EA045583B1 - Способ синтеза конъюгата гиалуроновой кислоты и паклитаксела - Google Patents
Способ синтеза конъюгата гиалуроновой кислоты и паклитаксела Download PDFInfo
- Publication number
- EA045583B1 EA045583B1 EA202291872 EA045583B1 EA 045583 B1 EA045583 B1 EA 045583B1 EA 202291872 EA202291872 EA 202291872 EA 045583 B1 EA045583 B1 EA 045583B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- paclitaxel
- conjugate
- hyaluronic acid
- linker
- spacer
- Prior art date
Links
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 title claims description 48
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 title claims description 36
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 title claims description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 34
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 title claims description 25
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 title claims description 25
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 title claims description 25
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title description 20
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 title description 16
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 16
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical group ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 15
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical group CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 13
- JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M sodium bromide Chemical class [Na+].[Br-] JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 10
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 10
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical group Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 150000002148 esters Chemical group 0.000 claims description 8
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- GRHQDJDRGZFIPO-UHFFFAOYSA-N 4-bromobutanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCBr GRHQDJDRGZFIPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 7
- DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N tetrabutylammonium Chemical compound CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical group CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 claims description 6
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 claims description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 5
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims description 4
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 4
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 3
- 241000561734 Celosia cristata Species 0.000 claims description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 2
- 210000001520 comb Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims 4
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 13
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 7
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 7
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 6
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 5
- -1 HA polysaccharide Chemical class 0.000 description 4
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 229920002685 Polyoxyl 35CastorOil Polymers 0.000 description 3
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 3
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 3
- 239000008389 polyethoxylated castor oil Substances 0.000 description 3
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 3
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical group [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 2
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 2
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 2
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 2
- QUANRIQJNFHVEU-UHFFFAOYSA-N oxirane;propane-1,2,3-triol Chemical compound C1CO1.OCC(O)CO QUANRIQJNFHVEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- RCINICONZNJXQF-XAZOAEDWSA-N taxol® Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(CC(C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3(C21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-XAZOAEDWSA-N 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- YAQLSKVCTLCIIE-UHFFFAOYSA-N 2-bromobutyric acid Chemical compound CCC(Br)C(O)=O YAQLSKVCTLCIIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 206010002199 Anaphylactic shock Diseases 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000009079 Bronchial Spasm Diseases 0.000 description 1
- 208000014181 Bronchial disease Diseases 0.000 description 1
- 206010006482 Bronchospasm Diseases 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CCNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001116500 Taxus Species 0.000 description 1
- 241001116498 Taxus baccata Species 0.000 description 1
- 235000009065 Taxus cuspidata Nutrition 0.000 description 1
- GUGOEEXESWIERI-UHFFFAOYSA-N Terfenadine Chemical compound C1=CC(C(C)(C)C)=CC=C1C(O)CCCN1CCC(C(O)(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)CC1 GUGOEEXESWIERI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024780 Urticaria Diseases 0.000 description 1
- XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N Vinyl acetate Chemical compound CC(=O)OC=C XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000001387 anti-histamine Effects 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000739 antihistaminic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001246 bromo group Chemical group Br* 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012829 chemotherapy agent Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 1
- 230000003436 cytoskeletal effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 229920001038 ethylene copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N glutaric acid Chemical compound OC(=O)CCCC(O)=O JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000028161 membrane depolarization Effects 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 1
- 238000010534 nucleophilic substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000009101 premedication Methods 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 1
- 208000013220 shortness of breath Diseases 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000013269 sustained drug release Methods 0.000 description 1
- DKPFODGZWDEEBT-QFIAKTPHSA-N taxane Chemical group C([C@]1(C)CCC[C@@H](C)[C@H]1C1)C[C@H]2[C@H](C)CC[C@@H]1C2(C)C DKPFODGZWDEEBT-QFIAKTPHSA-N 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
Description
Задача изобретения
В настоящем изобретении описан способ промышленного синтеза конъюгата гиалуроновой кислоты и паклитаксела, полученного согласно способу синтеза между молекулами гиалуроновой кислоты (ГК) и паклитаксела путем введения спейсера/линкера 4-броммасляной кислоты между гиалуроновой кислотой и указанным выше химиотерапевтическим веществом согласно оригинальному способу синтеза и очистки, который обеспечивает чистоту конъюгата в его конечной форме.
