10129-10149	AAUAAACUUU GU CACAU G CAGCA	228	NM-010414.3-10127- 10149 CIA as	10127-10149
AD380741.1	UUCACUCCUGUUCGCAGU UUC	28	NM_010414.3-8104 -8124 s	8104-8124	GAAACUGCGAACAGGAGU GAAUA	229	NM_010414.3-81028124 as	8102-8124
AD380534.1	CUGUCCCUUCUCUGUUAC CAU	29	NM-010414.3-7837 -7857 G21U s	7837-7857	AUG GUAACAGAGAAG G GA CAGGA	230	NM-010414.3-78357857 CIA as	7835-7857
AD384053.1	UCUGAGAAUGGGACUCAA UUU	30	NM_010414.3-1193 1-11951 s	11931-11951	AAAUU GAGU С CCAUUCU C AGAUG	231	NM_010414.3-1192911951 as	11929-11951
AD380916.1	UCAGAAGAUGAGAUCCUC AUU	31	NM-010414.3-8298 -8318 s	8298-8318	AAU GAGGAU CU CAU CUU C UGAAG	232	NM_010414.3-82968318 as	8296-8318
AD380402.1	CCACUGAAGGCUCUCGAU ACU	32	NM 010414.3 7704 -7724 C21U s	7704-7724	AGUAUCGAGAGCCUUCAG UGGCU	233	NM_010414.3-7702- 7724 GIA as	7702-7724

- 95 048552

AD381464.1	GAGUCUGUGAUUGUAGCU AUU	33	NM___010414.3___8946 -8966 G21U s	8946-8966	AAUAGCTACAAUCACAGA CUCGC	23 4	NM__010414.3___89448966 CIA as	8944-8966
AD-	UCAUGGCAUUUGAUCCAU		NM 010414.3 6888		AUCAUGGAUCAAAUGCCA		NM-010414.3-6886-
379729.1	GAU	34	-6908 G21U s	6888-6908	UGACA	235	6908 CIA as	6886-6908
AD-	ACGGCAUCCUCUAUGUGU		NM 010414.3 8452		ACAACACAUAGAG GAU G C		NM_010414.3-8450-
381065.1	UGU	35	-8472 G21U s	8452-8472	CGUGC	236	8472 CIA as	8450-8472
AD-	UGAGCGAGAUUGCUAAUG		NM 010414.3 6565		AGCCAUTAGCAAUCUCGC		NM_010414.3-6563-
379466.1	GCU	36	-6585 C21U s	6565-6585	UCAUG	237	6585 GIA as	6563-6585
AD-	CGCUGACAGAACUACGGA		NM 010414.3 8269		AUCUCCGUAGUUCUGUCA		NM_010414.3-8267-
380885.1	GAU	37	-8289 G21U s	8269-8289	GCGUC	238	8289 CIA as	8267-8289
AD-	AAGCAGGUCACAUACUCC		NM 010414.3 7097		AUU G GAGUAU GUGACCU G		NM_010414.3-7095-
379897.1	AAU	38	-7117 G21U s	7097-7117	CUUUC	239	7117 CIA as	7095-7117
AD-	CCAGUUGUUAGUGACUAU		NM 010414.3 8511		AAGAUAGU CACUAACAAC		NM_010414.3-8509-
381124.1	CUU	39	-8531 G21U s	8511-8531	UGGAA	240	8531 CIA as	8509-8531
AD-	UCAGUGAAGUGGUUCGAU		NM 010414.3 8191		AAGAU C GAAC CACUUCAC		NM_010414.3-8189-
380807.1	CUU	40	-8211 C21U s	8191-8211	UGAUC	241	8211 GIA as	8189-8211
AD-	AUCAGUGAAGUGGUUCGA		NM 010414.3 8190		AGAUCGAACCACUUCACU		NM 010414.3 8188-
380806.1	UCU	41	-8210 s	8190-8210	GAUCA	242	8210 as	8188-8210
AD-	CCAUGUGUGCUUGUCACA		NM 010414.3 1287		AAGU GU GACAAGCACACA		NM-010414.3-12871-
384843.1	CUU	42	3-12893 C21U s	12873-12893	UGGAG	243	12893 GIA as	12871-12893
AD-	UUUCAGCAUCUGUGAUAC		NM 010414.3 8653		UCU GUAT CACAGAUGCUG		NM_010414.3-8651-
381257.1	AGA	4 3	-8673 s	8653-8673	AAAAU	244	8673 as	8651-8673
AD-	AAGGCUCUCGAUACCAGA		NM 010414.3 7710		AAAUCUGGUAUCGAGAGC		NM_010414.3-7708-
380408.1	UUU	44	-7730 s	7710-7730	CUUCA	245	7730 as	7708-7730
AD-	UAGAUGACUUCUUUCCAC		NM 010414.3 9052		AAGGUGGAAAGAAGUCAU		NM_010414.3-9050-
381570.1	CUU	45	-9072 C21U s	9052-9072	CUAGG	246	9072 GIA as	9050-9072
AD-	GUUAACAGCUAUACUCGU		NM 010414.3 7314		AACAC GAGUAUAG CU GUU		NM_010414.3-7312-
380093.1	GUU	46	-7334 G21U s	7314-7334	AACUA	247	7334 CIA as	7312-7334
AD-	UCCAACCUCAAAGGAAUA		NM 010414.3 8535		AGCUAUTCCUUUGAGGUU		NM-010414.3-8533-
381148.1	GCU	47	-8555 C21U s	8535-8555	GGACA	248	8555 GIA as	8533-8555
AD-	UUGCUAAUGGCCAAAAGA		NM 010414.3 6574		AACUCUTUUGGCCAUUAG		NM_010414.3-6572-
379475.1	GUU	48	-6594 C21U s	6574-6594	CAAUC	249	6594 GIA as	6572-6594
AD-	CUGCUGUCCAACCUCAAA		NM 010414.3 8529		UCCUUUGAGGUUGGACAG		NM_010414.3-8527-
381142.1	GGA	49	-8549 s	8529-8549	CAGAU	250	8549 as	8527-8549
AD-	CCGAACGUACCCAGUUUG		NM 010414.3 8236		UUUCAAACUGGGUACGUU		NM 010414.3 8234-
380852.1	AAA	50	-8256 s	8236-8256	CGGUG	251	8256 as	8234-8256
AD-	AAGUAGACUCAGAUAUAC		NM_010414.3_7135		UUU GUATAU CU GAGU CUA		NM-010414.3-7133-
379935. 1	AAA	51	-7155 s	7135-7155	CUUCC	252	7155 as	7133-7155
AD-	GCUCAUUCCAGUUGUUAG		NM_010414.3_8504		U CACUAACAACUGGAAUG		NM_010414.3-8502-
381117.1	UGA	52	-8524 s	8504-8524	AGCUG	253	8524 as	8502-8524
AD-	CAGUGAAGUGGUUCGAUC		NM___010414.3_8192		AGAGAUC GAAC CACUUCA		NM-010414.3-8190-
380808.1	UCU	53	-8212 s	8192-8212	CUGAU	254	8212 as	8190-8212
AD-	GAGAUUGCUAAUGGCCAA		NM_010414.3_6570		AUUUUGGCCAUUAGCAAU		NM-010414.3-6568-
379471.1	AAU	54	-o5u0 G21U s	6570-6590	CUCGC	255	6590 CIA as	6568-6590
AD-	GAGUCCUUGGUCAAGCUA		NM_010414.3_8790		ACUUAGCUUGACCAAGGA		NM_010414.3-8788-
381342. 1	AGU	55	-8810 s	8790-8810	CUCUG	256	8810 as	8788-8810
AD-	GCUCUCGAUACCAGAUUU		NM_010414.3_7713		U CCAAAT CU GGUAUCGAG		NM_010414.3-7711-
380411.1	GGA	56	-7733 s	7713-7733	AGCCU	257	7733 as	7711-7733
AD-	CAUGUGACAAAGUUUAUG		NM_010414.3_1013		UUC CAUAAACUUU GU CAC		NM_010414.3-10130-
382487.1	GAA	57	2-10152 s	10132-10152	AUGCA	258	10152 as	10130-10152
AD-	UCCUCUGGUAUGGAAACU		NM_010414.3-7337		ACGAGUTUCCAUACCAGA		NM_010414.3-7335-
380116.1	CGU	58	-7357 G21U s	7337-7357	GGAGG	259	7357 CIA as	7335-7357
AD-	CAACCUCAAAGGAAUAGC		NM-010414.3-8537		UGGGCUAUUCCUUUGAGG		NM_010414.3-8535-
381150.1	CCA	59	-8557 s	8537-8557	UUGGA	260	8557 as	8535-8557
AD-	UGCUAAUGGCCAAAAGAG		NM-010414.3-6575		AGACUCTUUUGGCCAUUA		NM_010414.3-6573-
379476.1	UCU	60	-6595 C21U s	6575-6595	GCAAU	261	6595 GIA as	6573-6595
AD-	CCUAUGCCCGUGUAAAGU		NM-010414.3-1008		AACACUTUACACGGGCAU		NM-010414.3-10087-
382444.1	GUU	61	9-10109 G21U s	10089-10109	AGGAA	262	10109 CIA as	10087-10109
AD-	GACGCUGACAGAACUACG		NM 010414.3 8267		AUCCGUAGUUCUGUCAGC		NM-010414.3-8265-
380883.1	GAU	62	-8287 G21U s	8267-8287	GUCAG	263	8287 CIA as	8265-8287
AD-	ACUCAGAUAUACAAAACC		NM_010414.3-7141		U GAGGUTUU GUAUAU CU G		NM_010414.3-7139-
379941.1	UCA	63	-7161 s	7141-7161	AGUCU	264	7161 as	7139-7161
AD-	UUCUUUCCACCUCAAGAU		NM-010414.3-9060		AACAUCTUGAGGUGGAAA		NM_010414.3-9058-
381578.1	GUU	64	-9080 C21U s	9060-9080	GAAGU	265	9080 GIA as	9058-9080
AD-	CAGCGAGUCUGUGAUUGU		NM_010414.3-8942		ACUACAAUCACAGACUCG		NM_010414.3-8940-
381460.1	AGU	65	-8962 C21U s	8942-8962	CUGUC	266	8962 GIA as	8940-8962
AD-	AGACUCAGAUAUACAAAA		NM_010414.3-7139		AGGUUUTGUAUAU CU GAG		NM_010414.3-7137-
379939.1	CCU	66	-7159 s	7139-7159	UCU AC	267	7159 as	7137-7159
AD-	UUGUGAGUCUAGCAUCUG		NM-010414.3-1191		U CU CAGAU G CUAGACUCA		NM-010414.3-11915-
384039.1	AGA	67	7-11937 s	11917-11937	CAAAG	268	11937 as	11915-11937
AD-	UUGAUAUUCACUCCUGUU		NM_010414.3-8098		ACGAACAGGAGUGAAUAU		NM_010414.3-8096-
380735.1	CGU	68	-8118 C21U s	8098-8118	CAACC	269	8118 GIA as	8096-8118
AD-	UAGCUACUCAGUCUAGUC		NM-010414.3-1018		ACCGACTAGACUGAGUAG		NM_010414.3-10186-
382525.1	GGU	69	8-10208 G21U s	10188-10208	CUACA	270	10208 CIA as	10186-10208
AD-	CCUGUGUCUCCAGUCAAU		NM-010414.3-8058		AGAAUUGACUGGAGACAC		NM-010414.3-8056-
380713.1	UCU	70	-8078 C21U s	8058-8078	AGGUG	271	8078 GIA as	8056-8078
AD-	AGGGAACAUGCACUAUGU		NM-010414.3-9696		ACAACATAGUG CAUGUUC		NM-010414.3-9694-
382149.1	UGU	71	-9716 G21U s	9696-9716	CCUGC	272	9716 CIA as	9694-9716
AD-	AGCCAUUGCAGUACAACC		NM_010414.3-7055		ACAGGUT GUACUG CAAU G		NM_010414.3-7053-
379855.1	UGU	72	-7075 G21U s	7055-7075	GCUUC	273	7075 CIA as	7053-7075

- 96 048552

AD383508.1	UGCAAGGUUCCCUACCAA АСА	73	NM_010414.3-1125 1-11271 s	11251-11271	UGUUUGGUAGGGAACCUU GCAUC	274	NM-010414.3-11249-	11249-11271
11271 as
AD381273.1	ACAGAUGUGUGGAGUAAU GCU	74	ΝΜ-0104Ϊ4.3-8669 -8689 s	8669-8689	AGCAUUACUCCACACAUC UGUAU	275	NM-010414.3-86678689 as	8667-8689
AD- 382483.1	GCUGCAUGUGACAAAGUU UAU	75	NM-010414.3-1012 8-10148 s	10128-10148	AUAAACTUUGUCACAUGC AGCAC	276	NM_010414.3-10126- 10148 as	10126-10148
AD382481.1	GUGCUGCAUGUGACAAAG UUU	76	NM_010414.3-1012 6-10146 s	10126-10146	AAACUUTGUCACAUGCAG CACAG	277	NM-010414.3-1012410146 as	10124-10146
AD382485.1	UGCAUGUGACAAAGUUUA UGU	77	NM_010414.3-1013 0-10150 G21U s	10130-10150	ACAUAAACUUUGUCACAU GCAGC	278	NM_010414.3-1012810150 CIA as	10128-10150
AD380092.1	AGUUAACAGCUAUACUCG UGU	78	NM-010414.3-7313 -7333 s	7313-7333	ACACGAGUAUAGCUGUUA ACUAG	279	NM_010414.3-73117333 as	7311-7333
AD379420.1	GCUCGGAGUUCAACCUAA GCU	79	NM_010414.3-6517 -6537 C21U s	6517-6537	AGCUUAGGUUGAACUCCG AGCUC	280	NM_010414.3-65156537 GIA as	6515-6537
AD380800.1	AUCCUGAUCAGUGAAGUG GUU	80	NM-010414.3-8184 -8204 s	8184-8204	AACCACTUCACUGAUCAG GAUGA	281	NM-010414.3-81828204 as	8182-8204
AD384030.1	CAGUCAGCUUUGUGAGUC UAU	81	NM 010414.3 1190 8-11928 G21U s	11908-11928	AUAGACTCACAAAGCUGA CUGUA	282	NM 010414.3 11906- 11928 CIA as	11906-11928
AD380737.1	GAUAUUCACUCCUGUUCG CAU	82	NM-010414.3-8100 -8120 G21U s	8100-8120	AUGCGAACAGGAGUGAAU AUCAA	283	NM-010414.3-80988120 CIA as	8098-8120
AD382780.1	UUGAUGCACUCUCCUAGU CUU	83	NM_010414.3-1046 3-10483 C21U s	10463-10483	AAGACUAGGAGAGUGCAU CAACA	284	NM_010414.3-10461- 10483 GIA as	10461-10483
AD379944.1	CAGAUAUACAAAACCUCA GUU	84	NM-010414.3-7144 -7164 C21U s	7144-7164	AACUGAGGUUUUGUAUAU CUGAG	285	NM_010414.3-71427164 GIA as	7142-7164
AD379461.1	UGGCAUGAGCGAGAUUGC UAA	85	NM_010414.3-6560 -6580 s	6560-6580	UUAGCAAUCUCGCUCAUG CCAAG	286	NM_010414.3-65586580 as	6558-6580
AD381856. 1	ACAGGUGGAUGUGAACCU UUU	86	NM_010414.3-9353 -9373 s	9353-9373	AAAAGGTUCACAUCCACC UGUUC	287	NM_010414.3-93519373 as	9351-9373
AD379418.1	GAGCUCGGAGUUCAACCU AAU	87	NM-010414.3-6515 -6535 G21U s	6515-6535	AUUAGGTUGAACUCCGAG CUCAU	288	NM-010414.3-65136535 CIA as	6513-6535
AD382924. 1	UGUCCCUUUGUAUCUUCU GCA	88	NM_010414.3-1060 7-10627 s	10607-10627	UGCAGAAGAUACAAAGGG ACAGA	289	NM_010414.3-1060510627 as	10605-10627
AD383759.1	ACUCCUCAUGGUAGAUGU UCA	89	NM-010414.3-1157 8-11598 s	11578-11598	UGAACATCUACCAUGAGG AGUAA	290	NM_010414.3-11576- 11598 as	11576-11598
AD380409.1	AGGCUCUCGAUACCAGAU UUG	90	NM 010414.3 7711 -7731 s	7711-7731	CAAAUCTGGUAUCGAGAG CCUUC	291	NM 010414.3 77097731 as	7709-7731
AD- 379380.1	CUCGGAGUUCAACCUAAG CCU	91	NM_002111.8_6562 -6582 s	6562-6582	AGGCUUAGGUUGAACUCC GAGCU	292	NM-010414.3-65166538 as	6562-6582
AD381145.1	CUGUCCAACCUCAAAGGA AUA	92	NM_010414.3-8532 -8552 s	8532-8552	UAUUCCTUUGAGGUUGGA CAGCA	293	NM_010414.3-85308552 as	8530-8552
AD384054.1	CUGAGAAUGGGACUCAAU UUU	93	NM—010414.3-1Ϊ93 2-11952 s	11932-11952	AAAAUUGAGUCCCAUUCU CAGAU	294	NM-010 4 '14.3 - Ϊ193 0 11952 as	11930-11952
AD380796. 1	CGUCAUCCUGAUCAGUGA AGU	94	NM-010414.3-8180 -8200 s	8180-8200	ACUUCACUGAUCAGGAUG ACGGG	295	NM_010414.3-81788200 as	8178-8200
AD382960.1	CAAAGGUGUCUCUGAGCU AUU	95	NM_010414.3-1066 3-10683 G21U s	10663-10683	AAUAGCTCAGAGACACCU UUGGG	296	NM_010414.3-1066110683 CIA as	10661-10683
AD380555.1	CUACUACAGGUGCUCUUA UCA	96	NM_010414.3-7858 -7878 s	7858-7878	UGAUAAGAGCACCUGUAG UAGCU	297	NM_010414.3-78567878 as	7856-7878
AD379462.1	GGCAUGAGCGAGAUUGCU AAU	97	NM-010414.3-6561 -6581 s	6561-6581	AUUAGCAAUCUCGCUCAU GCCAA	298	NM_010414.3-65596581 as	6559-6581
AD382118.1	UGGCAGGAGUGCUUUGCA AUU	98	NM-010414.3-9665 -9685 G21U s	9665-9685	AAUUGCAAAGCACUCCUG CCAUU	299	NM-010414.3-9663- 9685 CIA as	9663-9685
AD380414.1	CUCGAUACCAGAUUUGGA AGA	99	NM_010414.3-7716 -7736 s	7716-7736	UCUUCCAAAUCUGGUAUC GAGAG	300	NM_010414.3-77147736 as	7714-7736
AD380091.1	UAGUUAACAGCUAUACUC GUU	100	NM_O1O414.3-7312 -7332 G21U s	7312-7332	AACGAGTAUAGCUGUUAA CUAGG	301	NM-010414.3-73107332 CIA as	7310-7332
AD383761.1	UCCUCAUGGUAGAUGUUC AUA	101	NM 010414.3 1158 0-11600 s	11580-11600	UAUGAACAUCUACCAUGA GGAGU	302	NM 010414.3 1157811600 as	11578-11600
AD380740.1	AUUCACUCCUGUUCGCAG UUU	102	NM-010414.3-8103 -8123 s	8103-8123	AAACUGCGAACAGGAGUG AAUAU	303	NM-010414.3-81018123 as	8101-8123
AD379945.1	AGAUAUACAAAACCUCAG UCA	103	NM_010414.3-7145 -7165 s	7145-7165	UGACUGAGGUUUUGUAUA UCUGA	304	NM_010414.3-71437165 as	7143-7165
AD379425.1	GUUCAACCUAAGCCUUUU GGU	104	NM_010414.3-6524 -6544 C21U s	6524-6544	ACCAAAAGGCUUAGGUUG AACUC	305	NM_010414.3-65226544 GIA as	6522-6544
AD380886.1	GCUGACAGAACUACGGAG AGU	105	NM-010414.3-8270 -8290 s	8270-8290	ACUCUCCGUAGUUCUGUC AGCGU	306	NM-010414.3-82688290 as	8268-8290
AD384366.1	CUGCACAUGUACCCUUCA GGA	106	NM-010414.3-1230 7-12327 s	12307-12327	UCCUGAAGGGUACAUGUG CAGAC	307	NM_010414.3-12305- 12327 as	12305-12327
AD380798.1	UCAUCCUGAUCAGUGAAG UGU	107	NM-010414.3-8182 -8202 G21U s	8182-8202	ACACUUCACUGAUCAGGA UGACG	308	NM-010414.3-81808202 CIA as	8180-8202
AD379463.1	GCAUGAGCGAGAUUGCUA AUU	108	NM_010414.3-6562 -6582 G21U s	6562-6582	AAUUAGCAAUCUCGCUCA UGCCA	309	NM_010414.3-65606582 CIA as	6560-6582
AD382148.1	CAGGGAACAUGCACUAUG UUU	109	NM-010414.3-9695 -9715 G21U s	9695-9715	AAACAUAGUGCAUGUUCC CUGCA	310	NM_010414.3-9693- 9715 CIA as	9693-9715
AD357754.1	UUGUUCUUUCUCGUAUUC AGU	110	NM-002111.8-5223 -5243 G21U s	5223-5243	ACUGAATACGAGAAAGAA CAAUA	311	NM-002111.8-52215243 CIA as	5221-5243
AD356938. 1	UGCAGAUAAGAAUGCUAU UCA	111	NM_002111.8-4387 -4407 s	4387-4407	UGAAUAGCAUUCUUAUCU GCACG	312	NM_002111.8_43854407 as	4385-4407
AD355054.1	CAAACUCUAUAAAGUUCC UCU	112	NM-002111.8-2347 -2367 s	2347-2367	AGAGGAACUUUAUAGAGU UUGCU	313	NM-002111.8-2345- 2367 as	2345-2367

- 97 048552

AD357748.1	AAGAUAUUGUUCUUUCUC GUA	113	NMJ002111.8___5217 -5237 s	5217-5237	UACGAGAAAGAACAAUAU CUUCA	314	NM__002111.8___52155237 as	5215-5237
AD- 355704.1	CUGAAACUUCUCAUGCAU GAU	114	NM_002111.8_3035 -3055 G21U s	3035-3055	AUCAUGCAUGAGAAGUUU CAGGU	315	NM__002111.8__30333055 CIA as	3033-3055
AD356946.1	AGAAUGCUAUUCAUAAUC АСА	115	NM_002111.8_4395 -4415 s	4395-4415	UGUGAUTAUGAAUAGCAU UCUUA	316	NM_002111.8_43934415 as	4393-4415
AD353499.1	UCAACAAAGUUAUCAAAG CUU	116	NM_002111.8_603623 s	603-623	AAGCUUTGAUAACUUUGU UGAGG	317	NM_002111.8_601623 as	601-623
AD354076.1	GAACUGACGUUACAUCAU АСА	117	NM_002111.8_1226 -1246 s	1226-1246	UGUAUGAUGUAACGUCAG UUCAU	318	NM_002111.8_12241246 as	1224-1246
AD356630.1	CCUGAAAUCCUGCUUUAG UCU	118	NM_0021U.8_4039 -4059 G21U s	4039-4059	AGACUAAAGCAGGAUUUC AGGUA	319	NM_002111.8_4037- 4059 CIA as	4037-4059
AD353351.1	CAUUGUCUGACAAUAUGU GAA	119	NM_002111.8_455475 s	455-475	UUCACATAUUGUCAGACA AUGAU	320	NM_002111.8_453475 as	453-475
AD359803.1	CAGUCGUACUCAGUUUGA AGA	120	NM_002111.8_7528 -7548 s	7528-7548	UCUUCAAACUGAGUACGA CUGGU	321	NM_002111.8_75267548 as	7526-7548
AD- 382526.1	AGCUACUCAGUCUAGUCG GGU	121	NM_010414.3__1018 9-10209 C21U s	10189-10209	ACCCGACUAGACUGAGUA GCUAC	322	NM_010414.3_10187- 10209 GIA as	10187-10209
AD356975.1	UUUGAACCUCUUGUUAUA AAA	122	NM 002111.8 4424 -4444 s	4424-4444	UUUUAUAACAAGAGGUUC AAACA	323	NN 002111.8 44224444 as	4422-4444
AD- 356974.1	GUUUGAACCUCUUGUUAU AAA	12 3	NM_002111.8_4423 -4443 s	4423-4443	UUUAUAACAAGAGGUUCA AACAA	324	NM_002111.8_44214443 as	4421-4443
AD355117.1	CUUGAACUACAUCGAUCA UGU	124	NM_002111.8_2410 -2430 G21U s	2410-2430	ACAUGAT CGAUGUAGUU C AAGAU	325	NM_002111.8_2408- 2430 CIA as	2408-2430
AD357755.1	UGUUCUUUCUCGUAUUCA GGA	125	NM_002111.8_5224 -5244 s	5224-5244	UCCUGAAUACGAGAAAGA ACAAU	326	NM_002111.8_52225244 as	5222-5244
AD- 356382.1	GCAGCUUCUAGACAAUCU GAU	126	NM_002111.8_3773 -3793 s	3773-3793	AUCAGATUGUCUAGAAGC UGCAC	327	NM_002111.8_37713793 as	3771-3793
AD356973.1	UGUUUGAACCUCUUGUUA UAA	127	№4^002111.8^4422 -4442 s	4422-4442	UUAUAACAAGAGGUUCAA ACAAA	328	NM_002111.8_44204442 as	4420-4442
AD358488.1	GAAAACCUUUCAACUCCA ACU	128	NM_002111.8_6035 -6055 C21U s	6035-6055	AGUUGGAGUUGAAAGGUU UUCAC	329	NM_002111.8_6033- 6055 GIA as	6033-6055
AD354078.1	ACUGACGUUACAUCAUAC АСА	129	NM_002111.8_1228 -1248 s	1228-1248	UGUGUATGAUGUAACGUC AGUUC	330	NM_002111.8_1226- 1248 as	1226-1248
AD- 356638.1	CCUGCUUUAGUCGAGAAC CAA	130	NMJJ02111.8__4047 -4067 s	4047-4067	UUGGUUCUCGACUAAAGC AGGAU	331	№4__002 111. 8^40454067 as	4045-4067
AD- 357096.1	UGGAUUCAGAUCAGGUGU UUA	131	NM_002111.8_4545 -4565 s	4545-4565	UAAACACCUGAUCUGAAU CCAGA	332	NM_002111.8_45434565 as	4543-4565
AD- 361492.1	CUGCUGACUUGUUUACGA AAU	132	NM_002111.8_9536 -9556 s	9536-9556	AUUUCGTAAACAAGUCAG CAGCC	333	NM_002111.8_95349556 as	9534-9556
AD382775.1	UGGUGUUGAUGCACUCUC CUA	133	NM_010414.3-1045 8-10478 s	10458-10478	UAGGAGAGUGCAUCAACA CCAGG	334	NM__010414.3-1045610478 as	10456-10478
AD- 357239.1	CAGAUCAUUGGAAUUCCU AAA	134	NM_002111. 8_4688 -4708 s	4688-4708	UUUAGGAAUUCCAAUGAU CUGUU	335	NM_002111.8-46864708 as	4686-4708
AD357756.1	GUUCUUUCUCGUAUUCAG GAU	135	NM_002111.8_5225 -5245 G21U s	5225-5245	AUCCUGAAUACGAGAAAG AACAA	336	NM-002111.8-5223- 5245 CIA as	5223-5245
AD356384.1	AGCUUCUAGACAAUCUGA UAU	136	NM_002111.8_3775 -3795 C21U s	3775-3795	AUAUCAGAUUGUCUAGAA GCUGC	337	NM-002111.8-3773- 3795 GIA as	3773-3795
AD357879.1	AUUUUCAAGGUUUCUAUU АСА	137	NM_002111.8_5368 -5388 s	5368-5388	UGUAAUAGAAACCUUGAA AAUGU	338	NM_002111.8-53665388 as	5366-5388
AD356386.1	CUUCUAGACAAUCUGAUA CCU	138	NM_002111.8_3777 -3797 s	3777-3797	AGGUAUCAGAUUGUCUAG AAGCU	339	NM_002111.8-37753797 as	3775-3797
AD356995.1	AGCUUUAAAACAGUACAC GAU	139	NM_002111.8_4444 -4464 C21U s	4444-4464	AUCGUGTACUGUUUUAAA GCUUU	340	NM_002111.8_44424464 GIA as	4442-4464
AD353516.1	GCUUUGAUGGAUUCUAAU CUU	140	NM_002111.8_620640 s	620-640	AAGAUUAGAAUCCAUCAA AGCUU	341	NM-002111.8-618640 as	618-640
AD354079.1	CUGACGUUACAUCAUACA CAU	141	NM_002111.8^1229 -1249 G21U s	1229-1249	AUGUGUAUGAUGUAACGU CAGUU	342	NM-002111.8-12271249 CIA as	1227-1249
AD356639.1	CUGCUUUAGUCGAGAACC AAU	142	NM_002111.8_4048 -4068 s	4048-4068	AUUGGUTCUCGACUAAAG CAGGA	343	NM-002111.8-40464068 as	4046-4068
AD- 357649.1	UGUUCGUCACUCCAAACA CAA	143	NM_002111.8_5118 -5138 s	5118-5138	UUGUGUTUGGAGUGACGA ACAUA	344	NM_002111.8-51165138 as	5116-5138
AD361496.1	UGACUUGUUUACGAAAUG UCU	144	NM_002111.8_9540 -9560 C21U s	9540-9560	AGACAUTUCGUAAACAAG UCAGC	345	NM_002111.8-9538- 9560 GIA as	9538-9560
AD382777.1	GUGUUGAUGCACUCUCCU AGU	145	NM_010414.3_1046 0-10480 s	10460-10480	ACUAGGAGAGUGCAUCAA САССА	346	NM-010414.3-10458- 10480 as	10458-10480
AD353525.1	GAUUCUAAUCUUCCAAGG UUA	146	NM_002111.8_629649 s	629-649	UAACCUTGGAAGAUUAGA AUCCA	347	NM_002111.8_627649 as	627-649
AD358480.1	CUCGUUGUGAAAACCUUU CAA	147	NM_002111.8_6027 -6047 s	6027-6047	UUGAAAGGUUUUCACAAC GAGAC	348	NM-002111.8-60256047 as	6025-6047
AD356388.1	UCUAGACAAUCUGAUACC UCA	148	NM_002111.8_3779 -3799 s	3779-3799	UGAGGUAUCAGAUUGUCU AGAAG	349	NM_002111.8-37773799 as	3777-3799
AD353500.1	CAACAAAGUUAUCAAAGC UUU	149	NM_002111.8_604624 s	604-624	AAAGCUTUGAUAACUUUG UUGAG	350	NM_002111.8-602624 as	602-624
AD356407.1	CAGGUCCUGUUACAACAA GUA	150	NM_002111.8__3798 -3818 s	3798-3818	UACUUGTUGUAACAGGAC CUGAG	351	NM-002111.8-37963818 as	3796-3818
AD- 357068.1	GUUCAGUUACGGGUUAAU UAU	151	NM_002111.8_4517 -4537 C21U s	4517-4537	AUAAUUAACCCGUAACUG AACCA	352	NM-002111.8-45154537 GIA as	4515-4537
AD- 359802.1	CCAGUCGUACUCAGUUUG AAU	152	NM_002111.8_7527 -7547 G21U s	7527-7547	AUUCAAACUGAGUACGAC UGGUC	353	NM_002111.8_7525- 7547 CIA as	7525-7547

- 98 048552

AD354638.1	UCUGAAAUUGUGUUAGAC GGU	153	NM 002111.8 1886	1886-1906	ACCGUCTAACACAAUUUC AGAAC	354	NM 002111.8 1884-	1884-1906
-1906 s	1906 as
AD356663.1	GGCAACUGUUUGUGUUCA АСА	154	NM_002111.8_4072 -4092 s	4072-4092	UGUUGAACACAAACAGUU GCCAU	355	NM__002111.8^40704092 as	4070-4092
AD357651.1	UUCGUCACUCCAAACACA AUU	155	NM_002111.8_5120 -5140 G21U s	5120-5140	AAUUGUGUUUGGAGUGAC GAACA	356	NM_002111.8_51185140 CIA as	5118-5140
AD362085.1	CUGACAUUUCCGUUGUAC AUU	156	NM_002111.8_1031 4-10334 G21U s	10314-10334	AAUGUACAACGGAAAUGU CAGCG	357	NM_002111.8_10312- 10334 CIA as	10312-10334
AD384329.1	CCACUGCCAAGUGCCCUU UAU	157	NM_010414.3_1227 0-12290 s	12270-12290	AUAAAGGGCACUUGGCAG UGGCU	358	NM_010414.3_1226812290 as	12268-12290
AD354067.1	CAGGUUUAUGAACUGACG UUA	158	NM_002111.8_1217 -1237 s	1217-1237	UAACGUCAGUUCAUAAAC CUGGA	359	NM_002111.8-12151237 as	1215-1237
AD353526.1	AUUCUAAUCUUCCAAGGU UAU	159	NM_002111.8_630650 C21U s	630-650	AUAACCTUGGAAGAUUAG AAUCC	360	NM_002111.8_628650 GIA as	628-650
AD356422.1	CAAGUAAAUCCUCAUCAC UGU	160	NM_002111.8_3813 -3833 G21U s	3813-3833	ACAGUGAUGAGGAUUUAC UUGUU	361	NM-002111.8-38113833 CIA as	3811-3833
AD353519.1	UUGAUGGAUUCUAAUCUU CCA	161	NM 002111.8 623643 s	623-643	UGGAAGAUUAGAAUCCAU CAAAG	362	NM-002111.8-621643 as	621-643
AD356443.1	CUUCAUACCUCAAACUGC AUU	162	NM_002111.8_3852 -3872 G21U s	3852-3872	AAUGCAGUUUGAGGUAUG AAGGA	363	NM-002111.8-38503872 CIA as	3850-3872
AD357115.1	UAUUGGCUUUGUAUUGAA АСА	163	NM_002111.8_4564 -4584 s	4564-4584	UGUUUCAAUACAAAGCCA AUAAA	364	NM_002111.8_45624584 as	4562-4584
AD- 361493.1	UGCUGACUUGUUUACGAA AUU	164	NM_002111.8_9537 -9557 G21U s	9537-9557	AAUUUCGUAAACAAGUCA GCAGC	365	NM_002111.8-9535- 9557 CIA as	9535-9557
AD354639.1	CUGAAAUUGUGUUAGACG GUA	165	NM_002111.8_1887 -1907 s	1887-1907	UACCGUCUAACACAAUUU CAGAA	366	NM_002111.8—18851907 as	1885-1907
AD356955.1	UUCAUAAUCACAUUCGUU UGU	166	NM-002111.8-4404 -4424 s	4404-4424	ACAAACGAAUGUGAUUAU GAAUA	367	NM_002111.8-44024424 as	4402-4424
AD358471.1	CAAUUCAGUCUCGUUGUG AAA	167	NM-002111.8-6018 -6038 s	6018-6038	UUUCACAACGAGACUGAA UUGCC	368	NM-002111.8-60166038 as	6016-6038
AD354066.1	CCAGGUUUAUGAACUGAC GUU	168	NM_002111.8-1216 -1236 s	1216-1236	AACGUCAGUUCAUAAACC UGGAC	369	NM_002111.8-12141236 as	1214-1236
AD384665.1	CCUCCAGGGAUUGGUAUG UGU	169	NM-010414.3-1269 5-12715 G21U s	12695-12715	ACACAUACCAAUCCCUGG AGGAC	370	NM_010414.3-12693- 12715 CIA as	12693-12715
AD355045.1	UUUCUUCAGCAAACUCUA UAA	170	NM 002111.8 2338 -2358 s	2338-2358	UUAUAGAGUUUGCUGAAG AAAGA	371	NM 002111.8 23362358 as	2336-2358
AD353715. 1	UGUUCCCAAAAUUAUGGC UUU	171	NM-002111.8-844864 C21U s	844-864	AAAGCCAUAAUUUUGGGA ACAGC	372	NM-002111.8-842864 GIA as	842-864
AD- 356429.1	UUUCUAUCAUCUUCCUUC AUA	172	NM—002111.8_3838 -3858 s	3838-3858	UAUGAAGGAAGAUGAUAG AAACU	373	ΝΜ_δθ21ϊ1.8-38363858 as	3836-3858
AD359761.1	cuuuaaggagUucaucua ccu	17 3	NM-002111.8-7486 -7506 G21U s	7486-7506	AGGUAGAUGAACUCCUUA AAGAC	374	NM-002111.8-74847506 CIA as	7484-7506
AD356669.1	UGUUUGUGUUCAACAAUU GUU	17 4	NM-002111.8-4078 -4098 s	4078-4098	AACAAUT GUUGAACACAA ACAGU	375	NM-002111.8-40764098 as	4076-4098
AD357684.1	ACUGUUCAACUGUGGAUA UCU	175	NM_002111.8-5153 -5173 G21U s	5153-5173	AGAUAUCCACAGUUGAAC AGUGC	376	NM_002111.8-51515173 CIA as	5151-5173
AD361981.1	UAACGUAACUCUUUCUAU GCU	176	NM_0021U. 8-1017 3-10193 C21U s	10173-10193	AGCAUAGAAAGAGUUACG UUAAA	377	NM_002111.8-10171- 10193 GIA as	10171-10193
AD355423.1	UCUGAGGAACAGUUCCUA UUU	177	NM_002111.8-2716 -2736 G21U s	2716-2736	AAAUAGGAACUGUUCCUC AGAGU	378	NM_002111.8-27142736 CIA as	2714-2736
AD356956.1	UCAUAAUCACAUUCGUUU GUU	17 8	NM_002111.8-4405 -4425 s	4405-4425	AACAAACGAAUGUGAUUA UGAAU	379	NM_002111.8-44034425 as	4403-4425
AD353522.1	AUGGAUUCUAAUCUUCCA AGU	179	NM_002111.8_626646 G21U s	626-646	ACUUGGAAGAUUAGAAUC CAUCA	380	NM_002111.8_624646 CIA as	624-646
AD354075.1	UGAACUGACGUUACAUCA UAU	180	NM-002111.8-1225 -1245 C21U s	1225-1245	AUAUGAT GUAACGUCAGU UCAUA	381	NM-002111.8-12231245 GIA as	1223-1245
AD355059.1	UCUAUAAAGUUCCUCUUG АСА	181	NM 002111.8 2352 -2372 s	2352-2372	UGUCAAGAGGAACUUUAU AGAGU	382	NM 002111.8 23502372 as	2350-2372
AD356951.1	GCUAUUCAUAAUCACAUU CGU	182	NM 002111.8 4400 -4420 s	4400-4420	ACGAAUGUGAUUAUGAAU AGCAU	383	NM 002111.8 43984420 as	4398-4420
AD- 353871. 1	GCUACUAAAUGUGCUCUU AGU	18 3	NM_002111.8-1021 -1041 G21U s	1021-1041	ACUAAGAGCACAUUUAGU AGCCA	384	NM_002111.8-10191041 CIA as	1019-1041
AD356996.1	GCUUUAAAACAGUACACG ACU	184	NM_002111.8_4445 -4465 s	4445-4465	AGUCGUGUACUGUUUUAA AGCUU	385	NM_002111.8-44434465 as	4443-4465
AD354068.1	AGGUUUAUGAACUGACGU UAU	185	NM_002111.8-1218 -1238 C21U s	1218-1238	AUAACGTCAGUUCAUAAA CCUGG	386	NM-002111.8-12161238 GIA as	1216-1238
AD356678.1	UCAACAAUUGUUGAAGAC UCU	186	NM_002111.8-4087 -4107 s	4087-4107	AGAGUCTUCAACAAUUGU UGAAC	387	NM_002111.8-40854107 as	4085-4107
AD357963.1	GCAACAUACUUUCUAUUG CCA	187	NM-002111.8-5452 -5472 s	5452-5472	UGGCAATAGAAAGUAUGU UGCUG	388	NM-002111.8-54505472 as	5450-5472
AD362090.1	AUUUCCGUUGUACAUGUU CCU	188	NM_002111.8-1031 9-10339 s	10319-10339	AGGAACAUGUACAACGGA AAUGU	389	NM_002111.8-10317- 10339 as	10317-10339
AD355745.1	CUCCGUCAGCACAAUAAC CAU	189	NM_002111.8-3076 -3096 G21U s	3076-3096	AUGGUUAUUGUGCUGACG GAGAA	390	NM_002111.8-3074- 3096 CIA as	3074-3096
AD357066.1	UGGUUCAGUUACGGGUUA AUU	190	NM 002111.8 4515 -4535 s	4515-4535	AAUUAACCCGUAACUGAA CCAGC	391	NM 002111.8 45134535 as	4513-4535
AD353527. 1	UUCUAAUCUUCCAAGGUU АСА	191	NM-002111.8—631651 s	631-651	UGUAACCUUGGAAGAUUA GAAUC	392	NM-002111.8-629651 as	629-651
AD354236.1	GAGUAUUGUGGAACUUAU AGU	192	NM_002111.8-1405 -1425 C21U s	1405-1425	ACUAUAAGUUCCACAAUA CUCCC	393	NM_002111.8-14031425 GIA as	1403-1425

- 99 048552

AD357750.1	GAUAUUGUUCUUUCUCGU AUU	193	NM_002111.8-5219 -5239 s	5219-5239	AAUACGAGAAAGAACAAU AUCUU	394	NM__002111.8___52175239 as	5217-5239
AD-	CUAGACAAUCUGAUACCU		NM 002111.8 3780		AUGAGGTAUCAGAUUGUC		NM 002111.8 3778-
356389.1	CAU	194	-3800 G21U s	3780-3800	UAGAA	395	3800 CIA as	3778-3800
AD-	CGCCUUUUAUCUGCUUCG		NM 002111.8 2207		AAACGAAGCAGAUAAAAG		NM 002111.8 2205-
354939.1	UUU	195	-2227 s	2207-2227	GCGGA	396	2227 as	2205-2227
AD-	UAUGAACGCUAUCAUUCA		NM 002111.8 4667		UUUUGAAUGAUAGCGUUC		NM 002111.8 4665-
357218.1	AAA	196	-4687 s	4667-4687	AUAAG	397	4687 as	4665-4687
AD-	UGAAAUUGUGUUAGACGG		NM 002111.8 1888		AUACCGTCUAACACAAUU		NM 002111.8 1886-
354640.1	UAU	197	-1908 C21U s	1888-1908	UCAGA	398	1908 GIA as	1886-1908
AD-	AUCUUCAAGUCUGGAAUG		NM 002111.8 5507		AAACAUTCCAGACUUGAA		NM 002111.8 5505-
358018.1	UUU	198	-5527 C21U s	5507-5527	GAUGU	399	5527 GIA as	5505-5527
AD-	UCCGUUGUACAUGUUCCU		NM 002111.8 1032		AACAGGAACAUGUACAAC		NM 002111.8 10320-
362093.1	GUU	199	2-10342 s	10322-10342	GGAAA	400	10342 as	10320-10342
AD-	GCUUCUAGACAAUCUGAU		NM 002111.8 3776		AGUAUCAGAUUGUCUAGA		NM 002111.8 3774-
356385.1	ACU	200	-3796 C21U s	3776-3796	AGCUG	401	3796 GIA as	3774-3796
AD-	UUCAGUUACGGGUUAAUU		NM 002111.8 4518		AGUAAUTAACCCGUAACU		NM 002111.8 4516-
357069.1	ACU	201	-4538 s	4518-4538	GAACC	402	4538 as	4516-4538
AD-	CAUGCAAGACUCACUUAG		NM 002111.8 6349		AGACUAAGUGAGUCUUGC		NM 002111.8 6347-
358764.1	UCU	202	-6369 C21U s	6349-6369	AUGGU	403	6369 GIA as	6347-6369
AD-	GAUGACUCUGAAUCGAGA		NM 002111.8 1508		AGAUCUCGAUUCAGAGUC		NM 002111.8 1506-
354316.1	UCU	203	-1528 G21U s	1508-1528	AUCCU	404	1528 CIA as	1506-1528
AD-	AGGCUAUAACCUACUACC		NM 002111.8 3106		AUUGGUAGUAGGUUAUAG		NM 002111.8 3104-
355775.1	AAU	204	-3126 G21U s	3106-3126	CCUCU	405	3126 CIA as	3104-3126
AD-	ACUCUGAAUCGAGAUCGG		NM 002111.8 1512		AAUCCGAUCUCGAUUCAG		NM 002111.8 1510-
354320.1	AUU	205	-1532 G21U s	1512-1532	AGUCA	406	1532 CIA as	1510-1532
AD-	ACCUACUACCAAG CAUAA		NM 002111.8 3114		AUGUUATGCUUGGUAGUA		NM 002111.8 3112-
355783.1	CAU	206	-3134 G21U s	3114-3134	GGUUA	407	3134 CIA as	3112-3134
AD-	UCUGAAUCGAGAUCGGAU		NM 002111.8 1514		AACAUCCGAUCUCGAUUC		NM 002111.8 1512-
354322.1	GUU	207	-1534 C21U s	1514-1534	AGAGU	408	1534 GIA as	1512-1534
AD-	AGGUCCUGUUACAACAAG		NM 002111.8 3799		UUACUUGUUGUAACAGGA		NM 002111.8 3797-
356408.1	UAA	208	-3819 s	3799-3819	CCUGA	409	3819 as	3797-3819
AD-	ACAGCAGUGUUGAUAAAU		NM 002111.8 2073		CAAAUUTAUCAACACUGC		NM 002111.8 2071-
354805.1	UUG	209	-2093 s	2073-2093	UGUCA	410	2093 as	2071-2093
AD-	GGUCCUGUUACAACAAGU		NM 002111.8 3800		UUUACUTGUUGUAACAGG		NM 002111.8 3798-
356409.1	AAA	210	-3820 s	3800-3820	ACCUG	411	3820 as	3798-3820
AD-	UUGAACUACAUCGAUCAU		NM 002111.8 2411		UCCAUGAUCGAUGUAGUU		NM 002111.8 2409-
355118.1	GGA	211	-2431 s	2411-2431	CAAGA	412	2431 as	2409-2431
AD-	ACUCGGAGUUCAACCUAA		NM 002111.8 6561		AGCUUAGGUUGAACUCCG		NM 002111.8 6559-
358958.1	GCU	212	-6581 C21U s	6561-6581	AGUUC	413	6581 GIA as	6559-6581
AD-	CUCUGAGGAACAGUUCCU		NM 002111.8 2715		AAUAGGAACUGUUCCUCA		NM 002111.8 2713-
355422.1	AUU	213	-2735 s	2715-2735	GAGUC	414	2735 as	2713-2735
AD-	CUCGGAGUUCAACCUAAG		NM 002111.8 6562		AGGCUUAGGUUGAACUCC		NM 002111.8 6560-
358959.1	ccu	91	-6582 s	6562-6582	GAGUU	415	6582 as	6560-6582
AD-	CUGAGGAACAGUUCCUAU		NM 002111.8 2717		ACAAUAGGAACUGUUCCU		NM 002111.8 2715-
355424.1	UGU	214	-2737 G21U s	2717-2737	CAGAG	416	2737 CIA as	2715-2737
AD-	GCUCGGAGUUCAACCUAA		NM 010414.3 6517		AGCUUAGGUUGAACUCCG		NM 010414.3 6515-
379420.2	GCU	79	-6537 C21U s	6517-6537	AGCUC	280	6537 GIA as	6515-6537
AD-	AUCAUUAUACAGG GCUUU		NM 002111.8 2835		UUAAAAGСCCUGUAUAAU		NM 002111.8 2833-
355524.1	UAA	215	-2855 s	2835-2855	GAU GA	417	2855 as	2833-2855
AD-	CUCGGAGUUCAACCUAAG		NM 002111.Θ 6562		AGGCUUAGGUUGAACUCC		NM 010414.3 6516-
379380.2	CCU	91	-6582 s	6562-6582	GAGCU	292	6538 as	6562-6582

Таблица 3

Модифицированные последовательности смысловых и антисмысловых цепей дцРНК средств к хангтингтину (HTT)

ID дуплекса	Смысловая последовательность 5'-»3 '	SEQ ID NO:	Антисмысловая последовательность 5'—>3'	SEQ ID NO:	Последовательность м₽НКмишени 51 —>3 '	SEQ ID NO:
AD-384118.1	gsgsacuaAfaAfCfUfuuuuaucaaaL96	418	usUfsugau(Agn)aaaaguUfuUfaguccscsu	619	AG GGACUAAAACUUUUUAUCAAA	821
AD-380543.1	csuscuguUfaCfCfAfgcuacuacauL96	419	asUfsguag(Tgn)agcuggUfaAfcagagsasa	620	UU CU CU GUUACCAGCUACUACAG	822
AD-38 0533.1	cscsugucCfcUfUfCfucuguuaccaL96	420	usGfsguaa(Cgn)agagaaGfgGfacaggsasu	621	AUCCUGUCCCUUCUCUGUUACCA	823
AD-384038.1	ususugugAfgUfCfUfagcaucugauL96	421	asUfscaga(Tgn)gcuagaCfuCfacaaasgsc	622	GCUUUGUGAGUCUAGCAUCUGAG	824
AD-380805.1	gsasucagUfgAfAfGfugguucgauuL96	422	asAfsucga(Agn)ccacuuCfaCfugaucsasg	623	CUGAUCAGUGAAGUGGUUCGAUC	825
AD-380117.1	cscsucugGfuAfUfGfgaaacucgguL96	423	asCfscgag(Tgn)uuccauAfcCfagaggsasg	624	CUCCUCUGGUAUGGAAACUCGGG	826
AD-381341.1	asgsagucCfuUfGfGfucaagcuaauL96	424	asUfsuagc(Tgn)ugaccaAfgGfacucusgsu	625	ACAGAGUC CUUG GU CAAGCUAAG	827
AD-379426.1	ususcaacCfuAfAfGfccuuuuggcuL96	425	asGfsccaa(Agn)aggcuuAfgGfuugaascsu	626	AGUUCAACCUAAGCCUUUUGGCU	828
AD-380888.1	usgsacagAfaCfUfAfcggagaguguL96	426	asCfsacuc(Tgn)ccguagUfuCfugucasgsc	627	GCUGACAGAACUACGGAGAGUGC	829
AD-384841.1	csusccauGfuGfUfGfcuugucacauL96	427	asUfsguga(Cgn)aagcacAfcAfuggagsgsg	628	CC CU CCAU GU GU GCUUGUCACAC	830
AD-380853.1	csgsaacgUfaCfCfCfaguuugaaauL96	428	asUfsuuca(Agn)acugggUfaCfguucgsgsu	629	AC CGAACGUACC CAGUUUGAAAU	831
AD-379602.1	asusaccaCfaUfCfAfuaccagucuuL96	429	asAfsgacu(Ggn)guaugaUfgUfgguauscsa	630	U GAUAC CACAU CAUAC CAGU CU C	832

100 048552

AD-382484.1	csusgcauGfuGfAfCfaaaguuuauuL96	430	asAfsuaaa(Cgn)uuugucAfcAfugcagscsa	631	UGCUGCAUGUGACAAAGUUUAUG	833
AD-380741.1	us us cacuCfcUfGfUfucgcaguuucL96	431	gsAfsaacu(Ggn)cgaacaGfgAfgugaasusa	632	UAUU CACU CCUGUUCG CAGUUUC	834
AD-380534.1	csusguccCfuUfCfUfcuguuaccauL96	432	asUfsggua(Agn)cagagaAfgGfgacagsgsa	633	UCCUGUCCCUUCUCUGUUACCAG	835
AD-38 4053.1	uscsugagAfaUfGfGfgacucaauuuL96	433	asAfsauug(Agn)gucccaUfuCfucagasusg	634	CAUCUGAGAAUGGGACUCAAUUU	836
AD-380916.1	uscsagaaGfaUfGfAfgauccucauuL96	434	asAfsugag(Ggn)aucucaUfcUfucugasasg	635	CUUCAGAAGAUGAGAUCCUCAUU	837
AD-380402.1	cscsacugAfaGfGfCfucucgauacuL96	435	asGfsuauc(Ggn)agagccUfuCfaguggscsu	636	AG CCACUGAAGGCUCU CGAUAC C	838
AD-381464.1	gsasgucuGfuGfAfUfuguagcuauuL96	436	asAfsuagc(Tgn)acaaucAfcAfgacucsgsc	637	GC GAGUCU GU GAUU GUAG CUAU G	839
AD-37 9729.1	us csauggCfaUfUfUfgauccaugauL96	437	asUfscaug(Ggn)aucaaaUfgCfcaugascsa	638	UGUCAU GG CAUUUGAU CCAU GAG	840
AD-381065.1	ascsggcaUfcCfUfCfuauguguuguL96	438	asCfsaaca(Cgn)auagagGfaUfgccgusgsc	639	GCACGGCAUCCUCUAUGUGUUGG	841
AD-379466.1	usgsagcgAfgAfUfUfgcuaauggcuL96	439	asGfsccau(Tgn)agcaauCfuCfgcucasusg	640	CAUGAG CGAGAUUG CUAAUG GC C	842
AD-38 0885.1	csgscugaCfaGfAfAfcuacggagauL96	440	asUfscucc(Ggn)uaguucUfgUfcagcgsusc	641	GACGCUGACAGAACUACGGAGAG	843
AD-379897.1	asasgcagGfuCfAfCfauacuccaauL96	441	asUfsugga(Ggn)uaugugAfcCfugcuususc	642	GAAAGCAGGUCACAUACUCCAAG	844
AD-381124.1	cscsaguuGfuUfAfGfugacuaucuuL96	442	asAf sgaua(Ggn)ucacuaAfcAfacuggsasa	643	UU CCAGUU GUUAGU GACUAU CU G	845
AD-380807.1	uscsagugAfaGfUfGfguucgaucuuL96	443	asAfsgauc(Ggn)aaccacUfuCfacugasusc	644	GAUCAGUGAAGUGGUUCGAUCUC	846
AD-380806.1	asuscaguGfaAfGfUfgguucgaucuL96	444	asGfsaucg(Agn)accacuUfcAfcugauscsa	645	UGAU CAGU GAAGUG GUUC GAUCU	847
AD-384843.1	cs csauguGfuGfCfUfugucacacuuL96	445	asAfsgugu(Ggn)acaagcAfcAfcauggsasg	646	CU CCAU GU GU GCUU GU CACACU C	848
AD-381257.1	ususucagCfaUfCfUfgugauacagaL96	446	usCfsugua(Tgn)cacagaUfgCfugaaasasu	647	AUUUUCAGCAUCUGUGAUACAGA	849
AD-380408.1	asasggcuCfuCfGfAfuaccagauuuL96	447	asAfsaucu(Ggn)guaucgAfgAfgccuuscsa	648	UGAAGGCUCUCGAUACCAGAUUU	850
AD-381570.1	usasgaugAfcUfUfCfuuuccaccuuL96	448	asAfsggug(Ggn)aaagaaGfuCfaucuasgsg	649	CCUAGAUGACUUCUUU CCACCU C	851
AD-380093.1	gsusuaacAfgCfUfAfuacucguguuL96	449	asAfscacg(Agn)guauagCfuGfuuaacsusa	650	UAGUUAACAG CUAUACUC GU GU G	852
AD-381148.1	uscscaacCfuCfAfAfaggaauagcuL96	450	asGfscuau(Tgn)ccuuugAfgGfuuggascsa	651	UGUC CAAC CU CAAAGGAAUAGCC	853
AD-379475.1	ususgcuaAfuGfGfOfcaaaagaguuL96	451	asAf scucu(Tgn)uuggccAfuUfagcaasusc	652	GAUU GCUAAU GGCCAAAAGAGUC	854
AD-381142.1	csusgcugUfcCfAfAfccucaaaggaL96	452	usCfscuuu(Ggn)agguugGfaCfagcagsasu	653	AUCUGCUGUCCAACCUCAAAGGA	855
AD-380852.1	cscsgaacGfuAfCfCfcaguuugaaaL96	453	usUfsucaa(Agn)cuggguAfcGfuucggsusg	654	CACC GAACGUAC CCAGUUUGAAA	856
AD-379935.1	asasguagAfcUfCfAfgauauacaaaL96	454	usUfsugua(Tgn)aucugaGfuCfuacuuscsc	655	GGAAGUAGACUCAGAUAUACAAA	857
AD-381117.1	gscsucauUfcCfAfGfuuguuagugaL96	455	usCfsacua(Agn)caacugGfaAfugagcsusg	656	CAGCUCAUUCCAGUUGUUAGUGA	858
AD-380808.1	csasgugaAfgUfGfGfuucgaucucuL96	456	asGfsagau(Cgn)gaaccaCfuUfcacugsasu	657	AUCAGUGAAGUGGUUCGAUCUCU	859
AD-379471.1	gsasgauuGfcUfAfAfuggccaaaauL96	457	asUfsuuug(Ggn)ccauuaGfcAfaucucsgsc	658	GC GAGAUU GCUAAU GG CCAAAAG	860
AD-381342.1	gsasguccUfuGfGfUfcaagcuaaguL96	458	asCfsuuag(Cgn)uugaccAfaGfgacucsusg	659	CAGAGUCCUUGGUCAAGCUAAGU	861
AD-380411.1	gscsucucGfaUfAfCfcagauuuggaL96	459	usCfscaaa(Tgn)cugguaUfcGfagagcscsu	660	AGGCUCUCGAUACCAGAUUUGGA	862
AD-382487.1	cs as ugugAfcAfAfAf guuuauggaa L9 6	460	usUfsccau(Agn)aacuuuGfuCfacaugscsa	661	UGCAUGUGACAAAGUUUAUGGAA	8 63
AD-380116.1	uscscucuGfgUfAfUfggaaacucguL96	461	asCfsgagu(Tgn)uccauaCfcAfgaggasgsg	662	CCUCCUCUGGUAUGGAAACUCGG	864
AD-381150.1	csasaccuCfaAfAfGfgaauagcccaL96	462	us Gfsggcu(Agn)uuccuuUfgAfgguugsgsa	663	UCCAACCUCAAAGGAAUAGCCCA	865
AD-379476.1	usgscuaaUfgGfCfCfaaaagagucuL96	463	asGfsacuc(Tgn)uuuggcCfaUfuagcasasu	664	AUUGCUAAUGGCCAAAAGAGUCC	866
AD-382444.1	cscsuaugCfcCfGfUfguaaaguguuL96	464	asAfscacu(Tgn)uacacgGfgCfauaggsasa	665	UUCCUAUGCCCGUGUAAAGUGUG	8 67
AD-380883.1	gsascgcuGfaCfAfGfaacuacggauL96	465	asUfsccgu(Agn)guucugUfcAfgcgucsasg	666	CUGACGCUGACAGAACUACGGAG	868
AD-379941.1	ascsucagAfuAfUfAfcaaaaccucaL96	466	usGfsaggu(Tgn)uuguauAfuCfugaguscsu	667	AGACUCAGAUAUACAAAACCUCA	869
AD-381578.1	ususcuuuCfcAfCfCfucaagauguuL96	467	asAfscauc(Tgn)ugagguGfgAfaagaasgsu	668	ACUU CUUU CCAC CU CAAGAU GU C	870
AD-381460.1	csasgcgaGfuCfUfGfugauuguaguL96	468	asCfsuaca(Agn)ucacagAfcUfcgcugsusc	669	GACAGC GAGU CU GU GAUU GUAG C	871
AD-379939.1	asgsacucAfgAfUfAfuacaaaaccuL96	469	asGfsguuu(Tgn)guauauCfuGfagucusasc	670	GUAGACUCAGAUAUACAAAACCU	872
AD-384039.1	ususgugaGfuCfUfAfgcaucugagaL96	470	usCfsucag(Agn)ugcuagAfcUfcacaasasg	671	CUUU GU GAGU CUAG CAUCUGAGA	873
AD-380735.1	ususgauaUfuCfAfCfuccuguucguL96	471	asCfsgaac(Agn)ggagugAfaUfaucaascsc	672	GGUUGAUAUU CACUCCUGUUCG C	874
AD-382525.1	usasgcuaCfuCfAfGfucuagucgguL96	472	asCfscgac(Tgn)agacugAfgUfagcuascsa	673	UGUAGCUACUCAGUCUAGUCGGG	875
AD-380713.1	cscsugugUfcUfCfCfagucaauucuL96	473	asGfsaauu(Ggn)acuggaGfaCfacaggsusg	674	CACCUGUGUCUCCAGUCAAUUCC	876
AD-382149.1	asgsggaaCfaUfGfCfacuauguuguL96	474	asCfsaaca(Tgn)agugcaUfgUfucccusgsc	675	GCAG GGAACAUG CACUAUGUUG G	877
AD-379855.1	asgsccauUfgCfAfGfuacaaccuguL96	475	asCfsaggu(Tgn)guacugCfaAfuggcususc	676	GAAGCCAUUGCAGUACAACCUGG	878
AD-383508.1	usgscaagGfuUfCfCfcuaccaaacaL96	476	us Gfsuuug(Ggn)uagggaAfcCfuugcasusc	677	GAUGCAAGGUUCCCUACCAAACA	879
AD-381273.1	ascsagauGfuGfUfGfgaguaaugcuL96	477	asGfscauu(Agn)cuccacAfcAfucugusasu	678	AUACAGAU GU GU GGAGUAAU GCU	880

- 101 048552

AD-382483.1	gscsugcaUfgUfGfAfcaaaguuuauL96	478	asUfsaaac(Tgn)uugucaCfaUfgcagcsasc	679	GUGCUGCAUGUGACAAAGUUUAU	881
AD-382481.1	gsusgcugCfaUfGfUfgacaaaguuuL96	479	asAfsacuu(Tgn)gucacaUfgCfagcacsasg	680	CUGUGCUGCAUGUGACAAAGUUU	882
AD-382485.1	usgscaugUfgAfCfAfaaguuuauguL96	480	asCfsauaa(Agn)cuuuguCfaCfaugcasgsc	681	GCUGCAUGUGACAAAGUUUAUGG	883
AD-380092.1	asgsuuaaCfaGfCfUfauacucguguL96	481	asCfsacga(Ggn)uauagcUfgUfuaacusasg	682	CUAGUUAACAGCUAUACUCGUGU	884
AD-379420.1	gscsucggAfgUfUfCfaaccuaagcuL96	482	asGfscuua(Ggn)guugaaCfuCfcgagcsusc	683	GAGCUC GGAGUUCAACCUAAGC C	885
AD-380800.1	asusccugAfuCfAfGfugaagugguuL96	483	asAfsccac(Tgn)ucacugAfuCfaggausgsa	684	UCAUCCUGAUCAGUGAAGUGGUU	886
AD-384030.1	csasgucaGfcUfUfUfgugagucuauL96	484	asUfsagac(Tgn)cacaaaGfcUfgacugsusa	685	UACAGUCAGCUUUGUGAGUCUAG	887
AD-380737.1	gsasuauuCfaCfUfCfcuguucgcauL96	485	asUfsgcga(Agn)caggagUfgAfauaucsasa	686	UU GAUAUUCACU CCUGUU CG CAG	888
AD-382780.1	ususgaugCfaCfUfCfuccuagucuuL96	486	asAfsgacu(Agn)ggagagUfgCfaucaascsa	687	UGUU GAUGCACU CU CCUAGU CU C	889
AD-379944.1	csasgauaUfaCfAfAfaaccucaguuL96	487	asAfscuga(Ggn)guuuugUfaUfaucugsasg	688	CU CAGAUAUACAAAACCU CAGU C	890
AD-379461.1	usgsgcauGfaGfCfGfagauugcuaaL96	488	usUfsagca(Agn)ucucgcUfcAfugccasasg	689	CUUG GCAU GAGC GAGAUU GCUAA	891
AD-381856.1	ascsagguGfgAfUfGfugaaccuuuuL96	489	asAfsaagg(Tgn)ucacauCfcAfccugususc	690	GAACAG GU GGAU GU GAAC CUUUU	892
AD-379418.1	gsasgcucGfgAfGfUfucaaccuaauL96	490	asUfsuagg(Tgn)ugaacuCfcGfagcucsasu	691	AUGAGCUCGGAGUUCAACCUAAG	893
AD-382924.1	usgsucccUfuUfGfUfaucuucugcaL96	491	usGfscaga(Agn)gauacaAfaGfggacasgsa	692	UCUGUCCCUUUGUAUCUUCUGCA	894
AD-383759.1	ascsuccuCfaUfGfGfuagauguucaL96	492	usGfsaaca (Tgn) cuaccaUfgAfggagusasa	693	UUACUC CU CAUG GUAGAU GUUCA	895
AD-380409.1	asgsgcucUfcGfAfUfaccagauuugL96	493	csAfsaauc(Tgn)gguaucGfaGfagccususc	694	GAAGGCUCUCGAUACCAGAUUUG	896
AD-379380.1	csuscggaGfuUfCfAfaccuaagccuL96	494	asGfsgcuu(Agn)gguugaAfcUfccgagscsu	695	CAAAUCUG GUAU CGAGAG CCUU C	897
AD-381145.1	csusguccAfaCfCfUfcaaaggaauaL96	495	usAfsuucc(Tgn)uugaggUfuGfgacagscsa	696	UGCUGUCCAACCUCAAAGGAAUA	898
AD-384054.1	csusgagaAfuGfGfGfacucaauuuuL96	496	asAfsaauu(Ggn)agucccAfuUfcucagsasu	697	AU CU GAGAAU GG GACU CAAUUUU	899
AD-380796.1	csgsucauCfcUfGfAfucagugaaguL96	497	asCfsuuca(Cgn)ugaucaGfgAfugacgsgsg	698	CCCGUCAUCCUGAUCAGUGAAGU	900
AD-382960.1	csasaaggUfgUfCfUfcugagcuauuL96	498	asAfsuagc(Tgn)cagagaCfaCfcuuugsgsg	699	CCCAAAGGUGUCUCUGAGCUAUG	901
AD-380555.1	csusacuaCfaGfGfUfgcucuuaucaL96	499	usGfsauaa(Ggn)agcaccUfgUfaguagscsu	700	AGCUACUACAGGUGCUCUUAUCA	902
AD-379462.1	gsgscaugAfgCfGfAfgauugcuaauL96	500	asUfsuagc(Agn)aucucgCfuCfaugccsasa	701	UUGGCAUGAGCGAGAUUGCUAAU	903
AD-382118.1	usgsgcagGfaGfUfGfcuuugcaauuL96	501	asAfsuugc(Agn)aagcacUfcCfugccasusu	702	AAUGGCAGGAGUGCUUUGCAAUG	904
AD-380414.1	csuscgauAfcCfAfGfauuuggaagaL96	502	usCfsuucc(Agn)aaucugGfuAfucgagsasg	703	CUCUCGAUACCAGAUUUGGAAGA	905
AD-38 0091.1	usasguuaAfcAfGfCfuauacucguuL96	503	asAfscgag(Tgn)auagcuGfuUfaacuasgsg	704	CCUAGUUAACAG CUAUACUC GU G	906
AD-383761.1	us cscucaUfgGfUfAfgauguucauaL96	504	usAfsugaa(Cgn)aucuacCfaUfgaggasgsu	705	ACUCCUCAUGGUAGAUGUUCAUA	907
AD-38 0740.1	asusucacUfcCfUfGfuucgcaguuuL96	505	asAfsacug(Cgn)gaacagGfaGfugaausasu	706	AUAUUCACUCCUGUUCGCAGUUU	908
AD-379945.1	asgsauauAfcAfAfAfaccucagucaL96	506	usGfsacug(Agn)gguuuuGfuAfuaucusgsa	707	UCAGAUAUACAAAACCUCAGUCA	909
AD-37 9425.1	gsusucaaCfcUfAfAfgccuuuugguL96	507	asCfscaaa(Agn)ggcuuaGfgUfugaacsusc	708	GAGUUCAACCUAAGCCUUUUGGC	910
AD-380886.1	gscsugacAfgAfAfCfuacggagaguL96	508	asCfsucuc(Cgn)guaguuCfuGfucagcsgsu	709	ACGCUGACAGAACUACGGAGAGU	911
AD-38 4366.1	csusgcacAfuGfUfAfcccuucaggaL96	509	usCfscuga(Agn)ggguacAfuGfugcagsasc	710	GU CU GCACAU GUAC CCUU CAGGA	912
AD-380798.1	us csauccUfgAfUfCfagugaaguguL96	510	asCfsacuu(Cgn)acugauCfaGfgaugascsg	711	CGUCAUCCUGAUCAGUGAAGUGG	913
AD-379463.1	gscsaugaGfcGfAfGfauugcuaauuL96	511	asAfsuuag(Cgn)aaucucGfcUfcaugcscsa	712	UGGCAU GAGC GAGAUU GCUAAU G	914
AD-382148.1	csasgggaAfcAfUfGfcacuauguuuL96	512	asAfsacau(Agn)gugcauGfuUfcccugscsa	713	UGCAGGGAACAUGCACUAUGUUG	915
AD-357754.1	ususguucUfuUfCfUfcguauucaguL96	513	asCfsugaa(Tgn)acgagaAfaGfaacaasusa	714	UAUUGUUCUUUCUCGUAUUCAGG	916
AD-356938.1	usgscagaUfaAfGfAfaugcuauucaL96	514	usGfsaaua(Ggn)cauucuUfaUfcugcascsg	715	CGUG CAGAUAAGAAUG CUAUUCA	917
AD-355054.1	csasaacuCfuAfUfAfaaguuccucuL96	515	asGfsagga(Agn)cuuuauAfgAfguuugscsu	716	AGCAAACUCUAUAAAGUUCCUCU	918
AD-357748.1	asasgauaUfuGfUfUfcuuucucguaL96	516	usAfscgag(Agn)aagaacAfaUfaucuuscsa	717	UGAAGAUAUUGUUCUUUCUCGUA	919
AD-355704.1	csusgaaaCfuUfCfUfcaugcaugauL96	517	asUfscaug(Cgn)augagaAfgUfuucagsgsu	718	ACCUGAAACUUCUCAUGCAUGAG	920
AD-356946.1	asgsaaugCfuAfUfUfcauaaucacaL96	518	usGfsugau(Tgn)augaauAfgCfauucususa	719	UAAGAAUG CUAUUCAUAAUCACA	921
AD-3534 99.1	us csaacaAfaGfUfUfaucaaagcuuL96	519	asAfsgcuu(Tgn)gauaacUfuUfguugasgsg	720	CCUCAACAAAGUUAUCAAAGCUU	922
AD-354076.1	gsasacugAfcGfUfUfacaucauacaL96	520	usGfsuaug(Agn)uguaacGfuCfaguucsasu	721	AU GAACUGAC GUUACAUCAUACA	923
AD-356630.1	cscsugaaAfuCfCfUfgcuuuagucuL96	521	asGfsacua(Agn)agcaggAfuUfucaggsusa	722	UACCUGAAAUCCUGCUUUAGUCG	924
AD-353351.1	csasuuguCfuGfAfCfaauaugugaaL96	522	usUfscaca(Tgn)auugucAfgAfcaaugsasu	723	AU CAUU GU CU GA CAAU AU GU GAA	925
AD-359803.1	cs asgucgUfaCfUfCfaguuugaagaL96	523	usCfsuuca(Agn)acugagUfaCfgacugsgsu	724	AC CAGU CGUACUCAGUUU GAAGA	926
AD-382526.1	asgscuacUfcAfGfUfcuagucggguL96	524	asCfsccga(Cgn)uagacuGfaGfuagcusasc	725	GUAGCUACUCAGUCUAGUCGGGC	927
AD-356975.1	ususugaaCfcUfCfUfuguuauaaaaL96	525	usUfsuuau(Agn)acaagaGfgUfucaaascsa	726	UGUUUGAACCUCUUGUUAUAAAA	928

- 102 048552

AD-356974.1	gsusuugaAfcCfUfCfuuguuauaaaL96	526	usUfsuaua(Agn)caagagGfuUfcaaacsasa	727	UUGUUUGAACCUCUUGUUAUAAA	929
AD-355117.1	csusugaaCfuAfCfAfucgaucauguL96	527	asCfsauga(Tgn)cgauguAfgUfucaagsasu	728	AU CUUGAACUACAU CGAU CAUG G	930
AD-357755.1	usgsuucuUfuCfUfCfguauucaggaL96	528	usCfscuga(Agn)uacgagAfaAfgaacasasu	729	AUU GUU CUUU CU C GUAUU CAG GA	931
AD-356382.1	gscsagcuUfcUfAfGfacaaucugauL96	529	asUfscaga(Tgn)ugucuaGfaAfgcugcsasc	730	GU G CAG CUUCUAGACAAU CU GAU	932
AD-356973.1	usgsuuugAfaCfCfUfcuuguuauaaL96	530	usUfsauaa(Cgn)aagaggUfuCfaaacasasa	731	UUUGUUUGAACCUCUUGUUAUAA	933
AD-358488.1	gsasaaacCfuUfUfCfaacuccaacuL96	531	asGfsuugg(Agn)guugaaAfgGfuuuucsasc	732	GU GAAAAC CUUU CAACUC CAAC C	934
AD-354078.1	ascsugacGfuUfAfCfaucauacacaL96	532	usGfsugua(Tgn)gauguaAfcGfucagususc	733	GAACUGAC GUUACAUCAUACACA	935
AD-356638.1	cscsugcuUfuAfGfUfcgagaaccaaL96	533	usUfsgguu(Cgn)ucgacuAfaAfgcaggsasu	734	AU C CUGCUUUAGUC GAGAACCAA	936
AD-357096.1	usgsgauuCfaGfAfUfcagguguuuaL96	534	usAf saaca(Cgn)cugaucUfgAfauccasgsa	735	U CU G GAUU CAGAUCAG GU GUUUA	937
AD-361492.1	csusgcugAfcUfUfGfuuuacgaaauL96	535	asUfsuucg(Tgn)aaacaaGfuCfagcagscsc	736	GGCUGCUGACUUGUUUACGAAAU	938
AD-382775.1	usgsguguUfgAfUfGfcacucuccuaL96	536	usAfsggag(Agn)gugcauCf aAfcaccasgsg	737	CCUG GU GUUGAU GCACUCUC CUA	939
AD-357239.1	csasgaucAfuUfGfGfaauuccuaaaL96	537	usUfsuagg(Agn)auuccaAfuGfaucugsusu	738	AACAGAUCAUUG GAAUUC CUAAA	940
AD-357756.1	gsusucuuUfcUfCfGfuauucaggauL96	538	asUfsccug(Agn)auacgaGfaAfagaacsasa	739	UU GUUCUUUCUC GUAUUCAG GAG	941
AD-356384.1	asgscuucUfaGfAfCfaaucugauauL96	539	asUfsauca(Ggn)auugucUfaGfaagcusgsc	740	G CAG CUUCUAGACAAU CU GAUAC	942
AD-357879.1	asusuuucAfaGfGfUfuucuauuacaL96	540	usGfsuaau(Agn)gaaaccUfuGfaaaausgsu	741	ACAUUUUCAAGGUUUCUAUUACA	943
AD-356386.1	csusucuaGfaCfAfAfucugauaccuL96	541	asGfsguau(Cgn)agauugUfcUfagaagscsu	742	AGCUUCUAGACAAUCU GAUACCU	944
AD-356995.1	asgscuuuAfaAfAfCfaguacacgauL96	542	asUfscgug(Tgn)acuguuUfuAfaagcususu	743	AAAGCUUUAAAACAGUACACGAC	945
AD-353516.1	gscsuuugAfuGfGfAfuucuaaucuuL96	543	asAfsgauu(Agn)gaauccAfuCfaaagcsusu	744	AAGCUUUGAUGGAUUCUAAUCUU	946
AD-354079.1	csusgacgUfuAfCfAfucauacacauL96	544	asUfsgugu(Agn)ugauguAfaCfgucagsusu	745	AACU GACGUUACAU CAUACACAG	947
AD-356639.1	csusgcuuUfaGfUfCfgagaaccaauL96	545	asUfsuggu(Tgn)cucgacUfaAfagcagsgsa	746	UCCUGCUUUAGUCGAGAACCAAU	948
AD-357649.1	usgsuucgUfcAfCfUfccaaacacaaL96	546	usUfsgugu(Tgn)uggaguGfaCfgaacasusa	747	UAUGUU CGUCACUCCAAACACAA	949
AD-361496.1	usgsacuuGfuUfUfAfcgaaaugucuL96	547	asGfsacau(Tgn)ucguaaAfcAfagucasgsc	748	GCUGACUUGUUUACGAAAUGUCC	950
AD-382777.1	gsusguugAfuGfCfAfcucuccuaguL96	548	asCfsuagg(Agn)gagugcAfuCfaacacscsa	749	UGGUGUUGAUGCACUCUCCUAGU	951
AD-353525.1	gsasuucuAfaUfCfUfuccaagguuaL96	549	usAfsaccu(Tgn)ggaagaUfuAfgaaucscsa	750	UG GAUU CUAAUCUU CCAAGGUUA	952
AD-358480.1	csuscguuGfuGfAfAfaaccuuucaaL96	550	usUfsgaaa(Ggn)guuuucAfcAfacgagsasc	751	GU CU C GUU GU GAAAAC CUUU CAA	953
AD-356388.1	uscsuagaCfaAfUfCfugauaccucaL96	551	usGfsaggu(Agn)ucagauUfgUfcuagasasg	752	CUUCUAGACAAU CU GAUACCUCA	954
AD-353500.1	csasacaaAfgUfUfAfucaaagcuuuL96	552	asAfsagcu(Tgn)ugauaaCfuUfuguugsasg	753	CUCAACAAAGUUAUCAAAGCUUU	955
AD-356407.1	csasggucCfuGfUfUfacaacaaguaL96	553	usAfscuug(Tgn)uguaacAfgGfaccugsasg	754	CU CAGGUC CU GUUACAACAAGUA	956
AD-357068.1	gsusucagUfuAf CfGfgguuaauuauL96	554	asUfsaauu(Agn)acccguAfaCfugaacscsa	755	UGGUUCAGUUACGGGUUAAUUAC	957
AD-3598 02.1	cscsagucGfuAfCfUfcaguuugaauL96	555	asUfsucaa(Agn)cugaguAfcGfacuggsusc	756	GACCAGUCGUACUCAGUUUGAAG	958
AD-354638.1	uscsugaaAfuUfGfUfguuagacgguL96	556	asCfscguc(Tgn)aacacaAfuUfucagasasc	757	GUUCUGAAAUUGUGUUAGACGGU	959
AD-356663.1	gsgscaacUfgUfUfUfguguucaacaL96	557	usGfsuuga(Agn)cacaaaCfaGfuugccsasu	758	AUGGCAACUGUUUGUGUUCAACA	960
AD-357651.1	ususcgucAfcUfCfCfaaacacaauuL96	558	asAfsuugu(Ggn)uuuggaGfuGfacgaascsa	759	UGUUCGUCACUCCAAACACAAUG	961
AD-362085.1	csusgacaUfuUfCfCfguuguacauuL96	559	asAfsugua(Cgn)aacggaAfaUfgucagscsg	7 60	CGCU GACAUUUCCGUUGUACAUG	962
AD-38 4329.1	cscsacugCfcAfAfGfugcccuuuauL96	560	asUfsaaag(Ggn)gcacuuGfgCfaguggscsu	7 61	AGCCACUGCCAAGUGCCCUUUAU	963
AD-354067.1	csasgguuUfaUfGfAfacugacguuaL96	561	usAfsacgu(Cgn)aguucaUfaAfaccugsgsa	7 62	UCCAGGUUUAUGAACUGACGUUA	964
AD-353526.1	asusucuaAfuCfUfUfccaagguuauL96	562	asUfsaacc(Tgn)uggaagAfuUfagaauscsc	7 63	GGAUUCUAAU CUUC CAAG GUUAC	965
AD-356422.1	csasaguaAfaUfCfCfucaucacuguL96	563	asCfsagug(Agn)ugaggaUfuUfacuugsusu	7 64	AACAAGUAAAUCCUCAUCACUG G	966
AD-353519.1	ususgaugGfaUfUfCfuaaucuuccaL96	564	usGfsgaag(Agn)uuagaaUfcCfaucaasasg	7 65	CUUU GAUG GAUU CUAAUCUU CCA	9 67
AD-356443.1	csusucauAfcCfUfCfaaacugcauuL96	565	asAfsugca(Ggn)uuugagGfuAfugaagsgsa	7 66	UC CUUCAUAC CUCAAACU GCAU G	968
AD-357115.1	usasuuggCfuUfUfGfuauugaaacaL96	566	usGfsuuuc(Agn)auacaaAfgCfcaauasasa	7 67	UUUAUU GG CUUU GUAUUGAAACA	969
AD-3614 93.1	usgscugaCfuUfGfUfuuacgaaauuL96	567	asAfsuuuc(Ggn)uaaacaAfgUfcagcasgsc	7 68	GCUGCUGACUUGUUUACGAAAUG	970
AD-354639.1	csusgaaaUfuGfUfGfuuagacgguaL96	568	usAfsccgu(Cgn)uaacacAfaUfuucagsasa	7 69	UU CU GAAAUU GU GUUAGACG GUA	971
AD-356955.1	ususcauaAfuCf Af CfauucguuuguL96	569	asCfsaaac(Ggn)aaugugAfuUfaugaasusa	770	UAUU CAUAAUCACAUUCGUUUGU	972
AD-358471.1	csasauucAfgUfCfUfcguugugaaaL96	570	usUfsucac(Agn)acgagaCfuGfaauugscsc	771	GGCAAUUCAGUCUCGUUGUGAAA	973
AD-354066.1	cscsagguUfuAfUfGfaacugacguuL96	571	asAfsegue(Agn)guucauAfaAfccuggsasc	772	GUCCAGGUUUAUGAACUGACGUU	974
AD-384665.1	cscsuccaGfgGfAfUfugguauguguL96	572	asCfsacau(Agn)ccaaucCfcUfggaggsasc	773	GUCCUCCAGGGAUUGGUAUGUGG	975
AD-355045.1	ususucuuCfaGfCfAfaacucuauaaL96	573	usUfsauag(Agn)guuugcUfgAfagaaasgsa	774	UCUUUCUUCAGCAAACUCUAUAA	976

- 103 048552

AD-353715.1	usgsuuccCfaAfAfAfuuauggcuuuL96	574	asAfsagcc(Agn)uaauuuUfgGfgaacasgsc	775	GCUGUUCCCAAAAUUAUGGCUUC	977
AD-356429.1	ususuciiaUfcAfUfCfuuccuucauaL96	575	usAfsugaa(Ggn)gaagauGfaUfagaaascsu	776	AGUUUCUAUCAUCUUCCUUCAUA	978
AD-359761.1	csusuuaaGfgAfGfUfucaucuaccuL96	576	asGfsguag(Agn)ugaacuCfcUfuaaagsasc	777	GUCUUUAAGGAGUUCAUCUACCG	979
AD-356669.1	usgsuuugUfgUfUfCfaacaauuguuL96	577	asAfscaau(Tgn)guugaaCfaCfaaacasgsu	778	ACUGUUUGUGUUCAACAAUUGUU	980
AD-357684.1	ascsuguuCfaAfCfUfguggauaucuL96	578	asGfsauau(Cgn)cacaguUfgAfacagusgsc	779	GCACUGUUCAACUGUGGAUAUCG	981
AD-361981.1	usasacguAfaCfUfCfuuucuaugcuL96	579	asGfscaua(Ggn)aaagagUfuAfcguuasasa	780	UUUAAC GUAACU CUUU CUAU GC C	982
AD-355423.1	uscsugagGfaAfCfAfguuccuauuuL96	580	asAfsauag(Ggn)aacuguUfcCfucagasgsu	781	ACUCUGAGGAACAGUU CCUAUUG	983
AD-356956.1	uscsauaaUfcAfCfAfuucguuuguuL96	581	asAfscaaa(Cgn)gaauguGfaUfuaugasasu	782	AUUCAUAAUCACAUUC GUUUGUU	984
AD-353522.1	asusggauUfcUfAfAfucuuccaaguL96	582	asCfsuugg(Agn)agauuaGfaAfuccauscsa	783	UGAUGGAUUCUAAUCUUCCAAGG	985
AD-354075.1	usgsaacuGfaCfGfUfuacaucauauL96	583	asUfsauga(Tgn)guaacgUfcAfguucasusa	784	UAUGAACU GACGUUACAUCAUAC	986
AD-355059.1	uscsuauaAfaGfUfUfccucuugacaL96	584	usGfsucaa(Ggn)aggaacUfuUfauagasgsu	785	ACUCUAUAAAGUUCCUCUUGACA	987
AD-356951.1	gscsuauuCfaUfAfAfucacauucguL96	585	asCfsgaau(Ggn)ugauuaUfgAfauagcsasu	786	AU GCUAUU CAUAAU CACAUU CGU	988
AD-353871.1	gscsuacuAfaAfUfGfugcucuuaguL96	586	asCfsuaag(Agn)gcacauUfuAfguagcscsa	787	UGGCUACUAAAUGUGCUCUUAGG	989
AD-356996.1	gscsuuuaAfaAfCfAfguacacgacuL96	587	asGfsucgu(Ggn)uacuguUfuUfaaagcsusu	788	AAGCUUUAAAACAGUACACGACU	990
AD-354068.1	asgsguuuAfuGfAfAfcugacguuauL96	588	asUfsaacg(Tgn)caguucAfuAfaaccusgsg	789	CCAGGUUUAU GAACUGAC GUUAC	991
AD-356678.1	uscsaacaAfuUfGfUfugaagacucuL96	589	asGfsaguc(Tgn)ucaacaAfuVfguugasasc	790	GUUCAACAAUUGUUGAAGACUCU	992
AD-357963.1	gscsaacaUfaCfUfUfucuauugccaL96	590	usGfsgcaa(Tgn)agaaagUfaUfguugcsusg	791	CAGCAACAUACUUU CUAUUG CCA	993
AD-362090.1	asusuuccGfuUfGfUfacauguuccuL96	591	asGfsgaac(Agn)uguacaAfcGfgaaausgsu	792	ACAUUUCCGUUGUACAUGUU CCU	994
AD-355745.1	csusccguCfaGfCfAfcaauaaccauL96	592	asUfsgguu(Agn)uugugcUfgAfcggagsasa	793	UU CU CC GU CAGCACAAUAAC CAG	995
AD-357066.1	usgsguucAfgUfUfAfcggguuaauuL96	593	asAfsuuaa(Cgn)ccguaaCfuGfaaccasgsc	794	GCUGGUUCAGUUACGGGUUAAUU	996
AD-353527.1	ususcuaaUfcUfUfCfcaagguuacaL96	594	usGfsuaac(Cgn)uuggaaGfaUfuagaasusc	795	GAUUCUAAUCUUCCAAGGUUACA	997
AD-354236.1	gsasguauUfgUfGfGfaacuuauaguL96	595	asCfsuaua(Agn)guuccaCfaAfuacucscsc	796	GGGAGUAUUGUGGAACUUAUAGC	998
AD-357750.1	gsasuauuGfuUfCfUfuucucguauuL96	596	asAfsuacg(Agn)gaaagaAfcAfauaucsusu	797	AAGAUAUUGUUCUUUCUCGUAUU	999
AD-356389.1	csusagacAfaUfCfUfgauaccucauL96	597	asUfsgagg(Tgn)aucagaUfuGfucuagsasa	798	UU CUAGACAAUCUGAUAC CU CAG	1000
AD-354939.1	csgsccuuUfuAfUfCfugcuucguuuL96	598	asAfsacga(Agn)gcagauAfaAfaggcgsgsa	799	UCCGCCUUUUAUCUGCUUCGUUU	1001
AD-357218.1	usasugaaCfgCfUfAfucauucaaaaL96	599	usUfsuuga(Agn)ugauagCfgUfucauasasg	800	CUUAUGAACG CUAU CAUU CAAAA	1002
AD-354640.1	usgsaaauUfgUfGfUfuagacgguauL96	600	asUfsaccg(Tgn)cuaacaCfaAfuuucasgsa	801	UCUGAAAUUGUGUUAGACGGUAC	1003
AD-358018.1	asuscuucAfaGfUfCfuggaauguuuL96	601	asAfsacau(Tgn)ccagacUfuGfaagausgsu	802	ACAUCUUCAAGUCUGGAAUGUUC	1004
AD-362093.1	uscscguuGfuAfCfAfuguuccuguuL96	602	asAfscagg(Agn)acauguAfcAfacggasasa	803	UUU С C GUU GUACAU GUU C CU GUU	1005
AD-356385.1	gscsuucuAfgAfCfAfaucugauacuL96	603	asGfsuauc(Agn)gauuguCfuAfgaagcsusg	804	CAGCUU CUAGACAAUCUGAUAC C	1006
AD-357069.1	ususcaguUfaCfGfGfguuaauuacuL96	604	asGfsuaau(Tgn)aacccgUfaAfcugaascsc	805	GGUU CAGUUACG GGUUAAUUACU	1007
AD-358764.1	csasugcaAfgAfCfUfcacuuagucuL96	605	asGfsacua(Agn)gugaguCfuUfgcaugsgsu	806	AC CAUG CAAGACUCACUUAGUCC	1008
AD-354316.1	gsasugacUfcUfGfAfaucgagaucuL96	606	asGfsaucu(Cgn)gauucaGfaGfucaucscsu	807	AGGAUGACUCUGAAUCGAGAUC G	1009
AD-355775.1	asgsgcuaUfaAfCfCfuacuaccaauI>96	607	asUfsuggu(Agn)guagguUfaUfagccuscsu	808	AGAG GCUAUAACCUACUACCAAG	1010
AD-354320.1	ascsucugAfaUfCfGfagaucggauuL96	608	asAfsuccg(Agn)ucucgaUfuCfagaguscsa	809	UGACUCUGAAUCGAGAUCGGAUG	1011
AD-355783.1	ascscuacUfaCfCfAfagcauaacauL96	609	asUfsguua(Tgn)gcuuggUfaGfuaggususa	810	UAAC CUACUACCAAGCAUAACAG	1012
AD-354322.1	uscsugaaUfcGfAfGfaucggauguuL96	610	asAf scauc(Cgn)gaucucGfaU fucagasgsu	811	ACUCUGAAUC GAGAUC GGAU GU C	1013
AD-356408.1	asgsguccUfgUfUfAfcaacaaguaaL96	611	usUfsacuu(Ggn)uuguaaCfaGfgaccusgsa	812	UCAGGUCCUGUUACAACAAGUAA	1014
AD-354805.1	ascsagcaGfuGfUfUfgauaaauuugL96	612	csAfsaauu(Tgn)aucaacAfcUfgcuguscsa	813	U GACAG CAGU GUUGAUAAAUUU G	1015
AD-356409.1	gsgsuccuGfuUfAfCfaacaaguaaaL96	613	usUfsuacu(Tgn)guuguaAfcAfggaccsusg	814	CAGGUCCUGUUACAACAAGUAAA	1016
AD-355118.1	ususgaacUfaCfAfUfcgaucauggaL96	614	usCfscaug(Agn)ucgaugUfaGfuucaasgsa	815	UCUUGAACUACAUC GAUCAU GGA	1017
AD-358958.1	ascsucggAfgUfUfCfaaccuaagcuL96	615	asGfscuua(Ggn)guugaaCfuCfcgagususc	816	GAACUC GGAGUU CAACCUAAGCC	1018
AD-355422.1	csuscugaGfgAfAfCfaguuccuauuL96	616	asAfsuagg(Agn)acuguuCfcUfcagagsusc	817	GACU CU GAGGAACAGUUCCUAUU	1019
AD-358959.1	csuscggaGfuUfCfAfaccuaagccuL96	494	asGfsgcuu(Agn)gguugaAfcUfccgagsusu	818	AACUCGGAGUUCAACCUAAGCCU	1020
AD-355424.1	csusgaggAfaCfAfGfuuccuauuguL96	617	asCfsaaua(Ggn)gaacugUfuCfcucagsasg	819	CUCUGAGGAACAGUUCCUAUUGG	1021
AD-379420.2	gscsucggAfgUfUfCfaaccuaagcuL96	482	asGfscuua(Ggn)guugaaCfuCfcgagcsusc	683	GAGCUCGGAGUUCAACCUAAGCC	885
AD-355524.1	asuscauuAfuAfCfAfgggcuuuuaaL96	618	usUfsaaaa(Ggn)cccuguAfuAfaugausgsa	820	U CAU CAUUAUACAG GG CUUUUAA	1022
AD-379380.2	csuscggaGfuUfCfAfaccuaagccuL96	494	asGfsgcuu(Agn)gguugaAfcUfccgagscsu	695	AG GCUUAG GUUGAACU CC GAGCU	292

- 104 048552

Таблица 4

Скрининг однократных HTT доз в клетках ВЕ(2)С

	Доза 10 нМ	Доза 0,1 нМ
Дуплекс	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD
AD-384118.1	51,69	25,40	46,89	7,33
AD-380543.1	95,92	27,12	71,60	24,68
AD-380533.1	105,39	28,38	91,67	26,80
AD-384038.1	154,15	20,25	125,43	25,19
AD-380805.1	101,15	19,55	114,28	15,36
AD-380117.1	130,05	21,16	122,25	14,15
AD-381341.1	138,31	25,62	146,74	39,17
AD-379426.1	145,46	25,51	151,86	38,36
AD-380888.1	130,28	16,92	134,28	21,73
AD-384841.1	125,51	34,07	115,98	15,20
AD-380853.1	107,44	23,39	98,68	4,67
AD-379602.1	84,02	18,25	172,53	35,05
AD-382484.1	75,19	25,05	57,22	13,43
AD-3 80741.1	118,53	24,70	73,00	3,77
AD-380534.1	143,75	30,13	103,24	23,54
AD-384053.1	87,87	16,27	130,20	13,77
AD-380916.1	95,50	29,09	144,05	13,23
AD-380402.1	139,27	15,07	126,43	16,30
AD-381464.1	135,36	39,85	134,37	31,20
AD-379729.1	84,36	24,54	137,33	26,49
AD-381065.1	141,96	30,56	136,29	12,84
AD-379466.1	115,44	40,22	120,93	21,48
AD-380885.1	95,86	10,93	139,28	22,72
AD-379897.1	95,59	22,26	172,12	33,52
AD-381124.1	59,94	26,80	51,93	10,57
AD-380807.1	99,61	30,47	77,87	21,23
AD-380806.1	132,18	39,93	102,86	19,45
AD-384843.1	117,21	24,86	123,71	11,78
AD-381257.1	99,30	30,21	124,74	10,99
AD-380408.1	157,70	44,86	129,06	19,38
AD-381570.1	193,38	37,37	125,32	13,13
AD-380093.1	192,68	42,81	135,16	26,86
AD-381148.1	187,13	28,75	137,42	11,82
AD-379475.1	149,83	36,22	124,88	9,89
AD-381142.1	131,62	40,12	121,85	12,50
AD-380852.1	76,23	5,88	198,90	40,31
AD-379935.1	64,90	29,25	53,70	13,77
AD-381117.1	95,64	33,48	68,03	15,97
AD-380808.1	124,46	39,75	95,85	8,44
AD-379471.1	93,97	29,87	104,28	18,99
AD-381342.1	107,50	20,99	126,66	32,01
AD-380411.1	148,77	15,63	134,25	21,15
AD-382487.1	155,26	47,54	136,80	13,12
AD-380116.1	156,98	36,49	156,00	25,80

- 105 048552

AD-381150.1	149,99	39,15	135,76	22,27
AD-379476.1	132,34	43,09	131,15	14,36
AD-382444.1	122,07	26,37	118,65	22,02
AD-380883.1	52,18	15,97	257,45	13,08
AD-379941.1	59,35	31,34	58,84	13,25
AD-381578.1	75,64	37,02	60,08	4,32
AD-381460.1	101,15	24,87	96,09	11,60
AD-379939.1	156,24	25,09	99,44	17,05
AD-384039.1	127,13	42,92	108,45	32,25
AD-380735.1	137,74	42,47	128,37	15,25
AD-382525.1	154,67	44,65	124,68	26,66
AD-380713.1	163,12	43,55	130,38	21,77
AD-382149.1	135,62	22,90	139,99	28,87
AD-379855.1	145,22	39,96	122,14	13,22
AD-383508.1	135,52	24,12	118,15	5,12
AD-381273.1	74,96	3,61	192,17	24,11
AD-382483.1	51,15	24,35	67,84	17,97
AD-382481.1	82,28	22,45	74,06	8,54
AD-382485.1	100,70	33,99	90,08	11,68
AD-380092.1	101,09	37,56	93,42	10,74
AD-379420.1	102,06	37,49	99,35	10,17
AD-380800.1	84,91	25,98	116,09	25,96
AD-384030.1	143,57	39,66	115,50	24,98
AD-380737.1	149,04	34,89	137,50	24,60
AD-382780.1	155,32	21,47	145,73	18,80
AD-379944.1	146,65	40,50	148,17	14,59
AD-379461.1	134,09	14,71	129,84	8,09
AD-381856.1	51,32	13,29	125,92	43,49
AD-379418.1	23,32	9,32	37,51	6,01
AD-382924.1	76,58	31,10	51,58	11,97
AD-383759.1	88,53	29,71	73,95	12,45
AD-380409.1	121,08	24,07	83,54	6,71
AD-379380.1	33,65	6,37	100,25	16,79
AD-381145.1	113,55	24,69	100,19	22,11
AD-384054.1	113,24	20,54	116,75	20,01
AD-380796.1	145,88	42,84	140,74	14,73
AD-382960.1	145,68	37,86	138,28	27,41
AD-380555.1	106,36	26,58	139,27	18,75
AD-379462.1	158,82	47,01	119,08	13,60
AD-382118.1	88,57	19,33	110,03	27,29
AD-380414.1	37,65	8,76	33,69	1,29
AD-380091.1	52,46	27,92	47,36	13,94
AD-383761.1	51,55	19,45	61,12	13,37
AD-380740.1	32,40	12,55	65,91	18,47
AD-379945.1	47,84	25,04	94,57	15,24

- 106 048552

AD-379425.1	52,33	16,94	89,98	12,20
AD-380886.1	111,81	24,52	137,52	37,78
AD-384366.1	103,34	14,61	105,10	18,86
AD-380798.1	109,34	31,61	103,41	21,42
AD-379463.1	112,46	30,89	92,69	9,78
AD-382148.1	40,89	7,63	59,31	20,48
AD-357754.1	25,92	3,91	59,47	11,65
AD-356938.1	19,38	3,74	66,11	22,41
AD-355054.1	73,88	18,14	121,65	15,38
AD-357748.1	58,16	15,88	122,16	5,44
AD-355704.1	37,44	4,59	165,32	50,68
AD-356946.1	48,39	8,85	162,43	42,24
AD-353499.1	32,30	7,21	139,76	50,75
AD-354076.1	88,26	13,12	133,42	42,69
AD-356630.1	37,53	3,16	92,04	25,79
AD-353351.1	41,71	6,98	96,78	14,30
AD-359803.1	54,29	19,36	177,30	41,38
AD-382526.1	38,58	7,17	54,67	10,40
AD-356975.1	33,90	7,35	80,03	9,50
AD-356974.1	32,22	5,95	120,19	17,90
AD-355117.1	37,63	2,69	117,21	11,97
AD-357755.1	104,49	8,71	136,50	16,63
AD-356382.1	94,77	7,03	150,60	13,96
AD-356973.1	85,49	7,63	148,93	18,16
AD-358488.1	46,44	2,36	139,29	25,52
AD-354078.1	46,34	5,84	129,77	43,58
AD-356638.1	77,64	14,67	138,53	22,89
AD-357096.1	48,16	2,44	135,84	19,68
AD-361492.1	56,56	15,98	124,38	30,67
AD-382775.1	42,95	11,66	76,60	16,23
AD-357239.1	24,39	3,37	60,14	11,30
AD-357756.1	78,94	10,48	109,26	30,70
AD-356384.1	36,95	9,36	105,38	12,36
AD-357879.1	42,50	4,51	117,99	20,11
AD-356386.1	68,71	7,28	147,92	36,10
AD-356995.1	60,22	5,01	168,66	25,76
AD-353516.1	33,15	9,36	133,30	18,51
AD-354079.1	49,35	5,31	130,79	14,08
AD-356639.1	36,33	3,49	117,25	22,43
AD-357649.1	85,70	2,07	91,78	58,01
AD-361496.1	41,93	12,04	140,37	30,87
AD-382777.1	56,23	13,88	58,04	19,93
AD-353525.1	21,75	2,08	58,46	7,82
AD-358480.1	26,74	5,28	64,94	13,24
AD-356388.1	45,10	10,22	109,51	34,60

- 107 048552

AD-353500.1	40,43	3,34	102,99	14,32
AD-356407.1	61,59	6,59	157,31	42,34
AD-357068.1	45,70	7,82	160,84	46,87
AD-359802.1	33,72	4,31	149,89	20,91
AD-354638.1	65,21	2,80	170,34	27,30
AD-356663.1	58,99	6,53	128,37	38,64
AD-357651.1	88,23	17,45	107,54	38,79
AD-362085.1	86,17	27,21	170,36	24,85
AD-384329.1	61,30	6,83	52,87	3,24
AD-354067.1	23,37	4,21	62,78	10,75
AD-353526.1	50,82	2,45	106,49	16,48
AD-356422.1	51,12	12,80	99,93	3,64
AD-353519.1	43,78	4,69	109,71	25,51
AD-356443.1	80,02	8,39	151,50	30,84
AD-357115.1	64,98	6,65	178,41	43,34
AD-361493.1	29,23	6,24	136,35	20,49
AD-354639.1	48,20	4,60	155,53	33,91
AD-356955.1	62,09	6,19	164,98	46,88
AD-358471.1	31,12	3,36	108,67	37,20
AD-354066.1	77,57	12,13	205,05	15,39
AD-384665.1	62,62	11,80	51,01	1,70
AD-355045.1	13,21	1,82	32,78	5,49
AD-353715.1	19,44	1,85	51,85	13,55
AD-356429.1	35,74	7,82	76,89	14,02
AD-359761.1	53,86	7,22	92,90	36,39
AD-356669.1	67,14	12,99	122,69	54,26
AD-357684.1	38,66	2,19	171,32	21,29
AD-361981.1	89,01	10,03	136,10	45,50
AD-355423.1	50,85	3,22	126,34	24,37
AD-356956.1	45,99	3,04	152,10	57,21
AD-353522.1	60,07	5,92	119,82	39,14
AD-354075.1	30,04	2,60	154,25	28,87
AD-355059.1	32,62	6,80	43,67	9,90
AD-356951.1	19,64	3,03	41,52	5,36
AD-353871.1	57,71	3,61	59,99	14,88
AD-356996.1	36,58	9,28	77,80	17,06
AD-354068.1	27,76	6,17	47,95	10,59
AD-356678.1	32,90	4,26	87,03	18,12
AD-357963.1	45,86	6,23	132,93	44,34
AD-362090.1	94,25	8,99	125,66	40,95
AD-355745.1	41,18	3,07	103,13	19,96
AD-357066.1	90,93	13,20	112,28	36,69
AD-353527.1	57,92	8,02	112,27	9,38
AD-354236.1	56,76	5,34	193,83	27,51
AD-357750.1	7,74	2,65	18,65	3,02

- 108 048552

AD-356389.1	13,11	2,30	35,47	3,73
AD-354939.1	18,83	5,26	49,46	4,06
AD-357218.1	16,19	4,22	32,72	6,57
AD-354640.1	18,37	2,59	41,06	5,66
AD-358018.1	25,29	8,01	63,68	15,77
AD-362093.1	95,57	21,34	100,80	19,61
AD-356385.1	28,71	2,03	63,42	13,57
AD-357069.1	31,85	2,96	90,71	14,52
AD-358764.1	17,72	5,20	54,27	8,41
AD-354316.1	83,70	20,63	199,24	10,55
AD-355775.1	61,70	17,03	158,42	20,42
AD-354320.1	61,59	15,49	160,96	7,90
AD-355783.1	55,33	15,69	133,29	18,94
AD-354322.1	191,64	54,47	179,71	36,74
AD-356408.1	159,84	36,30	213,32	24,70
AD-354805.1	172,07	29,14	199,39	27,62
AD-356409.1	83,23	12,52	173,24	19,82
AD-355118.1	102,46	24,74	170,98	23,64
AD-358958.1	187,06	30,88	199,91	32,39
AD-355422.1	72,78	24,21	226,00	37,15
AD-358959.1	100,77	30,11	199,23	10,37
AD-355424.1	54,88	14,67	156,21	37,30
AD-379420.2	162,26	36,61	179,07	34,36
AD-355524.1	85,94	17,37	175,30	31,43
AD-379380.2	90,64	12,90	153,32	39,65

Таблица 5

Немодифицированные последовательности смысловых и антисмысловых цепей дцРНК средств к хангтингтину (HTT)

ID дуплекса	Смысловая последовательность 5'—>3'	SEQ ID NO:	Диапазон в NM 002111.8	Антисмысловая последовательность 5 ' ->3'	SEQ ID NO:	Диапазон в NM 002111.8
AD-953583.1	GCUGCCGGGACGGGUCCAA	1023	1-19	UUGGACCCGUCCCGGCAGC	1194	1-19
AD-953591.1	GACGGGUC CAAGAU GGAC G	1024	9-27	CGUCCAUCUUGGACCCGUC	1195	9-27
AD-953599.1	CAAGAUGGACGGCCGCUCA	1025	17-35	UGAGCGGCCGUCCAUCUUG	1196	17-35
AD-953607.1	ACGGCCGCUCAGGUUCUGC	1026	25-43	GCAGAACCUGAGCGGCCGU	1197	2 5-43
AD-953615.1	UCAGGUUCUGCUUUUACCU	1027	33-51	AGGUAAAAGCAGAACCUGA	1198	33-51
AD-953623.1	UGCUUUUACCUGCGGCCCA	1028	41-59	UGGGCCGCAGGUAAAAGCA	1199	41-59
AD-953630.1	ACCUGCGGCCCAGAGCCCC	1029	48-66	GGGGCUCUGGGCCGCAGGU	1200	48-66
AD-953638.1	CCCAGAGCCOCAUUCAUU G	1030	56-74	CAAUGAAUGGGGCUCUGGG	1201	56-74
AD-953646.1	CCCAUUCAUUGCCCCGGUG	1031	64-82	CACCGGGGCAAUGAAUGGG	1202	64-82
AD-953654.1	UUGCCCCGGUGCUGAGCGG	1032	72-90	CCGCUCAGCACCGGGGCAA	1203	72-90
AD-953662.1	GUGCUGAGCGGCGCCGCGA	1033	80-98	UCGCGGCGCCGCUCAGCAC	1204	80-98
AD-953670.1	CGGCGCCGCGAGUCGGCCC	1034	88-106	GGGCCGACUCGCGGCGCCG	1205	88-106
AD-953584.1	CUGCCGGGACGGGUCCAAG	1035	2-20	CUUGGACCCGUCCCGGCAG	1206	2-20
AD-953592.1	ACGGGUCCAAGAUGGACGG	1036	10-28	CCGUCCAUCUUGGACCCGU	1207	10-28
AD-953600.1	AAGAUGGACGGCCGCUCAG	1037	18-36	CUGAGCGGCCGUCCAUCUU	1208	18-36
AD-953608.1	CGGCCGCUCAGGUUCUGCU	1038	26-44	AGCAGAACCUGAGCGGCCG	1209	26-44
AD-953616.1	CAGGUUCUGCUUUUACCUG	1039	34-52	CAGGUAAAAGCAGAACCUG	1210	34-52
AD-953624.1	GCUUUUACCUGC GGCC CAG	1040	42-60	CUGGGCCGCAGGUAAAAGC	1211	42-60
AD-953631.1	CCUGCGGCCCAGAGCCCCA	1041	49-67	UGGGGCUCUGGGCCGCAGG	1212	49-67
AD-953639.1	CCAGAGCCCCAUUCAUUGC	1042	57-75	GCAAUGAAUGGGGCUCUGG	1213	57-75
AD-953647.1	CCAUUCAUUGCCCCGGUGC	1043	65-83	GCACCGGGGCAAUGAAUGG	1214	65-83
AD-953655.1	UGCCCCGGUGCUGAGCGGC	1044	73-91	GCCGCUCAGCACCGGGGCA	1215	73-91

- 109 048552

AD-953663.1	UGCUGAGCGGCGCCGCGAG	1045	81-99	CUCGCGGCGCCGCUCAGCA	1216	81-99
AD-953671.1	GGCGCCGCGAGUCGGCCCG	1046	89-107	CGGGCCGACUCGCGGCGCC	1217	89-107
AD-953585.1	UGCCGGGACGGGUCCAAGA	1047	3-21	UCUUGGACCCGUCCCGGCA	1218	3-21
AD-953593.1	CGGGUCCAAGAUGGACGGC	1048	11-29	GCCGUCCAUCUUGGACCCG	1219	11-29
AD-953601.1	AGAUGGACGGCCGCUCAGG	1049	19-37	CCUGAGCGGCCGUCCAUCU	1220	19-37
AD-953609.1	GGCCGCUCAGGUUCUGCUU	1050	27-45	AAGCAGAACCUGAGCGGCC	1221	27-45
AD-953617.1	AGGUUCUGCUUUUACCUGC	1051	35-53	GCAGGUAAAAGCAGAACCU	1222	35-53
AD-953625.1	CUUUUACCUGCGGCCCAGA	1052	43-61	UCUGGGCCGCAGGUAAAAG	1223	43-61
AD-953632.1	CUGCGGCCCAGAGCCCCAU	1053	50-68	AUGGGGCUCUGGGCCGCAG	1224	50-68
AD-953640.1	CAGAGCCCCAUUCAUUGCC	1054	58-76	GGCAAUGAAUGGGGCUCUG	1225	58-76
AD-953648.1	CAUUCAUUGCCCCGGUGCU	1055	66-84	AGCACCGGGGCAAUGAAUG	122 6	66-84
AD-953656.1	GCCCCGGUGCUGAGCGGCG	1056	74-92	CGCCGCUCAGCACCGGGGC	1227	74-92
AD-953664.1	GCUGAGCGGCGCCGCGAGU	1057	82-100	ACUCGCGGCGCCGCUCAGC	1228	82-100
AD-953672.1	GCGCCGCGAGUCGGCCCGA	1058	90-108	UCGGGCCGACUCGCGGCGC	1229	90-108
AD-953586.1	GCCGGGACGGGUCCAAGAU	1059	4-22	AUCUUGGACCCGUCCCGGC	1230	4-22
AD-953594.1	GGGUCCAAGAUGGACGGCC	1060	12-30	GGCCGUCCAUCUUGGACCC	1231	12-30
AD-953602.1	GAUGGACGGCCGCUCAGGU	1061	2 0-38	ACCUGAGCGGCCGUCCAUC	1232	20-38
AD-953610.1	GCCGCUCAGGUUCUGCUUU	1062	28-46	AAAGCAGAACCUGAGCGGC	1233	28-46
AD-953618.1	GGUUCUGCUUUUACCUGCG	1063	36-54	CGCAGGUAAAAGCAGAACC	1234	36-54
AD-953626.1	UUUUACCUGCGGCCCAGAG	1064	44-62	CUCUGGGCCGCAGGUAAAA	1235	44-62
AD-953633.1	UGCGGCCCAGAGCCCCAUU	1065	51-69	AAUGGGGCUCUGGGCCGCA	1236	51-69
AD-953641.1	AGAGCCCCAUUCAUUGCCC	1066	59-77	GGGCAAUGAAUGGGGCUCU	1237	59-77
AD-953649.1	AUUCAUUGCCCCGGUGCUG	1067	67-85	CAGCACCGGGGCAAUGAAU	1238	67-85
AD-953657.1	CCCCGGUGCUGAGCGGCGC	1068	75-93	GCGCCGCUCAGCACCGGGG	12 39	75-93
AD-953665.1	CUGAGCGGCGCCGCGAGUC	1069	83-101	GACUCGCGGCGCCGCUCAG	1240	83-101
AD-953673.1	CGCCGCGAGUCGGCCCGAG	1070	91-109	CUCGGGCCGACUCGCGGCG	1241	91-109
AD-953587.1	CCGGGACGGGUCCAAGAUG	1071	5-23	CAUCUUGGACCCGUCCCGG	1242	5-23
AD-953595.1	GGUCCAAGAUGGACGGCCG	1072	13-31	CGGCCGUCCAUCUUGGACC	1243	13-31
AD-953603.1	AUGGACGGCCGCUCAGGUU	1073	21-39	AACCUGAGCGGCCGUCCAU	1244	21-39
AD-953611.1	CCGCUCAGGUUCUGCUUUU	1074	29-47	AAAAGCAGAACCUGAGCGG	1245	29-47
AD-953619.1	GUUCUGCUUUUACCUGCGG	1075	37-55	CCGCAGGUAAAAGCAGAAC	1246	37-55
AD-953627.1	UUUACCUGCGGCCCAGAGC	1076	45-63	GCUCUGGGCCGCAGGUAAA	12 47	45-63
AD-953634.1	GCGGCCCAGAGCCCCAUUC	1077	52-70	GAAUGGGGCUCUGGGCCGC	1248	52-70
AD-953642.1	GAGCCCCAUUCAUUGCCCC	1078	60-78	GGGGCAAUGAAUGGGGCUC	1249	60-78
AD-953650.1	UUCAUUGCCCCGGUGCUGA	1079	68-86	UCAGCACCGGGGCAAUGAA	1250	68-86
AD-953658.1	CCCGGUGCUGAGCGGCGCC	1080	76-94	GGCGCCGCUCAGCACCGGG	1251	76-94
AD-953666.1	UGAGCGGCGCCGCGAGUCG	1081	84-102	CGACUCGCGGCGCCGCUCA	1252	84-102
AD-953674.1	GCCGCGAGUCGGCCCGAGG	1082	92-110	CCUCGGGCCGACUCGCGGC	1253	92-110
AD-953588.1	CGGGACGGGUCCAAGAUGG	1083	6-24	CCAUCUUGGACCCGUCCCG	1254	6-24
AD-953596.1	GUCCAAGAUGGACGGCCGC	1084	14-32	GCGGCCGUCCAUCUUGGAC	1255	14-32
AD-953604.1	UGGACGGCCGCUCAGGUUC	1085	22-40	GAACCUGAGCGGCCGUCCA	1256	22-40
AD-953612.1	CGCUCAGGUUCUGCUUUUA	1086	30-48	UAAAAG CAGAACCUGAGC G	1257	30-48
AD-953620.1	UUCUGCUUUUACCUGCGGC	1087	38-56	GC CG CAGGUAAAAGCAGAA	1258	38-56
AD-953628.1	UUACCUGCGGCCCAGAGCC	1088	46-64	GGCUCUGGGCCGCAGGUAA	1259	4 6-64
AD-953635.1	CGGCCCAGAGCCCCAUUCA	1089	53-71	UGAAUGGGGCUCUGGGCCG	1260	53-71
AD-953643.1	AGCCCCAUUCAUUGCCCCG	1090	61-79	CGGGGCAAUGAAUGGGGCU	1261	61-79
AD-953651.1	UCAUUGCCCCGGUGCUGAG	1091	69-87	CUCAGCACCGGGGCAAUGA	12 62	69-87
AD-953659.1	CCGGUGCUGAGCGGCGCCG	1092	77-95	CGGCGCCGCUCAGCACCGG	1263	77-95

- 110 048552

AD-953667.1	GAGCGGCGCCGCGAGUCGG	1093	85-103	CCGACUCGCGGCGCCGCUC	1264	85-103
AD-953675.1	CCGCGAGUCGGCCCGAGGC	1094	93-111	GCCUCGGGCCGACUCGCGG	1265	93-111
AD-953589.1	GGGACGGGUCCAAGAUGGA	1095	7-25	UCCAUCUUGGACCCGUCCC	1266	7-25
AD-953597.1	UCCAAGAUGGACGGCCGCU	1096	15-33	AGCGGCCGUCCAUCUUGGA	12 67	15-33
AD-953605.1	GGACGGCCGCUCAGGUUCU	1097	2 3-41	AGAACCUGAGCGGCCGUCC	1268	23-41
AD-953613.1	GCUCAGGUUCUGCUUUUAC	1098	31-49	GUAAAAGCAGAACCUGAGC	1269	31-49
AD-953621.1	UCUGCUUUUACCUGCGGCC	1099	39-57	GGCCGCAGGUAAAAGCAGA	1270	39-57
AD-953629.1	UACCUGCGGCCCAGAGCCC	1100	47-65	GGGCUCUGGGCCGCAGGUA	1271	47-65
AD-953636.1	GGCCCAGAGCCCCAUUCAU	1101	54-72	AUGAAUGGGGCUCUGGGCC	1272	54-72
AD-953644.1	GCCCCAUUCAUUGCCCCGG	1102	62-80	CCGGGGCAAUGAAUGGGGC	1273	62-80
AD-953652.1	CAUUGCCCCGGUGCUGAGC	1103	70-88	GCUCAGCACCGGGGCAAUG	1274	70-88
AD-953660.1	CGGUGCUGAGCGGCGCCGC	1104	78-96	GCGGCGCCGCUCAGCACCG	1275	78-96
AD-953676.1	CGCGAGUCGGCCCGAGGCC	1105	94-112	GGCCUCGGGCCGACUCGCG	1276	94-112
AD-953590.1	GGACGGGUCCAAGAUGGAC	1106	8-26	GUCCAUCUUGGACCCGUCC	1277	8-26
AD-953598.1	CCAAGAUGGACGGCCGCUC	1107	16-34	GAGCGGCCGUCCAUCUUGG	1278	16-34
AD-953606.1	GACGGCCGCUCAGGUUCUG	1108	24-42	CAGAACCUGAGCGGCCGUC	1279	24-42
AD-953614.1	CUCAGGUUCUGCUUUUACC	1109	32-50	GGUAAAAGCAGAACCUGAG	1280	32-50
AD-953622.1	CUGCUUUUACCUGCGGCCC	1110	40-58	GGGCCGCAGGUAAAAGCAG	1281	40-58
AD-953637.1	GCCCAGAGCCCCAUUCAUU	1111	55-73	AAUGAAUGGGGCUCUGGGC	1282	55-73
AD-953645.1	CCCCAUUCAUUGCCCCGGU	1112	63-81	ACCGGGGCAAUGAAUGGGG	1283	63-81
AD-953653.1	AUUGCCCCGGUGCUGAGCG	1113	71-89	CGCUCAGCACCGGGGCAAU	1284	71-89
AD-953661.1	GGUGCUGAGCGGCGCCGCG	1114	7 9-97	CGCGGCGCCGCUCAGCACC	128 5	79-97
AD-953677.1	GCGAGUCGGCCCGAGGCCU	1115	95-113	AGGCCUCGGGCCGACUCGC	1286	95-113
AD-953685.1	GCCCGAGGCCUCCGGGGAC	1116	103-121	GUCCCCGGAGGCCUCGGGC	1287	103-121
AD-953693.1	CCUCCGGGGACUGCCGUGC	1117	111-129	GCACGGCAGUCCCCGGAGG	1288	111-129
AD-953701.1	GACUGCCGUGCCGGGCGGG	1118	119-137	CCCGCCCGGCACGGCAGUC	1289	119-137
AD-953709.1	UGCCGGGCGGGAGACCGCC	1119	127-145	GGCGGUCUCCCGCCCGGCA	1290	127-145
AD-953717.1	GGGAGACCGCCAUGGCGAC	1120	135-153	GUCGCCAUGGCGGUCUCCC	1291	135-153
AD-953724.1	CGCCAUGGCGACCCUGGAA	1121	142-160	UUCCAGGGUCGCCAUGGCG	1292	142-160
AD-953732.1	CGACCCUGGAAAAGCUGAU	1122	150-168	AUCAGCUUUUCCAGGGUCG	12 93	150-168
AD-953702.1	ACUGCCGUGCCGGGCGGGA	1123	120-138	UCCCGCCCGGCACGGCAGU	1294	120-138
AD-953710.1	GCCGGGCGGGAGACCGCCA	1124	128-146	UGGCGGUCUCCCGCCCGGC	1295	128-146
AD-953718.1	GGAGACCGCCAUGGCGACC	1125	136-154	GGUCGCCAUGGCGGUCUCC	1296	136-154
AD-953733.1	GACCCUGGAAAAGCUGAUG	1126	151-169	CAUCAGCUUUUCCAGGGUC	1297	151-169
AD-953741.1	AAAAGCUGAUGAAGGCCUU	1127	159-177	AAGGCCUUCAUCAGCUUUU	1298	159-177
AD-953749.1	AUGAAGGCCUUCGAGUCCC	1128	167-185	GGGACUCGAAGGCCUUCAU	1299	167-185
AD-953757.1	CUUCGAGUCCCUCAAGUCC	1129	175-193	GGACUUGAGGGACUCGAAG	1300	175-193
AD-953679.1	GAGUCGGCCCGAGGCCUCC	1130	97-115	GGAGGCCUCGGGCCGACUC	1301	97-115
AD-953687.1	CCGAGGCCUCCGGGGACUG	1131	105-123	CAGUCCCCGGAGGCCUCGG	1302	105-123
AD-953695.1	UCCGGGGACUGCCGUGCCG	1132	113-131	CGGCACGGCAGUCCCCGGA	1303	113-131
AD-953703.1	CUGCCGUGCCGGGCGGGAG	1133	121-139	CUCCCGCCCGGCACGGCAG	1304	121-139
AD-953711.1	CCGGGCGGGAGACCGCCAU	1134	129-147	AUGGCGGUCUCCCGCCCGG	1305	129-147
AD-953719.1	GAGACCGCCAUGGCGACCC	1135	137-155	GGGUCGCCAUGGCGGUCUC	1306	137-155
AD-953726.1	CCAUGGCGACCCUGGAAAA	1136	144-162	UUUUCCAGGGUCGCCAUGG	1307	144-162
AD-953734.1	ACCCUGGAAAAGCUGAUGA	1137	152-170	UCAUCAGCUUUUCCAGGGU	1308	152-170
AD-953742.1	AAAGCUGAUGAAGGCCUUC	1138	160-178	GAAGGCCUUCAUCAGCUUU	13 09	160-178
AD-953750.1	UGAAGGCCUUCGAGUCCCU	1139	168-186	AGGGACUCGAAGGCCUUCA	1310	168-186
AD-953758.1	UUCGAGUCCCUCAAGUCCU	1140	176-194	AGGACUUGAGGGACUCGAA	1311	176-194

- 111 048552

AD-953680.1	AGUCGGCCCGAGGCCUCCG	1141	98-116	CGGAGGCCUCGGGCCGACU	1312	98-116
AD-953688.1	CGAGGCCUCCGGGGACUGC	1142	106-124	GCAGUCCCCGGAGGCCUCG	1313	106-124
AD-953696.1	CCGGGGACUGCCGUGCCGG	1143	114-132	CCGGCACGGCAGUCCCCGG	1314	114-132
AD-953704.1	UGCCGUGCCGGGCGGGAGA	1144	122-140	UCUCCCGCCCGGCACGGCA	1315	122-140
AD-953712.1	CGGGCGGGASACCGCCAUG	1145	130-148	CAUGGCGGUCUCCCGCCCG	1316	130-148
AD-953720.1	AGACCGCCAUGGCGACCCU	1146	138-156	AGGGUCGCCAUGGCGGUCU	1317	138-156
AD-953727.1	CAUGGCGACCCUGGAAAAG	1147	145-163	CUUUUCCAGGGUCGCCAUG	1318	145-163
AD-953735.1	CCCUGGAAAAGCUGAUGAA	1148	153-171	UUCAUCAGCUUUUCCAGGG	1319	153-171
AD-953743.1	AAGCUGAUGAAGGCCUUCG	1149	161-179	CGAAGGCCUUCAUCAGCUU	1320	161-179
AD-953751.1	GAAGGCCUUCGAGUCCCUC	1150	169-187	GAGGGACUCGAAGGCCUUC	1321	169-187
AD-953759.1	UCGAGUCCCUCAAGUCCUU	1151	177-195	AAGGACUUGAGGGACUCGA	1322	177-195
AD-953681.1	GUCGGCCCGAGGCCUCCGG	1152	99-117	CCGGAGGCCUCGGGCCGAC	1323	99-117
AD-953689.1	GAGGCCUCCGGGGACUGCC	1153	107-125	GGCAGUCCCCGGAGGCCUC	1324	107-125
AD-953697.1	CGGGGACUGCCGUGCCGGG	1154	115-133	CCCGGCACGGCAGUCCCCG	1325	115-133
AD-953705.1	GCCGUGCCGGGCGGGAGAC	1155	123-141	GUCUCCCGCCCGGCACGGC	1326	123-141
AD-953713.1	GGGCGGGAGACCGCCAUGG	1156	131-149	CCAUGGCGGUCUCCCGCCC	1327	131-149
AD-953721.1	GACCGCCAUGGCGACCCUG	1157	139-157	CAGGGUCGCCAUGGCGGUC	1328	139-157
AD-953728.1	AUGGCGACCCUGGAAAAGC	1158	146-164	GCUUUUCCAGGGUCGCCAU	1329	146-164
AD-953736.1	CCUGGAAAAGCUGAUGAAG	1159	154-172	CUUCAUCAGCUUUUCCAGG	1330	154-172
AD-953744.1	AGCUGAUGAAGGCCUUCGA	1160	162-180	UCGAAGGCCUUCAUCAGCU	1331	162-180
AD-953752.1	AAGGCCUUCGAGUCCCUCA	1161	170-188	UGAGGGACUCGAAGGCCUU	1332	170-188
AD-953760.1	CGAGUCCCUCAAGUCCUUC	1162	178-196	GAAGGACUUGAGGGACUCG	1333	178-196
AD-953682.1	UCGGCCCGAGGCCUCCGGG	1163	100-118	CCCGGAGGCCUCGGGCCGA	1334	100-118
AD-953690.1	AGGCCUCCGGGGACUGCCG	1164	108-126	CGGCAGUCCCCGGAGGCCU	1335	108-125
AD-953698.1	GGGGACUGCCGUGCCGGGC	1165	116-134	GCCCGGCACGGCAGUCCCC	1336	116-134
AD-953706.1	CCGUGCCGGGCGGGAGACC	1166	124-142	GGUCUCCCGCCCGGCACGG	1337	124-142
AD-953714.1	GGCGGGAGACCGCCAUGGC	1167	132-150	GCCAUGGCGGUCUCCCGCC	1338	132-150
AD-953722.1	ACCGCCAUGGCGACCCUGG	1168	140-158	CCAGGGUCGCCAUGGCGGU	1339	140-158
AD-953729.1	UGGCGACCCUGGAAAAGCU	1169	147-165	AG CUUUU C CAG G GU C G С CA	1340	147-165
AD-953737.1	CUGGAAAAGCUGAUGAAGG	1170	155-173	CCUUCAUCAGCUUUUCCAG	13 41	155-173
AD-953745.1	GCUGAUGAAGGCCUUCGAG	1171	163-181	CUCGAAGGCCUUCAUCAGC	1342	163-181
AD-953753.1	AGGCCUUCGAGUCCCUCAA	1172	171-189	UUGAGGGACUCGAAGGCCU	1343	171-189
AD-953761.1	GAGUCCCUCAAGUCCUUCC	1173	179-197	GGAAGGACUUGAGGGACUC	1344	179-197
AD-953683.1	CGGCCCGAGGCCUCCGGGG	1174	101-119	CCCCGGAGGCCUCGGGCCG	1345	101-119
AD-953691.1	GGCCUCCGGGGACUGCCGU	1175	109-127	ACGGCAGUCCCCGGAGGCC	13 4 6	109-127
AD-953699.1	GGGACUGCCGUGCCGGGCG	1176	117-135	CGCCCGGCACGGCAGUCCC	1347	117-135
AD-9537 07.1	CGUGCCGGGCGGGAGACCG	1177	125-143	CGGUCUCCCGCCCGGCACG	1348	125-143
AD-953715.1	GCGGGAGACCGCCAUGGCG	1178	133-151	CGCCAUGGCGGUCUCCCGC	134 9	133-151
AD-953723.1	CCGCCAUGGCGACCCUGGA	1179	141-159	UCCAGGGUCGCCAUGGCGG	1350	141-159
AD-953730.1	GGCGACCCUGGAAAAGCUG	1180	148-166	CAG CUUUUC CAG G GU C G СC	1351	148-166
AD-953738.1	UGGAAAAGCUGAUGAAGGC	1181	156-174	GCCUUCAUCAGCUUUUCCA	1352	156-174
AD-953746.1	CUGAUGAAGGCCUUCGAGU	1182	164-182	ACUC GAAGG C CUU CAUCAG	13 53	164-182
AD-953754.1	GGCCUUCGAGUCCCUCAAG	1183	172-190	CUUGAGGGACUCGAAGGCC	1354	172-190
AD-953762.1	AGUCCCUCAAGUCCUUCCA	1184	180-198	UGGAAGGACUUGAGGGACU	1355	180-198
AD-953684.1	GGCCCGAGGCCUCCGGGGA	1185	102-120	UCCCCGGAGGCCUCGGGCC	1356	102-120
AD-953692.1	GCCUCCGGGGACUGCCGUG	1186	110-128	CACGGCAGUCCCCGGAGGC	13 57	110-128
AD-953700.1	GGACUGCCGUGCCGGGCGG	1187	118-136	CCGCCCGGCACGGCAGUCC	1358	118-136
AD-953708.1	GUGCCGGGCGGGAGACCGC	1188	126-144	GCGGUCUCCCGCCCGGCAC	1359	125-144
AD-953716.1	CGGGAGACCGCCAUGGCGA	1189	134-152	UCGCCAUGGCGGUCUCCCG	1360	134-152
AD-953731.1	GCGACCCUGGAAAAGCUGA	1190	149-167	UCAGCUUUUCCAGGGUCGC	1361	149-167
AD-953739.1	GGAAAAGCUGAUGAAGGCC	1191	157-175	GGCCUUCAUCAGCUUUUCC	1362	157-175
AD-953747.1	UGAUGAAGGCCUUCGAGUC	1192	165-183	GACU CGAAGGCCUUCAUCA	1363	165-183
AD-953755.1	GCCUUCGAGUCCCUCAAGU	1193	173-191	ACUUGAGGGACUCGAAGGC	1364	173-191

- 112 048552

Модифицированные последовательности смысловых и антисмысловых цепей _________________дцРНК средств к хангтингтину (HTT)_________________

Таблица 6

ID дуплекса	Смысловая последовательность 5’—>3’	SEQ ID NO:	Антисмысл свая последовательность 5' —>3 '	SEQ ID NO:	Последовательность мРНКмишени 5'->3 '	SEQ ID NO:
AD-953583.1	GCUGCCGGGACGGGUCCAAdTdT	1365	UUGGACCCGUCCCGGCAGCdTdT	1536	GCUGCCGGGACGGGUCCAA	1023
AD-953591.1	GACG GGUCCAAGAU GGACGdTdT	1366	CGUCCAUCUUGGACCCGUCdTdT	1537	GACGGGUCCAAGAUGGACG	1024
AD-953599.1	CAAGAUGGACGGCCGCUCAdTdT	1367	UGAGCGGCCGUCCAUCUUGdTdT	1538	CAAGAUGGACGGCCGCUCA	1025
AD-953607.1	ACGGCCGCUCAGGUUCUGCdTdT	1368	GCAGAACCUGAGCGGCCGUdTdT	1539	ACGGCCGCUCAGGUUCUGC	1026
AD-953615.1	UCAGGUUCUGCUUUUACCUdTdT	1369	AGGUAAAAGCAGAACCUGAdTdT	1540	UCAGGUUCUGCUUUUACCU	1027
AD-953623.1	UGCUUUUACCUGCGGCCCAdTdT	1370	UGGGCCGCAGGUAAAAGCAdTdT	1541	UGCUUUUACCUGCGGCCCA	1028
AD-953630.1	ACCUGCGGCCCAGAGCCCCdTdT	1371	GGGGCUCUGGGCCGCAGGUdTdT	1542	ACCUGCGGCCCAGAGCCCC	1029
AD-953638.1	CCCAGAGCCCCAUUCAUUGdTdT	137 2	CAAUGAAUGGGGCUCUGGGdTdT	1543	CCCAGAGCCCCAUUCAUUG	1030
AD-953646.1	CCCAUUCAUUGCCCCGGUGdTdT	1373	CACCGGGGCAAUGAAUGGGdTdT	1544	CCCAUUCAUUGCCCCGGUG	1031
AD-953654.1	UU GC CC CG GU GCUGAG CG GdTdT	1374	CCGCUCAGCACCGGGGCAAdTdT	1545	UUGCCCCGGUGCUGAGCGG	1032
AD-953662.1	GUGCUGAGCGGCGCCGCGAdTdT	137 5	UCGCGGCGCCGCUCAGCACdTdT	1546	GUGCUGAGCGGCGCCGCGA	1033
AD-953670.1	CGGCGCCGCGAGUCGGCCCdTdT	1376	GGGCCGACUCGCGGCGCCGdTdT	1547	CGGCGCCGCGAGUCGGCCC	1034
AD-953584.1	CUGCCGGGACGGGUCCAAGdTdT	1377	CUUGGACCCGUCCCGGCAGdTdT	1548	CUGCCGGGACGGGUCCAAG	1035
AD-953592.1	ACGGGUCCAAGAUGGACGGdTdT	1378	CCGUCCAUCUUGGACCCGUdTdT	1549	ACGGGUCCAAGAUGGACGG	1036
AD-953600.1	AAGAUGGACGGCCGCUCAGdTdT	1379	CUGAGCGGCCGUCCAUCUUdTdT	1550	AAGAUGGACGGCCGCUCAG	1037
AD-953608.1	CGGC CG CU CAGGUU CU GCUdTdT	1380	AGCAGAACCUGAGCGGCCGdTdT	1551	CGGCCGCUCAGGUUCUGCU	1038
AD-953616.1	CAGGUU CU GCUUUUACCUGdTdT	1381	CAGGUAAAAGCAGAACCUGdTdT	1552	CAGGUUCUGCUUUUACCUG	1039
AD-953624.1	GCUUUUACCU G C G G С C CAGdTdT	1382	CUGGGCCGCAGGUAAAAGCdTdT	1553	GCUUUUACCUGCGGCCCAG	1040
AD-953631.1	CCUGCGGCCCAGAGCCCCAdTdT	1383	UGGGGCUCUGGGCCGCAGGdTdT	1554	CCUGCGGCCCAGAGCCCCA	1041
AD-953639.1	CCAGAGCCCCAUUCAUUGCdTdT	1384	GCAAUGAAUGGGGCUCUGGdTdT	1555	CCAGAGCCCCAUUCAUUGC	1042
AD-953647.1	CCAUUCAUUGCCCCGGUGCdTdT	1385	GCACCGGGGCAAUGAAUGGdTdT	1556	CCAUUCAUUGCCCCGGUGC	1043
AD-953655.1	UGCCCCGGUGCUGAGCGGCdTdT	1386	GCCGCUCAGCACCGGGGCAdTdT	1557	UGCCCCGGUGCUGAGCGGC	1044
AD-953663.1	UGCUGAGCGGCGCCGCGAGdTdT	1387	CUCGCGGCGCCGCUCAGCAdTdT	1558	UGCUGAGCGGCGCCGCGAG	1045
AD-953671.1	GGCGCCGCGAGUCGGCCCGdTdT	1388	CGGGCCGACUCGCGGCGCCdTdT	1559	GGCGCCGCGAGUCGGCCCG	1046
AD-953585.1	UGCCGGGACGGGUCCAAGAdTdT	1389	UCUUGGACCCGUCCCGGCAdTdT	1560	UGCCGGGACGGGUCCAAGA	1047
AD-953593.1	CGGGUCCAAGAUGGACGGCdTdT	1390	GCCGUCCAUCUUGGACCCGdTdT	1561	CGGGUCCAAGAUGGACGGC	1048
AD-953601.1	AGAUGGACGGCCGCUCAGGdTdT	1391	CCUGAGCGGCCGUCCAUCUdTdT	1562	AGAUGGACGGCCGCUCAGG	1049
AD-953609.1	GGCCGCUCAGGUUCUGCUUdTdT	1392	AAGCAGAACCUGAGCGGCCdTdT	1563	GGCCGCUCAGGUUCUGCUU	1050
AD-953617.1	AGGUUCUGCUUUUACCUGCdTdT	1393	GCAGGUAAAAGCAGAACCUdTdT	1564	AGGUUCUGCUUUUACCUGC	1051
AD-953625.1	CUUUUACCU G C G G С C CAGAdTdT	1394	UCUGGGCCGCAGGUAAAAGdTdT	1565	CUUUUACCUGCGGCCCAGA	1052
AD-953632.1	CUGCGGCCCAGAGCCCCAUdTdT	1395	AUGGGGCUCUGGGCCGCAGdTdT	1566	CUGCGGCCCAGAGCCCCAU	1053
AD-953640.1	CAGAGC CC CAUU CAUU G CCdTdT	1396	GGCAAUGAAUGGGGCUCUGdTdT	1567	CAGAGCCCCAUUCAUUGCC	1054
AD-953648.1	CAUUCAUUGCCCCGGUGCUdTdT	1397	AGCACCGGGGCAAUGAAUGdTdT	1568	CAUUCAUUGCCCCGGUGCU	1055
AD-953656.1	GCCCCGGUGCUGAGCGGCGdTdT	1398	CGCCGCUCAGCACCGGGGCdTdT	1569	GCCCCGGUGCUGAGCGGCG	1056
AD-953664.1	GCUGAGCGGCGCCGCGAGUdTdT	1399	ACUCGCGGCGCCGCUCAGCdTdT	1570	GCUGAGCGGCGCCGCGAGU	1057
AD-953672.1	GCGCCGCGAGUCGGCCCGAdTdT	1400	UCGGGCCGACUCGCGGCGCdTdT	1571	GCGCCGCGAGUCGGCCCGA	1058
AD-953586.1	GCCGGGACGGGUCCAAGAUdTdT	1401	AUCUUGGACCCGUCCCGGCdTdT	1572	GCCGGGACGGGUCCAAGAU	1059
AD-953594.1	GGGUCCAAGAUGGACGGCCdTdT	1402	GGCCGUCCAUCUUGGACCCdTdT	1573	GGGUCCAAGAUGGACGGCC	1060
AD-953602.1	GAUGGACGGCCGCUCAGGUdTdT	1403	ACCUGAGCGGCCGUCCAUCdTdT	1574	GAUGGACGGCCGCUCAGGU	1061
AD-953610.1	GCCGCUCAGGUUCUGCUUUdTdT	1404	AAAGCAGAACCUGAGCGGCdTdT	1575	GCCGCUCAGGUUCUGCUUU	1062
AD-953618.1	GGUUCUGCUUUUACCUGCGdTdT	1405	CGCAGGUAAAAGCAGAACCdTdT	1576	GGUUCUGCUUUUACCUGCG	1063
AD-953626.1	UUUUAC CU G C G G С C CAGAGdTdT	1406	CUCUGGGCCGCAGGUAAAAdTdT	1577	UUUUACCUGCGGCCCAGAG	1064
AD-953633.1	UGCGGCCCAGAGCCCCAUUdTdT	1407	AAUGGGGCUCUGGGCCGCAdTdT	1578	UGCGGCCCAGAGCCCCAUU	1065
AD-953641.1	AGAGCCCCAUUCAUUGCCCdTdT	1408	GGGCAAUGAAUGGGGCUCUdTdT	1579	AGAGCCCCAUUCAUUGCCC	1066
AD-953649.1	AUUCAUUGСС С C G GU G CU GdTdT	1409	CAGCACCGGGGCAAUGAAUdTdT	1580	AUUCAUUGCCCCGGUGCUG	1067

113 048552

AD-953657.1	CCCCGGUGCUGAGCGGCGCdTdT	1410	GCGCCGCUCAGCACCGGGGdTdT	1581	CCCCGGUGCUGAGCGGCGC	1068
AD-953665.1	CUGAGCGGCGCCGCGAGUCdTdT	1411	GACUCGCGGCGCCGCUCAGdTdT	1582	CUGAGCGGCGCCGCGAGUC	1069
AD-953673.1	CGCCGCGAGUCGGCCCGAGdTdT	1412	CUCGGGCCGACUCGCGGCGdTdT	1583	CGCCGCGAGUCGGCCCGAG	1070
AD-953587.1	CCGGGACGGGUCCAAGAUGdTdT	1413	CAUCUUGGACCCGUCCCGGdTdT	1584	CCGGGACGGGUCCAAGAUG	1071
AD-953595.1	GGUCCAAGAUGGACGGCCGdTdT	1414	CGGCCGUCCAUCUUGGACCdTdT	1585	GGUCCAAGAUGGACGGCCG	1072
AD-953603.1	AU GGAC GG CC GCUCAG GUUdTdT	1415	AACCUGAGCGGCCGUCCAUdTdT	1586	AUGGACGGCCGCUCAGGUU	1073
AD-953611.1	CCGCUCAGGUUCUGCUUUUdTdT	1416	AAAAGCAGAACCUGAGCGGdTdT	1587	CCGCUCAGGUUCUGCUUUU	1074
AD-953619.1	GUUCUGCUUUUACCUGCGGdTdT	1417	CCGCAGGUAAAAGCAGAACdTdT	1588	GUUCUGCUUUUACCUGCGG	1075
AD-953627.1	UUUACCUGCGGCCCAGAGCdTdT	1418	GCUCUGGGCCGCAGGUAAAdTdT	1589	UUUACCUGCGGCCCAGAGC	1076
AD-953634.1	GCGGCCCAGAGCCCCAUUCdTdT	1419	GAAUGGGGCUCUGGGCCGCdTdT	1590	GCGGCCCAGAGCCCCAUUC	1077
AD-953642.1	GAGCCCCAUUCAUUGCCCCdTdT	1420	GGGGCAAUGAAUGGGGCUCdTdT	1591	GAGCCCCAUUCAUUGCCCC	1078
AD-953650.1	UUCAUUGCCCCGGUGCUGAdTdT	1421	UCAGCACCGGGGCAAUGAAdTdT	1592	UUCAUUGCCCCGGUGCUGA	1079
AD-953658.1	CCCGGUGCUGAGCGGCGCCdTdT	1422	GGCGCCGCUCAGCACCGGGdTdT	15 93	CCCGGUGCUGAGCGGCGCC	1080
AD-953666.1	UGAGCGGCGCCGCGAGUCGdTdT	1423	CGACUCGCGGCGCCGCUCAdTdT	1594	UGAGCGGCGCCGCGAGUCG	1081
AD-953674.1	GCCGCGAGUCGGCCCGAGGdTdT	1424	CCUCGGGCCGACUCGCGGCdTdT	1595	GCCGCGAGUCGGCCCGAGG	1082
AD-953588.1	CGGGACGGGUCCAAGAUGGdTdT	1425	CCAUCUUGGACCCGUCCCGdTdT	1596	CGGGACGGGUCCAAGAUGG	1083
AD-953596.1	GUCCAAGAUGGACGGCCGCdTdT	1426	GCGGCCGUCCAUCUUGGACdTdT	1597	GUCCAAGAUGGACGGCCGC	1084
AD-953604.1	UGGACGGCCGCUCAGGUUCdTdT	1427	GAACCUGAGCGGCCGUCCAdTdT	1598	UGGACGGCCGCUCAGGUUC	1085
AD-953612.1	CGCUCAGGUUCUGCUUUUAdTdT	1428	UAAAAGCAGAACCUGAGCGdTdT	1599	CGCUCAGGUUCUGCUUUUA	1086
AD-953620.1	UU CU GCUUUUACCU GO GGCdTdT	1429	GCCGCAGGUAAAAGCAGAAdTdT	1600	UUCUGCUUUUACCUGCGGC	1087
AD-953628.1	UUAC CUGCGGCC CAGAGCCdTdT	1430	GGCUCUGGGCCGCAGGUAAdTdT	1601	UUACCUGCGGCCCAGAGCC	1088
AD-953635.1	CGGCCCAGAGCCCCAUUCAdTdT	1431	UGAAUGGGGCUCUGGGCCGdTdT	1602	CGGCCCAGAGCCCCAUUCA	1089
AD-953643.1	AGCCCCAUUCAUUGCCCCGdTdT	1432	CGGGGCAAUGAAUGGGGCUdTdT	1603	AGCCCCAUUCAUUGCCCCG	1090
AD-953651.1	UCAUUGCCCCGGUGCUGAGdTdT	1433	CUCAGCACCGGGGCAAUGAdTdT	1604	UCAUUGCCCCGGUGCUGAG	1091
AD-953659.1	CCGGUGCUGAGCGGCGCCGdTdT	1434	CGGCGCCGCUCAGCACCGGdTdT	1605	CCGGUGCUGAGCGGCGCCG	1092
AD-953667.1	GAGCGGCGCCGCGAGUCGGdTdT	1435	CCGACUCGCGGCGCCGCUCdTdT	1606	GAGCGGCGCCGCGAGUCGG	1093
AD-953675.1	CCGCGAGUCGGCCCGAGGCdTdT	1436	GCCUCGGGCCGACUCGCGGdTdT	1607	CCGCGAGUCGGCCCGAGGC	1094
AD-953589.1	G G GAC G GGUC CAAGAUGGAdTdT	1437	UC CAUCUU GGAC CC GUCC CdTdT	1608	GGGACGGGUCCAAGAUGGA	1095
AD-953597.1	UC CAAGAU GGAC GGCC GCUdTdT	1438	AGCGGCCGUCCAUCUUGGAdTdT	1609	UCCAAGAUGGACGGCCGCU	1096
AD-953605.1	GGACGGCCGCUCAGGUUCUdTdT	1439	AGAACCUGAGCGGCCGUCCdTdT	1610	GGACGGCCGCUCAGGUUCU	1097
AD-953613.1	GCUCAGGUUCUGCUUUUACdTdT	1440	GUAAAAGCAGAACCUGAGCdTdT	1611	GCUCAGGUUCUGCUUUUAC	1098
AD-953621.1	UCUGCUUUUACCUGCGGCCdTdT	1441	GGCCGCAGGUAAAAGCAGAdTdT	1612	UCUGCUUUUACCUGCGGCC	1099
AD-953629.1	UACCUGCGGCCCAGAGCCCdTdT	1442	GGGCUCUGGGCCGCAGGUAdTdT	1613	UACCUGCGGCCCAGAGCCC	1100
AD-953636.1	GGCCCAGAGCCCCAUUCAUdTdT	144 3	AUGAAUGGGGCUCUGGGCCdTdT	1614	GGCCCAGAGCCCCAUUCAU	1101
AD-953644.1	GCCCCAUUCAUUGCCCCGGdTdT	144 4	CCGGGGCAAUGAAUGGGGCdTdT	1615	GCCCCAUUCAUUGCCCCGG	1102
AD-953652.1	CAUUGCCCCGGUGCUGAGCdTdT	144 5	GCUCAGCACCGGGGCAAUGdTdT	1616	CAUUGCCCCGGUGCUGAGC	1103
AD-953660.1	CGGUGCUGAGCGGCGCCGCdTdT	144 6	GCGGCGCCGCUCAGCACCGdTdT	1617	CGGUGCUGAGCGGCGCCGC	1104
AD-953676.1	CGCGAGUCGGCCCGAGGCCdTdT	1447	GGCCUCGGGCCGACUCGCGdTdT	1618	CGCGAGUCGGCCCGAGGCC	1105
AD-953590.1	GGACGGGUCCAAGAUGGACdTdT	1448	GUCCAUCUUGGACCCGUCCdTdT	1619	GGACGGGUCCAAGAUGGAC	1106
AD-953598.1	CCAAGAUGGACGGCCGCUCdTdT	1449	GAGCGGCCGUCCAUCUUGGdTdT	1620	CCAAGAUGGACGGCCGCUC	1107
AD-953606.1	GACGGCCGCUCAGGUUCUGdTdT	1450	CAGAACCUGAGCGGCCGUCdTdT	1621	GACGGCCGCUCAGGUUCUG	1108
AD-953614.1	CUCAGGUUCUGCUUUUACCdTdT	1451	GGUAAAAG CAGAACCU GAGdTdT	1622	CUCAGGUUCUGCUUUUACC	1109
AD-953622.1	CUGCUUUUACCUGCGGCCCdTdT	1452	GGGCCGCAGGUAAAAGCAGdTdT	1623	CUGCUUUUACCUGCGGCCC	1110
AD-953637.1	GCCCAGAGCCCCAUUCAUUdTdT	1453	AAUGAAUGGGGCUCUGGGCdTdT	1624	GCCCAGAGCCCCAUUCAUU	1111
AD-953645.1	CCCCAUUCAUUGCCCCGGUdTdT	1454	ACCGGGGCAAUGAAUGGGGdTdT	1625	CCCCAUUCAUUGCCCCGGU	1112
AD-953653.1	AUUGCCCCGGUGCUGAGCGdTdT	1455	CGCUCAGCACCGGGGCAAUdTdT	1626	AUUGCCCCGGUGCUGAGCG	1113
AD-953661.1	GGUGCUGAGCGGCGCCGCGdTdT	1456	CGCGGCGCCGCUCAGCACCdTdT	1627	GGUGCUGAGCGGCGCCGCG	1114
AD-953677.1	GCGAGUCGGCCCGAGGCCUdTdT	1457	AGGCCUCGGGCCGACUCGCdTdT	1628	GCGAGUCGGCCCGAGGCCU	1115
AD-953685.1	GCCCGAGGCCUCCGGGGACdTdT	1458	GUCCCCGGAGGCCUCGGGCdTdT	1629	GCCCGAGGCCUCCGGGGAC	1116
AD-953693.1	CCUCCGGGGACUGCCGUGCdTdT	1459	GCACGGCAGUCCCCGGAGGdTdT	1630	CCUCCGGGGACUGCCGUGC	1117
AD-953701.1	GACUGCCGUGCCGGGCGGGdTdT	1460	CCCGCCCGGCACGGCAGUCdTdT	1631	GACUGCCGUGCCGGGCGGG	1118
AD-953709.1	UGCCGGGCGGGAGACCGCCdTdT	1461	GGCGGUCUCCCGCCCGGCAdTdT	1632	UGCCGGGCGGGAGACCGCC	1119
AD-953717.1	GGGAGACCGCCAUGGCGACdTdT	1462	GU CG CCAU GGCGGU CU CC CdTdT	1633	GGGAGACCGCCAUGGCGAC	1120
AD-953724.1	CGCCAUGGCGACCCUGGAAdTdT	1463	UUCCAGGGUCGCCAUGGCGdTdT	1634	CGCCAUGGCGACCCUGGAA	1121
AD-953732.1	CGACCCUGGAAAAGCUGAUdTdT	1464	AUCAGCUUUUCCAGGGUCGdTdT	1635	CGACCCUGGAAAAGCUGAU	1122
AD-953702.1	ACUGCCGUGCCGGGCGGGAdTdT	1465	UCCCGCCCGGCACGGCAGUdTdT	1636	ACUGCCGUGCCGGGCGGGA	1123

114 048552

AD-953710.1	GCCGGGCGGGAGACCGCCAdTdT	1466	UGGCGGUCUCCCGCCCGGCdTdT	1637	GCCGGGCGGGAGACCGCCA	1124
AD-953718.1	GGAGACCGCCAUGGCGACCdTdT	1467	GGUCGCCAUGGCGGUCUCCdTdT	1638	GGAGACCGCCAUGGCGACC	1125
AD-953733.1	GACCCUGGAAAAGCUGAUGdTdT	1468	CAUCAGCUUUUCCAGGGUCdTdT	1639	GACCCUGGAAAAGCUGAUG	1126
AD-953741.1	AAAAG CU GAU GAAG GC CUUdTdT	1469	AAGGCCUUCAUCAGCUUUUdTdT	1640	AAAAGCUGAUGAAGGCCUU	1127
AD-953749.1	AU GAAGGCCUUCGAGUСCCdTdT	1470	GGGACUCGAAGGCCUUCAUdTdT	1641	AUGAAGGCCUUCGAGUCCC	1128
AD-953757.1	CUUCGAGUCCCUCAAGUCCdTdT	1471	GGACUUGAGGGACUCGAAGdTdT	1642	CUUCGAGUCCCUCAAGUCC	1129
AD-953679.1	GAGUCGGCCCGAGGCCUCCdTdT	1472	GGAGGCCUCGGGCCGACUCdTdT	1643	GAGUCGGCCCGAGGCCUCC	1130
AD-953687.1	CCGAGGCCUCCGGGGACUGdTdT	1473	CAGUCCCCGGAGGCCUCGGdTdT	1644	CCGAGGCCUCCGGGGACUG	1131
AD-953695.1	UCCGGGGACUGCCGUGCCGdTdT	1474	CGGCACGGCAGUCCCCGGAdTdT	1645	UCCGGGGACUGCCGUGCCG	1132
AD-953703.1	CUGCCGUGCCGGGCGGGAGdTdT	1475	CUCCCGCCCGGCACGGCAGdTdT	1646	CUGCCGUGCCGGGCGGGAG	1133
AD-953711.1	CCGGGCGGGAGACCGCCAUdTdT	1476	AUGGCGGUCUCCCGCCCGGdTdT	1647	CCGGGCGGGAGACCGCCAU	1134
AD-953719.1	GAGACC GC CAUG GC GACC CdTdT	1477	GGGUCGCCAUGGCGGUCUCdTdT	1648	GAGACCGCCAUGGCGACCC	1135
AD-953726.1	СCAUGGCGACCCUGGAAAAdTdT	1478	UUUUCCAGGGUCGCCAUGGdTdT	1649	CCAUGGCGACCCUGGAAAA	1136
AD-953734.1	AC C CU G GAAAAG CU GAU GAdTdT	1479	UCAUCAGCUUUUCCAGGGUdTdT	1650	AC CCU GGAAAAGCUGAU GA	1137
AD-953742.1	AAAGCUGAUGAAGGCCUUCdTdT	1480	GAAGGCCUUCAUCAGCUUUdTdT	1651	AAAGCUGAUGAAGGCCUUC	1138
AD-953750.1	UGAAGGCCUUCGAGUCCCUdTdT	1481	AGGGACUCGAAGGCCUUCAdTdT	1652	UGAAGGCCUUCGAGUCCCU	1139
AD-953758.1	UUCGAGUCCCUCAAGUCCUdTdT	1482	AGGACUUGAGGGACUCGAAdTdT	1653	UUCGAGUCCCUCAAGUCCU	1140
AD-953680.1	AGUCGGCCCGAGGCCUCCGdTdT	1483	CGGAGGCCUCGGGCCGACUdTdT	1654	AGUCGGCCCGAGGCCUCCG	1141
AD-953688.1	CGAGGCCUCCGGGGACUGCdTdT	1484	GCAGUCCCCGGAGGCCUCGdTdT	1655	CGAGGCCUCCGGGGACUGC	1142
AD-953696.1	CCGGGGACUGCCGUGCCGGdTdT	1485	CCGGCACGGCAGUCCCCGGdTdT	1656	CCGGGGACUGCCGUGCCGG	1143
AD-953704.1	UGCCGUGCCGGGCGGGAGAdTdT	1486	UCUCCCGCCCGGCACGGCAdTdT	1657	UGCCGUGCCGGGCGGGAGA	1144
AD-953712.1	C G G G C G G GAGAC C G С CAU GdTdT	1487	CAUGGCGGUCUCCCGCCCGdTdT	1658	CGGGCGGGAGACCGCCAUG	1145
AD-953720.1	AGACCGCCAUGGCGACCCUdTdT	1488	AGGGUCGCCAUGGCGGUCUdTdT	1659	AGACCGCCAUGGCGACCCU	1146
AD-953727.1	CAUGGCGACCCUGGAAAAGdTdT	1489	CUUUUCCAGGGUCGCCAUGdTdT	1660	CAUGGCGACCCUGGAAAAG	1147
AD-953735.1	СCCUGGAAAAGCUGAUGAAdTdT	1490	UUCAUCAGCUUUUCCAGGGdTdT	1661	СCCUGGAAAAGCUGAUGAA	1148
AD-953743.1	AAGCUGAUGAAGGCCUUCGdTdT	1491	CGAAGGCCUUCAUCAGCUUdTdT	1662	AAGCUGAUGAAGGCCUUCG	1149
AD-953751.1	GAAGGCCUUCGAGUСCCUCdTdT	1492	GAGGGACUCGAAGGCCUUCdTdT	1663	GAAGGCCUUCGAGUCCCUC	1150
AD-953759.1	UCGAGUCCCU CAAGUC CUUdTdT	1493	AAGGACUUGAGGGACUCGAdTdT	1664	UCGAGUCCCUCAAGUCCUU	1151
AD-953681.1	GUCGGCCCGAGGCCUCCGGdTdT	1494	CCGGAGGCCUCGGGCCGACdTdT	1665	GUCGGCCCGAGGCCUCCGG	1152
AD-953689.1	GAGGCCUCCGGGGACUGCCdTdT	1495	GGCAGUCCCCGGAGGCCUCdTdT	1666	GAGGCCUCCGGGGACUGCC	1153
AD-953697.1	CGGGGACUGCCGUGCCGGGdTdT	1496	CCCGGCACGGCAGUCCCCGdTdT	1667	CGGGGACUGCCGUGCCGGG	1154
AD-953705.1	GCCGUGCCGGGCGGGAGACdTdT	1497	GUCUCCCGCCCGGCACGGCdTdT	1668	GCCGUGCCGGGCGGGAGAC	1155
AD-953713.1	GGGCGGGAGACCGCCAUGGdTdT	1498	CCAUGGCGGUCUCCCGCCCdTdT	1669	GGGCGGGAGACCGCCAUGG	1156
AD-953721.1	GACCGCCAUGGCGACCCUGdTdT	1499	CAGGGUCGCCAUGGCGGUCdTdT	1670	GACCGCCAUGGCGACCCUG	1157
AD-953728.1	AU G G C GAC C CU G GAAAAG CdTdT	1500	GCUUUUCCAGGGUCGCCAUdTdT	1671	AUGGCGACCCUGGAAAAGC	1158
AD-953736.1	C CU GGAAAAG CU GAUGAAGdTdT	1501	CUUCAUCAGCUUUUCCAGGdTdT	1672	CCUGGAAAAGCUGAUGAAG	1159
AD-953744.1	AG CU GAU GAAG GC CUU CGAdTdT	1502	UCGAAGGCCUUCAUCAGCUdTdT	1673	AGCUGAUGAAGGCCUUCGA	1160
AD-953752.1	AAGGCCUUCGAGUCCCUCAdTdT	1503	UGAGGGACUCGAAGGCCUUdTdT	1674	AAGGCCUUCGAGUCCCUCA	1161
AD-953760.1	C GAGU С C CU CAAGU CCUU CdTdT	1504	GAAGGACUUGAGGGACUCGdTdT	1675	CGAGUCCCUCAAGUCCUUC	1162
AD-953682.1	UCGGCCCGAGGCCUCCGGGdTdT	1505	CCCGGAGGCCUCGGGCCGAdTdT	1676	UCGGCCCGAGGCCUCCGGG	1163
AD-953690.1	AGGCCUCCGGGGACUGCCGdTdT	1506	CGGCAGUCCCCGGAGGCCUdTdT	1677	AGGCCUCCGGGGACUGCCG	1164
AD-953698.1	GGGGACUGCCGUGCCGGGCdTdT	1507	GCCCGGCACGGCAGUCCCCdTdT	1678	GGGGACUGCCGUGCCGGGC	1165
AD-953706.1	CCGUGCCGGGCGGGAGACCdTdT	1508	GGUCUCCCGCCCGGCACGGdTdT	1679	CCGUGCCGGGCGGGAGACC	1166
AD-953714.1	GGCGGGAGACCGCCAUGGCdTdT	1509	GCCAUGGCGGUCUCCCGCCdTdT	1680	GGCGGGAGACCGCCAUGGC	1167
AD-953722.1	ACCGCCAUGGCGACCCUGGdTdT	1510	CCAGGGUCGCCAUGGCGGUdTdT	1681	ACCGCCAUGGCGACCCUGG	1168
AD-953729.1	UGGCGACCCUGGAAAAGCUdTdT	1511	AGCUUUUCCAGGGUCGCCAdTdT	1682	UGGCGACCCUGGAAAAGCU	1169
AD-953737.1	CU G GAAAAG CU GAU GAAG GdTdT	1512	CCUUCAUCAGCUUUUCCAGdTdT	1683	CUGGAAAAGCUGAUGAAGG	1170
AD-953745.1	GCU GAU GAAG GC CUUC GAGdTdT	1513	CUCGAAGGCCUUCAUCAGCdTdT	1684	GCU GAUGAAGGCCUUC GAG	1171
AD-953753.1	AGGCCUUCGAGUСCCUCAAdTdT	1514	UUGAGGGACUCGAAGGCCUdTdT	1685	AGGCCUUCGAGUCCCUCAA	1172
AD-953761.1	GAGU С C CU CAAGU C CUU C CdTdT	1515	GGAAGGACUUGAGGGACUCdTdT	1686	GAGUCCCUCAAGUCCUUCC	1173
AD-953683.1	CGGCCCGAGGCCUCCGGGGdTdT	1516	CCCCGGAGGCCUCGGGCCGdTdT	1687	CGGCCCGAGGCCUCCGGGG	1174
AD-953691.1	GGCCUCCGGGGACUGCCGUdTdT	1517	ACGGCAGUCCCCGGAGGCCdTdT	1688	GGCCUCCGGGGACUGCCGU	1175
AD-953699.1	GGGACUGCCGUGCCGGGCGdTdT	1518	CGCCCGGCACGGCAGUCCCdTdT	1689	GGGACUGCCGUGCCGGGCG	1176
AD-953707.1	CGUGCCGGGCGGGAGACCGdTdT	1519	CGGUCUCCCGCCCGGCACGdTdT	1690	CGUGCCGGGCGGGAGACCG	1177
AD-953715.1	GCGGGAGACCGCCAUGGCGdTdT	152 0	CGCCAUGGCGGUCUCCCGCdTdT	1691	GCGGGAGACCGCCAUGGCG	1178
AD-953723.1	CCGCCAUGGCGACCCUGGAdTdT	1521	UCCAGGGUCGCCAUGGCGGdTdT	1692	CCGCCAUGGCGACCCUGGA	1179
AD-953730.1	GGCGACCCUGGAAAAGCUGdTdT	1522	CAGCUUUUCCAGGGUCGCCdTdT	1693	GGCGACCCUGGAAAAGCUG	1180
AD-953738.1	UGGAAAAGCUGAUGAAGGCdTdT	1523	GCCUUCAUCAGCUUUUCCAdTdT	1694	UGGAAAAGCUGAUGAAGGC	1181
AD-953746.1	CUGAUGAAGGCCUUCGAGUdTdT	1524	ACUCGAAGGCCUUCAUCAGdTdT	1695	CUGAUGAAGGCCUUCGAGU	1182
AD-953754.1	GGCCUUCGAGUCCCUCAAGdTdT	1525	CUUGAGGGACUCGAAGGCCdTdT	1696	GGCCUUCGAGUCCCUCAAG	1183
AD-9537 62.1	AGUCCCUCAAGUCCUUCCAdTdT	1526	UGGAAGGACUUGAGGGACUdTdT	1697	AGUCCCUCAAGUCCUUCCA	1184
AD-953684.1	GGCCCGAGGCCUCCGGGGAdTdT	1527	UCCCCGGAGGCCUCGGGCCdTdT	1698	GGCCCGAGGCCUCCGGGGA	1185
AD-953692.1	GCCUCCGGGGACUGCCGUGdTdT	1528	CACGGCAGUCCCCGGAGGCdTdT	1699	GCCUCCGGGGACUGCCGUG	1186
AD-953700.1	GGACUGCCGUGCCGGGCGGdTdT	1529	CCGCCCGGCACGGCAGUCCdTdT	1700	GGACUGCCGUGCCGGGCGG	1187
AD-953708.1	GUGCCGGGCGGGAGACCGCdTdT	153 0	GCGGUCUCCCGCCCGGCACdTdT	1701	GUGCCGGGCGGGAGACCGC	1188
AD-953716.1	CGGGAGACCGCCAUGGCGAdTdT	1531	UCGCCAUGGCGGUCUCCCGdTdT	1702	CGGGAGACCGCCAUGGCGA	1189
AD-953731.1	GCGACCCUGGAAAAGCUGAdTdT	1532	UCAGCUUUUCCAGGGUCGCdTdT	1703	GCGACCCUGGAAAAGCUGA	1190
AD-953739.1	GGAAAAGCUGAUGAAG GC CdTdT	1533	GGCCUUCAUCAGCUUUUCCdTdT	1704	GGAAAAGCUGAUGAAGGCC	1191
AD-953747.1	UGAUGAAGGCCUUCGAGUCdTdT	153 4	GACUCGAAGGCCUUCAUCAdTdT	1705	UGAUGAAGGCCUUCGAGUC	1192
AD-953755.1	GCCUUCGAGUCCCUCAAGUdTdT	1535	ACUUGAGGGACUCGAAGGCdTdT	1706	GCCUUCGAGUCCCUCAAGU	1193