Область техники
Паклитаксел (Taxol®) представляет собой противораковое средство, осуществляющее свою антипролиферативную активность путем воздействия на организацию микротрубочек клеточной цитоскелетной системы: ингибируя деполяризацию вышеуказанных микротрубочек, он предотвращает их нормальную динамическую реорганизацию, которая происходит во время митотического клеточного деления (Manfredi J.J. et al., J. Cell Biol., 1982, 94:688-696).
Основными терапевтическими показаниями для паклитаксела являются его применение в терапии распространенного рака молочной железы, в терапии рака легких, в лечении рака яичников, рака мочевого пузыря, предстательной железы и эндометрия.
Паклитаксел представляет собой нерастворимое в воде соединение, и, следовательно, фармацевтическая композиция, в которой он используется в настоящее время, включает его смешивание с Cremophor EL - этиловым спиртом, (Pfeifer R.W. et al., Am. J. Hosp. Pharm., 1993, 50:2520-2521) в соотношении 1:1, и именно в этой форме его обычно вводят путем непрерывной внутривенной инфузии. Присутствие Cremophor EL является основной причиной негативных реакций, которые обычно возникают при введении паклитаксела, т.е. простых приступов крапивницы, одышки и бронхоспазма, вплоть до анафилактического шока. По этой причине все пациенты, получающие лечение фармацевтической композицией паклитаксел-Cremophor EL, должны перед началом лечения пройти процедуру согласно протоколу премедикации, которая состоит из введения дексаметазона, возможно в сочетании с антигистаминным средством.
Таким образом, авторы настоящего изобретения могут с уверенностью заявить, что препарат Taxol®, который в настоящее время используется в клинической практике (а также способ его введения), представляет собой ограничение его терапевтической эффективности. По этой причине исследования в настоящее время ориентированы как на синтез пролекарств/водорастворимых конъюгатов паклитаксела, так и на новые препараты вышеупомянутого противоракового лекарственного средства.
Паклитаксел представляет собой алкалоид, который в настоящее время получают полусинтетическим путем из одного из его предшественников, полученных из иголок тиса ягодного (Taxus Baccata). Химически он состоит из таксанового кольца с 15 атомами углерода, связанного с оксиэтановым кольцом в положениях С4 и С5, тогда как в положении С13 присутствует сложноэфирная связь, которая считается необходимой для его противораковой активности.
Для преодоления указанных выше проблем, связанных с типом состава, были предприняты попытки, например, инкапсулировать указанное противораковое вещество в липосомы, нанокапсулы и микросферы, образованные полимерной оболочкой, образованной биоразлагаемыми сополимерами, такими как полимолочная кислота, или небиоразлагаемыми сополимерами, такими как сополимер этилена с винилацетатом, или микросферы, образованные полифосфоэфиром, нагруженным паклитакселом, для создания системы пролонгированного высвобождения лекарственного средства в месте лечения (Nuijen В. et al., Investigational New Drugs, 2001, 19:143-153).
Однако было показано, что эти новые системы для инкапсуляции паклитаксела имеют проблемы со стабильностью, производством и воспроизводимостью.
Более того, были предприняты различные попытки солюбилизировать вышеупомянутое лекарственное средство циклодекстринами, но новые препараты не давали желаемых результатов (Nuijen В. et al., Investigational New Drugs, 2001, 19:143-153).
Химические исследования новых препаратов паклитаксела, которые сделают это лекарственное средство более водорастворимым, сохраняя при этом его эффективность в качестве противоракового средства неизменной, привели в результате к синтезу новых аналогов, модифицированных в положениях С2' и С7, и, кроме того, к получению новых конъюгатов, также определяемых как пролекарства.
Имея это в виду, было предпринято несколько попыток синтезировать новые пролекарства, которые привели, например, к получению таких лекарственных средств, как ацетилпаклитаксел (Mellado W. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 1984, 124(2):329-336), или к синтезу новых сложных эфиров вышеуказанного лекарственного средства с сукцинатом, глутаратом и сульфоновой кислотой на атоме углерода в положении С2', сложных эфиров, которые, однако, оказались нестабильными в водной среде.
Кроме того, также известно применение ПЭГ (полиэтиленгликоля) для дериватизации вышеуказанного химиотерапевтического вещества путем этерификации паклитаксела в положении С2'. Такая новая молекула оказалась хорошо растворимой в воде, но также имела ограниченную стабильность.