115 048552

Таблица 7

Скрининг однократных HTT доз в клетках BE(2)C

	Доза 50 нМ	Доза 10 нМ	Доза 1 нМ	Доза 0,1 нМ
Дуплекс	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD
AD-953583.1	65,73	3, 69	68,52	3,59	81,29	4,52	81,77	7,38
AD-953591.1	58,10	7,40	62,11	6, 03	78,16	9, 19	87,18	7,93
AD-953599.1	57,26	5,59	58, 05	5,65	67,00	6, 55	75,18	7,92
AD-953607.1	76, 53	11,31	78,85	9,00	89, 54	4,07	93,39	7,95
AD-953615.1	76,53	6,30	80,78	4,38	92,95	6,29	106,03	9,52
AD-953623.1	66, 90	7, 69	67,88	6, 90	82,93	8,14	92,69	11,53
AD-953630.1	94,68	3,29	101,89	11,32	104,63	8,08	105,94	3,82
AD-953638.1	42,99	6,32	41,59	3,46	64,62	4,89	73,39	3,32
AD-953646.1	70,95	4,23	66,70	4,72	97,86	8,88	95,46	13,41
AD-953654.1	100,02	6,41	98,76	5,28	101,05	3,32	94,44	9,22
AD-953662.1	58,24	3,55	59,42	4,65	70,38	3,35	81, 97	6,26
AD-953670.1	94,50	6,27	104,75	19,49	101,22	16, 84	98,02	9,61
AD-953584.1	75,92	8, 67	64,59	3,37	83, 74	4,97	83,52	8,34
AD-953592.1	74,32	6, 15	83, 15	3,03	91,25	3, 66	87,69	2,83
AD-953600.1	66, 63	5,56	72, 19	4,32	82,18	7,79	88,40	8,30
AD-953608.1	39,95	1,44	37, 97	2,56	50,35	1,45	59,10	4,86
AD-953616.1	55,54	6, 07	58,76	3,89	66, 92	2,95	82,14	3,85
AD-953624.1	59,50	6, 03	65, 30	8,40	84,89	4,79	99,56	8,34
AD-953631.1	58,38	5,72	65,35	6,45	51, 38	25,23	91,21	10,80
AD-953639.1	61,64	3,35	66,52	8,42	79,18	19, 97	93,20	7,44
AD-953647.1	85,61	6,31	88,65	3,05	106,42	7,45	99,83	6,89
AD-953655.1	104,92	13,38	100,12	4,72	115,45	11,59	102,49	2,83
AD-953663.1	82,13	6, 07	81, 32	3,82	91, 83	1, 33	92,32	8,82
AD-953671.1	100,07	15,43	99, 10	7,82	107,01	9, 34	105,01	12,00
AD-953585.1	68,95	9,55	61,23	3,65	74,87	7,80	81,74	7,20
AD-953593.1	85,35	3,46	97,48	1,55	100,73	13, 93	93, 10	10,76
AD-953601.1	77,13	7,42	84, 97	5,15	89,10	4,71	91,41	9,31
AD-953609.1	46,34	3, 08	47, 10	5,91	51,32	1, 83	64,58	5,59
AD-953617.1	77,35	6, 64	86, 08	6, 66	94,95	9, 83	93, 88	7,96
AD-953625.1	74,64	7,17	81, 66	5,25	78,02	9, 39	95,15	7,25
AD-953632.1	77,51	7,12	89, 57	9,14	90,60	3,10	98,16	23,71
AD-953640.1	83,31	3, 82	89, 18	7,83	102,72	9,30	96, 01	7,82
AD-953648.1	57,67	1, 63	65, 09	6,24	76, 89	8,29	87,91	7,83
AD-953656.1	99,23	7,82	93, 97	6, 04	105,33	7,69	114,77	15,98
AD-953664.1	98,54	7,7 0	99,52	: , 0 9	104,78	10,71	92,95	5,76
AD-953672.1	100,25	12,34	88,22	6, 82	96, 10	5, 13	113,16	16, 49
AD-953586.1	55,47	7,17	51, 83	2,45	70,27	6, 04	85,64	11,03
AD-953594.1	85,85	15, 81	87,47	4,38	98,58	6,57	101,50	8,72
AD-953602.1	41,93	3, 04	47,45	5,33	58,52	8,83	74,66	7,74
AD-953610.1	38,40	3, 08	43,49	5,30	53, 06	6, 83	69, 18	8,59
AD-953618.1	53,81	1,55	55, 94	4,80	76,25	4,38	84,62	4,50
AD-953626.1	132,27	15,59	123,27	12,89	120,22	12,84	107,76	14,81
AD-953633.1	98,35	3, 09	111,46	12,11	109,58	14,76	107,71	14,87
AD-953641.1	75,61	6, 32	86, 93	8,49	86, 57	8,36	89,55	3,27
AD-953649.1	92,18	8,31	97, 93	5,62	97,81	4,37	94,25	5,70
AD-953657.1	69,99	10, 60	85,39	4,71	101,53	6, 78	112,01	13,76
AD-953665.1	97,57	5,24	87,23	8,45	107,27	13,55	95,34	7,96
AD-953673.1	92,01	9, 92	94,45	18,78	111,78	7,01	100,86	12,99
AD-953587.1	68,70	6, 66	61, 13	3,55	74,72	0, 99	75,52	5,19
AD-953595.1	55,25	2,40	59, 95	10,47	73, 01	14,85	83, 12	6,44
AD-953603.1	41,36	4,30	45, 84	6, 02	50, 82	4,36	72,34	5,27

- 116 048552

AD-953611.1	30, 59	6, 97	42,23	5,89	49, 55	3, 33	58, 05	4,27
AD-953619.1	85, 04	6, 60	84,15	2, 66	92,49	6, 64	105,62	13, 92
AD-953627.1	122,45	6,77	121,67	8,15	115,37	10, 37	101,98	3, 81
AD-953634.1	94,74	5, 02	98,17	2,46	94,99	4, 68	103,34	14,41
AD-953642.1	97,38	4,57	101,48	3,54	102,35	5, 46	108,12	7,59
AD-953650.1	87,24	8,42	92,14	4,81	86, 84	5, 30	109,74	5, 84
AD-953658.1	84,73	6, 08	89,05	8,27	97,51	11, 09	98,79	13, 15
AD-953666.1	85,26	5,11	89,22	12,04	102,53	5, 36	100,98	5, 34
AD-953674.1	77,69	11, 54	89,93	11, 06	111,28	16, 28	121,78	24,22
AD-953588.1	61, 12	3,42	52,22	3,21	74,78	6, 36	81, 13	3, 04
AD-953596.1	62,94	11, 35	68,95	5, 19	67,32	6, 16	99,40	12,55
AD-953604.1	55, 03	9, 69	61,31	6,72	73, 83	5, 30	98, 96	6, 64
AD-953612.1	43, 94	3,27	48,39	4,57	52,67	1, 79	58,41	6, 63
AD-953620.1	91,36	14,02	94,64	8, 89	105,50	7,50	99,73	10, 63
AD-953628.1	109,80	6,56	130,58	21,51	110,07	9,27	102,73	8,48
AD-953635.1	65,33	12,81	71,01	5,41	78,77	14,06	102,21	16, 98
AD-953643.1	113,32	10, 85	114,70	7,78	113,65	1, 32	119,32	13, 91
AD-953651.1	92,51	8,51	102,42	11,22	96,93	2, 88	101,02	13,41
AD-953659.1	110,37	6, 31	110,02	7,07	114,25	8, 01	102,65	2,34
AD-953667.1	80, 72	6, 03	82,89	4,05	98,54	5, 69	102,25	17,23
AD-953675.1	92,90	16, 65	83,78	11, 99	105,12	8,40	117,15	13,27
AD-953589.1	36, 03	3, 99	37,09	3, 93	47,90	8, 18	65, 62	8,58
AD-953597.1	84,76	6,85	83,08	5, 17	70,66	15, 70	90, 06	9, 84
AD-953605.1	31,15	1,73	36,82	5,10	41,77	3, 33	62,59	7,87
AD-953613.1	40, 91	2,79	50,41	8,12	57,95	6,23	82,40	11, 89
AD-953621.1	95,71	7,99	107,50	8,86	105,83	6, 97	103,24	10, 64
AD-953629.1	94,99	2,17	99,81	5,71	104,87	13, 34	106,22	15,58
AD-953636.1	34,50	2,03	44,33	6,24	53, 82	3, 03	69, 97	4,61
AD-953644.1	75,18	2,13	84,50	4,58	93, 01	4, 04	102,93	8,86
AD-953652.1	102,12	6, 62	108,95	3, 92	102,50	14,43	102,09	6, 83
AD-953660.1	100,98	4,32	105,70	9, 85	103,96	9, 02	105,07	15, 10
AD-953676.1	97,29	12,62	90,38	6,80	104,26	13, 38	113,36	14,80
AD-953590.1	40,56	6, 67	37,30	8,25	60, 77	5, 55	64,45	11, 54
AD-953598.1	47,12	5,20	48,93	3, 87	66, 94	9, 54	75,49	4,38
AD-953606.1	38,33	3, 00	43,30	2,46	53,37	4, 82	71,51	5,85
AD-953614.1	45,05	3, 95	52,34	5,39	65, 63	4,84	86, 96	7,13
AD-953622.1	84,86	8,26	87,00	6, 92	93, 95	6, 81	91,20	5, 59
AD-953637.1	32, 84	1,10	42,70	7,04	56, 90	8,71	95,38	19, 98
AD-953645.1	47,64	4,52	53,70	5,27	69,42	3,59	92,71	7,28
AD-953653.1	105,41	8,04	111,93	16, 66	102,13	12, 99	106,61	10, 07
AD-953661.1	49,36	2,09	53,43	5,21	67,92	12, 66	101,20	13,79
AD-953677.1	45, 65	3,56	42,77	4,59	57,33	10, 35	77,95	5,43
AD-953685.1	48,42	10,41	46,82	4,11	63,78	7,35	86, 60	11, 82
AD-953693.1	93,50	6,26	89,55	14,61	95, 96	25, 61	98,07	8,42
AD-953701.1	100,99	25, 01	90,05	6, 66	106,35	9,81	99,41	4,05
AD-953709.1	111,06	20, 00	99,36	11,71	107,61	8, 85	111,13	31,48
AD-953717.1	87,09	9, 97	72,85	12,95	90,34	12, 98	102,74	8,46
AD-953724.1	61, 62	2,67	59,42	7,22	72,38	6, 31	97,59	8,53
AD-953732.1	36,91	3,27	36,45	2,72	49,11	4,45	75, 61	9, 88
AD-953740.1	57,47	6,77	55, 67	9,18	78,54	4,76	94,03	7,16
AD-953748.1	41, 94	4,36	34,60	5,45	53,28	4, 89	75,42	7,20
AD-953756.1	26,38	1,58	25,66	2,26	31, 90	4,42	52,80	4,10

- 117 048552

AD-953678.1	39,42	4,37	42,44	2,89	54,37	4,54	70,49	8,50
AD-953686.1	47,73	4,51	49, 18	7,58	63,76	10,38	78,32	18,31
AD-953694.1	78,72	6, 97	85, 82	12,25	97,80	10,27	111,29	11,78
AD-953702.1	101,14	10,57	101,53	10,33	117,42	7,40	105,83	11,09
AD-953710.1	107,38	6, 85	107,87	8,46	112,98	6, 08	115,03	19,01
AD-953718.1	105,19	12,03	102,57	14,87	108,64	7,61	104,65	7,29
AD-953733.1	54,90	6,22	63,24	10,51	70,74	5,85	103,23	2,58
AD-953741.1	53,57	4, 65	56, 02	4,29	81,67	10,58	101,25	13,78
AD-953749.1	82,34	4,62	81, 11	7,23	94, 63	7,27	100,71	11,80
AD-953757.1	31,43	1, 99	38, 04	2,38	42,02	8,56	63, 01	7,88
AD-953679.1	68,32	7,90	73, 96	3,66	75, 85	6, 87	82,08	5,08
AD-953687.1	54,92	7,52	54, 63	7,06	65,52	8,91	83,85	14,01
AD-953695.1	101,51	14,48	95, 01	6,55	104,09	7,93	105,23	12,85
AD-953703.1	85,19	6,51	80,28	4,95	92,69	3,83	103,61	10,67
AD-953711.1	112,96	8,24	109,11	7,12	120,35	12,16	106,85	15,15
AD-953719.1	114,81	12,49	119,99	7,03	113,69	8,85	119,23	9, 37
AD-953726.1	35,11	2,22	31,46	15,34	57,67	6,30	69,34	8,95
AD-953734.1	65,77	6,38	69, 99	3,84	81, 13	3, 99	106,57	11,42
AD-953742.1	58,72	7,50	61, 53	6, 18	80,00	3, 55	119,74	27,68
AD-953750.1	49,32	3,17	51,48	4,12	68,72	6, 03	100,69	9,29
AD-953758.1	44,88	3, 61	44, 90	4,85	63,24	5,71	84,39	11,25
AD-953680.1	74,90	10, 00	75, 77	8,06	83, 61	5,45	86, 00	5,23
AD-953688.1	81,42	6, 03	82,20	12,97	92,96	14,02	95,86	15,69
AD-953696.1	72,19	7,93	67, 92	6,92	94,23	6,09	104,55	13,60
AD-953704.1	61,45	5, 62	57, 14	12,13	83,24	6,56	95,70	13,67
AD-953712.1	91,32	22,75	93, 92	23,35	103,07	5, 72	115,58	24,96
AD-953720.1	49,31	2,84	54,74	6,31	73,48	3, 04	104,52	14, 03
AD-953727.1	45,24	3, 13	49,26	0,69	71,27	8, 02	99,78	13, 10
AD-953735.1	31,95	3, 33	40, 15	0,28	57,09	5,22	67,75	11,15
AD-953743.1	78,37	2,03	85,25	4,14	108,96	9, 61	117,13	18, 52
AD-953751.1	69,59	6, 18	79, 91	15,30	91,65	8,73	111,31	15, 81
AD-953759.1	32,77	2,20	36,29	3,15	46,58	3, 68	63,10	0, 91
AD-953681.1	63,72	8,96	62,53	10,90	69,20	7,75	73,85	14,26
AD-953689.1	84,37	9, 37	89,59	8,90	87,64	6, 11	94,10	8, 40
AD-953697.1	68,67	6,28	70,47	3,84	93,16	11,56	87,50	27,30
AD-953705.1	76,26	9,26	82,71	9,78	101,83	5,76	113,88	25, 71
AD-953713.1	72,81	6,33	122,98	18,47	121,70	6, 11	126,85	17,30
AD-953721.1	60,09	9, 07	61, 94	6,28	83,99	7,06	113,53	27,30
AD-953728.1	95,99	7,09	108,81	4,05	105,69	2, 61	114,43	15, 15
AD-953736.1	43,65	2,02	52,40	3,01	64,42	5, 17	107,14	11, 36
AD-953744.1	34,38	1,85	38,20	1,43	52,26	2, 92	87,44	11, 10
AD-953752.1	39,11	3,78	42,14	3,86	55,97	4,34	65,34	13, 30
AD-953760.1	39,56	5, 60	48,26	1,06	57,17	2, 95	69,88	14,70
AD-953682.1	72,92	6,13	77,05	5,65	64,24	10, 41	68,65	12, 16
AD-953690.1	56, 69	5, 84	63,32	3,95	69,67	3, 82	87,15	7, 13
AD-953698.1	84,41	5, 61	93,42	7,30	100,01	7,77	108,17	23, 60
AD-953706.1	79,57	29,33	101,33	7,52	109,13	5, 67	95,20	13,29
AD-953714.1	111,33	25, 98	125,62	15,31	121,04	5, 09	121,24	16, 17
AD-953722.1	93,22	15,35	99, 91	7,15	108,30	8, 00	119,11	13, 70
AD-953729.1	42,66	6, 10	48,25	6, 35	69,79	3, 86	81,80	40, 67
AD-953737.1	86, 74	4,91	92,04	8,22	106,08	8,22	112,46	14, 11
AD-953745.1	45,37	6, 06	51, 60	3,18	72,29	6, 94	101,78	13, 92

- 118 048552

AD-953753.1	43,19	1,55	48,00	4,80	52,93	1, 12	68,38	8,85
AD-953761.1	39,17	3, 62	48,79	4,14	67,01	4,98	107,76	31,81
AD-953683.1	54,19	11, 40	55,49	9,00	47,23	9, 63	50,48	20,26
AD-953691.1	51, 35	3,73	52,28	5,39	56,24	0, 80	75,71	12,94
AD-953699.1	64,00	6,71	70, 30	2,19	77,97	8,78	76,70	4,51
AD-953707.1	82,64	4,93	99, 12	4,80	93,51	14,02	103,34	13,49
AD-953715.1	67,17	5, 00	74, 93	8,83	89,71	4,29	107,26	12,67
AD-953723.1	53,25	5,	57,01	4,45	60, 65	5, 16	72,75	16, 34
AD-953730.1	41,03	3,52	48,59	3,57	57,66	2,68	85,34	8,56
AD-953738.1	88,72	13, 13	100,11	3,39	112,47	11, 06	111,34	12,58
AD-953746.1	40,09	4,99	42,65	2,74	56,37	4,56	80,77	15,66
AD-953754.1	56,31	8,93	60,39	6, 69	74,84	4,85	88,46	30,20
AD-953762.1	32,45	1,33	39,24	2,29	45,27	4,18	63,80	2,81
AD-953684.1	33,34	3, 17	33,75	3,02	36,55	4,48	65, 44	4,73
AD-953692.1	36, 65	6,50	37,31	4,94	43, 81	6, 87	49, 97	13,15
AD-953700.1	58,41	8,15	79,31	15,47	81,12	8,60	75, 62	22,12
AD-953708.1	88,19	10, 97	104,34	10,02	89,15	12,84	95,41	18,93
AD-953716.1	65,20	4,34	69,54	15,10	84,30	10,53	98,17	23,29
AD-953731.1	41,68	2,39	46,72	5,76	55, 67	1, 61	78,17	10,58
AD-953739.1	67,29	5, 08	75, 80	4,41	84,19	5, 33	85,46	21,86
AD-953747.1	39,12	1,33	48,43	3,51	71, 76	8,07	84,11	5, 65
AD-953755.1	34,37	1,72	43, 66	1,92	40,70	4,34	56,45	12,42

Таблица 8

Немодифицированные последовательности смысловых и антисмысловых ____________цепей дцРНК средств к хангтингтину (HTT)_______________________

ID дуплекса	Смысловая п ослeдовательность 5'—>3'	SEQ ID NO:	Диапазон в NM 002111.В	Адаиемисловая последовательность 5 ' —>3 '	SEQ ID NO:	Диапазон в NM 002111.8
AD-953857.1	U СAUAAUСACAUUС GUUUGUА	1707	4405-4425	UACAAAC GAAU GU GAUU AU GAAU	1867	4403-4425
AD-953865.1	UU CAGUUACG GGUUAAUUACA	1708	4518-4538	UGUAAUUAACCCGUAACUGAACC	1868	4516-4538
AD-953873.1	ACUGUCUCGACAGAUAGCUGA	1709	4966-4986	UCAGCUAUCUGUCGAGACAGUCG	1869	4964-4986
AD-953881.1	UUACGGAGUAUGUUCGUCACA	1710	5108-5128	UGUGACGAACAUACUCCGUAAAA	1870	5106-5128
AD-9538 89.1	GCAACAUACUUUCUAUUGCCA	187	5452-5472	UGG CAAUAGAAAGUAUGUUGCUG	1871	5450-5472
AD-953897.1	ACUCCGAGCACUUAACGUGGA	1711	5886-5906	UCCACGUUAAGUGCUCGGAGUCA	1872	5884-5906
AD-953904.1	G CAAUU CAGU CU С GUU GU GAA	1712	6017-6037	UUCACAACGAGACUGAAUU GC CU	1873	6015-6037
AD-953912.1	UGCCUUCAUGAUGAACUCGGA	1713	6547-6567	UCC GAGUUCAUCAUGAAGGCAUU	1874	6545-6567
AD-953920.1	CAACAG CUACACAC GU GU GСА	1714	7366-7396	U GCACAC GU GU GUAG CU GUUGAC	1875	7364-7386
AD-953928.1	GACGCUGACAGAACUGCGAAA	1715	8317-8337	UUUCGCAGUUCUGUCAGCGUCAC	187 6	8315-8337
AD-953936.1	CU GACUU GUUUAC GAAAUGUА	1716	9539-9559	UACAUUUCGUAAACAAGUCAGCA	1877	9537-9559
AD-9538 58.1	AUCACAUUCGUUUGUUUGAAA	1717	4410-4430	UUUCAAACAAACGAAUGUGAUUA	1878	4408-4430
AD-9538 66.1	CAGUUACGGGUUAAUUACUGА	1718	4520-4540	UCAGUAAUUAACCCGUAACUGAA	187 9	4518-4540
AD-953874.1	AAGCCCUUGGAGUGUUAAAUA	1719	5037-5057	UAU UUAACACU CCAAGGGCUU CA	1880	5035-5057
AD-953882.1	UCUGAUUUCCCAGUCAACUGA	1720	5197-5217	UCAGUUGACUGGGAAAUCAGAAC	1881	5195-5217
AD-953890.1	AUCUUCAAGUCUGGAAUGUUA	1721	5507-5527	UAACAUUCCAGACUUGAAGAU GU	1882	5505-5527
AD-953898.1	AUССAG GСAAUU CAGU CU С GА	1722	6011-6031	UCGAGACUGAAUUGCCUGGAUGA	1883	6009-6031
AD-953905.1	AUGGUCGACAUCCUUGCUUGA	1723	6170-6190	UCAAGCAAGGAUGUCGACCAUGC	1884	6168-6190
AD-953913.1	CUUCAUGAUGAACUCGGAGUA	1724	6550-6570	UACUCCGAGUUCAUCAUGAAGGC	1885	6548-6570
AD-953921.1	GACCAGU С GUACUСAGUUUGA	1725	7525-7545	UCAAACUGAGUACGACUGGUCCA	1886	7523-7545
AD-953929.1	ACGCUGACAGAACUGCGAAGA	1726	8318-8338	UCUUCGCAGUUCUGUCAGCGUCA	1887	8316-8338
AD-953937.1	U GACUU GUUUACGAAAUGUСА	1727	9540-9560	UGACAUUUCGUAAACAAGUCAGC	1888	9538-9560
AD-953859.1	UGUUUGAACCUCUUGUUAUAA	127	4422-4442	UUAUAACAAGAGGUU CAAACAAA	328	4420-4442
AD-953867.1	UCAGAUCAGGUGUUUAUUGGA	1728	4550-4570	UCCAAUAAACACCUGAUCUGAAU	1889	4548-4570
AD-953875.1	GCCCUUGGAGUGUUAAAUACA	1729	5039-5059	UGUAUUUAACACUCCAAGGGCUU	1890	5037-5059
AD-953883.1	AAGAUAUUGUUCUUUCUCGUA	113	5217-5237	UAC GAGAAAGAACAAUAUCUU CA	314	5215-5237
AD-953891.1	UCAAGUCUGGAAUGUUCCGGA	1730	5511-5531	UCC GGAACAUUCCAGACUUGAAG	1891	5509-5531
AD-953899.1	UCCAGGCAAUUCAGUCUCGUA	1731	6012-6032	UACGAGACUGAAUUGCCUGGAUG	1892	6010-6032
AD-953906.1	GUCGACAUCCUUGCUUGUCGA	1732	6173-6193	UCGACAAGCAAGGAUGUCGAC CA	1893	6171-6193
AD-953914.1	CUGCUAGCUCCAUGCUUAAGA	1733	6581-6601	UCUUAAGCAUGGAGCUAGCAG GC	1894	6579-6601
AD-953922.1	ACCAGU CGUACUCAGUUU GAA	1734	7526-7546	UUCAAACUGAGUACGACUGGU CC	1895	7524-7546
AD-953930.1	GAAAGGAGAAAGUCAGUCCGA	1735	8937-8957	UCGGACUGACUUUCUCCUUUCCU	1896	8935-8957
AD-953938.1	UAAC GUAACUCUUUCUAUGCA	1736	10173-10193	UGCAUAGAAAGAGUUAC GUUAAA	1897	10171-10193
AD-953860.1	GUUU GAAC CU CUUGUUAUAAA	123	4423-4443	UUUAUAACAAGAGGUUCAAACAA	324	4421-4443
AD-953868.1	UU GG CUUU GUAUUGAAACAGA	1737	4566-4586	UCUGUUUCAAUACAAAGCCAAUA	1898	4564-4586

119 048552

AD-953876.1	UAGACAUGCUUUUACGGAGUA	1738	5097-5117	UACUCCGUAAAAGCAUGUCUACC	1899	5095-5117
AD-953884.1	GAUAUUGUUCUUUCUCGUAUA	1739	5219-5239	UAUAC GAGAAAGAACAAUAUCUU	1900	5217-5239
AD-953892.1	CAAGUCUGGAAUGUUCCGGAA	1740	5512-5532	UUCCGGAACAUUCCAGACUUGAA	1901	5510-5532
AD-953900.1	CCAGGCAAUUCAGUCUCGUUA	1741	6013-6033	UAACGAGACUGAAUUGC CU GGAU	1902	6011-6033
AD-953907.1	CAUGCAAGACUCACUUAGUCA	1742	6349-6369	UGACUAAGU GAGU CUUG CAUG GU	1903	6347-6369
AD-953915.1	UGCUAGCUCCAUGCUUAAGCA	1743	6582-6602	U GCUUAAGCAU GGAG CUAG CAGG	1904	6580-6602
AD-953923.1	CCAGUCGUACUCAGUUUGAAA	1744	7527-7547	UUUCAAACUGAGUACGACUGGUC	1905	7525-7547
AD-953931.1	AGAACUUCAGACCCUAAUCCA	1745	8960-8980	UGGAUUAGG GU CU GAAGUU CUAC	1906	8958-8980
AD-953939.1	UCUAUGCCCGUGUAAAGUAUA	1746	10186-10206	UAUACUUUACACGGGCAUAGAAA	1907	10184-10206
AD-953861.1	UUUGAACCUCUUGUUAUAAAA	122	4424-4444	UUUUAUAACAAGAGGUU CAAACA	323	4422-4444
AD-953869.1	UUAUGAACGCUAUCAUUCAAA	1747	4666-4686	UUU GAAU GAUAGC GUUCAUAAGA	1908	4664-4686
AD-953877.1	ACAUGCUUUUACGGAGUAUGA	1748	5100-5120	U CAUACU CC GUAAAAGCAU GU CU	1909	5098-5120
AD-953885.1	UUGUUCUUUCUCGUAUUCAGA	1749	5223-5243	U CU GAAUAC GAGAAAGAACAAUA	1910	5221-5243
AD-953893.1	AG CACAAAGUUACUUAGU CCA	1750	5744-5764	U GGACUAAGUAACUUUGUG CU GG	1911	5742-5764
AD-953901.1	CAGGCAAUUCAGUCUCGUUGA	1751	6014-6034	UQAACGAGACUGAAUUGCCUGGA	1912	6012-6034
AD-953908.1	AUGCAAGACUCACUUAGUCCA	1752	6350-6370	U GGACUAAGUGAGUCUU GCAU GG	1913	6348-6370
AD-953916.1	ACUGGAGCAAGUUGAAUGAUA	1753	6753-6773	UAU CAUU CAACUUGCUC CAGUAG	1914	6751-6773
AD-953924.1	CAGU CGUACU CAGUUU GAAGA	120	7528-7548	UCUUCAAACUGAGUACGACUGGU	321	7526-7548
AD-953932.1	UCAUGAACAAAGUCAUCGGAA	1754	9129-9149	UUCCGAU GACUUU GUUCAU GAUG	1915	9127-9149
AD-953940.1	CUAUGCCCGUGUAAAGUAUGA	1755	10187-10207	UCAUACUUUACAC GG GCAUAGAA	1916	10185-10207
AD-953862.1	AAGCUUUAAAACAGUACACGA	1756	4443-4463	UCGUGUACUGUUUUAAAGCUUUU	1917	4441-4463
AD-953870.1	AAC G CUAUCAUUCAAAACAGA	1757	4671-4691	UCU GUUUUGAAUGAUAGCGUUCA	1918	4669-4691
AD-953878.1	CUUUUACGGAGUAUGUUCGUA	1758	5105-5125	UAC GAACAUACUC CGUAAAAG CA	1919	5103-5125
AD-953886.1	UGUUCUUUCUCGUAUUCAGGA	125	5224-5244	UCCUGAAUACGAGAAAGAACAAU	326	5222-5244
AD-953894.1	AGAGGAGGAUUCUGACUUGGA	1759	5779-5799	UCCAAGUCAGAAUCCUCCUCUUC	1920	5777-5799
AD-953902.1	AGGCAAUUCAGUCUCGUUGUA	1760	6015-6035	UACAACGAGACUGAAUUGC CU GG	1921	6013-6035
AD-953909.1	CACUGGAAACAGUGAGUCCGA	1761	6417-6437	UCGGACUCACUGUUUCCAGUGAC	1922	6415-6437
AD-953917.1	UGUCAACAGCUACACACGUGA	1762	7363-7383	UCACGUGUGUAGCUGUUGACAAG	1923	7361-7383
AD-953925.1	AAGCUGAGCAUUAUCAGAGGA	1763	7787-7807	UCCUCUGAUAAUGCUCAGCUUCC	1924	7785-7807
AD-953933.1	CGGCUGCUGACUUGUUUACGA	1764	9533-9553	UCGUAAACAAGUCAGCAGCCGGU	1925	9531-9553
AD-953941.1	CCGCUGACAUUUCCGUUGUAA	1765	10311-10331	UUACAACGGAAAUGUCAGCGGGU	1926	10309-10331
AD-953863.1	AG CU G GUUCAGUUAC G GGUUA	1766	4512-4532	UAACCCGUAACUGAACCAGCU GC	1927	4510-4532
AD-953871.1	GU G GAAG C GACU GU CU CGACA	1767	4957-4977	UGUCGAGACAGUCGCUUCCACUU	1928	4955-4977
AD-953879.1	UUUUAC G GAGUAU GUU C GU CA	1768	5106-5126	UGACGAACAUACUCCGUAAAAGC	1929	5104-5126
AD-953887.1	AUUUU CAAG GUUU CUAUUACA	137	5368-5388	UGUAAUAGAAACCUUGAAAAUGU	338	5366-5388
AD-953895.1	CAAUAGAGAAAUAGUACGAAA	1769	5818-5838	UUUCGUACUAUUUCUCUAUUGCA	1930	5816-5838
AD-953903.1	GGCAAUUCAGUCUCGUUGUGA	1770	6016-6036	UCACAACGAGACUGAAUUGCCUG	1931	6014-6036
AD-953910.1	AG CU G GU GAAU C G GAUUC CUA	1771	6513-6533	UAGGAAUCCGAUUCACCAGCUCU	1932	6511-6533
AD-953918.1	GU CAACAG CUACACACGU GUA	1772	7364-7384	UACACGUGUGUAGCUGUUGACAA	1933	7362-7384
AD-953926.1	UUGAGCUGAUGUAUGUGACGA	1773	8301-8321	UCGUCACAUACAUCAGCUCAAAC	1934	8299-8321
AD-953934.1	G G CU G CU GACUUGUUUAC GAA	1774	9534-9554	UUCGUAAACAAGUCAGCAGCCGG	1935	9532-9554
AD-953864.1	GUUCAGUUACGGGUUAAUUAA	1775	4517-4537	UUAAUUAACCCGUAACUGAACCA	1936	4515-4537
AD-953872.1	GACU GU CU C GACAGAUAG CUA	1776	4965-4985	UAGCUAUCUGUCGAGACAGUCGC	1937	4963-4985
AD-953880.1	UUUACGGAGUAUGUUCGUCAA	1777	5107-5127	UUGACGAACAUACUCCGUAAAAG	1938	5105-5127
AD-953888.1	AAGGUUUCUAUUACAACUGGA	1778	5374-5394	UCCAGUUGUAAUAGAAACCUU GA	1939	5372-5394
AD-953896.1	GACUCCGAGCACUUAACGUGA	1779	5885-5905	UCACGUUAAGUGCUCGGAGUCAU	1940	5883-5905
AD-953911.1	GCUGGUGAAUCGGAUUCCUGA	1780	6514-6534	UCAGGAAUCCGAUUCACCAGCUC	1941	6512-6534
AD-953919.1	UCAACAGCUACACACGUGUGA	1781	7365-7385	UCACACGUGUGUAGCUGUUGACA	1942	7363-7385
AD-953927.1	GAG CU GAU GUAU GU GACG CUA	1782	8303-8323	UAGCGUCACAUACAUCAGCUCAA	1943	8301-8323
AD-953935.1	CU G CU GACUU GUUUAC GAAAA	1783	9536-9556	UUUUCGUAAACAAGUCAGCAGCC	1944	9534-9556
AD-953763.1	AGCUACCAAGAAAGACCGUGA	1784	430-450	UCACGGUCUUUCUUGGUAGCUGA	1945	428-450
AD-953771.1	AUU CUAAU CUU C CAAG GUUAA	1785	630-650	UUAACCUUGGAAGAUUAGAAUCC	1946	628-650
AD-953779.1	AG GUUUAU GAACU GAC GUUAA	1786	1218-1238	UUAACGUCAGUUCAUAAACCUGG	1947	1216-1238
AD-9537 87.1	AGUAUU GU G GAACUUAUAGCA	1787	1406-1426	UGCUAUAAGUUCCACAAUACUCC	1948	1404-1426

120 048552

AD-953795.1	GACUCUGAAUCGAGAUCGGAA	1788	1511-1531	UUC CGAUCU CGAUUCAGAGUCAU	1949	1509-1531
AD-953803.1	ACAG CAGUGUUGAUAAAUUUA	1789	2073-2093	UAAAUUUAU CAACACUGCUGU CA	1950	2071-2093
AD-953810.1	CGCCUUUUAUCUGCUUCGUUA	1790	2207-2227	UAACGAAGCAGAUAAAAGGCG GA	1951	2205-2227
AD-953818.1	CUGAGGAACAGUUCCUAUUGA	1791	2717-2737	UCAAUAGGAACUGUUCCUCAGAG	1952	2715-2737
AD-953834.1	UAGGAAGAGCUGUACCGUUGA	1792	3325-3345	UCAAC GGUACAGCUCUU CCUAGA	1953	3323-3345
AD-953842.1	UUCUCUAAGUCCCAUCCGACA	1793	3679-3699	U GU CG GAUG GGACUUAGAGAAGG	1954	3677-3699
AD-953764.1	CUACCAAGAAAGACCGUGUGA	1794	432-452	U CACACG GU CUUU CUUGGUAG CU	1955	430-452
AD-953772.1	UUCCAAGGUUACAGCUCGAGA	1795	639-659	UCUCGAGCUGUAACCUUGGAAGA	1956	637-659
AD-953780.1	GGUUUAUGAACUGACGUUACA	1796	1219-1239	UGUAACGUCAGUUCAUAAACCUG	1957	1217-1239
AD-953788.1	GUAUUGUGGAACUUAUAGCUA	1797	1407-1427	UAG CUAUAAGUUC CACAAUACUC	1958	1405-1427
AD-953796.1	ACUCUGAAUCGAGAUCGGAUA	1798	1512-1532	UAU CC GAUCUC GAUUCAGAGU CA	1959	1510-1532
AD-953804.1	UGAUAAAUUUGUGUUGAGAGA	1799	2083-2103	U CU CU CAACACAAAUUUAU CAAC	1960	2081-2103
AD-953811.1	UCUAUAAAGUUCCUCUUGACA	181	2352-2372	UGUCAAGAGGAACUUUAUAGAGU	382	2350-2372
AD-953819.1	UGAGGAACAGUUCCUAUUGGA	1800	2718-2738	U CCAAUAGGAACU GUUCCU CAGA	1961	2716-2738
AD-953827.1	UCUCCGUCAGCACAAUAACCA	1801	3075-3095	UGGUUAUUGUGCUGACGGAGAAA	1962	3073-3095
AD-953835.1	AGGAAGAGCUGUACCGUUGGA	1802	3326-3346	UCCAACG GUACAG CU CUUCCUAG	1963	3324-3346
AD-953843.1	GAGAACAAGCAUCUGUACCGA	1803	3723-3743	UCGGUACAGAUGCUUGUUCUCCU	1964	3721-3743
AD-953851.1	GAGUGUCACAAAGAACCGUGA	1804	4369-4389	UCACGGUUCUUUGUGACACUCGU	1965	4367-4389
AD-953765.1	AAUCAUUGUCUGACAAUAUGA	1805	452-472	UCAUAUU GU CAGACAAU GAUU CA	1966	450-472
AD-953773.1	UCCAAGGUUACAGCUCGAGCA	1806	640-660	U GCUC GAGCUGUAAC CUUG GAAG	1967	638-660
AD-953781.1	UUUAUGAACUGACGUUACAUA	1807	1221-1241	UAUGUAACGUCAGUUCAUAAACC	1968	1219-1241
AD-953789.1	UAUUGUGGAACUUAUAGCUGA	1808	1408-1428	U CAGCUAUAAGUU CCACAAUACU	1969	1406-1428
AD-953797.1	CUCUGAAUCGAGAUCGGAUGA	1809	1513-1533	UCAUCCGAUCU CGAUUCAGAGUC	1970	1511-1533
AD-953805.1	AGAUGAAGCUACUGAACCGGA	1810	2101-2121	UCC GGUUCAGUAG CUUCAUCU CU	1971	2099-2121
AD-953812.1	CAUCUUGAACUACAUCGAUCA	1811	2407-2427	UGAUCGAUGUAGUUCAAGAUGUC	1972	2405-2427
AD-953828.1	UCCGUCAGCACAAUAACCAGA	1812	3077-3097	UCUGGUUAUUGUGCUGACGGAGA	1973	3075-3097
AD-953836.1	GGAAGAGCUGUACCGUUGGGA	1813	3327-3347	UCC CAAC GGUACAGCUCUU CCUA	1974	3325-3347
AD-953852.1	UGUCACAAAGAACCGUGCAGA	1814	4372-4392	UCUGCACGGUUCUUUGUGACACU	197 5	4370-4392
AD-953766.1	CAUU GU CU GACAAUAU GU GAA	119	455-475	UUCACAUAUUGUCAGACAAUGAU	1976	453-475
AD-953774.1	CU GUU С С CAAAAUUAUGGCUA	1815	843-863	UAGCCAUAAUUUUGGGAACAGCU	1977	841-863
AD-953782.1	CAG CAC CAAGAC CACAAU GUA	1816	1247-1267	UACAUUGUGGUCUUGGUGCUGUG	1978	1245-1267
AD-953790.1	AUU GU G GAACUUAUAGCU GGA	1817	1409-1429	UCCAGCUAUAAGUUCCACAAUAC	1979	1407-1429
AD-953798.1	UU CU GAAAUU GU GUUAGACGA	1818	1885-1905	UCGUCUAACACAAUUUCAGAACU	1980	1883-1905
AD-953806.1	CCUCUUGUCCAUUGUGUCCGA	1819	2189-2209	UCGGACACAAUGGACAAGAGGUG	1981	2187-2209
AD-953813.1	CUUGAACUACAUCGAUCAUGA	1820	2410-2430	UCAUGAUCGAUGUAGUUCAAGAU	1982	2408-2430
AD-953821.1	AAGAAC GAGU GCUCAAUAAUA	1821	2862-2882	UAUUAUUGAGCACUCGUUCUUGC	1983	2860-2882
AD-953829.1	AACCUUUCAAGAGUUAUUGCA	1822	3152-3172	UGCAAUAACUCUUGAAAGGUUAU	1984	3150-3172
AD-953837.1	GU CAG CUUG GUU CC CAUU GGA	1823	3376-3396	UCCAAUGGGAACCAAGCUGACGA	1985	3374-3396
AD-953845.1	CCUGAAAUCCUGCUUUAGUCA	1824	4039-4059	UGACUAAAGCAGGAUUUCAGGUA	1986	4037-4059
AD-953853.1	UAAGAAUGCUAUUCAUAAUCA	1825	4393-4413	UGAUUAUGAAUAGCAUUCUUAUC	1987	4391-4413
AD-953767.1	AAUGCCUCAACAAAGUUAUCA	1826	597-617	UGAUAACUUUGUUGAGGCAUUCG	1988	595-617
AD-953775.1	AGGCCUUCAUAGCGAACCUGA	1827	909-929	UCAGGUUCGCUAUGAAGGCCUUU	1989	907-929
AD-953783.1	G CAC CAAGAC CACAAU GUU GA	1828	1249-1269	UCAACAUUGUGGUCUUGGUGCUG	1990	1247-1269
AD-953791.1	U G GAGGAU GACU CU GAAU CGA	1829	1503-1523	UCGAUUCAGAGUCAUCCUCCAAG	1991	1501-1523
AD-953799.1	UCUGAAAUUGUGUUAGACGGA	1830	1886-1906	UCCGUCUAACACAAUUUCAGAAC	1992	1884-1906
AD-953807.1	CUCUUGUCCAUUGUGUCCGCA	1831	2190-2210	UGCGGACACAAUGGACAAGAGGU	1993	2188-2210
AD-953822.1	GAGUGCUCAAUAAUGUUGUCA	1832	2868-2888	UGACAACAUUAUUGAGCACUCGU	1994	2866-2888
AD-953830.1	AGUUU G CAUUUG GAGUUUAGA	1833	3262-3282	UCUAAACUCCAAAUGCAAACUGG	1995	3260-3282
AD-953838.1	AGCUUGGUUCCCAUUGGAUCA	1834	3379-3399	UGAUCCAAUGGGAACCAAGCUGA	1996	3377-3399
AD-953846.1	CUGAAAUCCUGCUUUAGUCGA	1835	4040-4060	UCGACUAAAGCAGGAUUUCAGGU	1997	4038-4060
AD-953854.1	AGAAU GCUAUU CAUAAUCACA	115	4395-4415	UGUGAUUAUGAAUAGCAUUCUUA	1998	4393-4415
AD-953768.1	UUAUCAAAGCUUUGAUGGAUA	1836	612-632	UAUCCAUCAAAGCUUUGAUAACU	1999	610-632
AD-953776.1	CUCUGCUGAUUCUUGGCGUGA	1837	1074-1094	UCACGCCAAGAAUCAGCAGAGUG	2000	1072-1094
AD-953784.1	CAC CAAGAC CACAAUGUU GUA	1838	1250-1270	UACAACAUUGUGGUCUUGGUGCU	2001	1248-1270

- 121 048552

AD-953792.1	GAGGAU GACU CU GAAU CGAGA	1839	1505-1525	UCUCGAUUCAGAGUCAUCCUCCA	2002	1503-1525
AD-953S00.1	CUGAAAUU GUGUUAGACGGUA	165	1887-1907	UACCGUCUAACACAAUUUCAGAA	366	1885-1907
AD-953808. 1	UCCGCCUUUUAUCUGCUUCGA	1840	2205-2225	UCGAAGCAGAUAAAAGGCGGACA	2003	2203-2225
AD-953815.1	GAACUACAUC GAUCAU GGAGA	1841	2413-2433	UCUCCAUGAUCGAUGUAGUUCAA	2004	2411-2433
AD-953823.1	GCCUCCAUCUCAUUUCUCCGA	1842	3061-3081	UCGGAGAAAUGAGAUGGAGGCUG	2005	3059-3081
AD-953831.1	GUUUGCAUUUGGAGUUUAGGA	1843	3263-3283	U CCUAAACUCCAAAUGCAAACUG	2006	3261-3283
AD-953839.1	AGAUGCUUUGAUUUUGGCCGA	1844	3412-3432	UCGGCCAAAAUCAAAGCAUCUUG	2007	3410-3432
AD-953847.1	GAAAUCCUGCUUUAGUCGAGA	1845	4042-4062	U CU C GACUAAAGCAG GAUUUCAG	2008	4040-4062
AD-953855.1	GCUAUUCAUAAUCACAUU CGA	1846	4400-4420	UCGAAUGU GAUUAUGAAUAGCAU	2009	4398-4420
AD-953769.1	GCUUUGAUGGAUUCUAAUCUA	1847	620-640	UAGAUUAGAAU CCAU CAAAGCUU	2010	618-640
AD-953777.1	GCAGCUUGUCCAGGUUUAUGA	1848	1207-1227	UCAUAAACCUGGACAAGCUGCUC	2011	1205-1227
AD-953785.1	AC CAAGACCACAAUGUUGUGA	1849	1251-1271	UCACAACAUUGUGGUCUUGGUGC	2012	1249-1271
AD-953793.1	AGGAUGACUCUGAAUCGAGAA	1850	1506-1526	UUCUCGAUUCAGAGUCAUCCUCC	2013	1504-1526
AD-9538 01.1	UGAAAUUGUGUUAGACGGUAA	1851	1888-1908	UUACCGU CUAACACAAUUUCAGA	2014	1886-1908
AD-953809.1	CCGCCUUUUAUCUGCUUCGUA	1852	2206-2226	UAC GAAG CAGAUAAAAGGC GGAC	2015	2204-2226
AD-953816.1	CUUUGGCGGAUUGCAUUCCUA	1853	2559-2579	UAGGAAUGCAAUCCGСCAAAGAA	2016	2557-2579
AD-953824.1	CCUCCAUCUCAUWCUCCGUA	1854	3062-3082	UAC GGAGAAAU GAGAUGGAGGCU	2017	3060-3082
AD-953832.1	GU CUAG GAAGAG CU GUAC C GA	1855	3322-3342	UCGGUACAGCUCUUCCUAGACUC	2018	3320-3342
AD-953840.1	GGCCGGAAACUUGCUUGCAGA	1856	3427-3447	UCU GCAAGCAAGUUU CCGGCCAA	2019	3425-3447
AD-953848.1	UUUAGU CGAGAACCAAUGAUA	1857	4052-4072	UAUCAUUGGUUCU CGACUAAAGC	2020	4050-4072
AD-953856.1	UUCAUAAUCACAUUCGUUUGA	1858	4404-4424	U CAAACGAAUGUGAUUAUGAAUA	2021	4402-4424
AD-953770.1	GAUUCUAAUCUUCCAAGGUUA	146	629-649	UAACCUUGGAAGAUUAGAAUCCA	2022	627-649
AD-953778.1	CAGGUUUAUGAACUGACGUUA	158	1217-1237	UAACGUCAGUUCAUAAACCUGGA	3 59	1215-1237
AD-953786.1	GAGUAUUGUGGAACUUAUAGA	1859	1405-1425	UCUAUAAGUUCCACAAUACUCCC	2023	1403-1425
AD-953794.1	G GAU GACU CU GAAU C GAGAUA	1860	1507-1527	UAU CU CGAUUCAGAGUCAU CCUC	2024	1505-1527
AD-953802.1	GAAAUU GU GUUAGACG GUACA	1861	1889-1909	UGUACCGUCUAACACAAUUUCAG	2025	1887-1909
AD-953817.1	UUUGGCGGAUUGCAUUCCUUA	1862	2560-2580	UAAGGAAU G CAAU CC GC CAAAGA	2026	2558-2580
AD-953825.1	CUCCAUCUCAUUUCUCCGUCA	1863	3063-3083	UGACGGAGAAAUGAGAUGGAGGC	2027	3061-3083
AD-953833.1	UCUAGGAAGAGCUGUACCGUA	1864	3323-3343	UACGGUACAGCUCUUCCUAGACU	2028	3321-3343
AD-953841.1	CUUCUCUAAGUCCCAUCC GAA	1865	3678-3698	UUCGGAUGGGACUUAGAGAAGGG	2029	3676-3698
AD-953849.1	UUAGUC GAGAAC CAAU GAUGA	1866	4053-4073	UCAUCAUUGGUUCUCGACUAAAG	2 030	4051-4073

Таблица 9

Модифицированные последовательности смысловых и антисмлсловых цепей дцРНК средств к хангшингтину (HTT)

ID дуплекса	Смысловая последовательность 5'—>3 '	SEQ ID NO:	Антисмысловая последовательность 5 ' —>3'	SEQ ID NO:	Последовательность мРНКмишени 51 —>3 ’	SEQ ID NO:
AD-953857.1	uscsaua(Ahd)UfcAfCfAf uucguuuguaL96	2031	VPusAfscaaAfcGfAfauguGfaUfuaugasasu	2205	AUUCAUAAUCACAUUCGUUUGUU	984
AD-953865.1	ususcag(Uhd)UfaCfGfGfguuaauuacaL96	2032	VPusGfsuaaUfuAfAfcccgUfaAfcugaascsc	2206	GGUUCAGUUACGGGUUAAUUACU	1007
AD-953873.1	ascsugu(Chd)UfcGfAfCfagauagcugaL96	2033	VPusCfsagcUfaUfCfugucGfaGfacaguscsg	2207	CGACUGUCUCGACAGAUAGCUGA	2379
AD-953881.1	ususacg(Ghd)AfgUfAfUfguucgucacaL96	2034	VPusGfsugaCfgAfAfcauaCfuCfcguaasasa	2208	UUUUACGGAGUAUGUUCGUCACU	2380
AD-953889.1	gscsaac(Ahd)UfaCfUfUfucuauugccaL96	2035	VPusGfsgcaAfuAfGfaaagUfaUfguugcsusg	2209	CAGCAACAUACUUUCUAUUGCCA	993
AD-953897.1	ascsucc(Ghd)AfgCfAfCfuuaacguggaL96	2036	VPusCfscacGfuUfAfagugCfuCfggaguscsa	2210	UGACUCCGAGCACUUAACGUGGC	2381
AD-953904.1	gscsaau(Uhd)CfaGfUfCfucguugugaaL96	2037	VPusUfseacAfaCfGfagacUfgAfauugcscsu	2211	AGGCAAUUCAGUCUCGUUGUGAA	2382
AD-953912.1	usgsccu(Uhd)CfaUfGfAfugaacucggaL96	2038	VPusCfscgaGfuUfCfaucaUfgAfaggcasusu	2212	AAUGCCUUCAUGAUGAACUCGGA	2383
AD-953920.1	csasaca(Ghd)CfuAfCfAfcacgugugcaL96	2039	VPusGfscacAfcGfUfguguAfgCfuguugsasc	2213	GUCAACAGCUACACACGUGUGCC	2384
AD-953928.1	gsascgc(Uhd)GfaCfAfGfaacugcgaaaL96	2040	VPusUfsucgCfaGfUfucugUfcAfgcgucsasc	2214	GUGACGCUGACAGAACUGCGAAG	2385
AD-953936.1	csusgac(Uhd)UfgUfUfUfacgaaauguaL96	2041	VPusAfscauUfuCfGfuaaaCfaAfgucagscsa	2215	UGCUGACUUGUUUACGAAAUGUC	2386
AD-953858.1	asuscac(Ahd)UfuCfGfUfuuguuugaaaL96	2042	VPusUfsucaAfaCfAfaacgAfaUfgugaususa	2216	UAAU CACAUUCGUUUGUUUGAAC	2387
AD-953866.1	csasguu(Ahd)CfgGfGfUfuaauuacugaL96	2043	VPusCfsaguAfaUfUfaaccCfgUfaacugsasa	2217	UUCAGUUACGGGUUAAUUACUGU	2388
AD-953874.1	asasgcc(Chd)UfuGfGfAfguguuaaauaL96	2044	VPusAfsuuuAfaCfAfcuccAfaGfggcuuscsa	2218	UGAAGCCCUUGGAGUGUUAAAUA	2389
AD-953882.1	uscsuga(Uhd)UfuCfCfCfagucaacugaL96	2045	VPusCfsaguUfgAfCfugggAfaAfucagasasc	2219	GUUCUGAUUUCCCAGUCAACUGA	2390
AD-953890.1	asuscuu(Chd)AfaGfUfCfuggaauguuaL96	2046	VPusAfsacaUfuCfCfagacUfuGfaagausgsu	2220	ACAUCUUCAAGUCUGGAAUGUUC	1004
AD-953898.1	asuscca(Ghd)GfcAfAfUfucagucucgaL96	2047	VPusCfsgagAfcUfGfaauuGfcCfuggausgsa	2221	UCAUCCAGGCAAUUCAGU CU CGU	2391
AD-953905.1	asusggu(Chd)GfaCfAfUfccuugcuugaL96	2048	VPusCfsaagCfaAfGfgaugUfcGfaccausgsc	2222	GCAU GGUC GACAUC CUUG CUUGU	2392

- 122 048552

AD-953913.1	csusuca(Uhd)GfaUfGfAfacucggaguaL96	2049	VPusAfscucCfgAfGfuucaUfcAfugaagsgsc	2223	GCCUUCAUGAUGAACUCGGAGUU	2393
AD-953921.1	gsascca(Ghd)UfcGfUfAfcucaguuugaL96	2050	VPusCfsaaaCfuGfAfguacGfaCfuggucscsa	2224	UGGACCAGUCGUACUCAGUUUGA	2394
AD-953929.1	ascsgcu(Ghd)AfcAfGfAfacugcgaagaL96	2051	VPusCfsuucGfcAfGfuucuGfuCfagcguscsa	2225	UGACGCUGACAGAACUGCGAAGG	2395
AD-953937.1	usgsacu(Uhd)GfuUfUfAfcgaaaugucaL96	2052	VPusGfsacaUfuUfCfguaaAfcAfagucasgsc	2226	GCUGACUU GUUUAC GAAAUGUC C	950
AD-953859.1	usgsuuu(Ghd)AfaCfCfUfcuuguuauaaL96	2053	VPusUfsauaAfcAfAfgaggUfuCfaaacasasa	2227	UUUGUUUGAACCUCUUGUUAUAA	933
AD-953867.1	uscsaga(Uhd)CfaGfGfUfguuuauuggaL96	2054	VPusCfscaaUfaAfAfcaccUfgAfucugasasu	2228	AUUCAGAUCAGGUGUUUAUUGGC	2396
AD-953875.1	gscsccu(Uhd)GfgAfGfUfguuaaauacaL96	2055	VPusGfsuauUfuAfAfcacuCfcAfagggcsusu	2229	AAGC CCUU GGAGUGUUAAAUACA	2397
AD-953883.1	asasgau(Ahd)UfuGfUfUfcuuucucguaL96	2056	VPusAfscgaGfaAfAfgaacAfaUfaucuuscsa	223 0	UGAAGAUAUUGUUCUUUCUCGUA	919
AD-953891.1	uscsaag(Uhd)CfuGfGfAfauguuccggaL96	2057	VPusCfscggAfaCfAfuuccAfgAfcuugasasg	2231	CUUCAAGUCUGGAAUGUUCCGGA	2398
AD-953899.1	uscscag(Ghd)CfaAfUfUfcagucucguaL96	2058	VPusAfscgaGfaCfUfgaauUfgCfcuggasusg	2232	CAUCCAGGCAAUUCAGUCUCGUU	2399
AD-953906.1	gsuscga(Chd)AfuCfCfUfugcuugucgaL96	2059	VPusCfsgacAfaGfCfaaggAfuGfucgacscsa	2233	UGGUCGACAUCCUUGCUUGUCGC	2400
AD-953914.1	csusgcu(Ahd)GfcUfCfCfaugcuuaagaL96	2060	VPusCfsuuaAfgCfAfuggaGfcUfagcagsgsc	2234	GCCUGCUAGCUCCAUGCUUAAGC	2401
AD-953922.1	ascscag(Uhd)CfgUfAfCfucaguuugaaL96	2061	VPusUfscaaAfcUfGfaguaCfgAfcugguscsc	223 5	GGAC CAGU CGUACU CAGUUU GAA	2402
AD-953930.1	gsasaag(Ghd)AfgAfAfAfgucaguccgaL96	2062	VPusCfsggaCfuGfAfcuuuCfuCfcuuucscsu	2236	AGGAAAGGAGAAAGUCAGUCCGG	2403
AD-953938.1	usasacg(Uhd)AfaCfUfCfuuucuaugcaL96	2063	VPusGfscauAfgAfAfagagUfuAfcguuasasa	2237	UUUAAC GUAACUCUUU CUAU GC C	982
AD-953860.1	gsusuug(Ahd)AfcCfUfCfuuguuauaaaL96	2064	VPusUfsuauAfaCfAfagagGfuUfcaaacsasa	223 8	UUGUUUGAACCUCUUGUUAUAAA	929
AD-953868.1	ususggc(Uhd)UfuGfUfAfuugaaacagaL96	2065	VPusCfsuguUfuCfAfauacAfaAfgccaasusa	2239	UAUU GG CUUU GUAUUGAAACAGU	2404
AD-953876.1	usasgac(Ahd)UfgCfUfUfuuacggaguaL96	2066	VPusAfscucCfgUfAfaaagCfaUfgucuascsc	2240	GGUAGACAUGCUUUUACGGAGUA	2405
AD-953884.1	gsasuau(Uhd)GfuUfCfUfuucucguauaL96	2067	VPusAfsuacGfaGfAfaagaAfcAfauaucsusu	2241	AAGAUAUUGUUCUUUCUCGUAUU	999
AD-9538 92.1	csasagu(Chd)UfgGfAfAfuguuccggaaL96	2068	VPusUfsccgGfaAfCfauucCfaGfacuugsasa	2242	UU CAAGUCUG GAAU GUUC CG GAG	2406
AD-953900.1	cscsagg(Chd)AfaUfUfCfagucucguuaL96	2069	VPusAfsacgAfgAfCfugaaUfuGfccuggsasu	2243	AU CCAG GCAAUU CAGU CU CGUU G	2407
AD-953907.1	csasugc(Ahd)AfgAfCfUfcacuuagucaL96	2070	VPusGfsacuAfaGfUfgaguCfuUfgcaugsgsu	2244	AC CAUG CAAGACUCACUUAGUCC	1008
AD-953915.1	usgscua(Ghd)CfuCfCfAfugcuuaagcaL96	2071	VPusGfscuuAfaGfCfauggAfgCfuagcasgsg	2245	CCUGCUAGCUCCAUGCUUAAGCC	2408
AD-953923.1	cscsagu(Chd)GfuAfCfUfcaguuugaaaL96	2072	VPusUfsucaAfaCfUfgaguAfcGfacuggsusc	2246	GACCAGUCGUACUCAGUUUGAAG	958
AD-953931.1	asgsaac(Uhd)UfcAfGfAfcccuaauccaL96	2073	VPusGfsgauUfaGfGfgucuGfaAfguucusasc	2247	GUAGAACUUCAGACCCUAAUCCU	2409
AD-953939.1	uscsuau(Ghd)CfcCfGfUfguaaaguauaL96	2074	VPusAfsuacUfuUfAfcacgGfgCfauagasasa	2248	UUUCUAUGCCCGUGUAAAGUAUG	2410
AD-953861.1	ususuga(Ahd)CfcUfCfUfuguuauaaaaL96	2075	VPusUfsuuaUfaAfCfaagaGfgUfucaaascsa	2249	UGUUUGAACCUCUUGUUAUAAAA	928
AD-9538 69.1	ususaug(Ahd)AfcGfCfUfaucauucaaaL96	2076	VPusUfsugaAfuGfAfuagcGfuUfcauaasgsa	2250	UCUUAUGAACGCUAUCAUUCAAA	2411
AD-953877.1	ascsaug(Chd)UfuUfUfAfcggaguaugaL96	2077	VPusCfsauaCfuCfCfguaaAfaGfcauguscsu	2251	AGACAUGCUUUUACGGAGUAUGU	2412
AD-953885.1	ususguu(Chd)UfuUfCfUfcguauucagaL96	2078	VPusCfsugaAfuAfCfgagaAfaGfaacaasusa	2252	UAUUGUUCUUUCUCGUAUUCAGG	916
AD-953893.1	asgscac(Ahd)AfaGfUfUfacuuaguccaL96	2079	VPusGfsgacUfaAfGfuaacUfuUfgugcusgsg	2253	CCAGCACAAAGUUACUUAGUCCC	2413
AD-953901.1	csasggc(Ahd)AfuUfCfAfgucucguugaL96	2080	VPusCfsaacGfaGfAfcugaAfuUfgccugsgsa	2254	UC CAGG CAAUUCAGUCUCGUUGU	2414
AD-953908.1	asusgca(Ahd)GfaCfUfCfacuuaguccaL96	2081	VPusGfsgacUfaAfGfugagUfcUfugcausgsg	2255	CCAUGCAAGACUCACUUAGUCCC	2415
AD-953916.1	ascsugg(Ahd)GfcAfAfGfuugaaugauaL96	2082	VPusAfsucaUfuCfAfacuuGfcUfccagusasg	2256	CUACUGGAGCAAGUUGAAUGAUC	2416
AD-953924.1	csasguc(Ghd)UfaCfUfCfaguuugaagaL96	2083	VPusCfsuucAfaAfCfugagUfaCfgacugsgsu	2257	ACCAGUCGUACUCAGUUUGAAGA	926
AD-953932.1	uscsaug(Ahd)AfcAfAfAfgucaucggaaL96	2084	VPusUfsccgAfuGfAfcuuuGfuUfcaugasusg	2258	CAUCAU GAACAAAGUCAU CGGAG	2 417
AD-953940.1	csusaug(Chd)CfcGfUfGfuaaaguaugaL96	2085	VPusCfsauaCfuUfUfacacGfgGfcauagsasa	2259	UU CUAU GC CC GU GUAAAGUAUGU	2418
AD-953862.1	asasgcu(Uhd)UfaAfAfAfcaguacacgaL96	2086	VPusCfsgugUfaCfUfguuuUfaAfagcuususu	2260	AAAAGCUUUAAAACAGUACACGA	2419
AD-953870.1	asascgc(Uhd)AfuCfAfUfucaaaacagaL96	2087	VPusCfsuguUfuUfGfaaugAfuAfgcguuscsa	2261	UGAACG CUAU CAUU CAAAACAGA	2420
AD-953878.1	csusuuu(Ahd)CfgGfAfGfuauguucguaL96	2088	VPusAfscgaAfcAfUfacucCfgUfaaaagscsa	2262	UGCUUUUACGGAGUAUGUUCGUC	2421
AD-953886.1	usgsuuc(Uhd)UfuCfUfCfguauucaggaL96	2089	VPusCfscugAfaUfAfcgagAfaAfgaacasasu	2263	AUUGUUCUUUCUCGUAUUCAGGA	931
AD-953894.1	asgsagg(Ahd)GfgAfUfUfcugacuuggaL96	2090	VPusCfscaaGfuCfAfgaauCfcUfccucususc	2264	GAAGAG GAGGAUUCUGACUUGG C	2422
AD-953902.1	asgsgca(Ahd)UfuCfAfGfucucguuguaL96	2091	VPusAfscaaCfgAfGfacugAfaUfugccusgsg	2265	CCAGGCAAUUCAGUCUCGUUGUG	2423
AD-953909.1	csascug(Ghd)AfaAfCfAfgugaguccgaL96	2092	VPusCfsggaCfuCfAfcuguUfuCfcagugsasc	2266	GU CACU GGAAACAGUGAGUCCG G	2424
AD-953917.1	usgsuca(Ahd)CfaGfCfUfacacacgugaL96	2093	VPusCfsacgUfgUfGfuagcUfgUfugacasasg	2267	CUUGUCAACAGCUACACACGUGU	2425
AD-953925.1	asasgcu(Ghd)AfgCfAfUfuaucagaggaL96	2094	VPusCfscucUfgAfUfaaugCfuCfagcuuscsc	2268	GGAAGCUGAG CAUUAU CAGAGG G	2426
AD-953933.1	csgsgcu(Ghd)CfuGfAfCfuuguuuacgaL96	2095	VPusCfsguaAfaCfAfagucAfgCfagccgsgsu	2269	ACCGGCUGCUGACUUGUUUACGA	2427
AD-953941.1	cscsgcu(Ghd)AfcAfUfUfuccguuguaaL96	2096	VPusUfsacaAfcGfGfaaauGfuCfagcggsgsu	2270	ACCCGCUGACAUUUCCGUUGUAC	2428
AD-953863.1	asgscug(Ghd)UfuCfAfGfuuacggguuaL96	2097	VPusAfsaccCfgUfAfacugAfaCfcagcusgsc	2271	GCAG CUGGUUCAGUUACGGGUUA	2429
AD-953871.1	gsusgga(Ahd)GfcGfAfCfugucucgacaL96	2098	VPusGfsucgAfgAfCfagucGfcUfuccacsusu	2272	AAGU GGAAGC GACU GU CU CGACA	2430
AD-953879.1	ususuua(Chd)GfgAfGfUfauguucgucaL96	2099	VPusGfsacgAfaCfAfuacuCfcGfuaaaasgsc	2273	GCUUUUACGGAGUAUGUUCGUCA	2431
AD-953887.1	asusuuu(Chd)AfaGfGfUfuucuauuacaL96	2100	VPusGfsuaaUfaGfAfaaccUfuGfaaaausgsu	2274	ACAUUUUCAAGGUUUCUAUUACA	943
AD-953895.1	csasaua(Ghd)AfgAfAfAfuaguacgaaaL96	2101	VPusUfsucgUfaCfUfauuuCfuCfuauugscsa	2275	UG CAAUAGAGAAAUAGUACGAAG	2432
AD-953903.1	gsgscaa(Uhd)UfcAfGfUfcucguugugaL96	2102	VPusCfsacaAfcGfAfgacuGfaAfuugccsusg	2276	CAGGCAAUUCAGUCUCGUUGUGA	2433
AD-953910.1	asgscug(Ghd)UfgAfAfUfcggauuccuaL96	2103	VPusAfsggaAfuCfCfgauuCfaCfcagcuscsu	2277	AGAG CU GGUGAAUC GGAUUC CU G	2434
AD-953918.1	gsuscaa(Chd)AfgCfUfAfcacacguguaL96	2104	VPusAfscacGfuGfUfguagCfuGfuugacsasa	2278	UU GU CAACAGCUACACAC GU GU G	2435

- 123 048552

AD-953926.1	ususgag(Chd)UfgAfUfGfuaugugacgaL96	2105	VPusCfsgucAfcAfUfacauCfaGfcucaasasc	2279	GUUUGAGCUGAUGUAUGUGACGC	2436
AD-953934.1	gsgscug(Chd)UfgAfCfUfuguuuacgaaL96	2106	VPusUfscguAfaAfCfaaguCfaGfcagccsgsg	2280	CCGGCUGCUGACUUGUUUACGAA	2437
AD-953864.1	gsusuca(Ghd)UfuAfCfGfgguuaauuaaL96	2107	VPusUfsaauUfaAfCfccguAfaCfugaacscsa	2281	UGGUUCAGUUACGGGUUAAUUAC	957
AD-953872.1	gsascug(Uhd)CfuCfGfAfcagauagcuaL96	2108	VPusAfsgcuAfuCfUfgucgAfgAfcagucsgsc	2282	GC GACU GU CU CGACAGAUAGCU G	2438
AD-953880.1	ususuac(Ghd)GfaGfUfAfuguucgucaaL96	2109	VPusUfsgacGfaAfCfauacUfcCfguaaasasg	2283	CUUUUACGGAGUAUGUUC GU CAC	2439
AD-953888.1	asasggu(Uhd)UfcUfAfUfuacaacuggaL96	2110	VPusCfscagUfuGfUfaauaGfaAfaccuusgsa	2284	UCAAGGUUUCUAUUACAACUGGU	2440
AD-953896.1	gsascuc(Chd)GfaGfCfAfcuuaacgugaL96	2111	VPusCfsacgUfuAfAfgugcUfcGfgagucsasu	2285	AU GACU CC GAGCACUUAACGUG G	2441
AD-953911.1	gscsugg(Uhd)GfaAfUfCfggauuccugaL96	2112	VPusCfsaggAfaUfCfcgauUfcAfccagcsusc	2286	GAGCUGGUGAAUCGGAUUCCUGC	2442
AD-953919.1	uscsaac(Ahd)GfcUfAfCfacacgugugaL96	2113	VPusCfsacaCfgUfGfuguaGfcUfguugascsa	2287	UGUCAACAGCUACACACGUGUGC	2443
AD-953927.1	gsasgcu(Ghd)AfuGfUfAfugugacgcuaL96	2114	VPusAfsgcgUfcAfCfauacAfuCfagcucsasa	2288	UUGAGCUGAUGUAUGUGACGCUG	2444
AD-953935.1	csusgcu(Ghd)AfcUfUfGfuuuacgaaaaL96	2115	VPusUfsuucGfuAfAfacaaGfuCfagcagscsc	2289	GGCUGCUGACUUGUUUACGAAAU	938
AD-953763.1	asgscua(Chd)CfaAfGfAfaagaccgugaL96	2116	VPusCfsacgGfuCfUfuucuUfgGfuagcusgsa	2290	UCAG CUAC CAAGAAAGACCGUGU	2445
AD-953771.1	asusucu(Ahd)AfuCfUfUfccaagguuaaL96	2117	VPusUfsaacCfuUfGfgaagAfuUfagaauscsc	2291	GGAUUCUAAUCUUCCAAGGUUAC	965
AD-953779.1	asgsguu(Uhd)AfuGfAfAfcugacguuaaL96	2118	VPusUfsaacGfuCfAfguucAfuAfaaccusgsg	2292	CCAGGUUUAUGAACUGACGUUAC	991
AD-953787.1	asgsuau(Uhd)GfuGfGfAfacuuauagcaL96	2119	VPusGfscuaUfaAfGfuuccAfcAfauacuscsc	2293	GGAGUAUUGUGGAACUUAUAGCU	2446
AD-953795.1	gsascuc(Uhd)GfaAfUfCfgagaucggaaL96	2120	VPusUfsccgAfuCfUfcgauUfcAfgagucsasu	2294	AU GACU CU GAAU CGAGAU CGGAU	2447
AD-953803.1	ascsagc(Ahd)GfuGfUfUfgauaaauuuaL96	2121	VPusAfsaauUfuAfUfcaacAfcUfgcuguscsa	2295	UGACAGCAGUGUUGAUAAAUUU G	1015
AD-953810.1	csgsccu(Uhd)UfuAfUfCfugcuucguuaL96	2122	VPusAfsacgAfaGfCfagauAfaAfaggcgsgsa	2296	UCCGCCUUUUAUCUGCUUCGUUU	1001
AD-953818.1	csusgag(Ghd)AfaCfAfGfuuccuauugaL96	2123	VPusCfsaauAfgGfAfacugUfuCfcucagsasg	2297	CUCUGAGGAACAGUUCCUAUUGG	1021
AD-953834.1	usasgga(Ahd)GfaGfCfUfguaccguugaL96	2124	VPusCfsaacGfgUfAfcagcUfcUfuccuasgsa	2298	UCUAGGAAGAGCUGUACCGUUGG	2448
AD-953842.1	ususcuc(Uhd)AfaGfUfCfccauccgacaL96	2125	VPusGfsucgGfaUfGfggacUfuAfgagaasgsg	2299	CCUU CU CUAAGU CC CAUC CGAC G	2449
AD-953764.1	csusacc(Ahd)AfgAfAfAfgaccgugugaL96	2126	VPusCfsacaCfgGfUfcuuuCfuUfgguagscsu	2300	AGCUACCAAGAAAGACCGUGUGA	2450
AD-953772.1	ususcca(Ahd)GfgUfUfAfcagcucgagaL96	2127	VPusCfsucgAfgCfUfguaaCfcUfuggaasgsa	2301	UCUUCCAAGGUUACAGCUCGAGC	2451
AD-953780.1	gsgsuuu(Ahd)UfgAfAfCfugacguuacaL96	2128	VPusGfsuaaCfgUfCfaguuCfaUfaaaccsusg	2302	CAGGUUUAUGAACUGACGUUACA	2452
AD-953788.1	gsusauu(Ghd)UfgGfAfAfcuuauagcuaL96	2129	VPusAfsgcuAfuAfAfguucCfaCfaauacsusc	2303	GAGUAUUGUG GAACUUAUAG CU G	2453
AD-953796.1	ascsucu(Ghd)AfaUfCfGfagaucggauaL96	2130	VPusAfsuccGfaUfCfucgaUfuCfagaguscsa	2304	UGACUCUGAAUCGAGAUCGGAUG	1011
AD-953804.1	usgsaua(Ahd)AfuUfUfGfuguugagagaL96	2131	VPusCfsucuCfaAfCfacaaAfuUfuaucasasc	2305	GUUGAUAAAUUUGU GUUGAGAGA	2454
AD-953811.1	uscsuau(Ahd)AfaGfUfUfccucuugacaL96	2132	VPusGfsucaAfgAfGfgaacUfuUfauagasgsu	2306	ACUCUAUAAAGUUCCUCUUGACA	987
AD-953819.1	usgsagg(Ahd)AfcAfGfUfuccuauuggaL96	2133	VPusCfscaaUfaGfGfaacuGfuUfccucasgsa	2307	UCUGAGGAACAGUUCCUAUUGGC	2455
AD-953827.1	uscsucc(Ghd)UfcAfGfCfacaauaaccaL96	2134	VPusGfsguuAfuUfGfugcuGfaCfggagasasa	2308	UUUCUCCGUCAGCACAAUAACCA	2456
AD-953835.1	asgsgaa(Ghd)AfgCfUfGfuaccguuggaL96	2135	VPusCfscaaCfgGfUfacagCfuCfuuccusasg	2309	CUAG GAAGAG CU GUAC CGUU GG G	2457
AD-953843.1	gsasgaa(Chd)AfaGfCfAfucuguaccgaL96	2136	VPusCfsgguAfcAfGfaugcUfuGfuucucscsu	2310	AGGAGAACAAGCAUCUGUACCGU	2458
AD-953851.1	gsasgug(Uhd)CfaCfAfAfagaaccgugaL96	2137	VPusCfsacgGfuUfCfuuugUfgAfcacucsgsu	2311	AC GAGU GU CACAAAGAAC CGUG C	2459
AD-953765.1	asasuca(Uhd)UfgUfCfUfgacaauaugaL96	2138	VPusCfsauaUfuGfUfcagaCfaAfugauuscsa	2312	UGAAUCAUUGUCUGACAAUAUGU	2460
AD-953773.1	uscscaa(Ghd)GfuUfAfCfagcucgagcaL96	2139	VPusGfscucGfaGfCfuguaAfcCfuuggasasg	2313	CUUCCAAGGUUACAGCUCGAGCU	2461
AD-953781.1	ususuau(Ghd)AfaCfUfGfacguuacauaL96	2140	VPusAfsuguAfaCfGfucagUfuCfauaaasesc	2314	GGUUUAUGAACU GACGUUACAU C	2462
AD-953789.1	usasuug(Uhd)GfgAfAfCfuuauagcugaL96	2141	VPusCfsagcUfaUfAfaguuCfcAfcaauascsu	2315	AGUAUU GU GGAACUUAUAGCUGG	2463
AD-953797.1	csuscug(Ahd)AfuCfGfAfgaucggaugaL96	2142	VPusCfsaucCfgAfUfcucgAfuUfcagagsusc	2316	GACUCUGAAUCGAGAUCGGAUGU	2464
AD-953805.1	asgsaug(Ahd)AfgCfUfAfcugaaccggaL96	2143	VPusCfscggUfuCfAfguagCfuUfcaucuscsu	2317	AGAGAUGAAG CUACUGAACC GG G	2465
AD-953812.1	csasucu(Uhd)GfaAfCfUfacaucgaucaL96	2144	VPusGfsaucGfaUfGfuaguUfcAfagaugsusc	2318	GACAUCUUGAACUACAUCGAUCA	2466
AD-953828.1	uscscgu(Chd)AfgCfAfCfaauaaccagaL96	2145	VPusCfsuggUfuAfUfugugCfuGfacggasgsa	2319	UCUCCGUCAGCACAAUAACCAGA	2467
AD-953836.1	gsgsaag(Ahd)GfcUfGfUfaccguugggaL96	2146	VPusCfsccaAfcGfGfuacaGfcUfcuuccsusa	2320	UAGGAAGAGCUGUACCGUUGGGA	2468
AD-953852.1	usgsuca (Chd) AfaAfGfAfaccgugcaga'L96	2147	VPusCfsugcAfcGfGfuucuUfuGfugacascsu	2321	AGUGUCACAAAGAACCGUGCAGA	2469
AD-953766.1	csasuug(Uhd)CfuGfAfCfaauaugugaaL96	2148	VPusUfscacAfuAfUfugucAfgAfcaaugsasu	2322	AU CAUU GU CU GACAAUAUGU GAA	925
AD-953774.1	csusguu(Chd)CfcAfAfAfauuauggcuaL96	2149	VPusAfsgccAfuAfAfuuuuGfgGfaacagscsu	2323	AGCU GUUC CCAAAAUUAUGG CUU	2470
AD-953782.1	csasgca(Chd)CfaAfGfAfccacaauguaL96	2150	VPusAfscauUfgUfGfgucuUfgGfugcugsusg	2324	CACAGCAC CAAGAC CACAAU GUU	2471
AD-953790.1	asusugu(Ghd)GfaAfCfUfuauagcuggaL96	2151	VPusCfscagCfuAfUfaaguUfcCfacaausasc	2325	GUAUUGUG GAACUUAUAG CU GGA	2472
AD-9537 98.1	ususcug(Ahd)AfaUfUfGfuguuagacgaL96	2152	VPusCfsgucUfaAfCfacaaUfuUfcagaascsu	2326	AGUUCUGAAAUUGUGUUAGACGG	2473
AD-953806.1	cscsucu(Uhd)GfuCfCfAfuuguguccgaL96	2153	VPusCfsggaCfaCfAfauggAfcAfagaggsusg	2327	CACCUCUUGUCCAUUGUGUCCGC	2474
AD-953813.1	csusuga(Ahd)CfuAfCfAfucgaucaugaL96	2154	VPusCfsaugAfuCfGfauguAfgUfucaagsasu	232 8	AUCUUGAACUACAUCGAUCAUG G	930
AD-953821.1	asasgaa(Chd)GfaGfUfGfcucaauaauaL96	2155	VPusAfsuuaUfuGfAfgcacUfcGfuucuusgsc	2329	GCAAGAAC GAGU GCUCAAUAAUG	2475
AD-953829.1	asasccu(Uhd)UfcAfAfGfaguuauugcaL96	2156	VPusGfs caaUf aAf CfucuuGfaAfagguusa.su	2330	AUAACCUUUCAAGAGUUAUUGCA	2476
AD-953837.1	gsuscag(Chd)UfuGfGfUfucccauuggaL96	2157	VPusCfscaaUfgGfGfaaccAfaGfcugacsgsa	2331	UCGUCAGCUUGGUUCCCAUUGGA	2477
AD-953845.1	cscsuga(Ahd)AfuCfCfUfgcuuuagucaL96	2158	VPusGfsacuAfaAfGfcaggAfuUfucaggsusa	2332	UACCUGAAAUCCUGCUUUAGUCG	924
AD-953853.1	usasaga(Ahd)UfgCfUfAfuucauaaucaL96	2159	VPusGfsauuAfuGfAfauagCfaUfucuuasusc	2333	GAUAAGAAUG CUAUUCAUAAUCA	2478
AD-953767.1	asasugc(Chd)UfcAfAfCfaaaguuaucaL96	2160	VPusGfsauaAfcUfUfuguuGfaGfgcauuscsg	2334	CGAAUGCCUCAACAAAGUUAUCA	2479

- 124 048552

AD-953775.1	asgsgcc(Uhd)UfcAfUfAfgcgaaccugaL96	2161	VPusCfsaggUfuCfGfcuauGfaAfggccususu	2335	AAAGGCCUUCAUAGCGAACCUGA	2480
AD-953783.1	gscsacc(Ahd)AfgAfCfCfacaauguugaL96	2162	VPusCfsaacAfuUfGfugguCfuUfggugcsusg	2336	CAGCAC CAAGAC CACAAU GUUGU	2481
AD-953791.1	usgsgag(Ghd)AfuGfAfCfucugaaucgaL96	2163	VPusCfsgauUfcAfGfagucAfuCfcuccasasg	2337	CUUGGAGGAUGACU CUGAAU CGA	2482
AD-953799.1	uscsuga(Ahd)AfuUfGfUfguuagacggaL96	2164	VPusCfscguCfuAfAfcacaAfuUfucagasasc	2338	GUUCUGAAAUUGUGUUAGACGGU	959
AD-953807.1	CSU3CUU(Ghd)UfcCfAfUfuguguccgcaL96	2165	VPusGfscggAfcAfCfaaugGfaCfaagagsgsu	2339	ACCUCUUGUCCAUUGUGUCCGCC	2483
AD-953822.1	gsasgug(Chd)UfcAfAfUfaauguugucaL96	2166	VPusGfsacaAfcAfUfuauuGfaGfcacucsgsu	2340	ACGAGUGCUCAAUAAUGUUGUCA	2484
AD-953830.1	asgsuuu(Ghd)CfaUfUfUfggaguuuagaL96	2167	VPusCfsuaaAfcUfCfcaaaUfgCfaaacusgsg	2341	CCAGUUUGCAUUUGGAGUUUAGG	2485
AD-953838.1	asgscuu(Ghd)GfuUfCfCfcauuggaucaL96	2168	VPusGfsaucCfaAfUfgggaAfcCfaagcusgsa	2342	UCAGCUUGGUUCCCAUUGGAUCU	2486
AD-953846.1	csusgaa(Ahd)UfcCfUfGfcuuuagucgaL96	2169	VPusCfsgacUfaAfAfgcagGfaUfuucagsgsu	2343	ACCUGAAAUCCUGCUUUAGUCGA	2487
AD-953854.1	asgsaau(Ghd)CfuAfUfUfcauaaucacaL96	2170	VPusGfsugaUfuAfUfgaauAfgCfauucususa	2344	UAAGAAUG CUAUUCAUAAUCACA	921
AD-953768.1	ususauc(Ahd)AfaGfCfUfuugauggauaL96	2171	VPusAfsuccAfuCfAfaagcUfuUfgauaascsu	2345	AGUUAU CAAAGCUUUGAU GGAUU	2488
AD-953776.1	csuscug(Chd)UfgAfUfUfcuuggcgugaL96	2172	VPusCfsacgCfcAfAfgaauCfaGfcagagsusg	2346	CACUCUGCUGAUUCUUGGCGUGC	2489
AD-9537 84.1	csascca(Ahd)GfaCfCfAfcaauguuguaL96	2173	VPusAfscaaCfaUfUfguggUfcUfuggugscsu	2347	AGCACCAAGACCACAAUGUUGUG	2490
AD-953792.1	gsasgga(Uhd)GfaCfUfCfugaaucgagaL96	2174	VPusCfsucgAfuUfCfagagUfcAfuccucscsa	2348	UGGAGGAUGACUCUGAAUCGAGA	2491
AD-9538 00.1	csusgaa(Ahd)UfuGfUfGfuuagacgguaL96	2175	VPusAfsccgUfcUfAfacacAfaUfuucagsasa	2349	UUCUGAAAUUGUGUUAGACGGUA	971
AD-953808.1	uscscgc(Chd)UfuUfUfAfucugcuucgaL96	2176	VPusCfsgaaGfcAfGfauaaAfaGfgcggascsa	2350	UGUCCGCCUUUUAUCU GCUU CGU	2492
AD-953815.1	gsasacu(Ahd)CfaUfCfGfaucauggagaL96	2177	VPusCfsuccAfuGfAfucgaUfgUfaguucsasa	2351	UU GAACUACAUCGAUCAU GGAGA	2493
AD-953823.1	gscscuc(Chd)AfuCfUfCfauuucuccgaL96	2178	VPusCfsggaGfaAfAfugagAfuGfgaggcsusg	2352	CAGCCUCCAUCUCAUUUCUCCGU	2494
AD-953831.1	gsusuug(Chd)AfuUfUfGfgaguuuaggaL96	2179	VPusCfscuaAfaCfUfccaaAfuGfcaaacsusg	2353	CAGUUUGCAUUUGGAGUUUAGGU	2495
AD-953839.1	asgsaug(Chd)UfuUfGfAfuuuuggccgaL96	2180	VPusCfsggcCfaAfAfaucaAfaGfcaucususg	2354	CAAGAUGCUUUGAUUUUGGCCGG	2496
AD-953847.1	gsasaau(Chd)CfuGfCfUfuuagucgagaL96	2181	VPusCfsucgAfcUfAfaagcAfgGfauuucsasg	2355	CUGAAAUCCUGCUUUAGUCGAGA	2497
AD-953855.1	gscsuau(Uhd)CfaUfAfAfucacauucgaL96	2182	VPusCfsgaaUfgUfGfauuaUfgAfauagcsasu	2356	AU GCUAUU CAUAAU CACAUUCGU	988
AD-953769.1	gscsuuu(Ghd)AfuGfGfAfuucuaaucuaL96	2183	VPusAfsgauUfaGfAfauccAfuCfaaagcsusu	2357	AAGCUUUGAUGGAUUCUAAUCUU	946
AD-953777.1	gscsagc(Uhd)UfgUfCfCfagguuuaugaL96	2184	VPusCfsauaAfaCfCfuggaCfaAfgcugcsusc	2358	GAGCAG CUUGUC CAGGUUUAUGA	2498
AD-953785.1	ascscaa(Ghd)AfcCfAfCfaauguugugaL96	2185	VPusCfsacaAfcAfUfugugGfuCfuuggusgsc	2359	GCACCAAGACCACAAUGUUGUGA	2499
AD-953793.1	asgsgau(Ghd)AfcUfCfUfgaaucgagaaL96	2186	VPusUfscucGfaUfUfcagaGfuCfauccuscsc	2360	GGAGGAUGACUCUGAAUCGAGAU	2500
AD-953801.1	usgsaaa(Uhd)UfgUfGfUfuagacgguaaL96	2187	VPusUfsaccGfuCfUfaacaCfaAfuuucasgsa	2361	UCUGAAAUUGUGUUAGACGGUAC	1003
AD-953809.1	cscsgcc(Uhd)UfuUfAfUfcugcuucguaL96	2188	VPusAfscgaAfgCfAfgauaAfaAfggcggsasc	2362	GUCCGCCUUUUAUCUGCUUCGUU	2501
AD-953816.1	csusuug(Ghd)CfgGfAfUfugcauuccuaL96	2189	VPusAfsggaAfuGfCfaaucCfgCfcaaagsasa	2363	UUCUUUGGCGGAUUGCAUUCCUU	2502
AD-953824.1	cscsucc(Ahd)UfcUfCfAfuuucuccguaL96	2190	VPusAfscggAfgAfAfaugaGfaUfggaggscsu	2364	AGCCUCCAUCUCAUUUCUCCGUC	2503
AD-953832.1	gsuscua(Ghd)GfaAfGfAfgcuguaccgaL96	2191	VPusCfsgguAfcAfGfcucuUfcCfuagacsusc	2365	GAGU CUAG GAAGAG CU GUAC CGU	2504
AD-953840.1	gsgsccg(Ghd)AfaAfCfUfugcuugcagaL96	2192	VPusCfsugcAfaGfCfaaguUfuCfcggccsasa	2366	UUGGCCGGAAACUUGCUUGCAGC	2505
AD-953848.1	ususuag(Uhd)CfgAfGfAfaccaaugauaL96	2193	VPusAfsucaUfuGfGfuucuCfgAfcuaaasgsc	2367	GCUUUAGUCGAGAACCAAUGAUG	2506
AD-953856.1	ususcau(Ahd)AfuCfAfCfauucguuugaL96	2194	VPusCfsaaaCfgAfAfugugAfuUfaugaasusa	2368	UAUU CAUAAU CACAUU CGUUUGU	972
AD-953770.1	gsasuuc(Uhd)AfaUfCfUfuccaagguuaL96	2195	VPusAfsaccUfuGfGfaagaUfuAfgaaucscsa	2369	UGGAUUCUAAUCUUCCAAGGUUA	952
AD-953778.1	csasggu(Uhd)UfaUfGfAfacugacguuaL96	2196	VPusAfsacgUfcAfGfuucaUfaAfaccugsgsa	2 37 0	UC CAGGUUUAUGAACUGACGUUA	964
AD-953786.1	gsasgua(Uhd)UfgUfGfGfaacuuauagaL96	2197	VPusCfsuauAfaGfUfuccaCfaAfuacucsesc	2371	GG GAGUAUUGUG GAACUUAUAGC	998
AD-953794.1	gsgsaug(Ahd)CfuCfUfGfaaucgagauaL96	2198	VPusAfsucuCfgAfUfucagAfgUfCaucasusc	2372	GAGGAU GACU CU GAAU CGAGAU C	2507
AD-953802.1	gsasaau(Uhd)GfuGfUfUfagacgguacaL96	2199	VPusGfsuacCfgUfCfuaacAfcAfauuucsasg	2373	CU GAAAUU GU GUUAGACG GUAC C	2508
AD-953817.1	ususugg(Chd)GfgAfUfUfgcauuccuuaL96	2200	VPusAfsaggAfaUfGfcaauCfcGfccaaasgsa	2374	UCUUUGGCGGAUUGCAUUCCUUU	2509
AD-953825.1	csuscca(Uhd)CfuCfAfUfuucuccgucaL96	2201	VPusGfsacgGfaGfAfaaugAfgAfuggagsgsc	237 5	GCCUCCAUCUCAUUUCUCCGUCA	2510
AD-953833.1	uscsuag(Ghd)AfaGfAfGfcuguaccguaL96	2202	VPusAfscggUfaCfAfgcucUfuCfcuagascsu	237 6	AGUCUAGGAAGAGCUGUACCGUU	2511
AD-953841.1	csusucu(Chd)UfaAfGfUfcccauccgaaL96	2203	VPusUfscggAfuGfGfgacuUfaGfagaagsgsg	2377	CCCUUCUCUAAGUCCCAUCCGAC	2512
AD-953849.1	ususagu(Chd)GfaGfAfAfccaaugaugaL96	2204	VPusCfsaucAfuUfGfguucUfcGfacuaasasg	2 37 8	CUUUAGUCGAGAAC CAAU GAUG G	2513

- 125 048552

Таблица 10

Скрининг однократных HTT доз в. клетках BE(2)C

Дуплекс	Доза 50 Средн. % остаточной мРНК HTT	нМ SD	Доза 10 нМ	Доза 1 нМ	Доза 0,1 нМ
Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD
AD-953857.1	16, 05	2,43	18,37	6, 33	37,83	3, 99	61,37	32,24
AD-953865.1	21,46	1,84	21, 52	2,08	41,90	6,47	66,45	9, 60
AD-953873.1	47,68	1, 44	41,42	6, 98	66, 65	7,70	107,00	4,95
AD-953881.1	57,77	5,42	61,52	12,2 8	71,46	8, 69	93,49	10, 37
AD-953889.1	21,18	1,43	21,45	3,67	36, 96	5,59	49,35	5,80
AD-953897.1	26, 52	2,95	25, 80	4,38	44,35	0,36	62,96	9, 00
AD-953904.1	15,29	2,08	14,33	1,46	27,94	3, 94	38,13	10, 23
AD-953912.1	20,77	1, 06	17,31	1,44	32,90	3,56	42,66	3, 78
AD-953920.1	29,21	5,44	23, 86	2,65	41,37	5,53	60,07	6, 41
AD-953928.1	26, 06	5,15	23, 19	2,25	45,61	1,04	59,95	10, 49
AD-953936.1	20,24	1, 03	18,53	1,67	38,84	3,09	49,16	2, 52
AD-953858.1	15,45	1,79	15, 12	3,49	29,10	5, 63	44,55	................6, 67
AD-953866.1	22,40	0,79	19, 07	1,56	33,29	1, 60	61,67	5,23
AD-953874.1	22,91	3,18	21, 92	2,47	32,57	1,93	55,52	7, 14
AD-953882.1	23,56	2,92	25, 69	4,05	42,19	5,80	73,33	9, 11
AD-953890.1	22,71	1, 67	24,89	2,42	37,31	6,20	49,23	5, 16
AD-953898.1	24,80	0,30	22,21	2,80	35,18	2,80	43,93	4, 68
AD-953905.1	26, 85	2,44	24,82	2,69	42,91	5, 14	72,01	10, 43
AD-953913.1	25,90	1,86	25,28	1,84	43,55	7,23	69,03	11,98
AD-953921.1	22,21	1,76	19, 64	1,53	34,67	3, 91	54,24	8,28
AD-953929.1	36,47	5,87	36, 02	2,85	61,06	2,86	83,91	22, 13
AD-953937.1	16,73	0, 96	19, 44	3,72	31,00	4,55	34,78	4, 00
AD-953859.1	16,27	1, 03	16, 96	0,82	30,38	3, 42	53,51	10, 75
AD-953867.1	22,01	3,84	21, 97	2,10	35,05	3,59	57,11	1, 53
AD-953875.1	24,36	1,2 3	26, 15	2,97	38,19	2,22	74,02	8, 43
AD-953883.1	24,73	1, 85	21, 07	1,38	30,54	4,74	46, 61	7, 10
AD-953891.1	24,26	0, 86	24,22	4,04	38,49	5,50	47,81	7,76
AD-953899.1	24,59	2,33	20,26	2,51	31,05	4,32	41,14	13, 31
AD-953906.1	22,78	1, 44	20, 10	7,25	46, 92	2, 16	75,40	9, 82
AD-953914.1	28,46	1,16	29, 74	4,80	64,66	8,34	96, 65	11,03
AD-953922.1	19,19	1,32	19, 92	3,18	29,66	1,82	34,86	3, 55
AD-953930.1	21,85	5, 90	21, 01	0, 82	43,94	3, 67	62,33	7,01
AD-953938.1	63,20	5, 78	66, 64	7,02	79,51	8,87	80,39	3, 46
AD-953860.1	19,05	4,26	18,65	0,79	33,32	5,75	48,63	5,08
AD-953868.1	19,63	3, 05	18,41	0, 48	32,04	2, 63	45,92	4, 72
AD-953876.1	33,16	2,94	31, 85	1,36	66,49	7,48	102,46	4,40
AD-953884.1	14,13	2,63	16, 42	2,11	29,70	2, 63	38,29	1, 64
AD-953892.1	27,64	2,38	25,56	1,96	47,71	9,73	73,34	17, 01
AD-953900.1	17,05	0, 96	18,87	1,40	32,04	4,65	42,31	8, 16
AD-953907.1	26, 95	3, 88	22,93	2,59	39,97	8,06	71,61	4,01
AD-953915.1	30,95	4,60	28,16	5,40	46, 16	10,23	71,46	7,54
AD-953923.1	21,89	2,66	17,20	1,12	27,43	1, 64	40,87	3,85
AD-953931.1	27,06	2,01	27,01	2,05	42,09	4, 90	63,01	3, 94
AD-953939.1	77,68	4,69	76, 66	10,80	88,25	6, 19	94,95	4,51
AD-953861.1	20, 65	1, 55	18,60	2,50	29,63	3, 05	40,90	5, 14
AD-953869.1	21,08	2,86	21, 03	2,2 8	33,09	2,30	55,70	4,88
AD-953877.1	31,47	1, 50	32,22	0,31	60,90	5, 92	88,72	15, 86
AD-953885.1	22,81	2,02	22,11	1,91	33,11	1,36	54,46	6, 06
AD-953893.1	25,43	3,20	26, 90	1,72	35,40	3,43	58,81	5, 7 4
AD-953901.1	23,55	2,39	22,74	2,14	30,83	2,19	46, 56	6, 45
AD-953908.1	28,14	3, 66	24,79	4,32	49,98	6, 67	74,89	11,2 8

- 126 048552

AD-953916.1	20,50	1,45	20, 84	3, 59	32,80	3, 07	55,53	5,20
AD-953924.1	20,30	2,89	19, 94	2,37	31,99	1,48	53,87	2, 32
AD-953932.1	22,26	4,04	22,14	1,06	37,97	1, 68	64,51	5, 33
AD-953940.1	78,14	8,15	84,67	10, 84	91,71	2,98	95,60	7, 68
AD-953862.1	22,74	1,44	21, 07	0,21	32,76	4,07	51,54	3,32
AD-953870.1	20, 18	2,42	19, 12	1,30	30,42	3, 19	40,34	7,91
AD-953878.1	33,07	2,38	31, 34	3,70	53,01	3,47	88,88	9,26
AD-953886.1	17,86	1,46	19, 86	1,08	31,56	1, 68	55,48	5, 88
AD-953894.1	27,61	2,51	28,83	1, 74	56, 14	0,45	82,15	15, 86
AD-953902.1	18,50	2,11	19,26	1,83	28,69	1,66	37,61	5, 71
AD-953909.1	26,17	1,74	28,69	2,80	48,35	4,44	68,14	4, 57
AD-953917.1	26, 83	2,16	27,61	2,62	36,73	1, 02	70,07	10, 65
AD-953925.1	46,16	7,34	44,27	1,82	71,56	4,90	107,36	4,41
AD-953933.1	18,24	2,49	20, 81	2,28	31,13	1, 91	52,83	9,20
AD-953941.1	59,99	7,78	52,78	7,30	82,81	6, 48	110,20	9, 13
AD-953863.1	32,05	2,19	28,11	1,01	34,98	0, 73	50,43	7,83
AD-953871.1	28,02	2,21	28,90	2,25	34,68	3,48	46, 87	5, 69
AD-953879.1	23,07	2,42	25, 80	2,96	36,76	3,23	59,20	7, 03
AD-953887.1	18,24	1, 05	20, 75	1,99	28,07	2,87	41,77	7, 81
AD-953895.1	20,39	2,35	22,41	3,55	26, 86	3, 42	43,97	4, 42
AD-953903.1	15,66	2,01	19, 65	2,14	29,56	1, 93	39,81	7, 11
AD-953910.1	23,32	4,24	23, 75	2,89	37,97	3,81	62,99	3, 58
AD-953918.1	31,96	4,06	32,74	2,53	45,30	1, 60	79,21	8, 97
AD-953926.1	21,45	0,48	24,19	2,05	40,34	5, 85	72,83	12, 05
AD-953934.1	23, 64	1, 04	25,29	0,71	38,99	2,17	67,06	7, 90
AD-953864.1	26,24	3,28	22,71	2,58	38,72	3,45	52,72	12, 31
AD-953872.1	25,36	5,20	25, 00	2,09	37,92	4,88	45,09	6,85
AD-953880.1	21,96	1,35	23, 44	2,50	37,41	4,29	49,37	9, 72
AD-953888.1	26, 33	2,91	24,11	1,45	40,29	3,43	55,22	10, 38
AD-953896.1	21,04	0, 64	22,26	2,38	36,44	4,77	56, 58	9, 76
AD-953911.1	22,96	1, 06	24,03	2,14	37,86	2,21	66,71	11,29
AD-953919.1	62,76	5,76	56, 02	5, 60	76, 99	2,81	99,08	13, 73
AD-953927.1	25,86	2,58	23, 39	2,44	31,73	2,85	46,22	9,20
AD-953935.1	16, 38	1, 42	17,59	1,08	29,00	3, 19	53,23	4, 33
AD-953763.1	33,44	10,21	31, 06	6, 57	43,69	4,70	48,31	5, 99
AD-953771.1	42,75	6, 50	41, 28	9, 16	75, 61	9,00	92,60	10, 47
AD-953779.1	27,92	5,35	31, 67	9,74	37,29	4,50	57,23	5, 65
AD-953787.1	32,95	4,58	35, 35	8,17	41,84	4,58	59,06	4,46
AD-953795.1	34,28	2,28	41, 91	3,73	53,55	5,26	85,25	1, 65
AD-953803.1	61,61	10, 04	46, 74	4,05	83,38	4,24	110,46	5, 45
AD-953810.1	32,03	4,20	30,31	3, 53	46, 84	8, 35	52,79	9, 88
AD-953818.1	35,62	7,77	39, 33	3, 83	64,80	4,51	83,71	8,90
AD-953834.1	38,17	10, 19	39,24	9, 05	69,47	5,13	84,84	12,05
AD-953842.1	48,14	5,74	42,18	11,18	64,07	8,26	83,21	9, 99
AD-953764.1	35,95	3, 92	32,36	4,78	52,82	1,31	84,76	7,49
AD-953772.1	34,22	7,68	38,93	10, 45	43,52	4,44	68,49	4, 03
AD-953780.1	30,99	9,57	31, 93	10,20	39,08	2,92	60,57	5, 48
AD-953788.1	38,27	4,23	37,18	5,59	47,91	5,42	76, 84	1,80
AD-953796.1	42,51	6,58	44,21	4,90	67,01	5, 42	102,06	6, 64
AD-953804.1	37,65	5, 98	34,34	7,25	41,18	3,27	67,16	2,81
AD-953811.1	35,49	4,59	33, 88	3, 83	69,90	4,22	92,57	4,77
AD-953819.1	72,71	8,61	64,21	4,15	84,79	6, 50	115,08	3, 54

- 127 048552

AD-953827.1	54,49	6, 72	47, 64	2,73	68,71	6,19	102,52	4,97
AD-953835.1	50, 86	9, 70	45,75	3, 45	70,68	2, 02	109,76	6, 91
AD-953843.1	40,24	13,59	34,25	4,72	42,61	4,27	72,86	11,78
AD-953851.1	28,35	1, 65	29, 66	1, 70	38,15	2,59	52,40	6, 40
AD-953765.1	2 8,75	5, 69	26, 86	10, 34	41,08	2,80	59, 02	5, 4 9
AD-953773.1	47,21	11,49	44, 85	8,81	49,28	4,61	75, 12	5,20
AD-953781.1	36, 10	8,50	36, 11	10,46	52,43	3, 14	88,89	6,54
AD-953789.1	33, 84	5, 38	30,41	2, 64	41, 12	5,33	61, 12	4,22
AD-953797.1	50, 45	9,38	48, 61	3, 65	74, 12	3,88	107,92	12,56
AD-953805.1	38,52	4,74	35, 18	3, 86	48,85	6,72	74,95	4,48
AD-953812.1	50, 94	4,43	47,30	4,06	44,30	3, 90	65,73	4,56
AD-953828.1	41,55	3, 96	36, 91	1, 60	48,35	3,41	84, 09	2,25
AD-953836.1	77,62	9,75	74, 18	18, 66	102,18	6,41	126,56	2,57
AD-953852.1	36,55	1, 38	38,33	2,34	49,12	9,28	76, 84	.......7,57
AD-953766.1	26, 95	4,97	26, 63	9, 68	34,64	4,42	55, 02	6, 92
AD-953774.1	31,82	8,79	29, 89	6, 65	47,56	6,79	76,30	11, 63
AD-953782.1	33,99	4,66	33,27	1, 66	58,33	2,52	88,13	2,99
AD-953790.1	35, 99	9, 97	36, 56	5,57	52,53	6, 12	76, 07	5, 88
AD-953798.1	31,59	5, 99	30,43	2, 92	48,48	9,26	58,30	7, 98
AD-953806.1	29, 95	2,89	29, 95	3, 45	47, 19	0, 64	72,89	3, 91
AD-953813.1	35, 04	6, 15	31, 69	2,55	37, 67	2,51	55,37	5, 38
AD-953821.1	30, 63	2,16	27,43	2,03	35,15	2,54	51, 11	4, 67
AD-953829.1	68,42	15, 84	60, 97	8, 15	84,94	2,74	110,99	4,30
AD-953837.1	36, 88	3,79	32,34	0,88	41,99	3, 69	79,41	5,74
AD-953845.1	49, 96	25, 03	37,73	5, 40	51,07	4,49	71,53	4,38
AD-953853.1	17,30	1,56	22, 03	4, 16	37,46	4, 85	62,29	9,25
AD-953767.1	24,93	5,50	28,42	10,66	40,33	3,22	69,76	2,61
AD-953775.1	45,40	10, 62	36, 34	9,82	73,68	7,21	102,63	7, 31
AD-953783.1	29, 99	12,53	29,51	4,63	49,16	6, 13	80,74	6, 86
AD-953791.1	30,97	8,17	29,31	7,02	46, 06	7, 18	74,93	6, 54
AD-953799.1	32,72	4,42	31,33	1,95	54,01	3, 60	86, 02	6, 50
AD-953807.1	37,52	7,06	37,17	3,09	55,11	2,71	82,01	4,66
AD-953822.1	33,78	5, 99	30, 78	3,36	46, 16	8,11	69,15	2,45
AD-953830.1	34,73	3,76	31,58	2,53	41,37	0,94	66,10	6, 80
AD-953838.1	33,55	9,39	34,52	2,10	49,15	2, 33	86,79	............ 3,75
AD-953846.1	33,45	7,53	33, 66	5,78	50,46	4,49	78,12	13, 11
AD-953854.1	23,08	2,75	19, 69	3,46	27,90	1, 19	48,41	6, 99
AD-953768.1	26, 98	4,47	27,38	10,87	33,82	3, 92	45,54	4,57
AD-953776.1	39,69	16, 74	31, 10	7,2 8	54,45	2,97	90,09	8, 42
AD-953784.1	29,34	10, 82	24,02	5,30	40,23	2, 64	61,39	5, 18
AD-953792.1	31,76	9,30	29, 07	4,26	37,11	3,03	56,21	8,23
AD-953800.1	29,00	3, 03	28,36	1,20	35,08	3, 37	55,13	4, 63
AD-953808.1	31,85	5, 96	28,41	1,27	40,18	3, 14	60,87	3,28
AD-953815.1	35,68	6, 34	33, 39	1,73	56, 62	1, 49	89,20	2, 68
AD-953823.1	47,61	8,60	43,41	7,31	76,73	6,34	105,86	12,49
AD-953831.1	33,88	4,75	29, 70	2,85	51,07	2,83	87,65	1, 33
AD-953839.1	36, 98	6, 09	30, 68	4,56	43,56	4, 04	73,41	4, 37
AD-953847.1	36,41	2,21	28,52	3,20	37,39	4,16	50,12	2,49
AD-953855.1	17,03	0, 92	20,33	2,28	31,95	1, 93	50,61	5,00
AD-953769.1	20,41	6, 91	19,71	9,17	31,58	2, 32	36,59	3,40
AD-953777.1	2 7,72	11,77	25,22	7,75	41,72	3, 97	70,38	3,27
AD-953785.1	30,05	8,76	25, 46	3,08	47,74	2,90	81,22	2, 03

- 128 048552

AD-953793.1	32,70	14,69	26, 09	4,10	45,08	5,84	70,67	4,24
AD-953801.1	38,99	5,2 9	35, 1 3	6,56	41,40	2,07	60,29	1,63
AD-953809.1	28,15	2,21	26, 23	3,63	40,42	2,30	54,00	6, 94
AD-953816.1	28,53	4, 61	25,41	3,81	36, 82	2,32	54,76	2, 99
AD-953824.1	30,25	1, 84	30,25	1,56	58,47	3,40	80,60	4,45
AD-953832.1	43,14	6,36	40, 76	5,26	72,55	2,64	92,56	7,75
AD-953840.1	30, 53	5,72	28, 62	1,53	40,53	1,46	67,24	4, 83
AD-953848.1	24,84	5,73	25, 53	2,19	28,59	3, 67	43,01	1, 45
AD-953856.1	24,53	4,30	32, 92	13,93	40,47	4,05	64,17	6,57
AD-953770.1	24,22	4,79	24,71	11,20	33, 60	2,40	49,01	2, 65
AD-953778.1	25,28	9,47	20,21	6,37	33, 84	2,50	48,13	5, 65
AD-953786.1	26, 47	9,22	22,25	7,17	40,55	4,25	62,15	3,45
AD-953794.1	36, 49	20, 58	28,21	9,14	45,54	5, 69	67,37	2, 13
AD-953802.1	35, 57	5,56	25, 34	4,52	42,55	3,28	64,50	4,55
AD-953817.1	32,24	3, 60	26, 88	7,17	39,15	4,10	62,75	8, 52
AD-953825.1	38,84	3,96	35, 19	5,34	42,76	5,17	52,16	11, 63
AD-953833.1	25,14	4, 13	26, 42	6,33	38,39	5,09	50,29	8,28
AD-953841.1	29, 86	1,31	31,23	3,65	53,57	9,16	66,57	2,48
AD-953849.1	22,59	4, 11	22, 30	7,94	27,51	5,06	37,40	3, 16

Таблица 11

Немодифицированные последовательности смысловых и антисмысловых цепей дцРНК средств к хакгтингтину (HTT)

ID дуплекса	Смысловая последовательность 5’->3'	SEQ ID NO:	Диапазон в NM 002111.8	Антисмысл ов ая последовательность 5'—>3’	SEQ ID NO:	Диапазон в NM 002111.8
AD-953943.1	AGCUAC CAAGAAAGACCGUGA	1784	430-450	UCACGGTCUUUCUUGGUAGCUGA	2574	428-450
AD-953944.1	CUACCAAGAAAGACC GUGUGA	1794	432-452	UCACACGGUCUUUCUUGGUAGCU	1955	430-452
AD-953945.1	UACCAAGAAAGACCGUGUGAA	2514	433-453	UUCACACGGUCUUUCUUGGUAGC	2575	431-453
AD-953946.1	CAUUGU CUGACAAUAUGU GAA	119	455-475	UUCACATAUUGU CAGACAAUGAU	320	453-475
AD-953947.1	AAUGCCUCAACAAAGUUAUCA	1826	597-617	UGAUAACUUUGUUGAGGCAUUCG	1988	595-617
AD-953948.1	UCAACAAAGUUAUCAAAGCUA	2515	603-623	UAGCUUTGAUAACUUUGUUGAGG	2576	601-623
AD-953949.1	CAACAAAGUUAUCAAAGCUUA	2516	604-624	UAAGCUTUGAUAACUUUGUUGAG	2577	602-624
AD-953950.1	GCUUUGAUGGAUUCUAAUCUA	1847	620-640	UAGAUUAGAAU С CAU CAAAGCUU	2010	618-640
AD-953951.1	UUGAUGGAUUCUAAUCUUCCA	161	623-643	UGGAAGAUUAGAAUCCAUCAAAG	362	621-643
AD-953952.1	AUGGAUUCUAAUCUUCCAAGA	2517	626-646	и CUU GGAAGAUUAGAAUC CAU СА	2578	624-646
AD-953953.1	GAUUCUAAUCUUCCAAGGUUA	146	629-649	UAACCUTGGAAGAUUAGAAUCCA	347	627-649
AD-953954.1	AUU CUAAUCUUСCAAGGUUAA	1785	630-650	UUAACCTUGGAAGAUUAGAAUCC	2579	628-650
AD-953955.1	UUCUAAUCUUCCAAGGUUACA	191	631-651	U GUAAC CUU G GAAGAUUAGAAU С	392	629-651
AD-953956.1	UUC CAAGGUUACAGCUCGAGA	1795	639-659	UCUCGAGCUGUAACCUUGGAAGA	1956	637-659
AD-953957.1	UGUUCCCAAAAUUAUGGCUUA	2518	844-864	UAAGCCAUAAUUUUGGGAACAGC	2580	842-864
AD-953958.1	AGGCCUUCAUAGCGAACCUGA	1827	909-929	UCAGGUTCGCUAUGAAGGCCUUU	2581	907-929
AD-953959.1	CCAGGUUUAUGAACUGACGUA	2519	1216-1236	UAC GU С AGUU CAUAAAC CU GGAC	2582	1214-1236
AD-953960.1	CAGGUUUAUGAACUGACGUUA	158	1217-1237	UAAC GU CAGUU CAUAAAC CUGGA	359	1215-1237
AD-953961.1	AGGUUUAUGAACUGACGUUAA	1786	1218-1238	UUAACGTCAGUUCAUAAACCUGG	2583	1216-1238
AD-953962.1	GUUUAU GAACUGACGUUACAA	2520	1220-1240	UUGUAACGUCAGUUCAUAAACCU	2584	1218-1240
AD-953963.1	UUUAUGAACUGACGUUACAUA	1807	1221-1241	UAU GUAACGU CAGUU CAUAAAC С	1968	1219-1241
AD-953964.1	ACUGACGUUACAUCAUACACA	129	1228-1248	U GU GUAT GAU GUAAC GUCAGUU С	330	1226-1248
AD-953965.1	CAGCACCAAGACCACAAUGUA	1816	1247-1267	UACAUUGUGGUCUUGGUGCUGUG	1978	1245-1267
AD-953966.1	GCACCAAGACCACAAUGUUGA	1828	1249-1269	UCAACATUGUGGUCUUGGUGCUG	2585	1247-1269
AD-953967.1	GCAGCAGCU CUU CAGAACGCA	2521	1291-1311	UGCGUUCUGAAGAGCUGCUGCAA	2586	1289-1311
AD-953968.1	GAGUAUUGUGGAACUUAUAGA	1859	1405-1425	U CUAUAAGUU C CACAAUACUC С C	2023	1403-1425
AD-953969.1	AGUAUUGUGGAACUUAUAGCA	1787	1406-1426	U GCUAUAAGUU C CACAAUACU С C	1948	1404-1426
AD-953970.1	GUAUUGUGGAACUUAUAGCUA	1797	1407-1427	UAGCUATAAGUUCCACAAUACUC	2587	1405-1427
AD-953971.1	UGGAGGAUGACU CUGAAUCGA	1829	1503-1523	U CGAUU CAGAGU CAU C CU C CAAG	1991	1501-1523
AD-953972.1	GAGGAUGACUCUGAAUCGAGA	1839	1505-1525	UCUCGATUCAGAGUCAUCCUCCA	2588	1503-1525
AD-953973.1	AGGAUGACUCUGAAUCGAGAA	1850	1506-1526	UUCU CGAUU CAGAGU CAU C CU С C	2013	1504-1526
AD-953974.1	GGAUGACUCUGAAUCGAGAUA	1860	1507-1527	UAU CUC GAUU CAGAGU CAU C CU C	2024	1505-1527
AD-953975.1	GACUCUGAAUCGAGAUCGGAA	1788	1511-1531	UUCCGATCUCGAUUCAGAGUCAU	2589	1509-1531

129 048552

AD-953976.1	ACU CUGAAU C GAGAU C GGAUA	1798	1512-1532	UAUCCGAUCUCGAUUCAGAGUCA	1959	1510-1532
AD-953977.1	CUCUGAAUCGAGAUCGGAUGA	1809	1513-1533	UCAUCCGAUCUCGAUUCAGAGUC	1970	1511-1533
AD-953978.1	UCUGAAUCGAGAUCGGAUGUA	2522	1514-1534	UACAUCCGAUCUCGAUUCAGAGU	2590	1512-1534
AD-953979.1	UUCU GAAAUU GUGUUAGACGA	1818	1885-1905	UCGUCUAACACAAUUUCAGAACU	1980	1883-1905
AD-953980.1	U CU GAAAUU GUGUUAGACGGA	1830	1886-1906	UCCGUCTAACACAAUUUCAGAAC	2591	1884-1906
AD-953981.1	CUGAAAUUGUGUUAGACGGUA	165	1887-1907	UAC C GU CUAACACAAUUU CAGAA	366	1885-1907
AD-953982.1	UGAAAUUGUGUUAGAC GGUAA	1851	1888-1908	UUACCGTCUAACACAAUUUCAGA	2592	1886-1908
AD-953983.1	GAAAUU GUGUUAGAC GGUACA	1861	1889-1909	UGUACCGUCUAACACAAUUUCAG	2025	1887-1909
AD-953984.1	C GGUAC C GACAACCAGUAUUA	2523	1903-1923	UAAUACTGGUUGUCGGUACCGUC	2593	1901-1923
AD-953985.1	ACAGCAGUGUUGAUAAAUUUA	1789	2073-2093	UAAAUUTAU CAACACU GCU GU CA	2594	2071-2093
AD-953986.1	CCUCUUGUCCAUUGUGUCCGA	1819	2189-2209	UCGGACACAAUGGACAAGAGGUG	1981	2187-2209
AD-953987.1	UCCGCCUUUUAUCUGCUUCGA	1840	2205-2225	UCGAAGCAGAUAAAAGGCGGACA	2003	2203-2225
AD-953988.1	CCGCCUUUUAUCUGCUUCGUA	1852	2206-2226	UACGAAGCAGAUAAAAGGCGGAC	2015	2204-2226
AD-953989.1	C GC CUUUUAU CU G CUU CGUUA	1790	2207-2227	UAACGAAGCAGAUAAAAGGCGGA	1951	2205-2227
AD-953990.1	CAAACU CUAUAAAGUU CCU CA	2524	2347-2367	UGAGGAACUUUAUAGAGUUUGCU	2595	2345-2367
AD-953991.1	UCUAUAAAGUUCCUCUUGACA	181	2352-2372	UGUCAAGAGGAACUUUAUAGAGU	382	2350-2372
AD-953992.1	CAU CUU GAACUACAU C GAU CA	1811	2407-2427	UGAUCGAUGUAGUUCAAGAUGUC	1972	2405-2427
AD-953993.1	AUCUUGAACUACAUCGAUCAA	2525	2408-2428	UUGAUC GAU GUAGUU CAAGAU GU	2596	2406-2428
AD-953994.1	UCUUGAACUACAUCGAUCAUA	2526	2409-2429	UAU GAU C GAU GUAGUU CAAGAU G	2597	2407-2429
AD-953995.1	CUU GAACUACAU C GAU CAU GA	1820	2410-2430	U CAU GAT CGAUGUAGU UCAAGAU	2598	2408-2430
AD-953996.1	UUGAACUACAUCGAUCAUGGA	211	2411-2431	UCCAUGAUCGAUGUAGUUCAAGA	412	2409-2431
AD-953997.1	GAACUACAU C GAU CAU GGAGA	1841	2413-2433	UCUCCATGAUCGAUGUAGUUCAA	2599	2411-2433
AD-953998.1	UUUGGCGGAUUGCAUUCCUUA	1862	2560-2580	UAAGGAAUGCAAUCCGCCAAAGA	2026	2558-2580
AD-953999.1	UUGGCGGAUUGCAUUCCUUUA	2527	2561-2581	UAAAGGAAUGCAAUCCGCCAAAG	2600	2559-2581
AD-954000.1	GCUACAGUGAGUUAGGACUGA	2528	2673-2693	U CAGU C CUAACU CACU GUAGCU G	2601	2671-2693
AD-954001.1	CUCU GAG GAACAGUU C CUAUA	2529	2715-2735	UAUAGGAACU GUU CCU CAGAGU C	2602	2713-2735
AD-954002.1	CUGAGGAACAGUUCCUAUUGA	1791	2717-2737	UCAAUAGGAACU GUU C CU CAGAG	1952	2715-2737
AD-954003.1	U GAG GAACAGUU C CUAUU G GA	1800	2718-2738	UCCAAUAGGAACUGUUCCUCAGA	1961	2716-2738
AD-954004.1	GAGGAACAGUUCCUAUUGGCA	2530	2719-2739	UGCCAATAGGAACUGUUCCUCAG	2603	2717-2739
AD-954005.1	GAGUGCUCAAUAAUGUUGUCA	1832	2868-2888	U GACAACAUUAUUGAGCACUCGU	1994	2866-2888
AD-954006.1	GCCUCCAUCUCAUUUCUCCGA	1842	3061-3081	UCGGAGAAAUGAGAUGGAGGCUG	2005	3059-3081
AD-954007.1	C CU C CAU CU CAUUUCU CC GUA	1854	3062-3082	UACGGAGAAAUGAGAUGGAGGCU	2017	3060-3082
AD-954008.1	CUCCAUCUCAUUUCUCCGUCA	1863	3063-3083	UGACGGAGAAAUGAGAUGGAGGC	2027	3061-3083
AD-954009.1	U CU С C GU CAG CACAAUAACCA	1801	3075-3095	UGGUUATUGUGCUGACGGAGAAA	2604	3073-3095
AD-954010.1	CUCCGUCAGCACAAUAACCAA	2531	3076-3096	UUGGUUAUUGUGCUGACGGAGAA	2605	3074-3096
AD-954011.1	UCCGUCAGCACAAUAACCAGA	1812	3077-3097	UCUGGUTAUUGUGCUGACGGAGA	2606	3075-3097
AD-954012.1	AGAG GCUAUAAC CUACUAC CA	2532	3104-3124	UGGUAGTAGGUUAUAGCCUCUAU	2607	3102-3124
AD-954013.1	AC CUACUAC CAAG CAUAACAA	2533	3114-3134	UUGUUATGCUUGGUAGUAGGUUA	2608	3112-3134
AD-954014.1	AAC CUUU CAAGAGUUAUU GCA	1822	3152-3172	UGCAAUAACUCUUGAAAGGUUAU	1984	3150-3172
AD-954015.1	AGUUUGCAUUUGGAGUUUAGA	1833	3262-3282	UCUAAACUCCAAAUGCAAACUGG	1995	3260-3282
AD-954016.1	CAGAU GAGU CU AG GAAGAG C A	2534	3315-3335	UGCUCUTCCUAGACUCAUCUGAG	2609	3313-3335
AD-954017.1	GUCUAGGAAGAGCUGUACCGA	1855	3322-3342	UCGGUACAGCUCUUCCUAGACUC	2018	3320-3342
AD-954018.1	UAGGAAGAGCUGUACCGUUGA	1792	3325-3345	UCAACGGUACAGCUCUUCCUAGA	1953	3323-3345
AD-954019.1	GUCAGCUUGGUUCCCAUUGGA	1823	3376-3396	UCCAAUGGGAACCAAGCUGACGA	1985	3374-3396
AD-954020.1	GGCCGGAAACUUGCUUGCAGA	1856	3427-3447	UCUGCAAGCAAGUUUCCGGCCAA	2019	3425-3447
AD-954021.1	CUUCUCUAAGUCCCAUCCGAA	1865	3678-3698	UUCGGATGGGACUUAGAGAAGGG	2610	3676-3698
AD-954022.1	GAGAAC AAG CAU CU GUAC C GA	1803	3723-3743	UCGGUACAGAUGCUUGUUCUCCU	1964	3721-3743
AD-954023.1	AACAAGCAUCUGUACCGUUGA	2535	3726-3746	UCAACGGUACAGAUGCUUGUUCU	2611	3724-3746
AD-954024.1	AGCAUCUGUACCGUUGAGUCA	2536	3730-3750	UGACUCAACGGUACAGAUGCUUG	2612	3728-3750
AD-954025.1	G CAG CUU CUAGACAAU CU GAA	2537	3773-3793	UUCAGATUGUCUAGAAGCUGCAC	2613	3771-3793
AD-954026.1	U CUAGACAAU CU GAUACCU CA	148	3779-3799	UGAGGUAUCAGAUUGUCUAGAAG	349	3777-3799
AD-954027.1	U CAG GU C CU GUUACAACAAGA	2538	3797-3817	UCUUGUTGUAACAGGACCUGAGG	2614	3795-3817
AD-954028.1	G GU C CU GUUACAACAAGUAAA	210	3800-3820	UUUACUTGUUGUAACAGGACCUG	411	3798-3820
AD-954029.1	CAAGUAAAU CCU CAU CACU GA	2539	3813-3833	UCAGUGAUGAGGAUUUACUUGUU	2615	3811-3833

130 048552

AD-954030.1	UUUCUAUCAUCUUCCUUCAUA	172	3838-3858	UAU GAAGGAAGAUGAUAGAAACU	373	3836-3858
AD-954031.1	UUCAUACCUCAAACUGCAUGA	2540	3853-3873	U CAU GCAGUUUGAGGUAU GAAG G	2616	3851-3873
AD-954032.1	ACCUCAAACUGCAUGAUGUCA	2541	3858-3878	U GACAU CAU G CAGUUU GAG GUAU	2617	3856-3878
AD-954033.1	CAGGACAUUGGGAAGUGUGUA	2542	4001-4021	UACACACUUCCCAAUGUCCUGCA	2618	3999-4021
AD-954034.1	CCUGAAAUCCUGCUUUAGUCA	1824	4039-4059	UGACUAAAGCAGGAUUUCAGGUA	1986	4037-4059
AD-954035.1	CUGAAAUCCUGCUUUAGUCGA	1835	4040-4060	UCGACUAAAGCAGGAUUUCAGGU	1997	4038-4060
AD-954036.1	GAAAUCCUGCUUUAGUCGAGA	1845	4042-4062	UCUCGACUAAAGCAGGAUUUCAG	2008	4040-4062
AD-954037.1	AAUCCUGCUUUAGUCGAGAAA	2543	4044-4064	UUUCUCGACUAAAGCAGGAUUUC	2619	4042-4064
AD-954038.1	UUUAGUCGAGAACCAAUGAUA	1857	4052-4072	UAUCAUTGGUUCUCGACUAAAGC	2620	4050-4072
AD-954039.1	UUAGUCGAGAACCAAUGAUGA	1866	4053-4073	UCAUCATUGGUUCUCGACUAAAG	2621	4051-4073
AD-954040.1	GAUGGCAACUGUUUGUGUUCA	2544	4069-4089	U GAAC ACAAAC AGUU G С C AU C AU	2622	4067-4089
AD-954041.1	GAGUGUCACAAAGAACCGUGA	1804	4369-4389	UCACGGTUCUUUGUGACACUCGU	2623	4367-4389
AD-954042.1	AGUGUCACAAAGAACCGUGCA	2545	4370-4390	U GCACGGUU CUUU GU GACACU C G	2624	4368-4390
AD-954043.1	UGCAGAUAAGAAUGCUAUUCA	111	4387-4407	U GAAUAG CAUUCUUAU CU G CAC G	312	4385-4407
AD-954044.1	AGAAUGCUAUUCAUAAUCACA	115	4395-4415	UGU GAU T AU GAAUAG CAUU CUUA	316	4393-4415
AD-954045.1	GCUAUU CAUAAU CACAUU CGA	1846	4400-4420	UCGAAUGUGAUUAUGAAUAGCAU	2009	4398-4420
AD-954046.1	AUCACAUUCGUUUGUUUGAAA	1717	4410-4430	UUU CAAACAAAC GAAU GU GAUUA	1878	4408-4430
AD-954047.1	UGUUUGAACCUCUUGUUAUAA	127	4422-4442	UUAUAACAAGAGGUUCAAACAAA	328	4420-4442
AD-954048.1	GUUUGAACCUCUUGUUAUAAA	123	4423-4443	UUUAUAACAAGAG GUU CAAACAA	324	4421-4443
AD-954049.1	UUU GAACCU CUU GUUAUAAAA	122	4424-4444	UUUUAUAACAAGAGGUUCAAACA	323	4422-4444
AD-954050.1	GCUUUAAAACAGUACACGACA	2546	4445-4465	U GU C GU GUACUGUUUUAAAGCUU	2625	4443-4465
AD-954051.1	AGCUGGUUCAGUUACGGGUUA	1766	4512-4532	UAAC CC GUAACU GAAC CAG CU G C	1927	4510-4532
AD-954052.1	GCUGGUUCAGUUACGGGUUAA	2547	4513-4533	UUAACСCGUAACUGAACCAGCUG	2626	4511-4533
AD-954053.1	UGGUUCAGUUAC GGGUUAAUA	2548	4515-4535	UAUUAAC С C GUAACU GAAC CAG C	2627	4513-4535
AD-954054.1	GUUCAGUUACGGGUUAAUUAA	1775	4517-4537	UUAAUUAACCCGUAACUGAACCA	1936	4515-4537
AD-954055.1	CAGUUACGGGUUAAUUACUGA	1718	4520-4540	U CAGUAAUUAAC C CGUAACUGAA	1879	4518-4540
AD-954056.1	UUACGGGUUAAUUACUGUCUA	2549	4523-4543	UAGACAGUAAUUAAC C CGUAACU	2628	4521-4543
AD-954057.1	UGGAUU CAGAUCAGGUGUUUA	131	4545-4565	UAAACAC CU GAU CUGAAU C CAGA	332	4543-4565
AD-954058.1	UAUGAACGCUAUCAUUCAAAA	196	4667-4687	UUUUGAAUGAUAGCGUUCAUAAG	397	4665-4687
AD-954059.1	GCGACUGUCUCGACAGAUAGA	2550	4963-4983	U CUAUCT GU C GAGACAGU C GCUU	2629	4961-4983
AD-954060.1	CGACUGUCUCGACAGAUAGCA	2551	4964-4984	UGCUAUCUGUCGAGACAGUCGCU	2630	4962-4984
AD-954061.1	GACUGUCUCGACAGAUAGCUA	1776	4965-4985	UAGCUATCUGUCGAGACAGUCGC	2631	4963-4985
AD-954062.1	ACU GUCUCGACAGAUAGCUGA	1709	4966-4986	U CAG CUAU CU GU C GAGACAGU C G	1869	4964-4986
AD-954063.1	CCCAAUGUUAGCCAAACAGCA	2552	4996-5016	UGCUGUTUGGCUAACAUUGGGAG	2632	4994-5016
AD-954065.1	CACAUUGACUCUCAUGAAGCA	2553	5021-5041	UGCUUCAUGAGAGUCAAUGUGCA	2633	5019-5041
AD-954066.1	GCCCUUGGAGUGUUAAAUACA	1729	5039-5059	UGUAUUTAACACUCCAAGGGCUU	2634	5037-5059
AD-954067.1	ACAUGCUUUUACGGAGUAUGA	1748	5100-5120	UCAUACTCCGUAAAAGCAUGUCU	2635	5098-5120
AD-954068.1	UUUUAC GGAGUAUGUUCGUCA	1768	5106-5126	U GAC GAACAUACU С C GUAAAAG C	1929	5104-5126
AD-954069.1	UUUACGGAGUAUGUUCGUCAA	1777	5107-5127	UUGACGAACAUACUCCGUAAAAG	1938	5105-5127
AD-954070.1	GAGCACUGUUCAACUGUGGAA	2554	5149-5169	UUCCACAGUUGAACAGUGCUCAC	2636	5147-5169
AD-954071.1	AAGAUAUUGUUCUUUCUCGUA	113	5217-5237	UAC GAGAAAGAACAAUAU CUU CA	314	5215-5237
AD-954072.1	GAUAUU GUU CUUUCUCGUAUA	1739	5219-5239	UAUACGAGAAAGAACAAUAUCUU	1900	5217-5239
AD-954073.1	UUGUUCUUUCUCGUAUUCAGA	1749	5223-5243	U CU GAATAC GAGAAAGAACAAUA	2637	5221-5243
AD-954074.1	UGUUCUUUCUCGUAUUCAGGA	125	5224-5244	U C CU GAAUAC GAGAAAGAACAAU	326	5222-5244
AD-954075.1	AUUUUCAAGGUUUCUAUUACA	137	5368-5388	U GUAAUAGAAAC CUU GAAAAU GU	338	5366-5388
AD-954076.1	GUGAGCAGCAACAUACUUUCA	2555	5445-5465	U GAAAGTAU GUUGCUGCU CACU C	2638	5443-5465
AD-954077.1	GCAACAUACUUUCUAUUGCCA	187	5452-5472	U GGCAATAGAAAGUAUGUUGCUG	388	5450-5472
AD-954078.1	AUCUUCAAGUCUGGAAUGUUA	1721	5507-5527	UAACAUTCCAGACUUGAAGAUGU	2639	5505-5527
AD-954079.1	CUGCUUGUCAACCACACCGAA	2556	5672-5692	UUCGGUGUGGUUGACAAGCAGCA	2640	5670-5692
AD-954080.1	UCCGAGCACUUAACGUGGCUA	2557	5888-5908	UAGCCACGUUAAGUGCUCGGAGU	2641	5886-5908
AD-954081.1	CCUCCAGUACAGGACUUCAUA	2558	5951-5971	UAUGAAGUCCUGUACUGGAGGCU	2642	5949-5971
AD-954082.1	CAGGCAAUUCAGUCU CGUUGA	1751	6014-6034	UCAACGAGACUGAAUUGCCUGGA	1912	6012-6034
AD-954083.1	AGGCAAUUCAGUCUCGUUGUA	1760	6015-6035	UACAACGAGACUGAAUUGCCUGG	1921	6013-6035
AD-954084.1	GGCAAUUCAGUCUCGUUGUGA	1770	6016-6036	U CACAAC GAGACU GAAUU G C CU G	1931	6014-6036

- 131 048552

AD-954085.1	GCAAUUCAGUCUCGUUGUGAA	1712	6017-6037	UUCACAACGAGACUGAAUUGCCU	1873	6015-6037
AD-954086.1	CAAUUCAGUCUCGUUGUGAAA	167	6018-6038	UUUCACAACGAGACUGAAUUGСC	368	6016-6038
AD-954087.1	AUGGUCGACAUCCUUGCUUGA	1723	6170-6190	UCAAGCAAGGAUGUCGACCAUGC	1884	6168-6190
AD-954088.1	GGUCGACAUCCUUGCUUGUCA	2559	6172-6192	UGACAAGCAAGGAUGUCGACCAU	2643	6170-6192
AD-954089.1	GUCGACAUCCUUGCUUGUCGA	1732	6173-6193	UCGACAAGCAAGGAUGUCGACCA	1893	6171-6193
АБ-954090.1	CUGGACAGGUUUCGUCUCUCA	2560	6326-6346	UGAGAGACGAAACCUGUCCAGCA	2644	6324-6346
AD-954091.1	CAUGCAAGACUCACUUAGUCA	1742	6349-6369	U GACUAAGUGAGUCUUGCAU GGU	1903	6347-6369
AD-954092.1	AU GCAAGACUCACUUAGUCCA	1752	6350-6370	UGGACUAAGUGAGUCUUGCAUGG	1913	6348-6370
AD-954093.1	UGUCACUGGAAACAGUGAGUA	2561	6414-6434	UACUCACUGUUUCCAGUGACACG	2645	6412-6434
AD-954094.1	CACUGGAAACAGUGAGUCCGA	1761	6417-6437	UCGGACTCACUGUUUCCAGUGAC	2646	6415-6437
AD-954095.1	GCUGGUGAAUCGGAUUCCUGA	1780	6514-6534	UCAGGAAUCCGAUUCACCAGCUC	1941	6512-6534
AD-954096.1	AACUCGGAGUUCAACCUAAGA	2562	6560-6580	UCUUAGGUUGAACUCCGAGUUCA	2647	6558-6580
AD-954097.1	ACUCGGAGUUCAACCUAAGCA	2563	6561-6581	UGCUUAGGUUGAACUCCGAGUUC	2648	6559-6581
AD-954098.1	CUCGGAGUUCAACCUAAGCCA	2564	6562-6582	UGGCUUAGGUUGAACUCCGAGUU	2649	6560-6582
AD-954099.1	CUGGAGCAAGUUGAAUGAUCA	2565	6754-6774	U GAU CATU CAACUUGCUCCAGUA	2650	6752-6774
AD-954100.1	AGAGCAGCUUCUUAGUCCAGA	2566	7120-7140	UCUGGACUAAGAAGCUGCUCUCC	2651	7118-7140
AD-954101.1	CUUGUCAACAGCUACACACGA	2567	7361-7381	UCGUGUGUAGCUGUUGACAAGGG	2652	7359-7381
AD-954102.1	UCAACAGCUACACACGUGUGA	1781	7365-7385	UCACACGUGUGUAGCUGUUGACA	1942	7363-7385
AD-954103.1	CAACAGCUACACACGUGUGCA	1714	7366-7386	UGCACACGUGUGUAGCUGUUGAC	1875	7364-7386
AD-954104.1	CUUUAAGGAGUUCAUCUACCA	2568	7486-7506	UGGUAGAUGAACUCCUUAAAGAC	2653	7484-7506
АБ-954105.1	GGACCAGUCGUACUCAGUUUA	2569	7524-7544	UAAACUGAGUACGACUGGUCCAG	2654	7522-7544
АБ-954106.1	GACCAGUCGUACUCAGUUUGA	1725	7525-7545	UCAAACTGAGUACGACUGGUC CA	2655	7523-7545
AD-954107.1	ACCAGUCGUACUCAGUUUGAA	1734	7526-7546	UUCAAACUGAGUACGACUGGUCC	1895	7524-7546
AD-954108.1	CCAGUCGUACUCAGUUUGAAA	1744	7527-7547	UUUCAAACUGAGUACGACUGGUC	1905	7525-7547
AD-954109.1	CAGUCGUACUCAGUUUGAAGA	120	7528-7548	U CUU CAAACUGAGUACGACU GGU	321	7526-7548
AD-954110,1	GACGCUGACAGAACUGCGAAA	1715	8317-8337	UUUCGCAGUUCUGUCAGCGUCAC	1876	8315-8337
AD-954111.1	ACGCUGACAGAACUGCGAAGA	1726	8318-8338	UCUUCGCAGUUCUGUCAGCGUCA	1887	8316-8338
AD-954112.1	UCAUUGAGAACUAUCCUCUGA	2570	8667-8687	UCAGAGGAUAGUUCUCAAUGAGG	2656	8665-8687
AD-954113.1	CGGCUGCUGACUUGUUUACGA	1764	9533-9553	UCGUAAACAAGUCAGCAGCCGGU	1925	9531-9553
AD-954114.1	GGCUGCUGACUUGUUUACGAA	1774	9534-9554	UUCGUAAACAAGUCAGCAGCCGG	1935	9532-9554
AD-954115.1	CUGCUGACUUGUUUACGAAAA	1783	9536-9556	UUUUCGTAAACAAGUCAGCAGCC	2657	9534-9556
AD-954116.1	UGCUGACUUGUUUACGAAAUA	2571	9537-9557	UAUUUCGUAAACAAGUCAGCAGC	2658	9535-9557
AD-954117.1	CUGACUUGUUUACGAAAUGUA	1716	9539-9559	UACAUUTCGUAAACAAGUCAGCA	2659	9537-9559
AD-954118.1	UGACUUGUUUACGAAAUGUCA	1727	9540-9560	UGACAUTUCGUAAACAAGUCAGC	2660	9538-9560
AD-954119.1	UAACGUAACUCUUUCUAUGCA	1736	10173-10193	UGCAUAGAAAGAGUUACGUUAAA	1897	10171-10193
AD-954120.1	CCGCUGACAUUUCCGUUGUAA	1765	10311-10331	UUACAACGGAAAUGUCAGCGGGU	1926	10309-10331
AD-954121.1	CUGACAUUUCCGUUGUACAUA	2572	10314-10334	UAUGUACAACGGAAAUGUCAGCG	2661	10312-10334
AD-954122.1	UCCGUUGUACAUGUUCCUGUA	2573	10322-10342	UACAGGAACAUGUACAACGGAAA	2662	10320-10342

Таблица 12

Модифицированные последовательности смысловых и антисмысловых цепей дцРНК средств к хангтингтину (HTT)

ID дуплекса	Смысловая последовательность 5'—>3'	SEQ ID NO:	Антисмысловая последовательность S'-^.3'	SEQ ID NO:	Последовательность м₽НКмишени 5'—>3 '	SEQ ID NO:
AD-953943.1	asgscua(Chd)CfaAfGfAfaagaccgugaL96	2116	VPusCfsacgg(Tgn)cuuucuUfgGfuagcusgsa	2734	UCAGCUACCAAGAAAGACCGUGU	2445
AD-953944.1	csusacc(Ahd)AfgAfAfAfgaccgugugaL96	2126	VPusCfsacac(Ggn)gucuuuCfuUfgguagscsu	2735	AGCUACCAAGAAAGACC GUGUGA	2450
AD-953945.1	usascca(Ahd)GfaAfAfGfaccgugugaaL96	2663	VPusUfscaca(Cgn)ggucuuUfcUfugguasgsc	2736	GCUACCAAGAAAGACCGUGUGAA	2913
AD-953946.1	csasuug(Uhd)CfuGfAfCfaauaugugaaL96	2148	VPusUfscaca(Tgn)auugucAfgAfcaaugsasu	2737	AUCAUUGUCUGACAAUAUGUGAA	925
AD-953947.1	asasugc (Chd) UfcAfAfCfaaaguuaucaL96	2160	VPusGfsauaa(Cgn)uuuguuGfaGfgcauuscsg	2738	C GAAU G C CU CAACAAAGUUAU CA	2479
AD-953948.1	uscsaac(Ahd)AfaGfUfUfaucaaagcuaL96	2664	VPusAf sgcuu(Tgn)gauaacUfuUfguugasgsg	2739	C CU CAACAAAGUUAU CAAAG CUU	922
AD-953949.1	csasaca(Ahd)AfgUfUfAfucaaagcuuaL96	2665	VPusAfsagcu(Tgn)ugauaaCfuUfuguugsasg	2740	CUCAACAAAGUUAU CAAAG CUUU	955
AD-953950.1	gs csuuu(Ghd)AfuGfGfAfuucuaaucuaL96	2183	VPusAfsgauu(Agn)gaauccAfuCfaaagcsusu	2741	AAG CUUU GAU G GAUU CU AAU CUU	946
AD-953951.1	ususgau(Ghd)GfaUfUfCfuaaucuuccaL96	2666	VPusGfsgaag(Agn)uuagaaUfcCfaucaasasg	2742	CUUUGAU GGAUUCUAAU CUUC CA	967
AD-953952.1	asusgga(Uhd)UfcUfAfAfucuuccaagaL96	2667	VPusCfsuugg(Agn)agauuaGfaAfuccauscsa	2743	UGAUGGAUUCUAAUCUUCCAAGG	985
AD-953953.1	gsasuuc(Uhd)AfaUfCfUfuccaagguuaL96	2195	VPusAf saccu(Tgn)ggaagaUfuAfgaaucscsa	2744	UGGAUUCUAAU CUU C CAAGGUUA	952

- 132 048552

AD-953954.1	asusucu(Abd)AfuCfUfUfccaagguuaaL96	2117	VPusUfsaacc(Tgn)uggaagAfuUfagaauscsc	2745	GGAUUCUAAUCUUCCAAGGUUAC	965
AD-953955.1	ususcua (Ahd)UfcUfUfCfcaagguuacaL96	2668	VPusGfsuaac(Cgn)uuggaaGfaUfuagaasusc	2746	GAUU CUAAU CUU C CAAG GUUACA	997
AD-953956.1	ususcca(Ahd)GfgUfUfAfcagcucgagaL96	2127	VPusCfsucga(Ggn)cuguaaCfcUfuggaasgsa	2747	UCUUCCAAGGUUACAGCUCGAGC	2451
AD-953957.1	usgsuuc(Chd)CfaAfAfAfuuauggcuuaL96	2669	VPusAfsagee(Agn)uaauuuUfgGfgaacasgsc	2748	GCUGUUCCCAAAAUUAUGGCUUC	977
AD-953958.1	asgsgcc(Uhd)UfcAfUfAfgcgaaccugaL96	2161	VPusCfsaggu(Tgn)egeuauGfaAfggccususu	2749	AAAGGCCUUCAUAGCGAACCUGA	2480
AD-953959.1	cscsagg(Uhd)UfuAfUfGfaacugacguaL96	2670	VPusAfsegue(Agn)guucauAfaAfccuggsasc	2750	GUCCAGGUUUAUGAACUGACGUU	974
AD-953960.1	csasggu(Uhd)UfaUfGfAfacugacguuaL96	2196	VPusAfsaegu(Cgn)aguucaUfaAfaccugsgsa	2751	U C CAG GUUUAU GAACU GAC GUUA	964
AD-953961.1	asgsguu(Uhd)AfuGfAfAfcugacguuaaL96	2118	VPusUfsaacg(Tgn)caguucAf uAfaaccusgsg	2752	CCAGGUUUAUGAACUGACGUUAC	991
AD-953962.1	gsusuua(Uhd)GfaAfCfUfgacguuacaaL96	2671	VPusUfsguaa(Cgn)gucaguUfcAfuaaacscsu	2753	AGGUUUAUGAACUGACGUUACAU	2914
AD-953963.1	ususuau(Ghd)AfaCfUfGfacguuacauaL96	2140	VPusAfsugua(Agn)cgucagUfuCfauaaascsc	2754	GGUUUAU GAACUGAC GUUACAUC	2462
AD-953964.1	ascsuga(Chd)GfuUfAfCfaucauacacaL96	2672	VPusGfsugua(Tgn)gauguaAfcGfucagususc	2755	GAACU GACGUUACAU CAUACACA	935
AD-953965.1	csasgca(Chd)CfaAfGfAfccacaauguaL96	2150	VPusAf scauu(Ggn)uggucuUfgGfugcugsusg	2756	CACAGCACCAAGACCACAAUGUU	2471
AD-953966.1	gscsacc(Ahd)AfgAfCfCfacaauguugaL96	2162	VPusCfsaaca(Tgn)ugugguCfuUfggugcsusg	2757	CAGCACCAAGACCACAAUGUUGU	2481
AD-953967.1	gscsagc(Ahd)GfcUfCfUfucagaacgcaL96	2673	VPusGfseguu(Cgn)ugaagaGfcUfgcugcsasa	2758	UUGCAGCAGCUCUUCAGAACGCC	2915
AD-953968.1	gsasgua(Uhd)UfgUfGfGfaacuuauagaL96	2197	VPusCfsuaua(Agn)guuccaCfaAfuacucscsc	2759	GGGAGUAUUGUGGAACUUAUAGC	998
AD-953969.1	asgsuau(Uhd)GfuGfGfAfacuuauagcaL96	2119	VPusGfscuau(Agn)aguuccAfcAfauacuscsc	2760	GGAGUAUUGUG GAACUUAUAG CU	2446
AD-953970.1	gsusauu(Ghd)UfgGfAfAfcuuauagcuaL96	2129	VPusAfsgcua(Tgn)aaguucCfaCfaauacsusc	2761	GAGUAUUGUGGAACUUAUAGCUG	2453
AD-953971.1	usgsgag(Ghd)AfuGfAfCfucugaaucgaL96	2163	VPusCfsgauu(Cgn)agagucAfuCfcuccasasg	2762	CUUGGAGGAUGACUCUGAAUCGA	2482
AD-953972.1	gsasgga(Uhd)GfaCfUfCfugaaucgagaL96	2174	VPusCfsucga(Tgn)ucagagUfcAfuccucscsa	2763	UGGAGGAUGACUCUGAAUCGAGA	2491
AD—953973.1	asgsgau(Ghd)AfcUfCfUfgaaucgagaaL96	2186	VPusUfscucg(Agn)uucagaGfuCfauccuscsc	2764	G GAGGAU GACU CU GAAU CGAGAU	2500
AD-953974.1	gsgsaug(Ahd)CfuCfUfGfaaucgagauaL96	2198	VPusAfsucuc(Ggn)auucagAfgUfcauccsusc	2765	GAGGAUGACUCUGAAUCGAGAUC	2507
AD-953975.1	gsascuc(Uhd)GfaAfUfCfgagaucggaaL96	2120	VPusUfsccga(Tgn)cucgauUfcAfgagucsasu	2766	AUGACUCUGAAUCGAGAUCGGAU	24 47
AD-953976.1	ascsucu(Ghd)AfaUfCfGfagaucggauaL96	2130	VPusAfsueeg(Agn)ucucgaUfuCfagaguscsa	2767	UGACUCUGAAUCGAGAUCGGAUG	1011
AD-953977.1	csuscug(Ahd)AfuCfGfAfgaucggaugaL96	2142	VPusCfsauce(Ggn)aucucgAfuUfcagagsusc	2768	GACUCUGAAUCGAGAUCGGAUGU	2464
AD-953978.1	uscsuga(Ahd)UfcGfAfGfaucggauguaL96	267 4	VPusAf scauc(Cgn)gaucucGfaUfucagasgsu	2769	ACUCUGAAUCGAGAUCGGAUGUC	1013
AD-953979.1	ususcug(Ahd)Af aUfUfGfuguuagacgaL96	2152	VPusCfsgucu(Agn)acacaaUfuUfcagaascsu	2770	AGUUCUGAAAUUGUGUUAGACGG	2473
AD-953980.1	uscsuga(Ahd)AfuUfGfUfguuagacggaL96	2164	VPusCfsegue(Tgn)aacacaAfuUfucagasasc	2771	GUU CU GAAAUU GU GUUAGACG GU	959
AD-953981.1	csusgaa(Ahd)UfuGfUfGfuuagacgguaL96	2175	VPusAfsccgu(Cgn)uaacacAfaUfuucagsasa	2772	UUCUGAAAUUGUGUUAGACGGUA	971
AD-953982.1	usgsaaa(Uhd)UfgUfGfUfuagacgguaaL96	2187	VPusUfsaeeg(Tgn)cuaacaCfaAfuuucasgsa	2773	UCU GAAAUU GU GUUAGACG GUAC	1003
AD-953983.1	gsasaau(Uhd)GfuGfUfUfagacgguacaL96	2199	VPusGfsua.ee (Ggn) ucuaacAf cAfauuucsasg	2774	CUGAAAUUGUGUUAGACGGUACC	2508
AD-953984.1	csgsgua(Chd)CfgAfCfAfaccaguauuaL96	2675	VPusAf sauac(Tgn)gguuguCfgGfuaccgsusc	2775	GAC GGUACCGACAACCAGUAUUU	2916
AD-953985.1	ascsagc(Ahd)GfuGfUfUfgauaaauuuaL96	2121	VPusAfsaauu(Tgn)aucaacAfcUfgcuguscsa	2776	UGACAGCAGUGUUGAUAAAUUUG	1015
AD-953986.1	cscsucu(Uhd)GfuCfCfAfuuguguccgaL96	2153	VPusCfsggac(Agn)caauggAfcAfagaggsusg	2777	CACCUCUUGUCCAUUGUGUCCGC	2474
AD-953987.1	uscscgc(Chd)UfuUfUfAfucugcuucgaL96	2176	VPusCfsgaag(Cgn)agauaaAfaGfgeggasesa	2778	UGUCCGCCUUUUAUCUGCUUCGU	2492
AD-953988.1	cscsgcc(Uhd)UfuUfAfUfcugcuucguaL96	2188	VPusAfscgaa(Ggn)cagauaAfaAfggeggsase	2779	GUCCGCCUUUUAUCUGCUUCGUU	2501
AD-953989.1	csgsccu(Uhd)UfuAfUfCfugcuucguuaL96	2122	VPusAfsaega(Agn)gcagauAfaAfaggegsgsa	2780	UCCGCCUUUUAUCUGCUUCGUUU	1001
AD-953990.1	csasaac(Uhd)CfuAfUfAfaaguuccucaL96	2676	VPusGfsagga(Agn)cuuuauAfgAfguuugscsu	2781	AGCAAACUCUAUAAAGUUCCUCU	918
AD-953991.1	uscsuau(Ahd)AfaGfUfUfccucuugacaL96	2132	VPusGfsucaa(Ggn)aggaacUfuUfauagasgsu	2782	ACU CUAU AAAGUUCCUCUU GACA	987
AD-953992.1	csasucu(Uhd)GfaAfCfUfacaucgaucaL96	2144	VPusGfsaucg(Agn)uguaguUfcAfagaugsusc	2783	GACAU CUU GAACUACAU C GAU CA	2466
AD-953993.1	asuscuu(Ghd)AfaCfUfAfcaucgaucaaL96	2677	VPusUfsgauc(Ggn)auguagUfuCfaagausgsu	2784	ACAUCUUGAACUACAUCGAUCAU	2917
AD-953994.1	uscsuug(Ahd)AfcUfAfCfaucgaucauaL96	2678	VPusAf sugau(Cgn)gauguaGfuUfcaagasusg	2785	CAUCUUGAACUACAUCGAUCAUG	2918
AD-953995.1	csusuga(Ahd)CfuAfCfAfucgaucaugaL96	2154	VPusCfsauga(Tgn)egauguAfgUfucaagsasu	2786	AUCUUGAACUACAUCGAUCAUGG	930
AD-953996.1	ususgaa(Chd)UfaCfAfUfcgaucauggaL96	2679	VPusCfscaug(Agn)uegaugUfaGfuucaasgsa	2787	UCUUGAACUACAUCGAUCAUGGA	1017
AD-953997.1	gsasacu(Ahd)CfaUfCfGfaucauggagaL96	2177	VPusCfsucca(Tgn)gauegaUfgUfaguucsasa	2788	UUGAACUACAUCGAUCAUGGAGA	2493
AD-953998.1	ususugg(Chd)GfgAfUfUfgcauuccuuaL96	2200	VPusAfsagga(Agn)ugcaauCfcGfccaaasgsa	2789	UCUUUGGCGGAUUGCAUUCCUUU	2509
AD-953999.1	ususggc(Ghd)GfaUfUfGfcauuccuuuaL96	2680	VPusAfsaagg(Agn)augcaaUfcCfgccaasasg	2790	CUUUGGCGGAUUGCAUUCCUUUG	2919
AD-954000.1	gscsuac(Ahd)GfuGfAfGfuuaggacugaL96	2681	VPusCfsaguc(Cgn)uaacucAfcUfguagcsusg	2791	CAG CU ACAGU GAGUU AG GACU G C	2920
AD-954001.1	csuscug(Ahd)GfgAfAfCfaguuccuauaL96	2682	VPusAf suagg(Agn)acuguuCfcUfcagagsusc	2792	GACUCUGAGGAACAGUUCCUAUU	1019
AD-954002.1	csusgag(Ghd)AfaCfAfGfuuccuauugaL96	2123	VPusCfsaaua(Ggn)gaacugUfuCfcucagsasg	2793	CUCUGAGGAACAGUUCCUAUUGG	1021
AD-954003.1	usgsagg(Ahd)AfcAfGfUfuccuauuggaL96	2133	VPusCfscaau(Agn)ggaacuGfuUfccucasgsa	2794	UCUGAGGAACAGUUCCUAUUGGC	2455
AD-954004.1	gsasgga(Ahd)CfaGfUfUfccuauuggcaL96	2683	VPusGfsccaa(Tgn)aggaacUfgUfuccucsasg	2795	CUGAGGAACAGUUCCUAUUGGCU	2921
AD-954005.1	gsasgug(Chd)UfcAfAfUfaauguugucaL96	2166	VPusGfsacaa(Cgn)auuauuGfaGfcacucsgsu	2796	ACGAGUGCUCAAUAAUGUUGUCA	2484
AD-954006.1	gscscue (Chd)AfuCfUfCfauuucuccgaL96	2178	VPusCfsggag(Agn)aaugagAfuGfgaggesusg	2797	CAGCCUCCAUCUCAUUUCUCCGU	2494
AD-954007.1	cscsucc(Ahd)UfcUfCfAfuuucuccguaL96	2190	VPusAfsegga(Ggn)aaaugaGfaUfggaggsesu	2798	AGCCUCCAUCUCAUUUCUCCGUC	2503
AD-954008.1	csuscca(Uhd)CfuCfAfUfuucuccgucaL96	2201	VPusGfsaegg(Agn)gaaaugAfgAfuggagsgsc	2799	GCCUCCAUCUCAUUUCUCCGUCA	2510
AD-954009.1	uscsucc(Ghd)UfcAfGfCfacaauaaccaL96	2134	VPusGfsguua(Tgn)ugugcuGfaCfggagasasa	2800	UUU CU С C GU CAG CACAAUAAC CA	2456