Наконец, была также разработана новая система доставки вышеуказанного лекарственного средства, которую получают путем конъюгации паклитаксела с белком сывороточного альбумина (ЧСА):
- 1 045583 конъюгат паклитаксел-ЧСА оказался хорошо растворимым в воде, но нет достоверных данных об эффективности относительно паклитаксела per se (Nuijen В. et al., Investigational. New Drugs, 2001, 19:143-153).
Недавно была синтезирована новая система высвобождения паклитаксела, этерифицированного предварительно модифицированной гиалуроновой кислотой (ГК), т.е. дериватизированного молекулами гидразида, связанными с карбоксильной группой ГК амидной связью (Luo Y. et al., Biomacromolecules, 2000, 1(2):208-218) (US 5,874,417). Таким образом, была получена новая система доставки паклитаксела, которая позволяет лекарственному средству напрямую достигать поверхности мембраны опухолевой клетки-мишени, которая характеризуется сверхэкспрессией рецептора ГК CD44.
В попытке развить все возможности ассоциации паклитаксела с ГК, в результате был изучен и синтезирован новый конъюгат ГК с химиотерапевтическим веществом, причем ГК и химиотерапевтическое вещество ковалентно связаны в нем друг с другом опосредованно с помощью спейсера/линкера, такого как, например, броммасляная кислота, которая делает конечный продукт более водорастворимым и, следовательно, легким для введения (ЕР 2045270).
Объем настоящего изобретения заключается в определении нового способа получения и очистки, который является особенно эффективным и преодолевает отмеченные выше недостатки предшествующего уровня техники.
Подробное описание изобретения
Таким образом, объектом настоящего изобретения является оригинальный способ получения и очистки конъюгата гиалуроновой кислоты и паклитаксела (ГК-паклитаксела), который включает или состоит из следующих стадий:
а) активация в растворе паклитаксела в органическом растворителе, предпочтительно дихлорметане, содержащем спейсер/линкер 4-броммасляной кислоты, карбоксильной группы вышеуказанного спейсера/линкера 4-броммасляной кислоты с помощью активирующего агента, предпочтительно карбодиимида, более предпочтительно 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида гидрохлорида (EDC, CAS номер 25952-53-8), в присутствии катализатора, предпочтительно DMAP (4-диметиламинопиридина), с получением интермедиата конъюгата ГК и паклитаксела (Br-С4-паклитаксела);
b) кристаллизация интермедиата, полученного на предыдущей стадии (а), в органическом растворителе, предпочтительно N-гептане, затем его фильтрация и сушка;
c) добавление интермедиата, полученного на предыдущей стадии (b), к ТВА (тетрабутиламмониевой) соли ГК в ДМСО;
d) очистка полученного таким образом конъюгата ГК-паклитаксела, который имеет сложноэфирную связь между карбоксилом полисахарида ГК и спейсером/линкером, где указанный спейсер/линкер, в свою очередь, связан сложноэфирной связью через свой карбоксил с гидроксильной группой у атома углерода в положении С2' паклитаксела, путем осаждения с помощью раствора этанол/вода, содержащего соль NaBr, по меньшей мере одной последующей промывки в этаноле/воде и дополнительной промывки в этаноле, предварительная сушка при температуре 40°C и пропускание в насыщенной водяным паром камере при температуре 40°C и атмосферном давлении, наконец, сушка при температуре 40°C под вакуумом.
Еще одним объектом изобретения является конъюгат ГК-паклитаксела, имеющий степень дериватизации или этерификации в диапазоне от 15 до 21% (мас./мас.), предпочтительно в диапазоне от 16 до 20% (мас./мас.), где исходная гиалуроновая кислота имеет ферментативное происхождение и среднемассовую молекулярную массу от 140000 до 250000 Да, причем указанный конъюгат имеет форму мелкодисперсного и однородного порошка со степенью чистоты более 98% (мас.) в пересчете на сухой продукт и содержит количество ди-Br-паклитаксела менее 1% (мас.).
Еще одним объектом изобретения также является конъюгат ГК-паклитаксела в форме мелкодисперсного и однородного порошка, содержащего менее 1% (мас.) ди-Br-паклитаксела, полученный и очищенный, как описано, и, следовательно, чрезвычайно чистый по отношению к такому же конъюгату, полученному способом согласно ЕР 2045270.
Еще одним объектом изобретения также является фармацевтическая композиция, по существу состоящая из конъюгата, полученного и очищенного с помощью описанного выше способа, в сочетании с фармакологически приемлемыми разбавителями/эксципиентами, предпочтительно фармацевтическая композиция, приготовленная в стерильной изотонической воде, содержащей 5% (мас./об.) глюкозы, для применения в лечении распространенного рака молочной железы, рака легких, рака яичников, рака мочевого пузыря, рака предстательной железы и эндометрия и мезотелиомы.
Композицию по настоящему изобретению применяют при лечении всех форм рака, при которых обычно применимы паклитаксел, все известные вышеперечисленные производные такого лекарственного средства и таксаны в целом.
Таким образом, в настоящем изобретении описано и заявлено получение и очистка конъюгата ГК-паклитаксела согласно оригинальному способу синтеза, состоящему во введении спейсера/линкера между гиалуроновой кислотой и вышеуказанным химиотерапевтическим веществом посредством образования сложноэфирной связи между карбоксилом вышеуказанного полисахарида и спейсером/линкером, причем указанный спейсер/линкер, в свою очередь, связан (всегда сложноэфирной свя- 2 045583 зью) через свой карбоксил с гидроксильной группой у атома углерода С2' паклитаксела, при этом спейсер/линкер, используемый для синтеза вышеуказанного конъюгата, представляет собой 4-броммасляную кислоту.
Такой новый способ синтеза конъюгата ГК-паклитаксела отличается от ЕР 2045270, поскольку он обеспечивает:
образование конъюгата с большей степенью чистоты;
исключение заключительного диализа;
сокращение использования растворителей;
получение исходного материала (конъюгата ГК-паклитаксела) в виде мелкодисперсного и однородного порошка, легко поддающегося стерилизации путем фильтрации после приготовления в водном растворителе;
сокращение времени синтеза.
Полученный и очищенный таким образом конъюгат ГК-паклитаксела имел степень дериватизации в диапазоне от 15 до 21% (мас./мас.), предпочтительно в диапазоне от 16 до 20% (мас./мас.).
Степень дериватизации или этерификации вышеуказанного конъюгата определяют ниже как массовую процентную долю паклитаксела к массе ГК-паклитаксела, таким образом, 100 мг конъюгата со степенью дериватизации, составляющей от 15 до 21% (мас./мас.), будут содержать 15, 16, 17, 18, 19, или 20, или 21 мг химиотерапевтического вещества паклитаксел в зависимости от указанной степени дериватизации (чтобы дополнительно проиллюстрировать это, при степени дериватизации 20% (мас./мас.) в 100 мг конъюгата содержится 20 мг паклитаксела); однако специалисту в данной области техники очевидно, что в конце таких промышленных способов синтеза может происходить небольшое варьирование в соотношении массы между молекулами,поэтому здесь и далее заявитель, описывая и заявляя диапазон дериватизации вышеуказанного конъюгата, составляющий от 15 до 21% (мас./мас.), намерен заявлять все заявленные процентные значения, включающие ±1%: например, степень 20% (мас./мас.) соответственно полагают равной 20±1%.
ГК, используемая для синтеза такого конъюгата ГК-паклитаксела, может быть получена из любого источника, например, путем экстракции из петушиных гребней (например, согласно ЕР 0138572 или WO 2018/020458), или биотехнологическим путем (например, согласно ЕР 2614088 или ЕР 2614087), или предпочтительно ферментативным путем (например, согласно ЕР0716688) и иметь среднемассовую молекулярную массу (MW) в диапазоне от 400 до 3x106 Да, предпочтительно от 400 до 1x106 Да, еще более предпочтительно от 140000 до 250000 Да (среднемассовая молекулярная масса означает массу, вычисленную с помощью способа характеристической вязкости (Terbojevich et al., Carbohydr Res, 1986, 363377)). ГК-паклитаксел, описанный и заявленный заявителем, имеет степень дериватизации в пределах от 15 до 21% (мас./мас.), предпочтительно в пределах от 16 до 20% (мас./мас.), предпочтительно получен из ГК ферментативного происхождения со среднемассовой молекулярной массой в диапазоне от 140000 до 250000 Да.