- 133 048552

AD-954010.1	csusccg(Uhd)CfaGfCfAfcaauaaccaaL96	2684	VPusUfsgguu(Agn)uugugcUfgAfcggagsasa	2801	UUCUCCGUCAGCACAAUAACCAG	995
AD-954011.1	uscscgu(Chd)AfgCfAfCfaauaaccagaL96	2145	VPusCfsuggu(Tgn)auugugCfuGfacggasgsa	2802	UCUCCGUCAGCACAAUAACCAGA	2467
AD-954012.1	asgsagg(Chd)UfaUfAfAfccuacuaccaL96	2 68 5	VPusGfsguag(Tgn)agguuaUfaGfccucusasu	2803	AUAGAGGCUAUAACCUACUACCA	2922
AD-954013.1	ascscua(Chd)UfaCfCfAfagcauaacaaL96	2686	VPusUfsguua(Tgn)gcuuggUfaGfuaggususa	2804	UAAC CUACU AC CAAG CAUAAC AG	1012
AD-954014.1	asasccu(Uhd)UfcAfAfGfaguuauugcaL96	2156	VPusGfscaau(Agn)acucuuGfaAfagguusasu	2805	AUAAC CUUU CAAGAGUUAUU GCA	2476
AD-954015.1	asgsuuu(Ghd)CfaUfUfUfggaguuuagaL96	2167	VPusCfsuaaa(Cgn)uccaaaUfgCfaaacusgsg	2806	CCAGUUUGCAUUUGGAGUUUAGG	2485
AD-954016.1	csasgau(Ghd)AfgUfCfUfaggaagagcaL96	2687	VPusGfscucu(Tgn)ccuagaCfuCfaucugsasg	2807	CUCAGAUGAGU CUAG GAAGAGCU	2923
AD-954017.1	gsuscua(Ghd)GfaAfGfAfgcuguaccgaL96	2191	VPusCfsggua(Cgn)agcucuUfcCfuagacsusc	2808	GAGUCUAGGAAGAGCUGUACCGU	2504
AD-954018.1	usasgga(Ahd)GfaGfCfUfguaccguugaL96	2124	VPusCfsaacg(Ggn)uacagcUfcUfuccuasgsa	2809	U CUAG GAAGAG CU GUAC C GUU G G	2448
AD-954019.1	gsuscag(Chd)UfuGfGfUfucccauuggaL96	2157	VPusCfscaau(Ggn)ggaaccAfaGfcugacsgsa	2810	UCGUCAGCUUGGUUCCCAUUGGA	2477
AD-954020.1	gsgsccg(Ghd)AfaAfCfUfugcuugcagaL96	2192	VPusCfsugca(Agn)gcaaguUfuCfcggccsasa	2811	UUGGCCGGAAACUUGCUUGCAGC	2505
AD-954021.1	csusucu(Chd)UfaAfGfUfcccauccgaaL96	2203	VPusUfscgga(Tgn)gggacuUfaGfagaagsgsg	2812	CCCUUCUCUAAGUCCCAUCCGAC	2512
AD-954022.1	gsasgaa(Chd)AfaGfCfAfucuguaccgaL96	2136	VPusCfsggua(Cgn)agaugcUfuGfuucucscsu	2813	AGGAGAACAAGCAUCUGUACCGU	2458
AD-954023.1	asascaa(Ghd)CfaUfCfUfguaccguugaL96	2688	VPusCfsaacg(Ggn)uacagaUfgCfuuguuscsu	2814	AGAACAAGCAUCUGUACCGUUGA	2924
AD-954024.1	asgscau(Chd)UfgUfAfCfcguugagucaL96	2689	VPusGfsacuc(Agn)acgguaCfaGfaugcususg	2815	CAAGCAUCUGUACCGUUGAGUCC	2925
AD-954025.1	gscsagc(Uhd)UfcUfAfGfacaaucugaaL96	2690	VPusUfscaga(Tgn)ugucuaGfaAfgcugcsasc	2816	GUGCAGCUUCUAGACAAUCUGAU	932
AD-954026.1	uscsuag(Ahd)CfaAfUfCfugauaccucaL96	2691	VPusGfsaggu(Agn)ucagauUfgUfcuagasasg	2817	CUU CU AG ACAAU CU GAU AC CU CA	954
AD-954027.1	uscsagg(Uhd)CfcUfGfUfuacaacaagaL96	2692	VPusCfsuugu(Tgn)guaacaGfgAfccugasgsg	2818	CCUCAGGUCCUGUUACAACAAGU	2926
AD-954028.1	gsgsucc(Uhd)GfuUfAfCfaacaaguaaaL96	2693	VPusUfsuacu(Tgn)guuguaAfcAfggaccsusg	2819	CAGGUCCUGUUACAACAAGUAAA	1016
AD-954029.1	csasagu(Ahd)AfaUfCfCfucaucacugaL96	2694	VPusCfsagug(Agn)ugaggaUfuUfacuugsusu	2820	AACAAGUAAAUCCUCAUCACUGG	966
AD-954030.1	ususucu(Ahd)UfcAfUfCfuuccuucauaL96	2695	VPusAfsugaa(Ggn)gaagauGfaUfagaaascsu	2821	A GUUUCUAU CAUCUU CCUU CAUA	978
AD-954031.1	ususcau(Ahd)CfcUfCfAfaacugcaugaL96	2696	VPusCfsaugc(Agn)guuugaGfgUfaugaasgsg	2822	CCUUCAUACCUCAAACUGCAUGA	2927
AD-954032.1	ascscuc(Ahd)AfaCfUfGfcaugaugucaL96	2697	VPusGf sacau (Cgn) augcagUfu'Ufgaggusasu	2823	AUACCUCAAACUGCAUGAUGUCC	2928
AD-954033.1	csasgga(Chd)AfuUfGfGfgaaguguguaL96	2698	VPusAfscaca(Cgn)uucccaAfuGfuccugscsa	2824	UGCAGGACAUUGGGAAGUGUGUU	2929
AD-954034.1	cscsuga(Ahd)AfuCfCfUfgcuuuagucaL96	2158	VPusGfsacua(Agn)agcaggAfuUfucaggsusa	2825	UACCUGAAAUCCUGCUUUAGUCG	924
AD-954035.1	csusgaa(Ahd)UfcCfUfGfcuuuagucgaL96	2169	VPusCfsgacu(Agn)aagcagGfaUfuucagsgsu	2826	ACCUGAAAUCCUGCUUUAGUCGA	2487
AD-954036.1	gsasaau(Chd)CfuGfCfUfuuagucgagaL96	2181	VPusCfsucga(Cgn)uaaagcAfgGfauuucsasg	2827	CUGAAAUCCUGCUUUAGUCGAGA	2497
AD-954037.1	asasucc(Uhd)GfcUfUfUfagucgagaaaL96	2699	VPusUfsucuc(Ggn)acuaaaGfcAfggauususc	2828	GAAAUCCUGCUUUAGUCGAGAAC	2930
AD-954038.1	ususuag(Uhd)CfgAfGfAfaccaaugauaL96	2193	VPusAf sucau(Tgn)gguucuCfgAfcuaaasgsc	2829	G CUUUAGUC GAGAAC CAAUGAUG	2506
AD-954039.1	ususagu(Chd)GfaGfAfAfccaaugaugaL96	2204	VPusCfsauca(Tgn)ugguucUfcGfacuaasasg	2830	CUUUAGUCGAGAACCAAUGAUGG	2513
AD-954040.1	gsasugg (Chd)AfaCfUfGfuuuguguucaL96	2700	VPusGfsaaca(Cgn)aaacagUfuGfccaucsasu	2831	AUGAUGGCAACUGUUUGUGUUCA	2931
AD-954041.1	gsasgug(Uhd)CfaCfAfAfagaaccgugaL96	2137	VPusCfsacgg(Tgn)ucuuugUfgAfcacucsgsu	2832	ACGAGUGUCACAAAGAACCGUGC	2459
AD-954042.1	asgsugu(Chd)AfcAfAfAfgaaccgugcaL96	2701	VPusGfscacg(Ggn)uucuuuGfuGfacacuscsg	2833	CGAGUGUCACAAAGAACCGUGCA	2932
AD-954043.1	usgscag(Ahd)UfaAfGfAfaugcuauucaL96	2702	VPusGfsaaua(Ggn)cauucuUfaUfcugcascsg	2834	C GU G C AGAUAAGAAUGCUAUUCA	917
AD-954044.1	asgsaau(Ghd)CfuAfUfUfcauaaucacaL96	2170	VPusGfsugau(Tgn)augaauAfgCfauucususa	2835	UAAGAAUGCUAUUCAUAAUCACA	921
AD-954045.1	gscsuau(Uhd)CfaUfAfAfucacauucgaL96	2182	VPusCfsgaau(Ggn)ugauuaUfgAfauagcsasu	2836	AUGCUAUUCAUAAUCACAUUCGU	988
AD-954046.1	asuscac(Ahd)UfuCfGfUfuuguuugaaaL96	2042	VPusUfsucaa(Agn)caaacgAfaUfgugaususa	2837	UAAUCACAUUC GUUU GUUU GAAC	2387
AD-954047.1	usgsuuu(Ghd)AfaCfCfUfcuuguuauaaL96	2053	VPusUfsauaa(Cgn)aagaggUfuCfaaacasasa	2838	UUUGUUUGAACCUCUUGUUAUAA	933
AD-954048.1	gsusuug(Ahd)AfcCfUfCfuuguuauaaaL96	2064	VPusUfsuaua(Agn)caagagGfuUfcaaacsasa	2839	UUGUUUGAACCUCUUGUUAUAAA	929
AD-954049.1	ususuga(Ahd)CfcUfCfUfuguuauaaaaL96	2075	VPusUfsuuau(Agn)acaagaGfgUfucaaascsa	2840	U GUUU GAAC CU CUU GUUAUAAAA	928
AD-954050.1	gscsuuu(Ahd)AfaAfCfAfguacacgacaL96	2703	VPusGfsucgu(Ggn)uacuguUfuUfaaagcsusu	2841	AAG CUUUAAAACAGUACACGACU	990
AD-954051.1	asgscug(Ghd)UfuCfAfGfuuacggguuaL96	2097	VPusAfsaccc(Ggn)uaacugAfaCfcagcusgsc	2842	GCAGCUGGUUCAGUUACGGGUUA	2429
AD-954052.1	gscsugg(Uhd)UfcAfGfUfuacggguuaaL96	2704	VPusUfsaacc(Cgn)guaacuGfaAfccagcsusg	2843	CAGCUGGUUCAGUUACGGGUUAA	2933
AD-954053.1	usgsguu(Chd)AfgUfUfAfcggguuaauaL96	2705	VPusAfsuuaa(Cgn)ccguaaCfuGfaaccasgsc	2844	GCUGGUUCAGUUACGGGUUAAUU	996
AD-954054.1	gsusuca(Ghd)UfuAfCfGfgguuaauuaaL96	2107	VPusUfsaauu(Agn)acccguAfaCfugaacscsa	2845	UGGUUCAGUUACGGGUUAAUUAC	957
AD-954055.1	csasguu(Ahd)CfgGfGfUfuaauuacugaL96	2043	VPusCfsagua(Agn)uuaaccCfgUfaacugsasa	2846	UU C AGUUAC G G GUUAAUUACU GU	2388
AD-954056.1	ususacg(Ghd)GfuUfAfAfuuacugucuaL96	2706	VPusAfsgaca(Ggn)uaauuaAfcCfcguaascsu	2847	AGUUACGGGUUAAUUACUGUCUU	2934
AD-954057.1	usgsgau(Uhd)CfaGfAfUfcagguguuuaL96	2707	VPusAfsaaca(Cgn)cugaucUfgAfauccasgsa	2848	UCUGGAUUCAGAUCAGGUGUUUA	937
AD-954058.1	usasuga(Ahd)CfgCfUfAfucauucaaaaL96	2708	VPusUfsuuga(Agn)ugauagCfgUfucauasasg	2849	CUUAUGAACGCUAUCAUUCAAAA	1002
AD-954059.1	gscsgac(Uhd)GfuCfUfCfgacagauagaL96	2709	VPusCfsuauc(Tgn)gucgagAfcAfgucgcsusu	2850	AAGCGACUGUCUCGACAGAUAGC	2935
AD-954060.1	csgsacu(Ghd)UfcUfCfGfacagauagcaL96	2710	VPusGfscuau(Cgn)ugucgaGfaCfagucgscsu	2851	AGCGACUGUCUCGACAGAUAGCU	2936
AD-954061.1	gsascug(Uhd)CfuCfGfAfcagauagcuaL96	2108	VPusAfsgcua(Tgn)cugucgAfgAfcagucsgsc	2852	GCGACUGUCUCGACAGAUAGCUG	2438
AD-954062.1	ascsugu(Chd)UfcGfAfCfagauagcugaL96	2033	VPusCfsagcu(Agn)ucugucGfaGfacaguscsg	2853	C GACU GU CU C G AC AG AU AG CU GA	2379
AD-954063.1	cscscaa(Uhd)GfuUfAfGfccaaacagcaL96	2711	VPusGfscugu(Tgn)uggcuaAfcAfuugggsasg	2854	CUCCCAAUGUUAGCCAAACAGCA	2937
AD-954065.1	csascau(Uhd)GfaCfUfCfucaugaagcaL96	2 712	VPusGfscuuc(Agn)ugagagUfcAfaugugscsa	2855	UGCACAUUGACUCUCAUGAAGCC	2938
AD-954066.1	gscsccu(Uhd)GfgAfGfUfguuaaauacaL96	2055	VPusGfsuauu(Tgn)aacacuCfcAfagggcsusu	2856	AAGСCCUUGGAGUGUUAAAUACA	2397

- 134 048552

AD-954067.1	ascsaug(Chd)UfuUfUfAfcggaguaugaL96	2077	VPusCfsauac(Tgn)ccguaaAfaGfcauguscsu	2857	AGACAUGCUUUUACGGAGUAUGU	2412
AD-954068.1	ususuua(Chd)GfgAfGfUfauguucgucaL96	2099	VPusGfsacga(Agn)cauacuCfcGfuaaaasgsc	2858	G CUUUUACG GAGUAU GUU C GU CA	2431
AD-954069.1	ususuac(Ghd)GfaGfUfAfuguucgucaaL96	2109	VPusUfsgacg(Agn)acauacUfcCfguaaasasg	2859	CUUUUACGGAGUAUGUUCGUCAC	2439
AD-954070.1	gsasgca(Chd)UfgUfUfCfaacuguggaaL96	2713	VPusUfsccac(Agn)guugaaCfaGfugcucsasc	2860	GUGAGCACUGUUCAACUGUGGAU	2939
AD-954071.1	asasgau(Ahd)UfuGfUfUfcuuucucguaL96	2056	VPusAfscgag(Agn)aagaacAfaUfaucuuscsa	2861	U GAAGAUAUU GUU CUUU CU C GUA	919
AD-954072.1	gsasuau(Uhd)GfuUfCfUfuucucguauaL96	2067	VPusAf suacg(Agn)gaaagaAfcAfauaucsusu	2862	AAGAUAUUGUU CUUU CU CGUAUU	999
AD-954073.1	ususguu(Chd)UfuUfCfUfcguauucagaL96	2078	VPusCfsugaa(Tgn)acgagaAfaGfaacaasusa	2863	UAUUGUUCUUUCUCGUAUUCAGG	916
AD-954074.1	usgsuuc(Uhd)UfuCfUfCfguauucaggaL96	2089	VPusCfscuga(Agn)uacgagAfaAfgaacasasu	2864	AUUGUUCUUUCUCGUAUUCAGGA	931
AD-954075.1	asusuuu(Chd)AfaGfGfUfuucuauuacaL96	2100	VPusGfsuaau(Agn)gaaaccUfuGfaaaausgsu	2865	ACAUUUU CAAG GUUU CUAUUACA	943
AD-954076.1	gsusgag(Chd)AfgCfAfAfcauacuuucaL96	2714	VPusGfsaaag(Tgn)auguugCfuGfcucacsusc	2866	GAGUGAGCAGCAACAUACUUUCU	2940
AD-954077.1	gscsaac(Ahd)UfaCfUfUfucuauugccaL96	2035	VPusGfsgcaa(Tgn)agaaagUfaUfguugcsusg	2867	CAGCAACAUACUUUCUAUUGCCA	993
AD-954078.1	asuscuu(Chd)Af aGfUfCfuggaauguuaL96	2046	VPusAfsacau(Tgn)ccagacUfuGfaagausgsu	2868	ACAUCUUCAAGUCUGGAAUGUUC	1004
AD-954079.1	csusgcu(Uhd)GfuCfAfAfccacaccgaaL96	2715	VPusUfscggu(Ggn)ugguugAf cAfagcagscsa	2869	UGCUGCUUGUCAACCACACCGAC	2941
AD-954080.1	uscscga(Ghd)CfaCfUfUfaacguggcuaL96	2716	VPusAfsgcca(Cgn)guuaagUfgCfucggasgsu	2870	ACUCCGAGCACUUAACGUGGCUC	2942
AD-954081.1	cscsucc(Ahd)GfuAfCfAfggacuucauaL96	2717	VPusAfsugaa(Ggn)uccuguAfcUfggaggscsu	2871	AGCCUCCAGUACAGGACUUCAUC	2943
AD-954082.1	csasggc(Ahd)AfuUfCfAfgucucguugaL96	2080	VPusCfsaacg(Agn)gacugaAfuUfgccugsgsa	2872	UCCAGGCAAUUCAGUCUCGUUGU	2414
AD-954083.1	asgsgca(Ahd)UfuCfAfGfucucguuguaL96	2091	VPusAfscaac(Ggn)agacugAfaUfugccusgsg	2873	CCAGGCAAUUCAGUCUCGUUGUG	2423
AD-954084.1	gsgscaa(Uhd)UfcAfGfUfcucguugugaL96	2102	VPusCfsacaa(Cgn)gagacuGfaAfuugccsusg	2874	CAGGCAAUUCAGUCUCGUUGUGA	2433
AD-954085.1	gscsaau(Uhd)CfaGfUfCfucguugugaaL96	2037	VPusUfscaca(Agn)cgagacUfgAfauugcscsu	2875	AGGCAAUUCAGUCUCGUUGUGAA	2382
AD-954086.1	csasauu(Chd)AfgUfCfUfcguugugaaaL96	2718	VPusUfsucac(Agn)acgagaCfuGfaauugscsc	2876	G G CAAUU CAGU CU C GUU GU GAAA	973
AD-954087.1	asusggu(Chd)GfaCfAfUfccuugcuugaL96	2048	VPusCfsaagc(Agn)aggaugUfcGfaccausgsc	2877	GCAUGGUCGACAUCCUUGCUUGU	2392
AD-954088.1	gsgsucg(Ahd)CfaUfCfCfuugcuugucaL96	2719	VPusGfsacaa(Ggn)caaggaUfgUfcgaccsasu	2878	AUGGUCGACAUCCUUGCUUGUCG	2944
AD-954089.1	gsuscga(Chd)AfuCfCfUfugcuugucgaL96	2059	VPusCfsgaca(Agn)gcaaggAfuGfucgacscsa	2879	UGGUCGACAUCCUUGCUUGUCGC	2400
AD-954090.1	csusgga(Chd)AfgGfUfUfucgucucucaL96	2720	VPusGfsagag(Agn)cgaaacCfuGfuccagscsa	2880	UGCUGGACAGGUUUCGUCUCUCC	2945
AD-954091.1	csasugc(Ahd)AfgAfCfUfcacuuagucaL96	2070	VPusGfsacua(Agn)gugaguCfuUfgcaugsgsu	2881	ACCAUGCAAGACUCACUUAGUCC	1008
AD-954092.1	asusgca(Ahd)GfaCfUfCfacuuaguccaL96	2081	VPusGfsgacu(Agn)agugagUfcUfugcausgsg	2882	CCAUGCAAGACUCACUUAGUCCC	2415
AD-954093.1	usgsuca(Chd)UfgGfAfAfacagugaguaL96	2721	VPusAfscuca(Cgn)uguuucCfaGfugacascsg	2883	CGUGUCACUGGAAACAGUGAGUC	2946
AD-954094.1	csascug(Ghd)AfaAfCfAfgugaguccgaL96 ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------ '—.....	2092	VPusCfsggac(Tgn)cacuguUfuCfcagugsasc	2884	GUCACUGGAAACAGUGAGUCCGG	2424
AD-954095.1	gscsugg(Uhd)GfaAfUfCfggauuccugaL96	2112	VPusCfsagga(Agn)uccgauUfcAfccagcsusc	2885	GAGCUGGUGAAUCGGAUUCCUGC	2442
AD-954096.1	asascuc(Ghd)GfaGfUfUfcaaccuaagaL96	2722	VPusCfsuuag(Ggn)uugaacUfcCfgaguuscsa	2886	UGAACUCGGAGUUCAACCUAAGC	2947
AD-954097.1	ascsucg(Ghd)Af gUfUfCfaaccuaagcaL96	2723	VPusGfscuua(Ggn)guugaaCfuCfcgagususc	2887	GAACUCGGAGUUCAACCUAAGCC	1018
AD-954098.1	csuscgg(Ahd)GfuUfCfAfaccuaagccaL96	2724	VPusGfsgcuu(Agn)gguugaAfcUfccgagsusu	2888	AACUCGGAGUUCAACCUAAGCCU	1020
AD-954099.1	csusgga(Ghd)CfaAfGfUfugaaugaucaL96	2725	VPusGfsauca(Tgn)ucaacuUfgCfuccagsusa	2889	UACUGGAGCAAGUUGAAUGAUCU	2948
AD-954100.1	asgsagc(Ahd)GfcUfUfCfuuaguccagaL96	2726	VPusCfsugga(Cgn)uaagaaGfcUfgcucuscsc	2890	GGAGAGCAGCUUCUUAGUCCAGA	2949
AD-954101.1	csusugu(Chd)AfaCfAfGfcuacacacgaL96	2727	VPusCfsgugu(Ggn)uagcugUfuGfacaagsgsg	2891	С C CUU GU CAACAG CU ACACAC GU	2950
AD-954102.1	uscsaac(Ahd)GfcUfAfCfacacgugugaL96	2113	VPusCfsacac(Ggn)uguguaGfcUfguugascsa	2892	U GU CAACAG CU AC AC AC GU GU G C	2443
AD-954103.1	csasaca(Ghd)CfuAfCfAfcacgugugcaL96	2039	VPusGfscaca(Cgn)guguguAfgCfuguugsasc	2893	GUCAACAGCUACACACGUGUGCC	2384
AD-954104.1	csusuua(Ahd)GfgAfGfUfucaucuaccaL96	2728	VPusGfsguag(Agn)ugaacuCfcUfuaaagsasc	2894	GUCUUUAAGGAGUUCAUCUACCG	979
AD-954105.1	gsgsacc(Ahd)GfuCfGfUfacucaguuuaL96	2729	VPusAfsaacu(Ggn)aguacgAfcUfgguccsasg	2895	CUGGACCAGUCGUACUCAGUUUG	2951
AD-954106.1	gsascca(Ghd)UfcGfUfAfcucaguuugaL96	2050	VPusCfsaaac(Tgn)gaguacGfaCfuggucscsa	2896	U GGAC CAGU CGUACU CAGUUU GA	2394
AD-954107.1	ascscag(Uhd)CfgUfAfCfucaguuugaaL96	2061	VPusUfscaaa(Cgn)ugaguaCfgAfcugguscsc	2897	GGACCAGUCGUACUCAGUUUGAA	2402
AD-954108.1	cscsagu(Chd)GfuAfCfUfcaguuugaaaL96	2072	VPusUfsucaa(Agn)cugaguAfcGfacuggsusc	2898	GAC CAGU CGUACU CAGUUU GAAG	958
AD-954109.1	csasguc(Ghd)UfaCfUfCfaguuugaagaL96	2083	VPusCfsuuca(Agn)acugagUfaCfgacugsgsu	2899	ACCAGUCGUACUCAGUUUGAAGA	926
AD-954110.1	gsascgc(Uhd)GfaCfAfGfaacugcgaaaL96	2040	VPusUfsucgc(Agn)guucugUfcAfgcgucsasc	2900	GUGACGCUGACAGAACUGCGAAG	2385
AD-954111.1	ascsgcu(Ghd)AfcAfGfAfacugcgaagaL96	2051	VPusCfsuucg(Cgn)aguucuGfuCfagcguscsa	2901	UGACGCUGACAGAACUGCGAAGG	2395
AD-954112.1	uscsauu(Ghd)AfgAfAfCfuauccucugaL96	2730	VPusCfsagag(Ggn)auaguuCfuCfaaugasgsg	2902	C CU CAUU GAGAACUAU C CU CU G G	2952
AD-954113.1	csgsgcu(Ghd)CfuGfAfCfuuguuuacgaL96	2095	VPusCfsguaa(Agn)caagucAf gCfagccgsgsu	2903	ACCGGCUGCUGACUUGUUUACGA	2427
AD-954114.1	gsgscug(Chd)UfgAfCfUfuguuuacgaaL96	2106	VPusUfscgua(Agn)acaaguCfaGfcagccsgsg	2904	CCGGCUGCUGACUUGUUUACGAA	2437
AD-954115.1	csusgcu(Ghd)AfcUfUfGfuuuacgaaaaL96	2115	VPusUfsuucg(Tgn)aaacaaGfuCfagcagscsc	2905	GGCUGCUGACUUGUUUACGAAAU	938
AD-954116.1	usgscug(Ahd)CfuUfGfUfuuacgaaauaL96	2731	VPusAf suuuc(Ggn)uaaacaAfgUfcagcasgsc	2906	GCUGCUGACUUGUUUACGAAAUG	970
AD-954117.1	csusgac(Uhd)UfgUfUfUfacgaaauguaL96	2041	VPusAfscauu(Tgn)cguaaaCfaAfgucagscsa	2907	UGCUGACUUGUUUACGAAAUGUC	2386
AD-954118.1	usgsacu(Uhd)GfuUfUfAfcgaaaugucaL96	2052	VPusGfsacau(Tgn)ucguaaAfcAfagucasgsc	2908	GCUGACUUGUUUACGAAAUGUCC	950
AD-954119.1	usasacg(Uhd)AfaCfUfCfuuucuaugcaL96	2063	VPusGfscaua(Ggn)aaagagUfuAfcguuasasa	2909	UUUAACGUAACUCUUUCUAUGCC	982
AD-954120.1	cscsgcu(Ghd)AfcAfUfUfuccguuguaaL96	2096	VPusUfsacaa(Cgn)ggaaauGfuCfagcggsgsu	2910	ACCCGCUGACAUUUCCGUUGUAC	2428
AD-954121.1	csusgac(Ahd)UfuUfCfCfguuguacauaL96	2732	VPusAfsugua(Cgn)aacggaAf aUfgucagscsg	2911	CGCUGACAUUUCCGUUGUACAUG	962
AD-954122.1	uscscgu(Uhd)GfuAfCfAfuguuccuguaL96	2733	VPusAfscagg(Agn)acauguAfcAfacggasasa	2912	UUUCCGUUGUACAUGUUCCUGUU	1005

Скрининг однократных НТТ доз в клетках BE(2)C

Таблица 13

	Доза 50 нМ	Доза 10 нМ	Доза 1 нМ	Доза 0,1 нМ
Дуплекс	Средн. % остаточной мРНК HTT	SD	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD
AD-953943.1	25,28	8, 03	29,30	6,44	32,57	12,47	46,70	13,54

135

AD-953944.1	41,24	7,70	40, 89	7,91	59, 91	20,20	85,25	18,83
AD-953945.1	33,55	5,45	42, 11	3,45	70,29	23,77	73,31	19,65
AD-953946.1	52,10	8,38	60, 45	8,41	81, 46	14,40	91,79	18,06
AD-953947.1	71,37	9,54	78,72	8,60	106,79	23, 62	87,11	18,93
AD-953948.1	28,84	2,55	32,11	3,84	51, 95	11, 17	66, 84	15,72
AD-953949.1	27,80	2,41	28,29	0,53	48,44	9, 11	57,01	13,39
AD-953950.1	19,18	1,56	22,28	2,23	41, 90	4,85	50, 60	10,20
AD-953951.1	35,52	3,47	40, 06	2,38	59,55	8,65	63,30	13,81
AD-953952.1	40,78	3, 62	47,38	6,25	73, 82	14,74	83,70	15,18
AD-953953.1	35,33	4,75	40, 88	5,35	54,48	11,58	76,41	16,22
AD-953954.1	80,48	13,33	94, 11	5,00	114,77	17,14	112,09	13,16
AD-953955.1	61,44	7,57	67, 95	5,96	100,83	16, 48	112,12	11,33
AD-953956.1	52,28	1, 18	53, 04	4,66	84,55	6, 04	103,05	13,02
AD-953957.1	27,47	4,33	32,42	1,80	60,62	14,19	82,35	11,15
AD-953958.1	42,36	8,94	52,33	5,08	101,09	14,02	74,85	14,06
AD-953959.1	75,40	11, 80	89, 04	9,94	94,52	26,23	91,62	23,89
AD- 953 9 60.1	49,59	6,40	47,82	6,33	75,30	5,89	101,99	14,34
AD-953961.1	43,00	5,18	47,78	8,88	70, 77	3,43	80,17	9,16
AD-953962.1	41,41	6,11	46, 17	2,48	70,52	9, 03	87,06	47,29
AD-953963.1	61, 88	13,44	69,79	8,45	126, 67	29, 69	119,20	18,58
AD-953964.1	49,04	4, 98	43,29	2,06	73, 17	16, 11	95,22	10,94
AD-953965.1	79,15	12,41	79, 79	6,49	112,95	26, 48	106,87	9,13
AD-953966.1	39,29	4,71	46,51	3,06	93,79	10, 89	78,31	9,71
AD-953967.1	102,74	15, 60	102,27	8,94	113,11	28,49	123,76	9,66
AD-953968.1	56,27	5, 92	58, 12	6,20	88,92	11, 11	104,25	16, 19
AD-953969.1	49,05	7,61	48,14	4,34	78,67	13, 96	100,12	9,43
AD-953970.1	73,15	6, 87	77, 89	3,81	114,55	15, 98	122,14	27,56
AD-953971.1	92,44	12,13	108,14	6, 62	141,31	17,87	125,68	17,13
AD-953972.1	43,95	9, 17	46, 62	3,59	75,63	8,78	79, 19	9,91
AD-953973.1	58,39	7,73	62, 98	3,93	110,01	14,70	117,11	19,26
AD-953974.1	47,46	5,57	52,5 9	3,19	110,79	8,08	89, 64	14,12
AD-953975.1	53,14	11,39	51,38	5,50	87,70	16, 68	99, 11	21,62
AD-953976.1	49,95	4,47	52,61	3,52	83,42	12,10	98,52	19,53
AD-953977.1	87,78	13,24	89,20	5,02	135,24	13,49	127,28	19,87
AD-953978.1	126,71	11, 93	145,34	6,50	166,62	14,28	114,56	18,35
AD-953979.1	48,28	4,97	51, 36	1,50	68,12	7,23	102,36	19,14
AD-953980.1	57,96	6,20	74,25	4,62	110,83	20, 10	131,34	20,04
AD-953981.1	49,45	8,32	53, 06	3,50	78,64	6,37	101,33	17,60
AD-953982.1	33,37	2, 16	42, 62	3,56	64,77	7,97	73, 11	11,94
AD-953983.1	39,40	10, 93	35, 92	2,28	57,13	6, 68	78,16	14,03
AD-953984.1	57,27	7,41	54,74	3,56	77,90	18,18	99,74	14,21
AD-953985.1	130,23	15, 12	137,00	5,31	137,26	18,25	128,33	32,12
AD-953986.1	50,95	10,45	54,33	4,64	105,85	9,70	103,85	21,90
AD-953987.1	69,56	6,28	77,39	4,68	81, 55	10, 03	126,82	37,96
AD-953988.1	66,19	16,21	91, 07	11,88	112,42	22,54	142,20	17,51
AD-953989.1	65,71	14,37	80, 99	7,71	122,89	11,49	136,06	13,06
AD-953990.1	83,61	12,96	64, 84	5,57	88,44	12,20	104,08	14,59
AD-953991.1	94,27	13,29	80, 81	9,00	101,66	8,48	113,51	9,05
AD-953992.1	44,46	5,75	39,33	3,94	58,24	10, 81	87,29	5,55
AD-953993.1	114,46	11, 88	119,55	18,54	138,88	4,29	139,56	15,56
AD-953994.1	109,68	16, 66	113,20	13,74	85,48	22, 04	132,49	25,95
AD-953995.1	44,47	8,00	43, 63	3,03	60, 41	1,70	85,58	8,98

- 136 048552

AD-953996.1	55,33	4,94	65, 39	5,34	90,87	10,20	128,94	17, 18
AD-953997.1	54,33	4, 23	54,39	5,44	91,96	7,82	107,48	13, 93
AD-953998.1	89,94	12,50	77,20	9,55	83,97	14,41	99,62	24,71
AD-953999.1	85,41	13, 43	77,50	8,43	77,70	8,48	110,99	13, 64
AD-954000.1	120,60	19, 15	112,70	6,22	85,64	27, 09	120,51	15, 78
AD-954001.1	94,88	10, 89	96, 63	6,17	118,17	11, 83	127,17	24, 97
AD-954002.1	51,53	4,49	49, 17	3,34	66,31	8,86	112,46	28, 45
AD-954003.1	123,28	14,54	118,10	13,16	157,56	23, 31	135,59	15, 72
AD-954004.1	75,28	8,21	98,59	21,80	125,64	7,09	140,25	21, 72
AD-954005.1	102,97	31, 98	113,10	12,44	159,34	23,27	129,47	16, 72
AD-954006.1	97,35	19, 09	94,31	15,52	71,85	14, 67	92,08	15, 42
AD-954007.1	49,86	4,43	47,55	2,82	70,97	11, 19	94,69	14,77
AD-954008.1	51,41	7, 18	41,24	1,97	57,95	4,19	89,30	14,74
AD-954009.1	89,01	12,41	84,78	3,63	107,09	5,23	97,41	9, 85
AD-954010.1	49,84	6,28	41, 44	1,50	54,91	3,86	103,82	11, 64
AD-954011.1	105,29	12, 79	90, 10	11,94	153,30	16,20	120,57	21, 63
AD-954012.1	90,03	8, 01	87,39	8,23	140,07	15, 18	132,56	20, 06
AD-954013.1	34,92	5, 03	36,29	5,46	62,17	6, 83	77,52	8,18
AD-954014.1	81,22	23, 88	86,33	11,49	67,65	13,37	90,11	8, 95
AD-954015.1	70,36	13, 12	60, 63	5,52	66,58	5, 12	90,80	13, 51
AD-954016.1	44,53	7, 30	38,81	1,7 0	56, 12	6,21	98,73	12, 81
AD-954017.1	97,19	12,84	81,90	6,70	106,75	9,38	88,14	13, 94
AD-954018.1	72,64	8, 33	65, 38	3,02	84,16	6, 84	72,28	35, 23
AD-954019.1	67,29	8, 93	61, 61	1,61	97,42	23, 69	110,48	16, 04
AD-954020.1	63,68	8,73	63, 56	6,39	110,81	15, 91	125,91	24,47
AD-954021.1	100,05	21, 36	92,98	5,12	127,14	10, 83	116,82	15, 90
AD-954022.1	28,29	9,46	29,23	2,71	34,21	9, 00	68,48	7,86
AD-954023.1	30,29	6,42	35, 88	4,22	40,46	3, 69	68,43	11,76
AD-954024.1	50,98	9,28	46, 06	4,64	52,39	4,98	87,55	10,91
AD-954025.1	75,43	8,49	64,94	11,65	64,26	3,84	100,45	17,56
AD-954026.1	46, 65	11, 78	44,30	2,74	43, 02	4,2^	74,87	12,89
AD-954027.1	57,79	8,79	54,28	8,40	67,25	12,15	100,97	18,05
AD-954028.1	45,79	6, 10	44,14	3,91	55, 59	5,40	97,37	12,76
AD-954029.1	40,81	3, 90	58, 93	15,43	73, 62	7,62	94,19	5,76
AD-954030.1	43,55	12,13	52, 94	_1, 13	73, 85	21,70	99, 17	16,74
AD-954031.1	49,31	6, 60	52, 96	11,91	83, 10	14,06	102,31	16, 01
AD-954032.1	127,12	23, 82	128,56	12,32	133,30	14,88	128,31	14,51
AD-954033.1	73,92	10,70	80, 98	18,52	113,54	30,70	130,72	14,26
AD-954034.1	49,31	6, 67	52, 15	10,90	84,31	20,73	110,44	23,97
AD-954035.1	114,40	15, 11	119,60	14,69	134,36	19,21	129,08	17,91
AD-954036.1	43,48	8,39	47,72	10,68	67, 08	8,75	106,73	21,10
AD-954037.1	39,27	4,77	44,74	6, 11	72, 17	11, 91	69,59	13,73
AD-954038.1	30,64	4,65	28,78	2,96	43, 66	8,99	56,53	12,31
AD-954039.1	36,40	11,20	30,20	5,20	39, 81	8,41	53,83	9,89
AD-954040.1	50,62	10, 89	40, 11	7,49	55, 41	10,77	81,88	12,15
AD-954041.1	35,66	3, 12	24, 01	4,69	32, 00	3,54	44,11	6,53
AD-954042.1	41,12	8, 18	24, 88	4,04	44, 89	6, 14	61,21	11,11
AD-954043.1	24,89	5,72	15, 90	2,81	22,25	4,24	32,58	5,77
AD-954044.1	65,02	12,76	24, 80	3,20	36, 34	3,58	43,61	4,19
AD-954045.1	29,56	5,27	33, 04	8,55	45,38	9, 97	61,31	9,41
AD-954046.1	50,62	13, 97	43,21	5,02	53, 53	2,70	82,32	9,29
AD-954047.1	112,14	11, 02	85, 80	11,37	84,42	14,84	92,74	14,20

- 137 048552

AD-954048.1	45,07	4,29	39,26	5,31	61,14	4,62	76,48	11,06
AD-954049.1	74,41	7,46	54, 16	4,25	73,62	7,71	86, 63	15,31
AD-954050.1	43,19	7,71	34,41	3,69	54,34	6, 87	64,75	6,48
AD-954051.1	40,81	4,58	27,32	4,69	35, 97	4,35	48,62	5,79
AD-954052.1	57,53	7,53	34,95	2,91	45, 72	15, 91	55,47	8,35
AD-954053.1	91,59	24,57	86,71	28,24	112,72	17,38	95,41	11,00
AD-954054.1	97,79	27,39	72,68	9,74	92,74	9, 94	97,46	7,00
AD-954055.1	97,83	2,74	87,42	9,52	101,94	20,54	98,18	20,94
AD-954056.1	37,01	8,47	36, 02	5,25	59,20	5, 18	67,31	5,75
AD-954057.1	72,64	27,91	60, 87	7,90	92,38	4,23	97,42	11,31
AD-954058.1	40,42	5,48	31, 51	4,21	50,10	5,34	64,00	5,40
AD-954059.1	110,34	24,77	79,75	10,33	90,93	11,33	93,25	8,2 4
AD-954060.1	105,41	10, 82	68, 12	9,92	67,92	19,45	77,29	9,57
AD-954061.1	48,19	12,83	45,41	7,18	82,81	16, 32	89,79	11,76
AD-954062.1	112,79	28,14	117,81	19,59	130,07	14,97	114,35	9,21
AD-954063.1	69,36	6, 09	65, 94	8,67	103,63	13, 94	103,38	7,59
AD-954065.1	55,37	13,42	43, 03	5,34	73, 02	12,77	86, 97	3, 99
AD-954066.1	49,73	13, 11	39, 91	5,94	75, 64	13, 85	91,95	7,81
AD-954067.1	87,82	13, 15	64,69	7,46	98,59	18,86	93,71	14,09
AD-954068.1	40,19	6,13	33, 47	4,27	53, 53	6, 72	63,74	6,42
AD-954069.1	48,15	13, 31	52,79	11,46	73, 81	8,41	91, 06	10,26
AD-954070.1	65,48	11,48	75,23	15,82	115,87	3, 64	102,39	5,57
AD-954071.1	123,38	32,06	81, 03	11,89	110,37	8,08	103,39	10,42
AD-954072.1	35,49	5, 00	36, 19	5,15	61,74	7,13	61, 94	5,11
AD-954073.1	85,49	23, 02	67, 03	5,33	111,70	10, 83	105,50	19,88
AD-954074.1	124,78	23,26	90, 09	14,54	129,47	9, 93	111,03	8,56
AD-954075.1	52,62	12,43	39, 80	11,15	71,55	4,83	81, 99	12,05
AD-954076.1	73,79	11, 02	45,41	7,32	74,27	6,14	89,39	6,76
AD-954077.1	36, 90	4,73	49, 38	9,45	61,64	8,52	80,49	15,53
AD-954078.1	42,82	8,28	56,34	12,92	81, 78	2,08	82,10	6,11
AD-954079.1	146,69	40, 61	152,79	32,89	150,99	10, 06	109,19	12,69
AD-954080.1	80,97	14,87	77,63	13,06	116,41	7,28	93,41	25,93
AD-954081.1	132,71	24,87	111,25	18,32	144,22	6, 86	106,52	13,53
AD-954082.1	53,58	11,30	49, 94	8,38	90, 95	15,32	102,40	14,73
AD-954083.1	52,38	9,89	49, 44	7,90	84,24	2,72	84,39	13,42
AD-954084.1	61,73	14,66	79,26	14,19	93,30	14,70	93, 82	9,65
AD-954085.1	36,35	5,49	44, 12	5,16	54,76	3,22	55,64	7,08
AD-954086.1	45,60	11,57	50, 65	6,54	64,43	12,90	68,12	7,00
AD-954087.1	137,98	20, 04	124,29	18,80	118,93	16, 69	92,84	19,91
AD-954088.1	41,87	8,36	52,21	6,46	78,64	3, 87	62,24	2,62
AD-954089.1	70,86	15,32	62,56	15,26	107,73	3, 13	100,55	22,65
AD-954090.1	70,40	19,51	61,35	6, 11	87,91	8,25	105,18	2,75
AD-954091.1	37,74	5, 94	45,78	7,62	63,97	11,22	98,88	15,71
AD-954092.1	49,19	12,83	59,59	17,25	71, 13	7,86	80,52	7,44
AD-954093.1	79,76	26, 13	125,17	23,01	113,91	8,99	101,46	8,08
AD-954094.1	61,37	8, 05	78,73	5,77	91, 71	19, 60	84,72	14,75
AD-954095.1	90,36	16, 00	96, 13	13,68	101,60	4,03	76, 09	16, 53
AD-954096.1	69,55	22,01	80, 82	24,89	83,29	14,39	77,15	10,78
AD-954097.1	50,60	5,74	60, 89	7,04	81,66	15, 06	93,85	17,16
AD-954098.1	50,89	7,69	54,42	6, 61	79,36	4,81	91,22	8,67
AD-954099.1	44,06	10,32	40,54	3,88	51,58	11, 04	66, 69	8,02
AD-954100.1	68,73	15, 47	80, 94	24,34	85,21	11,36	82,63	10,62

- 138 048552

AD-954101.1	96,29	18,69	82,73	18,38	102,29	7,72	77,19	23,29
AD-954102.1	97,04	16, 96	107,63	40,67	106,07	24,77	94,95	9,34
AD-954103.1	53, 12	19, 06	61,48	8,80	96, 56	9,11	81,60	4,45
AD-954104.1	39,24	14,17	43, 90	6, 64	63, 80	21, 66	74,13	17,46
AD-954105.1	92,22	40, 50	92,14	6, 14	121,87	12,99	117,35	4,61
AD-954106.1	94,69	22,86	81, 66	34,22	109,92	14,27	120,28	6, 00
AD-954107.1	52,54	5,70	54, 68	6,50	58,71	8,77	86,39	7,37
AD-954108.1	32,60	9,35	36, 30	8,08	52,25	9,42	65,38	12,97
AD-954109.1	49,22	14,42	49, 54	15,31	65, 91	5, 75	80, 95	9,56
AD-954110.1	68,41	9, 31	76, 51	10,13	76, 09	19, 11	99,23	8,36
AD-954111.1	92,65	22,73	101,91	26, 67	98,02	8,77	94,90	10,57
AD-954112.1	64,00	17,39	59, 14	9,11	83, 34	9, 57	83,36	12,35
AD-954113.1	58,25	12,41	57,75	13,56	81,37	7,99	93, 07	7,70
AD-954114.1	71,05	16, 06	77,64	9,56	87,97	8,84	109,33	15,36
AD-954115.1	60,65	15, 19	56, 61	8,62	76, 60	6, 08	101,81	10,73
AD-954116.1	26, 64	11, 15	26, 49	3,81	36, 33	5, 62	45,17	7,32
AD-954117.1	52,54	12,72	40, 89	8,82	55, 89	4,54	67, 65	7,51
AD-954118.1	40,93	7,86	43, 47	15,03	62,96	4,72	53,36	8,79
AD-954119.1	89,09	13, 93	93, 53	23,25	85, 36	8,16	79,38	9,09
AD-954120.1	108,81	24,28	103,12	24,39	96,43	3,32	95,36	8,32
AD-954121.1	109,72	19, 61	106,73	17,99	113,83	23,58	105,34	7,28
AD-954122.1	124,06	25, 59	104,70	14,12	98,12	9, 91	91,42	2,87

Таблица 14

Немодифицированные последовательности смысловых и антисмысловых цепей дцРНК средств к хангтингтину (HTT)

ID дуплекса	Смысловая последовательность 5'->3'	SEQ ID NO:	Диапазон в NM 002111.8	Антисмысловая последовательность 5'—>3'	SEQ ID NO:	Диапазон в NM 002111.8
AD-954123.1	AGCUACCAAGAAAGACCGUGA	1784	430-450	UCACGGTCUUUCUTGGUAGCUGA	3046	428-450
AD-954131.1	AUUCUAAUCUTCCAAGGUUAA	2953	630-650	UTAACCTUGGAAGAUTAGAAUCC	3047	628-650
AD-954139.1	AGGUUUAUGAACUGACGUUAA	1786	1218-1238	UTAACGTCAGUTCAUAAACCUGG	3048	1216-1238
AD-954147.1	AGUAUUGUGGAACUUAUAGCA	1787	1406-1426	UGCUAUAAGUUCCACAAUACUCC	1948	1404-1426
AD-954155.1	GACUCUGAAUCGAGAUCGGAA	1788	1511-1531	UTCCGATCUCGAUTCAGAGUCAU	30 49	1509-1531
AD-954163.1	ACAG CAGUGUT GAUAAAUUUA	2954	2073-2093	UAAATUTAUCAACACT GCU GUCA	3050	2071-2093
AD-954170.1	CGCCUUUUAUCUGCUUCGUUA	1790	2207-2227	UAACGAAGCAGAUAAAAGGCGGA	1951	2205-2227
AD-954178.1	CUGAGGAACAGUUCCUAUUGA	1791	2717-2737	UCAATAGGAACTGTUCCUCAGAG	3051	2715-2737
AD-954186.1	UUCU СC GU CAGC ACAAUAACA	2955	3074-3094	UGUUAUTGUGCTGACGGAGAAAU	3052	3072-3094
AD-954194.1	UAGGAAGAGCTGUACCGUUGA	2956	3325-3345	UCAACGGUACAGCTCTUCCUAGA	3053	3323-3345
AD-954202.1	UUCUCUAAGUCCCAUCCGACA	1793	3679-3699	UGUCGGAUGGGACTUAGAGAAGG	3054	3677-3699
AD-954210.1	UUGUGUUCAACAAUUGUUGAA	2957	4081-4101	UTCAACAAUUGTUGAACACAAAC	3055	4079-4101
AD-954124.1	CUACCAAGAAAGACCGUGUGA	1794	432-452	UCACACGGUCUTUCUTGGUAGCU	3056	430-452
AD-954132.1	UUCCAAGGTUACAGCUCGAGA	2958	639-659	UCUCGAGCUGUAACCTUGGAAGA	3057	637-659
AD-954140.1	GGUUUAUGAACUGACGUUACA	1796	1219-1239	UGUAACGUCAGTUCATAAACCUG	3058	1217-1239
AD-954148.1	GUAUUGUGGAACUUAUAGCUA	1797	1407-1427	UAGCTATAAGUTCCACAAUACUC	3059	1405-1427
AD-954156.1	ACUCUGAATCGAGAUCGGAUA	2959	1512-1532	UAUCCGAUCUCGATUCAGAGUCA	3060	1510-1532
AD-954164.1	UGAUAAAUTUGUGUUGAGAGA	2960	2083-2103	U CU CT CAACACAAAUTUAU CAAC	3061	2081-2103
AD-954171.1	UCUAUAAAGUTCCUCUUGACA	2961	2352-2372	UGUCAAGAGGAACTUTAUAGAGU	3062	2350-2372
AD-954179.1	UGAGGAACAGTUCCUAUUGGA	2962	2718-2738	UCCAAUAGGAACUGUTCCUCAGA	3063	2716-2738
AD-954187.1	UCUCCGUCAGCACAAUAACCA	1801	3075-3095	UGGUTATUGUGCUGACGGAGAAA	3064	3073-3095
AD-954195.1	AGGAAGAGCUGUACCGUUGGA	1802	3326-3346	UCCAACGGUACAGCUCUUCCUAG	1963	3324-3346
AD-954203.1	GAGAACAAGCAUCUGUACCGA	1803	3723-3743	UCGGTACAGAUGCTUGUUCUCCU	30 65	3721-3743
AD-954211.1	GAGUGUCACAAAGAACCGUGA	1804	4369-4389	UCACGGTUCUUTGTGACACUCGU	3066	4367-4389
AD-954125.1	AAUCAUUGTCTGACAAUAUGA	2963	452-472	UCAUAUTGUCAGACAAUGAUUCA	3067	450-472

- 139 048552

AD-954133.1	UCCAAGGUTACAGCUCGAGCA	2964	640-660	UGCUCGAGCUGTAACCUUGGAAG	3068	638-660
AD-954141.1	UUUAUGAACUGACGUUACAUA	1807	1221-1241	UAUGTAACGUCAGTUCAUAAACC	30 69	1219-1241
AD-954149.1	UAUUGUGGAACUUAUAGCUGA	1808	1408-1428	UCAGCUAUAAGTUCCACAAUACU	3070	1406-1428
AD-954157.1	CUCUGAAUCGAGAUCGGAUGA	1809	1513-1533	UCAUCCGAUCUCGAUTCAGAGUC	3071	1511-1533
AD-954165.1	AGAUGAAGCUACUGAACCGGA	1810	2101-2121	UCCGGUTCAGUAGCUTCAUCUCU	3072	2099-2121
AD-954172.1	CAUCUUGAACTACAUCGAUCA	2965	2407-2427	UGAUCGAUGUAGUTCAAGAUGUC	3073	2405-2427
AD-954180.1	GAGGAACAGUTCCUAUUGGCA	2966	2719-2739	UGCCAATAGGAACTGTUCCUCAG	3074	2717-2739
AD-954188.1	UCCGUCAGCACAAUAACCAGA	1812	3077-3097	UCUGGUTAUUGTGCUGACGGAGA	3075	3075-3097
AD-954196.1	GGAAGAGCTGTACCGUUGGGA	2967	3327-3347	UCCCAACGGUACAGCTCUUCCUA	3076	3325-3347
AD-954204.1	AACAAGCATCTGUACCGUUGA	2968	3726-3746	UCAACGGUACAGATGCUUGUUCU	3077	3724-3746
AD-954212.1	UGUCACAAAGAACCGUGCAGA	1814	4372-4392	UCUGCACGGUUCUTUGUGACACU	3078	4370-4392
AD-954126.1	CAUU GU CU GACAAUAU GU GAA	119	455-475	UTCACATAUUGTCAGACAAUGAU	3079	453-475
AD-954134.1	CUGUUCCCAAAAUUAUGGCUA	1815	843-863	UAGCCATAAUUTUGGGAACAGCU	30 80	841-863
AD-954142.1	CAGCACCAAGACCACAAUGUA	1816	1247-1267	UACATUGUGGUCUTGGUGCUGUG	3081	1245-1267
AD-954150.1	AUUGUGGAACTUAUAGCUGGA	2969	1409-1429	UCCAGCTAUAAGUTCCACAAUAC	30 82	1407-1429
AD-954158.1	UUCUGAAATUGUGUUAGACGA	2970	1885-1905	UCGUCUAACACAATUTCAGAACU	30 83	1883-1905
AD-954166.1	CCUCUUGUCCAUUGUGUCCGA	1819	2189-2209	UCGGACACAAUGGACAAGAGGUG	1981	2187-2209
AD-954173.1	CUUGAACUACAUCGAUCAUGA	1820	2410-2430	UCAUGATCGAUGUAGTUCAAGAU	3084	2408-2430
AD-954181.1	AAGAACGAGUGCUCAAUAAUA	1821	2862-2882	UAUUAUTGAGCACTCGUUCUUGC	3085	2860-2882
AD-954189.1	AACCUUUCAAGAGUUAUUGCA	1822	3152-3172	UGCAAUAACUCTUGAAAGGUUAU	3086	3150-3172
AD-954197.1	GUCAGCUUGGTUCCCAUUGGA	2971	3376-3396	UCCAAUGGGAACCAAGCUGACGA	1985	3374-3396
AD-954205.1	CCUGAAAUCCTGCUUUAGUCA	2972	4039-4059	UGACTAAAGCAGGAUTUCAGGUA	3087	4037-4059
AD-954213.1	UAAGAAUGCUAUUCAUAAUCA	1825	4393-4413	U GAUTAT GAAUAG CATU CUUAU C	3088	4391-4413
AD-954127.1	AAUGCCUCAACAAAGUUAUCA	1826	597-617	UGAUAACUUUGTUGAGGCAUUCG	3089	595-617
AD-954135.1	AGGCCUUCAUAGCGAACCUGA	1827	909-929	UCAGGUTCGCUAUGAAGGCCUUU	2581	907-929
AD-954143.1	GCACCAAGACCACAAUGUUGA	1828	1249-1269	UCAACATUGUGGUCUTGGUGCUG	3090	1247-1269
AD-954151.1	UGGAGGAUGACUCUGAAUCGA	1829	1503-1523	UCGATUCAGAGTCAUCCUCCAAG	3091	1501-1523
AD-954159.1	UCUGAAAUTGTGUUAGACGGA	2973	1886-1906	UCCGTCTAACACAAUTUCAGAAC	30 92	1884-1906
AD-954167.1	CUCUUGUCCATUGUGUCCGCA	2974	2190-2210	UGCGGACACAATGGACAAGAGGU	3093	2188-2210
AD-954174.1	UUGAACUACATCGAUCAUGGA	2975	2411-2431	UCCATGAUCGATGTAGUUCAAGA	3094	2409-2431
AD-954182.1	GAGUGCUCAATAAUGUUGUCA	2976	2868-2888	UGACAACAUUATUGAGCACUCGU	3095	2866-2888
AD-954190.1	AGUUUGCATUTGGAGUUUAGA	2977	3262-3282	UCUAAACUCCAAATGCAAACUGG	3096	3260-3282
AD-954198.1	AGCUUGGUTCCCAUUGGAUCA	2978	3379-3399	UGAUCCAAUGGGAACCAAGCUGA	1996	3377-3399
AD-954206.1	CUGAAAUCCUGCUUUAGUCGA	1835	4040-4060	UCGACUAAAGCAGGATUUCAGGU	3097	4038-4060
AD-954214.1	AGAAUGCUAUTCAUAAUCACA	2979	4395-4415	U GU GAUTAU GAAUAG CAUU CUUA	316	4393-4415
AD-954128.1	UUAUCAAAGCTUUGAUGGAUA	2980	612-632	UAUCCATCAAAGCTUTGAUAACU	3098	610-632
AD-954136.1	CUCUGCUGAUTCUUGGCGUGA	2981	1074-1094	UCACGCCAAGAAUCAGCAGAGUG	20 00	1072-1094
AD-954144.1	CACCAAGACCACAAUGUUGUA	1838	1250-1270	UACAACAUUGUGGTCTUGGUGCU	3099	1248-1270
AD-954152.1	GAGGAUGACUCUGAAUCGAGA	1839	1505-1525	UCUCGATUCAGAGTCAUCCUCCA	3100	1503-1525
AD-954160.1	CU GAAAUU GU GUUAGAC G GUA	165	1887-1907	UACCGUCUAACACAATUUCAGAA	3101	1885-1907
AD-954168.1	UCCGCCUUTUAUCUGCUUCGA	2982	2205-2225	UCGAAGCAGAUAAAAGGCGGACA	2003	2203-2225
AD-954175.1	GAACUACATCGAUCAUGGAGA	2983	2413-2433	UCUCCATGAUCGATGTAGUUCAA	3102	2411-2433
AD-954183.1	GCCUCCAUCUCAUUUCUCCGA	1842	3061-3081	UCGGAGAAAUGAGAUGGAGGCUG	2005	3059-3081
AD-954191.1	GUUUGCAUTUGGAGUUUAGGA	2984	3263-3283	UCCUAAACUCCAAAUGCAAACUG	20 06	3261-3283
AD-954199.1	AGAUGCUUTGAUUUUGGCCGA	2985	3412-3432	UCGGCCAAAAUCAAAGCAUCUUG	2007	3410-3432
AD-954207.1	GAAAUCCUGCTUUAGUCGAGA	2986	4042-4062	UCUCGACUAAAGCAGGAUUUCAG	2008	4040-4062
AD-954215.1	GCUAUUCATAAUCACAUUCGA	2987	4400-4420	UCGAAUGUGAUTATGAAUAGCAU	3103	4398-4420
AD-954129.1	GCUUUGAUGGAUUCUAAUCUA	1847	620-640	UAGATUAGAAUCCAUCAAAGCUU	3104	618-640
AD-954137.1	GCAGCUUGTCCAGGUUUAUGA	2988	1207-1227	UCAUAAACCUGGACAAGCUGCUC	2011	1205-1227
AD-954145.1	ACCAAGACCACAAUGUUGUGA	1849	1251-1271	UCACAACAUUGTGGUCUUGGUGC	3105	1249-1271
AD-954153.1	AGGAUGACTCTGAAUCGAGAA	2989	1506-1526	UTCUCGAUUCAGAGUCAUCCUCC	3106	1504-1526
AD-954161.1	UGAAAUUGTGTUAGACGGUAA	2990	1888-1908	UTACCGTCUAACACAAUUUCAGA	3107	1886-1908
AD-954169.1	CCGCCUUUTATCUGCUUCGUA	2991	2206-2226	UACGAAGCAGATAAAAGGCGGAC	3108	2204-2226
AD-954176.1	CUUUGGCGGATUGCAUUCCUA	2992	2559-2579	UAGGAATGCAATCCGCCAAAGAA	3109	2557-2579
AD-954184.1	CCUCCAUCTCAUUUCUCCGUA	2993	3062-3082	UACGGAGAAAUGAGATGGAGGCU	3110	3060-3082
AD-954192.1	GUCUAGGAAGAGCUGUACCGA	1855	3322-3342	U C G GTACAG CU CU T C CUAGACU C	3111	3320-3342

140 048552

AD-954200.1	GGCCGGAAACTUGCUUGCAGA	2994	3427-3447	UCUGCAAGCAAGUTUCCGGCCAA	3112	3425-3447
AD-954208.1	UUUAGU CGAGAACCAAUGAUA	1857	4052-4072	UAUCAUTGGUUCUCGACUAAAGC	2620	4050-4072
AD-954216.1	UUCAUAAUCACAUUCGUUUGA	1858	4404-4424	UCAAACGAAUGTGAUTAUGAAUA	3113	4402-4424
AD-954130.1	GAUUCUAATCTUCCAAGGUUA	2995	629-649	UAACCUTGGAAGATUAGAAUCCA	3114	627-649
AD-954138.1	CAGGUUUATGAACUGACGUUA	2996	1217-1237	UAACGUCAGUUCATAAACCUGGA	3115	1215-1237
AD-954146.1	GAGUAUUGTGGAACUUAUAGA	2997	1405-1425	UCUATAAGUUCCACAAUACUCCC	3116	1403-1425
AD-954154.1	GGAUGACU CU GAAU CGAGAUA	1860	1507-1527	UAUCTCGAUUCAGAGTCAUCCUC	3117	1505-1527
AD-954162.1	GAAAUUGUGUTAGACGGUACA	2998	1889-1909	UGUACCGUCUAACACAAUUUCAG	2025	1887-1909
AD-954177.1	UUUGGCGGAUTGCAUUCCUUA	2999	2560-2580	UAAGGAAUGCAAUCCGCCAAAGA	2026	2558-2580
AD-954185.1	CUCCAUCUCATUUCUCCGUCA	3000	3063-3083	UGACGGAGAAATGAGAUGGAGGC	3118	3061-3083
AD-954193.1	UCUAGGAAGAGCUGUACCGUA	1864	3323-3343	UACGGUACAGCTCTUCCUAGACU	3119	3321-3343
AD-954201.1	CUUCUCUAAGTCCCAUCCGAA	3001	3678-3698	UTCGGATGGGACUTAGAGAAGGG	3120	3676-3698
AD-954209.1	UUAGUCGAGAACCAAUGAUGA	1866	4053-4073	UCAUCATUGGUTCTCGACUAAAG	3121	4051-4073
AD-954217.1	UCAUAAUCACAUUCGUUUGUA	1707	4405-4425	UACAAACGAAUGUGATUAUGAAU	3122	4403-4425
AD-954225.1	UUCAGUUACGGGUUAAUUACA	1708	4518-4538	UGUAAUTAACCCGTAACUGAACC	3123	4516-4538
AD-954233.1	ACUGUCUCGACAGAUAGCUGA	1709	4966-4986	UCAGCUAUCUGTCGAGACAGUCG	3124	4964-4986
AD-954241.1	UUACGGAGTATGUUCGUCACA	3002	5108-5128	UGUGACGAACATACUCCGUAAAA	3125	5106-5128
AD-954249.1	GCAACAUACUTUCUAUUGCCA	3003	5452-5472	UGGCAATAGAAAGTATGUUGCUG	3126	5450-5472
AD-954257.1	ACUCCGAGCACUUAACGUGGA	1711	5886-5906	UCCACGTUAAGTGCUCGGAGUCA	3127	5884-5906
AD-954264.1	GCAAUU CAGU CU CGUU GU GAA	1712	6017-6037	UTCACAACGAGACTGAAUUGCCU	3128	6015-6037
AD-954272.1	UGCCUUCATGAUGAACUCGGA	3004	6547-6567	UCCGAGTUCAUCATGAAGGCAUU	3129	6545-6567
AD-954280.1	CAACAGCUACACACGU GU GCA	1714	7366-7386	UGCACACGUGUGUAGCUGUUGAC	1875	7364-7386
AD-954288.1	GACGCUGACAGAACUGCGAAA	1715	8317-8337	UTUCGCAGUUCTGTCAGCGUCAC	3130	8315-8337
AD-954296.1	CUGACUUGTUTACGAAAUGUA	3005	9539-9559	UACATUTCGUAAACAAGUCAGCA	3131	9537-9559
AD-954218.1	AUCACAUUCGTUUGUUUGAAA	3006	4410-4430	UTUCAAACAAACGAATGUGAUUA	3132	4408-4430
AD-954226.1	CAGUUACGGGTUAAUUACUGA	30 07	4520-4540	UCAGTAAUUAACCCGTAACUGAA	3133	4518-4540
AD-954234.1	AAGCCCUUGGAGUGUUAAAUA	1719	5037-5057	UAUUTAACACUCCAAGGGCUUCA	3134	5035-5057
AD-954242.1	UCUGAUUUCCCAGUCAACUGA	1720	5197-5217	UCAGTUGACUGGGAAAUCAGAAC	3135	5195-5217
AD-954250.1	AUCUUCAAGUCUGGAAUGUUA	1721	5507-5527	UAACAUTCCAGACTUGAAGAUGU	3136	5505-5527
AD-954258.1	AUCCAGGCAATUCAGUCUCGA	3008	6011-6031	UCGAGACUGAATUGCCUGGAUGA	3137	6009-6031
AD-954265.1	AUGGUCGACATCCUUGCUUGA	3009	6170-6190	UCAAGCAAGGATGTCGACCAUGC	3138	6168-6190
AD-954273.1	CUUCAUGATGAACUCGGAGUA	3010	6550-6570	UACUCCGAGUUCATCAUGAAGGC	3139	6548-6570
AD-954281.1	GACCAGUCGUACUCAGUUUGA	1725	7525-7545	UCAAACTGAGUACGACUGGUCCA	2655	7523-7545
AD-954289.1	ACGCUGACAGAACU GC GAAGA	1726	8318-8338	UCUUCGCAGUUCUGUCAGCGUCA	1887	8316-8338
AD-954297.1	UGACUUGUTUACGAAAUGUCA	3011	9540-9560	UGACAUTUCGUAAACAAGUCAGC	2660	9538-9560
AD-954219.1	UGUUUGAACCTCUUGUUAUAA	3012	4422-4442	UTAUAACAAGAGGTUCAAACAAA	3140	4420-4442
AD-954227.1	UCAGAUCAGGTGUUUAUUGGA	3013	4550-4570	UCCAAUAAACACCTGAUCUGAAU	3141	4548-4570
AD-954235.1	GCCCUUGGAGTGUUAAAUACA	3014	5039-5059	UGUATUTAACACUCCAAGGGCUU	3142	5037-5059
AD-954243.1	AAGAUAUUGUTCUUUCUCGUA	3015	5217-5237	UACGAGAAAGAACAATAUCUUCA	3143	5215-5237
AD-954251.1	UCAAGUCUGGAAUGUUCCGGA	1730	5511-5531	UCCGGAACAUUCCAGACUUGAAG	1891	5509-5531
AD-954259.1	UCCAGGCAAUTCAGUCUCGUA	3016	6012-6032	UACGAGACUGAAUTGCCUGGAUG	3144	6010-6032
AD-954266.1	GUCGACAUCCTUGCUUGUCGA	3017	6173-6193	UCGACAAGCAAGGAUGUCGACCA	1893	6171-6193
AD-954274.1	CUGCUAGCTCCAUGCUUAAGA	3018	6581-6601	UCUUAAGCAUGGAGCTAGCAGGC	3145	6579-6601
AD-954282.1	ACCAGUCGTACUCAGUUUGAA	3019	7526-7546	UTCAAACUGAGTACGACUGGUCC	3146	7524-7546
AD-954290.1	GAAAGGAGAAAGUCAGUCCGA	1735	8937-8957	UCGGACTGACUTUCUCCUUUCCU	3147	8935-8957
AD-954298.1	UAACGUAACUCUUUCUAUGCA	1736	10173-10193	UGCATAGAAAGAGTUACGUUAAA	3148	10171-10193
AD-954220.1	GUUUGAAC CU CUUGUUAUAAA	123	4423-4443	UTUATAACAAGAGGUTCAAACAA	3149	4421-4443
AD-954228.1	UUGGCUUUGUAUUGAAACAGA	1737	4566-4586	UCUGTUTCAAUACAAAGCCAAUA	3150	4564-4586
AD-954236.1	UAGACAUGCUTUUACGGAGUA	3020	5097-5117	UACUCCGUAAAAGCATGUCUACC	3151	5095-5117
AD-954244.1	GAUAUUGUTCTUUCUCGUAUA	3021	5219-5239	UAUACGAGAAAGAACAAUAUCUU	1900	5217-5239
AD-954252.1	CAAGUCUGGAAUGUUC CGGAA	1740	5512-5532	UTCCGGAACAUTCCAGACUUGAA	3152	5510-5532
AD-954260.1	CCAGGCAATUCAGUCUCGUUA	3022	6013-6033	UAACGAGACUGAATUGCCUGGAU	3153	6011-6033
AD-954267.1	CAUGCAAGACTCACUUAGUCA	3023	6349-6369	UGACTAAGUGAGUCUTGCAUGGU	3154	6347-6369
AD-954275.1	UGCUAGCUCCAUGCUUAAGCA	17 43	6582-6602	UGCUTAAGCAUGGAGCUAGCAGG	3155	6580-6602
AD-954283.1	CCAGUCGUACTCAGUUUGAAA	3024	7527-7547	UTUCAAACUGAGUACGACUGGUC	3156	7525-7547
AD-954291.1	AGAACUUCAGACCCUAAUCCA	1745	8960-8980	UGGATUAGGGUCUGAAGUUCUAC	3157	8958-8980

- 141 048552

AD-954299.1	UCUAUGCCCGTGUAAAGUAUA	3025	10186-10206	UAUACUTUACACGGGCAUAGAAA	3158	10184-10206
AD-954221.1	UUUGAACCTCTUGUUAUAAAA	3026	4424-4444	UTUUAUAACAAGAGGTUCAAACA	3159	4422-4444
AD-954229.1	UUAUGAACGCTAUCAUUCAAA	3027	4666-4686	UTUGAATGAUAGCGUTCAUAAGA	3160	4664-4686
AD-954237.1	ACAUGCUUTUACGGAGUAUGA	3028	5100-5120	UCAUACTCCGUAAAAGCAUGUCU	2635	5098-5120
AD-954245.1	UUGUUCUUTCTCGUAUUCAGA	3029	5223-5243	UCUGAATACGAGAAAGAACAAUA	2637	5221-5243
AD-954253.1	AGCACAAAGUTACUUAGUССА	3030	5744-5764	UGGACUAAGUAACTUTGUGCUGG	3161	5742-5764
AD-954261.1	CAGGCAAUTCAGUCUCGUUGA	3031	6014-6034	UCAACGAGACUGAAUTGCCUGGA	3162	6012-6034
AD-954268.1	AUGCAAGACUCACUUAGUССА	1752	6350-6370	UGGACUAAGUGAGTCTUGCAUGG	3163	6348-6370
AD-954276.1	ACUGGAGCAAGUUGAAUGAUA	1753	6753-6773	UAUCAUTCAACTUGCTCCAGUAG	3164	6751-6773
AD-954284.1	CAGUCGUACUCAGUUUGAAGA	120	7528-7548	UCUUCAAACUGAGTACGACUGGU	3165	7526-7548
AD-954292.1	UCAUGAACAAAGUCAUCGGAA	1754	9129-9149	UTCCGATGACUTUGUTCAUGAUG	3166	9127-9149
AD-954300.1	CUAUGCCCGUGUAAAGUAUGA	1755	10187-10207	UCAUACTUUACACGGGCAUAGAA	3167	10185-10207
AD-954222.1	AAGCUUUAAAACAGUACACGA	1756	4443-4463	UCGUGUACUGUTUTAAAGCUUUU	3168	4441-4463
AD-954230.1	AACGCUAUCATUСААААСAGA	3032	4671-4691	UCUGTUTUGAATGAUAGCGUUCA	3169	4669-4691
AD-954238.1	CUUUUACGGAGUAUGUUCGUA	1758	5105-5125	UACGAACAUACTCCGTAAAAGCA	3170	5103-5125
AD-954246.1	UGUUCUUUCUCGUAUUCAGGA	125	5224-5244	U CCUGAAUACGAGAAAGAACAAU	326	5222-5244
AD-954254.1	AGAGGAGGAUTCUGACUUGGA	3033	5779-5799	UCCAAGTCAGAAUCCTCCUCUUC	3171	5777-5799
AD-954262.1	AGGCAAUUCAGUCUCGUUGUA	1760	6015-6035	UACAACGAGACTGAATUGCCUGG	3172	6013-6035
AD-954269.1	CACUGGAAACAGUGAGUCCGA	1761	6417-6437	UCGGACTCACUGUTUCCAGUGAC	3173	6415-6437
AD-954277.1	UGUCAACAGCTACACACGUGA	3034	7363-7383	UCACGUGUGUAGCTGTUGACAAG	3174	7361-7383
AD-954285.1	AAGCUGAGCATUAUCAGAGGA	3035	7787-7807	UCCUCUGAUAATGCUCAGCUUCC	3175	7785-7807
AD-954293.1	CGGCUGCUGACUUGUUUACGA	1764	9533-9553	UCGUAAACAAGTCAGCAGCCGGU	3176	9531-9553
AD-954301.1	CCGCUGACAUTUCCGUUGUAA	3036	10311-10331	UTACAACGGAAAUGUCAGCGGGU	3177	10309-10331
AD-954223.1	AGCUGGUUCAGUUACGGGUUA	1766	4512-4532	UAACCCGUAACTGAACCAGCUGC	3178	4510-4532
AD-954231.1	GUGGAAGCGACUGUCUCGACA	1767	4957-4977	UGUCGAGACAGTCGCTUCCACUU	3179	4955-4977
AD-954239.1	UUUUACGGAGTAUGUUCGUCA	3037	5106-5126	UGACGAACAUACUCCGUAAAAGC	1929	5104-5126
AD-954247.1	AUUUUCAAGGTUUCUAUUACA	3038	5368-5388	UGUAAUAGAAACCTUGAAAAUGU	3180	5366-5388
AD-954255.1	CAAUAGAGAAAUAGUACGAAA	1769	5818-5838	UTUCGUACUAUTUCUCUAUUGCA	3181	5816-5838
AD-954263.1	GGCAAUUCAGTCUCGUUGUGA	3039	6016-6036	UCACAACGAGACUGAAUUGCCUG	1931	6014-6036
AD-954270.1	AGCUGGUGAATCGGAUUCCUA	3040	6513-6533	UAGGAATCCGATUCACCAGCUCU	3182	6511-6533
AD-954278.1	GU CAACAG CUACACAC GU GUА	1772	7364-7384	UACACGTGUGUAGCUGUUGACAA	3183	7362-7384
AD-954286.1	UUGAGCUGAUGUAUGUGACGA	1773	8301-8321	UCGUCACAUACAUCAGCUCAAAC	1934	8299-8321
AD-954294.1	GGCUGCUGACTUGUUUACGAA	3041	9534-9554	UTCGTAAACAAGUCAGCAGCCGG	3184	9532-9554
AD-954302. 1	GACUGUCATGTGGCUUGGUUA	3042	11080-11100	UAACCAAGCCACATGACAGUCGC	3185	11078-11100
AD-954224.1	GUUCAGUUACGG GUUAAUUAA	1775	4517-4537	UTAATUAACCCGUAACUGAACCA	3186	4515-4537
AD-954232.1	GACUGUCU СGACAGAUAG CUА	1776	4965-4985	UAGCTATCUGUCGAGACAGUCGC	3187	4963-4985
AD-954240.1	UUUACGGAGUAUGUUCGUCAA	1777	5107-5127	UTGACGAACAUACTCCGUAAAAG	3188	5105-5127
AD-954248.1	AAGGUUUCTATUACAACUGGA	3043	5374-5394	UCCAGUTGUAATAGAAACCUUGA	3189	5372-5394
AD-954256.1	GACUCCGAGCACUUAACGUGA	1779	5885-5905	UCACGUTAAGUGCTCGGAGUCAU	3190	5883-5905
AD-954271.1	GCUGGUGAAUCGGAUUCCUGA	1780	6514-6534	UCAGGAAUCCGAUTCACCAGCUC	3191	6512-6534
AD-954279.1	UCAACAGCTACACACGUGUGA	3044	7365-7385	UCACACGUGUGTAGCTGUUGACA	3192	7363-7385
AD-954287.1	GAGCUGAUGUAUGUGACGCUA	1782	8303-8323	UAGCGUCACAUACAUCAGCUCAA	1943	8301-8323
AD-954295.1	CUGCUGACTUGUUUACGAAAA	3045	9536-9556	UTUUCGTAAACAAGUCAGCAGCC	3193	9534-9556

Таблица 15

Модифицированные последовательности смысловых и антисмысловых цепей дцРНК средств к хангтингтину (HTT)

ID дуплекса	Смысловая последовательность 5 ' —>3'	SEQ ID NO:	Антисмысловая последовательность 5'—>3'	SEQ ID NO:	Последовательность мРНКмижени 5’—>3'	SEQ ID NO:
AD-954123.1	asgscua(Chd)cadAgdAaagaccgugaL96	3194	VPusdCsacdGgdTcuuudCudTgdGuagcusgsa	3374	иСAGCUACCAAGAAAGACCGUGU	2445
AD-954131.1	asusucu(Ahd)audCudTccaagguuaaL96	3195	VPusdTsaadCcdTuggadAgdAudTagaauscsc	3375	G GAUU CUAAU CUUC CAAGGUUAC	965
AD-954139.1	asgsguu(Uhd)audGadAcugacguuaaL96	3196	VPusdTsaadCgdTcagudTcdAudAaaccusgsg	3376	CCAGGUUUAUGAACUGACGUUAC	991
AD-954147.1	asgsuau(Uhd)gudGgdAacuuauagcaL96	3197	VPu sdGscudAudAaguudCcdAcdAauacus cs c	3377	GGAGUAUUGUGGAACUUAUAGCU	2446
AD-954155.1	gsascuc(Uhd)gadAudCgagaucggaaL96	3198	VPusdTsccdGadTcucgdAudTcdAgagucsasu	3378	AU GACU CU GAAU CGAGAU CGGAU	2447
AD-954163.1	ascsagc(Ahd)gudGudTgauaaauuuaL96	3199	VPusdAsaadTudTaucadAcdAcdTgcuguscsa	3379	UGACAGCAGU GUUGAUAAAUUU G	1015
AD-954170.1	csgsccu(Uhd)uudAudCugcuucguuaL96	3200	VPusdAsacdGadAgcagdAudAadAaggcgsgsa	3380	UCCGCCUUUUAUCUGCUUCGUUU	1001
AD-954178.1	csusgag(Ghd)aadCadGuuccuauugaL96	3201	VPusdCsaadTadGgaacdTgdTudCcucagsasg	3381	CU CU GAG GAACAGUUC CUAUUG G	1021

142 048552

AD-954186.1	ususcuc(Chd)gudCadGcacaauaacaL96	3202	VPusdGsuudAudTgugcdTgdAcdGgagaasasu	3382	AUUU CUС C GU CAGCACAAUAACC	3554
AD-954194.1	usasgga(Ahd)gadGcdTguaccguugaL96	3203	VPusdCsaadCgdGuacadGcdTcdTuccuasgsa	3383	UCUAGGAAGAGCUGUACCGUUGG	2448
AD-954202.1	ususcuc(Uhd)aadGudCccauccgacaL96	3204	VPusdGsucdGgdAugggdAcdTudAgagaasgsg	3384	CCUUCUCUAAGUCCCAUCCGACG	2449
AD-954210.1	ususgug(Uhd}ucdAadCaauuguugaaL96	3205	VPu sdTscadAcdAauugdTudGadAcacaasasc	3385	GUUU GU GUU CAACAAUUGUU GAA	3555
AD-954124.1	csusacc(Ahd}agdAadAgaccgugugaL96	3206	VPusdCsacdAcdGgucudTudCudTgguagscsu	3386	AGCUACCAAGAAAGACCGUGUGA	2450
AD-954132.1	ususcca(Ahd)ggdTudAcagcucgagaL96	3207	VPusdCsucdGadGcugudAadCcdTuggaasgsa	3387	U CUU C CAAG GUUACAG CU CGAG C	2451
AD-954140.1	gsgsuuu(Ahd)ugdAadCugacguuacaL96	3208	VPusdGsuadAcdGucagdTudCadTaaaccsusg	3388	CAGGUUUAUGAACUGACGUUACA	2452
AD-954148.1	gsusauu(Ghd)ugdGadAcuuauagcuaL96	3209	VPusdAsgcdTadTaagudTcdCadCaauacsusc	3389	GAGUAUUGUGGAACUUAUAGCUG	2453
AD-954156.1	ascsucu(Ghd)aadTcdGagaucggauaL96	3210	VPusdAsucdCgdAucucdGadTudCagaguscsa	3390	UGACUCUGAAUCGAGAUCGGAUG	1011
AD-954164.1	usgsaua(Ahd)audTudGuguugagagaL96	3211	VPusdCsucdTcdAacacdAadAudTuaucasasc	3391	GUUGAUAAAUUUGUGUUGAGAGA	2454
AD-954171.1	uscsuau(Ahd)aadGudTccucuugacaL96	3212	VPusdGsucdAadGaggadAcdTudTauagasgsu	3392	ACUCUAUAAAGUUCCUCUUGACA	987
AD-954179.1	usgsagg(Ahd)acdAgdTuccuauuggaL96	3213	VPusdCscadAudAggaadCudGudTccucasgsa	3393	UCUGAGGAACAGUUCCUAUUGGC	2455
AD-954187.1	uscsucc(Ghd)ucdAgdCacaauaaccaL96	3214	VPusdGsgudTadTugugdCudGadCggagasasa	3394	UUUCUCCGUCAGCACAAUAACCA	2456
AD-954195.1	asgsgaa(Ghd)agdCudGuaccguuggaL96	3215	VPusdCscadAcdGguacdAgdCudCuuccusasg	3395	CUAGGAAGAGCUGUACCGUUGGG	2457
AD-954203.1	gsasgaa(Chd)aadGcdAucuguaccgaL96	3216	VPusdCsggdTadCagaudGcdTudGuucucscsu	3396	AG GAGAACAAG CAU CU GUAC CGU	2458
AD-954211.1	gsasgug(Uhd)cadCadAagaaccgugaL96	3217	VPusdCsacdGgdTucuudTgdTgdAcacucsgsu	3397	ACGAGUGUCACAAAGAACCGUGC	2459
AD-954125.1	asasuca(Uhd)ugdTcdTgacaauaugaL96	3218	VPusdCsaudAudTgucadGadCadAugauuscsa	3398	U GAAU CAUUGU CU GACAAUAUGU	2460
AD-954133.1	uscscaa(Ghd)gudTadCagcucgagcaL96	3219	VPusdGscudCgdAgcugdTadAcdCuuggasasg	3399	CUUCCAAGGUUACAGCUCGAGCU	24 61
AD-954141.1	ususuau(Ghd)aadCudGacguuacauaL96	3220	VPusdAsugdTadAcgucdAgdTudCauaaascsc	3400	G GUUUAUGAACU GACGUUACAUC	2462
AD-954149.1	usasuug(Uhd)ggdAadCuuauagcugaL96	3221	VPusdCsagdCudAuaagdTudCcdAcaauascsu	3401	AGUAUUGUGGAACUUAUAGCUGG	2463
AD-954157.1	csuscug(Ahd)audCgdAgaucggaugaL96	3222	VPusdCsaudCcdGaucudCgdAudTcagagsusc	3402	GACU CU GAAU C GAGAU CG GAUGU	2464
AD-954165.1	asgsaug(Ahd)agdCudAcugaaccggaL96	3223	VPusdCscgdGudTcagudAgdCudTcaucuscsu	3403	AGAGAUGAAGCUACUGAACCGGG	24 65
AD-954172.1	csasucu(Uhd)gadAcdTacaucgaucaL96	3224	VPusdGsaudCgdAuguadGudTcdAagaugsusc	3404	GACAUCUUGAACUACAUCGAUCA	2466
AD-954180.1	gsasgga(Ahd)cadGudTccuauuggcaL96	3225	VPusdGsccdAadTaggadAcdTgdTuccucsasg	3405	CUGAGGAACAGUUCCUAUUGGCU	2921
AD-954188.1	uscscgu(Chd)agdCadCaauaaccagaL96	3226	VPusdCsugdGudTauugdTgdCudGacggasgsa	3406	иCU СC GU CAGCACAAUAACCAGA	2467
AD-954196.1	gsgsaag(Ahd)gcdTgdTaccguugggaL96	3227	VPusdCsccdAadCgguadCadGcdTcuuccsusa	3407	UAGGAAGAGCUGUACCGUUGGGA	2468
AD-954204.1	asascaa(Ghd)cadTcdTguaccguugaL96	3228	VPusdCsaadCgdGuacadGadTgdCuuguuscsu	3408	AGAACAAGCAUCUGUACCGUUGA	2924
AD-954212.1	usgsuca(Chd)aadAgdAaccgugcagaL96	3229	VPusdCsugdCadCgguudCudTudGugacascsu	3409	AGU GU CACAAAGAACC GU GCAGA	2469
AD-954126.1	csasuug(Uhd)cudGadCaauaugugaaL96	3230	VPusdTscadCadTauugdTcdAgdAcaaugsasu	3410	AU CAUU GU CU GACAAUAU GU GAA	925
AD-954134.1	csusguu(Chd)ccdAadAauuauggcuaL96	3231	VPusdAsgcdCadTaauudTudGgdGaacagscsu	3411	AGCUGUUCCCAAAAUUAUGGCUU	2470
AD-954142.1	csasgca(Chd)cadAgdAccacaauguaL96	3232	VPusdAscadTudGuggudCudTgdGugcugsusg	3412	CACAG CAC CAAGAC CACAAU GUU	2471
AD-954150.1	asusugu(Ghd)gadAcdTuauagcuggaL96	3233	VPusdCscadGcdTauaadGudTcdCacaausasc	3413	GUAUU GUGGAACUUAUAGCU G GA	2472
AD-954158.1	ususcug(Ahd)aadTudGuguuagacgaL96	3234	VPusdCsgudCudAacacdAadTudTcagaascsu	3414	AGUU CU GAAAUU GU GUUAGACG G	2473
AD-954166.1	cscsucu(Uhd)gudCcdAuuguguccgaL96	3235	VPusdCsggdAcdAcaaudGgdAcdAagaggsusg	3415	CACCUCUUGUCCAUUGUGUCCGC	2474
AD-954173.1	csusuga(Ahd)cudAcdAucgaucaugaL96	3236	VPusdCsaudGadTcgaudGudAgdTucaagsasu	3416	AU CUU GAACUACAU C GAU CAU G G	930
AD-954181.1	asasgaa(Chd)gadGudGcucaauaauaL96	3237	VPusdAsuudAudTgagcdAcdTcdGuucuusgsc	3417	GCAAGAAC GAGU G CU CAAUAAU G	2475
AD-954189.1	asasccu(Uhd)ucdAadGaguuauugcaL96	3238	VPusdGscadAudAacucdTudGadAagguusasu	3418	AUAAC CUUU CAAGAGUUAUU G CA	2476
AD-954197.1	gsuscag(Chd)uudGgdTucccauuggaL96	3239	VPusdCscadAudGggaadCcdAadGcugacsgsa	3419	UCGUCAGCUUGGUUCCCAUUGGA	2477
AD-954205.1	cscsuga(Ahd)audCcdTgcuuuagucaL96	3240	VPusdGsacdTadAagcadGgdAudTucaggsusa	3420	UACCUGAAAUCCUGCUUUAGUCG	924
AD-954213.1	usasaga(Ahd)ugdCudAuucauaaucaL96	3241	VPusdGsaudTadTgaaudAgdCadTucuuasusc	3421	GAUAAGAAU G CUAUU CAUAAU CA	2478
AD-954127.1	asasugc(Chd)ucdAadCaaaguuaucaL96	3242	VPusdGsaudAadCuuugdTudGadGgcauuscsg	3422	CGAAU G C CU CAACAAAGUUAU CA	2479
AD-954135.1	asgsgcc(Uhd)ucdAudAgcgaaccugaL96	3243	VPusdCsagdGudTcgcudAudGadAggccususu	3423	AAAGG C CUU CAUAGC GAAC CU GA	2480
AD-954143.1	gscsacc(Ahd)agdAcdCacaauguugaL96	3244	VPusdCsaadCadTugugdGudCudTggugcsusg	3424	CAG CAC CAAGAC CACAAU GUU GU	2481
AD-954151.1	usgsgag(Ghd)audGadCucugaaucgaL96	3245	VPusdCsgadTudCagagdTcdAudCcuccasasg	3425	CUU GGAGGAU GACU CU GAAU C GA	2482
AD-954159.1	uscsuga(Ahd)audTgdTguuagacggaL96	3246	VPusdCscgdTcdTaacadCadAudTucagasasc	3426	GUU CU GAAAUU GU GUUAGACG GU	959
AD-954167.1	csuscuu(Ghd)ucdCadTuguguccgcaL96	3247	VPusdGscgdGadCacaadTgdGadCaagagsgsu	3427	AC CU CUU GU C CAUU GU GU С C G С C	2483
AD-954174.1	ususgaa(Chd)uadCadTcgaucauggaL96	3248	VPusdCscadTgdAucgadTgdTadGuucaasgsa	3428	UCUUGAACUACAUCGAUCAUGGA	1017
AD-954182.1	gsasgug(Chd)ucdAadTaauguugucaL96	3249	VPusdGsacdAadCauuadTudGadGcacucsgsu	3429	AC GAGU G CU CAAUAAU GUU GU CA	2484
AD-954190.1	asgsuuu(Ghd)cadTudTggaguuuagaL96	3250	VPusdCsuadAadCuccadAadTgdCaaacusgsg	3430	CCAGUUU GCAUUU GGAGUUUAG G	2485
AD-954198.1	asgscuu(Ghd)gudTcdCcauuggaucaL96	3251	VPusdGsaudCcdAauggdGadAcdCaagcusgsa	3431	UCAGCUUGGUUСCCAUUGGAUCU	2486
AD-954206.1	csusgaa(Ahd)ucdCudGcuuuagucgaL96	3252	VPusdCsgadCudAaagcdAgdGadTuucagsgsu	3432	ACCUGAAAUCCUGCUUUAGUC GA	2487
AD-954214.1	asgsaau(Ghd)cudAudTcauaaucacaL96	3253	VPusdGsugdAudTaugadAudAgdCauucususa	3433	UAAGAAU G CUAUU CAUAAU CACA	921
AD-954128.1	ususauc(Ahd)aadGcdTuugauggauaL96	3254	VPusdAsucdCadTcaaadGcdTudTgauaascsu	3434	AGUUAU CAAAG CUUU GAU GGAUU	2488
AD-954136.1	csuscug(Chd)ugdAudTcuuggcgugaL96	3255	VPusdCsacdGcdCaagadAudCadGcagagsusg	3435	CACUCUGCUGAUUCUUGGCGUGC	2489
AD-954144.1	csascca(Ahd)gadCcdAcaauguuguaL96	3256	VPusdAscadAcdAuugudGgdTcdTuggugscsu	3436	AG CAC CAAGAC CACAAU GUU GU G	2490
AD-954152.1	gsasgga(Uhd)gadCudCugaaucgagaL96	3257	VPusdCsucdGadTucagdAgdTcdAuccucscsa	3437	UG GAG G AU GACU CU GAAU C GAGA	2491

- 143 048552

AD-954160.1	csusgaa(Ahd)uudGudGuuagacgguaL96	3258	VPusdAsccdGudCua a cdAcdAadTuuca gs as a	3438	UUCUGAAAUUGUGUUAGACGGUA	971
AD-954168.1	uscscgc(Chd)uudTudAucugcuucgaL96	3259	VPusdCsgadAgdCagaudAadAadGgcggascsa	3439	UGUCCGCCUUUUAUCUGCUUCGU	2492
AD-954175.1	gsasacu(Ahd)cadTcdGaucauggagaL96	3260	VPusdCsucdCadTgaucdGadTgdTaguucsasa	3440	UU GAACUACAUC GAUCAU G GAGA	2493
AD-954183.1	gscscuc(Chd)audCudCauuucuccgaL96	3261	VPusdCsggdAgdAaaugdAgdAudGgaggcsusg	3441	CAGCCUCCAUCUCAUUUCUCCGU	2494
AD-954191.1	gsusuug(Chd)audTudGgaguuuaggaL96	3262	VPusdCscudAadAcuccdAadAudGcaaacsusg	3442	CAGUUU G CAUUU G GAGUUUAGGU	2495
AD-954199.1	asgsaug (Chd) uudTgdAuu.uuggccgaL96	3263	VPusdCsggdCcdAaaaudCadAadGcaucususg	3443	CAAGAUGCUUUGAUUUUGGCCGG	2496
AD-954207.1	gsasaau(Chd)cudGcdTuuagucgagaL96	3264	VPusdCsucdGadCuaaadGcdAgdGauuucsasg	3444	CUGAAAUCCUGCUUUAGUCGAGA	2497
AD-954215.1	gscsuau(Uhd)cadTadAucacauucgaL96	3265	VPusdCsgadAudGugaudTadTgdAauagcsasu	3445	AU GCUAUUCAUAAU CACAUU CGU	988
AD-954129.1	gscsuuu(Ghd)audGgdAuucuaaucuaL96	3266	VPusdAsgadTudAgaaudCcdAudCaaagcsusu	3446	AAG CUUU GAU G GAUUCUAAU CUU	946
AD-954137.1	gscsagc(Uhd)ugdTcdCagguuuaugaL96	3267	VPusdCsaudAadAccugdGadCadAgcugcsusc	3447	GAGCAGCUUGUCCAGGUUUAUGA	2498
AD-954145.1	ascscaa(Ghd)acdCadCaauguugugaL96	3268	VPusdCsacdAadCauugdTgdGudCuuggusgsc	3448	G CAC CAAGAC CACAAU GUUGUGA	2499
AD-954153.1	asgsgau(Ghd)acdTcdTgaaucgagaaL96	3269	VPusdTscudCgdAuucadGadGudCauccuscsc	3449	GG AG GAU GACU CUGAAUC GAGAU	2500
AD-954161.1	usgsaaa(Uhd)ugdTgdTuagacgguaaL96	3270	VPusdTsacdCgdTcuaadCadCadAuuucasgsa	3450	U CU GAAAUU GU GUUAGACGGUAC	1003
AD-954169.1	cscsgcc(Uhd)uudTadTcugcuucguaL96	3271	VPusdAscgdAadGcagadTadAadAggcggsasc	3451	GUCCGCCUUUUAUCUGCUUCGUU	2501
AD-954176.1	csusuug(Ghd)cgdGadTugcauuccuaL96	3272	VPusdAsggdAadTgcaadTcdCgdCcaaagsasa	3452	UUCUUUGGCGGAUUGCAUUCCUU	2502
AD-954184.1	cscsucc(Ahd)ucdTcdAuuucuccguaL96	3273	VPusdAscgdGadGaaaudGadGadTggaggscsu	3453	AGCCUCCAUCUCAUUUCUCCGUC	2503
AD-954192.1	gsuscua(Ghd)gadAgdAgcuguaccgaL96	3274	VPusdCsggdTadCagcudCudTcdCuagacsusc	3454	GAGUCUAGGAAGAGCUGUACCGU	2504
AD-954200.1	gsgsccg(Ghd)aadAcdTugcuugcagaL96	3275	VPusdCsugdCadAgcaadGudTudCcggccsasa	3455	UUGGCCGGAAACUUGCUUGCAGC	2505
AD-954208.1	ususuag(Uhd)cgdAgdAaccaaugauaL96	3276	VPu sdAsucdAudTgguudCudCgdAcuaaa s g s c	3456	GCUUUAGUCGAGAACCAAUGAUG	2506
AD-954216.1	ususcau(Ahd)audCadCauucguuugaL96	3277	VPusdCsaadAcdGaaugdTgdAudTaugaasusa	3457	UAUU CAUAAU CACAUUCGUUUGU	972
AD-954130.1	gsasuuc(Uhd)aadTcdTuccaagguuaL96	3278	VPusdAsacdCudTggaadGadTudAgaaucscsa	3458	UGGAUUCUAAUCUUCCAAGGUUA	952
AD-954138.1	csasggu(Uhd)uadTgdAacugacguuaL96	3279	VPusdAsacdGudCaguudCadTadAaccugsgsa	3459	UCCAGGUUUAUGAACUGACGUUA	964
AD-954146.1	gsasgua(Uhd)ugdTgdGaacuuauagaL96	3280	VPusdCsuadTadAguucdCadCadAuacucscsc	3460	G GGAGUAUUGU G GAACUUAUAGC	998
AD-954154.1	gsgsaug(Ahd)cudCudGaaucgagauaL96	3281	VPu sdAs ucdTcdGauucdAgdAgdTcau cc suse	3461	GAGGAUGACUCUGAAUCGAGAUC	2507
AD-954162.1	gsasaau(Uhd)gudGudTagacgguacaL96	3282	VPu s d G s u a de cd Gu cu adAedAedAa uu u c s a s g	3462	CU GAAAUU GU GUUAGACG GUAC C	2508
AD-954177.1	ususugg(Chd)ggdAudTgcauuccuuaL96	3283	VPusdAsagdGadAugcadAudCcdGccaaasgsa	3463	UCUUUGGCG GAUU G CAUU CCUUU	2509
AD-954185.1	csuscca(Uhd)cudCadTuucuccgucaL96	3284	VPusdGsacdGgdAgaaadTgdAgdAuggagsgsc	3464	GCCUCCAUCUCAUUUCUCCGUCA	2510
AD-954193.1	uscsuag(Ghd)aadGadGcuguaccguaL96	3285	VPusdAscgdGudAcagcdTcdTudCcuagascsu	3465	AGUCUAGGAAGAGCUGUACCGUU	2511
AD-9542 01.1	csusucu(Chd)uadAgdTcccauccgaaL96	3286	VPusdTscgdGadTgggadCudTadGagaagsgsg	3466	CCCUUCUCUAAGUCCCAUCCGAC	2512
AD-954209.1	ususagu(Chd)gadGadAccaaugaugaL96	3287	VPusdCsaudCadTuggudTcdTcdGacuaasasg	3467	CUUUAGU C GAGAAC CAAU GAUG G	2513
AD-954217.1	uscsaua(Ahd)ucdAcdAuucguuuguaL96	3288	VPusdAscadAadCgaaudGudGadTuaugasasu	3468	AUU CAUAAU CACAUUCGUUUGUU	984
AD-954225.1	ususcag(Uhd)uadCgdGguuaauuacaL96	3289	VPusdGsuadAudTaaccdCgdTadAcugaascsc	3469	GGUU CAGUUAC G GGUUAAUUACU	1007
AD-954233.1	ascsugu(Chd)ucdGadCagauagcugaL96	3290	VPusdCsagdCudAucugdTcdGadGacaguscsg	3470	C GACU GU CU C GACAGAUAGCUGA	2379
AD-954241.1	ususacg(Ghd)agdTadTguucgucacaL96	3291	VPusdGsugdAcdGaacadTadCudCcguaasasa	3471	UUUUACGGAGUAUGUUCGUCACU	2380
AD-954249.1	gscsaac(Ahd)uadCudTucuauugccaL96	3292	VPusdGsgcdAadTagaadAgdTadTguugcsusg	3472	CAGCAACAUACUUUCUAUUGCCA	993
AD-954257.1	ascsucc(Ghd)agdCadCuuaacguggaL96	3293	VPusdCscadCgdTuaagdTgdCudCggaguscsa	3473	UGACUCCGAGCACUUAACGUGGC	2381
AD-954264.1	gscsaau(Uhd)cadGudCucguugugaaL96	3294	VPusdTscadCadAcgagdAcdTgdAauugcscsu	3474	AGGCAAUUCAGUCUCGUUGUGAA	2382
AD-954272.1	usgsccu(Uhd)cadTgdAugaacucggaL96	3295	VPusdCscgdAgdTucaudCadTgdAaggcasusu	3475	AAUGCCUUCAUGAUGAACUCGGA	2383
AD-954280.1	csasaca(Ghd)cudAcdAcacgugugcaL96	3296	VPusdGscadCadCgugudGudAgdCuguugsasc	3476	GU CAACAG CUACACAC GU GU GC C	2384
AD-954288.1	gsascgc(Uhd)gadCadGaacugcgaaaL96	3297	VPusdTsucdGcdAguucdTgdTcdAgcgucsasc	3477	GUGACGCUGACAGAACUGCGAAG	2385
AD-954296.1	csusgac(Uhd)ugdTudTacgaaauguaL96	3298	VPusdAscadTudTcguadAadCadAgucagscsa	3478	UGCUGACUUGUUUACGAAAUGUC	2386
AD-954218.1	asuscac(Ahd)uudCgdTuuguuugaaaL96	3299	VPusdTsucdAadAcaaadCgdAadTgugaususa	3479	UAAU CACAUU C GUUU GUUU GAAC	2387
AD-954226.1	csasguu(Ahd)cgdGgdTuaauuacugaL96	3300	VPusdCsagdTadAuuaadCcdCgdTaacugsasa	3480	UU CAGUUAC GG GUUAAUUACUGU	2388
AD-954234.1	asasgcc(Chd)uudGgdAguguuaaauaL96	3301	VPu s dAsuudT adAcacudCedAadGggcuu sc s a	3481	U GAAG С C CUU G GAGUGUUAAAUA	2389
AD-954242.1	uscsuga(Uhd)uudCcdCagucaacugaL96	3302	VPusdCsagdTudGacugdGgdAadAucagasasc	3482	GUU CU GAUUU C CCAGU CAACUGA	2390
AD-954250.1	asuscuu(Chd)aadGudCuggaauguuaL96	3303	VPusdAsacdAudTccagdAcdTudGaagausgsu	3483	ACAUCUUCAAGUCUGGAAUGUUC	1004
AD-954258.1	asuscca(Ghd)gcdAadTucagucucgaL96	3304	VPusdCsgadGadCugaadTudGedCuggausgsa	3484	UCAUCCAGGCAAUUCAGUCUCGU	2391
AD-9542 65.1	asusggu(Chd)gadCadTccuugcuugaL96	3305	VPusdCsaadGcdAaggadTgdTcdGaccausgsc	3485	GCAUGGUCGACAUCCUUGCUUGU	2392
AD-954273.1	csusuca(Uhd)gadTgdAacucggaguaL96	3306	VPusdAscudCcdGaguudCadTcdAugaagsgsc	3486	GCCUUCAUGAUGAACUCGGAGUU	2393
AD-954281.1	gsascca(Ghd)ucdGudAcucaguuugaL96	3307	VPusdCsaadAcdTgagudAcdGadCuggucscsa	3487	UGGACCAGUCGUACUCAGUUUGA	2394
AD-954289.1	ascsgcu(Ghd)acdAgdAacugcgaagaL96	3308	VPusdCs uudC gdCa guudCudGudCagc gu s c s a	3488	UGACGCUGACAGAACUGCGAAGG	2395
AD-954297.1	usgsacu(Uhd)gudTudAcgaaaugucaL96	3309	VPusdGsacdAudTucgudAadAcdAagucasgsc	3489	GCUGACUUGUUUACGAAAUGUCC	950
AD-954219.1	usgsuuu(Ghd)aadCcdTcuuguuauaaL96	3310	VPusdTsaudAadCaagadGgdTudCaaacasasa	3490	UUUGUUUGAACCUCUUGUUAUAA	933
AD-954227.1	uscsaga(Uhd)cadGgdTguuuauuggaL96	3311	VPusdCscadAudAaacadCcdTgdAucugasasu	3491	AUU CAGAU CAGGU GUUUAUU GG C	2396
AD-954235.1	gscsccu(Uhd)ggdAgdTguuaaauacaL96	3312	VPusdGsuadTudTaacadCudCcdAagggcsusu	3492	AAG С C CUU G GAGUGUUAAAUACA	2397
AD-954243.1	asasgau(Ahd)uudGudTcuuucucguaL96	3313	VPusdAscgdAgdAaagadAcdAadTaucuuscsa	3493	UGAAGAUAUUGUUCUUUCUCGUA	919

- 144 048552

AD-9542 51.1	uscsaag(Uhd)cudGgdAauguuccggaL96	3314	VPusdCscgdGadAcauudCcdAgdAcuugasasg	3494	CUUCAAGUCUGGAAUGUUCCGGA	2398
AD-954259.1	uscscag(Ghd)cadAudTcagucucguaL96	3315	VPusdAscgdAgdAcugadAudTgdCcuggasusg	3495	CAUCCAGGCAAUUCAGUCUCGUU	2399
AD-954266.1	gsuscga(Chd)audCcdTugcuugucgaL96	3316	VPusdCsgadCadAgcaadGgdAudGucgacscsa	3496	UGGUCGACAUCCUUGCUUGUCGC	2400
AD-954274.1	csusgcu(Ahd)gcdTcdCaugcuuaagaL96	3317	VPusdCsuudAadGcaugdGadGcdTagcagsgsc	3497	GCCUGCUAGCUCCAUGCUUAAGC	2401
AD-954282.1	ascscag(Uhd)cgdTadCucaguuugaaL96	3318	VPusdTscadAadCugagdTadCgdAcugguscsc	3498	GGAC CAGU C GUACU CAGUUUGAA	2402
AD-9542 90.1	gsasaag (Ghd) agdAadAgu.caguccgaL96	3319	VPusdCsggdAcdTgacudTudCudCcuuucscsu	3499	AGGAAAGGAGAAAGUCAGUCCGG	2403
AD-9542 98.1	usasacg(Uhd)aadCudCuuucuaugcaL96	3320	VPusdGscadTadGaaagdAgdTudAcguuasasa	3500	UUUAACGUAACUCUUUCUAUGCC	982
AD-954220.1	gsusuug(Ahd)acdCudCuuguuauaaaL96	3321	VPusdTsuadTadAcaagdAgdGudTcaaacsasa	3501	UUGUUU GAACCUCUUGUUAUAAA	929
AD-954228.1	ususggc(Uhd)uudGudAuugaaacagaL96	3322	VPusdCsugdTudTcaaudAcdAadAgccaasusa	3502	UAUU GGCUUU GUAUUGAAACAGU	2404
AD-954236.1	usasgac(Ahd)ugdCudTuuacggaguaL96	3323	VPusdAscudCcdGuaaadAgdCadTgucuascsc	3503	GGUAGACAUGCUUUUACGGAGUA	2405
AD-954244.1	gsasuau(Uhd)gudTcdTuucucguauaL96	3324	VPusdAsuadCgdAgaaadGadAcdAauaucsusu	3504	AAGAUAUUGUUCUUUCUCGUAUU	999
AD-954252.1	csasagu(Chd)ugdGadAuguuccggaaL96	3325	VPusdTsccdGgdAacaudTcdCadGacuugsasa	3505	UUCAAGUCUGGAAUGUUCCGGAG	2406
AD-954260.1	cscsagg(Chd)aadTudCagucucguuaL96	3326	VPusdAsacdGadGacugdAadTudGccuggsasu	3506	AUCCAGGCAAUUCAGUCUCGUUG	2407
AD-954267.1	csasugc(Ahd)agdAcdTcacuuagucaL96	3327	VPusdGsacdTadAgugadGudCudTgcaugsgsu	3507	ACCAUGCAAGACUCACUUAGUCC	1008
AD-954275.1	usgscua(Ghd)cudCcdAugcuuaagcaL96	3328	VPusdGscudTadAgcaudGgdAgdCuagcasgsg	3508	CCUGCUAGCUCCAUGCUUAAGCC	2408
AD-954283.1	cscsagu(Chd)gudAcdTcaguuugaaaL96	3329	VPusdTsucdAadAcugadGudAcdGacuggsusc	3509	GAC CAGU C GUACU CAGUUUGAAG	958
AD-954291.1	asgsaac(Uhd)ucdAgdAcccuaauccaL96	3330	VPusdGsgadTudAgggudCudGadAguucusasc	3510	GUAGAACUUCAGACCCUAAUCCU	2409
AD-954299.1	uscsuau(Ghd)ccdCgdTguaaaguauaL96	3331	VPusdAsuadCudTuacadCgdGgdCauagasasa	3511	UUU CUAU GC С C GU GUAAAGUAU G	2410
AD-954221.1	ususuga(Ahd)ccdTcdTuguuauaaaaL96	3332	VPusdTsuudAudAacaadGadGgdTucaaascsa	3512	U GUUU GAAC CU CUUGUUAUAAAA	928
AD-954229.1	ususaug(Ahd)acdGcdTaucauucaaaL96	3333	VPusdTsugdAadTgauadGcdGudTcauaasgsa	3513	UCUUAUGAACGCUAUCAUUCAAA	2411
AD-954237.1	ascsaug(Chd)uudTudAcggaguaugaL96	3334	VPusdCsaudAcdTccgudAadAadGcauguscsu	3514	AGACAU GCUUUUAC GGAGUAUGU	2412
AD-954245.1	ususguu(Chd)uudTcdTcguauucagaL96	3335	VPusdCsugdAadTacgadGadAadGaacaasusa	3515	UAUU GUU CUUU CU CGUAUUCAGG	916
AD-9542 53.1	asgscac(Ahd)aadGudTacuuaguccaL96	3336	VPusdGsgadCudAaguadAcdTudTgugcusgsg	3516	CCAGCACAAAGUUACUUAGUCCC	2413
AD-9542 61.1	csasggc(Ahd)audTcdAgucucguugaL96	3337	VPusdCsaadCgdAgacudGadAudTgccugsgsa	3517	UCCAGGCAAUUCAGUCUCGUUGU	2414
AD-954268.1	asusgca(Ahd)gadCudCacuuaguccaL96	3338	VPusdGsgadCudAagugdAgdTcdTugcausgsg	3518	CCAUGCAAGACUCACUUAGUCCC	2415
AD-954276.1	ascsugg(Ahd)gcdAadGuugaaugauaL96	3339	VPusdAsucdAudTcaacdTudGcdTccagusasg	3519	CUACUG GAG CAAGUUGAAUGAUC	2416
AD-954284.1	csasguc(Ghd)uadCudCaguuugaagaL96	3340	VPusdCsuudCadAacugdAgdTadCgacugsgsu	3520	ACCAGUCGUACUCAGUUUGAAGA	926
AD-954292.1	uscsaug(Ahd)acdAadAgucaucggaaL96	3341	VPusdTsccdGadTgacudTudGudTcaugasusg	3521	CAUCAUGAACAAAGUCAUCGGAG	2417
AD-954300.1	csusaug(Chd)ccdGudGuaaaguaugaL96	3342	VPusdCsaudAcdTuuacdAcdGgdGcauagsasa	3522	UU CUAU G С С C GU GUAAAGUAUGU	2418
AD-954222.1	asasgcu(Uhd)uadAadAcaguacacgaL96	3343	VPusdCsgudGudAcugudTudTadAagcuususu	3523	AAAAGCUUUAAAACAGUACACGA	2419
AD-954230.1	asascgc(Uhd)audCadTucaaaacagaL96	3344	VPusdCsugdTudTugaadTgdAudAgcguuscsa	3524	U GAAC GCUAUCAUU CAAAACAGA	2420
AD-954238.1	csusuuu(Ahd)cgdGadGuauguucguaL96	3345	VPusdAscgdAadCauacdTcdCgdTaaaagscsa	3525	U GCUUUUAC GGAGUAU GUUCGU C	2421
AD-954246.1	usgsuuc(Uhd)uudCudCguauucaggaL96	3346	VPusdCscudGadAuacgdAgdAadAgaacasasu	3526	AUUGUUCUUUCUCGUAUUCAGGA	931
AD-954254.1	asgsagg(Ahd)ggdAudTcugacuuggaL96	3347	VPusdCscadAgdTcagadAudCcdTccucususc	3527	GAAGAGGAGGAUUCUGACUUGGC	2422
AD-954262.1	asgsgca(Ahd)uudCadGucucguuguaL96	3348	VPusdAscadAcdGagacdTgdAadTugccusgsg	3528	CCAGGCAAUUCAGUCUCGUUGUG	2423
AD-954269.1	csascug(Ghd)aadAcdAgugaguccgaL96	3349	VPusdCsggdAcdTcacudGudTudCcagugsasc	3529	GUCACUGGAAACAGUGAGUCCGG	2424
AD-954277.1	usgsuca(Ahd)cadGcdTacacacgugaL96	3350	VPusdCsacdGudGuguadGcdTgdTugacasasg	3530	CUUGUCAACAGCUACACACGUGU	2425
AD-954285.1	asasgcu(Ghd)agdCadTuaucagaggaL96	3351	VPusdCscudCudGauaadTgdCudCagcuuscsc	3531	GGAAGCUGAGCAUUAUCAGAGGG	2426
AD-954293.1	csgsgcu(Ghd)cudGadCuuguuuacgaL96	3352	VPusdCsgudAadAcaagdTcdAgdCagccgsgsu	3532	ACCGGCUGCUGACUUGUUUACGA	2427
AD-954301.1	cscsgcu(Ghd)acdAudTuccguuguaaL96	3353	VPusdTsacdAadCggaadAudGudCagcggsgsu	3533	AC С C G CU GACAUUUCC GUUGUAC	2428
AD-954223.1	asgscug(Ghd)uudCadGuuacggguuaL96	3354	VPusdAsacdCcdGuaacdTgdAadCcagcusgsc	3534	GCAGCUGGUUCAGUUACGGGUUA	2429
AD-954231.1	gsusgga(Ahd)gcdGadCugucucgacaL96	3355	VPusdGsucdGadGacagdTcdGcdTuccacsusu	3535	AAGUGGAAGCGACUGUCUCGACA	2430
AD-954239.1	ususuua(Chd)ggdAgdTauguucgucaL96	3356	VPusdGsacdGadAcauadCudCcdGuaaaasgsc	3536	GCUUUUACGGAGUAUGUUCGUCA	2431
AD-954247.1	asusuuu(Chd)aadGgdTuucuauuacaL96	3357	VPusdGsuadAudAgaaadCcdTudGaaaausgsu	3537	ACAUUUUCAAGGUUUCUAUUACA	943
AD-954255.1	csasaua(Ghd)agdAadAuaguacgaaaL96	3358	VPusdTsucdGudAcuaudTudCudCuauugscsa	3538	UG CAAUAGAGAAAUAGUACGAAG	2432
AD-954263.1	gsgscaa(Uhd)ucdAgdTcucguugugaL96	3359	VPusdCsacdAadCgagadCudGadAuugccsusg	3539	CAGGCAAUUCAGUCUCGUUGUGA	2433
AD-954270.1	asgscug(Ghd)ugdAadTcggauuccuaL96	3360	VPusdAsggdAadTcegadTudCadCcagcuscsu	3540	AGAGCUGGUGAAUCGGAUUCCUG	2434
AD-954278.1	gsuscaa(Chd)agdCudAcacacguguaL96	3361	VPusdAscadCgdTgugudAgdCudGuugacsasa	3541	UU GU CAACAG CUACACAC GU GU G	2435
AD-954286.1	ususgag(Chd)ugdAudGuaugugacgaL96	3362	VPusdCsgudCadCauacdAudCadGcucaasasc	3542	GUUUGAGCUGAUGUAUGUGACGC	2436
AD-954294.1	gsgscug(Chd)ugdAcdTuguuuacgaaL96	3363	VPusdTscgdTadAacaadGudCadGcagccsgsg	3543	CCGGCUGCUGACUUGUUUACGAA	2437
AD-954302.1	gsascug(Uhd)cadTgdTggcuugguuaL96	3364	VPusdAsacdCadAgccadCadTgdAcagucsgsc	3544	GCGACUGUCAUGUGGCUUGGUUU	3556
AD-954224.1	gsusuca(Ghd)uudAcdGgguuaauuaaL96	3365	VPusdTsaadTudAacccdGudAadCugaacscsa	3545	U G GUU CAGUUAC G G GUUAAUUAC	957
AD-954232.1	gsascug(Uhd)cudCgdAcagauagcuaL96	3366	VPusdAsgcdTadlcugudCgdAgdAcagucsgsc	3546	GCGACUGUCUC GACAGAUAG CU G	2438
AD-954240.1	ususuac(Ghd)gadGudAuguucgucaaL96	3367	VPusdTsgadCgdAacaudAcdTcdCguaaasasg	3547	CUUUUACGGAGUAUGUUCGUCAC	2439
AD-954248.1	asasggu(Uhd)ucdTadTuacaacuggaL96	3368	VPusdCscadGudTguaadTadGadAaccuusgsa	3548	U CAAG GUUU CUAUUACAACUGGU	2440
AD-954256.1	gsascuc(Chd)gadGcdAcuuaacgugaL96	3369	VPusdCsacdGudTaagudGcdTcdGgagucsasu	3549	AUGACUCCGAGCACUUAACGUGG	2441
AD-954271.1	gscsugg(Uhd)gadAudCggauuccugaL96	3370	VPusdCsagdGadAuccgdAudTcdAccagcsusc	3550	GAGCUGGUGAAU CG GAUU CCUGC	2442
AD-954279.1	uscsaac(Ahd)gcdTadCacacgugugaL96	3371	VPu sdCs a edAedGugu gdTa dG cdTguu ga s c s a	3551	UGUCAACAGCUACACACGUGUGC	2443
AD-954287.1	gsasgcu(Ghd)audGudAugugacgcuaL96	3372	VPusdAsgcdGudCacaudAcdAudCagcucsasa	3552	UU GAGCUGAU GUAU GU GACG CU G	2444
AD-954295.1	csusgcu(Ghd)acdTudGuuuacgaaaaL96	3373	VPusdTsuudCgdTaaacdAadGudCagcagscsc	3553	GGCUGCUGACUUGUUUACGAAAU	938

- 145 048552

Скрининг однократных HTT доз в клетках BE(2)C

Таблица 16

	Доза 50	нМ	Доза 10	нМ	Доза	1 нМ	Доза	0,1 нМ
Дуплекс	Средн. % остаточной мРНК HTT	SD	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD	Дуплекс	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD	Средн. % остаточной мРНК НТТ
AD-954123.1	52,02	12, 80	46, 66	11,06	51, 72	10, 80	70, 22	6, 18
AD-954131.1	37,98	5, 90	34,57	5,77	56,27	5, 95	74,72	6,16
AD-954139.1	31,28	1,26	30,33	5,65	43, 37	8,28	61, 47	3, 88
AD-954147.1	33,48	1,73	36,49	5,47	49,67	12,95	74,93	16,31
AD-954155.1	55, 01	1, 15	66, 47	0,62	91,29	8,22	78, 41	9, 98
AD-954163.1	62,90	5, 16	50,49	7,01	66, 53	6,52	90,24	7,19
AD-954170.1	29,27	2,86	34,63	5,08	46, 01	6, 99	66, 85	2,30
AD-954178.1	43,47	4,36	41,39	2,26	79,85	16,32	87, 04	14,48
AD-954186.1	54,17	5,38	61,30	6,21	83, 63	16, 19	89, 18	4,75
AD-954194.1	47,87	5,42	39,24	2,46	50,47	7,85	77, 94	7,02
AD-954202.1	70, 30	6, 02	59, 62	8,57	62,98	11, 40	81, 62	14,21
AD-954210.1	32,28	5,26	36, 94	6, 00	64,76	9, 98	93,72	4,84
AD-954124.1	46,70	4,05	41, 03	1,99	66, 79	12,84	57, 90	2,15
AD-954132.1	81, 87	6,77	63,41	9,43	84,80	13, 63	84, 67	7,53
AD-954140.1	30, 47	2,31	30,26	3,39	48,06	11,20	55, 00	9, 66
AD-954148.1	34, 16	3, 45	39, 06	6, 94	54,16	2,59	75,41	4,55
AD-954156.1	42,59	5,18	43,79	9,06	70, 61	10, 32	74,37	10,49
AD-954164.1	29,49	1, 14	34,96	6,24	50, 44	2,05	64,40	5,75
AD-954171.1	39,79	1, 38	42,98	6, 89	61, 44	18,83	78,26	2,31
AD-954179.1	78,67	4,09	90, 13	10,14	116,94	15, 14	96, 51	6, 99
AD-954187.1	92,74	4,59	100,39	6,46	109,57	10, 84	95, 69	9,79
AD-954195.1	62,30	7,07	68,94	6, 67	87,94	2,35	93, 65	11,99
AD-954203.1	40,27	2,78	39,36	4,99	59,62	12,43	69,24	3,49
AD-954211.1	27,50	2,70	35,44	1,43	57,60	7,45	84, 16	6, 91
AD-954125.1	44,62	3,51	37,71	2,42	53,96	5,73	72,84	9,76
AD-954133.1	44,69	1,50	45, 67	5,60	72,15	4,87	91,31	13, 88
AD-954141.1	30,90	4,83	39, 50	3,44	58,12	15, 89	80,61	3, 02
AD-954149.1	26, 66	1,89	37,09	5,81	47,06	6, 03	54,88	8,32
AD-954157.1	76, 68	6, 90	86, 87	14,20	123,87	14,44	96,35	2,83
AD-954165.1	46,70	2,49	57,71	7,06	94,90	6, 91	81,55	14,03
AD-954172.1	36,92	2,44	41,21	4,86	53,31	11, 00	75,26	6, 57
AD-954180.1	58,96	1, 62	61, 78	3, 73	83,87	13, 62	95,17	6, 80
AD-954188.1	73,92	6,24	65, 52	8,60	75,12	7,69	77,77	4, 08
AD-954196.1	99,61	6, 03	106,63	13,54	117,44	16, 32	93,30	8,20
AD-954204.1	26, 94	2,60	27, 10	1,95	33,35	1, 88	44,67	2,25
AD-954212.1	42,77	2,77	53, 14	1,61	76, 16	7, 15	101,27	15,46
AD-954126.1	31,15	4,59	28,37	7,55	41,47	8,71	64,69	6,72
AD-954134.1	34,95	4,43	37, 04	3, 07	64,75	10, 62	81, 41	5, 61
AD-954142.1	85,11	5, 64	76, 57	8,62	103,15	15, 39	104,54	3, 92
AD-954150.1	34,95	5,56	43, 60	5, 54	61,62	3, 99	76, 87	4,98
AD-954158.1	36,70	7,95	44, 96	9,26	62,06	18,09	98,72	23,25
AD-954166.1	51,85	3,54	71,74	8,49	99,76	6,78	101,54	8,54
AD-954173.1	30,73	2,97	37, 17	3,06	41,53	3, 10	61,63	2,52
AD-954181.1	65,36	3,45	70,56	8,63	72,93	2,04	96, 04	3,73
AD-954189.1	38,01	3,43	47,12	5, 07	62,93	1,22	76,77	7,56
AD-954197.1	52,15	4,15	61, 12	5,20	82,73	7,76	95,55	7,69
AD-954205.1	31,38	2,29	33,79	2,85	52,38	10,33	81,33	3, 38
AD-954213.1	24,59	2,15	30,30	2,83	40,86	3,44	66, 86	6, 00
AD-954127.1	51,38	5,89	39, 04	7,84	55,31	11,49	64,90	4, 83
AD-954135.1	95,14	9, 88	102,58	8,08	104,48	5,54	94,95	12, 83
AD-954143.1	41,30	4,61	43, 90	3,89	71,08	2,83	93,56	2, 98

- 146 048552

AD-954151.1	49,96	2,57	58,67	3,77	87,43	9, 85	94,12	8,27
AD-954159.1	37,64	2,71	42,68	7,34	86,42	13, 02	92,18	15,52
AD-954167.1	64,60	10, 08	62,25	24,93	104,37	19, 93	79,75	5,74
AD-954174.1	26,34	2,62	33, 31	8,11	53,96	9, 59	67,80	7,33
AD-954182.1	39,88	1,79	44,29	2,43	74,11	10, 67	87,71	8,66
AD-954190.1	31,54	2,31	34,55	2,79	52,19	6,47	71,74	4, 87
AD-954198.1	80,34	4,43	87,33	9, 35	101,06	10,72	99,18	6, 53
AD-954206.1	33,58	1,34	33, 90	3,58	50,24	4,96	82,01	8, 04
AD-954214.1	23,40	2,25	31, 57	2,68	38,95	2,46	63, 16	9, 52
AD-954128.1	27,26	1,75	25,22	3,34	29,83	4, 96	47, 17	0, 54
AD-954136.1	87,99	6,49	91, 17	9,71	83,92	2,27	82,07	8, 82
AD-954144.1	29,88	2,85	33, 73	4,85	43,14	7, 17	69, 14	6, 09
AD-954152.1	35,17	2,44	36, 61	4,59	53,44	4, 84	77,50	3, 94
AD-954160.1	33,26	1, 92	28,97	5,90	50,16	5, 97	74,36	8,41
AD-954168.1	42,69	3,89	49,18	4,95	68,36	12,19	71,75	5,10
AD-954175.1	43,24	1,41	51, 66	2,51	84,47	5,48	97,60	14,78
AD-954183.1	75,62	6,73	84,16	18,23	99,04	8,72	98,12	5 76
AD-954191.1	38,92	1,79	46,32	7,58	71,86	10, 90	103,08	3, 01
AD-954199.1	42,26	2,80	45, 98	3, 56	73,52	6, 66	81,46	8,27
AD-954207.1	28,21	1,56	30, 80	3,11	45,83	7,89	73,61	10, 14
AD-954215.1	21,72	1,42	27,71	2,94	43,81	4,05	75, 95	9, 32
AD-954129.1	24,27	1,44	21,17	3,24	19,07	6, 69	60,49	6, 62
AD-954137.1	43,53	3,12	48,64	7,04	59,95	19,21	88,81	6,41
AD-954145.1	32,85	2,77	33, 76	10, 34	56,45	10,32	88,01	10,24
AD-954153.1	48,99	6,02	49,20	3, 77	78,83	10, 81	64,73	7,14
AD-954161.1	32,4	3, 02	34,48	2,60	46,36	4, 16	54,76	8,47

AD-954169.1	34,74	2,18	35,81	3, 43	61,71	5,68	75,21	5, 66
AD-954176.1	38,53	2,13	44,69	5, 07	61,75	4,66	77,80	6, 95
AD-954184.1	55, 56	3, 60	56,59	1,49	93,42	1,56	99,69	6,36
AD-954192.1	100,12	11, 38	98,85	0,79	101,06	14,32	110,37	16,13
AD-954200.1	35, 93	1,36	34,58	2,13	56, 52	5,39	76, 79	2,50
AD-954208.1	32,18	2,82	31,64	2,62	41,68	1,38	60,48	6,31
AD-954216.1	23, 72	2,06	30,51	2,01	49,35	4,19	81,27	3,16
AD-954130.1	19, 85	7, 94	23,85	3, 60	24,29	7,01	61,79	3, 84
AD-954138.1	34,61	3, 77	29,28	2,86	37,50	6,25	73,17	3, 15
AD-954146.1	30,29	4,48	28,72	4,62	46, 06	8,29	71,77	2,25
AD-954154.1	47,57	5, 76	45,17	4,28	72,44	11,48	95,85	11,77
AD-954162.1	33,21	2, 19	32,86	2, 61	40,48	1,74	71, 90	2,58
AD-954177.1	44,09	4,74	41,57	7,32	64,87	6, 95	84,18	6, 50
AD-954185.1	40, 16	6,27	39,88	6, 12	70,92	9,62	91,41	5,71
AD-954193.1	40, 67	3, 75	47,36	1, 96	83,44	7,54	90,57	7,54
AD-954201.1	88, 90	6, 15	86,29	11,24	93,95	13,19	75,31	5, 30
AD-954209.1	26, 15	1, 78	26,42	3, 92	37,25	8,70	57,03	2,95
AD-954217.1	22, 08	3, 65	26, 35	0, 46	40,24	8,85	69,89	18,22
AD-954225.1	32,81	0,7 4	45,33	7,32	67,38	4,84	104,66	12,11
AD-954233.1	85,46	11, 15	91,24	8,51	88,64	9,42	114,91	10,27
AD-954241.1	106,86	9,14	133,05	11,27	124,00	18,20	134,56	31,54
AD-954249.1	33,83	3, 03	45,04	2, 16	54,32	8,90	81,13	9,45
AD-954257.1	49,77	2,63	61,84	7,61	88,87	28,12	120,76	4,78
AD-954264.1	30,81	1,88	45,45	4,97	58,79	10,96	101,10	11,20
AD-954272.1	32,73	1, 95	45,08	6, 85	62,03	12,19	93,98	8,23
AD-954280.1	106,62	3, 67	133,82	8,30	110,97	16, 89	132,84	13, 83

- 147 048552

AD-954288.1	73,24	7,83	76, 91	15,22	90, 96	13,48	129,55	12,49
AD-954296.1	30, 93	3,59	35,55	5,19	51,27	11,72	78,93	5,41
AD-954218.1	26, 56	3, 53	28,97	3,37	38,53	8,13	64,10	5,89
AD-954226.1	50, 34	3,59	44,04	3, 70	51,26	4,10	91,30	6,11
AD-954234.1	90,21	10,40	88,98	6, 99	76, 60	10, 14	100,15	8,01
AD-954242.1	82,30	7, 82	103,00	6, 33	101,96	16, 94	130,97	9,81
AD-954250.1	44,08	4,85	54,36	3, 62	66,86	18,27	105,59	6, 63
AD-954258.1	64, 12	7, 04	69, 51	4,38	71, 00	14,41	107,71	8,55
AD-954265.1	44,56	2, 69	69, 05	0, 84	77,32	15, 12	119,63	11,20
AD-954273.1	39, 40	2,40	59, 31	2,24	71, 10	15,25	115,15	7,40
AD-954281.1	43, 61	1, 85	62,18	5, 17	77,33	10,83	119,66	11,64
AD-954289.1	120,87	10, 51	152,02	7, 08	119,60	23,43	135,41	10,87
AD-954297.1	30, 95	3,35	35, 55	3, 32	49, 47	8,36	85, 22	10,09
AD-954219.1	47,42	7,81	43, 53	4,97	46,70	4,05	84,71	15,02
AD-954227.1	31, 72	1,76	36, 01	1,47	50, 93	2,68	97,43	10,60
AD-954235.1	61, 17	5, 15	68,18	6,27	77,19	8,53	108,81	3,40
AD-954243.1	30, 31	5,06	40,81	5,97	36, 38	3,93	56,86	6,40
AD-954251.1	50, 50	4,90	60, 15	2,62	65, 56	11,90	110,36	11,58
AD-954259.1	29,29	1, 64	42,87	2,90	48,94	2,60	86,86	2,56
AD-954266.1	58,75	2,34	79, 79	6,51	85,54	17,99	119,76	12,98
AD-954274.1	103,48	10, 00	136,04	14,71	107,73	18,89	119,37	6,52
AD-954282.1	63, 93	4,55	72,13	2,20	82,83	16,10	115,03	9,20
AD-954290.1	73,27	4,25	76, 95	3,77	73,76	8,96	116,13	15,67
AD-954298.1	95,40	16, 15	116,77	3, 72	95,35	16,29	116,44	4,43
AD-954220.1	30, 05	3, 04	32,41	2,71	47,25	3,70	92,34	7,65
AD-954228.1	28,75	1, 80	39, 35	4,39	48, 16	4,85	95,79	8,46
AD-954236.1	51,97	2,64	61,61	12,31	74,92	7,84	112,83	3,27
AD-954244.1	25,23	3, 09	32,22	0, 67	36, 54	4,41	59,50	5, 69
AD-954252.1	41,80	4,89	52,60	11,56	58,19	12,54	104,28	27,43
AD-954260.1	32,19	0,53	47,42	3, 44	50,72	6, 34	93,22	6, 32
AD-954267.1	74,62	8,93	77,43	1,94	65,23	6, 95	105,17	5,36
AD-954275.1	54,18	2,72	65,06	5,80	66,73	11, 88	102,06	3, 54
AD-954283.1	38,12	2,23	49,23	2,88	49,95	10,25	94,58	3,70
AD-954291.1	101,23	7,90	123,82	1,81	92,72	16, 12	123,82	14,21
AD-954299.1	100,34	14,27	115,52	7,80	94,48	11, 11	117,27	9, 31
AD-954221.1	29,81	2,74	28,20	3, 92	35,63	5,34	61, 00	7,73
AD-954229.1	61,95	4,21	61,45	3, 69	57,20	5, 13	97,46	5,4 5
AD-954237.1	51,14	5,39	66, 14	6, 61	68,62	6, 00	105,63	7,44
AD-954245.1	54,15	6,59	59, 92	7,17	73,80	4, 02	108,37	7, 01
AD-954253.1	39,91	4, 15	45,61	5, 11	46, 87	2,60	80,73	7,62
AD-954261.1	37,65	3,22	46, 65	2,61	47,75	2,08	79,75	7,69
AD-954268.1	73,28	4,56	76, 13	6, 04	69,79	10, 57	103,51	12, 89
AD-954276.1	34,99	2,68	42,88	4,07	47,04	6, 06	72,15	5, 12
AD-954284.1	23,70	2,57	35,98	4,80	41,75	2,69	58,05	6,27
AD-954292.1	36,70	2,32	49,24	3,20	70,75	7,06	109,52	10, 64
AD-954300.1	95,58	13,44	116,85	15,24	98,47	15, 60	109,57	8,11
AD-954222.1	34,43	4,82	31,52	4,46	46,36	3, 69	83,27	9, 62
AD-954230.1	24,15	0,70	28,87	2,68	35,78	9,17	61,15	3, 50
AD-954238.1	52,45	3,33	52,94	7,85	52,93	8,19	96,17	6,44
AD-954246.1	37,41	4,41	48,17	3, 67	61,41	5,39	113,20	7, 83
AD-954254.1	54,05	4,03	59,72	10,49	58,06	5, 78	93,76	3, 73
AD-954262.1	45,38	4,69	46,22	3,64	50,32	4,42	76,36	8,74

- 148 048552

AD-954269.1	47, 10	2, 89	66, 30	3,54	81,45	12,33	114,12	6,38
AD-954277.1	48,62	4,99	66,89	3,79	79,00	10,51	104,56	14,40
AD-954285.1	66,27	6, 04	98,18	9, 60	90,64	L7,3-	111,14	9,29
AD-954293.1	40,39	6,73	53, 53	1, 35	66,11	4,95	87,61	6,50
AD-954301.1	104,24	15, 65	129,65	11,46	95,00	13,31	115,12	10,56
AD-954223.1	48,53	3,41	47,89	9, 69	63,25	5, 62	97,14	11,15
AD-954231.1	60, 66	5,40	71, 72	4,73	77,55	2,^0	103,25	6,93
AD-954239.1	34,51	1,10	39, 17	2,39	52,21	8,96	91, 15	6,20
AD-954247.1	22,02	2,03	28,16	1, 36	36,99	6, 62	59, 18	8,13
AD-954255.1	25, 12	2,48	30, 60	1, 38	42,70	4,95	57,04	5,98
AD-954263.1	41, 04	6,36	50,36	4,59	61,31	3,42	100,72	5,62
AD-954270.1	79, 14	6, 00	74,55	10, 12	80,65	13, 01	100,52	4,78
AD-954278.1	55,56	5,50	57,02	2,83	62,72	S 15	93,46	7,86
AD-954286.1	73, 12	6, 19	92,01	5, 10	87,34	10, 06	105,80	7,29
AD-954294.1	72,37	6, 17	78,67	6, 17	78,62	18,09	97,60	4,71
AD-954302.1	96, 95	14,38	109,14	8,35	98,40	19, 02	109,36	7,78
AD-954224.1	46, 96	10, 54	45,56	7,22	64,07	6,38	88,53	29,17
AD-954232.1	58,45	18,51	60, 74	11, 61	72,28	3, 88	103,49	3,84
AD-954240.1	33, 07	1, 88	37,40	6,08	57,76	20,62	94,18	5,99
AD-954248.1	30,79	4,54	32,41	4,32	47,75	9, 88	84,11	7,18
AD-954256.1	46, 98	6,73	51,72	6, 39	82,38	5, 87	107,79	6,63
AD-954271.1	57,61	6,76	69,95	3, 43	83,90	4,71	115,57	17,75
AD-954279.1	107,65	17,29	104,96	9, 00	86,16	9, 88	112,41	7,65
AD-954287.1	68,75	4, 71	66, 42	11, 11	77,12	10,56	106,01	2,85
AD-954295.1	39,45	1,79	40,12	3,52	61,80	8,89	102,42	7,93

Таблица 17

Модифицированные последовательности смысловых и антисмысловых цепей _________________дцРНК средств к хангтингтину (HTT) ________________

ID дуплекса	Смысловая посяедовательносиь 5'->3 '	SEQ ID NO:	Антисмысловая последовательность 5 ' >3'	SEQ ID NO:	последовательность мРНК-мишени 5 '->3 ’	SEQ ID NO:
AD-1019439.1	cscs gcu(Chd)AfgGfUfUfcugcuuuusasa	3557	VPusUfsaaaAfgCfAfgaacCfuGfagcggsesc	3644	GGCCGCUCAG GUU CU G CUUUUAC	3731
AD-1019442.1	csuscag(Ghd)UfuCfUfGfcuuuuaccsusa	355Θ	VPusAfsgguAfaAfAfgcagAfaCfcugagscsg	3645	CGCUCAGGUUCUGCUUUUACCUG	3732
AD-1019438.1	gscscgc(Uhd)CfaGfGfUfucugcuuususa	3559	VPusAfsaaaGfcAfGfaaccUfgAfgeggesesg	3646	C G GC C G CU CAG GUU CU G CUUUUA	3733
AD-1019408.1	asasagc(Uhd)GfaUfGfAfaggccuucgaL96	3560	VPusCfsgaag(G2p)ccuucaUfcAfgcuuususc	3647	GAAAAG CU GAUGAAGG CCUU CGA	3734
AD-1019426.1	uses ccu(Chd)AfaGfUfCfcuuccagcaaL96	3561	VPusUfsgcug(G2p)aaggacUfuGfagggasesu	3648	AGUC CCUCAAGU CCUU CCAGCAG	3735
AD-1019440.1	csgscuc(Ahd)GfgUfUfCfugcuuuuascsa	3562	VPusGfsuaaAfaGfCfagaaCfcUfgagagsgsc	3649	GCCGCUCAGGUUCUGCUUUUACC	3736
AD-1019410.1	esusgau(Ghd)AfaGfGfCfcuucgagucaL96	3563	VPusGfsacuc(G2p)aaggeeUfuCfaucagscsu	3650	AGCUGAUGAAGGCCUUCGAGUCC	3737
AD-1019405.1	ascsccu(Ghd)GfaAfAfAfgcugaugaaaL96	3564	VPusUfsucau(C2p)agcuuuUfcCfaggguscsg	3651	CGAC CCUG GAAAAG CU GAUGAAG	3738
AD-1019422.1	esgsagu(Chd)CfcUfCfAfaguccuuccaL96	3565	VPusGfsgaag(G2p)acuugaGfgGfacucgsasa	3652	UUCGAGUCCCUCAAGUCCUUCCA	3739
AD-1019407.1	usgs gaa(Ahd)AfgCfUfGfaugaaggccaL96	3566	VPusGfsgccu(Tgn)caucagCfuUfuuccasgsg	3653	CCUG GAAAAG CU GAUGAAGG CCU	3740
AD-1019418.1	cscsuuc(Ghd)AfgUfCfCfcucaaguccaL96	3567	VPusGfsgacu(Tgn)gagggaCfuCfgaaggscsc	3654	GGCCUUCGAGUCCCUCAAGUCCU	3741
AD-1019436.1	asesgge(Chd)GfcUfCfAfgguucugcsusa	3568	VPusAfsgcaGfaAfCfcugaGfcGfgeegusesc	3655	GGACGGCCGCUCAGGUUCUGCUU	3742
AD-1019406.1	esus gga(Ahd)AfaGfCfUfgaugaaggcaL96	3569	VPusGfsccuu(C2p)aucagcUfuUfuccagsgsg	3656	CCCUGGAAAAGCUGAUGAAGGCC	37 43
AD-1019417.1	gscscuu(Chd)GfaGfUfCfccucaagucaL96	3570	VPusGfsacuu(G2p)agggacUfcGfaaggesesu	3657	AGGCCUUCGAGUCCCUCAAGUCC	3744
AD-1019372.1	gscscgc(Uhd)CfaGfGfUfucugcuuuuaL96	3571	VPusAfsaaag(C2p)agaaccUfgAfgeggesesg	3658	CGGCCGCUCAGGUUCUGCUUUUA	3733
AD-1019375.1	gscsuca(Ghd)GfuUfCfUfgcuuuuaccaL96	3572	VPusGfsguaa(Agn)agcagaAfcCfugagcsgsg	3659	CCGCUCAGGUUCUGCUUUUACCU	3745
AD-1019444.1	csasggu(Uhd)CfuGfCfUfuuuaccugscsa	3573	VPusGfscagGfuAfAfaagcAfgAfaccugsasg	3660	CUCAGGUUCUGCUUUUACCUGCG	3746
AD-1019448.1	cscsaga(Ghd)CfcCfCfAfuucauugcscsa	3574	VPusGfsgcaAfuGfAfauggGfgCfucuggsgsc	3661	GCCCAGAGCCCCAUUCAUUGCCC	3747
AD-1019365.1	uscscaa(Ghd)AfuGfGfAfcggccgcucaL96	3575	VPusGfsagcg(G2p)ccguccAfuCfuuggascsc	3662	GGUCCAAGAUGGACGGCCGCUCA	374 8

- 149 048552

AD-1019374.1	csgscuc(Ahd)Gf gUfUfCfugcuuuuacaL96	3576	VPusGfsuaaa(Agn)gcagaaCfcUfgagcgsgsc	3663	GC CG CU CAGGUUCU GCUUUUAC C	3736
AD-1019402.1	gscsgac(Chd)CfuGfGfAfaaagcugauaL96	3577	VPusAfsucag(C2p)uuuuccAfgGfgucgcscsa	3664	UGGCGACCCUGGAAAAGCUGAUG	3749
AD-1019441.1	gscsuca(Ghd)GfuUfCfUfgcuuuuacscsa	3578	VPusGfsguaAfaAfGfcagaAfcCfugagcsgsg	3665	СCGCUCAGGUUCUGCUUUUACCU	3745
AD-1019399.1	cscsaug(Ghd)CfgAfCfCfcuggaaaagaL96	3579	VPusCfsuuuu(C2p)caggguCfgCfcauggscsg	3666	CGCCAUGGCGACCCUGGAAAAGC	3750
AD-1019378.1	csasggu(Uhd)CfuGfCfUfuuuaccugcaL96	3580	VPusGfscagg(Tgn)aaaagcAfgAfaccugsasg	3667	CU CAGGUU CU GCUUUUAC CU GC G	3746
AD-1019419.1	csusucg(Ahd)GfuCfCfCfucaaguccuaL96	3581	VPusAfsggac(Tgn)ugagggAfcUfcgaagsgsc	3668	GCCUUCGAGUCCCUCAAGUCCUU	3751
AD-1019423.1	gsasguc(Chd)CfuCfAfAfguccuuccaaL96	3582	VPusUfsggaa(G2p)gacuugAfgGfgacucsgsa	3669	UCGAGUCCCUCAAGUCCUUCCAG	3752
AD-1019437.1	csgsgcc(Ghd)CfuCfAfGfguucugcususa	3583	VPusAfsagcAfgAfAfecugAfgCfggccgsuse	3670	GACGGCCGCUCAGGUUCUGCUUU	3753
AD-1019376.1	csuscag(Ghd)UfuCfUfGfcuuuuaccuaL96	3584	VPusAfsggua(Agn)aagcagAfaCfcugagscsg	3671	CG CU CAGGUU CU GCUUUUAC CU G	3732
AD-1019373.1	cscsgcu(Chd)AfgGfUfUfcugcuuuuaaL96	3585	VPusUfsaaaa(G2p)cagaacCfuGfagcggscsc	3672	GGCCGCUCAGGUUCUGCUUUUAC	3731
AD-1019435.1	gsgsacg(Ghd)CfcGfCfUfcagguucusgsa	3586	VPusCfsagaAfcCfUfgagcGfgCfcguccsasu	3673	AUGGACGGCCGCUCAGGUUCUGC	3754
AD-1019411.1	usgsaug(Ahd)AfgGfCfCfuucgaguccaL96	3587	VPusGfsgacu(C2p)gaaggcCfuUfcaucasgsc	3674	GCUGAUGAAGGCCUUCGAGUCCC	3755
AD-1019434.1	usgsgac(Ghd)GfcCfGfCfucagguucsusa	3588	VPusAfsgaaCfcUfGfagegGfcCfguccasuse	3675	GAUGGACGGCCGCUCAGGUUCUG	3756
AD-1019377.1	uscsagg(Uhd)UfcUfGfCfuuuuaccugaL96	3589	VPusCfsaggu(Agn)aaagcaGfaAfccugasgsc	3676	GCUCAGGUUCUGCUUUUACCUGC	3757
AD-1019412.1	gsasuga(Ahd)GfgCfCfUfucgagucccaL96	3590	VPusGfsggac(Tgn)cgaaggCfcUfucaucsasg	3677	CUGAUGAAGGCCUUCGAGUCCCU	37 58
AD-1019403.1	csgsacc(Chd)UfgGfAfAfaagcugaugaL96	3591	VPusCfsauca(G2p)cuuuucCfaGfggucgscsc	3678	GGCGACCCUGGAAAAGCUGAUGA	37 59
AD-1019368.1	usgsgac(Ghd)GfcCfGfCfucagguucuaL96	3592	VPusAfsgaac(C2p)ugagegGfcCfguccasusc	3679	GAUGGACGGCCGCUCAGGUUCUG	3756
AD-1019404.1	gsasccc(Uhd)GfgAfAfAfagcugaugaaL96	3593	VPusUfscauc(Agn)gcuuuuCfcAfggguesgse	3680	GCGACCCUGGAAAAGCUGAUGAA	3760
AD-1019415.1	asasggc(Chd)UfuCfGfAfgucccucaaaL96	3594	VPusUfsugag(G2p)gacucgAfaGfgccuuscsa	3681	UGAAGGCCUUCGAGUCCCUCAAG	3761
AD-1019421.1	uscsgag(Uhd)CfcCfUfCfaaguccuucaL96	3595	VPusGfsaagg(Agn)cuugagGfgAfcucgasasg	3682	CUUC GAGU CC CU CAAGUC CUUC C	3762
AD-1019400.1	asusggc(Ghd)AfcCfCfUfggaaaagcuaL96	3596	VPusAfsgcuu(Tgn)uccaggGfuCfgccausgsg	3683	CCAUGGCGACCCUGGAAAAGCUG	3763
AD-1019450.1	cscsauu(Chd)AfuUfGfCfcccggugcsusa	3597	VPusAfsgcaCfcGfGfggcaAfuGfaauggsgsg	3684	CCCCAUUCAUUGCCCCGGUGCUG	3764
AD-1019420.1	ususcga(Ghd)UfcCfCfUfcaaguccuuaL96	3598	VPusAfsagga(C2p)uugaggGfaCfucgaasgsg	3685	CCUU CGAGUCCCUCAAGUCCUUC	3765
AD-1019429.1	gsascgg(Ghd)UfcCfAfAfgauggacgsgsa	3599	VPusCfscguCfcAfUfcuugGfaCfccgucsesc	3686	GGGACGGGUCCAAGAUGGACGGC	3766
AD-1019431.1	uscscaa(Ghd)AfuGfGfAfcggccgcuscsa	3600	VPusGfsageGfgCfCfguccAfuCfuuggasesc	3687	GGUCCAAGAUGGACGGCCGCUCA	3748
AD-1019428.1	gsgsacg(Ghd)GfuCfCfAfagauggacsgsa	3601	VPusCfsgucCfaUfCfuuggAfcCfcguccscsg	3688	CGGGACGGGUCCAAGAUGGACGG	3767
AD-1019364.1	ascsggg(Uhd)CfcAfAfGfauggacggcaL96	3602	VPusGfsccgu(C2p)caucuuGfgAfcccguscsc	3689	GGACGGGUCCAAGAUGGACGGCC	3768
AD-1019413.1	asusgaa(Ghd)GfcCfUfUfcgagucccuaL96	3603	VPusAfsggga(C2p)uegaagGfcCfuucauscsa	3690	UGAUGAAG GC CUUC GAGU CC CU C	3769
AD-1019394.1	cscsucc(Ghd)GfgGfAfCfugccgugccaL96	3604	VPusGfsgcac(G2p)gcagucCfcCfggaggscsc	3691	GGCCUCCGGGGACUGCCGUGCCG	3770
AD-1019398.1	gscscau(Ghd)GfcGfAfCfccuggaaaaaL96	3605	VPusUfsuuuc(C2p)agggucGfcCfauggcsgsg	3692	CCGCCAUGGCGACCCUGGAA7AG	3771
AD-1019366.1	asasgau(Ghd)GfaCfGfGfccgcucaggaL96	3606	VPusCfscuga(G2p)cggccgUfcCfaucuusgsg	3693	CCAAGAUGGACGGCCGCUCAGGU	3772
AD-1019432.1	as as gau(Ghd)GfaCfGfGfccgcucags gsa	3607	VPusCfscugAfgCfGfgccgUfcCfaucuusgsg	3694	C CAAGAU G GAC G G С C G CU CAGGU	3772
AD-1019380.1	usus cug(Chd)UfuUfUfAfccugcggccaL96	3608	VPusGfsgeeg(C2p)agguaaAfaGfcagaascsc	3695	GGUUCUGCUUUUACCUGCGGCCC	3773
AD-1019382.1	cscsaga(Ghd)CfcCfCfAfuucauugccaL96	3609	VPusGfsgcaa(Tgn)gaauggGfgCfucuggsgsc	3696	GCCCAGAGCCCCAUUCAUUGCCC	3747
AD-1019433.1	as gs aug(Ghd)AfcGfGfCfcgcucaggsusa	3610	VPusAfsccuGfaGfCfggccGfuCfcaucususg	3697	CAAGAU G GAC G G С C G CU CAG GUU	3774
AD-1019424.1	as gsucc(Chd)UfcAfAfGfuccuuccagaL96	3611	VPusCfsugga(Agn)ggacuuGfaGfggacuscsg	3698	CGAGUCCCUCAAGUCCUUCCAGC	3775
AD-1019445.1	gsgsuuc(Uhd)GfcUfUfUfuaccugcgsgsa	3612	VPusCfscgcAfgGfUfaaaaGfeAfgaaccsusg	3699	CAGGUUCUGCUUUUACCUGCGGC	377 6
AD-1019369.1	gsgsacg(Ghd)CfcGfCfUfcagguucugaL96	3613	VPusCfsagaa(C2p)cugagcGfgCfcguccsasu	3700	AUGGACGGCCGCUCAGGUUCUGC	3754
AD-1019416.1	gsgsccu(Uhd)CfgAfGfUfcccucaaguaL96	3614	VPusAfscuug(Agn)gggacuCfgAfaggeesusu	3701	AAGG CCUU CGAGUC CCUCAAGU C	3777
AD-1019414.1	usgsaag(Ghd)CfcUfUfCfgagucccucaL96	3615	VPusGfsaggg(Agn)cucgaaGfgCfcuucasusc	3702	GAUGAAGGCCUUCGAGUCCCUCA	3778
AD-1019447.1	cscscag(Ahd)GfcCfCfCfauucauugscsa	3616	VPusGfscaaUfgAfAfugggGfcUfcugggsesc	3703	GGCCCAGAGCCC CAUU CAUUGCC	3779
AD-1019430.1	ascsggg(Uhd)CfcAfAfGfauggacggscsa	3617	VPusGfsccgUfcCfAfucuuGfgAfcccguscsc	3704	GGACGGGUCCAAGAUGGACGGCC	3768
AD-1019395.1	csusccg(Ghd)GfgAfCfUfgccgugccgaL96	3618	VPusCfsggca(C2p)ggcaguCfcCfcggagsgsc	3705	GCCUCCGGGGACUGCCGUGCCGG	3780
AD-1019396.1	cscsgug(Chd)CfgGfGfCfgggagaccgaL96	3619	VPusCfsgguc(Tgn)cccgccCfgGfcacggscsa	3706	UGCCGUGCCGGGCGGGAGACCGC	3781
AD-1019425.1	gsusccc(Uhd)CfaAfGfUfccuuccagcaL96	3620	VPusGfscugg(Agn)aggacuUfgAfgggacsusc	3707	GAGUCCCUCAAGUCCUUCCAGCA	37 82
AD-1019363.1	gsascgg(Ghd)UfcCfAfAfgauggacggaL96	3621	VPusCfsegue (C2p)aucuugGfaCfccgucscsc	3708	GGGACGGGUCCAAGAUGGACGGC	3766
AD-1019367.1	asgsaug(Ghd)AfcGfGfCfcgcucagguaL96	3622	VPusAfsccug(Agn)geggeeGfuCfcaucususg	3709	CAAGAU GGAC GG CC GCUCAG GUU	3774
AD-1019362.1	gsgsacg(Ghd)GfuCfCfAfagauggacgaL96	3623	VPusCfsgucc(Agn)ucuuggAfcCfcguccscsg	3710	CGGGACGGGUCCAAGAUGGACGG	3767
AD-1019379.1	gsgsuuc(Uhd)GfcUfUfUfuaccugcggaL96	3624	VPusCfsegea(G2p)guaaaaGfcAfgaaccsusg	3711	CAGGUUCUGCUUUUACCUGCGGC	3776
AD-1019397.1	ascscgc(Chd)AfuGfGfCfgacccuggaaL96	3625	VPusUfsccag(G2p)gucgccAfuGfgeggusesu	3712	AGACCGCCAUGGCGACCCUGGAA	3783
AD-1019392.1	csgsagg(Chd)CfuCfCfGfgggacugccaL96	3626	VPusGfsgcag(Tgn)ccccggAfgGfccucgsgsg	3713	CCCGAGGCCUCCGGGGACUGCCG	3784
AD-1019409.1	asasgcu(Ghd)AfuGfAfAfggccuucgaaL96	3627	VPusUfsegaa(G2p)gccuucAfuCfagcuususu	3714	AAAAGCUGAU GAAG GC CUUC GAG	3785
AD-1019361.1	csgsgga(Chd)GfgGfUfCfcaagauggaaL96	3628	VPusUfsccau(C2p)uuggacCfcGfucccgsgsc	3715	GCCGGGACGGGUCCAAGAUGGAC	3786
AD-1019449.1	csasgag(Chd)CfcCfAfUfucauugccscsa	3629	VPusGfsggcAfaUfGfaaugGfgGfcucugsgsg	3716	CCCAGAGCCCCAUUCAUUGCCCC	37 87
AD-1019385.1	usgscug(Ahd)GfcGfGfCfgccgcgaguaL96	3630	VPusAfscucg(C2p)ggcgccGfcUfcagcascsc	3717	GGUGCUGAGCGGCGCCGCGAGUC	3788
AD-1019427.1	csgsgga(Chd)GfgGfUfCfcaagauggsasa	3631	VPusUfsccaUfcUfUfggacCfcGfucccgsgsc	3718	GCCGGGACGGGUCCAAGAUGGAC	3786
AD-1019390.1	cscscga(Ghd)GfcCfUfCfcggggacugaL96	3632	VPusCfsague (C2p)ccggagGfcCfucgggscsc	3719	GGCCCGAGGCCUCCGGGGACUGC	3789
AD-1019383.1	csasgag(Chd)CfcCfAfUfucauugcccaL96	3633	VPusGfsggca(Agn)ugaaugGfgGfcucugsgsg	3720	CC CAGAGC CC CAUU CAUU GC CC C	3787
AD-1019401.1	usgsgcg(Ahd)CfcCfUfGfgaaaagcugaL96	3634	VPusCfsagcu(Tgn)uuccagGfgUfcgccasusg	3721	CAUGGCGACCCUGGAAAAGCUGA	37 90
AD-1019393.1	gsasggc(Chd)UfcCfGfGfggacugccgaL96	3635	VPusCfsggca(G2p)uccccgGfaGfgccucsgsg	3722	CCGAGGCCUCCGGGGACUGCCGU	3791
AD-1019370.1	ascsggc(Chd)GfcUfC£AfgguucugcuaL96	3636	VPusAfsgcag(Agn)accugaGfcGfgccguscsc	3723	GGACGGCCGCUCAGGUUCUGCUU	37 42
AD-1019391.1	cscsgag(Ghd)CfcUfCfCfggggacugcaL96	3637	VPusGfscagu(C2p)cccggaGfgCfcucggsgsc	3724	GCCCGAGGCCUCCGGGGACUGCC	3792
AD-1019446.1	ususcug(Chd)UfuUfUfAfccugcggcscsa	3638	VPusGfsgeeGfeAfGfguaaAfaGfcagaascsc	3725	GGUUCUGCUUUUACCUGCGGCCC	3773
AD-1019371.1	cs gs gcc(Ghd)CfuCfAfGfguucugcuuaL96	3639	VPusAfsagca(G2p)aaccugAfgCfggccgsusc	3726	GACGGCCGCUCAGGUUCUGCUUU	3753
AD-1019386.1	gscsuga(Ghd)CfgGfCfGfccgcgagucaL96	3640	VPusGfsacuc(G2p)cggcgcCfgCfucagcsasc	3727	GUGCUGAGCGGCGCCGCGAGUCG	37 93
AD-1019389.1	gscsccg(Ahd)GfgCfCfUfccggggacuaL96	3641	VPusAfsgucc(C2p)cggaggCfcUfcgggcscsg	3728	CGGCCCGAGGCCUCCGGGGACUG	37 94
AD-1019387.1	gsasguc(Ghd)GfcCfCfGfaggccuccgaL96	3642	VPusCfsggag(G2p)ccucggGfcCfgacucsgsc	3729	GCGAGUCGGCCCGAGGCCUCCGG	3795
AD-1019381.1	cscscag(Ahd)GfcCfCfCfauucauugcaL96	3643	VPusGfscaau(G2p)aaugggGfcUfcugggsesc	3730	GGCCCAGAGCCCCAUUCAUUGCC	3779

- 150 048552

Немодифицированные последовательности смысловых и антисмысловых цепей дцРНК средств к хангтингтину (HTT)