Конъюгат ГК-паклитаксела, описанный выше, получают и очищают в соответствии с вышеуказанным оригинальным способом синтеза, модифицированным по сравнению с предшествующим уровнем техники и, таким образом, подробно описанным ниже:
в растворе паклитаксела в органическом растворителе, предпочтительно дихлорметане, содержится спейсер/линкер 4-броммасляной кислоты, карбоксильную группу 4-броммасляной кислоты активируют активирующим агентом, таким как карбодиимид, предпочтительно 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид гидрохлорид (EDC), в присутствии катализатора, предпочтительно DMAP (4-диметиламинопиридина), таким образом получают образование сложного эфира между гидроксильной функциональной группой при атоме углерода С2' паклитаксела и карбоксильной группой спейсера/линкера для образования интермедиата конъюгата ГК-паклитаксела, в котором связь между указанным спейсером/линкером и паклитакселом представляет собой сложноэфирную связь;
полученный интермедиат кристаллизуют путем добавления органического растворителя, предпочтительно N-гептана, к вышеуказанному раствору, затем выделяют путем фильтрации и сушат; таким образом получают высушенный интермедиат, который затем анализируют для оценки степени чистоты с помощью метода ВЭЖХ на наличие ди-Br-паkлитаксела, количество которого благодаря вышеуказанной стадии кристаллизации резко снижается, оказываясь менее 1% (мас.), следовательно, чистота продукта такого синтеза оказывается более 98% (мас./мас.);
затем путем прямого контакта указанного интермедиата с ТВА (тетрабутиламмониевой) солью ГК в диметисульфоксиде (ДМСО) (ДМСО позволяет растворять такой интермедиат и оптимизирует реакцию указанного синтеза по сравнению с N-метил-2-пирролидоном (NMP) и диметилформамидом (DMF)) получают нуклеофильное замещение СОО- ГК на углероде, связанном с бромом спейсера/линкера. Таким образом, образуется сложноэфирная связь между ГК и спейсером/линкером, ранее связанным и паклитаксела;
полученный конъюгат таким образом очищают путем осаждения из раствора этанол/вода, содержащего NaBr (при температуре 40°C), затем промывают один или более раз в этаноле/воде и потом про- 3 045583 мывают в этаноле, затем предварительно сушат при температуре 40°C, оставляют при температуре 40°C в насыщенной водяным паром камере при атмосферном давлении и, наконец, сушат при температуре
40°C под вакуумом.
Заявитель неожиданно обнаружил, что NaBr облегчает осаждение конъюгата и, следовательно, его очистку, в то же время NaBr, в свою очередь, легко удаляется путем последующих промывок конъюгата указанными выше водно-спиртовыми растворами.
Стадии предварительной сушки и пропускание в насыщенной водяным паром камере при атмосферном давлении проводят при температуре 40°C в течение периода времени, составляющего по меньшей мере 8 ч, а стадию сушки проводят при температуре 40°C, под вакуумом, в течение периода времени, составляющего по меньшей мере 16 ч.
Такая стадия очистки конъюгата исключает процесс диализа.
Полученный конечный продукт представляет собой мелкодисперсный и однородный порошок, его анализируют методом ВЭЖХ для оценки степени дериватизации или этерификации карбоксила, и его способности фильтроваться.
Таким образом, показано, что конъюгат ГК-паклитаксела, полученный и очищенный, как указано выше, свободен от загрязняющих веществ, в основном представленных следующими:
ди-Br-паклитаксел: полностью нежелательный побочный продукт реакции вследствие реакции этерификации двух молекул 4-броммасляной кислоты с молекулой паклитаксела по двух разным гидроксилам. Снижение содержания этого вторичного продукта является значительным улучшением процесса синтеза и очистки конъюгата, поскольку ди-Br-паклитαксел взаимодействует с двумя карбоксильными функциональными группами одной или двух молекул ГК-ТВА и, следовательно, определяет образование сшитой фармацевтической композиции, содержащей конъюгат согласно настоящем изобретению, которая полностью теряет терапевтическую эффективность и ставит под сомнение возможность стерилизации путем фильтрации с помощью 0,2 мкм фильтров;
остатки NaBr, растворителей и активирующих агентов, которые удаляются благодаря стадии кристаллизации интермедиата в N-гептане, благодаря стадии осаждения в этаноле и последующим промывкам конечного продукта ГК-паклитаксела в водно-спиртовом растворе. На практике, можно проводить процесс кристаллизации в N-гептане, и, следовательно, он включает только интермедиат, что, таким образом, приводит к чистому продукту, который легко отделить от остатков различного вида, присутствующих в реакционной среде.
Благодаря всем вышеперечисленным стадиям получают чрезвычайно чистый мелкодисперсный порошкообразный конъюгат без необходимости проведения заключительного диализа, что также определяет значительную экономию растворителей.
Таким образом, способ синтеза и очистки конъюгата ГК-паклитаксела, являющийся объектом изобретения, отличается от ЕР 2045270, поскольку он обеспечивает:
образование конъюгата с большей степенью чистоты;
исключение заключительного диализа;
сокращение использования растворителей;
получение исходного материала в виде мелкодисперсного и однородного порошка, легко поддающегося стерилизации путем фильтрации после приготовления в водном растворителе;
общее сокращение времени синтеза.
Чтобы лучше проиллюстрировать объем и преимущества настоящего изобретения, приведен пример получения и очистки конъюгата ГК-паклитаксела, который, однако, никоим образом не ограничивает объем формулы изобретения.
Пример 1. Получение и очистка конъюгата ГК-паклитаксела со степенью дериватизации 18% (мас./мас.).
Получение сложноэфирного производного ГК (ГК, используемая для такого синтеза, имеет среднемассовую молекулярную массу в диапазоне от 160000 до 230000 Да) и паклитаксела, имеющего степень дериватизации, т.е. этерификации карбоксила, 18% (мас./мас.).
110,1 мг 4-броммасляной кислоты, 151,9 мг EDC и 19,5 мг DMAP добавляли в 308,7 мг паклитаксела, растворенного в 15 мл дихлорметана, при перемешивании при температуре 10°C в течение по меньшей мере 40 мин. Затем к полученному таким образом раствору добавляли воду; после перемешивания в течение нескольких минут органической фазе давали отделиться. Органическую фазу собирали, а водную фазу (содержащую соли и остаток бромида) удаляли. К полученной таким образом органической фазе добавляли 25 мл N-гептана при температуре 10°C, получая кристаллизацию интермедиата, затем выделяли путем фильтрации и таким образом сушили. Таким образом, было получено 301 мг высушенного продукта-интермедиата.
300 мг такого интермедиата было добавлено в раствор 1000 мг ГК-ТВА (соли ГК с тетрабутиламмонием), растворенной в 44 мл ДМСО. Через 1 день реакции при температуре 40°C в раствор добавляли 50 мл ДМСО. Через 1 ч медленно по каплям добавляли раствор этанол/вода в соотношении 96/4, содержащий NaBr с концентрацией 2% (мас./мас.), получая таким образом осадок полученного конъюгата, который многократно промывали в этаноле/воде (8,5/1,5), окончательно повторно промывали 100% эта- 4 045583 нолом и затем предварительно сушили при температуре 40°C в течение 8 ч. Предварительно высушенный продукт затем оставляли при 40°C в насыщенной водяным паром камере при атмосферном давлении еще на 8 ч и, наконец, сушили при 40°C в вакууме не менее 16 ч, но до полного высыхания.
Полученный конъюгат ГК-паклитаксела анализировали методом ВЭЖХ (Rosato A., Urologic Oncology: Seminars and Original Investigations, 2006, 24:207-215), чтобы проверить, что эффективная степень дериватизации составила 18% (мас./мас.); методом ВЭЖХ высушенного интермедиата (Theodoridis G. et al., Application Note, August 1999:40-44) определили количество ди-Br-паклитаксела, которое составило менее 1% (мас.) (как продемонстрировано ниже), степень чистоты конъюгата составила более 98% (мас.) в пересчете на сухой продукт.
Конъюгат ГК-паклитаксела, полученный как описано выше, представляет собой бело-желтоватый порошок, однородный и гигроскопичный, легко стерилизуемый путем фильтрации с помощью 0,2 мкм фильтров при восстановлении в водной среде в виде фармацевтической композиции.
Пример 2 сравнительный. Получение и очистка конъюгата ГК-паклитаксела согласно WO 2004/035629 (ЕР 2045270).
Получение сложноэфирного производного ГК и паклитаксела со степенью этерификации карбоксила 18% (мас./мас.).
Чтобы продемонстрировать, что способ, являющийся объектом изобретения, превосходит предшествующий уровень техники, представленный способом, описанным в WO 2004/035629, заявитель приготовил конъюгат ГК-паклитаксела в соответствии с примером 6 из WO 2004/035629, изменив массовую концентрацию различных компонентов, для получения конъюгата ГК-паклитаксела со степенью этерификации карбоксила 18% (мас./мас.), чтобы сравнить такое производное в отношении чистоты и способности фильтроваться с конъюгатом ГК-паклитаксела из примера 1 данного документа.
Используемая ГК имеет среднемассовую молекулярную массу в диапазоне от 160000 до 230000 Да, как в примере 1.