Таблица 18

ID дуплекса	Смысловая последовательность 5'—>3’	SEQ ID NO:	Диапазон в NM 002111.8	Антисмысловая последовательность 5'->3'	SEQ ID NO:	Диапазон в NM 002111.8
AD-1019439.1	CCGCUCAGGUUCUGCUUUUAA	3796	29-49	UUAAAAGCAGAACCUGAGCGGCC	3861	27-49
AD-1019442.1	CUCAGGUUCUGCUUUUACCUA	3797	32-52	UAGGUAAAAGCAGAAC CUGAGC G	3862	30-52
AD-1019438.1	GCCGCUCAGGUUCUGCUUUUA	3798	28-48	UAAAAGCAGAACCUGAGCGGCC G	3863	26-48
AD-1019408.1	AAAGCUGAUGAAGGCCUUCGA	3799	160-180	UCGAAGGCCUUCAUCAGCUUUUC	3864	158-180
AD-1019426.1	UCCCUCAAGUCCUUCCAGCAA	3800	182-202	UUGCUGGAAGGACUUGAGGGACU	3865	180-202
AD-1019440.1	CGCUCAGGUUCUGCUUUUACA	3801	30-50	U GUAAAAGCAGAACCU GAGCGGC	3866	28-50
AD-1019410.1	CUGAUGAAGGCCUUCGAGUCA	3802	164-184	UGACUCGAAGGCCUUCAUCAGCU	3867	162-184
AD-1019405.1	ACCCUGGAAAAGCUGAUGAAA	3803	152-172	UUUCAUCAGCUUUUCCAGGGUCG	3868	150-172
AD-1019422.1	CGAGUCCCUCAAGUCCUUCCA	3804	178-198	U GGAAGGACUUGAGGGACUCGAA	3869	176-198
AD-1019407.1	U GGAAAAGCUGAUGAAGGCCA	3805	156-176	UGGCCUTCAUCAGCUUUUCCAGG	3870	154-176
AD-1019418.1	CCUUCGAGUCCCUCAAGUCCA	3806	174-194	U GGACUT GAGGGACUC GAAGGCC	3871	172-194
AD-1019436.1	ACGGCCGCUCAGGUUCUGCUA	3807	25-45	UAGCAGAACCUGAGCGGCCGUCC	3872	23-45
AD-1019406.1	CUGGAAAAGCUGAUGAAGGCA	3808	155-175	UGCCUUCAUCAGCUUUUCCAGGG	3873	153-175
AD-1019417.1	GCCUUCGAGUCCCUCAAGUCA	3809	173-193	UGACUUGAGGGACUCGAAGGCCU	3874	171-193
AD-1019372.1	GCCGCUCAGGUUCUGCUUUUA	3798	28-48	UAAAAGCAGAACCUGAGCGGCCG	3863	26-48
AD-1019375.1	GCUCAGGUUCUGCUUUUACCA	3810	31-51	UGGUAAAAGCAGAACCUGAGCGG	3875	29-51
AD-1019444.1	CAGGUUCUGCUUUUACCUGCA	3811	34-54	UGCAGGUAAAAGCAGAACCUGAG	3876	32-54
AD-1019448.1	CCAGAGCCCCAUUCAUUGCCA	3812	57-77	UGGCAAUGAAUGGGGCUCUGGGC	3877	55-77
AD-1019365.1	UCCAAGAUGGACGGCCGCUCA	3813	15-35	UGAGCGGCCGUCCAUCUUGGACC	3878	13-35
AD-1019374.1	CGCUCAGGUUCUGCUUUUACA	3801	30-50	UGUAAAAGCAGAACCUGAGCGGC	3866	28-50^
AD-1019402.1	GCGACCCUGGAAAAGCUGAUA	3814	149-169	UAUCAGCUUUUCCAGGGUCGCCA	3879	147-169
AD-1019441.1	GCUCAGGUUCUGCUUUUACCA	3810	31-51	UGGUAAAAGCAGAACCUGAGCGG	3875	29-51
AD-1019399.1	CCAUGGCGACCCUGGAAAAGA	3815	144-164	UCUUUUCCAGGGUCGCCAUGGCG	3880	142-164
AD-1019378.1	CAGGUUCUGCUUUUACCUGCA	3811	34-54	UGCAGGTAAAAGCAGAACCUGAG	3881	32-54
AD-1019419.1	CUUCGAGUCCCUCAAGUCCUA	3816	175-195	UAGGACTU GAGGGACU C GAAGGC	3882	173-195
AD-1019423.1	GAGUCCCUCAAGUCCUUCCAA	3817	179-199	UUGGAAGGACUUGAGGGACUCGA	3883	177-199
AD-1019437.1	CGGCCGCUCAGGUUCUGCUUA	3818	2 6-4 6	UAAGCAGAACCUGAGCGGCCGUC	3884	24-46
AD-1019376.1	CUCAGGUUCUGCUUUUACCUA	3797	32-52	UAGGUAAAAGCAGAACCUGAGCG	3862	30-52
AD-1019373.1	C CGCUCAGGUUCU GCUUUUAA	3796	29-49	UUAAAAGCAGAACCUGAGCGGCC	3861	27-49
AD-1019435.1	GGACGGCCGCUCAGGUUCUGA	3819	23-43	UCAGAACCUGAGCGGCCGUCCAU	3885	21-43
AD-1019411.1	UGAUGAAGGCCUUCGAGUCCA	3820	165-185	UGGACUCGAAGGCCUUCAUCAGC	3886	163-185
AD-1019434.1	UGGACGGCCGCUCAGGUUCUA	3821	22-42	UAGAACCUGAGCGGCCGUCCAUC	3887	20-42
AD-1019377.1	UCAGGUUCUGCUUUUACCUGA	3822	33-53	UCAGGUAAAAGCAGAACCUGAGC	3888	31-53
AD-1019412.1	GAUGAAGGCCUUCGAGUCCCA	3823	166-186	UGGGACTCGAAGGCCUUCAUCAG	3889	164-186
AD-1019403.1	CGACCCUGGAAAAGCUGAUGA	3824	150-170	UCAUCAGCUUUUCCAGGGUCGCC	3890	148-170
AD-1019368.1	UGGACGGCCGCUCAGGUUCUA	3821	22-42	UAGAACCUGAGCGGCCGUCCAUC	3887	20-42
AD-1019404.1	GACCCUGGAAAAGCUGAUGAA	3825	151-171	UUCAUCAGCUUUUCCAGGGUCGC	3891	149-171
AD-1019415.1	AAGGCCUUCGAGUCCCUCAAA	3826	170-190	UUUGAGGGACUCGAAGGCCUUCA	3892	168-190
AD-1019421.1	UCGAGUCCCUCAAGUCCUUCA	3827	177-197	UGAAGGACUUGAGGGACUCGAAG	3893	175-197

- 151 048552

AD-1019400.1	AUGGCGACCCUGGAAAAGCUA	3828	146-166	UAGCUUTUCCAGGGUCGCCAUGG	3894	144-166
AD-1019450.1	CCAUUCAUUGCCCCGGUGCUA	3829	65-85	UAGCACCGGGGCAAUGAAUGGGG	3895	63-8 5
AD-1019420.1	UUCGAGUCCCUCAAGUCCUUA	3830	176-196	UAAGGACUUGAGGGACUCGAAGG	3896	174-196
AD-1019429.1	GACGGGU CCAAGAUGGACGGA	3831	9-29	UCCGUCCAUCUUGGACCCGUCCC	3897	7-29
AD-1019431.1	UCCAAGAUGGACGGCCGCUCA	3813	15-35	UGAGCGGCCGUCCAUCUUGGACC	3878	13-35
AD-1019428.1	GGAC GGGUCCAAGAUGGACGA	3832	8-29	UCGUCCAUCUUGGACCCGUCCCG	3898	6-29
AD-1019364.1	ACGGGUCCAAGAUGGACGGCA	3833	10-30	UGCCGUCCAUCUUGGACCCGUCC	3899	10-30^
AD-1019413.1	AUGAAGGCCUUCGAGUCCCUA	3834	167-187	UAGGGACUCGAAGGCCUUCAUCA	3900	165-187
AD-1019394.1	CCUCCGGGGACUGCCGUGCCA	3835	111-131	UGGCACGGCAGUCCCCGGAGGCC	3901	109-131
AD-1019398.1	GCCAUGGCGACCCUGGAAAAA	3836	143-163	UUUUUCCAGGGUCGCCAUGGCGG	3902	141-163
AD-1019366.1	AAGAUGGACGGCCGCUCAGGA	3837	18-38	UCCUGAGCGGCCGUCCAUCUUGG	3903	16-38
AD-1019432.1	AAGAUGGACGGCCGCUCAGGA	3837	18-38	UCCUGAGCGGCCGUCCAUCUUGG	3903	16-38
AD-1019380.1	UUCU GCUUUUACCUGCGGCCA	3838	38-58	UGGCCGCAGGUAAAAGCAGAACC	3904	36-58
AD-1019382.1	CCAGAGCCCCAUUCAUUGCCA	3812	57-77	UGGCAATGAAUGGGGCUCUGGGC	3905	55-77
AD-1019433.1	AGAUGGACGGCCGCUCAGGUA	3839	19-39	UACCUGAGCGGCCGUCCAUCUUG	3906	17-39
AD-1019424.1	AGUCCCUCAAGUCCUUCCAGA	3840	180-200	UCUGGAAGGACUUGAGGGACUCG	3907	178-200
AD-1019445.1	GGUUCUGCUUUUACCUGCGGA	3841	36-56	UCCGCAGGUAAAAGCAGAACCUG	3908	34-56
AD-1019369.1	GGACGGCCGCUCAGGUUCUGA	3819	23-43	UCAGAACCUGAGCGGCCGUCCAU	3885	21-43
AD-1019416.1	GGCCUUCGAGUCCCUCAAGUA	3842	172-192	UACUUGAGGGACUCGAAGGCCUU	3909	170-192
AD-1019414.1	UGAAGGCCUUCGAGUCCCUCA	3843	168-188	UGAGGGACUCGAAGGCCUUCAUC	3910	166-188
AD-1019447.1	CCCAGAGCCCCAUUCAUUGCA	3844	56-76	UGCAAUGAAUGGGGCUCUGGGCC	3911	54-76
AD-1019430.1	ACGGGUCCAAGAUGGACGGCA	3833	10-30	UGCCGUCCAUCUUGGACCCGUCC	3899	10-30
AD-1019395.1	CUCCGGGGACUGCCGUGCCGA	3845	112-132	UCGGCACGGCAGUCCCCGGAGGC	3912	110-132
AD-1019396.1	CCGUGCCGGGCGGGAGACCGA	3846	124-144	UCGGUCTCCCGCCCGGCACGGCA	3913	122-144
AD-1019425.1	GUCCCUCAAGUCCUUCCAGCA	3847	181-201	UGCUGGAAGGACUUGAGGGACUC	3914	179-201
AD-1019363.1	GACGGGUCCAAGAUGGACGGA	3831	9-29	UCCGUCCAUCUUGGACCCGUCCC	3897	7-29
AD-1019367.1	AGAUGGACGGCCGCUCAGGUA	3839	19-39	UACCUGAGCGGCCGUCCAUCUUG	3906	17-39
AD-1019362.1	GGACGGGUCCAAGAUGGACGA	3832	8-28	UCGUCCAUCUUGGACCCGUCCCG	3898	6-28
AD-1019379.1	GGUUCUGCUUUUACCUGCGGA	3841	36-56	UC CGCAGGUAAAAGCAGAAC CUG	3908	34-56
AD-1019397.1	ACCGCCAUGGCGACCCUGGAA	3848	140-160	UUCCAGGGUCGCCAUGGCGGUCU	3915	138-160
AD-1019392.1	CGAGGCCUCCGGGGACUGCCA	3849	106-126	UGGCAGTCCCCGGAGGCCUCGGG	3916	104-126
AD-1019409.1	AAGCUGAUGAAGGCCUUCGAA	3850	161-181	UUCGAAGGCCUUCAUCAGCUUUU	3917	159-181
AD-1019361.1	CGGGACGGGUCCAAGAUGGAA	3851	6-26	UUCCAUCUUGGACCCGUCCCGGC	3918	4-26
AD-1019449.1	CAGAGCCCCAUUCAUUGCCCA	3852	58-78	UGGGCAAUGAAUGGGGCUCUGGG	3919	56-78
AD-1019385.1	UGCUGAGCGGCGCCGCGAGUA	3853	81-101	UACUCGCGGCGCCGCUCAGCACC	3920	79-101
AD-1019427.1	CGGGACGGGUCCAAGAUGGAA	3851	6-26	UUCCAUCUUGGACCCGUCCCGGC	3918	4-26
AD-1019390.1	CCCGAGGCCUCCGGGGACUGA	3854	104-124	UCAGUCCCCGGAGGCCUCGGGCC	3921	102-124
AD-1019383.1	CAGAGCCCCAUUCAUUGCCCA	3852	58-78	UGGGCAAUGAAUGGGGCUCUGGG	3919	56-78
AD-1019401.1	UGGCGACCCUGGAAAAGCUGA	3855	147-167	UCAGCUTUUCCAGGGUCGCCAUG	3922	145-167
AD-1019393.1	GAGGCCUCCGGGGACUGCCGA	3856	107-127	UCGGCAGUCCCCGGAGGCCUCGG	3923	105-127
AD-1019370.1	ACGGCCGCUCAGGUUCUGCUA	3807	25-45	UAGCAGAACCUGAGCGGCCGUCC	3872	23-45
AD-1019391.1	CCGAGGCCUCCGGGGACUGCA	3857	105-125	UGCAGUCCCCGGAGGCCUCGGGC	3924	103-125
AD-1019446.1	UUCUGCUUUUACCUGCGGCCA	3838	38-58	UGGCCGCAGGUAAAAGCAGAACC	3904	36-58
AD-1019371.1	CGGCCGCUCAGGUUCUGCUUA	3818	26-46	UAAGCAGAACCUGAGCGGCCGUC	3884	24-46
AD-1019386.1	GCUGAGCGGCGCCGCGAGUCA	3858	82-102	UGACUCGCGGCGCCGCUCAGCAC	3925	80-102
AD-1019389.1	GCCCGAGGCCUCCGGGGACUA	3859	103-123	UAGUCCCCGGAGGCCUCGGGCCG	3926	101-123
AD-1019387.1	GAGUCGGCCCGAGGCCUCCGA	3860	97-117	UCGGAGGCCUCGGGCCGACUCGC	3927	95-117
AD-1019381.1	CCCAGAGCCCCAUUCAUUGCA	3844	56-76	UGCAAUGAAUGGGGCUCUGGGCC	3911	54-76

152 048552

Таблица 19

Скрининг однократных HTT доз в клетках BE(2)C

	Доза 50 нМ	До&а 10 нМ	Дода 1 нМ	Доза 0,1 нМ
Дуплекс	Средн. % остаточной нРНК HTT	SD	Средн, % остаточной м₽НК НТТ	SD	Средн. % остаточной м₽НК НТТ	SD	Средн. % остаточной иРНК. НТТ	SD
AD-1019439.1	26, 33	2,98	33,43	1,95	44,24	3,94	69,16	16,03
AD-1019442.1	26, 6B	3,71	33,86	6,48	42, 42	6,68	55,50	5,70
AD-1019439.1	26, 88	5,41	33,28	10,09	38,25	3,40	64, 16	11, 54
АС—1019409.1	27,81	2,8 8	38,50	5,30	63, 17	11,67	89,78	38,20
AD-1019426.1	28,13	3,88	3 9,70	_4,4 7	53, 66	23,30	64,65	3 0, 16
АС-1019440.1	30, 30	4,22	33,05	6,61	37,88	7,04	60,38	10, 12
АС-1019410.1	31, 80	4,96	32,53	10,80	5 0,70	8,85	8 9,25	55,87
АС-1019405.1	32,12	5,75	4 0,14	8,14	54,55	11,42	82,13	14,98
AD-1019422.1	32,13	2,02	42,4 6	5,7 5	51,78	2,68	67,56	3,7 6
AD-1019407.1	33, 66	6,11	58,75	11,88	8 0,18	12,89	125,80	26,45
АП-Ί 0Ί 9 4 Ί Я . Ί	36, 0 0	10, Ί 2	51,87	1 В, 91	97,46	22, 32	72,77	13, 55
AD-1019436.1	36,32	3,03	43,8 9	2,64	60, 54	5,2 9	72,72	8,4 7
АП-‘ΙΟΊ 94 06. Ί	36, 67	7,79	4 0,0 3	5 , Ί 8	54,98	16, Ί 7	72, 36	12, 32
AD-1019417.1	37,43	9,80	34,14	9,23	47,79	12,90	60, 93	25,4 8
AC-1019372.1	37,5 0	8,16	34,12	3,72	60,81	10,31	103,20	13, 72
AD 1019375.1	37,69	9, /9	34,46	6,10	49,56	5,83	66,26	5,42
AD-1019444.1	38,95	4,5 0	43,4 0	1,91	37,44	18,40	52,46	14,08
AC- 10194 48.1	39,2 0	2,03	42,53	9,51	54,64	8,72	66,41	8,54
AD-1019365.1	40, 07	3,04	45,42	6,80	59,29	8,64	68,99	4,11
AD-1019374.1	4 0,28	3,07	33,44	4,95	52,85	8,36	66, 91	6, 58
AD-1019402.1	41, 01	6,72	58,59	9,68	75,67	6,36	80,45	4 8,52
AD-1019441.1	43, 13	4,88	42,11	20,87	49,84	11,2 9	83,77	30, 02
AD-1019399.1	44,66	6,75	51,34	3,94	83, 68	16, 14	85,67	7, 63
AD-1019378.1	45,39	6,11	41,34	1,35	64,4 3	5,63	8 7,98	16, 2 3
AD-1019419.1	45,70	15,44	47,87	15,97	64, 58	24,64	61,93	9, 06
AD-1019423.1	46, 12	3,60	53,83	12,67	5 9,8 С	/, 57	78,49	12,61
AD-1019437.1	46, 79	2,68	67,22	9,08	64,41	5,28	91,99	18,73
AD-1019376.1	47,24	5, 85	45,27	11, 35	48,36	7,08	66,50	11,13
AD-1019373.1	48, 15	6, 89	41, 62	12,43	58,13	8,10	68,76	4,30
AD-1019435.1	52,61	4,27	52,59	14,30	71,50	18,95	83,12	30, 00
AD-1019411.1	52, 82	14, 69	58,28	29, 31	89,10	24,14	92,75	40,76
AD-1019434.1	53, 94	4,86	57,33	16, 85	69,25	9, 85	73,47	12,55
AD-1019377.1	57, 15	11, 34	52,68	7,70	77,91	11, 93	81,77	11,31
AD-1019412.1	62,07	14,20	88,99	17,66	102,97	21,58	84,96	13, 92
AD-1019403.1	64, 17	7,55	65,79	13,52	91,61	8,33	78,69	11,47
AD-1019368.1	64,78	8,20	58,57	2,18	65,86	2,46	64,57	20, 59
AD-1019404.1	64, 98	13, 39	89, 42	25,45	92,10	13,45	84,96	32,65
AD-1019415.1	67,27	9,53	78,07	17, 87	82,38	19,31	77,82	2,74
AD-1019421.1	69, 68	26, 22	66, 48	16, 26	88,04	26, 99	80,85	17,61
AD-1019400.1	69, 82	32,75	98,86	18,21	87,73	31,20	90,88	24,31
AD-1019450.1	70, 95	8,42	66, 87	9, 62	60,36	4,15	74,24	7,35
AD-1019420.1	71, 07	8, 19	72,14	21,72	75,76	10,39	75,64	7, 13
AD-1019429.1	77, 16	3, 18	90,72	8,30	85,69	8,68	76, 60	9, 44
AD-1019431.1	77,28	13, 02	84,76	20, 09	100,34	25,59	105,70	37,13
AD-1019428.1	77,77	17,48	97,53	47, 95	103,57	36,26	80,54	9, 56
AD-1019364.1	80, 17	3, 62	81, 84	3,20	83,89	5,46	81,75	8,87
AD-1019413.1	80, 67	7,77	80, 97	20, 54	88,80	7,99	119,10	30, 63
AD-1019394.1	82, 14	16,56	92,68	2,28	90,83	19, 90	111,52	47,91
AD-1019398.1	82, 85	6, 81	97,08	13, 06	91,52	2,80	71,62	2,97
AD-1019366.1	82, 97	11, 84	66, 97	7,23	68,08	7,16	80,92	4,98
AD-1019432.1	83,34	10, 98	64,39	6, 32	64,34	3, 93	69,63	8,62
AD-1019380.1	85, 03	3,70	63, 09	1, 84	81,38	13, 03	62,93	3, 56
AD-1019382.1	85, 70	14,67	75, 64	7,28	78,99	5,79	87,44	19, 58
AD-1019433.1	85, 75	8,79	74, 83	26, 05	75,50	7,52	77,17	6, 31
AD-1019424.1	86, 03	27, 07	111,91	28, 13	114,99	40, 63	94,47	25,23

- 153 048552

ЛЭ-1 01 94 4 5. '	07,45	4,6'	6-,08	7,23	67,4 Ί		8 3,68	3,22
ЛЭ-1019369.'	8 8,7 5	2,36	31 , 4 4	4,07	Р । г 6 7	1,4Р	8 4,8 5	6,30
ЛЭ-1 01 9416.·	88,97	/6, 9 8	' 03,80	3	ай, р	1 5, 56	1 0 3,9-'	50,76
АЗ-1 019414 .	89,03	31 , 1 3	83,38	Р 3, 3 5	I η-,7 6	. ' J	7 6, 1 3	4,19
AD 10194 47'. 1	8 9,66	8, /4	92,05	6, 8 9	?'?, 43	5,86	101,69	11,25
AD 1019430.1	9 0,8 о	13,22	9 2,6 5	18,5’/	·- С ? ϋ	-1 г -X Т	80,44	3. о /
АО 1019395.1	91,51	12,21	111,33	32,95	113, '3	18,1'0	12 / ,67	1'/, 8 4
70 1019398.1	94,92	23,01	_ 131,79	__ „3%ЗЬ	113,2 /	16,56	88, 9 8	_ 33%9С
3O-1C19O5.1	95,56	39, 01	___ ^125^04	11,22	107,52	3_8, 0 5	_ __ 73,18	__ Κι' С?
30-1019363.1	95,63	3,0 9	93,66	7,36	5 1,59	9, 55	8 3,52	8,42
АО-1019367.1	96,44	1,76	73,39	11, 85	^,41	8, 52	74, В2	4,01
АО-1019362.1	96, 52	7,99	33,17	3,46	е , 2 9	3,0 5	94, 33	3,8 4
70-J 01 9 374.	9 6,93	11, о'	73,07	12,4 6	з Я 7 ы	1 й, 14	104,71	<3,49
ЛЭ-1 01 9397.1	97,03	16,47	9 9,20	7,97	1 п3,7д	Iе·, ‘5	9 9,16	1 6, 51
70-1019392.1	97,50	2-,45	'11,56	1 1 , 32	1 2 >1,55	;ίί, 14	162,41	2'-,1 4
70-1 01 94 09. ’	9 8,-7	1 -, 8 0	99,07	45,47	110,	-а Г'1 г । /	134,23	6 8,21
АО-1019361.1	101,31	14,8 /	33,4 /	3, 31	й ч пз	9 . 3	8 6,55	9, з4
АО-1019449.1	101,0	20,4 6	Ί 3 , .з /	11, /4	78,_2	4, 92	7 /, 6 9	6, 15
70-1019385.1	101,8 '/	13, :з!	98,4 6	12,91	131,69	33,41	115,89	43,8 6
70-1019427.1	102,5.о	21, 14	161,66	4 з, 2 с	103,28	3 2 ί J ζ	10 6, 18	5, зЗ
АО-1019390.1	105,47	9, 42	92,7 6	10, 07	-0 „ 93	13, 19	86, 69	17,4 6
АО-1019383.1	105,74	7,88	73,94	4,49	7 6,20	3,46	7 3,73	1, 51
АО-1019401.1	105,91	15,85	122,03	11, 39	1.37,2:	2 6,94	109,80	41,71
АО-1019393.1	106,21	29, 14	105,07	19, 55	126,94	4 6, 57	101,66	32,4 4
70-1019370.1	106,29	18,22	32,52	11,42	84,49	11,58	76,24	3,39
70-1019391.1	107,20	42,41	92,50	15,30	110,50	15,64	94,73	13, 97
70-1019446.1	107,77	12,57	91,32	14,53	78,4:	9,44	8 3,59	12,05
70-1019371.1	109,09	39, 35	77,55	9, 57	83,12	10,89	94,98	22,8 4
/0-1019386.1	109,52	12,16	106,26	21,94	124,32	16,83	147,23	17,76
AD-1019389.1	120,92	6,39	89,68	12,49	94, 77	10,01	90,44	19, э
AD-1019387.1	135,14	7,97	102,51	12,39	108,16	17,75	95, 03	42, 80
70-1019381.1	142,40	16, 59	86,79	21,01	106,55	17,10	86,46	17,57

Таблица 20

Модифицированные последовательности смысловых и антисмысловых цепей дцРНК средств к хакгтингтину (HTT)

ID дуплекса	Смысловая последовательность 5'—>3'	SEQ ID NO	Антисмысловая последовательность 5'->3'	SEQ ID NO:	последовательность мРНКмишени 5’-> 3 ’	SEQ ID NO:
AD-1019427	csgsgga(Chd)GfgGfUfCfcaagauggsasa	3631	VPusUfsccaUfcUfUfggacCfcGfucccgsgsc	3718	GCCGGGACGGGUCCAAGAUGGAC	3786
AD-1019428	gsgsacg(Ghd)GfuCfCfAfagauggacsgsa	3601	VPusCfsgucCfaUfCfuuggAfcCfcguccscsg	3688	CGGGACGGGUCCAAGAUGGACGG	3767
AD-1019429	gsascgg(Ghd)UfcCfAfAfgauggacgsgsa	3599	VPusCfscguCfcAfUfcuugGfaCfccgucscsc	3686	GGGACGGGUCCAAGAUGGACGGC	3766
AD-1019430	ascsggg(Uhd)CfcAfAfGfauggacggscsa	3617	VPusGfsccgUfcCfAfucuuGfgAfcccguscsc	3704	GGACGGGUCCAAGAUGGACGGCC	3768
AD-1019431	uscscaa(Ghd)AfuGfGfAfcggccgcuscsa	3600	VPusGfsagcGfgCfCfguccAfuCfuuggascsc	3687	GGUCCAAGAUGGACGGCCGCUCA	3748
AD-1019432	asasgau(Ghd)GfaCfGfGfccgcucagsgsa	3607	VPusCfscugAfgCfGfgccgUfcCfaucuusgsg	3694	CCAAGAUGGACGGCCGCUCAGGU	3772
AD-1019433	asgsaug(Ghd)AfcGfGfCfcgcucaggsusa	3610	VPusAfsccuGfaGfCfggccGfuCfcaucususg	3697	CAAGAUGGACGGCCGCUCAGGUU	3774
AD-1019434	usgsgac(Ghd)GfcCfGfCfucagguucsusa	3588	VPusAfsgaaCfcUfGfagcgGfcCfguccasusc	3675	GAUGGACGGCCGCUCAGGUUCUG	3756
AD-1019435	gsgsacg(Ghd)CfcGfCfUfcagguucusgsa	3586	VPusCfsagaAfcCfUfgagcGfgCfcguccsasu	3673	AUGGACGGCCGCUCAGGUUCUGC	3754
AD-1019436	ascsggc(Chd)GfcUfCfAfgguucugcsusa	3568	VPusAfsgcaGfaAfCfcugaGfcGfgccguscsc	3655	GGACGGCCGCUCAGGUUCUGCUU	3742
AD-1019437	csgsgcc(Ghd)CfuCfAfGfguucugcususa	3583	VPusAfsagcAfgAfAfccugAfgCfggccgsu.se	3670	GACGGCCGCUCAGGUUCUGCUUU	3753
AD-1019438	gscscgc(Uhd)CfaGfGfUfucugcuuususa	3559	VPusAfsaaaGfcAfGfaaccUfgAfgcggcscsg	3646	CGGCCGCUCAGGUUCUGCUUUUA	3733
AD-1019439	cscsgcu(Chd)AfgGfUfUfcugcuuuusasa	3557	VPusUfsaaaAfgCfAfgaacCfuGfagcggscsc	3644	GGCCGCUCAGGUUCUGCUUUUAC	3731
AD-1019440	csgscuc(Ahd)GfgUfUfCfugcuuuuascsa	3562	VPusGfsuaaAfaGfCfagaaCfcUfgagcgsgsc	3649	GCCGCUCAGGUUCUGCUUUUACC	3736
AD-1019441	gscsuca(Ghd)GfuUfCfUfgcuuuuacscsa	3578	VPusGfsguaAfaAfGfcagaAfcCfugagcsgsg	3665	CCGCUCAGGUUCUGCUUUUACCU	3745
AD-1019442	csuscag(Ghd)UfuCfUfGfcuuuuaccsusa	3558	VPusAfsgguAfaAfAfgcagAfaCfcugagscsg	3645	CGCUCAGGUUCUGCUUUUACCUG	3732
AD-1019444	csasggu(Uhd)CfuGfCfUfuuuaccugscsa	3573	VPusGfscagGfuAfAfaagcAfgAfaccugsasg	3660	CUCAGGUUCUGCUUUUACCUGCG	3746
AD-1019445	gsgsuuc(Uhd)GfcUfUfUfuaccugcgsgsa	3612	VPusCfscgcAfgGfUfaaaaGfcAfgaaccsusg	3699	CAGGUUCUGCUUUUACCUGCGGC	3776
AD-1019446	ususcug(Chd)UfuUfUfAfccugcggcscsa	3638	VPusGfsgccGfcAfGfguaaAfaGfcagaascsc	3725	GGUUCUGCUUUUACCUGCGGCCC	3773
AD-1019447	cscscag(Ahd)GfcCfCfCfauucauugscsa	3616	VPusGfscaaUfgAfAfugggGfcUfcugggscsc	3703	GGCCCAGAGCCCCAUUCAUUGCC	3779
AD-1019448	cscsaga(Ghd)CfcCfCfAfuucauugcscsa	3574	VPusGfsgcaAfuGfAfauggGfgCfucuggsgsc	3661	GCCCAGAGCCCCAUUCAUUGCCC	3747
AD-1019449	csasgag(Chd)CfcCfAfUfucauugccscsa	3629	VPusGfsggcAfaUfGfaaugGfgGfcucugsgsg	3716	CCCAGAGCCCCAUUCAUUGCCCC	3787
AD-1019450	cscsauu(Chd)AfuUfGfCfcccggugcsusa	3597	VPusAfsgcaCfcGfGfggcaAfuGfaauggsgsg	3684	CCCCAUUCAUUGCCCCGGUGCUG	3764

- 154 048552

Немодифицированные последовательности смысловых и антисмысловых цепей дцРНК средств к хангтингтину (HTT)

Таблица 21

Название дуплекса	Смысловая последовательность 5'->3'	SEQ ID NO:	Диапазон в NM 002111.8	Антисмысловая последовательность 5'—>3'	SEQ ID NO:	Диапазон в NM 002111.8
AD-1019427	CGGGACGGGUCCAAGAUGGAA	3851	6-26	UUCCAUCUUGGACCCGUCCCGGC	3918	4-26
AD-1019428	GGACGGGUCCAAGAUGGACGA	3832	8-28	UCGUCCAUCUUGGACCCGUCCCG	3898	6-28
AD-1019429	GACGGGUCCAAGAUGGACGGA	3831	9-2 9	UCCGUCCAUCUUGGACCCGUCCC	3897	7-29
AD-1019430	ACGGGUCCAAGAUGGACGGCA	3833	10-30	UGCCGUCCAUCUUGGACCCGUCC	3899	8-30
AD-1019431	UCCAAGAUGGACGGCCGCUCA	3813	15-35	UGAGCGGCCGUCCAUCUUGGACC	3878	13-35
AD-1019432	AAGAUGGACGGCCGCUCAGGA	3837	18-38	UCCUGAGCGGCCGUCCAUCUUGG	3903	16-38
AD-1019433	AGAUGGACGGCCGCUCAGGUA	3839	19-39	UACCUGAGCGGCCGUCCAUCUUG	3906	17-39
AD-1019434	UGGACGGCCGCUCAGGUUCUA	3821	22-42	UAGAACCUGAGCGGCCGUCCAUC	3887	20-42
AD-1019435	GGACGGCCGCUCAGGUUCUGA	3819	23-43	UCAGAAC CU GAGC GGC C GUC CAU	3885	21-43
AD-1019436	ACGGCCGCUCAGGUUCUGCUA	3807	25-45	UAGCAGAACCUGAGCGGCCGUCC	3872	23-45
AD-1019437	CGGCCGCUCAGGUUCUGCUUA	3818	26-46	UAAGCAGAACCUGAGCGGCCGUC	3884	24-46
AD-1019438	GCCGCUCAGGUUCUGCUUUUA	3798	28-48	UAAAAGCAGAACCUGAGCGGCCG	3863	26-48
AD-1019439	CCGCUCAGGUUCUGCUUUUAA	3796	29-49	UUAAAAGCAGAACCUGAGCGGCC	3861	27-49
AD-1019440	CGCUCAGGUUCUGCUUUUACA	3801	30-50	UGUAAAAGCAGAACCUGAGCGGC	3866	28-50
AD-1019441	GCUCAGGUUCUGCUUUUACCA	3810	31-51	UGGUAAAAG CAGAACCU GAGCGG	3875	29-51
AD-1019442	CUCAGGUUCUGCUUUUACCUA	3797	32-52	UAGGUAAAAGCAGAACCUGAGCG	3862	30-52
AD-1019444	CAGGUUCUGCUUUUACCUGCA	3811	34-54	UGCAGGUAAAAGCAGAACCUGAG	3876	32-54
AD-1019445	GGUUCUGCUUUUACCUGCGGA	3841	36-56	UCCGCAGGUAAAAGCAGAACCUG	3908	34-56
AD-1019446	UUCUGCUUUUACCUGCGGCCA	3838	38-58	UGGCCGCAGGUAAAAGCAGAACC	3904	36-58
AD-1019447	CCCAGAGCCCCAUUCAUUGCA	3844	56-76	UGCAAUGAAUGGGGCUCUGGGCC	3911	54-76
AD-1019448	CCAGAGCCCCAUUCAUUGCCA	3812	57-77	UGGCAAUGAAUGGGGCUCUGGGC	3877	55-77
AD-1019449	CAGAGCCCCAUUCAUUGCCCA	3852	58-78	UGGGCAAUGAAUGGGGCUCUGGG	3919	56-78
AD-1019450	CCAUUCAUUGCCCCGGUGCUA	3829	65-85	UAGCACCGGGGCAAUGAAUGGGG	3895	63-85

Таблица 22

Скрининг однократных HTT доз в клетках Hep3B

	Доза 50 нМ	Доза 10 нМ	Доза 1 нМ	Доза 0,1 нМ
дуплекс	Средн. % остаточной мРНК HTT	SD	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD
AD-1019427	138,10	1,80	106,69	9,66	110,69	6, 95	82,33	1, 04
AD-1019428	122,96	8,54	123,38	18,73	143,60	19,65	85,92	4,79
AD-1019429	159,97	25, 69	127,20	20, 43	169,69	7,54	102,37	11,52
AD-1019430	183,50	24,67	141,83	30,68	165,83	16, 88	90,68	5, 39
AD-1019431	122,49	13,91	99,24	19,93	134,14	12,03	82,93	2,70
AD-1019432	94,78	5, 80	81,95	16,55	106,91	10,11	78,58	2,06
AD-1019433	85,34	8,81	70,69	7,49	99, 44	9,50	78,0 6	6, 13
AD-1019434	66, 47	0,79	49,38	3, 88	76, 15	9,24	77,24	2,61
AD-1019435	106,08	23,50	77,75	10,92	88,27	2,79	104,29	24,58
AD-1019436	112,04	11, 84	119,35	16,71	115,61	11,36	110,74	26,21
AD-1019437	139,88	16, 93	130,38	10,92	134,78	14,02	117,90	19, 13
AD-1019438	68, 19	8,66	71,56	12,22	74,56	10,01	80, 95	23,59
AD-1019439	62,16	6, 48	50,77	5,23	81,31	7,53	84,51	12,58
AD-1019440	56, 89	5, 93	46, 04	4,27	70, 32	11,39	79,98	8, 10
AD-1019441	70,06	5, 54	42,12	4,50	89, 04	2,93	82,5 6	7,31
AD-1019442	48,73	5, 66	34,56	5,17	60, 32	6, 46	77,28	3, 85
AD-1019444	103,32	16, 53	71,56	8,89	90,43	14,68	110,64	14,14
AD-1019445	201,07	51, 82	144,95	19,20	144,50	22,60	100,27	11,62
AD-1019446	191,30	81, 87	137,09	38,39	191,26	8,92	158,08	19,82
AD-1019447	184,26	22,26	167,74	43,07	148,71	32,03	113,94	14,67
AD-1019448	99,85	6,52	75, 18	11,48	128,40	10,49	121,88	27,56
AD-1019449	156,40	22,70	114,59	8,29	132,89	16,45	100,24	17,33
AD-1019450	161,29	65, 73	92,49	15,35	119,28	11,41	93,35	4,75

155 048552

Скрининг однократных HTT доз в клетках РСН

Таблица 23

	Доза 50 нМ	Доза 10 нМ	Доза 1 нМ	Доза 0,1 нМ
Дуплекс	Средн. % остаточной мРНК HTT	SD	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD
AD-1019427	101,37	9,26	156,06	40,24	138,20	35, 12	140,07	40,07
AD-1019428	92,49	6,19	135,48	22,38	118,19	5,27	119,47	16, 68
AD-1019429	98,97	6, 65	131,39	12,98	130,93	6,30	128,81	26, 81
AD-1019430	100,45	5,26	129,08	14,59	125,01	11, 13	126,55	16, 02
AD-1019431	98,21	8,32	145,07	10,68	127,63	7,57	141,36	10,73
AD-1019432	106,29	3,11	168,38	37,13	136,01	22,40	131,93	16,42
AD-1019433	102,70	8,23	161,01	12,53	139,06	5, 13	145,64	6, 63
AD-1019434	129,67	17, 06	154,19	12,23	158,96	23,34	188,71	33,63
AD-1019435	104,54	9,16	131,00	4,95	106,67	10,72	107,91	15,44
AD-1019436	93, 90	5,21	119,23	11,41	118,13	13, 87	97,48	5, 83
AD-1019437	100,62	5,20	119,08	14,80	134,47	18,41	109,63	9,43
AD-1019438	84,11	2,20	117,95	22,08	117,34	12, 05	103,38	9,16
AD-1019439	98,67	3, 66	135,71	12,20	124,13	7,31	135,45	7,08
AD-1019440	83, 61	4,58	99,43	3,05	116,11	3,48	127,08	7,79
AD-1019441	82,45	4,43	137,14	12,07	119,26	6,58	130,27	3,07
AD-1019442	120,65	12,47	153,01	14,74	135,81	15, 03	176,38	33,63
AD-1019444	97,66	4,03	120,60	17,75	103,85	6,35	103,97	10, 02
AD-1019445	94,35	7,61	120,88	24,22	102,70	4,30	94,75	4,03
AD-1019446	92,74	4,59	107,26	12,05	114,16	5,03	95,74	4,00
AD-1019447	88,37	11,45	108,43	8,25	111,92	15,15	93,29	14, 63
AD-1019448	45,33	4,67	62,29	8,67	101,08	7,47	94,82	8,72
AD-1019449	98,22	15, 96	112,71	12,36	131,04	8,72	105,94	11, 80
AD-1019450	85, 07	15, 81	97,62	10,72	107,02	2,92	127,99	8,39

Модифицированные последовательности смысловых и антисмысловых ____________цепей дцРНК , средств к хангтингтину (HTT) _________

Таблица 24

ID дуплекса	Смысловая последовательность 5' >3'	SEQ ID NO:	Антисмысловая последовательность 5'—>3'	SEQ ID NO:	последовательность мРНКмишени 5 1 -Α·3 1	SEQ ID NO:
AD-1019451	usgscug(Ahd)GfcGfGfCfgccgcgagsusa	3928	VPusAfscucGfcGfGfcgccGfcUfcagcascsc	3968	GGUGCUGAGCGGCGCCGCGAGUC	3788
AD-1019452	gscsuga(Ghd)CfgGfCfGfccgcgaguscsa	3929	VPusGfsacuCfgCfGfgcgcCfgCfucagesasc	3969	GUGCUGAGCGGCGCCGCGAGUCG	3793
AD-1019453	gsasguc(Ghd)GfcCfCfGfaggccuccsgsa	3930	VPusCfsggaGfgCfCfucggGfcCfgacucsgsc	3 97 0	GCGAGUCGGCCCGAGGCCUCCGG	3795
AD-1019454	asgsucg(Ghd)CfcCfGfAfggccuccgsgsa	3931	VPusCfscggAfgGfCfcucgGfgCfcgacuscsg	3971	CGAGUCGGCCCGAGGCCUCCGGG	4008
AD-1019455	gscsccg(Ahd)GfgCfCfUfccggggacsusa	3932	VPusAfsgucCfcCfGfgaggCfcUfcgggcscsg	3972	CGGCCCGAGGCCUCCGGGGACUG	3794
AD-1019456	cscscga(Ghd)GfcCfUfCfcggggacusgsa	3933	VPusCfsaguCfcCfCfggagGfcCfucgggscsc	3973	GGCCCGAGGCCUCCGGGGACUGC	3789
AD-1019457	cscsgag(Ghd)CfcUfCfCfggggacugscsa	3934	VPusGfscagUfcCfCfcggaGfgCfcucggsgsc	3974	GCCCGAGGCCUCCGGGGACUGCC	3792
AD-1019458	csgsagg(Chd)CfuCfCfGfgggacugcscsa	3935	VPusGfsgcaGfuCfCfccggAfgGfccucgsgsg	3975	CCCGAGGCCUCCGGGGACUGCCG	3784
AD-1019459	gsasggc(Chd)UfcCfGfGfggacugccsgsa	3936	VPusCfsggcAfgUfCfcccgGfaGfgccucsgsg	3976	CCGAGGCCUCCGGGGACUGCCGU	3791
AD-1019460	cscsucc(Ghd)GfgGfAfCfugccgugcscsa	3937	VPusGfsgcaCfgGfCfagucCfcCfggaggscsc	3977	GGCCUCCGGGGACUGCCGUGCCG	3770
AD-1019461	csusccg(Ghd)GfgAfCfUfgccgugccsgsa	3938	VPusCfsggcAfcGfGfcaguCfcCfcggagsgsc	3978	GCCUCCGGGGACUGCCGUGCCGG	3780
AD-1019462	cscsgug(Chd)CfgGfGfCfgggagaccsgsa	3939	VPusCfsgguCfuCfCfcgccCfgGfcacggscsa	3979	UGCCGUGCCGGGCGGGAGACCGC	3781
AD-1019463	ascscgc(Chd)AfuGfGfCfgacccuggsasa	3940	VPusUfsccaGfgGfUfcgccAfuGfgeggusesu	3980	AGACCGCCAUGGCGACCCUGGAA	3783
AD-1019464	gscscau(Ghd)GfcGfAfCfccuggaaasasa	3941	VPusUfsuuuCfcAfGfggucGfcCfauggcsgsg	3981	CCGCCAUGGCGACCCUGGAAAAG	3771
AD-1019465	cscsaug(Ghd)CfgAfCfCfcuggaaaasgsa	3942	VPusCfsuuuUfcCfAfggguCfgCfcauggscsg	3982	CGCCAUGGCGACCCUGGAAAAGC	3750
AD-1019466	asusggc(Ghd)AfcCfCfUfggaaaagcsusa	3943	VPusAfsgcuUfuUfCfcaggGfuCfgccausgsg	3983	CCAUGGCGACCCUGGAAAAGCUG	3763
AD-1019467	usgsgcg(Ahd)CfcCfUfGfgaaaagcusgsa	3944	VPusCfsagcUfuUfUfccagGfgUfcgccasusg	3984	CAUGGCGACCCUGGAAAAGCUGA	3790
AD-1019468	gscsgac(Chd)CfuGfGfAfaaagcugasusa	3945	VPusAfsucaGfcUfUfuuccAfgGfguegesesa	3985	UGGCGACCCUGGAAAAGCUGAUG	3749
AD-1019469	csgsacc(Chd)UfgGfAfAfaagcugausgsa	3946	VP us C f s a ucAf gC f U f u uu cC f a G f gg uc gs cs c	3986	GGCGACCCUGGAAAAGCUGAUGA	3759
AD-1019470	gsasccc(Uhd)GfgAfAfAfagcugaugsasa	3947	VPusUfscauCfaGfCfuuuuCfcAfgggucsgsc	3987	GCGACCCUGGAAAAGCUGAUGAA	3760
AD-1019471	ascsccu(Ghd)GfaAfAfAfgcugaugasasa	3948	VPusUfsucaUfcAfGfcuuuUfcCfaggguscsg	3988	CGACCCUGGAAAAGCUGAUGAAG	3738
AD-1019472	csusgga(Ahd)AfaGfCfUfgaugaaggscsa	3949	VPusGfsccuUfcAfUfcagcUfuUfuccagsgsg	3989	CCCUGGAAAAGCUGAUGAAGGCC	3743
AD-1019473	usgsgaa(Ahd)AfgCfUfGfaugaaggcscsa	3950	VPusGfsgccUfuCfAfucagCfuUfuuccasgsg	3990	CCUGGAAAAGCUGAUGAAGGCCU	3740
AD-1019474	asasagc(Uhd)GfaUfGfAfaggccuucsgsa	3951	VPusCfsgaaGfgCfCfuucaUfcAfgcuuususc	3991	GAAAAGCUGAUGAAGGCCUUCGA	3734
AD-1019475	asasgcu(Ghd)AfuGfAfAfggccuucgsasa	3952	VPusUfsegaAfgGfCfcuucAfuCfagcuususu	3992	AAAAGCUGAUGAAGGCCUUCGAG	3785
AD-1019476	csusgau(Ghd)AfaGfGfCfcuucgaguscsa	3953	VPusGfsacuCfgAfAfggccUfuCfaucagscsu	3993	AGCUGAUGAAGGCCUUCGAGUCC	3737
AD-1019477	usgsaug(Ahd)AfgGfCfCfuucgagucscsa	3954	VPusGfsgacUfcGfAfaggcCfuUfcaucasgsc	3994	GCUGAUGAAGGCCUUCGAGUCCC	3755
AD-1019478	gsasuga(Ahd)GfgCfCfUfucgaguccscsa	3955	VPusGfsggaCfuCfGfaaggCfcUfucaucsasg	3995	CUGAUGAAGGCCUUCGAGUCCCU	3758
AD-1019479	asusgaa(Ghd)GfcCfUfUfcgagucccsusa	3956	VPusAfsgggAfcUfCfgaagGfcCfuucauscsa	3996	UGAUGAAGGCCUUCGAGUCCCUC	3769
AD-1019480	usgsaag(Ghd)CfcUfUfCfgagucccuscsa	3957	VPusGfsaggGfaCfUfcgaaGfgCfcuucasusc	3997	GAUGAAGGCCUUCGAGUCCCUCA	3778
AD-1019481	asasggc(Chd)UfuCfGfAfgucccucasasa	3958	VPusUfsugaGfgGfAfcucgAfaGfgccuuscsa	3998	UGAAGGCCUUCGAGUCCCUCAAG	3761

- 156 048552

AD-1019482	gsgsccu(Uhd)CfgAfGfUfcccucaagsusa	3959	VPusAfscuuGfaGfGfgacuCfgAfaggccsusu	3999	AAGGCCUUCGAGUCCCUCAAGUC	3777
AD-1019483	gscscuu(Chd)GfaGfUfCfccucaaguscsa	3960	VPusGfsacuUfgAfGfggacUfcGfaaggcscsu	4000	AGGCCUUCGAGUCCCUCAAGUCC	3744
AD-1019484	cscsuuc(Ghd)Af gUfCfCfcucaagucscsa	3961	VPusGfsgacUfuGfAfgggaCfuCfgaaggscsc	4001	GGCCUUCGAGUCCCUCAAGUCCU	3741
AD-1019485	csusucg(Ahd)GfuCfCfCfucaaguccsusa	3962	VPusAfsggaCfuUfGfagggAfcUfcgaagsgsc	4002	GCCUUCGAGUCCCUCAAGUCCUU	3751
AD-1019486	ususcga(Ghd)UfcCfCfUfcaaguccususa	3963	VPusAfsaggAfcUfUfgaggGfaCfucgaasgsg	4003	CCUUCGAGUCCCUCAAGUCCUUC	3765
AD-1019487	uscsgag(Uhd)CfcCfUfCfaaguccuuscsa	3964	VPusGfsaagGfaCfUfugagGfgAfcucgasasg	4004	CUUCGAGUCCCUCAAGUCCUUCC	37 62
AD-1019488	csgsagu(Chd)CfcUfCfAfaguccuucscsa	3965	VPusGfsgaaGfgAfCfuugaGfgGfacucgsasa	4005	UUCGAGUCCCUCAAGUCCUUCCA	3739
AD-1019489	gsasguc(Chd)CfuCfAfAfguccuuccsasa	3966	VPusUfsggaAfgGfAfcuugAfgGfgacucsgsa	4006	UCGAGUCCCUCAAGUCCUUCCAG	3752
AD-1019491	gsusccc(Uhd)CfaAfGfUfccuuccagscsa	3967	VPusGfscugGfaAfGfgacuUfgAfgggacsusc	4007	GAGUCCCUCAAGUCCUUCCAGCA	3782

Таблица 25

Немодифицированные последовательности смысловых и антисмысловых цепей дцРНК средств к хангтингтину (HTT)

Название дуплекса	Смысловая последовательность 5'—>3'	SEQ ID NO:	Диапазон в NM 002111.8	Антисмысловая последовательность 5s—>3'	SEQ ID NO:	Диапазон в NM 002111.8
AD-1019451	UGCUGAGCGGCGCCGCGAGUA	3853	81-101	UACUCGCGGCGCCGCUCAGCACC	3920	79-101
AD-1019452	GCUGAGCGGCGCCGCGAGUCA	3858	82-102	UGACUCGCGGCGCCGCUCAGCAC	3925	80-102
AD-1019453	GAGUCGGCCCGAGGCCUCCGA	3860	97-117	UCGGAGGCCUCGGGCCGACUCGC	3927	95-117
AD-1019454	AGUCGGCCCGAGGCCUCCGGA	4009	98-118	UCCGGAGGCCUCGGGCCGACUCG	4010	96-118
AD-1019455	GCCCGAGGCCUCCGGGGACUA	3859	103-123	UAGUCCCCGGAGGCCUCGGGCCG	3926	101-123
AD-1019456	CCCGAGGCCUCCGGGGACUGA	3854	104-124	UCAGUCCCCGGAGGCCUCGGGCC	3921	102-124
AD-1019457	CCGAGGCCUCCGGGGACUGCA	3857	105-125	UGCAGUCCCCGGAGGCCUCGGGC	3924	103-125
AD-1019458	CGAGGCCUCCGGGGACUGCCA	3849	106-126	UGGCAGUCCCCGGAGGCCUCGGG	4011	104-126
AD-1019459	GAGGCCUCCGGGGACUGCCGA	3856	107-127	UCGGCAGUCCCCGGAGGCCUCGG	3923	105-127
AD-1019460	CCUCCGGGGACUGCCGUGCCA	3835	111-131	UGGCACGGCAGUCCCCGGAGGCC	3901	109-131
AD-1019461	CUCCGGGGACUGCCGUGCCGA	3845	112-132	UCGGCACGGCAGUCCCCGGAGGC	3912	110-132
AD-1019462	CCGUGCCGGGCGGGAGACCGA	3846	124-144	UCGGUCUCCCGCCCGGCACGGCA	4012	122-144
AD-1019463	ACCGCCAUGGCGACCCUGGAA	3848	140-160	UUCCAGGGUCGCCAUGGCGGUCU	3915	138-160
AD-1019464	GCCAUGGCGACCCUGGAAAAA	3836	143-163	UUUUUCCAGGGUCGCCAUGGCGG	3902	141-163
AD-1019465	CCAUGGCGACCCUGGAAAAGA	3815	144-164	UCUUUUCCAGGGUCGCCAUGGCG	3880	142-164
AD-1019466	AUGGCGACCCU GGAAAAGCUA	3828	146-166	UAGCUUUUCCAGGGUCGCCAUGG	4013	144-166
AD-1019467	UGGCGACCCUGGAAAAGCUGA	3855	147-167	UCAG CUUUUCCAGGGUCGCCAUG	4014	145-167
AD-1019468	GCGACCCUGGAAAAGCUGAUA	3814	149-169	UAUCAGCUUUUCCAGGGUCGCCA	3879	147-169
AD-1019469	CGACCCUGGAAAAGCUGAUGA	3824	150-170	UCAUCAGCUUUUCCAGGGUCGCC	3890	148-170
AD-1019470	GACCCUGGAAAAGCUGAUGAA	3825	151-171	UUCAUCAGCUUUUCCAGGGUCGC	3891	149-171
AD-1019471	ACCCUGGAAAAGCUGAUGAAA	3803	152-172	UUUCAUCAGCUUUUCCAGGGUCG	3868	150-172
AD-1019472	CUGGAAAAGCU GAUGAAGGCA	3808	155-175	UGCCUUCAUCAGCUUUUCCAGGG	3873	153-175
AD-1019473	UGGAAAAGCUGAUGAAGGCCA	3805	156-176	UGGCCUUCAUCAGCUUUUCCAGG	4015	154-176
AD-1019474	AAAGCUGAUGAAGGCCWCGA	3799	160-180	UCGAAGGCCUUCAUCAGCUUUUC	3864	158-180
AD-1019475	AAGCUGAUGAAGGCCUUCGAA	3850	161-181	UUCGAAGGCCUUCAUCAGCUUUU	3917	159-181
AD-1019476	CUGAUGAAGGCCUUCGAGUCA	3802	164-184	UGACUCGAAGGCCUUCAUCAGCU	3867	162-184
AD-1019477	UGAUGAAGGCCUUCGAGUCCA	3820	165-185	U GGACUCGAAGGCCUUCAU CAGC	3886	163-185
AD-1019478	GAUGAAGGCCUUCGAGUCCCA	3823	166-186	UGGGACUCGAAGGCCUUCAUCAG	4016	164-186
AD-1019479	AUGAAGGCCUUCGAGUCCCUA	3834	167-187	UAGGGACUCGAAGGCCUUCAUCA	3900	165-187
AD-1019480	UGAAGGCCUUCGAGUCCCUCA	3843	168-188	UGAGGGACUCGAAGGCCUUCAUC	3910	166-188
AD-1019481	AAGGCCUUCGAGUCCCUCAAA	3826	170-190	UUUGAGGGACUCGAAGGCCUUCA	3892	168-190
AD-1019482	GGCCUUCGAGUCCCUCAAGUA	3842	172-192	UACUUGAGGGACUCGAAGGCCUU	3909	170-192
AD-1019483	GCCUUCGAGUCCCUCAAGUCA	3809	173-193	UGACUUGAGGGACUCGAAGGCCU	3874	171-193
AD-1019484	CCUUCGAGUCCCUCAAGUCCA	3806	174-194	U GGACUU GAG GGACUC GAAGGC C	4017	172-194
AD-1019485	CUUCGAGUCCCUCAAGUCCUA	3816	175-195	UAGGACUUGAGGGACUCGAAGGC	4018	173-195
AD-1019486	UUCGAGUCCCUCAAGUCCUUA	3830	176-196	UAAGGACUUGAGGGACUCGAAGG	3896	174-196
AD-1019487	UCGAGUCCCUCAAGUCCUUCA	3827	177-197	UGAAGGACUUGAGGGACUCGAAG	3893	175-197
AD-1019488	CGAGUCCCUCAAGUCCUUCCA	3804	178-198	UGGAAGGACUUGAGGGACUCGAA	3869	176-198
AD-1019489	GAGUCCCUCAAGUCCUUCCAA	3817	179-199	UUGGAAGGACUUGAGGGACUCGA	3883	177-199
AD-1019491	GUCCCUCAAGUCCUUCCAGCA	3847	181-201	UGCUGGAAGGACUUGAGGGACUC	3914	179-201

- 157 048552

Скрининг однократных HTT доз в клетках BE(2)C

Таблица 26

	Доза 50 нМ	Доза 10 иМ	Доза 1 нН	Доза 0,1 нМ
Дуплекс	Средн. % остаточной мРНК HTT	SD	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD
AD-1019451	93,29	16, 82	79, 48	6, 60	117,48	21, 67	86, 30	7,18
AD-1019452	99,01	13,04	95,58	11, 01	108,44	12, 82	96,63	5,59
AD-1019453	87, 05	7,20	113,35	13, 73	94,72	2,78	98,74	13, 68
AD-1019454	119,73	25,89	106,65	10, 68	98,62	4,77	103,14	10,90
AD-1019455	82,82	7,22	103,85	19,64	118,66	29, 10	97,17	11,43
AD-1019456	130,50	23,39	97, 94	18,86	98,21	6, 84	105,81	7,47
AD-1019457	113,79	27,33	98,22	13, 18	94,59	15,31	104,74	12,62
AD-1019458	105,55	18,22	81,42	3,46	95, 90	9, 68	97,59	10,26
AD-1019459	86,39	6,10	82, 18	7,18	86, 45	7,09	86, 03	7,52
AD-1019460	86,54	26, 91	73, 97	4, 97	89,26	22,30	87,31	2,77
AD-1019461	101,49	23,41	102,71	17,25	128,66	12, 07	95,42	4,26
AD-1019462	91, 96	6, 71	107,73	16,2 9	112,32	21, 80	88,42	4,11
AD-1019463	90,33	25,45	88, 82	11, 53	97,45	10, 80	105,73	11,70
AD-1019464	96,47	8,69	105,84	6,30	107,74	8,91	92,45	2,58
AD-1019465	39,56	9,26	44, 15	1, 46	54,35	15, 13	81,22	10,35
AD-1019466	73,77	16,43	58, 74	8,97	71,43	15, 68	82,76	3,09
AD-1019467	86, 04	21,44	63,29	4,25	73,17	11,29	89,01	3,28
AD-1019468	37,14	2,38	40,49	8,69	46, 65	3, 92	76, 47	6, 65
AD-1019469	55,50	7,49	58, 16	7,02	71,59	3,80	92,31	9,48
AD-1019470	30, 87	5,33	42,49	5, 00	49,71	8,12	84,22	9,04
AD-1019471	39,47	5,81	38, 61	4,32	49,39	4,07	76, 09	6,89
AD-1019472	36, 94	6,56	38, 58	5,74	59, 19	9, 03	92,89	15, 63
AD-1019473	44,28	4,57	41, 08	5, 92	58,70	14,41	96, 29	18,47
AD-1019474	23,10	2,15	26, 69	3,41	47,74	11, 81	58,58	8, 93
AD-1019475	79, 15	38,02	75, 33	20,13	78,21	15, 30	96, 03	6, 92
AD-1019476	29,76	0,61	34, 60	6, 18	36, 90	9,22	61,84	4, 44
AD-1019477	32,07	3,21	37, 52	1,42	50, 16	16, 87	88,20	6,09
AD-1019478	35,78	6,14	46, 00	8,07	56, 02	5,51	93, 58	9, 49
AD-1019479	82,43	14,10	79, 61	12,60	79,91	1,40	90,84	6,32
AD-1019480	73,10	10, 82	64, 04	5,81	76,54	2,46	88,44	4,59
AD-1019481	61, 17	5, 75	50, 82	2,01	61,45	4, 92	83,66	18,29
AD-1019482	37,37	4,04	46, 32	5,39	65,74	8,11	86, 94	5, 01
AD-1019483	38,58	7,74	36, 51	3, 09	52,26	5,18	77,39	6, 67
AD-1019484	24,49	2,05	30, 55	2,75	35, 81	8,29	66, 74	4, 82
AD-1019485	28,44	1,78	32, 61	4,65	37,42	6, 84	60,91	7, 85
AD-1019486	46,24	9,01	45, 45	5,18	53, 16	7,81	76, 82	2, 97
AD-1019487	39, 72	7,09	41, 07	5, 67	53, 60	9, 86	79,86	4, 54
AD-1019488	49,71	3, 57	45, 89	6, 61	52,78	5, 90	82,82	17,59
AD-1019489	39,41	10,74	30, 19	5,45	46, 89	3,86	66, 60	15, 82
AD-1019491	37,54	2,60	38,78	4,86	61, 14	10, 96	84,32	10, 33

- 158 048552

Модифицированные последовательности смысловых и антисмысловых цепей дцРНК средств к хангтингтину (HTT)

Таблица 27

ID дуплекса	Смысловая последовательность 5'—>3'	SEQ ID NO:	Антисмысловая последовательность 51—>3'	SEQ ID NO:	последовательность мРНКмишени 5'—>3 '	SEQ ID NO:
AD-1289928.1	asc scc(Uhd)ggaAfAfAfgcugaugaaaL96	4019	VPusUfsucdAu(C2p)agcuuuUfcCfagggususc	4070	CGACCCUGGAAAAGCUGAUGAAG	3738
AD-1289833.1	esc saucg(Chd)gAfCfCfcuggaaaagaL96	4020	VPusCfsuudTu(C2p)caggguCfgCfgauggscsg	4071	CGCCAUGGCGACCCUGGAAAAGC	3750
AD-1289929.1	esc suggaAfAfAfgcuga(Uhd)gaaaL96	4021	VPusUfsucdAu(C2p)agcuuuUfcCfaggsgsu	4072	ACCCUGGAAAAGCUGAUGAAG	4134
AD-1289927.1	esc s(Uhd)ggaAfAfAfguugaugaaaL96	4022	VPusUfsucdAudCaacuuuUfcCfaggsgsu	4073	ACCCUGGAAAAGCUGAUGAAG	4134
AD-1289826.1	esc saugg(Chd)gAfCfCfcuggaaaagaL96	4023	VPusCfsuudTudCcaggguCfgCfcauggscsg	4074	CGCCAUGGCGACCCUGGAAAAGC	3750
AD-1289831.1	asusgg(Chd)gAfCfCfcuggaaaagaL96	4024	VPusCfsuudTu(C2p)caggguCfgCfcausgsg	4075	CCAUGGCGACCCUGGAAAAGC	4135
AD-1289925.1	ascscc(Ulid)ggaAfAfAfgcugaugaaaL96	4019	VPusUfsucdAu(C2p)agcuuuUfcCfaggguscsg	4076	CGACCCUGGAAAAGCUGAUGAAG	3738
AD-1289824.1	esc saugg(Chd)gAfCfCfcuggaaaagaL96	4023	VPusCfsuuuUfcCfAfggguCfgCfcauggscsg	3982	CGCCAUGGCGACCCUGGAAAAGC	3750
AD-1289832.1	asusgg(Chd)gAfCfCfcuggaaaagaL96	4024	VPusCfsuudTu(C2p)caggguCfgCfcaususc	4077	CCAUGGCGACCCUGGAAAAGC	4135
AD-1289825.1	esc sauggcgAfCfCfcugg(Ahd)aaagaL96	4025	VPusCfsuuuUfcCfAfggguCfgCfcauggscsg	3982	CGCCAUGGCGACCCUGGAAAAGC	3750
AD-1289852.1	cscsgcucAfgGfUfUfcugcu(Uhd)uuaaL96	4026	VPusUfsaadAadGcagaacCfudGagcggscsc	4078	GGCCGCUCAGGUUCUGCUUUUAC	3731
AD-1289867,1	csusu(Chd)GfaGfUfCfccucaagucaL96	4027	VPusdGsacdTu(G2p)agggacUfcGfaagsgsc	4079	GCCUUCGAGUCCCUCAAGUCC	4136
AD-1289924.1	asc sccuggaAfAfAfgcuga(Uhd)gaaaL96	4028	VPusUfsucau(C2p)agcuuuUfcCfaggguscsg	3651	CGACCCUGGAAAAGCUGAUGAAG	3738
AD-1289853.1	esc sgcu(Chd)AfgGfU fUfcugauuuuaaL96	4029	VPusUfsaadAadTcagaacCfiidGagcggscsc	4080	GGCCGCUCAGGUUCUGCUUUUAC	3731
AD-1289860.1	esc sggu(Chd) AfgGfU fUfcugcuuuuaaL96	4030	VPusUfsaadAadGcagaacCfudGaccggscsc	4081	GGCCGCUCAGGUUCUGCUUUUAC	3731
AD-J 289931.1	cscs(Ahd)ggaAfAfAfgcugaugaaa.L96	4031	VPusUfsucdAu(C2p)agcuuuUfcCfuggsgsu	4082	ACCCUGGAAAAGCUGAUGAAG	4134
.A.D-1289926.1	esc s(Uhd)ggaAfAfAfgcuuaugaaaL96	4012	VPusUfsucdAudAagcuuuUfcCfaggsgsu	4083	ACCCUGGAAAAGCUGAUGAAG	4Π4
AD-1289851.1	cscsgcu(Chd)AfgGfUfUfcugcuuuuaaL96	3585	VPusUfsaadAadGcagaacCfudGagcggscsc	4078	GGCCGCUCAGGUUCUGCUUUUAC	3731
AD-1289930.1	esc suggaAfAfAfgcuga(Uhd)gaaaL96	4021	VPusUfsucdAu(C2p)agcuuuUfcCfaggsusc	4084	ACCCUGGAAAAGCUGAUGAAG	4134
AD-1289859.1	cscsgca(Chd)AfgGfUfUfcugcuuuuaaL96	4033	VPusUfsaadAadGcagaacCfudGugcggscsc	4085	GGCCGCUCAGGUUCUGCUUUUAC	3731
AD-1289932.1	csgs(Uhd)ggaAfAfAfgcugaugaaaL96	4034	VPusUfsucdAu(C2p)agcuuuUfcCfacgsgsu	4086	ACCCUGGAAAAGCUGAUGAAG	4134
AD-1019405.3	ascsccu(Ghd)GfaAfAfAfgcugaugaaaI 96	3564	VPusUfsucau(C2p)agcuuuUfcCfaggguscsg	3651	CGACCCUGGAAAAGCUGAUGAAG	3738
AD-1289861.1	cscsccu(CM)AfgGfUiUfcugcuuuuaaL96	4035	VPusUfsaadAadGcagaacCfudGaggggscsc	4087	GGCCGCUCAGGL UCUGCU U U UAC	3731
AD-1107447,5	esc saug(Ghd)CfgAfCfCfcuggaaaagaL96	3579	VPusCfsuuuUfcCfAfggguCfgCfcauggscsg	3982	CGCCAUGGCGACCCUGGAAAAGC	3750
AD-1289948.1	uscsccu(Chd)AfagUfCfcuuccagcaaL96	4036	VPusUfsgcdTg(G2p)aaggacUfudGagggasusc	4088	AGUCCCUCAAGUCCUUCCAGCAG	3735
AD-1289864.1	gscscuu(Chd)GfaGfUfCfccucaagucaL96	3570	VPusdGsacdTu(G2p)agggacUfcGfaaggcscsu	4089	AGGCCUUCGAGU CCCU CAAGUCC	3744
AD-1289913.1	gscsgac(Chd)CfiidGgAfaaagcugauaL96	4037	VPusAfsucdAg(C2p)uuuuccAfgdGgucgcscsg	4090	UGGCGACCCUGGAAAAGCUGAUG	3749
AD-1289923.1	ascscc(Uhd)ggaAfAfAfgcugaugaaaL96	4019	VPusUfsucau(C2p)agcuuuUfcCfaggguscsg	3651	CGACCCUGGAAAAGCUGAUGAAG	3738
AD-1289921.1	gscsguc(Chd)CfudGgAfaaagcugauaL96	4038	VPusAfsucdAg(C2p)uuuuccAfgdGgacgcscsg	4091	UGGCGACCCUGGAAAAGCUGAUG	3749
AD-1289865.1	gscscuu(Chd)GfaGfUfCfccuuaagucaL96	4039	VPusdGsacdTudAagggacUfcGfaaggcscsu	4092	AGGCCUUCGAGUCCCUCAAGUCC	3744
AD-1107442.5	c sc sgcu(Chd) AfgGfU fUfcugcuuuuaaL96	3585	VPusUfsaaaAfgCfAfgaacCfuGfagcggscsc	3644	GGCC GC U C AGGUUCUGCUU U UAC	3731
AD-1289830.1	cscsaugg(Uhd)gAfCfCfcuggaaaagaL96	4040	VPusCfsuudTudCcaggguCfaCfcauggsusc	4093	CCAUGGCGACCCUGGAAAAGC	4135
AD-1289866.1	gscscuu(Chd)GfaGfUfCfccucaagucaL96	3570	VPusdGsacdTu(G2p)agggacUfcGfaaggcsusc	4094	AGGCCUUCGAGUCCCUCAAGUCC	3744
AD-1289947.1	uscsccu(Chd)AfagUfCfcuuccagcaaL96	4036	VPusUfsgcdTg(G2p)aaggacUfudGagggascsu	4095	AGUCCCUCAAGUCCUUCCAGCAG	3735
AD-1289933.1	gscs(Uhd)ggaAfAfAfgcugaugaaaL96	4041	VPusUfsucdAu(C2p)agcuuuUfcCfagcsgsu	4096	ACCCUGGAAAAGCUGAUGAAG	4134
A1J-1289950.1	uscscca(Chd)AfagUfCfcuuccagcaaL96	4042	VPusUfsgcdTg(G2p)aaggacUludGugggascsu	4097	AGUCCCUCAAGUCCUUCCAGCAG	3735
AD-1289868.1	csusu(Chd)GfaGfUfCfccucaagucaL96	4027	VPusdGsacdTu(G2p)agggacUfcGfaagscsu	4098	GCCU UCGAGUCCCUCAAGUCC	4136
AD-1289946.1	uscsgcu(Chd)AfaGfUfCfcuuucagcaaL96	4043	VPusUfsgcdTgdAaaggacUfuGfagcgascsu	4099	AGUCCCUCAAGUCCUUCCAGCAG	3735
AD-1289960.1	gscsguc(Chd)CfudGgAfaaagcugauaL96	4038	VPusAfsucdAg(C2p)uuuudCcAfgdGgacgcsusc	4100	UGGCGACCCUGGAAAAGCUGAUG	3749
AD-1289956.1	gscsgac(Chd)CfudGgAfaaagcugauaL96	4037	VPusAfsucdAgdCuuuudCcAfgdGgucgcscsg	4101	UGGCGACCCUGGAAAAGCUGAUG	3749
AD-1289827.1	c sc saugg(Chd)gAfCfCfcuggaaaa gaL96	4023	VPusCfsuudTu(C2p)caggguCfgCfcauggscsg	4102	CGCCAUGGCGACCCUGGAAAAGC	3750
AD-1289829.1	cscsaugg(Chd)gAfUfCfcuggaaaagaL96	4044	VPusCfsuudTudCcaggauCfgCfcauggsusc	4103	CGCCAUGGCGACCCUGGAAAAGC	3750
AD-1289850.1	cscsgcu(Chd)aggUfUfcugcuuuuaaL96	4045	VPusUfsaaaAfgCfAfgaacCfuGfagcggscsc	3644	GGCCGCUCAGGUUCUGCUUUUAC	3731
AD-1289945.1	uscsccu(Chd)AfaGfUfCfcuuucagcaaL96	4046	VPusUfsgcdTgdAaaggacUfuGfagggascsu	4104	AGUCCCUCAAGUCCUUCCAGCAG	3735
AD-1289835.1	cscsuugg(Clid)gAfCfCfcuggaaaagaL96	4047	VPusCfsuudTu(C2p)caggguCfgCfcaaggscsg	4105	CGCCAUGGCGACCCUGGAAAAGC	3750
AD-1289828.1	cscsaugg(Chd)gAfCfCfcuggaaaagaL96	4023	VPusCfsuudTu(C2p)caggguCfgCfcauggsusc	4106	CGCCAUGGCGACCCUGGAAAAGC	3750
AD-1289949.1	cscsu(Chd)AfagUfCfcuuccagcaaL96	4048	VPusUfsgcdTg(G2p)aaggacUfudGaggscsg	4107	UCCCUCAAGUCCUUCCAGCAG	4137
AD-1289871.1	gscsguu(Chd)GfaGflJfCfccucaagucaL96	4049	VPusdGsacdTu(G2p)agggacUfcGfaacgcscsu	4108	AGGCCUUCGAGUCCCUCAAGUCC	3744
AD-1289914.1	gscsgac(Chd)CfudGgAfaaagcugauaL96	4037	VPusAfsue dAg(C2p)uuuudCcAfgdGgucgcscsg	4109	UGGCGACCCUGGAAAAGCUGAUG	3749
AD-1289911.1	gscsgaccCfuGfGfAfaaagc(Uhd)gauaL96	4050	VPusAfsucag(C2p)uuuuccAfgGfgucgcscsa	3664	UGGCGACCCUGGAAAAGCUGAUG	3749
AD-1289857.1	gscsu(Chd)AfgGfUfUfcugcuuuuaaL96	4051	VPusUfsaadAadGcagaacCfudGagcsusg	4110	CCGCUCAGGUUCUGCUUUUAC	4138
AD-1289944.1	uscsccucAfaGfUfCfcuucc(Ahd)gcaaL96	4052	VPusUfsgcug(G2p)aaggacUfiiGfagggascsu	3648	AGUCCCUCAAGUCCUUCCAGCAG	3735
AD-1289957.1	gscsgac(Chd)CfiiGfGfAfaaagcugauaL96	3577	VPusAfsucdAg(C2p)uuuudCcAfgdGgucgcscsg	4109	UGGCGACCCUGGAAAAGCUGAUG	3749
AD-I289955.1	gscsgac(Chd)CfudGgAfaaagcugauaL96	4037	VPusAfsucaGfcUfUfuuccAfgGfgucgcscsg	4111	UGGCGACCCUGGАΛΛ AGCUGAUG	3749
AD-1289834.1	cscsaagg(Chd)gAfCfCfcuggaaaagaL96	4053	VPusCfsuudTu(C2p)caggguCfgCfcuuggscsg	4112	CGCCAUGGCGACCCUGGAAAAGC	3750
AD-1289855.1	cscsgcu(Chd)agdGuUfcugcuuuuaaL96	4054	VPusUfsaadAadGcagadAcCfiidGagcggscsc	4113	GGCCGCUCAGGUUCUGCUUUUAC	3731
AD-1019402.3	gscsgac(Chd)CfuGfGfAfaaagcugauaL96	3577	VPusAfsucag(C2p)uuuuccAfgGfgucgcscsa	3664	UGGCGЛСССUGGA A AAGCUG A U G	3749
AD-1289954.1	gsasccCfuGfGfAfaaugc(Uhd)gauaL96	4055	VPusAfsucdAgdCauuudCcAfgdGgucsusc	4114	GCGACCCUGGAAAAGCU GAUG	4139

- 159 048552

AD-1289920,1	gscsgag(Chd)CfudGgAfaaagcugauaL96	4056	VPusAfsucdAg(C2p)umiuccAfgdGcucgcscsg	4115	UGGCGACCCUGGAAAAGCUGAUG	3749
AD-1019426.3	uscsccu(Chd)AfaGfUfCfcuuccagcaaL96	3561	VPusUfsgcug(G2p)aaggacUfuGfagggascsii	3648	AGUCCCUCAAGUCCUUCCAGCAG	3735
Л [>-12X9X62.1	cscsgcu(Chd)agGfUfUfcugcuuuuaaL96	4057	VPusdTsaadAadGcagadAcCfudGagcggscsc	4116	GGCCGCUCAGGUUCUGCUULUAC	3’31
AD-1289854.1	cscsgcu(Chd)aggUfUfciigcuuuuaaL96	4045	VPusUfsaadAadGcagaacCfudGagcggscsc	4078	GGCCGCU CAGGUUCUGCU UUU AC	3731
AD-1289914.2	gscsgac(Chd)CfudGgAfaaagciieauaI.96	4037	VPusAfsucdAg(C2p)uuuudCcAfgdGgucgcscsg	4109	UGGCGACCCUGGAAAAGCUGAUG	3749
AD-1289915.1	gscsgac(Chd)CfudGgAfaaagcugauaL96	4037	VPusAfsucdAg(C2p)uuuudCcAfgdGgiicgcsusg	4117	UGGCGACCCUGGAAAAGCUGAUG	3749
AD-1107449.5	gscsgac(Chd)CfuGfGfAfaaagcugauaL96	3577	VPusAfsucaGfcUfUfuuccAfgGfgucgcscsa	3985	UGGCGACCCUGGAAAAGCUGAUG	3749
AD-1289870.1	gscscau(Chd)GfaGfUfCfccucaagucaL96	4058	VPusdGsacdTu(G2p)agggacUfcGfauggcscsu	4118	AGGCCUUCGAGUCCCUCAAGUCC	3744
AD-1289953.1	gscsgaccCfuGfGfAfaaagc(Uhd)gauaL96	4050	VPusAfsucaGfcUfUfuuccAfgGfgucgcscsg	4111	UGGCGACCCUGGAAAAGCUGAUG	3749
AD-1107451.5	gscscuu(Chd)GfaGfUfCfccucaagucaL96	3570	VPusGfsacuUfgAfGfggacUfcGfaaggcscsu	4000	AGGCCUUCGAGUCCCUCAAGUCC	3744
AD-1289961.1	gscscac(Chd)CfiidGgAfaaagcugauaL96	4059	VPusAfsucdAg(C2p)uuuudCcAfgdGguggcsiisc	4119	CCAUGGCGACCCUGGAAAAGC	4135
AD-1289951.1	uscscgu(Chd)AfagUfCfcuuccagcaaL96	4060	VPusUfsgcdTg(G2p)aaggacUfudGacggascsu	4120	AGUCCCUCAAGUCCUUCCAGCAG	3735
AD-1289915.2	gscsgac(Chd)CfudGgAfaaagcugauaL96	4037	VPusAfsucdAg(C2p)umiudCcAfgdGgucgcsusg	4117	UGGCGACCCUGGAAAAGCUGAUG	3749
AD-1289912.1	gscsgac(Chd)CfiidGgAfaaagcugauaL96	4037	VPusAfsucag(C2p)uuuuccAfgGfgucgcscsg	4121	UGGCGACCCUGGAAAAGCUGAUG	3749
AD-1289958.1	gsasc(Chd)CfudGgAfaaagcugauaL96	4061	VPusAfsucdAg(C2p)uuuudCcAfgdGgucsusg	4122	GCGACCCUGGAAAAGCUGAUG	4139
AD-1289869.1	gscscua(Chd)GfaGfUfCfccucaagucaL96	4062	VPusdGsacdTu(G2p)agggacUfcGfuaggcscsu	4123	AGGCCUUCGAGUCCCUCAAGUCC	3”44
AD-1289916.2	gsasc(Chd)CfudGgAfaaagcugauaL96	4061	VPusAfsucdAg(C2p)uuuudCcAfgdGgucsgsc	4124	GCGACCCUGGAAAAGCUGAUG	4139
AD-1289858.1	gscsu(Chd)AfgGfU fUfcugcuuuuaaL96	4051	VPusUfsaadAa(G2p)cagaacCfudGagcsusg	4125	CCGCUCAGGUUCUGCUUUUAC	4138
AD-1289789.1	csasgcu(Uhd)CfcUfCfAfgccgccgccaL96	4063	VPusGfsgcgGfcGfGfcugaGfgAfagcugsasg	4126	CUCAGCUUCCUCAGCCGCCGCCG	4140
AD-1255821.1	uscsagc(Uhd)UfcCfUfCfagccgccgcaL96	4064	VPusGfscggCfgGfCfugagGfaAfgcugasgsg	4127	CCUCAGCUUCCUCAGCCGCCGCC	4141
AD-1289959.1	gscsgag(Chd)CfudGgAfaaagcugauaL96	4056	VPusAfsucdAg(C2p)umiudCcAfgdGcucgcsusc	4128	UGGCGACCCU GGAAAAGCUGAUG	3749
AD-1289790.1	asgscuu(Ctid)CfuCfAfGfccgccgccgaL96	4065	VPusCfsggcGfgCfGfgcugAfgGfaagcusgsa	4129	UCAGCUUCCUCAGCCGCCGCCGC	4142
AD-1289952.1	uscsgcu(Chd)AfagUfCfcuuccagcaaL96	4066	VPusUfsgcdTg(G2p)aaggacUfudGagc gasc su	4130	AGUCCCUCAAGUCCUUCCAGCAG	3735
AD-J 289791.1	gscsuuc(Chd)UfcAfGfCfcgccgccgcaL96	4067	VPusGfscggCfgGlCfggcuGfaGfgaagcsusg	4131	CAGCUUCCUCAGCCGCCGCCGCA	4143
AD-1289922.1	gscscac(Chd)CfudGgAfaaagcugauaL96	4059	VPusAfsiicdAg(C2p)uuuuccAfgdGguggcscsg	4132	UGGCGACCCUGGAAAAGCUGAUG	3749
AD-1289919.1	gscsgaccCfuGfGfAfaaugc(Uhd)gauaL96	4068	VPusAfsucdAgdCauuudCcAfgdGgucscsu	4133	UGGCGACCCUGGAAAAGCUGAUG	3749
AD-1289916.1	gsasc(Chd)CfudGgAfaaagcugauaL96	4061	VPusAfsucdAg(C2p)uuuudCcAfgdGgucsgsc	4124	GCGACCCUGGAAAAGCUGAUG	4139
AD-1289863.1	gscscuu(CM)gagUfCfcciicaagucaL96	4069	VPusGfsacuUfgAfGfggacUfcGfaaggcscsu	4000	AGGCCUUCGAGUCCCUCAAGUCC	3744