Вкратце, к 308,7 мг паклитаксела, растворенного в 15 мл дихлорметана, добавляли 117,2 мг 4-броммасляной кислоты и 614,1 мг EDC. Затем в раствор добавляли воду для удаления всего бромида и карбодиимида. В полученный таким образом органический раствор добавляли сульфат натрия для обезвоживания, а растворитель удаляли с помощью роторного испарителя. В итоге, было получено 363 мг высушенного интермедиата.
315 мг полученного таким образом интермедиата добавляли к ГК-ТВА, растворенного в безводном NMP, раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 7 дней, после чего добавляли 20 мл бидистиллированной воды и 4 мл насыщенного раствора NaCl. Его перемешивали в течение 1 ч, чтобы обеспечить обмен натрия с ионом ТВА. Затем по каплям добавляли этанол и полученный таким образом волокнистый продукт растворяли в воде, подвергали диализу и, наконец, лиофилизировали.
Конъюгат ГК-паклитаксела, полученный в соответствии с примером 2, анализировали методом ВЭЖХ, чтобы проверить, что полученная эффективная степень дериватизации составила 18% (мас./мас.).
Таким образом, два конъюгата из примеров 1 и 2 сравнивали для проверки их чистоты в отношении количества ди-Br-паклитаксела (сшитого побочного продукта реакции), присутствующего и определяемого в высушенном интермедиате из примеров 1 и 2 (методом ВЭЖХ в отношении высушенного интермедиата, Theodoridis G. et al., Application Note, August 1999:40-44), и способности фильтроваться через фильтры из ацетата целлюлозы (Minisart®, 0,2 мкм), которые гарантируют квалифицированному специалисту стерильность продукта, измеренную при давление 2 атм.
Испытание на способность фильтроваться.
Для проведения испытания использовали небольшой стальной бак (Sartorius Stedim объемом 0,22 л) с входным отверстием для сжатого воздуха (регулируемым манометром) в верхней части и выходным отверстием в нижней части. В бак загружали 15 мл раствора ГК-паклитаксела, растворенного до концентрации 12 мг/мл в глюкозе концентрацией 5% (мас./мас.). Под баком, на выходном отверстии, установлен фильтр 0,2 мкм (Minisart, СЕ, Sterile). Поток сжатого воздуха регулировали для получения давления около 1,5 бар внутри стального бака с целью проталкивания раствора через стерильный фильтр. В момент начала фильтрации включали хронометр и, поместив градуированный цилиндр под выходное отверстие фильтра, измеряли отфильтрованный объем с течением времени.
Результаты.
Конъюгат ГК-паклитаксела, полученный согласно примеру 1:
ди-Br-паклитаксел (мас./мас.) (процентная массовая доля относительно массы интермедиата): 0,8%;
способность фильтроваться (раствор 12 мг/мл конъюгата в растворе глюкозы концентрацией 5% (мас./мас.)): 4,5 мл/мин.
Конъюгат ГК-паклитаксела, полученный согласно примеру 2:
ди-Br-паклитаксел (мас./мас): 5,2%;
способность фильтроваться: 0,04 мл/мин.
В заключение, полученные результаты показывают, что конъюгированный ГК-паклитаксел, полученный согласно способу изобретения, отличается:
очень высокой степенью чистоты при совершенно незначительном количестве ди-Br-паклитаксела;
- 5 045583 высокой способностью отфильтровываться через 0,2 мкм фильтры, которые, как известно специалисту в данной области, обеспечивают стерильность фильтрата (фильтрующая способность 0,04 мл/мин является признаком мало/плохо фильтруемого продукта, поэтому не поддается стерилизации через фильтры 0,2 мкм, что делает необходимым выбор альтернативного метода стерилизации, такого как термическая или радиационная стерилизация, причем оба метода, однако, определяют, как широко известно, частичное разрушение продуктов, подвергнутых таким процессам, особенно производных сложных эфиров).
Наконец, способ по изобретению приводит к значительному снижению количества используемого растворителя, поскольку в таком способе не проводится очистка путем диализа конъюгата, запланированная, однако, в известном специалисту способе, что приводит к значительному сокращению времени приготовления конъюгата по примеру 1-2 в сравнении.
Таким образом, полученный конъюгат имел оптимальные характеристики по сравнению с конъюгатом, полученным в предшествующем уровне техники (WO 2004/035629), и, кроме того, обеспечивалась значительная экономия издержек и времени.
Claims (11)
1. Способ получения и очистки конъюгата гиалуроновой кислоты и паклитаксела (ГК-паклитаксела), который включает или состоит из следующих стадий:
а) активация в растворе паклитаксела в органическом растворителе, содержащем спейсер/линкер 4-броммасляной кислоты, карбоксильной группы вышеуказанного спейсера/линкера 4-броммасляной кислоты с помощью активирующего агента, представляющего собой карбодиимид, в присутствии катализатора с получением интермедиата конъюгата ГК-паклитаксела;
Ь) кристаллизация интермедиата, полученного на предыдущей стадии (а), в органическом растворителе, затем его фильтрация и сушка;
с) добавление интермедиата, полученного на предыдущей стадии (Ь), к ТВА (тетрабутиламмониевой) соли ГК в ДМСО;
d) очистка конъюгата ГК-паклитаксела, полученного таким образом, который имеет сложноэфирную связь между карбоксилом полисахарида ГК и спейсером/линкером, где указанный спейсер/линкер, в свою очередь, связан посредством сложноэфирной связи через свой карбоксил с гидроксильной группой у атома С2' углерода паклитаксела, путем осаждения в растворе этанол/вода, содержащем соль NaBr, по меньшей мере одной последующей промывки в этаноле/воде и дальнейшей промывки в этаноле, предварительная сушка при температуре 40°С и пропускание в насыщенной водяным паром камере при температуре 40°С и атмосферном давлении, наконец, сушка при температуре 40°С под вакуумом.
2. Способ по п.1, в котором на стадии (а) активации активирующий агент представляет собой 1-этил-3-(3-дим етиламинопропил)карбо диимида гидрохлорид (EDC).
3. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором на стадии (а) активации катализатор представляет собой 4-диметиламинопиридин (DMAP).
4. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором на стадии (Ь) кристаллизации растворитель представляет собой N-гептан.
5. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором на стадии (d) очистки предварительную сушку и пропускание в насыщенной водяным паром камере при атмосферном давлении проводят при температуре 40°С в течение периода времени, составляющего по меньшей мере 8 ч, а стадию сушки проводят при температуре 40°С, под вакуумом, в течение периода времени, составляющего по меньшей мере 16 ч.
6. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором исходная гиалуроновая кислота имеет среднемассовую молекулярную массу в диапазоне от 400 до Зх10б Да.
7. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором исходная гиалуроновая кислота получена путем экстракции из петушиных гребней, биотехнологическим или ферментативным путем, предпочтительно ферментативным.
8. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором на стадии (а) активации органический растворитель представляет собой дихлорметан.
9. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором исходная гиалуроновая кислота имеет среднемассовую молекулярную массу в диапазоне от 400 до 1х10б Да.
10. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором исходная гиалуроновая кислота имеет среднемассовую молекулярную массу в диапазоне от 140000 до 250000 Да.
11. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором исходная гиалуроновая кислота получена ферментативным путем и имеет среднемассовую молекулярную массу в диапазоне от 140000 до 250000 Да.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
IT102020000008209 | 2020-04-17 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA045583B1 true EA045583B1 (ru) | 2023-12-07 |
Family
ID=
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2384593C2 (ru) | Таксаны, ковалентно связанные с гиалуроновой кислотой или производными гиалуроновой кислоты | |
KR101614157B1 (ko) | 간접적인 화학적 공액에 의해 수득되는, 히알루론산 또는이의 유도체의 항암 바이오컨쥬게이트 | |
EP2219616A2 (en) | Lyophilized pharmaceutical composition with improved stability containing taxane derivatives, and method of manufacturing the same | |
Nichols et al. | Selective oxidation of 2-hydroxypropyl ethers of cellulose and dextran: Simple and efficient introduction of versatile ketone groups to polysaccharides | |
CN115379862A (zh) | 用于合成透明质酸和紫杉醇的缀合物的方法 | |
Guo et al. | Drug content on anticancer efficacy of self-assembling ketal-linked dextran-paclitaxel conjugates | |
EA045583B1 (ru) | Способ синтеза конъюгата гиалуроновой кислоты и паклитаксела | |
JP2021176932A (ja) | カルボキシ化分解性ポリロタキサン及びその製造方法 | |
Jelonek et al. | Correlation between the composition of PLA-based folate targeted micelles and release of phosphonate derivative of betulin | |
JP5514718B2 (ja) | 不溶性薬剤の制御放出のための、シクロデキストリンおよびポリ(アミドアミン)に基づく超分岐ポリマー | |
Hao et al. | Synthesis and characteristics of the fluorouracil-dextran conjugates |