Немодифицированные последовательности смысловых и антисмысловых

Таблица 28

цепей дцРНК средств к хангтингтину (HTT)
Название дуплекса	Смысловая последовательность 5’—>3'	SEQ ID NO:	Диапазон в NM 002111.8	Антисмысловая последовательность 5'—>3'	SEQ ID NO	Диапазон в NM 002111.8
AD-1289928.1	ACCCUGGAAAAGCUGAUGAAA	3803	152-172	UUUCAUCAGCUUUUCCAGGGUUC	4182	150-172
AD-1289833.1	CCAUGGCGACCCUGGAAAAGA	4144	144-164	UCUUTUCCAGGGUCGCGAUGGCG	4183	142-164
AD-1289929.1	CCUGGAAAAGCUGAUGAAA	4145	154-172	UUUCAUCAGCUUUUCCAGGGU	4184	152-172
AD-1289927.1	CCUGGAAAAGUUGAUGAAA	414 6	154-172	UUUCAUCAACUUUUCCAGGGU	4185	152-172
AD-1289826.1	CCAUGGCGACCCUGGAAAAGA	3815	144-164	UCUUTUCCAGGGUCGCCAUGGCG	4186	142-164
AD-1289831.1	AUGGCGACCCUGGAAAAGA	4147	146-164	UCUUTUCCAGGGUCGCCAUGG	4187	144-164
AD-1289925.1	ACCCUGGAAAAGCUGAUGAAA	3803	152-172	UUUCAUCAGCUUUUCCAGGGUCG	3868	150-172
AD-1289824.1	CCAUGGCGACCCUGGAAAAGA	3815	144-164	UCUUUUCCAGGGUCGCCAUGGCG	3880	142-164
AD-1289832.1	AUGGCGACCCUGGAAAAGA	414 7	146-164	UCUUTUCCAGGGUCGCCAUUC	4188	144-164
AD-1289825.1	CCAUGGCGACCCUGGAAAAGA	3815	144-164	UCUUUUCCAGGGUCGCCAUGGCG	3880	142-164
AD-1289852.1	CCGCUCAGGUUCUGCUUUUAA	3796	29-49	UUAAAAGCAGAAC CUGAGC GGCC	3861	27-49
AD-1289867.1	CUUCGAGUCCCUCAAGUCA	414 8	175-193	UGACTUGAGGGACUCGAAGGC	4189	173-193
AD-1289924.1	ACCCUGGAAAAGCUGAUGAAA	3803	152-172	UUUCAUCAGCUUUUCCAGGGUCG	3868	150-172
AD-1289853.1	CCGCUCAGGUUCUGAUUUUAA	4149	29-49	UUAAAAT CAGAAC CUGAGC GGCC	4190	27-49
AD-1289860.1	CCGCUCAGGUUCUGCUUUUAA	4150	29-49	UUAAAAGCAGAACCUGACC GGC C	4191	27-49
AD-1289931.1	CCAGGAAAAGCUGAUGAAA	4151	154-172	UUUCAUCAGCUUUUCCUGGGU	4192	152-172
AD-1289926.1	CCUGGAAAAGCUUAUGAAA	4152	154-172	UUUCAUAAGCUUUUCCAGGGU	4193	152-172
AD-1289851.1	CCGCUCAGGUUCUGCUUUUAA	3796	29-49	UUAAAAGCAGAACCUGAGCGGCC	3861	27-49
AD-1289930.1	CCUGGAAAAGCUGAUGAAA	4145	154-172	UUUCAUCAGCUUUUCCAGGUC	4194	152-172
AD-1289859.1	CCGCACAGGUUCUGCUUUUAA	4153	29-49	UUAAAAGCAGAACCUGUGCGGCC	4195	27-49
AD-1289932.1	CCUGGAAAAGCUGAUGAAA	4154	154-172	UUUCAUCAGCUUUUCCAGGGU	4196	152-172
AD-1019405.3	ACCCUGGAAAAGCUGAUGAAA	3803	152-172	UUUCAUCAGCUUUUCCAGGGUCG	3868	150-172
AD-1289861.1	CCCCUCAGGUUCUGCUUUUAA	4155	29-49	UUAAAAGCAGAACCUGAGGGGCC	4197	27-49
AD-1107447.5	CCAUGGCGACCCUGGAAAAGA	3815	144-164	UCUUUUCCAGGGUCGCCAUGGCG	3880	142-164
AD-1289948.1	UCCCUCAAGUCCUUCCAGCAA	3800	182-202	UUGCTGGAAGGACUUGAGGGAUC	4198	180-202

- 160 048552

AD-1289864.1	GCCUUCGAGUCCCUCAAGUCA	3809	173-193	UGACTUGAGGGACUCGAAGGCCU	4199	171-193
AD-1289913.1	GCGACCCUGGAAAAGCUGAUA	3814	149-169	UAUCAGCUUUUCCAGGGUCGCCG	4200	147-169
AD-1289923.1	ACCCUGGAAAAGCUGAUGAAA	3803	152-172	UUUCAUCAGCUUUUCCAGGGUCG	3868	150-172
AD-1289921.1	GCGUCCCUGGAAAAGCUGAUA	4156	149-169	UAUCAGCUUUUCCAGGGACGCCG	4201	147-169
AD-1289865.1	GCCUUCGAGUCCCUUAAGUCA	4157	173-193	UGACTUAAGGGACUCGAAGGCCU	4202	171-193
AD-1107442.5	CCGCUCAGGUUCUGCUUUUAA	3796	29-49	UUAAAAGCAGAACCUGAGCGGCC	3861	27-49
AD-1289830.1	CCAUGGUGACCCUGGAAAAGA	4158	144-164	UCUUTUCCAGGGUCACCAUGGUC	4203	142-164
AD-1289866.1	GCCUUCGAGUCCCUCAAGUCA	3809	173-193	UGACTUGAGGGACUCGAAGGCUC	4204	171-193
AD-1289947.1	UCCCUCAAGUCCUUCCAGCAA	3800	182-202	UUGCTGGAAGGACUUGAGGGACU	4205	180-202
AD-1289933.1	GCUGGAAAAGCUGAUGAAA	4159	154-172	UUUCAUCAGCUUUUCCAGCGU	4206	152-172
AD-1289950.1	UCCCACAAGUCCUUCCAGCAA	4160	182-202	UUGCTGGAAGGACUUGUGGGACU	4207	180-202
AD-1289868.1	CUUCGAGUCCCUCAAGUCA	4148	175-193	UGACTUGAGGGACUCGAAGCU	4208	173-193
AD-1289946.1	UCGCUCAAGUCCUUUCAGCAA	4161	182-202	UUGCTGAAAGGACUUGAGCGACU	4209	180-202
AD-1289960.1	GCGUCCCUGGAAAAGCUGAUA	4156	149-169	UAUCAGCUUUUCCAGGGACGCUC	4210	147-169
AD-1289956.1	GCGACCCUGGAAAAGCUGAUA	3814	149-169	UAUCAGCUUUUCCAGGGUCGCCG	4200	147-169
AD-1289827.1	CCAUGGCGACCCUGGAAAAGA	3815	144-164	UCUUTUCCAGGGUCGCCAUGGCG	4186	142-164
AD-1289829.1	CCAUGGCGAUCCUGGAAAAGA	4162	144-164	UCUUTUCCAGGAUCGCCAUGGUC	4211	142-164
AD-1289850.1	CCGCUCAGGUUCUGCUUUUAA	3796	29-49	UUAAAAGCAGAACCUGAGCGGCC	3861	27-49
AD-1289945.1	UCCCUCAAGUCCUUUCAGCAA	4163	182-202	UUGCTGAAAGGACUUGAGGGACU	4212	180-202
AD-1289835.1	CCUUGGCGACCCUGGAAAAGA	4164	144-164	UCUUTUCCAGGGUCGCCAAGGCG	4213	142-164
AD-1289828.1	CCAUGGCGACCCUGGAAAAGA	3815	144-164	UCUUTUCCAGGGUCGCCAUGGUC	4214	142-164
AD-1289949.1	CCUCAAGUCCUUCCAGCAA	4165	184-202	UUGCTGGAAGGACUUGAGGCG	4215	182-202
AD-1289871.1	GCGUUCGAGUCCCUCAAGUCA	4166	173-193	UGACTUGAGGGACUCGAAGGCCU	4216	171-193
AD-1289914.1	GC GACC CU GGAAAAGCU GAUA	3814	149-169	UAUCAGCUUUUCCAGGGUCGCCG	4200	147-169
AD-1289911.1	GCGACCCUGGAAAAGCUGAUA	3814	149-169	UAUCAGCUUUUCCAGGGUCGCCA	3879	147-169
AD-1289857.1	GCUCAGGUUCUGCUUUUAA	4167	31-49	UUAAAAGCAGAACCUGAGCUG	4217	29-49
AD-1289944.1	UCCCUCAAGUCCUUCCAGCAA	3800	182-202	UUGCUGGAAGGACUUGAGGGACU	3865	180-202
AD-1289957.1	GCGACCCUGGAAAAGCUGAUA	3814	149-169	UAUCAGCUUUUCCAGGGUCGCCG	4200	147-169
AD-1289955.1	GCGACCCUGGAAAAGCUGAUA	3814	149-169	UAUCAGCUUUUCCAGGGUCGCCG	4200	147-169
AD-1289834.1	CCAAGGCGACCCUGGAAAAGA	4168	144-164	UCUUTUCCAGGGUCGCCUUGGCG	4218	142-164
AD-1289855.1	CCGCUCAGGUUCUGCUUUUAA	3796	29-49	UUAAAAGCAGAACCUGAGCGGCC	3861	27-49
AD-1019402.3	GCGACCCUGGAAAAGCUGAUA	3814	149-169	UAUCAGCUUUUCCAGGGUCGCCA	3879	147-169
AD-1289954.1	GACCCUGGAAAUGCUGAUA	4169	151-169	UAUCAGCAUUUCCAGGGUCUC	4219	149-169
AD-1289920.1	GCGAGCCUGGAAAAGCUGAUA	4170	149-169	UAUCAGCUUUUCCAGGGUCGCCG	4220	147-169
AD-1019426.3	UCCCUCAAGUCCUUCCAGCAA	3800	182-202	UUGCUGGAAGGACUUGAGGGACU	3865	180-202
AD-1289862.1	CCGCUCAGGUUCUGCUUUUAA	3796	29-49	UTAAAAGCAGAACCUGAGCGGCC	4221	27-49
AD-1289854.1	CCGCUCAGGUUCUGCUUUUAA	3796	29-49	UUAAAAGCAGAACCUGAGCGGCC	3861	27-49
AD-1289914.2	GCGACCCUGGAAAAGCUGAUA	3814	149-169	UAUCAGCUUUUCCAGGGUCGCCG	4200	147-169
AD-1289915.1	GCGACCCUGGAAAAGCUGAUA	3814	149-169	UAUCAGCUUUUCCAGGGUCGCUG	4222	147-169
AD-1107449.5	GCGACCCUGGAAAAGCUGAUA	3814	149-169	UAUCAGCUUUUCCAGGGUCGCCA	3879	147-169
AD-1289870.1	GCCAUCGAGUCCCUCAAGUCA	4171	173-193	UGACTUGAGGGACUCGAUGGCCU	4223	171-193
AD-1289953.1	GCGAC CCUGGAAAAGCUGAUA	3814	149-169	UAUCAGCUUUUCCAGGGUCGCCG	4200	147-169
AD-1107451.5	GCCUUCGAGUCCCUCAAGUCA	3809	173-193	UGACUUGAGGGACUCGAAGGCCU	3874	171-193
AD-1289961.1	GCGACCCUGGAAAAGCUGAUA	4172	149-169	UAUCAGCUUUUCCAGGGUGGCUC	4224	147-169
AD-1289951.1	UCCCUCAAGUCCUUCCAGCAA	4173	182-202	UUGCTGGAAGGACUUGAGGGACU	422 5	180-202
AD-1289915.2	GCGACCCUGGAAAAGCUGAUA	3814	149-169	UAUCAGCUUUUCCAGGGUCGCUG	4222	147-169
AD-1289912.1	GCGACCCUGGAAAAGCUGAUA	3814	149-169	UAUCAGCUUUUCCAGGGUCGCCG	4200	147-169
AD-1289958.1	GACCCUGGAAAAGCUGAUA	4174	151-169	UAUCAGCUUUUCCAGGGUCUG	4226	149-169
AD-1289869.1	GCCUACGAGUCCCUCAAGUCA	4175	173-193	UGACTUGAGGGACUCGUAGGCCU	4227	171-193
AD-1289916.2	GACCCUGGAAAAGCUGAUA	4174	151-169	UAUCAGCUUUUCCAGGGUCGC	4228	149-169
AD-1289858.1	GCUCAGGUUCUGCUUUUAA	4167	31-49	UUAAAAGCAGAAC CUGAGCUG	4217	29-49
AD-1289789.1	CAGCUUCCUCAGCCGCCGCCA	4176	299-319	UGGCGGCGGCUGAGGAAGCUGAG	4229	297-319
AD-1255821.1	UCAGCUUCCUCAGCCGCCGCA	4177	298-318	UGCGGCGGCUGAGGAAGCUGAGG	4230	296-318
AD-1289959.1	GCGAGCCUGGAAAAGCUGAUA	4170	149-169	UAUCAGCUUUUCCAGGCUCGCUC	4231	147-149
AD-1289790.1	AGCUUCCUCAGCCGCCGCCGA	4178	300-320	UCGGCGGCGGCUGAGGAAGCUGA	4232	298-320
AD-1289952.1	UCCCUCAAGUCCUUCCAGCAA	417 9	182-202	UUGCTGGAAGGACUUGAGGGACU	4233	180-202
AD-1289791.1	GCUUCCUCAGCCGCCGCCGCA	4180	301-321	UGCGGCGGCGGCUGAGGAAGCUG	4234	299-321
AD-1289922.1	GCGACCCUGGAAAAGCUGAUA	4172	149-169	UAUCAGCUUUUCCAGGGUGGCCG	4235	147-169
AD-1289919.1	GCGACCCUGGAAAUGCUGAUA	4181	149-169	UAUCAGCAUUUCCAGGGUCCU	4236	147-169
AD-1289916.1	GACCCUGGAAAAGCUGAUA	4174	151-169	UAUCAGCUUUUCCAGGGUCGC	4228	149-169
AD-1289863.1	GCCUUCGAGUCCCUCAAGUCA	3809	173-193	UGACUUGAGGGACUCGAAGGCCU	3874	171-193

- 161 048552

Таблица 29

Модифицированные последовательности смысловых и антиемысловых цепей дцРНК средств к хангтингтину (HTT)

ID дуплекса	Смысловая последовательность 5 ' -»3'	SEQ ID NO:	Антисмысловая последовательность 5'—>3'	SEQ ID NO:	последовательность мРНК-мишени 5'—>3'	SEQ ID NO:
AD-1255829.1	ascsagc(Chd)GfcUfGfCfugccucagcaL96	4237	VPusGfscugAfgGfCfagcaGfcGfgcugusgsc	4282	GCACAGCCGCUGCU GCCUCAGCC	4327
AD-1289804.1	cscsgcc(Ghd)CfaGfGfCfacagccgcuaL96	4238	VPusAfsgcgGfcU fGfugccU fgCfggcggscsg	4283	CGCCGCCGCAGGCACAGCCGCUG	4328
AD-1255847,1	usgsagg(Ahd)GfcCfGfCfugcaccgacaL96	4239	VPusGfsucgGfuGfCfagcgGfcUfccucasgsc	4284	GCUGAGGAGCCGCUGCACCGACC	4329
AD-1255846.1	csusgag(Ghd)AfgCfCfGfcugcaccgaaL96	4240	VPusUfscggUfgCfAfgcggCfiiCfcucagscsc	4285	GGCUGAGGAGCCGCUGCACCGAC	4330
AD-1255842,1	gsusggc(Uhd)GfaGfGfAfgccgcugcaaL96	4241	VPusUfsgcaGfcGfGfcuccUfcAfgccacsasg	4286	CUGUGGCUGAGGAGCCGCUGC AC	4331
AD-1255826.1	gsgscac(Ahd)GfcCfGfCfiigcugccucaL96	4242	VPusGfsaggCfaGfCfagcgGfcUfgugccsusg	4287	CAGGCACAGCCGCU GCUGCCUCA	4332
AD-1255828.1	csascag(Chd)CfgCfUfGfcugccucagaL96	4243	VPusCfsugaGfgCfAfgcagCfgGfcugugscsc	4288	GGCACAGCCGCUGCUGCCUCAGC	4333
AD-1255844.1	gsgscug(Alid)GfgAfGfCfcgcugcaccaL96	4244	VPusGfsgugCfaGfCfggcuCfcUfcagccsasc	4289	GUGGCUGAGGAGCCGCUGCACCG	4334
AD-1289792.1	csusucc(Uhd)CfaGfCfCfgccgccgcaaL96	4245	VPusU fsgcgGfcGfGfcggcU fg Afggaa gscsu	4290	AGCUUCCUCAGCCGCCGCCGCAG	4335
AD-1255825.1	asgsgca(Chd)AfgCfCfGfcugcugccuaL96	4246	VPusAfsggcAfgCfAfgcggCfuGfiigccusgsc	4291	GCAGGCACAGCCGCUGCUGCCUC	4336
AD-1255822.1	esc sgc a( GM) Gfc AfC fAfgcc gcugcu aL96	4247	VPusAfsgcaGfcGfGfcuguGfcCfugcggscsg	4292	CGCCGCAGGCACAGCCGCUGCUG	4337
AD-1255839.1	gscsugu(Glid)GfcUfGfAfggagccgcuaL96	4248	VPusAfsgcgGfcUfCfcucaGfcCfacagcscsg	4293	CGGCUGUGGCUGAGGAGCCGCUG	4338
AD-1255827.1	gscsaca(Ghd)CfcGfCfUfgcugccucaaL96	4249	VPusUfsgagGfcAfGfcagcGfgCfiigugcscsu	4294	AGGCACAGCCGCUGCUGCCUCAG	4339
AD-1255824.1	gscsagg(Chd)AfcAfGfCfcgcugcugcaL96	4250	VPusGfscagCraGfCrggciiGfiiGIccugcsgsg	4295	CCGCAGGCACAGCCGCUGCUGCC	4340
AD-1255845.1	gscsuga(Glid)GfaGfCfCfgcugcaccgaL96	4251	VPusCfsgguGfcAfGfcggcUfcCfucagcscsa	4296	UGGCUGAGGAGCCGCUGCACCGA	4341
AD-1255830.1	cscsgcu(Ghd)CfuGfCfCfucagccgcaaL96	4252	VPusUfsgcgGfcUfGfaggcAfgCfagcggscsu	4297	AGCCGCUGCUGCCUCAGCCGCAG	4342
AD-1289806. J	gscscgc(Ahd)GfgCfAfCfagccgcugcaL96	4253	VPusGfscagCfgGfCfugugCfcUfgcggcsgsg	4298	CCGCCGCAGGCACAGCCGCUGCU	4343
AD-1255836.1	cscsggc(Uhd)GfuGfGfCfugaggagccaL96	4254	VPusGfsgcuCfcUfCfagccAfcAfgccggsgsc	4299	GCCCGGCUGUGGCUGAGGAGCCG	4344
AD-1289807.1	csasggc(Ahd)CfaGfCfCfgcugcugccaL96	4255	VPusGfsgcaGfcAfGfcggcUfgUfgccugscsg	4300	CGCAGGCACAGCCGCUGCUGCCU	4345
AD-1289805.1	csgsccg(Chd)AfgGfCfAfcagccgcugaL96	4256	VPusCfsagcGfgCfUfgugcCfuGfcggcgsgsc	4301	GCCGCCGCAGGCACAGCCGCUGC	4346
AD-1255840.1	csusgug(Ghd)CfuGfAfGfgagccgcugaL96	4257	VPusCfsagcGfgCIUfccucAfgCfcacagscsc	4302	GGCUGUGGCUGAGGAGCCGCUGC	4347
AD-1289808,1	csasgcc(GM)CfuGfCfUfgccucagccaL96	4258	VPusGfsgcuGfaGfGfcagcAfgCfggcugsusg	4303	CACAGCCGCUGCUGCCUCAGCCG	4348
AD-1289800.1	gscscgc(Chd)GfcCfGfCfaggcacagcaL96	4259	VPusGfscugUfgCfCfugcgGfcGfgcggcsusg	4304	CAGCCGCCGCCGCAGGCACAGCC	4349
AD-1255838.1	gsgscug(Uhd)GfgCfUfGfaggagccgcaL96	4260	VPusGfscggCfiiCfCfucagCfcAfcagccsgsg	4305	CCGGCUGUGGCUGAGGAGCCGCU	4350
AD-1255843.1	usgsgcu(Ghd)AfgGfAfGfccgcugcacaL96	4261	VPusGfsugcAfgCfGfgcucCfuCfagccascsa	4306	UGUGGCUGAGGAGCCGCUGCACC	4351
AD-1255837.1	csgsgcu(Ghd)UfgGfCfUfgaggagccgaL96	4262	VPusCfsggcUfcCfUfcagcCfaCfagccgsgsg	4307	CCCGGCUGUGGCUGAGGAGCCGC	4352
AD-1255833.1	gsgsccc(Ghd)GfcUfGfUfggcugaggaaL96	4263	VPusUfsccuCfaGfCfcacaGfcCfgggccsgsg______	4308	CCGGCCCGGCUGUGGCUGAGGAG	4353
AD-1289797.1	uscsagc(Chd)GfcCfGfCfcgcaggcacaL96	4264	VPusGfsugcCftiGfCfggcgGfcGfgcugasgsg	4309	CCUCAGCCGCCGCCGCAGGCACA	4354
AD-1255823.1	csgscag(Ghd)CfaCfAfGfccgcugcugaL96	4265	VPusCfsagcAfgCfGfgcugUfgCfcugcgsgsc	4310	GCCGCAGGCACAGCCGCUGCUGC	4355
AD-1289810.1	gscscgc(Ulid)GfcUfGfCfcucagccgcaL96	4266	VPusGfscggCfuGfAfggcaGfcAfgcggcsusg	4311	CAGCCGCUGCUGCCUCAGCCGCA	4356
AD-1289811.1	cscsggc(Chd)CfgGfCfUfguggcugagaL96	4267	VPusCfsucaGfcCfAfcagcCfgGfgccggsgsu	4312	ACCCGGCCCGGCUGUGGCUGAGG	4357
AD-1289812.1	csgsgcc(Chd)GfgCfUfGfuggcugaggaL96	4268	VPusCfscucAfgCfCfacagCfcGfggccgsgsg	4313	CCCGGCCCGGCUGUGGCUGAGGA	4358
AD-1255841.1	usgsugg(Chd)UfgAfGfGfagccgcugcaL96	4269	VPusGfscagCfgGfCfiiccuCfaGfccacasgsc	4314	GCUGUGGCUGAGGAGCCGCUGCA	4359
AD-1289799.1	asgsccg(Chd)CfgCfCfGfcaggcacagaL96	4270	VPusCfsuguGfcCfUfgcggCfgGfcggcusgsa	4315	UCAGCCGCCGCCGCAGGCACAGC	4360
AD-1255834.1	gscsccg(Ghd)CfuGfUfGfgcugaggagaL96	4271	VPusCfsuccUfcAfGfccacAfgCfcgggcscsg	4316	CGGCCCGGCUGUGGCUGAGGAGC	4361
AD-1289809.1	asgsccg(Chd)UfgCfUfGfccacagccgaL96	4272	VPusCfsggcUfgAfGfgcagCfaGfcggcusgsu	4317	ACAGCCGCUGCUGCCUCAGCCGC	4362
AD-1289801.1	cscsgcc(GM)CfcGfCfAfggcacagccaL96	4273	VPusGfsgcuGfuGfCfcugcGfgCfggcggscsu	4318	AGCCGCCGCCGCAGGCACAGCCG	4363
AD-1289793.,1	ususccu(Chd)AfgCfCfGfccgccgcagaL96	4274	VPusCfsugcGfgCfGfgcggCfuGfaggaasgsc	4319	GCUUCCUCAGCCGCCGCCGCAGG	4364
AD-1289798.1	csasgcc(Ghd)CfcGfCfCfgcaggcacaaL96	4275	VPusUfsgugCfcUfGfcggcGfgCfggcugsasg	4320	CUCAGCCGCCGCCGCAGGCACAG	4365
AD-1289796.1	csuscag(Chd)CfgCfCfGfccgcaggcaaL96	4276	VPusUfsgccUfgCfGfgcggCfgGfcugagsgsa	4321	UCCUCAGCCGCCGCCGCAGGCAC	4366
AD-1289803.1	gscscgc(Chd)GfcAfGfGfcacagccgcaL96	4277	VPusGfscggCfuGfUfgccuGfcGfgcggcsgsg	4322	CCGCCGCCGCAGGCACAGCCGCU	4367
AD-1255835.1	cscscgg(Chd)UfgUfGfGfcugaggagcaL96	4278	VPusGfscucCfuCfAfgccaCfaGfccgggscsc	4323	GGCCCGGCUGUGGCUGAGGAGCC	4368
AD-1289802.1	csgsccg(Clid)CfgClAl’GfgcacagccgaL96	4279	VPusCfsggcUfgUfGfccugCfgGfcggcgsgsc	4324	GCCGCCGCCGCAGGCACAGCCGC	4369
AD-1289794.1	uscscuc(Ahd)GfcCfGfCfcgccgcaggaL96	4280	VPusCfscugCfgGfCfggcgGfcUfgaggasasg	4325	CUUCCUCAGCCGCCGCCGCAGGC	4370
AD-1289795.1	cscsuca(Ghd)CfcGfCfCfgccgcaggcaL96	4281	VPusGfsccuGfcGfGfcggcGfgCfugaggsasa	4326	UUCCUCAGCCGCCGCCGCAGGCA	4371

Таблица 30

Немодифицированные последовательности смысловых и антисмысловых цепей дцРНК средств к хангтингтину (HTT)

Название дуплекса	Смысловая последовательность 5'->3'	SEQ ID NO:	Диапазон в NM 002111.8	Антисмысловая последовательность 5'->3'	SEQ ID NO:	Диапазон в NM 002111.8
AD-1255829.1	ACAGCCGCUGCUGCCUCAGCA	4372	325-345	UGCUGAGGCAGCAGCGGCUGUGC	4417	323-345
AD-1289804.1	CCGCCGCAGGCACAGCCGCUA	4373	314-334	UAGCGGCUGUGCCUGCGGCGGCG	4418	312-334
AD-1255847.1	UGAGGAGCCGCUGCACCGACA	4374	394-414	UGUCGGUGCAGCGGCUCCUCAGC	4419	392-414
AD-1255846.1	CUGAGGAGCCGCUGCACCGAA	4375	393-413	UUCGGUGCAGCGGCUCCUCAGCC	4420	391-413
AD-1255842.1	GUGGCUGAGGAGCCGCUGCAA	4376	389-409	UUGCAGCGGCUCCUCAGCCACAG	4421	387-409
AD-1255826.1	GGCACAGCCGCUGCUGCCUCA	4377	322-342	UGAGGCAGCAGCGGCUGUGCCUG	4422	320-342
AD-1255828.1	CACAGCCGCUGCUGCCUCAGA	4378	324-344	UCUGAGGCAGCAGCGGCUGUGCC	4423	322-344
AD-1255844.1	GGCUGAGGAGCCGCUGCACCA	4379	391-411	UGGUGCAGCGGCUCCUCAGCCAC	4424	389-411
AD-1289792.1	CUUCCUCAGCCGCCGCCGCAA	4380	302-322	UUGCGGCGGCGGCUGAGGAAGCU	4425	300-322
AD-1255825.1	AGGCACAGCCGCUGCUGCCUA	4381	321-341	UAGGCAGCAGCGGCUGUGCCUGC	4426	319-341

- 162 048552

AD-1255822.1	CCGCAGGCACAGCCGCUGCUA	4382	317-337	UAGCAGCGGCUGUGCCUGCGGCG	4427	315-337
AD-1255839.1	GCUGUGGCUGAGGAGCCGCUA	4383	386-406	UAGCGGCUCCUCAGCCACAGCCG	4428	384-406
AD-1255827.1	GCACAGCCGCUGCUGCCUCAA	4384	323-343	UUGAGGCAGCAGCGGCUGUGCCU	4429	321-343
AD-1255824.1	GCAGGCACAGCCGCUGCUGCA	4385	319-339	UGCAGCAGCGGCUGUGCCUGCGG	4430	317-339
AD-1255845.1	GCUGAGGAGCCGCUGCAGCGA	4386	392-412	UCGGUGCAGCGGCUCCUCAGCCA	4431	390-412
AD-1255830.1	CCGCUGCUGCCUCAGCCGCAA	4387	329-349	UUGCGGCUGAGGCAGCAGCGGCU	4432	327-349
AD-1289806.1	GCCGCAGGCACAGCCGCUGCA	4388	316-336	UGCAGCGGCUGUGCCUGCGGCGG	4433	314-336
AD-1255836.1	CCGGCUGUGGCUGAGGAGCCA	4389	383-403	UGGCUCCUCAGCCACAGCCGGGC	4434	381-403
AD-1289807.1	CAGGCACAGCCGCUGCUGCCA	4390	320-340	UGGCAGCAGCGGCUGUGCCUGCG	4435	318-340
AD-1289805.1	CGCCGCAGGCACAGCCGCUGA	4391	315-335	UCAGCGGCUGUGCCUGCGGCGGC	4436	313-335
AD-1255840.1	CUGUGGCUGAGGAGCCGCUGA	4392	387-407	UCAGCGGCUCCUCAGCCACAGCC	4437	385-407
AD-1289808.1	CAGCCGCUGCUGCCUCAGCCA	4393	326-346	UGGCUGAGGCAGCAGCGGCUGUG	4438	324-346
AD-1289800.1	GCCGCCGCCGCAGGCACAGCA	4394	310-330	UGCUGUGCCUGCGGCGGCGGCUG	4439	308-330
AD-1255838.1	GGCUGUGGCUGAGGAGCCGCA	4395	385-405	UGCGGCUCCUCAGCCACAGCCGG	4440	383-405
AD-1255843.1	UGGCUGAGGAGCCGCUGCACA	4396	390-410	UGUGCAGCGGCUCCUCAGCCACA	4441	388-410
AD-1255837.1	CGGCUGUGGCUGAGGAGCCGA	4397	384-404	UCGGCUCCUCAGCCACAGCCGGG	4442	382-404
AD-1255833.1	GGCCCGGCUGUGGCUGAGGAA	4398	380-400	UUCCUCAGCCACAGCCGGGCCGG	4443	378-400
AD-1289797.1	UCAGCCGCCGCCGCAGGCACA	4399	307-327	UGUGCCUGCGGCGGCGGCUGAGG	4444	305-327
AD-1255823.1	CGCAGGCACAGCCGCUGCUGA	4400	318-338	UCAGCAGCGGCUGUGCCUGCGGC	4445	316-338
AD-1289810.1	GCCGCUGCUGCCUCAGCCGCA	4401	328-348	UGCGGCUGAGGCAGCAGCGGCUG	4446	326-348
AD-1289811.1	CCGGCCCGGCUGUGGCUGAGA	4402	378-398	UCUCAGCCACAGCCGGGCCGGGU	4447	376-398
AD-1289812.1	CGGCCCGGCUGUGGCUGAGGA	4403	379-399	UCCUCAGCCACAGCCGGGCCGGG	4448	377-399
AD-1255841.1	UGUGGCUGAGGAGCCGCUGCA	4404	388-408	UGCAGCGGCUCCUCAGCCACAGC	4449	386-408
AD-1289799.1	AGCC GCC GCC GCAGGCACAGA	4405	309-329	UCUGUGCCUGCGGCGGCGGCUGA	4450	307-329
AD-1255834.1	GCCCGGCUGUGGCUGAGGAGA	4406	381-401	UCUCCUCAGCCACAGCCGGGCCG	4451	379-401
AD-1289809.1	AGCCGCUGCUGCCUCAGCCGA	4407	327-347	UCGGCUGAGGCAGCAGCGGCUGU	4452	325-347
AD-1289801.1	CCGCCGCCGCAGGCACAGCCA	4408	311-331	UGGCUGUGCCUGCGGCGGCGGCU	4453	309-331
AD-1289793.1	UUCCUCAGCCGCCGCCGCAGA	4409	303-323	UCUGCGGCGGCGGCUGAGGAAGC	4454	301-323
AD-1289798.1	CAGCCGCCGCCGCAGGCACAA	4410	308-328	UUGUGCCUGCGGCGGCGGCUGAG	4455	306-328
AD-1289796.1	CUCAGCCGCCGCCGCAGGCAA	4411	306-326	UUGCCUGCGGCGGCGGCUGAGGA	4456	304-326
AD-1289803.1	GCCGCCGCAGGCACAGCCGCA	4412	313-333	UGCGGCUGUGCCUGCGGCGGCGG	4457	311-333
AD-1255835.1	CCCGGCUGUGGCUGAGGAGCA	4413	382-402	UGCUCCUCAGCCACAGCCGGGCC	4458	380-402
AD-1289802.1	CGCCGCCGCAGGCACAGCCGA	4414	312-332	UCGGCUGUGCCUGCGGCGGCGGC	4459	310-332
AD-1289794.1	UCCUCAGCCGCCGCCGCAGGA	4415	304-324	UCCUGCGGCGGCGGCUGAGGAAG	4460	302-324
AD-1289795.1	CCUCAGCCGCCGCCGCAGGCA	4416	305-325	UGCCUGCGGCGGCGGCUGAGGAA	4461	303-325

Таблица 31

Скрининг однократных HTT доз в клетках BE(2)C____________

	Доза 50 нМ	Доза 10 нМ	Доза 1 нМ	Доза 0,1 нМ
Дуплекс	Средн. % остаточной мРНК HTT	SD	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD	Средн. % остаточной мРНК НТТ	SD
AD-1255829.1	42,96	5, 68	43, 85	2,29	66, 98	1,37	87,40	4,66
AD-1289804.1	51,24	11,22	49, 88	3,32	74,10	3,11	112,44	7,55
AD-1255847.1	56,33	5,48	53,42	4,55	73, 16	9, 69	86,04	11, 02
AD-1255846.1	60, 91	8,58	54,43	5, 62	76,71	5,58	88,90	9,21
AD-1255842.1	71, 67	8,66	57, 02	6, 91	82,51	3,37	88,66	8,57
AD-1255826.1	63, 03	13,87	61, 10	6, 07	81,42	7,45	106,67	5,54
AD-1255828.1	58,25	8,33	61,99	2,58	62,19	9, 96	95,71	14,52
AD-1255844.1	77,81	19, 83	62,45	3,32	93,71	5, 93	94,62	11,51
AD-1289792.1	63, 07	19,66	62,71	7,40	70, 83	2, 95	97,30	8,23
AD-1255825.1	61, 98	11,14	62, 99	5,30	82,22	8,57	113,33	9,73
AD-1255822.1	54,95	8,25	63,21	7,99	73, 10	6,20	94,27	7,33
AD-1255839.1	79, 41	19, 00	63, 82	10,25	78,93	6,77	92,85	7,99
AD-1255827.1	66, 37	7,51	66, 77	10,38	76, 46	6,28	93,56	8,78
AD-1255824.1	70, 91	12,73	67, 84	12,01	79,52	3,88	104,18	6,96
AD-1255845.1	71, 58	5,96	68,53	5,24	99, 80	7,33	102,28	15, 66
AD-1255830.1	55,81	5, 08	72, 00	4,27	85,56	3,31	107,28	6, 84
AD-1289806.1	73, 43	5, 18	76, 80	10,37	92,52	7, 68	102,29	4,29
AD-1255836.1	124,80	23,77	81, 79	12,98	107,34	3,39	93,98	7,73
AD-1289807.1	77,24	10,72	87, 68	14,15	82,46	0,99	99,67	4,22
AD-1289805.1	88,02	4,90	90,31	4,52	97,27	3,91	121,40	4,20
AD-1255840.1	105,83	14,38	90, 46	4,13	80, 88	15, 34	82,60	12, 65
AD-1289808.1	122,86	14,70	92, 14	2,12	102,50	3,56	96, 30	8,50
AD-1289800.1	76, 52	4,81	93, 52	5,12	90, 00	4,51	95,56	2,21
AD-1255838.1	89,17	8,94	93, 90	18,11	108,49	11, 18	94,09	9,61

- 163 048552

AD-1255843.1	107,35	9, 98	-7 3, °2	6, 81	109,57	7,77	93, 99	4,85
AD-1255837.1	117,27	34,77	93, 96	7,45	98,71	18, 19	100,51	7,76
AD-1255833.1	99,27	6, 98	94,69	17,28	101,75	10, 49	88,41	2,89
AD-1289797.1	80,55	6,78	98,81	6,21	74,29	18,16	104,59	7,71
AD-1255823.1	105,66	24,48	98,93	13, 66	86, Об	9, 79	100,05	8,60
AD-1289810.1	92,87	20,76	100,62	6, 60	97,46	4, 56	122,30	16, 77
AD-1289811.1	93,41	6,43	102,94	1,79	96,52	6, 13	98,20	6,21
AD-1289812.1	90,48	4,72	104,24	15, 15	83,21	3, 00	96, 73	22,75
AD-1255841.1	101,07	13,00	104,75	7, 36	100,13	18,24	96,25	9,73
AD-1289799.1	91, 60	17,43	104,76	10, 87	85,06	17,47	85, 10	10,35
AD-1255834.1	125,74	10, 44	106,54	6,84	94,34	21, 58	97,11	4,22
AD-1289809.1	124,27	17,95	108,22	12,24	99,43	0,97	103,04	5,39
AD-1289801.1	98,11	7, 63	109,29	5,74	98, 62	7, 63	111,41	15, 08
AD-1289793.1	98,72	9,25	110,46	9, 91	116,62	26,19	103,92	5,03
AD-1289798.1	94,79	16,26	110,50	7,33	88,92	11,12	104,76	15, 05
AD-1289796.1	81, 94	6,56	110,65	15, 00	87,24	7,53	121,12	19,77
AD-1289803.1	109,67	9,57	115,61	26, 44	88,09	26, 87	110,34	2,77
AD-1255835.1	97,25	6,52	116,18	25, 86	102,10	12, 39	101,26	5, 04
AD-1289802.1	99, 88	5,45	122,93	13, 24	98,52	8, 59	115,30	12, 06
AD-1289794.1	86,59	6,59	130,53	22,85	95,85	8,83	118,93	12,22
AD-1289795.1	92,81	12,98	132,84	25, 18	101,37	16, 37	108,22	9,88

Модифицированные последовательности смысловых и антисмысловых цепей дцРНК средств к хангтингтину (HTT)

Таблица 32

ID дуплекса	Смысловая последовательность 51 —>3 1	SEQ ID NO:	Антисмысловая последовательность 5’—>3’	SEQ ID NO:	последовательность мРНК-мишени 5’—>3’	SEQ ID NO:
AD-1107441	ascsggc(Chd)GfcUfCfA±gguucugcuaL96	3636	VPusAfsgcaGfaAfCfcngaGfcGfgccguscsc	3655	GGACGGCCGCUCAGGUUCUGCUU	37 42
AD-1107446	cscsaga(Ghd)CfcCfCfAfuucauugccaL96	3609	VPusGfsgcaAfuGfAfauggGfgCfucuggsgsc	3661	GCCCAGAGCCCCAUUCAUUGCCC	3747
AD-1107445	csuscag(Ghd)UfuCfUfGfcuuuuaccuaL96	3584	VPusAfagguAfaAfAfgcagAfaCfcugagscsg	3645	CG CU CAGGUU CU GCUUUUAC CU G	3732
AD-1107440	gsgsacg(Ghd)CfcGfCfUfcagguucugaL96	3613	VPusCfsagaAfcCfUfgagcGfgCfcguccsasu	3673	AUGGACGGCCGCUCAGGUUCUGC	3754
AD-1107444	gscsuca(Ghd)GfuUfCfUfgcuuuuaccaL96	3572	VPusGfsguaAfaAfGfcagaAfcCfugagcsgsg	3665	CCGCUCAGGUUCUGCUUUUACCU	3745
AD-1107443	csgscuc(Ahd)GfgUfUfCfugcuuuuacaL96	3576	VPusGfsuaaAfaGfCfagaaCfcUfgagcgsgsc	3649	GC CG CU CAGGUU CU GCUUUUAC C	3736
AD-1107450	csusgau(Ghd)AfaGfGfCfcuucgagucaL96	3563	VPusGfsacuCfgAfAfggccUfuCfaucagscsu	3993	AGCUGAUGAAGGCCUUCGAGUCC	3737
AD-1107452	cscsuuc(Ghd)AfgUfCfCfcucaaguccaL96	3567	VPusGfsgacUfuGfAfgggaCfuCfgaaggsesc	4001	GGCCUUCGAGUCCCUCAAGUCCU	3741
AD-1107454	gsusccc(Uhd)CfaAfGfUfccuuccagcaL96	3620	VPusGfscugGfaAfGfgacuUfgAfgggacsusc	4007	GAGUCCCUCAAGUCCUUCCAGCA	37 82
AD-1107453	ususcga(Ghd)UfcCfCfUfcaaguccuuaL96	3598	VPusAf saggAf cU fU fgaggG faCfucgaasgs g	4003	CCUUCGAGUCCCUCAAGUCCUUC	3765
AD-1107439	usgsgac(Ghd)GfcCfGfCfucagguucuaL96	3592	VPusAfsgaaCfcUfGfagcgGfcCfguccasusc	3675	GAUGGACGGCCGCUCAGGUUCUG	3756
AD-1107448	asusggc(Ghd)AfcCfCfUfggaaaagcuaL96	3596	VPusAfsgcuUfuUfCfcaggGfuCfgccausgsg	3983	CCAU GG CGAC CCUG GAAAAG CU G	3763
AD-1289840	csusga(Uhd)gAfaGfGfCfcuucgagucaL96	4462	VPusdGsacdTc(G2p)aaggccUfuCfaucagscsu	4470	AGCUGAUGAAGGCCUUCGAGUCC	3737
AD-1289848	csusga(Ahd)gAfaGfGfCfcuucgagucaL96	4463	VPusdGsacdTc(G2p)aaggccUfuCfuucagscsu	4471	AGCUGAUGAAGGCCUUCGAGUCC	3737
AD-1210232	gsasccc(Uhd)GfgAfAfAfagcugaugaaL96	3593	VPusUfscauCfaGfCfuuuuCfcAfgggucsgsc	3987	GCGACCCUGGAAAAGCUGAUGAA	3760
AD-1210237	usgsgaa(Ahd)AfgCfUfGfaugaaggccaL96	3566	VPusGfsgccUfuCfAfucagCfuUfuuccasgsg	3990	CCUGGAAAAGCUGAUGAAGGCCU	3740
AD-1210241	asasagc(Uhd)GfaUfGfAfaggccuucgaL96	3560	VPusCfsgaaGfgCfCfuucaUfcAfgcuuususc	3991	GAAAAGCUGAUGAAGGCCUUCGA	3734
AD-1210242	usgsaug(Ahd)AfgGfCfCfuucgaguccaL96	3587	VPusGfsgacUfcGfAfaggcCfuUfcaucasgsc	3994	GCUGAUGAAGGCCUUCGAGUCCC	37 5 5
AD-1210244	gsgsccu(Uhd)CfgAfGfUfcccucaaguaL96	3614	VPusAfscuuGfaGfGfgacuCfgAfaggccsusu	3999	AAGGCCUUCGAGUCCCUCAAGUC	3777
AD-1210245	csusucg(Ahd)GfuCfCfCfucaaguccuaL96	3581	VPusAfsggaCfuUfGfagggAfcUfcgaagsgsc	4002	GCCUUCGAGUCCCUCAAGUCCUU	3751
AD-1210247	gsasguc(Chd)CfuCfAfAfguccuuccaaL96	3582	VPusUfsggaAfgGfAfcuugAfgGfgacucsgsa	4006	UCGAGUCCCUCAAGUCCUUCCAG	3752
AD-1289816	gscsucagguUfCfUfgcuu(Uhd)uaccaL96	4464	VPusdGsgudAa(Agn)agcagaAfcCfugagcsgsg	4472	CCGCUCAGGUUCUGCUUUUACCU	3745
AD-1289819	uscsagguUfCfUfgcuu(Uhd)uaccaL96	4465	VPusdGsgudAa(A2p)agcagaAfcCfugasgsc	4473	GCUCAGGUUCUGCUUUUACCU	4479
AD-1289886	csuscaggUfuCfUfGfcuuu(Uhd)accuaL96	4466	VPusAfsggdTa(Agn)aagcagAfaCfcugagscsg	4474	CGCUCAGGUUCUGCUUUUACCUG	3732
AD-1289906	uscsg(Ahd)guCfCfCfucaaguccuaL96	4 4 67	VPusAfsggdAc(Tgn)ugagggAfcUfcgasgsg	4475	CUU C GAGU С C CU CAAGU CCUU	4480
AD-1289907	uscsg(Ahd)guCfCfCfucaaguccuaL96	4467	VPusAfsggdAc(U2p)ugagggAfcUfcgasusc	4476	CUU C GAGU С C CU CAAGU CCUU	4480
AD-1289909	csusugg(Ahd)guCfCfCfucaaguccuaL96	4 4 68	VPusAfsggdAc(U2p)ugagggAfcUfccaagsgsc	4477	GCCUUCGAGUCCCUCAAGUCCUU	3751
AD-1289964	gscscgc(Uhd)CfadGgUfucugcuuuuaL96	4469	VPusAfsaadAg(C2p)agaadCcUfgAfgcggcscsg	4478	CGGCCGCUCAGGUUCUGCUUUUA	3733

Немодифицированные последовательности смысловых и антисмысловых цепей дцРНК средств к хангтингтину (HTT)

Таблица 33

Название дуплекса	Смысловая последовательность 5' ->3	SEQ ID NO:	Диапазон в NM 002111.8	Антисмысловая последовательность 5'—>3'	SEQ ID NO:	Диапазон в NM 002111.8
AD-1107441	ACGGCCGCUCAGGUUCUGCUA	38 07	25-45	UAGCAGAACCUGAGCGGCCGUCC	3872	23-45
AD-1107446	CCAGAGCCCCAUUCAUUGCCA	3812	57-77	UGGCAAUGAAUGGGGCUCUGGGC	3877	55-77
AD-1107445	CUCAGGUUCUGCUUUUACCUA	3797	32-52	UAGGUAAAAGCAGAACCUGAGCG	3862	30-52
AD-1107440	GGAC GGC C GCU CAGGUUCU GA	3819	23-43	UCAGAACCUGAGCGGCCGUCCAU	3885	21-43
AD-1107444	GCUCAGGUUCUGCUUUUACCA	3810	31-51	UGGUAAAAGCAGAACCUGAGCGG	3875	29-51
AD-1107443	CGCUCAGGUUCUGCUUUUACA	3801	30-50	UGUAAAAGCAGAACCUGAGCGGC	3866	28-50
AD-1107450	CUGAUGAAGGCCUUCGAGUCA	3802	164-184	U GACU C GAAG GC CUU CAU CAG CU	3867	162-184
AD-1107452	CCUUCGAGUCCCUCAAGUCCA	3806	174-194	UGGACUUGAGGGACUCGAAGGCC	4017	172-194
AD-1107454	GUCCCUCAAGUCCUUCCAGCA	3847	181-201	UGCUGGAAGGACUUGAGGGACUC	3 914	179-201
AD-1107453	UUCGAGUCCCUCAAGUCCUUA	3830	176-196	UAAGGACUUGAGGGACUCGAAGG	3896	174-196
AD-1107439	UGGACGGCCGCUCAGGUUCUA	3821	22-42	UAGAACCUGAGCGGCCGUCCAUC	3887	20-42
AD-1107448	AUGGCGACCCU GGAAAAGCUA	3828	146-166	UAGCUUUUCCAGGGUCGCCAUGG	4013	144-166
AD-1289840	CUGAUGAAGGC CUUCGAGUCA	38 02	164-184	UGACTCGAAGGCCUUCAUCAGCU	4485	162-184
AD-1289848	CUGAAGAAGGCCUUCGAGUCA	4481	164-184	UGACTCGAAGGCCUUCUUCAGCU	4486	162-184
AD-1210232	GACCCUGGAAAAGCUGAUGAA	3825	151-171	UUCAUCAGCUUUUCCAGGGUCGC	3891	149-171
AD-1210237	UGGAAAAGCUGAUGAAGGCCA	3805	156-176	UGGCCUUCAUCAGCUUUUCCAGG	4015	154-176
AD-1210241	AAAGCUGAUGAAGGCCUUCGA	3799	160-180	UCGAAGGCCUUCAUCAGCUUUUC	3864	158-180
AD-1210242	UGAUGAAGGCCUUCGAGUCCA	3820	165-185	UGGACUCGAAGGCCUUCAUCAGC	3886	163-185
AD-1210244	GGCCUUCGAGUCCCUCAAGUA	3842	172-192	UACUUGAGGGACUCGAAGGCCUU	3909	170-192

164

AD-1210245	CUUCGAGUCCCUCAAGUCCUA	3816	175-195	UAGGACUUGAGGGACUC GAAGGC	4018	173-195
AD-1210247	GAGUCCCUCAAGUCCUUCCAA	3817	179-199	UUGGAAGGACUUGAGGGACUCGA	3883	177-199
AD-1289816	GCUCAGGUUCUGCUUUUACCA	3810	31-51	UGGUAAAAGCAGAACCUGAGCGG	3875	29-51
AD-1299819	UCAGGUUCUGCUUUUACCA	4482	33-51	UGGUAAAAGCAGAACCUGAGC	4487	31-51
AD-1289886	CUCAGGUUCUGCUUUUACCUA	3797	32-52	UAGGT AAAAGC AGAAC CU GAGC G	4488	30-52
AD-1289906	UCGAGUCCCUCAAGUCCUA	4483	177-195	UAGGACTUGAGGGACUC GAGG	4489	175-195
AD-1289907	UCGAGUCCCUCAAGUCCUA	4483	177-195	UAGGACUUGAGGGACUCGAUC	4 4 90	175-195
AD-1289909	CUUGGAGUCCCUCAAGUCCUA	4484	175-195	UAGGACUUGAGGGACUCCAAGGC	4491	173-195
AD-1289964	GCCGCUCAGGUUCUGCUUUUA	3798	2 8-48	UAAAAGCAGAACCUGAGCGGCCG	3863	26-48

Таблица 34

Скрининг однократных HTT доз в клетках ВЕ(2)С

	50 нМ	10 hM	1 hM	0,1 hM
Дуплекс	Средн.	SD	Средн.	SD	Средн.	SD	Средн.	SD
AD-1289928.1	26,86	1,60	19,55	4,52	22,39	2,15	24,14	1,37
AD-1289833.1	23,91	3,07	17,68	4,58	23,55	2,74	27,27	2,74
AD-1289929.1	23,77	2,47	15,37	2,70	24,10	4,62	24,65	2,18
AD-1289927.1	27,09	5,65	18,06	2,62	24,84	1,66	28,64	2,32
AD-1289826.1	25,34	2,46	16,35	1,53	25,52	5,56	25,98	2,57
AD-1289831.1	30,21	1,67	36,35	7,86	26,09	3,74	30,90	2,30
AD-1289925.1	25,68	4,12	20,60	4,16	27,36	3,07	39,34	7,40
AD-1289824.1	32,57	4,27	38,34	6,20	29,00	2,92	34,38	5,30
AD-1289832.1	32,44	3,57	35,65	5,85	29,89	2,64	37,93	10,68
AD-1289825.1	39,83	17,90	26,65	9,54	30,69	2,01	34,00	4,25
AD-1289852.1	29,07	4,82	35,54	5,97	30,92	7,56	49,11	2,59
AD-1289867.1	28,36	2,80	31,88	7,37	31,98	12,26	56,00	5,83
AD-1289924.1	26,70	1,03	24,41	1,78	32,66	3,15	39,48	5,92
AD-1289853.1	34,66	4,96	28,99	3,10	35,62	5,35	47,55	8,03
AD-1289860.1	30,85	1,81	33,63	6,59	36,85	9,35	47,87	13,74
AD-1289931.1	27,24	1,71	29,84	4,12	36,93	5,95	52,53	23,19
AD-1289926.1	20,74	1,73	21,36	3,76	37,21	10,19	33,30	5,90
AD-1289851.1	29,04	4,65	46,37	10,68	37,41	7,70	59,15	8,97
AD-1289930.1	28,14	3,09	27,85	5,73	37,82	7,73	51,47	21,21
AD-1289859.1	32,10	2,80	36,95	3,88	39,64	2,26	51,16	3,87
AD-1289932.1	38,64	15,28	32,51	2,70	40,87	5,61	57,50	9,85
AD-1019405.3	32,37	3,41	27,02	4,04	40,92	2,74	27,48	2,39
AD-1289861.1	28,13	4,06	21,27	3,46	41,31	5,09	49,50	12,59
AD-1107447.5	37,70	10,79	43,44	9,88	41,46	7,19	49,31	3,36
AD-1289948.1	30,97	2,76	40,28	4,17	41,80	7,23	66,69	15,51
AD-1289864.1	29,78	3,77	39,21	7,89	42,69	5,07	89,93	14,78
AD-1289913.1	31,72	5,80	34,84	8,88	42,95	10,68	73,21	7,08
AD-1289923.1	59,24	10,74	39,10	6,46	45,24	7,48	32,36	10,02
AD-1289921.1	53,68	1,92	58,15	6,99	45,73	4,52	65,30	17,40
AD-1289865.1	31,87	5,72	40,91	4,15	45,75	10,10	79,13	17,89
AD-1107442.5	32,33	6,49	43,54	11,06	46,70	8,32	64,81	14,58
AD-1289830.1	42,03	13,79	33,46	8,03	46,86	4,86	59,66	10,81
AD-1289866.1	36,51	6,26	41,19	8,95	46,89	11,53	71,88	7,53
AD-1289947.1	38,31	1,99	49,21	5,64	48,00	8,18	83,10	17,67
AD-1289933.1	32,81	4,00	35,67	2,53	48,04	7,15	69,06	9,73
AD-1289950.1	27,26	3,33	34,49	6,62	48,53	8,09	69,57	3,80
AD-1289868.1	30,84	5,79	42,94	4,23	52,80	8,22	61,31	3,51
AD-1289946.1	46,68	5,83	46,28	8,49	54,50	7,35	68,13	7,41
AD-1289960.1	35,30	1,65	35,68	3,55	54,94	9,28	65,79	5,26
AD-1289956.1	27,84	2,18	36,44	6,74	55,13	12,30	71,89	7,68
AD-1289827.1	28,82	5,84	29,88	4,99	55,28	10,84	52,68	11,79
AD-1289829.1	40,71	2,43	53,32	13,95	56,16	7,42	85,09	20,29
AD-1289850.1	68,59	4,01	72,52	15,97	58,55	10,21	83,76	7,50
AD-1289945.1	59,40	11,93	40,74	8,64	59,54	12,43	76,72	22,59
AD-1289835.1	37,25	4,53	52,77	8,52	60,32	12,83	112,64	25,83

- 165 048552

AD-1289828.1	39,08	9,24	50,27	6,14	60,38	8,94	85,28	13,09
AD-1289949.1	48,48	15,67	46,75	6,41	60,71	7,90	74,31	4,00
AD-1289871.1	31,65	7,54	50,42	4,81	60,78	10,75	76,82	20,33
AD-1289914.1	31,82	1,51	36,43	2,73	60,93	9,49	76,70	18,34
AD-1289911.1	36,55	3,76	52,21	4,79	61,12	6,82	96,29	13,51
AD-1289857.1	37,65	1,30	54,22	7,43	62,08	12,37	112,67	7,H
AD-1289944.1	41,93	6,76	38,97	6,75	62,30	6,63	103,47	5,76
AD-1289957.1	28,01	4,91	33,18	4,70	63,87	9,58	81,23	11,07
AD-1289955.1	35,33	2,36	39,61	7,12	64,57	6,39	83,55	12,05
AD-1289834.1	38,03	15,96	41,29	5,72	66,11	14,38	70,25	14,42
AD-1289855.1	47,03	10,61	45,38	6,17	66,56	9,83	113,47	25,72
AD-1019402.3	51,50	11,45	78,69	14,18	67,31	12,68	108,20	11,66
AD-1289954.1	53,07	5,81	56,54	15,91	69,08	10,97	81,29	11,70
AD-1289920.1	59,99	6,29	76,06	5,44	72,04	7,85	83,88	18,77
AD-1019426.3	35,72	4,46	39,52	5,34	72,10	11,86	105,24	4,97
AD-1289862.1	35,67	5,88	38,24	6,53	72,61	22,46	94,79	2,43
AD-1289854.1	49,03	11,42	48,86	5,36	73,01	13,83	88,95	28,52
AD-1289914.2	30,03	5,23	33,37	2,93	73,79	12,67	88,84	7,72
AD-1289915.1	51,74	11,74	41,21	11,76	74,00	18,84	103,91	17,51
AD-1107449.5	41,89	7,53	42,32	2,51	74,27	4,96	117,23	13,14
AD-1289870.1	48,95	10,27	49,15	12,60	74,52	14,88	105,14	20,17
AD-1289953.1	35,31	3,01	45,74	4,87	74,71	7,89	107,34	16,59
AD-1107451.5	48,67	4,47	55,46	6,57	76,65	14,88	114,80	16,96
AD-1289961.1	52,85	13,96	49,17	9,57	77,13	6,98	84,90	17,73
AD-1289951.1	31,47	8,60	45,99	5,14	77,78	9,98	102,83	16,18
AD-1289915.2	37,75	9,20	40,82	2,69	79,15	10,39	99,07	23,10
AD-1289912.1	82,10	12,60	95,77	23,45	79,51	11,95	88,10	11,79
AD-1289958.1	49,85	10,86	43,74	4,02	79,96	21,58	106,79	13,72
AD-1289869.1	41,54	14,67	48,99	10,01	81,83	10,93	95,34	11,88
AD-1289916.2	38,11	12,11	30,92	6,77	83,06	27,70	89,95	11,93
AD-1289858.1	77,51	8,31	98,31	11,66	83,94	4,52	88,77	13,74
AD-1289789.1	57,63	5,94	59,15	10,78	86,59	17,72	91,84	14,11
AD-1255821.1	69,16	8,85	82,13	11,58	89,11	12,53	97,77	12,97
AD-1289959.1	42,26	5,22	40,42	4,96	90,44	16,55	71,09	18,49
AD-1289790.1	73,58	9,37	78,35	21,25	90,71	28,57	82,85	26,71
AD-1289952.1	52,77	12,63	56,28	12,30	94,30	5,79	131,73	12,58
AD-1289791.1	74,62	17,99	119,43	34,26	99,39	20,30	98,65	23,07
AD-1289922.1	83,30	14,91	69,35	9,41	100,96	15,26	98,87	18,45
AD-1289919.1	84,61	7,92	93,30	16,27	100,99	12,77	98,84	16,16
AD-1289916.1	51,67	8,05	54,39	2,65	102,21	17,34	146,47	25,74
AD-1289863.1	96,63	15,42	129,19	8,00	146,62	21,26	154,53	20,81

Пример 2. Скрининг HTT in vivo с использованием РНКи средств, направленных на экзон 1 HTT AAV.

Дуплексы, представляющие интерес, направленные на экзон 1 HTT, идентифицированные в представленных выше исследованиях in vitro, оценивали in vivo.

В частности, в день до введения дозы -14 мышей дикого типа (C57BL/6) трансдуцировали путем ретроорбитального введения 2х10^{В * 10} вирусных частиц вектора на основе аденоассоциированного вируса 8 (AAV8), кодирующего часть человеческого HTT дикого типа. Иллюстративные AAV векторы представлены в таблице ниже.

Конструкция	Область	Начало	Конец	Вставка (пн)	Длина (пн)
AAV1	5'UTR+ORF	1	2655	200	2855
AAV2	ORF	2656	5310	200	2855
AAV3	ORF	5311	7965	200	2855
AAV4	ORF+3'UTR	7966	10820	-	2855
AAV5	3'UTR	10821	13475	200	2855

В этом эксперименте мышам вводили AAV8, кодирующий часть HTT дикого типа (AAV1).

В день 0 группам из трех мышей подкожно вводили однократную дозу 3 мг/кг исследуемых средств или контрольного PBS. В день 14 после введения дозы животных умерщвляли, собирали образцы печени и быстро замораживали в жидком азоте. Тканевую мРНК выделяли и исследовали методом ОТ-кПЦР. Уровни мРНК человеческого HTT сравнивали с геном домашнего хозяйства GAPDH. Затем значения нормализовали по среднему значению в контрольной AAV группе. Данные выражены в процентах от исходного значения и представлены как среднее±стандартное отклонение. Результаты, показанные на фиг. 1 и 2, демонстрируют, что протестированные репрезентативные дуплексные средства эффективно снижают уровень матричной РНК человеческого HTT in vivo.

- 166 048552

Пример 3. Скрининг HTT in vivo с использованием РНКи средств, направленных на Экзон 1 HTT.

Дуплексы, представляющие интерес, направленные на экзон 1 HTT человека, оценивали в известной модели болезни Гентингтона (БХ) на мышах, YAC128. Мыши YAC128 несут в своем геноме искусственную дрожжевую хромосому (YAC), содержащую полный человеческий ген БХ, содержащий 128 повторов CAG. У мышей YAC128 развиваются моторные нарушения и возрастная атрофия головного мозга, включая атрофию коры и полосатого тела, связанную с потерей стриарных нейронов. Мыши YAC128 демонстрируют первоначальную гиперактивность, после которой развивается моторный дефицит и, наконец, гипокинез (см., например, Slow, et al. (2003) Human Molecular Genetics 12(13): 1555; Van Raamsdonk, et al. (2005), 2 Human Molecular Genetics 14(24):3823; и Carroll, et al. (2011) Neurobiology of Disease 43:257-265).

В день 0 мышам YAC128 (возрастом 7-13 недель, 27,7±3,4 г, n=36) подкожно вводили однократную дозу 10 мг/кг интересующих средств или контроль PBS. В день 7 после введения дозы животных умерщвляли, собирали образцы печени и быстро замораживали в жидком азоте. Из печени выделяли мРНК и исследовали методом ОТ-кПЦР.

Влияние этих средств на полноразмерную мРНК человеческого HTT дикого типа показано на фиг. 3А. Эти данные демонстрируют, что протестированные репрезентативные дуплексные средства эффективно снижают уровень матричной РНК человеческого HTT in vivo.

Уровни человеческого мутантного белка HTT определяли с помощью Вестерн-блоттинга.

Вкратце, печень гомогенизировали в буфере RTPA вместе с ингибиторами протеаз. Общий белок определяли количественно с использованием набора Pierce BCA в соответствии с инструкциями производителя. Восемьдесят мкг суммарных клеточных лизатов денатурировали при кипячении в 4х LDS буфере, подвергали электрофорезу в геле ДСН-ПААГ в градиенте 3-8% трис-ацетата и переносили на мембраны из ПВДФ. Блоты блокировали блокирующим буфером Odyssey в течение 1 ч при комнатной температуре и гибридизовали со специфичными антителами в течение ночи при 4°С. Использовали следующие антитела: к HTT (Millipore, номер по кат. МАВ2166), к кальнексину (Millipore-Sigma, номер по кат. С4731, флуоресцентно-конъюгированные вторичные антитела (Licor, козьи антитела против иммуноглобулинов кролика, номер по кат. 926-32211, и ослиные антитела против иммуноглобулинов мыши, номер по кат. 926-680721:5000). Детектирование полос белков проводили с помощью визуализационной системы Biorad Chemidoc MP. Интенсивность каждой полосы HTT нормализовали по Кальнексину, используемому в качестве контроля при нанесении, и использовали нормализованные значения интенсивности для количественного определения нокдауна HTT в образцах, обработанных миРНК, по сравнению с контролями, обработанными растворителем (1х PBS).

Влияние этих средств на уровни мутантного человеческого белка HTT показано на фиг. 3В-3С. Эти данные демонстрируют, что протестированные иллюстративные дуплексные средства эффективно снижают уровень полноразмерной матричной РНК человеческого HTT дикого типа (фиг. 3А), а также мутантного человеческого белка HTT in vivo.

В другой серии экспериментов мышам YAC128 (возрастом 7-13 недель, 27,7±3,4 г, n=36) подкожно вводили однократную дозу 10 мг/кг интересующих средств или контроль PBS в день 0. В день 7 после введения дозы животных умерщвляли, собирали образцы печени и быстро замораживали в жидком азоте. Из печени выделяли мРНК и исследовали методом ОТ-кПЦР. Уровни мРНК полноразмерного мутантного HTT и уровни белка полноразмерного мутантного HTT анализировали, как описано выше. Результаты показаны на фиг. 4А-4В и демонстрируют, что протестированные репрезентативные дуплексные средства эффективно снижают уровень мутантного человеческого белка HTT in vivo.

Дополнительные дуплексы, представляющие интерес, направленные на экзон 1 человеческого HTT, также оценивали на способность ингибировать экспрессию полноразмерного человеческого HTT дикого типа in vivo у мышей разного возраста и веса. В частности, в день 0 мышам (возрастом 10-16 недель, 28,2±3,7 г, n=84) подкожно вводили однократную дозу 10 мг/кг интересующих средств или контроля PBS. В день 7 после введения дозы животных умерщвляли, собирали образцы печени и быстро замораживали в жидком азоте. Из печени выделяли мРНК и исследовали методом ОТ-кПЦР.

Уровни мРНК полноразмерного человеческого HTT дикого типа измеряли, как описано в настоящем документе, при этом результаты, показанные на фиг. 5, продемонстрировали, что протестированные репрезентативные дуплексные средства эффективно снижают уровень полноразмерной мРНК человеческого HTT дикого типа in vivo.

Пример 4. Анализ взаимосвязи структуры-активности.

Представляющие интерес дуплексы, направленные на экзон 1 HTT человека, были отобраны для дальнейшего анализа взаимосвязи между структурой и активностью (SAR) и оценены на способность ингибировать экспрессию мутантного HTT in vivo.

В частности, в день 0 мышам YAC128 (возрастом 6-9 недель, n=4 в группе) подкожно вводили однократную дозу 10 мг/кг интересующих средств или контроль PBS. В день 7 после введения дозы животных умерщвляли, собирали образцы печени и быстро замораживали в жидком азоте. Из печени выделяли мРНК и исследовали методом ОТ-кПЦР.

- 167 -

Claims (39)

1. На фиг. 6 показан влияние этих средств на уровни полноразмерной мРНК мутантного человеческого HTT и уровни полноразмерного мутантного человеческого белка. Данные демонстрируют, что средства ингибируют экспрессию экзона 1 мутантного человеческого HTT и полноразмерной мРНК мутантного человеческого HTT и полноразмерного человеческого белка in vivo.

   Дополнительные интересующие дуплексы также оценивали на мышах YAC128 (возрастом 6 недель, n=4 на группу). В день 0 мышам подкожно вводили однократную дозу 10 мг/кг интересующих средств или контроля PBS. В день 7 после введения дозы животных умерщвляли, собирали образцы печени и быстро замораживали в жидком азоте. Из печени выделяли мРНК и исследовали методом ОТкПЦР.

   На фиг. 7 показано влияние этих средств на уровни полноразмерной мРНК мутантного человеческого HTT.

   Пример 5. Скрининг in vitro в человеческих фибробластах пациентов с БХ.

   Влияние представляющих интерес дуплексов на экспрессию полноразмерного человеческого HTT дикого типа и полноразмерного мутантного HTT также оценивали в фибробластах человека. Фибробласты были получены из Института Кориелла, от взрослого здорового контрольного пациента (Контроль, GM02153), пациента с БХ, развившейся в зрелом возрасте (Взрослый, GM04478), и пациента с БХ, развившейся в несовершеннолетнем возрасте (Ювенильный, GM09197). Фибробласты трансфицировали либо 10 нМ, либо 50 нМ дуплексов, направленных на экзон 1 гена HTT или на полноразмерный ген HTT.

   Результаты, показанные на фиг. 8А-8В, фиг. 9А-9В, фиг. 10A-10D и фиг. ИА-HD, демонстрируют, что средства, направленные на экзон 1 гена HTT или полноразмерный ген HTT, ингибируют экспрессию полноразмерной мРНК мутантного человеческого HTT в образцах пациентов in vitro.

   Пример 6. HTT скрининг in vivo с использованием РНКи средств, направленных на полноразмерный человеческий HTT.

   Дуплексы, представляющие интерес, направленные на полноразмерный человеческий HTT, идентифицированные в представленных выше исследованиях in vitro, оценивали in vivo с применением мышиной модели YAC128 и методов с использованием AAV, как описано в настоящем документе.

   В день -14 перед введением дозы мышей дикого типа (C57BL/6, возрастом 7-13 недель, 27,7±3,4 г, n=36) трансдуцировали путем ретроорбитального введения 2х10¹⁰ вирусных частиц вектора на основе аденоассоциированного вируса 8 (AAV8), кодирующего часть HTT человека, включающего AAV1, AAV2, AAV3 или AAV4, как описано в Примере 2 выше.

   В день 0 трансдуцированным мышам и мышам YAC128 подкожно вводили однократную дозу 3 мг/кг или 10 мг/кг интересующих средств или контроля PBS. В день 7 или 14 после введения дозы животных умерщвляли, собирали образцы печени и быстро замораживали в жидком азоте. Из печени выделяли мРНК и исследовали методом ОТ-кПЦР.

   Как показано на фиг. 12, средства ингибируют экспрессию полноразмерной мРНК человеческого HTT или полноразмерного мутантного человеческого HTT in vivo при использовании обеих экспериментальных моделей.

   Дополнительные представляющие интерес дуплексы, направленные на полноразмерный человеческий HTT, также оценивали на способность ингибировать человеческий HTT дикого типа in vivo.

   В день -14 перед введением дозы мышей дикого типа (C57BL/6, возрастом 7-13 недель, 27,7±3,4 г, n=36) трансдуцировали путем внутривенного введения 2х10¹⁰ вирусных частиц AAV1, AAV2, AAV3, или AAV4 (см. таблицу выше в примере 2).

   В день 0 трансдуцированным мышам подкожно вводили однократную дозу 3 мг/кг интересующих средств или контроля PBS. В день 14 после введения дозы животных умерщвляли, образцы печени собирали и быстро замораживали в жидком азоте. Из печени выделяли мРНК и исследовали методом ОТкПЦР.

   Как показано на фиг. 13A-13D, средства ингибируют экспрессию полноразмерной мРНК человеческого HTT дикого типа in vivo, при этом было определено, что многочисленные дуплексы, направленные на полноразмерный транскрипт человеческого HTT, обладают эффективностью более 90%.

   ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Средство на основе двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК) для ингибирования экспрессии Хантингтина (HTT), где средство на основе дцРНК включает смысловую цепь и антисмысловую цепь, образующие двухцепочечную область, где антисмысловая цепь включает по меньшей мере 19 последовательных нуклеотидов из комплемента нуклеотидов 142-195 последовательности SEQ ID NO: 1, где все нуклеотиды смысловой цепи и все нуклеотиды антисмысловой цепи независимо содержат нуклеотидную модификацию, выбранную из группы, состоящей из 2'-O-метилнуклеотидной модификации, 2'-фторнуклеотидной модификации и термически дестабилизирующей модификации, когда термически дестабилизирующая модификация присутсвует, только антисмысловая цепь средства на основе дцРНК содержит термически дестабилизирующую модификацию,

   - 168 048552 где средство на основе дцРНК дополнительно содержит 6-8 фосфоротиоатных межнуклеотидных связей, и где один или больше липофильных фрагментов, содержащих насыщенную или ненасыщенную Сб-С1₈ углеводородную цепь, конъюгированы с одним или более внутренними положениями, выбранными из группы, состоящей из положений 4-8 и 13-18 смысловой цепи.
2. 2. Средство на основе дцРНК по п.1, где термически дестабилизирующая модификация представляет собой абазическую модификацию, некомплементарность с противостоящим нуклеотидом в противоположной цепи, модификацию сахара, ациклический нуклеотид или 2'- дезоксинуклеотидную модификацию.
3. 3. Средство на основе дцРНК по п.1, где термически дестабилизирующая модификация представляет собой разомкнутую нуклеиновую кислоту (UNA) или глицерин-нуклеиновую кислоту (GNA).
4. 4. Средство на основе дцРНК по п.1, где термически дестабилизирующая модификация представляет собой цитидин-2'-фосфат.
5. 5. Средство на основе дцРНК по п.1, где средство содержит модификацию 2'-5' межнуклеотидной связи.
6. 6. Средство на основе дцРНК по п.1, где антисмысловая цепь содержит по меньшей мере 23 последовательных нуклеотидов из комплемента нуклеотидов 147-169 последовательности SEQ ID NO: 1.
7. 7. Средство на основе дцРНК по п.1 или 6, где липофильный фрагмент конъюгирован через линкер или носитель.
8. 8. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6 и 7, где одна или более липофильных фрагментов конъюгированы с одним или более внутренними положениями, выбранными из группы, состоящей из положений 5, 6, 7, 15 и 17 на смысловой цепи.
9. 9. Средство на основе дцРНК по пп.1, 6-8, где углеводородная цепь содержит функциональную группу, выбранную из группы, состоящей из гидроксила, амина, карбоксила, сульфоната, фосфата, тиола, азида и алкина.
10. 10. Средство на основе дцРНК по п.9, где липофильный фрагмент содержит насыщенную или ненасыщенную С16 углеводородную цепь.
11. 11. Средство на основе дцРНК по п.10, где насыщенная или ненасыщенная С16 углеводородная цепь конъюгирована с положением 6 при отсчете от 5'-конца смысловой цепи.
12. 12. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-11, где липофильный фрагмент конъюгирован при посредстве носителя, заменяющего один или более нуклеотидов во внутреннем положении(ях) или двухцепочечной области.
13. 13. Средство на основе дцРНК по п.12, где носитель представляет собой циклическую группу, выбранную из группы, состоящей из пирролидинила, пиразолинила, пиразолидинила, имидазолинила, имидазолидинила, пиперидинила, пиперазинила, [1,3]диоксоланила, оксазолидинила, изоксазолидинила, морфолинила, тиазолидинила, изотиазолидинила, хиноксалинила, пиридазинонила, тетрагидрофуранила и декалинила; или представляет собой ациклическую группу на основе серинольного скелета или диэтаноламинового скелета.
14. 14. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-13, где липофильный фрагмент конъюгирован со средством на основе дцРНК через линкер, содержащий простую эфирную, тиоэфирную, карбамидную, карбонатную, амино, амидную, малеимид-тиоэфирную, дисульфидную, фосфодиэфирную, сульфонамидную связь, продукт клик-реакции или карбамат.
15. 15. Средство на основе двухцепочечной дцРНК по любому из пп.1, 6-14, где липофильный фрагмент конъюгирован с нуклеиновым основанием, остатком сахара или межнуклеозидной связью.
16. 16. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-15, где антисмысловая цепь содержит две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи на 5'-конце и две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи на 3'-конце и смысловая цепь содержит две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи на 5'-конце и две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи на 3'-конце.
17. 17. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-16, где каждая цепь независимо имеет длину 19-25 нуклеотидов.
18. 18. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-17, где по меньшей мере одна цепь включает 3'-оверхенг, содержащий по меньшей мере 1 нуклеотид.
19. 19. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-18, где двухцепочечная область имеет длину 19-25 пар нуклеотидов.
20. 20. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-19, где каждая цепь имеет длину 21-23 нуклеотидов.
21. 21. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-20, где 3'-конец смысловой цепи защищен посредством кэпа, который представляет собой циклическую группу, имеющую амин, причем указанная циклическая группа выбрана из группы, состоящей из пирролидинила, пиразолинила, пиразолидинила, имидазолинила, имидазолидинила, пиперидинила, пиперазинила, [1,3]диоксоланила, оксазолидинила, изоксазолидинила, морфолинила, тиазолидинила, изотиазолидинила, хиноксалинила, пиридазинонила, тетрагидрофуранила и декалинила.

    - 169 048552
22. 22. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-21, дополнительно включающее фосфат или миметик фосфата на 5'-конце антисмысловой цепи.
23. 23. Средство на основе дцРНК по п.22, где миметик фосфата представляет собой 5'-винилфосфонат (VP).
24. 24. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-23, где антисмысловая цепь содержит по меньшей мере 19 последовательных нуклеотидов из нуклеотидной последовательности 5’- UAUCAGCUUUUCCAGGGUCGCCG-3’ последовательности SEQ ID NO: 4200.
25. 25. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-24, где смысловая цепь содержит по меньшей мере 19 последовательных нуклеотидов из нуклеотидной последовательности 5’-GCGACCCUGGAAAAGCUGAUA-3’ последовательности SEQ ID NO: 3814.
26. 26. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-25, где смысловая цепь содержит по меньшей мере 19 последовательных нуклеотидов из нуклеотидной последовательности 5’-GCGACCCUGGAAAAGCUGAUA-3’ последовательности SEQ ID NO: 3814 и антисмысловая цепь содержит по меньшей мере 19 последовательных нуклеотидов из нуклеотидной последовательности 5 -UAUCAGCUUUUCCAGGGUCGCCG-3’ последовательности SEQ ID NO: 4200.
27. 27. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-26, где смысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность 5’-GCGACCCUGGAAAAGCUGAUA-3’ последовательности SEQ ID NO: 3814, и антисмысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность 5’- UAUCAGCUUUUCCAGGGUCGCCG-3’ последовательности SEQ ID NO: 4200.
28. 28. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-23, где антисмысловая цепь содержит по меньшей мере 19 последовательных нуклеотидов из нуклеотидной последовательности 5’-UCUUUUCCAGGGUCGCCAUGGCG-3’ последовательности SEQ ID NO: 3880.
29. 29. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-28, где смысловая цепь содержит по меньшей мере 19 последовательных нуклеотидов, отличающихся не более чем 3 нуклеотидами от нуклеотидной последовательности 5’-CCAUGGCGACCCUGGAAAAGA-3’ последовательности SEQ ID NO: 3815.
30. 30. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-29, где смысловая цепь содержит по меньшей мере 19 последовательных нуклеотидов из нуклеотидной последовательности 5’- CCAUGGCGACCCUGGAAAAGA-3’ последовательности SEQ ID NO: 3815 и антисмысловая цепь содержит по меньшей мере 19 последовательных нуклеотидов из нуклеотидной последовательности 5’-UCUUUUCCAGGGUCGCCAUGGCG-3’ последовательности SEQ ID NO: 3880.
31. 31. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-30, где смысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность 5’- CCAUGGCGACCCUGGAAAAGA-3’ последовательности SEQ ID NO: 3815, и антисмысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность 5 ’ -UCUUUUCC AGGGUCGCC AUGGCG-3 ’ полседовательности SEQ ID NO: 3880.
32. 32. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-23, где антисмысловая цепь содержит по меньшей мере 19 последовательных нуклеотидов из нуклеотидной последовательности 5’- UGGCCUTCAUCAGCUUUUCCAGG -3’ последовательности SEQ ID NO: 3870.
33. 33. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-23 и 32, где смысловая цепь содержит по меньшей мере 19 последовательных нуклеотидов из нуклеотидной последовательности 5’ - UGGAAAAGCUGAUGAAGGCCA -3’ последовательности SEQ ID NO: 3805.
34. 34. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-23, 32-33, где смысловая цепь содержит по меньшей мере 19 последовательных нуклеотидов из нуклеотидной последовательности 5’-UGGAAAAGCUGAUGAAGGCCA-3’ последовательности SEQ ID NO: 3805, и антисмысловая цепь содержит по меньшей мере 19 последовательных нуклеотидов из нуклеотидной последовательности 5 -UGGCCUTCAUCAGCUUUUCCAGG-3’ последовательности SEQ ID NO: 3870.
35. 35. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-23 и 32-34, где смысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность 5’-UGGAAAAGCUGAUGAAGGCCA-3’ последовательности SEQ ID NO: 3805 и антисмысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность

    5’- UGGCCUTCAUCAGCUUUUCCAGG -3’ последовательности SEQ ID NO: 3870.
36. 36. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-23, где антисмысловая цепь содержит по меньшей мере 19 последовательных нуклеотидов из нуклеотидной последовательности 5’-UAGGACTUGAGGGACUCGAAGGC-3’ последовательности SEQ ID NO: 3882.
37. 37. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-23 и 36, где смысловая цепь содержит по меньшей мере 19 последовательных нуклеотидов из нуклеотидной последовательности 5’-CUUCGAGUCCCUCAAGUCCUA-3’ последовательности SEQ ID NO: 3816.
38. 38. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-23, 36 и 37, где смысловая цепь содержит по меньшей мере 19 последовательных нуклеотидов из нуклеотидной последовательности 5’-CUUCGAGUCCCUCAAGUCCUA-3’ последовательности SEQ ID NO: 3816 и антисмысловая цепь содержит по меньшей мере 19 последовательных нуклеотидов из нуклеотидной последовательности 5 -UAGGACTUGAGGGACUCGAAGGC-3’ последовательности SEQ ID NO: 3882.
39. 39. Средство на основе дцРНК по любому из пп.1, 6-23 и 36-38, где смысловая цепь содержит нук

    - 170 -